Introduccion

Especei de plantas de la familia solanaceae contiene alcaloides tropanicos

que
son
farmacolgicamente
activos
colinrgicos
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25248046)
Atropa belladona es una planta prteneciente a la familia Solanaceae que es
nativa
de
Europa,
Norte
de
frica
y
Oeste
asitico
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4244915/). Atropa Belladona
es rica en atropina y en menor proporcin de escopolamina que son
alcaloides tropanicos . stos van a actuar sobre los receptores muscarinicos
M3, interviniendo as en el mecanismo de accin de la acetilcolina. ste
receptor
esta
acoplado
a
protenas
G(q/11)
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20009428)
que
estimula
a
la
fosfolipasa C, activando el ciclo de inositol trifosfato y en consecuecnia
aumenta la concentracin de calcio intracelular que conlleva a la apertura
de canales dependientes de voltaje (VOC) de calcio y finaliza con la
fosforilacion de actina y miosina y por tanto contraccin del msculo liso.
La atropina es generalemnte aceptada como un agonista competitivo de la
acetilcolina (Ach). Esta observacin confirma estudios similares de
acetilcolina-atropina
realizado
por
Schild
(1947)
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1509519/pdf/bripharmchem0
0135-0092.pdf)
Material y mtodos
En primer lugar se procede al sacrificio de una rata de la raza Wistar de un
peso comprendido entre 300 y 350mg. Posteriormente indentificaremos y
extraeremos ileon. Realizamos una limpieza intraluminal gracias a una
jeringa. El rgano deber ser colocado en una placa Petri con SSF oxigenada
a temperatura ambiente . A continuacin se colocarn dos puntos opuestos
de sujecin (hilo) gracias a una aguja pinchando dos veces el etremo del
tejido , dejando un asa antes de atarlo para no estrangular el rgano. En el
otro extremo (que se unir al trnaductor) se pinchar solo una vez de
manera que el medio nutritivo pueda penetrar en el ileon.
El rgano se dispone en la copa de tejido. El extremo que posee un asa se
fijar a una varilla y el otro al transductor isomtrico ajustado con la
correspondiente tensin inicial de 0,7-0,9g. La copa de tejido recibe
aireacin y esta rellena de una solucin nutritiva llamada Solucion de
Krebs-Henseleit cuya composicin es la siguiente NaCl (118 mM), KCl (4,75
mM), NaHCO3 (25 mM), MgSO4 (1,2mM), CaCl2 (1,8mM), KH2PO4 (1,2mM) y
glucosa (11mM). Todo el sistema se encuentra a una temperatura de 37 C.

La preparacin se deja estabilizar durante unos 30 minutos, con la finalidad

de conseguir una lnea basal estable. Durante este tiempo vamos a preparar
una disoluion del agonista del receptor muscarinico M3 (acetilcolina) de
0,2M para 25 mL (para ello es necesario 0,9083mg de Ach) y a partir de

esta disolucin obtenemos diluciones de 2*10-2M, 2*10-3M, 2*10-4M, 2*105M, 2*10-6M y 2*10-7M.
As mismo tambin prepararemos las disoluciones de distintos antagonistas:
Atropina a partir de una solucin Stock en el congelador de 10-3M y
preparamos disoluciones de 10-4M, 10-5M, 10-6M.
Escopolamina: partimos de una disolucin de 10-6M y obtenemos las
disoluciones 10-7M y 10-8M.
Diltiazem: partimos de una solucin stocken el congelador de 10-3M
preparamos la disolucin de 10-4M.

Extracto de belladona: partimos de una concentracin de 10 ug/mL

Tambin distintas diluiones (10-4M, 10-5M y 10-6M) de fisostigmina a partir
de una soluion stock en el congelador 10-3M
A continuacin aadimos de forma acumulativa a la copa de tejido mediante
una jeringuilla de insulina 0,25mL de solucin acetilcolina ms diluida y
posteriormente aadimos 0,5 mL de esta solucin. El procedimiento se
repetir con las distintas concentraciones de la mas diluida a la ms
concentrada. El msculo del ileon se va a contraer y va a ser detectado por
el transducto que transforma la concentracin en una seal, que llega al
amplicador y posteriormente a un ordenador y mediante el programa
Biopac nos muestra los resultados, obteniendo asi la curva concentracinrespuesta a Ach.
Una vez obtenida la curva, procedemos eliminar el lquido nutritivo y
volverlo a rellenar. Aadimos de forma acumulativa el primer antagonista,
que es la atropina, de la solucin ms diluida a la ms concentrada
(preparadas anteriormente) de la misma forma que el procedimiento
anterior. La solucin que nos queda en la copa de tejido se atropina ser de
10-8M. Dejamos 15 min de incubacin y repetimos la curva concentracinrespuesta de Ach. Una vez obtenida la curva, se procede a al retirada y
posterior llenado del liquido nutritivo. Se repite el mismo procedimeinto
para la escopolamina, extracto de belladona, diltiazem y fisostigmina.

Salvo la fisostigmina que no ser necesario esperar los 15 min de

incubacin.
Resultados
La grgica azul corresponde a la curva dosis-respuesta Ach y la roja
corresponde a la escopolamina (figura1), atropina (figura 2), extracto de
belladona (figura 3), diltiazem (figura 4) y fisostigmina (figura 5).

Figura 1: Curva dosis-respuesta de escopolamina

dosis-respuesta Ach-Atropina:

Figura 2: curva

Discusin de los resultados

Sugn los resultados de la figura 1. La escopolamina es un antagonista
reversible del receptor muscarinico M3 ya que a medida que sube la
concentracin de acetilcolina, sta se une al recptor y desplaza la unin
existente entre la escopolamina dicho receptor. Sin embargo, en este
experimento no llegamos al efecto mximo, pues hace falta mas acetilcolina
para llegar a la saturacion de stos recpetores. De la figura 2 podemos
llegar a la misma conclusin y es que la atropina tambin es un
antangonista reversible de los receptores muscarinicos.
En la figura 3, observamos que el efecto del extracto de Atropa bellanoda
seria una mezcla de ambos efectos ms potencia y hay un desplazamiento
hacia a derecha y necesitaramos una mayor concentracin de Ach para
llegar al efecto mximo.
En la figura 4: El diltiazem no
de los receptores localizados
impide la entrada de calcio a
mucha acetilcolina y nunca s
antagonista no competitivo.

alcanza el efecto amximo ya que es agonista

en la subunidad alfa1 de canales de calcio e
la celula y no se produce la contraccion por
va a producir . Se va a comportar como un

En la figura 5: Se desplaza hacia la izquierda ya que inhibe a la

acetilcolinesterasa y aumenta el efecto de la Ach por tanto esperamos que
el pd2 aumente en presencia de fiso y la dosis 50 sera.
Gracias a las curvas dosis-respuestas, podemos calcular la dosis eficaz 50
(definir) y podemos concluir que el efecto de:
Figura1: ACh 6,94501E-07 // 4,67589E-05, La dosis eficaz 50 ha aumentado, por lo cual es
menos txica.

Figura2: Ach 9,11279E-07 // 1,11115E-05 igual que la anterior

Figura 3: Ach 4,29687E-07 // 7,46794E-05 igual que la anterior
Fugura 4: ACh 1,6791E-06 // 3,7164E-05 la dosis eficaz 50 ha disminuido.

Figura 5: ACh 5,1404E-06 // 8,3228E-08

Apellidos inicial, titulo del trabjo, nombre de la revista,abrev, ao,vol, pagipagf
(Talero y cols, ao)
La acetilcolina va a interaccionar sobre los receptores muscarinicos,
concretamente en los M3, y stos estn acoplados a protenas G, que a su
vez van a estimular a la fosfolipasa C y

Cul es el mecanismo de accin del extracto de atropa belladona?

Acetilcolina: mecanismo. El extracto de atropa belladona va a contener
atropina y escopolamina que va a actuar sobre los receptores muscarinicos
de acetilcolina.

Realizamos un bao de rganos con el ileon. para que?--> ver el efecto del
frmaco sobre este rgano.
Esperamos que la atropina y escopolamina actua como antagonista
competitivo de los receptores muscarinicos de acetilcolina que va a
dificultar la contraccin del msculo liso del ilen.

Acetilcolina
Atropina
Belaldona
Escopolamina
Bao de rganos
Alcaloides tropanicos
Diltiazem
Fisostigmina
Curva dosis respuesta