Direccin General de Epidemiologa

lineamientos para la vigilancia epidemiolgica

del rotavirus por laboratorio

Instituto de Diagnstico y referencia Epidemiolgicos

Dr. Manuel Martnez Bez

LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLGICA

DEL ROTAVIRUS POR LABORATORIO

DGE-InDRERNLSP
2015
Fotografa de la portada propiedad de HKS Arquitectos

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PRIMERA EDICIN, 2015

ROTAVIRUSRNLSP
ESTE

DOCUMENTO FUE AVALADO POR LOS REPRESENTANTES DE LAS INSTITUCIONES QUE

CONFORMAN EL GRUPO TCNICO INTERINSTITUCIONAL DEL COMIT NACIONAL PARA LA
VIGILANCIA EPIDEMIOLGICA (CONAVE).

TODOS LOS DERECHOS RESERVADOS CONFORME A LA LEY,

INDRE-SECRETARA DE SALUD
SE PERMITE LA REPRODUCCIN TOTAL O PARCIAL SI SE CITA LA FUENTE: LINEAMIENTOS
PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLGICA DE ROTAVIRUS POR LABORATORIO VERSIN NO.
01. INDRE, 2015.
COLECCIN PUBLICACIONES TCNICAS DEL INDRE:
ISBN: EN PROCESO
INSTITUTO DE DIAGNSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLGICOS DR. MANUEL MARTNEZ
BEZ
FRANCISCO P MIRANDA 177, COL. LOMAS DE PLATEROS DEL. LVARO OBREGN, C. P.
01480, MXICO, D. F.
WWW.INDRE.SALUD.GOB.MX
TEL. (55)53-42-75-50
LA EDICIN ESTUVO A CARGO DE: DR. JOS ALBERTO DAZ QUINEZ
EL DISEO ESTUVO A CARGO DE: LIC. BRENDA ESCOBEDO LPEZ
IMPRESO EN MXICO. PRINTED IN MEXICO

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SECRETARA DE SALUD
DRA. MERCEDES JUAN LPEZ
SECRETARIA DE SALUD
DR. EDUARDO GONZLEZ PIER
SUBSECRETARIO DE INTEGRACIN Y DESARROLLO DEL SECTOR SALUD
DR. PABLO ANTONIO KURI MORALES
SUBSECRETARIO DE PREVENCIN Y PROMOCIN DE LA SALUD
LIC. MARCELA GUILLERMINA VELASCO GONZLEZ
SUBSECRETARIA DE ADMINISTRACIN Y FINANZAS
DR. GABRIEL OSHEA CUEVAS
COMISIONADO NACIONAL DE PROTECCIN SOCIAL EN SALUD
LIC. MIKEL ARRIOLA PEALOZA
COMISIONADO FEDERAL DE PROTECCIN CONTRA RIESGOS SANITARIOS
DR. JOS MELJEM MOCTEZUMA
COMISIONADO NACIONAL DE ARBITRAJE MDICO
DR. GUILLERMO MIGUEL RUIZ-PALACIOS Y SANTOS
TITULAR DE LA COMISIN COORDINADORA DE INSTITUTOS NACIONALES DE SALUD Y
HOSPITALES DE ALTA ESPECIALIDAD
LIC. RODRIGO REINA LICEAGA
TITULAR DE LA UNIDAD COORDINADORA DE VINCULACIN Y PARTICIPACIN SOCIAL
DR. NELLY AGUILERA ABURTO
TITULAR DE LA UNIDAD DE ANLISIS ECONMICO
LIC. CARLOS SANDOVAL LEYVA
DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIN SOCIAL
DR. JESS FELIPE GONZLEZ ROLDAN
DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE PROGRAMAS PREVENTIVOS Y CONTROL
DE ENFERMEDADES
DR. EDUARDO JARAMILLO NAVARRETE
DIRECTOR GENERAL DE PROMOCIN DE LA SALUD
DR. CUITLHUAC RUIZ MATUS
DIRECTOR GENERAL DE EPIDEMIOLOGA

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LIC. JUAN CARLOS REYES OROPEZA

DIRECTOR GENERAL DE INFORMACIN EN SALUD

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INSTITUTO DE DIAGNSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLGICOS

DR. MANUEL MARTNEZ BEZ
DR. JOS ALBERTO DAZ QUINEZ
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO
BIOL. IRMA LPEZ MARTNEZ
DIRECTORA DE DIAGNSTICO Y REFERENCIA
QFB. LUCA HERNNDEZ RIVAS
DIRECTORA DE SERVICIOS Y APOYO TCNICO
LIC. ADRIANA CASTRO CABRERA
SUBDIRECTORA DE OPERACIN
QBP. IRMA HERNNDEZ MONROY
ASESORA TCNICA DE LA DIRECCIN
BIOL. NORMA ANGLICA MONTES COLIMA
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGA
M. EN C. BELN TORRES LONGORIA
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE VIROLOGA
QFB. ROBERTO VZQUEZ CAMPUZANO
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE ENFERMEDADES EMERGENTES Y URGENCIAS
M. EN C. JUAN CARLOS CARPIO PEDROZA
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGA
DRA. CLARA GORODEZKY LAUFERMAN
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGA
M. EN C. JUDITH ESTEVEZ RAMREZ
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE CONTROL DE MUESTRAS Y SERVICIOS
DR. JOS ERNESTO RAMREZ GONZLEZ
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BIOLOGA MOLECULAR Y VALIDACIN DE TCNICAS
DRA. HERLINDA GARCA LOZANO
JEFA DEL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES
COORDINADORA DE LA RED DE ROTAVIRUS

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GRUPO DE TRABAJO
DRA. HERLINDA GARCA LOZANO
JEFA DEL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES
COORDINADORA DE LA RED DE ROTAVIRUS
QFB. HEIDI LIZBETH TERN VEGA
ADSCRITA AL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES
BIOL. IRMA LPEZ MARTNEZ
DIRECTORA DE DIAGNSTICO Y REFERENCIA
DR. HUGO MARTNEZ ROJANO
ASESOR TCNICO DE LA DIRECCIN GENERAL ADJUNTA DEL INDRE
COORDINADOR DE MEDICINA LABORAL
DR. JOS ALBERTO DAZ QUINEZ
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO

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LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA

EPIDEMIOLGICA DEL ROTAVIRUS
POR LABORATORIO

DGE-InDRERNLSP
2015

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NDICE
INTRODUCCIN ................................................................................................................... 9
ANTECEDENTES DE LA RED PARA EL DIAGNSTICO DE ROTAVIRUS ...................... 10
MARCO LEGAL DEL LABORATORIO ................................................................................ 12
DEFINICIONES OPERATIVAS ........................................................................................... 12
OBJETIVOS .......................................................................................................................... 13
Objetivo general ................................................................................................................ 13
Objetivos especficos ......................................................................................................... 13
RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PBLICA PARA EL DIAGNSTICO
DE ROTAVIRUS ................................................................................................................... 14
ORGANIZACIN DE LA RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE ROTAVIRUS ..........15
Laboratorio de Virus Gastrointestinales: Laboratorio Nacional de Referencia, el cual
realiza las siguientes tcnicas diagnsticas:.......................................................................15
Red de Laboratorios Estatales de Salud Pblica ................................................................15
FUNCIONES DE LOS INTEGRANTES DE LA RED ........................................................... 16
Funciones del laboratorio de virus gastrointestinales. Laboratorio Nacional de
Referencia.......................................................................................................................... 16
Funciones de los Laboratorios Estatales de Salud Pblica (LESP). ................................. 16
TOMA, MANEJO Y ENVO DE MUESTRAS ....................................................................... 18
ALMACENAMIENTO Y ENVO DE MUESTRAS ................................................................ 19
ALGORITMOS DE DIAGNSTICO DE TIPIFICACIN Y SECUENCIACIN PARA
ROTAVIRUS Y OTROS VIRUS GASTROINTESTINALES .................................................. 22
ESTNDARES DE CALIDAD............................................................................................... 23
CAPTURA DE DATOS Y RESULTADOS.............................................................................. 25
PROGRAMA DE EVALUACIN EXTERNA DEL DESEMPEO (PEED) .......................... 26
BANCO DE MATERIAL BIOLGICO .................................................................................. 27
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES PARA LA RED DE ROTAVIRUS ............................... 29
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ..................................................................................... 30
ANEXO I: DISPOSITIVOS MDICOS ................................................................................. 32
ANEXO II: PREPARACIN DE REACTIVOS...................................................................... 33
ANEXO III: ESPECIFICACIONES DE LOS REACTIVOS PARA ROTAFORESIS .............. 37
ANEXO IV: ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIN DE REACTIVOS PARA PAGE. .... 39
ANEXO V: LINEAMIENTOS PARA LA SOLICITUD DE INSUMOS .................................. 41
ANEXO VII: FORMATO PARA LA VIGILANCIA DE LA ENFERMEDAD DIARREICA
AGUDA (EDA) POR ROTAVIRUS ....................................................................................... 43

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INTRODUCCIN
La enfermedad diarreica aguda (EDA) es un problema de salud pblica y la
segunda causa de mortalidad y morbilidad en la poblacin infantil a nivel mundial.
Los rotavirus humanos del grupo A son los principales agentes virales causantes de
cuadros diarreicos con deshidratacin severa. Anualmente en Amrica Latina y el
Caribe se presentan 15000 muertes, 75000 hospitalizaciones, 2 millones de visitas
clnicas y 10 millones de casos de cuadros diarreicos. La EDA es causada por
diferentes agentes etiolgicos entre los que se incluyen bacterias, parsitos y virus.
Los rotavirus humanos son la principal causa de episodios diarreicos en nios
menores de 5 aos ocasionando aproximadamente el 70% de estos casos. Los nios
de 6 a 24 meses de edad tienen mayor riesgo de adquirir la infeccin y se estima
que estos grupos etarios, por lo menos, cursan de uno a tres eventos de
gastroenteritis en su vida.
La gastroenteritis puede transmitirse por diferentes rutas, el principal mecanismo
es la va fecal-oral debido al consumo de alimentos o contacto de manos y objetos
contaminados con materia fecal. Adems existen evidencias de propagacin a
travs de aerosoles y secreciones.
En pases industrializados, los nios menores de tres aos presentan en promedio
tres episodios de diarrea al ao, en los pases en vas de desarrollo los individuos
presentan un mayor nmero de eventos diarreicos. Esto hace necesario que estn
sujetos a la vigilancia epidemiolgica para identificar de forma oportuna los
eventos que signifiquen un riesgo para la salud de la poblacin y con base en los
hallazgos, se tomen decisiones para las acciones de planeacin, control y
prevencin de las enfermedades sujetas a vigilancia.
En Mxico las acciones de vigilancia se apoyan en el Sistema Nacional de Vigilancia
Epidemiolgica (SiNaVE), el cual cuenta con el subsistema de laboratorio para
llevar a cabo las actividades de manera oportuna y uniforme para el diagnstico de
rotavirus, y otros virus gastrointestinales como son los Norovirus, Sapovirus,
Astrovirus y Adenovirus entricos asociados a la enfermedad diarreica aguda.
El presente documento establece los lineamientos de operacin que debe realizar la
Red Nacional de Laboratorios Estatales de Salud Pblica (RNLSP) para la
vigilancia basada en el laboratorio de la gastroenteritis viral incluyendo las
funciones por niveles; la toma, manejo y envo de muestras; la metodologa para el
anlisis de muestras (mtodos convencionales y mtodos moleculares); la
evaluacin del desempeo as como, los estndares de calidad.

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ANTECEDENTES DE LA RED NACIONAL

Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica
La Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica (RNLSP) es el conjunto de
laboratorios de vigilancia epidemiolgica con objetivos especficos que le han
permitido unificar mtodos de diagnstico, criterios de interpretacin de
resultados, transferencia tecnolgica, generacin de conocimiento y formacin de
recursos humanos. Es el soporte tcnico-cientfico til para la vigilancia
epidemiolgica, que genera informacin de calidad para la toma oportuna de
decisiones a travs de la confirmacin de diagnsticos mediante estudios de
laboratorio en muestras biolgicas.
La RNLSP depende de la Secretara de Salud y es el Instituto de Diagnstico y
Referencia Epidemiolgicos (InDRE) su rgano rector en el rea de vigilancia
epidemiolgica. Tiene fundamento legal en la Norma Oficial Mexicana NOM-017SSA2-2012, para la vigilancia epidemiolgica y est conformada por 31
Laboratorios Estatales de Salud Pblica (LESP) de las 32 entidades federativas del
pas (el Distrito Federal enva sus muestras al InDRE).
El Marco Analtico Bsico de la RNLSP consta de 27 diagnsticos, distribuidos en
16 redes de vigilancia especfica.

ANTECEDENTES DE LA RED PARA EL DIAGNSTICO DE ROTAVIRUS

Desde 1994, que fue integrada esta red de diagnstico, el laboratorio de virus
gastrointestinales del InDRE ha ofrecido a sus integrantes cursos de capacitacin y
actualizacin, capacitacin en servicio, supervisin, asesora, apoyo con equipo e
insumos en caso de emergencia y desastres as como el envo de reactivos para
realizar el proceso del mtodo de electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE).
Posteriormente se inici el Programa de control de calidad en el que se les solicit a
los integrantes de la red enviaran el 100% de las muestras diarreicas positivas y
50% de las negativas a rotavirus para la evaluacin inicial de la red.
En el ao 2002 la RNLSP se incorpor al Programa Caminando a la Excelencia
para evaluar el desempeo tcnico del personal de la RNLSP respecto a los
programas prioritarios de la salud y fomentar su desarrollo.
Durante los aos 2002 a 2004 se utilizaron cinco indicadores para la evaluacin
del Boletn Caminando a la Excelencia: capacidad analtica, muestras enviadas para
control de calidad, calidad de las muestras, concordancia-cumplimiento e
independencia diagnstica, con los que se garantiz la calidad de los diagnsticos
emitidos por los LESP.
Sin embargo, este ltimo ao 2013, se plante la necesidad de contar con una
herramienta que de manera ms confiable, permitiera entre otros aspectos evaluar
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la capacidad tcnica, detectar las necesidades de capacitacin y mantener una

mejora continua de los miembros de la red de diagnstico por lo que se reevaluaron los indicadores para el Boletn Caminando a la Excelencia quedando
incluidos los parmetros de concordancia, cumplimiento y evaluacin del
desempeo.
A partir del ao 2005 y hasta la fecha, se preparan y envan anualmente a toda la
red, paneles de eficiencia para medir el indicador de evaluacin al desempeo.
Estos paneles contienen 10 muestras de evacuaciones diarreicas previamente
caracterizadas en el laboratorio de virus gastrointestinales del InDRE.
La conformacin de la red de diagnstico ha cambiado a travs de los aos de la
siguiente manera:
Durante el ao 2007
La red de Rotavirus estaba constituida por 20 LESP.
Enviaban el 50% de muestras positivas y el 10% de negativas.
Se inici por parte de los LESP el envo de muestras para referencia
(constitucin del banco).
En el ao 2008
La red se constituy de 25 LESP debido a la inclusin de Durango, Tlaxcala,
Oaxaca y Quertaro los cuales participaron en la evaluacin de los dos paneles
de ese ao.
A mediados de este ao se incluy Sonora participando nicamente en el
segundo panel de evaluacin.
Los LESP enviaban el 10% de muestras positivas y el 5% de negativas
De los 25 LESP, casi la mitad de ellos (12) enviaban muestras para el banco
general de Rotavirus.
En el ao 2009
Se integran Aguascalientes y Sinaloa a la red de diagnstico, los cuales enviaban
muestras para la conformacin del banco general de Rotavirus conforme lo
dispuesto para toda la red.
En el ao 2010
La red estaba constituida por 29 LESP. Este ao se integraron Baja California y
Guanajuato, quienes participaron en la evaluacin del segundo panel del 2010.
En el ao 2012
Durante este ao se cumpli con la implementacin de la red de Rotavirus en todo
el pas, a partir de ese ao la RNLSP cuenta con equipo y personal de laboratorio,
previamente capacitado en el InDRE.
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MARCO LEGAL DEL LABORATORIO

1. Constitucin Poltica de los Estados Unidos Mexicanos. Artculo 4. DOF
05/02/1917, ltima Reforma D.O.F. 15/02/2012.
2. Ley General de Salud. Artculo 3, XV; 59; 64, III; 133; 134, I; 136, 138, 139 y
141. DOF 7/02/1984, ltima Reforma DOF 07/06/2012.
3. Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA2-, Para la vigilancia epidemiolgica.
DOF: 19/02/2013.
4. Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002. Proteccin
ambiental-salud ambiental-residuos peligrosos biolgico-infecciososclasificacin y especificaciones de manejo.
5. Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005, Que establece las
caractersticas, el procedimiento de identificacin, clasificacin y los listados
de los residuos peligrosos. DOF: 23/06/2006.
6. Norma Oficial Mexicana NOM-031-SSA2-1999, Para la atencin a la salud
del nio.
7. Secretara de Salud. Programa Sectorial de Salud 2013-2018. Diario Oficial
de la Federacin DOF: 12/12/2013.
8. Plan Nacional de Desarrollo 2013-2018. Diario Oficial de la Federacin,
DOF: 20/05/2013, www.dof.gob.mx
9. Secretara de Salud. Programa de Accin Especfico 2013-2018. Sistema
Nacional de Vigilancia Epidemiolgica, primera edicin 2014.
10. Lineamientos para programas de evaluacin externa del desempeo de la
Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, InDRE- Secretara de Salud,
Mxico 2014.
11. Criterios de Operacin para la Red Nacional de Laboratorios de Salud
Pblica, InDRE-Secretara de Salud, Mxico 2014.
12. Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011. Para la organizacin y
funcionamiento de los laboratorios clnicos. D.O.F. 27-03-2012.

DEFINICIONES OPERATIVAS
Definicin de casos
Caso sospechoso
Todo nio menor de 5 aos hospitalizado por diarrea aguda.
Se define como:
Nio menor de 5 aos: todo nio de cero a cuatro aos, 11 meses y 29 das de
edad.
Hospitalizado: nio ingresado a la sala de rehidratacin o a la de hospitalizacin.
En los hospitales donde no existe una sala de rehidratacin, se considera

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hospitalizado todo nio que reciba rehidratacin oral o parenteral en el ambiente

hospitalario, aunque no sea ingresado en la sala de hospitalizacin.
Diarrea aguda: tres o ms evacuaciones lquidas o semilquidas en las ltimas 24
horas, con hasta 14 das de duracin. Si bien la consistencia de las heces es ms
importante que el nmero de evacuaciones, considerar que los nios con lactancia
materna exclusiva suelen presentar heces lquidas.
Deben ser considerados los siguientes criterios de exclusin de caso:
Tener 5 aos de edad cumplidos o ms.
Presentar diarrea prolongada (ms de 14 das de duracin).
Haber sido hospitalizado por otra razn, aunque presente diarrea.
Haber tomado la muestra de heces despus de 48 horas post-ingreso
hospitalario, por el riesgo de tratarse de una infeccin intrahospitalaria sin
embargo, en el caso de EDA en adultos puede ser considerado para la realizacin
de estudios de laboratorio.
Caso confirmado
Caso sospechoso que tiene una muestra de heces oportuna cuyo resultado de
laboratorio es positivo para Rotavirus. En el caso de estudio de brote, se confirma
en aquellos en los que se establezca el nexo epidemiolgico con un caso confirmado
por laboratorio.

OBJETIVOS
Objetivo general
Establecer los criterios y procedimientos adecuados para la aplicacin del
algoritmo del diagnstico y tipificacin de Rotavirus, y del algoritmo diferencial
para el diagnstico de otros virus gastrointestinales; as como analizar la
informacin generada por la RNLSP para proporcionar informacin
epidemiolgica convencional y de vigilancia basada en el laboratorio.

Objetivos especficos

Determinar el panorama epidemiolgico de las diarreas por Rotavirus en

Mxico.
Disponer de datos para generar informacin sobre el ndice de morbilidad y
mortalidad de la enfermedad diarreica aguda (EDA).
Determinar la circulacin de los diferentes genotipos de Rotavirus en el pas.
Identificar los genotipos emergentes y re-emergentes de Rotavirus asociados
con la EDA.

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Fortalecer la red de laboratorios para el diagnstico oportuno de Rotavirus.

Proporcionar informacin epidemiolgica convencional y vigilancia basada en
el laboratorio.
Identificar los agentes virales asociados con EDA a travs del servicio de
NuTraVE-EDA, a travs del algoritmo diferencial para otros agentes virales.

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PBLICA PARA EL

DIAGNSTICO DE ROTAVIRUS
Figura. 1.- Conformacin de la red para el diagnstico de rotavirus en Mxico, 2014

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ORGANIZACIN DE LA RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE

ROTAVIRUS
La RNLSP para el diagnstico de Rotavirus est basada en los siguientes niveles de
organizacin:
Laboratorio de Virus Gastrointestinales: Laboratorio Nacional de
Referencia, el cual realiza las siguientes tcnicas diagnsticas:

Electroforesis en Geles de Poliacrilamida (PAGE) para el diagnstico y control

de calidad de Rotavirus.
RT-PCR punto final para la tipificacin a VP7 y VP4 de las cepas de Rotavirus
grupo A, para el servicio de referencia solicitado por los LESP (Tcnica del CDC,
Atlanta, GA) (Manual of Rotavirus detection and Characterization Methods).
World Health Organization, 2009 y en apoyo a la vigilancia epidemiolgica.
Diagnstico diferencial para otros virus gastrointestinales mediante Ensayo
Inmunoenzimtico (ELISA) para la identificacin de cada uno de los siguientes
virus: Rotavirus, Norovirus, Astrovirus, Adenovirus entricos 40 y 41 a partir de
heces, para el servicio de referencia solicitado por la RNLSP.
Tcnica de RT-PCR punto final para la identificacin y tipificacin de otros
virus gastrointestinales: Norovirus, Sapovirus, Astrovirus, Adenovirus entricos
40 y 41, para el servicio de referencia solicitado por los LESP (Tcnica del CDC,
Atlanta, GA) (Manual of Rotavirus Detection and Characterization Methods).
World Health Organization, 2009.
Propagacin de las cepas prototipo de Rotavirus: Wa, DS-1, Price, ST3 a travs
del cultivo de clulas MA-104 (Tcnica del CDC, Atlanta, GA) para la obtencin
de controles positivos y complementar el envo de Kits y paneles de eficiencia.
Anlisis filogentico de los productos obtenidos de cADN de las cepas de
Rotavirus circulantes para el estudio de la epidemiologa molecular de estos
agentes virales en apoyo a la vigilancia epidemiolgica de la EDA por Rotavirus
as como el monitoreo de las cepas emergentes y re-emergentes en el pas.

Red de Laboratorios Estatales de Salud Pblica

En la actualidad la red est conformada por 31 LESP (Aguascalientes, Baja
California Sur, Baja California, Campeche, Chiapas, Chihuahua, Coahuila, Colima,
Durango, Estado de Mxico, Guanajuato, Guerrero, Hidalgo, Jalisco, Michoacn,
Morelos, Nayarit, Nuevo Len, Oaxaca, Puebla, Quertaro, Quintana Roo, San Luis
Potos, Sinaloa, Sonora, Tabasco, Tlaxcala Tamaulipas, Veracruz, Yucatn y
Zacatecas):

Todos ellos utilizan el mtodo de prueba que consiste en la Electroforesis en

Geles de Poliacrilamida (PAGE) para la identificacin del virus (Manual de
Vigilancia de la Diarrea para Rotavirus, OPS. 2009).

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FUNCIONES DE LOS INTEGRANTES DE LA RED

Funciones del laboratorio de virus gastrointestinales. Laboratorio
Nacional de Referencia
Coordinar la red para el diagnstico de rotavirus, que es fundamental para la
vigilancia epidemiolgica de la diarrea por Rotavirus.
Tipificar los VP7 y VP4 de las cepas de Rotavirus circulantes en el pas.
Preparar y enviar los reactivos que conforman el Kit de Rotaforesis para los
LESP.
Preparar y enviar los paneles de eficiencia para la red de rotavirus.
Evaluar los mtodos de prueba para transferirlos a la red de rotavirus.
Implementar las metodologas de punta para el diagnstico de virus
gastrointestinales.
Capacitar y apoyar al personal de salud involucrado en el diagnstico de
rotavirus para el fortalecimiento de la red.
Actualizar el diagnstico de rotavirus y otros virus gastrointestinales a travs de
cursos.
Proporcionar informacin para la vigilancia epidemiolgica basada en el
laboratorio de las diferentes cepas circulantes en el pas.
Realizar el diagnstico diferencial a travs de NuTraVE-EDA para otros virus
gastrointestinales asociados con la enfermedad diarreica aguda mediante
pruebas de biologa molecular.
Realizar anlisis filogentico de las cepas virales circulantes en el pas.
Realizar control de calidad a travs de una evaluacin del desempeo. Con base
a la calificacin final se definir el porcentaje de muestras a enviar al InDRE si
el desempeo es satisfactorio se continuar con este tipo de evaluacin.
Realizar la captura y emisin de resultados en la plataforma de Infolab y de
NuTraVE-EDA del InDRE as como la informacin completa de las muestras
que lleguen directamente al laboratorio.
Proporcionar los resultados en forma oportuna y confiable a los usuarios de la
red.
Promover la investigacin aplicada en apoyo a la vigilancia, para los programas
prioritarios de salud.
Funciones de los Laboratorios Estatales de Salud Pblica (LESP).
Los laboratorios estales (Aguascalientes, Baja California Sur, Baja California,
Campeche, Chiapas, Chihuahua, Coahuila, Colima, Durango, Estado de Mxico,
Guanajuato, Guerrero, Hidalgo, Jalisco, Michoacn, Morelos, Nayarit, Nuevo Len,
Oaxaca, Puebla, Quertaro, Quintana Roo, San Luis Potos, Sinaloa, Sonora,
Tabasco, Tlaxcala, Tamaulipas, Veracruz, Yucatn y Zacatecas) con capacidad
instalada para el diagnstico de rotavirus por PAGE llevan a cabo las siguientes
funciones:

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Realizar el diagnstico de rotavirus por la tcnica de PAGE con la metodologa

estandarizada que es proporcionada en la capacitacin en el InDRE.
Participar en el Programa Externo de Evaluacin del Desempeo a travs de los
paneles de eficiencia para la evaluacin del desempeo, dos veces por ao y
obtener una calificacin aprobatoria.
Solicitar un nuevo panel de evaluacin y enviar las acciones de mejoras, en el
caso de haber obtenido una calificacin no aprobatoria.
Enviar al laboratorio de virus gastrointestinales el 10% de las muestras positivas
de casos de EDA para control de calidad al InDRE en apoyo a la vigilancia
epidemiolgica convencional.
Enviar al laboratorio de virus gastrointestinales el 5% de muestras negativas de
casos de EDA para control de calidad al InDRE.
Enviar al laboratorio de virus gastrointestinales el resto de las muestras
positivas y negativas para conformacin del banco general de Rotavirus y la
tipificacin de los genotipos circulantes en el pas, en apoyo a la vigilancia
basada en el laboratorio.
Tener la capacidad instalada para procesar 50 muestras semanales, segn la
infraestructura del laboratorio y contar con personal de salud capacitado para
realizar el diagnstico.
Almacenar y conservar de forma adecuada los reactivos que se utilizan en la
tcnica de PAGE (anexo IV).
Solicitar al InDRE los reactivos para la tcnica de PAGE de acuerdo a la
calendarizacin programada (anexo V).
Asistencia del personal responsable a los cursos anuales de actualizacin, de
diagnstico de rotavirus y otros virus gastrointestinales, impartidos por el
InDRE.
Solicitar al InDRE capacitacin en servicio para el personal de nuevo ingreso o
bien cuando exista una nueva asignacin de analista, que ser el responsable del
diagnstico.
Enviar muestras negativas a Rotavirus por la tcnica de PAGE al servicio de
NuTraVE-EDA en apoyo a la vigilancia basada en el laboratorio.
Estandarizacin del servicio de envo de muestras de control de calidad al
InDRE, que a partir de la fecha de ser recibida en el LESP es de 15 das, (no
almacenar en refrigeracin las muestras, por perodos mayores a un mes).
Proporcionar al personal de otras instituciones de salud los formatos y
lineamientos vigentes establecidos por el InDRE para la toma y envo de
muestras al LESP.
Cumplir con los requerimientos establecidos en el Manual para la Toma, Envo,
Almacenamiento y Recepcin de muestras (REMU-MA-01/1); as como el uso
del Formato nico de Muestras (REMU F-05) vigente para el caso de la
vigilancia convencional. En el caso de NuTraVE-EDA utilizar el formato
impreso directamente de la plataforma que contiene el nmero de folio
completo.
Proporcionar los resultados en forma oportuna y confiable a sus usuarios a
travs del informe de prueba.

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Cumplir con el envo de muestras clnicas al InDRE para fortalecer la vigilancia

convencional y la vigilancia basada en el laboratorio.

TOMA, MANEJO Y ENVO DE MUESTRAS

Criterios de aceptacin de muestra
1. Se aceptarn las muestras que cumplan con la definicin operacional de
EDA.
2. Muestras registradas en la plataforma del InDRE.
3. Muestras con volumen suficiente (5.020 mL), y perfectamente etiquetadas.
4. Muestras que hayan sido tomadas en frasco de plstico con tapn de rosca.
5. Muestras que hayan sido tomadas dentro de las primeras 24 horas de haber
iniciado los sntomas en el paciente.
6. Muestras almacenadas a una temperatura de 4 a 8 C
7. Muestras que cumplan los lineamientos del manual de toma y envo de
muestras editado por el InDRE (REMU-MA-01).
Tipos de muestras
En los casos de EDA, se tomar muestra de materia fecal dentro de las primeras 24
horas de iniciados los sntomas en los pacientes que cumplan con los criterios
inclusin.
Criterios de rechazo de muestra
1. Se rechazarn las muestras que no cumplan con la definicin operacional de
EDA.
2. Muestras sin formato nico de muestras del InDRE, ni solicitud de oficio.
3. Muestras de referencia y control de calidad que no tengan resultado en
formato.
4. Muestras con volumen insuficiente (<5.0 mL) aun cuando estn
perfectamente etiquetadas.
5. Muestras que sean tomadas con hisopo rectal.
6. Muestras que excedan los 5 das de trnsito en reas locales y 7 das en reas
forneas.
7. Muestras derramadas.
8. Muestras no etiquetadas.
9. Muestras que no sean enviadas con refrigerantes.
10. Muestras de referencia o control de calidad que no cuenten con formatos de
envo ver anexo VII.
11. Muestras de referencia o control de calidad con datos incompletos en
formatos de envo.

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Toma de la muestra clnica

Colocar al paciente un paal desechable puesto al revs y vaciar la muestra en
un frasco recolector de polipropileno graduado con una capacidad de 20 mL.
Si la muestra es lquida vaciar en un vaso recolector de 5.0 a 10 mL de la
muestra diarreica directamente en un frasco limpio con tapa de rosca. Si la
muestra es slida, utilizar un abatelenguas y colocar en un frasco recolector (ver
figura 2).
Identificar el frasco con el nombre del paciente y fecha de la toma de muestra.
Introducir el frasco en una bolsa de plstico individual para evitar el derrame
accidental de la muestra.
Llenar el formato adecuadamente.
Enviar la muestra al laboratorio, adjuntando solicitud de oficio y relacin de
nombres de los pacientes en caso de ser varios.

Figura 2. Toma y recoleccin de la muestra clnica para Rotavirus y otros virus

gastrointestinales
ALMACENAMIENTO Y ENVO DE MUESTRAS
La muestra debe ser almacenada, por un mximo de siete das, en el refrigerador
entre 4 a 8 C hasta su envo al laboratorio.
Una vez almacenadas las muestras clnicas debern ser enviadas al laboratorio de
referencia [1] en cajas de unicel acompaadas de refrigerantes y en un sobre, colocar
El sistema bsico de triple embalaje consiste en la utilizacin de un recipiente primario, en el cual est
contenida la muestra biolgica (exudado farngeo, exudado nasofarngeo, lavado bronquio alveolar, biopsia,
suero, etc.), el recipiente primario (p. ej. criotubos, tubos o frascos con tapa de rosca) debe ser hermtico para
evitar que la muestra se derrame y tiene que estar perfectamente etiquetado con el nombre o nmero de
1

Rotavirus
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el oficio de solicitud y formatos debidamente completados (pegado en el interior de

la tapa superior), ver la figura 3 y 4.
MUESTRA
Slida: 5-10 g
Lquida: 5-20 ml

TOMA Y ENVIO
DE MUESTRAS

nombre
edad
fecha
procedencia

Etiquetar

Llenar
la encuesta

OFICIO
Directo
r
Dx.
Tcnic
a

Lista de
nombres y
resultados

nombre
edad
fecha
procedencia

Almacenar a 4C

Caja de envo

ENCUESTA
NuTraVE-EDA
No. Folio
REMU-F-12

muestra del paciente. El recipiente primario deber rodearse de material absorbente como gasa o papel
absorbente y colocarse en un recipiente secundario hermtico a prueba de derrames y golpes. Si se colocan
varios recipientes primarios dentro de un recipiente secundario se deber usar una gradilla y material
absorbente para evitar algn derrame. Es importante mencionar que dentro del recipiente secundario (hielera)
tiene que haber suficientes refrigerantes para mantener una temperatura de 4 a 8 C. Los recipientes
secundarios debern llevar las etiquetas de riesgo biolgico y seal de orientacin del recipiente, a su vez el
recipiente secundario deber ir contenido en un paquete externo de envo (caja de cartn o hielera) que proteja
el contenido de elementos externos del ambiente y debe estar etiquetado con los datos del remitente,
destinatario y seal de orientacin. La documentacin que se integre al triple embalaje deber colocarse en la
parte interior del paquete.

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Figura. 3. Toma y envo de muestras para gastroenteritis viral.

Figura.4. Logstica de trabajo (desde la toma de muestra, hasta la difusin del

informe).

Rotavirus
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ALGORITMOS DE DIAGNSTICO DE TIPIFICACIN Y

SECUENCIACIN PARA ROTAVIRUS Y OTROS VIRUS
GASTROINTESTINALES

Figura. 5. Algoritmo ampliado para NuTraVE-EDA. Clave de tabulador:

1A2510004, 1A2510005, 1A2510101, 1A2510302, 1A2510304, 1A2510006,
1A2510201, 1A2510301, 1A2510303

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Figura. 6. Algoritmo para control de calidad y tipificacin de Rotavirus. Clave de

tabulador: 1A251000, 1A2510004, 1A2510005
ESTNDARES DE CALIDAD
La funcionalidad de una red de diagnstico para la vigilancia epidemiolgica de
Rotavirus puede evaluarse en tres fases: 1) pre-analtica, 2) analtica y 3) postanaltica.
1) Fase pre-analtica
En la fase pre-analtica se evala la oportunidad de la toma de la muestra y la
calidad de la misma.
Se habla de una muestra adecuada si el paciente a quien se la toman cumple con la
definicin de caso, el tipo de muestra de acuerdo al diagnstico presuntivo de
gastroenteritis viral y que la cantidad de muestra sea suficiente, que se haya
cumplido el protocolo para la toma de la muestra, el material, la temperatura, el
embalaje y el transporte sean los adecuados.
Esta fase ocurre entre el inicio de los sntomas y el momento de la toma de la
muestra. El primer indicador para evaluar esta fase, es el ndice de rechazo de
muestras inadecuadas. El punto de corte del mismo es que no rebase el 10%. La
construccin del indicador es el siguiente:

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NDICE DE
RECHAZO = Nmero de muestras rechazadas
N de muestras que llegan a la institucin para diagnstico
El segundo indicador de la fase pre-analtica es la oportunidad de la toma de la
muestra. Este indicador mide el tiempo ptimo de la toma de la muestra con
respecto al inicio de los sntomas de la enfermedad. El cumplimiento de este
indicador es indispensable para mantener la adecuada sensibilidad de la prueba.
Oportunidad
Resultados de diagnstico informados en tiempo estndar entre el nmero de
muestras recibidas para diagnstico por 100.
Meta
Cumplir con la emisin de los resultados de diagnstico en tiempo estndar por lo
menos el 90% de las muestras procesadas mensualmente.
2) Fase analtica
Comprende todo el flujo de muestra dentro del proceso analtico y se utilizarn dos
indicadores:
a) Desempeo tcnico
b) Oportunidad del proceso analtico
El indicador de desempeo tcnico ser obtenido a travs de paneles de eficiencia
dos veces por ao, cumplimiento de cdula de verificacin en visitas de supervisin
(una vez al ao), concordancia con las muestras enviadas para cultivo viral y el 10%
de negativas y cumplimiento con las bases del sistema vectorial de caminando a la
excelencia.
ndice de desempeo tcnico
Confiabilidad
Paneles aprobados con el 90% o ms sobre paneles recibidos por 100.
Meta
Cumplir con el 85% o ms del programa de evaluacin del desempeo para cada
diagnstico.
3) Fase post-analtica
El indicador de la fase post-analtica es la emisin de resultado, el cual medir el
tiempo transcurrido entre el trmino del anlisis de PAGE y la llegada de la
informacin a la base de datos (plataforma de vigilancia epidemiolgica). Todos los
laboratorios que realizan el diagnstico para esta red deben informar los resultados
por da de proceso y no acumular los resultados para capturar resultados en el
sistema de informacin general. Tiempo entre procesamiento, captura y envo de
informacin dentro de las primeras 24 horas de terminado el proceso:
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La fuente de informacin de los indicadores, ser la plataforma Infolab y la de

NuTraVE-EDA actual, y la plataforma SiNaVE a partir del 19 de octubre de 2012. El
seguimiento de los indicadores en el InDRE se efecta por el personal de la
Direccin de Servicios de Apoyo, en combinacin con el rea de coordinacin de la
RNLSP y son revisados semanalmente, excepto el de desempeo tcnico que se
evala trimestralmente.
CAPTURA DE DATOS Y RESULTADOS
La captura de los datos en la plataforma de Infolab del InDRE y de NuTraVE-EDA
se realizar de acuerdo al manual de uso de las plataformas.
PANELES DE EFICIENCIA
Los laboratorios de la red Rotavirus reciben semestralmente en fechas previamente
establecidas un panel de eficiencia, y con base en los resultados obtenidos, se
evala su desempeo y se define si se continua con el diagnstico liberado (debe
obtenerse al menos el 80% de calificacin aprobatoria).

Concordancia entre 80 y 100%. Se mantiene este tipo de evaluacin.

Concordancia menor al 70%. Se requiere comprar un nuevo panel y enviar las
oportunidades de mejora.
Concordancia no aceptable en el segundo panel. Se requiere de capacitacin del
personal y establecer nuevamente el envo de muestras para realizar el
diagnstico en el InDRE.

ENVO DE PANELES DE EFICIENCIA

Se envan semestralmente dos paneles de evaluacin a la red con 10

muestras cada uno de ellos y dos controles positivos: e-tipo largo y e-tipo
corto.
El envo de los paneles se realiza a travs de las guas pre-pagadas por el
LESP.
Con cada panel se enva el oficio especfico, el formato para el informe de
resultados y el formato para que los laboratorios notifiquen la recepcin del
mismo.
Las muestras clnicas enviadas en los diferentes paneles son codificadas para
cada regin geogrfica. Se notifica va electrnica a travs de la coordinacin
de la RNLSP el envo de paneles de eficiencia.

RESULTADOS DE LOS PANELES DE EFICIENCIA

La RNLSP informa al laboratorio a travs de la coordinacin de la RNLSP

los resultados obtenidos del anlisis, 7 das hbiles posteriores a la recepcin
del panel.
Se informa a cada uno de los LESP correspondientes, de los resultados
obtenidos del panel con la clave previamente asignada por el InDRE.

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Se notifica a la RNLPS va electrnica y por oficio los resultados obtenidos

por el InDRE, 10 das hbiles despus de haber recibido la informacin del
LESP.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

Es importante mencionar que el anlisis de los resultados va enfocado a identificar
oportunidades de mejora en la RNLSP.
Los criterios de evaluacin que deben identificar los analistas del LESP son los
siguientes:
Muestra positiva: la prueba de Rotavirus se considera positiva cuando se
observa la presencia de los 11 segmentos de ARN viral o cualquiera de los
segmentos que conforman el primer bloque (bloque I, 4 bandas).
Muestra negativa: la prueba se considera negativa cuando hay ausencia de los 11
segmentos de ARN viral o bien de la observacin de segmentos inespecficos no
correspondientes al genoma de Rotavirus.

Rotavirus.- deteccin mayor del RNA viral en heces

Rotavirus.- deteccin menor del RNA viral en heces
Rotavirus.- deteccin escasa del RNA viral en heces
Rotavirus.- deteccin mnima del RNA viral en heces

Todo lo anterior para alcanzar la mayor ponderacin en cada caso.

PROGRAMA DE EVALUACIN EXTERNA DEL DESEMPEO (PEED)
El anlisis de los indicadores que a la fecha se utilizan en la evaluacin del Boletn
Caminando a la Excelencia, cumplimiento, concordancia y el desempeo obtenido
por los LESP en los paneles de eficiencia, permite contar con un panorama general
y determinar el diagnstico situacional de esta red.
Considerando los resultados obtenidos por la RNLSP en el boletn y PEED para el
diagnstico de rotavirus, se han propuesto modificaciones al esquema actual, con la
finalidad de privilegiar el envo de los paneles de eficiencia como una herramienta
ms eficaz para la evaluacin del desempeo, considerando para ello los siguientes
criterios:
1. Aquellos LESP que hayan obtenido 90% o ms de concordancia en el boletn
(rotavirus) y PEED, se clasificarn como sobresalientes.
2. Aquellos LESP que hayan obtenido menos de 90% y ms de 70% de
concordancia en el boletn (rotavirus) y PEED, se clasificarn como
satisfactorio.
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3. Aquellos que obtengan 70% o menos de concordancia en el boletn (rotavirus) y

PEED, se clasificarn como mnimo.
Con base en la evaluacin se propone modificar el porcentaje de muestras que
actualmente envan los LESP para aseguramiento de la calidad como se muestra a
continuacin:
Cuadro 1. Evaluacin del PEED
Clasificacin de
laboratorio
Sobresaliente

Satisfactorio

Mnimo

Porcentaje para aseguramiento de la calidad

Enviarn el 10% de muestras positivas y 5% de las
negativas a rotavirus y se les enviar panel de eficiencia
dos veces por ao.
Enviarn el 10% de muestras positivas y 5% de las
negativas a rotavirus y se les enviar panel de eficiencia
dos veces por ao.
Enviarn el 50% de muestras positivas y 10% de las
negativas a rotavirus, se deber solicitar un nuevo panel y
enviar medidas correctivas y plan de accin, y se les
enviar panel de eficiencia dos veces por ao.

BANCO DE MATERIAL BIOLGICO

Los LESP debern enviar el 100% de sus muestras positivas y negativas a
rotavirus para conformar el banco general de Rotavirus del InDRE, que
servir para la vigilancia en nuestro pas. Esta solicitud se deber enviar y notificar
con otro oficio diferente al de control de calidad (no existe costo alguno para este
envo). El laboratorio de virus gastrointestinales del InDRE, seleccionar slo el
25% de las muestras positivas a Rotavirus del banco, para la vigilancia basada en el
laboratorio, de las cuales se proporcionar resultado al LESP.
En el caso de las muestras enviadas para control de calidad, se realizar la
identificacin o tipificacin de rotavirus por RT-PCR.
Estudios de brotes de enfermedad diarreica aguda (EDA) asociados con
rotavirus
En caso de brotes por EDA asociados con rotavirus, se enviar al laboratorio de
virus gastrointestinales del InDRE el 50% de las muestras positivas a Rotavirus
para su tipificacin de cepas a VP7 y VP4 y 100% negativas para el diagnstico
diferencial de otros agentes virales: Norovirus, Sapovirus, Astrovirus y Adenovirus

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entricos 40 y 41. En el caso de brotes, se realizar el algoritmo ampliado para

brotes y NuTraVE-EDA.
Secuenciacin en apoyo al anlisis filogentico de las cepas circulantes
para Rotavirus y otros virus gastrointestinales.
La secuenciacin de ampliaciones de cADN se realiza con el apoyo del laboratorio
de genoma de patgenos del InDRE, para lo cual el laboratorio de virus
gastrointestinales lo solicita va memorndum acompaado de la lista de productos
de cADN y sus respectivos oligonucletidos.

Se realizar el 10% de la secuenciacin a los productos de cADN de las

diferentes cepas a sus genotipos G y P circulantes durante la epidemia rotaviral
anual para la confirmacin de cepas emergentes o re-emergentes.
Se realizar el 15% de la secuenciacin a los productos de cADN de los
diferentes genotipos G y P circulantes de Rotavirus slo en caso de brotes
asociados con Enfermedad Diarreica Aguda (EDA) para la confirmacin de
cepas emergentes o re-emergentes.
Se realizar el 5% de la secuenciacin a los productos de cADN de las cepas
circulantes para otros virus gastrointestinales slo en caso de brotes asociados
con EDA.
Se enviarn las muestras para NuTraVE: El envo de muestras clnicas para la
solicitud del estudio por NuTraVE, se realiza por oficio especfico acompaado
de la encuesta correspondiente de NuTraVE y muestra fsica diferente a la de
control de calidad, as como de su captura previa en la plataforma de NuTraVE.

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Envo del primer panel

a la RNLSP
Recepcin de
resultados en el InDRE
Envo de resultados a la
RNLSP
Recepcin del Plan de
acciones de los LESP
Fecha lmite de
cumplimiento al Plan
de Accin
Curso de actualizacin
para el diagnstico de
Rotavirus:
ELISA para
Diagnstico de
Rotavirus y
preparacin de
reactivos para
Rotaforesis, InDRE
Envo del segundo
panel a la RNLSP
Recepcin de
resultados en el InDRE
Envo de resultados a la
RNLSP

DIC

NOV

OCT

SEP

AGO

JUL

JUN

MAY

ABR

MAR

FEB

ACTIVIDAD

ENE

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES PARA LA RED DE ROTAVIRUS

xx
xx
xx
xx
xx

xx

xx
xx
xx

Nota: Las fechas del cronograma pueden estar sujetas a cambio de da.
Si algn da coincide con fin de semana o da de asueto, la fecha se
mueve al da hbil siguiente.

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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Bishop RF, Davidson GP, Holmes IH, Ruck BJ, Virus particles in epithelial cells
of duodenal mucosa from children with viral gastroenteritis. Lancet 1973;
1:1281-1283.
2. Jin S, Kilgore PE, Holman RC, Clarke MJ, Gangarosa EJ, Glass IR. Trends in
hospitalizations for diarrhea in Unites States children from 1979 through 1992:
estimates of the morbidity associated with rotavirus. Pediatr Infect Dis J 1996;
15:397-404.
3. Kotloff KL, Wasserman SS, Steciak JY, et al Acute diarrhea in Baltimore
children attending an outpatient clinic. Pediatr Infect Dis J 1988; 7:753-9.
4. Matson DO, Estes MK. Impact of rotavirus infection at a large pediatric
hospital. J Infect Dis 1990; 162:598-604.
5. Woods PA, Gentsch J, Gouvea V, et al. Distribution of serotypes of human
rotavirus in different populations. J Clin Microbiol 1992; 30:781-5.
6. Espejo, R.T. et al. Presence of two distinct types of rotavirus in infants and
young children hospitalized with acute gastroenteritis in Mexico City. J Infect D
1979; 139:474-477.
7. Padilla NL, Arias LC, Lopez S, Puerto F, Snodgrass DR, Taniguchi K and
Greenberg HBB . Diversity of rotavirus serotypes in Mexican infants with
gastroenteritis. J Clin Microbiol. 1990; 28:1114-8.
8. Castillo AR, Villa AV, Gonzlez RE, Pimentel ME, Mungua MM, de Jesus DB,
Diaz OH, Garcia LH, VP4 and VP7 Genotyping by Reverse Transcription-PCR of
Human Rotavirus in Mexican Children with Acute Diarrhea. J Clin Microbiol
2000; 38:3876-3878.
9. Lpez S, Padilla NL, Arias FC. Correlacin entre serotipo y electroferotipo de
rotavirus aislados en dos poblaciones de Mxico. Bol Med Hosp Mex 1993;
50:736-741.
10. Padilla NL, Mndez-Toss M, Menchaca G, Contreras FJ, Romero.-Guido P,
Puerto IF, Guisafr H, Mota F, Herrera I, Cedilla R, Muoz O, Calva J, Guerrero
LM, Coulson SB, Greenberg BH, Lpez S and Arias FC. Antigenic and Genomic
Diversity of Human Rotavirus VP4 in Two Consecutive Epidemic Seasons in
Mexico. J Clin Microbiol. 1998; 36:1688-1692.
11. Espejo TR, Puerto F, Soler C and Gonzlez N. Characterization of Human Para
rotavirus. Infec Immun. 1984; 44:112-116.
12. Epidemiologa. Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiolgica. Ciudad de
Mxico, Sistema nico de Informacin, Secretara de Salud, 1997; 14:4.
13. Gutirrez, G et al. Impact of oral rehydration and selected public health
interventions on reduction of mortality from childhood diarrheal in Mexico.
Bulletin of the Health Organization-Bulletin de I'Organisation mondiale de la
Sant, 1996, 74:189-197.
Rotavirus
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Pgina 30 de 43
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14. Villa S, Guiscafr H, Martnez H, Muoz O y Gutirrez G. Mortalidad estacional

por diarrea entre los nios mexicanos. Bulletin of the World Health
Organization. 1999; 5:375-380.
15. F. Ral Velzquez, Herlinda Garca-Lozano, Esteban Rodrguez, Yolanda
Cervantes, Alejandro Gmez, Martin Melo, Luis Anaya, Juan Carlos Ovalle,
Javier Torres, Benita Daz De Jess, Carlos lvarez-Lucas, Thomas Breuer,
Onofre Muoz y Pablo Kuri. Diarrhea Morbidity and Mortality in Mexican
Children Impact of Rotavirus Disease Pediatr Infect Dis J. 2004; 23:149-145.
16. Carr, M.E. Et al. The clinical features of infantile gastroenteritis due to
rotavirus. Scand J Infect Dis 1976; 8:241-243.
17. Rodrguez WJ, Kim HW, Brandt CD, et al. Longitudinal study of rotavirus
infection and gastroenteritis in families served by pediatric medical practice:
clinical and epidemiologic observations Pediatr Infect Dis J 1987; 6:170-176.
18. Dennehy Penelope H. Rotavirus Vaccines: an Overview: Clin Microbiol Rev.
2008; 21: 198-208.
19. Walter JE, Mitchell DK, Guerrero ML, Berke T, Matson DO, Monroe SS,
Pickering LK, Ruiz-Palacios G. Molecular epidemiology of human astrovirus
diarrhea among children from a periurban community of Mexico City. J Infect
Dis. 2001; 183:681-6.
20. Peasey AE, Ruiz-Palacios G, Quigley M, Newsholme W, Martinez J, Rosales G,
Jiang X, Blumenthal UJ. J Infect Dis. 2004; 189:2027-36.
21. Miller MJ, et al. Guidelines for safe work practices in human and animal
medical diagnostic laboratories. MMWR Surveillance Summ. 6; 61:1-102; 2012.
22. Guidelines for Biosafety Laboratory Competency. MMWR. Supplement / Vol.
60; 2011.
23. World Health Organization. Guidance on regulations for the Transport of
Infectious Substances 2013-2014; Geneva: WHO Press; 2012.
24. Chosewood C & Wilson DE. Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories 5th ed. CDC-NIH; 2009.
25. European Committee for Standardization. CWA 15793:2011 Laboratory biorisk
management standard. Brussels: CEN; 2011.
26. World Health Organization. Laboratory Biosafety Manual 3rd ed. Geneva:
WHO Press; 2004.

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ANEXO I: DISPOSITIVOS MDICOS

1. Lindberg Termoagitador con temperatura y agitacin regulable
2. Potencimetro digital
3. Fuente de poder marca Bio Rad
4. Cmara de electroforesis Mini protean II marca Bio Rad
5. Agitador tipo vortex
6. Microcentrfuga para tubos eppendorf de 3,000 10,000 rpm

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ANEXO II: PREPARACIN DE REACTIVOS

REACTIVOS PARA ROTAFORESIS
Solucin A 5X (Solucin de lisis)
Procedimiento:
1. Pesar: Tris base 1.6 g; EDTA 1.4 g; SDS 0.65 g y NaCl 2.0 g.
2. Disolver cada uno en 20 mL de agua bidestilada estril con agitacin constante,
hasta la completa disolucin.
3. Agregar 0.65 mL de -mercaptoetanol.
4. Llevar al volumen en un matraz aforado de 50 mL con agua bidestilada estril.
5. Guardar en una botella de vidrio o plstico.
6. Conservar a temperatura ambiente.
Solucin B 1X (Fenol saturado)
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.

Tomar el frasco (s) del fenol ultra puro presentacin en cristales.

Poner a bao Mara (60 C) el frasco hasta disolver todos los cristales.
Preparar solucin reguladora 1(B1) Tris-Base, 1M, pH 7.6
Preparar solucin reguladora 2 (B2) Tris-base, 0.1M, pH 7.6
Hacer 4 lavados con 500 mL cada uno, con solucin reguladora 1 (B1). Por cada
lavado dejar en agitacin 24 h.
6. Cuando transcurran 24 h, dejar reposar 30 min y retirar la solucin reguladora
(fase superior).
7. Hacer dos lavados de 400 mL con solucin reguladora, dos por cada lavado
dejar en agitacin por 24 h.
8. Cuando hayan pasado las 24 h, dejar reposar 30 min y retirar la solucin
reguladora.
9. Al volumen restante de la solucin B2, adicionar 0.2 mL de -mercaptoetanol
por cada 100 mL. Mezclar en un termoagitador durante 30 min.
10. Poner en un termoagitador y adicionar 0.5 g de 8-hidroxiquinolena en
cristales. Revisar la coloracin cada 5 min, hasta obtener el color deseado
(amarillo paja).
11. Dejar reposar el fenol con la solucin reguladora por dos das a 4 C.
12. Poner alcuotas de 35 mL de fenol fase de color amarillo y de 5 a 10 mL de
solucin reguladora fase transparente con un pipeteador automtico en tubos
cnicos de polipropileno (Corning) de 50 mL de capacidad.
13. Cubrir los tubos con papel aluminio y etiquetarlos.
14. Guardar el fenol en refrigeracin.

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Solucin reguladora 1 Tris-Base, 1M, pH 7.6

Procedimiento:
1. Pesar 121.1 g de Tris-base
2. Disolver en 600 mL de agua bidestilada y ajustar el pH a 7.6 (si el pH queda
muy bsico, bajarlo con cido clorhdrico concentrado).
3. Aforar con agua bidestilada en un matraz volumtrico de 1.0 L.

Solucin reguladora 2 Tris-base, 0.1M, pH 7.6

Procedimiento:

1. Pesar 12.11 g de Tris-base.

2. Disolver en 700 mL de agua destilada y ajustar el pH a 7.6 (si el pH queda muy
bsico, bajarlo con cido clorhdrico concentrado).
3. Aforar con agua bidestilada en un matraz volumtrico de 1.0 L
Cloroformo
1. Utilizar el reactivo directamente como viene en su presentacin comercial.
2. Guardar a temperatura ambiente.
Solucin C 1X (Solucin de colorante xilen-cianol)
1.
2.
3.
4.
5.

Procedimiento:
Pesar 0.5 g de Agarosa ultrapura.
Disolver la agarosa en 33 mL de agua bidestilada estril con ayuda de un
termoagitador.
Agregar 0.2 mL de Xilen-Cianol (50 mg/mL).
Dejar enfriar, tapar y etiquetar.
Guardar a temperatura ambiente.

Xilen-cianol 50 mg/mL
Procedimiento
1. Pesar 1.0 g de Xilencianol.
2. Disolverlo en 20 mL de agua bidestilada estril.
Solucin Acrilamida 30%/Bisacrilamida 0.8%
(Solucin de acrilamida-bisacrilamida)
Procedimiento

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1. Pesar 30 g de acrilamida y disolver en agua bidestilada estril con ayuda de un

termoagitador. Posteriormente, adicionar 0.8 g de bisacrilamida y continuar la
agitacin hasta la disolucin completa de los polmeros.
2. Aforar con agua bidestilada estril en un matraz volumtrico para preparar 100
mL.
3. Cubrir los tubos con papel aluminio y etiquetar.
4. Almacenar la solucin en refrigeracin.
Solucin de Tris Abajo pH 8.8 (4X)
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.

Pesar 18.17 g de tris base.

Disolver en 60 mL de agua bidestilada estril.
Agregar 4.0 mL de Dimetilsulfxido (DMSO) 10% a la solucin anterior.
Medir el pH de la solucin. El pH final debe ser de 8.8 (s el pH queda muy
bsico, ajustarlo con cido clorhdrico concentrado).
5. Llevar el volumen con agua bidestilada estril en un matraz volumtrico de 100
mL.
6. Almacenar en refrigeracin.
SDS 10%
Procedimiento:
1. Pesar 5.0 g de dodecil sulfato de sodio.
2. Disolver en 50 mL de agua bidestilada estril.
TEMED
1. Tetra-metil-etilen-diamino. Utilizar el reactivo directamente como viene en su
presentacin comercial.
2. Almacenar a 4 C.
Solucin de Persulfato de Amonio al 2%
Procedimiento
1. Pesar 0.4 g de persulfato de amonio.
2. Disolver en 20 mL de agua bidestilada estril.
3. Almacenar en refrigeracin.
Nota: para este reactivo se recomienda preparar poca cantidad ya que
su capacidad de polimerizacin disminuye en tres meses.

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SOLUCIN D 10X (Solucin de corrimiento para electroforesis)

Procedimiento:

1. Pesar 12 g de Tris-base y 57.6 g de Glicina.

2. Disolver en agua bidestilada estril y completar el volumen con agua bidestilada
estril en un matraz volumtrico hasta 500 mL.
3. Almacenar a temperatura ambiente.
SOLUCIN E 10X (Solucin de etanol para fijacin)
Procedimiento:
1. Agregar 3.0 mL de cido actico glacial en 287 mL de etanol absoluto.
2. Almacenar a temperatura ambiente.
SOLUCIN F 100X (Solucin de nitrato de plata para la tincin)
Procedimiento:
1. Disolver 3.66 g de nitrato de plata en 20 mL de agua bidestilada estril.
2. Almacenar a temperatura ambiente.
SOLUCIN G 125X (Solucin de revelado)
1. Formaldehdo al 38%. Utilizar el reactivo directamente como viene en su
presentacin comercial.
2. Almacenar a temperatura ambiente.
SOLUCIN DE HIDRXIDO DE SODIO 3% (Solucin de revelado)
Procedimiento:
1. Pesar 3.0 g de NaOH
2. Disolver lentamente en 100 mL de agua bidestilada estril. Precaucin: el
contenedor puede calentarse mientras se prepara la solucin.
3. Almacenar a temperatura ambiente.
SOLUCIN H (Solucin de paro)
1. cido actico glacial grado reactivo. Utilizar el reactivo directamente como
viene en su presentacin comercial.
2. Almacenar a temperatura ambiente.
Nota: para la preparacin de los reactivos antes descritos deber
utilizarse agua bidestilada de calidad certificada y estril.

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ANEXO III: ESPECIFICACIONES

ROTAFORESIS

DE

LOS

REACTIVOS

PARA

SOLUCIN A 5X

Tris, Tris-Base, Trizma-Base, cristales, peso molecular 121.1 (Roche, Promega,

Sigma).
EDTA, cido Etilen Diamino tetractico, peso molecular 372.26 (Bio-Rad,
Gibco, Boehringer-Manheim).
SDS, Dodecil Sulfato de Sodio, reactivo para electroforesis, peso molecular
288.38 (Bio-Rad).
NaCl, Cloruro de sodio, peso molecular 58.44 (Sigma).
-mercaptoetanol (Sigma).

SOLUCIN B 1X
Fenol, ultra puro, cristales, (Sigma, Invitrogen, Fluka-Biochemika).
Tris, Tris-Base, Trizma-Base, cristales, peso molecular 121.1 (Roche, Promega).
cido clorhdrico (Hycel, Reproqifin).
-mercaptoetanol, 2-mercaptoetanol (Sigma).
8-Hidroxiquinoleina, cristales, peso molecular 145.2, (Sigma).
CLOROFORMO
Cloroformo, grado analtico A.C.S., peso molecular 119.38, (Hycel, Fermont).
ACRILAMIDA
Acrilamida, grado electroforesis o biologa molecular, peso molecular 71.08,
(Sigma, Boehringer).
BIS-ACRILAMIDA
Bis-acrilamida, N, N, Metilen Bis acrilamida, grado electroforesis o grado
biologa molecular, peso molecular 154.2 (Sigma, MP Biomedicals, Bio-Rad).
PERSULFATO DE AMONIIO
Persulfato de amonio, grado electroforesis, (Gibco, ICN, Sigma).
TEMED
Temed, N, N, N, N, Tetra metil etilen diamino, grado electroforesis (Sigma,
Research-Organic, Bio-Rad).

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SOLUCIN C 1X
Agarosa, ultra pura, grado analtico (Sigma).
Xilen-Cianol, grado electroforesis (Sigma, Bio-Rad).
SOLUCIN D 10X
Tris, Tris-Base, Trizma-Base, grado molecular cristales, peso molecular 121.1
(Roche, Promega).
Glicina, Glicina ultra pura, grado electroforesis, peso molecular 75.07 (Sigma,
Gibco, Research-Organic).
SOLUCIN E 10X
cido actico glacial, grado reactivo A.C.S. (Merck, Golen Bell)
Etanol absoluto (Hycel, Golen Bell)
SOLUCIN F 100X
Nitrato de plata, reactivo A.C.S. (Sigma, Fermont)
SOLUCIN G 125X
Formaldehdo, (J.T. Baker, Golen Bell)
Hidrxido de sodio, reactivo analtico, grado U.S.P., peso molecular 40.00
(Reproquifin, Quiromed, Fermont, J.T. Baker)
SOLUCIN H
cido actico glacial, grado reactivo A.C.S. (Merck, Golen Bell)

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ANEXO IV: ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIN DE REACTIVOS

PARA PAGE.
Cuadro 2. Almacenamiento y conservacin de los reactivos para el diagnstico de
Rotavirus
Temperatura de
conservacin

Caducidad

Solucin A 1X

Temperatura
ambiente

6 meses

Frasco con tapn de rosca

Solucin B

Refrigeracin

6 meses

Tubo cnico tapn de rosca

de policarbonato de 50 mL
(Corning)

Solucin C

Temperatura
ambiente

6 meses

Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca

Solucin D 10X

Temperatura
ambiente

6 meses

Frasco con tapn de rosca

Solucin E 10X

Temperatura
ambiente

6 meses

Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca

Solucin F 100X

Temperatura
ambiente

6 meses

Frasco con tapn de rosca

protegido de la luz

Solucin G 125X

Temperatura
ambiente

6 meses

Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca

Solucin H

Temperatura
ambiente

No aplica

Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca

Cloroformo

Temperatura
ambiente

No aplica

Frasco de vidrio con tapn

de rosca. Cubrir con papel
aluminio

Solucin de hidrxido de
sodio al 3%

Temperatura
ambiente

6 meses

Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca

Acrilamida/Bisacrilamida

Refrigeracin

3 meses

Frasco de vidrio con tapn

Reactivos

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Tipo de
almacenamiento

de rosca. Cubrir con papel

aluminio
Persulfato de amonio 2%

Refrigeracin

3 meses

Frasco con tapn de rosca

protegido de la luz

TEMED

Refrigeracin

No aplica

Frasco de vidrio mbar con

tapn de rosca

Solucin tris Abajo

Refrigeracin

3 meses

Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca

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ANEXO V: LINEAMIENTOS PARA LA SOLICITUD DE INSUMOS

Poltica para la solicitud de insumos para el diagnstico de rotavirus
por rotaforesis
La Coordinacin de la RNLSP del InDRE, tiene como poltica, proporcionar un
servicio de calidad y respuestas oportunas para los laboratorios integrantes de
la red, la cual est integrada dentro del sistema de gestin de calidad y observa
los procedimientos vigentes y busca la mejora continua de su servicio. Para
cumplir con este propsito se requerir observar los siguientes lineamientos.
Los laboratorios estatales de salud pblica
Solicitar sus insumos para el diagnstico de Rotavirus a travs de un oficio
escrito dirigido al Director General Adjunto del InDRE; con atencin a la
coordinacin de la RNLSP.
Enviar su solicitud el da lunes de la semana anterior al envo.
Debern enviar su solicitud por correo normal, para poder darle trmite de
forma oficial, sin embargo, para asegurar una respuesta oportuna se les
solicita hacer el envo de sus oficios de solicitud escaneados (con nmero de
folios
ya
asignados
y
rubricados)
por
E-mail
al
correo
estevezjudith@yahoo.com.mx con atencin a Dra. Herlinda Garca Lozano o
bien por va fax al (01 55) 53420670 o bien al correo
hgarcialozano@yahoo.com.mx.
En caso de que no procese muestras o tenga problemas con el diagnstico
implementado deber informarlo va correo electrnico para justificar el no
uso de los reactivos.
Especificar en el oficio de solicitud, el nmero de kit que necesite (kit1, kit 2
o kit 3). No se proporcionan reactivos individuales.
Contar con fondos para cubrir su solicitud en la coordinacin de la RNLSP
del InDRE.
Asegurar que sus servicios de mensajeras tengan un tiempo de entrega de
24 horas para las solicitudes de reactivos.
Considerar que si el envo se planea en mircoles y no lo recolectan, este se
har hasta la semana siguiente.
Considerar las solicitudes de reactivos dos semanas antes de la fecha
estipulada del envo de paneles de evaluacin (ver cronograma). No se
suministrar peticiones de reactivos durante estas fechas.
En caso de tener solicitudes expeditas justificadas y que planee venir por los
insumos al instituto debido a la premura de tenerlos en existencia en su
estado; deber enviar su solicitud, con 48 horas de antelacin y en horario

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laboral, en el InDRE es de 8:00 a 16:00 horas, para que se puedan gestionar

sus requerimientos.
Ser responsabilidad del LESP sancionar a la mensajera contratada y si
fuera el caso recuperar el costo de los daos ocasionados, en caso de retraso
y/o extravo del insumo solicitado.
El LESP deber informar a la coordinacin de la RNLSP, a travs de correo
electrnico de las siguientes situaciones relacionadas con el sistema de
diagnstico implementado, descompostura de equipo, reactivos caducos, y
derrame de reactivos durante el envo con la finalidad de darle seguimiento
a su problemtica.
Es responsabilidad del LESP, solicitar al rea de laboratorio de virus
gastrointestinales su Kit de reactivos, con un mes de anticipacin a las
fechas previamente programadas al envo de sus paneles de evaluacin.

rea tcnica: laboratorio de virus gastrointestinales

El tiempo de respuesta ser no mayor a 48 horas, una vez que se ha recibido
la solicitud de insumos por parte de la coordinacin de la RNLSP, considerar
que slo los das de entrega de mensajera son lunes, martes y mircoles.
Los insumos previamente autorizados de las solicitudes respectivas, debern
estar debidamente embalados en cajas de cartn.
Se rotularn las cajas de envo con los datos de la persona a quien se enva y
el lugar, sealando con flechas la orientacin/posicin en que debe
manejarse la caja durante el envo.
Entregar los paquetes a la coordinacin de la RNLSP a la hora acordada, la
cual depender de cada mensajera.
Los envos de reactivos se colocarn en caja de cartn para asegurar la
integridad de la misma y por tanto de los insumos.

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ANEXO VII: FORMATO PARA LA VIGILANCIA DE LA ENFERMEDAD

DIARREICA AGUDA (EDA) POR ROTAVIRUS

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