Radicales Libres y Antioxidantes en El Proceso Inflamatorio y en Las Lesiones Por Isquemia-Reperfusion

Vet Clin Small Anim 38 (2008) 31123
CLNICAS VETERINARIAS
PEQUEOS ANIMALES
Radicales libres y antioxidantes
en el proceso inflamatorio
y en las lesiones por isquemia-reperfusin
Peter Vajdovich, PhD
Department of Internal Medicine and Clinics, Szent Istvn University,
H-1078, Istvn u. 2., P.O. Box 1400, Budapest, Hungary
RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES EN EL PROCESO
INFLAMATORIO
Generalidades sobre la inflamacin
La inflamacin es uno de los mecanismos de defensa del husped ms tiles e impor-
tantes. Sin una respuesta inflamatoria adecuada la vida no sera posible [1]. Tambin
es una de las formas ms comunes de lesionar los tejidos. La palabra inflamacin
significa literalmente quemazn. El romano Cornelio Celso formul sus famosos
signos cardinales de la inflamacin: calor, rubor, tumor y dolor. A esta lista clsica de
cuatro signos debe aadirse functio laesa o prdida de funcin. Este quinto signo sue-
le atribuirse a Galeno (130200 d. C.), pero en realidad se debe a Rudolf Wirchow
(18211902), el padre de la patologa moderna.
La inflamacin es un proceso en el que intervienen mltiples participantes celula-
res, humorales y tisulares. Comienza o est precedida por una lesin celular o tisular
que provoca ajustes hemodinmicos y de la permeabilidad. Rpidamente, los vasos
afectados exudan lquidos, protenas plasmticas y leucocitos. La maquinaria que acti-
va estos procesos incluye mediadores bioqumicos. Los distintos tipos de leucocitos
contribuyen a la reaccin de defensa debido a su capacidad para migrar, liberar enzi-
mas y, muchas veces, mediadores inflamatorios, e inducir la fagocitosis. En las reac-
ciones inflamatorias que provocan respuestas sistmicas suele producirse un aumento
de leucocitos circulantes en el torrente sanguneo (leucocitosis) y, por supuesto, en los
tejidos.
Aunque la inflamacin es una parte de la defensa del husped, puede provocar una
lesin tisular en el husped mayor que la que podra haber causado el estmulo inicial
si no se hubiera producido la respuesta inflamatoria (p. ej., las reacciones anafilcticas,
que son devastadoras para el organismo y la neutropenia inducida experimentalmente,
que previene la aparicin de neumona e hipoxia graves en los terneros infectados por
Mannheimia haemolytica). Muchas enfermedades, especialmente las enfermedades
inmunomediadas (p. ej., anemia hemoltica inmunomediada, dermatopatas autoinmu-
nitarias similares y peritonitis infecciosa felina), se asocian a reacciones inflamatorias
que no suponen un beneficio evidente para el husped, sino que le perjudican.
Direccin electrnica: vajdovich.peter@aotk.szie.hu
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La inflamacin es un proceso orientado a la supervivencia. Sin el proceso infla-
matorio, sera difcil contener las infecciones bacterianas, las heridas no cicatrizaran
bien y los tejidos lesionados no se repararan. Como ejemplos pueden citarse las
enfermedades granulomatosas que se desarrollan en los seres humanos que tienen
infecciones recurrentes graves. En estos pacientes se produce un profundo deterioro
del metabolismo exudativo de los leucocitos (es decir, en la generacin de radicales
libres reactivos de oxgeno) que da lugar a defectos de la funcin microbicida. El
sndrome de Chediak-Higashi (SCH) se ha descrito en los seres humanos, los visones
aleucianos, los ratones de color beige, el ganado Hereford parcialmente albino y los
gatos. El SCH es una enfermedad autosmica recesiva determinada genticamente
que se caracteriza por neutropenia, infecciones pigenas recurrentes asociadas gr-
nulos lisosomales fagocticos gigantes anormales y defectos de la actividad microbi-
cida. La deficiencia de la adherencia leucoctica (DAL) es una enfermedad rara que
se ha descrito en los seres humanos, el ganado vacuno (DAL bovina, DALB) y en los
perros, en la que los leucocitos carecen de un grupo relacionado de molculas de
adherencia funcionales en su superficie, las integrinas CD11/CD18. En la DAL algu-
nos leucocitos, en especial los neutrfilos, son incapaces de abandonar el torrente
sanguneo y entrar en los tejidos. La DAL se extendi mucho en Estados Unidos
entre las vacas frisonas Holstein porque el gen defectuoso se disemin debido a la
inseminacin artificial [2]. En los seres humanos tambin se ha descrito otra defi-
ciencia de las molculas de adhesin, la DAL 2.
Manifestaciones de la inflamacin aguda
Los tres componentes principales de la respuesta inflamatoria son [1]:
Cambios hemodinmicos. 1.
Cambios de la permeabilidad. 2.
Las clulas implicadas. 3.
Cambios hemodinmicos
Tras la primera seal de la respuesta inflamatoria se producen rpidamente alteraciones
de la permeabilidad de los vasos afectados y reacciones que afectan a los leucocitos. Las
alteraciones hemodinmicas son una cadena integrada de sucesos activada por mediado-
res bioqumicos, aunque en algunos casos se inician de forma transitoria debido a meca-
nismos neurognicos. Los cambios hemodinmicos siguen la siguiente secuencia:
Vasoconstriccin transitoria que dura algunos segundos (mecanismo neurognico). 1.
Vasodilatacin, que tarda unos minutos en aparecer y dura horas o ms. La 2.
liberacin de histamina hace que se formen mastocitos y se produzcan xido
ntrico (NO) y prostaglandinas (PGD
2
, PGE
2
), lo que causa hiperemia activa local
aguda.
El volumen del flujo sanguneo aumenta en la zona debido a la vasodilatacin. 3.
El aumento de la permeabilidad vascular (histamina, leucotrienos LTC 4.
4
, -D
4
, y -E
4
,
bradicinina y factor activador plaquetario [PAF]) produce contraccin de las clu-
las endoteliales, por lo que se producen fisuras en los vasos pequeos. Los facto-
res del complemento (C5a y C3a) participan indirectamente induciendo la libe-
racin de histamina en los mastocitos.
El caudal del flujo disminuye debido a la vasodilatacin que existe en la zona I. 5.
RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
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Se produce marginacin de los leucocitos a lo largo de las paredes vasculares: 6.
la disminucin del caudal del flujo produce una disminucin de la fuerza de
resistencia de los leucocitos cuando entran en contacto con la pared de los vasos,
por lo que las molculas de adhesin que se encuentran sobre los leucocitos y
las clulas endoteliales pueden permanecer unidas. Tambin aumentan el nmero
y la avidez de las molculas de adhesin. Cuando la permeabilidad vascular
aumenta mucho, se filtran ms protenas en los tejidos.
Se produce exudacin: los leucocitos migran hacia los tejidos, igual que el suero. 7.
Cambios de la permeabilidad
Tras la lesin local puede producirse directamente filtracin vascular, causada por
cualquier clase de lesin estructural de la microvasculatura que afecta a todos los tipos
de vasos, o indirectamente, como un efecto de las sustancias bioqumicas que aparecen
en, y alrededor, de la zona y afectan principalmente a las vnulas.
La permeabilidad puede ser un proceso pasivo que afecta al paso de lquido entre
las clulas endoteliales o un proceso activo en el que las clulas endoteliales crean
vesculas endocitticas y descargan el contenido al otro lado de la barrera mediante
transporte activo dentro de la propia clula.
El edema puede desarrollarse mediante dos mecanismos principales: hidrosttico o
debido a mediadores bioqumicos que estn almacenados y se liberan desde las clulas
(es decir, histamina y serotonina de los mastocitos, granulocitos basfilos y plaquetas)
o que se sintetizan rpidamente. Los mediadores bioqumicos incluyen:
Cininas plasmticas, como bradicinina, que se activan o se adhieren enzimti- 1.
camente por la accin de proteinasas plasmtica, como el factor de Hageman
(XIIa).
Factores del complemento, como C5a y C3a, que inducen la liberacin de 2.
mediadores desde los leucocitos.
Leucotrienos que se producen a travs de la cascada del cido araquidnico 3.
(AA) y que actan independientemente de los granulocitos de los neutrfilos
(LTC
4
, LTD
4
, LTE
4
) o actan a travs de cambios de la permeabilidad dependien-
tes de los neutrfilos (LTB
4
).
Prostaglandinas, como PGE 4.
2
y PGI
2
, que producen vasodilatacin y filtracin
vascular, y tromboxano A
2
que causa filtrado vascular solamente.
Citocinas, como interleucina (IL)-1 y el factor de necrosis tumoral (TNF)- 5. que se
sintetizan en los leucocitos e inducen la segunda fase de la filtracin vascular
PAF, que afecta tanto al endotelio como a los leucocitos. 6.
Los siguientes mediadores producen contraccin de las clulas endoteliales, que da
lugar a fisuras en los vasos pequeos:
La histamina (de los mastocitos) causa un efecto transitorio y a corto plazo que 1.
puede eliminarse con antihistamnicos. (Otros mediadores son LTC
4
, LTD
4
, LTE
4
y
bradicinina.)
PAF. 2.
La serotonina (slo en los mastocitos de los roedores) tiene un efecto prolongado 3.
(34 horas). (Los antihistamnicos no invierten los cambios.)
El complemento, como C5a y C3a, participa indirectamente induciendo la libe- 4.
racin de histamina por los mastocitos.
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Los mediadores bioqumicos de la permeabilidad vascular pueden ejercer sus efec-
tos actuando directamente sobre la microvasculatura (p. ej., histamina y LTC
4
, LTD
4
y
LTE
4
) o utilizando los leucocitos como intermediarios (p. ej., citocinas).
Citocinas. Las citocinas inflamatorias pueden dividirse en dos grupos: las que partici-
pan en la inflamacin aguda y las responsables de la inflamacin crnica. IL-1, TNF-,
IL-6, IL-8, IL-11 y otras quimiocinas desempean una funcin en la inflamacin agu-
da. Las citocinas que participan en la inflamacin crnica pueden dividirse en dos
grupos. IL-4, IL-5, IL-6, IL-7 y IL-13 son las citocinas que median las respuestas
humorales. IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, los interferones (IFN), el
factor de crecimiento transformante (TGF)- y TNF- median las respuestas celulares.
Algunas citocinas, como IL-1, participan de forma significativa tanto en la inflamacin
aguda como crnica [3,4].
IL-8 y otras quimiocinas de bajo peso molecular (p. ej., protena inflamatoria de
macrfago-1) pertenecen a la familia de citocinas quimiotcticas y son responsables
de la migracin quimiotctica y de la activacin de los neutrfilos y otros tipos celulares
(p. ej., monocitos, linfocitos, basfilos y eosinfilos) en el sitio de la inflamacin [5].
La formacin de citocinas como IL-8 puede estar inducida por metabolitos reactivos
de oxgeno (MRO) como el perxido de hidrgeno (H
2
O
2
). El tratamiento con 1 mM de
H
2
O
2
produce la mxima expresin de IL-8 en clulas Caco-2 adultas sin filtrar
24 horas despus del tratamiento. Adems, puede inducir necrosis tisular. Se observ
que 1 mM de H
2
O
2
tena un efecto necrosante tardo en las clulas Caco-2 adultas sin
filtrar [6].
Tras un estmulo que induce inflamacin, se activa el factor nuclear kappa B
(NF-B), un activador de la transcripcin de varios genes inflamatorios [7]. Simult-
neamente, tambin puede activarse la ruta de la protena cinasa activada por mitogn
(MAPK) [8].
Los radicales libres de oxgeno regulan la activacin de los factores de transcrip-
cin, como NFB y la protena activadora 1, en varias clulas diferentes. Esta acti-
vacin da lugar a la expresin de muchas citocinas proinflamatorias, incluyendo
IL-1 [9].
Clulas implicadas
Los grupos bsicos de leucocitos que participan en las reacciones inflamatorias son los
granulocitos neutrfilos, eosinfilos y basfilos, mastocitos, monocitos y macrfagos,
linfocitos, y plasmocitos. Todos, excepto los mastocitos y los plasmocitos, son habi-
tantes normales de la sangre circulante. Cada uno de estos tipos celulares desempea
una funcin diferente y entra en el proceso inflamatorio en respuesta a un estmulo
especfico [1]. La produccin de clulas mieloides, como neutrfilos, eosinfilos,
basfilos y monocitos, est regulada principalmente por las siguientes citocinas: IL-3,
factor estimulante de colonias de granulocitos y macrfagos (GM-CSF), factor estimu-
lante de colonias de granulocitos (G-CSF) y factor estimulante de colonias de mono-
citos (M-CSF) [10].
Granulocitos neutrfilos o leucocitos polimorfonucleares. Generalmente, la madura-
cin de los granulocitos neutrfilos polimorfonucleares (PMN) en la mdula sea dura
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2 semanas, pero puede acelerarse si existe una gran demanda de neutrfilos circulan-
tes. En algunos casos, la maduracin se produce en el bazo y/o el hgado, a veces en
respuesta a un aumento de la demanda de estas clulas y a veces por razones eviden-
tes [1]. Los neutrfilos maduros permanecen en la circulacin menos de 1 da
(7-14 horas) y despus migran a los tejidos, donde pueden sobrevivir hasta 1-2 das;
no regresan a la circulacin. Sin embargo, los neutrfilos leucmicos pueden volver
a circular [10]. Normalmente, existen dos compartimentos funcionales de PMN en
la sangre: un compartimento marginal, formado por las clulas que se encuentran
en la luz de los vasos sanguneos, y un compartimento circulante, formado por las
clulas que fluyen libremente y que se encuentran en las muestras cuando se hacen
frotis sanguneos [1]. En los perros normales, el ganado bovino y los caballos, slo
la mitad de los neutrfilos circulan libremente y aproximadamente la mitad se
encuentran en el compartimento marginal, pero en los gatos, aproximadamente dos
tercios de los neutrfilos se encuentran en el compartimento marginal [10]. Cual-
quier mediador farmacolgico o bioqumico que afecte al nivel de los leucocitos o a
la funcin de las clulas endoteliales puede modificar el equilibrio entre los compar-
timentos marginal y circulante [1]. El compartimento marginal puede movilizarse
rpidamente bajo la influencia de la adrenalina y los corticoesteroides liberados a la
circulacin en respuesta a estmulos fisiolgicos y patolgicos. La adrenalina dismi-
nuye la adherencia aumentando la produccin de AMP cclico. Los frmacos antiin-
flamatorios no esteroideos (AINE) pueden inhibir la agregacin y la adherencia
inducidas por el complemento (C5a) in vitro [10].
La funcin principal de los neutrfilos en la respuesta inflamatoria implica su par-
ticipacin en la fagocitosis, la liberacin de sus enzimas lisosomales lticas y la forma-
cin de factores quimiotcticos [1].
Durante la fagocitosis, las clulas absorben las partculas extraas y luego las des-
truyen mediante sus enzimas y otros componentes que se encuentran principalmente
en los grnulos. Existen numerosas enzimas y otras sustancias en los grnulos neutr-
filos (lisosomas), y muchas de estas enzimas son proteolticas y digestivas. Cuando los
neutrfilos ingieren las partculas, las envuelven en una membrana celular, formando
fagosomas, que se fusionan con los lisosomas para formar fagolisosomas. La sntesis
de factores quimiotcticos tambin es una funcin esencial, ya que ciertos componen-
tes del complemento pueden activarse por enzimas de los neutrfilos, produciendo
quimioatractores (como C5a) para ms neutrfilos y PMN que producen LTB
4
, que da
lugar a la atraccin y activacin cclicas de los neutrfilos [1].
En los PMN de varias especies se han identificado varias clases y subclases de
grnulos (o compartimentos). Cada uno de los tipos principales de grnulos tiene un
perfil enzimtico distinto, que adems puede variar entre las especies. Los diferentes
grnulos aparecen en diferentes fases del desarrollo de los neutrfilos en la mdula
sea. Los grnulos azurfilos, o primarios, son los primeros en aparecer. Estos grnulos
son grandes, ovalados y electrodensos. Los grnulos especficos, o secundarios, son
ms pequeos, menos densos y ms numerosos [1].
En los neutrfilos maduros no puede demostrarse la presencia de grnulos azur-
filos con los mtodos que suelen utilizarse para teir los frotis de sangre debido a la
disminucin del contenido de glucosaminoglicanos (mucopolisacridos) en los gr-
nulos. Generalmente, la formacin de grnulos primarios se limita a la fase promie-
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locito. Se dividen en dos grupos: un grupo contiene grandes cantidades de pptidos
antibacterianos denominados defensinas o beta-defensinas (en el ganado bovi-
no) y el otro grupo no contiene estos pptidos, pero su perfil enzimtico es muy
parecido [1].
Se cree que los grnulos secundarios slo se producen en la fase de mielocito. Los
grnulos secundarios especficos no contienen mieloperoxidasa (MPO). En los neutr-
filos de muchas especies se han identificado otros tipos de grnulos, y se han denomi-
nado grnulos terciarios o grnulos de gelatinasa. La gelatinasa, una enzima que
disuelve la matriz extracelular es, cuantitativamente, su mayor componente, aunque
tambin contienen citocromo b especfico de los grnulos [1].
Las vesculas secretoras son ricas en receptores y tambin contienen algunas enzi-
mas. Los neutrfilos contienen otros componentes de localizacin incierta.
Las protenas que se encuentran en los neutrfilos son esenciales. Pueden clasificar-
se segn su naturaleza bioqumica o segn sus sitios de actividad en serina, metalo-,
cistena y asprtico proteinasas. Las dos primeras clases de proteinasas degradan las
protenas de la matriz extracelular. Las serina proteinasas tienen un residuo serina
catalticamente esencial en su sitio activo. Las cistena y asprtico proteinasas, que se
denominan as porque requieren un aminocido en particular para su actividad catal-
tica, incluyen las catepsinas B, D, H, L y S, que se encuentran en los lisosomas de la
mayora de los leucocitos [1].
Granulocitos eosinoflicos. Los granulocitos eosinoflicos se encuentran abundante-
mente en los sitios donde existe un trastorno inflamatorio alrgico, parasitario o fn-
gico de tipo determinado, pero pueden formar parte de cualquier exudado. Tienen una
funcin nica como clulas efectoras para daar o eliminar helmintos y otros patge-
nos. Tambin tienen una predisposicin tanto para causar trastornos de hipersensibi-
lidad como para colaborar en su regulacin, especialmente reacciones de hipersensi-
bilidad de tipo I. Los eosinfilos son fagocitos, pero menos activos que los neutrfilos.
Se forman en la mdula sea, y su diferenciacin y maduracin dependen especial-
mente de tres citocinas: IL-3, IL-5 (factor de diferenciacin de eosinfilos) y GM-CSF.
En los tejidos, se encuentran principalmente en la pared intestinal, los pulmones, la
piel y las mucosas. Los glucocorticoesteroides afectan a los eosinfilos, y un aumento
de la liberacin o la administracin de estas sustancias puede producir eosinopenia,
que puede atribuirse en parte a la inhibicin transitoria de la liberacin de eosinfilos
desde la mdula sea [1].
Los eosinfilos pueden adherirse a los helmintos y perder los grnulos. General-
mente, son atrados a zonas de degranulacin de los mastocitos. Los eosinfilos tienen
el potencial bioqumico para ayudar a neutralizar algunos de estos mediadores deriva-
dos de los mastocitos. Debido a la degranulacin de los mastocitos, tambin aparece
una quimiotaxina eosinfila especfica, la eotaxina. Aparentemente, varios tipos de
clulas, incluyendo fibroblastos y algunas clulas epiteliales, sintetizan las protenas
eotaxina pequeas en los tejidos, como respuesta, al menos en parte, a la liberacin del
contenido de los mastocitos estimulados, como la histamina [1].
Los eosinfilos responden a los mismos estmulos y quimiotaxinas que los neutr-
filos (p. ej., factores bacterianos solubles y componentes activados del sistema del
complemento). En condiciones normales, la llegada de los eosinfilos ayuda a destruir
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los antgenos o los patgenos ofensivos y puede ayudar a neutralizar el exceso de
mediadores de los mastocitos, que podra causar una inflamacin excesiva. Si el est-
mulo antignico o inflamatorio es persistente, o si el sistema inmunitario del husped
es demasiado sensible, llegarn al tejido demasiados eosinfilos y permanecern dema-
siado tiempo en l, contribuyendo a las reacciones tisulares adversas y a la lesin
tisular [1].
Monocitos y macrfagos. Los monocitos y los macrfagos se originan en la mdula
sea y migran a los tejidos desde la sangre circulante. Pueden destacar en las reac-
ciones inflamatorias. Algunos macrfagos, los histiocitos, residen en los tejidos y
experimentan la divisin celular, pero tambin se originan en la mdula sea. Los
macrfagos son los leucocitos ms dinmicos, su semivida en la circulacin es de
24 a 72 horas. Los monocitos de la sangre tienen que activarse antes de adquirir su
mxima competencia funcional como macrfagos. As, la diferencia principal entre
los monocitos y los macrfagos se relaciona con el sitio de activacin. En los rumian-
tes (vacas, ovejas y cabras), los gatos y los cerdos se encuentran macrfagos espec-
ficos de rgano, clulas de Kupffer hepticas y macrfagos intravasculares pulmona-
res. Estas clulas son muy sensibles a las endotoxinas bacterianas y a otros estmulos
que inducen la liberacin de una gran cantidad de citocinas y otros mediadores des-
de los macrfagos. En esta situacin especial, los macrfagos fijados a los tejidos
pueden provocar respuestas inmunoinflamatorias especficas de rgano [1]. Tienen
importantes funciones secretoras, ya que son capaces de sintetizar un gran nmero
de mediadores.
El proceso de fagocitosis y de eliminacin de los microorganismos es parecido en
los macrfagos y en los neutrfilos. Los macrfagos absorben y destruyen los patge-
nos que los neutrfilos no pueden controlar de forma eficaz, especialmente los micro-
organismos intracelulares y los que causan una respuesta inflamatoria granulomatosa
(p. ej., hongos, protozoos, virus, el bacilo tuberculoso, Listeria y Brucella spp.) [11].
Su funcin se asocia a la formacin de radicales libres de oxgeno, intermediarios
reactivos de nitrgeno (radicales de oxgeno, NO) y pptidos antimicrobianos (como
las defensinas) en los grnulos celulares. Los macrfagos de las vacas resistentes a
Brucella abortus producen significativamente ms explosiones oxidativas y tienen ms
actividad bacteriosttica que los macrfagos de las vacas susceptibles [12].
Los macrfagos limpian los deshechos de los tejidos mediante fagocitosis y des-
componiendo la fibrina (activadores del plasmingeno). Los macrfagos especficos
de tejidos pueden recoger los deshechos tisulares e incluso participar en el reciclado de
las sustancias que el organismo prefiere conservar, como el hierro procedente de los
productos de la degradacin de los grupos hemo. Ingieren los restos celulares, las
clulas afectadas, las clulas recubiertas de anticuerpos y otros materiales extraos.
Como ejemplos pueden citarse la destruccin fagoctica de los ncleos expulsados de
los metarubricitos en la mdula sea, la eliminacin de los cuerpos de Howell-Jolly
de las clulas circulantes en el bazo y la fagocitosis de los eritrocitos recubiertos de
anticuerpos por el sistema de fagocitos mononucleares en la anemia hemoltica inmu-
nomediada [11].
Los mediadores que se forman en los macrfagos reclutan otros leucocitos en la zona
e influyen en su actividad, y tambin en la de las clulas del estroma, como los fibro-
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blastos. Esta funcin est mediada por la sntesis de quimiocinas (IL-8, oncogn-
relacionado con el crecimiento/actividad estimuladora del crecimiento de melanomas,
protena-1 quimioatractora de monocitos, protena-10 IFN-inducible, y otras) y la sn-
tesis de otros mediadores que incrementan la expresin de los leucocitos y la molculas
de adhesin endoteliales, como los interferones (IFN- e IFN-) y las citocinas (IL-1,
IL1-1, IL-1ra, IL-4, y otras, y TNF-) [1]. Las citocinas de los macrfagos pueden
causar cambios dramticos en las clulas. Por ejemplo, IL-1 disminuye la expresin
de la protena de la Na
+
-K
+
-ATPase. Esta accin se consigue estimulando la MAP y la
protena cinasa regulada por la seal extracelular (MEK)/ruta de la protena cinasa regu-
lada por la seal extracelular (ERK), NF-B, y ciclooxigenasa [COX]) [13].
Las citocinas sintetizadas por los macrfagos, IL-1, TNF- e IL-6, tienen efectos
estimulantes autocrinos y paracrinos locales, que incluyen la induccin de una respues-
ta de fase aguda a la inflamacin, la infeccin u otra enfermedad [1].
Los macrfagos estimulan y modulan otra actividad celular en los tejidos por sus
actividades antimicrobianas, antivricas (formacin de radicales libres de oxgeno,
mediadores nitrito, proteasas) y antitumorales (oncostatina M, factor inhibidor de la
leucemia). Estimulan las respuestas inmunitarias linfocitarias producidas por citocinas
(IL-1, IL-1, IL-1ra, IL-4 y otras, y TNF-). Afectan a las reacciones vasculares
mediante la sntesis de mediadores lipdicos de la inflamacin (PAF, prostaglandinas,
leucotrienos) e intermediarios reactivos de nitrgeno (NO). Tambin actan en la cica-
trizacin y reparacin: los macrfagos estimulados sintetizan y secretan factores de
crecimiento, como el factor de crecimiento hematopoytico (G-CSF, GM-CSF, M-CSF)
y otros factores de crecimiento como TGF-, TGF-, el factor de crecimiento derivado
de plaquetas y el factor de crecimiento de los hepatocitos, que estimulan la regenera-
cin y las respuestas de reparacin en el tejido lesionado [1].
Los macrfagos desempean una funcin en la fase aferente de la respuesta inmuni-
taria (la induccin de la inmunidad frente a un antgeno) y en la fase eferente (la expre-
sin de la inmunidad celular). En la fase aferente de la respuesta inmunitaria, los macr-
fagos recogen y procesan el antgeno antes de que est disponible para que los linfocitos
desencadenen una respuesta mediante anticuerpos o la inmunidad celular. La propiedad
de los macrfagos para unirse al antgeno se asocia a sus antgenos de superficie (Ia). Los
monocitos procesan el antgeno de una forma altamente inmunognica. Despus, el ant-
geno est disponible para los linfocitos por la secrecin de un producto de los macrfagos
soluble que se une al antgeno o por la interaccin entre las clulas. Los macrfagos secre-
tan IL-1, que estimula a los linfocitos T, que elaboran varias linfocinas que reclutan
clones especficos de las clulas T y B para que participen en la fase eferente de la res-
puesta inmunitaria [3]. En la fase eferente de la respuesta inmunitaria, el aumento de la
fagocitosis, la destruccin de los patgenos recubiertos de anticuerpos o la citotoxicidad
se consiguen mediante macrfagos activados o armados [11].
Tanto los neutrfilos como los macrfagos migran hacia los tejidos, pero los PMN
lo hacen ms deprisa y en mayor nmero; los macrfagos aparecen ms tarde en las
reacciones tisulares. Los macrfagos tienen una esperanza de vida mayor que los neu-
trfilos y pueden proliferar en zonas donde la inflamacin se prolonga; esta prolifera-
cin es responsable de que existan en gran nmero en las reacciones de larga duracin.
Los macrfagos son el origen de las clulas gigantes multinucleadas presentes en algu-
nas reacciones inflamatorias crnicas. Por ejemplo, los objetos no digeribles, como los
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cuerpos extraos o ciertos tipos de microorganismos como las micobacterias, pueden
estimular a los macrfagos para que se fundan y formen clulas gigantes. Esta fusin
puede ser el resultado de que coexistan macrfagos muy estimulados en la misma zona,
que intentan absorber los mismos objetos, chocan entre s y se fusionan bajo la influen-
cia de las citocinas [1].
Mastocitos y granulocitos basfilos. Los mastocitos se encuentran en las zonas perivas-
culares de los tejidos, mientras que los basfilos son circulantes. Estas clulas estn muy
relacionadas funcionalmente y tienen muchas similitudes (p. ej., el citoplasma lleno de
grnulos gruesos, que se tien de color azul oscuro en los basfilos y de color rojo oscu-
ro en los mastocitos cuando se utilizan tinciones de tipo Romanowsky). Son ricos en
mucopolisacridos, principalmente heparina, histamina, varias proteinasas y otros media-
dores biolgicamente activos. Estas clulas participan en la patogenia de la inflamacin
aguda porque su liberacin de histamina desencadena muchas de las manifestaciones
clnicas inmediatas. Tienen receptores que se unen con gran afinidad a la porcin Fc de
los anticuerpos IgE. La degranulacin con liberacin de histamina y otros mediadores
inflamatorios tiene lugar cuando los basfilos y los mastocitos se estimulan de forma
adecuada (p. ej., cuando un antgeno especfico se unen a los anticuerpos IgE unidos a la
clula). Los mastocitos son la fuente principal de histamina, que es importante para el
fenmeno vascular de la inflamacin aguda, y tambin producen algunas citocinas [1].
Los granulocitos basfilos se originan en la mdula sea y son miembros raros de
la poblacin de leucocitos de la sangre. Son reclutados en los tejidos por mecanismos
inmunitarios parecidos a los de los mastocitos. Parece que la liberacin de mediadores
por los basfilos tisulares ayuda a la expulsin de los parsitos, y la llegada de basfi-
los cuando se producen reacciones de hipersensibilidad aumenta el potencial anafilc-
tico de una zona tisular determinada [1].
Linfocitos y plasmocitos. Tanto los linfocitos como los plasmocitos participan en las
reacciones inmunitarias. Estas clulas aparecen ms tarde que los neutrfilos en la
mayora de las reacciones inflamatorias. Sin embargo, parece que algunos microorga-
nismos infecciosos provocan una respuesta linfoctica casi desde el principio, como las
lesiones renales de la leptospirosis aguda en los perros y las infecciones por micoplas-
mas en muchas especies. Generalmente, los infiltrados de linfocitos y plasmocitos
indican una reaccin inmunitaria local en respuesta a algn tipo de sustancia o antge-
no. Los linfocitos son importantes para la respuesta inflamatoria de varias formas espe-
cficas. Los linfocitos B y su progenie, los plasmocitos, son importantes en la produc-
cin de anticuerpos. Los anticuerpos constituyen una de las opsoninas principales y,
por tanto, interactan directamente con la rama fagoctica, celular, del mecanismo de
defensa del husped. Adems, los linfocitos T colaboradores de tipo 1 representan el
origen celular de las linfocinas potentes, IFN-, TNF- e IL-2, que pueden modular y
extender las reacciones inflamatorias locales [1].
Plaquetas. Las plaquetas casi siempre estn involucradas en las reacciones inflamato-
rias locales, porque los vasos lesionados dejan expuestas las estructuras subendoteliales
a las clulas sanguneas circulantes y las plaquetas se unen a estas zonas. Uno de los
primeros pasos es la adherencia de las plaquetas circulantes al colgeno subendotelial y
VAJDOVICH
40
a la membrana basal prxima a la superficie endotelial daada. La adhesin depende de
los enlaces entre las molculas de adhesin de la superficie de las plaquetas (glucopro-
tena Ib) y el factor de von Willebrand, que se sintetiza en las clulas endoteliales y en
los magacariocitos, se almacena en los grnulos citoplsmicos y se secreta desde las
clulas endoteliales tanto en el plasma como hacia la membrana basal subendotelial y el
colgeno. Cuando se adhiere al colgeno, el factor de von Willebrand expuesto acta
como un ancla para el receptor de glucoprotena plaquetaria Ib, y comienza la fase pla-
quetaria. Una vez que las primeras plaquetas se adhieren, liberan componentes de los
dos tipos de grnulos intracelulares, los cuerpos alfa y los cuerpos densos. El contenido
de los grnulos que tiene algn efecto sobre el proceso inflamatorio incluye ADP y ATP,
serotonina, factor plaquetario 4, PAF, fibronectina, factores de la coagulacin (fibrin-
geno, antgeno relacionado con el factor VIII, factor V), adrenalina, histamina, Ca
2+
y
productos de la unin entre la proteasa y el complemento (que produce C5a). Las enzi-
mas de la ruta del AA, especialmente tromboxano A
2
(TXA
2
) y los factores de creci-
miento (p. ej., factor de crecimiento derivado de plaquetas, factor de crecimiento fibro-
blstico, TGF), tambin participan y estimulan enzimas (catepsina, arilsulfatasa,
-glucuronidasa) y los procesos de cicatrizacin resultantes [1]. Las plaquetas pueden
tener propiedades fagocitarias y bactericidas, esta actividad se ha demostrado en plaque-
tas de pollo y humanas. Se trata de un proceso dependiente de energa. Las plaquetas se
unen a las endotoxinas para detoxificarlas. La -lisina, un componente termoestable
bactericida del suero, se ha localizado en las plaquetas, y se secreta durante la coagula-
cin sangunea, la inflamacin, las reacciones antgeno-anticuerpo y la bacteriemia.
Tiene efecto bactericida sobre Bacillus subtilis y deteriora Escherichia coli. Puede
amplificar la muerte mediada por anticuerpos y por el complemento, y la lisis de las
bacterias gramnegativas. Se ha descubierto que las protenas catinicas derivadas de
las plaquetas tienen una potente actividad bactericida contra Staphylococcus aureus [14].
Clulas endoteliales y fibroblastos. Para abandonar la corriente sangunea y entrar en las
zonas inflamadas de los tejidos, los leucocitos primero deben adherirse a la microvascu-
latura y migrar a travs de ella. El endotelio participa activamente en las interacciones
entre los leucocitos y las clulas endoteliales. Adems, las clulas endoteliales tienen un
gran potencial de proliferacin y desempean una funcin crtica en la cicatrizacin y
reparacin [1]. Los fibroblastos son clulas importantes porque sintetizan una serie de
citocinas que influyen en los leucocitos, y tambin son importantes en la cicatrizacin y
reparacin debido a su capacidad para sintetizar y fijar colgeno. Adems, muchas de las
protenas importantes de la matriz extracelular son productos de los fibroblastos, y muchas
de ellas son importantes para la activacin y desplazamiento de los leucocitos [1].
EVENTOS CELULARES
La secuencia de eventos celulares consta de: 1) marginacin, 2) pavimentacin,
3) migracin, 4) quimiotaxis, 5) fagocitosis y 6) sntesis de mediadores.
Marginacin
En el foco de la lesin o la inflamacin, las clulas como los macrfagos residentes en
los tejidos se estimulan para sintetizar y secretar quimioatractores y activadores de las
clulas, como citocinas y quimiocinas, que se difunden desde la zona, entran en contac-
41
to con los vasos sanguneos pequeos y estimulan la adhesin entre los leucocitos y las
clulas endoteliales en las vnulas locales, atrayendo a los leucocitos hacia el tejido. La
marginacin se consigue en parte debido a la vasodilatacin y a la disminucin del
caudal del flujo sanguneo; gran parte de estos procesos pueden atribuirse a las mol-
culas de adhesin de la superficie de los leucocitos y las clulas endoteliales [1].
Pavimentacin
Cuando el estmulo inflamatorio es muy fuerte entran en juego otras molculas de
adhesin. En los leucocitos son importantes las
2
-integrinas, que son molculas hete-
rodimricas que siempre estn presentes en la superficie de los leucocitos, pero su
adhesividad aumenta rpidamente en respuesta a la estimulacin. Estas integrinas com-
prenden CD11b/CD18 (tambin conocidas como complejo de ataque de la membrana
1 [Mac-1]) y CD11a/CD18 (tambin conocidas como antgeno asociado a la funcin
linfoctica 1 [LFA-1]). Como ya se ha mencionado, la agregacin de los neutrfilos est
mediada por la
2
-integrina CD11b/CD18, que tiene una expresin limitada sobre la
membrana superficial de las clulas en reposo, pero que es reclutada desde las organe-
las intracelulares tras la activacin celular [15]. Las molculas de adhesin se almace-
nan en grnulos (lisosomas) y se desplazan a la superficie cuando se estimula la clula.
Durante el proceso inflamatorio, los mediadores bioqumicos (sobre todo citocinas
como IL-1 y el TNF-) se difunden a travs del tejido en la zona, entrando en contacto
con las clulas endoteliales. Este contacto hace que el endotelio produzca otros media-
dores, como PAF e IL-8, lo que estimula an ms a los leucocitos. Esta segunda fase de
unin entre los leucocitos y las clulas endoteliales es intensa, y los leucocitos pueden
quedarse detenidos en la zona [1]. Se ha investigado el efecto de la oxigenacin hiperb-
rica sobre varias funciones de los neutrfilos mediadas por CD11b/CD18 (Mac-1) en seres
humanos sanos. La oxigenacin hiperbrica con una presin absoluta de 3 atmsferas
durante 23 minutos reduce la adherencia al 50%. Los estudios anteriores indican que
este efecto puede estar causado por la inhibicin de la
2
-integrina [16].
Se ha asociado un trastorno hereditario al deterioro de la adherencia de los neutrfilos.
La DAL (sndrome de granulopata canina) es una inmunodeficiencia primaria que se
hereda como un rasgo autosmico recesivo. Se ha descrito en los seres humanos, los
Setters irlandeses y las vacas Holstein. Esta deficiencia es el resultado de una deficiencia
de la expresin de las glucoprotenas de la superficie de los leucocitos. Clnicamente, se
caracteriza por infecciones bacterianas graves, recurrentes, alteracin de la formacin de
pus y retraso de la cicatrizacin de las heridas. Los animales infectados suelen mostrar
pirexia intensa, anorexia y prdida de peso; generalmente, la respuesta al tratamiento con
antibiticos es escasa. Puede producirse leucocitosis persistente y extrema (>100.000 leu-
cocitos/L), en la que predominan los neutrfilos maduros. [17]. En este trastorno, la
fagocitosis y la capacidad bactericida de los neutrfilos estn deterioradas debido a la fal-
ta de protenas de adhesin, que impide que los leucocitos abandonen los vasos sangu-
neos, por lo que su nmero en los tejidos es reducido, aunque estn presentes en gran
nmero en la sangre. Por tanto, son incapaces de fagocitar las bacterias opsonizadas por
el fragmento C3b. La DALB se diagnostic en cuatro terneros Holstein de entre 1 y
4 meses de edad, que presentaban lceras graves en la mucosa oral, gingivitis, perodon-
titis grave, neumona crnica y falta de crecimiento asociado a neutrofilia intensa. Los
neutrfilos de los terneros afectados tenan un defecto funcional que se caracterizaba por
VAJDOVICH
42
una gran disminucin de la adherencia, los movimientos quimiotcticos, la fagocitosis,
la respuesta quimioluminiscente dependiente de luminol y las actividades productoras de
O
2
. Mediante el anlisis citomtrico de flujo se detect claramente la deficiencia de la
expresin de CD18 (0,11,7%) en los neutrfilos. Estos terneros afectados tenan un
antecesor comn, que se haba reconocido como portador. Las caractersticas clnicas, las
anomalas funcionales de los leucocitos, la deficiencia de la expresin de CD18 y la
forma de heredarse indicaban que los terneros tenan DALB. Las anomalas funcionales
de los leucocitos in vitro se asociaron a deficiencia de la expresin de CD11/CD18 [18].
Tambin se diagnostic DALB en dos terneros (de 5 y 9 meses de edad) que tenan neu-
mona y gingivitis. En estos terneros y en sus madres (las portadoras) se examin el gen
de la molcula de adhesin de los leucocitos CD18 mediante la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR) y digestin mediante endonucleasa de restriccin. Se observ una
diferencia evidente en el patrn de digestin de los terneros sanos, los terneros con DALB
y sus madres. Por tanto, en la DALB, la mutacin puntual observada en los pacientes
humanos era muy indicativa [19]. La estimacin de la frecuencia allica de la DALB
teniendo en cuenta los resultados de la PCR demostr que alrededor de 450 terneros
daneses nacidos en 1991 podran estar afectados por este trastorno recesivo [20].
Migracin
La migracin es el proceso por el que los leucocitos abandonan su localizacin en la
sangre para alcanzar los tejidos perivasculares. Los neutrfilos entran enseguida en
contacto con las uniones celulares interendoteliales, y aparece otra molcula de adhe-
sin, CD31, sobre las clulas endoteliales de esa zona. Los neutrfilos tienen las mismas
molculas de adhesin, y estas molculas reconocen y se unen a sus parejas sobre las
uniones celulares endoteliales, creando una seal de salida para los neutrfilos. Las
irritaciones relativamente menores de las cavidades peritoneal y pleural, as como las
abrasiones cutneas menores, provocan una acumulacin de neutrfilos que alcanza su
valor mximo a las 4 a 6 horas y disminuye rpidamente, mientras que el nmero total
de clulas mononucleares comienza a aumentar a las 4 horas y alcanza un valor mximo
sostenido a las 18 a 24 horas. Cuando el proceso est causado por microorganismos
vivos, se va acumulando progresivamente un gran nmero de neutrfilos durante las
24 horas de observacin, pero no puede detectarse ninguna respuesta mononuclear [1].
Quimiotaxis
La quimiotaxis es una migracin direccional en respuesta a un gradiente de quimioatrac-
tores. Los leucocitos pueden percibir las pequeas diferencias direccionales de las concen-
traciones de mediadores quimiotcticos (quimiotaxinas) debido a que se ocupan ms de
sus receptores de quimiotaxinas en el lado de la clula ms prximo al sitio de la inflama-
cin, donde la concentracin de mediadores inflamatorios y quimiotaxinas es mayor. Los
leucocitos activados son muy mviles y parece que poseen un sentido de la direccin, es
decir, sus desplazamientos en el tejido estn dirigidos, no son aleatorios. Adems de los
leucocitos, las bacterias, los mohos deslizantes celulares, las clulas tumorales, los fibro-
blastos, las clulas endoteliales y otras clulas muestran varios niveles de sensibilidad
quimiotctica. Los neutrfilos responden rpidamente a las seales quimiotcticas, en
aproximadamente 90 minutos, mientras que los monocitos tardan varias horas en respon-
der. La velocidad de respuesta de los eosinfilos se encuentra en un punto intermedio [1].
43
Quimiotaxinas
Compuestos quimiotcticos. Las quimiotaxinas que derivan del plasma son C5a, C5a-
des Arg y los fibrinopptidos (productos de la degradacin de la fibrina) [1].
Las quimiotaxinas que derivan de las clulas inflamatorias son derivados del AA:
LTB
4
, cido hidroxieicosatetraenoico (HETE), PAF y quimiocinas.
Las quimiotaxinas derivadas de otros factores son:
Quimiotaxinas bacterianas, que incluyen los pptidos de tipo 1. N-Formil-Met-Leu-Fe.
Necrotaxinas (derivadas de clulas muertas). 2.
Endotoxinas. 3.
El radical anin superxido (O
2
) tambin puede ser un factor quimiotctico, puesto que

varios modelos de inflamacin inducida en animales de laboratorio se inhiban notablemen-
te mediante la administracin intravenosa de la enzima superxido dismutasa (SOD) [21].
Endotoxinas o lipopolisacridos bacterianos. Las endotoxinas y los lipopolisacridos
bacterianos (LPS) son productos bacterianos. La endotoxina que es el producto de las
bacterias gramnegativas no es una quimiotaxina potente para los leucocitos, pero indu-
ce la sntesis de quimiotaxinas potentes en las clulas de los tejidos, como las quimio-
cinas. Las endotoxinas producen inflamacin indirectamente. Los LPS son activadores
de muchos tipos de leucocitos y especialmente de los macrfagos, no por activacin
directa, sino por la combinacin de varias protenas en el organismo. El hgado de los
mamferos produce una protena ligada a LPS que reconoce y se une a los LPS en el
plasma sanguneo. Se trata de una protena de fase aguda que aumenta en los procesos
inflamatorios. Su efecto beneficioso es que suprime o elimina las bacterias gramnega-
tivas peligrosas, pero la hiperestimulacin del sistema inmunitario y la produccin
excesiva de mediadores pueden causar reacciones potencialmente mortales. Los seres
humanos y los caballos estn entre los organismos ms sensibles [1].
Varios ejemplos demuestran que los efectos de los LPS se asocian a las sustancias
antioxidantes del organismo. Esto se explica porque los LPS inducen la formacin de
MRO que pueden inhibirse por los antioxidantes. Sin embargo, los MRO inducidos por
los LPS pueden producir la activacin, transduccin de la seal y secrecin exageradas
de varias poblaciones de clulas inflamatorias. Los efectos txicos de las endotoxinas
pueden estar mediados por clulas inflamatorias y por la liberacin de oxidantes txi-
cos. N-acetilcistena inhibe los efectos in vivo de la endotoxemia en las ovejas [22]. Los
LPS inducen el aumento de los mediadores de la respuesta inflamatoria sistmica. La
lutena, un dihidroxicarotenoide, tiene un potencial antioxidante e inmunomodulador.
La inyeccin de LPS aumenta la hepatoglobina y el cinc en el plasma, y disminuye el
hierro y el cobre plasmticos. El hierro y el azufre plasmticos de los pollos proceden-
tes de huevos carentes de carotenoides sufren ms cambios tras la inyeccin de LPS
que en los pollos procedentes de huevos ricos en carotenoides. [23]. Los LPS modifi-
can las concentraciones de carotenoides en los pollos en crecimiento. Los carotenoides
del plasma, el hgado y la piel disminuyen tras las enfermedades infecciosas. General-
mente, los LPS disminuyen la lutena, la cantaxantina y los carotenoides totales en
el plasma, y la lutena, la ceaxantina, la cantaxantina y los carotenoides totales en el
hgado [24]. En general, los LPS inducen la expresin de TGF- ARNm e IL-2. La
vitamina E de la dieta tiene un efecto inmunomodulador sobre la inflamacin en las
VAJDOVICH
44
aves de corral mediando la induccin de algunas citocinas y otros factores. Estos efec-
tos no se relacionan claramente con sus propiedades antioxidantes. Los LPS producen
un aumento de la expresin de IL-1, el factor de crecimiento mielomonoctico (MGF)
e IFN-, y no tienen efecto sobre la expresin de IL-2 y TGF- ARNm sea cual sea la
concentracin de vitamina E de la dieta. A una dosis de 200 UI/kg, la vitamina E dis-
minuye la expresin estructural de MGF ARNm tras la inyeccin intravenosa de LPS,
pero no afecta a la expresin de otras citocinas [25].
Mecanismo de la quimiotaxis
El mecanismo de la quimiotaxis es el siguiente: [1]:
El quimioatractor se une a la superficie celular. 1.
Se libera calcio de los almacenes intracelulares, y la traslocacin de membrana 2.
del calcio produce un aumento del Ca
2+
citoslico, necesario para desencade-
nar tanto la degranulacin como los cambios de la polaridad de la membrana.
Tambin influye en la red actina-miosina submembranosa.
Movilidad de los leucocitos. La locomocin adecuada requiere la adherencia 3.
reversible a una superficie.
Las clulas sufren cambios morfolgicos caractersticos que comienzan con el 4.
aumento del fruncimiento de la membrana superficial a los 30 segundos de la
estimulacin.
En los primeros minutos tras la estimulacin puede producirse agregacin leuco- 5.
citaria transitoria dependiente de la dosis.
Cuando los leucocitos responden, adoptan una orientacin polarizada caracterstica 6.
durante la locomocin con lamelipodios muy extendidos en el borde principal.
En un gradiente de quimioatractores, las poblaciones de clulas migran hacia la 7.
fuente del factor quimiotctico.
Los leucocitos se deforman fcilmente cuando migran a travs de lugares estrechos. 8.
La capacidad de las clulas para orientarse correctamente en un gradiente quimio-
tctico es una funcin de los microtbulos, mientras que la locomocin propiamente
dicha est ligada a los microfilamentos. Las sustancias como la citocalasina B, que
altera los microfilamentos, impiden la locomocin aunque las clulas sigan orientadas
en el gradiente. La colchicina altera los microtbulos y produce desorientacin, pero
no interfiere con la locomocin. Tras el desplazamiento, las clulas llegan al sitio de la
inflamacin; es posible que intervenga la disminucin de la expresin de los receptores
superficiales de quimiotaxinas.
Fagocitosis
Hace casi 100 aos, Metchnikoff declar que las clulas fagocitarias eran responsables
de proteger al husped de la invasin de innumerables microorganismos. Estas clulas
colaboran con varios factores tumorales, denominados en conjunto opsoninas, para
mejorar la eficacia del proceso. Este proceso implica eventos de reconocimiento de
membrana especficos, unin superficial entre los leucocitos y las partculas, absor-
cin, formacin de una vacuola fagoctica y fusin de la vacuola con los lisosomas,
exponiendo el objeto prisionero a la accin del contenido lisosomal. Los neutrfilos y
los macrfagos se degranulan progresivamente, es decir, utilizan el contenido de sus
grnulos para intentar eliminar o descomponer la partcula ingerida [1].
45
Mecanismos bactericidas
La finalidad de la fagocitosis es destruir y degradar las bacterias. Se conocen dos sis-
temas de destruccin: dependiente de oxgeno e independiente de oxgeno. Existen dos
tipos de sistemas de destruccin dependientes de oxgeno: el sistema de radicales de
oxgeno y el sistema MPO-haluro [1].
Mecanismos de destruccin dependientes de oxgeno. Durante la fagocitosis, los neutr-
filos sufren una explosin de la actividad metablica, que se caracteriza por un aumento
de dos a tres veces del consumo de oxgeno, un aumento de la produccin de O
2
y de
radicales aninicos hidroxilo (HO
) y de la formacin de H
2
O
2
, y un aumento de la cap-
tacin de oxgeno independiente de cianuro y de la cantidad de glucosa metabolizada por
la desviacin de hexosa monofosfato (HMPS) [26]. Esta actividad, que se demostr hace
ms de 50 aos, es la base de los radicales libres de oxgeno y de los cambios antioxidan-
tes en los procesos inflamatorios. En la figura 1 se muestra cmo se midi hace muchas
dcadas y de forma fiable el uso de oxgeno por los leucocitos [26].
El sistema de radicales libres de oxgeno. Adems de formarse MRO, aumenta la acti-
vidad de la glutatin reductasa (GSSG-R) debido a la induccin de los mecanismos de
defensa contra las especies reactivas de oxgeno (ERO) que se forman intracelularmente
en los leucocitos. Este proceso regulado se ha denominado explosin respiratoria de la
Figura 1. Tasas relativas de captacin de oxgeno en suspensiones de leucocitos ricas en
PMN procedentes de exudados peritoneales de cobayas normales (controles) y de cobayas
infectados con diferentes cepas de mycobacterium. Las tasas de captacin de oxgeno se cal-
cularon en L/100 L fsforo celular/h. El valor absoluto para los leucocitos obtenidos del
exudado peritoneal de los animales normales es de 36,5 1,9 g O
2
/100 L fsforo celular/h.
El nmero de animales de cada grupo es: control, 31; infectados con el bacilo Calmette-Gurin
(BCG), 15; infectados con R1Rv, 8; infectados con Valle, 6. (Tomado de Stahelin H, Karnovs-
ky ML, Farnham AE, Suter E. Studies on the interaction between phagocytes and tubercle bacilli.
III. Some metabolic effects in guinea pigs associated with infection with tubercle bacilli. J Exp
Med 1957;105(3):26577; con autorizacin. Copyright 1957, The Rockefeller University
Press.)
CEPA UTILIZADA PARA LA INFECCIN
T
A
S
A

R
E
L
A
T
I
V
A

D
E

C
A
P
T
A
C
I
N
D
E

O
X
G
E
N
O
1
1,163
0,05 > P > 0,02
1,293
P < 0,01
1,064
P > 0,1
CONTROL BCG R
1
R
V
VALLE
VAJDOVICH
46
fagocitosis. La figura 1 incluye una parte importante de esta actividad bioqumica de
los fagocitos. Gran parte de esta actividad bioqumica de los fagocitos puede atribuirse a
la NADPH oxidasa ligada a la membrana; el citocromo b tambin forma parte de este
sistema y est presente en los grnulos especficos y terciarios (gelatinasa) de los neutr-
filos. Estos grnulos se fusionan con la partcula absorbida, que tambin est unida a la
membrana, haciendo que el citocromo b y otros muchos componentes de los grnulos
estn disponibles para la actividad microbicida [1]. La activacin de la protena C cinasa
y el aumento del Ca
2+
intracelular activan la NADPH oxidasa [27].
La NADPH oxidasa activada reduce el oxgeno molecular mediante transferencia
de electrones desde NADPH, formando as O
2
y NADP; este ltimo es necesario para

la actividad de HMPS. La mayora del O
2
que se produce reacciona rpidamente y

sufre una dismutacin para producir oxgeno y H
2
O
2
. El HMPS activado por NADP
metaboliza la glucosa para proporcionar la energa necesaria para regenerar el NADPH
que se ha consumido en la reaccin inicial en la que particip la NADPH oxidasa, y el
sistema puede comenzar otra vez [1]. Para que la explosin respiratoria funcione de
forma correcta es necesaria la despolarizacin de las membranas celulares. Tras la
explosin respiratoria se produce degranulacin y cambia la concentracin intracelular
de AMPc mientras se produce O
2
[28]. Puesto que la NADPH oxidasa se localiza en

la membrana, el O
2
puede producirse en la superficie interna de la membrana plasm-

tica de las clulas y tambin en la superficie externa. Sus sitios de unin estn orienta-
dos hacia la superficie citoplsmica, ya que el propio NADPH se localiza en el cito-
plasma. La parte de la enzima que produce O
2
se localiza en la bicapa lipdica. La

superficie externa original de la membrana celular est en el interior del fagolisosoma,
y la superficie interna original est en la parte exterior, por lo que la parte que produce
O
2
est dentro de la vacuola [29]. As, el O

2
se convierte en H
2
O
2
de forma espont-
nea o mediante SOD. La partcula fagocitada est en la vacuola, que ms tarde se
fusiona con los grnulos azurfilos que contienen MPO (primarios) [30].
El sistema mieloperoxidasa-haluro. La produccin de O
2
y H
2
O
2
durante la explosin
respiratoria proporciona un enlace directo entre el radical libre de oxgeno y los siste-
mas basados en MPO de las actividades microbicidas y citotxicas de los fagocitos
[31]. Ni el O
2
ni el H
2
O
2
son molculas microbicidas potentes por s mismas. O
2

contribuye a la formacin de HO
, que es muy txico, muy activo y perjudicial para las

macromolculas biolgicas. Estos radicales destruyen las bacterias debido a la lesin
oxidativa y a la peroxidacin de los lpidos de la membrana [32].
La peroxidacin lipdica (POL) es una consecuencia de la produccin de O
2
. La
concentracin mxima de 4-hidroxinonenal (HNE), un producto aldehdo principal de
la POL, se alcanza al mismo tiempo que la tasa de produccin mxima de O
2
, 6 horas
despus de que comience el proceso inflamatorio [33]. Otro producto final metaestable
es el malondialdehdo (MDA), una sustancia que suele utilizarse para detectar la POL
por su carcter reactivo con el cido tiobarbitrico [34]. Gran parte de la produccin
de O
2
tiene lugar en la superficie de los fagolisosomas. Otra reaccin antimicrobiana

es el resultado de la combinacin de O
2
con H
2
O
2
, ambos producidos y disponibles
debido a la reduccin del oxgeno. Esta combinacin tambin da lugar a la produccin
de HO
oxidante reactivo y se denomina reaccin de Haber-Weiss: O

2
+ H
2
O
2
O
2
+
HO
+ HO
[35]. Esta reaccin es muy lenta, pero la catlisis de iones metlicos tran-
47
sitorios, especialmente hierro, la potencia en gran medida. El hierro que participa en
estas reacciones puede proceder de muchas fuentes, tanto del interior como del exterior
de los leucocitos; este ltimo est disponible en las protenas hemo y en las protenas
transportadoras de hierro, como la transferrina.
El hierro se cataliza en la reaccin de Haber-Weiss mediante la reaccin de Fenton:
O
2
+ Fe
3+
r Fe
2+
+ O
2
Fe
2+
+ H
2
O
2
rFe
3+
+ HO
+ HO
Como una analoga de la reaccin de Fenton, el H

2
O
2
puede sustituirse por alquil-
hidroperxidos:
Fe
2+
+ ROOH r Fe
3+
+ RO
+ HO
[36].
El H
2
O
2
que se produce en estas reacciones tambin puede combinarse con la enzi-
ma MPO de los grnulos azurfilos dentro de los fagolisosomas y, junto con un in
haluro, como yoduro, bromuro o cloruro (este ltimo es el haluro fisiolgicamente
importante habitual), puede formar una mezcla bactericida potente que se conoce como
sistema H
2
O
2
-MPO-haluro. La combinacin molecular de estos componentes produce
una actividad bactericida mucho ms fuerte que la que podra tener cualquiera de estas
molculas si actuara de forma individual. La molcula asesina que se produce en la
reaccin H
2
O
2
+ Cl
r HOCl + H
2
O es el cido hipocloroso (HOCl), una sustancia
oxidante y antimicrobiana potente. Esta actividad tiene lugar dentro del fagolisosoma
para que no se destruya el propio fagocito [1].
Enzimas fundamentales para la fagocitosis
NADPH oxidasa. En condiciones de reposo, los componentes citoslicos de la NADPH
oxidasa (E.C. 1.23.45.3) existen como oligmeros de 240 a 300 kd [37,38]. Para que
se forme un complejo oxidasa activo se requieren al menos cinco protenas: el citocro-
mo b
558
ligado a la membrana, las protenas citoslicas, p47
phox
, p67
phox
, y una prote-
na ligada a GTP pequea, Rac-1 o Rac2 [39,40]. Recientemente se han identificado
otros dos componentes [37], un complejo enzimtico asociado a la membrana plasm-
tica que cataliza la reduccin de electrn nico del O
2
molecular a O
2
, una sustancia
oxidante y reductora muy potente [41]. El O
2
sufre una dismutacin espontnea o, en

presencia de SOD, para formar H
2
O
2
, que no es un radical libre, pero ms adelante
puede convertirse en cido hipobromoso o hipocloroso en presencia de MPO en los
neutrfilos y macrfagos, y de eosinfilo peroxidasa (una protena muy bsica que se
almacena dentro de grnulos eosinfilos especficos) y cloruro o bromuro [42]. Se cree
que la activacin de la NADPH oxidasa y la produccin consecuente de radicales de
oxgeno txicos son importantes para la funcin de defensa del husped de las clulas
mieloides (v. figura 2) [43,44].
Se cree que la estimulacin de la fosfolipasa C en los neutrfilos es el evento central
de la activacin de la NADPH oxidasa. Se ha propuesto que el AA, que se separa los
fosfolpidos de la membrana debido a la actividad de la fosfolipasa A
2
(PLA
2
), puede
desempear una funcin importante en la activacin de los neutrfilos humanos
[4548]. Las MAPK y las tirosina cinasas tambin participan en la activacin de la
VAJDOVICH
48
NADPH oxidasa [4951]. Tambin se conocen otros procesos reguladores. La regula-
cin hacia abajo mediada por receptor gamma activado por proliferadores de peroxi-
somas (PPAR-) de la p47 fagocito oxidasa, un componente del sistema NAD(P)H
oxidasa, se ha identificado como un mecanismo molecular que inhibe la formacin de
O
2
[52].
Mieloperoxidasa. MPO (EC 1.11.1.7) tiene un pigmento hemo, que es el responsable
del color verde que tienen las secreciones ricas en neutrfilos, como el pus y algunas
formas de moco. La protena MPO de 150 kd es un tetrmero que consta de dos cade-
nas ligeras de 15 kd y dos cadenas pesadas glucosiladas de peso variable unidas a un
grupo hemo protsico. Se han identificado tres isoformas, que slo se diferencian en el
tamao de las cadenas pesadas [53]. En la figura 3 se muestra la estructura cristalina
de MPO [54].
MPO produce cido hipocloroso a partir de H
2
O
2
y del anin cloruro (Cl
) durante
la explosin respiratoria de los neutrfilos. Requiere hemo como cofactor [54]. Ade-
ms, oxida la tiroxina de su radical tirosilo utilizando H
2
O
2
como agente oxidante [55].
El cido hipocloroso y el radical tirosilo son citotxicos. Su efecto antibacteriano pue-
de reducirse mucho precalentndola a 80 C o durante ms de 10 minutos o aadiendo
algunos inhibidores; es ms activa cunto ms cido es el pH utilizado (5). La lactope-
roxidasa es menos eficaz que la MPO cuando el cloruro es el haluro utilizado. Si no se
aade un haluro junto con MPO, a altas concentraciones tiene un efecto antibacteriano
sobre Lactobacillus acidophilus, que tambin es sensible a la temperatura y a la cata-
lasa (CAT). Los haluros y el H
2
O
2
aumentan el efecto antibacteriano, y la CAT lo
disminuye, as como el cianuro, acida, metimazol y tiosulfato. [56]. Los PMN pueden
Figura 2. Estructura del complejo NADPH oxidasa activo. Se cree que el dominio de unin a
NADPH est a un lado de la membrana y que el O
2
se genera en el otro lado. La oxidasa

puede localizarse en la membrana plasmtica o en las membranas intracelulares, dependiendo
del tipo de clula. (Tomado de Ray R, Shah AM. NADPH oxidase and endothelial cell function.
Clin Sci 2005;109:21726; con autorizacin.)
49
concentrar el yoduro, por ejemplo, por desyodacin de las hormonas tiroideas. Median-
te la activacin de este yodo, la MPO de los granulocitos neutrfilos puede producir
yodacin de la transferrina, lo que da lugar a una prdida notable de la capacidad de
ligarse al hierro y a la formacin concomitante de H
2
O
2
, proceso que puede inhibir la
CAT. Estos procesos pueden ayudar a explicar los cambios del metabolismo del hierro
que se asocian a la respuesta inflamatoria in vivo [57]. La actividad de MPO en los
tejidos puede utilizarse como marcador para detectar la gravedad de los procesos infla-
matorios, por ejemplo, en el modelo en ratas de la colitis inducida con cido actico
(v. figura 4) [58].
En resumen, el aumento del uso de glucosa a travs de la desviacin de hexosa
monofosfato (HMPS)/ ruta pentosa fosfato, el aumento de la actividad respiratoria y la
activacin de la NADPH oxidasa de membrana constituye la explosin metablica
posfagoctica o explosin respiratoria. Como consecuencia, se producen muchas ERO
con actividad antibacteriana, principalmente de forma espontnea, como O
2
, H
2
O
2
,
HO
y oxgeno singlete [10,59,60]. El H

2
O
2
se combina con MPO y un haluro, como
cloruro o yodo, para formar un sistema bactericida potente (MPO-H
2
O
2
-haluro). Este
complejo elimina varias bacterias, virus, micoplasmas y hongos, y destruye las clulas
cubiertas de anticuerpos. Se cree que el complejo MPO-H
2
O
2
-haluro destruye las bac-
terias mediante halogenacin, deaminacin y descarboxilacin de las protenas bacte-
rianas y los cidos nucleicos. No slo los haluros, sino tambin el oxgeno singlete y
Figura 3. Estructura cristalina de la mieloperoxidasa. (Por cortesa de T. Kettle, PhD, Christ-
church, New Zealand.)
VAJDOVICH
50
el OH
eliminan las bacterias mediante peroxidacin de lpidos, lesin de la membrana

mitocondrial interna y lesin oxidativa de los cidos nucleicos. El hipocloruro, un
oxidante reactivo que se forma como producto final de la explosin respiratoria en los
neutrfilos activados, es bactericida, y se ha relacionado con las lesiones tisulares
mediadas por neutrfilos asociadas a los procesos inflamatorios [10,61]. Los organis-
mos y tambin los neutrfilos y las bacterias se protegen a s mismos contra los efectos
txicos de varios MRO y otros oxidantes de varias formas, a travs de mecanismos del
sistema antioxidante. Este sistema consta de enzimas antioxidantes y sustratos que son
miembros de reacciones enzimticas y no enzimticas que actan contra los MRO. Los
sustratos antioxidantes incluyen algunas vitaminas muy conocidas (p. ej., vitaminas E
y C) y muchas sustancias. SOD previene las lesiones producidas por O
2
convirtindo-
lo en H
2
O
2
a una velocidad rpida. El sistema redox glutatin (glutatin reducido,
GSH; glutatin oxidado o bisulfuro de glutatin, GSSG; glutatin peroxidasa, GSH-
Px; GSSG-R y CAT) regula la cantidad de H
2
O
2
intracelular convirtindola en agua.
Las bacterias CAT positivas son resistentes a los efectos destructores del complejo
MPO-H
2
O
2
-haluro, pero los microorganismos CAT negativos se destruyen [10]. El
Figura 4. Mecanismo de destruccin dependiente de oxgeno y defensa antioxidante enzim-
tica. GSH, glutatin reducido; GSH-Px, glutatin peroxidasa; GSH-Red, glutatin reductasa;
GSSG, bisulfuro de glutatin; HMPS, desviacin de hexosa monofosfato; MPO, mieloperoxida-
sa; SOD, superxido dismutasa.
Peroxidacin en la
membrana lipdica
Fagosoma
Partcula
fagocitada
de forma espontnea
o
Citocromo b Ncleo
NADPH
oxidasa
RCHO
Aldehdo
activo
Canal
de protones Desyodacin
de la protena
Peroxisoma
Citoplasma
51
sistema antioxidante tiene una ontognesis, pero la mayora de los mamferos nacen
con un sistema bien organizado de defensa contra el entorno extrauterino, que es muy
oxigenado comparado con la vida uterina [62]. Varias vitaminas tienen efectos antioxi-
dantes, pero tambin pueden incrementar la explosin oxidativa. Los estudios han
demostrado que los suplementos multivitaminas aumentan el nmero y la actividad
productora de ERO de los macrfagos. Este efecto persiste 2 semanas despus de in-
terrumpir la administracin de altas dosis de suplementos [63].
Algunos factores que impiden la funcin destructora de los neutrfilos y los macrfagos
Se investig si en los pacientes que tenan infecciones piognicas recurrentes exis-
tan anomalas de las funciones de los neutrfilos como la adherencia, la quimio-
taxis, la fagocitosis, la produccin de MRO, la degranulacin y la eliminacin de
bacterias [10].
Cambios relacionados con la edad. En los caballos [64] y en los terneros [65] se pro-
duce un cambio de la funcin de los neutrfilos relacionado con la edad. La fagocitosis
de S. aureus por los neutrfilos de los potros es inferior a la que se observa en los
neutrfilos de los adultos. Se utiliz suero autlogo como fuente de opsoninas. El
deterioro de la funcin no se asoci a la falta de ningn factor plasmtico, y el uso de
suero adulto no mejor la capacidad de los neutrfilos para adherirse a las bacterias.
La actividad de la explosin oxidativa de los neutrfilos de los potros era equivalente
a la de las clulas adultas [64]. La capacidad fagoctica era dbil desde el nacimiento
hasta las tres semanas de edad. La capacidad de destruccin tambin era baja al prin-
cipio, pero a partir de los 3 meses los valores de la quimioluminiscencia eran iguales o
superiores a los de los caballos maduros [66]. En el ganado vacuno, los valores de la
yodacin en los terneros de 4 a 11 semanas de edad fueron aproximadamente del 52%
de los valores de las vacas de 14 meses. Esta diferencia no pudo atribuirse a la canti-
dad de MPO en los grnulos neutrfilos. La citotoxicidad celulomediada dependiente
de anticuerpos tambin tenda a ser inferior en los neutrfilos de los grupos de edad de
4 a 19 semanas. La reduccin de nitroazul de tetrazolio, una medida del O
2
generado
por los neutrfilos, slo era inferior en el grupo de edad de 4 a 5 semanas [65].
Defectos hereditarios. Tambin se han observado algunos defectos hereditarios. Los
defectos funcionales pueden asociarse a anomalas morfolgicas, como en el sndrome
de Chdiak-Higashi, o no estar asociados a cambios morfolgicos de los neutrfilos,
como en la enfermedad granulomatosa crnica y en el sndrome de granulocitopata.
Este ltimo sndrome se ha mencionado anteriormente.
El SCH se ha descrito en los seres humanos, los visones, los ratones, los zorros, los
gatos persa, las vacas Hereford y Brangus [67], y las orcas [68,69]. Se produce un
aumento de la sensibilidad a las infecciones bacterianas debido al deterioro de la funcio-
nalidad de los leucocitos, un aumento de la tendencia a las hemorragias debido a los
defectos de los grnulos plaquetarios y albinismo oculocutneo parcial debido a la dis-
tribucin anormal de la melanina. Los sntomas se asocian a la disfuncin leucocitaria
secundaria a las anomalas de los lisosomas. En los seres humanos y los ratones (el ratn
beige) con SCH existe una deficiencia de las clulas asesinas naturales. Existen infor-
mes de un trastorno parecido en una lnea de gatos persas [70]. Los individuos afectados
VAJDOVICH
52
tienen el pelo de color humo o humo azulado y los iris de color amarillo verdoso
plido. En los gatos persas, la capa se vuelve ms clara, los iris cambian de color de
cobrizo o dorado a amarillo/verde claro y la retina pierde la pigmentacin. Pueden tener
cataratas congnitas [71]. Los neutrfilos contienen grnulos peroxidasa positivos, suda-
nfilos y eosinfilos anormalmente grandes. Los grnulos de los eosinfilos y los bas-
filos tambin estn dilatados, como los grnulos de melanina de la piel y el pelo. Tambin
se han observado grnulos citoplsmicos eosinfilos grandes, cido perydico-Schiff-
positivos, en las clulas de los tbulos renales. En el SCH los neutrfilos no pueden
metabolizar y digerir los microbios de forma adecuada debido a las inclusiones anorma-
les. Se ha observado que el cido ascrbico mejora la funcin de los neutrfilos [72]. Se
han encontrado mutaciones en el gen CHS1. El gen LYST del cromosoma 1q42, que
codifica una protena de 429 kd con funcin desconocida, tambin es responsable del
SCH clsico [73]. La nica opcin de tratamiento parece ser la transfusin, la adminis-
tracin de antibiticos y glucocorticoesteroides, y el trasplante de mdula sea [74].
La enfermedad granulomatosa crnica (EGC) es un trastorno recesivo que se caracte-
riza por un defecto de una oxidasa de la explosin respiratoria de los fagocitos. Est cau-
sada por mutaciones de alguno de los cuatro genes que codifican las subunidades de la
NADPH oxidasa de los fagocitos que generan O
2
. Algunos pacientes con EGC carecen

del factor activador de oxidasa de 67 kd [75]. Las caractersticas especficas de la enfer-
medad son las infecciones recurrentes bacterianas y fngicas potencialmente mortales y
los granulomas inflamatorios. Se utilizaron tcnica genticas para conseguir ratones con
un alelo nulo del gen relacionado con la EGC ligada a X, que codifica la subunidad de 91
kd de la oxidasa citocromo b. Los ratones macho homocigotos afectados no producan
O
2
en los fagocitos, lo que se manifestaba por un aumento de la susceptibilidad a las

infecciones causadas por S. aureus y Aspergillus fumigatus, y su respuesta inflamatoria
estaba alterada en la peritonitis tioglicolato [76]. Se ha desarrollado un ELISA utilizando
anticuerpos policlonales contra dos protenas citoslicas de 47 kd (p47) y de 67 kd (p67)
que se comportan como factores de activacin de la NADPH oxidasa que genera O
2
en
los neutrfilos cuando comienza la fagocitosis. Estas dos protenas se asocian al complejo
NADPH oxidasa durante la activacin. El ELISA es ms sensible que el anlisis bsico
basado en el uso del sistema libre de clulas de la activacin de la oxidas y la produccin
de O
2
. El mtodo descrito tiene aplicaciones potenciales para la titulacin de los factores

citoslicos de la activacin de la oxidasa en las formas autosmicas recesivas de la EGC
[77]. La actividad de la NADPH oxidasa puede reconstruirse mediante transferencia gen-
tica mediada por retrovirus o lentivirus a la mdula sea de seres humanos con la EGC in
vitro y en los modelos de trasplantes de xenoinjertos. Los estudios de transferencia gen-
tica en modelos con ratones knockout que imitan la enfermedad humana indican que
corregir la actividad de la oxidasa en una minora de fagocitos es beneficioso clnicamen-
te [78]. Un nio de 6 aos que tena la EGC complicada con reacciones inflamatorias
crnicas con formacin de granulomas pulmonares grandes y lesiones intracerebrales se
recuper de forma estable tras el trasplante de mdula sea de un donante no emparentado.
Los granulomas pulmonares y las lesiones intracerebrales se resolvieron rpidamente.
Existen informes sobre animales de diferentes especies y razas con lesiones graves que se
sospechaba que estaban asociadas a la EGC. Ocho dberman pinschers estrechamente
relacionados, con rinitis crnica y neumona, tenan un nmero normal o aumentado de
leucocitos estructuralmente normales. El defecto bactericida puede estar relacionado con
53
la incapacidad de los neutrfilos para producir cantidades normales de radicales de oxge-
no tras la estimulacin, que se establece por la disminucin de la capacidad de los neutr-
filos para reducir el nitroazul de tetrazolio y para producir O
2
tras la estimulacin con

cimosn opsonizado. Estas observaciones, junto con los signos de enfermedad inflamato-
ria crnica en los pulmones de un perro, indican que la enfermedad puede tener algn
parecido con la EGC de los seres humanos [79].
Otros trastornos. En las ratas y en las vacas con deficiencia de selenio se ha observado
una disminucin de la actividad de GSH-Px en los fagocitos, y se ha relacionado con una
disminucin de la actividad bactericida de los neutrfilos bovinos para las bacterias pat-
genas. Los defectos de la migracin quimiotctica y el deterioro de la actividad bacteri-
cida de los neutrfilos en las vacas con deficiencia de selenio se han asociado a mastitis
coliforme ms grave y prolongada que la que se observa en animales que reciben suple-
mentos de selenio [80]. A pesar de que existen algunas controversias, la mayora de los
estudios experimentales sobre animales con deficiencia de selenio indican una fagocito-
sis normal y una alteracin de la capacidad bactericida de los neutrfilos. La disminucin
de la actividad de GSH-Px de los PMN que se produce tras la deficiencia de selenio
podra explicar algunas de estas alteraciones [81]. En los terneros recin nacidos se obser-
va disminucin de la expresin del receptor Fc y de la actividad de MPO si se comparan
con las vacas. La disminucin de la expresin de Fc podra contribuir al deterioro de la
adherencia y la fagocitosis de las bacterias, y la disminucin de la actividad de la MPO
de los neutrfilos podra indicar una capacidad bactericida ms dbil de las clulas neo-
natales [82]. El sndrome por aspiracin de meconio es una causa importante de disnea.
El meconio caus una disminucin dependiente de la dosis de la fagocitosis y una dismi-
nucin de la funcin de los macrfagos alveolares disminuyendo la explosin respirato-
ria. En los macrfagos alveolares que estuvieron en contacto con el meconio durante un
perodo largo (24 horas) se observ fragmentacin del ADN que indicaba apoptosis en
los lactantes recin nacidos [83]. El ejercicio intensivo puede alterar la fagocitosis de los
neutrfilos y la actividad de la explosin oxidativa en los caballos [84].
Infecciones. La capacidad destructora de los PMN puede alterarse de forma transitoria
debido a varias causas, como la infeccin por Leishmania spp. La produccin de O
2
y de
H
2
O
2
por las clulas PMN fue significativamente inferior en un grupo de perros infectados
con Leishmania que en los perros sanos o en los perros infectados tratados con antimonia-
to de meglumina que no tenan sntomas de leishmaniosis [85]. La inflamacin sptica
tambin disminuye la actividad de la explosin oxidativa de los neutrfilos. La explosin
oxidativa de los neutrfilos procedentes de potros con sepsis tenda a ser inferior que la de
los neutrfilos procedentes de potros sanos en todas las muestras recogidas en cualquier
momento. Las concentraciones sricas de IgG no se relacionaron con la fagocitosis de los
neutrfilos, pero s con la actividad de la explosin oxidativa. La actividad de la explosin
oxidativa de los neutrfilos procedentes de los potros con sepsis aument significativa-
mente 5 das despus de realizar transfusiones de plasma [86]. La explosin respiratoria
oxidativa, medida por el mtodo de la quimioluminiscencia, de los neutrfilos procedentes
de gatos con viremia persistente infectados con el virus de la leucemia felina era inferior
que en los gatos afectados slo de forma subclnica [87]. Los PMN procedentes del tero
de yeguas que se consideraban susceptibles a las infecciones uterinas crnicas tenan una
VAJDOVICH
54
funcionalidad deficiente en cuanto a las actividades fagoctica y bactericida, comparados
con los procedentes de yeguas resistentes a estas infecciones [88].
Frmacos. Existen varios frmacos que pueden influir en la propiedad fagoctica de los
PMN. Algunos AINE, como cido acetilsaliclico y centrofenoxina, aumentan la fagoci-
tosis, mientras que otros, como bencidamina, idometacina, fenilbutazona, ibuprofeno y
paracetamol, disminuyen esta funcin, que se examin mediante fagocitosis de S. aureus
32P-marcados por neutrfilos aislados de la leche de vaca. Adems, se descubri que los
siguientes frmacos disminuan la fagocitosis: los peptlidos novobiocina y pristinami-
cina; los aminoglucsidos tobramicina, amicacina y gentamicina; las tetraciclinas; el
cido fusdico; minociclina y doxiciclina; y los antibiticos betalactmicos carfecilina,
cefapirina sdica y cefacetrilo sdico. Sin embargo, bromexina, un frmaco secretoltico,
aument la fagocitosis en el mismo estudio [89]. Los glucocorticoesteroides inhiben la
fagocitosis interfiriendo con la unin de la bacteria opsonizada y C3b y/o los receptores
Fc [90]. La supresin de la explosin oxidativa inducida por dexametasona en los neu-
trfilos de los terneros puede detectarse mediante la tcnica citomtrica de flujo [91].
Efectos perjudiciales de la explosin oxidativa
Los efectos perjudiciales de los radicales libres que se originan de las clulas fagocita-
rias son evidentes y se han descrito en otro lugar. Un resumen completo se saldra del
propsito de este captulo, pero merece la pena mencionar algunos conceptos, dirigidos
principalmente a los trastornos de los animales.
Peroxidacin lipdica. Se ha descubierto que los leucocitos PMN fomentan la peroxi-
dacin en los micelios de cido linoleico. La POL promovida por los leucocitos es
parecida al proceso bien conocido promovido por la NADPH citocromo P450 reduc-
tasa microsomal. Este mecanismo implica la reaccin del oxgeno molecular o los
radicales reactivos de oxgeno y los cidos grasos poliinsaturados, en los cuales el
grupo carbnico de metileno- (CH), que se localiza junto al enlace doble, es relati-
vamente inestable y por tanto puede activarse por la prdida de un tomo de hidrgeno
(RH r R + H). La molcula de oxgeno puede yacer en este lecho, y se forma un radi-
cal lipoperxido (ROO). Este proceso inicia ciertas reacciones en cadena, la lesin de
lpidos, protenas y cidos nucleicos, y la formacin de muchos productos finales esta-
bles y metaestables [92]. La peroxidacin de los lpidos es un mecanismo importante
por medio del cual los granulocitos expresan la lesin tisular debido a que la lesin de
las membranas produce cambios de la permeabilidad [93].
Lesiones oxidativas del ADN, los lpidos y las protenas. A altas concentraciones, las
ERO pueden ser mediadores importantes de la lesin de las estructuras celulares, los ci-
dos nucleicos, los lpidos y las protenas. Se sabe que HO
reacciona con todos los com-

ponentes de la molcula de ADN, daando las bases purina y pirimidina, as como el eje
central de la desoxirribosa. La lesin del ADN que mejor se ha estudiado es la formacin
de 8-OH-G. La modificacin permanente del material gentico causada por estos aconte-
cimientos de la lesin oxidativa representa el primer paso relacionado con la mutagne-
sis, la carcinognesis y el envejecimiento. Se sabe que la produccin de ERO inducida por
metales provoca un ataque del ADN y de otros componentes celulares relacionados con
55
los residuos de cidos grasos poliinsaturados de los fosfolpidos, que son extremadamen-
te sensibles a la oxidacin. Una vez formados, los radicales peroxilo (ROO
) pueden
reestructurarse mediante una reaccin de ciclacin para formar endoperoxidasas (precur-
sores de MDA), siendo MDA el producto final del proceso de peroxidacin. El producto
aldehdo principal de la POL diferente de MDA es 4-hidroxi-2-nonenal. MDA es mutag-
nico en las clulas bacterianas y de los mamferos y es carcinognico en las ratas. Hidroxi-
nonenal es dbilmente mutagnico, pero parece que es el producto txico principal de la
LPO. Los mecanismos que participan en la oxidacin de las protenas por las ERO se
esclarecieron gracias a los estudios en los que aminocidos, pptidos simples y protenas
se expusieron a las radiaciones ionizantes en condiciones en las que se formaba HO
o una
mezcla de radicales HO
/O
2
. Las cadenas laterales de todos los residuos aminocidos de

las protenas, en especial los residuos cistena y metionina de las protenas, son suscepti-
bles a la oxidacin por la accin de las ERO/especies reactivas de nitrgeno. La oxidacin
de los residuos cistena puede dar lugar a la formacin reversible de disulfuros mixtos
entre los grupos tiol de la protena (-SH) y tioles de bajo peso molecular, en particular GSH
(S-glutatiolacin). La concentracin de grupos carbonilo, generados por muchos mecanis-
mos diferentes, es una buena forma de medir la oxidacin proteica mediada por ERO. Se
han desarrollado varios mtodos muy sensibles para analizar los grupos carbonilo de las
protenas. Los productos finales de la glucacin avanzada (AGE) forman una clase com-
pleja. Son el resultado de una reaccin entre carbohidratos y un grupo de protenas amino
libres. Los productos intermedios se conocen, de forma variable, como productos Ama-
dori, Schiff Base y Maillard, con el nombre de los investigadores que primero los descri-
bieron. La mayora de los AGE son compuestos reactivos, muy inestables, y es difcil
analizar por completo los productos finales. Debido a su color marrn, muy conocido por
la qumica alimentaria, al principio Milliard propuso el nombre de melanoidinas. Los
compuestos AGE que se han encentrado en los seres humanos y que mejor se han descri-
to qumicamente son pentosidina y carboxil metil lisina [94].
Cambios de la permeabilidad microvascular. Existen pruebas de que las especies de
oxgeno activado, generadas por los sistemas sustrato xantina oxidasa (XO), pueden
influir en la degradacin del cido hialurnico, en las clulas gliales humanas de los
cultivos y en la microcirculacin. Tambin se han observado aumento de la permeabi-
lidad microvascular y aumento de la adherencia leucocito PMN-endotelial [95].
Lesin de los eritrocitos. Los neutrfilos activados pueden afectar a los eritrocitos, ya
que inducen la deplecin del GSH reducido de los eritrocitos, aumentan la hemoglobina
y metahemoglobina ligadas a la membrana y fomentan la unin de inmunoglobulina a la
membrana celular. SOD y CAT mejoran la disminucin del GSH reducido y el aumento
de las uniones de metahemoglobina e inmunoglobulina. Esta actividad se interpreta como
una prueba de que los neutrfilos activados pueden alterar la naturaleza antignica de la
membrana de los eritrocitos generando radicales de oxgeno txicos [96].
Procesos inflamatorios exagerados. Los estudios experimentales indican que los metaboli-
tos de oxgeno derivados de los neutrfilos contribuyen al desarrollo de las lesiones tisulares
que se asocian a diversos estados patolgicos, que incluyen el enfisema, el infarto de mio-
cardio, el sndrome disneico agudo del adulto, la vasculitis mediada por inmunocomplejos
VAJDOVICH
56
y la artritis reumatoide [97]. Los procesos inflamatorios locales pueden dar lugar a inflama-
cin sistmica; tambin pueden iniciarse cambios de los radicales libres y antioxidantes. Se
implant una gasa debajo de la piel a seis ovejas con fstulas linfticas en el costado, lo que
produjo una gran infiltracin de monocitos y macrfagos en ambos pulmones y en el hgado.
El agua del pulmn, representada como el contenido de agua sobre el peso seco, fue normal.
La POL en el pulmn y el hgado cuantificada por el contenido del subproducto MDA
aument un 300 y un 90% sobre los valores de control, respectivamente [98].
Trastornos patolgicos. Se ha afirmado que la potencia de los amino salicilatos como
antioxidantes en la enteritis destaca la importancia de los MRO en la enfermedad intes-
tinal inflamatoria [99].
Los procesos inflamatorios del intestino y sus efectos, como la diarrea y la sntesis
de prostaglandinas, se acompaan de un aumento de la produccin de radicales libres.
En un experimento realizado con leon de lechn tras la infeccin con Cryptosporidium
spp., los investigadores observaron que la produccin de MRO derivados de los fago-
citos tambin contribuye a la sntesis de prostaglandinas y altera el transporte en el
leon inflamado debido al aumento de las concentraciones de MDA el segundo da de
la infeccin, que precede al aumento PGE
2
en el tercer y cuarto das, que se relaciona
con la fase diarreica aguda. Sin embargo, la mayor intensidad de la atrofia de las vello-
sidades (en el octavo da) se relacionaba con las concentraciones ms altas de CAT y
MDA, pero con niveles bajos de PGE
2
[100].
Es probable que varias enfermedades renales, como la glomerulonefritis, la vascu-
litis, las nefropatas txicas, la pielonefritis, la insuficiencia renal aguda y otras, estn
mediadas, al menos en parte, por lesiones oxidativas [101]. Todos los MRO principales
se han relacionado con lesiones glomerulares. Adems, en los modelos dependientes
de neutrfilos, se ha demostrado que la interaccin entre la MPO derivada de los neu-
trfilos y los aniones haluro participa en la lesin glomerular, as como en la haloge-
nacin de la membrana basal glomerular. Las citocinas tambin tienen una funcin
importante (quiz elaboradas por los monocitos/macrfagos infiltrados) estimulando a
las clulas mesangiales para que produzcan ERO [102].
La osteoartritis, la artritis reumatoide, la espondilitis y las enfermedades relacionadas
son un grupo de trastornos graves de las articulaciones y los tejidos adyacentes que afectan
a los seres humanos y a los animales. Existen varios factores (alteraciones inmunomedia-
das, traumatismos, infecciones y alteraciones genticas, entre otros) que pueden iniciar
estos trastornos. En la mayora de los casos, la acumulacin de clulas y mediadores infla-
matorios se acompaa de degeneracin del cartlago, apoptosis de los condrocitos, lesin
del colgeno y otros procesos destructivos. En varios artculos se ha investigado la relacin
entre los cambios de los radicales libres y del estado antioxidante y el proceso inflamatorio
en la artritis. Se sabe que las clulas inflamatorias son el origen ms importante de la for-
macin de radicales libres. En uno de los primeros estudios se demostr que una tasa ms
alta de POL (concentracin de MDA medida en el plasma) influye en las enfermedades
reumticas en los seres humanos [103]. Campo et al. [104] afirmaban que las ERO liberadas
por los granulocitos neutrfilos, monocitos y otras rutas bioqumicas tenan el papel prin-
cipal, causando la destruccin erosiva del cartlago articular. Es ms, indicaron que existe
una diferencia de la actividad de los neutrfilos y monocitos en este proceso. Ostrakhovitch
et al. [105] observaron que la NADPH oxidasa junto con la NO sintasa son la fuente prin-
57
cipal de O
2
en los neutrfilos de los pacientes que tienen artritis reumatoide, mientras que
en los monocitos el O
2
se produca por la NADPH oxidasa y la mitocondria.
En esta enfermedad se han identificado otras fuentes de radicales libres. Se ha pro-
puesto que OH
es un agente lesivo principal en la inflamacin reumatoide de las

articulaciones y que la liberacin de hierro desde la transferrina, que puede producirse
debido al pH bajo presente en el microentorno creado por los fagocitos activados adhe-
rentes, facilita su formacin. Se ha propuesto que una funcin de la lactoferrina es la
proteccin contra las reacciones de los radicales dependientes de hierro, ms que actuar
como cataltico para la produccin de OH
[106].
El hallazgo de Sarban et al. [107] de que la capacidad antioxidante total y los nive-
les de POL se relacionan con los reactivos de la fase aguda como la tasa de sedimen-
tacin de los eritrocitos aport datos muy importantes sobre la actividad patolgica en
la artritis reumatoide.
Tambin se midi la actividad de algunas enzimas antioxidantes en pacientes con
estas enfermedades. Por ejemplo, los investigadores descubrieron que en la espondilitis
anquilosante la actividad de la enzima CAT tena una relacin positiva significativa con
las concentraciones de protena C reactiva y la tasa de sedimentacin de los eritrocitos en
los pacientes activos [108]. Tambin se descubri que en los nios que tenan artritis
reumatoide juvenil las concentraciones de enzimas antioxidantes (CAT, GSH-Px) haban
disminuido en el momento del diagnstico, junto con un aumento de MDA, SOD y las
pruebas inflamatorias [109]. Los condrocitos sufren apoptosis como una consecuencia
de la formacin de ERO, que es un factor fundamental en el desarrollo de esta enferme-
dad. Se descubri que la adicin de H
2
O
2
a los condrocitos da lugar a la formacin de
ERO y produce disfuncin lisosomal, que se aprecia por la inflamacin y la ruptura, antes
de la disfuncin del potencial de la membrana mitocondrial. Los investigadores indican
que los antioxidantes pueden tener una aplicacin teraputica para prevenir la disfuncin
lisosomal inhibiendo la apoptosis de los condrocitos y la degradacin de la matriz carti-
laginosa [110]. Los condrocitos son componentes importantes de las articulaciones, y
producen radicales libres por s mismos; su formacin de ERO tiene una participacin
fundamental en el proceso de envejecimiento, ms que en la osteoartritis [111].
In vivo, el O
2
de las articulaciones puede derivar de los leucocitos PMN activados
o de un ciclo de isquemia/reperfusin. En presencia de hierro ferroso puede generar
OH
altamente reactivo. Los factores predisponentes pueden incluir la sinovitis, la

isquemia inducida por el ejercicio y las lesiones traumticas menores de las articula-
ciones. A diferencia de otros mediadores inflamatorios, los radicales libres derivados
de oxgeno pueden lesionar los tejidos directamente, y estas especies reactivas podran
ser responsables de la lesin tisular y de la aparicin insidiosa de la artropata degene-
rativa equina inducida por el ejercicio [112].
La enfermedad pulmonar obstructiva crnica y otros trastornos de las vas respirato-
rias inferiores son problemas muy importantes en los caballos. El H
2
O
2
, como producto
final de los procesos oxidativos, puede medirse de varias formas, como en el aire espira-
do condensado. Los investigadores observaron que los caballos afectados con obstruc-
cin recurrente de las vas respiratorias y que tenan las vas respiratorias muy inflama-
das, tenan concentraciones significativamente superiores de H
2
O
2
en el aire espirado
condensado que los caballos de control o que los caballos afectados por una obstruccin
recurrente de las vas respiratorias en ausencia de inflamacin [113]. Los investigadores
VAJDOVICH
58
demostraron que esta observacin es importante porque los radicales libres pueden pro-
ducir una disminucin notable del compartimento de cido ascrbico antioxidante, que se
altera en esta enfermedad. La concentracin de cido ascrbico en el lquido que recubre
el epitelio pulmonar haba disminuido en los caballos afectados de ORVR con inflama-
cin de las vas respiratorias si se comparaba con los caballos afectados con ORVR sin
inflamacin de las vas respiratorias y los caballos de control. Tambin se demostr que
la inflamacin neutroflica que se produca en la ORVR se asocia a la disminucin del
compartimento del cido ascrbico del lquido que recubre el epitelio pulmonar. Los
investigadores demostraron que el cido ascrbico del lquido que recubre el epitelio
pulmonar permaneca significativamente bajo en los caballos afectados con ORVR sin
inflamacin de las vas respiratorias que en los caballos de control. Es ms, la proporcin
cido ascrbico/redox del lquido que recubre el epitelio pulmonar (es decir, la propor-
cin de las concentraciones de dehidroascorbato y de cido ascrbico total) era ms alta
en los caballos afectados con ORVR con inflamacin en las vas respiratorias que en los
caballos afectados con ORVR sin inflamacin de las vas respiratorias. El nmero de
neutrfilos del lquido de lavado bronquioalveolar se relacionaba inversamente con la
concentracin del cido ascrbico del lquido que recubre el epitelio pulmonar (r = -0,81)
y se relacionaba positivamente con la proporcin cido ascrbico/redox (r = 0,65) [114].
Es ms, los investigadores demostraron que en los caballos afectados con ORVR, la
exposicin al polvo orgnico produca una disminucin significativa de la concentracin
de cido ascrbico en el lquido que recubre el epitelio respiratorio traqueal; este descen-
so era mayor que la disminucin en el lquido que recubre el epitelio pulmonar bronquio-
alveolar. La disminucin del porcentaje de cido ascrbico del lquido que recubre el
epitelio respiratorio traqueal se relacion con la disminucin del porcentaje de cido
ascrbico del lquido que recubre el epitelio pulmonar bronquioalveolar tras la exposi-
cin [115]. Tambin demostraron que la exposicin al polvo orgnico produca neutrofi-
lia aguda en las vas respiratorias, que se asoci a un aumento de la elastasa y a una
disminucin de las concentraciones de cido ascrbico en el lquido de lavado bronquio-
alveolar. Sin embargo, no afectaba a los marcadores del estrs oxidativo, como tampo-
co al H
2
O
2
del aire espirado condensado. La disminucin del cido ascrbico se relacio-
n con un aumento de la resistencia respiratoria [116].
El estrs oxidativo que se produce al exhalar se relaciona con la funcin pulmonar y
la inflamacin de las vas respiratorias, y puede evaluarse localmente mediante el lquido
que recubre el epitelio pulmonar (LREP), el estado GSH, el cido rico y 8-epi-PGF
2alfa
.
El estado oxidativo se relacion con los parmetros de la funcin pulmonar (mecanismos
respiratorios y tensin del gas sanguneo arterial) y con los parmetros de la inflamacin
de las vas respiratorias (porcentaje de neutrfilos en el lavado bronquioalveolar y pun-
tuacin de la inflamacin de las vas respiratorias). La GSH hemolizada de los eritrocitos
fue significativamente diferente entre los grupos, y se relacion con los parmetros de la
funcin pulmonar y de la inflamacin de las vas respiratorias. El ejercicio produjo un
aumento del cido rico plasmtico, que fue significativamente superior en los caballos
en remisin clnica y en remisin completa. 8-epi-PGF
2alfa
del LREP aument significa-
tivamente en la remisin completa y se relacion con los parmetros de la funcin pul-
monar y de la inflamacin de las vas respiratorias [117]. Otras pruebas tambin han
demostrado la importancia de la formacin de radicales libres. La sensibilizacin pasiva
de los bronquios equinos con suero procedente de animales con hulfago y una concen-
59
tracin total alta de IgE induce la inflamacin y la hipersensibilidad. Los investigadores
opinan que estos efectos podran estar causados por el estrs oxidativo, porque un pretra-
tamiento con GSH disminuy el aumento de la expresin de IL-1 ARNm y la contrac-
cin en respuesta a la estimulacin mediante un campo elctrico de los bronquios equinos
aislados sensibilizados de forma pasiva [9].
Muchos informes han demostrado que los procesos de los radicales libres y los cam-
bios de las enzimas antioxidantes desempean funciones importantes en el desarrollo de
los trastornos inflamatorios orales. Los perros con gingivitis y perodontitis mnima
tenan capacidades antioxidantes totales significativamente superiores en el lquido cre-
vicular gingival que los perros con perodontitis avanzada. El anlisis de regresin con
dos variables revel relaciones negativas significativas entre las capacidades antioxidan-
tes totales del lquido crevicular gingival y los parmetros clnicos y la edad. Las capaci-
dades antioxidantes totales del lquido crevicular gingival y del suero se relacionaban con
la gravedad del enfermedad perodontal en los perros, probablemente debido a la libera-
cin de ERO por los fagocitos activados y los fibroblastos en los tejidos perodontales
inflamados [118]. La POL y la actividad de los sistemas antioxidantes se estudiaron en
los tejidos del parodontium de 64 gatos; en la gingivitis, se detect activacin mxima de
la POL tanto en los procesos gingivales como alveolares [119].
Debido a su funcin como interconexin entre el organismo y el entorno, la piel siempre
est expuesta tanto a agentes prooxidantes endgenos como del entorno, lo que da lugar a
una produccin peligrosa de ERO. Existen varios factores que producen estrs oxidativo;
el ms importante es la acumulacin de fagocitos en diferentes capas de la piel y el tejido
subcutneo. Existen pruebas convincentes de que el estrs oxidativo participa en la lesin
de los componentes celulares, como el ADN, los lpidos de la membrana celular y las pro-
tenas. Para protegerse contra la sobrecarga de especies oxidantes, la piel contiene un siste-
ma bien organizado de antioxidantes qumicos y enzimticos que trabajan de forma sinr-
gica. La red antioxidante de la piel protege a la clula contra las lesiones oxidativas y evita
que se formen productos de la oxidacin, como 4-hidroxi-2-nonenal o malonaldehdo, que
pueden producir lesiones en las protenas, apoptosis o la liberacin de mediadores proinfla-
matorios como las citocinas. Cuando el estrs oxidativo sobrepasa la capacidad antioxidan-
te de la piel, la modificacin posterior del sistema redox celular produce altera la homeos-
tasis de la clula y da lugar a procesos degenerativos. Recientemente, se ha sugerido la
aplicacin tpica o la administracin oral de antioxidantes como tratamiento preventivo
para el fotoenvejecimiento de la piel y el cncer inducido por los rayos ultravioletas. El
reconocimiento de que las ERO pueden actuar como segundos mensajeros en la induccin
de varias respuestas biolgicas (p. ej., en la activacin de NF-B o la protena-1 activadora,
la generacin de citocinas y la modulacin de rutas de sealizacin, entre otras) ha hecho
que muchos investigadores se centren en los efectos posibles de los antioxidantes en muchos
procesos patolgicos. El hallazgo reciente de que los PPAR, cuyos ligandos naturales son
cidos grasos poliinsaturados y los productos de su oxidacin, desempaan una funcin
principal en la induccin de algunas enfermedades cutneas, indica que existen ms rela-
ciones entre los radicales libres y la inflamacin cutnea [120].
Efectos beneficiosos teraputicos de la explosin oxidativa
Junto a sus efectos perjudiciales, los radicales libres que producen los fagocitos tienen una
cara de Jano. No hay dudas de que estos radicales libres son fundamentales para el que el
VAJDOVICH
60
efecto bactericida sea adecuado. Es ms, a veces debe aumentar mucho la explosin oxida-
tiva. Es muy importante que aumente la actividad de la explosin oxidativa cuando su fun-
cin ha disminuido ligeramente. Es como la salud: se valora ms cuando se ha perdido.
Tratamiento con oxgeno hiperbrico en la destruccin microbiana. El aporte de ox-
geno afecta al sistema inmunitario, la cicatrizacin de las heridas y el tono vascular. El
oxgeno solo tiene poco efecto antimicrobicida directo, incluso para los ms anaero-
bios [121]. Sin embargo, es un factor crucial de la funcin inmunitaria. Los tejidos
isqumicos, hipxicos, son mucho ms sensibles a la infeccin que los tejidos norma-
les; en un estudio realizado con ms de 60 pacientes, ninguno de los pacientes bien
oxigenados sufrieron infecciones, incluso tras una contaminacin importante durante
la intervencin quirrgica. La infeccin se disemin rpidamente en los tejidos hipxi-
cos y parece que la formacin de abscesos, que impide la diseminacin de la infeccin
en los tejidos normales, no limit su diseminacin. En el tejido isqumico, la infec-
cin caus trombosis intravascular y gangrena infecciosa. Los leucocitos entran en el
tejido hipxico en un nmero superior que en los tejidos normales. Los leucocitos que
llegan pierden su eficacia debido a la hipoxia; en las zonas hipxicas carecen de ox-
geno suficiente para eliminar las bacterias. Por eso se reclutan ms leucocitos. Se ha
demostrado que los niveles de hiperoxia que se alcanzan fcilmente en condiciones
clnicas pueden facilitar la funcin de los leucocitos. Adems, la destruccin de las
bacterias puede aumentar hasta un nivel aproximadamente igual al que se consigue con
los antibiticos, y este aumento de la destruccin bacteriana que se consigue gracias al
oxgeno se suma a la accin de los antibiticos. Sin embargo, que un paciente respi-
re oxgeno no garantiza que se libere en los tejidos; la nica forma de saber que el
oxgeno ha llegado a los tejidos es medirlo all. Para obtener todo el beneficio de la
destruccin oxidativa de los leucocitos se requiere una tecnologa que mida el oxgeno
a nivel tisular. La mejor forma de asegurar que el oxgeno se libera es aumentar la PO
2

arterial y administrar lquido de forma intensiva para mantener el retorno capilar nor-
mal, la temperatura cutnea perifrica, la turgencia normal del globo ocular y la hume-
dad de las mucosas, y para asegurar que los signos vitales no varan [122].
Los neutrfilos requieren oxgeno molecular como sustrato para eliminar los micro-
bios. La explosin oxidativa que se observa en los neutrfilos tras la fagocitosis de las
bacterias supone un aumento de 10 a 15 veces el consumo de oxgeno. Aqu el oxgeno
se utiliza como sustrato para la formacin de radicales libres, que desencadenan direc-
ta o indirectamente la actividad destructora de los fagocitos [123]. Este sistema anti-
microbiano endgeno prcticamente deja de funcionar en condiciones de hipoxia. Para
que se produzca la funcin oxidativa normal se considera que se necesita una PO
2
tisu-
lar de al menos 30 mmHg de oxgeno. En los tejidos lesionados e infectados la PO
2

suele estar por debajo de este nivel. Aumentando el nivel de oxgeno en estos tejidos
puede conseguirse que se restaure la funcin de los leucocitos y que se recupere la
actividad antimicrobiana adecuada [124].
Mecanismos de destruccin independientes de oxgeno
Algunos mecanismos bactericidas no dependen del oxgeno. Los componentes de estos
mecanismos se encuentran principalmente en los lisosomas de los leucocitos. Las enzi-
mas catinicas de los lisosomas atacan las paredes celulares bacterianas, especialmen-
61
te de los cocos grampositivos, e hidrolizan la unin cido murmico-N-acetilglucosa-
mina que se encuentra en la capa glucopeptdica de muchas bacterias. La lactoferrina
es una glucoprotena ligada al hierro que se encuentra en grnulos especficos, y puede
ser perjudicial para algunos microorganismos que requieren hierro para crecer. La
catepsina G es una proteinasa de los grnulos azurfilos que tiene propiedades antimi-
crobianas tanto para las bacterias grampositivas como gramnegativas, as como para
algunos hongos [1]. Un grupo de pptidos relacionados, ricos en arginina y cistena,
conocidos como defensinas, tambin son componentes de los grnulos de los leuco-
citos y tienen propiedades antimicrobianas de amplio espectro, incluyendo bacterias
grampositivas y gramnegativas, hongos e incluso algunos virus con cubierta. Las
defensinas son un grupo de una coleccin mucho ms grande de pptidos antimicro-
bianos que se encuentran en toda la naturaleza [1].
Un importante pptido antimicrobiano es la protena 1 de los macrfagos asociada
a la resistencia natural (Nramp1), que puede tener una funcin de transportador, faci-
lita el aumento del flujo citoplsmico de hierro y su actividad aparentemente es sensi-
ble a, y aumenta debido a, las citocinas asociadas a la respuesta inflamatoria. Tras la
fagocitosis de las bacterias patgenas, Nramp1 aparece en la membrana de los fagoli-
sosomas de las clulas del linaje de los macrfagos. Existe la hiptesis de que Nramp1
es una bomba de hierro que consume este nutriente de los fagolisosomas, y por tanto
colabora impidiendo que las bacterias absorbidas dispongan de este nutriente esencial
para su supervivencia y crecimiento. Si no funciona correctamente, se producen infec-
ciones micobacterianas crnicas y generalmente no patgenas, como los complejos de
Mycobacterium avium. Estos sistemas son formidables y puede parecer que son inven-
cibles, pero los mecanismos fagocitarios y bactericidas no siempre tienen xito [125].
Defensa contra las enzimas lisosomales. Los fagocitos pueden liberar sus potentes
sustancias qumicas en los tejidos en los sitios de inflamacin, y por tanto contribuyen
a la lesin tisular. Con frecuencia, las enzimas de los leucocitos deben inhibirse para
evitar el riesgo de que se extienda la lesin tisular. La mayora de las lesiones estn
causadas por proteinasas; por tanto, las antiproteinasas son necesarias para mantenerlas
bajo control. La ms universal de las antiproteinasas es la
2
-macroglobulina, que se
sintetiza en el hgado, circula en el plasma e inhibe cuatro clases de proteinasas de los
leucocitos. Esta
2
-macroglobulina es capaz de inactivar una amplia variedad de pro-
teinasas (incluyendo serina, cistena, aspartato y metaloproteinasas). Los inhibidores
de serina proteinasa, o serpinas, abundan en el plasma e incluyen el inhibidor de
1
-proteinasa, los inhibidores del activador de plasmingeno, anti-trombina III y otros.
Los inhibidores tisulares de metaloproteinasas, que son sintetizados por los leucocitos
y en las clulas del tejido conjuntivo, inhiben las metaloproteinasas de la matriz [1].
MEDIADORES BIOQUMICOS DE LA INFLAMACIN
Un mediador bioqumico puede ser cualquier mensajero que acta sobre los vasos
sanguneos, las clulas inflamatorias u otras clulas, colaborando con la respuesta
inflamatoria [1,126,127]. En la tabla 1 se enumeran algunas caractersticas de los
mediadores bioqumicos de la inflamacin.
Las lesiones precipitan la respuesta inflamatoria, en gran parte debido a la estimu-
lacin de la liberacin de mediadores bioqumicos. La importancia relativa de los dis-
VAJDOVICH
62
tintos mediadores en el desarrollo de una reaccin inflamatoria vara dependiendo de
la especie animal, la localizacin en el organismo y la naturaleza de la sustancia lesiva.
Los mediadores pueden distribuirse por todo el organismo, o pueden sintetizarse en la
mayora de las localizaciones, por lo que pueden liberarse o activarse localmente en
casi todos los focos inflamatorios. Para proteger al organismo de los efectos potencial-
mente nocivos de muchos mediadores, algunas de las molculas de la inflamacin
tienen semividas ms cortas en los tejidos y pueden desactivarse rpidamente. Ninguna
Tabla 1
Algunas caractersticas de los mediadores bioqumicos de la inflamacin
Caracterstica Tipo Ejemplos
Localizacin Exgena
Endgena
Plasma
Leucocitos
Clulas endoteliales
Fibroblastos
Lipopolisacridos bacterianos
Histamina
Bradicinina
Leucotrieno B4, interleucina 1
xido ntrico,
prostaglandina I
2
Prostaglandina E
2
,
Interleucina 1, factor de
crecimiento transformante
Sntesis Se realiza en la clula,
requiere slo la liberacin
de los almacenes
celulares
Se sintetiza de novo por
las clulas estimuladas
Se genera como una
consecuencia de los
pasos enzimticos
mltiples que implican la
actividad secuencial de
diferentes molculas
mediante protelisis
limitada
Histamina
Prostaglandinas, factor
activador plaquetario
Sistema del complemento,
sistemas de coagulacin
Tamao Pequeo
Intermedio
Grande
Histamina (111 d),
bradicinina (9 aminocidos,
peso molecular: 1059,6 d)
Factor de necrosis tumoral
(17 kd)
Fosfolipasa citoslica A
2

(85 kd)
Tipo de molcula Aminas
Lpidos
Glucoprotenas
Polipptidos
Histamina, serotonina
Leucotrienos, factor activador
plaquetario
Interfern
C5a
63
parte de la respuesta inflamatoria depende de un nico mediador; la mayora de los
mediadores tienen mltiples funciones, y la mayora de las funciones pueden ser rea-
lizadas por varios mediadores [1].
Aminas vasoactivas
Las aminas vasoactivas, histamina y serotonina, tienen una funcin fundamental en los
procesos inflamatorios (v. tabla 2), pero una descripcin detallada de sus funciones
sobrepasara el mbito de este artculo.
Cininas
Las cininas son un grupo de polipptidos relacionados que proceden de la descompo-
sicin de unos precursores proteicos del plasma (ciningenos) por unas enzimas deno-
minadas calicrenas. La bradicinina prototipo (de peso molecular 1059,6 d) es un
nonapptido, y su metabolito biolgicamente activo es des-Arg bradicinina, con
un peso molecular de 904 d, lo que significa que se ha desprendido enzimticamente un
residuo arginina terminal (v. figura 5) [1].
La bradicinina es un polipptido que consta de nueve aminocidos y deriva de un
ciningeno circulante de alto peso molecular. Esta molcula es un sustrato de la enzima
calicrena (su precursor es la precalicrena) que separa la bradicinina de este cininge-
no de alto peso molecular. La activacin de esta ruta se produce en lo que se denomina
sistema de contacto, y tambin participan factores de la coagulacin, como el factor
XII (factor de Hageman), el factor XI (antecedente tromboplastnico plasmtico), pre-
calicrena y plasmingeno. El plasmingeno es un miembro bsico de la ruta fribino-
ltica. El sistema de contacto es responsable de la coagulacin intrnseca y de la fribi-
nlisis. El trmino bradi- indica que es lento produciendo una contraccin completa
del msculo liso si se compara con la histamina. Otras cininas tambin derivan de los
ciningenos tisulares mediante la accin de las calicrenas tisulares. Las leucocininas
son cininas derivadas de los leucocitos. Otra cinina (C-cinina) deriva de uno de los
componentes del complemento que actan en primer lugar. La bradicinina y la des-Arg
bradicinina son mediadores potentes que tienen diversos efectos sobre los vasos san-
guneos y varios tipos de clulas. Se unen a sus receptores respectivos B
2
y B
1
, que se
expresan de forma constitutiva (B
2
), o por la regulacin hacia arriba durante la infla-
macin (B
1
). Las cininas actan sobre los vasos perifricos produciendo vasodilatacin
o vasoconstriccin, dependiendo de las condiciones locales, y producen broncocons-
triccin. Pueden disminuir el tono del msculo liso arterial y pueden aumentar la per-
meabilidad vascular por los mismos mecanismos que la histamina: contraccin y sepa-
racin de las clulas endoteliales. Las cininas tambin pueden estimular la liberacin
de histamina en los mastocitos y activar la cascada araquidnica para la sntesis de
prostaglandinas y leucotrienos. Junto con las prostaglandinas, se cree que la bradicini-
na es un mediador principal del dolor de la inflamacin aguda debido a sus efectos
sobre las fibras nerviosas aferentes. Las cininas pueden aumentar el flujo sanguneo
perifrico, afectan a la permeabilidad vascular y producen dolor por mecanismos direc-
tos o indirectos. Tambin inducen rubor, calor, tumor y dolor, cuatro de los signos
cardinales de la inflamacin. Despus de sintetizarse, las cininas se inactivan rpida-
mente (en minutos) debido a la accin de las cininasas, enzimas que separan los ami-
nocidos del terminal carboxilo de estos polipptidos [1].
VAJDOVICH
64
Tabla 2
Aminas vasoactivas
Caractersticas
Tamao 111 Da 176,2 Da
Formacin Mediador preformado, formado por la
descarboxilacin del aminocido
L-histidina
Mediador preformado, formado a
partir del triptfano de la dieta,
oxidacin y descarboxilacin
Localizacin En los grnulos de los mastocitos, los
neutrlos baslos y, en algunas
especies, en las plaquetas
En algunas clulas (p. ej., clulas
neurales) del aparato
gastrointestinal, el cerebro, el
pulmn, las plaquetas; en los
roedores: mastocitos y baslos
Inactivacin Por la histaminasa o la desaminacin
oxidativa
Mediante monoaminooxidasas
Liberacin En respuesta a procesos inmunolgicos
(p. ej., desafo antignico de clulas
sensibilizadas a anticuerpos IgE,
exposicin a los componentes del
complemento C3a y C5a), lesiones
fsicas, traumatismos mecnicos,
radiacin, calor, varias sustancias
qumicas (p. ej., toxinas, venenos de
serpiente, melitina del veneno de abeja,
tripsina, sales biliares, ATP)
A partir de las plaquetas durante la
reaccin de liberacin
plaquetaria desencadenada por
estmulos como trombina, tripsina,
colgeno, complejos antgeno-
anticuerpo, supercies cubiertas
de globulina, venenos de
serpiente, adrenalina, PAF y ADP
A partir de las neuronas en
respuesta a varios estmulos
Funcin Desempea una funcin en la fase activa,
inmediata y aguda del aumento de la
permeabilidad vascular
Produce un aumento de la permeabilidad
vascular y tiene efectos de contraccin
intensos sobre los msculos lisos
vasculares y bronquiales
Dilatacin de las arteriolas
Aumento de la permeabilidad vascular
por la formacin de grietas entre los
mrgenes de las clulas endoteliales
adyacentes de las vnulas que
contactan con ellas
Probablemente estimula las clulas
estromales para que sinteticen y liberen
eotaxinas, que son quimiocinas potentes
para la quimiotaxis de los eosinlos
Tiene efectos sobre el msculo liso,
los vasos sanguneos y los
nervios en diferentes regiones del
organismo, y puede mediar la
sensacin de dolor
Como un neurotransmisor
monoamina, afecta a muchos
centros sensitivos y superiores
En el cerebro, incluyendo la
memoria, el apetito, el sueo y el
aprendizaje
Conocida por muchos como la
hormona del bienestar
La serotonina, junto con las
endornas, GABA y dopamina,
constituyen el proceso biolgico
que se conoce como la cascada
graticante
Datos tomados de Bochsler PN, Slauson DO. Inammation and repair of tissue. In: Slauson DO, Cooper BJ,
editors. Mechanisms of disease. A textbook of comparative general pathology. 3rd edition. St. Louis (MO):
Mosby; 2002. p. 141245.
Histamina
N
N
H
NH
2
Serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT)
NH
2
N
H
HO
65
Metabolitos del cido araquidnico
Los metabolitos del AA de la inflamacin se descubrieron en los aos 70, cuando se
explic parcialmente el modo de accin del cido acetilsaliclico (aspirina). John Vane
recibi el premio Nobel por su trabajo en este campo [1]. Los metabolitos del AA
actan en varios procesos biolgicos, entre los cuales tiene importancia la inflamacin.
Tienen una funcin en la vasodilatacin, el filtrado vascular, la coagulacin, la trom-
bosis y el dolor, y en los trastornos cardiovasculares, endocrinos y otros. Estos meta-
bolitos, que a veces se denominan autacoides, son hormonas a corto plazo que se
forman rpidamente y se descomponen espontneamente o son destruidas rpidamen-
te por enzimas.
El AA es un cido graso poliinsaturado C
20
con enlaces intercalados de metileno
(5,8,11,14-cido eicosatetraenoico), que deriva de los alimentos o de la conversin de
cido grasos esenciales como el cido linoleico (linoleato) o el cido -linolnico
(linolenato) [1].
Hay una relacin notable entre la actividad fundamental de varios cidos grasos y su
capacidad para convertirse en prostaglandinas o leucotrienos; no parece que los cidos
grasos esenciales ejerzan todos sus efectos fisiolgicos a travs de las sntesis de prosta-
glandinas o leucotrienos. La funcin de los cidos grasos esenciales en la formacin de
membranas no tiene relacin con la produccin de metabolitos del AA. Las prostaglandi-
nas y los leucotrienos no alivian los sntomas de la deficiencia de cidos grasos esenciales,
y el sndrome por deficiencia de cidos grasos esenciales no est causado por la inhibicin
crnica de la sntesis de metabolitos del AA [128]. Se esterifican para formar fosfolpidos
de membrana como fosfatidilcolina en muchos tipos de clulas del organismo, incluyendo
las clulas inflamatorias. Para que se lleve a cabo el metabolismo celular del AA, primero
debe liberarse desde su posicin esterificada en estos fosfolpidos de membrana para
alimentar la cascada del AA. La liberacin desde la membrana se consigue principal-
mente debido a la actividad de las fosfolipasas celulares ligadas a la membrana [1].
Fosfolipasa A
2
Las fosfolipasas son enzimas que transforman los fosfolpidos en cidos grasos y otras
sustancias lipoflicas. Existen cuatro clases principales, denominadas A, B, C y D, que
se diferencian por el tipo de reaccin que catalizan. El AA se separa de las membranas
celulares principalmente por la actividad de isoformas de la fosfolipasa A
2
(PLA
2
, o
Figura 5. Bradicinina.
VAJDOVICH
66
2-acilhidrolasa fosfatada, EC 3.1.1.4), que tienen actividad sobre varios sustratos fos-
folpidos de la membrana. Su peso molecular es de alrededor de 13.900 d. Otras fosfo-
lipasas (C y D) tienen una especificidad de sustrato limitada. PLA
2
y sus isoformas
participan en varias funciones corporales, no slo en la cascada del AA. Las fosfolipa-
sas A
2
incluyen varias familias de protenas no relacionadas, con una actividad enzi-
mtica comn. Dos de las familias ms importantes son las fosfolipasas A
2
secretadas
y citoslicas. Otras familias incluyen la PLA
2
independiente de Ca
2+
y la PLA
2
asocia-
da a la lipoprotena, la acetilhidrolasa del factor activador plaquetario [1,128].
Las fosfolipasas A
2
secretadas son las formas extracelulares de las fosfolipasas A
2
.
Se han aislado en distintos venenos (de serpiente, de abeja y de avispa), en prctica-
mente todos los tejidos de todos los mamferos estudiados (incluyendo el pncreas y el
rin) y en las bacterias. Necesitan Ca
2+
para activarse. Las PLA
2
pancreticas actan
en la digestin inicial de los componentes fofolipdicos de la grasa de la dieta. Las
fosfolipasas de los venenos ayudan a inmovilizar a las vctimas fomentando la lisis
celular [129].
Las PLA
2
citoslicas son las PLA
2
intracelulares, tambin dependen del calcio,
tienen una estructura tridimensional completamente diferente y son significativamente
ms grandes que las PLA
2
secretadas (ms de 700 residuos). Incluyen un dominio C2
y un dominio cataltico grande [129].
Estas fosfolipasas participan en los procesos de sealizacin celulares, como los
de la respuesta inflamatoria. El AA producido es tanto una molcula de sealizacin
como el precursor de otras molculas de sealizacin denominadas eicosanoides.
Estas molculas incluyen leucotrienos y prostaglandinas. Algunos eicosanoides se
sintetizan a partir del diacilglicerol liberado de la bicapa lipdica mediante la fosfo-
lipasa C [1].
Las fosfolipasas pueden activarse cuando los receptores de membrana adecuados
que se encuentran en la superficie celular se unen a estmulos proinflamatorios como
las citocinas, factores de crecimiento, pptidos quimiotcticos u otras molculas de
sealizacin importantes para una clula en particular. El AA liberado puede movili-
zarse por dos rutas principales, la ruta COX y la de la lipooxigenesa (LOX). Las rutas
del metabolismo son divergentes. La sntesis de los prostanoides prostaglandina (PG
2
)
y tromboxano (TX
2
) por la ruta COX compite con la sntesis de leucotrienos (es decir,
LT
4
), y las lipoxinas (es decir, LX
4
) por la ruta LOX para el sustrato araquidonato
(v. figura 6) [128].
La regulacin de las PLA
2
est mediada a travs de las rutas de sealizacin
MAPK y NFB. Los investigadores demostraron que la expresin de las PLA
2
cito-
slicas se relacionan con la liberacin de PGE
2
por las clulas estimuladas por endo-
toxinas (LPS), mediada al menos en parte por las rutas de sealizacin MAPK y
NFB [130]. Recientemente se ha demostrado que las PLA
2
tienen una funcin
importante en la muerte celular que se produce por necrosis o por apoptosis. En la
necrosis, la muerte celular se caracteriza por la inflamacin de la clula y las orga-
nelas, la deplecin de ATP, el aumento de la permeabilidad de la membrana plasm-
tica y la liberacin de macromolculas. Se ha propuesto que durante la necrosis
aumenta la actividad de las PLA
2
, lo que produce la hidrlisis acelerada de los fos-
folpidos de la membrana que, a su vez, aumenta la permeabilidad de la membrana
plasmtica y la lisis celular [131].
67
La ruta de la ciclooxigenasa
Las prostaglandinas de la ruta COX se denominan prostanoides. La sntesis de prosta-
noides implica el consumo de dos molculas O
2
catalizado por la prostaglandina H sin-
tasa (PGHS), que tiene dos actividades enzimticas distintas, COX y peroxidasa. PGHS
se presenta como dos isoenzimas, PGHS-1 (peso molecular de 67 kd) y PGHS-2 (peso
molecular de 72 kd), o como ciclooxigenasa 1 (COX1) y ciclooxigenasa 2 (COX2), cada
una de las cuales tiene actividades COX y peroxidasa. El producto de la ruta COX,
y endoperxido (PGH), se convierte en prostaglandinas D, E y F, as como en TXA
2
y
prostaciclina (PGI
2
) [128].
La ruta COX se nombra por las enzimas responsables de la conversin del AA en
la prostaglandina inestable endoperxido PGG
2
, que se reduce a un segundo endope-
rxido, PGH
2
, que puede utilizarse como sustrato para sintetizar varias prostaglandi-
nas diferentes: PGE
2
, un vasodilatador, inductor de edema y estimulador de los ner-
vios sensitivos que causan el dolor; PGD
2
, un vasodilatador; y prostaglandina F
2

(PGF
2
), un vasoconstrictor y broncoconstrictor. Se producen ERO e hidroxiheptade-
catrienoato como productos finales de la reduccin de PGG
2
catalizada por la funcin
peroxidasa. Las ERO inducen la POL y, como consecuencia, la formacin de MDA
(v. figura 7) [1].
Figura 6. Conversin del cido araquidnico en prostaglandinas y tromboxano a travs de la
ruta de la ciclooxigenasa, y en leucotrienos y lipoxinas a travs de la ruta de la lipooxigenasa.
(Adaptado de Mayes PA. Metabolism of unsaturated fatty acids and eicosanoids. In: Murray RK,
Granner DK, Mayes PA, et al, editors. Harpers biochemistry. 25th edition. Appleton and Lange;
2000. p. 250; con autorizacin).
Varios estmulos,
por ejemplo
angiotensina II,
bradicinina,
adrenalina, trombina
cido araquidnico
Fosfolpidos de membrana
FOSFOLIPASA A
2
CICLOOXIGENASA LIPOOXIGENASA
Leucotrienos
Lipoxinas
Prostaglandinas
Tromboxanos
VAJDOVICH
68
Los prostanoides se han asociado al dolor que se experimenta durante la inflama-
cin. Pueden producir vasodilatacin y pueden colaborar con otros mediadores para
producir un aumento de la permeabilidad vascular y edema. PGH
2
tambin puede
convertirse en PGI
2
mediante la accin de la prostaglandina I
2
sintasa, principalmente
en las clulas endoteliales, o en TXA
2
por la accin de la tromboxano A
2
sintasa, prin-
cipalmente en las plaquetas, y el cido acetilsaliclico a bajas dosis inhibe su sntesis
especficamente. PGI
2
y TXA
2
son molculas inestables, de vida corta, con propieda-
des biolgicas importantes en la inflamacin y la coagulacin sangunea. PGI
2
se pro-
duce en las paredes de los vasos sanguneos y es un potente vasodilatador e inhibidor
de la agregacin plaquetaria. Los tromboxanos son vasoconstrictores importantes y
agregadores plaquetarios potentes. Aunque utilicen la misma ruta (COX), las prostaci-
clinas y los tromboxanos son antagnicos. El sistema equilibra su sntesis segn las
necesidades de cada actividad. Cada tipo celular produce slo un tipo de prostanoide
[128]. A una concentracin tan pequea como 1 ng/mL las prostaglandinas causan
contraccin de los msculos lisos en los animales. Los usos teraputicos potenciales
incluyen la prevencin de la concepcin, la finalizacin de la gestacin, la prevencin
o el alivio de las lceras gstricas, el control de la inflamacin y de la presin arterial,
Figura 7. Conversin de cido araquidnico en prostaglandinas y tromboxanos de la serie 2.
Ambas actividades protagonistas pueden atribuirse a una enzima, la prostaglandina H sintasa.
En las prostaglandinas y tromboxano de las series 1 y 3 se producen conversiones similares.
HHT, hidroxiheptadecatrienoato; PG, prostaglandina; PGI, prostaciclina; Tx, tromboxano.
(Adaptado de Mayes PA. Metabolism of unsaturated fatty acids and eicosanoids. In: Murray
RK, Granner DK, Mayes PA, et al, editors. Harpers biochemistry. 25th edition. Appleton and
Lange; 2000. p. 250; con autorizacin.)
Araquidonato
CICLOOXIGENASA
cido acetilsaliclico
Indometacina
Ibuprofeno
PROSTACICLINA
SINTASA
PEROXIDASA
Malondialdehdo + HHT
TROMBOXANO
SINTASA
ISOMERASA
Imidazol
6-ceto PGF
REDUCTASA
ISOMERASA
69
y el alivio del asma y la congestin nasal. Las prostaglandinas aumentan la formacin
de AMPc en las plaquetas, las glndula tiroidea, el cuerpo lteo, los huesos fetales, la
adenohipfisis y el pulmn, pero disminuyen la sntesis de AMPc en las clulas tubu-
lares renales y el tejido adiposo [128]. Las prostaglandinas tienen muchas otras funcio-
nes; incluso median la movilidad del esperma en las aves y en los mamferos. Los
investigadores han observado que las prostaglandinas estn presentes en el plasma
seminal y en el esperma de los pavos, y que los inhibidores de COX disminuyen la
movilidad del esperma en los pavos [132]. Aunque una descripcin detallada de las
funciones de las prostaglandinas sobrepasara el mbito de este artculo.
La formacin de prostaglandinas desactivadas se consigue parcialmente por una
propiedad destacable de la COX: la destruccin autocataltica; es decir, COX es
una enzima suicida. La inactivacin de las prostaglandinas, una vez formadas,
es pida. Probablemente la causa principal sea la presencia de la enzima 15-hidroxi-
prostaglandina deshidrogenasa en la mayora de los tejidos de los mamferos [128]. En
este mecanismo participan dos enzimas COX: COX1 y COX2, que tambin se conocen
como PGHS-1 y PGHS-2. COX1 es responsable de fomentar la produccin de los
metabolitos del AA constitutivos para satisfacer las necesidades diarias de las clulas,
que incluyen la necesidad de prostaglandinas para ayudar a regular el flujo sanguneo
en los tejidos produciendo variaciones fisiolgicas normales, moderadas, de la vasodi-
latacin, para la estimulacin normal de las clulas de la mucosa gstrica para producir
moco y otras funciones. COX1 es una enzima que debe estar disponible y ser funcional
para las actividades domsticas diarias [1]. La transcripcin de COX2 est regulada
por NFB y est presente en circunstancias inusuales, como durante la inflamacin.
Tpicamente, MAPK estimula el gen COX2 y la expresin de la protena, y libera
prostaglandina, pero tiene poco efecto sobre COX1 [133].
Algunas clulas del organismo (p. ej., las clulas de Kupffer del hgado) normal-
mente tienen una cantidad pequea de COX2, que permite la generacin de cantidades
mayores de prostaglandinas y de tromboxano de las que normalmente se produciran
en un tejido en particular, y por tanto contribuye al proceso inflamatorio [1]. Se sabe
que los AINE habituales, incluyendo cido acetilsaliclico, ibuprofeno, fenilbutazona,
flunixina y otros, inhiben COX1 slo, o tanto COX1 como COX2, a niveles variables.
El cido acetilsaliclico, un AINE, inhibe tanto PGHS-1 (COX1) como PGHS-2
(COX2) mediante acetilacin (v. figura 8) [128,134].
La mayora de los dems AINE, como indometacina e ibuprofeno, inhiben COX
compitiendo con el araquidonato. Los corticoesteroides antiinflamatorios inhiben com-
pletamente la transcripcin de PGHS-2 (COX2), pero no la de PGHS-1 (COX1) [128].
Generalmente, estos frmacos mejoran algunos de los efectos adversos de la inflamacin,
pero su actividad conlleva un riesgo de que se produzcan lceras gstricas y otros efectos
secundarios indeseables. Los AINE ms nuevos COX2-selectivos pueden controlar en
parte esta ruta de la inflamacin, conservando algunas o todas las actividades domsticas
de COX2, y por tanto evitando los efectos secundarios clsicos, como las lceras [1].
Los glucocorticoesteroides tambin son inhibidores poderosos de la inflamacin.
Inhiben las enzimas PLA
2
y tambin inhiben la expresin o actividad de la enzima
COX2. Los corticoesteroides inhiben las enzimas PLA
2
induciendo lipocortina, una
protena inhibidora de las enzimas PLA
2
. Estos efectos dependen de la dosis. Los cor-
ticoesteroides suprimen tanto COX1 (que no est disponible para el AA) como COX2
VAJDOVICH
70
(que est inhibido). Tambin suprimen la transcripcin de algunos genes de citocinas
proinflamatorias, y por tanto suprimen las concentraciones de algunas citocinas as
como de NO sintasa inducible (iNOS). Los corticoesteroides tambin inhiben la fun-
cin de algunas clulas del sistema inmunitario; por ejemplo, son linfolticos e inhiben
la emigracin de los eosinfilos desde la mdula sea. Los corticoesteroides, como los
AINE, pueden causar efectos secundarios si se utilizan durante perodos prolongados
[1]. Las enzimas COX son esenciales en algunos trastornos neoplsicos, as como en
los trastornos inflamatorios. La isoforma inducible de la enzima, COX2, se sobreex-
presa en algunas lesiones malignas y premalignas. En los estudios se ha observado que
la inhibicin de COX2 es una estrategia eficaz para la quimioprevencin. Los AINE
como celecoxib son inhibidores de COX2 muy conocidos. Se ha descubierto que los
trisulfuros trialil liposolubles inhiben la expresin del gen COX2 y son eficaces contra
los tumores caninos y humanos [135].
Regulacin de la ruta de la ciclooxigenasa por radicales libres y antioxidantes. Existen
varios factores de transcripcin y molculas de sealizacin que activan los genes COX.
Las funciones de algunos de ellos dependen de los radicales libres y los antioxidantes.
Los ejemplos siguientes muestran que las molculas con propiedades antioxidantes, ade-
ms de otros factores, pueden influir en la expresin de los genes COX.
La pirrolidina ditiocarbamato (PDTC) es un antioxidante. Los investigadores han
demostrado que el factor de transcripcin NFB es un regulador clave de la expresin
de COX2 en la produccin de PGE
2
inducida por TNF, que est mediado por una ruta
tirosina cinasa. Si est regulado, NFB forma complejos con COX2 que codifican
Figura 8. El cido acetilsaliclico inactiva la ciclooxigenasa por acetilacin de una serina,
probablemente en o cerca del sitio activo. (Tomado de Zubay GL, Parson WW, Vance DE.
Principles of biochemistry. Part 5. Metabolism of lipids. Dubuque (IA): Wm C. Brown Commu-
nications, Inc.; 1995. p. 454; con autorizacin.)
(Serina)
(Serina)
Ciclooxigenasa
(Activa)
Ciclooxigenasa
(Inactiva)
cido saliclico
cido acetilsaliclico
71
ADN. El complejo COX2-NFB ADN-protena desaparece tras el tratamiento con
PDTC o herbimicina A (un inhibidor de tirosina cinasa). PDTC y herbimicina A ate-
nan la liberacin de PGE
2
estimulada por TNF- [136].
GSH intracelular modula la expresin del gen COX2 estimulada por LPS y la snte-
sis de prostaglandinas en las clulas mediante la activacin temprana de MAPK
[133].
Las fracciones celulares pequeas de las clulas aisladas de la mucosa gstrica
canina son productores principales de la PGE
2
, y los macrfagos son el origen celular
predominante. Las fracciones celulares principales y parietales producen muy poca
PGE
2
. La actividad de PGHS depende de la presencia continua de hidroperoxidasas.
Se ha demostrado que H
2
O
2
estimula la produccin de PGE
2
dependiente de la concen-
tracin [137].
GSH-Px dependiente de selenio, modulando las concentraciones celulares de cidos
grasos hidroperoxidasas, puede influir en las enzimas clave de la cascada AA/ruta
COX. Se ha sugerido que la ruta COX modulada es responsable de la disfuncin vas-
cular en la deficiencia de selenio, probablemente debido a la disminucin de la activi-
dad de GSH-Px dependiente de selenio [138].
Los radicales de oxgeno producidos por el sistema hipoxantina-XO producen una
constriccin potente de la circulacin pulmonar en el cerdo. Se cree que D-penicilami-
na es un limpiador de radicales libres. D- penicilamina inhibi el aumento de la con-
centracin plasmtica de tromboxano B
2
(TXB
2
), 6-ceto-PGF
1
, cisteinil leucotrienos
inducida por XO [139].
Ruta de la lipooxigenasa
La va alternativa de la cascada del AA es la ruta de la LOX. En este proceso participan
varias enzimas LOX (p. ej., 5-LOX, 12-LOX y 15-LOX) que producen lipoxinas. Exis-
ten tres LOX diferentes (dioxigenasas) que insertan oxgeno en las posiciones 5, 12 y
15 del AA, respectivamente, dando lugar a la forma hidroperoxidada del cido hidro-
peroxieicosatetraenoico (HPETE). El primer paso del metabolismo del AA por esta
ruta implica la activacin de la enzima 5-LOX (una enzima de 78 kd dependiente del
ATP y del Ca
2+
) por la protena activadora de 5-LOX, lo que produce la sntesis de
5-cido hidroperoxieicosatetraenoico (5-HPETE), que es el precursor de leucotrienos
potentes [1].
5-LOX, una vez activada, se transloca desde el citosol al compartimento de la mem-
brana nuclear o plasmtica [131]. Los leucotrienos se denominan as debido a la estructu-
ra de la cadena trieno y porque se aislaron por primera vez en los leucocitos, pero tambin
se sintetizan en las clulas del mastocitoma y las plaquetas. Los leucotrienos se producen
en respuesta a estmulos inmunolgicos y no inmunolgicos (v. figura 9) [128].
Un metabolito que deriva de 5-HPETE es 5-HETE, que es quimiotctico para los
leucocitos, pero la mayora de los 5-HPETE generalmente se convierten en el leuco-
trieno intermedio LTA
4
, que despus se metaboliza para dar origen al resto de los leu-
cotrienos. LTB
4
es un mediador inflamatorio potente e induce la quimiotaxis de los
leucocitos (especialmente los neutrfilos), la agregacin, el aumento de la adherencia,
la liberacin de enzimas lisosomales y la produccin de O
2
. Alternativamente, LTA
4

puede procesarse para producir LTC
4
, que despus se convierte en LTD
4
y LTE
4
[1].
LTC
4
se forma mediante la adicin del pptido GSH a travs de un enlace tioter. La
VAJDOVICH
72
siguiente eliminacin de glutamato y glicina produce LTD
4
y LTE
4
, secuencialmente
[128]. Al final de esta ruta se forma LTF
4
, un producto de la degradacin inactivo. La
combinacin de LTC
4
, LTD
4
y LTE
4
es responsable de la actividad biolgica, y antes
se conoca como la sustancia de reaccin lenta de la anafilaxia. A concentracin
suficiente, estos leucotrienos pueden producir una vasoconstriccin intensa. Junto con
LTB
4
son ms potentes que la histamina aumentando la permeabilidad vascular y atra-
yendo a los leucocitos, y parece que son reguladores importantes en muchas enferme-
dades que implican reacciones inflamatorias o de hipersensibilidad inmediata, como el
asma. Es ms, son de 100 a 1000 veces ms potentes que la histamina o las prostaglan-
Figura 9. Conversin del cido araquidnico en leucotrienos y lipoxinas de la serie 4 a travs
de la ruta de la lipooxigenasa. Los nmeros rodeados con un crculo indican 1, peroxidasa; 2,
leucotrieno A
4
epxido hidrolasa; 3, glutatin S transferrasa; 4, -glutamiltranspeptidasa; 5,
cisteinil-glicina dipeptidasa. En las series 3 y 5 de los leucotrienos se producen conversiones
similares. HETE, hidroxieicosatetraenoato; HPETE, cido hidroperoxieicosatetraenoico. (Tomado
de Mayes PA. Metabolism of unsaturated fatty acids and eicosanoids. In: Murray RK, Granner
DK, Mayes PA, et al, editors. Harpers biochemistry. 25th edition. Appleton and Lange; 2000.
p. 250; con autorizacin.)
12-LIPOOXIGENASA
5-LIPOOXIGENASA
5-LIPOOXIGENASA
15-LIPOOXIGENASA
15-LIPOOXIGENASA
Araquidonato
Leucotrieno B
4 Leucotrieno A
4
Lipoxinas, p. ej. LXA
4
Glutatin
Leucotrieno C
4
Leucotrieno D
4a Leucotrieno E
4
cido glutmico
Cistena Cistena Cistena
Glicina Glicina
Glicina
cido glutmico
73
dinas contrayendo la musculatura de las vas respiratorias bronquiales. Los leucotrie-
nos son vasoactivos, y se ha encontrado 5-LOX en las paredes arteriales [128]. Los
leucotrienos son objetivos de los frmacos antiinflamatorios. La mayora de los tipos
celulares que predominan crean uno o slo algunos de los productos de la ruta del AA,
y su actividad depende de qu enzimas o sintasas activas tenga un tipo en especial de
clula y de que puedan activarse [1].
LTB
4
y, en menor medida, otros productos de la LOX son capaces de inducir la
agregacin y la degranulacin de los neutrfilos, y la secrecin de grnulos azurfilos
en los leucocitos PMN humanos est mediada en gran medida por un efecto autocrino
de LTB
4
. En algunos estudios, aunque no en todos, se ha observado que se producen
ERO debido al desafo de LTB
4
, lo que indica que los metabolitos de la LOX son malos
activadores del mecanismo de explosin respiratoria. En los neutrfilos humanos se
observ un aumento del efecto de LTB
4
a travs del metabolismo oxidativo estimulado
por pptidos quimiotcticos. Se ha observado que LTB
4
es un potente activador de
PPAR-, un factor de transcripcin que desempea un papel fundamental en la homeos-
tasis lipdica mediante la regulacin de la degradacin oxidativa de los cidos grasos y
sus derivados, como el propio LTB
4
. Esta observacin dio lugar a la hiptesis de que
la activacin de su propio metabolismo a travs de omega-oxidacin puede actuar
como una retroalimentacin negativa, ayudando a limitar el efecto proinflamatorio de
LTB
4
. Esta hiptesis tambin proporciona nuevas bases para la interpretacin de los
efectos beneficiosos de la manipulacin diettica de los lpidos en las patologas aso-
ciadas a la sntesis de mediadores inflamatorios lipdicos [140].
In vitro, la flunixina y el inhibidor de 5-LOX cido nordihidroguaiartico (NDGA)
fueron los inhibidores ms potentes de la migracin dirigida por LTB
4
de los neutrfilos
caninos. La fenilbutazona inhibi la migracin en menor medida, y la indometacina no
lleg al 50% de inhibicin. Ex vivo, la flunixina casi inhibi completamente la respuesta de
LTB
4
en una hora, y segua teniendo una actividad inhibidora significativa 24 horas despus
de administrar una dosis intravenosa de 1 mg/kg. La fenilbutazona fue menos activa ex vivo,
pero suprimi la quimiotaxis una hora despus de la administracin de una dosis intrave-
nosa de 20 mg/kg. Se ha sugerido que parte de la accin antiinflamatoria de la flunixina en
los perros puede atribuirse a la inhibicin del reclutamiento de neutrfilos [141].
Las lipoxinas son una familia de tetraenos conjugados que tambin se originan en
los leucocitos. Estn formados por la accin combinada de ms de una LOX, introdu-
ciendo ms oxgeno en la molcula. Se han formado varias lipoxinas (LXA
4
a LXE
4
)
de forma similar a la que se ha descrito para los leucotrienos [128].
Regulacin de la ruta de la lipooxigenasa por radicales libres y antioxidantes. Como
en la ruta de la COX, varios factores de transcripcin y molculas de sealizacin
activan los genes LOX. Entre estos agentes reguladores se encuentran los radicales
libres y los antioxidantes. A continuacin se ofrecen algunos ejemplos que demuestran
que las molculas con propiedades antioxidantes, adems de otros factores, pueden
influir en la expresin del gen LOX.
Se ha sugerido que los eicosanoides desempean una funcin dual regulando la
supervivencia y la apoptosis celular en varios tipos de clulas, probablemente de forma
independiente del estrs oxidativo. NDGA, un inhibidor de LOX, produjo apoptosis en
lneas celulares, mientras que el cido acetilsaliclico, un inhibidor de COX, no tuvo
VAJDOVICH
74
efecto. Se descubri que la caspasa (la cinasa dependiente de ciclina que regula la
apoptosis) y los metabolitos poli (ADP-ribosa) participaban en la ruta de transduccin
de la seal de la apoptosis inducida por NDGA en las clulas, pero NDGA no afectaba
a la apoptosis inducida por H
2
O
2
[142].
El antioxidante GSH-Px tiene un efecto inhibidor sobre la produccin de la mayora
de los mediadores de la ruta del AA. GSH-Px dependiente de selenio acta modulando
los niveles celulares de cidos grasos hidroperoxidasas y puede influir en enzimas
fundamentales de la cascada del AA, las rutas COX y LOX. Aunque se observ que la
oxidacin enzimtica del AA era relativamente inferior en la ruta LOX que en la ruta
COX, en los cultivos deficientes de selenio se produjo significativamente ms 15-HPE-
TE que en las clulas a las que se les haba administrado suplementos de selenio [138].
El ebselen es un componente seleno-orgnico que ejerce una actividad de tipo GSH-Px
e inhibe la actividad LOX del AA [143].
Se dise molecularmente y se sintetiz una serie nueva de derivados (3-piridilme-
til) benzoquinona con el propsito doble de inhibir TXA
2
y las enzimas de la biosnte-
sis de leucotrienos. Se demostr que adems actuaban eliminando las especies reacti-
vas de oxgeno [144].
La D-penicilamina inhibe la sntesis tanto de los productos de LOX como de COX,
probablemente por su accin como limpiador de radicales de oxgeno [139].
La vitamina E tiene una funcin importante en el sistema antioxidante del cerebro,
pero su concentracin es variable en zonas diferentes, como se observ tanto en espe-
cies de mamferos (ratas) como de aves (pollos) [145,146]. Por tanto, los signos clni-
cos causados por esta deficiencia son especficos del sitio.
Se ha sugerido que el cerebelo tiene menos proteccin antioxidante que el cerebro,
y que la actividad superior de PLA
2
y la mayor propensin a oxigenar el AA a travs
de la ruta LOX a expensas de la ruta PGHS puede hacer que esta regin del cerebro sea
especialmente vulnerable a la lesin oxidativa en la encefalomalacia nutricional. Se
compararon las actividades de PGHS y LOX en el cerebelo y en el cerebro de pollitos
con suficiente vitamina E y en pollitos en los que se provoc encefalomalacia nutricio-
nal mediante una dieta deficiente en vitamina E. La produccin de prostaglandinas fue
del 50 al 60% inferior en el cerebelo de los pollitos atxicos que en el cerebelo de los
pollitos de control, mientras que en la ruta LOX cerebelar se observ la tendencia
opuesta, utilizando radioinmunoanlisis de 15-HETE [147].
Factores nutricionales que influyen en la produccin de metabolitos del cido
araquidnico
Algunos alimentos contienen AA, y muchos alimentos (p. ej., aceite de girasol, aceite de
maz) contienen cidos grasos comunes, como el cido linoleico (cido graso -6), que
producen AA en el metabolismo. Este AA puede incorporarse a los fosfolpidos de la
membrana celular para utilizarse ms adelante en la cascada del AA. Por el contrario,
otros alimentos (aceite de camo, aceite de semillas de lino y hortalizas de hojas verdes)
contienen cido -linoleico (cido graso -3), y este cido graso se metaboliza a cido
eicosapentaenoico (EPA), que se encuentra en el aceite de pescado procedente de peces
marinos y que se metaboliza para formar cido docosahexaenoico (DHA). Cuando en la
dieta hay cantidades suficientes de EPA y DHA, se incorporan a los fosfolpidos de
la membrana celular, desplazando parte del AA. Cuando la cascada del AA est activada,
75
EPA y DHA compiten con el AA para entrar en la cascada; es decir, compiten por los
sitios de unin de las enzimas COX y 5-LOX. Como resultado, se metaboliza menos AA
y se producen menos prostaglandinas proinflamatorias y leucotrienos. Los distintos pro-
ductos del metabolismo de EPA y DHA no son tan activos biolgicamente, y por tanto
disminuye el mecanismo inflamatorio relacionado con AA (v. figura 10) [1,148].
Los cambios de la ingestin diettica de cidos grasos esenciales, adems de modifi-
car los procesos inflamatorios, tambin modifican la homeostasis y muchos otros meca-
nismos. En los esquimales de Groenlandia se ha observado una incidencia baja de car-
diopatas, disminucin de la agregacin plaquetaria y tiempos de coagulacin
prolongados, lo que se ha atribuido a su alta ingestin de aceite de pescado que contiene
20:5 3 (EPA), que da lugar a series de prostaglandina 3 (PG
3
) y tromboxano (TX
3
). PG
3

y TX
3
inhiben la liberacin de araquidonato desde los fosfolpidos y la formacin de
PG
2
y TX
2
. PG
3
es un antiagregador plaquetario tan potente como PGI
2
, pero TXA
3
es
un agregador ms dbil que TXA
2
; as el equilibrio de la actividad se desplaza hacia la
no agregacin. Adems, las concentraciones plasmticas de colesterol, triacilglicerol y
lipoprotenas de baja densidad y de muy baja densidad tambin son bajas en los esqui-
males, mientras que las concentraciones de lipoprotenas de alta densidad son altas (todos
estos factores actan contra la aterosclerosis y el infarto de miocardio) [128].
Factores nutricionales de los metabolitos del cido araquidnico y dermatitis atpica
canina. Los estudios clnicos ms recientes han proporcionado pruebas de que los
suplementos de cidos grasos -3 solo o combinado con cido gamma-linoleico, que
es un producto metablico de la familia de los cidos grasos -6, son beneficiosos
clnicamente para el tratamiento de las dermatitis alrgicas caninas. El mecanismo de
accin de estos beneficios clnicos todava no est claro, porque en ninguno de los
estudios se ha demostrado que exista una relacin entre los cambios de los cidos
grasos cutneos o plasmticos, o las concentraciones de eicosanoides, y la mejora
clnica. Debido a que los rangos de dosificacin son amplios, no puede determinarse
la importancia de las concentraciones totales de cidos grasos -3 u -6, la concentra-
cin de cidos grasos individuales y la proporcin optima entre -6 y -3. Los estudios
in vitro con mastocitos proporcionan otra forma de examinar los efectos de los cidos
grasos poliinsaturados en las dermatitis atpicas caninas. Al aadir varios cidos gra-
sos -3 se produjo una disminucin significativa de los mediadores inflamatorios pro-
ducidos por los mastocitos cultivados (v. figura 11) [148].
Factores nutricionales de los metabolitos del cido araquidnico y la produccin de
radicales libres. Tanto los procesos inflamatorios como la formacin de radicales
libres de oxgeno y/o nitrgeno disminuyen cuando se administran suplementos de
cidos grasos -3 derivados del aceite de pescado. Por tanto, los suplementos dietti-
cos de cidos grasos -3 podran proteger los tejidos de las lesiones provocadas por los
radicales libres de oxgeno en varias enfermedades en las que estn alterados los meca-
nismos de defensa oxidantes/antioxidantes. Se ha demostrado que los suplementos de
cidos grasos -3 ayudan a prevenir la POL y a proteger a los eritrocitos de las lesiones
oxidativas en las ratas macho albinas Wistar despus de administrar suplementos de
aceite de pescado en la dieta (0,4 g/kg/da) durante 30 das [149]. El proceso inflama-
torio puede determinarse por la produccin de radicales libres en las clulas que estn
VAJDOVICH
76
Figura 10. Metabolismo de los cidos grasos omega-3 y omega-6. (Tomado de Logas D. Are
fatty acids effective in canine atopic dermatitis: an evidence-based medicine update. In: Procee-
dings of the 2006 Hills Symposium on Dermatology. Supported by an educational grant from Hills
Pet Nutrition, Inc., Topeka (KN): Educational Concepts, LLC; 2006. p. 18; con autorizacin.)
cidos grasos omega 6 Enzimas cidos grasos omega 3
Linoleico 18:2
6-desaturasa
Alfa linolnico (ALA) 18:3
Gamma linolnico (GLA) 18:3
Elongasa
Octadecatetraenoico 18:4
Dihomogamma-linolnico
(DGLA)
20:3
5-desaturasa
Eicosatetraenoico 20:4
Araquidnico (AA) 20:4
Elongasa
Eicosapentaenoico (EPA) 20:5
Adrnico 22:4
Elongasa
Docasapentaenoico 22:5
Tetracosatetraenoico 24:4
4-desaturasa
Tetracosapentaenoico 24:5
Tretacospentaenoico 24:5
-oxidacin
Tetrahexaenoico 24:6
Docosapentaenoico 22:5 Docosahexaenoico (DHA) 22:6
Aceite de girasol
Aceite de maz
Aceite de crtamo
Aceite de camo
Aceite de semillas del lino
Hortalizas verdes
OMEGA 6 OMEGA 3
cido linoleico (LA) cido alfa-linolnico (ALA) 18:2 18:3
18:3 18:4
20:3 20:4
20:4 20:5
22:4 22:5 24:5 24:4
24:5 24:6
22:5 22:6
-6-desaturasa
Elongasa
-5-desaturasa
Elongasa
-4-desaturasa
cido gamma-linolnco (GLA)
Aceite de primavera nocturna
Aceite de borraja
Aceite de grosellas negras
cido dihomogamma linolnico
(DGLA)
cido araquidnico (AA) cido eicosapentaenoico (EPA)
Aceite de pescado marino
cido docosahexaenoico (DHA)
77
realizando la fagocitosis. La produccin de O
2
en los macrfagos y/o monocitos
humanos estimulados y la quimioluminiscencia de los monocitos, dos indicadores de
la actividad inflamatoria de los monocitos, se redujeron significativamente tras la
ingestin de 6 g de cidos grasos -3 al da durante 6 semanas [150]. Las concentra-
ciones elevadas de DHA etil ster redujeron la formacin de O
2
inducida por PMA sin
afectar a la actividad celular de la protena cinasa C [151]. La sntesis de NO es un
factor importante en los procesos nocivos de los radicales libres. Los derivados del
aceite de pescado tambin suprimen el NO. Se observ supresin de la produccin de
NO con los cidos grasos -3, DHA, EPA y cido alfa-linoleico de forma dependiente
de la dosis. En contraste, se observ inhibicin de NO con cidos grasos libres poliin-
saturados -6 (cido linoleico), cidos grasos libres poliinsaturados -9 (cido oleico)
y un cido graso saturado (cido esterico) [152]. Con los cidos grasos -3, la pro-
duccin de O
2
catalizada por la NADPH oxidasa en los neutrfilos se redujo cuando
se comparaba con el efecto del AA (un cido graso -6). Los efectos son ms pronun-
ciados cuando aumenta la longitud de la cadena de carbono y el nmero de dobles
enlaces [153]. Una duda importante es si la disminucin de la funcin de las clulas
inflamatorias har que disminuyan los efectos bactericidas. Se ha demostrado que la
alimentacin entrica a corto plazo con una dieta enriquecida en EPA o enriquecida en
EPA y cido -linolnico regula rpidamente la composicin de cidos grasos de los
fosfolpidos de los macrfagos alveolares y fomenta un cambio hacia la formacin de
menos eicosanoides inflamatorios por los macrfagos estimulados, pero no altera la
Figura 11. Ecosanoides omega-3 y omega-6. (Tomado de Logas D. Are fatty acids effective in
canine atopic dermatitis: an evidence-based medicine update. In: Proceedings of the 2006 Hills
Symposium on Dermatology. Supported by an educational grant from Hills Pet Nutrition, Inc.,
Topeka (KN): Educational Concepts, LLC; 2006. p. 19; con autorizacin.)
-6-desaturasa -6-desaturasa
Elongasa Elongasa
Elongasa
-5-desaturasa -5-desaturasa
-4-desaturasa
Ciclooxigenasa
Ciclooxigenasa Ciclooxigenasa Lipooxigenasa Lipooxigenasa
cido
docasahexaenoico
(DHA)
FAMILIA OMEGA-6 FAMILIA OMEGA-3
cido linoleico cido alfa linoleico
cido gamma-linolnico (GLA)
cido araquidnico cido eicosapentaenoico (EPA)
cido dihomogamma-linolnico (DGLA)
Prostaglandinas
y tromboxanos
(serie 1)
Leucotrienos
y lipoxinas
(serie 4)
Leucotrienos
y lipoxinas
(serie 4)
Prostaglandinas
y tromboxanos
(serie 2)
Prostaglandinas
y tromboxanos
(serie 3)
VAJDOVICH
78
funcin bactericida de los macrfagos alveolares con respecto a las respuestas obser-
vadas tras la alimentacin con una dieta que contenga cido linoleico [154].
Estos conocimientos sobre los suplementos de cidos grasos y -3 tienen implica-
ciones prcticas. Estos cidos grasos pueden mejorar la funcin de produccin de leu-
cotrienos de los granulocitos neutrfilos. Los niveles basales de los cidos grasos libres
en el plasma se elevaron varias veces, incluyendo altas concentraciones de AA precursor
de lpidos -6. Los neutrfilos aislados en pacientes con sepsis mostraron una sensibi-
lidad notablemente reducida a la estimulacin ex vivo, incluyendo la generacin de
mediadores lipdicos (p. ej., leucotrienos y PAF), la explosin respiratoria y la sealiza-
cin de la hidrlisis de fosfoinositida. Bajo un rgimen de infusin de lpidos -6, las
anomalas de los cidos grasos libres en el plasma y el deterioro de las funciones de los
neutrfilos persistieron o empeoraron. En contraste, se produjo un cambio rpido de la
fraccin de los cidos grasos libres del plasma a una predominancia de los cidos -3
EPA y DHA sobre AA en respuesta de la infusin de lpidos -3. LTB
5
, adems de
LTB
4
, pareci estimular ms los neutrfilos originados en estos pacientes, y la funcin
de los neutrfilos mejor significativamente en el grupo de lpidos -3 [155].
La ruta alternativa del cido araquidnico
El metabolismo del AA libre se inicia no slo por la accin de la fosfolipasa A
2
, sino
tambin por el citocromo P450, que da lugar a la formacin de productos de la AA
epooxigenasa, productos de la AA N/N-1 hidroxilasa, productos tipo LOX y productos
de la oxidacin de radicales libres. Las rutas principales del metabolismo del AA cata-
lizadas por el citocromo P450 generan metabolitos que se subdividen en dos grupos:
1) los cidos epoxieicosatrienoicos formados por las citocromo P450 epooxigenasas y
2) los HETE que estn hidroxilados en o cerca del terminal N por las citocromo P450
N-oxidasas [156]. Adems, la autooxidacin del AA por las ERO derivadas del cito-
cromo P450 produce hidroperoxidasas lipdicas como productos primarios de la oxi-
dacin [157]. Durante el ciclo del citocromo P450, se producen H
2
O
2
y O
2
por la
descomposicin de los complejos dioxgeno ferrosos (P450 oxigenado) o por la libe-
racin desde el intermediario peroxifrrico (P450 peroxi). El aumento de la produccin
de O
2
y H
2
O
2
, en presencia de hierro quelado, puede producir HO reactivo [158]. La
actividad del citocromo P450 exacerba las lesiones dependientes de PLA
2
y de AA,
principalmente mediante la produccin de radicales de oxgeno que fomentan la POL
o la produccin de metabolitos que alteran la homeostasis del Ca
2+
. Por el contrario,
en otras situaciones el metabolismo del AA por el citocromo P450 es protector, prin-
cipalmente porque disminuye las concentraciones de AA no esterificado y porque se
producen metabolitos que activan las rutas antiapoptsicas, como la fosfoinositido 3
cinasa/AKT y p42/p44 MAPK [131].
Rutas dependientes del factor de Hageman
El factor de Hageman (factor XII) de la cascada intrnseca de la coagulacin tambin
activa otras cascadas enzimticas como resultado de la actividad de la serina proteasa.
La activacin del factor XII causada por el contacto con el colgeno, las plaquetas
activadas o varias superficies cargadas negativamente (incluyendo el cristal) da lugar
a: 1) la coagulacin de la sangre, 2) la participacin del sistema fibrinoltico, 3) la
produccin de cininas y 4) la activacin de la cascada del complemento. Las dos lti-
79
mas son partes importantes de la respuesta inflamatoria. El factor de Hageman tambin
puede activarse, y estas cascadas pueden empezar a activarse por proteasas de los neu-
trfilos/leucocitos, que estn presentes en todos los procesos inflamatorios. En estas
cascadas se producen tanto plasmina como calicrena, que pueden retroalimentar el
sistema unindose a ms factor de Hageman o activndolo, proporcionando as un
mecanismo de activacin cclica [1].
Los radicales libres que producen los granulocitos neutrfilos pueden actuar como
anticoagulantes. Se descubri que algunos factores de la coagulacin sangunea y los
trombocitos son sensibles a los oxidantes no radicales de los fagocitos activados. A travs
de la generacin de
1
O
2
(oxgeno singlete), los leucocitos PMN pueden producir una
zona pericelular local de anticoagulacin. El
1
O
2
de sealizacin celular en cantidades
fisiolgicas es una sustancia antitrombtica, como se demostr por el hallazgo de que los
factores de la coagulacin plasmticos fibringeno, factor V, factor VIII y factor X res-
ponden a la oxidacin con una dosis eficaz del 50% de 2 a 3 mmol/l de hipoclorito
sdico o taurina-cloramina. Las cloraminas o las sustancias de tipo cloramina (p. ej., clo-
ramina T
R
o vancomicina) tambin inactivan la agregacin plaquetaria (en sangre com-
pleta o plasma rico en plaquetas) a una dosis eficaz del 50% de aproximadamente 1 mmol.
Esta oxidacin irreversible de los componentes de la homeostasis se inhibe aadiendo
metionina, cistena, cido ascrbico o acida antes de la oxidacin [159].
Sistema del complemento
El sistema del complemento es un sistema multicomponente. Se descubri a finales del
siglo XIX en el suero de los cobayas como un componente termolbil necesario para la
actividad bactericida. Los complementos son componentes de la accin de los anticuer-
pos en la destruccin de las bacterias. Los componentes del complemento tambin pue-
den activarse mediante rutas que no requieren anticuerpos, como en la ruta alternativa,
que se inicia por los componentes de la pared celular bacteriana [1]. El sistema del com-
plemento es una serie compleja de componentes proteicos que interactan, que se deno-
minan de C1 a C9 en la ruta clsica y como factores B, D, H, I y properdina (P) en la ruta
alternativa de la activacin y en varias molculas proteicas reguladoras. Las protenas del
complemento circulan como protenas solubles precursoras (cimgenos) que estn inac-
tivas o son poco activas. Los componentes del complemento activados son enzimas que
interactan secuencialmente de forma ordenada en la ruta clsica de la lisis celular diri-
gida por anticuerpos [1]. Diversas enzimas que tienen otro origen, como plasmina, cali-
crena y las enzimas lisosomales de los leucocitos, pueden activar algunos componentes
del complemento. Los objetivos principales de la mayora de las reacciones mediadas por
el complemento son las membranas biolgicas, y el resultado final es la perforacin de
la membrana que da lugar a la citlisis. Los subproductos de la cascada, como C5a y C3a,
pueden activar las funciones celulares que dan lugar a un aumento de la permeabilidad
vascular, contraccin del msculo liso, atraccin quimiotctica de los leucocitos, libera-
cin de mediadores de los mastocitos, adherencia inmunitaria, degranulacin y liberacin
de enzimas lisosomales de los neutrfilos, y aumento de la fagocitosis [1].
La ruta clsica
La ruta clsica se activa cuando los componentes del complemento se unen a los anti-
cuerpos; como consecuencia, si los anticuerpos no se unen, la ruta clsica no puede
VAJDOVICH
80
activarse. Los componentes que son factores conocidos de la ruta clsica se designan
como C1 a C9 [1].
La ruta alternativa
La ruta alternativa no utiliza o no necesita anticuerpos para activarse; puede hacerlo
entrando en contacto con productos microbianos, como endotoxinas. Los componentes
proteicos que interactan en la ruta alternativa del sistema del complemento se desig-
nan como factores B, D, H, I y properdina (P) [1].
Funciones del complemento en la inflamacin y la defensa del husped
Neutralizacin de virus. La neutralizacin de los virus por los anticuerpos puede mejo-
rarse, especialmente por C1 y C4, y a concentraciones bajas de anticuerpos, por la fija-
cin de C3b. El angioedema hereditario es una enfermedad humana mediada por un
fragmento de bajo peso molecular derivado de la descomposicin de C2 que tiene activi-
dad de tipo cinina (C-cinina). En ausencia del inhibidor de la glucoprotena plasmtica
controladora C1, tiene lugar la produccin incontrolada de la cinina C2, que es respon-
sable de los ataques episdicos de edema cutneo, respiratorio y gastrointestinal [1].
Adherencia inmunitaria. La adherencia inmunitaria es el fenmeno por el cual las clu-
las o partculas se unen a sitios receptores especficos en los neutrfilos, los monocitos,
los macrfagos y las plaquetas, aumentando as la fagocitosis (opsonizacin). Esta fun-
cin puede atribuirse a la unin de C3b a la superficie de las clulas o las partculas. La
unin de C3b a los linfocitos tambin puede facilitar la produccin de anticuerpos por
las clulas B y aumentar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos [1].
Produccin de anafilotoxinas. La produccin de anafilotoxinas se refiere a las acti-
vidades de los pptidos de la degradacin del complemento C3a y C5a. La C3 conver-
tasa junto con otras enzimas proteolticas que no son del complemento, como plasmi-
na, tripsina, enzimas lisosomales de los leucocitos y ciertas proteinasas bacterianas,
pueden liberar C3a por descomposicin de C3 nativo. Este fragmento es una anafilo-
toxina que puede aumentar la permeabilidad vascular y produce contraccin del
msculo liso y liberacin de mediadores, como histamina en los mastocitos. C5a pue-
de tener una actividad parecida. Las funciones biolgicas de C5a son parecidas a las de
C3a, aunque este ltimo es menos potente, y parece que cada pptido reacciona con
diferentes receptores de membrana. C5a puede fomentar la quimiotaxis y mediar la
liberacin de enzimas lisosomales de los leucocitos neutrfilos [1].
Sistema del complemento, radicales libres y antioxidantes. Se ha sugerido que el aumento
de radicales libres que tiene lugar cuando se activa el complemento se debe a la funcin de
las clulas fagocitarias. En los animales a los que se les inyect el factor del veneno de cobra
y se trataron con intervenciones protectoras contra la lesin pulmonar (deplecin de neu-
trfilos, CAT, descomposicin de HO o quelantes del hierro), se redujeron notablemente
las concentraciones plasmticas de dienos conjugados, hidroperoxidasas y productos fluo-
rocrmicos [160]. Esto indica que la actividad de C5a podra estar relacionada con los
productos de oxgeno procedentes de XO. Es ms, la produccin de C5a es sensible a CAT
dependiente de hierro. Los descubrimientos mencionados antes se sugirieron cuando los
81
complementos se activaban debido a una lesin local por quemadura en la piel y al conte-
nido del pptido quimiotctico relacionado con C5a, y se examin la relacin de los pro-
ductos de oxgeno con la aparicin de este pptido. Los inhibidores de XO, los limpiadores
de HO y la deplecin del complemento disminuyeron la actividad de C5a en el sitio de la
quemadura, mientras que la deplecin de los neutrfilos no tuvo efecto [161].
La activacin del complemento tambin es un factor importante en la isquemia-
reperfusin. Este proceso activa el complemento, y los OH
que se generan durante

la reperfusin pueden ser el mecanismo que activa el complemento en este modelo de
lesin. El pretratamiento con dimetiltiourea y deferoxamina previno la activacin del
complemento inducida por la reperfusin e inhibi la actividad quimiotctica del plas-
ma en los animales que sufran isquemia y reperfusin intestinales [162].
Respuestas especficas del sistema inmunitario
Los mecanismos principales de las respuestas inmunitarias especficas se salen del
mbito de este artculo. A continuacin se describen brevemente algunos puntos
del mecanismo de las respuestas inmunitarias especficas en los que podran participar
los radicales libres y los procesos antioxidantes.
En 1973, los investigadores demostraron que las respuestas inmunitarias humorales
aumentaban en los pollos tras la administracin de vitamina E [163]. Las reacciones alr-
gicas y de sensibilidad suelen mejorar tras la administracin de dosis masivas de ascorbato.
Existe la hiptesis de que la reduccin de los enlaces disulfuro entre las cadenas en las
molculas de anticuerpos es un mecanismo del bloqueo de los sntomas alrgicos, porque
hace que sea imposible que se unan al antgeno. Es ms, se crea que los anticuerpos inten-
tan complementarse con los antgenos slo en reas donde existen radicales libres perdidos
o un potencial redox relativamente oxidativo, y que los trastornos inflamatorios, de hiper-
sensibilidad y autoinmunitarios pueden producirse cuando los sistemas limpiadores de
radicales libres antioxidantes estn sobrecargados [164]. En un modelo con ratas de la
sinovitis se demostr que las alteraciones inespecficas de la IgG por los radicales libres
pueden causar lesiones ms graves que la IgG no alterada. Los investigadores observaron
que la presencia de IgG alterada por radicales libres convierte una lesin inflamatoria en
un estmulo ms persistente, y que un entorno sujeto a una estimulacin antignica conti-
nuada tiene la capacidad de inducir ms lesiones a IgG por los radicales libres [165]. Los
anticuerpos pueden inducir la formacin de radicales libres, como se demostr en un expe-
rimento en el que se comprob la capacidad del suero y del lquido cefalorraqudeo que
contenan anticuerpos antivirus del moquillo canino procedentes de perros con encefalitis
por moquillo, para generar ERO en los macrfagos en los cultivos de clulas cerebrales
primarias del perro utilizando un ensayo de quimioluminiscencia (CL). La conclusin de
que la secrecin de ERO inducida por anticuerpos antivricos, que se sabe que son muy
txicos para el tejido cerebral, puede desempear una importante funcin en las lesiones
inflamatorias de la materia blanca apoya una hiptesis anterior sobre la desmielinizacin
transitoria que se produce en la encefalitis causada por el moquillo canino [166].
Regulacin de los procesos inflamatorios por los radicales libres y los antioxidantes
Los procesos inflamatorios pueden activarse de varias formas, y los radicales libres son
factores importantes de esta activacin. Los radicales libres modulan la activacin de
los factores de transcripcin, como NFB y la protena 1 activadora, en varias clulas
VAJDOVICH
82
diferentes. Esta activacin da lugar a la expresin de muchas citocinas proinflamato-
rias, incluyendo IL-1. Los macrfagos son protectores fundamentales del pulmn y
desempean una funcin esencial regulando la respuesta inflamatoria. Para esta regu-
lacin es fundamental la activacin de la NADPH oxidasa. Mediante interacciones
mediadas por receptores, los estmulos extracelulares activan las rutas de sealizacin
para la fosforilacin y el ensamblaje de la NADPH oxidasa. Una vez que la NADPH
oxidasa est activada, produce O
2
y H
2
O
2
en un proceso conocido como explosin
respiratoria. Durante muchos aos se ha asumido que el O
2
y H
2
O
2
participaban en la
funcin antimicrobicida de los macrfagos; ahora ya est claro que el H
2
O
2
que se
produce en la explosin respiratoria acta como un segundo mensajero y activa las
rutas de sealizacin principales en los macrfagos alveolares [167].
Mensajeros de transduccin de la seal
Existen muchos factores que son responsables de la transduccin de la seal dentro de las
clulas, incluyendo los leucocitos. Aunque los conocimientos sobre el mecanismo de la
sealizacin redox todava son escasos, cada da est ms claro que las ERO producidas
por la explosin respiratoria tienen un gran efecto sobre las rutas de sealizacin intrace-
lulares y, en ltima instancia, sobre la modulacin de la expresin gentica [167]. Se han
descubierto familias de mensajeros de transduccin de la seal con mltiples miembros,
incluyendo las Jano cinasas, los transductores de la seal y activadores de la transcrip-
cin, y MAPK, entre otras [1]. NFB es un factor de transcripcin y desempea un papel
fundamental en la expresin de varios genes que participan en el proceso inflamatorio
[130]. Tanto los factores de transcripcin NFB como la protena 1 activadora se activan
por el H
2
O
2
producido por la explosin respiratoria. Puesto que estos factores de trans-
cripcin controlan la expresin inducible de los genes cuyos productos forman parte de
la respuesta inflamatoria, pueden ser un enlace crtico entre la explosin respiratoria y
otras respuestas inflamatorias. Las rutas de la c-Jun N-terminal cinasa (JNK) y ERK, dos
miembros de la familia MAPK, tambin se activan mediante la explosin respiratoria.
JNK se activa por el H
2
O
2
producido tanto exgena como endgenamente. Los estudios
sobre ERK han demostrado que los algunos agonistas especficos de la explosin respi-
ratoria, pero no los bolos de H
2
O
2
, pueden activar esta ruta. La ruta ERK tambin regula
la expresin de los genes mediante fosforilacin del factor de transcripcin Elk-1, que
controla la produccin del factor de transcripcin c-Fos [167].
Receptores activados por proliferador de peroxisomas
Un hallazgo reciente es la funcin de los PPAR. En biologa celular, los PPAR son un
grupo de isoformas de los receptores nucleares que existen de un lado a otro de la biologa.
Originalmente se identificaron en las ranas Xenopus laevis como receptores que inducen
la proliferacin de peroxisomas en las clulas, estn ntimamente conectados con los
carbohidratos celulares, los lpidos y el metabolismo de las protenas y con la diferencia-
cin celular. Son factores de transcripcin. El primer PPAR que se identific, PPAR-, fue
descubierto durante la investigacin de un objetivo molecular para un grupo de sustancias
que se denominaban proliferadores de peroxisoma porque aumentaban los peroxisomas
en los tejidos hepticos de los roedores, adems de aumentar la sensibilidad a la insulina.
Se han identificado tres tipos de PPAR: , y (). Los ligandos para los PPAR son
cidos grasos libres y eicosanoides. PPAR- se activa por la prostaglandina PGJ
2
. Por el
83
contrario, PPAR- se activa por LTB
4
. PPAR- puede desempear una funcin importan-
te en la regulacin de las respuestas inflamatoria e inmunitaria modulando la actividad de
los monocitos y de los macrfagos. Es ms, los ligandos de los PPAR son cidos grasos
libres e eicosanoides. Los investigadores han descubierto que el cido linoleico conjugado
trans-10-cis-12 (t10c12-CLA) aumenta la fagocitosis de las clulas PMN de la sangre
perifrica porcinas in vitro, y han sacado la conclusin de que t10c12-CLA tiene un efec-
to inmunoestimulante sobre la capacidad fagocitaria de los PMN porcinos, que est
mediada por el TNF- procedente de las clulas mononucleares de la sangre perifrica a
travs de una ruta dependiente de PPAR. Los PPAR se expresan en los macrfagos, clu-
las que tambin producen ERO mediante estimulacin de la actividad de NADPH oxida-
sa [168]. Pioglitazona, un ligando especfico de PPAR- , inhibe las lesiones de la
mucosa gstrica producidas por el cido acetilsaliclico en la ratas. El aumento de la zona
erosiva gstrica total, las sustancias reactivas al cido tiobarbitrico, la actividad MPO y
el valor mximo de la expresin de TNF- ARNm se inhibieron significativamente
mediante el tratamiento con pioglitazona [169]. Los ligandos de PPAR- endgenos redu-
cen el grado de inflamacin y el desarrollo de lesiones tisulares [170]. Rosiglitazona, el
agonista de PPAR derivado de tiazolidinediona, ejerce efectos antiinflamatorios potentes
(p. ej., inhibicin del edema de las garras, formacin de exudados pleurales, infiltracin
de clulas mononucleares y lesiones histolgicas) en la inflamacin aguda. Es ms, rosi-
glitazona redujo el aumento de la tincin (inmunohistoqumica) para nitrotirosina y poli
(ADP-ribosa) polimerasa y la expresin de iNOS, COX2, la molcula-1 de adherencia
intercelular y P-selectina en los pulmones de ratas [171]. En un estudio sobre la inflama-
cin crnica del colon en las ratas, la administracin de rosiglitazona mediante alimen-
tacin oral forzada tuvo efectos antiinflamatorios parecidos a los que se relacionan con el
deterioro de la funcin de los neutrfilos. Redujo el aumento de las concentraciones de
MPO y TNF-, y disminuy la expresin de NF-B p65. Adems, el tratamiento con
rosiglitazona aument la produccin de PGE
2
e hizo que PGD
2
recuperara las concentra-
ciones basales, redujo la expresin de COX2 y produjo un aumento significativo de la
apoptosis inducida por el cido trinitrobencenosulfnico (TNBS) [172].
Regulacin mediante antioxidantes
Los procesos inflamatorios hacen que disminuyan algunos antioxidantes tisulares, como
los carotenoides. Recientemente, se ha observado que durante la respuesta de la fase
aguda disminuyen los carotenoides tisulares cuando existe una enfermedad infecciosa
en los pollos. Los carotenoides del plasma, el hgado y la piel reducen los inconvenien-
tes de la enfermedad infecciosa [24] pero, al parecer, los mecanismos reguladores son
complicados, porque tambin se ha descubierto que la lutena, un dihidroxicarotenoide,
tiene un potencial antioxidante e inmunomodulador en los pollos [23].
Tambin se sabe que la vitamina E es un antioxidante con efectos inmunomodulado-
res, aunque no se conocen bien los mecanismos exactos, aunque es evidente que la vita-
mina E interviene en la induccin de algunos factores (p. ej., algunos factores de creci-
miento). La vitamina E disminuye la expresin constitutiva de TGF- tras la inyeccin
intravenosa de LPS. La aparicin de los linfocitos tambin est mediada por la vitamina
E, porque la proporcin CD4+/CD8+ fue significativamente inferior cuando se adminis-
traron suplementos de vitamina E que cuando no se administraron. Es ms, la vitamina
E de la dieta disminuye MGF ARNm de forma dependiente de la dosis [25].
VAJDOVICH
84
El xido ntrico en los procesos inflamatorios y mediados por radicales libres
El NO es una molcula pequea, sin carga, que slo contiene dos tomos, y es uno de
los mediadores conocidos ms pequeos. Se produce en varias clulas de los mamfe-
ros y tiene actividades multifuncionales y numerosas. NO tiene seis funciones impor-
tantes:
En el sistema cardiovascular, como un mediador fisiolgico potente del tono 1.
vascular, especficamente de la vasodilatacin, un determinante importante de la
resistencia vascular.
Como un efector de la defensa del husped frente a ciertos patgenos, mediante 2.
la formacin de peroxinitrito.
Como una molcula de sealizacin neurotransmisora en los sistemas nerviosos 3.
perifrico y central.
Como mediador en el sistema inflamatorio y en la vasorregulacin [52]. 4.
Como un reductor de la trombogenicidad del endotelio vascular [173]. 5.
Como modulador de los procesos inflamatorios, porque NO participa controlan- 6.
do el fenotipo de los macrfagos proinflamatorio frente a antiinflamatorio [52].
Sntesis y origen del xido ntrico
El substrato para la sntesis de NO es la L-arginina (L-Arg). En presencia de oxgeno,
se oxida un nitrgeno de L-Arg, y se forman NO y L-citrulina como subproductos.
La capacidad de cualquier clula para sintetizar NO depende de la presencia y acti-
vidad de las NOS. Las enzimas NOS producen NO catalizando una oxidacin de cin-
co electrones de un tomo de nitrgeno guanidino de L-Arg. La oxidacin de L-Arg
a L-citrulina se realiza a travs de dos reacciones de monooxigenacin sucesivas que
producen N-hidroxi-L-arginina como intermediario. Se consumen dos moles de O
2

y 1,5 moles de NADPH por cada mol de NO que se forma [174]. Adems de la
L-Arg, existen otras fuentes de NO (p. ej., TNBS). En los cobayas, la administracin
de TNBS derivado del NO produjo un aumento del grosor tisular, MPO, y lavado
de protenas y concentraciones de nitrito superiores a las de los controles artificiales.
La administracin oral de NG-nitro-L-arginina metil ster (L-NAME) evit estas
respuestas. NG-nitro-D-arginina metil ster slo tuvo efectos en los tejidos engrosa-
dos [175].
xido ntrico sintasa
NOS (EC 1.14.13.39) y sus cofactores (NADPH, flavina adenina dinucletido [FAD],
flavina mononucletido y tetrahidrobiopterina) son necesarios para catalizar la reac-
cin para producir NO [1]. El peso molcula de la enzima es de aproximadamente
300.000 d. Las enzimas NOS son las nicas conocidas que requieren a la vez cinco
cofactores de unin/grupos protsicos: FAD, flavina mononucletido, hemo, tetrahi-
drobiopterina y Ca
2+
-calmodulina. Existen tres isoformas distintas de la enzima NOS,
que se expresan y se regulan de forma diferente en varios tejidos y clulas, lo que
permite el control selectivo y la actividad dirigida al sitio del NO cuando se produce.
Las actividades de la isoenzima NOS estn reguladas por mecanismos transcripciona-
les, translacionales o postranslacionales que dependen de la isoforma en particular, y
las variaciones del mtodo de regulacin pueden influir en los procesos normales o
patolgicos. Las tres isoformas bsicas de las enzimas NOS tienen dos categoras fun-
cionales: formas constitutivas (cNOS) que estn presentes de forma continua en las
85
clulas, y formas iNOS, que se regulan de forma transcripcional y normalmente no
estn presentes en ausencia de inflamacin u otros estmulos [1]. NO acta como una
molcula de sealizacin autocrina o paracrina, y la enzima constitutiva lo sintetiza
cuando es necesario (es decir, est mediada por diferentes estmulos), en una actividad
de tipo domstico y fisiolgico. Las clulas que utilizan NO como sustancia de seali-
zacin para los procesos fisiolgicos normales incluyen las clulas endoteliales vascu-
lares (que utilizan la isoforma endotelial [eNOS] NOS3) y las neuronas (que utilizan
la isoforma neuronal [nNOS] NOS1). Muchos otros tipos de clulas tambin dependen
de la funcin constitutiva de NOS [1].
Tipos de xido ntrico
En los mamferos, existen tres genes diferentes que codifican las isoformas nNOS,
eNOS e iNOS (NOS2) [176].
xido ntrico sintasa neuronal. La NOS neuronal (NOS1) produce NO en el tejido
neuronal tanto en el sistema nervioso central como perifrico. Esta enzima tambin
desempea una funcin en la comunicacin celular y se asocia a las membranas plas-
mticas [176].
xido ntrico sintasa endotelial. La NOS endotelial (NOS3 o cNOS) produce NO en
los vasos sanguneos y participa en la regulacin vascular. Una cNOS dependiente de
Ca
2+
produce la liberacin basal de NO. Esta eNOS se asocia a las membranas plasm-
ticas que rodean las clulas y a las membranas de los cuerpos de Golgi dentro de las
clulas [176].
xido ntrico sintasa inducible. La NOS inducible (NOS2) puede encontrarse en el
sistema inmunitario, pero tambin se encuentra en el sistema cardiovascular. Permite
que los macrfagos utilicen el estrs oxidativo de NO (un radical libre) en la defensa
inmunitaria contra los patgenos [176].
Funciones bsicas del xido ntrico sintetizado por los diferentes tipos de xido
ntrico sintasa
La funcin del NO relacionada con las clulas endoteliales es importante tanto en los
procesos normales como patolgicos. Las clulas endoteliales estimuladas utilizan
NOS constitutiva para generar NO de forma dependiente del calcio; el NO se difunde
fuera de las clulas endoteliales, recorre una distancia corta (antes de inactivarse rpi-
damente) e induce la guanilil ciclasa soluble en las clulas del msculo liso de la pared
vascular. El resultado es la relajacin dependiente de protena cinasa del msculo
liso vascular y vasodilatacin. La sntesis excesiva de NO puede producir vasodilata-
cin masiva debido a hipotensin intensa. Esta alteracin puede producirse en la sepsis
o el shock sptico cuando eNOS se estimula demasiado en las clulas endoteliales, algo
que se conoce muy bien. Por otro lado, iNOS puede inducirse en las clulas endotelia-
les muy agitadas y en los monocitos y los macrfagos debido a las citocinas que se
producen en respuesta a las toxinas bacterianas. El resultado es que la vasculatura
perifrica se dilata mucho, se produce un compartimento perifrico de sangre y el
paciente sufre hipotensin [1].
VAJDOVICH
86
Regulacin de la sntesis de xido ntrico
En los vasos sanguneos sanos, el NO se produce a partir de L-Arg por la cNOS en las
clulas endoteliales. Adems, las lesiones vasculares o la inflamacin hacen que se
produzca NO en la mayora de los tipos de clulas vasculares, incluyendo las clulas
del msculo liso vascular. Esta respuesta a las lesiones est causada por la induccin
de iNOS por citocinas como IL-1 o TNF- [1]. Los factores derivados de la sangre
(trombina, plasmina) y de las clulas vasculares (factor de crecimiento derivado de
plaquetas, TGF- , factor de crecimiento de tipo insulina, factor de crecimiento epidr-
mico y factor de crecimiento fibroblstico bsico) regulan la induccin de la sntesis
de NO en las clulas del msculo liso vascular. La produccin endgena de NO por el
msculo liso vascular en los sitios donde existe una lesin puede contribuir al control
local del flujo sanguneo, el tono vascular y la fluidez de la sangre. Tambin puede
participar en la remodelacin de la pared de los vasos sanguneos lesionados [177].
Muchos tipos de clulas, incluyendo las clulas endoteliales, pueden expresar iNOS,
pero los macrfagos y los monocitos son los productores ms importantes en la mayo-
ra de las especies animales. Se produce induccin transcripcional de iNOS, y se sin-
tetiza NO tras la estimulacin de los macrfagos con combinaciones de toxinas bacte-
rianas, as como endotoxinas y varias citocinas como IFN-, y IL-1 y TNF-. Los
glucocorticoesteroides, TGF-, y IL-4, y IL-10 y ciclosporina A exgena pueden inhi-
bir la induccin transcripcional de iNOS [1]. En la modulacin de PPAR-, NO afecta
a la funcin de los macrfagos. Puesto que NO participa en el control del fenotipo
proinflamatorio frente a antiinflamatorio de los macrfagos, puede deducirse que NO
tiene una funcin importante en los procesos inflamatorios [52].
Participacin del xido ntrico en los radicales libres y los procesos antioxidantes
Sin embargo, adems de los sucesos vasculares, las concentraciones altas de NO inhi-
ben o destruyen muchos (pero no todos) patgenos, incluyendo bacterias (p. ej., Myco-
bacterium spp., S. aureus), hongos (p. ej., Cryptococcus neoformans), protozoos
(p. ej., eishmania major, Trypanosoma brucei, T. cruzi, y Plasmodium spp.) y meta-
zoos (p. ej., Schistosoma mansoni). Estos efectos se producen debido a la reaccin
entre el NO y el O
2
, que normalmente (y de forma conveniente) tiene lugar en el sitio

de la inflamacin, y que da lugar a la formacin de una molcula intermedia muy
reactiva, peroxinitrito, que se descompone an ms en otro intermediario reactivo de
nitrgeno. Estos son radicales libres. Los objetivos moleculares de NO son variados,
pero generalmente son protenas que contienen hierro y azufre. Los intermediarios
derivados de NO reactivos dan lugar a la formacin de complejos nitrosil-hierro-sulfu-
ro (p. ej., cis-aconitasa en el ciclo del cido tricarboxlico, protenas con hierro y sele-
nio en la cadena de transporte de electrones y ribonucletido reductasa). Como resul-
tado, pueden alterarse las rutas metablicas importantes del patgeno o de los propios
tejidos del organismo. NO y sus intermediarios reactivos tienen una vida corta y por
tanto slo pueden difundirse hasta una distancia corta antes de descomponerse. Los
grupos hemo tambin inactivan el NO, por lo que se inactiva siempre que entra en
contacto con la sangre. Esta inactivacin limita la deteccin del NO en los sistemas
biolgicos que contienen grupos hemo [1]. NO y sus intermediarios reactivos pueden
reaccionar con las protenas para formar S-nitrosotioles, que tienen semividas ms
largas que el NO y actan como un reservorio para la biodisponibilidad y bioactividad
87
del NO en el organismo. Se cree que los S-nitrosotioles son intermediarios clave en la
actividad de importantes nitrovasodilatadores, como la nitroglicerina y el nitroprusiato
sdico [1].
Efectos del xido ntrico en los trastornos patolgicos
Existen pruebas convincentes de que la produccin excesiva y prolongada de NO con-
tribuye a la lesin tisular en la septicemia, las lesiones por isquemia-reperfusin y otros
trastornos inflamatorios [173].
Los macrfagos utilizan la isoforma iNOS para mantener la sntesis de cantidades
relativamente grandes de NO durante un perodo de tiempo ms prolongado de lo que
sera posible con cNOS. Tras la induccin en los macrfagos, iNOS da lugar a la sn-
tesis de aproximadamente cien veces ms NO del que pueden sintetizar las isoformas
cNOS diminutas. La sntesis ms prolongada y sostenida de NO puede afectar a los
procesos inmunoinflamatorios, como la sepsis y la hipotensin [1].
Se ha descubierto que si se administra L-Arg con la nutricin parenteral total, el
exceso de NO (como un producto final del metabolismo de L-Arg) empeora el shock
(reduce la presin arterial media) y aumenta la mortalidad en los perros con peritonitis
por E. coli. Estos efectos se han asociado al aumento de arginina en el plasma, ornitina,
nitrato/nitrito en el suero, enzimas hepticas y proporciones de nitrgeno ureico/creati-
nina en sangre, mientras que el pH arterial y las concentraciones de bicarbonato descien-
den. La N-acetilcistena no disminuye ninguno de los efectos nocivos de L-Arg [178].
El NO afecta a los procesos metablicos, como las gluconeognesis. Los efectos del
NO sobre la gluconeognesis se relacionan con los efectos parecidos de las endotoxi-
nas. Los donantes de NO S-nitroso-N-acetilpenicilamina y 3-morfolino-sidnonimina
inhiben la sntesis de glucosa de forma dependiente de la dosis y del tiempo a partir del
lactato ms piruvato como el sustrato que se relaciona con la produccin de NO. El
sitio primario de inhibicin de la gluconeognesis, tanto por el NO como por las endo-
toxinas, es a nivel de la formacin de fosfoenolpiruvato [179].
El shock es un sndrome tpico en el que el NO tiene un papel fundamental. La
hipotensin del shock sptico refleja la regulacin hacia abajo de la produccin de NO
y la activacin de la guanilil ciclasa del msculo liso vascular. El azul de metileno
tiene un efecto inhibidor sobre la disminucin de la presin arterial mediada por NO,
inhibiendo la sntesis y/o la degradacin de NO [180].
NO tambin acta como un inductor de radicales libres, ya que la formacin de
peroxinitrito es uno de los iniciadores ms importante de las lesiones causadas por los
radicales libres (p. ej., lesin del ADN). Es probable que la produccin excesiva de NO
en los tejidos inflamados d lugar directamente a la formacin de compuestos de
N-nitroso mediado por los macrfagos activados. El NO y otros compuestos nitrosos
pueden afectar al desarrollo de los tumores. Los cnceres que se originan durante las
infecciones bacterianas, vricas y parasitarias proporcionan modelos tiles para inves-
tigar la relacin que existe entre la inflamacin y la carcinognesis. Los investigadores
tambin han estudiado la relacin que existe entre las respuestas inmunitarias y la
produccin de sustancias lesivas para el ADN dependientes de NO (p. ej., NO, radica-
les de oxgeno y compuestos N-nitroso) y el riesgo de cncer [181].
El NO interviene en la inmunosupresin. Los estudios demuestran que el NO deri-
vado de los macrfagos interviene en la inmunosupresin y, posiblemente, tambin en
VAJDOVICH
88
la aparicin temprana de la capacidad protectora de una cepa vacunal de Salmonella
typhimurium viva atenuada. Se ha propuesto una teora en la que la autotoxicidad de
los linfocitos transentes podra explicar el mecanismo de la inmunosupresin. El
modelo propone que los macrfagos activados por Salmonella producen NO, que inac-
tiva los linfocitos de las zonas vecinas, que se vuelven disfuncionales. La inhibicin de
NO por NG-monometil-L-arginina invierte la inmunosupresin [182].
El AINE cido acetilsaliclico tambin afecta al NO. Las concentraciones terapu-
ticamente importantes de cido acetilsaliclico provocan la liberacin de NO desde el
endotelio vascular. Parece que este efecto est causado por la acetilacin directa de la
protena eNOS, pero es independiente de la inhibicin de COX o de la inhibicin de
la degradacin de NO mediada por O
2
. Otros inhibidores de COX no han demostrado

tener efectos vasculares beneficiosos [183].
Se ha demostrado que en los seres humanos y los animales con enfermedad pero-
dontal se produce un aumento local de iNOS y de los productos reactivos de nitr-
geno. Cuando se administraron inhibidores de iNOS (como mercaptoalquilguanidi-
nas) por va tpica en forma de gel, se redujo la gingivitis experimental en un perro
beagle, que se analiz mediante el ndice de placa, el ndice gingival y el porcentaje
de hemorragia [184].
LESIONES POR HIPOXIA-REPERFUSIN
Definicin de lesiones por hipoxia-reperfusin
Si la circulacin colateral no puede compensar la disminucin o el cese del flujo san-
guneo nutricional en cualquier tejido (p. ej., debido a sepsis, shock, hemorragia u
oclusin de los vasos) que causa hipoxia (isquemia), se producen lesiones irreversibles
[185]. El intestino es especialmente sensible a este efecto; aunque se mantenga la cir-
culacin general, la punta de las vellosidades se vuelve gravemente hipxica debido al
cortocircuito extravascular del oxgeno en la base de las vellosidades. La lesin isqu-
mica del intestino comienza en la capa vellosa de la mucosa. La lesin de la mucosa
permite que aumente la captacin de enzimas proteolticas, bacterias y endotoxinas
desde la luz intestinal hacia la circulacin [186]. En varios rganos, incluyendo el
intestino delgado, se desarrollan edema tisular, lesin morfolgica y alteraciones fun-
cionales tras una isquemia temporal, tanto durante el perodo hipxico como despus
de la reoxigenacin [185]. Granger et al. [187] demostraron que la isquemia y reperfu-
sin intestinales temporales producen edema intestinal, lo que da lugar a un movimien-
to neto del lquido hacia la luz intestinal. Schoenberg et al. [188] demostraron que, tras
dos horas de isquemia intestinal, se producen lesiones de la mucosa, principalmente
tras la reperfusin. Antiguamente, se crea que la hipoxia tisular desempeaba una
funcin fundamental en la patogenia de las lesiones de la mucosa y en el deterioro de
la funcin intestinal tras la reperfusin, y que estas lesiones se agravaban en algunas
especies debido a las proteasas pancreticas, que se secretan durante la fase isqumica
y causan la digestin proteoltica del ncleo proteico de las clulas de la mucosa [189].
Algunos modelos experimentales de isquemia intestinal grave inducida mediante la
oclusin completa de los vasos mesentricos indicaron que tras la reperfusin no se
agrava de forma evidente la lesin tisular. Aparentemente, la oclusin vascular com-
pleta da lugar al desarrollo rpido de lesiones intestinales sin que haya un componente
de reperfusin significativo [190]. Es probable que la lesin de la mucosa que se obser-
89
va tras la isquemia parcial y la reperfusin no tenga mucha importancia clnica hasta
las ltimas fases del infarto mesentrico [185].
Aunque es esencial que se recupere el oxgeno en los tejidos isqumicos para que
las clulas puedan sobrevivir, una parte importante de las lesiones tisulares que se
producen estn causadas por la reintroduccin del oxgeno en los tejidos isqumicos.
Este fenmeno se denomina lesin por reperfusin o paradoja del oxgeno. La
toxicidad paradjica del oxgeno se inicia por procesos bioqumicos que tienen lugar
durante la isquemia y que dan lugar a la formacin de especies de oxgeno parcial-
mente reducidas que causan lesiones celulares o la muerte celular. Incluyen O
2
,
H
2
O
2
, HO y otros perxidos no radicales [191]. Este proceso tambin puede causar
insuficiencia orgnica multisistmica grave [192]. Es necesario que los pacientes que
estn en shock recuperen la reperfusin tisular y las concentraciones tisulares de
oxgeno, pero cuando el clnico administra el tratamiento necesario para conseguir
estos objetivos puede contribuir a la morbilidad y a la mortalidad que se asocian a
las lesiones por reperfusin.
Xantina deshidrogenasa y xantina oxidasa en la hipoxia-reperfusin
Durante la hipoxia, el ATP intracelular se descompone en hipoxantina. Esta disminu-
cin del ATP puede ser extremadamente grave en la isquemia, porque dos horas de
isquemia parcial reducen las concentraciones de ATP a aproximadamente el 40% del
nivel preisquemia. La disminucin del ATP se asoci a un aumento de 7,6 veces la
concentracin de AMP y a un aumento de 10 veces la concentracin de hipoxantina en
los tejidos intestinales [193]. Normalmente, la xantina deshidrogenasa (XDH) oxida la
hipoxantina para formar xantina utilizando nicotinamida adenina dinucletido (NAD).
En esta reaccin, NAD se convierte en NADH. Poco despus de aparecer la isquemia,
las concentraciones extracelulares de calcio disminuyen y aumentan las concentracio-
nes intracelulares de calcio, debido a la incapacidad para mantener el gradiente de la
membrana celular debido a la isquemia. XDH (EC 1.1.1.204), la forma -D, est pre-
sente en grandes cantidades y en la isquemia se convierte en XO (EC 1.1.3.22), la
forma -O, debido a la estimulacin de las proteasas por el aumento del calcio intrace-
lular. Esta conversin enzimtica de D a O es esencial para que se produzcan las lesio-
nes por reperfusin mediadas por radicales de oxgeno. Las concentraciones excesivas
de hipoxantina se acumulan en los tejidos porque ya no hay XDH. XO, que utiliza
oxgeno en vez de NAD como substrato, es incapaz de catalizar la conversin de
hipoxantina a xantina en ausencia de oxgeno. Por tanto, en condiciones de hipoxia
la hipoxantina no se degrada hasta cido rico y se acumula en los tejidos isqumicos.
Cuando se realiza la reperfusin tisular, debido al inicio del tratamiento para el shock,
el oxgeno molecular se reintroduce en los tejidos isqumicos. La conversin de
hipoxantina a xantina por XO hace que se generen grandes cantidades de O
2
(v. figu-
ra 12) [191,193].
Segn Roy et al. [194], la velocidad de conversin de D a O es rpida en el intestino
y ms lenta en otros rganos (p. ej., corazn, rin, bazo, hgado), pero Parks et al.
[195] observaron una velocidad de conversin ms lenta en el intestino. El mecanismo
ms probable de la conversin de D a O es la protelisis limitada y la oxidacin de los
grupos sulfhidrilo unidos a la enzima para formar disulfuros que se activan por la
afluencia de calcio [194]. Durante la hipoxia no funciona la bomba de calcio que con-
VAJDOVICH
90
sume energa, lo que da lugar a un aumento de la concentracin de calcio en las clulas
[185]. Segn la hiptesis de Roy et al. [194], la afluencia de calcio activa las proteasas
intracelulares reguladas por calmodulina, lo que da lugar a la conversin de D a O.
Observaron que la inhibicin de las proteasas intracelulares por un inhibidor de serina
proteasa (inhibidor de tripsina de soja) impide la conversin. Otros inhibidores de pro-
teasa, como la aprotinina, tambin protegen el intestino contra las lesiones isqumicas
y postisqumicas del tejido [189].
Los inhibidores de proteasas tambin pueden bloquear los efectos nocivos de las
proteasas liberadas por los neutrfilos activados, que se acumulan tras la isquemia y la
reperfusin intestinales. El tratamiento previo de ratas con trifluoperacina, un inhibidor
de calcio-calmodulina, redujo significativamente la velocidad de conversin de D a O
durante la isquemia [194]. XO es una fuente principal (y posiblemente la primera) de
la produccin de radicales libres en el intestino con isquemia y reperfusin, como
demuestra la inhibicin de esta enzima por el inhibidor competitivo, alopurinol, que es
tan eficaz como SOD para prevenir el aumento de la permeabilidad vascular y la lesin
de la mucosa tras la reperfusin [196]. La inactivacin de XO por el cido flico y
pterina aldehdo tambin reduce el aumento de la permeabilidad vascular que se obser-
va tras la reperfusin del intestino [197]. Otro mtodo para disminuir la actividad de
XO es alimentar a las ratas con dietas deficientes en molibdeno y suplementadas con
tungsteno. Este tratamiento produjo la incorporacin de tungsteno, en vez de molibde-
no, en XO, reduciendo su actividad en un 75% [198].
Acumulacin de radicales libres
A los 10-30 segundos de iniciarse la reperfusin se produce la explosin de la forma-
cin de O
2
causada por la accin de XO, que inicia una cadena de reacciones que
Figura 12. Lesiones por isquemia y reperfusin.
Normal Isquemia Reperfusin
Adenosina
Hipoxantina
Xantina
deshidrogenasa
(XDH)
cido rico
Hipoxia, prdida de energa
Aumento de la degradacin del ATP
Bombas Na
+
+ Ca
2+
Disminucin de la funcin de la bomba
de calcio que consume energa
Aumento de la concentracin de calcio
en las clulas
Se produce carencia de XDH debido a la protelisis
limitada causada por las proteasas intracelulares
reguladas por calmodulina y la oxidacin de los grupos
SH unidos a enzimas AS
Conversin de XDH
Se forma xantina oxidasa (XO)
Adenosina
Inosina
cido rico
Hipoxantina
91
genera otros radicales. El sitio principal donde se producen radicales es el endotelio
vascular. El O
2
producido en primer lugar es muy inestable y reacciona espontnea-

mente o se dismuta para formar H
2
O
2
y agua. El siguiente paso fundamental es la
reduccin del in frrico intracelular a in ferroso mediante O
2
. El hierro se almacena
en la protena ferritina que se encuentra en todas las clulas. El hierro liberado de la
transferrina, lactoferrina, ferritina, hemoglobina y la molcula de adenosina 5-difos-
fato-frrico durante la isquemia se oxida rpidamente en el momento de la reperfusin.
Cuando hay H
2
O
2
en un medio acuoso se forma HO mediante la reaccin de Haber-
Weiss. (La reaccin de Haber-Weiss catalizada por el hierro se denomina reaccin de
Fenton.) HO es el radical ms destructivo y de vida ms corta de todos los radicales
[191]. Los radicales acumulados alteran las protenas y las membranas celulares
mediante la abstraccin del in hidrgeno. La prdida de los iones hidrgeno da lugar
a la formacin de ms radicales en un proceso de autoperpetuacin. Tambin se gene-
ran otros radicales, como los radicales ferril o perferril altamente reactivos, debido a la
reaccin del hierro ferroso con oxgeno, O
2
o H
2
O
2
[199].
Peroxidacin lipdica en la hipoxia y reperfusin
El origen inicial de los radicales de oxgeno parece ser el sistema hipoxantina-XO. Los
radicales de oxgeno reaccionan directamente con los cidos grasos poliinsaturados,
produciendo LPO dentro de las membranas celulares [185]. Los radicales lipdicos
generados por la POL en las membranas celulares se combinan con el oxgeno mole-
cular y, a travs de procesos bioqumicos que tienen lugar en presencia de hierro ferro-
so, producen ms radicales lipdicos. Estos radicales afectan a las clulas causando
disfuncin progresiva de la membrana celular, prdida de la permeabilidad selectiva de
la membrana, lesiones del ADN y degradacin de las protenas estructurales y de la
actividad de las enzimas ligadas a la membrana [191]. Las concentraciones de SOD en
la sangre completa disminuyeron notablemente en los animales que haban sufrido
hipoxia y reperfusin, como un efecto de los procesos de los radicales libres y de la
POL, y los valores de MDA aumentaron significativamente tras la reperfusin. MDA
es un producto final metaestable de la POL y se denomina sustancia reactiva del ci-
do tiobarbitrico [192]. La POL puede monitorizarse por el aumento de MDA y de
4-hidroxialquenales. Ambos son productos de la POL. Los investigadores consideran
que la medida de MDA por s misma no es una prueba adecuada de la presencia o la
magnitud de la POL [200].
Mecanismos de defensa antioxidantes en la hipoxia y la reperfusin
Existen varios mecanismos de defensa celulares que protegen contra los efectos poten-
cialmente nocivos de los radicales libres de oxgeno que se generan normalmente como
subproductos. O
2
y H
2
O
2
se descomponen por la accin de las enzimas en agua y
oxgeno molecular. SOD dismuta el O
2
para formar H
2
O
2
, que es menos activo, y no
es un radical libre. GSH-Px y CAT convierten el H
2
O
2
en oxgeno molecular y agua al
final del proceso. Las lneas no enzimticas de defensa tambin eliminan los radicales
libres residuales que escapan a estos sistemas enzimticos. Estos limpiadores incluyen
la vitamina E, que reduce varias especies de radicales; y ascorbato, vitamina A y
-carotenos, que son limpiadores de radicales. Cuando se producen radicales libres
durante la reperfusin, todas estas defensas naturales se superan rpidamente [191].
VAJDOVICH
92
Las lesiones por hipoxia-reperfusin son un proceso enzimtico combinado
El aparato gastrointestinal est especialmente bien abastecido de la maquinaria enzi-
mtica necesaria para formar grandes cantidades de ERO. Los orgenes de las ERO en
el aparato gastrointestinal incluyen las oxidasas de la mucosa como XO, aminooxidasa
(AO) y aldehdo oxidasa, as como la NADPH oxidasa que se encuentra en los leuco-
citos fagocitarios residentes (macrfagos, neutrfilos, eosinfilos) de la lmina propia
[201,99]. La reoxigenacin tisular que se produce tras la hipoxia se asocia a lesiones
por isquemia-reperfusin y puede sealar el desarrollo del precondicionamiento isqu-
mico, un estado adaptativo que protege contra las lesiones por isquemia-reperfusin
consecuentes. Los investigadores han realizado anlisis con chip de ARN de modelos
in vivo e in vitro de lesiones por isquemia-reperfusin para definir los mecanismos
moleculares subyacentes. Los anlisis con chip del tejido renal tras la isquemia y la
reperfusin revelaron cierta cantidad de genes antioxidantes regulados hacia arriba,
incluyendo aldehdo deshidrogenasas (ALDH, ALDH1A1 y ALDH1A7), glutatin
S-transferasas (GSTM5, GSTA2, y GSTP1), y NAD(P)H quinona oxidorreductasa
(NQO1). El factor de transcripcin, factor 2 relacionado con NF-E2 (Nrf2), un regula-
dor principal de esta respuesta antioxidante, tambin aument en las lesiones por
isquemia-reperfusin. Es ms, los anlisis con chip de las clulas epiteliales renales
expuestas a la hipoxia y la reoxigenacin demostraron que Nrf2 est regulado hacia
arriba durante la reoxigenacin. Leonard et al. [202] tambin observaron una acumu-
lacin nuclear de la protena Nrf2 especfica durante la reoxigenacin y la activacin
consecuente de una reestructura recopiladora promotora de NQO1. La atenuacin de
las ERO en la reoxigenacin utilizando el antioxidante N-acetilcistena inhibi la acti-
vacin de Nrf-2. En las biopsias hepticas humanas realizadas una hora despus del
trasplante se detectaron concentraciones de ARNm para los genes dependientes de
Nrf2. Estos resultados indican que la actividad de Nrf-2 dependiente de la reoxigena-
cin facilita el precondicionamiento isqumico mediante la induccin de la expresin
de los genes antioxidantes, y que las ERO pueden ser crticas en la sealizacin de este
proceso.
Activacin de los metabolitos del cido araquidnico en la hipoxia y reperfusin
Tras la aparicin de la isquemia, las concentraciones extracelulares de calcio disminu-
yen y las concentraciones de calcio intracelular aumentan debido a la alteracin del
mantenimiento del gradiente de la membrana celular mediada por la isquemia. El
aumento del calcio intracelular tambin contribuye a la lesin de la membrana celular
mediante la activacin de fosfolipasas, que a su vez liberan cidos grasos libres de las
membranas. En presencia de O
2
la cascada del AA se activa debido al aumento del

calcio intracelular [191]. La produccin inicial de radicales libres de oxgeno tiene
lugar principalmente en las clulas endoteliales vasculares durante el perodo de reper-
fusin. Parece que las lesiones tisulares intestinales postisqumicas estn causadas por
la formacin de radicales de oxgeno y la activacin de PLA
2
. El aumento de la activi-
dad de PLA
2
tambin estimula la produccin de prostaglandinas y leucotrienos [185].
Durante la isquemia intestinal, las concentraciones de prostaglandinas y tromboxano
apenas cambian [203]. Sin embargo, tras la reperfusin del intestino, las concentracio-
nes de PGI
2
, PGF
2
y 13,14 dihidro-15-ceto PGF
2
aumentan significativamente, lo
que indica una estimulacin de la cascada COX. Este aumento de las concentraciones
93
de prostaglandinas puede contribuir a la cardiodepresin que suele observarse tras la
reperfusin. Sin embargo, parece que el aumento del metabolismo de las prostaglandi-
nas es independiente de la produccin de perxidos lipdicos por los radicales de ox-
geno [204]. La activacin de PLA
2
inicia las lesiones de la mucosa tras la isquemia.
Esta enzima es capaz de aumentar la formacin de lisofosfolpidos citotxicos dentro
de los tejidos. PLA
2
es una enzima hidroltica que separa los cidos grasos de los fos-
folpidos de las membranas (p. ej., lisolecitina desde lecitina, lisocefalina desde cefa-
lina y lisofosfatidil colina desde fosfatidil colina) [185]. Otamiri et al. [205] descubrie-
ron que las concentraciones de lisofosfatidil colina aumentaron tras la reperfusin
paralelamente al aumento de la actividad de PLA
2
. La lisolecitina es muy citotxica.
Es ms, la lisofosfatidil colina potencia la hiperpermeabilidad intestinal que normal-
mente se observa tras la isquemia. Las concentraciones plasmticas de anafilotoxina
C5a y TXB
2
aumentaban significativamente en la reperfusin tras la isquemia, produ-
ciendo cambios patolgicos notables en el intestino, el hgado y los pulmones, inclu-
yendo necrosis aguda de la mucosa intestinal, infiltracin de granulocitos e invasin
bacteriana del hgado y los pulmones [192].
Activacin de los granulocitos neutrfilos
La acumulacin de granulocitos neutrfilos es uno de los factores ms importantes en
la lesin tisular que se produce en las lesiones por isquemia-reperfusin. En un expe-
rimento en el que investigaban las lesiones intestinales por isquemia-reperfusin en los
gatos, Hernndez et al. [197] impidieron la adherencia de los neutrfilos y la extrava-
sacin utilizando suero antineutrfilos y anticuerpos monoclonales especficos para la
-cahna del complejo CD18. Este estudio demostr que la deplecin de los leucocitos
y la inhibicin de su adherencia atenan el aumento de la permeabilidad microvascular
tras la isquemia y previenen las lesiones graves de la mucosa.
Los neutrfilos se activan por dos causas principales. Se cree que los metabolitos
del AA son los principales responsables de la quimiotaxis, la adherencia y la activacin
de los neutrfilos. De forma secundaria, los radicales de oxgeno desencadenan indi-
rectamente la acumulacin de neutrfilos dentro del tejido afectado, iniciando los pro-
cesos inflamatorios. Los neutrfilos median las lesiones secretando ms radicales
libres de oxgeno y enzimas proteolticas. El resultado de la activacin de los neutrfi-
los es la lisis de protenas estructurales y la POL, con la perpetuacin de las lesio-
nes por reperfusin, que da lugar a un aumento de la permeabilidad microvascular,
lesiones celulares, lesiones graves de la mucosa o la muerte. Debido a este proceso se
produce inflamacin celular, y el gran nmero de neutrfilos implicados puede contri-
buir a la obstruccin mecnica de algunos lechos capilares. Esta secuencia de eventos
se conoce como el fenmeno de no reflujo. La isquemia contina en estos lechos
tisulares y se produce necrosis debido a la incapacidad para restablecer el flujo sangu-
neo [191].
Efectos de la duracin de la isquemia
La duracin y la intensidad de la isquemia influyen en la gravedad de la lesin meta-
blica que se produce durante el perodo de reperfusin. La isquemia completa produ-
ce la muerte del 100% de las clulas en la zona afectada en un tiempo que puede variar
desde minutos hasta horas. La temperatura, la gluclisis anaerobia, el sustrato almace-
VAJDOVICH
94
nado disponible (principalmente glucgeno) y otros factores influyen en el lapso de
tiempo que tardan en morir las clulas. El aumento de la isquemia durante 30 a 90
minutos produce un aumento intracelular marcado del calcio y deplecin de ATP. En
general, cuando la duracin de la isquemia aumenta, aumenta la gravedad de las lesio-
nes isqumicas, que se mide por el porcentaje de necrosis tisular. La lesin tisular
puede reducirse significativamente filtrando la sangre para reducir el nmero de neu-
trfilos perfundidos al rea afectada o administrando anticuerpos monoclonales contra
neutrfilos para reducir la adherencia neutroflica [191].
Efectos del complemento
El sistema del complemento tiene una funcin principal en el desarrollo de las lesiones
por hipoxia-reperfusin. Si se bloquean los componentes principales de este sistema
administrando el inhibidor de C1s C1s-INH-248 5 minutos antes de la reperfusin, la
gravedad de las lesiones por reperfusin es menor [206].
Efectos de la hipomagnesemia
La hipomagnesemia aumenta las lesiones por reperfusin. La inflamacin neurognica
que se produce muy pronto durante la hipomagnesemia predispone al miocardio a
sufrir lesiones por reperfusin debido a la deplecin de antioxidantes endgenos y al
reclutamiento de clulas inflamatorias que pueden participar en el aumento de la pro-
duccin de radicales libres durante la reperfusin tras la isquemia. Los suplementos de
vitamina E pueden impedir que estas lesiones aumenten, posiblemente debido a la
restauracin de las defensas antioxidantes endgenas [207].
Importancia de la formacin de aldehdos
Debido a que las lesiones cerebrales por isquemia-reperfusin se han asociado a grandes
aumentos de las concentraciones de aldehdos reactivos en el rea de penumbra, los
cientficos investigaron si la funcin hidracina de la fenelcina era capaz de secuestrar
los aldehdos reactivos. Tanto los aminoaldehdos como la acrolena se generan a partir
del metabolismo de poliaminas para formar putrescina, a travs de poliamina oxidasa.
Estos aldehdos txicos comprometen la integridad mitocondrial y lisosomal e inician
la apoptosis y la necrosis. Los estudios anteriores han demostrado que la neutralizacin
farmacolgica de los aldehdos reactivos a travs de la formacin de derivados tioacetal
proporciona una neuroproteccin significativa contra las lesiones por isquemia-reperfu-
sin en modelos de isquemia tanto focal como generalizada. La neuroproteccin obser-
vada con fenelcina est en consonancia con los hallazgos de los estudios anteriores
sobre las sustancias secuestradoras de aldehdos en el tratamiento de la lesin cerebral
por isquemia-reperfusin y apoya el concepto de que la carga de aldehdos es un factor
principal del retraso de la prdida de clulas de la penumbra isqumica [208].
Importancia del xido ntrico en las lesiones por isquemia-reperfusin
En 1999, Mirza [209] realiz varios descubrimientos importantes con respecto a la
funcin del NO y sus metabolitos en las lesiones por reperfusin. Este estudio se rea-
liz en 31 caballos; 20 de ellos tenan una obstruccin por estrangulacin del intestino
delgado adquirida de forma natural, y 11 eran caballos clnicamente normales sin sig-
nos de enfermedad del aparato gastrointestinal. Utilizando NADPH reducida, se rea-
95
lizaron tinciones histoqumicas de tejidos crioconservados, y se realizaron tinciones
inmunohistoqumicas de iNOS y nitrotirosina en tejidos embebidos en parafina y fija-
dos con formalina. Tambin se midi el NO en el lquido abdominal, el plasma y la
orina. NADPH diaforasa es una enzima que tiene importancia en este proceso. Suele
utilizarse su tincin histoqumica como marcador de la presencia de NOS, indepen-
dientemente de la isoenzima (cNOS o iNOS), porque esta enzima se colocaliza con
NOS. Nitrotirosina es un metabolito del peroxinitrito tras su reaccin con tirosina.
En este estudio, las concentraciones de NO en el plasma y en el lquido abdominal
de los caballos afectados eran significativamente mayores que las de los controles, pero
las concentraciones de NO en la orina no presentaban diferencias significativas entre
los grupos. Se produjo una disminucin significativa de la tincin de NADPH diafora-
sa en el epitelio de la mucosa, en la vasculatura, los leucocitos y en el plexo de la
submucosa de los caballos afectados, si se comparaba con los caballos de control. Se
produjo un aumento significativo de la tincin de iNOS en los leucocitos de la mucosa
y la submucosa, y de la tincin de nitrotirosina en los leucocitos de la mucosa de los
caballos afectados si se comparaban con los caballos de control. En condiciones basa-
les, existe nNOS y NOS endotelial en el yeyuno de los caballos, y es probable que
medien los efectos fisiolgicos o citoprotectores. Las concentraciones de NO en el
plasma y en el lquido abdominal, pero no en la orina, aumentan tras la obstruccin por
estrangulacin del intestino delgado; este aumento puede asociarse a un aumento de la
tincin de iNOS en los leucocitos de la mucosa y la submucosa, que probablemente
estaba causado por el aumento de la expresin en respuesta a los estmulos asociados
a la isquemia. El aumento de la tincin de nitrotirosina en los leucocitos de la mucosa
de los caballos afectados probablemente refleje la presencia de peroxinitrito debido al
aumento del NO y a la produccin de O
2
, y puede reflejar una funcin citotxica del

NO en la obstruccin por estrangulacin del intestino delgado en los caballos [209].
Se han recogido algunos datos sobre el efecto protector del NO sobre el miocardio
en la isquemia y la reperfusin. Los investigadores que determinaron los efectos del
NO crean que era un factor relajante derivado del endotelio en las lesiones por reper-
fusin tras la isquemia de miocardio. En los gatos con isquemia de miocardio, el rea
necrosada (expresada como un porcentaje del rea del miocardio en riesgo) era signi-
ficativamente menor en los gatos tratados con NO que en los gatos que no haban
recibido un tratamiento con NO. Las actividades de MPO cardaca indican que fueron
atrados significativamente menos neutrfilos a la zona necrosada en los gatos tratados
con NO. Los investigadores concluyeron que parece que el NO protege significativa-
mente el miocardio tras la isquemia y la reperfusin. El NO puede ofrecer esta cardio-
proteccin incorporndose a las clulas sanguneas circulantes (es decir neutrfilos,
plaquetas), inhibiendo as su acumulacin y adherencia en la regin isqumica, o
mediante un efecto citoprotector cardaco directo [210]. Kubes [211] afirm que la
produccin basal de NO es importante para minimizar la disfuncin de la barrera
microvascular y de la mucosa asociada a la reperfusin del intestino tras la isquemia.
Evalu si la inhibicin de la sntesis de NO afecta a la funcin de la barrera intestinal
tras la isquemia y la reperfusin del intestino delgado felino. Descubri que el aumento
de la permeabilidad microvascular y de la mucosa inducido por la isquemia y la reper-
fusin aumentaba de forma espectacular mediante la infusin del inhibidor de NOS,
L-NAME, y este efecto se inverta mediante la infusin de L-Arg. Iniciando la infusin
VAJDOVICH
96
de L-Arg slo 10 minutos antes de la reperfusin, protega contra la disfuncin de la
barrera de la mucosa inducida por la isquemia y la reperfusin y contra la necrosis
tisular. Tambin se sabe que el aumento de la actividad de NOS dentro de los miocitos
cardacos contribuye a la depresin de la contractibilidad cardaca que se observa en el
shock endotxico. El inhibidor de NOS L-NAME no tuvo efectos sobre los monocitos
procedentes de los animales de control, pero aument la contraccin de los mioci-
tos procedentes de los animales tratados con endotoxinas en un 40%. Las sustancias
que previenen la sntesis o los efectos del NO invierten la depresin de la contraccin
de los miocitos que se observa tras el tratamiento con endotoxinas [212,85]. Kubes
[211] tambin menciona que, aunque se sabe que L-NAME es eficaz para mantener la
contraccin miocrdica en el shock endotxico, y que L-Arg empeora este trastorno, pare-
ce que los efectos son diferentes en el intestino. Estos hallazgos indican que los tejidos del
intestino y el miocardio tienen sensibilidades diferentes a los efectos del NO.
ENZIMAS QUE PARTICIPAN EN LAS LESIONES
POR HIPOXIA-REPERFUSIN
Aldehdo oxidasa
Las aldehdos oxidasas (AO, EC 1.2.3.1) son molibdo-flavoenzimas. Son protenas
relacionadas estructuralmente que requieren un cofactor molibdopterina y FAD para
llevar a cabo su actividad cataltica. En los mamferos, se conocen cuatro enzimas:
xantina oxidorreductasa (XOR), aldehdo oxidasa (AOX1, EC 1.2.3.1) y dos protenas
descritas recientemente en el ratn conocidas como aldehdo oxidasa homloga 1
(AOH1) y aldehdo oxidasa homloga 2 (AOH2). Hasta el momento existen muy pocos
datos sobre la importancia fisiopatolgica de AO, AOH1 y AOH2, de las que todava
no se ha encontrado un sustrato endgeno aceptado. AOX1 puede desempear una
funcin indirecta y potencialmente protectora en las lesiones hepticas causadas por el
etanol en los alcohlicos. De hecho, la enzima puede detoxificar el hgado mediante la
biotransformacin de acetaldehdo en el cido correspondiente. Sin embargo, con res-
pecto a la importancia de AOX1 en el metabolismo del acetaldehdo hay que destacar
que existen varias isoformas de ALDH que pueden competir con la AOX1 heptica por
este sustrato. Tambin se ha indicado que AOX1 tiene un gran efecto sobre las lesiones
por hipoxia-reperfusin, pero todava no se conocen todos los detalles, porque la inhi-
bicin de AO no afecta a la permeabilidad capilar pulmonar en los pulmones de cone-
jo aislados expuestos a isquemia y reperfusin [213].
Aldehdo deshidrogenasa
Las enzimas ALDH (EC 1.2.1.3) son una familia de isoenzimas que podra desem-
pear una funcin principal en la detoxificacin (oxidacin o deshidrogenacin) de
los aldehdos generados por el metabolismo del alcohol y la POL [214]. ALDH es
una familia de enzimas que oxida un aldehdo en presencia de NAD
+
y agua dando
lugar a un cido (aldehdo- NAD
+
oxidorreductasa) y NADH. Varias formas de
ALDH son enzimas que catalizan la oxidacin (deshidrogenacin) de aldehdos.
Existen varias formas en el citosol, la mitocondria y el retculo endoplsmico de los
mamferos. Estas formas se han clasificado como clase 1 (citoslica), clase 2 (mito-
condrial) y clase 3 (tumorales y otras isoenzimas). En las tres clases existen formas
constitutivas e inducibles.
97
La reaccin global que catalizan las ALDH es:
RCHO + NAD(P)
+
+ H2O } RCOOH + NAD(P)H + H
+
La ALDH tiene mucha especificidad por el sustrato. Generalmente, la oxidacin de
los aldehdos es una reaccin de detoxificacin, en la que se eliminan los productos
electroflicos de la oxidacin del alcohol. La alcohol deshidrogenasa oxida el etanol
para formar acetaldehdo y la acetaldehdo deshidrogenasa detoxifica esta sustancia para
formar cido actico. De forma parecida, La ALDH detoxifica la acrolena, el metabo-
lito hepatotxico que se forma a partir de alil alcohol. Sin embargo, en el caso del
2-butoxietanol, el alcohol y la ALDH catalizan secuencialmente la formacin de un
metabolito hematotxico, el cido 2-butoxiactico [215]. ALDH tambin puede com-
portarse como las esterasas, hidrolizando steres como para-nitrofenil acetato. Se ha
encontrado ALDH en casi todas las formas de seres vivos. Su funcin principal en los
seres humanos y otros mamferos es proteger al organismo de compuestos txicos y
aldehdos. Las primeras investigaciones, realizadas entre 1970 y 1980, se centraron en
una ALDH del hgado que ayuda a metabolizar un aldehdo (acetaldehdo) que procede
del alcohol, cambindolo por cido actico, que el organismo puede utilizar para obte-
ner energa. El frmaco disulfiram (que a veces se utiliza para el tratamiento del alco-
holismo) desactiva la ALDH, por lo que la persona enferma si bebe alcohol [215].
La deficiencia de esta enzima o su inactivacin debido a un polimorfismo producen
intolerancia al alcohol. El consumo de alcohol produce sntomas de tipo alrgico,
incluyendo congestin y flujo nasal. Este trastorno es ms frecuente en las personas
con ascendentes del este asitico, y aproximadamente el 50% de los chinos, los corea-
nos y los japoneses tienen algn grado de intolerancia al alcohol. Estos sntomas a
veces se denominan rubor alcohlico [216]. La ALDH desempea una funcin
detoxificando los productos aldehdos de la POL. Los ensayos histoqumicos e inmu-
nocitoqumicos demostraron que existe una colocalizacin de POL y ALDH, princi-
palmente en los fotorreceptores y en las capas internas de la retina. Este hallazgo
indica la participacin de ALDH en la detoxificacin de los aldehdos peroxdicos de
la retina. Cualquier cambio de la expresin y distribucin retinianas de ALDH podra
tener una importancia crucial en la evaluacin de las rutas de las vitreorretinopatias
mediadas por la POL [217].
ALDH es ms potente que AOX. En varios ejemplos humanos distintos, la actividad
de la aldehdo oxidasa fue al menos 10 veces inferior que la de ALDH [218].
Aminooxidasa, amino oxidorreductasa
Las AO y las amino oxidorreductasas (EC 1.4 y EC 1.5.) se han dividido tradicional-
mente en dos grupos principales, dependiendo de la naturaleza qumica del cofactor al
que se unen: AO dependientes de flavina y AO dependientes del cobre [219].
Aminooxidasas dependientes de flavina
Las AO dependientes de flavina (EC 1.4.3.4.) son enzimas intracelulares que contienen
FAD (p. ej., monoaminooxidasa [MAO]-A, MAO-B y poliaminooxidasas) [220]. MAO-
A y -B son enzimas mitocondriales muy conocidas, cuyas funciones en el metabolismo
de los neurotransmisores (p. ej., noradrenalina) y otras aminas biognicas (p. ej., tirami-
na, adrenalina) estn bien establecidas [220]. Las poliaminooxidasas que contienen FAD
VAJDOVICH
98
utilizan las aminas secundarias espermina y espermidina como sustratos principales, por
lo que es posible que regulen el crecimiento celular [221]. La clonacin de poliamino-
oxidasas a partir de clulas de mamferos revel la existencia de varias enzimas con
sustratos y propiedades moleculares diferentes. Parece que una es idntica a la poliami-
nooxidasa que se pens que cataliza la conversin de espermidina a putrescina dentro del
ciclo de interconversin [222]. MAO-A y -B no son enzimas especialmente importantes
en las lesiones por isquemia-reperfusin y por tanto no se describen con detalle.
Aminooxidasas dependientes del cobre
Las AO dependientes del cobre (EC 1.4.3.6.) contienen un cofactor que posee uno o ms
grupos carbonilo, que en la mayora de los casos parece ser topaquinona [223225]. Estas
enzimas incluyen diaminooxidasas (DAO), la enzima del tejido conectivo lisil oxidasa y las
MAO de la membrana plasmtica y solubles [226]. Estas enzimas se denominan en con-
junto como aminooxidasas sensibles a semicarbacida (SSAO) debido a su sensibilidad
caracterstica a la inhibicin por un compuesto carbonil reactivo semicarbacida. Las SSAO
son enzimas multifuncionales que se encuentran abundantemente en la naturaleza y que
contienen 2 tomos de cobre en cada dmero [219]. Las AO que contienen cobre contienen
un in cobre en el sitio activo y tambin un cofactor orgnico nico, 2,4,5-trihidroxifenila-
lanina quinona, que es esencial para la catlisis. Los datos estructurales han dado a conocer
el mecanismo cataltico de la enzima y tambin la biognesis del cofactor. El cofactor
deriva de una tirosina de la secuencia de aminocidos de la enzima y slo requiere que se
aada cobre y oxgeno molecular mediante un evento de autoprocesamiento [227].
Utilizando oxgeno molecular, las SSAO convierten los aminos primarios en sus
aldehdos correspondientes [228]. Tras la formacin del aldehdo, la enzima est en
forma aminoquinol reducido de dos electrones. En la reoxidacin de la enzima que la
devuelve al estado del reposo se utiliza oxgeno molecular, que se reduce a H
2
O
2
en
este proceso, con la liberacin adicional de amonio [229]. En los mamferos, SSAO
circula en el plasma; en muchos tejidos y rganos, especialmente en los adipocitos y
las clulas endoteliales vasculares y musculares lisas, se encuentra una forma unida a
la membrana (que suele denominarse protena de adherencia vascular 1). En los
ltimos aos, se han obtenido pruebas de que SSAO tiene una funcin en el entrecru-
zamiento de protenas, la formacin de AGE, la aterognesis, la regulacin de la glu-
cosa y la extravasacin de leucocitos en los sitios de inflamacin [228].
Diaminooxidasa
La DAO es una AO dependiente del cobre. Es, principalmente, una enzima intracelular
que se sintetiza preferentemente en la placenta, el rin y el intestino, sobre todo en las
clulas de la mucosa gastrointestinal. Es responsable de la deaminacin oxidativa de
las diaminas como cadaverina y putrescina, algunos de sus derivados, e histamina. La
actividad de la DAO plasmtica puede ser sensible a los cambios del estado del cobre;
ltimamente se ha observado que esta actividad es muy baja en las ratas que se alimen-
tan con una dieta pobre en cobre durante un perodo de 6 meses, y es significativamen-
te diferente en los animales de control que se alimentan con una dieta con un aporte
adecuado de cobre [230]. Para evaluar el patrn de desarrollo de la actividad de la DAO
se us un procedimiento espectrofotomtrico simple y rpido para DAO en el que se
utiliz histamina como sustrato [231]. Otra herramienta en la que la DAO puede ayudar
99
como enzima que contiene cobre, la actividad de la DAO en el plasma fresco, es un
ensayo relativamente simple y puede servir como una forma eficaz para diagnosticar la
deficiencia de cobre en las vacas [232]. La forma secretada se une de forma dependien-
te de heparina a las clulas endoteliales. La DAO tambin oxida la histamina, y por
tanto es importante en la regulacin de la inflamacin y las reacciones alrgicas [230].
Otras aminooxidasas sensibles a la semicarbacida que contienen topa
Las SSAO que contienen topa son principalmente solubles o se expresan en la superficie
celular, tienen diferentes sustratos principales, son insensible o muy poco sensibles a los
inhibidores de MAO clsicos (como clorgilina o deprenilo) e intervienen en diferentes
funciones biolgicas [225]. Aunque estas SSAO estn presentes en las bacterias, las
levaduras y las plantas, as como en los eucariotas superiores, esta discusin se limita a
las enzimas de los mamferos. Histricamente, las SSAO se definieron por su inhibicin
por compuestos reactivos a carbonilo como semicarbacida [233]. Desde entonces se han
descrito muchos otros inhibidores de SSAO [225]. La mayora de las SSAO son gluco-
protenas dimricas con masas moleculares de 140 a 180 kd [223,225].
Aminooxidasas en la hipoxia-reperfusin
Las enzimas DAO y SSAO tienen funciones opuestas en las lesiones por isquemia y
reperfusin. Las SSAO contribuyen al aumento de la formacin de radicales libres,
y las DAO actan como una defensa contra las lesiones causadas por la histamina.
Aminooxidasas sensibles a semicarbacida como enzimas que empeoran
las lesiones por hipoxia-reperfusin
Los investigadores creen que la deaminacin de las aminas endgenas y exgenas por
la SSAO en las lesiones tisulares da lugar a la sobreproduccin de H
2
O
2
. La POL, el
contenido de GSSG, la actividad de SSAO y la liberacin de H
2
O
2
aumentaron en un
grupo con isquemia-reperfusin, mientras que el contenido de GSH, la proporcin
GSH/GSSG y la actividad de las enzimas antioxidantes disminuyeron. La actividad de
SSAO, la liberacin de H
2
O
2
, el contenido de GSSG y la POL disminuyeron notable-
mente en el grupo con precondicionamiento isqumico, mientras que el contenido de
GSH, la proporcin GSH/GSSG y la actividad de las enzimas antioxidantes aumenta-
ron significativamente. Se observ que la actividad de SSAO se relacionaba positiva-
mente con la produccin de H
2
O
2
en todos los grupos de estudio [234].
La diaminooxidasa es una enzima fundamental para el mecanismo
de defensa en la hipoxia-reperfusin
La histamina empeora las lesiones por isquemia-reperfusin. La histamina contribuye al
colapso circulatorio letal tras la oclusin aguda de la arteria mesentrica superior. Cuan-
do se inicia la reperfusin, se libera histamina endgena desde el intestino, al principio
principalmente por los mastocitos [235]. La funcin principal de la DAO es catalizar la
descomposicin de la histamina. En un experimento con conejos se observ que la acti-
vidad de la DAO disminua hasta el 60% tras la isquemia y reperfusin intestinales. Se
observ una relacin entre la respuesta y la dosis entre el inhibidor especfico de DAO
aminoguanidina y la disminucin del tiempo de supervivencia. Las concentraciones plas-
mticas de histamina en la aurcula derecha aumentaron slo ligeramente tras la isque-
VAJDOVICH
100
mia, pero aumentaron considerablemente durante la reperfusin del intestino y permane-
cieron elevadas durante al menos 20 minutos. La disminucin del tiempo de
supervivencia inducida por aminoguanidina se invirti completamente mediante el pre-
tratamiento de los animales con el antagonista del receptor H1 dimetilpiridina y el anta-
gonista del receptor H2 cimetidina [236]. La administracin intravenosa de DAO inhibi
notablemente el aumento de la permeabilidad vascular inducido por la reperfusin, pre-
serv la estructura de los riones y normaliz la tasa de aclaramiento de fenolsulfoftale-
na y creatinina. El uso combinado de difenilhidramina y ranitidina tambin inhibi las
lesiones por reperfusin del rin. Estos resultados indican que la histamina y sus recep-
tores podran desempear funciones crticas en las lesiones por reperfusin tras la isque-
mia del rin [237]. El antagonista H1 clorfenilamina y el antagonista H2 famotidina
tambin inhibieron las lesiones por reperfusin del intestino delgado [238].
TRATAMIENTO DE LAS LESIONES POR HIPOXIA-REPERFUSIN
Los estudios experimentales han revelado que muchos frmacos son eficaces para el tra-
tamiento de las lesiones por hipoxia-reperfusin, pero en el entorno del laboratorio slo
puede imitarse parcialmente la fisiopatogenia clnica de ciertos trastornos. En este momen-
to no pueden hacerse recomendaciones especficas sobre el tratamiento con respecto a
frmacos diseados para imitar la produccin de radicales de oxgeno y sus efectos.
Los radicales libres de oxgeno se producen muy deprisa tras el inicio de la reper-
fusin. Los efectos perjudiciales que producen los radicales libres pueden mejorarse si
los frmacos estn en el tejido en el momento de la reperfusin para que puedan in-
terrumpir la cascada del desarrollo de radicales y as limitar la lesin celular. Los fr-
macos deben administrase por va intravenosa al empezar el tratamiento de shock.
Los abordajes del tratamiento farmacolgico son: 1) el uso de radicales limpiadores,
2) quelacin del hierro, 3) inhibicin de XO, 4) inhibicin de proteasas y 5) uso de
diversos frmacos.
Radicales limpiadores
Antioxidantes utilizados habitualmente
Se han administrado, por va intravenosa, enzimas antioxidantes endgenas, como SOD
y CAT, que normalmente estn presentes a altas concentraciones en las clulas. Para que
estas enzimas eliminen el O
2
y el H
2
O
2
eficazmente en los pacientes, deben alcanzar
concentraciones elevadas (10 g/mL) y deben administrarse de forma continuada, ya que
su semivida es de slo 6 minutos [239]. Ambas enzimas son impermeables a la membra-
na, por lo que no pueden alcanzar y eliminar los radicales de oxgeno que se producen
intracelularmente [185]. ltimamente se ha demostrado que SOD se internaliza por
endocitosis mediada por receptor [240]. El O
2
puede atravesar la membrana, estando

disponible as para reaccionar con SOD o CAT [241]. SOD y CAT pueden conjugarse
con macromolculas inertes (p. ej., Ficoll, dextrano o polietiln glicol) o pueden conju-
garse con los liposomas o ser atrapadas por ellos. La conjugacin de las enzimas antioxi-
dantes con varias macromolculas aumenta su semivida circulante a 30-40 horas [239].
Adems, polietiln glicol facilita la fijacin celular y, posiblemente, la penetracin intra-
celular de las enzimas [242]. Los liposomas que contienen SOD tienen semividas de 2 a
5 horas en la circulacin y de ms de 12 horas en los tejidos. Estos liposomas son absor-
bidos por las clulas, principalmente mediante endocitosis [185].
101
Los estudios demostraron que el pretratamiento con otros limpiadores de radicales
libres de oxgeno (manitol, vitamina C, vitamina E y dimetilsulfxido [DMSO]) pro-
porciona una proteccin significativa contra las lesiones isqumicas del intestino del-
gado. Se sugiri que manitol y SOD podran ser ms adecuados para los trastornos
inflamatorios crnicos. DMSO es un limpiador de HO
. Su metabolito, dimetil sulfuro,

atrapa otros radicales libres derivados de oxgeno. Sin embargo, la eficacia de DMSO
como limpiador de radicales en el contexto de las lesiones por reperfusin es contro-
vertida, ya que adems de ser un limpiador eficaz, DMSO interfiere con la migracin
de los leucocitos y el metabolismo del AA [243,244]. En la isquemia renal experimen-
tal se ha demostrado que los limpiadores de OH
manitol y clorpromazina son protec-

tores [245].
Es ms, otros investigadores demostraron que, en los pacientes que se someten a un
trasplante de rin, la administracin intravenosa de vitaminas C, E, A y del comple-
jo B fue beneficiosa y proporcion una proteccin antioxidante eficaz cuando se reali-
z antes de la reperfusin. Los controles demostraron un aumento transitorio de las
peroxidasas lipdicas del plasma (medido mediante malonaldehdo), con un valor
mximo una hora despus de iniciarse la reperfusin. Si se compara con el valor basal,
el valor de malonaldehdo aument una hora despus de iniciarse la reperfusin. En el
grupo de tratamiento la concentracin plasmtica de malonaldehdo no aument, sino
que disminuy ligeramente, aproximadamente un 20%, comparada con el valor basal.
La diferencia entre los dos grupos en cuanto a las concentraciones plasmticas de
malonaldehdo 1 hora despus de iniciarse la reperfusin fue muy significativa [246].
21-aminoesteroides
Los 21-aminoesteroides, o lazaroides, constituyen otra clase de limpiadores de radica-
les; se han identificado con una U, un nmero y a veces otra letra (p. ej., U-74.006F,
U-74.389G). Estos anlogos tempranos de metilprednisolona carecen de actividad glu-
cocorticoesteroide debido a la sustitucin del grupo 11--hidroxi (p. ej., U-72.099E)
pero inhiben la POL dbilmente. Los lazaroides son los nicos compuestos que poseen
los efectos estabilizadores de la membrana de los glucocorticoesteroides sin los efectos
secundarios dependientes del receptor [247]. Los lazaroides ejercen sus efectos contra
la POL a travs de dos mecanismos, limpieza de radicales libres y estabilizacin de la
membrana [248,249]. Los primeros estudios con animales sobre las lesiones traumti-
cas isqumicas indican que los lazaroides inhiben la POL de la membrana limpiando
los radicales peroxilo, un mecanismo parecido al de la vitamina E [250].
En los modelos experimentales de lesiones craneoenceflicas, el tirilazad dismi-
nuy la produccin de HO
en el cerebro de ratones que haban sufrido una contusin

cerebral y en jerbos que haban sufrido oclusin carotdea bilateral, lo que indica que
el tirilazad tambin puede limpiar el HO
[251,252]. Se ha demostrado que estos

frmacos son eficaces limpiando todos los radicales lipdicos y de oxgeno. Tambin
son ms eficaces que el quelante del hierro deferoxamina unindose e inactivando el
O
2
en el momento de la reperfusin [243,253]. U74500A, que contiene una piridina

sustituida, puede tener una afinidad dbil por el Fe
2+
porque muestra un intercambio
espectral en la solucin que depende de la concentracin de Fe
2+
. Esta afinidad es
predecible, porque U74500A contiene el fragmento molecular N-C = C-N, que gene-
ralmente se asocia a la coordinacin metal-ligando [254]. Es ms, durante las inves-
VAJDOVICH
102
tigaciones del shock endotxico en los perros, los tratados con U-74,006F mantuvie-
ron una presin arterial media, el ndice cardaco, el ndice de volumen sistlico y el
ndice del trabajo sistlico ventricular izquierdo ms altos, y la resistencia vascular
pulmonar ms baja. El flujo sanguneo fraccionario en los lechos mesentrico y renal
tambin fue superior [255].
N-acetilcistena
N-acetilcistena es un frmaco que se origina a partir de sulfhidrilo o GSH. Puede pe-
netrar en las clulas. Es un precursor de GSH capaz de reabastecer rpidamente las
concentraciones intracelulares reducidas de GSH tras su deplecin, aumentando as las
defensas antioxidantes. La administracin de N-acetilcistena conserva la funcin sis-
tlica y mejora la resolucin del edema de miocardio tras la derivacin cardiopulmo-
nar/parada cardiopljica en los perros. Los investigadores demostraron que en los
perros de control el estrs oxidativo (medido por las concentraciones de 8-isoprostano
en el plasma del seno coronario) era significativamente ms alto que los valores basales
30 minutos despus de la derivacin cardiopulmonar, pero que no variaba en el grupo
de la N-acetilcistena. La resolucin del edema de miocardio, medida por el agua mio-
crdica en los tejidos, fue significativamente mayor en el grupo N-acetilcistena 30 minu-
tos despus de la derivacin cardiopulmonar que en el grupo de control [256].
Quelacin del hierro
La deferoxamina quela el hierro ferroso, impidiendo la activacin de la reaccin de
Fenton catalizada por hierro, y por tanto inhibe la produccin de HO
. El tratamiento
con transferrina o deferoxamina cargada de hierro no protege contra las lesiones isqu-
micas [197]. El efecto beneficioso de los quelantes del hierro se debe a la inhibicin de
los radicales ferril o perferril muy reactivos, que se generan por la reaccin del hierro
ferroso con oxgeno, O
2
l, o H
2
O
2
[199]. En uno de los experimentos sobre la isquemia
y la reperfusin realizado en ratas, los investigadores demostraron claramente que el
tratamiento con deferoxamina previene el aumento de las concentraciones de los pro-
ductos de la POL en el tejido intestinal [257].
Inhibicin de xantina oxidasa
Los estudios indican que la enzima XO, que reacciona con hipoxantina, es la fuente
principal de la produccin de radicales oxgeno tras la isquemia intestinal. Los inhibi-
dores de XO (alopurinol, pterina aldehdo y otros) son sustancias poderosas que ate-
nan el aumento de la permeabilidad vascular intestinal inducido por la isquemia. Los
estudios morfomtricos de biopsias obtenidas tras la reperfusin del intestino indicaron
que el pretratamiento con alopurinol prevena en gran medida la necrosis epitelial
intestinal tpica inducida por la isquemia y la reperfusin. La inactivacin de XO por
el cido flico y pterina aldehdo tambin reduce el aumento de la permeabilidad vas-
cular que se observa tras la reperfusin del intestino [196]. Los resultados experimen-
tales requieren una investigacin clnica ms profunda.
Inhibicin de proteasas
La conversin de XDH a XO tambin se ha impedido experimentalmente con inhibi-
dores de proteasa y bloqueadores del calcio. Los inhibidores de proteasas, como apro-
103
tinina, protegen el intestino contra las lesiones tisulares isqumicas y postisqumicas
[189]. Los inhibidores de proteasas tambin pueden bloquear los efectos lesivos de las
proteasas liberadas por los neutrfilos activados que se acumulan tras la isquemia y la
reperfusin intestinal.
Frmacos diversos
Tiazolidinedionas
Los PPAR son receptores nucleares que participan en la regulacin del metabolismo
del substrato energtico y en las respuestas inflamatorias. Los activadores de PPAR-
de tiazolidinediona se han utilizado clnicamente para mejorar la sensibilidad a la insu-
lina y para el control de la glucemia en pacientes con diabetes de tipo 2 [258]. PPAR-
se expresa predominantemente en el tejido adiposo, pero tambin se expresa en el
miocardio [259]. Su funcin en el corazn todava no se conoce; sin embargo, algunas
pruebas indican que la activacin de los PPAR- del miocardio por la tiazolidinediona
puede tener efectos metablicos y antiinflamatorios [260]. Los efectos cardacos,
metablicos y antiinflamatorios del PPAR- se han demostrado en modelos con ratas
y ratones. Se ha observado que la activacin del PPAR- aumenta la expresin de los
transportadores de glucosa en el miocardio para fomentar el uso de los carbohidratos
como sustrato en los miocardiocitos y el corazn intacto [261], y para atenuar la expre-
sin de las citocinas proinflamatorias en los miocardiocitos activados [262], la miocar-
ditis experimental [263] o la insuficiencia ventricular izquierda crnica causada por
infarto de miocardio [264].
Es ms, en la mayora de los estudios (pero no en todos) se ha demostrado que los
activadores del PPAR- de tiazolidinediona reducen el tamao del infarto de miocardio
y mejoran la recuperacin de la funcin contrctil en los corazones de ratas intactas
tras la isquemia y la reperfusin [265267]. Estos hallazgos derivan de los estudios
realizados en modelos normales y resistentes a insulina. La forma de activacin se
dedujo porque las tiazolidinedionas inhiben la inflamacin mediada por neutrfilos.
Los estudios experimentales demostraron que las tiazolidinedionas (es decir, rosiglita-
zona) protegen contra las lesiones cardacas, gastrointestinales y pulmonares tras la
isquemia y la reperfusin, adems de producir una disminucin significativa de la
infiltracin de neutrfilos. Estos informes han dado lugar a la hiptesis de que la inhi-
bicin de la inflamacin mediada por neutrfilos por las tiazolidinedionas participa en
la disminucin de la lesin tisular inducida por la isquemia y la reperfusin [268]. Sin
embargo, otros investigadores observaron que la activacin crnica de PPAR- no tena
efectos protectores en un modelo de isquemia y reperfusin miocrdica en cerdos nor-
males, no diabticos. En este modelo se produjo disfuncin contrctil grave del mio-
cardio, aumento de la expresin de las citocinas proinflamatorios (ARNm y protena)
y deterioro metablico. Todas la anomalas mejoraron tras un pretratamiento con tro-
glitazona (una tiazolidinediona que contiene una mitad de -tocoferol) o con el propio
-tocoferol. Por el contrario, el pretratamiento con rosiglitazona, una tiazolidinediona
que carece de una mitad -tocoferol, no tuvo efectos beneficiosos sobre ninguna varia-
ble medida, incluso aunque rosiglitazona aument la expresin de PPAR- en el mio-
cardio. El anlisis de variables mltiples indic que la presencia de una mitad de
-tocoferol, pero no de una tiazolidinediona, en las sustancia de prueba protegi contra
las lesiones por isquemia-reperfusin [260].
VAJDOVICH
104
Prostaglandina J
2
Un ligando del PPAR-, 15-desoxi-Delta12,14-prostaglandina J
2
(15d-PGJ
2
), inhibi
las lesiones de la mucosa gstrica inducidas por isquemia y reperfusin en las ratas. El
aumento del ndice de erosin fue significativamente inhibido por el pretratamiento
con 15d-PGJ
2
de forma dependiente de la dosis. En este modelo de isquemia y reper-
fusin, el pretratamiento con 15d-PGJ
2
inhibi significativamente el aumento de la
concentracin de MDA, la actividad de MPO y el contenido de TNF- en la mucosa
gstrica [269].
Agonistas del adrenorreceptor 2 y del receptor de DA-1
En un experimento con un modelo canino del shock hemorrgico en el cual se reinfun-
di la sangre que se haba perdido, el hidrocloruro de dopexamina (DPX) previno el
deterioro del flujo sanguneo renal actuando sobre los receptores 2 y DA-1. Esta
capacidad para conservar la funcin tubular fue, principalmente, el resultado de sus
efectos antagnicos sobre los receptores de DA-1. Ms tarde se demostr en un expe-
rimento con ratas que el pretratamiento con DPX mejoraba significativamente la super-
vivencia de forma dependiente de la dosis en aproximadamente un 70%. Ni la dobuta-
mina ni el prenalterol, que son agonistas del adrenorreceptor 1 y, como DPX,
sustancias cronotrpicas e inotrpicas potentes, fueron eficaces para prevenir la toxi-
cidad letal inducida por radicales libres de oxgeno. En una serie independiente, un
agonista selectivo del receptor de DA-1, felodopam, no tuvo efectos protectores, y
un antagonista del receptor de DA-1, SCH-23,390, no antagoniz los efectos ventajo-
sos de DPX. Por el contrario, salbutamol, un agonista selectivo del adrenorreceptor 2,
aument significativamente la supervivencia facilitada por DPX, y un antagonista
selectivo del adrenorreceptor 2, ICI-558,551, atenu significativamente la supervi-
vencia. Estos estudios indican que, a diferencia de lo que ocurre en el shock hemorr-
gico, las propiedades antagonistas del adrenorreceptor 2 son fundamentales para la
capacidad de DPX de atenuar la toxicidad letal, y estos efectos podran estar relacio-
nados con la prevencin de la POL inducida por los radicales libres de oxgeno [270].
Precondicionamiento isqumico
El precondicionamiento isqumico es un mecanismo endgeno que protege los tejidos
mediante el cual episodios cortos de isquemia y reperfusin protegen a los tejidos y las
clulas de la lesin inducida por un perodo sostenido posterior de isquemia. En este
proceso, los tejidos estn preparados para poder afrontar un desafo posterior que
podra causar una lesin por isquemia-reperfusin ms grave. Este proceso puede ver-
se como un entrenamiento antes de una competicin. Quin ganar? Los tejidos o los
mediadores nocivos que se generan durante la isquemia y la reperfusin?
En uno de los primeros estudios que se realizaron sobre el precondicionamiento,
Shiki y Hearse [271] observaron que el corazn de las ratas que se sometieron a
5 minutos de isquemia regional y que mostraron taquicardia ventricular, fibrilacin
ventricular y numerosos complejos ventriculares prematuros durante la reperfusin
mostraron muy pocas arritmias tras un perodo de recuperacin y un segundo episodio
de isquemia y reperfusin. Se observ que la vulnerabilidad a las arritmias durante el
segundo perodo de reperfusin se relacionaba inversamente con la incidencia de arrit-
mias que se haban observado en el primer episodio de reperfusin. Los investigadores
105
propusieron que un perodo muy corto de isquemia y reperfusin precondiciona al
miocardio y, por tanto, influye en la vulnerabilidad del corazn a las arritmias produ-
cidas por un reperfusin posterior.
Otros investigadores administraron SOD a corazones de conejos precondicionados
que haban sufrido un episodio nico de isquemia de 5 minutos y 5 minutos de reperfu-
sin una hora antes de la isquemia y la reperfusin. Los resultados demostraron que
aunque SOD atenu la liberacin de enzimas y la prdida funcional en los corazones de
control, no tuvo efectos sobre los corazones precondicionados, lo que sugiere que es
poco probable que el precondicionamiento est mediado por O
2
en los corazones de
conejo aislados [272]. Investigaron si el efecto protector del precondicionamiento podra
estar relacionado con un aumento de las defensas antioxidantes de los corazones de los
conejos. Las actividades antioxidantes de CAT, GSH-Px, manganeso SOD, cobre/cinc
SOD, glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, GSSG-R y GSH se midieron en regiones
isqumicas y normales tanto de corazones de conejo precondicionados como de control.
Todos los corazones sufrieron 30 minutos de isquemia regional y 5 minutos de reperfu-
sin. No cambi la actividad de ninguna de las enzimas antioxidantes cuando se com-
pararon las zonas no isqumicas y postisqumicas en los corazones no precondiciona-
dos y precondicionados. Por tanto, los investigadores concluyeron que el aumento de las
defensas antioxidantes no es el mecanismo del precondicionamiento [273].
Sin embargo, a pesar de estos hallazgos, otros autores han observado que precondi-
cionar un corazn mediante aturdimientos sucesivos puede dar lugar a un fortalecimien-
to del sistema de defensa oxidativo del corazn, y es probable que este fortalecimiento
desempee una funcin en el mantenimiento del miocardio durante las lesiones poste-
riores por isquemia y reperfusin. En este experimento, el corazn de un cerdo se
someti a cuatro episodios de 5 minutos de aturdimiento ocluyendo la arteria coronaria
descendente anterior izquierda, y a minutos de reperfusin despus de cada aturdi-
miento. Despus se someti el corazn a una isquemia regional durante 60 minutos
mediante oclusin de la arteria descendente izquierda, seguida de 6 horas de reperfu-
sin. El corazn de control se perfundi durante 60 minutos, despus se produjo isque-
mia de 60 minutos y despus 6 horas de reperfusin. Los resultados de los estudios
indicaron estimulacin de un nmero de enzimas antioxidantes, incluyendo mangane-
so SOD, CAT, GSH-Px y GSSG-R, tras el aturdimiento repetido y la reperfusin.
Adems, se expresaron varias protenas nuevas despus de que el corazn fuera pre-
condicionado, incluyendo algunas protenas relacionadas con el estrs oxidativo y la
protena del shock cardaco de 72 kd [274].
Sin embargo, Fu et al. [275] no observaron ningn cambio de las defensas antioxidan-
tes en el miocardio precondicionado. En su experimento, se precondicion un corazn
porcino mediante 2 oclusiones de la arteria coronaria descendente anterior izquierda
media durante 10 minutos, con un intervalo de reperfusin de 30 minutos. Se realizaron
biopsias del ventrculo izquierdo de regiones de control y precondicionadas 30 minutos
despus de la ltima oclusin. Estos hallazgos no apoyan la hiptesis de que el aumento
de las defensas antioxidantes podra contribuir a la cardioproteccin del precondiciona-
miento. Adems, en el miocardio precondicionado se descubri un sistema de sealiza-
cin de receptor mediado por protena G intacto para los receptores -adrenrgicos,
muscarnicos y de endotelina. Los hallazgos pueden continuar debatindose debido a los
diferentes perodos de precondicionamiento y de toma de muestras.
VAJDOVICH
106
Yamashita et al. [276] sugirieron que la induccin de manganeso SOD en los miocitos
mediante precondicionamiento desempea un papel fundamental en la adquisicin de
tolerancia a la isquemia en una fase posterior (24 horas) del precondicionamiento isqu-
mico. Descubrieron que la actividad y el contenido de manganeso SOD en los miocitos
cardacos aumentaban 24 horas despus del precondicionamiento hipxico coincidiendo
con la adquisicin de la tolerancia a la hipoxia. El contenido de manganeso SOD ARNm
tambin aument 20 a 40 minutos despus del precondicionamiento.
Los radicales libres estn entre los diversos desencadenantes y mediadores identifi-
cados del precondicionamiento isqumico. Las ltimas investigaciones han demostra-
do que los radicales libres se generan por mecanismos XO porque el alopurinol blo-
quea totalmente los efectos protectores miocrdicos que se observan en los miocitos
precondicionados. Los investigadores afirman que, como en los hallazgos anteriores,
los radicales de oxgeno que se producen durante el perodo de precondicionamiento
inicial activaron las defensas antioxidantes endgenas (aument la actividad de man-
ganeso SOD) 24 horas despus, contribuyendo a la cardioproteccin posterior al pre-
condicionamiento [277]. Los estudios en animales de experimentacin (ratas y cone-
jos) han demostrado la participacin de los oxirradicales libres en la transduccin de
la seal del precondicionamiento isqumico [278].
LESIONES POR HIPOXIA-REPERFUSIN EN LOS TRASTORNOS
ANIMALES
Dilatacin gstrica-vlvulo en los perros
La dilatacin gstrica-vlvulo (DVG) es una enfermedad tpica de los perros, y con fre-
cuencia es letal. La DVG se caracteriza por shock cardiognico, con hipoperfusin resul-
tante. Los objetivos del tratamiento incluyen la reperfusin de los tejidos que han sufrido
isquemia transitoria, lo que indica que la lesin por reperfusin puede ser un factor de la
fisiopatogenia de la DVG [243]. Tras un estado hipxico considerablemente largo, pueden
producirse lesiones por reperfusin durante o despus de la intervencin. Segn los estu-
dios, los efectos evidentes de las lesiones por reperfusin aparecen 3 horas despus de la
descompresin. Se analizaron la concentracin tisular de ATP, la conductancia de la muco-
sa y los cambios microscpicos. La concentracin de ATP en el fundus no fue muy dife-
rente de la concentracin basal cuando se indujo DVG experimentalmente durante
120 minutos, seguido por descompresin, derrotacin y reperfusin durante 90 minutos,
pero disminuy significativamente por debajo de los valores basales cuando la descompre-
sin dur 210 minutos. La concentracin de ATP en el yeyuno disminuy significativamen-
te por debajo del nivel basal cuando la descompresin dur de 120 a 210 minutos [279].
Se intentaron algunas opciones de tratamiento en los perros que haban sido tratados
con alopurinol (un inhibidor de XO), U74006F (un 21-aminoesteroide, inhibidor expe-
rimental de la POL) o una solucin salina (cloruro sdico al 0,85%). Tres de los ocho
perros del grupo tratado con alopurinol murieron, ninguno de los cinco perros del
grupo tratado con U74006F muri y cuatro de los ocho perros del grupo tratado con la
solucin salina murieron. La concentracin tisular de MDA, un indicador inespecfico
de la POL, fue significativamente mayor que los valores basales en el duodeno, el
yeyuno, el colon, el hgado y el pncreas en los perros tratados con la solucin salina
o alopurinol que en los mismos tejidos de los perros tratados con U74006F tras la
correccin quirrgica de la DVG (es decir, durante la reperfusin) [243]. Los resulta-
107
dos de otro estudio indican que la mortalidad asociada a la DVG inducida experimen-
talmente disminuye si se realiza una intervencin farmacolgica adecuada y en el
momento preciso para prevenir o atenuar las lesiones por reperfusin, y que parece que
deferoxamina es ms eficaz que el limpiador de radicales libres DMSO. De los seis
perros tratados con deferoxamina, sobrevivieron los seis; de los tratados con DMSO,
tres; de los tratados con suero salino, dos [244]. Debido a estos hallazgos, se recomien-
da utilizar medidas protectoras contra las lesiones por los radicales libres en el trata-
miento de la DVG en los perros. El frmaco ms potente parece ser la deferoxamina.
Isquemia intestinal en los caballos
Como ya demostraron Vatistas et al. [253] en el colon grueso equino, las lesiones pro-
gresaron durante la reperfusin del colon delgado tras 60 minutos de isquemia arterio-
venosa completa. A pesar de estos hallazgos no se ha demostrado una modificacin
significativa de los procesos de los radicales libres como consecuencia de la reperfusin.
En este estudio, se obtuvieron muestras de biopsia tisulares de todo el espesor del colon
antes, durante y tras la isquemia, para medir la concentracin de MDA y la actividad de
MPO y para realizar una evaluacin morfolgica del tejido del colon. La concentracin
de MDA y la actividad de MPO aumentaron durante la isquemia y la reperfusin, aun-
que estos aumentos no fueron significativos. En este experimento, los autores distribu-
yeron aleatoriamente 16 caballos en tres grupos: slo vehculo, dosis baja (vehculo y
3 mg de U-74389 G/kg de peso corporal) y dosis alta (vehculo y 10 mg de U-74389 G/kg).
La administracin de 21-aminoesteroide (U-74,389G) no afect la concentracin de
MDA y la actividad de MPO de forma significativa. Sin embargo, con la dosis ms baja
la actividad de MPO tendi a disminuir a los 30 y 60 minutos de la reperfusin. La
administracin de 3 y 10 mg/kg de U-74389G previno la disminucin de la superficie
de la mucosa inducida por la reperfusin, que fue significativa a los 60 y 90 minutos.
Tras la reduccin inicial en los caballos de todos los grupos, el volumen de la mucosa
aument durante los primeros 60 minutos de reperfusin [253]. Este hallazgo se corres-
ponde con un informe anterior (uno de los primeros artculos importantes sobre los
efectos de los radicales libres en el intestino equino en las lesiones por hipoxia-reperfu-
sin) que indica que la administracin sistemtica de DMSO parece ser protectora.
Estos investigadores observaron los efectos fisiolgicos sobre el yeyuno equino de
1 hora de isquemia y 1 hora de reperfusin, y los efectos protectores de la administra-
cin sistemtica de DMSO (1 g/kg de peso corporal) en 18 ponis, utilizando segmentos
neuralmente intactos de yeyuno perfundido con sangre heparinizada a flujo constante.
La administracin de DMSO previno la disminucin de la resistencia vascular intestinal
(R, mmHg/mL/min/100 g) durante la reperfusin [280].
Otros investigadores no observaron lesiones por reperfusin importantes cuando uti-
lizaron modelos de isquemia arteriovenosa [281,282]. Al contrario que Arden et al. [280],
Reeves et al. [281] observaron que los cambios histopatolgicos del colon equino eran
mnimos tras una hora de isquemia. Los cambios progresivos durante el perodo postis-
qumico tambin fueron mnimos tras la obstruccin por estrangulacin isqumica, y
moderados tras la obstruccin por estrangulacin hemorrgica. El tratamiento con DMSO
no tuvo efectos beneficiosos demostrables cuando se evalu mediante histologa, inmu-
nohistoqumica o conservacin de los niveles de GSH en la mucosa. En resumen, en este
estudio no pudo detectarse ninguna lesin por reperfusin tras 60 minutos de isquemia.
VAJDOVICH
108
Wilkins et al. [282] descubrieron que la saturacin media de oxgeno venoso y la PO
2

venosa media en los ponis de experimentacin fueron significativamente inferiores al
final de 2 horas de isquemia y aumentaron significativamente durante la fase de reperfu-
sin del colon equino. La concentracin venosa media de potasio fue significativamente
superior (p < 0,01) durante las fases de isquemia y reperfusin. Las concentraciones de
vitamina E y GSH-Px estaban dentro de los lmites normales en todos los ponis.
Sin embargo, Moore et al. [283], utilizando un modelo isqumico con un flujo arte-
rial bajo, verificaron que algunos parmetros, como el ndice de desechos celulares y
el porcentaje estimado de prdida de la mucosa, fueron significativamente superiores
en los segmentos de colon reperfundidos. Ellos pensaron que era una prueba de lesin
por hipoxia-reperfusin en los caballos con hipoxia intestinal. El porcentaje de altera-
cin de la superficie de la mucosa y de edema de la mucosa tenda a ser mayor duran-
te las primeras fases de la reperfusin (de 3 a 4 horas) y la hemorragia de la mucosa,
medida por el porcentaje de la profundidad de la prdida de la mucosa, y la proporcin
entre las criptas y la mucosa intersticial durante la ltima fase (de 4 a 6 horas) de la
reperfusin en los caballos. El restablecimiento del flujo sanguneo arterial del colon
tras la isquemia con flujo bajo produjo mayor lesin en la mucosa que un perodo
comparable de isquemia continuada. Se detect lesin por reperfusin en el colon
grueso de los caballos tras la isquemia arterial de bajo flujo.
Adems, en 1991, Prichard et al. [284] descubrieron que XO interviene en las lesiones
por isquemia-reperfusin en los caballos. El nivel de actividad de XO se expres como
un porcentaje segn la proporcin XO/(XDH + XO). Los investigadores observaron un
aumento de casi 3 veces en el nivel de actividad combinada de XDH y XO desde el leon
al duodeno. Sin embargo, el valor preisqumico del porcentaje de la actividad de XO no
vari significativamente entre los segmentos del yeyuno y el leon. De la misma forma,
no se observaron diferencias significativas entre los segmentos intestinales despus de la
isquemia. Por tanto, se combinaron los datos procedentes de todos los segmentos intes-
tinales para cada momento y se analizaron. Comparado con el nivel preisqumico (media,
27%), el porcentaje de la actividad de XO aument tras una hora de isquemia (media, 37%)
y alcanz importancia estadstica. No hubo diferencias estadsticas significativas entre el
porcentaje de actividad preisqumica de XO y el porcentaje de actividad de XO en el
intestino no isqumico al final del perodo de anestesia. Durante la isquemia, el porcen-
taje de actividad de XO aument, dando credibilidad a la importancia documentada ante-
riormente de XO en las lesiones por reperfusin en el intestino delgado equino [284].
A pesar de los hallazgos contradictorios, parece que los procesos de los radicales libres
tienen importancia en la isquemia intestinal equina, pero el beneficio de utilizar cualquier
frmaco contra estos procesos todava es cuestionable. Anteriormente se ha sugerido que
la formacin y liberacin de radicales libres en el intestino grueso no puede atribuirse
principalmente al mecanismo XO [245], sino ms bien al mecanismo AOX, porque esta
parte del intestino es rico en AOX. Esta idea no parece que sea completamente vlida,
porque los hallazgos contradictorios que se mencionaron antes se demostraron tanto en
el intestino delgado como en el intestino grueso.
Tromboembolia arterial en los gatos
La tromboembolia arterial es una complicacin comn en los gatos con miocardiopa-
tas. Existen muy pocos artculos sobre los radicales libres y los procesos antioxidantes
109
en esta enfermedad. Se descubri un hallazgo importante relacionado con las concen-
traciones plasmticas de arginina y homocistena en esta enfermedad. En los seres
humanos, las concentraciones plasmticas altas de homocistena y las concentraciones
bajas de vitamina B son factores de riesgo de las enfermedades vasculares perifricas.
Adems, las concentraciones plasmticas bajas de arginina se han relacionado con
disfuncin endotelial. Entre los grupos no se observaron diferencias en cuanto a la
homocistena o el folato. La concentracin media de vitamina B
12
fue inferior en los
gatos con tromboembolia arterial y en los gatos con miocardiopata que en los contro-
les sanos. Las concentraciones plasmticas de arginina fueron ms bajas en los gatos
con tromboembolia arterial que en los gatos con miocardiopata o en los animales
sanos de control [285]. Las concentraciones plasmticas bajas de donantes de NO y
arginina pueden contribuir al aumento de la agregacin plaquetaria en la tromboembo-
lia, que podra inhibirse con NO [210].
Desplazamiento del abomaso en el ganado bovino
Un problema importante para la cra de ganado es el desplazamiento del abomaso en
las vacas lecheras. Como en los hallazgos sobre las lesiones por reperfusin en los
caballos, en el ganado tambin existen hallazgos contradictorios con respecto a este
trastorno, y tambin implican la funcin de los antioxidantes. El estado antioxidante
de los animales puede evaluarse mediante la actividad de SOD en la sangre. Tras la
ciruga, la actividad de SOD disminuye rpidamente, por lo que se ha sugerido que el
tratamiento de las vacas con desplazamiento del abomaso con ascorbato, a-tocoferol o
prednisolona antes de volver a colocar el abomaso mejora el estado antioxidativo y
metablico [286]. Tambin se ha descubierto que la concentracin de selenio en la
sangre no desempea una funcin etiolgica en el desplazamiento del abomaso en las
vacas [287]. En otro estudio sobre esta enfermedad, se realiz una intervencin quirr-
gica abdominal (omentopexia) para corregir el desplazamiento izquierdo del abomaso.
Diez horas antes de la ciruga, se administraron 10 mg de vitamina E/kg de peso cor-
poral por va intramuscular a 10 vacas. El estrs quirrgico produjo un gran aumento
de las concentraciones plasmticas de cortisol y leucocitosis neutroflica en las 5 horas
siguientes a la ciruga. La va que se utiliz para administrar vitamina E no afect a las
concentraciones plasmticas de cortisol ni al recuento de leucocitos [288].
Isquemia de miocardio en los perros
La isquemia de miocardio produce la liberacin de factores quimiotcticos, la migra-
cin de neutrfilos, la peroxidacin de lpidos y la deplecin de limpiadores de radica-
les libres. Los neutrfilos invasores pueden lesionar la vasculatura del miocardio y el
sarcolema produciendo radicales libres de oxgeno. Esta teora se comprob en un
experimento en el que el ibuprofeno limit el tamao del infarto. Se asoci a una nota-
ble disminucin de la acumulacin de leucocitos dentro del miocardio isqumico. La
deplecin de neutrfilos con antisuero produjo una disminucin similar del tamao del
infarto y se acompa de una disminucin de la infiltracin de leucocitos. Una combi-
nacin de limpiadores de radicales libres (SOD ms CAT) disminuy la lesin del
miocardio, tanto si la infusin comenz antes de la oclusin o 75 minutos despus de
la misma [289]. En otro estudio, el mismo grupo de investigacin descubri que la
SOD sola es tan eficaz como la combinacin de SOD y CAT protegiendo al miocardio
VAJDOVICH
110
isqumico reperfundido. El efecto beneficioso de la SOD y el efecto significativo de la
CAT indican que la lesin tisular durante la isquemia y la reperfusin puede estar
mediada en gran parte por O
2
, y no por H
2
O
2
[290].
Lesiones cerebrales
El sndrome de isquemia-reperfusin es un problema fundamental en las lesiones cere-
brales. Se ha documentado que, durante la isquemia y la reperfusin cerebral focales,
se producen algunos sucesos que afectan a la integridad microvascular, como las alte-
raciones de la reactividad de las clulas endoteliales, la activacin del sistema de coa-
gulacin y las interacciones entre los granulocitos y las clulas endoteliales. La pro-
duccin de radicales libres de oxgeno, la expresin de selectina e integrina, la
adherencia intercelular, las respuestas vasomotoras, los cambios de la permeabilidad
endotelial y del sistema de coagulacin, y la activacin de las plaquetas son algunos de
los procesos microvasculares que parece que se desencadenan durante la isquemia y la
reperfusin [291]. Los investigadores sugieren que el aumento de los procesos de LPO,
que parece que se relaciona con la gravedad de la lesin craneoenceflica, acompaa a
la contusin cerebral [292]. Se produjo una disminucin significativa de GSH una hora
despus de la lesin de la mdula espinal, junto con aumento de MDA del 123%, y un
aumento de los 4-hidroxialquenales de ms del 500%, dos productos finales metaesta-
bles de la POL. 24 horas despus de la lesin de la mdula espinal, la concentracin de
MDA volvi a la normalidad, pero la concentracin de 4-hidroxialquenales sigui
siendo elevada. Segn estos resultados, los autores sugieren que: 1) las condiciones que
se observan tras la lesin de la mdula espinal pueden favorecer determinadas vas de
la ruta de la POL, dando lugar a concentraciones diferentes de los productos de la POL
y 2) la magnitud de MDA por s misma no es una prueba adecuada para determinar la
presencia o la magnitud de la POL tras la lesin de la mdula espinal [200].
Bibliografa
Bochsler PN, Slauson DO. Inflammation and repair of tissue. In: Slauson DO, Cooper BJ [1]
editor. Mechanisms of disease. A textbook of comparative general pathology. 3rd edition.
St. Louis (MO): Mosby; 2002;p. 141245.
Shuster DE, Kehrli ME, Ackermann MR, et al. Identification and prevalence of genetic defect [2]
that causes leukocyte adhesion deficiency in Holstein cattle. Proc Natl Acad Sci U S A.
1992;89:92259229.
Dinarello CA. The biology of interleukin-1. [3] Chem Immunol. 1992;51:132.
Dinarello CA. The IL-1 family and inflammatory diseases. [review] [4] Clin Exp Rheumatol.
2002;20(5 Suppl 27):S1S13.
Miller MD, Krangel MS. Biology and biochemistry of the chemokines: a family of chemot- [5]
actic and inflammatory cytokines. Crit Rev Immunol. 1992;12:1746.
Nemeth E, Halasz A, Barath A, et al. Effect of hydrogen peroxide on interleukin-8 synthesis [6]
and death of Caco-2 cells. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2007;29(2):297310.
Rogler G, Brand K, Vogl D, et al. Nuclear factor [7] B is activated in macrophages and epi-
thelial cells of inflammed intestinal mucosa. Gastroenterology. 1998;115:357369.
Hobbie S, Chen LM, Davis RJ, et al. Involvement of mitogen-activated protein kinase path- [8]
ways in the nuclear responses and cytokine production induced by Salmonella typhimurium
in cultured intestinal epithelial cells. J Immunol. 1997;159:55505559.
Matera MG, Calzetta L, Peli A, et al. Immune sensitization of equine bronchus: glutathione, [9]
IL-1beta expression and tissue responsiveness. Respir Res. 2005;6:104.
Jain NC. The neutrophils. In: Essentials of veterinay hematology. Philadelphia: Lea and [10]
Febiger; 1993;p. 222246a.
111
Jain NC. The monocytes and macrophages. In: Essentials of veterinay hematology. Phila- [11]
delphia: Lea and Febiger; 1993;p. 266277b.
Harmon BG, Adams LG, Templeton JW, et al. Macrophage function in mammary glands of [12]
Brucella abortus-infected cows and cows that resisted infection after inoculation of Brucella
abortus. Am J Vet Res. 1989;50:459465.
Kreydiyyeh SI, Al-Sadi R. The signal transduction pathway that mediates the effect of inter- [13]
leukin-1 beta on the Na+-K+-ATPase in LLC-PK1 cells. Pflugers Arch. 2004;448(2):231238[Epub
2004 Feb 17].
Jain NC. The platelets. In: Essentials of veterinary hematology. Philadelphia: Lea and [14]
Febiger; 1993;p. 105132c.
Buyon JP, Philips MR, Merrill JT, et al. Differential phosphorylation of the beta2 integrin [15]
CD11b/CD18 in the plasma and specific granule membranes of neutrophils. J Leukoc Biol.
1997;61(3):313321.
Kalns J, Lane J, Delgado A, et al. Hyperbaric oxygen exposure temporarily reduces Mac-1 [16]
mediated functions of human neutrophils. Immunol Lett. 2002;83(2):125131.
Debenham SL, Millington A, Kijas J, et al. Canine leucocyte adhesion deficiency in Irish red [17]
and white setters. J Small Anim Pract. 2002;43(2):7475.
Nagahata H, Kehrli ME, Murata H, et al. Neutrophil function and pathologic findings in [18]
Holstein calves with leukocyte adhesion deficiency. Am J Vet Res. 1994;55(1):4048.
Tajima M, Irie M, Kirisawa R, et al. The detection of a mutation of CD18 gene in bovine [19]
leukocyte adhesion deficiency (BLAD). J Vet Med Sci. 1993;55(1):145146.
Jrgensen CB, Agerholm JS, Pedersen J, et al. Bovine leukocyte adhesion deficiency in Dan- [20]
ish Holstein-Friesian cattle. I. PCR screening and allele frequency estimation. Acta Vet Scand.
1993;34(3):231236.
McCord JM, Wong K, Stokes SH, et al. Superoxide and inflammation: a mechanism for the [21]
anti-inflammatory activit y of superoxide dismutase. Acta Physiol Scand Suppl.
1980;492:2530.
Snapper JR, Bernard GR, Brigham KL. In vivo oxidants and pulmonary inflammation. [22] Bull Eur
Physiopathol Respir. 1986;22(1):257s260s.
Koutsos EA, Garcia Lopez JC, Klasing KC. Carotenoids from in ovo or dietary sources blunt [23]
systemic indices of the inflammatory response in growing chicks (Gallus gallus domesticus).
J Nutr. 2006;136(4):10271031.
Koutsos EA, Calvert CC, Klasing KC. The effect of an acute phase response on tissue caro- [24]
tenoid levels of growing chickens (Gallus gallus domesticus). Comp Biochem Physiol A Mol
Integr Physiol. 2003;135(4):635646.
Leshchinsky TV, Klasing KC. Profile of chicken cytokines induced by lipopolysaccharide is [25]
modulated by dietary alpha-tocopheryl acetate. Poult Sci. 2003;82(8):12661273.
Stahelin H, Karnovsky ML, Farnham AE, et al. Studies on the interaction between phago- [26]
cytes and tubercle bacilli. III. Some metabolic effects in guinea pigs associated with infec-
tion with tubercle bacilli. J Exp Med. 1957;105(3):265277.
Shepherd VL. The role of the respiratory burst of phagocytes in host defense. [27] Semin Respir
Infect. 1986;1:99106.
Galig T, Babior B. The killing of pathogenes by phagocytes. [28] Annu Rev Med. 1981;32:
313326.
Babior B. Oxygen-dependent microbial killing by phagocytes (first of two parts). [29] N Engl
J Med. 1978;12(298):659668.
Root R, Metcalf J. H2O2 release from human granulocytes during phagocytosis. [30] J Clin
Invest. 1977;60:12661279.
Kakinuma K, Chance B. Spectrophotometric studies on NAD(P)H oxidase and myeloper- [31]
oxidase. Biochim Biophys Acta. 1977;480:96103.
Repine J, Eaton J, Anders M, et al. Generation of hydroxyl radical by chemicals, enzymes [32]
and human phagocytes: an improved detection system using the antiinflammatory agent
dimethyl sulfoxide. J Clin Invest. 1979;64:16421651.
Schaur RJ, Dussing G, Kink E, et al. The lipid peroxidation product 4-hydroxynonenal is formed [33]
byand is able to attractrat neutrophils in vivo. Free Radic Res. 1994;20(6):365373.
VAJDOVICH
112
Placer Z, Cushman L, Johnson B. Estimation of product of lipid peroxidation (malonyl dialde- [34]
hyde) in biochemical systems. Anal Biochem. 1966;16:359364.
Fridovich I. Superoxide radical: an endogenous toxicant. [35] Annu Rev Pharmacol Toxicol.
1983;23:239257.
Aust SD, Svingen BA. The role of iron in enzimatic lipid peroxidation. In: Pryor W editors. [36]
Free radicals in biology. vol. 5:New York: Academic Press; 1982;p. 126.
Park JW, Benna JE, Scott KE, et al. Isolation of a complex of respiratory burst oxidase com- [37]
ponents from resting neutrophil cytosol. Biochemistry. 1994;33:29072911.
Park JW, Ma M, Ruedi JM, et al. The cytosolic components of the respiratory burst oxidase [38]
as a M(r) approximately 240,000 complex that acquires a membrane-binding site during
activation of the oxidase in a cell-free system. J Biol Chem. 1992;267:1732717332.
Bokoch GM. Regulation of the human neutrophil NADPH oxidase by the Rac GTP-binding [39]
proteins. Curr Opin Cell Biol. 1994;6:212218.
Casimar CM, Teahan CG. The respiratory burst of neutrophils and its deficiency. [40]
In: Hellewell PG, Williams TJ editor. Immunopharmacology of neutrophils. London: Aca-
demic Press; 1994;p. 2754.
Babior BM, Kipnes RS, Curnette JT. Biological defense mechanism: the production by leu- [41]
kocytes of superoxide, a potential bactericidal agent. J Clin Invest. 1973;52:741744.
Weiss SJ, Klein R, Slivka A, et al. Chlorination of taurine by human neutrophils. [42] J Clin Invest.
1982;70(3):598607.
Butterworth AE, Thorne KJI. Eosinophils and parasitic diseases. In: Smith H, Cook RM edi- [43]
tor. Immunopharmacology of eosinophils. London: Academic Press; 1993;p. 119150.
Ray R, Shah AM. NADPH oxidase and endothelial cell function. [44] Clin Sci.
2005;109:217226.
Aebischer CP, Pasche I, Jorg A. Nanomolar arachidonic acid influences the respiratory burst in [45]
eosinophils and neutrophils induced by GTP-binding protein. A comparative study of the respira-
tory burst in bovine eosinophils and neutrophils. Eur J Biochem. 1993;218:669677.
Badwey JA, Karnovsky ML. Active oxygen species and the functions of phagocytic leuko- [46]
cytes. Annu Rev Biochem. 1980;49:695726.
Curnette JT, Badwey JA, Robinson JM, et al. Studies on the mechanism of superoxide release [47]
from human neutrophils stimulated with arachidonate. J Biol Chem. 1984;259:1185111857.
Henderson LM, Moule SK, Chappell JB. The immediate activator of the NADPH oxidase is [48]
arachidonate not phosphorylation. Eur J Biochem. 1993;211:157162.
Kita H, Abu Ghazaleh RI, Gleich GJ, et al. Role of pertussis toxin-sensitive G proteins in [49]
stimulus-dependent human eosinophil degranulation. J Immunol. 1991;147:34663473.
Lindsay MA, Giembycz MA. Signal transduction and activation of the NADPH oxidase in [50]
eosinophils. Mem Inst Oswaldo Cruz. 1997;92(Suppl II):115123.
Nagata M, Sedgwick JB, Bates ME, et al. Eosinophil adhesion to vascular cell adhesion [51]
molecule-1 activates superoxide anion generation. J Immunol. 1995;155:21942202.
Von Knethen A, Brune B. Activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma by [52]
nitric oxide in monocytes/macrophages down-regulates p47phox and attenuates the respi-
ratory burst. J Immunol. 2002;169(5):26192626.
Mathy-Hartert M, Bourgeois E, Grlke S, et al. Purification of myeloperoxidase from equine [53]
polymorphonuclear leucocytes. Can J Vet Res. 1998;62(2):127132.
Kettle T, Gedye CA, Hampton MB, et al. Inhibition of myeloperoxidase by benzoic acid [54]
hydrazides. Biochem J. 1995;308(2):559563.
Heinecke JW, Li W, Francis GA, et al. Tyrosyl radical generated by myeloperoxidase cata- [55]
lyzes the oxidative cross-linking of proteins. J Clin Invest. 1993;91:28662872.
Klebanoff SJ. Myeloperoxidase-halide-hydrogen peroxide antibacterial system. [56] J Bacteriol.
1968;95(6):21312138.
Clark RA, Pearson DW. Inactivation of transferrin iron binding capacity by the neutrophil [57]
myeloperoxidase system. J Biol Chem. 1989;264(16):94209427.
Fabia R, ArRajab A, Johansson ML, et al. The effect of exogenous administration of Lacto- [58]
bacillus reuteri R2LC and oat fiber on acetic acid-induced colitis in the rat. Scand J Gastro-
enterol. 1993;28(2):155162.
113
Farber JL, Kyle ME, Coleman JB. Mechanisms of cell injury by activated oxygen species. [59]
Lab Invest. 1990;62:670679.
Morel F, Doussiere J, Vignais PV. The superoxide-generating oxidase of phagocytic cells. [60]
Physiological, molecular and pathological aspects. Eur J Biochem. 1991;201:523546.
Bernofsky C. Nucleotide chloramines and neutrophil-mediated cytotoxicity. [61] FASEB J.
1991;5:295300.
Gaal T, Ribiczeyne-Szabo P, Stadler K, et al. Free radicals, lipid peroxidation and the anti- [62]
oxidant system in the blood of cows and newborn calves around calving. Comp Biochem
Physiol B Biochem Mol Biol. 2006;143(4):391396[Epub 2006 Feb 14].
Jakus J, Kriska T, Vanyur R. Effect of multivitamins in an effervescent preparation on the res- [63]
piratory burst of peritoneal macrophages in mice. Br J Nutr. 2002;87(5):501508.
McTaggart C, Yovich JV, Penhale J, et al. A comparison of foal and adult horse neutrophil [64]
function using flow cytometric techniques. Res Vet Sci. 2001;71(1):7379.
Hauser MA, Koob MD, Roth JA. Variation of neutrophil function with age in calves. [65] Am J Vet
Res. 1986;47(1):152153.
Demmers S, Johannisson A, Grndahl G, et al. Neutrophil functions and serum IgG in grow- [66]
ing foals. Equine Vet J. 2001;33(7):676680.
Ayers JR, Leipold HW, Padgett GA. Lesions in Brangus cattle with Chediak-Higashi syn- [67]
drome. Vet Pathol. 1988;25(6):432436.
Prieur DJ, Collier LL. Inheritance of the Chediak-Higashi syndrome in cats. [68] J Hered.
1981;72(3):175177a.
Prieur DJ, Holland JM, Bell TG, et al. Ultrastructural and morphometric studies of platelets [69]
from cattle with the Chediak-Higashi syndrome. Lab Invest. 1976;35(3):197204.
Kramer JW, Davis WC, Prieur DJ. The Chediak-Higashi syndrome of cats. [70] Lab Invest.
1977;36(5):554562.
Prieur DJ, Collier LL. Morphologic basis of inherited coat-color dilutions of cats. [71] J Hered.
1981;72(3):178182b.
Boxer LA, Watanabe AM, Rister M, et al. Correction of leukocyte function in Chdiak- [72]
Higashi syndrome by ascorbate. N Engl J Med. 1976;295:10411045.
Introne W, Boissy RE, Gahl WA. Clinical, molecular, and cell biological aspects of Chedi- [73]
ak-Higashi syndrome. [review] Mol Genet Metab. 1999;68(2):283303.
Trigg ME, Schugar R. Chediak-Higashi syndrome: hematopoietic chimerism corrects genet- [74]
ic defect. Bone Marrow Transplant. 2001;27(11):12111213.
Pilloud-Dagher MC, Vignais PV. Purification and characterization of an oxidase activating [75]
factor of 63 kilodaltons from bovine neutrophils. Biochemistry. 1991;30(11):27532760.
Pollock JD, Williams DA, Gifford MAC, et al. Mouse model of X-linked chronic granuloma- [76]
tous disease, an inherited defect in phagocyte superoxide production. Nat Genet.
1995;9:202209.
Jouan A, Pilloud-Dagher MC, Fuchs A, et al. A generally applicable ELISA for the detection [77]
and quantitation of the cytosolic factors of NADPH-oxidase activation in neutrophils. Anal
Biochem. 1993;214(1):252259.
Barese CN, Goebel WS, Dinauer MC. Gene therapy for chronic granulomatous disease. [78]
Expert Opin Biol Ther. 2004;4(9):14231434.
Breitschwerdt EB, Brown TT, De Buysscher EV, et al. Rhinitis, pneumonia, and defective neu- [79]
trophil function in the Doberman pinscher. Am J Vet Res. 1987;48(7):10541062.
Grasso PJ, Scholz RW, Erskine RJ, et al. Phagocytosis, bactericidal activity, and oxidative [80]
metabolism of milk neutrophils from dairy cows fed selenium-supplemented and selenium-
deficient diets. Am J Vet Res. 1990;51(2):269274.
Dhur A, Galan P, Hercberg S. Relationship between selenium, immunity and resistance [81]
against infection. Comp Biochem Physiol C. 1990;96(2):271280.
Zwahlen RD, Wyder-Walther M, Roth DR. Fc receptor expression, Concanavalin A capping, [82]
and enzyme content of bovine neonatal neutrophils: a comparative study with adult cattle.
J Leukoc Biol. 1992;51(3):264269.
Craig S, Lopez A, Hoskin D, et al. Meconium inhibits phagocytosis and stimulates respiratory [83]
burst in alveolar macrophages. Pediatr Res. 2005;57(6):813818[Epub 2005 Mar 17].
VAJDOVICH
114
Raidal SL, Love DN, Bailey GD, et al. Effect of single bouts of moderate and high intensity [84]
exercise and training on equine peripheral blood neutrophil function. Res Vet Sci.
2000;68(2):141146.
Brandonisio O, Panunzio M, Faliero SM, et al. Evaluation of polymorphonuclear cell and [85]
monocyte functions in Leishmania infantum-infected dogs. Vet Immunol Immunopathol.
1996;53(12):95103.
McTaggart C, Penhale J, Raidala SL. Effect of plasma transfusion on neutrophil function in [86]
healthy and septic foals. Aust Vet J. 2005;83(8):499505.
Lafrado LJ, Mathes LE, Zack PM, et al. Biological effects of staphylococcal protein A immunother- [87]
apy in cats with induced feline leukemia virus infection. Am J Vet Res. 1990;51(3):482486.
Liu IK, Cheung AT. Immunoglobulin and neutrophil defense against uterine infection in mares [88]
resistant and susceptible to chronic endometritis: a review. J Am Vet Med Assoc.
1986;189(6):700702.
Paape MJ, Miller RH, Ziv G. Pharmacologic enhancement or suppression of phagocytosis [89]
by bovine neutrophils. Am J Vet Res. 1991;52(2):363366.
Crabtree GR, Munck A, Smith KA. Glucocorticoids inhibit expression of Fc receptors on the [90]
human granulocytic cell line HL-60. Nature. 1979;279(5711):338339.
Salgar SK, Paape MJ, Alston-Mills B, et al. Flow cytometric study of oxidative burst activity [91]
in bovine neutrophils. Am J Vet Res. 1991;52(8):12011207.
Pryor W. Free radical reactions and their importance in biochemical systems. [92] Fed Proc.
1973;32:18621869.
Carlin G. Peroxidation of linolenic acid promoted by human polymorphonuclear leucocytes. [93]
J Free Radic Biol Med. 1985;1(4):255261.
Valko M, Leibfritz D, Moncola J, et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological [94]
functions and human disease. [review] Int J Biochem Cell Biol. 2007;39:4484.
Del Maestro R, Thaw HH, Bjork J, et al. Free radicals as mediators of tissue injury. [95] Acta
Physiol Scand Suppl. 1980;492:4357.
Weiss DJ, Klausner JS. Neutrophil-induced erythrocyte injury: a potential cause of erythro- [96]
cyte destruction in the anemia associated with inflammatory disease. Vet Pathol.
1988;25(6):450455.
Fantone JC, Ward PA. Polymorphonuclear leukocyte-mediated cell and tissue injury: oxygen [97]
metabolites and their relations to human disease. [review] Hum Pathol. 1985;16(10):973978.
Lalonde C, Demling RH, Goad ME. Tissue inflammation without bacteria produces increased [98]
oxygen consumption and distant organ lipid peroxidation. Surgery. 1988;104(1):4956.
Gross V, Arndt H, Andus T, et al. Free radicals in inflammatory bowel diseases pathophysi- [99]
ology and therapeutic implications. Hepatogastroenterology. 1994;41(4):320327.
Argenzio RA, Rhoads JM. Reactive oxygen metabolites in piglet cryptosporidiosis. [100] Pediatr
Res. 1997;41(4 Pt 1):521526.
Andreoli SP. Reactive oxygen molecules, oxidant injury and renal disease. [101] Pediatr Nephrol.
1991;5(6):733742.
Diamond JR. The role of reactive oxygen species in animal models of glomerular disease. [102]
[review] Am J Kidney Dis. 1992;19(3):292300.
Mzes M, Bartosiewicz G. Investigations on vitamin E and lipid peroxide status in rheu- [103]
matic diseases. Clin Rheumatol. 1983;2:259264.
Campo GM, Avenoso A, Campo S, et al. Efficacy of treatment with glycosaminoglycans [104]
on experimental collagen-induced arthritis in rats. Arthritis Res Ther. 2003;5(3):R122
R131[Epub 2003 Mar 6].
Ostrakhovitch EA, Afanasev IB. Oxidative stress in rheumatoid arthritis leukocytes: suppres- [105]
sion by rutin and other antioxidants and chelators. Biochem Pharmacol. 2001;62(6):
743746.
Halliwell B, Gutteridge JM, Blake D. Metal ions and oxygen radical reactions in human [106]
inflammatory joint disease. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 1985;311(1152):659671.
Sarban S, Kocyigit A, Yazar M, et al. Plasma total antioxidant capacity, lipid peroxidation, [107]
and erythrocyte antioxidant enzyme activities in patients with rheumatoid arthritis and oste-
oarthritis. Clin Biochem. 2005;38(11):981986[Epub 2005 Sep 16].
115
Ozgocmen S, Sogut S, Ardicoglu O, et al. Serum nitric oxide, catalase, superoxide dis- [108]
mutase, and malondialdehyde status in patients with ankylosing spondylitis. Rheumatol Int.
2004;24(2):8083[Epub 2003 Jun 17].
Gotia S, Popovici I, Hermeziu B. Antioxidant enzymes levels in children with juvenile rheu- [109]
matoid arthritis. Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi. 2001;105(3):499503.
Takahashi T, Kitaoka K, Ogawa Y, et al. Lysosomal dysfunction on hydrogen peroxide- [110]
induced apoptosis of osteoarthritic chondrocytes. Int J Mol Med. 2004;14(2):197200.
Henrotin Y, Kurz B, Aigner T. Oxygen and reactive oxygen species in cartilage degrada- [111]
tion: friends or foes?. [review] Osteoarthr Cartil. 2005;13(8):643654.
Auer DE. An hypothesis on the etiopathogenesis of equine inflammatory joint disease. [112] Vet
Clin Pathol. 1989;18(1):2126.
Deaton CM, Marlin DJ, Smith NC, et al. Breath condensate hydrogen peroxide correlates [113]
with both airway cytology and epithelial lining fluid ascorbic acid concentration in the
horse. Free Radic Res. 2004;38(2):201208a.
Deaton CM, Marlin DJ, Smith NC, et al. Pulmonary epithelial lining fluid and plasma ascor- [114]
bic acid concentrations in horses affected by recurrent airway obstruction. Am J Vet Res.
2004;65(1):8087b.
Deaton CM, Marlin DJ, Deaton L, et al. Comparison of the antioxidant status in tracheal [115]
and bronchoalveolar epithelial lining fluids in recurrent airway obstruction. Equine Vet J.
2006;38(5):417422.
Deaton CM, Marlin DJ, Smith NC, et al. Effect of acute airway inflammation on the pulmo- [116]
nary antioxidant status. Exp Lung Res. 2005;31(7):653670.
Kirschvink N, Smith N, Fievez L, et al. Effect of chronic airway inflammation and exercise [117]
on pulmonary and systemic antioxidant status of healthy and heaves-affected horses. Equine
Vet J. 2002;34(6):563571.
Pavlica Z, Petelin M, Nemec A, et al. Measurement of total antioxidant capacity in gingival crev- [118]
icular fluid and serum in dogs with periodontal disease. Am J Vet Res. 2004;65(11):15841588.
Levitskii AP, Kozlianina NP, Skliar VE. [Lipid peroxidation and antioxidant systems in cat [119]
periodontal tissues]. Vopr Med Khim. 1987;33(1):107111[in Russian].
Briganti S, Picardo M. Antioxidant activity, lipid peroxidation and skin diseases. Whats [120]
new. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2003;17(6):663669.
Tally FP, Stewart PR, Sutter VL, et al. Oxygen tolerance of fresh clinical anaerobic bacteria. [121]
J Clin Microbiol. 1975;1:161164.
Hunt TK, Knighton DR, Price DC, et al. Oxygen in the prevention and treatment of infection. [122]
In: Root RK, Trunkey DD, editors. New surgical and medical approaches in infectious dis-
eases. In: Sande MA, Root RK, series editors. Contemporary issues in infectious diseases.
vol. 6. New York: Churchill Livingstone Inc; 1987. p. 117.
Forman HJ, Thomas MJ. Oxidant production and bactericidal activity of phagocytes. [123] Annu
Rev Physiol. 1986;48:669680.
Knighton DR, Halliday B, Hunt TK. Oxygen as an antibiotic: the effect of inspired oxygen [124]
on infection. Arch Surg. 1984;119:199204.
Altet L, Francino O, Solano-Gallego L, et al. Mapping and sequencing of the canine [125]
NRAMP1 gene and identification of mutations in Leishmaniasis-susceptible dogs. Infect
Immun. 2002;70:27632771.
Nemenoff RA, Winitz S, Qian NX, et al. Phosphorylation and activation of a high molecu- [126]
lar weight form of phospholipase A2 by p42 microtubule-associated protein 2 kinase and
protein kinase C. J Biol Chem. 1993;268(3):19601964.
Steffen MJ, Holt SC, Ebersole JL. Porphyromonas gingivalis induction of mediator and [127]
cytokine secretion by human gingival fibroblasts. Oral Microbiol Immunol.
2000;15(3):172180.
Mayes PA, et al. Metabolism of unsaturated fatty acids and eicosanoids. In: Mur- [128]
ray RK, Granner DK, Mayes PA editor. Harpers biochemistry. 25th edition. New York:
McGraw-Hill; 2000;p. 250.
Six DA, Dennis EA. The expanding superfamily of phospholipase A(2) enzymes: classifica- [129]
tion and characterization. Biochim Biophys Acta. 2000;1488(12):119.
VAJDOVICH
116
Luo SF, Lin WN, Yang CM, et al. Induction of cytosolic phospholipase A2 by lipopolysac- [130]
charide in canine tracheal smooth muscle cells: involvement of MAPKs and NF-kappaB
pathways. Cell Signal. 2006;18(8):12011211[Epub 2005 Nov 8].
Caro AA, Cederbaum AI. Role of cytochrome P450 in phospholipase A2- and arachidonic [131]
acid-mediated cytotoxicity. Free Radic Biol Med. 2006;40(3):364375.
Kennedy JH, Korn N, Thurston RJ. Prostaglandin levels in seminal plasma and sperm extracts [132]
of the domestic turkey, and the effects of cyclooxygenase inhibitors on sperm mobility.
Reprod Biol Endocrinol. 2003;1:74.
Chen JX, Berry LC, Christman BW, et al. Glutathione mediates LPS-stimulated COX-2 expres- [133]
sion via early transient p42/44 MAPK activation. J Cell Physiol. 2003;197(1):8693.
Zubay GL, Parson WW, Vance DE. Principles of biochemistry. Part 5. Metabolism of lipids. [134]
Dubuque (IA): Wm C. Brown Communications, Inc.; 1995; p. 454.
Elango EM, Asita H, Nidhi G, et al. Inhibition of cyclooxygenase-2 by diallyl sulfides (DAS) [135]
in HEK 293T cells. J Appl Genet. 2004;45(4):469471.
Nakao S, Ogtata Y, Shimizu E, et al. Tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha)-induced prostag- [136]
landin E2 release is mediated by the activation of cyclooxygenase-2 (COX-2) transcription via
NFkappaB in human gingival fibroblasts. Mol Cell Biochem. 2002;238(12):1118.
Olson CE, Chen MC, Amirian DA, et al. Oxygen metabolites modulate prostaglandin E2 pro- [137]
duction by isolated gastric mucosal cells. Am J Physiol. 1989;256(5 Pt 1):G925G930.
Cao YZ, Reddy CC, Sordillo LM. Altered eicosanoid biosynthesis in selenium-deficient [138]
endothelial cells. Free Radic Biol Med. 2000;28(3):381389.
Sanderud J, Oroszlan G, Bjoro K, et al. D-penicillamine inhibits the action of reactive oxy- [139]
gen species in the pig pulmonary circulation. J Perinat Med. 1995;23(5):385393.
Sala A, Zarini S, Bolla M. Leukotrienes: lipid bioeffectors of inflammatory reactions. [140] Bio-
chemistry (Mosc). 1998;63(1):8492.
Strom H, Thomsen MK. Effects of non-steroidal anti-inflammatory drugs on canine neutrophil [141]
chemotaxis. J Vet Pharmacol Ther. 1990;13(2):186191.
Nishimura K, Tsumagari H, Morioka A, et al. Regulation of apoptosis through arachidonate [142]
cascade in mammalian cells. Appl Biochem Biotechnol. 2002;102103(16):239250.
Watanabe T, Nishiyama M, Hori T, et al. Ebselen (DR3305) ameliorates delayed cerebral [143]
vasospasm in a canine two-hemorrhage model. Neurol Res. 1997;19(5):563565.
Ohkawa S, Terao S, Terashita Z, et al. Dual inhibitors of thromboxane A2 synthase and [144]
5-lipoxygenase with scavenging activity of active oxygen species. Synthesis of a novel
series of (3-pyridylmethyl)benzoquinone derivatives. J Med Chem. 1991;34(1):267276.
Surai PF. Vitamin E in avian reproduction. [145] Poultry and Avian Biology Reviews.
1999;10:160.
Westermarck T, Antila E, Atroshi F. Vitamin E therapy in neurological diseases. [146]
In: Packer L, Fuchs J editor. Vitamin E in health and disease. New York: Marcel Dekker;
1993;p. 799807.
Greenberg-Levy SH, Budowski P, Grossman S. Lipoxygenase and other enzymes of arachi- [147]
donic acid metabolism in the brain of chicks affected by nutritional encephalomalacia. Int J
Biochem. 1993;25(3):403409.
Logas D. Are fatty acids effective in canine atopic dermatitis: an evidence-based medicine [148]
update. In: Proceedings of the 2006 Hills Symposium on Dermatology. Supported by an
educational grant from Hills Pet Nutrition, Inc. Topeka (KS): 2006 Educational Concepts,
LLC. 2006. p. 1623.
Iraz M, Erdogan H, Ozyurt B, et al. Brief communication: omega-3 essential fatty acid sup- [149]
plementation and erythrocyte oxidant/antioxidant status in rats. Ann Clin Lab Sci.
2005;35(2):169173.
Fisher M, Levine PH, Weiner BH, et al. Dietary n-3 fatty acid supplementation reduces super- [150]
oxide production and chemiluminescence in a monocyte-enriched preparation of leuko-
cytes. Am J Clin Nutr. 1990;51(5):804808.
Arita K, Kanno T, Takehara Y, et al. Effect of n-3 and n-6 polyunsaturated fatty acids and [151]
their ethylesters on stimuli-dependent superoxide generation in neutrophils. Physiol Chem
Phys Med NMR. 2001;33(2):121132.
117
Ohata T, Fukuda K, Takahashi M, et al. Suppression of nitric oxide production in lipopoly- [152]
saccharide-stimulated macrophage cells by omega 3 polyunsaturated fatty acids. Jpn J Can-
cer Res. 1997;88(3):234237.
Schneider SM, Fung VS, Palmblad J, et al. Activity of the leukocyte NADPH oxidase in [153]
whole neutrophils and cell-free neutrophil preparations stimulated with long-chain polyun-
saturated fatty acids. Inflammation. 2001;25(1):1723.
Palombo JD, DeMichele SJ, Boyce PJ, et al. Effect of short-term enteral feeding with eicos- [154]
apentaenoic and gamma-linolenic acids on alveolar macrophage eicosanoid synthesis and
bactericidal function in rats. Crit Care Med. 1999;27(9):19081915.
Mayer K, Fegbeutel C, Hattar K, et al. Omega-3 vs. omega-6 lipid emulsions exert differential [155]
influence on neutrophils in septic shock patients: impact on plasma fatty acids and lipid mediator
generation. Intensive Care Med. 2003;29(9):14721481[Epub 2003 Jul 25].
Spector AA, Fang X, Snyder GD, et al. Epoxyeicosatrienoic acids (EETs): metabolism and [156]
biochemical function. [review] Prog Lipid Res. 2004;43(1):5590.
Pratt DA, Mills JH, Porter NA. Theoretical calculations of carbon-oxygen bond dissociation [157]
enthalpies of peroxyl radicals formed in the autoxidation of lipids. J Am Chem Soc.
2003;125(19):58015810.
Loida PJ, Sligar SG. Molecular recognition in cytochrome P-450: mechanism for the control [158]
of uncoupling reactions. Biochemistry. 1993;32(43):1153011538.
Stief TW, Kurz J, Doss MO, et al. Singlet oxygen inactivates fibrinogen, factor V, factor VIII, [159]
factor X, and platelet aggregation of human blood. Thromb Res. 2000;97(6):473480.
Ward PA, Till GO, Hatherill JR, et al. Systemic complement activation, lung injury, and prod- [160]
ucts of lipid peroxidation. J Clin Invest. 1985;76(2):517527.
Oldham KT, Guice KS, Till GO, et al. Activation of complement by hydroxyl radical in [161]
thermal injury. Surgery. 1988;104(2):272279.
Turnage RH, Magee JC, Guice KS, et al. Complement activation by the hydroxyl radical [162]
during intestinal reperfusion. Shock. 1994;2(6):445450.
Tengerdy RP, Nockels CF. The effect of vitamin E on egg production, hatchability and [163]
humoral immune response of chickens. Poult Sci. 1973;52(2):778783.
Cathcart RF. The vitamin C treatment of allergy and the normally unprimed state of antibod- [164]
ies. Med Hypotheses. 1986;21(3):307321.
Hewitt SD, Lunec J, Morris CJ, et al. Effect of free radical altered IgG on allergic inflamma- [165]
tion. Ann Rheum Dis. 1987;46(11):866874.
Griot C, Brge T, Vandevelde M, et al. Antibody-induced generation of reactive oxygen [166]
radicals by brain macrophages in canine distemper encephalitis: a mechanism for bystand-
er demyelination. Acta Neuropathol. 1989;78(4):396403.
Iles KE, Forman HJ. Macrophage signaling and respiratory burst. [167] Immunol Res. 2002;
26(13):95105.
Teissier E, Nohara A, Chinetti G, et al. Peroxisome proliferatoractivated receptor- [168] induces
NADPH oxidase activity in macrophages, leading to the generation of LDL with PPAR-
activation properties. Circ Res. 2004;95:1174.
Naito Y, Takagi T, Matsuyama K, et al. Pioglitazone, a specific PPAR-gamma ligand, inhib- [169]
its aspirin-induced gastric mucosal injury in rats. Aliment Pharmacol Ther.
2001;15(6):865873.
Genovese T, Mazzon E, Di Paola R, et al. Role of endogenous ligands for the peroxisome [170]
proliferators activated receptors alpha in the secondary damage in experimental spinal cord
trauma. Exp Neurol. 2005;194(1):267278.
Cuzzocrea S, Pisano B, Dugo L, et al. Rosiglitazone, a ligand of the peroxisome proliferator- [171]
activated receptor-gamma, reduces acute inflammation. Eur J Pharmacol. 2004 Jan
1;483(1):7993.
Sanchez-Hidalgo M, Martin AR, Villegas I, et al. Rosiglitazone, an agonist of peroxisome [172]
proliferator-activated receptor gamma, reduces chronic colonic inflammation in rats. Bio-
chem Pharmacol. 2005;69(12):17331744.
Stewart AG, Phan LH, Grigoriadis G. Physiological and pathophysiological roles of nitric [173]
oxide. Microsurgery. 1994;15(10):693702.
VAJDOVICH
118
Koppenol WH. Thermodynamics of reactions involving nitrogen-oxygen compounds. [174] Meth
Enzymol. 1996;268:712.
Miller MJ, Sadowska-Krowicka H, Chotinaruemol S, et al. Amelioration of chronic ileitis by [175]
nitric oxide synthase inhibition. J Pharmacol Exp Ther. 1993;264(1):1116.
Knowles RG, Moncada S. Nitric oxide synthases in mammals. [176] Biochem J. 1994;298(Pt
2):249258.
Schini VB, Busse R, Vanhoutte PM. Inducible nitric oxide synthase in vascular smooth muscle. [177]
Arzneimittelforschung. 1994;44(3A):432435.
Kalil AC, Sevransky JE, Myers DE, et al. Preclinical trial of L-arginine monotherapy alone or [178]
with N-acetylcysteine in septic shock. Crit Care Med. 2006;34(11):27192728.
Horton RA, Ceppi ED, Knowles RG, et al. Inhibition of hepatic gluconeogenesis by nitric [179]
oxide: a comparison with endotoxic shock. Biochem J. 1994;299(Pt 3):735739.
Keaney JF, Puyana JC, Francis S, et al. Methylene blue reverses endotoxin-induced hypoten- [180]
sion. Circ Res. 1994;74(6):11211125.
Haswell-Elkins MR, Satarug S, Tsuda M, et al. Liver fluke infection and cholangiocarcinoma: [181]
model of endogenous nitric oxide and extragastric nitrosation in human carcinogenesis.
Mutat Res. 1994;305(2):241252.
Eisenstein TK, Huang D, Meissler JJ, et al. Macrophage nitric oxide mediates immunosup- [182]
pression in infectious inflammation. Immunobiology. 1994;191(45):493502.
Taubert D, Berkels R, Grosser N, et al. Aspirin induces nitric oxide release from vascular [183]
endothelium: a novel mechanism of action. Br J Pharmacol. 2004;143(1):159165.
Paquette DW, Rosenberg A, Lohinai Z, et al. Inhibition of experimental gingivitis in Beagle [184]
dogs with topical mercaptoalkylguanidines. J Periodontol. 2006;77(3):385391.
Schoenberg MH, Beger HG. Reperfusion injury after intestinal ischemia. [185] Crit Care Med.
1993;21(9):13761386.
Bounous G. Role of the intestinal contents in the pathophysiology of acute intestinal ischemia. [186]
[review] Am J Surg. 1967;114(3):368375.
Granger DN, Sennett M, McElearney P, et al. Effect of local arterial hypotension on cat [187]
intestinal capillary permeability. Gastroenterology. 1980;79(3):474480.
Schoenberg MH, Muhl E, Sellin D, et al. Posthypotensive generation of superoxide free [188]
radicalspossible role in the pathogenesis of the intestinal mucosal damage. Acta Chir
Scand. 1984;150(4):301309.
Bounous G. Pancreatic proteases and oxygen-derived free radicals in acute ischemic enter- [189]
opathy. Surgery. 1986;99(1):9294.
Haglind E, Haglund U, Lundgren O, et al. Graded intestinal vascular obstruction. IV. An [190]
analysis of the pathophysiology in the development of refractory shock. Circ Shock.
1981;8(6):635646.
Lantz GC. Oxygen free radicals and reperfusion injury. Special therapy. In: Bonagura JD [191]
editors. Kirks current veterinary therapy XII. Small animal practice. Philadelphia: W.B. Saun-
ders Company; 1995;p. 6467.
Zhi-Yong S, Dong YL, Wang XH. Bacterial translocation and multiple system organ failure in [192]
bowel ischemia and reperfusion. J Trauma. 1992;32(2):148153.
Schoenberg MH, Fredholm BB, Haglund U, et al. Studies on the oxygen radical mechanism [193]
involved in the small intestinal reperfusion damage. Acta Physiol Scand.
1985;124(4):581589.
Roy RS, McCord JM. Superoxide and Ischemia: conversion of xanthine dehydrogenase to [194]
xanthine oxidase. In: Greenwald RA, Cohen G editor. Oxy radicals and their scavenger
systems, vol. 2. Cellular and medical aspects. New York: Elsevier Science Publishing;
1983;p. 145153.
Parks DA, Williams TK, Beckman JS. Conversion of xanthine dehydrogenase to oxidase in [195]
ischemic rat intestine: a reevaluation. Am J Physiol. 1988;254(5 Pt 1):G768G774.
Granger DN, McCord JM, Parks DA, et al. Xanthine oxidase inhibitors attenuate ischemia-induced [196]
vascular permeability changes in the cat intestine. Gastroenterology. 1986;90(1):8084a.
Hernandez LA, Grisham MB, Granger DN. A role for iron in oxidant-mediated ischemic [197]
injury to intestinal microvasculature. Am J Physiol. 1987;253(1 Pt 1):G49G53.
119
Vasko KA, DeWall RA, Riley AM. Effect of allopurinol in renal ischemia. [198] Surgery.
1972;71(5):787790.
Aust SD, White BC. Oxygen free radicals in medicine and biology. [199] Advances in Free
Radical Biology & Medicine. 1985;1:117.
Lucas JH, Wheeler DG, Guan Z, et al. Effect of glutathione augmentation on lipid peroxida- [200]
tion after spinal cord injury. J Neurotrauma. 2002;19(6):763775[Erratum in: J Neurotrauma
2003;20(1):121].
Grisham MB, Granger DN. Neutrophil-mediated mucosal injury. Role of reactive oxygen [201]
metabolites. Dig Dis Sci. 1988;33(3 Suppl):6S15S.
Leonard MO, Kieran NE, Howell K, et al. Reoxygenation-specific activation of the antioxi- [202]
dant transcription factor Nrf2 mediates cytoprotective gene expression in ischemia-reper-
fusion injury. FASEB J. 2006;20(14):26242626.
Schoenberg MH, Paes E. Intestinal ischemia and reperfusion. [203] Progress in Applied Microcir-
culation. 1989;13:109125.
Schoenberg MH, Oettinger W, Mohr A. The development of the prostaglandin metabolism [204]
during intestinal ischemia and reperfusion. Eur Surg Res. 1986;18:2526.
Otamiri T, Franzen L, Lindmark D, et al. Increased phospholipase A2 and decreased lyso- [205]
phospholipase activity in the small intestinal mucosa after ischaemia and revascularisation.
Gut. 1987;28(11):14451453.
Buerke M, Schwertz H, Langin T, et al. Proteome analysis of myocardial tissue following [206]
ischemia and reperfusioneffects of complement inhibition. Biochim Biophys Acta.
2006;1764(10):15361545.
Weglicki WB, Phillips TM, Mak IT, et al. Cytokines, neuropeptides, and reperfusion injury [207]
during magnesium deficiency. Ann N Y Acad Sci. 1994;723:246257.
Wooda PL, Khana MA, Moskala JR, et al. Aldehyde load in ischemiareperfusion brain [208]
injury: neuroprotection by neutralization of reactive aldehydes with phenelzine. Brain Res.
2006;1122(1):184190.
Mirza MH, Oliver JL, Seahorn TL, et al. Detection and comparison of nitric oxide in clini- [209]
cally normal horses and those with naturally acquired small intestinal strangulation obstruc-
tion. Can J Vet Res. 1999;63(4):230240.
Johnson G, Tsao PS, Lefer AM. Cardioprotective effects of authentic nitric oxide in myocar- [210]
dial ischemia with reperfusion. Crit Care Med. 1991;19(2):244252.
Kubes P. Ischemia-reperfusion in feline small intestine: a role for nitric oxide. [211] Am J Physiol.
1993;264:143149.
Brady AJ, Poole-Wilson PA, Harding SE, et al. Nitric oxide production within cardiac myo- [212]
cytes reduces their contractility in endotoxemia. Am J Physiol. 1992;263(6 Pt 2):H1963
H1966.
Adkins WK, Taylor AE. Role of xanthine oxidase and neutrophils in ischemia-reperfusion [213]
injury in rabbit lung. J Appl Phys. 1990;69(6):20122018.
Hsu LC, Chang WC, Yoshida A. Cloning of a cDNA encoding human ALDH7, a new [214]
member of the aldehyde dehydrogenase family. Gene. 1994;151(12):285289.
Hempel J, Nicholas H, Lindahl R. Aldehyde dehydrogenases: widespread structural and [215]
functional diversity within a shared framework. Protein Sci. 1993;2:18901900.
Wall TL, Peterson CM, Peterson KP, et al. Alcohol metabolism in Asian-American men with [216]
genetic polymorphisms of aldehyde dehydrogenase. Ann Intern Med. 1997;127(5):376379.
Pinazo-Durna MD, Verdejoa C, Azorna I, et al. Colocalization of aldehyde dehydroge- [217]
nases and Fe/NADPH-induced lipid peroxidation in tissue sections of rat retina. Ophthalmic
Res. 2000;32:6168.
Wierzchowski J, Wroczynski P, Laszuk K, et al. Fluorimetric detection of aldehyde dehydro- [218]
genase activity in human blood, saliva, and organ biopsies and kinetic differentiation
between class I and class III isozymes. Anal Biochem. 1997;245(1):6978.
Jalkanen S, Salmi M. Cell surface monoamine oxidases: enzymes in search of a function. [219]
EMBO J. 2001;20(15):38933901.
Shih JC, Chen K, Ridd MJ. Role of MAO A and B in neurotransmitter metabolism and behav- [220]
ior. Pol J Pharmacol. 1999;51(1):2529.
VAJDOVICH
120
Seiler N. Polyamine metabolism. [221] Digestion. 1990;46(Suppl 2):319330.
Seiler N. Catabolism of polyamines. [222] Amino Acids. 2004;26(3):217233[Epub 2004
Apr 20].
Klinman JP, Mu D. Quinoenzymes in biology. [223] Annu Rev Biochem. 1994;63:299344.
Klinman JP. New quinocofactors in eukaryotes. [224] J Biol Chem. 1996;271(44):2718927192.
Lyles GA. Mammalian plasma and tissue-bound semicarbazide-sensitive amine oxidases: [225]
biochemical, pharmacological and toxicological aspects. Int J Biochem Cell Biol. 1996;
28(3):259274.
Gong B, Boor PJ. The role of amine oxidases in xenobiotic metabolism. [226] Expert Opin Drug
Metab Toxicol. 2006;2(4):559571.
Brazeau BJ, Johnson BJ, Wilmot CM. Copper-containing amine oxidases. Biogenesis and [227]
catalysis; a structural perspective. Arch Biochem Biophys. 2004;428(1):2231.
Boomsma F, Hut H, Bagghoe U, et al. Semicarbazide-sensitive amine oxidase (SSAO): from [228]
cell to circulation. Med Sci Monit. 2005;11(4):RA122RA126.
Wilmot CM. Oxygen activation in a copper-containing amine oxidase. [229] Biochem Soc Trans.
2003;31(Pt 3):493496.
Kehoe CA, Faughnan MS, Gilmore WS, et al. Plasma diamine oxidase activity is greater [230]
in copper-adequate than copper-marginal or copper-deficient rats. J Nutr. 2000;130(1):
3033.
Kazmierczak SC, Robertson AF. Evaluation of a spectrophotometric method for measure- [231]
ment of activit y of diamine oxidase in newborn infants. Ann Clin Lab Sci.
1992;22(3):155161.
Legleiter LR, Spears JW. Plasma diamine oxidase: a biomarker of copper deficiency in the [232]
bovine. J Anim Sci. 2007;85(9):21982204.
Tabor CW, Tabor H, Rosenthal SM. Purification of amine oxidase from beef plasma. [233] J Biol
Chem. 1954;208(2):645661.
Ucar G, Topaloglu E, Burak Kandilci H, et al. Elevated semicarbazide-sensitive amine oxi- [234]
dase (SSAO) activity in lung with ischemia-reperfusion injury: protective effect of ischemic
preconditioning plus SSAO inhibition. Life Sci. 2005;78(4):421427.
Kaszaki J, Boros M, Szabo A, et al. Role of histamine in the intestinal flow response follow- [235]
ing mesenteric ischemia. Shock. 1994;2(6):413420.
Kusche J, Lorenz W, Stahlknecht CD, et al. Intestinal diamine oxidase and histamine release [236]
in rabbit mesenteric ischemia. Gastroenterology. 1981;80(5 pt 1):980987.
Kaneko H, Koshi S, Hiraoka T, et al. Inhibition of post-ischemic reperfusion injury of the [237]
kidney by diamine oxidase. Biochim Biophys Acta. 1998;1407(3):193199.
Koshi S, Inoue M, Obayashi H, et al. Inhibition of post-ischemic reperfusion injury of the [238]
small intestine by diamine oxidase. Biochim Biophys Acta. 1991;1075(3):231236.
Abuchowski A, McCoy JR, Palczuk NC, et al. Effect of covalent attachment of polyethylene [239]
glycol on immunogenicity and circulating life of bovine liver catalase. J Biol Chem.
1977;252(11):35823586.
Dini L, Rotilio G. Electron microscopic evidence for endocytosis of superoxide dismutase by [240]
hepatocytes using protein- gold adducts. Biochem Biophys Res Commun.
1989;162(3):940944.
Hassan HM, Fridovich I. Paraquat and [241] Escherichia coli. Mechanism of production of extra-
cellular superoxide radical. J Biol Chem. 1979;254(21):1084610852.
Beckman JS, Freeman BA. Antioxidant enzymes as mechanistic probes of oxygen-depend- [242]
ent toxicity. In: Taylor AE, Matalon S, Ward PA editor. Physiology of oxygen radicals.
Clinical physiology series. Baltimore: American Physiological Society, Williams and Wilkins;
1987;p. 3953.
Badylak SF, Lantz GC, Jeffries M. Prevention of reperfusion injury in surgically induced [243]
gastric dilatation-volvulus in dogs. Am J Vet Res. 1990;51(2):294299.
Lantz GC, Badylak SF, Hiles MC, et al. Treatment of reperfusion injury in dogs with experi- [244]
mentally induced gastric dilatation-volvulus. Am J Vet Res. 1992;53(9):15941598.
Parks D, Bulkley G, Granger D. Role of oxygen-derived free radicals in digestive tract dis- [245]
ease. Surgery. 1983;3(94):415422.
121
Rabl H, Khoschsorur G, Colombo T, et al. A multivitamin infusion prevents lipid peroxidation [246]
and improves transplantation performance. Kidney Int. 1993;4(43):912917.
Kavanagh RJ, Kam PC. Lazaroids: efficacy and mechanism of action of the 21-aminosteroids [247]
in neuroprotection. Br J Anaesth. 2001;86(1):110119.
Hall ED, Pazara KE, Braughler JM. Effect of tirilazad mesylate on postischaemic brain lipid [248]
peroxidation and recovery of extracellular calcium in gerbils. Stroke. 1991;22:361366.
Sato PH, Hall ED. Tirilazad mesylate protects vitamin C and E in brain ischaemia reperfusion [249]
injury. J Neurochem. 1992;58:22632268.
Braughler JM, Pregenzer JF. The novel 21-aminosteroid inhibitors of lipid peroxidation: reac- [250]
tion with lipid peroxyl and phenoxyl radicals. Free Radic Biol Med. 1989;7:125130.
Clark WM, Hotan T, Lauten J, et al. Therapeutic efficacy of tirilazad in experimental multiple [251]
cerebral emboli: a randomized, controlled trial. Crit Care Med. 1994;22(7):11611166.
Hall ED, Yonkers PA, Andrus PK, et al. Biochemistry and pharmacology of lipid antioxidants [252]
in acute brain and spinal cord injury. J Neurotrauma. 1992;9:425442.
Vatistas NJ, Snyder JR, Hildebrand SV, et al. Effects of the 21-aminosteroid U-74389G on [253]
ischemia and reperfusion injury of the ascending colon in horses. Am J Vet Res. 1993;
54(12):21552160.
Braughler JM, Pregenzer JF, Chase RL, et al. Novel 21-amino steroids as potent inhibitors of [254]
iron-dependent lipid peroxidation. J Biol Chem. 1987;262(22):1043810440.
Zhang H, Spapen H, Manikis P, et al. Tirilazad mesylate (U-74006F) inhibits effects of endo- [255]
toxin in dogs. Am J Physiol. 1995;268(5 Pt 2):H1847H1855.
Fischer UM, Cox CS, Allen SJ, et al. The antioxidant N-acetylcysteine preserves myocardial [256]
function and diminishes oxidative stress after cardioplegic arrest. J Thorac Cardiovasc Surg.
2003;126(5):14831488.
Balogh N, Krausz F, Levai P, et al. Effect of deferoxamine and L-arginine treatment on lipid peroxida- [257]
tion in an intestinal ischaemia-reperfusion model in rats. Acta Vet Hung. 2002;50(3):343356.
Martens FM, Visseren FL, Lemay J, et al. Metabolic and additional vascular effects of thia- [258]
zolidinediones. Drugs. 2002;62:14631480.
Gilde AJ, Van Bilsen M. Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs): regulators of [259]
gene expression in heart and skeletal muscle. Acta Physiol Scand. 2003;178:425434.
Xu Y, Gen M, Lu L, et al. PPAR-gamma activation fails to provide myocardial protection in ischemia [260]
and reperfusion in pigs. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2005;288(3):H1314H1323.
Bhr M, Spelleken M, Bock M, et al. Acute and chronic effects of troglitazone on isolated [261]
rat ventricular cardiocytes. Diabetologia. 1996;39:766774.
Takano H, Nagai T, Asakawa M, et al. Peroxisome proliferator-activated receptor activators [262]
inhibit lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor- expression in neonatal rat myo-
cytes. Circ Res. 2000;87:596602.
Yuan Z, Liu Y, Liu Y, et al. Peroxisome proliferation-activated receptor-ligands ameliorate [263]
experimental autoimmune myocarditis. Cardiovasc Res. 2003;59:685694.
Shiomi T, Tsutsui H, Hayashidani S, et al. Pioglitazone, a peroxisome proliferator-activated [264]
receptor-agonist, attenuates left ventricular remodeling and failure after experimental myo-
cardial infarction. Circulation. 2002;106:31263132.
Ito H, Nakano A, Kinoshita M, et al. Pioglitazone, a peroxisome proliferator-activated [265]
receptor- agonist, attenuates myocardial ischemia/reperfusion injury in a rat model. Lab
Invest. 2003;83:17151721.
Khandoudi N, Delerive P, Berrebi-Bertrand I, et al. Rosiglitazone, a peroxisome proliferator- [266]
activated receptor, inhibits the Jun NH2-terminal kinase/activating protein 1 pathway and
protects the heart from ischemia/reperfusion injury. Diabetes. 2002;51:15071514.
Sidell RJ, Cole MA, Draper NJ, et al. Thiazolidinedione treatment normalizes insulin resist- [267]
ance and ischemic injury in the Zucker fatty rat heart. Diabetes. 2002;51:11101117.
Naito Y, Yoshikawa T. Thiazolidinediones: a new class of drugs for the therapy of ischemia- [268]
reperfusion injury. Drugs Today (Barc). 2004;40(5):423430.
Takagi T, Naito Y, Ichikawa H, et al. A PPAR-gamma ligand, 15-deoxy-Delta12,14-prostag- [269]
landin J(2), inhibited gastric mucosal injury induced by ischemia-reperfusion in rats. Redox
Rep. 2004;9(6):376381.
VAJDOVICH
122
Jacinto SM, Chintala MS, Lokhandwala MF, et al. Efficacy and mechanisms of dopexamine [270]
in the prevention of ischemia-reperfusion induced organ damage: role of oxygen free radi-
cals. Clin Exp Hypertens. 1997;19(12):181190.
Shiki K, Hearse DJ. Preconditioning of ischemic myocardium: reperfusion-induced arrhyth- [271]
mias. Am J Physiol. 1987;253(6 Pt 2):H1470H1476.
Omar BA, Hanson AK, Bose SK, et al. Ischemic preconditioning is not mediated by free [272]
radicals in the isolated rabbit heart. Free Radic Biol Med. 1991;11(5):517520.
Turrens JF, Thornton J, Barnard ML, et al. Protection from reperfusion injury by preconditioning [273]
hearts does not involve increased antioxidant defenses. Am J Physiol. 1992;262(2 Pt
2):H585H589.
Das DK, Prasad MR, Lu D, et al. Preconditioning of heart by repeated stunning. Adaptive [274]
modification of antioxidative defense system. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 1992;
38(7):739749.
Fu LX, Kirkeboen KA, Liang QM, et al. Free radical scavenging enzymes and G protein [275]
mediated receptor signalling systems in ischaemically preconditioned porcine myocardium.
Cardiovasc Res. 1993;27(4):612616.
Yamashita N, Nishida M, Hoshida S, et al. Induction of manganese superoxide dismutase [276]
in rat cardiac myocytes increases tolerance to hypoxia 24 hours after preconditioning. J Clin
Invest. 1994;94(6):21932199.
Zhai X, Zhou X, Ashraf M. Late ischemic preconditioning is mediated in myocytes by [277]
enhanced endogenous antioxidant activity stimulated by oxygen-derived free radicals. Ann
N Y Acad Sci. 1996;793:156166.
Tanaka M, Fujiwara H, Yamasaki K, et al. Superoxide dismutase and N-2-mercaptopropio- [278]
nyl glycine attenuate infarct size limitation effect of ischaemic preconditioning in the rabbit.
Cardiovasc Res. 1994;28:980986.
Peycke LE, Hosgood G, Davidson JR, et al. The effect of experimental gastric dilatation- [279]
volvulus on adenosine triphosphate content and conductance of the canine gastric and
jejunal mucosa. Can J Vet Res. 2005;69(3):170179.
Arden WA, Stick JA, Parks AH, et al. Effects of ischemia and dimethyl sulfoxide on equine [280]
jejunal vascular resistance, oxygen consumption, intraluminal pressure, and potassium loss.
Am J Vet Res. 1989;50(3):380387.
Reeves MJ, Vansteenhouse J, Stashak TS, et al. Failure to demonstrate reperfusion injury fol- [281]
lowing ischaemia of the equine large colon using dimethyl sulphoxide. Equine Vet J.
1990;22(2):126132.
Wilkins PA, Ducharme NG, Lowe JE, et al. Measurements of blood flow and xanthine oxi- [282]
dase activity during postischemic reperfusion of the large colon of ponies. Am J Vet Res.
1994;55(8):11681177.
Moore RM, Bertone AL, Muir WW, et al. Histopathologic evidence of reperfusion [283]
injury in the large colon of horses after low-flow ischemia. Am J Vet Res. 1994;55(10):
14341443.
Prichard M, Ducharme NG, Wilkins PA, et al. Xanthine oxidase formation during experimen- [284]
tal ischemia of the equine small intestine. Can J Vet Res. 1991;55(4):310314.
McMichael MA, Freeman LM, Selhub J, et al. Plasma homocysteine, B vitamins, and amino [285]
acid concentrations in cats with cardiomyopathy and arterial thromboembolism. J Vet Intern
Med. 2000;14(5):507512.
Furll M, Sattler T, Dabbagh MN, et al. [Etiology and prophylaxis of reperfusion injuries]. [286]
Dtsch Tierarztl Wochenschr. 1999;106(9):389393[in German].
Geishauser T, Weiser M, Zibell KL. [Indirect and direct determination of selenium levels in [287]
the blood of cows with left side displacement of the abomasum]. Tierarztl Prax.
1995;23(5):443445[in German].
Mudron P, Sallmann HP, Rehage J, et al. [Effects of a surgical reposition of left-sided abo- [288]
masal displacement on parameters of energy metabolism in dairy cows]. Dtsch Tierarztl
Wochenschr. 1994;101(9):376378[in German].
Werns SW, Shea MJ, Lucchesi BR. Free radicals in ischemic myocardial injury. [289] J Free Radic
Biol Med. 1985;1(2):103110a.
123
Werns SW, Shea MJ, Driscoll EM, et al. The independent effects of oxygen radical scav- [290]
engers on canine infarct size. Reduction by superoxide dismutase but not catalase. Circ Res.
1985;56(6):895898b.
del Zoppo GJ. Microvascular changes during cerebral ischemia and reperfusion. [291] Cerebrov-
asc Brain Metab Rev. 1994;6(1):4796.
Kasprzak HA, Wozniak A, Drewa G, et al. Enhanced lipid peroxidation processes in [292]
patients after brain contusion. J Neurotrauma. 2001;18(8):793797.

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Vet Clin Small Anim 38 (2008) 31123

) tambin puede ser un factor quimiotctico, puesto que

y NADP; este ltimo es necesario para

que se produce reacciona rpidamente y

[28]. Puesto que la NADPH oxidasa se localiza en

puede producirse en la superficie interna de la membrana plasm-

se localiza en la bicapa lipdica. La

est dentro de la vacuola [29]. As, el O

, que es muy txico, muy activo y perjudicial para las

tiene lugar en la superficie de los fagolisosomas. Otra reaccin antimicrobiana

oxidante reactivo y se denomina reaccin de Haber-Weiss: O

Como una analoga de la reaccin de Fenton, el H

sufre una dismutacin espontnea o, en

se genera en el otro lado. La oxidasa

y oxgeno singlete [10,59,60]. El H

eliminan las bacterias mediante peroxidacin de lpidos, lesin de la membrana

. Algunos pacientes con EGC carecen

en los fagocitos, lo que se manifestaba por un aumento de la susceptibilidad a las

. El mtodo descrito tiene aplicaciones potenciales para la titulacin de los factores

tras la estimulacin con

reacciona con todos los com-

. Las cadenas laterales de todos los residuos aminocidos de

es un agente lesivo principal en la inflamacin reumatoide de las

altamente reactivo. Los factores predisponentes pueden incluir la sinovitis, la

que se generan durante

, que normalmente (y de forma conveniente) tiene lugar en el sitio

. Otros inhibidores de COX no han demostrado

producido en primer lugar es muy inestable y reacciona espontnea-

la cascada del AA se activa debido al aumento del

, y puede reflejar una funcin citotxica del

puede atravesar la membrana, estando

. Su metabolito, dimetil sulfuro,

manitol y clorpromazina son protec-

en el cerebro de ratones que haban sufrido una contusin

[251,252]. Se ha demostrado que estos

en el momento de la reperfusin [243,253]. U74500A, que contiene una piridina

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