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Universidad Católica de la Santísima Concepción

Facultad de Medicina, Escuela de Medicina


g
Depto. De Ciencias Básicas y Morfología
Laboratorio de Bioquímica

PRÁCTICO Nº 5 BIOQUÍMICA:
EXAMEN FISICO-QUIMICO Y
MICROSCÓPICO DE ORINA

Nombre de Integrantes: Felipe Navarro


Ricardo Olave
Plinio Ramírez
Belén Rodríguez
Fecha de Realización: 06 de mayo de 2009
Fecha de Entrega de informe: 28 de mayo de 2009
Docentes Encargados: Dr. Reginaldo del Pozo
Bq. Mirna Muñoz M.Sc.
Bq. Javier Grandón
Qco. Germán Rotter
Muestra orina: N° 4
Muestra problema: MP3
INTRODUCCIÓN

El riñón, es un órgano que mediante el proceso de formación de la orina


cumple, entre otras, dos importantes funciones:
 La eliminación de nuestro organismo de una importante cantidad de residuos
metabólicos, muchos de ellos inútiles y de otros que incluso pueden
comportarse como tóxicos.
 La regulación de la composición de los fluidos de nuestro organismo,
facilitando así tanto la supervivencia de las células como el óptimo desarrollo
de todos los procesos metabólicos.
Un análisis de orina, es un procedimiento técnico encaminado a examinar los
componente que la integran, su cantidad y la proporción en que se encuentran.
El estudio de una muestra de orina –cuando es realizado adecuadamente-, va
a proporcionar una gran información acerca de múltiples alteraciones orgánicas y, de
muy diversa etiología tanto del órgano donde se forma (el riñón) como de muchos
órganos y procesos metabólicos.
A menudo, el análisis de orina permite detectar una alteración de carácter
patológico. En ocasiones, sirve para poner en evidencia estados fisiológicos
particulares no patológicos (poner de manifiesto un embarazo reciente, determinar el
buen funcionamiento renal, etc).
En general, dicho estudio, va a estar muy condicionado por la forma en que
se lleve a cabo la recogida, de la muestra sometida a examen.
Los objetivos fundamentales de cualquier análisis de orina son:
1. Obtener información del estado general del riñón, así como de las lesiones que
pudieran afectarlo.
2. Detectar, la existencia de una alteración a nivel de las vías urinarias por las que
se excretan la orina ya formada.
3. Teniendo en cuenta aquellos productos que se eliminan vía urinaria, detectar
alteraciones funcionales de otros órganos de nuestra economía.
4. Poner de manifiesto, la existencia de alteraciones metabólicas de muy diversa
etiología, que pueden ser detectables por un aumento o disminución anormal,
de ciertos metabolitos en la orina.
Al analizar orina, por tanto, se intenta encontrar:
 Sustancias o componentes que normalmente no se encuentran en la
misma.
 Alguna alteración en la concentración (por defecto o por exceso) de
componentes que habitualmente se encuentran en ella.
El estudio de los distintos parámetros bioquímicos, deberá siempre ir
acompañado de una investigación microscópica de la muestra obtenida tras
concentrar la orina original (estudio del SEDIMENTO URINARIO).
Actualmente, todo queda muy simplificado por la utilización de las tiras
reactivas (llamado química seca),
El examen de orina completo, comprende: estudio físico, análisis químico en
su aspecto cuali y cuantitativo de algunos parámetros, y el examen microscópico del
sedimento urinario. Aspectos que serán revisados en detalle en el presente informe.

OBJETIVOS

- Conocer el procedimiento experimental del examen de orina completo, los pasos a


seguir para su realización, y qué se puede medir a través de este.
- Destacar la importancia de este examen y su utilidad en la práctica médica, mediante
el conocimiento basado en la experiencia.
- Relacionar anormalidades en una muestra de orina con ciertas patologías.
- Conocer ventajas y desventajas de los distintos métodos utilizados en el examen.
MATERIALES

 Muestra de orina n° 4.
 Muestra de orina de Felipe Navarro.
 Tiras reactivas que reaccionan con de orina.
 Vaso precipitado 50 ml.
 Un frasco con el reactivo Glucosa GOD-PAD.
 Dos micropipetas: 10-100 µl - 100-1000 µl
 Puntas para micropipetas: Amarillas -Azules.
 Probeta de 25 ml.
 7 microtubos con tapa.
 1 microtubo con estándar de glucosa 100 mg/ml (concentración 5,55 mmol/l)
 1 microtubo con MP6.
 Una Gradilla para microtubos.
 Un Vórtex.
 Guantes.
 Toalla desechable.
 7 cubetas para espectrofotómetro.
 Gradilla para las cubetas.
 Espectrofotómetro.
 Microscopio de Contraste de Fase.

Reactivos

 Estándar Glucosa 100mg/dl (5.55 mmol/l)


 Muestra problema Glucosa N°4
 Reactivo para identificación de glucosa
 Tampón fosfato pH 7.3; 100mmol/l
 Fenol 16 mmol/l
 4 aminoantipirina 0.25 mmol/l
 Glucosa Oxidasa ≥ 20.000 U/l
 Peroxidasa ≥ 1.000 U/l

METODO

EXAMEN FISICO DE ORINA


 Observación y determinación de:
 Color
 Aspecto
 Transparencia
 Presencia de algún tipo de precipitado

EXAMEN QUIMICO
Determinación de propiedades semi-cuantitativas o cualitativas a través de tiras
reactivas.
Tira reactiva

Sumergir una tira


reactiva en la muestra
de orina problema nº4
y muestra del
integrante del grupo. Comparar la tira reactiva con la
escala cromática del frasco, después
de haber sacado el exceso con la
toalla desechable.

Glucosa en muestra n° 4
Determinación cuantitativa de glucosa

10 µl de la muestra de orina más 1 ml de reactivo


pipeteados con micropipeta indicada y si da positivo
para glucosa se somete a espectrofotometría Vórtex
calculando su concentración en la muestra.
Se toma el
microtubo
previamente cerrado
desde arriba y se
Microtubo (x2)
Agita en el vórtex.

M Extraer 10 10 l MP6
P más 1ml
6 reactivo
Vórtex

Microtubo (x2) Se toma el


microtubo
previamente
Preparación de
cerrado desde
blanco y estándares
arriba y se
1ml reactivo

Microtubo (x1
Se Incuba 15 minutos a
Temperatura ambiente
(25°C) por las
10 µl condiciones del
Microtubo
Estándar + laboratorio, ya que lo
(x2)
1ml reactivo ideal es 37° durante 10
minutos.
B Se Verte cada muestra en una
(x1)
Espectrofotómetro cubeta para su análisis en el
espectrofotómetro
nm
S
(x2)

La luz del espectrofotómetro M


(x2)
debe pasear 1cm por el lado de
de la cubeta y de no tocar el
centro de la cubeta porque
puede alterar la absorbancia. O se mide el blanco y se lleva a
(x2) cero su absorbancia, luego se
miden los estándares, la
muestra problema y finalmente
la muestra de orina.

EXAMEN MICROSCÓPICO DE SEDIMENTO URINARIO

M
P
4
Solo una gota
de sedimento se
coloca sobre el
Procedimiento realizado por el porta objeto y
docente, en el que sedimento se lo restante se
extrae (se debe utilizar guantes) Durante 5 minutos a
desecha.
con una pipeta Pasteur. 2000 rpm

En un microscopio
Contraste de Fase se
Analiza el Sedimento
Urinario.
RESULTADOS

Examen físico

Parámetro Paciente 4 Ricardo Olave


Aspecto Transparente Transparente
Color Amarillo paja Amarillo paja

Examen químico

a) Semicuantitativo: La tabla siguiente expresa los valores obtenidos al sumergir


tiras reactivas para este tipo de examen en las muestras de orina.
Parámetro Paciente 4 Ricardo Olave
Leucocitos (leucocitos/µL) Trazas (-)
Nitritos (mg/mL) (-) (-)
Urobilinógeno (µmol/L) 3,2 3,2
Proteínas (g/L) Trazas (-)
pH 6,5 6,5
Sangre (eritrocitos/µL) (-) (-)
Gravedad específica (g/mL) 1,025 1,015
Cuerpos cetónicos (mg/mL) 5 (-)
Bilirrubina (mg/dL) (-) (-)
Glucosa (mL/L) 110 (-)

b) Cuantitativo: El examen cuantitativo corresponde a la medición de la


absorbancia a 500 nm de una de orina del paciente, está medida es
proporcional a la cantidad de glucosa en la muestra y se basa en la reacción de
la glucosa oxidasa en la cual uno de los productos de ella, el H2O2, es
transformado en un compuesto coloreado, la quinonimina coloreada, por acción
de la peroxidasa. Este método es conocido como GOD-PAP.
Muestras Abbs Promedios Concentración
Glucosa (mg/mL)
Blanco 0,000 0,000 0,00
Estándar 0,325 0,326 100,00
Estándar (bis) 0,327
MP3 0,606 0,602 184,66
MP3 (bis) 0,598
Paciente 4 1,820 1,817 557,36
Paciente 4 (bis) 1,813

Para el cálculo de las concentraciones de glucosa de acuerdo a la absorbancia


utilizamos el estándar de concentración conocida, 100 mg/mL, que se realizó por
duplicado siendo su promedio de abbs 0,326. En todas las muestras las mediciones se
realizan por duplicado, por lo tanto utilizamos para calcular la concentración de
glucosa en la orina el promedio de ambas, ilustraremos como realizar el cálculo en
base al Paciente 4:

Despejando:
Entonces el Paciente 4 de acuerdo a la absorbancia medida posee una
concentración de 557,36 mg/mL de glucosa en la orina. La misma clase de operación
se realiza con las demás absorbancias para obtener las concentraciones de glucosa
de las muestras correspondientes.

Examen microscópico del sedimento urinario

El sedimento urinario del paciente 4 se muestra limpio; algunas bacterias,


probablemente por el tiempo que tenía la muestra desde que se tomó se multiplicaron;
glóbulos rojos dentro de lo normal, leucocitos uno por campo y estrías de mucus
presentes.

CONCLUSIÓN Y DISCUSION

Discusión

En el examen físico al analizar la muestra del grupo este resulto ser normal, y
la muestra problema N4, se vio de aspecto amarillento concentrado. En el examen
químico con tiras reactivas se detecto en la muestra de nuestro grupo todo en el rango
de lo normal, aunque un leve aumento en los leucocito quizás producto de una
infección, y en la muestra problema, de detectaron altos contenidos de glucosa lo que
nos indica que la persona sufría de diabetes. El método de GOD-PAD, es un buen
método para la detección de glucosa en la orina a partir de reacciones enzimáticas, es
por esto mismo que en este examen, se incurra en posibles errores como un mal
manejo en los instrumentos de laboratorio, como la elección de micropipetas, elección
de cubetas, calibración de instrumentos y de cantidades a extraer, posibles
contaminaciones de las muestras, mal trabajo con el espectrofotómetro, problemas
con su lectura, vaciamiento de el contenido de un tubo otro, la no agitación de las
muestras en el Vortex, una incubación insuficiente o a una temperatura inadecuada lo
cual causará efectos directos en la enzima, etc.
Como resumen, debemos destacar, que para este práctico se debió mantener
un método objetivo para no caer en la subjetividad, y con esto, disminuir la tasa de
error en los resultados, de no ser así, se repetían los experimentos de manera de
obtener un resultado óptimo. También se necesitó de un buen trabajo en cuanto al
manejo en los equipos de laboratorio, lo único que pudo causar error, por su grado de
subjetividad fue el manejo con tiras reactivas, en las que nos complico llegar a un
consenso en alguno de sus valores, pero se enfatizo la idea era e descarte de
variables la cual nos servirá en la aplicación de el examen de orina en nuestro futuro
medico.

Conclusión

El práctico de esta semana, nos permitió entender la gran importancia de los


métodos de apoyo diagnósticos tan sencillos como el examen de orina, la que tal
como se ha mencionado muchas veces en literatura, representa una verdadera
biopsia, que nos permite tener una visión de todo el organismo, pero también tenemos
que tener presente que no constituye por sí mismo la herramienta para un diagnóstico
definitivo, debido a que existen márgenes de error como la especificad de detección
de la tiras reactivas y a la limitación de la identificación de bacterias en caso de un
bacteriuria en el sedimento urinario por lo que debe necesariamente completarse con
otros exámenes y la relación medico paciente, también existe la posibilidad de
contaminación de la muestra que es algo no se debe despreciar, de ahí la importancia
de respetar los tiempos de análisis, reiterando en lo anterior, es muy importante el
criterio y la experiencia a la hora de examinar la orina de un paciente, ya que sólo con
estos elementos lograremos evaluar correctamente todos los parámetros involucrados
como la morfología de eritrocitos y la presencia de cilindros, etc.
respecto de las ventajas el examen de orina este es rápido, no invasivo,
sencillo y ofrece un panorama general del estado urinario, que pueden ser similares
en muchas patologías renales y otras alteraciones orgánicas como nefritis,
pielonefritis, glomerulitis, cistitis y otras, además de ser instrumento de apoyo
diagnóstico y de seguimiento en la evolución de patologías como la diabetes.
El principal problema que se presenta en el diagnóstico urológico, aún
contando con un sedimento de orina procesado en óptimas condiciones, viene
representado por la discriminación necesaria entre la atipia degenerativa-reactiva y la
tumoral, para evitar falsos positivos. La correlación clínico morfológica y los datos
celulares previamente descritos eliminan en gran medida este hecho. Sin embargo, en
determinadas situaciones no puede emitirse un diagnóstico citológico conclusivo, y
conviene reseñarlo de esta forma para, de acuerdo con el clínico, establecer las
pautas pertinentes. El diagnóstico diferencial entre cambios reactivos y atipia tumoral
puede beneficiarse con la realización de técnicas especiales; la inmunocitoquímica es
de gran valor en la práctica, no sólo por su metodología sencilla y sin necesidad de
aparataje complejo, sino también por su posible realización en un material previamente
estudiado con técnicas habituales.
Otras causas que pueden platear problemas diagnósticos son:
 Contaminación seminal: hay presencia de células prostáticas y /o de vesículas
seminales con gran tamaño, núcleo irregular y nucleolo patente. Valorar la
presencia de espermatozoides, el pigmento pardo-amarillento citoplasmático,
los macrófagos y posibles cuerpos amiláceos acompañantes.
 Escasa o nula descamación en orina de tumores pequeños vesicales o de vías
urinarias acompañados de intensa hematuria o marcados cambios
degenerativos. En estos casos conviene estudiar varias muestras de orina
espontánea u obtenida por otro medios.
 Aparente falta de correlación en citologías positivas sin evidencia de tumor
exofílico en ecografía e incluso con cistoscopia aparentemente normal. En
estos casos es imprescindible realizar un mapeo sistemático para confirmar la
lesión, que suele ser intraepitelial.
Un inconveniente de la recogida de muestra de orina, es la posibilidad de
contaminación por la flora presente en toda la uretra femenina y en la terminal
masculina, y por la flora del área perineal.
De una forma general, para poder obtener la mayor cantidad de información
posible la operación de recogida debe ajustarse en la medida de lo posible a las
siguientes reglas básicas:
 Que sea homogénea.
 Que sea representativa del total.
 Que sea tomada en recipientes adecuados.
 Conservarla adecuadamente cuando no pueda ser analizada inmediatamente.
 Etiquetar e identificar convenientemente la muestra.

Conservación
Las muestras de orina deben ser analizadas frescas, siempre que sea posible y
mantenidas en las mejores condiciones de conservación. Debe guardarse siempre,
parte de la muestra de orina analizada por si fuera necesario efectuar algún otro
análisis de comprobación, o por si, durante el análisis se deteriora sin haber obtenido
resultados fiables.
BIBLIOGRAFÍA

R. del Pozo, M. Muñoz, J. Grandón, G. Rotter. “Guía de trabajos prácticos Bioquímica


2009”. UCSC, Facultad de Medicina, Escuela de Medicina.

Mª Carmen D’Ocon Navaza, Mª José García García-Saavedra, José carlos Vicente


García. “Fundamentos y técnicas de análisis bioquímico” 1999 Editorial Paraninfo.

J. Rodríguez Costa, D. De Agustín Vázquez. “Cuadernos de citopatología”, M.F. Rivas


Manga “Líquidos orgánicos: II, Orina y líquido Cefalorraquídeo”. 2003 Ediciones Díaz
Santos S.A