COMPOSICIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO VEGETAL

1. Compuestos inorgnicos:

1.1. Macronutrientes:
Son los que se requieren en cantidades de mili molar (mM) y son los elementos requeridos
en mayor cantidad en cultivo de tejidos vegetales. En general los macroelementos
proporcionan aniones y cationes para las clulas de las plantas.
1.1.1. Nitrgeno (N):
Este macroelemento influye en la velocidad de crecimiento de las plantas. Es un
elemento esencial en la composicin molecular de la clorofila, alcaloides, cidos
nucleicos, algunas hormonas de las plantas y aminocidos. La falta de nitrgeno se
caracteriza por las hojas amarillentas y el retraso del crecimiento. Los medios de
cultivo deben contener al menos 25-60 mM de nitrgeno inorgnico para el
crecimiento satisfactorio de las clulas vegetales. Las fuentes de nitrgeno para el
medio de cultivo de tejidos son el nitrato de amonio (NH4+) y compuestos a base de
nitrato (NO3-).
1.1.2. Fsforo (P):

Es abundante en el tejido meristemtico y otros tejidos de rpido crecimiento, pero
su rol exacto no es conocido. Su propsito principal parece ser la de un activador de
enzimas. Fosfato de sodio y fosfato de potasio son incluidos normalmente el medio
de cultivo.

1.1.3. Potasio (K):

Es necesario para la divisin normal de la clula, para la sntesis de carbohidratos y
protenas, para la activacin de muchas enzimas, para la produccin de clorofila y
para la reduccin de nitratos. Cumple un importante rol en el mantenimiento del
balance de iones en la clula, del mantenimiento de la presin osmtica en el
citoplasma y de la regulacin osmtica de la clula. Nitrato de potasio y fosfato de
potasio son fuentes comunes de potasio, cloruro de potasio es usado
ocasionalmente.

1.1.4. Azufre (S):

Est presente en algunas moleculas de protenas. Promueve el desarrollo de races y
el follaje verde oscuro. Es suministrada en el medio de cultivo en forma de sulfato.

1.1.5. Calcio (Ca):

Como pectato de calcio, es una parte integral de las paredes de clulas de plantas en
el que desempea un papel en la permeabilidad. Facilita el movimiento de
carbohidratos y aminocidos en toda la planta y promueve el desarrollo de la raz. Se
incluye al medio como cloruro de calcio o nitrato de calcio.

1.1.6. Magnesio (Mg):

Es el elemento central en las moleculas de clorofila. Es tambin importante como
activador de enzimas. La mayora de las frmulas de medio de cultivo de tejidos
utilizan el sulfato de magnesio.

1.1.7. Hierro (Fe):

Est involucrado en la sntesis de la clorofila. Tambin participa en la conversin de
energa en la fotosntesis y la respiracin ya que se reduce del estado frrico al
estado ferroso. En el medio de cultivo tisular, sulfato ferroso (FeSO4. 7H2O) se
mezcla con la sal de sodio de etileno diamina tetra actico (EDTA) que hace que el
hierro sea ms fcilmente disponible para las plantas.

1.2. Micronutrientes:

Adems de los principales elementos requeridos por las plantas, hay un nmero de los
otros elementos esenciales para un buen crecimiento pero se necesitan solamente en
cantidades extremadamente pequeas. Se llaman elementos menores, elementos traza
o micronutrientes.

1.2.1. Boro (B):

Es un elemento traza importante que se presume desempea un papel en el
movimiento del azcar. La falta de boro produce sntomas interesantes de deficiencia,
por lo general el deterioro de los tejidos internos, como en "la podredumbre del
corazn" en la remolacha azucarera, agrietada tallo de apio, o "cara de mono" en las
aceitunas.

1.2.2. Molibdeno (Mo):

Se cree que participa en la conversin del nitrgeno en amoniaco. Tambin ayuda a la
fijacin de nitrgeno (la conversin del nitrgeno atmosfrico en nitratos por las
bacterias fijadoras de nitrgeno).
Se requiere para el crecimiento normal y se aade al medio de cultivo tisular como
molibdato de sodio (Na2MoO4.2H2O). Cantidades superiores a 10 partes por milln
puede ser daino para las plantas.

1.2.3. Manganeso (Mn):

La deficiencia de manganeso se caracteriza por varios sntomas clorticos, a menudo
moteado amarillo de hojas. Es un elemento esencial en la membrana del cloroplasto.
Sulfato de manganeso (MnSO4. H2O) suministra el manganeso necesaria en medio
de cultivo tisular.

1.2.4. Cobalto (Co):

Es un elemento en el complejo de molcula de vitamina B12 (C63H90N14PCo) que es
esencial para la fijacin del nitrgeno. Cloruro de cobalto (CoCl2.6H2O) se agrega a la
mayora de los medios a 0,25 mg / L.

1.2.5. Zinc (Zn):

Es un elemento vital en varias enzimas, que participan en la formacin de clorofila,
as como en la produccin de auxina, cido indolactico (IAA). Un rastro de zinc en
forma de sulfato de zinc (ZnSO4.7H2O) est incluido en medio de cultivo tisular.

1.2.6. Cobre (Cu):

Causas de deficiencia de retraso en el crecimiento, malformaciones, hojas retorcidas
y manchados o muerte regresiva de las ramitas jvenes. Se cree que es necesario en
la conversin de energa, ya que alterna entre el estado cuproso y el estado cprico.
Slo se requiere 0,25 mg de sulfato de cobre (CuSO4-5H2O) por litro de medio para
suministrar el cobre necesario en el cultivo de tejidos de la mayora de las plantas.

1.2.7. Cloro (Cl):

Es esencial para ayudar a estimular la fotosntesis, pero la forma en que funciona no
se entiende. Los sntomas de deficiencia son las hojas marchitas, que se vuelven
amarillentas o bronce y mueren. Las plantas requieren de cloro en cantidades
mnimas, pero se incluye en algunos medios de cultivo de tejidos como grandes
cantidades como cloruro de calcio (CaCl2.2H2O).
El exceso de cantidad de este micronutriente parece aceptable para la mayora de las
plantas, sin embargo se debe utilizar con precaucin.

1.2.8. Yodo (I):

Es esencial para los medios como el yoduro de potasio (KI). Generalmente no se
considera un elemento esencial incluso a travs de l es un componente de algunos
aminocidos.

2. Compuestos orgnicos

2.1. Carbohidratos:

Debido a que las clulas cultivadas in vitro son generalmente heterotrficas respecto
de la fuente de carbono, se deben agregar azcares al medio de cultivo. Estos actan
como fuente energtica y de carbono e incrementan el potencial osmtico del medio.
La sacarosa, en concentraciones del 2 al 4 % (p/v), constituye la fuente ms utilizada.
Otros azcares capaces de sostener el crecimiento o incrementar la produccin de
metabolitos son glucosa, fructosa, trehalosa, maltosa y lactosa. Varios investigadores
han estudiado la influencia de la fuente de carbono en el crecimiento y la produccin,
observando que el nivel de azcar puede influenciar a ambos pero no siempre es
previsible su efecto. En general, el incremento de los niveles de sacarosa favorece el
crecimiento y la formacin de productos, pero valores superiores al 10 % (p/v) pueden
producir represin por catabolitos.

2.2. Vitaminas:

Son necesarias para llevar a cabo una serie de reacciones catalticas en el metabolismo
y son requeridas en pequeas cantidades. Las vitaminas ms empleadas son:

2.2.1. Tiamina (vitamina B1):

Se aade como hidrocloruro de tiamina y constituye una vitamina esencial para el
crecimiento de clulas vegetales. Es un cofactor esencial en el metabolismo de
hidratos de carbono y est directamente implicado en la biosntesis de algunos
aminocidos. Es un coenzima de la descarboxilaci de los cetocidos piruvato y -
cetoglutarato y es esencial para el crecimiento radical pues interviene en la sntesis de
citocininas. Se ha aadido a los medios de cultivo de plantas con ms frecuencia que
cualquier otra vitamina.

2.2.2. cido Nicotnico:
Tambin llamado niacina. Es foto y termoestable. Es un componente de las enzimas
activas en la reaccin de la energa luminosa. Su principal funcin es ser coenzima de
las enzimas que se conoce como deshidrogenasas que catalizan las reacciones de
oxido-reduccin (NAD, NADP Y NADH o NADPH) que intervienen en la transferencia
de hidrgeno
2.2.3. Piridoxina (Vitamina B6):

Es aadida como hidrocloruro de Piridoxina (Piridoxina-HCl). Participa como
coenzima en el metabolismo de los aminocidos, entre ellos el triptfano y cido
nicotnico, adems de favorecer la formacin de races.

2.2.4. Myo-inositol:

Myo-inositol (tambin a veces descrito como meso-inositol o i-inositol) es el nico de
los nueve estereoismeros tericos de inositol que tiene importancia biolgica
significativa.
No es propiamente una vitamina, sino un azcar-alcohol. Mdicamente se ha
clasificado como un miembro del complejo de vitamina B.
Est involucrado en la sntesis de fosfolpidos y por lo tanto en la sntesis de
membranas. As tambin participa en las vas biosintticas que conducen a la
formacin de la pectina y hemicelulosas necesaria en las paredes celulares. Tiene un
efecto sobre la proliferacin de tejidos y sobre la activacin de la organognesis.

2.2.5. cido ascrbico y cido ctrico:

Son aadidos a los medios de cultivo en ocasiones no como vitaminas sino como
antioxidantes para evitar el oscurecimiento de determinados tejidos.

2.2.6. Riboflavina:

Es termoestable, pero fcilmente se descompone a la luz. A bajas concentraciones
(90.01 mg.l-1) promueve el crecimiento en callos habituados de zanahoria, pero sin
efecto en la oscuridad. Concentraciones de 10-50mg.l-1 inhiben completamente el
crecimiento en la luz y promueve el crecimiento en la oscuridad. La riboflavina
aparece en la naturaleza como un constituyente de las flavinas coenzimas: flavin
mononucleotido (FMN) y flavin adenina dinucletida (FDA). La riboflavina es
termoestable por lo que no se descompone fcilmente.

2.2.7. Acido pantotcnico:

Es termoestable, por lo tanto, puede ser esterilizado en autoclave junto con el medio
nutricional Estimula el crecimiento de levaduras, en sauce llorn y Juniperas (Morel,
1946; Gautheret, 1958). Se encuentra en la naturaleza como componente de la
coenzima A. Sin embargo, no es una vitamina esencial.

2.2.8. Biotina:

No es esencial y probablemente promueve el crecimiento del cambio en inculo de
sauce llorn (Gautheret, 1959). Unida a su enzima especfica, se relaciona
ntimamente con reacciones de carboxilizacin.
Carboxilacin
Carboxilacin conjugada y transcarboxilacin


2.3. Aminocidos

El papel de los aminocidos en la nutricin de los tejidos y clulas vegetales es
complejo, ya que los tejidos responden en forma diversa a su suplemento. En general,
si los aminocidos corresponden a la forma D son inhibidores, mientras que en la forma
L tienen accin benfica. Los aminocidos representan, para las clulas, una fuente
efectiva e inmediata de nitrgeno, puesto que se pueden incorporar al metabolismo
mucho ms rpido que el nitrgeno inorgnico, an cuando ambas fuentes se
encuentran en el mismo medio. Glicina es el aminocido ms comunmente usado en
los diferentes tipos de medios de cultivo.

2.4. Hormonas y reguladores del crecimiento

2.4.1. Auxinas

Es una familia de sustancias qumicas que tienen en comn la capacidad de regular el
crecimiento, la divisin celular y la diferenciacin de races en los cultivos in vitro. En
las plantas, las auxinas intervienen en el tropismo a la gravedad y a la luz, la
dominancia apical, el crecimiento de las partes florales y la diferenciacin de los
tejidos vasculares . Las auxinas ms utilizadas son el AIA (cido indol-3-actico), el
ANA (cido -naftalenactico), el 2,4-D (cido 2,4-diclorofenoxiactico), el AIB (cido
indolbutrico), el pCPA (cido p-clorofenoxiactico) y el BTOA (cido benzotiazol-2-
oxiactico).
En cuanto al mecanismo de accin de las auxinas, se conoce que ellas aumentan la
plasticidad de la pared celular, lo que permite la expansin de la clula. La elongacin
inducida por auxinas se inicia al unirse esta hormona al receptor, probablemente
localizado en la cara externa de la membrana plasmtica, lo que desencadena una
cascada de eventos que determinan la secrecin de protones por la clula. Como
resultado de esta acidificacin, se activan protenas que rompen los enlaces cruzados
entre las molculas de celulosa y permiten la elongacin cuando aumenta la presin
de turgencia. Durante este proceso se han detectado cambios en las concentraciones
del trifosfato de inositol y del calcio inico citoplasmtico, los que actuaran como
segundos mensajeros.

2.4.2. Citoquininas

Son derivados de la adenina que promueven la divisin celular. Entre ellas cabe
mencionar las siguientes: BA (bencil adenina), K (cinetina o 6-furfuril aminopurina),
Zea (zeatina) y 2-iP (N-isopentenil adenina). Las dos primeras son citocininas
sintticas y las dos ltimas naturales.
Las citocininas in vivo incrementan la tasa de divisin celular, el transporte de solutos
hacia las hojas, semillas, flores y frutos y producen un retardo de la senescencia de
las hojas).
La inclusin de citocininas en el medio de cultivo permite formar callos en varias
especies vegetales, aunque principalmente induce que regiones meristemticas
multicelulares se diferencien en estructuras organizadas.

2.4.3. Giberalinas

Las giberelinas (GAs) constituyen una familia de compuestos qumicos tetracclicos
diterpenoides que regulan varios procesos del crecimiento y desarrollo como la
germinacin de semillas, la elongacin de tallos, el desarrollo de races y la floracin.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

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