CELULAS CI TOTOXI CAS NATURALES

Universidad Nacional del Nordeste

Facultad de Medicina
Ctedra de Bioqumica
Brandan, Nora
Profesora Titular. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE.
Aquino Esperanza, Jos
Ayudante Alumno por Concurso. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina.
UNNE.
Aispuru, Gualberto
Ayudante Alumno Interino. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina.
UNNE.

Rol de l as cl ul as NK en el Si st ema I nmune .
Car act er st i cas de l as cl ul as NK
Expr esi n Fenot pi ca de l as cl ul as NK
Ci t ot oxi ci dad medi ada por cl ul as dependi ent e de ant i cuer pos ( ADCC)
Reconoci mi ent o
Mecani smos ef ect or es
Cl ul as ci t ot xi cas act i vadas por l i nf oqui nas ( LAK)
Papel de l as cl ul as NK en l a I nmuni dad Nor mal
Cl ul as NK en l a i nmuni dad f r ent e a Tumor es
Bi bl i ogr af a

Introduccin
Vivimos en un mundo potencialmente hostil, repleto de una asombrosa coleccin
de agentes nocivos (infecciosos o no) de forma, tamao, composicin y
caractersticas agresivas diversas que pueden llevar al desarrollo de una entidad
patolgica. El hombre y otros seres vivos han desarrollado para esto una serie
de mecanismos de defensa que aseguran proteccin e integridad. Son estos
mecanismos los que establecen un estado de inmunidad (del latn, libre de
obligaciones) contra las noxas. El desequilibrio, la falencia o falla de la
inmunidad puede determinar un estado patolgico.
Las clulas y molculas responsables de la inmunidad constituyen el sistema
inmunitario (SI) y la respuesta global y coordinada tras la introduccin de un
elemento extrao al organismo es la respuesta inmunitaria .
Los individuos sanos se encuentran protegidos de los agentes patgenos por
medio de diferentes mecanismos. Alguno de estos mecanismos incluye
la inmunidad innata ( natural o nativa ). Esta representa la primera lnea de
defensa, cuyas caractersticas se limitan a poder discriminar un microorganismo
y a su naturaleza moderadamente estereotpica, siendo su accionar muy
parecido frente a la mayora de los agentes nocivos. Los elementos esenciales de
la inmunidad natural corresponde a las barreras epiteliales, mecanismos
humorales y celulares.
A diferencia de la inmunidad innata, existen mecanismos de defensa mucho ms
evolucionados que son estimulados tras la exposicin a agentes infecciosos, y
cuya intensidad y capacidad de defensa aumenta despus de la ulterior
exposicin a un determinado microorganismo. Puesto que esta forma de
inmunidad se desarrolla como respuesta a la infeccin, se le
denominainmunidad adaptativa . Quien posee la capacidad para discriminar
entre diferentes microorganismos. Los componentes bsicos de este tipo de
inmunidad son los linfocitos y sus productos.
La inmunidad innata posee distintos mecanismos para estimular a la inmunidad
adaptativa con el fin de ampliar la respuesta frente a la noxa. Del mismo modo,
la inmunidad especifica utiliza recursos de la inmunidad innata, adems de los
propios, para llevar adelante sus funciones. L as interacciones entre inmunidad
innata y especfica son bidireccionales .

Rol de l as cl ul as NK en el Si st ema I nmune
Car act er st i cas de l as cl ul as NK
Las clulas citotoxicas naturales o natural killer ( NK ) representan una
subpoblacin de linfocitos que se encuentra en la sangre (5-10%) y en los tejidos
linfoides, especialmente el bazo, adems de encontrase en gran cantidad en el
hgado. stas clulas derivan de la medula sea y son linfocitos grandes (10-15 m
m) con numerosos grnulos citoplasmticos (Figura 1), razn por lo cual se los
denomina linfocitos granulares grandes ( LGL ), aunque en realidad toman esta
apariencia slo despus de activarse. Los grnulos de las clulas NK, al igual que
los de los CTL, contienen:perforinas granzimas , factor de necrosis
tumoral tipo b (TNF- b ) y proteoglucanos (condroitn sulfato A).


Tras la exocitosis dirigida de los grnulos, las clulas NK pueden producir la lisis
osmtica de las clulas dianas e inducir, adems, la muerte celular apoptotica a
travs de la va perforina-granzima B. Es ms acertado, tal vez, considerar a las
clulas NK como CTL filogenticamente primitivos que carecen de receptor de
clulas T (TCR) especfico para el reconocimiento de antgenos.

Expr esi n Fenot pi ca de l as c l ul as NK
Si se considera su fenotipo de superficie y el linaje, las clulas NK no son
clulas T ni B (clulas cero). Estas clulas no sufren maduracin en el timo.
Tampoco sufren reordenamiento gentico de Ig o del TCR, y no expresan
molculas CD3, marcador especfico de clulas T.
Las clulas NK expresan ciertas molculas de adhesin como CD2, LFA-1 y la
molcula de adhesin de clulas nerviosas NCAM o CD56. Adems de esto, las
NK expresan un receptor de baja afinidad para la porcin Fc de la IgG,
llamado Fc g RIIIA ( CD16 ). En estas clulas, tanto CD2 como Fc g RIIIA se
asocian a subunidades de sealizacin, a saber homodmeros y heterodmeros
que implican la cadena z del complejo TCR o a la cadena g del receptor de Fc
(FcR), cada una de las cuales contiene los motivos de activacin del receptor va
tirosina (ITAM). Las molculas de adhesin de las NK reconocen estructuras
glucoproteicas de alto peso molecular que aparecen en la superficie de clulas
infectadas por virus, diferencindolas de las clulas normales. Estas molculas de
adhesin son consideradas como receptores de tipo lectina (que se unen a
carbohidratos), lo que permite enfrentar estrechamente la clula diana con su
destructor.
Por otro lado, las clulas NK expresan las subunidades b y g c de transduccin de
seales del receptor IL-2, pero no la subunidad a , por lo que pueden ser
inducidas a proliferacin con altas concentraciones de IL-2. sin embargo, las
clulas NK, si expresan la subunidad a del receptor de IL-15 y pueden proliferar
a concentraciones muy bajas de esta citoquina. Adems, las NK expresan
receptores para IFN de tipo I, INF- g e IL-12, que actan sobre estas clulas para
aumentar sus capacidades citolticas.

Ci t ot oxi ci dad medi ada por cl ul as dependi ent e de ant i cuer pos ( ADCC)
La interaccin del Fc g RIIIA con las porciones Fc de IgG1 IgG3 que se hallan
unidas a la superficie de las clulas dianas para lograr la activacin de la clula
NK y que esta despliegue su accin efectora, es un ejemplo caracterstico
de citotoxicidad mediada por clulas dependiente de anticuerpos ( ADCC ,
del ingls antibody dependent cell-mediated cytotoxicity ), es decir, lisis de una
clula diana por encontrase sta recubierta de anticuerpos. Las clulas NK
constituyen las principales clulas efectoras de la ADCC dirigida por IgG.

Reconoci mi ent o

Las clulas NK expresan miembros de una familia de protenas de la superficie
celular que contienen dos o tres dominios Ig en sus regiones extracelular. Las
clulas NK expresan una o ms de estas protenas con capacidad receptora, de
hecho, las NK dependen de estos receptores para reconocer una clula infectada
de una normal.
Esta habilidad de distinguir a clulas potencialmente peligrosas de clulas
saludables depende de la expresin e interaccin entre los receptores inhibidores
y activadores.
Los primeros reconocen una forma allica especifica de las molculas de clase I
del MHC (complejo mayor de histocompatibilidad) que se expresa de modo
constitutivo en todas las clulas normales. En cambio, los receptores activadores
reconocen protenas que se expresan tanto en las cedulas normales como
patolgicas. Bajo estos conceptos cabe preguntarse si los receptores
activadores no son especficos para clulas normales, a que se debe que las NK
no se encuentren permanentemente activadas, inclusive contra las clulas sanas?
Esto es posible gracias a que normalmente las clulas NK se encuentran bajo el
efecto inhibidor.
Actualmente han sido identificados numerosos receptores inhibidores, los cuales
poseen motivos inhibidores de tirosina de receptores (ITIMs) en sus residuos
citoplasmaticos. Cuando estos motivos son activados, reclutan tirosin-
fosfatasas citoplasmaticas (SHP-1, SHP-2), que desfosforilan y por ende
inactivan las cascadas de seales generadas por los receptores activadores (Fig.
2).
Los receptores que activana los NK incluyen grupos de molculas
estructuralmente distintas, pero que comparten un grupo de molculas
sealizadoras que contienen motivos activadores de tirosinas de
receptores (ITAMs). Estos receptores al ser inducidos, generan una cascada de
foforilaciones, que finalmente activan a las NK. Esta funcin solo ser posible si
el receptor inhibidor no ha sido activado.
Por consiguiente, la activacin de la clula NK ocurre cuando una clula diana es
incapaz de ocupar este receptor inhibidor. De ah que las clulas NK reconozcan
la ausencia de unos determinados pptidos propios presentados por las formas
allicas propias de las molculas MHC clase I.

Mecani smos ef ect or es
Luego de la activacin de la clula NK, los grnulos se polarizan entre el ncleo
y la membrana que contacta con la clula diana, en pocos minutos el contenido
de estos se libera hacia el espacio extracelular entre las dos clulas.
Tal vez el componente ms importante de los grnulos sean las perforinas o
citolisinas que poseen una cierta homologa estructural con el C9 del
complemento. La interaccin de estas protenas con la membrana de la clula
diana se establece a travs de los fosfolipidos que contengan fosfatidilcolina,
estos son los ligandos ms potentes de las perforinas. El resultado de esto es la
formacin de una amplio canal en la membrana (poro), que es por si mismo
suficiente para la muerte celular, llevando a las celulas dianas a una necrosis
generada por la osmolisis. Adems, este poro provee una puerta de entrada a
otras molculas efectoras.
Las clulas NK no solo utilizan este mecanismo, tambin destruyen por
activacin de la apoptosis . Este otro mecanismo ltico es posible gracias a
las granzimas , particularmente el subtipo granzima B. Estas son protenas que
se encuentran dentro de los granulos de las NK y que son capaces de inducir la
apoptosis a travs de la activacion de las caspasas, especialmente la capasa 3 .
Actualmente se ha demostrado que la granzima B puede ingresar a las clulas
dianas en ausencia de las perforinas, pero en este caso quedan capturadas dentro
de vesculas endociticas sin poder ejercer su efecto apoptotico. Este particular
hecho nos demuestra que la actividad apoptotica de la granzima B solo es posible
si se encuentra libre en el citoplasma, he aqu la importancia de las perforinas,
quienes les proveen la puerta de entrada.
Adems de perforinas y granzimas, los grnulos contienen TNF- b y condroitn
sulfato A, un proteoglucano cargado negativamente que resiste a la accin de la
proteasas, que tiene la aparente funcin de proteger la clula NK de la autlisis
por sus propios agentes letales.

Cl ul as ci t ot xi cas act i vadas por l i nf oqui nas ( LAK)
Se ha observado que las clulas NK responden a ciertas citoquinas como la IL-2.
Esta es sintetizada y liberada por los linfocitos T CD4 que, de modo autocrino
favorece la proliferacin de estas clulas. Pero adems posee un amplio efecto
sobre las NK.
El receptor de IL-2 (IL-2R) es un trimero compuesto por subunidades , , y .
La IL-2 ejerce su efecto a travs del IL-2 R b g c promoviendo la diferenciacin
a clulas citotxicas activadas por linfoquinas (del ingls limphokine-activated
killer cells, LAK ).
La subunidad IL-2 R b g c genera distintos mecanismos de sealizacin
intracelular que determinan la proliferacin de las NK.
Uno de ellos es a travs de las protenas JAK, quienes determinas la activacin
de los factores de trascripcin STAT. Las protenas STAT, peculiarmente STAT5
promueve la activacin de 2 enhancers del gen de las perforinas (fig 3).
Por otra parte determina la activacin del factor de trascripcin AP-1 y del factor
nuclear kB (NF-kB) (Fig. 3). Adems promueve la expresin de los genes bcl-2 y
c-myc.


Las clulas LAK exhiben una capacidad citoltica aumentada y una amplia
especificidad de diana, lisando una gran variedad de clulas tumorales y tipos
celulares normales no propias, entre las que se encuentran en primer lugar las
clulas epiteliales (endotelio).
Las clulas T activas producen IL-2 en gran cantidad pudiendo estimular la
diferenciacin de clulas NK a clulas LAK. Adems de la IL-2, las NK
responden a IL-12, IL-15 e INF-I.

Papel de l as cl ul as NK en l a I nmuni dad Nor mal
Las clulas NK lisan clulas infectadas por virus (Fig. 4) antes de que los CTL
especficos de antgeno puedan diferenciarse a partir de pre-CTL, es decir,
durante los primeros das de la infeccin viral. En las etapas tempranas de una
infeccin viral, las clulas NK se expanden y son activadas por citoquinas de la
inmunidad innata, como IL-15, IFN-1 e IL-12. Adems de lisar clulas diana que
exhiben niveles reducidos de molculas MHC-I, las NK activadas secretan INF-
g que activa a los macrfagos y, de forma autocrina, a si misma. Esta respuesta
conjunta clula NK-macrfago puede contener ciertas infecciones in
vitro durante varias semanas, lo que da tiempo a que la inmunidad especfica
erradique la infeccin por medio de los CTL.

Cl ul as NK en l a i nmuni dad f r ent e a Tumor es



Las clulas NK desempean un papel importante en la lisis de clulas tumorales,
sobre todo aquellas de origen hematopoytico, que escapan por diferentes
mecanismos de la lisis mediada por CTL.
El reconocimiento de las clulas NK de clulas infectadas por virus se produce
cuando el microorganismo reduce la expresin de molculas MHC clase I, una
estrategia que utilizan algunos virus para escapar de los CTL especficos, o al
sustituir los pptidos propios por pptidos derivados de las protenas virales.
La capacidad tumoricida de las NK se ve potenciada in vitro por ciertas
interleuquinas en especial IL-2. La actividad in vivo de los NK aun no se conoce
por completo, pero se ha observado que pacientes con recuento bajo de NK, son
mas susceptibles a padecer ciertos tipos de tumores, por ejemplo ciertos tipos de
linfomas.
Actualmente se utiliza en seres humanos de la IL-2 como terapia frente a los
tumores, en especial en cancer de rion.