PRACTICA N 1 EXTRACCION DE ADN

I.

OBJETIVO Realizar una extraccin casera de la presencia de ADN en vegetales.

II.

FUNDAMENTO TEORICO

La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente, vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separadas de l por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamlico, probablemente el nico reactivo de esta prctica que no suele haber en una cocina. III. MATERIALES Y REACTIVOS 3.1. 3.2. Muestra Hielo triturado Cebolla Ajos Tomate Leche Materiales de vidrio Tubos de ensayo Gradilla Varillas de vidrio Batidor Nevera Colador o centrifuga Vasos de precipitado de 150 250 ml (12 unidades) Pipetas Rallador

3.3.

Reactivos Agua (destilada o mineral) Sal de mesa Bicarbonato sdico Detergente liquido o champ Alcohol isoamlico a 0 C

IV.

METODOLOGA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta prctica as como el mtodo analtico para obtener los resultados citados. V. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sdico. 5 ml de detergente lquido o champ. 2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos. 3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente 4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante. 5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. 6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de

alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado. VI. RESULTADOS Y DISCUSIN

Describir lo encontrado en la experiencia realizada