25/08/2011

Definiciones

Deteccin de la mutagenicidad
Dr. Carlos F. Prada Q.

Genotoxicologa Rama de la toxicologa que estudia el efecto de agentes mutagnicos, carcinogenticos y/o txicos para la reproduccin sobre el genoma humano. (Modificado de
Vamparys y col. 1996)

Mutagnesis Induccin de cambios hereditarios (mutaciones) en el genotipo de una clula como consecuencia de alteraciones o prdida de genes o cromosomas (o parte de ellos). (Vettorazzi, 2001). Carcinognesis : la induccin del cncer Teratognico Cualquier sustancia que produzca defectos de nacimiento no hereditarios.

Posibles efectos adversos de la exposicin a sustancias mutagnicas

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Como se detecta la mutagenicidad?

Ensayos in vitro de mutagenicidad Ensayos del cometa (SCGE) Ensayos de microncleos (MN) Ensayos de retromutacin en bacterias Test de Intercambio de Cromtides Hermanas (ICH) Fragmentacin del ADN en espermatozoides (prueba clnica)

Ensayos in vitro de aberraciones cromosmicas en mamferos

Deteccin de las alteraciones cromosmicas estructurales inducidas por la sustancia de ensayo en clulas de mdula sea de animales, por lo general roedores. Utilizan cultivos de lneas celulares establecidas o cultivos de clulas primarias. (fibroblastos de hmster chino, humanos u otros mamferos, linfocitos de sangre perifrica, Espermatogonias).

Ensayo Cometa
Desarrollada por Ostling y Johanson en el ao 1984 Mide las clulas con una elevada frecuencia de rupturas tanto cadena sencilla y de doble cadena Electroforesis en microgeles para detectar el dao al ADN a nivel de clulas individuales Presenta la apariencia de un cometa, con una cabeza (regin nuclear) y cola (formada por fragmentos nucleares) debido al patrn de migracin del ADN que se produce en las clulas daadas

Ensayo del Cometa

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Ventajas del ensayo Cometa

1) Demostrada sensibilidad para detectar bajos niveles de dao al ADN 2) Rpida realizacin (resultados en pocos das) 3) Anlisis de los datos a nivel de clulas individuales 4) Requiere un pequeo tamao de muestra (pocas clulas) 5) Flexibilidad y bajo costo 6) Aplicable a cualquier poblacin de clulas eucariotas.

Ensayo Micronucleos
Desarrollada por Heddle (1973) y Schmid (1975) Determinar el dao cromosmico in vivo mediante el conteo de microncleos (MN) en poblaciones celulares en divisin. Los MN son expresados en clulas en divisin que contienen rupturas de cromosomas por prdida de los centrmeros (fragmentos acntricos) y / o prdida de cromosomas completos. Los fragmentos cromosmicos son incapaces de viajar a los polos del ncleo celular durante la anafase de la divisin celular Los fragmentos de cromosomas asumen gradualmente una morfologa de un ncleo en interfase

Importante..
El ensayo no puede ser usado cuantitativamente en poblaciones celulares que no se estn dividiendo o en aquellas donde la cintica de divisin no sea bien conocida

Microncleos

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Ventajas del ensayo de microncleos

Permiten detectar diferentes tipos de lesiones como: Roturas del ADN de doble cadena. Roturas del ADN de cadena simple, mal reparado o sin reparar. Alteraciones en las protenas implicadas en la segregacin cromosmica. Diferentes tipos de aberraciones cromosmicas Apoptosis mediante la frecuencias de ncleos condensados

Ensayo de retromutacin en bacterias (Salmonella typhimurium)

Teste de Ames (1973) Demostr que el 60-90% de las sustancias qumicas carcinogenticas eran a su vez mutagnicas. Principio: Utilizan cepas mutantes, deficientes para la histidina ( h-), para detectar mutaciones puntuales (sustitucin, adicin o supresin) de bases nitrogenadas Detecta mutaciones que revierten las mutaciones originales y restauran la capacidad de las bacterias de sintetizar el aa Histidina

Ensayo de Ames

Test de Intercambio de Cromtides Hermanas (ICH)

Su origen molecular es poco conocido Fenmemo cromosmico visible al microscopio. Implica el intercambio de fragmentos de ADN entre las cromtides hermanas de los cromosomas

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Test de Intercambio de Cromtides Hermanas (ICH)

la base anloga Bromodeoxyuridine (BrdU) que permite la diferenciacin entre las dos cromtides hermanas. Replicacin del DNA semiconservativa til en la evaluacin de sustancias qumicas en clulas como linfocitos o clulas de mdula sea. Monitoreo de poblaciones humanas expuestas a posibles mutgenos qumicos.

Test de Intercambio de Cromtides Hermanas (ICH)

Fragmentacin del ADN en espermatozoides

Una de las causas de la infertilidad masculina

Fragmentacin del ADN en espermatozoides