Mortalidad embrionaria en bfalas sincronizadas y se aparearon por AI durante el descenso estacional en la funcin reproductiva *IA AI: Inseminacin Artificial

l Abstracto El objetivo fue determinar los factores que contribuyen a la mortalidad embrionaria en los bfalos apareados por IA durante un perodo de aumento de la duracin del da que corresponde a una disminucin natural de la actividad reproductiva. Bfalas mediterrneas italianas (n = 243) que muestran ciclos estrales regulares que fueron sincronizada con el programa Ovsynch-TAI y apareadas por IA 16 a 40 horas despus de la segunda inyeccin de GnRH. Las muestras de sangre se recogieron en los das 10 y 20 despus de la primera IA y se ensayaron para progesterona (P 4). El diagnstico de gestacin se realiz los das 26 y 40 despus de la primera IA con ecografa rectal. Los bfalos con un cigoto en el da 26, pero no el da 40 se les consider que haban sufrido mortalidad embrionaria y a estos animales se les recuper el fluido uterino mediante lavado y fue analizado para agentes infecciosos comunes. La sincronizacin del estro se logr en el 86% de los bfalos y la tasa de embarazo en el da 40 fue del 34%. La mortalidad embrionaria entre los das 26 y 40 se produjo en 45% de los bfalos y se asoci con la presencia de importantes agentes infecciosos en slo 10 bfalos (8%). Las concentraciones de P4 en el da 10 despus de la IA fue mayor (P <0,05) en los bfalos que establecieron un embarazo que en los bfalos que mostraron que la mortalidad embrionaria no se asoci con agentes infecciosos. De manera similar, en el da 20 despus de la IA las concentraciones de P4 fueron mayores (P <0,01) en bfalas embarazadas en comparacin con bfalas no embarazadas y bfalas que tenan mortalidad embrionario. Se concluye que una capacidad reducida de secrecin de P4 puede explicar alrededor del 50% de las mortalidades embrionarias en bfalas sincronizadas y apareadas por AI durante un perodo de actividad reproductiva baja y que otros factores an no identificados tambin tienen un efecto significativo sobre la supervivencia embrionaria. 1. Introduccin El bfalo es una especie de fotoperodo y las hembras muestran una disminucin en la actividad reproductiva a partir de mediados de invierno hasta la primavera en respuesta a la creciente duracin del da. La disminucin de la actividad reproductiva de temporada se manifiesta por una reduccin en la incidencia de comportamiento estral, una disminucin en la proporcin de mujeres que se someten a ciclos de celo regulares y generalmente bajas tasas de concepcin. Hay un requisito en la regin mediterrnea para los programas apareamiento de bfalos que se realizarn durante la depresin estacional para que el parto coincida con el pico anual de la demanda de leche de bfala. Esto crea una conflicto potencial entre el punto ms bajo en la reproduccin estacional y la necesidad de establecer embarazos. La sincronizacin del estro se ha utilizado en los bfalos en un intento de aumentar las tasas de concepcin durante la depresin estacional de la fertilidad y en un estudio reciente las tasas de embarazo despus de la sincronizacin y el AI eran alrededor del 30%. Esto se compara con una tasa de embarazo de 50% de los bfalos que se sometieron a la sincronizacin del estro similar durante un perodo de la disminucin de la duracin del da. El ltimo estudio indica que los bfalos tienen el potencial para lograr tasas de embarazo similares al ganado despus de la sincronizacin del estro. La causa de las tasas de embarazo relativamente bajas en los bfalos sincronizados y apareados durante el perodo en que la actividad reproductiva se suprime no ha sido ampliamente investigada. Las concentraciones plasmticas de progesterona (P4) Son generalmente ms bajos y menos fiable como indicador de embarazo durante los perodos de aumento de duracin del da en y esto tiende a ser asociado con una mayor incidencia de mortalidad embrionaria temprana. La reduccin de la secrecin de P4 por debajo de un umbral requerido para establecer el embarazo se ha demostrado como una causa de mortalidad embrionaria en el ganado y propuesto para el bfalo. El objetivo del presente estudio fue determinar la incidencia de la mortalidad embrionaria en bfalos mediterrneos italianos, sincronizado y se apareados por IA en pleno invierno que coincidi con la transicin de la depresin estacional de la fertilidad a la actividad reproductiva. Circulando concentraciones de P4 fueron monitoreados durante el ciclo despus del apareamiento para determinar si existen relaciones entre las tendencias del plasma P4 y la mortalidad embrionaria. La aparicin de agentes infecciosos en el tracto reproductivo se determin tambin e igualmente relacionada con la mortalidad embrionaria.

2. Material y mtodos 2,1. Animales El estudio se realiz utilizando bfalas mediterrneas italianas multparas (N = 243) a 163 6 das de lactancia de cras en el sur de Italia (entre 40.58N y paralelo 41.58N). Los animales fueron seleccionados mediante examen clnico antes de la IA y slo aquellos con buena salud se incluyeron en el ensayo. Se 2 mantuvieron en patios abiertos que permitieron 15 m para cada animal. Una racin total mezclada que consiste en 50-55% de forraje y 45-50% de concentrado, que contiene 0,90 MFU/kg de materia seca (MS) y 15% de protena cruda/DM, se aliment diariamente en un corral en grupo. 2,2. Sincronizacin del estro El tratamiento de sincronizacin del estro fue desarrollado para el ganado y ha sido utilizado previamente en los bfalos. Brevemente, se compone de 100 g de GnRH (Enagon 1, Gellini) administrado en el da 0, 375 g PGF2 (Cystrinol 1, Gellini) en el Da 7 y 100 g de GnRH el da 9 (Programa Ovsynch-TAI). Debido a la intensidad relativamente baja del comportamiento de estro en los bfalos, los animales son palpados por el recto (inmediatamente antes de la IA) para evaluar el estado estral (folculo 1,0 cm y un tero tnico con la presencia o ausencia de secrecin mucosa vaginal). Las inseminaciones artificiales se realizaron por el mismo operador y cada bfalo fue inseminado dos veces, 16 y 40 horas despus de la segunda inyeccin de GnRH. El semen congelado de un mismo lote de un solo toro de fertilidad demostrada fue utilizado en el programa de IA. Bfalas con un folculo <1,0 cm no recibieron la IA. El estado ovrico cclico de las bfalas y la funcin ltea fueron evaluados por la medicin de las concentraciones de P4 por RIA en dos muestras de sangre tomadas en los das 10 y 20 despus de la IA. Las concentraciones de P4 en la Sangre > 1,5 ng / ml se consideraron indicativos de la presencia de un cuerpo lteo activo. 2,3. Embarazo y evaluacin de lavado uterino Veintisis das despus de la IA, las bfalas se sometieron a una ecografa trans-rectal para evaluar el desarrollo embrionario. La ecografa se realiz con un Aloka SSD-500 unidad equipado con una sonda de formacin lineal de 5,0 MHz (Aloka Co., Tokio, Japn) y se llev a cabo por el mismo operador experimentado. El diagnstico de gestacin se confirm el da 40 despus de la IA mediante ecografa. Las bfalas que estaban embarazadas en el da 26, pero no el da 40 se considero que ha sido objeto de la mortalidad embrionaria y el lavado uterino se obtuvo para prueba de agentes infecciosos. La solucin salina fisiolgica estril (0,9% NaCl) fue utilizada para lavar y el fluido se recuper en recipientes estriles y se almacen a 4C. Los anlisis microbiolgicos se llevaron a cabo para Campylobacter spp., Enterobacteriaceae, Pasteurella spp., Pseudomonas spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Listeria monocytogenes, Arcanobacterium pyogenes, licheiniformis Bacillus, Mycoplasma spp. y hongos. Un ensayo ELISA se utiliz para la deteccin de BVDV (simbitica) y el PCR se realiz para Leptospira spp., BuHV-1, Toxoplasma gondii y Neospora caninum. Un mes despus de que las descargas uterinas de las bfalas no embarazadas y bfalas que tuvieron mortalidad embrionaria temprana durante el programa de IA se colocaron con toros de libido y fertilidad comprobados (1 toro/20 hembras) durante siete meses. El embarazo se control mediante rectal palpacin a intervalos de 30 das. Da de la concepcin se calcul restando el duracin de la gestacin promedio (308 das) a partir del da al momento del parto. 2,4. Los anlisis estadsticos Las diferencias en las concentraciones sanguneas de P4 en los das 10 y 20 despus de la IA entre embarazadas, no embarazadas y bfalos que tuvieron mortalidad embrionaria fueron probados por ANOVA. El mismo anlisis se utiliz para las comparaciones del inicio del perodo de apareamiento hasta el intervalo de la concepcin entre las bfalas no embarazadas y las bfalas que tenan la mortalidad embrionaria. Las diferencias dentro de cada grupo de situacin reproductiva (embarazadas, no embarazadas y bfalos que haban tenido mortalidad embrionaria) era entre P4 a los 10 y 20 das despus de la IA. Eran analizados por t-test para muestras pareadas.

3. Resultados De 243 bfalos fueron sometidos a tratamiento de sincronizacin, 34 (14%) no tenan un folculo 1,0cm y fueron excluidos del estudio. De los restantes 209 bfalos, el 86% (180) mostraron una respuesta al ciclo estral tpica, con P4 elevada en los das 10 y 20 despus de la sincronizacin. En 18/209 (8,7%) bfalos la P4 fue elevada (> 1,5 ng / ml) slo en el Da 20 mientras que 11/209 (5,2%) bfalas no tenan P4 elevado en cualquiera de los das 10 o 20. Los animales antiguos se consideran que han sufrido un aumento retardado en P4 despus de la ovulacin, mientras que los ltimos animales fueron considerados como acclicos. La tasa de preez en el da 26 despus de la IA fue del 63% (131/209), pero se redujo a 34% (72/209) por Da 40 lo que represent una mortalidad embrionaria de 45% (59/131). Entre los bfalos mostraron que la mortalidad embrionaria 7,6% (10/131) tenan agentes infecciosos en lavado uterino (Streptococcus spp., Enteriobacteriacee spp., Proteus spp., Staphylococcus spp., Leptospira y Licheiniformis Bacillus). La tasa de preez y la mortalidad embrionaria fueron no se vieron afectadas por la edad, la paridad o la etapa de la lactancia (Tabla 1). 1.5 ng/ml

Las concentraciones plasmticas de P4 en bfalas embarazadas y no embarazadas y bfalos que mostraron mortalidad embrionaria no infecciosa se muestran en la Tabla 2. Las bfalas embarazadas tenan concentraciones ms altas de P4 (P <0,05) en el Da 10 que las bfalas que mostraron mortalidad embrionaria, mientras que P4 en no embarazadas bfalos no difieren de los otros dos grupos. Bfalos embarazadas tambin fue mayor (P <0,01) plasma P 4 el da 20 que a la vez no embarazada bfalos y bfalas que mostraron mortalidad embrionaria. La concentracin plasmtica de P4 disminuyo (P<0,01) significativamente slo en bfalas no embarazadas entre los das 10 y 20 (Tabla 2).

Treinta y nueve (50%) de las bfalas no embarazadas y 25 (51%) de las bfalas que mostraron mortalidad embrionaria no infecciosa tuvieron un nivel elevado de plasma P4 (> 1,5 ng / ml) en los das 10 y 20 (Tabla 3). Las concentraciones de P4 en los dos ltimos grupos de bfalos eran similares a las concentraciones de P4 registradas en las bfalas embarazadas (Tabla 2). Los datos en la Tabla 3 tambin muestran que las bfalas no embarazadas tuvieron una disminucin en las concentraciones de plasma P4 en los Das 10 y 20 (DP4 = 0,8 0,3, P <0,05), mientras que las bfalas que experimentaron mortalidad embrionaria tuvieron un incremento (DP4 = 0,7 0,5) en las concentraciones de plasma de P4. Entre los bfalos que mostraron mortalidad embrionaria no infecciosa, 31% (15/49) tenan una breve fase del cuerpo lteo (P4 > 1,5 ng/ml slo en el da 10), y 18% (9/49) tuvieron un aumento retardado en plasma P4 (P4 > 1,5 ng/ml slo en el Da 20). 4. Discusin En el presente estudio, la proporcin (86%) de bfalos que mostraron estro sincronizado despus del tratamiento con el programa Ovsynch-TAI y la tasa de embarazo (34%) en el da 40 despus de AI fue similar a la reportada previamente en pleno invierno. La proporcin de los bfalos con desarrollo embrionario en el da 26 despus de la IA tambin fue similar a la reportada por bfalas que se sometieron a la sincronizacin del estro e IA durante un perodo de das de longitud decreciente. En este ltimo estudio, una baja incidencia de mortalidad embrionaria result en una relativamente alta tasa de concepcin a la sincronizacin del estro y la IA. Una observacin destacada en el presente estudio fue la incidencia relativamente alta (45%) de la mortalidad embrionaria entre los das 26 y 40 despus de la IA. La presencia de agentes infecciosos como causa probable de mortalidad embrionaria alrededor del 8% de las prdidas. En contraste con las conclusiones en el presente estudio una tasa de mortalidad embrionaria del 20% fue reportada en bfalas cerca del ecuador. Una caracterstica de los bfalos que experimentaron mortalidad embrionaria fue las relativamente bajas concentraciones de P4 en la sangre en los das 10 y 20 despus de la IA en comparacin con las bfalas que mantuvieron un embarazo. Sobre la base de este ltimo hallazgo, podra ser la hiptesis de que la mortalidad embrionaria en bfalos en el presente estudio se debi principalmente a una secrecin reducida de P4 por el cuerpo lteo. Esta conclusin sera consistente con los hallazgos en el ganado bovino y ovino en donde la mortalidad embrionaria se asoci con una reduccin de las concentraciones circulantes de P4. Como se ha sealado anteriormente bfalos son reproductores estacionales, y tiene un incremento de actividad reproductiva en respuesta a la disminucin de la duracin del da. El presente estudio se llev a cabo durante un perodo de aumento de la duracin del da y se propone que la relativamente alta incidencia de los bfalos con bajas concentraciones circulantes de P4 despus de la sincronizacin del estro era el reflejo de una reduccin de la actividad del sistema endocrino reproductivo. La secrecin deficiente de P4 se ha relacionado con una disminucin de la capacidad de desarrollo del embrin para secretar interfern-tau (IFN-t) en el umbral de las cantidades necesarias para prevenir la lutelisis. Sin embargo, las bajas concentraciones de P4 que se observaron en el 49% de los bfalos que mostraban mortalidad embrionaria temprana y el otro 51% tuvo concentraciones de P4 en los das 10 y 20 despus de la IA que eran similares a las concentraciones en bfalos que mantenan un embarazo. Otros factores pueden reducir las concentraciones circulantes de P4 por lo tanto tambin contribuyeron a la mortalidad embrionaria en el presente estudio. En consideracin, se inform de que la calidad del ovocito, como se juzga por la capacidad para dar como resultado en el desarrollo embrionario y el embarazo, se podra reducir en bfalos durante el perodo de anestro cuando aumenta la longitud del da. Curiosamente, el 50% de las bfalas que no estaban embarazadas en el Da 26 tenan las concentraciones de P4 en la sangre tanto en los das 10 y 20 despus de la IA, similares a las concentraciones en bfalas que estaban embarazadas en el da 40. Este hallazgo podra sugerir que hubo prdida embrionaria en las primeras tres semanas despus de la IA o algunos bfalos tuvieron un largo ciclo estral despus de la sincronizacin y la IA. La primera sugerencia implicara que la incidencia de mortalidad embrionaria temprana en los bfalos es ms alta que se ha registrado. De las bfalas que

mostraron una mortalidad embrionaria no infecciosa 49%, o bien tenan un aumento retardado en la circulacin P4 despus de la sincronizacin y la IA o una fase ltea relativamente corta. En conclusin, los bfalos que se someten a la sincronizacin del estro y a la IA durante un perodo de aumento de longitud de das tienen una incidencia relativamente alta de mortalidad embrionaria. Una capacidad reducida de secretar progesterona parece explicar parte de esta mortalidad embrionaria pero otros factores an no identificados contribuyen al 40 y 50% de las prdidas embrionarias. Ser importante para aclarar an ms los factores que pueden contribuir a la mortalidad embrionaria en los bfalos de modo que se pueden desarrollar estrategias para optimizar la fertilidad para la sincronizacin y la IA durante los periodos de actividad reproductiva reducida.