UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

CATEDRA DE FISIOLOGIA ANIMAL

Informe de Prctica de Laboratorio:

DETERMINACIN DEL VALOR DE ALGUNAS CONSTANTES CORPUSCULARES

Autor: KEVIN RAFHAEL DAZ MUOZ

Cd.: 050402107
Docente: MARGARITA ROMAN VARGAS

2012

INTRODUCCIN

El volumen de sangre de los adultos se correlaciona con la masa corporal (libre de grasa) y representa en las mujeres 3.5 L y en los hombres 4.5 L. La sangre est formada por una parte corpuscular (clulas sanguneas) y una parte lquida (plasma). De la parte corpuscular aproximadamente el 90%

corresponde a glbulos rojos (Rodak, 2004).

Entre las funciones de la sangre destacan entre otras el transporte de numerosas sustancias (O2, CO2, nutrientes, productos del metabolismo, vitaminas, electrlitos, etc.), el transporte de calor (calentamiento,

enfriamiento), la transmisin de seales (hormonas), el amortiguamiento y defensa frente a las sustancias extraas y microrganismos (Silbernagl y Despopoulus, 2000).

Estas funciones son realizadas por las clulas sanguneas, de las que las ms numerosas son los eritrocitos encargados del transporte de O 2 y de parte del taponamiento del pH. Entre los leucocitos, los granulocitos neutrfilos se encargan de la defensa inmunitaria inespecfica y los monocitos y linfocitos de las reacciones inmunitarias especficas. Las plaquetas (o trombocitos) intervienen de forma decisiva en la coagulacin de la sangre (Silbernagl y Despopoulus, 2000).

Debido a la importancia de estas funciones y a la cantidad de clulas sanguneas que participan en estos procesos, se toman medidas que nos indican valores normales de parmetros como: Tiempo de coagulacin, velocidad de sedimentacin, hematocrito, hemoglobina, recuento de glbulos rojos, recuento de glbulos blancos, volumen corpuscular medio, etc.

Por eso decidimos realizar esta prctica de laboratorio, donde determinaremos el valor de las siguientes constantes corpusculares: Tiempo de coagulacin, velocidad de sedimentacin, hematocrito, hemoglobina, recuento de glbulos rojos, recuento de glbulos blancos, volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, concentracin media de hemoglobina corpuscular. Y como objetivo comparar los resultados obtenidos con los parmetros normales.

II.

MATERIAL Y MTODOS
1. MATERIALES: a) Material biolgico: Sangre

b) Obtencin de las muestra: Jeringa Algodn Alcohol Banda elstica Frascos con anticoagulante

c) Tiempo de coagulacin: Lamina porta objeto Alfiler Cronometro

d) Velocidad de sedimentacin: Tubo de Wintrobe Soporte para tubo

e) Hematocrito: Tubo de Wintrobe Soporte para tubo

f) Hemoglobina: Pipeta de Sahli NH4OH Boquilla

g) Cantidad de Glbulos rojos: Pipeta de Thomas Cmara de NEUBAUER Laminilla cubre objeto Boquilla Microscopio Contometro

h) Cantidad de Glbulos blancos: Pipeta de Thoma Cmara de NEUBAUER Laminilla cubre objeto Boquilla Microscopio Contometro

2. MTODO: Obtencin de la muestra La sangre se extrajo tpicamente de una vena, de la parte interior del codo. El sitio se limpia con un desinfectante (alcohol). Se envolvi una banda elstica alrededor de la parte superior del brazo con el fin de aplicar presin en el rea y hacer que la vena se llene de sangre. Luego, se introdujo suavemente una aguja en la vena y se recogi la sangre en un frasco conteniendo anticoagulante. La banda elstica se retir del brazo. Una vez recogida la muestra de sangre, se retir la aguja y se cubri el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.

Tiempo de coagulacin: Se coloca una gota de sangre en una lmina porta objeto, con un alfiler se mueve lentamente la gota de sangre hasta observar la formacin de un delgado hilo en la punta del alfiler que vendra a ser la fibrina formada producto de la transformacin del fibrogeno.

Calculando el tiempo desde que se coloco la gota de sangre hasta la aparicin de dicho hilo. El cual seria el tiempo de coagulacin.

Velocidad de sedimentacin: Colocamos el tubo de Wintrobe en la gradilla de sedimentacin cuidando que est perfectamente bien nivelada. Con la ayuda de la pipeta Pasteur llenamos el tubo de Wintrobe hasta la marca de 10 1 con sangre previamente homogenizada. Dejamos reposar durante una hora evitando cualquier movimiento. Hicimos la lectura de los milmetros (mm) sedimentados en una hora.

Hematocrito: Segn el Mtodo de Wintrobe, la sangre con anticoagulante debe ser llevada mediante una pipeta Pasteur, hacia el tubo de Wintrobe, co0menzando desde el fondo hasta la marca de 100mm. , teniendo cuidado de no formar espuma. Tapar el tubo con un tapn de goma para evitar evaporacin. Centrifugar a 3000rpm. por 30 minutos. Transcurrido el tiempo observar y medir directamente el nivel de la columna de glbulos rojos.

Micro hematocrito: Tomar la muestra en capilares con anticoagulante.

Debe llenarse aproximadamente 70 80% del capilar. Ocluir un extremo del capilar con plastilina.

Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrifuga de microhematocrito, con el extremo ocluido, adherido al reborde extremo de la plataforma. Centrifugar por 5 minutos entre 10000 12000 rpm.

Hemoglobina: La sangre tomada se diluye en 5ml de hidrxido de amonio el cual causa hemolisis de los hemates. Por medio de la pipeta de Sahli se toma exactamente 0.02 ml de sangre total, limpiar luego la punta con papel absorbente, y verter en un tubo de ensayo el cual contiene el hidrxido de amonio. Dejar en reposo por espacio de 5 a 15 minutos. Luego llevar a un espectrofotmetro absorbancia. Realizar los clculos, multiplicando la absorbancia por el factor que es 0.1063, y as obtener la concentracin de hemoglobina por unidad de volumen (gr/dL). con filtro verde a 540 nm. y leer la

Cantidad de Glbulos rojos: Llenar la pipeta de Thoma para eritrocitos (roja) con sangre hasta la marca de 0.5 con ayuda una boquilla. Secar el exceso de sangre con una gasa limpia. Sin dejar caer alguna gota de sangre, llenar con el lquido diluyente de Hayem hasta la marca de 101 sin pasar de la marca. Mezclar el contenido en el agitador para pipetas de Thoma

durante 1 min. Desechar las primeras 3 gotas. Dejar caer una gota en la cmara de NEUBAUER, cubrir con una laminilla. Contar las clulas con el objetivo 40X en las cinco cuadrculas secundarias con la ayuda de un contador mecnico. Calcular el nmero de eritrocitos/mm3 multiplicando el valor obtenido por 10000

Cantidad de Glbulos blancos: Llenar la pipeta de Thoma para leucocitos (blanca) con sangre hasta la marca de 0.5 con ayuda una boquilla. Secar el exceso de sangre con una gasa limpia. Sin dejar caer alguna gota de sangre, llenar con el lquido diluyente de Turck hasta la marca de 101 sin pasar de la marca. Mezclar el contenido en el agitador para pipetas de Thoma durante 1 min. Desechar las primeras 3 gotas. Dejar caer una gota en la cmara de NEUBAUER, cubrir con una laminilla. Contar las clulas con el objetivo 40X en las cinco cuadrculas secundarias con la ayuda de un contador mecnico. Calcular el nmero de eritrocitos/mm3 multiplicando el valor obtenido por 10000 Volumen corpuscular medio (VCM): Resulta de multiplicar el valor del hematocrito en porcentaje por 10, divido todo esto entre el nmero de Glbulos Rojos contados en millones por mm3. Arroja el volumen promedio de cada GR, en micras cubicas o femtolitros (fL).

Hemoglobina Corpuscular Media (HCM): Se determina mediante el cociente entre el valor de la concentracin de hemoglobina de sangre total (gr/dL) multiplicado por 10 y el nmero de hemates en un mm3. Se expresa en g.

Concentracin Corpuscular Media de hemoglobina (CMHC): Se obtiene de la multiplicacin de la concentracin de la hemoglobina de la sangre total por 100, todo esto divido entre el valor del hematocrito en porcentaje.

III.

RESULTADOS: Tabla N 1:
ANLISIS Tiempo de coagulacin Velocidad de sedimentacin Hematocrito Microhematocrito Hemoglobina Recuento de Glbulos rojos Recuento de Glbulos blancos Volumen corpuscular medio(VCM) Hemoglobina corpuscular media(HCM) Concentracin media de Hb. Corpuscular(CMHC) LECTURA 213 17 mm/h 46% 46% 18.39g/dL 2940000 mm3 5450 mm3 1.57x10-4fL 7.39x10-5 g 40%

IV.

DISCUSIN:
El nmero de leucocitos depende de muchos factores como, edad, peso, etc. Para adultos los valores de referencia oscilan entre 4 500 / mm3 y 11 500 / mm3 (Ruiz, 2003). Los valores obtenidos para recuento de glbulos blancos en la tabla 1 dan un nmero de 5450 mm3 de sangre, encontrndose dentro de los parmetros ideales.

La referencia para hemoglobina es variable y depende del sexo, altura del sitio de residencia, etc. Las cifras inferiores normales de hemoglobina en adultos sanos son de 12 g/dL para mujeres y de 14 g/dL para varones. Las

cuantificaciones de Hb inferiores a las mencionadas permiten establecer el diagnstico de anemia. Las cifras de hemoglobina superiores a 15 g/dL para mujeres y 18 g/dL para varones permiten establecer el diagnstico de

eritrocitosis o polisemia (Ruiz, 2003). Por lo tanto concentracin de hemoglobina en mujer, hallada en el laboratorio (18.39g/dL), se encuentra por encima del limite superior, lo que no indicara el diagnstico de eritrocitosis o polisemia; sino debido a al error propio de la inexperiencia de los estudiantes en estas pruebas.

El valor encontrado del Hto se encuentra en el rango dispuesto por Rodak, 2004, el cual oscila entre 35 y 49 % para mujeres.

El Tiempo de coagulacin indica el estado de los factores plasmticos que intervienen en el mecanismo de la coagulacin (globulina antihemoflica,

protrombina, fibringeno, etc.) o que la dificultan (antitrombina, etc), aunque hay que resaltar su escaso valor, pues es normal en muchos casos en los que estos factores estn alterados (M. Donado, 2005). En la prctica este tiempo fue de 2 13, valor ligeramente bajo; ya que el tiempo de coagulacin normal es de 5 a 10 minutos. Slo si es superior a 12 puede considerarse patolgico (Rodak, 2004).

La velocidad de sedimentacin globular (VSG) es til para monitorizar la evolucin de una enfermedad inflamatoria o diferenciar enfermedades similares. La VSG es afectada por los eritrocitos, el plasma y factores mecnicos y tcnicos. Los eritrocitos normalmente son pequeos, sedimentan despacio y tienen una carga superficial neta negativa, por consiguiente tienden a repelerse entre s (Rodak, 2004). Caso que ocurre en la VSG hallada en el laboratorio de prctica, el cual esta dentro del rango establecido por Ruiz, 2003, el cual va desde los 15 mm/h a 20 mm/h.

V.

CONCLUSIN:
Los resultados obtenidos para las diferentes pruebas, dan resultados dentro de los parmetros establecidos, por lo que se los puede considerar como normales, con excepcin de algunos valores que varan.

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFCAS:
GANONG W. 1996. Fisiologa mdica. El Manual Moderno. RODAK, F. 2004. HEMATOLOGA: Fundamentos y Aplicaciones Clnicas. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. pg. 155-168. RUIZ ARGUELLES, G. J. 2003, FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA, Editorial Mdica Panamericana S.A. Espaa., pg. 45-60. SILBERNAGL, S. DESPOPOULUS, A. 2000. Atlas de bolsillo de fisiologa. Ediciones Harcourt. Espaa. pg. 88.