Ginecol Obstet Mex 2008;76(1):52-64

Artculo de revisin

Descripcin de los elementos biolgicos implicados en el inicio de un nuevo organismo. Revisin de investigaciones contemporneas sobre el desarrollo embrionario temprano
Alejandra Huerta Zepeda,* Mara Elena Torres Padilla,** Rodrigo Guerra Lpez***

RESUMEN
El desarrollo embrionario de los mamferos comienza con la fertilizacin de un ovocito maduro por un espermatozoide. Las clulas germinales atraviesan una serie de procesos, incluida la gametognesis: a) origen de las clulas germinales y su migracin hacia las gnadas, b) aumento en nmero de las clulas germinales por mitosis, c) reduccin del nmero de cromosomas por meiosis, y d) maduracin estructural y funcional de los ovocitos y espermatocitos. Cuando estn capacitadas o maduras, los gametos se liberan de las gnadas y se transportan al oviducto, donde normalmente se realiza la fertilizacin. En el ovocito fertilizado (cigoto) comienza la transicin-maternaal-cigoto, que incluye la degradacin de los transcritos maternos, reemplazados por los transcritos del cigoto, por la activacin del genoma del cigoto. Simultneamente, el material nuclear del espermatozoide y del ovocito sufre una serie de cambios que forman los proncleos masculino y femenino. Esta serie de cambios incluye el reemplazo de las protaminas que empaquetan el material gentico masculino por histonas. Despus de la fertilizacin, los gametos se reorganizan epigenticamente, lo que implica cambios en la cromatina y metilacin del ADN; esta reprogramacin se extiende al estadio de blastocisto. Las modicaciones covalentes de las histonas y la metilacin del ADN se consideran las marcas epigenticas ms importantes en el desarrollo del embrin preimplantado. Finalmente, en el cigoto se distinguen los polos animal-vegetal por la expulsin del cuerpo polar. Luego sufre una serie de divisiones que originan al blastocisto, donde se distingue el eje embrionario-abembrionario, para enseguida entrar al tero previamente preparado para la implantacin. Palabras clave: desarrollo embrionario, clulas germinales, reprogramacin epigentica, fertilizacin, cigoto, blastocisto.

ABSTRACT
The development of the mammalian embryo begins with the fertilization of the mature oocyte by the sperm. However, many processes that lead to the production of functional gametes precede this event. First of all, both male and female germ cells form during gametogenesis. The gametogenesis comprises four different steps: a) the specication and migration of primordial germ cells, b) the increase in the number of germ cells through mitotic divisions, c) the reduction in chromosomal number through meiosis, and d) a nal structural and functional maturation of the oocyte and the sperm. Once the oocyte and the sperm have matured, the newly formed gametes are released from the gonads upon the appropriate hormonal stimulus and are subsequently transported to the oviduct, where the oocyte awaits to be fertilized by the sperm. The fertilized oocyte, now called zygote, undergoes the maternal-to-zygotic transition, characterized by the degradation of maternal transcripts and the concomitant synthesis of transcripts by the newly formed zygote. The production of these new transcripts is the result of the genome activation of the zygote. At the same time, the sperm and eggs chromatin experience a series of changes that will result in the formation of the male and female pronuclei. In the male pronucleus an exchange of protamines for histones takes place. Furthermore, the parental genomes are subject to modication through DNA demethylation, and the proteins, around which the DNA is packed, the histones, are also subject to covalent modications. These modications constitute some of the most prominent changes involved in the epigenetic reprogramming of the two gametes. Finally, the animal-vegetal poles that will begin the rst divisions or cleavage to give rise to the blastocyst, where we can already distinguish an embryonic-abembryonic axis. The blastocyst will then implant in the uterus previously prepared for implantation. Key words: embryonic development, germ cells, epigenetic reprogramming, fertilization, zygote, blastocyst.

RSUM
Le dveloppement embryonnaire des mammifres commence avec la fertilisation dun ovocyte mr par un spermatozode. Les cellules germinales traversent une srie de procs, la gamtogense incluse : a) origine des cellules germinales et leur migration vers les gonades, b) augmentation en nombre des cellules germinales par mitose, c) rduction du nombre de chromosomes par miose, et d) maturation structurelle et fonctionnelle des ovocytes et spermatocytes. Lorsquils sont capacits ou mrs, les gamtes se librent des gonades et sont transports vers loviducte, o la fcondation est normalement ralise. Dans lovocyte fertilis (zygote) commence la transition

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maternelle au zygote, qui comporte la dgradation des transcrits maternels, remplacs par les transcrits du zygote, par lactivation du gnome du zygote. Simultanment, le matriel nuclaire du spermatozode et de lovocyte subit une srie de changements qui forment les pronuclus masculin et fminin. Cette srie de changements comporte le remplacement des protamines qui contiennent le matriel gntique masculin par des histones. Aprs la fertilisation, les gamtes se rorganisent pigntiquement, ce qui implique des changements dans la chromatine et mthylation de lADN ; cette reprogrammation stend au stade blastocyste. Les modications covalentes des histones et la mthylation de lADN sont considres les marques pigntiques les plus importantes dans le dveloppement de lembryon pr implant. Finalement, dans le zygote on distingue les ples animal-vgtal par lexpulsion du corps polaire. Puis il subit une srie de divisions qui donnent origine au blastocyste, o se distingue laxe embryonnaire-abembryonnaire, pour ensuite entrer dans lutrus pralablement prpar pour limplantation. Mots-cls : dveloppement embryonnaire, cellules germinales, reprogrammation pigntique, fertilisation, zygote, blastocyste.

RESUMO
O desenvolvimento embrionrio dos mamferos comea com a fertilizao de um ovcito maduro com um espermatozide. As clulas germinais atravessam uma srie de processos, inclundo a gametogneses: a) origem das clulas germinais e sua migrao at as gnadas, b) aumento do nmero das clulas germinais por mitoses, c) reduo do nmero de cromossomos por meiose, e d) madurao estrutural e funcional dos ovcitos e espermatozides. Quando j esto capacitados ou maduros, os gametas se liberam das gnadas e se transportam ao oviducto, onde normalmente se realiza a fertilizao. No vulo fertilizado (zigoto) comea a transio-materna-aozigoto, que inclue a degradao dos transcritos maternos, substitudos pelos transcritos do zigoto, pela ativao do genoma do zigoto. Simultaneamente, o material nuclear do espermatozide e do ovcito sofre uma srie de mudanas que formam os proncleos masculino e feminino. Esta srie de mudanas inclue a substituio das protaminas que empacotam o material gentico masculino por histonas. Depois da fertilizao, os gametas se reorganizam epigeneticamente, o que implica mudana na cromatina e metilao do DNA; esta reprogramao se extende ao estgio de blastcisto. As modicaes covalentes dos histonas e a metilao do DNA se consideram marcas epigenticas mais importantes no desenvolvimento do embrio pr implantado. Finalmente, no zigoto se distingem os polos animal-vegetal pela expulso do corpo polar. Logo sofre uma srie de divises que originam ao blastcisto, onde se distinge o caminho embrionrio-abembrionrio, para em seguida entrar ao tero previamente preparado para a implantao. Palavras-chave: desenvolvimento embrionrio, clulas germinais, reprogramao epigentica, fertilizao, zigoto e blastcisto.

E
* ** ***

nseguida se exponen algunos elementos fundamentales que hoy ofrece la biologa del desarrollo para comprender y explicar la embriognesis en los mamferos, donde el ratn es el modelo experimental por excelencia. Muchas obras de embriologa han explicado este proceso continuo. Sin embargo, hoy existen nuevos datos que permiten

analizar con mayor certeza la continuidad y el carcter individual e irrepetible del nuevo organismo que surge tras la fertilizacin. Aqu nos limitamos a la descripcin de los elementos biolgicos implicados y dejamos para investigaciones futuras la interpretacin biolosca de los mismos y las eventuales consecuencias de estos hallazgos para la comprensin de la vida humana naciente.
CLULAS GERMINALES PRIMORDIALES

Departamento de Biologa Molecular y Biotecnologa. Instituto de Investigaciones Biomdicas, UNAM. Institut de Genetique et de Biologie Moleculaire et cellulaire (IGBMC), CU de Strasbourg, France. Centro Karol Wojtyla para la investigacin social avanzada, Quertaro, Qro., Mxico.

Correspondencia: Dra. Alejandra Huerta Zepeda. Instituto de Investigaciones Biomdicas. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Ciudad Universitaria, CP 04510. Mxico, DF. Tel.: +52 (55) 5622 92 21, E-mail: ahuertaz@yahoo.com Recibido: noviembre, 2007. Aceptado: noviembre, 2007. Este artculo debe citarse como: Huerta ZA, Torres PME, Guerra LR. Descripcin de los elementos biolgicos implicados en el inicio de un nuevo organismo. Revisin de investigaciones contemporneas sobre el desarrollo embrionario temprano. Ginecol Obstet Mex 2008;76(1):52-64. La versin completa de este artculo tambin est disponible en internet: www.actualizacionmedica.com.mx

La espermatognesis y la oognesis se han estudiado ampliamente durante muchos aos, no as el origen del linaje de las clulas germinales primordiales (primordial germ cells, PGC), su papel emergente y su destino, quiz porque se parte de la idea que estas clulas contienen la misma informacin gentica del organismo que las produce y porque adems su estudio es tcnicamente difcil. Las clulas germinales primordiales son las precursoras de las clulas germinales o clulas sexuales, reconocidas como clulas altamente especializadas, de quienes depende la existencia de descendencia.

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Estas clulas se desarrollarn en espermatocitos u ovocitos. En todos los mamferos las clulas germinales primordiales juegan un papel muy importante y nico en la trasmisin de la informacin gentica de una generacin a la siguiente. Durante la especicacin de las clulas germinales primordiales la metilacin del ADN se pierde, lo que trae consigo un cambio en la informacin epigentica que da como resultado una nueva programacin epigentica (reprogramacin). La reprogramacin es sustancialmente regulada por factores como la metilacin del ADN y la modicacin de las histonas que se unen a la cromatina (gura 1).1,2 En un embrin de aproximadamente 7.5 das postfertilizacin, las clulas germinales primordiales se localizan en pequeos racimos (25-40) en la pared del saco vitelino, en la base del alantoides, cerca de la insercin del futuro cordn umbilical; es decir, en la regin extraembrionaria (gura 2).3 Cuando se han especicado y desarrollado, las clulas germinales empiezan a migrar fuera de la cordillera genital, hacia las gnadas primordiales del embrin. Se pueden identicar, principalmente, por su alta actividad de fosfatasa alcalina y por la expresin de genes especcos implicados en la manutencin de la pluripotencialidad. Las clulas germinales son las nicas clulas que sufren divisiones meiticas durante su diferenciacin. Durante el curso de su migracin, estas clulas precursoras ya se han diferenciado en clulas germinales

Delantero

Trasero Alantoides

Corazn

Clulas germinales primordiales

Saco vitelino Figura 2. Origen y migracin de las clulas germinales. Las clulas germinales primordiales se observan en la pared del saco vitelino, en la base del alantoides.

Alto

PGCs Masculino

Femenino Bajo Figura 1. Reprogramacin de las clulas germinales. Las clulas germinales primordiales sufren una demetilacin en el desarrollo muy temprano. Posteriormente hay una remetilacin en las clulas germinales masculinas: se inicia en la espermatogonia y en las clulas germinales femeninas despus del nacimiento. Figura modicada de Reik W, 2001.

(germ cells, GC) y empiezan una fase rpida de proliferacin mittica una vez que han llegado a las gnadas. En cada divisin mittica las clulas germinales producen dos clulas diploides genticamente iguales. A travs de varias divisiones iguales, el nmero de clulas germinales aumenta con rapidez. El patrn de proliferacin mittica diere marcadamente entre las clulas masculinas y femeninas. Otra diferencia entre las clulas germinales masculinas y las femeninas es que las clulas germinales femeninas quedan arrestadas en profase de la meiosis I hasta la pubertad y cesan su actividad despus de la menopausia. En cambio, las clulas germinales masculinas entran a un arresto mittico en el estadio de clulas seminales espermatognicas en los tbulos seminferos; este arresto se reanuda en respuesta a la estimulacin de las hormonas gonadotrpicas que ocurre en la pubertad y las divisiones se prolongarn a lo largo de toda la vida (gura 3). En los gametos femeninos, la diferenciacin incluye la sntesis y almacenamiento de muy variadas molculas, ARN mensajeros, factores de transcripcin u otras molculas conocidas como factores maternos y que son necesarias para las fases iniciales del desarrollo temprano de un embrin. En los gametos masculinos, la diferenciacin incluye un alto grado de compactacin de la cromatina, que implica la sntesis de protaminas, que son pequeas protenas ricas en arginina y cistena con alta anidad por el ADN. En condiciones patolgicas, las clulas germinales primordiales que no entraron en las gnadas primordiales pueden originar tumores en el transcurso de la GINECOLOGA Y OBSTETRICIA DE MXICO

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Mediacin

Descripcin de los elementos biolgicos implicados en el inicio de un nuevo organismo

Espermatogonia

Oogonia

--- Crecimiento / Maduracin --Espermatocito primario Ovocito primario

--- Meiosis I --Espermatocito primario Ovocito primario

Primer cuerpo polar

Espermtide Diferenciacin

Segundo cuerpo polar Ovocito

Espermatocito Figura 3. Esquema de los pasos que ocurren durante la primera y segunda divisin meitica. La clula germinal primaria femenina (ovocito primario) produce una clula (ovocito secundario) y un cuerpo polar o clula pequea. En la segunda divisin meitica madura una clula (ovocito maduro) y el segundo cuerpo polar. La clula germinal primaria masculina (espermatocito primario) produce dos espermatocitos secundarios, que a su vez originan cuatro espermtides (cada uno se convierte en espermatozoide que en el trayecto del tero ser capacitado).

vida o sufrir mutaciones que provocan aberraciones en la diferenciacin de las clulas germinales, que eventualmente conducen hacia la infertilidad.
FERTILIZACIN

Con la fertilizacin se inician numerosos y complejos cambios, que incluyen diversos procesos celulares en el cigoto resultante; es decir, en el ovocito fertilizado y en la cromatina derivada del espermatozoide. El ovocito detenido en la profase meitica I contiene el ncleo en el centro. Con el reinicio de la meiosis, durante la maduracin del ovocito, se forma el huso meitico. ste se va desplazando hacia la corteza, que se enriquece de actina y forma microvellosidades en la membrana. Cuando el huso alcanza la zona cortical, se
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completa la metafase I y se expulsa el primer cuerpo polar. El resultado es el ovocito maduro arrestado en metafase II. En esta fase, el ovocito maduro puede ser fertilizado. Cuando en el ovocito fertilizado penetra el espermatozoide, empieza el proceso de expulsin del segundo cuerpo polar, con lo que se completa la segunda divisin meitica. En los instantes que siguen a la fertilizacin, el proncleo femenino se localizar cerca del cuerpo polar. Posteriormente, ambos proncleos migran hacia el centro del cigoto que se acaba de formar. En el cigoto, es decir, el embrin de una clula, el proncleo masculino est enriquecido de protenas, como los factores de transcripcin Spl, TBP, ets-114 que inicialmente no posee el proncleo femenino. Esto se reeja en mayor actividad transcripcional en la cromatina masculina: la expresin de genes en el proncleo masculino es signicativamente ms alta que en el femenino. El proncleo masculino no slo comienza la transcripcin antes que (e independientemente de) el proncleo femenino, sino tambin la replicacin. Estos eventos reflejan probablemente diferencias en la estructura de la cromatina paterna y materna, debido quiz, entre otras cosas, al intercambio que debe sufrir el proncleo masculino de protaminas a histonas (gura 4). Se ha propuesto que durante el intercambio protaminas-histonas que sigue a la fertilizacin, los factores transcripcionales maternos podran ganar tiempo para acceder al ADN que comprende las secuencias reguladoras de genes antes de que sean secuestradas al nucleosoma. El intercambio protaminas-histonas se inicia muy pronto despus de la fertilizacin y es completado mucho antes de la replicacin del ADN.4 Entre los cambios epigenticos a los que estn sujetos los proncleos est la desmetilacin del ADN, que se da en diferentes fases y a diferentes grados, produciendo una asimetra en ambos proncleos: mientras el proncleo femenino guarda globalmente las marcas de metilacin del ADN, el proncleo masculino est sujeto a una desmetilacin activa, a la que slo escapan los genes que se regulan por estampado. Es probable que esta asimetra epigentica tenga efectos importantes sobre la diferenciacin del embrin. Por ejemplo, en los embriones clonados resultado de la transferencia de un ncleo celular somtico, esta

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Ovocito ADN doble hlice

Espermatocito ADN doble hlice

Nucleosoma

1 hpf

Protamina

ADN

Solenoide

Espiral

mente, en el estadio de blastocisto, los linajes que constituyen la masa celular interna (inner cell mass, ICM) o el trofoectodermo muestran tambin una asimetra epigentica; en la masa celular interna aumenta la metilacin del ADN y de las histonas (gura 5).6 Hace poco se report que en el estadio de cuatro clulas, los niveles de metilacin de ciertos aminocidos en las histonas estn ms elevados en las clulas que contribuyen a la masa celular interna, eso indica que la informacin epigentica inuye en el destino de la determinacin celular.7 Otro evento de fertilizacin es la sealizacin intracelular provocada por la entrada del espermatozoide y que resulta en ondas de Ca2+ transitorio. Asimismo, suceden cambios en la poliadenilacin de ARNm materno, es decir, de transcritos que se produjeron en el ovocito durante su formacin. Finalmente, empieza
Huevo fertilizado 2 clulas 4 clulas 8 clulas 1 clula Mrula Blastocisto 32 - 64 clulas Fertilizacin Primordial Madura Clulas germinales Embrin Figura 5. Reprogramacin de la metilacin durante el desarrollo embrionario del ratn. Esquema de los niveles relativos de metilacin del ADN en las clulas germinales y en el desarrollo embrionario. La impronta de los genes metilados y la secuencia gentica sin impronta. Las clulas germinales primordiales, altamente metiladas, entran en la cordillera germinal y empieza la diferenciacin y expansin. Las clulas germinales primordiales sufren a lo largo del genoma una demetilacin. As, la fase de reprogramacin incluye borrado y reseteado de las marcas especcas de origen parental (impronta) que incluye la metilacin del ADN. La segunda fase de reprogramacin de la metilacin ocurre entre la fertilizacin y la formacin del blastocisto. En la fertilizacin se observa asimetra entre el material gentico parental, con la prdida de la metilacin de manera preferencial en el genoma paterno. Este proceso se efecta en ausencia de transcripcin y replicacin de ADN, es decir, en el espacio de unas horas, por lo que se deduce que se trata de una demetilacin activa. La iniciacin de la metilacin del ADN de novo ocurre despus del quinto ciclo celular y coincide con la formacin del blastocisto. Figura modicada de Santos F, 2004.

Mc Octmero histona

6 hpf

Ac Octmero histona

Mc Histona metilada NH2terminal

HDAC HMT

? Mc Alto Histona acetilada NH2terminal

Figura 4. Asimetra epigentica de la cromatina en el cigoto despus de la fertilizacin. En la fertilizacin, los gametos femeninos y masculinos estn en diferentes fases de la maduracin meitica. El gameto femenino se encuentra arrestado, o detenido, en metafase de la segunda divisin meitica (MII) en espera de la seal para completar la meiosis. En el proncleo femenino, las histonas se encuentran metiladas en la regin amino-terminal. En el proncleo masculino se encuentra acomplejado en una conguracin toroidal nica, debido a la presencia de protaminas. El proncleo masculino debe sufrir descondensacin e intercambio de protaminas a histonas. Durante este periodo, las histonas sufren cambios de acetilacin y desacetilacin (a travs de enzimas especcas llamadas histonas acetiltransferasas -HAT- y deacetilasas -HDAC-, respectivamente); y metilacin (a travs de histonas metiltransferas especcas (HMTs).

Bajo

asimetra epigentica no existe, y los embriones resultantes de la clonacin muestran defectos durante el desarrollo ms tardo, particularmente en el de los tejidos embrionarios o extraembrionarios.5 La reprogramacin de los genomas parentales contina durante las primeras divisiones celulares. Posterior-

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la sntesis de protenas propias del embrin, que no son maternas. Los cambios que acompaan a la fertilizacin no han podido reproducirse del todo en la fertilizacin articial o fecundacin in vitro. Por ejemplo, la incorporacin de la membrana del espermatozoide provoca, en la membrana del ovocito (oolema), la reaccin de bloqueo rpido de poliespermia, mientras que en los ovocitos activados por inyeccin intracitoplsmica del espermatozoide (intra-cytoplasmatic sperm injection, ICSI), tcnica frecuentemente usada en la fertilizacin in vitro, el ovocito recin fertilizado puede ser penetrado por otros espermatozoides durante varias horas, debido a que no se desarrolla la reaccin de bloqueo del oolema.8
PRINCIPALES EVENTOS DURANTE EL DESARROLLO DEL EMBRIN ANTES DE LA IMPLANTACIN

producir sus propios ARNm y las correspondientes protenas; asimismo, los transcritos maternos se van degradando poco a poco. Esta transicin se conoce como la transicin desde la madre al cigoto (maternal-to-zygotic transition, MZT). Esto implica que el desarrollo es inicialmente sustentado por las protenas heredadas de la madre presentes en el ovocito, y que los transcritos maternos son reemplazados por los transcritos del cigoto. En el desarrollo de organismos multicelulares existe un periodo de silencio transcripcional, que va desde que el ovocito alcanza el crecimiento completo (fully growth oocyte) hasta que la activacin del genoma embrionario se reanuda varias horas despus de la fertilizacin. La transicin materna al cigoto tiene varias funciones que son requeridas durante la preimplantacin del embrin y que se resumen en tres funciones: 1) Destruccin de los transcritos maternos del ovocito (ARNm unidos a MSY2) y degradacin de los depsitos de ARNm maternos. Al parecer, la degradacin de los ARNm maternos es un mecanismo que dirige el inicio del desarrollo del ovocito al embrin. 2) Reemplazo de los transcritos maternos localizados en el ovocito, por nuevos transcritos de origen cigtico. Si stos no se reemplazan por los transcritos del cigoto, el desarrollo se altera por la incapacidad del embrin de ejecutar las funciones celulares bsicas. La produccin de nuevos transcritos implica la activacin del genoma embrionario (embryonic genome activation, EGA) o activacin gnica del cigoto (zygotic genome activation).10 3) Promocin de la reprogramacin del patrn de expresin de los genes en el cigoto, acompaada de la generacin de nuevos transcritos que no se expresaron en el ovocito.11 Es probable que la transicin sea consecuencia de la reprogramacin, y no viceversa. Las modicaciones covalentes de las histonas y la metilacin del ADN son las marcas epigenticas ms importantes en el desarrollo del embrin preimplantado. Despus de la fertilizacin los gametos sufren una fuerte reprogramacin que incluye cambios en la metilacin del ADN, modicacin en las histonas e incorporacin diferencial de histonas especializadas. Los cambios

Los procesos desencadenados por la fertilizacin incluyen la transicin-materno-cigtica, misma que lleva consigo la degradacin de transcritos matemos y la activacin del genoma del cigoto que, al mismo tiempo, implica la reprogramacin de la expresin de genes indispensables para el desarrollo embrionario subsiguiente. Aunque la principal actividad transcripcional de la expresin de genes ocurre durante el estadio de dos clulas, la transcripcin es evidente en el embrin-l-clula.
Funciones biolgicas de la transicin de la madre al cigoto

El control de la traduccin juega un papel importante en la maduracin del ovocito y es un proceso que tambin ocurre durante el desarrollo temprano del embrin. En este proceso participa la protena MSY2 (familia de protenas multifuncional caja-Y) implicada en la inhibicin de la traduccin de los ARNm maternos. MSY2 participa en la regulacin de la estabilidad de los ARNm durante el crecimiento del ovocito y en la maduracin del mismo se inactiva despus de la fertilizacin.9 Cuando el genoma del embrin se activa, se inicia el control del proceso de maduracin del ovocito, la terminacin de la meiosis y algunos eventos de la posfertilizacin. Posteriormente, el cigoto empieza a
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epigenticos del genoma parental pueden ser necesarios para activar la transcripcin cigtica.12 En experimentos de transferencia nuclear se demostr la prdida de la capacidad funcional del citoplasma de un ovocito para reprogramar un ncleo somtico, esto sugiere la importancia de la asimetra epigentica entre los dos genomas parentales y las funciones de la transicin cigtica para el desarrollo embrionario correcto.
Reprogramacin epigentica en el desarrollo embrionario

Las modicaciones covalentes de la histonas y la metilacin del ADN son las marcas epigenticas ms importantes en el desarrollo del embrin preimplantado. Recientemente se public que los mecanismos epigenticos en el embrin temprano no slo implican cambios en la modicacin de las histonas, sino tambin incluye el reemplazo de las histonas y algunas variantes de stas, en particular la H3.3.7 A pesar de que el contenido gentico es el mismo en ambos gametos (ncleo haploide, 23 cromosomas), las diferencias en la informacin epigentica refuerzan su naturaleza distintiva. El marcado epigentico conere estabilidad a la expresin de genes y a la estructura de la cromatina, con esto se logra que la informacin se traduzca adecuadamente durante el desarrollo del organismo que inicia desde el embrin-l-clula. Las marcas o informacin epigentica contribuyen al desarrollo y dicha informacin puede regular el destino celular. Despus de la fertilizacin ambos proncleos migran al centro del cigoto, pero permanecen separados durante las fases S y G2 del ciclo celular. Los dos proncleos se sincronizan para que se lleve a cabo la metafase de la primera mitosis. La primera divisin mittica se completa con la telofase y citocinesis del cigoto. La duracin de la mitosis del cigoto del ratn es aproximadamente de 119 minutos. Aun sin la fusin del material nuclear de los gametos, en el cigoto se inicia un proceso namente controlado.
Gnesis de la polaridad

La gnesis de la polaridad, es decir la regionalizacin en los embriones tempranos de los mamferos, es otro aspecto importante para el desarrollo de todo el organismo. En teora, la polaridad es el resultado de la

distribucin de los ARNm y protenas en el embrin. Esta distribucin asimtrica es importante ya que si estas molculas no se distribuyen correctamente, entonces el patrn del embrin se afecta. Esta distribucin asimtrica de componentes moleculares es muy obvia en el ovocito de embriones de otras especies no mamferas, como en Xenopus (rana), el pez y los erizos de mar. Sin embargo, en los embriones de mamferos dichos componentes maternos tericamente distribuidos asimtricamente no se ha identicado con claridad. En el embrin de ratn la polarizacin de los blastmeros, entre las divisiones del estadio de 8 a 16 clulas, que se reeja en la generacin de divisiones asimtricas y simtricas, es necesaria para la formacin de dos diferentes tipos de clulas en el blastocisto: la masa celular interna y el trofoectodermo. Consecuentemente ocurre la formacin del blastocisto y su eje embrionario-abembrionario: la regin del embrin que incluye la masa celular interna demarca la parte embrionaria, mientras que la cavidad es la parte abembrionaria. En la mayor parte de las especies la polaridad del embrin se establece desde la maduracin del ovocito o durante la fertilizacin, como consecuencia de la localizacin asimtrica de determinantes celulares. Algunos autores piensan que en los mamferos la polaridad se desarrolla tcnicamente despus de la implantacin. Antes se pensaba que los blastmeros (clulas del embrin temprano) son clulas idnticas hasta que ocurre la generacin de clulas diferentes resultantes de divisiones asimtricas. En la actualidad hay varias demostraciones que sugieren que el establecimiento de los ejes del embrin puede realizarse en el cigoto, y que los ejes embrionario-abembrionario, antero-posterior (craneal-caudal), pueden encontrarse, por ende, delimitados en el embrin preimplantado. El desarrollo del embrin de mamfero es altamente regulativo, esto signica que aunque pueda haber una tendencia en el seguimiento de ciertas pistas del patrn, que se dan a lo largo del desarrollo de la preimplantacin normal, el destino celular no est jado en ningn momento y si el embrin es perturbado, el patrn puede volver a establecerse. Por esto, la adopcin o el seguimiento de un patrn en el embrin de ratn no son estrictamente necesarios para su desarrollo. GINECOLOGA Y OBSTETRICIA DE MXICO

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Despus de la fertilizacin, luego de los procesos mencionados, el cigoto sufre un cambio pronunciado en el metabolismo y comienzan las divisiones celulares. Durante este tiempo (tres das en el caso del ratn) el embrin an est encasquetado en la zona pelcida y es transportado a travs del oviducto uterino hacia el tero para su implantacin.
Primera divisin mittica del cigoto

Al parecer, el cigoto es simtrico; sin embargo, es el producto del ovocito previo a la divisin meitica II. Cuando se expulsa el segundo cuerpo polar, la asimetra del cigoto se vuelve evidente por la posicin del cuerpo polar. El cuerpo polar es una de las notas caractersticas que, convencionalmente, dene el polo animal. Otra caracterstica de la asimetra es el cono de fertilizacin, que es una estructura temporal (su existencia dura aproximadamente 30 minutos) que se forma cerca del punto de entrada del espermatozoide en el ovocito.13 En la actualidad, el estudio de las primeras divisiones del cigoto ha tenido un atractivo especial, porque sigue abierta la interrogante sobre si las primeras divisiones son, en cierto sentido, aleatorias o si existen algunos patrones exibles que conducen al desarrollo embrionario que permite cierta plasticidad. Diversos investigadores (Gardner RL, ZernickaGoetz M, Fujimori T) han estudiado el patrn de las primeras divisiones en el embrin de ratn. En ausencia de un marcador conable, inherente al mismo cigoto, las observaciones experimentales se llevan a cabo siguiendo el comportamiento de factores externos o de seales, como el punto de entrada del espermatozoide o el cuerpo polar (que reeja el sitio de la segunda divisin meitica).14-17 Algunas observaciones muestran una correlacin entre la polaridad del cigoto y el blastocisto, ya que la simetra del plano bilateral del blastocisto temprano se encuentra, por lo general, ortogonal al eje animal-vegetal del cigoto. As, el eje embrionario-abembrionario (em-ab) tiende a formar un ngulo recto al plano de la primera divisin. Estas correlaciones no ocurren en todos los embriones analizados, pues no todos los embriones se han reexaminado (slo 60% del total) debido a dicultades tcnicas.18
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Puesto que el eje embrionario-abembrionario puede estar relacionado con el plano de la primera divisin mittica, es importante tratar de entender cmo se genera esta primera divisin. La primera divisin mittica ocurre, generalmente, en el plano meridional (86% de los cigotos analizados), a lo largo del eje A-V, tomando como marcador del polo animal del cigoto al segundo cuerpo polar. As, si el cuerpo polar se trasplanta experimentalmente a otra regin del cigoto, se puede inducir el sitio de la primera divisin mittica, que ocurre a travs de la nueva posicin del cuerpo polar (76% de los cigotos experimentales). El punto de entrada del espermatozoide (sperm entry position, SEP) se relaciona, en cierta medida, con el plano de la primera divisin y puede, por consecuencia, denir la parte embrionaria y abembrionaria del futuro blastocisto. Esto se debe a la alineacin del espermatozoide con el plano de la primera divisin mittica (67% de los embriones analizados). Estos factores (PB y el SEP) en la supercie del huevo proveen de manera general, aunque no absoluta, un marcador de la primera divisin. Richard Gardner reporta que cuando el cuerpo polar logra permanecer adherido a lo largo del desarrollo temprano hasta el estadio de blastocisto, no solamente marca la primera divisin, sino que tambin marca el lmite entre la parte embrionaria-abembrionaria del blastocisto. Esto lo conrm posteriormente el grupo de Zernicka-Goetz, quienes mostraron que el punto de entrada del espermatozoide provee un marcador en la supercie del ovocito para el plano de la primera divisin. Cuando el esperma se marc con Alexa or 448, esperando no perturbar el desarrollo del embrin, en la mayor parte de los huevos fertilizados (88%), encontraron la marca uorescente en la regin central, cerca del surco de la primera divisin. Posteriormente, el mismo laboratorio demostr que la citocinesis pasa cercana al sitio previo de la meiosis, as como el SEP y la trayectoria del proncleo masculino, en una mayora signicativa de los huevos fertilizados.15-19 Sin embargo, todos estos reportes an son motivo de controversia. Otro grupo sugiere que la primera divisin se establece cuando los dos proncleos se posicionan en el centro del cigoto, justo antes de entrar en la fase M y no en una fase tarda de la interfase.20,21 Esos autores mencionaron despus que la

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primera escisin ocurre a una distancia considerable del eje A-V, y que el segundo cuerpo polar se mueve ms tarde muy cerca del surco de la escisin. Este grupo arma que el plano de la primera divisin determina la localizacin nal del segundo cuerpo polar y no viceversa. Sin embargo, faltan elementos para conocer con exactitud estos mecanismos, particularmente a causa de que los parmetros de los anlisis realizados por los dos grupos son diferentes. Por ejemplo, mientras Plusa y colaboradores toman en cuenta la estructura y la posicin tridimensional que los proncleos adoptan durante su migracin, Hiiragi y colaboradores, no lo hacen as. As pues, los mecanismos moleculares y la descripcin exacta que dirigen la primera divisin todava no se conocen del todo.16,21-23
Otros eventos que regulan la activacin de las primeras divisiones: concentracin de iones de calcio libre intracelular [Ca2+]i

La primera divisin se caracteriza por una fase GI larga, que se inicia con la elevacin del Ca2+ causada por la entrada del espermatozoide. En los ovocitos de las especies animales estudiados hasta la fecha, la fertilizacin por esperma evoca una elevacin en la concentracin de iones de calcio libre intracelular [Ca2+]i. Estas oscilaciones de calcio son importantes para la regulacin del metabolismo del cigoto. En los ovocitos de los mamferos superiores, el aumento de la [Ca2+]i se da en forma de oscilaciones largas, iniciadas inmediatamente despus de la fecundacin por el espermatozoide y terminando alrededor de la primera mitosis del ciclo celular. Estas oscilaciones son necesarias y sucientes para completar los eventos de activacin del ovocito que, en trminos generales, comprende la reaccin de bloqueo a poliesperma, as como el reinicio y terminacin de la meiosis.16,17 La [Ca2+]i participa en la separacin de los cromosomas durante la transicin metafase-anafase de las clulas hijas o citocinesis, y en la mitosis, particularmente en la rotura de la envoltura nuclear y la condensacin de los cromosomas.24 Aunque los mecanismos por los que el espermatozoide inicia estas concentraciones transitorias de Ca2+i no estn plenamente comprendidos, hay pruebas que sugieren que el espermatozoide contiene un factor que activa

la va fosfoinositol, que es regulada por calcio y que desencadena dichos procesos celulares. En el ratn se demostr que el reclutamiento de los ARNm maternos se inicia y es diferencialmente regulado por oscilaciones de las [Ca2+]i, es decir, la transicin ovocito-embrin est implicada por la respuesta diferencial a las ondas de los iones de calcio, y la activacin del cigoto despus de la fertilizacin tambin se inicia y es regulada por la duracin de la seal sostenida por la [Ca2+]i.25,26 Cuando concluye la primera divisin se forman dos clulas o blastmeros similares en apariencia y aproximadamente del mismo tamao. Ambos blastmeros resultantes pueden contribuir al desarrollo de la masa celular interna (ICM) y del trofoectodermo.27 La orientacin de las divisiones de la segunda escisin es variable, puede ser meridional (M) es decir, paralela al eje animal-vegetal, E ecuatorial (E perpendicular a M, es decir, al eje animal-vegetal). Mientras en el primer tipo de divisin las dos clulas resultantes heredan componentes del polo animal y del polo vegetal, en las divisiones ecuatoriales dichos polos son segregados y una de las clulas resultantes ser animal y la otra vegetal. La divisin de los blastmeros del estadio de dos clulas es asincrnica, es decir, un blastmero se divide antes que el otro. En la mayora de los casos, cuando el plano de la divisin del primer blastmero que se divide es meridional y el del segundo ecuatorial (embriones ME), el primero contribuye, predominantemente, a la parte embrionaria y el otro a la parte abembrionaria del blastocisto. Cuando el plano de divisin del primer blastmero se divide es ecuatorial y el del segundo meridional (embriones EM), el primer blastmero puede dar lugar a la parte embrionaria o abembrionaria con igual probabilidad. Este patrn de divisin describe dos tipos de embriones claramente diferentes (ME e EM). En efecto, estos resultados no se esperaran si el patrn de desarrollo del blastocisto fuera totalmente aleatorio.28,29 Estas evidencias contribuyen a pensar que cada blastmero del embrin, del estadio de dos clulas, cuando menos en un subgrupo de embriones, tienen propiedades diferentes de desarrollo y, por lo tanto, un destino celular diferente. La localizacin asimtrica de ARNm que codica para el factor de transcripcin (Cdx2) que se expresa GINECOLOGA Y OBSTETRICIA DE MXICO

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en el trofoectodermo, es requerido para la diferenciacin correcta de dicho tejido. Se ha observado que la prdida de este factor de transcripcin provoca fallas en la regulacin de Oct-4 y Nanog (factores de transcripcin) en las clulas externas del blastocisto y subsecuentemente la muerte de esas clulas. Cdx2 es esencial para la segregacin de los linajes de la ICM y del trofoectodermo en la fase de blastocisto.30 Recientemente se report que los niveles de protena de Cdx2 son altamente variables en los blastmeros.31 Bajo estas condiciones experimentales la distribucin asimtrica de la protena de Cdx2 en los blastmeros denira el linaje del trofoectodermo. Los mecanismos tempranos que dirigen el desarrollo del cigoto, as como el crecimiento y el desarrollo embrionario subsiguiente, son procesos namente regulados y marcadamente exibles, inuidos enormemente por las interacciones moleculares y celulares, y controlados por algunos componentes bioqumicos (por ejemplo el [Ca2+]i). Durante el desarrollo subsiguiente, la morfologa celular, la adhesin diferencial, la migracin celular, la gastrulacin, colaboran para producir el plano corporal e iniciar la formacin denitiva de los ejes corporales.
Formacin del blastocisto con sus distintos ejes

En el estadio de ocho clulas ocurre una redistribucin de protenas localizadas en la membrana celular, as como de componentes del citoesqueleto. En este estadio, los blastmeros comienzan el proceso de compactacin. Como consecuencia de la localizacin diferencial de componentes y de las divisiones simtricas y asimtricas que ocurren al estadio de ocho clulas, los blastmeros resultantes al estadio de 16 clulas heredan diferentes concentraciones de ciertos componentes de membrana. En este estadio pueden distinguirse por primera vez dos grupos de clulas en el embrin: las clulas internas y las clulas externas (que rodean a las clulas internas). Los eventos que denen las caractersticas morfolgicas que distinguen la parte embrionaria de la parte abembrionaria en el blastocisto se llevan a cabo al nal de la quinta divisin despus de la fertilizacin, es decir, en el estadio de 32 clulas. En esta fase, las clulas de la parte externa del embrin se han diferenciado en clulas epiteliales del trofoecISSN-0300-9041 Volumen 76, Nm. 1, enero, 2008

todermo e inician un transporte activo de canales de Na+/K+ que resulta en la acumulacin de los uidos internos y la formacin de la cavidad del blastocisto.32 La parte que alberga la cavidad (o blastocele) y el trofoectodermo mural es la parte abembrionaria. Por el contrario, la parte que alberga la masa celular interna y el trofoectodermo que la envuelve (trofoectodermo polar) dene la parte embrionaria del blastocisto. Asimismo, el blastocisto no es perfectamente radial y compone un eje short-long, que es ortogonal al eje embrionario-abembrionario. Ms tarde (aproximadamente 4.5 das despus de la fertilizacin), la masa celular interna da lugar a la formacin de otro tejido, el endodermo primitivo, que se desarrollar en el endodermo visceral y parietal durante la implantacin. Como resultado de la implantacin, el blastocisto sufre cambios morfogenticos notables. El endodermo visceral (VE) envuelve tanto al epiblasto (Epi), que deriva de la masa celular interna y que dar lugar al embrin propiamente dicho, como al ectodermo extraembrionario (ExE), que deriva del trofoectodermo polar. Ambos tejidos extraembrionarios, del endodermo visceral y el ectodermo extraembrionario, proveen seales e interactan genticamente con el epiblasto para el establecimiento de los ejes corporales y la adquisicin del patrn de los tejidos embrionarios. En este estadio, un da despus de la implantacin (5.5 das posfertilizacin), se distingue el eje proximal-distal del embrin: por convencin, la parte ms proximal es la que estar en contacto con la vasculatura materna, hacia donde se localiza el ectodermo extraembrionario, y la parte distal comprende al epiblasto. Las primeras muestras palpables del eje anterior-posterior ocurren tcnicamente despus de la implantacin. Al quinto da del desarrollo, un da despus de que el blastocisto se implanta, un grupo de clulas localizadas en la parte distal del embrin y que expresan genes especcos, migran en direccin proximal. Este grupo de clulas se considera un signalling centre esencial para el futuro desarrollo del patrn embrionario y recibe el nombre de AVE (anterior visceral endoderma). La expresin de genes en el AVE dene una asimetra molecular en el embrin. La posicin nal que estas clulas adoptan es lo que establece el polo anterior. Por consiguiente, el polo

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opuesto ser el polo posterior. De esta manera queda establecido el eje anterior-posterior un da despus de la implantacin y unas cuantas horas antes de que la gastrulacin comience. sta se inicia con la formacin de la lnea primitiva (primitive streak) en el polo posterior del embrin. Un reto importante es tratar de entender cul es el origen de las clulas del AVE y si estas clulas tienen un origen jo directamente en clulas preexistentes en el blastocisto preimplantado. Si bien hay una cierta correlacin entre la posicin que las clulas del endodermo primitivo (o sus precursores) tienen en el blastocisto y la posicin (ms proximal o ms distal) que estas clulas o sus hijas adoptan despus de la implantacin, no hay an pruebas denitivas de la relacin exacta entre el AVE y posibles progenitores en el blastocisto. Asimismo, algunos de los genes que se expresan especcamente en el AVE, ya se expresan en el estadio de blastocisto. Sin embargo, el destino celular particular de las clulas que expresan dichos genes y si realmente contribuyen a la formacin del AVE despus de la implantacin no est establecido.33,34 En conclusin, el eje anterior-posterior queda establecido despus de la implantacin, antes de la gastrulacin. Aunque hay algunas pistas sobre una posible influencia de la preimplantacin sobre el establecimiento del eje anterior-posterior, dicha relacin no se ha definido. Por el contrario, pero sin excluir lo anterior, es claro que el conjunto de interacciones celulares que derivan progresivamente de los diferentes tejidos del embrin juega un papel decisivo en el establecimiento del patrn corporal. GLOSARIO Alantoides. Extensin tubular de la capa interna (endodermo) del saco vitelino. En los embriones de los mamferos los vasos alantoides se convertirn en los vasos umbilicales. Blastmero. Nombre que reciben las clulas del embrin temprano. Ciclo celular. La divisin del ciclo celular ocurre en cuatro fases bien denidas y la fase G0, que se reere a la diferenciacin celular. Fases G: intervalos entre las divisiones celulares o mitosis. Fase G0: clulas

terminalmente diferenciadas que pueden permanecer fuera del ciclo celular, casi de manera indenida, o bien hasta nuevo estmulo. Fase G1: punto de re-entrada al ciclo celular, durante sta se realiza la sntesis de ARN y de protenas, pero no la de ADN. Fase S: fase de sntesis del ADN en la clula, resulta en la duplicacin del ADN. Se sintetizan tambin algunos ARN y protenas. Fase G2: no se sintetiza ADN, pero s ARN y protenas. Fase M: mitosis, durante esta etapa se rompe la envoltura nuclear, los cromosomas se aparean y se separan. La mitosis resulta en la reparticin de los dos juegos idnticos de cromosomas en las clulas hijas resultantes. Cigoto. Clula diploide que resulta de la fecundacin de un vulo por un espermatozoide. Contiene una copia del material gentico paterno y una del materno. En condiciones experimentales, un ovocito tambin puede ser activado por partenognesis; es decir, que el ovocito es inducido a comenzar las divisiones celulares, puede producirse antes de la replicacin, es decir, que el partenote resultante contiene slo una copia (haploide) de material gentico, o despus de la replicacin, en donde el partenote resultante contiene informacin diploide, como en cualquier clula somtica normal. Cono de fertilizacin. Protuberancia rica en lamentos de actina que se forma transitoriamente en el huevo fertilizado, en el punto de entrada del espermatozoide. Cromatina. Es el conjunto de ADN, de histonas y de protenas-no-histonas que se encuentran en el ncleo de las clulas. Las unidades bsicas de la cromatina son los nucleosomas. Cuerpo polar (polar body, PB). Pequea clula que es expulsada del ovocito durante la meiosis y contiene un juego de cromosomas. El primer cuerpo polar, por lo general, se degenera, mientras que el segundo permanece unido al embrin y sirve como marcador del polo animal. Eje animal-vegetal. Eje que pasa a travs del cuerpo polar. La regin cercana al cuerpo polar determina el polo animal y la regin opuesta (180 grados) al cuerpo polar es, por consecuencia, el polo animal. Embrin. Resultado de la fertilizacin de un vulo con un espermatozoide. En el humano se considera embrin desde la fecundacin hasta el trmino de 8 GINECOLOGA Y OBSTETRICIA DE MXICO

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semanas de gestacin. Despus de este tiempo se le llama feto. Factores de transcripcin. Protenas que reconocen secuencias especcas del ADN que ayudan a reconocer el sitio del promotor para que inicie la transcripcin. Estos factores se unen a los elementos cis reguladores. Por ejemplo, Spl es un transactivador de unin a ADN de un gran nmero de genes en los eucariotes superiores; TBP es una protena de unin a la caja TATA. TATA binding protein. ets-1 es un factor de transcripcin descubierto como un protooncogn: virus aviar eritroblastosis v-ets, se ha reportado que est involucrado en mecanismos de diferenciacin, activacin y proliferacin celular. Histonas. Protenas que se unen al ADN dando como resultado el empaquetamiento ordenado del ADN en nucleosomas. Protenas presentes slo en eucariotes. Impronta parental o imprinting. Marca que se impone a las regiones del ADN en el cromosoma paterno o materno y que tiene efectos sobre la expresin o represin de genes especcos a partir del material gentico paterno o materno. De esta manera, el imprinting determina la contribucin diferencial de la dotacin gentica del padre y la madre para el desarrollo del embrin en genes determinados. El imprinting est regulado principalmente por marcas de metilacin de ADN. Informacin epigentica. Informacin que se impone al ADN independientemente de su secuencia primaria y que regula la expresin de genes a nivel transcripcional y postranscripcional. Por denicin, la informacin epigentica es heredada al curso de divisiones celulares; es decir, esa informacin la contiene toda la progenie de una clula determinada. Los mecanismos epigenticos incluyen, principalmente, la metilacin del ADN, modicaciones covalentes de las histonas, y remodelacin de la cromatina. La reprogramacin epigentica es la modicacin del programa de la expresin del genoma regulado por dichos mecanismos epigenticos y como consecuencia es borrada o reseteada la informacin de dicho genoma para dar lugar a una nueva programacin, sin modicar la secuencia del ADN. Maduracin del ovocito. Proceso que se da bajo la estimulacin hormonal adecuada y que reanuda el
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arresto de la profase I de la meiosis. Como resultado, se reduce el nmero de cromtides al ser expulsadas dentro del primer cuerpo polar. Masa celular interna. Clulas internas del blastocisto, pluripotenciales, que dan lugar a todos los tipos celulares del embrin. Meiosis. Es la divisin celular de una clula diploide que tiene como resultado la reduccin del nmero de cromosomas y da lugar a cuatro clulas haploides. Involucra dos divisiones con sus respectivas fases: profase, metafase, anafase, telofase. En la primera divisin, en una prolongada profase, se da el apareamiento de los cromosomas homlogos y el entrecruzamiento de segmentos entre los cromosomas o recombinacin. Metafase, cromosomas paternos y maternos alineados. Anafase, el surco de la separacin de los cromosomas se forma con ayuda de los microtbulos. Telofase, cada uno de los cromosomas se secretan hacia diferentes clulas. Metilacin de novo. Es la adicin de grupos metilo a la citocina del ADN. La adicin de estos grupos suele provocar un cambio en el patrn de expresin de genes en donde ocurre dicha metilacin. En la mayora de los casos, de la metilacin de un gen, resulta un gen silenciado inactivo. Esto quiere decir que, salvo algunas excepciones, genes no metilados son genes que se expresan, generando una informacin epigentica en este gen, que es caracterstica para esa clula en particular que lo porta. Proncleo. Ncleo haploide (femenino o masculino) del cigoto. Protaminas. Protenas implicadas en el empaquetamiento del ADN de los espermatozoides maduros. Trofoectodermo. Linaje celular que envuelve la masa celular interna en el blastocisto y que principalmente origina los anexos embrionarios (por ejemplo, la placenta), y no al embrin propiamente dicho. Zona pelcida. Membrana que recubre al ovocito, de aproximadamente 13 micras de grueso. Contiene un gran nmero de copias de las protenas ZP3, ZP1 Y ZP2 glucosiladas.
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