DETERMINACIN DE PROTEINAS

INTRODUCCIN
El termino protena fue utilizado por primera vez por el qumico alemn Gerardus Mulder, en 1838 , tomo este
nombre del vocablo griego PROTEROS , que significa primordial nivel primario .
Las protenas son un grupo de biopolmeros constituidos de aminocidos que exhiben una amplia gama de
estructuras y funciones .
Las protenas como un grupo de biomoleculas , desempean una gran variedad de funciones , algunas
participan en la contraccin muscular y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan
molculas pequeas.
Los anticuerpos (molculas que sirven para como proteccin inmunolgica ) son protenas al igual que las
enzimas (catalizadores biolgicos) y algunas hormonas.
Las protenas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de combinaciones en la
composicin y secuencia de aminocidos.
Las protenas tambin se clasifican segn su composicin , las que se forman solo de residuos de
aminocidos y no tienen otras biomoleculas son PROTENAS SMPLES; no odas las protenas son solubles
en agua , de hecho las protenas insolubles son esenciales para dar soporte y mantener la integridad
estructural de las clulas y organismos.
DESARROLLO
METODO DE BIURET
Material por equipo
O 1 proveta de 50ml.
O 2 gradillas
O 2 pipetas de 10ml
O 3 pipetas de 5ml
O 1 pipeta de1ml
O tuvos de15x100-12 piezas
O 1 vaso de presipitados de 100 ml
O 12 tubos de 16x150
O 1 balanza granataria
O papel parafilm para 10 tubos
O papel embudo y un filtro
REACTVOS POR EQUPO
O Agua destilada
O Solucion de acido acetico 0.1 N
O Solucion de Acetato de sodio 0.1 N
O Solucion de caseina (contenido 4 mg/ml)
O Reactivo de Biyret 50ml
MATERAL TRADO POR EQUPO:
O 6 gramos aprox. De leche en polvo descremada
O 1 plumon indeleble
O masking tape
O javon y franela para limpiar
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELECTRICO
En la preparacin de tubos con solucion amortiguadora de acetatos en la grailla se colocaron 6 tubos de
15x100 rotulados con numeros consecutivos , se adiciono a caadad tubo las soluciones de acido acetico y
acetato de sodio con el siguiente orden :
TUBO SOLUCION DE ACIDO SOLUCION ACETATO DE
ACETICO 10.1 N SODIO 0.1N
1 5ml -
2 4 ml 1 ml
3 3ml 2ml
4 2ml 3ml
5 1ml 4ml
6 - 5ml
el volumen de cada tubo deber de ser de 5 ml 1:30
PREPARACIN DE LA LECHE
En un vaso de precipitados de 100 ml se disolvieron 6 gr de leche en polvo descremada con 50 ml de agua
destilada incorporndola poco a poco para que no se formaran grumos .
En un tuvo de ensaye de 16x150 mm se midio 2ml de leche reidratada y aadimos 8ml de agua destilada
agitando cuidadosamente por inversin. 1:5
PUNTO ISOELECTRICO
Aadimos 1 ml de leche diluida (1:5) a cada tubo de la solucin amortiguadora , despus mezclamos
cuidadosamente todos los tubos y dejamos reposar por 10 minutos .
En el tubo 1 donde observamos los grumos de leche suspendidos en la solucin se solubilizaron las protenas
de leche
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6
Despus se separo el sobrante y se transfiri a los tubos limpios de 15x100 rotulados con el numero de tubo
que le correspondia.
O Tubo 1: CLARO
O Tubo 2 : CLARO CON SOBRENADANTE
O Tubo 3: CLARO CON SOBRENADANTE
O Tubo 4: CLARO CON SOBRENADANTE
O Tubo 5: TURBO
O Tubo 6: TURBO
DETERMINACIN DE PROTEINAS CON EL METODO DE BIURET
Se colocaron en una gradilla 11 tubos de 16x150 mm, rotulando a un tubo con el numero cero el cual llevo los
reactivos para calibrar el espectrofotometro , los siguientes 4 tubos los rotulamos de al V , y los restante los
rotulamos de 1 al 6.
Se aadio a cada tubo de reactivos para determinar las proteinas en la curva de calibracin ( V) y los
sobrenadantes en los tubos del 1 al 6 .
Mezclamos cuidadosamente cadad reactivo y los dejamos en reposo por 30minutos para favorecer el color .
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6
AZUL AZUL Y MORADO AZUL AZUL AZUL AZUL
TUBO TUBO TUBO TUBO V TUBO V TUBO V
AZUL CLARO NTERMEDO MORADO MORADO MORADO MORADO
RESULTADOS
En la siguente tabla estan los resultados que obtuvimos de absorvancia o densidad optica.
TU
BO
I II III IV V 1 2 3 4 5 6
D.O 0. 0. 0.0 0.1 0.1 0. 0.0 0.0 0.0 0. 0.
32 60 93 27 52 17 20 08 08 19 23 MG.
DE
PROT
EINA
0.
8
1.
6
2.
4
3.
2
4 0
0.
12
0.0
37
0.0
76
0.
12
O Calcula el contenido proteico de los tubos al V deacuerdo al volumen empleado de la solucion en
estandar de caseina y colocalos en el eje x.
O Coloca los valores O.D obtenidos para cada uno de estos tubos en el eje y y traza la curva
correspondiente.
O nterpola los valores de O.D de los tubos 1-6 , calcula la cantdad de proteina precente en cada sobre
nadante
TABLA DE RESULTADOS.
!#OTEINA Mg/ ml Mg/ 100 ml
Sobrenadante1 5.1 510
Sobrenadante2 0.6 60
Sobrenadante3 0.24 24
Sobrenadante4 0.24 24
Sobrenadante5 0.57 57
Sobrenadante6 6.9 690
O haciendo uso de la ecuacin de HEENDERSON HASELBACH calcula el pH del tubo de donde
observaste la mayor precipitacin de casena.
0.4 mg proteina x 5x6x2 =24 mg proteina/ml
6g 1000 ml =120 g leche
30 ml 1 L L
2 ml + 8 ag
1 ml +5 = 6 ml 0.5+0.5 = 1 ml
24 g proteina
L = 0.2 g proteina
120 g leche g de leche
L
O Describa brevemente la ley de lambert y beer y cuales son sus limitaciones.
BIBLIOGRAFA
O Conceptos de bioqumica de Rodney Boyer
CONCLUSIN
Con el metodo de Biuret se le quitaron a la leche muchas de sus propiedades y al meter os resultados al
centrifugado la leche salio muy clarita cambiando su aspecto natural , cumplindose el objetivo pudimos sacar
el punto isoelectrico exacto