UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA CARRERA DE MEDICO CIRUJANO

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA MODULO DIGESTIVO NOMBRE DE LOS ALUMNOS:

CISNEROS PELCASTRE MARIANA GUADALUPE CRUZ ESCUTIA GABRIELA ESPINOSA CURIEL YOSANDI BARBARA RIVERA MEZA CESAR VALDES ROMERO YUSAHANDI SARAI

GRUPO: 1305

INTRODUCCION La porcin inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal excesivamente amplia. Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios ( Bacteroides, bcilos grampositivos, estreptococos), microorganismos entricos grannegativos y S. faecalis. Cualquier intento por aislar bacterias patogenas de las heces implica la separacin de las especies patgenas, usualmente a travs del empleo de medios selectivos diferenciales y de cultivos enriquecidos. Las principales causas de transtornos gastrointestinales agudos incluyen a los virus, las toxinas ( de: estafilococos, vibriones, Escherichia coli toxgena), bacilos entricos gramnegativos invasores, los fermentadores lentos de la lactosa, las Shigellas, las Salmonellas y las campilobacterias. La importancia relativa de estos grupos tiene grandes discrepancias en las distintas partes del mundo. ANTECEDENTES ESPECIMENES. Las heces y los raspados rectales son los especimenes de que se dispone con mayor facilidad. Debe anotarse la presencia de sangre, moco o helmintos en la inspeccin somera inicial. Se suspenden los especmenes en un caldo selectivo como el Caldo de Tetrationatoy se cultivan sobre medios ordinarios as como en medios selectivos diferenciales, por ejemplo Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separacin de los bacilos gramnegativos que no ferementan la lactosa de otras bacterias entericas comunes.. Los frotis teidos pueden revelar una prevalencia de leucocitos y de ciertos microorganismos anormales como Cndida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para diferenciar las bacterias entricas patgenas de las de la flora normal. Instrucciones para la Toma de la Muestra 1. Obtenga la muestra antes de todo tratamiento con antibiticos. En caso que esto no sea posible, informe al laboratorio el tratamiento que est recibiendo. 2. La muestra puede ser recogida en su casa o en el laboratorio. En caso de hacer la recoleccin en su casa, debe pedir previamente al laboratorio el material necesario, el cual consiste en un MEDIO DE TRANSPORTE CON UN HISOPO, QUE VA DENTRO DEL EQUIPO. Guarde este material en un sitio fresco fuera del alcance de los nios. 3. Debe recoger las heces en la forma ms estril posible. Puede ser un plato, un vaso de cama o un recipiente cualquiera. Lo ms importante es que hayan sido lavados con agua y jabn y luego con abundante agua hervida. En caso necesario (como en nios), es preferible realizar un hisopado rectal, que debe

ser tomado por el personal entrenado. 4. Una vez recogidas las heces, impregne con las mismas el hisopo suministrado, prefiriendo las partes que contengan moco, sangre y restos celulares. Introduzca el hisopo hasta el fondo del tubo con el medio gelatinoso, dejndolo dentro del tubo. Tpelo inmediatamente y mantngalo en ambiente fresco (nunca en nevera) y llvelo lo ms pronto posible al laboratorio. 5. Favor tener en cuenta las siguientes precauciones:

o destapar el tubo, excepto para introducir la muestra; no tocar con los dedos la parte interior de la tapa, ni del recipiente, ni el algodn del hisopo. Identifique la muestra, escribiendo claramente en la etiqueta su nombre completo, edad, hora y fecha de la toma de muestra. No llene el tubo con heces: es suficiente con la cantidad que queda adherida al hisopo. Cuando las heces son lquidas, asegrese de impregnar bien el hisopo. Las personas que sufren de estreimiento pueden utilizar un laxante salino (sal de fruta) y recoger para el examen la segunda o tercera evacuacin (nunca la primera). En nios, pueden utilizarse supositorios de glicerina peditricos. En lactantes, puede recoger la muestra directamente del paal, pero asegurndose que las heces hayan sido recin emitidas y que no hayan sido absorbidas por el paal.

Medios de cultivo Para facilitar el aislamiento de bacterias entricas patgenas se utilizan medios de enriquecimiento y medios selectivos. Los ms empleados son los siguientes: Medios de enriquecimiento Caldo con tetrationato (Mueller y Kauffmann). Este mtodo posee la propiedad de inhibir o destruir el crecimiento de Salmonella y Shigella. Contiene, entre otros, tiosulfato de sodio, sales biliares y yodo, el cul acta sobre el medio para determinados gneros, en especial Salmonella; de aqu su uso como paso previo a la siembra en placas de medios selectivos.

Caldo con selenito (Leifson). Posee selenito, cido de sodio que inhibe parcialmente al grupo coliforme durante las primeras horas de cultivo (12 a 24 horas), y permite el rpido desarrollo de salmonelas y shigellas. Selenito sdico 4 g Peptona 5 g Manitol 4 g Fosfato disdico anhidro (Na2HPO4 ) 10 g Agua destilada 1000 ml 2. Medios selectivos Agar SS (salmonella-shigella). Este medio selectivo, empleado para aislar Salmonella y Shigella ejerce una buena inhibicin sobre agentes coliformes, sin limitar el desarrollo de los patgenos gramnegativos. Se utiliza especialmente junto al agar-sulfito de bismuto, para siembra de materiales provenientes de medios enriquecedores, como caldo tetrationato y caldo con selenito. Contiene sales biliares, lactosa, citrato y tiosulfato sdico, citrato frrico, verde brillante y rojo neutro como indicador. Shigella y Salmonella, como tambin otros agentes que no fermentan la lactosa, aparecen como colonias lisas, transparentes a opacas; las pocas colonias fermentadoras de la lactosa que se pueden desarrollar tienen color rojo y un centro negro. Conviene sealar que la bilis o las sales biliares inhiben el crecimiento de microorganismos grampositivos y esporulados sin interferir en el crecimiento de los bacilos gramnegativos. Agar MacConkey. Es un medio selectivo-diferencial que contiene sales biliares, las cuales inhiben la flora grampositiva. Los agentes del grupo coliforme dan colonias de color rojo, debido a que fermentan la lactosa. En cambio, Salmonella y Shigella sp. forman colonias incoloras.

Agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolato). Medio indefinido, mixto, slido y diferencial. En l crecern microorganismos quimiohetertrofos formadores de sulfhdrico a partir de sulfato. En la receta aparece rojo fenol, en el cual acta el indicador de pH. Se pueden presentar tres tipos de anomalas intestinales: Infeccin intestinal ! Debida a la produccin de cambios ecolgicos por la accin directa del microorganismo.

Intoxicacin alimentaria ! Producida indirectamente por el microorganismo a travs de la produccin de toxinas, antes de la ingestin por la persona. Toxiinfecin alimentaria ! Producida por el microorganismo a travs de la produccin de toxinas, despus de su ingestin por la persona. Hay que tener en cuenta la biota presente en condiciones normales. As: Lactantes (alimentacin materna). Altos niveles de Bifidobacterium Bajos niveles de E.coli y Enterobacterias Lactantes (alimentacin artificial) Altos niveles de grampositivos Bajos niveles de Bifidobacterium Nios y adultos Predominancia de Anaerobios Anaerobios Facultativos y Aerobios: % E.coli " 80% % Enterococos " 14% % Staphylococcus y Streptococcus " 4% % Otros " 2% " Dieta rica en protenas: predominancia de biota Grampositiva. " Dieta rica en hidratos de carbono: predominio de Gramnegativa. OBJETIVOS 1.- El alumno conocer la importancia del coprocultivo para la identificacin de enterobacterias. 2.- El alumno conocer la tcnica de la toma de la muestra para el coprocultivo. 3.- El alumno conocer la tcnica de siembra en los medios de cultivo tetrationato y caldo Selenito.

MATERIAL Muestra de heces en frasco estril 1 tubo con caldo tetrationato 1 tubo con caldo selenito 1 caja con medio EMB 1 caja con medio Salmonella- Shigella (S-S) 1caja con medio sulfito y bismuto (SyB) Asa bacteriolgica Mechero 2 hisopos estriles

PROCEDIMIENTO 1. Tomar una muestra con heces con el hisopo en condiciones de esterilidad y colocar en el medio de tetrationato 2. Tomar otra muestra y colocarla en el tubo con medio de selenito 3. Incubar a 37 C durante 24 horas (sesin anterior) 4. Dividirlas cajas con medio de cultivo a la mitad y sembrar a partir de los medios de selenito y tetrationato tomando la muestra con el hisopo y nicamente descargar en un extremo de la caja, identificando correctamente que porcin de la caja esta sembrada a partir de que medio 5. Efectuar estra de aislamiento en ambas secciones 6. Seguir el mismo procedimiento para cada medio proporcionado 7. Incubar las cajas de medio a 37C durante 24 a 48h y leer morfologa colonial guindose por el cuadro adjunto a esta practica 8. Efectuar un comentario amplio de los resultados obtenidos 1.- Cul es el objetivo de emplear el medio de caldo selenito y caldo tetrationato para efectuar el coprocultivo? Caldo tetrationato, el medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos txicos. La selectividad est dada por la presencia de tosulfato de sodio, tetrationato y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como Salmonella e inhiben el desarrollo de la flora acompaante Caldo Selenito, posee selenito, cido de sodio que inhibe parcialmente al grupo coliforme durante las primeras horas de cultivo (12 a 24 horas), y permite el rpido desarrollo de Salmonella y Shigella.

2.- Cules son las enfermedades intestinales ms frecuentes? Mencione por lo menos cuatro y comente cul es el agente causal y datos clnicos.

3.- De qu otra manera adems del coprocultivo se podra investigar una infeccin por Salmonella? Dadas las variadas manifestaciones clnicas de las salmonelosis, la confirmacin del diagnstico de estas infecciones, requiere de mtodos microbiolgicos que permitan el aislamiento o identificacin del agente causal o de pruebas serolgicas que facilitan reconocer anticuerpos especficos presentes en el suero de los pacientes.

 Hemocultivo: es el procedimiento de eleccin, cuando se realiza apropiadamente y en medios selectivos a base de bilis. Coincidiendo con la fisiopatologa de la infeccin, son positivos especialmente durante la primera semana de la infeccin; se calcula que al final de la tercera semana de positividad solamente alcanza un 50%. Mielocultivo: el cultivo del aspirado de mdula sea se considera como el mejor mtodo para el aislamiento de salmonella en los pacientes con fiebre tifoidea y paratifoidea. Aunque el procedimiento produce una molestia transitoria, en general es bien tolerado y los cultivos son ms rpidamente positivos. Se recomienda sea practicado por personal con experiencia. Pueden ser positivos an cuando los hemocultivos sean negativos.

Coprocultivo: puede ser positivo desde el comienzo de la infeccin, aunque su mxima positividad en la infeccin aguda, se observa durante la tercera semana. Es particularmente til para el control postratamiento de los pacientes y para detectar los portadores crnicos. Cultivo de bilis duodenal: obtenido por aspiracin o utilizando la tcnica que lleva un dispositivo en cpsulas de gelatina. No es superior al hemocultivo y con certeza no supera a la asociacin del hemocultivo con el coprocultivo. Urocultivo: su valor diagnstico es muy limitado pues la bacteriuria no es continua. Su mxima positividad est en la tercera semana. La Salmonella tambin puede ser aislada de otros productos como las manchas rosadas o reoseolas tficas, de la secrecin bronquial, del lquido articular, etc. Diagnstico serolgico Reaccin de seroaglutinacin (Widal): es de poco valor como prueba diagnstica. En la infeccin no tratada slo cerca del 50% de los pacientes pueden tener un aumento significativo de las aglutininas contra el antgeno "O", en algn momento de la enfermedad. Las aglutininas contra el antgeno "H" no tienen valor diagnstico aunque puedan observarse ttulos elevados de ellas. En muchos casos de fiebre tifoidea no hay elevacin de los ttulos de aglutininas durante el curso de la infeccin y en ocasiones se pueden observar elevaciones no especficas, debido a reacciones cruzadas. Diagnstico inmunoenzimtico: la deteccin de anticuerpos IgM e IgG contra el lipopolisacarido por tcnica ELISA an no est disponible para uso rutinario.

4.- Investigue cuales son las enterotoxinas que ms problemas causan a nivel del intestino, cul es su accin y cules son los microorganismos que las producen Dentro de los microorganismos que afectan el intestino se encuentra Escherichia coli, su cepas ms virulentas son Enterotoxignica (ETEC) que producen dos tipos de enterotoxinas, las LT que es termolbil y que es muy parecida a la toxina del clera y la ST que es termoestable. Tambin la cepa Enterohemorrgica (EHEC) produce una toxina muy parecida a la shiga llamada SLT.

RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS

Agar S.S. Selenito Colonias negras Halo transparente Colonias balncas Tetrationato Colonias negras Halo transparente

Sulfato de bismuto

selenito Colonias verde negrusco convexas Tienen limites bien definidos

Tetrationato colonias verdes y algunas negras Convexas Incolora en el centro

EMB

SELENITO COLONIAS VERDE BRILLANTE COLONIAS ROSAS CON HALO CONVEXAS

SELENITO COLONIAS VERDE BRILLANTE COLONIAS ROSAS CON HALO

Conclusin Durante la prctica se cumplieron los objetivos planteados para nuestro conocimiento, y se espera que la tcnica de sembramos de buenos resultados para s poder observar las caractersticas de los microorganismos en estudio. La prctica nos sirve como mdicos porque mediante un estudio de este tipo podemos identificar los diferentes microorganismos causantes de enfermedades gastrointestinales, adems de que conociendo el agente causal podemos dar un mejor tratamiento y as prevenir posibles complicaciones.

Cesarin: Te toca el tema de: Pacientes ulcerosos segun Overbeck y Biebl citados por Inaue

BIBLIOGRAFA Romero Cabello, Ral. Microbiologa y Parasitologa Humana, 3 ed., Ed. Mdica Panamericana, Mxico, 2007, pgs. 774, 785, 804. A. Pumarola, et. al., Microbiologa y parasitologa mdica, Salvat editores, 2 edicin, Madrid 1999. Romero Cabello Ral, Microbiologa y parasitologa humana, editorial mdica Panamericana, 3 edicin, Mxico 2007