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Bioquímica – Curso 2010‐11
SOLUCIONES A LOS PROBLEMAS DE CINÉTICA ENZIMÁTICA
1.-. El estudio de una reacción enzimática que sigue una cinética del tipo Michaelis-
Menten ha aportado los siguientes datos:
0.05
0.04
1/V0 (min/nmol)
0.03
0.02
Km = 1 M
0.01
Vmax = 50 nmol/min
0.00
-1.0 -0.5 0.0 0.5 1.0 1.5
1/[S] (M-1)
b) Si se aumenta la cantidad de enzima en la reacción, ¿variarán Km y Vmax.?
La Km no depende de la concentración de enzima, luego no variará.
La Vmax = kcat [ET]; es decir, es directamente proporcional a la concentración de
enzima y, por tanto, aumentará proporcionalmente.
2.- Para establecer los parámetros cinéticos de dos enzimas (E1 y E2, PM 65000 y
75000 Da, respectivamente) que catalizan la misma reacción en dos
compartimentos subcelulares distintos, se determinaron las velocidades iniciales
de la reacción en presencia de diferentes concentraciones de sustrato y de 1 g/ml
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Problemas de Bioquímica – Primer Curso del Grado en
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de enzima en cada caso. Los ensayos se realizaron en tampón fosfato 0,2 M, pH 7,2
(valores de pKa: 2,1; 7,2; 12,3). Los resultados obtenidos fueron los siguientes:
v0 (mol/ml/min)
[S] (mM) E1 E2
Se desea conocer:
a) Los parámetros cinéticos de ambas enzimas y el valor de kcat
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E1
6
-1
E2
1/v0 (mol/ml/min)
0
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6
1/[S] (mM)-1
[ET] = (1μg/ml)/MM
Vmax
Enzima Km (mM) kcat (min-1)
(μmol/ml min)
E1 4.24 1.00 65000
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E2 10.42 0.80 60000
La Km sería la misma.
Vmax sería el doble (2.0 μmol/ml min para E1 y 1.6 μmol/ml min para E2).
V0 = Vmax [S]/(Km + [S]) = kcat [ET] [S]/(Km + [S]), luego si es la misma concentración de
sustrato y el doble de enzima, la V0 también tienen que ser el doble.
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obtenidos a pH 5,0 se muestran en la Figura. Cuando el estudio se llevó a cabo a pH
7,0, no se observó inhibición.
3,5
1/v0 (mol/min)-1
[I]=1mM
3,0
pH = 5,0
2,5
[I]=0
2,0
1,5
1,0
0,5
1/[S] (M)-1
0,0
0,4
-0 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8
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La eficacia catalítica en valor absoluto no se puede calcular porque se desconoce la
concentración de enzima. Sin embargo, dado que Vmax = kcat [ET] y que la concentración
de enzima es la misma de los dos casos, la relación Vmax/Km es directamente
proporcional a dicha eficacia. Por tanto:
[B] = 0
2
0
-0,3 -0,2 -0,1 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
-1
1/[S] M
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1/v0 (mol/min)-1
1/[S] (mM)-1 CON INHIBIDOR
SIN INHIBIDOR
A (0,01 mM) B (0,50 mM) C (0,20 mM)
25
-1
1/V0 (mol/min)
20
15
10
0
-100 -80 -60 -40 -20 0 20 40 60 80
-1
1/[S] (mM)
Vmax y Km de la enzima: Km = 33 μM Vmax = 0.27 μmol/min
B es un inhibidor acompetitivo, luego KBm = Km/(1 + [I]/KBi), de lo que se deduce que KBi =
217.4 μM.
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Falso por idénticas razones que en el caso anterior.
f) La Vmax y la Km dependen de la temperatura.
Verdadero, todas las constantes dependen de la temperatura. La Km es una constante y la
Vmax es proporcional a otra (kcat).
g) La velocidad de una reacción catalizada por una enzima en presencia de una
concentración de sustrato limitante de la velocidad, disminuye con el tiempo.
Verdadero. La velocidad siempre disminuye con el tiempo porque se va gastando el
sustrato. Si usamos concentraciones saturantes este efecto puede no tener lugar en el
intervalo de tiempo en el que hacemos la medida.
h) Si se ha agregado suficiente sustrato, la Vmax de una reacción catalizada por una
enzima puede ser obtenida aún en presencia de un inhibidor no competitivo.
Falso, una inhibición sólo puede ser completamente revertida por el sustrato si se
trata de un inhibidor competitivo.