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Fundamentos

de Inmunología
Básica y Clínica
Editores
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.

EDITORIAL
UNIVERSIDAD

DE
TALCA

UNIVERSIDAD DE
MCMXCI TALCA

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA


COLECCIÓN E-BOOK
Serie de libros electrónicos
Fundamentos de Inmunología
Básica y Clínica

Editores
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA


Vicerrectoría Académica
COLECCIÓN E-BOOK
Serie de libros electrónicos

EDITORIAL
UNIVERSIDAD

DE
TALCA

UNIVERSIDAD DE
MCMXCI TALCA

Registro de propiedad intelectual © N° 128.873

ISBN: 978-956-7059-86-7

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

Talca- Chile, julio de 2009


Edición soporte papel año 2002

Diseño Editorial:
Marcela Albornoz Dachelet

Corrección de textos:
María Cecilia Tapia Castro
1

Sin título-2 1 5/26/06, 10:25 AM


Registro de propiedad intelectual Nº 128.873
ISBN: 956-7059-51-9

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

Talca - CHILE, 2002

Ilustraciones
BQ. Marcos Pérez Cid

Diseño gráfico
Marcela Albornoz Dachelet

Revisión de textos
María Cecilia Tapia Castro

La ilustración de la portada muestra la interacción entre una Célula Presentadora de Antígeno y un Linfocito T. Se
representan algunas de las moléculas que participan: Receptor de células T (TCR), molécula del Complejo Princi-
pal de Histocompatibilidad (MHC), Péptido Antigénico y Moléculas de Adhesión Celular.

Diagramación e impresión
Gutenberg-Talca
Impreso en Chile

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Fundamentos de
Inmunología
Básica y Clínica

Editores
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.

EDITORIAL
UNIVERSIDAD

DE
TALCA

MCMXCI

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UNIVERSIDAD DE TALCA

FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGÍA
BÁSICA Y CLÍNICA

Editores

Prof. Dr. Iván Palomo González


Unidad de Inmunología y Hematología
Departamento de Bioquímica Clínica
e Inmunohematología
Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Talca

Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux


Programa Disciplinario de Inmunología
Instituto de Ciencias Biomédicas
Facultad de Medicina
Universidad de Chile

Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda Carvajal


Unidad de Inmunología
Departamento de Medicina
Facultad de Medicina
Universidad de Chile

Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber


Fundación Ciencias para la Vida
Departamento de Biología
Facultad de Ciencias
Universidad de Chile

Prof. Dr. Ulises Vergara Castillo


Escuela de Postgrado, Facultad de Medicina y
Departamento de Medicina Preventiva,
Facultad de Ciencias Veterinarias,
Universidad de Chile.

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AUTORES DE CAPÍTULOS

Dra. Ana María Agar Muñoz Dra. Luz P. Blanco Palma


Unidad de Inmunología Laboratorio de Inmunobioquímica
Clínica Alemana Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular
Prof. Dra. Edilia Andrews García Facultad de Ciencias Químicas y
Departamento de Microbiología Farmacéuticas
Facultad de Ciencias Biológicas Universidad de Chile
Universidad de Concepción
Prof. Dra. Eva Burger
Prof. Dra. Adriana Ardiles Sandoval Departamento de Inmunología
Policlínico de Medicina Integral Instituto de Ciencias Biomédicas
Servicio de Medicina Universidad de San Pablo, Brasil
Hospital San Juan de Dios
Prof. Dr. Antonio Cabral
Departamento de Reumatología
BQ. Alejandra Arenas Celfé Instituto Nacional de Nutrición
Sección Histocompatibilidad Salvador Subiran, México
Unidad de Inmunología
Instituto de Salud Pública Prof. Dr. Flavio Carrión Arriagada
Unidad de Inmunología
Dr. Miguel Barría Maldonado Facultad de Medicina
Instituto de Inmunología Universidad de Los Andes
Facultad de Medicina
Universidad Austral de Chile Dr. Darwins Castillo Alvarez
Sección Inmunodiagnóstico
Prof. Dra. María Inés Becker Contreras Unidad de Inmunología
Unidad de Inmunología Instituto de Salud Pública
Facultad de Ciencias Biológicas
P. Universidad Católica de Chile Prof. Dr. Edgardo Carrasco Calderón
Departamento de Medicina Oriente
Facultad de Medicina
Prof. Dr. Rosario Billetta D’aquila Universidad de Chile
Programa disciplinario de Inmunología Instituto Nacional del Tórax
Instituto de Ciencias Biomédicas
Facultad de Medicina Prof. Dra. Mónica Cornejo De Luigi
Universidad de Chile Unidad de Inmunología
Facultad de Medicina
Prof. Dra. María Rosa Bono Merino Universidad de Valparaíso
Departamento de Biología
Facultad de Ciencias
Universidad de Chile

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Prof. Dr. Alfredo De Ioannes Ilis Prof. Dr. Ricardo Forastiero Valcarcel
Unidad de Inmunología Unidad de Hematología
Facultad de Ciencias Biológicas Universidad Favarolo
P. Universidad Católica de Chile Buenos Aires, Argentina

Prof. Dra. Patricia Díaz Amor Prof. Dr. Enrique González Villanueva
Departamento de Medicina Experimental Laboratorio de Biología Molecular
Facultad de Medicina Instituto de Biología y Biotecnología
Universidad de Chile Universidad de Talca

Dra. Susana Elgueta Miranda Prof. Dr. Jorge González Cortés


Sección Histocompatibilidad Unidad de Parasitología
Unidad de Inmunología Departamento de Tecnología Médica
Instituto de Salud Pública Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Antofagasta
Prof. Dr. Patricio Esquivel Sánchez
Instituto de Inmunología Dra. María Antonieta Guzmán Meléndez
Facultad de Medicina Unidad de Inmunología
Universidad Austral de Chile Servicio de Medicina
Hospital Clínico
Prof. Dr. Heriberto Fernández Universidad de Chile
Jaramillo
Instituto de Microbiología Clínica Prof. Dr. Gustavo Hoecker Salas
Facultad de Medicina Unidad de Inmunogenética
Universidad Austral de Chile Instituto de Ciencias Biomédicas
Facultad de Medicina
Prof. Dr. Jorge A. Fernández Vargas Universidad de Chile
Unidad de Virología
Facultad de Medicina Prof. Dra. Mónica Imarai Bahamonde
Universidad de Chile Departamento de Biología
Facultad de Química y Biología
Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux Universidad de Santiago de Chile
Programa disciplinario de Inmunología
Instituto de Ciencias Biomédicas Prof. Dr. Sergio Jacobelli Gabrielli
Facultad de Medicina Departamento de Reumatología e
Universidad de Chile Inmunología Clínica
Facultad de Medicina
Prof. Dr. Hugo Folch Vilches P. Universidad Católica de Chile
Instituto de Inmunología
Facultad de Medicina Prof. Dra. Cecilia Koenig Samohod
Universidad Austral de Chile Departamento Biología Celular y
Molecular
Facultad de Ciencias Biológicas
P. Universidad Católica de Chile

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Dra. María Angélica Marinovich Prof. Dr. Iván Palomo González
Unidad de Reumatología Unidad de Inmunología y Hematología
Departamento de Medicina Interna Departamento de Bioquímica Clínica e
Universidad de Chile Inmunohematología
Hospital Clínico San Borja-Arriarán Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Talca
Prof. Dr. Benjamín Martínez
Rondanelli Prof. Dr. Jaime Pereira Garcés
Departamento de Patología Oral Departamento de Hematología y
Facultad de Odontología Oncología
Universidad Mayor Facultad de Medicina
P. Universidad Católica de Chile
Dr. Rodrigo Mora Sanhueza
Programa Doctorado en Ciencias Prof. Dra. Silvia Pierangeli
Biomédicas Departamento de Microbiología e
Facultad de Medicina Inmunología
Universidad de Chile Morehouse School of Medicine
Atlanta, Georgia, USA.
Prof. Dra. Cristina Navarrete
Departamento de Histocompatibilidad e Prof. Dr. Javier Puente Piccardo
Inmunogenética Laboratorio de Inmunobioquímica
The London Blood Transfusion Center Departamento de Bioquímica y
Londres, Inglaterra Biología Molecular
Facultad de Ciencias Químicas y
Dr. Rodrigo Naves Pichuante Farmacéuticas
Instituto Milenio de Biología Universidad de Chile
Fundamental y Aplicada
Prof. Dr. Arnoldo Quezada Lagos
Dra. Ximena Norambuena Rodríguez Departamento de Pediatría
Unidad de Inmunología Facultad de Medicina
Servicio de Pediatría Universidad de Chile
Hospital Exequiel González Cortés
Dr. Santiago Rivero Díaz
Prof. Dr. José M. Ojeda Fernández Departamento de Reumatología e
Unidad de Virología Inmunología Clínica
Facultad de Medicina Facultad de Medicina
Universidad de Chile P. Universidad Católica de Chile

Prof. Dr. Mauricio Oqueteaux Prof. Dr. Cristián Rodríguez Guiraldes


Tacchini Unidad de Inmunología
Departamento de Hematología y Facultad de Medicina
Oncología Universidad de Los Andes
Facultad de Medicina
P. Universidad Católica de Chile

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Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber Prof. MgCs. Marcela Vásquez Rojas
Fundación Ciencias para la Vida Unidad de Inmunología y Hematología
Departamento de Biología Departamento de Bioquímica Clínica e
Facultad de Ciencias Inmunohematología
Universidad de Chile Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Talca
Prof. Dr. Flavio Salazar-Onfray
Programa disciplinario de Inmunología Dra. Pilar Vega Covarrubias
Instituto de Ciencias Biomédicas Sección Inmunidad Celular
Facultad de Medicina Laboratorio CIDI
Universidad de Chile
Prof. Dr. Ulises Vergara Castillo
Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda Carvajal Laboratorio de Inmunología
Unidad de Inmunología Facultad de Ciencias Veterinarias y
Departamento de Medicina Pecuarias
Facultad de Medicina Universidad de Chile
Universidad de Chile
Prof. Dra. Juana Villegas Moraga
Prof. Dra. Mireya Silva Batista Departamento de Medicina Interna
Laboratorio Clínico Inmunolab Facultad de Medicina
Universidad de la Frontera
Téc. Quím.Valeska Simon Zegers
Departamento de Biología Prof. Dr. Luis Zaror Cornejo
Facultad de Ciencias Instituto de Microbiología Clínica
Universidad de Chile Facultad de Medicina
Universidad Austral de Chile
Prof. Dr. Julio Sharfstein
Instituto de Biofísica Carlos Chagos Prof. Dra. Marta Zelazko de
Filho. UFRJ Cheistwer
Laboratory of Molecular Immunology Servicio de Inmunología
CCS Hospital Nacional de Pediatría
Río de Janeiro, Brasil Juan P. Garrahan
Buenos Aires, Argentina
BQ. Carolina Valenzuela Barros
Sección Inmunodiagnóstico Dr. Claudio Zúñiga Marti
Unidad de Inmunología Laboratorio de Inmunología
Instituto de Salud Pública Facultad de Ciencias Veterinarias y
Pecuarias
Prof. Dr. Claudio Vásquez Guzmán Universidad de Chile
Departamento de Ciencias Biológicas
Facultad de Química y Biología
Universidad de Santiago de Chile

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PATROCINIO

International Union of Immunology Societies (IUIS)


Asociación Latinoamericana de Inmunología (ALAI)
Sociedad Chilena de Inmunología (SOCHIN)
Sociedad Chilena de Alergia e Inmunología

Network for Research and Training in Parasitic Diseases


at the Southern Cone of Latin America, SIDA, Suecia

Universidad de Talca
Universidad de Chile
Facultad de Medicina
Facultad de Ciencias
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas
Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias
P. Universidad Católica de Chile
Facultad de Ciencias Biológicas
Universidad Austral de Chile
Facultad de Medicina
Universidad de Valparaíso
Facultad de Medicina
Universidad de Santiago de Chile
Facultad de Química y Biología
Universidad de la Frontera
Facultad de Medicina
Universidad de Antofagasta
Facultad de Ciencias Médicas
Universidad de Los Andes
Facultad de Medicina
Universidad Mayor
Facultad de Odontología
Universidad Favaloro (Argentina)
Instituto de Salud Pública de Chile

AUSPICIO

International Union of Immunology Societies (IUIS)

Biomérieux S.A.
Equilab
Laboratorio Clínico Talca Ltda.

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A nuestras queridas familias y a nuestros estimados alumnos

11

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CONTENIDOS

Página

PREFACIO 31

PRÓLOGO 35

SECCIÓN I: GENERALIDADES SOBRE INMUNIDAD 37

Capítulo 1 39
INTRODUCCIÓN A LA INMUNOLOGÍA: LAS BASES
BIOLÓGICAS DE LA INDIVIDUALIDAD
Prof. Dr. Gustavo Hoecker S.

Capítulo 2 45
HISTORIA DE LA INMUNOLOGÍA
Prof. Dr. Iván Palomo G. y Prof. Dr. Arturo Ferreira V.
1. Introducción 47
2. Dos siglos de inmunología 48
2.1. Inmunidad 48
2.2. Serología 48
2.3. Inmunoquímica 48
2.4. Inmunobiología 48
3. Premios Nobel 49

Capítulo 3 53
CÉLULAS Y ÓRGANOS DEL SISTEMA INMUNE
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Jaime Pereira G. y Prof. Dra. Cecilia Koenig S.
1. Introducción 55
2. Células del sistema inmune 55
2.1. Hematopoyesis 55
2.2. Linfocitos 57
2.3. Sistema fagocítico mononuclear 62
2.3.1. Monocitos 62
2.3.2. Macrófagos 63
2.3.3. Células dendríticas 65
2.4. Granulocitos 65
2.4.1. Neutrófilos 65
2.4.2. Eosinófilos 73
2.4.3. Basófilos 74
3. Órganos linfoides 75
3.1 Órganos linfoides primarios 75
3.1.1. Médula ósea 75
3.1.2. Timo 78
3.2. Órganos linfoides secundarios 80
3.2.1. Ganglios linfáticos 80
3.2.2. Bazo 82
3.2.3. Tejido linfoide asociado a mucosa 83
3.2.4 Amígdalas 84

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4. Tránsito linfocitario 84

Capítulo 4 87
INMUNIDAD INNATA
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dra. Adriana Ardiles S. y Prof. Dr. Ulises Vergara C.
1. Introducción 89
2. Componentes de la inmunidad innata o natural 90
3. Fase de reconocimiento en la respuesta inmune innata 93
4. Fase efectora en la respuesta inmune innata 94
5. Proyección clínica 98
6. Filogenia de la respuesta inmune innata 99

SECCIÓN II: ESPECIFICIDAD DE LA RESPUESTA INMUNE 101

Capítulo 5
ANTÍGENOS 103
Prof. Dra. María Inés Becker C. y Prof. Dr. Alfredo De Ioannes I.
1. Introducción 105
2. Conceptos generales 105
2.1. Antígeno 105
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad 106
2.3. Determinante antigénico 106
2.4. Haptenos 108
3. Características del antígeno que lo hacen inmunogénico 108
3.1 Tamaño 109
3.2. Presencia de grupos químicos activos 109
3.3. Conformación espacial de los epítopos 110
3.4. Movilidad atómica 110
4. Naturaleza química de los antígenos 110
4.1. Proteínas 110
4.2. Carbohidratos 111
4.3. Lípidos 112
4.4. Ácidos nucleicos 113
5. Clasificación de los antígenos según las células inmunes involucradas en su reconocimiento 113
5.1. Antígenos timo-dependientes 113
5.2. Antígenos timo-independientes 113
6. Clasificación general de los antígenos según su función 113
6.1. Antígenos de trasplante 113
6.2. Antígenos tumorales 113
6.3. Autoantígenos 113
6.4. Antígenos de diferenciación 114
6.5. Superantígenos 114
6.6. Alergenos 114

Capítulo 6 117
RECEPTOR DE LINFOCITOS B E INMUNOGLOBULINAS
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dra. María Inés Becker C., Prof. Dra. Silvia Pierangeli y Prof. Dr.
Ulises Vergara C.
1. Introducción 119
2. Receptor de linfocitos B (BCR): Estructura y función 120
2.1. Inmunoglobulina de membrana 121
2.2. Complejo accesorio Igα/Igβ 124

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3. Linfocitos B y señales accesorias de coestimulación 125
3.1. Antígenos T-dependientes y antígenos T-independientes 125
3.2. Co-Receptor CD21 (CR2) 125
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2 126
5. Estructura y función de inmunoglobulinas 126
5.1. Estructura general 127
5.2. Dominios de inmunoglobulinas y regiones hipervariables 128
5.3. Variaciones isotípicas, alotípicas e idiotípicas 129
5.3.1. Variaciones isotípicas 130
5.3.2. Variaciones alotípicas 130
5.3.3. Variaciones idiotípicas 130
5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas 130
6. Respuesta inmune humoral 135
6.1. Avidez 136
6.2. Afinidad 136
7. Bases genéticas de la diversidad de inmunoglobulinas 136
7.1. Genes de inmunoglobulinas 137
7.1.1. Genes de cadenas pesadas 138
7.1.2. Genes de cadenas livianas 138
7.2. Reordenamiento génico 139
7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas 140
7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas 140
7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA 141
7.2.4. Diversificación de la región N 141
7.2.5. Exclusión alélica 142
7.2.6. Exclusión isotípica 142
7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas 142
7.3. Hipermutación somática 143
7.4. Control de la transcripción de los genes de inmunoglobulinas 144
7.5. Estimación numérica de la diversidad de anticuerpos 144
8. Edición del receptor linfocitario 145
9. Biosíntesis y ensamblaje de las inmunoglobulinas 146

Capítulo 7 149
RECEPTOR DE LINFOCITOS T Y SEÑALES ACCESORIAS DE COESTIMULACIÓN
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Iván Palomo G.
1. Introducción 151
2. Estructura del receptor T 152
2.1. TCR αβ 152
2.2. TCR γδ 153
3. Estructura y función del complejo CD3 154
4. Receptor T y reconocimiento antigénico 154
4.1 Linfocitos TCD4 , linfocitos TCD8 y restricción MHC 156
4.2. Células TNK 157
5. Genética molecular del receptor T 159
5.1. Genes de cadenas TCRα, TCRβ, TCRγ y TCRδ 159
5.1.1. Genes de cadenas TCRα 159
5.1.2. Genes de cadenas TCRβ 159
5.1.3. Genes de cadenas TCRγ 160
5.1.4. Genes de cadenas TCRδ 161
5.2. Reordenamiento génico 161
6. Linfocitos T y señales accesorias de coestimulación 163
7. Homeostasis y desarrollo post-tímico de linfocitos T 165

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Capítulo 8 167
COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Prof. Dr. Iván Palomo G., Dr. Claudio Zúñiga M. y Prof. Dra. Cristina
Navarrete
1. Introducción 169
2. Genes y moléculas del Complejo Principal de Histocompatibilidad 170
2.1. Genes del MHC 171
2.1.1. Genes de clase I 171
2.1.2. Genes de clase II 172
2.1.3. Genes de clase III 173
2.1.4. Otros genes del MHC 173
2.2. Estructura y función de las moléculas MHC 174
2.2.1. Estructura y función de las Moléculas MHC de clase I 174
2.2.2. Estructura y función de las Moléculas MHC de clase II 174
3. El concepto de restricción MHC 175
4. Otras moléculas de presentación 176
4.1. Moléculas CD1 176
5. Herencia de los genes HLA 176
6. Complejo Principal de Histocompatibilidad y enfermedad 176
7. Nomenclatura y tipificación HLA 178

Capítulo 9 179
PROCESAMIENTO, PRESENTACIÓN Y RECONOCIMIENTO ANTIGÉNICO
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Dr. Claudio Zúñiga M., Prof. Dr. Iván Palomo G., y Prof. Dra. Cristina
Navarrete
1. Introducción 181
2. Linfocitos T y reconocimiento antigénico 181
2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y reconocimiento peptídico 182
2.2. Linfocitos T γδ 182
2.3. Células NK 182
2.4. Células presentadoras de antígenos 183
3. Tráfico celular y procesamiento antigénico 184
4. Antígenos endógenos y exógenos 184
5. Fragmentos peptídicos y moléculas MHC 184
6. Procesamiento y presentación de antígenos endógenos 185
7. Procesamiento y presentación de antígenos exógenos 187
8. Presentación alternativa de péptidos 189

Capítulo 10 191
ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS
Prof. Dr. Javier Puente P.
1. Introducción 194
2. Activación de los linfocitos T 195
2.1. Relación estructura-función del complejo TCR 195
2.2. Secuencias de activación en el TCR-CD3 y cadenas ξ 196
2.3. Proteínas tirosina quinasas en la activación de los LT 196
2.4. Proteínas adaptadoras en la activación de los linfocitos 198
2.5. Modelo general de activación de los LT 198
2.6. Las dos señales necesarias para la activación de los LT 201
3. Activación de los linfocitos B 202
3.1. Secuencias de activación en el BCR y sub-unidades asociadas 202
3.2. Modelo general de activación de los LB 202
4. Activación de las células NK 205

15

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4.1. Modelo de activación de las células NK 205

Capítulo 11 209
CITOQUINAS
Dr. Rodrigo Naves P. y Prof. Dra. María Rosa Bono M.
1. Introducción 211
2. Propiedades generales de las citoquinas 211
3. Receptores de las citoquinas y mecanismos de transducción de señales 219
3.1. Receptores de citoquinas 219
3.2. Transducción de señales 223
4. Principales actividades biológicas de las citoquinas 223
4.1. Inmunidad innata 223
4.1.1. Inmunidad antiviral 224
4.1.2. Citoquinas e inflamación 224
4.2. Citoquinas y respuesta inmune 225
4.2.1. Citoquinas y diferenciación de células linfoides 225
4.2.2. Células Th1 y Th2 226
4.2.3. Activación de linfocitos B 228
4.2.4. Respuesta inmune específica mediada por células 228
4.3. Citoquinas y hematopoyesis 229
4.3.1. Factores estimuladores de colonias 230
4.3.2. Otras citoquinas estimuladoras de la hematopoyesis 231
4.3.3. Citoquinas supresoras 232
5. Quimioquinas 232
5.1. Quimioquinas en la diferenciación linfocitaria 232
5.2. Quimioquinas en la recirculación de los linfocitos a través de los órganos linfoides
secundarios 234
5.3. Quimioquinas en el “homing” de los linfocitos a sitios efectores periféricos 235
5.4. Quimioquinas y enfermedades 235
5.5. Quimioquinas y terapia 237

Capítulo 12 239
RECEPTORES DE ADHESIÓN, “HOMING” Y ACTIVACIÓN DE LINFOCITOS
Dr. Jorge Rodrigo Mora S. y Prof. Dr. Mario Rosemblatt S.
1. Introducción 241
2. Modelo general de adhesión leucocitaria 242
3. Receptores de adhesión y sus ligandos 244
3.1. Receptores de adhesión de la familia de las integrinas 245
3.2. Receptores de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas (SFIg) 246
3.3. Moléculas de adhesión de la familia de las selectinas 248
4. Interacciones linfocito-endotelio 248
4.1. Tráfico linfocitario a través del endotelio inflamado 250
4.2. Tráfico linfocitario a través del endotelio columnar (HEV) 252
4.3. Tráfico linfocitario hacia la piel 253
5. Regulación del posicionamiento (“homing”) de linfocitos 253
6. Receptores de adhesión en la diferenciación y activación linfocitaria 257
6.1. Receptores de adhesión y diferenciación temprana en la médula ósea 257
6.2. Receptores de adhesión y diferenciación en el microambiente de los OLS 258

Capítulo 13 261
ONTOGENIA Y DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS B Y T
Dr. Rodrigo Naves P. y Prof. Dr. Mario Rosemblatt S.
1. Introducción 263

16

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2. Regulación génica de la diferenciación linfocitaria 264
3. Diferenciación y maduración de linfocitos B 266
3.1. Etapa antígeno-independiente 266
3.2. Etapa antígeno-dependiente 267
4. Diferenciación y maduración de linfocitos T 269
4.1. Migración de los precursores de linfocitos T 269
4.2. Diferenciación 269
4.3. Selección tímica 271

Capítulo 14 275
REGULACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Dr. Claudio Zúñiga M. y Prof. Dr. Iván Palomo G.
1. Introducción 277
2. Regulación de la respuesta inespecífica 277
2.1. Regulación del sistema del complemento 277
2.2. Regulación de la acción de células NK 277
3. Regulación de la respuesta inmune específica 278
3.1. Mecanismos inmunológicos y no inmunológicos de regulación 279
3.2. Deleción y anergia clonal. Tolerancia inmunológica 280
3.3. Activación de linfocitos T supresores 281
3.4. Regulación mediante linfocitos Th1 y Th2 282
3.5. Regulación idiotípica o red idiotipo-anti-idiotipo 283
3.6. Regulación o “feedback” por anticuerpos y complejos inmunes 284
3.7. Regulación por Prostaglandinas 286
3.7.1. Prostaglandina E2 (PGE2) 286
3.7.2. Prostaglandina 15-d PGJ2 286

Capítulo 15 289
NEUROINMUNOLOGÍA
Prof. Dr. Hugo Folch V., Dr. Miguel Barría M. y Prof. Dr. Patricio Esquivel S.
1. Introducción 291
2. Interacciones entre el sistema nervioso central, sistema endocrino y sistema inmune 292
2.1. Inervación de los órganos linfoides 293
2.2. Existencia de un eje Sistema nervioso central-hipófisis-sistema inmune 293
2.3. El SNC tiene “conocimiento” de la entrada de antígeno al organismo y responde a él 294
2.4. El sistema inmune produce hormonas 294
2.5. El sistema inmune tiene receptores para hormonas y neuropéptidos 295
2.6. Otras señales derivadas del sistema inmune tienen efecto en el sistema neuroendocrino 295
3. Resultante de la interacción del sistema nervioso, sistema endocrino y el sistema inmune:
evidencias en el organismo vivo que demuestran su efecto en la respuesta inmune 297
3.1. Efecto del “stress” en la respuesta inmune 297
3.2. Depresión e inmunidad 297
3.3. Efecto de los factores sociales en la respuesta inmune 297
3.4. Las drogas psicoactivas alteran el funcionamiento del sistema linfoide 298
3.5. Las hormonas sexuales modulan la respuesta autoinmune 298
4. Algunos casos en que el sistema inmune origina cambios o trastornos en el sistema nervioso 298
4.1. Efecto de los anticuerpos a nivel del sistema nervioso 298
4.2. Efecto de complejos antígeno-anticuerpo en el sistema nervioso central 298
4.3. Rol patogénico de linfocitos T, macrófagos y citoquinas en el tejido nervioso 298

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Capítulo 16 299
INMUNIDAD DE MUCOSAS
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Iván Palomo G.
1. Introducción 301
2. Sistema inmune de mucosas 302
2.1. Organización estructural 302
2.2. Transporte y presentación de antígenos 304
3. Funciones efectoras de la inmunidad de mucosas 305
3.1. Respuesta inmune de anticuerpos 305
3.2. Respuesta inmune celular 306
4. Inmunización a través de mucosas 307
4.1. Uso de adyuvantes 308
5. Tolerancia inducida a través de mucosas 309

Capítulo 17 311
INMUNOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN
Prof. Dra. Mónica Imarai B. y Prof. Dra. Juana Villegas M.
1. Introducción 313
2. El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva 314
2.1. El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva de la hembra 314
2.2. El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva del macho 316
3. Inducción de la respuesta inmune en la mucosa reproductiva 316
3.1. Inducción de la respuesta inmune en la mucosa reproductiva de la hembra 316
3.2. Respuesta inmune a las infecciones en la mucosa reproductiva de la mujer 317
4. El sistema inmune local en el embarazo 318
4.1. La Interfase materno fetal 318
4.2. Expresión de MHC en las células trofoblásticas 318
4.3. Las células NK de la decidua 319
4.4. Los linfocitos T de la decidua 319
4.5. Citoquinas en la preñez 320
5. Factores inmunológicos que afectan la fertilidad 320
5.1. Aborto espontáneo recurrente de causa inexplicada 320
5.2. Anticuerpos antiespermáticos 321

SECCIÓN III: MECANISMOS EFECTORES DE LA RESPUESTA INMUNE 325

Capítulo 18 327
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
Prof. Dr. Arturo Ferreira V. y Prof. Dr. Julio Scharfstein
1. Introducción 329
2. Generalidades sobre la activación y regulación del Sistema del Complemento 331
2.1. Generación de enlaces covalentes por parte de C3b y C4b, al reaccionar con
estructuras de las superficies atacadas por el sistema 335
2.2. Las C3 y C5 convertasas de las rutas clásica y alterna son funcionalmente homólogas 336
3. Ruta clásica: algunos detalles moleculares 337
3.1. Unión C1 337
3.2. Activación de C4 y C2 338
3.3. Convertasa de C3 339
3.4. Convertasa de C5 340
3.5. Mecanismos que confinan la activación del complemento a las membranas
blanco (“target”) o culpables 340
3.6. Rutas de las lectinas 340

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4. Ruta alterna: algunos detalles moleculares 341
4.1. Activación de la ruta alterna 342
4.2. Papel de la properdina 344
5. Fase terminal: generación del complejo destructor de membranas 344
5.1. Generación de C5-8 344
5.2. Polimerización de C9 345
5.3. Efecto funcional de la inserción del MHC en las membranas 346
5.4. Perspectivas futuras del estudio de la fase final de la activación del complemento 347
6. Algunos aspectos genéticos del Complemento 347
7. Complemento y enfermedad 347

Capítulo 19 349
INMUNIDAD MEDIADA POR CÉLULAS
Dra. Luz Blanco P. y Prof. Dr. Javier Puente P.
1. Introducción 351
2. Citolisis mediada por linfocitos T 352
2.1. Mecanismo membranolítico 355
2.2. Mecanismo dependiente de la interacción FasL-Fas 356
3. Citolisis mediada por célula NK 358
3.1. Citotoxicidad mediada por células NK 358
3.2. Receptor FcγRIIIA (CD16) 360
4. Métodos de estudio del proceso citolítico 361
5. Hipersensibilidad retardada (HR) 362

Capítulo 20 365
RESPUESTA INMUNE MEDIADA POR IgE
Prof. Dr. Arnoldo Quezada L. y Dr. Edgardo Carrasco C.
1. Introducción 367
2. Características de la IgE 367
3. Mastocitos y Basófilos 367
4. Receptores para IgE y liberación de mediadores 368
5. Regulación de la síntesis de IgE 371
6. Rol biológico de la respuesta mediada por IgE 372
7. Aplicaciones biomédicas 373

SECCIÓN IV: INMUNOLOGÍA CLÍNICA 375

Capítulo 21 377
HIPERSENSIBILIDAD
Prof. Dr. Arnoldo Quezada L. y Dra. Ximena Norambuena R.
1. Introducción 379
2. Clasificación de las reacciones de hipersensibilidad 380
3. Hipersensibilidad inmediata mediada por IgE (tipo I) 381
4. Hipersensibilidad citotóxica (tipo II) 382
5. Hipersensibilidad mediada por complejos inmunes (tipo III) 383
6. Hipersensibilidad retardada mediada por células (tipo IV) 384

Capítulo 22 387
ANAFILAXIS
Prof. Dra. Patricia Díaz A.
1. Introducción 389
2. Fisiopatología 389

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2.1. Mastocitos 389
2.2. Degranulación de mastocitos y basófilos 390
2.3. Participación de cascadas de la inflamación en la reacción anafiláctica y anafilactoídea 393
2.4. Alteraciones Funcionales 393
3. Causas de anafilaxis 394
3.1. Fármacos 394
3.2. Látex 394
3.3. Picaduras de himenópteros 394
3.4. Alimentos 394
3.5. Anafilaxis inducida por inmunoterapia 395
3.6. Anafilaxis inducida por ejercicio 395
3.7. Anafilaxis idiopática 395
4. Causas de reacciones anafilactoídeas 395
4.1. Aditivos 395
4.2. Medios de contraste 395
4.3. Ácido acetil salicílico (AAS) y anti-inflamatorios no esteroidales (AINE) 395
5. Reacciones anafilácticas y anafilactoídeas en pabellones quirúrgicos 396
6. Signos y síntomas 396
7. Laboratorio 397
8. Tratamiento 397

Capítulo 23 399
AUTOINMUNIDAD
Dra. Ana María Agar M. y Dra. María Angélica Marinovic M.
1. Introducción 401
2. Formas clínicas y características comunes 401
3. HLA y enfermedades autoinmunes 403
4. Patogenia de las enfermedades autoinmunes 404
5. Autotolerancia 404
5.1. Falla de la tolerancia central del linfocito T 405
5.2. Falla de la tolerancia periférica del linfocito T 405
5.3. Falla de la tolerancia del linfocito B 405
6. Citoquinas y enfermedades autoinmunes 406
7. Nuevos tratamientos 407

Capítulo 24 409
ENFERMEDADES REUMÁTICAS
Prof. Dr. Sergio Jacobelli G. y Prof. Dr. Santiago Rivero D.
1. Introducción 411
2. Artritis Reumatoídea 411
2.1. Patogenia 412
2.1.1. Genética 412
2.1.2. Infecciones 413
2.1.3. Autoinmunidad 414
2.2. Clínica y tratamiento 416
3. Lupus eritematoso sistémico 416
3.1. Patogenia 416
3.1.1. Factores genéticos 417
3.1.2. Factores ambientales 417
3.1.3. Disregulación del sistema inmune 417
3.1.4. Inflamación y daño celular/tisular 419
3.2. Clínica y tratamiento 419

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Capítulo 25 423
SÍNDROME ANTIFOSFOLÍPIDO
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Antonio Cabral, Prof. Dra. Silvia Pierangeli
y Prof. Dr. Ricardo Forastiero V.
1. Introducción 425
2. Antígenos y anticuerpos 425
2.1. Antígenos 425
2.2. Anticuerpos 426
3. Mecanismos de trombosis 427
3.1. Biosíntesis de eicosanoides e isoeicosanoides 427
3.2. Sistema antitrombótico de la proteína C 428
3.3. Vía del factor tisular 428
3.4. Sistema fibrinolítico 428
3.5. Anexinas y activación celular 428
3.6. Inmunidad celular y perfil de citoquinas 429
3.7. Asociación con factores genéticos de riesgo trombótico 429
4. Manifestaciones clínicas 429
4.1. Manifestaciones vaso-oclusivas 429
4.2. Manifestaciones hemocitopénicas 430
4.3. Otras manifestaciones 430
5. Laboratorio 430
5.1. Anticardiolipina por ELISA 431
5.2. Anticoagulante Lúpico 432
5.3. Pruebas de laboratorio más específicas para el diagnóstico de SAF 432
5.4. ¿Qué pruebas de laboratorio se deben usar en el diagnóstico de SAF? 432
6. Tratamiento 433

Capítulo 26 437
CITOPENIAS INMUNES
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Jaime Pereira G. y Prof. MgCs. Marcela Vásquez R.
1. Introducción 439
2. Anemias hemolíticas inmunes 439
2.1. Sistemas antigénicos de los glóbulos rojos 439
2.2. Anemias hemolíticas inmunes 441
2.2.1. Anemias hemolíticas aloinmunes 442
2.2.2. Anemias hemolíticas autoinmunes 443
3. Trombocitopenias inmunes 445
3.1. Sistemas antigénicos de las plaquetas 446
3.2. Trombocitopenias inmunes 447
3.2.1. Trombocitopenias aloinmunes 449
3.2.2. Trombocitopenias autoinmunes 451
4. Neutropenias inmunes 453
4.1. Sistemas antigénicos de los neutrófilos 453
4.2. Neutropenias inmunes 454
4.2.1. Neutropenias aloinmunes 454
4.2.2. Neutropenias autoinmunes 455

Capítulo 27 459
GAMMAPATÍAS MONOCLONALES
Prof. Dra. Mireya Silva B. y Prof. Dr. Mauricio Oqueteaux T.
1. Introducción 461
2. Estudio inmunológico de las gammapatías monoclonales 462
2.1. Pesquisa de una proteína monoclonal 462

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2.2. Identificación de una proteína monoclonal 463
2.3. Cuantificación de inmunoglobulinas 465
2.4. Viscosidad sérica 465
2.5. Beta-2 microglobulina 465
2.6. Proteína C reactiva 465
2.7. Interleuquina-6 466
2.8. Estudios inmunológicos en orina 466
3. Gammapatía monoclonal de significado incierto 466
3.1. Aspectos generales 466
3.2. Evolución de las MGUS en el tiempo 466
4. Mieloma múltiple 467
4.1. Manifestaciones clínicas 467
4.2. Pronóstico 468
5. Variedades infrecuentes de mieloma múltiple y otras gammapatías 469
5.1. Mieloma "indolente" 469
5.2. Leucemia de células plasmáticas 470
5.3. Mieloma osteoesclerótico 470
5.4. Plasmocitoma extramedular 470
5.5. Plasmocitoma óseo solitario 470
5.6. Macroglobulinemia de Waldenström (MW) 470
5.7. Enfermedad de cadenas livianas 470
5.8. Amiloidosis primaria 471
5.9. Enfermedad por cadenas pesadas 471
6. Diagnóstico diferencial entre MGUS y MM 471
7. Patogenia 472
7.1. Papel de la IL-6 y vía de la ciclina D1 472
7.2. Genes supresores de tumores 473
7.3. Apoptosis de CPs 473
7.4. Papel del estroma en las discrasias de CPs 473
8. Tratamiento 473

Capítulo 28 477
ENFERMEDADES ORALES DE ORIGEN INMUNOLÓGICO
Prof. Dr. Benjamín Martínez R.
1. Introducción 479
2. Reacciones de hipersensibilidad orales 479
3. Manifestaciones orales de inmunodeficiencias 480
3.1. Candidiasis oral en infección por VIH 480
3.2. Leucoplasia pilosa 482
3.3. Sarcoma de Kaposi 482
4. Enfermedades autoinmunes orales 482
4.1. Síndrome de Sjögren 482
4.2. Úlcera oral recurrente (aftas) 484

Capítulo 29 489
OTRAS ENFERMEDADES INMUNOMEDIADAS
Prof. Dra.Cecilia Sepúlveda C.
1. Introducción 491
2. Algunas enfermedades inmunomediadas 491
2.1. Lupus eritematoso sistémico 491
2.2. Artritis reumatoidea 492
2.3. Enfermedades mediadas por anticuerpos 492
2.4. Otras enfermedades 494

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Capítulo 30 495
INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS
Prof. Dra. Mónica Cornejo De L. y Prof. Dra. Marta Zelazko de Ch.
1. Introducción 497
2. Inmunodeficiencias primarias 499
2.1. Aspectos genéticos de las IDP 499
2.2. Estudios de laboratorio inmunológico para el diagnóstico de IDP 500
2.3. Características de las IDP 501
2.3.1. Defectos predominantemente de anticuerpos 501
2.3.2. Defectos combinados de células T y B 503
2.3.3. Inmunodeficiencias asociadas a otros defectos 507
2.3.4. Defectos congénitos de inmunidad natural 508
3. Tratamiento de las inmunodeficiencias congénitas 509

Capítulo 31 511
INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS
Dra. María Antonieta Guzmán M. y Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda C.
1. Introducción 513
2. Infección por VIH y SIDA 513
2.1. Magnitud del problema 514
2.2. Características del virus 514
2.3. Progresión de la infección por VIH-1 517
2.4. Ingreso al organismo 517
2.5. Respuesta inmune anti-VIH 518
2.6. Diagnóstico de laboratorio 530
2.7. Tratamiento 530
3. Sistema inmune fetal y neonatal 519
3.1. Inmunidad celular 519
3.2. Inmunidad humoral 519
3.3. Inmunidad innata 519
4. Envejecimiento y sistema inmune 520
4.1. Inmunidad celular 520
4.2. Inmunidad humoral 521
5. Inmunidad y nutrición 521
5.1. Inmunidad celular 522
5.2. Déficit de nutrientes específicos 522
6. Inmunodeficiencia inducida por cirugía y trauma 522
7. Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infecciosas 523
7.1. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones virales 523
7.2. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones bacterianas y fúngicas 524
7.3. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones parasitarias 525
8. Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infiltrativas y tumores 525
8.1. Evasión de la respuesta inmune por tumores 525
8.2. Defectos inmunológicos en tumores 526
9. Inmunodeficiencia secundaria a terapia inmunosupresora 526
9.1. Mecanismos de acción 526
9.2. Impacto de la inmunodeficiencia asociada a inmunosupresora 529

Capítulo 32 531
INMUNIDAD FRENTE A BACTERIAS
Prof. Dra. Eva Burger, Prof. Dra. Edilia Andrews G. y Prof. Dr. Heriberto Fernández J.
1. Introducción 533

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2. Inmunidad frente a bacterias extracelulares 533
2.1. Características generales de las bacterias extracelulares 533
2.2. Mecanismos de inmunidad natural 534
2.2.1. Mecanismos comunes a bacterias extra e intracelulares 534
2.2.2. Inmunidad natural a bacterias extracelulares 535
2.3. Inmunidad adquirida a bacterias extracelulares 536
2.3.1. Neutralización de toxinas o enzimas bacterianas por anticuerpos 536
2.3.2. Efectos directos del sistema del complemento 536
2.3.3. Efecto conjunto de anticuerpo, complemento y lisozima 536
2.3.4. Opsonización y facilitación de la fagocitosis 536
3. Inmunidad frente a bacterias intracelulares 537
3.1. Características generales de las bacterias intracelulares 537
3.2. Inmunidad natural a bacterias intracelulares 537
3.2.1. Células NK 537
3.2.2. Leucocitos polimorfonucleares neutrófilos 538
3.3. Inmunidad adquirida a bacterias intracelulares 538
3.3.1. Macrófagos activados 538
3.3.2. Linfocitos T 538
3.3.3. Efecto conjunto de linfocitos T CD4+ y CD8+ 539
3.3.4. Linfocitos T-γδ 539
3.3.5. Citoquinas 539
3.3.6. Granulomas 540
4. Análisis comparativo del desarrollo de inmunidad en infecciones por bacterias
extracelulares e intracelulares 540
5. Estrategias de intervención inmune en relación a bacterias intracelulares 540
5.1. Tipos de vacunas para bacterias intracelulares en uso 541
5.2. Desarrollo de nuevas vacunas 541
5.2.1. Identificación de antígenos protectores 541
5.2.2. Cepas vaccinales atenuadas y recombinantes 541
5.2.3. Vacunas de subunidades y empleo de adyuvantes 541
5.2.4. Vacunas DNA 542

Capítulo 33 545
INMUNIDAD FRENTE A HONGOS
Prof. Dra. Eva Burger, Prof. Dr. Luiz Zaror C., y Prof. Dr. Heriberto Fernández J.
1. Introducción 547
1.1. Consideraciones históricas 547
1.2. Características generales de algunos hongos oportunistas 547
1.3. Características generales de algunos hongos patogénicos 548
1.4. Características generales de los dermatofitos 548
1.5. Conceptos sobre inmunidad a hongos patogénicos 549
2. Inmunidad natural 549
2.1. Factores hormonales 549
2.2. Concentración de hierro 549
2.3. Sistema del complemento 550
2.4. Células “natural killer” (NK) 550
2.5. Leucocitos polimorfonucleares neutrófilos (PMN) 550
2.6. Macrófagos 550
3. Inmunidad humoral a hongos 551
3.1. Papel de la inmunidad humoral 551
3.2. Mecanismos protectores de la inmunidad humoral 551
4. Inmunidad celular a hongos 552
4.1. Macrófagos 552

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4.2. Linfocitos T 522
4.3. Citoquinas 553
4.4. Granulomas 553
5. Mecanismos de inmunidad protectora 554
5.1. Mecanismo principal 554
5.2. Otros mecanismos 555

Capítulo 34 557
RESPUESTA INMUNE FRENTE A VIRUS
Prof. Dr. José M. Ojeda F. y Prof. Dr. Jorge A. Fernández V.
1. Introducción 559
2. Infección viral 560
2.1. Interacción virus-huésped 560
3. Respuesta inmune en infecciones virales 560
3.1. Inmunidad antiviral natural 561
3.1.1. Producción de IFN tipo I y otras citoquinas 561
3.1.2. Células NK 561
3.1.3. Activación del complemento y fagocitosis 561
3.2. Inmunidad antiviral específica 562
3.2.1. Inmunidad humoral 562
3.2.2. Inmunidad celular 562
3.3. Evasión de la respuesta inmune por virus 564
3.3.1. Persistencia intracelular 564
3.3.2. Variación antigénica 564
3.3.3. Interacción con componentes del sistema inmune 565
3.3.4. Interferencia con la presentación antigénica 565
3.3.5. Simulación molecular 566
3.3.6. Inmunosupresión 566

Capítulo 35 567
INMUNIDAD FRENTE A PARÁSITOS
Prof. Dr.Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Jorge González C.
1. Introducción 569
2. Respuesta inmune frente a protozoos 570
2.1. Desarrollo de inmunidad protectora 572
2.2. Activación de macrófagos infectados 574
2.3. Activación de linfocitos T CD8+ 575
2.4. Rol de los anticuerpos en el control de protozoos 575
3. Respuesta inmune frente a nemátodos intestinales 576
3.1. Aspectos generales de la respuesta inmune 577
3.1.1. Enterocitos 577
3.1.2. Inmunoglobulinas 577
3.1.3. Linfocitos 578
3.1.4. Células mieloides 578
3.2. Respuesta Th2 y protección inmunológica 578
3.2.1. Mecanismos efectores y resistencia a la infección 579
3.3. Respuesta Th1 y susceptibilidad a la infección 579
4. Respuesta inmune frente a tremátodos intestinales 580
4.1. Inmunidad protectora frente a Schistosoma 581
4.1.1. Eosinófilos 582
4.1.2. Macrófagos 582
4.2. Inmunidad en la rata 583
4.3. Inmunidad en el ratón 583
4.4. Interferencia con la inmunidad 584

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Capítulo 36 587
VACUNAS
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Rosario Billetta
1. Introducción 587
2. Vacunas naturales o tradicionales 590
3. Vacunas recombinantes 593
4. Vacunas anti-idiotípicas 596
5. Vacunas sintéticas 596
6. Vacunas de DNA 598
7. Vacunas Genómicas 600
8. Adyuvantes, inmunomoduladores e inmunogenicidad 600

Capítulo 37 605
MECANISMOS DE INMUNIDAD ANTITUMORAL
Prof. Dr. Flavio Salazar O. y Prof. Dr. Javier Puente P.
1. Introducción 607
2. Defensa inmunológica contra el cáncer 608
2.1. La hipótesis de vigilancia inmunológica antitumoral 608
2.2. Componentes de la respuesta inmune antitumoral 608
2.2.1. Respuesta inmunológica humoral 609
2.2.2. Respuesta inmunológica celular 609
3. Antígenos asociados a tumores 610
3.1. Clasificación de AAT reconocidos por LT 610
4. Estrategias tumorales de evasión inmunológica 610
4.1. Disminución de la expansión de las moléculas MHC 610
4.2. Factores inmunosupresores producidos por los tumores 613
5. Terapia inmunológica contra el cáncer 613
5.1. Anticuerpos monoclonales 613
5.2. Terapia biológica contra el cáncer 614
5.2.1. Utilización de citoquinas 615
5.2.2. Terapia celular adoptiva 615
5.3. Inmunización activa contra tumores 617

Capítulo 38 619
MECANISMOS INMUNOLÓGICOS DEL RECHAZO DE ALOINJERTOS
Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda C.
1. Introducción 621
2. Rechazo de aloinjertos 621
2.1. Presentación directa de aloantígenos 622
2.2. Presentación indirecta de aloantígenos 622
2.3. Células que participan en el rechazo 623
3. Mecanismos efectores del rechazo 623
3.1 Rechazo hiperagudo 623
3.2. Rechazo agudo 624
3.3. Rechazo crónico 624
4. Prevención y tratamiento del rechazo 624
4.1 Inmunosupresión 624
4.2. Selección de donantes 625
4.3. Inducción de tolerancia 625

26

Sin título-2 26 5/26/06, 10:25 AM


Capítulo 39 627
INMUNOMODULADORES
Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda C. y Dra. María Antonieta Guzmán M.
1. Introducción 629
2. Principales Inmunomoduladores 629
2.1. Antiproliferativos 629
2.2. Antagonistas de las Inmunofilinas 630
2.3. Glucocorticoides 631
2.4. Agentes biológicos 631
2.5. Citoquinas 632
2.6. Trasplante de médula ósea 633
2.7. Células autólogas modificadas 633
2.8. Isoprinosine 633
3. Efectos Adversos de los Inmunomoduladores 633

SECCIÓN V: MÉTODOS INMUNOLÓGICOS Y DE BIOLOGÍA


MOLECULAR 635

Capítulo 40 637
MÉTODOS INMUNOQUÍMICOS
Dr. Darwins Castillo A. y BQ. Carolina Valenzuela B.
1. Introducción 640
2. Inmunoanálisis 641
2.1. Inmunoanálisis con reactivos no marcados 641
2.1.1. Reacción de precipitación 641
2.1.1.1. Reacción de precipitación en medio líquido 641
a) Precipitación en tubo 641
b) Floculación 642
c) Turbidimetría 642
d) Nefelometría 643
e) Precipitación de complejos inmunes solubles 643
2.1.1.2. Reacción de precipitación en gel 643
a) Inmunodifusión doble 643
b) Inmunodifusión radial 644
c) Inmunoelectroforesis 644
d) Inmunofijación 645
e) Contrainmunoelectroforesis 645
f) “Rocket” inmunoelectroforesis 646
g) Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional de Laurell 647
2.1.2. Reacción de aglutinación 647
a) Aglutinación directa 647
b) Aglutinación indirecta 648
c) Aglutinación pasiva 648
2.1.3. Reacción con participación del complemento 648
a) Fijación del complemento 648
b) Actividad hemolítica del complemento 648
2.2. Inmunoanálisis con reactivos marcados 648
2.2.1. Inmunoanálisis fluorescente 648
a) Microscopía inmunofluorescente 648
b) Inmunoanálisis de fluorescencia polarizada 649
c) Inmunoanálisis de fluorescencia unida a enzima 650
d) Citometría de flujo 650

27

Sin título-2 27 5/26/06, 10:25 AM


2.2.2. Enzimainmunoanálisis (EIA) 650
a) EIA homogéneo 650
b) EIA heterogéneo 651
c) Electroinmunotransferencia o “Western blot” o “Immunoblotting” 651
2.2.3. Radioinmunoanálisis (RIA) 652
a) RIA en fase soluble 652
b) RIA en fase sólida 652
c) Detección inmunorradiométrica para antígeno 652
2.2.4. Quimiluminiscencia 652
2.2.5. Bioluminiscencia 652

Capítulo 41 655
MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA INMUNIDAD CELULAR
Prof. Dr. Jorge González C. y Dra. Pilar Vega C.
1. Introducción 657
2. Preparación y aislamiento de diferentes poblaciones celulares 658
2.1. Métodos de purificación tradicionales 658
2.2. Separación inmunomagnética 659
3. Estudio de la respuesta inmune celular específica 660
3.1. Estudio de las subpoblaciones de linfocitos 660
3.2. Estudio de las funciones de inmunidad celular específica 662
3.3. Estudio de la síntesis de citoquinas y sus receptores 670
3.4. “DNA microarrays” 675
3.5. Pruebas para evaluar reacciones de hipersensibilidad retardada (RHR) 676
3.6. Estudios de la especificidad de células T 676
3.7. Detección de células T “supresoras” 677
4. Estudio de la inmunidad celular inespecífica 678
4.1. Ensayos funcionales de neutrófilos 678
4.2. Ensayos funcionales de eosinófilos 679
4.3. Funciones de monocitos y macrófagos 679
5. Evaluación de laboratorios del paciente infectado con el virus de la inmunodeficiencia humana.
Un modelo del estudio de las deficiencias en la respuesta celular 682
5.1. Estudio fenotípico de linfocitos 682
5.2. Estudio de la respuesta proliferativa 683
5.3. Estudio de la respuesta citotóxica 683
5.4. Evaluación de los niveles de citoquinas y subpoblaciones de linfocitos T 684

Capítulo 42 685
LABORATORIO DE HISTOCOMPATIBILIDAD Y TRASPLANTE DE ÓRGANOS
Dra. Susana Elgueta M., BQ. Alejandra Arenas C. y Prof. Dra. Cristina Navarrete
1. Introducción 687
2. Nomenclatura HLA 689
2.1. Herencia 690
3. Tipificación HLA 691
3.1. Técnica serológica 691
3.2. Técnica celular 692
3.3. Técnica molecular 692
4. Anticuerpos HLA 693
4.1. Anticuerpos reactivos con panel 693
4.2. Crossmatch 694
5. Requerimientos de histocompatibilidad para trasplante 695
6. Otras aplicaciones de la tipificación HLA 696

28

Sin título-2 28 5/26/06, 10:25 AM


Capítulo 43 699
CITOMETRÍA DE FLUJO: PRINCIPIOS BÁSICOS Y APLICACIONES
Téc. Quím. Valeska Simon Z. y Prof. Dra. María Rosa Bono
1. Introducción 701
2. Principios generales 701
2.1. Sistemas de fluidos 702
2.2. Sistema óptico 703
2.3. Sistema electrónico 703
2.4. Reactivos para citometría de flujo 704
3. Aplicaciones de la citometría de flujo 705
3.1. Determinación de poblaciones celulares 705
3.2. Fenotipificación de neoplasias hematológicas 708
3.2.1. Fenotipificación de leucemias 708
3.2.2. Fenotipificación de linfomas 710
3.3. Enfermedad de Hodgkin 713
3.4. Trasplante de médula ósea 713
3.5. Análisis de DNA y ciclo celular 714
3.6. Análisis de enfermedad residual mínima 715

Capítulo 44 719
ANTICUERPOS MONOCLONALES
Prof. Dra. María Inés Becker C. y Prof. Dr. Alfredo E. De Ioannes I.
1. Introducción 722
2. Fundamentos del desarrollo de hibridomas 722
2.1. Mielomas 722
2.2. Fusión celular 723
2.3. Medio de selección 723
3. Etapas de la producción de hibridomas murinos 724
3.1. Inmunización 724
3.2. Fusión 725
3.3. Selección y crecimiento 726
3.4. Subclonación y congelación 727
3.5. Cultivo masivo 727
4. Anticuerpos monoclonales versus anticuerpos policlonales 727
4.1. Especificidad 727
4.2. Avidez y afinidad 729
5. Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales 729
5.1. Investigación básica 729
5.2. Medicina 730
5.3. Biotecnología 731
6. Otros tipos de hibridomas 731
6.1. Heterohibridomas 731
6.2. Hibridomas humanos 732

Capítulo 45 737
MÉTODOS FUNDAMENTALES DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Prof. Dr. Claudio Vásquez G. y Prof. Dr. Enrique González V.
1. Introducción 739
2. Bases de la Biología Molecular 739
2.1. El DNA es el material genético 740
2.2. Componentes del DNA 740
2.3. Estructura del DNA 741
3. Las nuevas tecnologías 741

29

Sin título-2 29 5/26/06, 10:25 AM


3.1. Endonucleasas de restricción 742
3.2. Clonamiento del DNA 742
3.3. Transferencia de “Southern” 743
3.4. Transformación de células 743
3.5. Secuenciación del DNA 744
3.6. Reacción de la polimerasa en cadena 745
3.7. Animales transgénicos y “knock out” de genes 746
4. La expresión génica en organismos eucarióticos 747
4.1. Estructura de los genes eucarióticos 747
4.2. El proceso de expresión génica y sus etapas 748
4.3. La expresión diferencial de genes y su regulación 749
5. Métodos de análisis de la expresión génica 752
5.1. Hibridación “Northern” 752
5.2. Reacción de la polimerasa en cadena acoplada a la reacción de la transcriptasa
reversa (RT-PCR) 753
5.3. Análisis del perfil transcripcional mediante el método de “differential display” de mRNAs. 753
5.4. Hibridación sustractiva 755

Capítulo 46 757
GRUPOS DE DIFERENCIACIÓN ANTIGÉNICA
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Flavio Carrión A. y Prof. Dr. Cristián Rodríguez G.
1. Introducción 759
2. Estructura de los antígenos de membrana 775
2.1. Proteínas de transmembrana tipo I 775
2.2. Proteínas de transmembrana tipo II 775
2.3. Proteínas de transmembrana tipo III 776
3. Moléculas CD asociadas a líneas celulares 777
3.1. Moléculas CD expresadas principalmente en "stem cell" 777
3.2. Moléculas CD expresadas principalmente en células B 777
3.3. Moléculas CD expresadas principalmente en células T 778
3.4. Moléculas CD expresadas principalmente en células NK 779
3.5. Moléculas CD expresadas principalmente en granulocitos 780
3.6. Moléculas CD expresadas principalmente en monocitos-macrófagos 780
3.7. Moléculas CD expresadas principalmente en plaquetas 780
4. Familias de moléculas CD 781
5. Algunas aplicaciones de la nomenclatura CD en Inmunología 781

GLOSARIO 785

ÍNDICE ALFABÉTICO GENERAL DE MATERIAS 801

30

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PREFACIO

Nuestras primeras palabras queremos que sean para dedicar un homenaje pós-
tumo a César Milstein, quien junto a George Köhler, en la década del setenta, desarro-
llaron la metodología para obtener anticuerpos monoclonales. Tal importancia cien-
tífica representó su aporte, que recibieron el Premio Nobel en 1984 (ver capítulo 2). El
Dr. Milstein, nació el 8 de octubre de 1927 (Bahía Blanca, Argentina) y falleció a
comienzos del presente año. Después de obtener el Doctorado en Química en la Uni-
versidad de Buenos Aires (1957), obtuvo el grado de PhD en la Universidad de
Cambridge, Inglaterra, institución en la que trabajaba cuando recibió el máximo pre-
mio científico. Su conferencia (Nobel Lecture, 8 de diciembre, 1984) se tituló “From
the structure of antibodies to the diversification of the immune response”. Dada la
importancia de esta herramienta en el estudio molecular de diversas macromoléculas
y que su aplicación se realiza tanto en ciencias básicas como en clínica, dedicamos un
capítulo del libro a la descripción de los anticuerpos monoclonales (capítulo 44).

Por otra parte, en las personas de Walter Gilbert, Francis Collins y J. Craig
Venter, queremos expresar nuestro reconocimiento a todos los científicos que partici-
paron en uno de los más importantes avances de la biología moderna, nos referimos a
la decodificación del genoma humano. Mientras trabajábamos en la edición de este
libro: Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica, la noticia recorrió el mundo, a
mediados de 2000, primero, y luego a comienzos de 2001. Alrededor de 50 años des-
pués que James Watson y Francis Crick publicaran en Nature (Abril de 1953) la es-
tructura del DNA, dos grupos de investigadores (del Proyecto Genoma Humano y de
una compañía privada), publicaron, en febrero de 2001, en Nature y Science, respec-
tivamente, la información sobre el genoma humano. Describieron que los humanos
tenemos alrededor de 30.000 genes, número significativamente menor de los, aproxi-
madamente, 80.000 que se esperaba. Deseamos que el nuevo conocimiento que se
generará en los próximos años, a partir de este significativo avance científico, sea
utilizado en la búsqueda de terapias para las casi cinco mil enfermedades genéticas
conocidas y en el tratamiento del cáncer.

Adicionalmente, queremos expresar en estas líneas nuestro reconocimiento a los


inmunólogos, ex-académicos de la Universidad de Chile, Dra. Olga Pizarro y Dr. Tulio

31

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Pizzi, por sus contribuciones a la inmunología, en el conocimiento de la inmunogenética
H2, y por su labor en la formación de especialistas en Inmunología Clínica y los apor-
tes en el ámbito de la Enfermedad de Chagas, respectivamente.

El libro Fundamentos de Inmunología (Julio de 1998, 33 capítulos) representó


un aporte significativo a la enseñanza de la Inmunología moderna en Chile. El respal-
do del Comité Editorial de la Editorial de la Universidad de Talca, de los inmunólogos,
profesores de Inmunología y de los alumnos de pre y postgrado nos compromete a
entregar un texto de calidad internacional y que pueda ser utilizado en Chile como
también en otros países de lengua española.

Este texto cuenta con 46 capítulos, estructurados en cinco secciones: En la sec-


ción I, Generalidades sobre inmunidad, entre otros aspectos se incluye el capítulo
“Introducción a la Inmunología: las bases biológicas de la individualidad celular”,
escrito por el Dr. Gustavo Hoecker, destacado Inmunólogo y Premio Nacional de Cien-
cias; además en la sección hay un capítulo dedicado a las células y órganos del siste-
ma inmune. La sección II, Especificidad de la respuesta inmune, trata sobre molécu-
las del sistema inmune, como por ejemplo las inmunoglobulinas, los receptores de
células T, Complejo Principal de Histocompatibilidad y las citoquinas. La sección III,
Mecanismos efectores de la respuesta inmune, principalmente está dedicada al siste-
ma del complemento y a la citotoxicidad mediada por células. La sección IV,
Inmunología clínica, se refiere a las enfermedades que presentan un mecanismo
patogénico de tipo inmune. Finalmente la sección V, Métodos inmunológicos y de
biología molecular, presenta los principios de los métodos inmunoquímicos y de inmu-
nidad celular, y de biología molecular.

Salvo excepciones, los capítulos están escritos por dos o más autores, lo que
garantiza una mayor calidad al contenido. Participan 64 inmunólogos; además de
destacados inmunólogos chilenos participaron siete inmunólogos de universidades ex-
tranjeros (Estados Unidos, Inglaterra, México, Brasil y Argentina), lo cual es una for-
taleza que destacamos.

Por tratarse de un texto docente, con el propósito de facilitar la lectura, en los


capítulos se han numerado los subtítulos, y en cada uno de ellos se ha incluido, al
comienzo, un Índice de capítulo y Resumen; y al final las Lecturas Sugeridas. Para
cerrar el libro se incluye un Glosario que comprende los términos inmunológicos más
usados y un Índice alfabético general de materias.

En los últimos años se han realizado importantes avances en el conocimiento del


Sistema Inmune y en las aplicaciones de la nueva información. Ello justifica que, ac-
tualmente, los Planes de Estudios de las carreras de la salud y biológicas en general,
incluyan Inmunología como asignatura independiente. Siendo este un libro docente,
está dirigido a alumnos de carreras que, en sus Planes de Estudios, tienen esta asigna-
tura: Medicina, Odontología, Medicina Veterinaria, Bioquímica, Química y Farma-

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Sin título-2 32 5/26/06, 10:25 AM


cia, Tecnología Médica, Biotecnología y Licenciatura en Biología, entre otras. Cree-
mos que el libro también será de gran utilidad para alumnos de postgrado y profesio-
nales que se interesen en esta disciplina.

Si bien el texto está escrito en castellano, se usarán algunos términos y siglas en


inglés por lo difundido de su uso, como por ejemplo LT “helper”, TCR, entre otros.

Agradecemos a las personas que colaboraron en la edición del libro; a la correc-


tora de textos, Profesora María Cecilia Tapia Castro, por el interés puesto en esta obra
como también por su excelente trabajo profesional; a la diseñadora gráfica Marcela
Albornoz D. y al BQ Marcos Pérez C., quien realizó las figuras del libro; a la secreta-
ria Haydée Alvarez A., nuestro reconocimiento por su destacada colaboración en el
trabajo de preedición.

Agradecemos a las instituciones que han respaldado nuestro trabajo con su pa-
trocinio: la International Union of Immunology Societies (IUIS) en la persona de la
Prof. Dr. Genevieve Milon, Chairperson IUIS Education Committee; la Asociación
Latinoamericana de Inmunología (ALAI); la Sociedad Chilena de Inmunología
(SOCHIN); y la Sociedad Chilena de Alergia e Inmunología. También agradecemos a
la Universidad Favaloro (Argentina), Universidad de Chile (Facultades de Medicina,
de Ciencias, de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, de Ciencias Veterinarias y Pe-
cuarias), Pontificia Universidad Católica de Chile (Facultad de Ciencias Biológicas),
Universidad Austral de Chile (Facultad de Medicina), Universidad de Valparaíso (Fa-
cultad de Medicina), Universidad de Santiago de Chile (Facultad de Química y Biolo-
gía), Universidad de la Frontera (Facultad de Medicina), Universidad de Antofagasta
(Facultad de Ciencias de la Salud), Universidad de Talca (Facultad de Ciencias de la
Salud), Universidad Mayor (Facultad de Odontología), Universidad de Los Andes (Fa-
cultad de Medicina) e Instituto de Salud Pública de Chile.

Damos las gracias a la Universidad de Talca, en la persona de su Rector, Prof.


Dr. Álvaro Rojas Marín, y a la Editorial de esta institución en la persona del Vicerrector
de Extensión y Comunicaciones, Prof. Dr. Pedro Zamorano Pérez, por el apoyo otor-
gado durante el desarrollo de esta obra.

Finalmente, expresamos nuestro deseo que este libro sea de utilidad e interés para
alumnos y profesionales que quieran conocer algo más sobre las células, moléculas y me-
canismos del sistema inmune, tanto en situaciones de normalidad como en enfermedad.

Dr. Iván Palomo González


Dr. Arturo Ferreira Vigoroux
Dra. Cecilia Sepúlveda Carvajal
Dr. Mario Rosemblatt Silber
Dr. Ulises Vergara Castillo
Editores

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34

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PRÓLOGO

Al calor de las nuevas tecnologías de biología celular y molecular, y de la re-


ciente aparición de la genómica, la proteómica y la bioinformática, la Inmunología
moderna se desarrolla de forma vertiginosa. Se produce un volumen colosal de nuevos
conocimientos, algunos de los cuales echan por tierra nuestros “dogmas” más repeti-
dos, y los nuevos descubrimientos y conceptos sobre cómo opera el sistema inmune se
convierten rápidamente en productos aplicables en la prevención y en el tratamiento
de las enfermedades, gracias a la Biotecnología. Es este el contexto donde se mueve la
enseñanza de la Inmunología de estos tiempos, que debe combinar el estímulo al ins-
tinto de experimentación y el alto rigor académico, con la idea de que es importante
convertir los conocimientos en objetos de impacto real para nuestras sociedades.

Con un extenso contenido formado por cinco secciones y cuarenta y seis capítu-
los, Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica, descolla por su cuidadosa ela-
boración, resultado del trabajo de un grupo importante de inmunólogos. Las generali-
dades de la Inmunología, los aspectos más específicos de la respuesta inmune, la
Inmunología Clínica y algunos de los métodos más empleados para la aplicación de
estos conocimientos, o para su descubrimiento, forman parte de un texto que está lla-
mado a jugar un rol importante en la docencia de esta ciencia.

Sólo me queda felicitar a los autores de este excelente texto y conminar a sus
lectores a enfrentar con esfuerzo y dedicación los nuevos retos que impone el desarro-
llo de la Inmunología en Latinoamérica para experimentadores y clínicos, más ahora
cuando tenemos el honor y el compromiso de organizar el Congreso Mundial de
Inmunología del 2007, cuya sede fue recientemente concedida a Río de Janeiro.

Jorge Victor Gavilondo Cowley, D.Sc.


Presidente de la Asociación Latinoamericana de Inmunología
(ALAI) 2000-2002

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Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

SECCIÓN I
GENERALIDADES SOBRE INMUNIDAD

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Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 1

INTRODUCCIÓN A LA INMUNOLOGÍA: LAS BASES


BIOLÓGICAS DE LA INDIVIDUALIDAD CELULAR

Gustavo Hoecker S.*

* Premio Nacional de Ciencias, 1989.

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El avance sorprendente de la ciencia y la a las inmunoglobulinas de los animales inyectados.
tecnología ha adquirido tal velocidad que, por una Deseo señalar en un paréntesis, que
parte, su último fruto, la biología molecular ha Landsteiner era, y fue hasta su muerte, un
conducido a identificar las moléculas responsables anatomopatólogo que hizo autopsias todos los días
de la herencia como sus productos de traducción, desde las 6 a las 8 de la mañana. De ahí, subía a su
las proteínas, y se están visualizando los caminos modesto laboratorio para leer, hacer experimentos,
complejos por los cuales discurren todas las pensar y describir sus resultados. Ambos, Ehrlich
funciones vitales. y Landsteiner, fueron Premios Nobel y son el
Los seres vivientes desde las bacterias hasta origen de la inmunología humoral clásica y sus
los elefantes, incluido el hombre, se caracterizan extensos descubrimientos acerca del origen y
por una individualidad podría decirse total o sea causas de casi todas las enfermedades infecciosas,
que no existen dos seres exactamente iguales. De y de las aplicaciones a la transfusión sanguínea.
esto se infiere que otra característica mayor de las Landsteiner mismo fue el descubridor de la mayor
especies vivientes es la heterogeneidad. Esta parte de los antígenos mayores de los glóbulos
resulta de la recombinación, tanto de los factores rojos humanos (ABO y Rh).
hereditarios, los genes, como de los factores El continuo y rápido progreso de la
ambientales que comparten los miembros de una inmunología demostró que unas células
misma especie. insignificantes, pero muy abundantes en el
En el segundo capítulo de este libro, que organismo (aproximadamente un décimo del peso
detalla el desarrollo histórico de nuestra disciplina, total), los linfocitos, eran responsables de la
verán que el avance del conocimiento ha sido el producción de las inmunoglobulinas: los linfocitos
resultado de la práctica de la crianza de plantas y B. Esta era una clara indicación de una extensa
de la observación de las propiedades y heterogeneidad celular, inaparente a la inspección
enfermedades en todos los seres vivos, algunos microscópica. Existía, también, una inmunidad
de los cuales morían y otros se recuperaban y celular.
sobrevivían. Se dedujo que la producción y la La simple observación permitió ver que al
resistencia a las enfermedades, dependían de la comienzo de las infecciones y en los primeros
individualidad de cada miembro del grupo cinco días, los organismos se defendían de los
biológico, lo que llevó a la selección artificial de agentes infecciosos y parasitarios. Existía una
las especies domésticas. Independientemente de inmunidad natural. Los elementos celulares
ésta, la selección natural, al azar, trabaja sobre centrales en esta inmunidad eran los macrófagos
todos los seres vivientes. y a nivel humoral, una serie de diferentes
La inmunología en su estado presente, podría substancias que eran activadas o existían
decirse que empezó en 1900 y ha crecido naturalmente en el suero (alexinas, substancia A,
paralelamente con el redescubrimiento y progreso complemento, etc.). Debemos a Metchnikoff, un
de la genética. Los hechos fundamentales fueron biólogo general, el descubrimiento de esta fracción
el descubrimiento en el suero de las inmu- celular fundamental de la inmunidad tanto natural
noglobulinas, que reaccionaban específicamente como inducida.
con ciertas células, bacterias, hongos o parásitos Establecida en los primeros 50 años del siglo
y sus productos de secreción. El centro de este pasado las bases de la inmunidad humoral y su
progreso fue el desarrollo de la teoría química de estructuración genética, se expandió una cantidad
los receptores y de sus agentes específicos que enorme de investigaciones acerca de la
debemos a Ehrlich en lo químico, y a Carl heterogeneidad de los linfocitos. Primero se
Landsteiner, primero, por su descubrimiento de los descubrió que la respuesta humoral era el resultado
grupos sanguíneos humanos (1900) y segundo, por de la multiplicación clonal de un escaso número
su demostración de la inmunogenicidad de de linfocitos (Jerne, 1952) portadores de
substancias químicas artificiales que, ligadas a receptores específicos para una porción menor,
proteínas naturales, reaccionaban específicamente aproximadamente 10 a 12 aminoácidos, de la

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macromolécula inmunogénica, el epítopo. La más débiles - 20 o más días. Peter Gorer en
unión de ambos transmitía una señal que llegaba Inglaterra e investigadores chilenos establecieron
al núcleo. Éste, a su vez, traducía la señal y sus que los genes mayores de histocompatibilidad
productos estimulaban a unos pocos clones de determinaban, un “complejo” de antígenos que se
linfocitos a multiplicarse y a diferenciarse. La heredaban estrechamente ligados (ver capítulo 8)
respuesta total puede ser la secreción de y se expresaban en prácticamente todas las células
inmunoglobulinas específicas, la conversión del del organismo (Gorer et al, 1955; Hoecker et al,
linfocito neutro en un linfocito citotóxico para los 1954 ) y que había, por lo menos, dos clases
agentes infectantes o uno de colaboración y diferentes, 1 y 2, de este sistema que se expresaban
estimulación del complejo inmunitario. diferencialmente en los linfocitos de clase 1, en
El desarrollo de la inmunología, como los linfocitos citotóxicos y los linfocitos B, y de
dependiente de los genes y éstos, a su vez, agentes clase 2 en los linfocitos originados en el timo,
inmutables, salvo excepcionales y poco frecuentes linfocitos T. Estas eran las células responsables
mutaciones, explicaban la individualidad como de la inmunidad adquirida. El sistema
resultado de las recombinaciones de los genes en inmunológico, como todas las funciones vitales,
el curso de las generaciones, pero no existía una es de una eficacia, economía y adaptabilidad
explicación para la inmensa cantidad de increíble frente a las variantes inmunogénicas
inmunoglobulinas específicas. No había una ambientales.
interpretación para esta extensa heterogeneidad Las investigaciones siguientes cuyos detalles
adaptativa del individuo que se manifestaba sólo pueden verse en los diversos capítulos de este libro,
en los linfocitos, y que tenía una base genética analizan las interrelaciones celulares y humorales
desde que se trasmitía a todos los miembros de un de la respuesta inmune, en especial, los aspectos
mismo clon y a sus productos. El único problema moleculares de estos procesos. El estado actual
comparable era el sistema nervioso. La clave de la investigación inmunológica se centra en
siguió al descubrimiento por Barbara McClintock especial en los caminos moleculares que siguen,
y Jacob y Monod (1958) de los “genes saltarines”, por una parte los factores inmunogénicos y por
o sea, de los fenómenos de recombinación genética otra la respuesta inmune específica y algunos
en células somáticas. factores estructurales y metabólicos que regulan
Susumi Tonegawa en 1976 descubrió que la respuesta inmune.
los genes característicos de las inmunoglobulinas, Scott & Rawson (Sc.Am., June, 2000 54- 64)
v por variable, j por unión (joint en inglés), y c señalan que las células de nuestro cuerpo tienen
por constante (ver capítulo 6) eran totalmente una sorprendente red de comunicaciones internas
uniformes en el embrión, inmunológicamente y que comprender estos circuitos ayuda a los
inmaduro y en cambio, en el adulto, inmu- científicos a desarrollar nuevas terapias para
nológicamente maduro, eran extremadamente muchos y serios desórdenes.
heterogéneos. De esto concluyó que la hetero- La biología molecular, en especial la genética,
geneidad era el resultado de la recombinación establecieron que la estimulación específica de los
somática de los genes para las regiones v, j y c. A genes nucleares se traduciría en proteínas
esta heterogeneidad contribuye también una alta específicas en el citoplasma. Éstas eran con
tasa de mutaciones espontáneas en este sistema. frecuencia, enzimas hidrolíticas y el citoplasma
Podríamos decir que la inmunología clásica parecía un saco de enzimas y otras moléculas. Un
termina con el descubrimiento de las bases de la sistema así no permitiría trasmitir las proteínas
especificidad de los trasplantes de tejidos. Era un inducidas. Y es característico de los seres vivientes
hecho conocido en los mamíferos que sólo los que los sistemas de comunicación intracelular, a
autotrasplantes se establecen: los alotrasplantes diferencia de las comunicaciones extracelulares,
- entre individuos de la misma especie - son se transmiten sin ningún error. Cuando se
siempre rechazados. Con mayor razón, los producen errores -mutaciones- las funciones
trasplantes entre diferentes especies - los metabólicas y orgánicas funcionan mal, o los seres
heterotrasplantes, no prenden: o sea, que los mutantes, mueren. De lo cual se deduce que en el
organismos reconocen “lo propio” y lo distinguen interior de las células existen caminos exactos
de lo ajeno. Debemos a George Snell el entre las moléculas mensajeras vgr. un antígeno,
descubrimiento de las bases de este fenómeno: los y los receptores específicos para ellas. A esta unión
genes de histocompatibilidad y, en especial, una se sigue un complejo grupo de señales moleculares
familia de ellos, los genes mayores (MHC), HLA que llega hasta el núcleo. En éste, un gen específico
y H.2 en el hombre y el ratón, respectivamente. se activa y su acción se traduce en la producción
Las diferencias entre dador y receptor entre éstos y secreción de la proteína que él determina.
provoca el rechazo del injerto en no más de 10 a Para que esto ocurra, los mensajeros cruzan
12 días, los otros genes H, determinan rechazos cada una de las estructuras celulares protegidas

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de la destrucción enzimática por su unión con
moléculas de algunos sistemas que no son
hidrolizables. Entre éstos y muy importantes, son
los antígenos mayores de histocompatibilidad
(MHC). Se sabe que las moléculas MHC de clase
1 pueden asociarse a receptores de superficie para
diversas hormonas -beta-adrenérgicas, insulina,
interleuquina -2, endorfinas y otras. Ligado a este
problema está el hecho que los linfocitos
citotóxicos sólo se activan si son portadores en la
superficie de antígenos de clase 1. Los antígenos
solubles a su vez, pueden penetrar al citoplasma
unidos a antígenos MHC de clase 2 de aquí
vuelven a la superficie celular donde las
inmunoglobulinas circulantes y el complemento
los eliminan a través de los macrófagos.
Este no es solamente un caso especial para el
sistema inmunológico sino que un proceso
continuo para todas las funciones celulares y puede
decirse que todos los sistemas están inter-
conectados incluido el sistema nervioso.
Como último comentario, creo poder predecir
que en este siglo y en base a información
inmunogenética y técnicas moleculares ya en uso,
cambiará substancialmente la farmacología: se
fabricará vacunas de DNA o RNA, se inoculará
genes para la producción de anticuerpos y células
específicas, adecuadas para la mayor parte de las
enfermedades infecciosas, bacterianas,
parasitarias, virales y autoinmunes. Como
resultado, el hombre vivirá unos cuantos años más
y aparecerán otras enfermedades o disfunciones
todavía no conocidas o estudiadas. Tendrán buena
tarea los jóvenes inmunólogos clínicos.

LECTURAS SUGERIDAS

Hoecker, G., Counce Sh., Smith, P., The antigens


determined by the H-2 locus. A rhesus-like
system in the mouse, Proceedings of the National
Academy of Sciences, 1954; 40: 1040 - 1051.

Monod, J., Le hasard et la necessité. Essai sur


la philosophie naturelle de la biologie moderne,
Editions du Seuil, Paris, 1975.

Scott J. D., Pawson R., “Cell communication: the


inside story”, Scientific American, 2000, pp. 54 -
61.

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Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 2

HISTORIA DE LA INMUNOLOGÍA

Iván Palomo G. y Arturo Ferreira V.

1. Introducción
2. Dos siglos de inmunología
2.1. Inmunidad
2.2. Serología
2.3. Inmunoquímica
2.4. Inmunobiología
3. Premios Nobel

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RESUMEN

La Inmunología tiene una historia de aproximadamente 200 años, los que se pueden separar
en dos períodos: 1796-1958 y 1959 a la fecha. Este último período se ha caracterizado por impor-
tantes avances en el conocimiento del sistema inmune a nivel molecular.
Veintitrés científicos han obtenido quince Premios Nobel por sus aportes en el campo de la
Inmunología: Boehring, Koch, Erlich, Metchnikoff, Richet, Bordet, Lansteiner, Theiler, Bovet,
Burnet, Medawar, Edelman, Porter, Yalow, Benacerraf, Dousset, Snell, Jerne, Koller, Milstein,
Tonegawa, Doherty y Zinkernagel.
En este capítulo se menciona los avances más importantes en inmunidad, serología,
inmunoquímica e inmunobiología, realizados durante los dos siglos de historia de esta ciencia.

1. INTRODUCCIÓN Metchnikoff que investigó la fagocitosis, Koch que


hizo aportes fundamentales sobre hipersensibili-
El origen de la inmunología se ha relaciona- dad y Landsteiner que demostró la existencia de
do con el descubrimiento de la vacuna contra la varios sistemas antigénicos en los glóbulos rojos
viruela, hace aproximadamente 200 años (1796), humanos.
aporte realizado por Edward Jenner, un médico Período 1959 a la fecha. Este período, se
rural inglés. Jenner, observó que las personas que inicia con los hallazgos sobre estructura de los
contraían la “vacuna” (erupción viral leve que anticuerpos realizados en 1959 por Porter y
afectaba al ganado y que se transmitía a las orde- Edelman (Premio Nobel en 1972; ver punto 3).
ñadoras), quedaban protegidas contra la viruela. Estas cuatro décadas, llamado período de la
Esta observación le llevó a transferir pus de una Inmunología Molecular, se ha caracterizado por
lesión de vacuna de una ordeñadora, al brazo de la velocidad en la generación de nuevo conoci-
un niño, al cual seis semanas más tarde volvió a miento y tecnología. Durante estos años se han
inocular, pero esta vez con pus tomado de una identificado las moléculas que son propias del sis-
pústula de viruela y el niño no enfermó. tema inmune, y de los genes que las codifican.
En dos siglos de historia de la inmunología Entre los descubrimientos más relevantes de este
se han realizado importantes avances científicos período se pueden citar, la obtención de
en áreas como la serología, inmunidad celular, anticuerpos monoclonales, el conocimiento de la
inmunología molecular e inmunogenética. Por otra genética de las inmunoglobulinas, la descripción
parte, se han postulado y demostrado mecanismos de los genes del Complejo Principal de
inmunológicos que explican la patogenia de en- Histocompatibilidad (MHC). Además, en este pe-
fermedades como las alergias, las inmu- ríodo se realizó el aislamiento de las moléculas y
nodeficiencias, las gammapatías monoclonales y genes de los receptores de células T, de citoquinas
las enfermedades autoinmunes. Además, se han y de moléculas de adhesión celular.
desarrollado áreas como son la inmunofar- Adicionalmente se han conocido importantes as-
macología, la inmunología del cáncer y la pectos moleculares de la activación linfocitaria.
inmunología de trasplante. Por otra parte, estos conocimientos de inmunología
Los doscientos años de historia de la básica han permitido importantes avances en el
inmunología pueden ser divididos en dos perío- conocimiento de la patogenia y tratamiento de di-
dos: 1796-1958 y 1959 a la fecha. ferentes enfermedades inmunes.
Período 1796-1958. Al menos treinta y cin- En este capítulo sólo se hará una relación
co destacados investigadores hicieron contribucio- de los principales investigadores en inmunología
nes seminales en este período. En 1980, casi un indicando una breve descripción de sus contribu-
siglo después que Jenner inmunizara contra la vi- ciones.
ruela, Louis Pasteur realizó importantes investi-
gaciones en relación a la atenuación de vacunas.
Otros investigadores de este período fueron

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2. DOS SIGLOS DE INMUNOLOGÍA KRAUSS, Rudolf. En 1987 observó que los
filtrados de cultivos bacterianos o los extractos de
A continuación se describen, brevemente, los bacterias lisadas, precipitaban con antisueros
aportes realizados por alrededor de setenta cientí- bacterianos.
ficos durante los doscientos años de historia de la BORDET, Jules. Obtuvo el Premio Nobel en
inmunología. Han sido separados en cuatro áreas 1919 (ver punto 3).
(inmunidad, serología, inmunoquímica e VON WASSERMANN, August. En 1906
inmunobiología) y ordenados cronológicamente desarrolló la prueba de fijación del complemento
en cada una de ellas. para el diagnóstico de la sífilis.
En este punto los Premios Nobel sólo serán COONS, Albert. En 1942 desarrolló una téc-
nombrados ya que su aporte se describe en el punto nica de marcación de los anticuerpos basada en la
3. Algunos de ellos son citados en más de un área. unión covalente del isotiocianato de fluoresceína.
COOMBS, Robin. En 1945 desarrolló la
2.1. Inmunidad prueba de antiglobulinas.
OUCHTERLONY, Örjan; OUDIN, Jacques
JENNER, Edward. En 1796 realizó la inmu- y ELECK, Stephen. Entre 1946 y 1948 desarro-
nización contra la viruela. llaron pruebas de inmunodifusión.
PASTEUR, Louis. En 1880 describió lo que GRABAR, Pierre y WILLIAMS, Curtis. En
representó la primera vacuna atenuada. Observó 1953 modificando la prueba de inmunodifusión
que los cultivos viejos del bacilo del cólera, al ser en gel, desarrollaron la técnica de inmu-
inoculados en aves no provocaban la enferme- noelectroforesis.
dad. Por otra parte, describió que la incubación de YALOW, Rosalyn. Obtuvo el Premio Nobel
Bacillus anthracis a 42°C, hacía perder la viru- en 1977 (ver punto 3).
lencia del bacilo. Posteriormente, en 1885, desa-
rrolló una vacuna contra la rabia, atenuando el 2.3. Inmunoquímica
virus causante de la enfermedad.
METCHNIKOFF, Elie. Obtuvo el Premio EHRLICH, Paul. Obtuvo el Premio Nobel en
Nobel en 1908 (ver punto 3). 1908 (ver punto 3).
NUTTALL, George. En 1888 demostró que OBERMAYER, Friedrich y PICK, Ernst. En
la sangre desfibrinada era bactericida por sí mis- 1906 observaron que la nitrificación o yodación de
ma y sugirió que en dicho fenómeno participaría las proteínas, modifican su especificidad serológica.
una sustancia termolábil presente en el suero. ARRHENIUS, Svante. En 1907 acuñó el tér-
VON BEHRING, Emil. Obtuvo el Premio mino inmunoquímica. La primera contribución
Nobel en 1901 (ver punto 3). importante, en esta rama de la inmunología, fue el
EHRLICH Paul. Obtuvo el Premio Nobel en estudio de los haptenos.
1908 (ver punto 3). LANDSTEINER, Karl. Obtuvo el Premio
WRIGTH, Almroth y DOUGLASS, Stewart. Nobel en 1930 (ver punto 3).
En 1903 demostraron que ciertas sustancias pre- MARRACK, John. En 1934 propuso un nue-
sentes en el suero, que denominaron opsoninas, vo modelo de reacción antígeno-anticuerpo, ba-
favorecían la fagocitosis de bacterias. sado en la polivalencia, es decir la presencia de
RAMON, Gastón. En 1923 observó que al varios sitios de combinación, de cada uno de ellos.
tratar las toxinas con formaldehido, éstas perdían HEIDELBERGER, Michael y KENDALL,
sus efectos nocivos y conservaban la actividad F.E. En 1935, diseñaron una técnica de precipita-
antigénica. Los toxoides resultantes comenzaron ción cuantitativa que permitió expresar la canti-
a usarse como vacunas. dad de anticuerpos en mg de proteína por ml, en
THEILER, Max. Obtuvo el Premio Nobel lugar de usar el método de titulación.
en 1951 (ver punto 3). KABAT, Elvin y TISELIUS, Arne. En 1938
ISAACS, Alick y LINDENMANN, Jean. En demostraron que los anticuerpos están en la frac-
1957 describieron el interferón. ción gamma-globulina del suero.
PORTER, Rodney y EDELMAN, Gerald.
2.2. Serología Obtuvieron el Premio Nobel en 1972 (ver punto 3).

GRÜBER, Max y DURHAM, Herbert. En 2.4. Inmunobiología


1896 demostraron la reacción de aglutinación del
Vibrio cholerae y del bacilo de la tifoidea por KOCH, Robert. Obtuvo el Premio Nobel en
antisueros específicos. 1905 (ver punto 3).
WIDAL, Georges. En 1986 desarrolló la RICHET, Charles. Obtuvo el Premio Nobel
prueba de serodiagnóstico para fiebre tifoidea. en 1913 (ver punto 3).

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LANDSTEINER, Karl. Obtuvo el Premio 1901, Von Behring
Nobel en 1930 (ver punto 3). Emil Von Behring (1854-1917) recibió el
VON PIRQUET, Clemens y SCHICK, Bela. primer Premio Nobel en Medicina. Estudió en el
En 1905 estudiaron la Enfermedad del suero. Instituto Koch en Berlín. Entre 1890 y 1892, jun-
Pirquet realizó varios aportes sobre la alergia que to a sus colaboradores, demostró que la inmuni-
siguen siendo válidos. dad contra la difteria y el tétano se basaba en anti-
EHRLICH, Paul. Obtuvo el premio Nobel en toxinas y demostró que la administración pasiva
1908. de sueros antitoxina diftérica y antitoxina tetánica,
PRAUSNITZ, Carl y KÜSTNER, Heinz. En respectivamente, podían curar estas enfermeda-
1921 publicaron sus observaciones sobre la des. Creó así una estrategia terapéutica que sería
reagina, una sustancia de tipo anticuerpo presente usada más tarde en otras patologías.
en el suero y asociada con procesos alérgicos. Hoy
se acepta que la reagina corresponde a la IgE. 1905, Koch
HAUROWITZ, Félix. En 1930 formuló la Robert Koch (1843-1910), médico que ini-
teoría del molde o plantilla para la formación de cialmente investigó sobre el Bacillus anthracis en
anticuerpos. un pequeño pueblo de Alemania y luego trabajó
BOVET, Daniel. Obtuvo el Premio Nobel en en el Instituto Koch en Berlín. Hizo contribucio-
1957 (ver punto 3). nes en metodología de cultivo y aislamiento
BURNET, Macfarlane y MEDAWAR, Peter. bacteriano, y publicó los famosos postulados de
Obtuvieron el Premio Nobel en 1960 (ver punto 3). Koch para probar la etiología. Hizo aportes en
WITEBSKY, Ernest. En 1956 estableció los varias enfermedades pero fueron sus aportes en
criterios para demostrar la existencia de una en- relación a tuberculosis: descripción del
fermedad autoinmune. Micobacterium tuberculosis y la reacción de
SNELL, George; DAUSSET, Jean y tuberculina (fenómeno de hipersensibilidad retar-
BENACERRAF, Baruj. Obtuvieron el Premio dada), los que le hicieron merecedor del Premio
Nobel en 1980 (ver punto 3). Nobel.
MILSTEIN, César; KÖHLER, George y
JERNE, Nils. Obtuvieron el Premio Nobel en 1984 1908, Metchnikoff y Ehrlich
(ver punto 3). Elie Metchnikoff (1845-1916) nació en Ru-
TONEGAWA, Susumu. Obtuvo el Premio sia y estudió zoología. En 1884, trabajando en un
Nobel en 1987 (ver punto 3). laboratorio de biología marina en Italia, realizó
DOHERTY, Peter y ZINKERNAGEL, Rolf. las observaciones iniciales sobre células
Obtuvieron el Premio Nobel en 1996 (ver punto 3). fagocíticas de estrella de mar, que le permitieron
JANEWAY, Charles; MEDZHITOV, Rusian desarrollar la teoría de inmunidad celular
y PRESTON-HURLBURT, Paula. En 1997 (fagocitosis; ver capítulos 3 y 4). Después siguió
(Nature, 388:394-397) comunicaron la existencia investigando sobre fagocitosis en el Instituto
en humanos de la proteína Toll, homóloga a la Pasteur en París.
descrita en Drosophila y que induce respuesta in- Paul Ehrlich (1854-1916), nació en Alema-
mune natural y adquirida. Se trata de una proteína nia y estudió Medicina. Realizó aportes en las
de transmembrana que presenta un dominio áreas de inmunidad, serología e inmunobiología.
extracelular rico en leucina y otro citoplasmático Ehrlich desarrolló varias tinciones citoquímicas
homólogo al que presenta el receptor de en tejidos; desarrolló las tinciones más usadas
interleuquina 1 (IL-1R). Ambas proteínas en hematología para teñir las células sanguíneas.
transducen señales a través de NF-kB. Este ha- En 1891, siendo asistente de Koch, comenzó a
llazgo ha significado el primer ejemplo de una realizar estudios inmunológicos. En 1897 hace
conexión a nivel molecular entre el sistema inmu- su primera contribución a la inmunología des-
ne innato y adaptativo. cribiendo un método para estandarizar la pre-
paración de toxina y anti-toxina diftérica.
3. PREMIOS NOBEL Ehrlich hizo contribuciones teóricas sobre la
formación de anticuerpos; postuló la hipótesis
Entre 1901 y 1996 veintitrés científicos han de las cadenas laterales. También planteó algu-
obtenido el Premio Nobel por sus aportes a la nos mecanismos en la patogenia de hemólisis
inmunología y temas afines (tabla 2-1). inmune. Más adelante hizo importantes aportes
A continuación se indican algunos anteceden- en el tratamiento de tripanosomiasis y sífilis.
tes sobre los Premios Nobel otorgados a científi-
cos que han hecho aportes significativos en
Inmunología:

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Tabla 2-1. Premios Nobel por investigaciones en Inmunología

Año Investigador Aporte

1901 Emil von Behring Terapéutica con antisueros


1905 Robert Koch Tuberculosis
1908 Paul Ehrlich Teorías sobre inmunidad
Elie Metchnikoff Fagocitosis
1913 Charles Richet Mecanismo de la Anafilaxia
1919 Jules Bordet Acción bactericida del Complemento
1930 Karl Landsteiner Grupos sanguíneos humanos
1951 Max Theiler Vacuna contra la Fiebre amarilla
1957 Daniel Bovet Antihistamínicos
1960 Macfarlane Burnet y Tolerancia inmunológica
Peter Medawar
1972 Gerald Edelman y Estructura química de
Rodney Porter las inmunoglobulinas
1977 Rosalyn Yalow Radioinmunoanálisis
1980 Baruj Benacerraf, Inmunogenética e Histocompatibilidad
Jean Dausset y
George Snell
1984 Niels Jerne Teoría selectiva
Red idiotipo/anti-idiotipo
Georges Koller y Tecnología del hibridoma
César Milstein
1987 Susumu Tonegawa Genética de las inmunoglobulinas
1996 Peter Doherty y Restricción genética de la respuesta inmune
Rolf Zinkernagel

1913, Richet poliomielitis se podía producir en primates no


Charles Richet (1850-1935). Nació en París, humanos y uno de los primeros en hacer la misma
Francia y estudió Medicina. Interesado en la fisio- observación en sífilis. Por otra parte, contribuyó
logía estudió el efecto del veneno de invertebrados a entender las bases químicas de las interacciones
marinos sobre mamíferos. Junto a Paul Portier des- antígeno-anticuerpo.
cribió la Anafilaxia (ver capítulos 21 y 22). Así
mostró que los mecanismos protectores de la in- 1951, Theiler
munidad también podrían causar enfermedad. Max Theiler (1899-1972), nació en Sudáfrica,
estudió Medicina en Inglaterra y luego viajó a Es-
1919, Bordet tados Unidos. Demostró que la Fiebre amarilla era
Jules Bordet (1870-1960) fue un médico na- causada por un virus filtrable; luego obtuvo virus
cido en Bélgica. Siendo joven fue a estudiar con atenuados y logró inmunizar contra esta infec-
Metchnikoff en el Instituto Pasteur en París. Hace ción. Sus estudios permitieron obtener la actual
importantes contribuciones al entendimiento del vacuna contra la Fiebre amarilla.
mecanismo bactericida mediado por complemen-
to (ver capítulo 18). En 1899 describe el fenóme- 1957, Bovet .
no de hemólisis específica. Luego, junto a Octave Daniel Bovet (1907- ), fisiólogo y farmacólo-
Gengou, describe el fenómeno de fijación de com- go. Trabajó con Emile Roux en el Instituto Pasteur
plemento y sus posibilidades diagnósticas. (París) en la respuesta del sistema nervioso autó-
nomo a varios productos químicos. Se interesó en
1930, Landsteiner sustancias que pudieran oponerse a la acción de la
Karl Landsteiner (1868-1943), médico de histamina y desde allí surgieron drogas
Viena. En 1901, estudiando anticuerpos antihistamínicas para el tratamiento de alergias
antieritrocitarios identificó el sistema antigénico (Asma y Fiebre del heno) (ver capítulos 21 y 22).
ABO en los glóbulos rojos (ver capítulos 4 y 26).
Posteriormente, en 1926, con Philip Levine des- 1960, Burnet y Medawar
cribe el sistema MNP y en 1940 con Alexander Macfarlane Burnet (1899-1985), médico aus-
Wiener describe el sistema Rh. En otro orden, traliano. Alrededor de 1950 Burnet junto con
Landsteiner fue el primero en demostrar que la proponer una teoría sobre la formación de

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anticuerpos (teoría de la selección clonal), postu- detección de diferentes antígenos en el orden de
ló que la respuesta inmune se desarrolla tardía- los nanogramos o picogramos ( ver capítulo 40).
mente durante la vida embrionaria e involucra un
sistema de reconocimiento de lo propio y lo ex- 1980, Benacerraf, Dausset y Snell
traño. En otras palabras planteó que el autorre- Se les otorgó el Premio Nobel a Benacerraf,
conocimiento (tolerancia a los antígenos propios) Dausset y Snell por sus trabajos en moléculas
sucede en la vida neonatal por contacto de las cé- genéticamente determinadas en la superficie ce-
lulas formadoras de anticuerpos con nuevos lular y que regulan las reacciones inmunológicas.
antígenos; cuando el feto sintetiza estas células George Snell (1903-1996) a mediados de la
por primera vez. década del cuarenta desarrolló cepas congénicas
Peter Medawar (1915-1987), inicialmente se de ratones, las que sólo se diferencian en un locus
interesó en la reparación de tejidos y problemas génico. Junto con Peter Gorer, comprobaron que
asociados a los trasplantes. Algunos años después los genes controlan la síntesis del antígeno II, de-
comprobó la teoría postulada por Burnet en ex- nominado posteriormente H-2; hoy conocido
perimentos realizados en ratones. como Complejo Principal de Histocompatibilidad,
clase II (MHC-II) (ver capítulo 8). Además de-
1972, Porter y Edelman mostraron que de estos antígenos depende el éxi-
Rodney Porter (1917-1985) de la Universi- to o el fracaso de los injertos entre ratones
dad de Oxford y Gerald Edelman (1929- ) de la congénicos. En los experimentos que condujeron
Universidad Rockefeller. Recibieron el Premio a estos fundamentales hallazgos participó Gusta-
Nobel por sus trabajos en la estructura química de vo Hoecker S, profesor e inmunólogo chileno, y
los anticuerpos (inmunoglobulinas). Ambos tra- Premio Nacional de Ciencias 1989.
bajaron con la misma inmunoglobulina, hoy co- Jean Dausset (1916- ), francés, descubrió que
nocida como IgG, pero cada investigador la trató los pacientes que reciben múltiples transfusiones
con diferentes métodos analíticos. sanguíneas producen isoanticuerpos contra los
Porter empleó diferentes enzimas; en 1958, leucocitos del dador. Dichos anticuerpos reaccio-
a partir de la molécula IgG purificada, utilizando nan con los antígenos de superficie de los
papaína obtuvo dos fragmentos Fab (fragmento leucocitos del dador (HLA, «human leukocyte
que une antígeno) iguales y un fragmento Fc (frag- antigen») (ver capítulo 8) o con el mismo antígeno
mento cristalizable) (ver capítulo 6). en los leucocitos de otras personas. Poco después
Edelman, a partir de IgG de Mieloma Múlti- se relacionó la producción de una respuesta in-
ple (ver capítulo 27) y utilizando urea (reductor), mune a los HLA con los rechazos de injertos (ver
obtuvo la separación en cadenas pesadas (H) y li- capítulo 38).
vianas (L) (ver capítulo 6). También demostró que Baruj Benacerraf (1920- ) y colaboradores
diferentes anticuerpos de cerdos guinea tenían dis- demostraron que otros genes presentes en el locus
tinta movilidad electroforética. del Complejo Principal de Histocompatibilidad,
Luego Porter y colaboradores demostraron en la región I, también participan en el control de
que cada molécula de inmunoglobulina estaba for- la respuesta inmune.
mada por dos cadenas H y dos cadenas L.
Posteriormente Porter, Edelman y otros in- 1984, Milstein, Köhler y Jerne
vestigadores realizaron la primera secuenciación César Milstein (1927- ) y George Köhler
aminoacídica parcial de las cadenas de los (1946-1995) en la década del setenta desarrolla-
anticuerpos. En 1969 Edelman y colaboradores ron la metodología para obtener anticuerpos
realizaron la secuenciación aminoacídica completa monoclonales (ver capítulo 44). Henry Kunkel y
de la molécula de inmunoglobulina, lo que ayudó colaboradores (1955) mostraron que los mielomas,
a definir sus diferentes dominios funcionales. tumores de células plasmáticas (ver capítulo 27)
producían anticuerpos monoclonales; en 1962
1977, Yalow Michael Potter mostró que dicho tumor podía ser
A comienzos de la década del 50, Rosalyn inducido en ratones y otros mostraron que podían
Yalow (1921- ) junto a su colaborador Solomon crecer indefinidamente en cultivo.
Berson, estudiaron las causas de la resistencia a la En 1974 Köhler inició un postdoctorado en
insulina en la diabetes. Demostraron la formación el laboratorio de Milstein en Cambridge; ambos
de anticuerpos anti-insulina; el complejo antígeno- emprendieron la tarea de inmortalizar células
anticuerpo lo pudieron medir desarrollando un formadoras de anticuerpo por fusión con células
método inmunorradiométrico de competencia en de mieloma, con el propósito de estudiar las ba-
que marcaban con un isótopo el antígeno. Este ses genéticas de la diversidad de los anticuerpos.
método ha servido de base a las técnicas de Para ello usaron una línea celular mutante de
radioinmunoanálisis actualmente usadas para la mieloma deficiente en la enzima hipoxantina

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fosforibosiltransferasa; células que mueren en un venía otro segmento génico adicional a V y J que
medio que contiene hipoxantina, aminoptirina y denominaron D (“diversity”, diversidad) (ver ca-
timidina (medio HAT), pero las células híbridas pítulo 6). Los trabajos de Tonegawa han tenido
(hibridomas) sobreviven, pudiendo ser seleccio- repercusión en el conocimiento de la variabilidad
nadas. Éstas sintetizan anticuerpos con una única genética de los receptores de linfocitos T (TCR).
especificidad (anticuerpos monoclonales) en for-
ma indefinida. Los anticuerpos monoclonales han 1996, Doherty y Zinkernagel
sido una poderosa herramienta en el estudio A Peter Doherty (1940- ) y Rolf Zinkernagel
molecular de diversas macromoléculas y su apli- (1944- ) se les otorgó el Premio Nobel por la de-
cación se realiza tanto en ciencias básicas como mostración de la restricción MHC en el reconoci-
en clínica. miento de antígenos virales sobre células infecta-
Nils Jerne (1912-1994) realizó varias contri- das, por parte de los linfocitos T citotóxicos. En
buciones a la inmunología. Principalmente hizo la década del setenta Doherty y Zinkernagel reali-
aportes teóricos. En 1955 fue el primer científico zaron experimentos en un sistema in vitro que
moderno que planteó la teoría selectiva para la permitía medir la capacidad de células efectoras
formación de los anticuerpos, en la cual el antígeno de destruir células blanco infectadas por virus;
selecciona el anticuerpo a partir de un repertorio utilizaron el virus de la coriomeningitis linfocítica
preformado. En 1971 postula una hipótesis sobre (LCMV) que infecta ratones. Cuando los dos ti-
el desarrollo de especificidades del repertorio de pos celulares (linfocito T citotóxico y célula blan-
células T; dice que el principal estímulo para que co) pertenecían a la misma cepa de ratón, la muerte
los linfocitos se dividan en el timo son los fue eficiente. En cambio cuando ambas células
antígenos MHC. En 1974 desarrolla la teoría más pertenecían a ratones con diferente haplotipo
importante; predijo que cada molécula de anticuer- MHC, la destrucción de las células blanco gene-
po tiene una región inmunogénica específica lla- ralmente no ocurre. Ellos concluyeron que la cé-
mada marcador idiotípico, que estimularía la for- lula efectora debía reconocer dos señales sobre la
mación de un segundo anticuerpo que reacciona- célula infectada, una derivada del virus y otra de
ría con ese marcador y así sucesivamente (red las moléculas MHC presentes en la célula blanco
idiotipo-anti-idiotipo), pudiendo representar uno (ver capítulo 9)
de los principales mecanismos reguladores de la
respuesta inmune (ver capítulo 14).
LECTURAS SUGERIDAS
1987, Tonegawa
Susumu Tonegawa (1939- ) recibió el Pre- Barret, J., Inmunología médica, Capítulo 1, Quin-
mio Nobel por sus trabajos en biología molecular ta edición, Ed. Interamericana, México, 1990.
de los genes de inmunoglobulinas, mostrando
cómo se genera la diversidad de las inmu- Hoecker, G., “Los Complejos Mayores de
noglobulinas. Histocompatibilidad”, Universum, año 9:61-72,
En 1965 Dreyer y Bennett propusieron que 1994.
podría ser necesario menos DNA para codificar
las diferentes especificidades de las Silverstein, A., A history of Immunology,
inmunoglobulinas si múltiples genes para regio- Appendix B and appendix C, Ed. Academic Press
nes variables (V) se combinaban con un único gen Inc., California, 1988.
para región constante (C) (ver capítulo 6).
En 1976 Tonegawa y Hozumi confirmaron Silverstein, A., “The history of Inmunology” en
la hipótesis de Dreyer y Bannett; demostraron que Fundamental Immunology, Chapter 2, Ed. Paul
en el DNA embrionario los segmentos génicos V W., Leppincott-Raven, Publisher, 1999.
y C estaban separados. Luego Tonegawa, Gilbert
y Maxam mostraron, en diferentes células, que Stites, D. and Terr, A., Basic and Clinical
estos dos genes estaban aún separados por DNA Inmunology, Chapter 1, Seventh edition, Ed.
no codificante (intron). Más adelante, Tonegawa Appleton & Lange, USA, 1991.
y Philip Leder, encontraron que la secuencia
amininoacídica de la región V de la cadena L te-
nía más aminoácidos que los codificados por los
segmentos génicos V. Tonegawa y colaboradores
pronto encontraron el segmento restante que lla-
maron J (“joining”, unión). Posteriormente
Tonegawa y Leroy Hood describieron que en el
caso de la región variable de las cadenas H, inter-

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Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 3

CÉLULAS Y ÓRGANOS DEL SISTEMA INMUNE

Iván Palomo G., Jaime Pereira G. y Cecilia Koenig S.

1. Introducción
2. Células del sistema inmune
2.1. Hematopoyesis
2.2. Linfocitos
2.3. Sistema fagocítico mononuclear
2.3.1. Monocitos
2.3.2. Macrófagos
2.3.3. Células dendríticas
2.4. Granulocitos
2.4.1. Neutrófilos
2.4.2. Eosinófilos
2.4.3. Basófilos
3. Órganos linfoides
3.1 Órganos linfoides primarios
3.1.1. Médula ósea
3.1.2. Timo
3.2. Órganos linfoides secundarios
3.2.1. Ganglios linfáticos
3.2.2. Bazo
3.2.3. Tejido linfoide asociado a
mucosa
4. Tránsito linfocitario

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Sin título-2 54 5/26/06, 10:25 AM


RESUMEN

Las células del sistema inmune que incluyen linfocitos, granulocitos y monocitos-
macrófagos, se forman en la médula ósea a partir de células pluripotentes, a través de un proceso
finamente regulado y en el que participan varias citoquinas.
Los linfocitos son las células que participan en la inmunidad adquirida o específica. Las
células T participan en la inmunidad celular y las células B en la inmunidad humoral. Una tercera
subpoblación de linfocitos, las células NK, participan en la inmunidad celular de tipo innata.
Las células del Sistema Fagocítico Mononuclear (monocitos, macrófagos y células
dendríticas) tienen como función fagocitar, actividad más desarrollada en los macrófagos, que
son células tisulares derivadas de los monocitos circulantes.
Los granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos) presentan particularidades
morfológicas y funcionales. La principal función de los neutrófilos es su capacidad fagocítica.
En el capítulo se explican los procesos de activación, quimiotaxis, fagocitosis y bacteriolisis.
Los órganos linfoides se pueden clasificar en primarios (timo y médula ósea) y secunda-
rios (bazo, ganglios linfáticos y tejido linfoide asociado a mucosas). En el timo maduran los LT
y en la médula ósea los LB. En los órganos linfoides secundarios, los linfocitos toman contacto
con los antígenos y es en ellos donde se genera la respuesta inmune específica (células efectoras
y de memoria). En estos órganos existen zonas ricas en células B, y otras en que, principalmente,
existen células T.
La capacidad de los linfocitos de recircular entre los órganos linfoides secundarios, vasos
linfáticos, conducto torácico y vasos sanguíneos le permiten tomar contacto con antígenos en
diferentes lugares del organismo.

1. INTRODUCCIÓN la médula ósea, órgano en que ocurre la


hematopoyesis, proceso por el cual se forman, di-
El sistema inmune humano, y de los ferencian y maduran las células sanguíneas.
vertebrados en general, consiste en varios órga-
nos y diferentes tipos de células, que le permiten 2.1. Hematopoyesis
al organismo distinguir lo propio y eliminar lo
extraño. En el feto la hematopoyesis ocurre en el hí-
En este capítulo se revisan los aspectos fun- gado y en el bazo. A partir del nacimiento se sus-
damentales de las células del Sistema Inmune, que pende este proceso en esos órganos y se incrementa
participan en la inmunidad específica e en la médula ósea, sitio donde había comenzado
inespecífica (ver capítulo 4), y los órganos que en los últimos meses de gestación. En la médula
componen este sistema, tanto los que participan ósea tres aspectos son importantes a considerar:
en la producción y maduración celular, como los (a) la estructura anatómica (ver punto 3.2.1): dis-
que sirven para encuentro de las células del siste- posición tridimensional de vasos sanguíneos y di-
ma inmune con los antígenos. ferentes tipos celulares; (b) el estroma: incluye va-
rios tipos celulares, (fibroblastos, adipocitos,
2. CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNE macrófagos, linfocitos y células endoteliales de
los sinusoides) y macromoléculas de la matriz
Las células del sistema inmune incluyen extracelular (colágeno, fibronectina, laminina,
linfocitos y diferentes células fagocíticas, organi- hemonectina, tenascina, trombospondina y
zadas en los tejidos linfoides. Las células del sis- proteoglicanos).
tema inmune derivan de células pluripotentes de En la médula ósea las células hemato-

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poyéticas se distribuyen en tres compartimientos eritroblástica se reconocen las etapas,
morfo-funcionales: (a) compartimiento de células proeritroblasto, eritroblasto basófilo, eritroblasto
madres, (b) compartimiento mitótico o de división poliromatófilo, eritroblasto ortocromático,
y (c) compartimiento de maduración – almacena- reticulocito y glóbulo rojo. En la línea linfoide, a
miento (figura 3-1). partir de la CFU-L, después de un proceso de di-

Figura 3-1. Compartimientos celulares en la médula ósea. Se distinguen 3 compartimientos morfo-funcionales: de células
madres (“stem cells”), mitótico y de maduración – almacenaje. En la figura, los dos últimos compartimientos ejemplifican la serie
granulótica, representándose el tamaño relativo de los diferentes compartimientos.

Las células del compartimiento “stem cell” ferenciación y maduración se originan los
(de células madres) corresponden a menos del 1% linfocitos T y linfocitos B.
de las células de la médula. No son identificables En el proceso de diferenciación y madura-
morfológicamente, por lo que deben ser estudia- ción de las diferentes líneas celulares, participan
das en cultivos in vitro. La “stem cell” o célula varios factores de maduración y citoquinas
madre pluripotente, también denominada CFU- secretadas por células del estroma (ver capítulo
ML (Unidad formadora de colonias mieloides y 11). Existen factores que actúan sobre progenito-
linfoides) tiene la capacidad de dividirse y res de multilinaje: “Kit ligand”, GM–CSF (CSF:
autoperpetuarse. Da origen a dos líneas celulares Factor estimulador de colonias), G-CSF,
principales, mieloide y linfoide (figura 3-2). En la interleuquina (IL)-3, IL-4, IL-6, IL-11, IL-12, “Flt-
línea mieloide, a partir de la CFU-GEMM 3 ligand”, Factor inhibidor de leucemia (LIF),
(granulocítica, eritroide, monocítica y Oncostatin (OSM). Algunos de estos factores par-
megacariocítica) se producen dos diferentes CFU ticipan también en la maduración de algunas lí-
“encomendadas”, CFU-GM (granulocito, neas celulares en particular. Entre los factores de
monocito) y CFU-MegE (megacariocito, maduración de los granulocitos y monocitos, se
eritroide); posteriormente se generan las CFU-G, reconocen a GM-CSF; G-CSF favorece la madu-
CFU-M, CFU-E, CFU-Meg. En el compartimiento ración a neutrófilos, M-CSF a monocitos, IL-5 a
mitótico, a partir de las CFU de las líneas celula- eosinófilos y “Kit ligand” a basófilos. Por su par-
res específicas antes mencionadas, se generan las te, el regulador fisiológico de la maduración
primeras células reconocibles morfológicamente eritroide es la eritropoyetina (EPO) y de los
de cada línea celular: mieloblasto en el caso de megacariocitos la trombopoyetina (TPO) también
los granulocitos, que posteriormente madurará a denominada “mpl-ligand”. “Kit ligand” también
promielocito y luego a mielocito etapa en la cual parece tener participación en la maduración
se diferencian las tres líneas específicas de los eritroide.
granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos); En la línea linfoide B, que a diferencia de los
las etapas posteriores de maduración de los linfocitos T, maduran en la médula ósea, el factor
granulocitos corresponden a juveniles, bacilifor- de maduración es la IL-7.
mes y segmentados. Por su parte, la serie monocí- Las células de las diferentes líneas hematopo-
tica madura en las etapas de monoblasto y monoci- yéticas presentan receptores para los factores de
to. De la CFU-Meg, la línea megacariocítica se maduración antes nombrados. En la tabla 3-1 se
reconoce las etapas de megacarioblasto, resumen los principales factores maduración
megacariocito y plaquetas; por su parte en la serie hematopoyéticos y sus receptores.

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Figura 3-2. Esquema de la Hematopoyesis. La célula madre pluripotencial autoperpetuable, da origen a una célula pluripotencial,
también denominada CFU-ML (Unidad formadora de colonias mieloides y linfoides), de la que se originan: a) el progenitor
mieloide (CFU-GEMM), a partir del cual por procesos de maduración y diferenciación se originan los granulocitos (neutrófilos,
eosinófilos y basófilos), monocitos, eritrocitos y plaquetas; y b) el progenitor linfoide (CFU-L), que después de un proceso de
maduración y diferenciación, da origen a los linfocitos T y linfocitos B. Se muestra los puntos de acción de las citoquinas (IL-1, IL-
3, IL-6 e IL-7) y factores estimuladores de colonias (CSF) específicos, que participan como factores reguladores de la granulopoyesis
y linfopoyesis. EPO, eritropoyetina; TPO, trombopoyetina.

Tabla 3-1. Factores de maduración hematopoyéticos y sus receptores

Factor Receptor

Eritropoyetina (EPO) EPOR


Kit ligand (KL) “Kit”
Interleuquina-1, etc. (IL-1, etc.) “IL-1 receptor”
Factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) “G-CSF receptor”
Factor estimulador de colonias de granulocitos-
macrófago (GM-CSF) “G-CSF receptor”
Factor estimulador de colonias de monocito-macrófago
(M-CSF, CSF-1) CSF-1R
Interferón (IFN) α, β, γ “IFN-α, β, γ receptor”
Trombopoyetina (TPO, mpl, ligand) mpl
Factor inhibidor de leucemia (LIF) “LIF receptor”
Oncostatin M (OSM) “OSM receptor”
Factor de crecimiento transformante α (TGF-α) “EGF receptor”
Factor de crecimiento tipo insulina (IGF-1) IGF-1R
“Flt-3 ligand” (FL) Flt-3, STK
“Flk-1 ligand” Flk-1

2.2. Linfocitos

Los linfocitos, junto con las células presentadoras linfocitos son uno de los tipos de células mejor
de antígeno (CPA) son la base celular de la res- estudiadas. Dado que una parte importante del li-
puesta inmune específica. Actualmente los bro trata sobre la inmunidad específica y, por lo

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tanto, sobre la ontogenia y función de las diferen- Los denominados "linfocitos activados" co-
tes subpoblaciones de linfocito, en este capítulo el rresponden a linfocitos asociados a una respuesta
tema será tratado sólo en sus aspectos generales. inmune. Estos linfocitos estimulados antigénica-
mente se caracterizan por presentar citoplasma
Características generales abundante, hiperbasófilo (azul intenso) y de bor-
des irregulares.
Los linfocitos constituyen aproximadamente A la microcospía electrónica de barrido, los
el 20-25% de los leucocitos circulantes en el adul- linfocitos en reposo presentan una superficie lisa;
to (tabla 3-2). Desde el punto de vista morfoló- que se hace irregular (velluda) al estar activados.
gico, en frotis sanguíneo teñido con May Los linfocitos, al igual que otros leucocitos,
Grünwald-Giemsa se distinguen dos tipos: los se pueden movilizar. Inicialmente se forma un
linfocitos pequeños (7-9 µm) que presentan una pseudópodo que rodea la célula y al contraerse
relación núcleo/citoplasma alta y representan la empuja el núcleo hacia delante quedando una cola
mayoría, y los linfocitos grandes (11-20 µm), citoplasmática llamada urópodo (ura: cola, podi:
que presentan citoplasma más abundante (figura pie), presentando la célula un aspecto de espejo
3-3). El núcleo generalmente es redondo u oval de mano o pera. La velocidad es de aproximada-
y compuesto predominantemente de heterocro- mente 20 µm/minuto, la que aumenta cuando la
matina. Los nucléolos pueden no observarse con célula es estimulada. El urópodo, además de per-
tinción de May Grünwald-Giemsa. En los mitir el movimiento facilita las interacciones con
linfocitos grandes puede observarse gránulos otras células (linfocitos, macrófagos), etc.
citoplasmáticos (linfocitos granulares grandes). Los linfocitos además de presentar diferen-

Tabla 3-2. Leucocitos normales en sangre periférica del humano adulto normal

Tipo de célula % Número absoluto (/µL)

Leucocitos (totales) 4 - 10 x103


Neutrófilos 60-65 2 - 7 x103
Eosinófilos 0-4 0 - 0,4 x103
Basófilos <1 0,1 - 1 x103
Monocitos 4-10 0,2 - 0,8 x103
Linfocitos 20-25 1,5 - 3,5 x103

cias morfológicas son un grupo heterogéneo es-


tructural y funcionalmente. Se dividen en tres gru-
pos funcionales diferentes: los linfocitos T (LT)
que participan en la inmunidad adquirida de tipo
celular, los linfocitos B (LB) que participan en la
inmunidad adquirida de tipo humoral y las célu-
las NK ("Natural Killer") que no expresan mar-
cadores de células T ni células B y que participan
en la inmunidad natural o innata.
Las células T y B, originadas a partir de la
CFU-L en la médula ósea (figura 3-2), experimen-
tan un proceso de maduración y diferenciación en
el timo y médula ósea (tejido bolsa equivalente en
el humano). La mayor parte de los linfocitos que
Figura 3-3. Esquema de estructura subcelular de un linfo-
se encuentran en la sangre, linfa, ganglio linfático
cito pequeño. En el frotis de sangre teñido con May Grünwald
- Giemsa los linfocitos pequeños presentan un diámetro simi- y timo son linfocitos T, en cambio un mayor por-
lar a los glóbulos rojos (7-9 mm). A la microscopía electrónica centaje de los linfocitos presentes en la médula
se observa nucléolo y un pequeño aparato de Golgi. Además, ósea son linfocitos B; en el bazo y amígdalas el
en su escaso citoplasma presenta algunos ribosomas y un pe-
porcentaje de ambas subpoblaciones es similar.
queño retículo endoplásmico y escasos gránulos.

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Las células plasmáticas generalmente presen- subpoblaciones de células T "helper": LTh1 y
tan forma ovalada. Corresponden a las células LTh2. Los LTh1 secretan IL-2, IFN-γ, IL-3 y es-
efectoras de la línea linfoide B (productoras de timulan la inmunidad mediada por células; los
inmunoglobulinas). El núcleo, con una distribu- LTh2 secretan IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 y favore-
ción radial de la heterocromatina, está ubicado cen la respuesta inmune humoral. Por su parte,
excéntricamente y el citoplasma presenta una gran los linfocitos B se reconocen por la expresión en
cantidad de retículo endoplásmico rugoso que le su membrana de inmunoglobulinas IgM y en al-
otorga la intensa basofilia que le caracteriza al ser gunos casos IgD. Además son CD19+, CD20+,
teñidas estas células con May Grünwald - Giemsa. CD22+ y también expresan moléculas MHC
A nivel perinuclear presenta un desarrollado apa- clase II. Las células NK presentan los siguientes
rato de Golgi (figura 3-4). marcadores: FcγRIII (CD16), CD56 y CD57.

Diferenciación de linfocitos

Los linfocitos se generan a partir de la CFU-


L de la médula ósea (ver punto 2.1) que presenta
desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT) en el
núcleo y expresa CD34, C-Kit y HLA-DR (tipo
de molécula MHC clase II en humanos) en la mem-
brana celular. La línea linfoide B madura en la
propia médula ósea y la línea linfoide T en el timo.
En ambos casos la maduración implica una etapa
independiente de antígeno, que ocurre en la mé-
dula ósea (línea B) y en el timo (línea T), y una
Figura 3-4. Esquema de la estructura subcelular de una etapa dependiente de antígeno que en ambas lí-
célula plasmática. Las células plasmáticas presentan un diá- neas celulares ocurre en los órganos linfoides se-
metro de 10-25 mm. Se ubican principalmente en los órganos
linfoides secundarios y muy raramente en sangre periférica.
cundarios (ver punto 3.2). La maduración de las
células B se puede separar en dos estadios previos
al LB maduro: Pro-B en que las células son TdT+,
En el estudio hematológico de rutina de los CD10+, CD19+, CD24+, CD34+, CD38+ y HLA-
linfocitos sanguíneos sólo se utiliza la tinción de Dr+ y Pre-B se caracterizan por ser TdT+, CD10+,
May-Grünwald-Giemsa, metodología que no per- CD19+, CD20+, CD24+, CD38+ y cadenas µ
mite conocer la línea celular de los linfocitos. En citoplasmáticas + (de IgM; ver capítulo 6). Las
caso de requerirse dicha información, como es el células B maduras presentan el siguiente
caso de diagnóstico diferencial de leucemias, se Inmunofenotipo: CD19, CD20, CD21, CD22,
puede recurrir a tinciones citoquímicas que identi- CD24, CD38, IgM, IgD (no siempre) y FcR.
fican la presencia o ausencia de ciertas enzimas y Las etapas finales de diferenciación de los
otras moléculas en el citoplasma de los linfocitos. LB tienen lugar en periferia, en algún órgano
Más recientemente se utiliza citometría de flujo linfoide secundario (ver punto 3.2) y son antígeno
para identificar las subpoblaciones de linfocitos dependientes. En el punto siguiente se explica muy
(ver capítulo 43). Al respecto, el uso de brevemente el proceso de activación linfocitaria
anticuerpos monoclonales conjugados con que ocurre como consecuencia de la interacción,
fluorocromos permite identificar marcadores de en este caso, entre IgM o IgD de membrana de un
superficie designados con el sistema CD ("clus- LB y el antígeno respectivo. Los LB vírgenes ex-
ter designation") a modo de ejemplo se mues- presan en su membrana IgM y IgD y son CD10-,
tran algunos en la (tabla 3-3) (ver capítulo 45). CD23-, CD38- y CD77-; de tomar contacto con
De esta forma se reconoce como marcadores de el antígeno expresa CD23. Luego, como célula
las células T al complejo CD3 y a las dos precursora del centro germinal en los folículos
subpoblaciones más importantes de esta línea ce- linfoides (ver punto 3.2) el fenotipo que le carac-
lular se les identifica por ser CD4+ (LT "helper") teriza es IgM+, e IgD+, CD10+, CD23-, CD38+ y
o CD8+ (LT citotóxicos). Basándose en el pa- CD77- (figura 3-5). Posteriormente en la zona
trón de secreción de citoquinas, se reconocen dos oscura del centro germinal, las células

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Tabla 3-3. Moléculas CD asociadas a linfocitos
CD Sinónimo Expresión Función(es)
célula

CD2 LFA-2 LT, células NK CAM


CD3 LT Transducción de señales
CD4 LT "helper" Adhesión, transducción de señales
CD7 LT y timocitos
CD8 LT citotóxicos Adhesión, transducción de señales
CD10 CALLA LT inmaduros
CD11b CR3 (α) Granulocitos, CAM. Con CD18 forma Mac-1
monocitos, NK Receptor de iC3b
CD16 FcγRIII Granulocitos, Receptor de baja afinidad para IgG
macrófagos, células NK
CD19 Células B Regulación de activación
CD20 Pre-B y LB ¿Regulación de activación?
CD21 LB Receptor de C3d y virus de Epstein Barr
Ligando de CD23
CD22 LB maduros CAM
CD23 FcεRIIa LB activados Receptor de IgE de afinidad intermedia
CD25 Receptor de IL-2 LT, LB, macrófagos Con cadena 70 KDa forma
baja afininidad Activados receptor alta afinidad IL-2
CD28 LT citotóxicos
CD29 VLA (β) Amplia CAM con CDw49a,b,c,d,e,f
CD35 CR1 Granulocitos, mono- Receptor de C3b
citos, eritrocitos LB
CD40 LB Une CD40-L. Activación de LB.
CD54 ICAM-1 Amplia CAM
CD55 DAF Amplia Regulador del complemento
CD56 NK, algunos LT
CD57 NK, algunos LT

CD, "cluster designation"; CAM, molécula de adhesión celular; LB, linfocitos B; LT, linfocitos T; LFA,
antígeno asociado a función de linfocito; ICAM, molécula de adhesión intercelular; VLA, antígeno muy
tardío; DAF, "Decay Accelerating factor"; NK, células "Natural Killer".

(centroblastos) son IgM+, IgD- CD10+, CD23-, subpoblaciones de células B, LB1 y LB2: Entre
CD38+ y CD77-; luego en la zona clara del mis- otros aspectos la subpoblación B1 presenta recep-
mo centro las células (centrocitos) presentan el tores BcR polirreactivos de baja afinidad y se en-
siguiente fenotipo; IgG+ o IgM+ o IgE+, CD10+, cuentra mayoritariamente en el peritoneo y en el
CD23-, CD38+ y CD77-. Durante la etapa de pre- bazo. La subpoblación B2, constituye la mayor
cursor del centro germinal y centroblasto ocurre parte del repertorio linfocitario B y se encuentra
el fenómeno de mutación somática y entre la eta- fundamentalmente en los órganos linfoides secun-
pa de centroblasto y de centrocito se produce el darios y en la sangre (ver capítulo 6).
fenómeno de cambio de clase (ver capítulo 6). La mayoría de los linfocitos B1 se caracteri-
La última etapa es en la que se generan células za por la expresión del marcador CD5
plasmáticas (IgG+ o IgA+ o IgE+, CD10-, (glicoproteína monomérica de 67 kDa, propia de
CD23-, CD38+ y CD77-) y células de memoria linfocitos T) y aunque su función es todavía un
(IgG+ o IgA+ o IgE+, CD10-, CD23-, CD38- y misterio, se ha sugerido que la activación de estas
CD77-). Por otra parte, se distinguen dos células conduce a la producción de anticuerpos que

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Figura 3-5. Maduración de los linfocitos B en el centro germinal de los folículos linfáticos. Los LB vírgenes toman contacto
con el antígeno en la zona oscura del centro germinal (del folículo linfoide). En esta zona ocurre la expansión clonal y mutación
somática. Luego en la zona clara del centro germinal se produce el cambio de clase, y se generan células B de memoria (recirculan)
y células plasmáticas (algunas migran a la médula ósea). CDF, célula dendrítica folicular.

proporcionan protección contra infecciones Por su parte, la maduración de las células T


bacterianas durante la vida fetal, mucho antes que se puede separar también en dos estadios previos
el repertorio linfocitario de .la respuesta inmune al LT maduro: Pro-T que son TdT+, HLA-DR+,
adquirida sea completamente funcional. Además, CD1+, CD2+, CD5+, CD7+, C-kit+ y CD3
en el repertorio adulto, los linfocitos B1 dan ori- citoplasmático +, y Pre-T que son TdT+, CD1+,
gen a células plasmáticas que secretan IgM y a CD4+, CD5+, CD7+, CD8+, CD3 citoplasmático
una fracción importante de células plasmáticas + (ver capítulo 7). Las células T maduras
productoras de IgA en el intestino. De hecho, la presentan el siguiente inmunofenotipo: CD2+,
transferencia pasiva de linfocitos peritoneales B1 CD3+, CD4+ ó CD8+, CD7+, TCRαβ+ (ver
en ratones Scid (que sufren de una severa capítulo 7). Por otra parte, en base al diferente
inmunodeficiencia combinada), reconstituye la patrón de secresión de citoquinas, se distinguen
producción de IgA contra muchas bacterias intes- dos subpoblaciones de células T “helper” (CD4+),
tinales. Por otro lado la transferencia pasiva de LTh1 y LTh2 (ver capítulos 11 y 14).
células de hígado fetal o del omentum intestinal, Mayores antecedentes sobre la diferenciación de
a ratones irradiados, rápidamente reconstituye la los linfocitos B y T, serán descritos en el capítulo 13.
subpoblación B1, mientras la transferencia de de
precursores de médula ósea adulta reconstituye la Reconocimiento antigénico
subpoblación B2 pero no la B1.
En el repertorio linfocitario adulto, los Los LB y LT presentan receptores para
linfocitos B 1 son bastante frecuentes en la pobla- antígenos específicos, como son la IgM de mem-
ción B que sufre neoplasias y en aquéllos que re- brana que forma parte del BCR (Receptor de cé-
conocen una gran variedad de autoantígenos y re- lulas B) y el TCR (Receptor de células T), respec-
accionan cruzadamente con antígenos bactarianos tivamente (ver capítulos 6 y 7).
como polisacáridos y lipopolisacáridos. El reper- Además de presentar un receptor diferente,
torio de receptores BcR es bastante más limitado las células B y células T reconocen el antígeno en
en los linfocitos B1 que en los linfocitos B2, sus diferente forma; en el caso de los LB las IgM de
reordenamientos génicos VH son más restringi- membrana reconocen el antígeno directamente, sin
dos, y, como no expresan la enzima TdT (Termi- intervención de otra célula, en cambio en el caso
nal deoxinucleotidil Transferasa), carecen de re- de los LT los TCR reconocen péptidos extraños
giones N en las uniones VDJ. que son presentados por otra célula, unidos a mo-

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léculas MHC, clase I si se trata de LTc y clase II
si es LTh. Estos péptidos se originan durante el
procesamiento del antígeno en células blanco
(cuando son presentados en moléculas MHC cla-
se I), y en las denominadas células presentado-
ras de antígeno (cuando son presentados en mo-
léculas MHC clase II). En el capítulo 9 se expli-
ca en detalle el procesamiento de los antígenos a
través de dos vías diferentes (endógena y
exógena) según los péptidos sean presentados a
LTc o LTh. Además se explica el concepto de
restricción MHC.
Las células NK, que no expresan
inmunoglobulinas ni TCR, poseen dos tipos de
receptores: de activación (KAR: "Killer
Activating Receptor") y de inhibición (KIR:
"Killer Inhibition Receptor"). Los KAR recono-
cen patrones moleculares hidrocarbonados carac-
terísticos de microorganismos y los KIR recono-
cen moléculas MHC propias en otras células; si
éstas son propias transducen señales de inhibi-
ción de los mecanismos de citoxicidad (ver capí-
tulo 19). Figura 3-6. Esquema de la selección clonal de las células B
y células T. Luego que un antígeno interacciona con la célula
T y/o B que posee el receptor que le es específico, el linfocito
Activación de los linfocitos es activado, sufriendo una transformación blástica. La activa-
ción linfocitaria lleva a una proliferación clonal y diferencia-
La unión del antígeno con el receptor espe- ción celular con producción de células efectoras y de memo-
cífico de una célula T o B activa al linfocito me- ria, tanto en la línea celular B como T.
diante un delicado proceso bioquímico que im-
plica transducción de señales al interior de la
célula, generación de segundos mensajeros (IP3, 2.3. Sistema fagocítico mononuclear
DAG, Ca2+) y fosforilación de proteínas (ver ca-
pítulo 10). Proteínas fosforiladas, se unen a se- Dada su relación ontogénica, y sus caracte-
cuencias reguladoras de genes que participan en rísticas estructurales y funcionales, a los monocitos
la activación de los linfocitos. Como consecuen- y macrófagos se les agrupa en el denominado Sis-
cia de la activación, el linfocito sufre un proceso tema fagocítico mononuclear (SFM), antes lla-
denominado transformación blástica que im- mado sistema retículo endotelial. Se describirá
plica una serie de cambios estructurales y en este punto a las células dendríticas (DC,
bioquímicos que terminan en la formación de una “Dendritic Cells”) por su origen común, aunque
célula grande, de citoplasma basófilo (por aumen- no son principalmente fagocíticas.
to de retículo endoplásmico), núcleo laxo, seme- Estas células presentan un amplio espectro
jante a un linfoblasto. La activación linfocitaria de funciones: (a) remoción de células muertas,
produce una amplificación clonal (etapa de pro- senescentes, extrañas, y alteradas; (b) regulación
liferación de células con la misma especifici- de la función de otras células; (c) procesamiento
dad antigénica), posteriormente ocurre una pro- y presentación de antígenos; (d) participación en
ducción de células efectoras, responsables de reacciones inflamatorias; (e) destrucción de
la síntesis de anticuerpos (células plasmáticas) y microorganismos y (f) destrucción de células
de la inmunidad mediada por células (LT CD4+ neoplásicas.
y LT CD8+) y células de memoria (estas dos
últimas como parte de la etapa de maduración) 2.3.1. Monocitos
(figura 3-6).
Los monocitos presentan un diámetro de 12-
15 µm (figura 3-7) y representan un 4-10% de los

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leucocitos sanguíneos (tabla 3-2). En su citoplas- (testículo, ovario, útero, oviductos), hueso
ma tienen gránulos azurófilos o primarios que (osteoclastos) e intestino. También se encuentran
contienen hidrolasas ácidas, que junto con los en la leche materna.
mecanismos oxidativos, participan en la destruc-
ción de las partículas fagocitadas; al respecto es Receptores de fagocitos mononucleares
válido lo descrito antes para los neutrófilos.
Los macrófagos y monocitos presentan una
gama importante de receptores: para región Fc
inmunoglobulinas, complemento, lipoproteínas,
citoquinas y factores quimiotácticos, entre otras
moléculas (tabla 3-4).
Las Moléculas de Adhesión Celular (CAM)
participan en las uniones célula-célula y célula-
matriz. En los monocitos y macrófagos, entre otras
moléculas de adhesión se han descrito las molé-
culas LFA1 (CD11a/CD18), Mac-1 (CD11b/
CD18) y p150,95 o CR1(CD11c/CD18) de la fa-
milia integrinas y las moléculas CD2 e ICAM-1
(CD54) de la superfamilia de las inmunoglobulinas
(SFIg) (ver capítulo 12).

2.3.2. Macrófagos

Los macrófagos pueden ser residentes (fijos


en tejidos) o libres. Entre los primeros destacan:

a) Macrófagos intestinales. Los macrófagos se


Figura 3-7. Esquema de la estructura subcelular de encuentran principalmente en la lámina pro-
monocitos y macrófagos. Los monocitos son precursores san- pia del tracto gastrointestinal. Las áreas
guíneos de los macrófagos tisulares. Ambos tipos de células corticales ricas en linfocitos asociados a in-
presentan un núcleo excéntrico arriñonado. En la indentación
presentan el aparato de Golgi. Ambos poseen escasa cantidad
testino (GAL) y las placas de Peyer contie-
de retículo endoplásmico rugoso y las mitocondrias están dis- nen muy pocos macrófagos. Respecto a su
tribuidas en el citoplasma. Los macrófagos son de mayor ta- función podrían participar en la presentación
maño que los monocitos y presentan diferente forma y fun- antigénica, en la fagocitosis de bacterias y
ciones según el tejido en que están ubicados. En los macrófagos
es posible observar microfilamentos, liposomas, gotas de gra-
células muertas.
sa y vesículas endocíticas conteniendo moléculas solubles y b) Macrófagos del hígado. Las células de
partículas de distintos tamaños que han sido internalizadas. Kupffer se ubican en las paredes
vasculares de los sinusoides hepáticos.
Pueden fagocitar un espectro amplio de
Después de salir de la médula ósea los células y partículas, entre ellos, liposomas,
monocitos circulan aproximadamente 8 horas; al bacterias, parásitos, virus, glóbulos rojos
igual que los neutrófilos, en la sangre se recono- y plaquetas opsonizadas con IgG y/o com-
cen dos compartimentos, circulante y marginal; plemento.
luego pasan a los tejidos donde se transforman en c) Macrófagos cerebrales. Estos macrófagos
macrófagos. En relación a los monocitos los son llamados células microgliales. La función
macrófagos son de mayor tamaño y presentan de estos macrófagos no es bien conocida,
mayor capacidad fagocítica y microbicida. Pue- posiblemente participan en la inducción de la
den permanecer vivos entre algunos meses y años. respuesta inmune y probablemente modulen
Se encuentran en varios órganos, destacando su la función neuronal.
presencia en el hígado (células de Kupffer), riño- d) Macrófagos peritoneales. Éstos se encuen-
nes, pulmones (macrófagos alveolares e tran entre los macrófagos de serosas; tienen
intersticiales), serosas (peritoneal y plural) bazo, capacidad para destruir células neoplásicas y
ganglios linfáticos, cerebro, aparato reproductivo bacterias. En casos de peritonitis o ascitis

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Tabla 3-4. Receptores de macrófagos y monocitos

Receptores de Inmunoglobulinas
FcγRI (CD64)
FcγRII (CD32): A, B y C
FcγRIII (CD16): A y B
FcεRI
FcεRI
FcεRII (CD23): A y B
FcαR
Receptores del Complemento
CR1 (CD35)
CR3 (CD11b/CD18)
Receptores de Citoquinas
TNF-R
IL-1R
M-CSFR
IFNγR
Receptores de factores quimiotácticos
De péptidos formilados
De quimioquinas
De C5a
Receptor de lipopolisacárido (CD14)
Receptores de lipoproteínas
LDL-R
Receptor “scavenger” (de LDL modificada)
Receptores de hormonas
De Glucocorticoides
De Insulina
De Estrógenos
Otras hormonas
Receptor de transferrina
Receptor de lactoferrina
Receptor de fibronectina

maligna aumenta el número de macrófagos. ganos linfoides secundarios; allí atrapan material
e) Macrófagos de órganos reproductivos. Los extraño: macrófagos de los sinusoides esplénicos
testículos contienen un gran número de y de los senos medulares en los ganglios linfáticos.
macrófagos. Pueden participar en la fago- Los macrófagos tienen una vida vida media
citosis de espermios moribundos no eyacula- mucho más larga que los neutrófilos en los tejidos
dos y en la destrucción de microorganismos. (meses e incluso años).
En los ovarios los macrófagos pueden parti- Una subpoblación de los monocitos y
cipar en la fagocitosis de células degenerativas macrófagos, expresa en su superficie moléculas
del cuerpo lúteo. de clase II del Complejo Principal de
f) Macrófagos del hueso. Los osteoclastos se Histocompatibilidad (MHC), que participan en
encargan de la resorción ósea. la presentación del antígeno a los linfocitos T
g) Macrófagos del tejido conjuntivo: "helper" (LTh) (ver capítulos 8 y 9). Por otra par-
Histiocitos. te, sintetizan y secretan citoquinas como
h) Macrófagos renales. Céluas mesangilales de Interferón (IFN) α y β, IL-1 y Factor de necrosis
los glomérulos renales tumoral (TNF).

Los macrófagos libres están situados en ór-

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2.3.3. Células dendríticas receptor de manosa, quimioquina CCR5 (ver
capítulo 11) y FcR, y no expresan la molécula
Junto a los monocitos y macrófagos las DC de adhesión ICAM-1 y molécula coestimuladora
son células presentadoras de antígeno, pero este B7. En el paso a DC maduras participan LPS
último tipo celular es el que presenta una mayor (Lipopolisacárido) de la pared bacteriana,
capacidad, siendo muy eficiente en el inicio y mo- citoquinas como IL-1 y TNFα. Las DC madu-
dulación de la respuesta inmune. Morfológi- ras expresan en su superficie altos niveles de
camente se caracterizan porque del cuerpo celular moléculas MHC clase II, de moléculas
salen prolongaciones alargadas. coestimulatorias (CD40, CD86/B7-2 y B7-1),
Durante su maduración sufren una serie de moléculas de adhesión (ICAM-1 y LFA-3) y
de cambios inmunológico-funcionales que les de receptores para quimioquinas como CCR7
permiten una mayor adaptación a las circuns- (ver capítulo 11).
tancias, así consiguen una mayor especializa- In vivo, factores, tanto de tipo infecciosos
ción en sus funciones de activación de como inflamatorios, influyen en estimular la ma-
linfocitos T. duración y el movimiento de las DC hacia los te-
Se ha demostrado la existencia de distintas jidos linfoides secundarios.
líneas de DC, con diferentes estadios madurativos
y vías de migración, lo que implica una distribu- 2.4. Granulocitos
ción anatómica diferente. A partir de la célula
pluripotencial CD34+ y en presencia de GM-CSF Como se indicó antes, en la serie
y TNFα se diferencia en: (a) CD1α+, CD14-, de granulocítica, a partir del estadio madurativo de
las que se originan las células de Langerhans (DC mielocito se reconocen tres líneas celulares dife-
de la piel) y (b) CD1α-, CD14+ que dan origen a rentes: neutrófilos, eosinófilos y basófilos. En la
las DC mieloides. tabla 3-2 se muestra el porcentaje que cada línea
Las células de Langerhans se trasladan ha- celular ocupa entre los leucocitos en los adultos y
cia tejidos no vascularizados como la epidermis el número absoluto que representa.
en la piel, y las DC mieloides lo hacen hacia zo-
nas vascularizadas, localizándose en los intersti- 2.4.1. Neutrófilos. En los adultos, los
cios (DC intersticiales). Una vez que las células neutrófilos maduros representan aproximada-
de Langerhans han incorporado el antígeno en la mente el 65% de los 4-10 x 103 glóbulos blan-
piel, migran por la linfa hacia los ganglios cos o leucocitos por microlitro de la sangre.
linfáticos donde lo presentan a las LT; las DC Los neutrófilos tienen un diámetro de 10-
intersticiales, por su parte, migran hacia el bazo a 15 µm y un núcleo segmentado con 2-5 lóbulos
través de la sangre. (figura 3-8). En su citoplasma se han descrito
Según su distribución las DC se clasifican cuatro tipos de gránulos, los primarios o
en: (a) DC del tejido linfoide (DC azurófilos (lisosomas), secundarios (específi-
interdigitantes); existen en la médula ósea y timo cos), terciarios y vesículas secretoras (tabla 3-
y se denominan de la zona marginal, cuando 5). Los gránulos primarios, son escasos en los
están presentes en bazo, (b) DC de los tejidos estadios maduros, y contienen enzimas y pro-
sólidos no linfoides (células de Langerhans, teínas microbicidas (entre otras, peroxidasa,
cuando se localizan en la epidermis y células lisozima, proteínas catiónicas) proteínas
intersticiales a las localizadas en el corazón y (elastasa, catepsina G y otras proteínas) e
riñones) y (c) DC de fluidos a las que se en- hidrolasas ácidas (entre otras, N-acetilglu-
cuentran en tránsito, tanto en los vasos linfáticos curonidasa y catepsinas B y D). Los gránulos
aferentes como en la sangre. secundarios, son los más numerosos en los
La maduración de la DC es fundamental neutrófilos maduros; contienen lisosima,
en la iniciación de la respuesta imune. Los es- colagenasa, fosfatasas alcalina, lactoferrina y
tudios de maduración in vitro de DC se realizan otras enzimas y proteínas. Los gránulos ter-
a partir de monocitos obtenidos de sangre ciarios contienen principalmente gelatinasa. Las
periférica e incubados en presencia de GM-CSF vesículas secretoras, al parecer formadas por
e IL-4; se obtiene así una población de DC endocitosis, contienen algunas proteínas
inmaduras, células que expresan en su super- plasmáticas.
ficie moléculas MHC clase II en baja densidad,

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Tabla 3-5. Contenido de los gránulos de los neutrófilos humanos

Gránulos Primarios Gránulos Secundarios Gránulos Terciarios Vesículas Secretoras


Membrana CD11b (Mac-1) CD11b (Mac-1) CD11b (Mac-1)
Citocromo b558 Citocromo b558 Citocromo b558
Receptor de FMLP Receptor de FMLP Receptor de FMLP
Receptor de laminina Receptor de laminina
Receptor de uPA Receptor de uPA
CD63 CD15 Fosfatasa alcalina
CD66c CD66a CD10, CD13, CD45
CD68 CD666 CD16
Receptor de fibronectina DAF (CD55)
Subunidad α de Proteína G CR1 (CD35)
Antígeno NB1
RAP1, RAP2
Receptor de Trombospondina
Receptor de TNF
Receptor de Vitronectina
Matriz
Agentes microbicidas
Lisozima Lisozima Lisozima
Mieloperoxidasa Colagenasa
Defensinas
Proteínas catiónicas
Proteína bactericida
permeabilizante (BPI)
Proteasas Elastasa
Catepsina G
Proteinasa 3
Hidrolasas ácidas N-Acetilglucuronidasa
Catepsinas B y D
β-Glucuronidasa
β-Glicerofosfatasa
β-Galactosidasa
β-Glucosaminidasa
α-Fucosidasa
α-Manosidasa
N-Acetil-β-glucosaminidasa
Otros Sialidasa Sialisidasa
Azurocidin Pro-uPA Pro-uPA/uPA
Ácido mucopolisacárido Apolactoferrina Gelatinasa Proteínas plasmáticas:
Proteína ligante de heparina β2-Microglobulina Acetiltransferasa Tetranectina,
Factor inactivador de C5a Histaminasa Albúmina,
Heparinasa Otras
Proteína ligante de Vitamina B12
Inhibidor de proteína Kinasa C
Otros

FMLP, péptido formil-metil-leu-phe; uPA, Activador del plasminógeno tipo uroquinasa.

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factor”, (DAF, CD55), Antígeno lencocitario co-
mún (CD45) (Proteína tirosina fosfatasa).
Una vez que los neutrófilos salen de la mé-
dula ósea, permanecen en circulación aproxima-
damente 7 horas, para luego pasar al azar a los
tejidos, donde subsisten vivos 2-3 días. La pro-
ducción y destrucción diaria de neutrófilos es de
0,9x109/Kg de peso.
Para que los neutrófilos puedan cumplir su
función de fagocitar y destruir las partículas inge-
ridas deben movilizarse al foco infeccioso.
Figura 3-8. Esquema de la estructura subcelular de un
neutrófilo. Célula de 10-15 µm. Debido al pH neutro de su Quimiotaxis
citoplasma y contenido granular, éstos no se tiñen con la clási-
ca tinción hematológica de May Grünwald-Giemsa. Una ca-
racterística de los neutrófilos maduros es su núcleo segmentado.
El movimiento de los neutrófilos al sitio de
El citoplasma contiene un pequeño aparato de Golgi y retículo infección es dirigido por un gradiente químico
endoplásmico rugoso, y escasas mitocondrias y ribosomas. Los (quimiotaxis). Entre otros factores quimiotácticos
neutrófilos presentan dos tipos de gránulos, primarios y se- (tabla 3-6), para los que estos leucocitos poseen
cundarios; estos últimos más numerosos en neutrófilos madu-
ros. Además contienen numerosos y pequeños gránulos de
receptores, destacan algunas proteínas del com-
glicógeno.
plemento (C5a, C3a), péptidos formilados (Ej. N-
formil-met-leu-phe, FMLP) y lípidos derivados de
las bacterias, factor plaquetario 4 (PF4),
Algunas moléculas expresadas en la membra- metabolitos de la vía de la lipoxigenasa del
na de los neutrófilos son: (a) moléculas de adhe- metabolismo del ácido araquidónico, especial-
sión (ver capítulo 12), entre ellas LFA-1 (CD11a), mente el leucotrieno B4 (LTB4), y las llamadas
Mac-1 (CD11b), p150, 95 (CD11c), β2- integrina quimioquinas, entre ellas la IL-8. Varios de estos
(CD18), ICAM-3 (CD50), L-selectina (CD62b), (b) factores han sido clonados y secuenciados. A modo
receptores: FcγRI (CD64), FcγRII (CD32), FcγRIII de ejemplo el receptor de C5a es una proteína de
(CD16), Receptor para C5a (CD68), receptor para transmembrana de 30 kDa y presenta tres “loops”
G-CSF (CD114), (c) ectoenzimas: aminopeptidasa extracelulares e intracelulares, siete dominios
N (CD13, inactiva IL-8), endopeptidasa (CD10, transmembrana, el extremo carboxilo citoplas-
inactiva FMLP) y (d) otros: “Decay accelerating mático y el extremo amino extracelular.

Tabla 3-6. Factores quimiotácticos para neutrófilos

Factor quimiotáctico Fuente


Clásicos
Péptidos formilados Bacterias
Fragmento C5a Activación del Complemento
Leucotrieno B4 (LTB4) Metabolismo del ácido araquidónico
Factor activador de plaquetas (PAF) Metabolismo de fosfatidilcolina
Quimioquinas C-X-C

Interleuquina 8 (IL-8) Linfocitos T, monocitos, células


endoteliales, otras células.
β-tromboglobulina Gránulos α de plaquetas
gro-α Células endoteliales, monocitos,
otras células.
ENA-78 Células epiteliales
Quimioquinas C-C
MIP-1αβ Monocitos

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Los factores quimiotácticos actúan a bajas Entre los receptores de opsoninas, se distin-
dosis (0,1-1mM). El efecto biológico de los fac- guen: (i) los receptores de fragmento Fc de IgG
tores quimiotácticos es lograr una migración diri- (FcγR) e IgA (FcαR) unidos a un dímero de cade-
gida de los neutrófilos. La respuesta leucocitaria nas γ, los receptores del complemento y otros
a los factores quimiotácticos es regulada positiva receptores (de colectinas y de proteínas
o negativamente por varios estímulos fisiológicos plasmáticas). Los receptores de Fc son miembros
y farmacológicos. Varias citoquinas, como por de la superfamilia de las inmunoglobulinas (ver
ejemplo, TNFα e IFNγ favorecen la quimiotaxis. capítulo 6), con 3 (FcγRIA) o 2 (otros receptores
En el caso del IFNγ participa aumentando la Fc) dominios tipo inmunoglobulina extracelu-
hidrólisis de fosfatidilcolina por la fosfolipasa D. lares, un dominio transmembrana y una corta cola
La desensibilización celular al estímulo del factor citoplasmática; FcγRIIIB, unido a glicofosfa-
quimiotáctico puede ocurrir por aumento de cAMP tidilinositol (GPI), es una excepción. En la tabla
o degradación del factor quimiotáctico. 3-7 se muestra en diferentes FcγR y el FcαR indi-
cado las células que los presentan:
Receptores que participan en la fagocitosis Los receptores del complemento incluyen
CR1, una proteína de transmembrana que une C3b,
Una etapa inicial de la fagocitosis es el reco- y dos integrinas CD11b/CD18 y CD11c/CD18, lla-
nocimiento, por parte de la célula fagocítica, de la madas también CR3 y CR4, respectivamente. Es-
partícula a ser fagocitada. Para ello las células tos dos últimos receptores unen iC3b, molécula
fagocíticas poseen 2 grupos de receptores, capa- derivada de C3b y se une covalentemente a la su-
ces de reconocer: (a) ligandos propios de los or- perficie celular.
ganismos o células a fagocitar y (b) moléculas que Otros receptores unen un grupo de molécu-
se han unido a ellas y que favorecen la fagocitosis las llamadas colectinas, entre ellas la proteína que
(opsoninas). une manosa (MBL), molécula que participa en la
Entre los receptores que unen moléculas no activación del sistema del complemento y la pro-
opsónicas y que se presentan fundamentalmente teína C reactiva (PCR) que se puede unir por ejem-
los macrófagos, se encuentran: (i) los receptores plo al carbohidrato C del Streptococcus
“scavenger” que unen varios ligandos, entre otros, pneumoniae. Además de receptores para las
proteínas modificadas, polianiones (incluye áci- colectinas también existe receptores para algunas
dos nucleicos), fosfolípidos ácidos (incluye proteínas plasmáticas que se pueden unir a los
lipopolisacárido de bacterias Gram negativas y microorganismos, por ejemplo receptores para
ácido lipoteicoico de bacterias Gram positivas y fibrinógeno y fibronectina.
(ii) el receptor de manosa, que une carbohidratos.

Tabla 3-7. Receptores de la región Fc de IgG e IgA

Receptor CD Células

FcγRI* CD64 Monocitos, macrófagos,


Neutrófilos maduros tratados con IFNγ
FcγRIIA CD32 Neutrófilos maduros, monocitos
Macrófagos, plaquetas
FcγRIIB CD32 Monocitos, macrófagos
Linfocitos B, mastocitos
FcγRIIIA CD16 Macrófagos, células NK
Mastocitos
FcαR CD89 Granulocitos, monocitos
Macrófagos

* Tres locus génicos; I, alta afinidad; II, afinidad intermedia; III, baja afinidad

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Transducción de señales en la fagocitosis DAG activa la proteína kinasa C que fosforila
proteínas que participan en los procesos de
Se describirá el mecanismo de transducción degranulación y secreción. La fosfolipasa D
de señales asociados a la fagocitosis mediada por escinde fosfatidilcolina a ácido fosfatídico y coli-
FcγR. Los receptores FcγRI, FcγIIA y FcγIIIA na; su activación se asocia a la unión de ligandos
comparten la capacidad para activar la cascada de a receptores del complemento.
tirosina kinasa. Los dominios ITAM (“inmune-
tyrosine activation motifs”) de la cadena γ de los Adhesión de neutrófilos al endotelio
receptores FcγR pueden ser fosforilados por
tirosina kinasa de la familia SyK. Esta etapa es Para que los neutrófilos lleguen a los tejidos
fundamental para la ingestión y polimerización de infectados, junto recibir la señal quimiotáctica, és-
actina. Paralelamente, la unión ligando-receptor tos deben unirse al endotelio, luego rodar sobre
activa la fosfolipasa C la cual desdobla el fosfatidil éste (“rolling”), sufrir un proceso de activación
inositol-4,5-difosfato (PIP2) en inositol-1,4,5- adicional y luego participar de un proceso de mi-
trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG) (figura gración transendotelial. En este proceso tienen
3-9). El IP3 permite que se libere Ca2+ de los de- importante participación algunas moléculas de
pósitos citoplasmáticos, el que tiene dos acciones: adhesión celular (capítulo 12), expresadas en for-
(a) desencadena el ordenamiento de los filamen- ma constitutiva e inducida en la membrana de los
tos de actina y de la proteína contráctil miosina, neutrófilos y células endoteliales.
responsables del movimiento de los neutrófilos Aproximadamente la mitad de los neutrófilos
y (b) activa la fosfolipasa A2 que convierte los circulantes forman parte del “pool” marginal, que
fosfolípidos de membrana en ácido araquidónico mantienen interacción intermitente con el
a partir del cual se obtienen otros metabolitos. El endotelio. Las moléculas de adhesión de la fami-

Figura 3-9. Activación de los neutrófilos a través de FcγR. La unión de bacterias opsonizadas con IgG a FcγR favorece la
fosforilación de las cadenas γ del FcγR por proteína kinasa. Además se activa la fosfolipasa C que desdobla el fosfatidil inositol -
4,5-difosfato (PIP2) en inositol-1,4,5-trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG). La figura muestra esquemáticamente la participación
de los segundos mensajeros (IP3, Ca2+ y DAG).

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lia selectinas (L-selectinas, CD62L en leucocitos con IgG (subclases 1 ó 3) y/o fracciones del
y E-selectinas, CD62E en células endoteliales) y complemento (C3b y/o C4b). Los neutrófilos al
sus ligandos, carbohidratos sialilados, son respon- igual que los monocitos y macrófagos, poseen
sables del “rolling” de los neutrófilos sobre el receptores para la región Fc de IgG (FcγR) y
endotelio. La interacción de los factores para C3b y C4b (tabla 3-8). La unión de estas
quimiotácticos con sus respectivos receptores ini- opsoninas con el receptor respectivo, activa la
cia el proceso de transducción de señales en los célula fagocítica, ésta emite prolongaciones que
neutrófilos, lo que inicialmente se asocia con ex- engloban al microorganismo. El fagosoma for-
presión de moléculas de adhesión de la familia mado por la membrana plasmática, posterior-
integrinas, especialmente LFA-1 (CD11a-CD18) mente se fusiona con la membrana de los grá-
que se une a su ligando de la superfamilia de las nulos citoplasmáticos que descargan su conte-
inmunoglobulinas ICAM-1 (CD54) en las célu- nido enzimático en el interior del fagosoma (fi-
las endoteliales. Este último tipo de interacción gura 3-10). El DAG, a través de la proteína
resulta en un marcado incremento de la adhesión kinasa C que fosforila proteínas, “gatilla” la
de los neutrófilos al endotelio y término del degranulación.
“rolling”. Luego los neutrófilos migran entre las
células endoteliales al tejido.

Fagocitosis

La endocitosis, proceso por el cual el mate-


rial es introducido en la célula, puede tomar la
forma de una pinocitosis (bebiendo por células) y
fagocitosis (comiendo por células). La fagocitosis
es visible al microscopio óptico; la pinocitosis se
refiere a la ingestión de macromoléculas. Ambos
procesos involucran invaginación de la membra-
na celular y la formación de vesículas o vacuolas
(fagosomas). La mayoría de las células pueden
realizar pinocitosis, pero la fagocitosis es un pro-
ceso característico de los neutrófilos, monocitos Figura 3-10. Esquema de fagocitosis. Se muestra el proceso
y macrófagos, y, en mucho menor grado, de los de fagocitosis de bacterias opsonizadas. La unión de gránulos
primarios y específicos con el fagosoma forman la vacuola
eosinófilos y basófilos. digestiva. La degradación bacteriana conduce a la formación
La fagocitosis de los microorganismos se ve de un cuerpo residual y a la expulsión (exocitosis) de compo-
favorecida si éstos están recubiertos (opsonizados) nentes no degradables.

Tabla 3-8. Receptores para inmunoglobulinas y fracciones del complemento en los


granulocitos y monocitos/macrófagos.

FcεRI FcεRII FcγRI FcγRII FcγRIII C5aR CR1 CR3

Neutrófilos - + - +? + + + +
Eosinófilos - + - - + + + +
Basófilos + - - - + + + +

Monocitos/
macrófagos ? - + + + + + +

FcεR, Receptor para IgE (I, alta afinidad; II, afinidad intermedia); Fcγ, Receptor para IgG (I, alta afini-
dad; II, afinidad intermedia; III, baja afinidad); C5aR, receptor de C5a; CR1, receptor de C3b; CR3,
receptor de iC3b.

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Antes se indicó el contenido de cada uno de los tres a) Mecanismos antimicrobianos dependientes
tipos de gránulos de los neutrófilos (tabla 3-5). Así del oxígeno. Durante la fagocitosis, proceso de-
por ejemplo los gránulos azurófilos contienen pendiente de energía, se produce un aumento del
componentes antibacterianos; también contienen consumo de oxígeno, de la oxidación de la gluco-
elementos como elastasa que puede favorecer el sa y de la producción de metabolitos del oxígeno,
movimiento de los neutrófilos al hidrolizar algu- fenómeno también denominado “estallido respi-
nos componentes de la matriz extracelular. Los ratorio” (figura 3-11). La generación de estos úl-
gránulos secundarios son liberados más fácilmente timos se debe a la activación de la NADPH oxidasa
de los neutrófilos, conteniendo entre otras molé- que al oxidar el NADPH reduce el oxígeno
culas, algunas que activan el sistema del comple- molecular a ión superóxido (O-2), el que se con-
mento. También contienen colagenasa, que al igual vierte en peróxido de hidrógeno (H2O2). Los
que la elastasa puede favorecer el movimiento de metabolitos del oxígeno pueden actuar a través de
las células fagocíticas. Por otra parte, la un mecanismo dependiente o independiente de
apolactoferrina al unir hierro puede tener un efec- mieloperoxidasa (MPO), enzima presente en alta
to antimicrobiano, entre otras razones por privar concentración en los gránulos primarios, los que
de este elemento a las bacterias. Por su parte, la son degranulados al interior del fagosoma (figura
gelatinasa contenida en los gránulos terciarios 3-11). La MPO, en presencia de un ión haluro
puede participar, junto a otros componentes, en la como Cl- (o Br-), transforma el H2O2, generada por
modificación de la matriz extracelular durante el mecanismos dependientes de oxígeno pero inde-
desplazamiento de los neutrófilos. En otro orden, pendiente de MPO, en ácido hipocloroso (HOCl),
proteínas de membrana de los gránulos terciarios un potente oxidante y antimicrobiano,
y de las vesículas secretoras, pueden aumentar su (antibacteriano, antifúngico, antiviral y
expresión en la superficie celular, después de la antimicoplasma). Los radicales superóxido e
activación. hidroxilo, por sí solos tienen acción microbicida.
La oxidasa dependiente de NADPH, es un
Mecanismos microbicidas complejo multienzimático que incluye dos proteí-
nas de membrana (de dos tipos de gránulos: vesí-
Una vez fagocitados los microorganismos, culas secretoras y gránulos secundarios) y tres
éstos son destruidos por mecanismos dependien- citosólicas, cuando la célula está en reposo (figu-
tes e independientes del oxígeno, también deno- ra 3-12). El componente de membrana es un
minados mecanismos oxidativos y no oxidativos, heterodímero formado por una proteína de 91 kDa
respectivamente (tabla 3-9). (gp91phox) y una proteína de 22 kDa (p22phox).
Estas proteínas, junto con flavin adenin
dinucleótido (FAD) forman un flavocitocromo
Tabla 3-9. Mecanismos antimicrobianos de
denominado citocromo b558. Adicionalmente en la
los neutrófilos
membrana participa una proteína de unión de
nucleótidos de guanina denominada rap1. La
Dependientes del oxígeno
subunidad de 91 kDa presenta el sitio de unión
Mediados por mieloperoxidasa para el NADPH. Ambas subunidades presentan
Ácido hipocloroso (HOCl) grupos HEME. El componente citoplasmático está
Independientes de mieloperoxidasa formado por tres proteínas independientes:
Peróxido de hidrógeno (H2O2) p40phox, p74phox y p67 phox. Además participa
Ión superóxido (O2-) otra proteína de unión de nucleótidos de guanina,
¿Otros? rac2; en reposo una GDP y cuando la célula es
activada une GTP.
Independientes del Oxígeno
Precozmente durante la activación, las ve-
sículas secretoras y posteriormente los gránulos
pH ácido
secundarios, se fusionan con la membrana
Lisozima
plasmática, la cual durante la fagocitosis se
Lactoferrina
invagina y por tanto la membrana de los
Defensinas
fagosomas presentará las proteínas de membra-
Proteína bactericida permeabilizante (BPI)
na de la NADPH oxidasa. Como consecuencia
Proteínas catiónicas de los gránulos
de la activación de los neutrófilos, proceso en

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Sin título-2 71 5/26/06, 10:25 AM


Figura 3-11. Mecanismos microbicidas oxidativos. Una oxidasa cataliza la reducción de oxígeno a ión superóxido (O-2) a expen-
sas del NADPH. El NADPH es regenerado a través de la vía de las hexosas. El O-2 es transformado en peróxido de hidrógeno
(H2O2) y O2 por la superóxido dismutasa (SOD). Reacciones posteriores que comprometen al H2O2 y al O-2, llevan a la formación
de dos tipos de compuestos microbicidas: radicales libres altamente oxidantes (OH) o halógenos oxidados (por ejemplo: ácido
hipocloroso, HOCl).

Figura 3-12. NADPH oxidasa. La oxidasa dependiente NADPH está formada por proteínas de membrana (22 y 91 kDa), unidas
a flavin adenin dinucleótido (FAD) y a proteínas citosólicas (40, 47 y 67 kDa y Rac –2). Estas últimas se translocan a la membrana
cuando el neutrófilo es activado.

que p47phox es fosforilada, las proteínas NADPH oxidasa (p47phox, p67phox, p22phox
citosólicas son translocadas a la membrana o p91phox).
plasmática, formándose y activándose el comple-
jo NADPH oxidasa. b) Mecanismos antimicrobianos indepen-
La enfermedad granulomatosa crónica es dientes del oxígeno. Estos mecanismos fun-
una inmunodeficiencia primaria, caracterizada cionan en ausencia de metabolitos del oxíge-
por una mayor susceptibilidad a infecciones no, situación que se presenta en un ambiente
bacterianas y fúngicas. Es causada por muta- anaeróbico; sin embargo ambos tipos de me-
ciones que producen una pérdida o inactivación canismos, oxidativos y no oxidativos, a menu-
de una de las subunidades principales de la do participan en forma sinérgica. En los meca-

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Sin título-2 72 5/26/06, 10:25 AM


nismos microbicidas independientes del oxí- Una vez muertas las bacterias en el interior
geno participan proteínas y enzimas presentes de los fagolisosomas, son degradadas por
en los gránulos citoplasmáticos de los fagocitos hidrolasas ácidas, que por la generación de áci-
(tabla 3-3). Entre otros componentes de estos do láctico durante la glicólisis, encuentran su pH
mecanismos destacan: (a) la lisozima, enzima óptimo para actuar.
catiónica que destruye el péptidoglican de la
pared celular, principalmente de las bacterias 2.4.2. Eosinófilos. Los eosinófilos son células de
Gram positivas; (b) la proteína bactericida aproximadamente 10 µm de diámetro y cuyo nú-
permeabilizante (BPI), proteína catiónica que cleo es generalmente bilobulado (figura 3-14) y
permeabiliza la membrana bacteriana; (c) la su citoplasma anaranjado con tinción de
catepsina G, una serino proteasa con actividad hematoxilina-eosina. Representan el 1-4% de los
sobre bacterias Gram negativas y (d) las leucocitos sanguíneos (tabla 3-2); alrededor del
defensinas, péptidos de 29-34 aminoácidos, ri- 99% de los eosinófilos se encuentra en los tejidos
cos en arginina y cisteína, y que presentan acti- donde llegan luego de un breve paso de aproxi-
vidad microbicida sobre bacterias Gram positi- madamente 30 minutos por la sangre, después de
vas, Gram negativas, hongos y algunos virus. salir de la médula ósea.
En la figura 3-13 se muestra un resumen
de los mecanismos microbicidas durante la
fagocitosis.

Figura 3-14. Esquema de la estructura subcelular de los


eosinófilos. Los eosinófilos son leucocitos de aproximadamen-
te 10 µm de diámetro. Presentan un núcleo bilobulado con un
nucléolo medianamente grande. En el citoplasma se observan
ribosomas, mitocondria y pequeña cantidad de retículo
endoplásmico rugoso. El aparato de Golgi es pequeño. Un
hecho característico de los eosinófilos son sus gránulos esféri-
cos u ovales.

Gránulos

Figura 3-13. Fagocitosis y mecanismos microbicidas. (A) Los eosinófilos presentan dos tipos de grá-
Bacteria opsonisada con IgG y C3b se une a una célula nulos en su citoplasma: gránulos específicos de
fagocítica a través de los respectivos ligandos (FcγR y CR1). eosinófilos y gránulos pequeños. Los gránulos
(B) Luego de emitir pseudópodos la bacteria es fagocitada,
específicos, aproximadamente 20 por célula, en
los gránulos azurófilos y secundarios se acercan al fagosoma
en formación, y se estructura la NADPH oxidasa. (C) En el su centro presentan la proteína básica mayor
fagosoma se inicia el “estallido respiratorio” en el que a (MBP) y algunas citoquinas; en la matriz con-
partir de oxígeno molecular y con participación de la tienen proteína catiónica eosinófila (ECP),
superóxido disminutasa (SOD) se genera peróxido de hi-
peroxidasa eosinófila (EPO), neurotoxina deri-
drógeno (H2O2) y por acción de la mieloperoxidasa (MPO)
de los gránulos azurófilos se genera ácido hipocloroso vada de eosinófilos (EDN) y algunas citoquinas.
(HOCl). Adicionalmente participan otros componentes Los gránulos pequeños que almacenan
bactericidas (lisozima y otras proteínas) de los gránulos es- arilsulfatasa, se encuentran en los eosinófilos
pecíficos. La enzima glucosa 6 fosfato deshidrogenasa
maduros.
(G 6 PD) pertenece a la vía de derivación de la hexosa
monofosfato.

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Sin título-2 73 5/26/06, 10:25 AM


Otras moléculas sintetizadas en los eosinófilos Eosinófilos y patologías

Cuando los eosinófilos son estimulados Hay varias situaciones patológicas en que au-
secretan algunos mediadores derivados de mem- menta la cifra absoluta de eosinófilos en la sangre
brana: Leucotrieno C4 (LTC4), leucotrieno B4, 15- (eosinofília). Destacan: (a) las infecciosas parasi-
HETE y PAF. tarias, particularmente por helmintos, en las cua-
Los eosinófilos pueden sintetizar varias les se ha observado que los eosinófilos pueden
citoquinas proinflamatorias; se ha descrito mRNA tener una acción efectora (capítulo 35) y (b) las
para ellas: Interleuquinas (IL-1, IL-2, IL-3, IL-5, enfermedades alérgicas (capítulos 21 y 22). En-
IL-6, IL-10, IL-16) factores de crecimiento fermedades mieloproliferativas, otras neoplasias
(TGFα, TGFβ, TNFα, GM-CSF), Interferones y algunos fármacos (Ej. Penicilina, Tetraciclina,
(IFNγ) y quimioquinas (IL-8, MIP-1α y Nitrofurantoina) pueden asociarse con eosinófilos.
RANTES).
2.4.3 Basófilos. Los basófilos representan menos
Receptores de membrana del 1% de los leucocitos sanguíneos (tabla 3-2).
Al igual que los otros granulocitos maduros pre-
Uno de los receptores más importantes des- sentan un diámetro aproximado de 10 µm. En los
de el punto de vista fisiopatológico son los re- frotis sanguíneos teñidos con May-Grünwald
ceptores de Fc de IgE de baja afinidad (FcεRIII) Giemsa, los gránulos citoplasmáticos ácidos que
(tabla 3-8). se caracterizan por presentar un intenso color
azul violeta, casi cubren completamente el núcleo
Acumulación de eosinófilos en tejidos bilobulado. La figura 3-15 muestra un esquema
de su estructura subcelular.
La quimiotaxis, adhesión a células
endoteliales y matriz extracelular parece ser con-
trolada por la respuesta inmune de células T y sub-
secuente liberación de citoquinas. Las citoquinas
liberadas en procesos alérgicos son las que parti-
cipan en respuestas inmunes tipo Th2 (IL-4, IL-
5), en cambio en la reacción de hipersensibilidad
de tipo retardada (DTH) se encuentran citoquinas
asociadas a respuesta tipo Th1 (Ej. IL-2, IFNγ).
La liberación de IL-5 por LTh2 sensibilizados lue-
go de su estimulación con antígeno específico, se
puede asociar al desarrollo de eosinofilia durante
enfermedad alérgica.
Las citoquinas además de participar en la di- Figura 3-15. Esquema de la estructura subcelular de un
ferenciación de los eosinófilos a partir de los pre- basófilo. El núcleo es bilobulado y la cromatina presenta una
distribución similar a los neutrófilos y eosinófilos. Presenta
cursores, contribuyen a su acumulación en el teji- un pequeño aparato del Golgi y retículo endoplasmático; es-
do inflamado. En esta última función participan caso número de ribosomas libres y mitocondrias.
principalmente IL-3, IL-5, GM-CSF, PF4, LTB4,
IL-8 y RANTES.
En la adhesión a endolelio y migración Los basófilos son muy similares a los
transendotelial participan, al igual que para los mastocitos o células cebadas, en cuanto a la com-
neutrófilos, las moléculas de adhesión celular: posición de sus gránulos y a su función.
selectinas, integrinas y de la superfamilia de las La diferenciación a basófilos y mastocitos
inmunoglobulinas (ver punto 2.2.1). desde células inmaduras (CD34+, c-kit-, FcεRI-)
Algunas citoquinas (IL-3, IL-5 y GM-CSF) ocurre a través de varias etapas en que estos y otros
prolongan la sobrevida de los eosinófilos en los marcadores de membrana se van modificando. Las
tejidos. Estas citoquinas también aumentan la ca- células cebadas maduras presentan el siguiente
pacidad citotóxica de ellos. fenotipo FcεRI+ y c-kit+ y los basófilos son
FcεRI+, c-kit-, CD23+. Además al igual que los
eosinófilos son CD25+ y CD125+.

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Sin título-2 74 5/26/06, 10:25 AM


En la tabla 3-10 se indican las principales pro- Concavalina A), algunas citoquinas (ej. IL-1, MIP-
teínas de membrana de los basófilos y mastocitos. Am- 1α). El péptido formil-met-leu-phe sólo estimula
bos tipos de células presentan receptores de alta afini- la secreción de los basófilos.
dad para IgE (FcεRI), sólo los basófilos presentan Ambos tipos celulares participan en las eta-
integrinas y solamente los mastocitos presentan c-kit. pas iniciales del proceso inflamatorio, pero en las
etapas más avanzadas de reparación sólo lo hacen
los mastocitos. Así, inicialmente ambos secretan
Tabla 3-10. Proteínas de membrana de mediadores inflamatorios: (Histamina, IL-4,
basófilos y células cebadas quimioquinas; basófilos: IL-13; mastocitos:
TNFα, etc.), moléculas que durante el proceso van
Marcador Básofilo Mastocitos disminuyendo. Por su parte, las células cebadas
durante el desarrollo del proceso siguen liberan-
FcεRI + + do otros mediadores, ahora antiinflamatorios (IL-
FcγRII - + 10, TGF-β, etc.) y más adelante, moléculas que
Integrina CD11a/18 - + favorecen la reparación tisular (proteinasas, fac-
Integrina CD11b/18 - + tores de crecimiento y otras citoquinas).
Integrina CD11c/18 - + Varios fármacos antialérgicos y antiinflama-
IL-2R (CD25) - + torios inhiben la secreción de mediadores desde
C-Kit (CD117) + - los basófilos y mastocitos; sus acciones son múl-
IL-3Rα (CD123) - + tiples y variadas. Entre ellas se incluyen: Agonistas
IL-3/5/GMRβ - + de B 2 , antagonistas de H 1 , corticoides y
ciclosporina A, entre otros.

3. ÓRGANOS LINFOIDES
En las primeras etapas de maduración parti-
cipa el factor de “stem cell” o “c-kit ligand”. En Desde un punto de vista inmunológico, los
la maduración de células cebadas participan órganos y tejidos linfoides, se pueden clasificar
citoquinas como IL-3, IL-6. En cultivos celulares en primarios y secundarios (figura 3-16). Más re-
se han descrito las CFU de basófilo y eosinófilos cientemente se han descrito los tejidos linfoides
(CFU- baso/eo). terciarios; parte de ellos son descritos aquí como
En la diferenciación de basófilos la principal tejido asociado a mucosas (punto 3.2.3) y se in-
citoquina que participa es IL-3; también partici- cluye además en este concepto el tejido linfoide
pan GM-CSF, IL-4 e IL-5. Esta última promueve asociado a piel (ver capítulo 16).
además la diferenciación de eosinófilos. El TGF-
β, en presencia de IL-3 suprime la diferenciación 3.1. Órganos linfoides primarios
de eosinófilos y favorece la diferenciación de
basófilos. En los órganos linfoides primarios, timo y
Varias moléculas mediadoras de inflamación médula ósea en el hombre, las células linfoides
son liberadas desde ambos tipos celulares por me- experimentan un proceso de proliferación y dife-
canismos mediados por unión de IgE u otros me- renciación a células T y células B, respectivamen-
canismos. Ambas células contienen histamina, te. Este proceso no requiere presencia de antígenos
PAF, condroitinsulfato, LTB4, LTC4, IL-4 e IL-13. extraños (antígeno independiente). Allí los
Sólo en los mastocitos, óxido nítrico (NO), linfocitos adquieren el repertorio de receptores
prostaglandinas D2 (PGD2), PGF2, tromboxano A2, antigénicos específicos (LT: TCR y LB: IgM e
triptasa, carboxipeptidasa A, IL-5, IL-6, IL-8, IL- IgD) y aprenden a distinguir entre lo propio y lo
10, TNFα, TGF-β, IFNγ. Sólo en los basófilos, extraño.
MIP-1α.
Varios factores pueden activar la secreción 3.1.1. Médula ósea
de mediadores de inflamación por parte de
basófilos y células cebadoras. Entre ellos, la unión En la médula ósea, a partir de la segunda
de una molécula de IgE (o IgG) y su respectivo mitad del embarazo y en el resto de la vida, ocu-
antígeno (alergeno) a los FcεRI (o FcγRII), rre la diferenciación y maduración de los glóbu-
anafilotoxinas (C3a y C5a), lectinas (ej. los rojos, glóbulos blancos y plaquetas

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Sin título-2 75 5/26/06, 10:25 AM


Figura 3-16. Órganos linfoides. Se muestran los órganos linfoides primarios, (Médula ósea y Timo) secundarios (Bazo, Ganglios
linfáticos: cervicales, axilares mesentéricos e inguinales), tejido asociado a mucosa (GALT: intestinal; BALT: bronquial) y amíg-
dalas (palatinas, faríngea y linguales). Además se indica el lugar de drenaje de los linfocitos desde el conducto torácico a la sangre
(vena subclavia izquierda).

(Hematopoyesis, ver punto 2.1). Entre los


leucocitos, tiene especial interés en este caso la
maduración de los linfocitos B.
En el hombre y otros mamíferos, la médula
ósea es el tejido equivalente a la bolsa de
Fabricio, órgano en el que se diferencian los
linfocitos B en las aves; el origen de "B" se re-
fiere a bolsa. La bolsa de Fabricio es un órgano
linfoepitelial, que corresponde a un trozo de in-
testino modificado, localizado cerca de la cloa-
ca; los folículos están en la corteza y médula de
la bolsa.
La médula ósea se encuentra en la cavidad
medular de los huesos largos (principalmente en
las epífisis) y en los espacios existentes entre las
trabéculas de los huesos esponjosos.

Histología. La médula ósea está formada por dos


importantes compartimientos: vascular y
hematopoyético (figura 3-17). Figura 3-17. Estructura general de la médula ósea. Se des-
taca el compartimiento vascular (arterias, venas y sinusoides)
y del compartimiento hematopoyético.

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Sin título-2 76 5/26/06, 10:25 AM


Los vasos sanguíneos del compartimiento gración transitorios (<4 µm de diámetro) que se
vascular forman un esqueleto estructural en la forman en las células endoteliales de los
médula ósea. La sangre que ingresa a la médula sinusoides.
ósea lo hace por las arterias nutricias que perfo- El Compartimiento hematopoyético está
ran la diáfisis a través de los agujeros nutricios. formado por los islotes de células hematopoyéticas
Estas arterias entran en la cavidad medular y dan de las diferentes líneas celulares (serie
origen a la arteria longitudinal central, desde la granulocítica, serie monocítica, serie eritroblástica,
cual se generan pequeños vasos que irrigan tanto serie megacariocítica y serie linfoide), en sus dis-
la médula como el hueso cortical. Las ramas di- tintos estadios madurativos. En células se ubican
rigidas a la médula descargan su sangre a capila- entre los sinusoides, y entre éstos y la cortical del
res los cuales vacían en una extensa red de hueso.
sinusoides. Los sinusoides (45 a 80 µm de diá- Además de las células hematopoyéticas en
metro) están compuestos por células la médula ósea también existen otras células que
endoteliales, una lámina basal y una capa exter- forman parte de denominado estroma medular.
na de células reticulares; estas últimas cubren Entre ellas destacan: macrófagos, células
aproximadamente el 50% de la superficie reticulares y algunas células adiposas (figura 3-
endotelial. Estos sinusoides drenan en una vena 18). Estas células participan activamente en la re-
longitudinal central, que a su vez descarga su gulación de la hematopoyesis secretando
contenido en venas que salen del hueso por el citoquinas y factores de maduración.
conducto nutricio. Adicionalmente los macrófagos fagocitan núcleos
El pasaje transendotelial de células maduras, expulsados por los eritroblastos ortocromáticos al
desde el comportamiento hematopoyético a la san- madurar a reticulocitos, células alteradas y célu-
gre ocurre directamente a través de poros de mi- las muertas.

Figura 3-18. Estructura histológica de la médula ósea. La médula ósea está formada por vasos sanguíneos, sinusoides, células
del estroma y células hematopoyéticas. Los distintos tipos de células se desarrollan en islotes hematopoyéticos ubicados a diferen-
te distancia de la pared de los sinusoides, según el linaje celular.

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La hematopoyesis implica un complejo pro- llegan, en estado inmaduro, desde la médula ósea.
ceso de maduración y diferenciación celular. A En el humano, el timo comienza a originarse
partir de una célula pluripotencial se originan los hacia el final de la sexta semana de gestación. Para
diferentes tipos de leucocitos (neutrófilos, el nacimiento el timo está totalmente desarrollado.
linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos), gló- El timo es un órgano de naturaleza
bulos rojos y plaquetas. En dicho proceso partici- linfoepitelial que se ubica en el mediastino antero-
pan varias citoquinas (ver punto 2.1). Por otra par- superior, sobre los grandes vasos del corazón (fi-
te, las moléculas de adhesión celular (ver capítulo gura 3-16). Su tamaño y grado de desarrollo va-
12) presentes en las células hematopoyéticas y del rían con la edad del individuo, alcanzando su máxi-
estroma, y la matriz extracelular tienen fundamen- mo desarrollo (40 a 50 gramos), cerca de la pu-
tal participación en el proceso de maduración y bertad, después de la cual empieza a involucionar,
focalización en la médula ósea. En el caso parti- proceso que continúa hasta avanzada edad.
cular de los linfocitos, las células B maduran en la
propia médula ósea. En la figura 3-19 se muestra Histología. Es el único órgano linfoide lobulado;
esquemáticamente este proceso. está formado por dos lóbulos, derecho e izquierdo

Figura 3-19. Maduración de células B en la médula ósea. Esquemáticamente se muestra la secuencia de maduración de las
células B a partir de una célula madre (“stem cell”); durante este proceso depende de células de estroma (células reticulares, entre
otras). Otro aspecto importante es que muchas células no reordenan correctamente los segmentos génicos VDJ o VJ (ver capítulo
6) y sufren apoptosis por lo que son fagocitadas por los macrófagos medulares. Las células B vírgenes (este proceso no ha
requerido de contacto con antígeno) pasan a la sangre a través de los sinusoides y luego a los órganos linfoides secundarios donde
pueden tomar contacto con el antígeno para el cual presentan especificidad. Se indican los principales marcadores en diferentes
etapas de maduración. µ, cadena pesada mu (IgM); k, cadena liviana de Ig; TdT, desoxinucleotidil transferasa terminal.

Respecto a las células T, si bien éstas madu- unidos por tejido conectivo. Ambos lóbulos es-
ran en el timo, desde la médula ósea emigran célu- tán rodeados por una cápsula de tejido conectivo;
las “encomendadas” a madurar como linfocitos T. ésta emite numerosos tabiques al interior de los
Usando citometría de flujo (ver capítulo 43), en mé- lóbulos subdividiéndolos en miles de lobulillos de
dula ósea, se ha detectado una subpoblación que 0,5-2 mm. Cada lóbulo posee una zona periférica
coexpresa CD34 (marcador de “Stem Cells”), CD2, y más rica en células, denominada corteza y la
CD7 y CD3 citoplasmático (marcadores de línea médula. Los tabiques llegan hasta el límite
T). Sin embargo, también se propone la existencia corticomedular (figura 3-20).
de un progenitor común para ambos linajes celula- El estroma laxo, compuesto por células
res, B y T. Otros hallazgos indican que CD44 po- reticulares epiteliales entreteje la corteza y la mé-
dría participar en el "homing" de las células linfoides dula. En el retículo se encuentran linfocitos,
que llegan al timo a madurar como células T. macrófagos y células dendríticas interdigitantes.

3.1.2. Timo Las Células reticulares epiteliales tienen un as-


pecto variable. Presentan prolongaciones en for-
La principal función del timo es participar en ma de estrella, que interaccionan entre sí. En la
la maduración y diferenciación de los linfocitos T a periferia de la corteza y alrededor de los vasos san-
partir de la proliferación y diferenciación de linfocitos guíneos, estas células conforman una capa conti-
troncales inmunológicamente no competentes que nua de células planas.

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Figura 3-20. Estructura histológica del timo. En cada lóbulo del timo se pueden describir 2 regiones: corteza y médula. En
ambas zonas, corteza y médula tímica, existen células linfoides, reticulares epiteliales y macrófagos. En la corteza ocurren los
procesos de selección positiva y negativa de las células linfoides T (ver texto) en el que participan las células reticulares
epiteliales corticales. Las células linfoides a medida que maduran migran a la médula tímica desde donde emigran a la sangre. A
medida que maduran las células linfoides expresan diferentes marcadores de superficie.

En la médula existen más células reticulares llas que dejan las células retículo epiteliales. Las
epiteliales que en la corteza, conformando en la células linfoides son mucho más abundantes en la
primera los corpúsculos de Hassall. corteza que en la médula. En la corteza subcapsular
Las células reticulares epiteliales expresan en externa son células grandes (≈ 15 µm); correspon-
su superficie moléculas MHC de clase I y de cla- den a linfoblastos (células linfoides inmaduras).
se II, las que al interaccionar con las células En el resto de la corteza y médula son más peque-
linfoides son fundamentales en el proceso de ma- ños.
duración de estos últimos. Esto es especialmente Después de la pubertad, cuando el timo co-
significativo en la corteza capsular. mienza a involucionar, pierde peso y aumenta pro-
gresivamente la proporción de adipocitos (célu-
Los Macrófagos se encuentran en cantidad mo- las grasas); sin embargo durante toda la vida per-
derada en la corteza, pero son más abundantes en sisten restos de parénquima. En el adulto una vez
la médula. También expresan moléculas MHC de que se ha formado un “pool” de células T
clase I y II. periféricas, aparentemente no es necesario la pro-
ducción de grandes cantidades de linfocitos T.
Las Células dendríticas interdigitantes se en- Respecto a los Vasos sanguíneos, el timo
cuentran en abundante cantidad en el límite es irrigado por sangre que fluye a través de arte-
córticomedular y en la médula, se ubican entre el rias que ingresan por la cápsula, formando
retículo que conforman las células retículo arteriolas en los tabiques. Aquí se forman las
epiteliales. Al igual que estas últimas presentan vénulas interlobulares las cuales se vacían en la
largas prolongaciones citoplasmáticas a través de vena tímica eferente. Los capilares presentan un
las cuales toman contacto con los linfocitos. Al endotelio rodeado de una gruesa lámina basal.
igual que las células reticulares epiteliales expre- La corteza sólo es irrigada por capilares, éstos
san en su membrana moléculas MHC clase I y II, participan de la llamada barrera hematotímica,
y participan en la maduración de los linfocitos. que protegería a las células linfoides en madura-
ción en la corteza tímica, contra sustancias
Las Células linfoides se localizan entre las ma- antigénicas circulantes.

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Fisiología. En el timo ocurre la maduración de asociado a mucosas (MALT). Los órganos se-
los linfocitos T, células que participan de la inmu- cundarios, son los tejidos donde los linfocitos vír-
nidad celular e indirectamente en la inmunidad genes (B y T) interactúan con los antígenos y con
humoral. otras células del sistema inmune; es aquí donde se
Células linfoides inmaduras llegan, desde la inicia la respuesta inmune. En estos tejidos existe
médula ósea (durante la gestación: del saco un microambiente linfoide altamente organizado,
vitelino, bazo e hígado) a la región subcapsular donde las células B y T toman contacto con el
de la corteza tímica donde se diferencian a células antígeno y como consecuencia de ello se activan
T inmaduras (timocitos). En el proceso de madu- y proliferan (expansión clonal), desarrollándose
ración, desde células doble negativas (CD4-, CD8- dos subpoblaciones, células efectoras y células de
) y CD3- y TCR- a células T CD4+ (LTh) o CD8+ memoria.
(LTc) y CD3+ y TCR+, las células linfoides se
movilizan desde la corteza a la médula tímica. 3.2.1. Ganglios linfáticos
Durante este recorrido interaccionan con células
reticulares epiteliales y células dendríticas Los ganglios linfáticos son pequeños órga-
interdigitantes, las cuales expresan en su membra- nos linfoides ovales y encapsulados, de 1-3 cm de
na moléculas de MHC clase I y II. diámetro. A diferencia de otros órganos linfoides,
En el proceso de maduración ocurren los pro- están interpuestos en el trayecto de los vasos
cesos de selección, positiva y negativa (ver capítu- linfáticos, actuando como filtros a través de los
lo 13). En la primera, los linfocitos que a través de cuales pasa la linfa en su camino hacia la sangre;
su TCR reconocen las moléculas MHC propias son entre otros elementos filtran bacterias, otros
seleccionados positivamente (pueden continuar el microorganismos y otras sustancias extrañas.
proceso de maduración); los otros sufren apoptosis. Los ganglios linfáticos se encuentran en nú-
Las células que pasan la primera etapa son someti- mero variable en ciertas zonas del cuerpo, pero
das a la llamada selección negativa, durante la cual son más abundantes en las regiones axilar, cervi-
son eliminadas (apoptosis) las que, a través de su cal, inguinal, en las cavidades corporales (Ej.
TCR, reconocen con alta afinidad antígenos pro- Mesenterio) y a lo largo de los vasos mayores (fi-
pios en las moléculas MHC de clase I o II de las gura 3-16).
células reticulares epiteliales o células dendríticas
interdigitantes. Durante el proceso de maduración Histología. Los elementos de sostén del ganglio
tímica sobrevive alrededor del 5% de las células linfático son: (i) cápsula: rodea al ganglio y está
linfoides que proliferaron en la corteza tímica. compuesta de tejido conectivo, (ii) trabéculas: son
Las células T maduras, (LTc y LTh), aban- prolongaciones de la cápsula hacia el interior del
donan la médula tímica a través de las venas que parénquima ganglionar, específicamente de la cor-
drenan al timo. teza y (iii) tejido reticular: red tridimensional for-
La falta de desarrollo congénita de timo se mada por células y fibras reticulares, suspendidas
denomina Síndrome de DiGeorge. Estas personas de la cápsula y trabéculas, que forma la estructura
no pueden producir linfocitos T, desarrollando una del órgano. En uno de los bordes donde la cápsula
inmunodeficiencia grave (ver capítulo 30). es más gruesa se distingue el hilio.
El parénquima del ganglio se divide en dos
3.2. Órganos linfoides secundarios regiones: corteza y médula (figura 3-21). La cor-
Los diferentes tejidos linfoides secundarios teza, es la zona más externa y separada en com-
presentan especificidades asociadas a sus funcio- partimientos por las trabéculas. Se distinguen las
nes, sin embargo tienen algunas características es- cortezas externa y profunda (o paracorteza). La
tructurales comunes: (a) presentan mecanismos corteza externa alberga los denominados folículos
para transportar los antígenos al microambiente (o nódulos) linfoides primarios que son agrega-
linfoide; (b) tienen adaptaciones vasculares espe- dos esféricos de LB (vírgenes y de memoria). Es-
cializadas para atraer linfocitos, desde la sangre, tos nódulos pueden presentar un centro
especialmente vírgenes; y (c) presentan regiones germinativo, denominándose así folículos
donde principalmente existen LT o LB, llamadas linfoides secundarios. Estos últimos se forman
zona T y zona B, respectivamente. cuando se desarrolla una respuesta inmune; en el
Los órganos linfoides secundarios incluyen centro germinal se encuentran LB llamados
los ganglios linfáticos, el bazo y el tejido linfoide centroblastos. Aquí se generarían los LB de me-

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Figura 3-21. Estructura histológica de un ganglio linfático. El ganglio posee elementos de sostén (cápsula, trabéculas y tejido
reticular). Su parénquima se divide en corteza y médula; en la corteza existe tejido linfoide organizado como folículos y en la
médula existen cordones de tejido linfoide separados por senos medulares. Vasos linfáticos aferentes y eferentes entran y salen de
los ganglios, respectivamente.

moria y células plasmáticas (células efectoras de el endotelio y migración transendotelial partici-


las células B). La región periférica de los folículos pan moléculas de adhesión, en forma similar a lo
secundarios se denomina zona del manto o calota, descrito para los neutrófilos (ver punto 2.4.1.). Los
formada por linfocitos que están emigrando del LB que ingresan migran a la corteza y la mayoría
centro germinal. de los LT, permanecen en la corteza profunda.
La corteza externa es una zona dependiente
de médula ósea o zona B. En la corteza profunda La médula corresponde a la parte más interna del
(paracorteza) no existen folículos y está poblada ganglio. Consiste en los llamados cordones
principalmente de células T. (zona dependiente de medulares constituidos por linfocitos, células
timo, zona T) Las células presentadoras de plasmáticas y macrófagos. Estos cordones están ubi-
antígeno emigran hacia esta zona para presentar cados alrededor de los senos medulares, los que con-
los antígenos en moléculas MHC clase II a los LTh. vergen a la región del hilio donde desembocan en
Si éstas se activan, ocurrirá una expansión clonal los vasos linfáticos eferentes. Los linfocitos de los
y aumentará la anchura de la paracorteza. Las cé- cordones están en proceso de emigrar desde la cor-
lulas T recién formadas emigran hacia los senos teza para entrar en los senos medulares y así vía
medulares, dejan el ganglio y van a la zona de linfáticos eferentes alcanzar el conducto torácico, y
actividad antigénica. Las vénulas de endotelio luego la circulación general (ver punto 4).
columnar (HEV) están localizadas en esta región; Los vasos que llegan al ganglio se llaman
a través de este tipo de epitelio los linfocitos de la vasos linfáticos aferentes y se introducen en él
circulación general ingresan al parénquima por varios puntos de la superficie convexa y vacian
ganglionar. En la interacción de los linfocitos con la linfa en el seno subcapsular. Este seno se conti-

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núa con los senos corticales o paratrabeculares teza profunda y otros reclutados desde la corteza
(paralelos a las trabéculas) los que descargan la externa pueden endocitar el antígeno, procesarlo
linfa en los senos medulares que a su vez drenan y presentarlo a los LTh. Por su parte, los LT CD4+
la linfa en los vasos linfáticos eferentes. Éstos facilitan la respuesta inmune humoral, particular-
abandonan el ganglio por el hilio; ambos vasos mente en el caso de los llamados antígenos timo
linfáticos, aferentes y eferentes poseen válvulas. dependientes (ver capítulo 5). Así en la paracorteza
También entran y salen a través del hilio (zona se generan pequeños focos de diferenciación y
cóncava del ganglio), los vasos sanguíneos (arte- maduración de LB a células plasmáticas las que
ria y vena) y nervios. Otros tejidos linfoides como secretarán anticuerpos (IgM, IgG) que llegan a la
las amígdalas, el bazo y el timo tienen sólo vasos sangre vía linfa eferente. Posteriormente algunos
linfáticos eferentes. LTh y LB migran a los folículos primarios de la
corteza externa amplificando la respuesta inmu-
Fisiología. Entre las funciones de los ganglios ne. Allí se generan linfoblastos, llamados en este
linfáticos, está el filtrar la linfa que ingresa vía va- caso centroblastos. Por un proceso de maduración
sos linfáticos aferentes, así los macrófagos pueden y selección por afinidad van siendo selecciona-
fagocitar alrededor del 90% de los antígenos que dos los que presentan mayor afinidad por el
ingresan a los ganglios. Esto causa un proceso in- antígeno. También ocurre aquí el fenómeno deno-
flamatorio con aumento de volumen del ganglio. minado cambio de clase (ver capítulo 6).
Además de la fagocitosis del antígeno en los
ganglios linfáticos los linfocitos B y/o T toman 3.2.2 Bazo
contacto con los antígenos. Una respuesta inmu-
ne primaria (primer contacto con el antígeno es- El bazo es el órgano linfoide de mayor tama-
pecífico) la respuesta se inicia con activación de ño del cuerpo (aproximadamente 150 g en adul-
LTh vírgenes, ubicados en la corteza profunda; tos); está situado en el peritoneo, en la región su-
aproximadamente 48 horas después de la activa- perior izquierda del abdomen.
ción se transforman en linfoblastos los que sufren El bazo está rodeado por una cápsula de teji-
mitosis generándose a los 5 días un clon de LTh do conectivo desde la cual parten trabéculas hacia
efectores y de memoria. Si el agente infeccioso es el parénquima del órgano (figura 3-22). Por el hilio
intracelular (Ej. Virus) se activan los LTc que re- entran la arteria esplénica y nervios, y salen por
conocen los antígenos expresados en moléculas la vena esplénica y vasos linfáticos. La estructura
MHC de clase I (ver capítulos 8 y 9). del órgano está dada por una red tridimensional
Al mismo tiempo que se activa la respuesta de fibras y células reticulares, conectadas a la cáp-
inmune celular los escasos LB existentes en la cor- sula y trabéculas (similar a los ganglios linfáticos).

Figura 3-22 Estructura histológica del bazo. Una cápsula de tejido conectivo rodea al bazo; de ésta se originan trabéculas hacia
el parénquima. La pulpa blanca está compuesta principalmente por linfocitos. La pulpa roja la componen sinusoides venosos,
células y fibras reticulares, eritrocitos, macrófagos, linfocitos y granulocitos.

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La arteria esplénica se ramifica en las arte- recirculante de linfocitos. La mayoría de las célu-
rias trabeculares, las que al presentar un diámetro las plasmáticas emigran a la médula ósea para sin-
de 0,2 mm dejan las trabéculas y son rodeados tetizar y secretar anticuerpos en los senos medulares;
por linfocitos denominándose a éstos vaina sólo algunas se quedan en la zona marginal para
linfática periarterial y al vaso, arteria central. hacer lo propio en los senos marginales.
Luego ésta pierde la vaina linfática y se subdivi- La pulpa roja está compuesta de sinusoides
de en varias arterias penicilares, que entran la lla- venosos separados por cordones parenquimatosos,
mada pulpa roja (ver más adelante). El extremo que consisten en mallas de células reticulares y
de las arterias penicilares corresponden a capila- fibras reticulares, en la que existen abundantes
res arteriales terminales que descargan la sangre eritrocitos, macrófagos, linfocitos, células
en los senos esplénicos. Éstos drenan en las venas plasmáticas y granulocitos. Estos macrófagos son
pequeñas de la pulpa, las que van aumentando de responsables de retirar de la circulación los gló-
calibre, llegando a formar la vena esplénica, que bulos rojos y plaquetas, senescentes y alterados.
drena en la vena cava. Desde el punto de vista inmune, el bazo pre-
El parénquima esplénico o pulpa esplénica, senta una función similar a los ganglios linfáticos,
se divide en pulpa blanca y pulpa roja. La pulpa la diferencia fundamental radica en que el bazo es
blanca está compuesta por tejido linfoide, prin- el más importante sitio de respuesta inmune a
cipalmente linfocitos, estrechamente asociados a antígenos circulantes y los ganglios linfáticos par-
la arteria central, a cuyo alrededor forman la vai- ticipan en la respuesta inmune a antígenos pre-
na linfática periarterial. En ésta existen principal- sentes en la linfa. El concepto de respuesta inmu-
mente células T (aproximadamente 70% de CD4+ ne se refiere a la respuesta inmune innata y espe-
y 30% de CD8+). Las células B están organizadas cífica, tanto celular (fagocitosis, activación de cé-
en folículos, generalmente incorporados en la vai- lulas T) como humoral (activación de células B
na linfática periarterial. Los folículos primarios con la consiguiente síntesis de anticuerpos).
contienen células B no estimuladas y los folículos
secundarios son sitios de activación y prolifera- 3.2.3 Tejido linfoide asociado a mucosa
ción de células B, y contienen centro germinal.
La pulpa blanca está rodeada por una delgada zona En muchas regiones del cuerpo, el tejido
marginal que la separa de la pulpa roja, que con- linfoide no está encapsulado como en los ganglios
tiene células B, células “helper”, macrófagos y linfáticos y el bazo. Se trata de tejido linfoide di-
células dendríticas interdigitantes (células presen- fuso sin organización especial, que no se separa
tadoras de antígeno). con precisión del tejido conectivo vecino, pero que
En la zona marginal también se encuentran presenta folículos linfoides aislados. A estos teji-
los senos marginales; aquí es donde las células y dos se le denomina tejido linfoide asociado a
antígenos transportados por la sangre tienen ac- mucosa (MALT), las localizaciones más caracte-
ceso al parénquima del bazo. Así puede ocurrir: rísticas son las asociadas a la mucosa intestinal
(i) contacto entre los antígenos y las células pre- (GALT, “gut”) y respiratoria (BALT, “broncus”)
sentadoras de antígeno; (ii) los macrófagos pue- (figura 3-16); también existe en la mucosa
den fagocitar microorganismos y células urogenital (ver capítulo 16). Además de linfocitos,
senescentes; (iii) células T y B de la sangre pue- células que se encuentran en mayor porcentaje,
den ingresar a la pulpa blanca; y (iv) los LTh, también se hallan linfoblastos, células plasmáticas
reconocen antígenos presentados en moléculas y macrófagos. Los folículos de los MALT son si-
MHC clase II por las células dentríticas milares a los existentes en el bazo y los ganglios
interdigitantes; esto dará lugar a activación y pro- linfáticos; las regiones centrales son ricas en cé-
liferación clonal en la pulpa blanca (folículo se- lulas B, igual que los centros germinales.
cundario).
A modo de resumen, los linfocitos se forman GALT. Todo el tracto gastrointestinal contiene
en la pulpa blanca, las células B de memoria y cé- MALT. Sin embargo, el intestino delgado, princi-
lulas plasmáticas en los folículos linfáticos y las palmente el íleon, además de folículos linfoides
subpoblaciones de células T en las vainas linfáticas aislados, contiene conglomerados linfoides deno-
periarteriales. Los LB y LT recién formados entran minados placas de Peyer. Éstas presentan un fo-
en los senos marginales y emigran hacia el sitio lículo formado por células B, rodeado por una
inflamatorio, o forman parte de la reserva región más laxa de células T y macrófagos que

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actúan como CPA. Las placas de Peyer no cuen- La IgA es la clase de anticuerpo que más activa y
tan con vasos linfáticos aferentes, pero sí presen- eficientemente puede ser secretada a través del
tan vasos linfáticos eferentes que drenan en los epitelio. Ello le significa una importante partici-
ganglios linfáticos mesentéricos. Los linfocitos pación en la defensa contra patógenos a nivel de
llegan a las placas a través de pequeñas arteriolas las vías respiratorias y del tracto intestinal. En el
que son drenadas por HEV. Si bien el íleon está intestino la producción de IgA se inicia por el in-
revestido por epitelio cilíndrico simple, las zonas greso de los antígenos a las placas de Peyer, don-
adyacentes a los folículos linfoides de las placas de células T de regiones interfoliculares y células
están cubiertas por células de tipo escamoso (pe- B foliculares, son estimuladas. Algunos de los
queñas y anchas) llamadas células M, a través de linfocitos B se diferencian a células productoras
las cuales los antígenos luminales penetran por de IgA y migran a la lámina propia, ubicada bajo
pinocitocis y fagocitosis. (figura 3-23) el epitelio de mucosa. Las citoquinas más impor-
tantes en el cambio de clase a isotipo IgA son el
factor de crecimiento transformante B (TGF-B) e
IL-5 (ver capítulo 6). Algunas células B activadas
migran a los centros germinales de las placas de
Peyer, donde ocurren proliferación de los LT y
mutaciones somáticas de los genes de Ig, lo que
conduce a una mayor afinidad de los anticuerpos.
Los linfocitos productores de IgA pueden perma-
necer en la lámina propia o pueden migrar a otras
mucosas u órganos linfoides.

3.2.4 Amígdalas

Las amígdalas son agregados encapsulados,


de manera incompleta, de folículos linfoides. Exis-
ten 3 tipos de amígdalas: (a) palatinas: bilaterales,
localizadas en los límites de la cavidad oral y la
faringe; (b) faríngea: única, ubicada en el techo de
la faringe nasal y (c) linguales: varias, se encuen-
tran en superficie dorsal del tercio posterior de la
lengua (figura 13-16). Por su estratégica localiza-
Figura 3-23. Participación de las células M en la incorpo- ción, las amígdalas están directamente expuestas a
ración de antígenos hasta las placas de Peyer. Las células tomar contacto con antígenos inhalados e ingeri-
M, expuestas hacia el lumen intestinal, permiten el ingreso de dos. El parénquima de los diferentes tipos de amíg-
antígenos por pinocitosis y fagocitosis. De esta forma los dalas es similar, está conformado por folículos
antígenos pueden tomar contacto con los linfocitos y
macrófagos de las placas de Peyer. linfoides ricos en células B, los que pueden presen-
tar centros germinales. Reaccionan a los antígenos
formando linfocitos y estableciendo una reacción
inflamatoria. La superficie de las amígdalas está
BALT. El tejido linfoide asociado la mucosa de recubierta por epitelio, diferente en cada caso.
bronquios es, estructuralmente, similar a las pla-
cas de Peyer, presenta folículos ricos en células 4. TRÁNSITO LINFOCITARIO
B, y sectores en que existen LT y CPA. El BALT
se encuentra en los bronquios de todos los lóbulos Una parte de los linfocitos formados en la
pulmonares; se ubica principalmente en las bifur- médula ósea pasa al timo, donde se diferencia a
caciones de los bronquios y bronquiolos. Al igual células T y otra parte se diferencia a células B en la
que en el GALT en la zona adyacente a los propia médula ósea. Luego de adquirir en los ór-
folículos linfoides el epitelio cilíndrico es reem- ganos linfoides primarios, los receptores que los
plazado por células M descritas en el GALT. Tam- caracterizan como linfocitos T (“helper” y
poco presentan vasos linfáticos aferentes, pero sí
eferentes y está ricamente vascularizado.

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citotóxicos) y linfocitos B, las células linfoides vír- LECTURAS SUGERIDAS
genes pasan a través de la circulación general a los
tejidos linfoides secundarios. El paso desde la san- Austyn, J. and Wood, K., Principles of cellular
gre por las HEV se ve favorecido por moléculas de and molecular immunology, Chapter 1, Oxford
adhesión (ver capítulo 12); moléculas que presen- University Press, New York, 1993.
tan ciertas diferencias dependiendo del tipo de lin-
focito (virgen o de memoria) y del tejido de destino Babior, B., “NADPH oxidase: An update”, Blood,
(ganglio linfático, placas de Peyer, GUT o piel). 93(5):1464-1476, 1999.
Allí toman contacto con los antígenos para los cua-
les presentan especificidad. En los órganos linfoides Bokoch, G., “Chemoattractant signaling and leu-
secundarios se ubican en zonas específicas, así los cocyte activation”, Blood 86(5):1649-1660, 1995.
folículos linfoides son ricos en LB y la paracorteza
(de los ganglios linfáticos) es rica en LT. Aquí en Degos, L; Linch, C.; Löwenberg, B., Textbook of
los órganos linfoides secundarios se generan los Malignant Haematology, Chapters 3, 4, Martin
linfocitos de memoria (T y B) y efectores (linfocitos Dunitz, 1999.
T citotóxico y células plasmáticas Los linfocitos
salen de los ganglios linfáticos a través de los va- Gartner, L. y Hiatt, J., Traducido por Sapiña, S.,
sos linfáticos eferentes, para llegar nuevamente a Histología, texto y atlas, Capítulos 10 y 12,
la circulación a través del conducto torácico y con- Interamericana, 1997.
ducto linfático derecho (figura 3-24).
En condiciones normales, los linfocitos es- Geneser, F., Histología: sobre bases moleculares,
tán recirculando permanentemente, lo cual pro- Capítulos 10, 11 y 16, Editorial Panamericana,
porciona una vigilancia inmunológica más eficien- 2001.
te, al permitir la presencia de todo el repertorio de
linfocitos antígeno-específicos, en diferentes par-
tes del organismo.

Figura 3-24. Recirculación de los linfocitos. Una vez que las células T y B salen de los órganos linfoides primarios como
linfocitos maduros, pasan a través de la circulación general a los tejidos linfoides secundarios. Desde los ganglios linfáticos, salen
a través de los vasos linfáticos eferentes y vuelven a la circulación general, fundamentalmente, por el conducto torácico.

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Sin título-2 85 5/26/06, 10:25 AM


Hampton, M.; Kettle, A.; Winterbown, C., “Inside
the neutrophil phagosome: oxidants,
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92(9): 3007 - 3017, 1998.

Lee, R.; Foerter, J.; Lukeng, J.; Pareskevas, F.;


Greer, J.; Rodgers, G., Editors, Wintrobe's clini-
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Sin título-2 86 5/26/06, 10:25 AM


Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 4

INMUNIDAD INNATA

Iván Palomo G., Adriana Ardiles S. y Ulises Vergara C.

1. Introducción
2. Componentes de la inmunidad
innata o natural
3. Fase de reconocimiento en la
respuesta inmune innata
4. Fase efectora en la respuesta
inmune innata
5. Proyección clínica
6. Filogenia de la respuesta
inmune innata

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RESUMEN

La inmunidad innata es la primera línea de defensa contra la infección. Posee mecanismos


de reconocimiento de diversidad limitada codificadas en la línea germinal. No posee memoria.
Está constituido por diversos tipos celulares y moléculas solubles que juegan un rol en el recono-
cimiento de microorganismos y también en la fase efectora de la respuesta innata.
Filogenéticamente es el mecanismo de defensa más antiguo y se ha conservado a lo largo de la
evolución. Actúa rápidamente para eliminar al antígeno a través de mecanismos microbicidas y
respuesta inflamatoria. Por ser sus mecanismos efectores tan potentes y con capacidad de produ-
cir daño tisular del huésped están finamente regulados por diversos mecanismos de control. La
respuesta innata tiene la capacidad de alertar y dirigir la respuesta inmune adquirida orientándola
hacia una respuesta celular o humoral específica.

1. INTRODUCCIÓN da por un conjunto de diversos tipos celulares y


factores solubles encargados de la resistencia del
El sistema inmune es parte de los mecanis- huésped ante agentes infecciosos con los cuales
mos biológicos destinados a mantener la integri- nunca éste ha tenido contacto. A diferencia de la
dad estructural y funcional de los individuos y, inmunidad específica, la inmunidad innata es de ac-
está genéticamente programado para la neutrali- ción inmediata, no requiere exposición previa al
zación y eliminación tanto de agentes infeccio- antígeno y no se modifica con exposiciones repeti-
sos, células y moléculas extrañas, como detritus y das al agente infeccioso. Su rapidez de activación
productos moleculares de células propias enveje- y, por lo tanto, rapidez de la respuesta efectora a la
cidas, transformadas o tumorales. infección, colocan a la inmunidad innata en una si-
Los componentes celulares y moleculares del tuación privilegiada para eliminar a los agentes in-
sistema inmune se han separado tradicionalmente fecciosos. Sin embargo, no debemos olvidar que
en componentes naturales o innatos y componen- en el curso de la evolución estos microorganismos
tes adquiridos o específicos que han desarrollado han desarrollado diversas estrategias para evadir,
estrategias, mecanismos y receptores distintos para distraer, suprimir o manipular en su propio benefi-
el reconocimiento inmunológico. Así, mientras la cio, los diversos mecanismos efectores de la res-
inmunidad específica se basa en el tamaño y la puesta inmune. Por otra parte, los huéspedes han
diversidad del repertorio linfocitario T (1018) y B desarrollado mecanismos defensivos cada vez más
(1014) y requiere la activación y expansión clonal selectivos y específicos. Esto ha significado mejo-
de linfocitos T y B únicos y específicos para el rar, diversificar y amplificar mediante mecanismos
desarrollo de una respuesta inmune eficiente; el de recombinación génica, el repertorio de recepto-
sistema innato utiliza unos pocos cientos de re- res linfocitarios aumentando así la probabilidad que
ceptores de expresión constitutiva y no clonal en un linfocito individual y único reconozca antígenos
las células de la inmunidad natural y, cuya especi- del microorganismo. Estos cambios evolutivos han
ficidad está dirigida a moléculas o patrones permitido el surgimiento de la inmunidad adquiri-
moleculares altamente conservados en grandes da, optimizando la defensa inmunológica de los
grupos de agentes infecciosos (PAMPs= Pathogen hospederos y por lo tanto su sobrevida en un am-
Associated Molecular Patterns). biente siempre cambiante y de gran complejidad.
La inmunidad innata es filogenéticamente más Existe una interacción bidireccional entre
antigua que la adquirida, se ha conservado a lo lar- estos dos sistemas: el sistema inmune innato
go de la escala evolutiva y constituye la primera funciona como una alerta para el sistema inmune
línea de defensa contra la infección. Está constitui- específico y puede determinar el tipo de respuesta

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adquirida, ya sea humoral o celular. Por otra parte, (tabla 4-1), se puede citar la integridad de la piel y
el sistema inmune específico utiliza los mecanis- de las mucosas del tracto respiratorio, digestivo y
mos efectores de la inmunidad innata para eliminar urogenital. Al estar las células epiteliales firme-
a los microorganismos haciendo más eficiente el mente adheridas, constituyen una barrera muy im-
proceso de fagocitosis y amplificando la respuesta portante en la resistencia del huésped a la infec-
inflamatoria mediante la activación del complemen- ción. Cada sistema posee características particu-
to por la vía clásica (figura 4-1). Del balance entre lares de acuerdo con su anatomía y fisiología. Así
la efectividad de los mecanismos inespecíficos para por ejemplo, en el aparato respiratorio, el flujo de
eliminar la infección y de la carga del agente aire o de fluidos a lo largo del epitelio, unido al
infectante va a depender la evolución de la infec- movimiento ciliar ejerce una función de barrido
ción. Si ésta persiste por más tiempo, el influjo de de microorganismos que se hayan adherido al
monocitos y macrófagos al sitio de infección va a mucus impidiendo de esta manera la adhesión a
llevar al procesamiento y presentación de antígenos las células epiteliales.
del agente infeccioso al sistema inmune específi- En la inmunidad innata participan linfocitos
co, con su consecuente activación (figura 4-2). con características especiales que los hacen más
Después de un tiempo relativamente corto de 3 a 5 afines con ésta que con la inmunidad adquirida.
días, los anticuerpos producidos por la progenie de Estos linfocitos tienen un receptor para antígeno
los clones de linfocitos B activados van a producir de diversidad limitada. Son los linfocitos T
una opsonización adicional del agente infeccioso. intraepiteliales y los linfocitos B-1. Los primeros
La fijación de anticuerpos en la superficie bacteriana producen citoquinas, activan fagocitos y causan
por sí sola puede no tener un efecto nocivo para la la muerte de las células infectadas; y los segun-
sobrevida bacteriana, sin embargo, a través de la dos, producen anticuerpos naturales clase IgM.
activación de la vía clásica de complemento y de la Constituyen un mecanismo preformado para en-
fagocitosis se acelera la eliminación de dicho agen- frentar microorganismos que sobrepasan las ba-
te. A su vez, los linfocitos T (LT) secretan citoquinas rreras epiteliales.
que activan a los monocitos y macrófagos, permi- Los mastocitos son otro tipo celular que par-
tiéndoles eliminar organismos ingeridos que resis- ticipa en la inmunidad innata. Se ubican en las
ten la destrucción por parte de células no activadas. proximidades de pequeños vasos sanguíneos y
Así, los mecanismos inespecíficos que iniciaron la posee mediadores de la inflamación preformados
reacción inmune vienen ahora a completar su efec- como histamina, serotonina, factor quimiotáctico
to, bajo la dirección y activación de la inmunidad para eosinófilos, factor quimiotáctico para
específica (figuras 4-1 y 4-2). neutrófilos, heparina, quimasa, peroxidasa, etc.
También tienen la capacidad de secretar media-
dores lipídicos de neoformación tales como las
2. COMPONENTES DE LA INMUNIDAD prostaglandinas, tromboxano y leucotrienos y
INNATA mediadores proteicos de neoformación como las
citoquinas. El lipopolisacárido puede inducir di-
Los componentes del sistema inmune innato rectamente la liberación de productos de los
son un grupo heterogéneo de células y factores mastocitos e indirectamente, a través de la activa-
solubles (tabla 4-1). Estos componentes se ubican ción del sistema del complemento. Los
en posibles puntos de entrada de los agentes in- mastocitos, por estas características, pueden ini-
fecciosos desde el medio ambiente; en la circula- ciar y orquestar la respuesta inflamatoria en los
ción, donde pueden hacer una labor de vigilancia sitios de infección.
y, en los tejidos donde finalmente se llevará a cabo Otros tipos de células que intervienen en la
la respuesta efectora si es que el agente infeccioso inmunidad innata son los polimorfonucleares
ha logrado sobrepasar estas primeras barreras. (PMN) neutrófilos, eosinófilos, los monocitos y
Estos mecanismos son de tipo físico; están las células “natural killer” (NK). Todas estas cé-
preformados o mantenidos bajo control por el lulas tienen la propiedad de circular y migrar. Ello
huésped. Deben ser activados rápidamente en res- les permite ejercer una vigilancia eficiente y una
puesta a la infección, pero debido a su alta poten- rápida llegada a los lugares de infección. Estas
cia e inespecificidad, pueden producir daño tisular, células se originan en la “stem cell” de la médula
por lo tanto, su activación debe ser regulada. ósea, la que se diferencia a un precursor mieloide
Con respecto a los componentes celulares (que genera los granulocitos, monocitos y

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Figura 4-1. El sistema inmune. El sistema inmune está compuesto de dos ramas principales: inmunidad innata y adquirida. La
confrontación del sistema inmune innato con patógenos lleva a su rápida activación y capacita al sistema inmune específico para
responder apropiadamente. Existen interconexiones entre los mediadores solubles y celulares de ambos sistemas, que interactúan
aumentando la eficacia de la respuesta. Modificado de Ploegh, HL., Science 1998; 280:248.

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acetílglucosamina en la pared celular bacteriana;
hidrolasas neutras y ácidas, que degradan
macromoléculas microbianas, y proteínas
catiónicas que destruyen bacterias gram negati-
vas. Los gránulos secundarios contienen lisozima,
lactoferrina, que tiene la capacidad de que el fie-
rro requerido para el crecimiento microbiano lo
que produce bacteriostasis y colagenasa que di-
giere macromoléculas bacterianas.
Los monocitos son los precursores circulan-
tes de los macrófagos tisulares. Se encuentran en
gran número en tejido conectivo, pulmón
(macrófagos alveolares e intersticiales), hígado
(células de Küpfer), bazo (macrófagos esplénicos),
cerebro (células de la microglía).
Figura 4-2. Interacciones entre inmunidad innata y adqui-
rida. Los anticuerpos producidos por los linfocitos B, al unir- Las células NK o linfocitos granulares gran-
se a los microorganismos actúan como agentes opsonizantes. des presentan actividad citotóxica directa y
Las citoquinas liberadas por las células T activan las células citotoxidad dependiente de anticuerpos y partici-
fagocíticas para destruir el material que éstos han endocitado.
pan en defensa contra células infectadas por virus
A su vez, los macrófagos y monocitos pueden presentar el
antígeno a las células T y causar su activación. precozmente durante la infección (ver capítulo 19).
No expresan receptores de linfocitos T. Poseen
receptores de activación KAR (“Killer Activating
Receptor”) que reconocen patrones moleculares
macrófagos) y a un precursor linfoide del cual o PAMPs hidrocarbonados propios de los agentes
derivan las células NK (ver capítulo 3). infecciosos y activan la citotoxicidad directa. Re-
Los polimorfonucleares son el tipo celular ceptores Fc reconocen anticuerpos específicos
más numeroso a nivel circulante. Son de corta vida unidos a la membrana de los agentes infecciosos
y se producen en gran número en la respuesta y activan la citotoxicidad dependiente de
inflamatoria. Estas células deben migrar al sitio anticuerpos. Las células NK poseen además re-
de infección abandonando el torrente sanguíneo ceptores de inhibición KIR “Killer Inhibition Re-
en respuesta a señales moleculares. Los PMN po- ceptor” que reconocen moléculas codificadas por
seen gránulos primarios y secundarios. Los grá- el Complejo Principal de Histocompatibilidad
nulos primarios contienen mieloperoxidasa, que (MHC) y transducen señales de inhibición de la
potencia la actividad microbicida del peróxido de citotoxicidad contra células propias que expresan
hidrógeno; lisozima, que hidroliza uniones estas moléculas MHC.
glicosídicas entre ácido acetilmurámico y Además de ser una barrera física, la piel y

Tabla 4-1. Componentes de la inmunidad innata

Celulares Solubles

Células epiteliales de la piel y mucosas Defensinas, lisozima y otras


Linfocitos T intraepiteliales Sistema del complemento
Linfocitos B-1 Colectinas
Mastocito Pentraxinas
Polimorfonucleares neutrófilos Factores de coagulación
Monocitos Citoquinas:
Macrófagos TNF, IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN
Células Natural Killer Quimioquinas:
IL-8, MC, MIP

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mucosas poseen sustancias como ácidos grasos flamatorio secundario a la infección. Interviene en
(piel), enzimas como lisozima (presente en sali- la fase de reparación tisular y en consecuencia en
va, sudor, lágrimas) y péptidos antibacterianos la recuperación de la integridad de los tejidos. El
como defensinas con acción microbicida o sistema de la coagulación, junto a las otras casca-
inhibidora del crecimiento bacteriano. das plasmáticas enzimáticamente gatilladas, como
A nivel digestivo, participan la lisozima de el sistema de las quininas, el sistema de la fibrinolisis
la saliva, el pH ácido del estómago, las criptidinas y el sistema del complemento, son mediadores de
(péptidos antibacterianos generados en las criptas la inflamación. Estos sistemas se interrelacionan por
del intestino delgado), y la flora normal que com- lo que la activación de uno de ellos puede produci-
pite por nutrientes con microorganismos patógenos rá la activación de los otros. La puesta en marcha
y también elabora sustancias antibacterianas tales de la acción de los mediadores plasmáticos de la
como las colicinas, que previenen la colonización inflamación junto con la activación de los media-
por otro tipo de bacterias dentro del intestino. dores celulares, contribuye a la eliminación del
Además de los Componentes solubles men- agente infeccioso a través de la respuesta
cionados en relación con las barreras epiteliales y inflamatoria local. Las citoquinas son una familia
mucosas, en la inmunidad innata hay otros com- de proteínas que participan tanto en la inmunidad
ponentes de este tipo, que participan en la fase de innata como en la inmunidad adquirida (ver capí-
reconocimiento y en la fase efectora (tabla 4-1). A tulo 11). Ellas son producidas por diversos tipos
continuación se describen brevemente: celulares. Comunican células del sistema inmune
El complemento es un sistema de proteínas entre sí. Ejercen acciones locales y a distancia so-
plasmáticas que interactúan entre sí de una manera bre diferentes tipos celulares. Las citoquinas que
regulada. Es un mecanismo efector de la inmunidad participan en la inmunidad innata son generadas
humoral inespecífica y tiene un rol amplificador de por macrófagos activados en sitios de infección.
la respuesta inflamatoria. Los precursores de este Hay citoquinas de alarma o proinflamatorias
sistema deben ser activados secuencialmente por como interleuquina 1 (IL-1), factor de necrosis
reacciones bioquímicas a través de dos vías princi- tumoral (TNF) e interleuquina 6 (IL-6), las cuales
pales: clásica y alterna, que comparten una secuen- inducen en la etapa precoz de la infección una re-
cia terminal común. La vía clásica se activa por puesta inflamatoria local dirigida a contenerla y,
inmunocomplejos de IgG o IgM y la vía alterna se eventualmente, inducen una respuesta sistémica
activa por lipopolisacáridos de pared bacteriana, o de fase aguda. Otras citoquinas tienen función
polisacáridos y agregados de inmunoglobulinas. La quimiotáctica para leucocitos como interleuquina
vía de las lectinas de la activación del complemento 8 (IL-8). La interleuquina 12 (IL-12) activa célu-
es gatillada por la unión de polisacáridos microbianos las NK y estimula a los macrófagos, la
a lectinas circulante (ver capítulo 18). interleuquina 10 (IL-10) inhibe a los macrófagos
Las colectinas son una familia de proteínas y los interferones (IFN) α y β tienen actividad
caracterizadas por la presencia de un dominio antiviral.
colágeno–símil y un dominio lectina. Juegan un
rol en la inmunidad innata al actuar como recep-
tores de patrones de reconocimiento y pueden ac- 3. FASE DE RECONOCIMIENTO EN LA
tivar al complemento vía unión de C1q. RESPUESTA INMUNE INNATA
Las pentraxinas son una familia de proteínas
del plasma que contienen cinco unidades globula- La diferencia esencial entre los sistemas
res. La proteína C reactiva es el miembro más im- inmunológicos innato y adquirido es el modo a tra-
portante de esta familia: (a) es un reactante de fase vés del cual reconocen a los microorganismos. El
aguda que se sintetiza a nivel hepático, (b) su ligan- sistema inmune innato emplea proteínas codificadas
do es polisacárido bacteriano, (c) reconoce también en la línea germinal. Reconoce estructuras compar-
constituyentes fosfolipídicos de células dañadas, (d) tidas por diferentes tipos de microorganismos (pa-
funciona como opsonina y (e) puede activar el com- trones moleculares). Estas proteínas pueden ser re-
plemento por vía clásica, por su unión a C1q. ceptores de superficie celular o sustancias solubles
El sistema de la coagulación además de parti- de diversidad limitada.
cipar en la hemostasia y contribuir a evitar local- Las principales moléculas solubles de recono-
mente la diseminación de la infección, está estre- cimiento de la inmunidad innata, en general, reco-
chamente unido a la injuria tisular y al proceso in- nocen estructuras carbohidrato (tabla 4-2). Las prin-

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cipales son Proteína C reactiva, Proteína amiloide Subsecuentemente la activación del macrófago es el
sérico, “mannose binding protein” (MBP), resultado de señales gatilladas por la subunidad “Toll-
“lipopolysaccharide binding protein” (LBP), CD14 like-4”. La activación de los macrófagos se eviden-
soluble y C3. Es importante destacar que algunos de cia a través de la estimulación de síntesis de proteí-
estos receptores solubles tienen la capacidad de acti- nas que van a favorecer la función microbicida
var complemento y de esa manera pueden favorecer (oxidasas, óxido nítrico sintetasa), la trombosis (fac-
la fagocitosis, amplificar la respuesta inflamatoria y tor tisular), la remodelación tisular (proteasas, facto-
lisar a microorganismos. Otros son profagocíticos. res de crecimiento, factores angiogénicos), inflama-
Claramente se puede ver que la función de reconoci- ción local y respuesta de fase aguda (IL-1, IL-6 y
miento está unida a funciones efectoras. TNF), activación de otros tipos celulares (IL-12) y

Tabla 4-2. Inmunidad innata: moléculas solubles de reconocimiento

Síntesis Ubicación Ligando: Ligando: Activación Profagocítica


hepática sérica Polisacáridos Proteína complemento
matriz
extracelular

PCR + + + + +
PAS + + + + +
MBP + + + + +
LBP + + + +
sCD14 + + +
C3 + + + + +

PCR, Proteína C reactiva; PAS, Proteína amiloide A; MBP, “Mannose binding protein”;
LBP, “Lipopolysaccharide binding protein”; sCD14, CD14 soluble.

Los principales receptores celulares de reconocimien- estimulación de la respuesta específica a través de


to de la inmunidad innata (tabla 4-3) se ubican en la presentación antigénica y de la expresión de molé-
membrana celular de polimorfonucleares neutrófilos, culas coestimuladoras. Entre otros receptores celu-
monocitos y macrófagos, dotándolos así de la capa- lares de reconocimiento que presentan los
cidad de vigilancia de microorganismos que puedan polimorfonucleares neutrófilos se encuentran el re-
haber ingresado al huésped habiendo sobrepasado ceptor para el péptido bacteriano que contiene resi-
la barrera inicial del sistema de defensa inespecífi- duos N-formil metionil y el receptor para fragmento
co. Reconocen glicoproteínas y lipopolisacáridos de complemento como CR3, que puede directamen-
bacterianos comunes a muchos patógenos y que no te reconocer bacterias para fagocitosis.
están presentes en células de mamíferos. Son los re-
ceptores de patrones de reconocimiento. Además, los
receptores solubles y celulares de reconocimiento 4. FASE EFECTORA EN LA RESPUESTA
pueden actuar en conjunto para llevar a cabo su fun- INMUNE INNATA
ción. De este modo el sistema sensor de
lipopolisacárido (LPS) del macrófago está constitui- La unión ligando-receptor induce respuestas ce-
do por tres componentes: una proteína plasmática lulares que estimulan la inflamación y la acción
de unión a LPS que es LBP, un receptor de superfi- microbicida. Entre los sistemas mediadores de
cie celular para LPS que es CD14 y un receptor la inflamación juega un rol preponderante el sis-
transductor de señales llamado receptor “Toll-like- tema de las cascadas plasmáticas enzimática-
4”. LPS circulante es inicialmente unido a LBP y mente gatilladas: sistema de la coagulación, sis-
luego es entregado a CD14 sobre la superficie del tema de las quininas, sistemas de la fibrinolisis y
macrófago donde la LBP es liberada. sistema del complemento (figura 4-3). Estos siste-

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Tabla 4-3. Inmunidad innata: receptores celulares de reconocimiento

Ubicación Ligando Función

Receptor de manosa Macrófago tisular Glicoproteínas Fagocitosis


microbianas
Receptores scavenger Macrófago tisular Pared celular de Fagocitosis
bacterias y hongos
Receptor CD14/Toll-like Monocitos y macrófagos LPS Activación de macrófagos
Receptor CR3 Monocitos, macrófagos iC3b, LPS Fagocitosis, adhesión
y PMN neutrófilos
Receptor péptido N- PMN neutrófilos, Proteínas bacterianas Activación neutrófilos
formilmetionil macrófagos y macrófagos

LPS, “Lipopolysaccharide” (lipopolisacárido) ; PMN, polimorfonucleares.

mas están interrelacionados y juegan un papel am- opsonina y favorece la fagocitosis por neutrófilos
plificador de la respuesta inflamatoria. El factor y macrófagos. La activación del sistema de las
Hageman o factor XII es fundamental; su activa- quininas libera bradiquinina, que aumenta la per-
ción (por superficies cargadas negativamente, meabilidad vascular y también provoca dolor. Ade-
como colágeno, membranas basales, expuestos más, el quininógeno, de alto peso molecular, es
durante la injuria tisular) inicia la cascada de la un cofactor en la activación del factor Hageman.
coagulación, del sistema de las quininas y de la La calicreina por sí misma, al ser un activador de
fibrinolisis. La plasmina activa al sistema del com- este factor, permite la amplificación autocatalítica
plemento; factores derivados de éste participan en del estímulo inicial. Los neutrófilos y macrófagos
la inflamación aguda, como C3a y C5a, que ac- activados matan microorganismos por medio de
túan sobre el mastocito produciendo su enzimas lisosomales, intermediarios reactivos del
degranulación y liberando histamina, lo que pro- oxígeno y óxido nítrico, o sea también en relación
duce aumento de la permeabilidad vascular y con estos receptores de superficie celular se pue-
vasodilatación. C5a favorece la adhesión, de ver la unión entre función de reconocimiento y
quimiotaxis y activación de leucocitos. C3b es una funciones efectoras.

Figura 4-3. Sistemas mediadores del plasma en la inflamación. Proteínas de los sistemas de la coagulación, de la fibrinolisis, de
las cininas y del complemento interaccionan, participando como mediadores químicos de la inflamación. CAPM, cininógeno de
alto peso molecular; AP, activador del plasminógeno; PDF, productos de degradación de la fibrina.

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Con respecto a mediadores de la inflamación bios vasculares de aumento de flujo y de permeabi-
de origen celular los productos derivados del me- lidad, producidos por los mediadores químicos de
tabolismo del ácido araquidónico son fundamen- la inflamación y el reclutamiento de leucocitos ha-
tales (figura 4-4). Luego de su liberación desde cia los sitios de infección con la formación subse-
fosfolípidos de membranas a través de la activa- cuente del infiltrado inflamatorio. Este recluta-
ción de fosfolipasa A2, el ácido araquidónico es miento es estimulado por citoquinas y mediado
metabolizado a través de dos vías, la vía de la por moléculas de adhesión. Estas moléculas son
cicloxigenasa y la vía de la lipoxigenasa. En la glicoproteínas unidas a la membrana celular que
vía de la cicloxigenasa se obtienen secuen- permiten a la célula interactuar con otra (ver capí-
cialmente, entre otros metabolitos, los endoperó- tulo 12). La migración de los leucocitos se realiza
xidos prostaglandinas G2 y H2, tromboxano A2 a través del endotelio de la vénula postcapilar. Pro-
(agregante plaquetario y vasoconstrictor), ductos bacterianos como lipopolisacáridos e IL-1
prostaciclina o prostaglandina I2 (antiagregante y TNF secretados por macrófagos estimulan a las
plaquetario y vasodilatador) y las prostaglandinas células endoteliales para expresar secuencialmente
E2, F2α y D2 (vasodilatadores). El tromboxano A2 selectinas e integrinas que median la adhesión pre-
se sintetiza, fundamentalmente, en las plaquetas y ferencial de diferentes tipos de leucocitos. Las
la prostaciclina en las células endoteliales. En la selectinas intervienen en la unión inicial, laxa del
vía de la lipoxigenasa se genera el ácido leucocito con la célula endotelial y las integrinas
hidroperoxieicosatetraenoico (HETE), un potente median la unión estable entre aquellas células. Esta
agente quimiotáctico para los neutrófilos. El HETE unión es previa a la migración del leucocito a tra-
puede originar el leucotrieno A4, a partir del cual se vés de los espacios intercelulares endoteliales. Los
generan los leucotrienos B4 (factor quimiotáctico) quimioatractantes activan la adhesividad de las
y leucotrienos C4, D4 y E4, que aumentan la per- integrinas y dirigen la migración de los leucocitos
meabilidad vascular. El término leucotrieno se debe de acuerdo al gradiente de concentración de fac-
a que presentan una cadena conjugada triénica y tores quimiotácticos hasta llegar al foco de infec-
que se aislaron originalmente en los leucocitos. ción (figura 4-5).

Figura 4-4. Metabolitos del ácido araquidónico. Una vez Figura 4-5. Migración de leucocitos en inflamación. Varias
desesterificado por la fosfolipasa A2, el ácido araquidónico familias de moléculas de adhesión controlan la migración de
es metabolizado a través de las vías de la cicloxigenasa y de la leucocitos durante la inflamación; las selectinas facilitan el
lipoxigenasa. PGG2 y PGH2, endoperóxidos; PGI2, rodamiento (“rolling”), las quimioquinas dan las señales que
prostaciclina; PGE2, PGF2a y PGD2, prostaglandinas; HPETE, convierten la interacción de baja afinidad mediada por
ácido hidroxieicotetranoico; LTA4-LTE4, leucotrienos. selectinas en una interacción de alta afinidad mediadas por
integrinas previa a la extravasación de leucocitos.

La respuesta inflamatoria local se evidencia


semiológicamente por los cinco signos clásicos: Los neutrófilos inician el englobamiento a
aumento de volumen, eritema, aumento de tem- través de la proyección de pseudópodos alrede-
peratura local, dolor e impotencia funcional. Di- dor del microorganismo, y luego fusionan los po-
chos signos son la expresión clínica de los cam- los distales de aquellos, para formar el fagosoma.

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Los gránulos citoplasmáticos de los leucocitos tes, anemia de enfermedades crónicas y
polimorfonucleares se fusionan a la base del trombocitosis; balance nitrogenado negativo, pér-
fagosoma y descargan su contenido dentro de él. dida de masa muscular, disminución de la
Estos gránulos, como se dijo anteriormente, con- gluconeogénesis, aumento de la lipolisis del teji-
tienen enzimas y otras sustancias bactericidas o do adiposo y caquexia; disminución del zinc y del
bacteriostáticas. Cuando los fagocitos son activa- fierro sanguíneos; y aumento de la síntesis hepá-
dos por estímulos particulados o solubles, la vía tica de proteínas de fase aguda.
glicolítica y el shunt hexosamonofosfato, son es- En general, las proteínas de fase aguda tie-
timulados para producir nicotinamida adenina nen funciones destinadas a favorecer la elimina-
dinucleótido fosfato reducido (NADPH). NADPH ción de agentes infecciosos, limitar el daño tisular,
es un sustrato para la enzima NADPH oxidasa, favorecer la reparación y por lo tanto restablecer
que es activada. Esta activación reduce el oxíge- la homeostasis (tabla 4-4). Hay proteínas de fase
no molecular a anión superóxido, que es converti- aguda cuyos niveles séricos aumentan signifi-
do a H2O2, el cual por medio de la acción de la cativamente y se conoce su evolución durante el
mieloperoxidasa, también presente en fagocitos, curso de la infección. La variación de estos
forma OCl-, potente citotóxico (ver capítulo 3). parámetros tiene utilidad clínica para el seguimien-
Otra vía incluye la producción de óxido nítrico. to de las infecciones. Las proteínas de fase aguda
Los neutrófilos activados expresan una enzima cuyos niveles tienen mayor modificación son: Pro-
inducible llamada óxido nítrico sintetasa que ge- teína C reactiva y proteína amiloide sérico. Tam-
nera óxido nítrico a partir del aminoácido arginina bién aumenta MBL (“Mannose Binding Lectin”).
y oxígeno molecular; en presencia de otras espe- La Proteína C reactiva inicia su aumento sérico
cies reactivas de oxígeno dentro de la vacuola entre seis u ocho horas de iniciado el proceso, al-
fagocítica el óxido nítrico se convierte en otros canzando el máximo nivel a los dos o tres días. La
productos altamente tóxicos para microorga- Proteína C reactiva y MBL actúan como opsoninas
nismos. Hay un aumento del consumo de oxígeno y activan complemento, por lo tanto el huésped
por el neutrófilo llamado estallido respiratorio que puede disponer rápidamente de dos proteínas con
se produce inmediatamente después de la propiedades funcionales que facilitan la fagocitosis
fagocitosis. Estas vías oxidativas proporcionan y amplifican la respuesta inflamatoria. La concen-
algunos de los efectos antimicrobianos preponde- tración sérica de otras proteínas disminuye durante
rantes de los neutrófilos. La generación de radica- la respuesta de fase aguda; estas proteínas no son
les libres es regulada cuidadosamente para evitar requeridas para la defensa del huésped.
daño tisular por el sistema del glutatión, catalasa, La respuesta de fase aguda disminuye al eli-
superóxidodismutasa, etc. minarse la infección, por la inhibición de
La respuesta de fase aguda se caracteriza por citoquinas mediada por glucocorticoides y por
un conjunto de cambios que afectan al sistema ner- citoquinas reguladoras, como IL-10, que inhibe
vioso, endocrinológico y hematológico. También a los macrófagos activados. IL-10 está
se presentan alteraciones del metabolismo y de la involucrada en el control homeostático de la in-
nutrición. Pero, sin duda, lo más llamativo es la munidad innata.
respuesta febril y la síntesis de proteínas de fase En relación con la evolución temporal de la
aguda. Estos cambios reemplazan a los mecanis- respuesta inmune innata y adquirida, los mecanis-
mos homeostáticos normales por nuevos equili- mos innatos actúan inmediatamente ya que se pro-
brios y prioridades los que presumiblemente con- duce el reconocimiento por efectores preformados
tribuyen a mejorar la respuesta adquirida. La ma- inespecíficos (0-4 horas). Los mecanismos de in-
yor parte de estos cambios se presentan dentro de munidad innata son seguidos horas después por
las etapas iniciales de la infección y son mediados respuestas inducidas precoces (4-96 horas) que
por IL-1, TNF e IL-6. La síntesis de estas pueden ser activados por la infección pero no dan
citoquinas es inducida por lipopolisacáridos inmunidad protectora. Estas etapas precoces ayu-
bacterianos que estimulan al macrófago. La res- dan a mantener la infección bajo control mientras
puesta de fase aguda se caracteriza por la presen- los linfocitos específicos para el antígeno y que
cia de fiebre, somnolencia, anorexia; aumento de pertenecen al sistema inmune específico son acti-
ACTH, cortisol y catecolaminas y disminución de vados (más de 96 horas). Las citoquinas y molé-
“Insulin like growth factor 1” (IGF-1); aumento culas coestimuladoras producidas durante estas
de la cantidad de neutrófilos inmaduros circulan- etapas precoces tienen un importante rol en dar

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Tabla 4-4. Proteínas de fase aguda

Reactantes positivos Reactantes negativos

Complemento: Albúmina
C3, C4, C9, Factor B, MBL, Transferrina
Inhibidor de C1, C4b-bp. Transtiretina
Coagulación y fibrinolisis: IGF-1
Fibrinógeno, Plasminógeno, Factor XII
Activador tisular de plasminógeno, α Feto proteína
Uroquinasa, Proteína S, Vitronectina,
Inhibidor I del activador de plasminógeno.
Antiproteasas:
Inhibidor α1 proteasa, α1 Antiquimotripsina,
Inhibidor de la tripsina pancreática.
Proteínas de transporte:
Céruloplasmina, Haptoglobina, Hemopexina.
Otras:
Proteína C reactiva, Amiloide A sérico,
α1-Glicoproteína ácida, Fibronectina,
Ferritina, Angiotensinógeno, LPS-bp.

MBL: “Mannose binding lectin”; C4b-bp: C4b “binding protein”; LPS-bp: “Lipopolysaccharide binding
protein”; IGF-1: “Insulin like growth factor 1”.

forma a la respuesta inmune específica y puede se asocian con mayor frecuencia a pacientes que
determinar que una respuesta sea mediada por LT presentan deficiencias de este sistema. Estos pa-
o LB. cientes presentan infecciones muy graves y recu-
En la inmunidad innata, microorganismos que rrentes especialmente bacterianas o por hongos a
son reconocidos e ingeridos por macrófagos, acti- pesar de tener un sistema inmune adquirido intac-
van macrófagos o células presentadoras de to.
antígenos (CPA) para secretar citoquinas y expre- Es así como pacientes con alteraciones de
sar moléculas coestimuladoras como B7-1 y B7- barrera cutánea como los grandes quemados pre-
2 que en conjunto con el antígeno estimulan al LT sentan infecciones muy graves y pacientes con de-
específico. Microorganismos extracelulares que ficiencias cuantitativas o cualitativas de
son reconocidos a nivel sérico pueden activar com- polimorfonucleares neutrófilos presentan infeccio-
plemento; la proteína C3d liberada durante esta nes recurrentes principalmente bacterianas (ver
activación como producto de clivaje de C3 se une capítulo 30). Las deficiencias cualitativas pueden
a CR2 de LB específico para ese antígeno y que ser primarias (deficiencias de gránulos azurófilos
ha recibido, al reconocer al microorganismo, su y específicos, deficiencias de adhesión
primera señal de activación. CR2 es un receptor leucocitaria, deficiencias de generación de
para C3d que está presente en LB maduros. La metabolitos intermediarios del oxígeno, etc.) o
unión de C3d a CR2 da la segunda señal de acti- pueden ser adquiridos (deficiencias de quimiotaxis
vación para LB y de este modo se inicia la res- y fagocitosis que se observan en Diabetes Mellitus
puesta inmune humoral específica. e Insuficiencia Renal crónica).
Las deficiencias cuantitativas también pue-
den ser primarias o adquiridas. Neutropenias me-
5. PROYECCIÓN CLÍNICA nores a 500 células/µL, conllevan un serio riesgo
de infección por hongos o bacterias cuyo pronós-
La importancia de la inmunidad innata que- tico va a depender de la rapidez de la caída de los
da de manifiesto al pensar en las patologías que neutrófilos, de la reserva medular, de la duración

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y de la causa de la neutropenia. Entre las transducción de señales, disminución en la ex-
neutropenias adquiridas, las más importantes son presión de receptores en la superficie celular, al-
las autoinmunes y las secundarias a drogas teración de la estructura del citoesqueleto y dis-
citotóxicas. minución en la producción de intermediarios
Pacientes con deficiencias del sistema de reactivos del oxígeno. En los recién nacidos tam-
complemento se presentan con diferentes cuadros bién se ha descrito deficiencia de regulación de
clínicos según las fracciones del complemento expresión de moléculas de adhesión (selectinas e
que estén deficitarias (ver capítulos 18 y 30). Aque- integrinas) en PMN lo que podría explicar la falla
llos con deficiencias de C1, C2 y C4 presentan relativa de estas células para formar el infiltrado
asociación a patologías autoinmunes como Lupus inflamatorio.
Eritematoso Sistémico y discoide con mayor fre- Los monocitos en el recién nacido son seme-
cuencia que la población general. Aquellos con jantes a los de los adultos en cantidad, capacidad
déficit de C3, Factor H, Factor I, Properdina pre- fagocítica, capacidad microbicida, perfil enzimático
sentan susceptibilidad a infecciones piógenas. Por y propiedades migratorias al azar. Son
último los pacientes con déficit de los componen- funcionalmente deficientes en relación con la acti-
tes finales del sistema del complemento (Complejo vación de LT y en presentación antigénica de
de ataque a la membrana) y con déficit de los com- aloantígenos y antígenos virales. Los monocitos del
ponentes de la vía alterna son más susceptibles a recién nacido presentan menor capacidad de pro-
infecciones fulminantes por Neisserias. ducción de IL-6 y TNF. Este hecho conlleva menor
Existen déficit inmunes fisiológicos que con- reactividad inflamatoria y menor respuesta febril
tribuyen a una mayor susceptibilidad a infeccio- en esta etapa de la vida. La adhesión de los
nes en pacientes pediátricos. En el período de re- monocitos está disminuida lo que incide en el re-
cién nacido la inmadurez del sistema inmune ines- clutamiento de estas células al foco de infección.
pecífico contribuye a este hecho. Se puede evi- La actividad de las células NK en los recién
denciar también la importancia de la inmunidad nacidos está disminuida con respecto al adulto.
innata al revisar la maduración de los componen- Responden menos a señales de activación
tes de ésta durante la etapa postnatal y en los pri- exógenas.
meros años de vida y su relación con la inmuni- Durante el período de lactante hay una ma-
dad adquirida. La respuesta inmune específica a duración de los fagocitos y un aumento progresi-
la mayoría de los antígenos depende de comple- vo de las concentraciones de complemento.
jas interacciones entre macrófagos, LT y LB. Pero
la expresión completa de mecanismos de defensa
del huésped requiere la maduración de otras lí- 6. FILOGENIA DE LA RESPUESTA INMU-
neas celulares y componentes séricos relaciona- NE INNATA
dos con la fase efectora de la inmunidad. Esto in-
cluye complemento, fagocitos, mastocitos, Los mecanismos de la inmunidad innata es-
basófilos, etc., que son componentes de la inmu- tán presentes en todos los organismos en diferen-
nidad innata. En el recién nacido los niveles de te forma. La defensa del huésped en invertebra-
complemento son bajos en comparación con los dos es mediada por células y moléculas que se
del adulto, y los fagocitos presentan una inmadu- parecen a los mecanismos efectores de la inmuni-
rez fisiológica. Hay una producción defectuosa y dad innata de los organismos superiores.
una migración disminuida de polimorfonucleares Los invertebrados, por ejemplo,
al foco infeccioso. Hay una capacidad disminuida equinodermos, anélidos y artrópodos, poseen ba-
de la “stem cell” para responder a las demandas rreras defensivas físico químicas, procesos de coa-
de la infección. Además, la producción de factor gulación y cicatrización de heridas. La fagocitosis
estimulador de colonias de granulocitos y está presente en todos los invertebrados. Los
monocitos (GM-CSF) por monocitos está dismi- equinodermos y artrópodos además poseen facto-
nuida. También se ha invocado déficit funciona- res humorales defensivos naturales o inducibles y
les intrínsecos de los PMN del recién nacido. Es- un sistema lítico análogo al complemento. En al-
tos pueden presentar defectos en adherencia, agre- gunos invertebrados como esponjas, celenterados,
gación, migración, fagocitosis y funciones anélidos, artrópodos, tunicados y equinodermos
microbicidas. Esto se ha asociado con déficit de hay reacciones de reconocimiento de injertos
maduración que se expresa en alteración de la alogénicos, limitadas y de corta duración. Los

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mecanismos específicos y especializados propios Janeway, C.A.; Travers, P.; Walport, M.; Capra,
de la inmunidad adquirida se encuentran sólo en J.D., Immunobiology. The immune system in
vertebrados. No obstante lo anterior, existen se- health and disease, Fourth edition, Current
mejanzas entre reconocimiento de patógenos, vías Biology Publications, Elsevier Science Ltd./
de señales y mecanismos efectores de inmunidad Garland Publishing, London, 1999.
innata en animales inferiores y mamíferos lo que
apunta a un ancestro común de estas defensas. Jurlow, E., Ed. Inflamación y reparación tisular,
Recientemente, la inmunidad innata ha logra- Mediterráneo, Santiago, 1996.
do despertar mayor interés en investigación ya que
la permanencia de sus mecanismos en especies Kopp, E.B.; Medzilitov, R., “The Toll-receptor
más evolucionadas que cuentan con el sistema de family and control of innate immunity”, Current
inmunidad adquirida, avala su eficacia en la pri- Opinion in Immunology; 11:13-18, 1999.
mera línea de defensa, y conjuntamente con eli-
minar la infección, es capaz de estimular y orien- Mackay, I.; Rosen, F.S.; Delves, P.J.; Roitt, I.M.,
tar la respuesta inmune específica. “The immune system”, New Engl J Med; 343
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Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

SECCIÓN II
ESPECIFICIDAD DE LA
RESPUESTA INMUNE

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Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 5

ANTÍGENOS

María Inés Becker C. y Alfredo De Ioannes I.

1. Introducción 4.2. Carbohidratos


2. Conceptos generales 4.3. Lípidos
2.1. Antígeno 4.4. Ácidos nucleicos
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad 5. Clasificación de los antígenos según
2.3. Determinante antigénico las células inmunes involucradas en
2.4. Haptenos la respuesta
3. Características del antígeno que lo 5.1. Antígenos timo-dependientes
hacen inmunogénico 5.2. Antígenos timo-independientes
3.1. Tamaño 6. Clasificación general de los antí-
3.2. Presencia de grupos químicos ac- genos según su función
tivos 6.1. Antígenos de trasplante
3.3. Conformación espacial de 6.2. Antígenos tumorales
los epítopos 6.3. Autoantígenos
3.4. Movilidad atómica 6.4. Antígenos de diferenciación
4. Naturaleza química de los antí- 6.5. Superantígenos
genos 6.6. Alergenos
4.1. Proteínas

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RESUMEN

Los antígenos son compuestos de diversa naturaleza química –provenientes del medio o
generados por el propio organismo- que son capaces de inducir una respuesta inmunológica en
los vertebrados, propiedad denominada inmunogenicidad. La interacción del antígeno con los
productos de la respuesta inmune y especialmente, con los anticuerpos –propiedad denominada
antigenicidad- ha permitido conocer la estructura y función de numerosos antígenos, demostrán-
dose que los productos de la respuesta inmune interactúan con regiones específicas del antígeno,
denominadas epítopos, los cuales pueden corresponder a una secuencia aminoacídica determina-
da (epítopos lineales) o a un arreglo espacial de la cadena polipeptídica (epítopos
conformacionales).
Aunque la capacidad inmunogénica de un antígeno depende de su naturaleza química in-
trínseca (tamaño, forma, movilidad atómica, presencia de grupos químicos activos y residuos
aromáticos) también está relacionada con la capacidad de respuesta del organismo y, en este
sentido, son determinantes sus características genéticas y su historial inmunológico.

1. INTRODUCCIÓN conceptos de vitalidad y patogenicidad eran per-


fectamente disociables de la inmunogenicidad, lo
Los conceptos de antígeno e inmunógeno son que determinó que la inmunología se
tan antiguos como la inmunología. Inicialmente independizara de la microbiología. Fue en esta
se asoció el concepto de vitalidad y patogenicidad época cuando Landsteiner, padre de la
a la capacidad de inducir una respuesta inmune inmunoquímica, acuñó el concepto de determinan-
protectora: los inmunólogos del siglo pasado se te antigénico o epítopo y definió serológicamente
resistían a pensar que algo inerte e inocuo –esen- los grupos sanguíneos humanos.
cialmente inútil- pudiera despertar una respuesta
inmune. Esa línea de pensamiento asociaba a la 2. CONCEPTOS GENERALES
microbiología como una disciplina secundaria, li-
mitando el desarrollo de vacunas para la profilaxis 2.1. Antígeno
de enfermedades graves que afectaban a la huma-
nidad. Con el tiempo, la patogenicidad como re- La definición de antígeno deriva de la esen-
quisito de la inmunogenicidad, cedió el paso al cia misma del sistema inmune: su capacidad para
uso de cepas bacterianas atenuadas, o, simplemen- reconocer en forma específica, en una molécula,
te se utilizaron microorganismos con reacción cru- características que no son constituyentes norma-
zada para inducir una protección efectiva, siendo les del organismo, mediante la activación de
el caso más notable el desarrollo de la vacuna para linfocitos B o T.
la viruela por Jener. La demostración por parte de Los antígenos pueden ser compuestos de di-
Ehrlich y Von Behring que microorganismos muer- versa naturaleza química provenientes del medio,
tos por fijación con formaldehído o por calenta- que se encuentran presentes en microorganismos,
miento eran inmunogénicos, fue un nuevo paso plantas, alimentos, fármacos y cosméticos, etc.
para acercarse a la esencia del reconocimiento Los antígenos también pueden ser compuestos que
inmunológico. se generan en el organismo como resultado del
A principios de este siglo, se pudo inducir metabolismo en el caso de la detoxificación de
inmunidad protectiva con fracciones de drogas, como resultado de una transformación
microorganismos, los toxoides, que son exotoxinas neoplásica (antígenos tumorales) o como mani-
bacterianas inactivadas, demostrándose que los festación de enfermedades autoinmunes

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(autoantígenos). cuerpo, también pueden ser aplicados a la re-
lación del antígeno con receptores específicos
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad de las células T. Sin embargo, a los fragmen-
tos peptídicos presentados clásicamente por los
Dos propiedades de un antígeno son MHC a los Receptores de células T (TCR), se
inmunogenicidad y antigenicidad. han agregado lípidos y glicolípidos presentes
Cuando un antígeno induce una respuesta del en micobacterias que son presentados por
sistema inmune se dice que es inmunogénico, pro- CD1.
piedad que está íntimamente relacionada con la En resumen, gran parte del conocimiento dis-
capacidad de estimular linfocitos T en el caso de ponible sobre la estructura y función de numero-
las proteínas y con la actividad mitogénica de los sos antígenos se debe a que ha sido posible desa-
polisacáridos en las células B. Aunque la capaci- rrollar anticuerpos específicos contra ellos; esto
dad inmunogénica de una molécula depende de ha permitido estudiar las regiones del antígeno con
varios factores intrínsecos relacionados con su las cuales dichos anticuerpos interactúan y tam-
estructura química, esta propiedad es la sumatoria bién ha hecho posible comprender las condicio-
de una serie de influencias que reflejan tanto el nes y mecanismos fisicoquímicos que gobiernan
historial inmunológico del animal como los atri- esta interacción.
butos genéticos de que éste dispone para recono-
cerlo como tal. Es decir: el repertorio de células 2.3. Determinante antigénico
B, la actividad de células T “helper” y células T
supresoras, la red idiotipo-anti-idiotipo y el Com- El lugar de reconocimiento específico de los
plejo Principal de Histocompatibilidad (MHC) anticuerpos en el antígeno se denomina deter-
(ver capítulo 8). minante antigénico o epítopo. En general, los
Recientemente, se ha postulado que las mo- epítopos presentes en proteínas y macromo-
léculas, para ser inmunogénicas además de ser léculas corresponden a zonas flexibles que po-
capaces de ser reconocidas por los receptores seen grupos químicos ricos en posibilidades de
específicos, deberían generar señales de peli- interacción con el sitio activo de los anticuerpos.
gro para el sistema inmune por medio de recep- Como se verá más adelante, la presencia de gru-
tores de la respuesta innata, como son los de la pos aromáticos y de regiones con alta movilidad
familia Toll, descritos inicialmente en atómica es determinante en la interacción
Drosophilia melanogaster, que reconocen es- antígeno-anticuerpo.
tructuras más generales presentes en compues- Los antígenos proteicos pueden contener uno
tos bacterianos como son el LPS por el receptor o más determinantes antigénicos diferentes -a me-
TLR4, péptido glicanos, lipoproteínas nos que la proteína tenga subunidades o segmen-
bacterianas y lipoarabino-mananos de tos repetidos- y, en teoría, cada uno de ellos pue-
micobacterias por el receptor TLR2. El DNA de interactuar con un anticuerpo.
bacteriano con motif CpG es reconocido por La observación que los anticuerpos produci-
TLR9. La estimulación de estos receptores fi- dos contra una proteína nativa a menudo no reac-
nalmente converge en la activación del factor cionan con la proteína desnaturalizada, llevó a de-
NFkB, que induce la expresión de genes defen- finir dos clases de determinantes antigénicos: los
sivos y pro-inflamatorios en células claves de de tipo lineal o secuencial y los de tipo
la respuesta innata. Por esta razón, la incorpo- conformacional o discontinuo, como lo ilustra
ración de bacterias o productos de ellas en los la figura 5-1, utilizando la proteína lisozima como
adyuvantes para aumentar la inmunogenicidad modelo.
de proteínas, tiene como fundamento la Los determinantes lineales, derivan de la es-
estimulación de células accesorias del sistema tructura primaria de la proteína; corresponden a
inmune. epítopos formados por aminoácidos adyacentes en
El término antigenicidad se refiere a la la secuencia polipeptídica, y se calcula que el ta-
capacidad de interacción de un antígeno con maño necesario de un epítopo para unir un anti-
los productos de una respuesta inmune, ya sea cuerpo específico es de unos seis aminoácidos de
con anticuerpos o con células T. Aunque mu- longitud. Estos epítopos se localizan en la super-
chos de los conceptos definidos aquí han sur- ficie o en una región extendida de la molécula. Si
gido del estudio de la reacción antígeno-anti- los determinantes lineales se encuentran al inte-

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Figura 5-1. Estructura antigénica de la lisozima de huevo de pollo. La lisozima es una pequeña proteína globular cuya estruc-
tura primaria consiste en una cadena polipeptídica de 129 aminoácidos unida por cuatro puentes disulfuro. Estudios cristalográficos
apoyados con antisueros convencionales de cabra y conejo y anticuerpos monoclonales murinos, han permitido definir en su
estructura antigénica 8 péptidos principales denominados de la siguiente forma: N-C; LII, pIb; una región continua entre los
aminoácidos 34 y 54 dentro de pIb; péptido 8; región del “loop” (asa) entre los residuos 60 a 83; “loop” II y “loop” III. Para
determinar la importancia de diferentes aminoácidos en la unión de los anticuerpos, se han realizado estudios con anticuerpos
dirigidos contra la región del “loop” (la más inmunogénica, junto con el péptido N-C) utilizando lisozima obtenida de huevos de
diferentes aves, péptidos derivados de la proteína nativa y péptidos sintéticos en que algunos aminoácidos han sido modificados.
Los resultados demuestran claramente que no todos los aminoácidos de esta región contribuyen a la antigenicidad de este péptido,
siendo la arginina que se encuentran en la posición 68, el requerimiento principal para la unión de los anticuerpos. Se ha demostra-
do que la antigenicidad de esta molécula depende de su estructura conformacional intacta, puesto que existe muy poca reacción
cruzada entre lisozima nativa y desnaturada.

rior de la proteína, es necesario desnaturalizarla la lisozima, el citocromo c y la albúmina del sue-


para hacer accesibles los anticuerpos. ro. Los estudios con estas proteínas han permiti-
Los determinantes conformacionales corres- do definir los siguientes conceptos sobre la estruc-
ponden a epítopos derivados del arreglo espacial tura antigénica de las proteínas: (a) prácticamente
o plegamiento de la cadena peptídica; es decir, de- toda la superficie de una proteína puede ser
penden de la estructura secundaria y terciaria de inmunogénica y antigénica a la vez y puede in-
la proteína, siendo en ciertos casos estabilizados cluir múltiples determinantes antigénicos a me-
por puentes disulfuro. nudo sobrepuestos. (b) muchos sitios antigénicos
Con ayuda de los anticuerpos monoclonales presentan un arreglo tridimensional de residuos
(ver capítulo 44) -una de cuyas propiedades más de aminoácidos que requieren la conformación
poderosas es que se unen a un sólo epítopo del nativa de la proteína, para su integridad antigénica.
antígeno- se ha logrado conocer la estructura c) en un antígeno dado, los determinantes poten-
antigénica completa de algunas proteínas globu- cialmente inmunogénicos varían de una especie a
lares, que han sido utilizadas como antígenos otra y dependen tanto de las diferencias estructu-
modelo. Entre ellas se encuentran la mioglobina, rales entre el antígeno y las proteínas propias del

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huésped como de los mecanismos que regulan las masa molecular inferior a 5 kDa (alergenos, dro-
interacciones entre las diferentes subpoblaciones gas, mono u oligosacáridos y oligopéptidos) sólo
celulares que desarrollan la respuesta inmune. pueden actuar como inmunógenos al ser acopla-
De tal modo, se puede decir que en algunas das químicamente a macromoléculas de
proteínas los epítopos están suficientemente se- inmunogenicidad probada, que funcionan como
parados como para unir anticuerpos específicos transportadoras; son los denominados haptenos.
sin interferirse; pero, algunas moléculas tienen La base del concepto de la íntima relación de
epítopos sobrepuestos y, a menudo, la unión del la respuesta inmune a un antígeno con su estruc-
primer anticuerpo puede interferir estéricamente tura química, fue planteada por Landsteiner a prin-
con la unión de otro anticuerpo. Además hay ca- cipios del siglo XX. Este investigador acopló va-
sos de epítopos que se exponen a raíz de un cam- rios haptenos a diferentes proteínas transportado-
bio conformacional producido por la unión de un ras y demostró que los anticuerpos producidos
anticuerpo a otro epítopo de la molécula. Final- contra estas proteínas conjugadas artificialmente,
mente, se pueden producir neoepítopos como re- exhibían reacciones específicas con los grupos
sultado, por ejemplo, del tratamiento de una pro- introducidos (figura 5-2). Debido a que también
teína con proteasas. se formaban anticuerpos contra la proteína trans-
Cabe destacar que el conjunto de anticuerpos portadora, para evidenciar la antigenicidad del
que predominan después de una inmunización con hapteno, fue preciso emplear antígenos de prue-
una proteína nativa, no es igual al repertorio po- ba, en los que el mismo hapteno estaba acoplado
tencial total del animal. Ciertas secuencias y a a una proteína no relacionada.
veces residuos individuales sobre la superficie de Cuando se desarrollan anticuerpos
la proteína, pueden identificarse como policlonales o monoclonales contra un hapteno,
inmunodominantes: son aquellos a los cuales se se observa que, en gran parte de ellos, el recono-
dirige la mayor parte de la respuesta inmune. Esto cimiento del hapteno depende total o parcialmen-
puede deberse a propiedades estructurales espe- te de nuevas estructuras, generadas por el tipo
ciales intrínsecas de esa región y a factores de enlace químico aportado por el agente
genéticos propios del animal. acoplante. Este hecho tiene gran trascendencia:
El elemento estructural del determinante si los anticuerpos están destinados a reconocer
antigénico que se proyecta distalmente desde la el hapteno en solución como en el caso de un
masa central del antígeno y, que aporta mayor can- RIA o un ELISA de competencia (ver capítulo
tidad de energía libre para la interacción con el 40), la única forma para que esto ocurra será mo-
anticuerpo, se denomina grupo inmuno- dificando el hapteno con el mismo compuesto
dominante y determina la especificidad del anti- utilizado para acoplarlo a la proteína transporta-
cuerpo. Este concepto surgió de los estudios para dora.
determinar las fuerzas responsables de la estabili- En conclusión, los haptenos no inducen la
dad de la unión antígeno-anticuerpo. Dado que producción de anticuerpos pero sí son capaces de
ellas afectan la especificidad de la unión, se pue- reaccionar específicamente con ellos, ofreciendo
de afirmar lo siguiente: Los anticuerpos reaccio- al inmunólogo un modelo excepcional para inves-
nan más efectivamente con antígenos que estimu- tigar los mecanismos de la reacción antígeno-an-
lan su formación que con otros. Dentro de este ticuerpo, ya que la estructura de por lo menos uno
contexto, se les designa como antígenos de los reactivos, el hapteno, es conocida.
homólogos. Sin embargo, ocasionalmente, como
resultado de una reacción cruzada, algunos
anticuerpos reaccionan con mayor afinidad con un 3. CARACTERÍSTICAS DEL ANTÍGENO
antígeno heterólogo (antígeno diferente al que QUE LO HACEN INMUNOGÉNICO
generó el anticuerpo) que con uno homólogo; es
el caso de los anticuerpos denominados Como se ha mencionado, existen varios fac-
heteroclíticos. tores que influyen en la inmunogenicidad de una
proteína. Algunos son de carácter intrínseco y tie-
2.4. Haptenos nen que ver con su propia naturaleza química, lo
que determina su hidrofilicidad y su flexibilidad.
No todas las moléculas son inmunogénicas; En cambio, otros factores son extrínsecos y están
por ejemplo, numerosas substancias pequeñas de relacionados con la capacidad de respuesta del ani-

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Figura 5-2. Efecto sobre la reacción antígeno-anticuerpo de la posición y naturaleza de grupos hapténicos substituidos en
una proteína transportadora. Landsteiner desarrolló antisueros de conejo específicos contra globulina de suero de caballo
substituida con haptenos como sulfonato de m-aminobenceno (A) y p-azotoluidina (B). Luego estudió, mediante reacciones de
precipitación, el efecto que producían sobre la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo, modificaciones de la posición y
naturaleza de los grupos hapténicos substituidos en globulina de pollo. La intensidad de la reacción observada (cantidad de
precipitado) se señala en una escala arbitraria que va desde 0 a dos cruces (++). La reacción con el hapteno homólogo se destaca
en negrita.

mal y con la dosis de antígeno: concentraciones 3.1. Tamaño


muy pequeñas no producen estimulación de la res-
puesta inmune y concentraciones muy elevadas Se sabe que las proteínas de masa molecular
pueden inhibirla. superior a 10 kDa son inmunogénicas. Sin em-
En la última década, con el desarrollo de bargo, algunas proteínas de menor masa, inocula-
la tecnología de péptidos sintéticos, se ha iden- das con un coadyuvante apropiado, inducen la pro-
tificado las propiedades de una molécula que ducción de anticuerpos; también ocurre lo inver-
inciden directamente en su inmunogenicidad. so es decir existen proteínas de elevada masa
Así, construyendo péptidos de un mismo molecular que no son buenos inmunógenos; es el
aminoácido, péptidos que combinan las diferen- caso de las histonas, las protaminas y la gelatina.
tes propiedades de los aminoácidos, péptidos Su falta de inmunogenicidad se explica en parte
lineales y ramificados, elaborados exclusiva- porque carecen de grupos químicos activos.
mente con la forma D o L de los aminoácidos o
con mezclas de ambos, ha quedado en eviden- 3.2. Presencia de grupos químicos activos
cia que, para la producción de anticuerpos es
determinante la ramificación y arreglo espacial Ha quedado en evidencia que la inmuno-
del péptido, la naturaleza levogira (L) de los genicidad de las proteínas depende de la presen-
aminoácidos y la presencia de aminoácidos con cia de ciertos grupos químicos activos, especial-
núcleos aromáticos. mente los de carácter polar.

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La presencia en la superficie de las proteínas 4. NATURALEZA QUÍMICA DE LOS
de aminoácidos con residuos aromáticos o con gru- ANTÍGENOS
pos cargados positivos (Lisina) o negativos
(Glutámico y Aspártico) contribuye a aumentar su En general las proteínas son las moléculas
antigenicidad. más inmunogénicas y, en orden decreciente, les
Otro aminoácido frecuentemente siguen los carbohidratos, los lípidos y los ácidos
involucrado es Tirosina y un buen ejemplo de la nucleicos.
importancia de este aminoácido es la proteína
Nicrosina presente en invertebrados. El estudio 4.1. Proteínas
cristalográfico de Nicrosina no revela en condi-
ciones normales la presencia de una tirosina ex- Las proteínas son antígenos timo dependien-
puesta en la superficie; pero la síntesis de la pro- tes, es decir, en su reconocimiento participan
teína recombinante, en la que se introduce un linfocitos T y B. Debido a su gran complejidad
cambio en el residuo de tirosina no expuesto, estructural, puesto que además de estructura
conduce a la pérdida de un epítopo. Un análisis primaria, secundaria y terciaria, poseen múltiples
de cristales de Nicrosina que incluyen el Fab de epítopos, lo que las hace a la vez antigénicas e
un anticuerpo monoclonal contra ella, muestra inmunogénicas. La agregación y la presencia de
claramente que, a consecuencia de la interacción formas poliméricas aumentan la inmunogenicidad
antígeno-anticuerpo, se produce un cambio de las proteínas.
conformacional en la proteína: la Tirosina emerge Para conocer la estructura antigénica de al-
a la superficie y participa activamente en la gunas proteínas, se ha usado la cristalografía y,
interacción. Este ejemplo, pone de manifiesto la sin duda, la herramienta más utilizada actualmen-
notable dinámica de la reacción antígeno-anti- te son los anticuerpos monoclonales, que han per-
cuerpo y la importancia de la movilidad atómica mitido realizar mapeos epitópicos precisos de nu-
en la definición de un epítopo. merosas proteínas modelo -como Lisosima,
Mioglobina y Albúmina- y también de proteínas
3.3. Conformación espacial de los epítopos utilizadas en la formulación de vacunas para hu-
manos, por ejemplo, el antígeno de superficie del
La palabra epítopo presupone que las regio- virus de la Hepatitis B y las proteínas de la cu-
nes antigénicas corresponden a prominencias so- bierta del virus del SIDA.
bre la superficie de la molécula, lo cual es válido El análisis antigénico de proteínas virales tie-
en muchos casos; pero también se ha descrito que ne gran relevancia, puesto que mediante síntesis
pueden ser hondonadas de la superficie y que el peptídica, se cree que podrían construirse vacu-
sitio de unión del anticuerpo se introduce en la nas compuestas de aquellos péptidos que produ-
cavidad epitópica. cen anticuerpos capaces de neutralizar la
infectividad viral. Esta idea ha sido abordada
3.4. Movilidad atómica experimentalemente con varios modelos, entre
ellos se ha utilizado dos antígenos de superficie
Dado que el repertorio de receptores del sis- del virus de la influenza, denominados
tema inmune humoral es finito y se genera du- Hemaglutinina (HA) y Neuraminidasa (NA).
rante el desarrollo embrionario de los También este concepto se ha aplicado en el análi-
vertebrados, antes de la exposición con los sis de antígenos de patógenos como Plasmodium
antígenos, la posibilidad de que una estructura falciparum (agente causal de la malaria) y de
antigénica se una a algún receptor depende de su Tripanosoma cruzi (agente causal de la Enferme-
capacidad de interactuar con cierta afinidad con dad de Chagas) que poseen mecanismos que les
un receptor preexistente. Por lo tanto, la flexibi- permiten evadir la respuesta inmune del hospede-
lidad de las estructuras antigénicas contribuye a ro; sin embargo, a la fecha no se tienen resultados
su antigenicidad ya que les permite adaptarse a plenamente satisfactorios.
receptores preexistentes. Este fenómeno también Otro ejemplo de antígeno proteico es el sis-
se observa en las regiones hipervariables de los tema antigénico Rh de los glóbulos rojos. El sis-
anticuerpos, que también presentan alta movili- tema Rh es uno de los sistemas sanguíneos más
dad molecular. polimórficos, ya que a la fecha se han descrito 47
antígenos diferentes, siendo comunes sólo cinco,

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que se denominan: D, C, c, E y e (ver capítulo en trasplantes y en otros procesos patológicos (ver
26). El antígeno más importante de este sistema capítulo 26).
es el antígeno proteico D, ya que su tipificación El sistema ABO fue descrito a principio de
determina que la sangre del paciente sea clasifi- este siglo por Landsteiner, quien descubrió que el
cada como Rh positiva (presencia del antígeno D) suero de dadores humanos normales aglutinaba a
o negativa (ausencia del antígeno D). La proteína los eritrocitos de otros dadores. Al analizar el pa-
D está compuesta por 417 aminoácidos, tiene una trón de reacciones, definió los principales
masa molecular en torno a 30 kDa y no es antígenos de este sistema como A, B y O, que co-
glicosilada. Presenta 12 dominios transmembrana rresponden a determinantes antigénicos de natu-
ricos en aminoácidos hidrofóbicos. La diferencia raleza oligosacárida. Los antígenos del sistema
entre los antígenos D, difiere de C/c y E/e se basa ABO se heredan en forma autosómica, siendo los
en cambio de aminoácidos. El paso de eritrocitos genes A y B codominantes entre sí y dominantes
fetales a la circulación materna puede inducir sobre O.
anticuerpos anti Rh (D+) en la madre cuando ésta El sistema ABO se caracteriza por su ubi-
carece de estos antígenos (ver capítulo 26). cuidad, puesto que los antígenos están presentes
en alta densidad sobre la superficie de los
4.2. Carbohidratos eritrocitos y células epiteliales y también se reco-
nocen en numerosas secreciones como la saliva,
Los determinantes antigénicos de numerosas leche, y mucosa gástrica, entre otras. Los antígenos
substancias de interés biológico, corresponden a del sistema ABO se caracterizan también porque
carbohidratos que se encuentran en glicolípidos y en un individuo existe la presencia natural de
glicoproteínas. Buenos ejemplos son el lipopo- anticuerpos IgM contra el producto de el o los
lisacárido (LPS) de las bacterias Gram-negativas alelos que él no posee. La formación de estos
y el sistema de antígenos de grupo sanguíneo en anticuerpos se explica en parte, por la ubicuidad
humanos, como el sistema ABO. de este tipo de oligosacáridos, ya que también se
encuentran antígenos muy similares en la pared
LPS de numerosas bacterias, algunas de las cuales se
localizan en la flora normal del intestino. Por otra
La diversidad antigénica entre las especies parte, también se postula que se formarían como
de bacterias Gram negativas, reside en las dife- consecuencia del paso de eritrocitos maternos a la
rencias estructurales de los componentes del LPS, circulación fetal en el momento del parto.
antiguamente denominado endotoxina, porque El conocimiento de la estructura química de
estaba unido a la célula y tenía carácter los antígenos ABO se facilitó enormemente por el
termoestable. El LPS es el principal blanco de la hecho que los determinantes antigénicos corres-
respuesta inmune humoral contra este tipo de ponden a oligosacáridos, que pueden ser prepara-
patógenos. dos mediante síntesis química. Por lo tanto, fue
La estructura química del LPS puede divi- posible utilizarlos en estudios de inhibición de la
dirse en tres regiones: el polisacárido O-específi- aglutinación de eritrocitos por haptenos. Posterior-
co, que también actúa como sitio receptor para mente, se realizó un avance enorme con el adve-
algunos bacteriófagos y confiere la especificidad nimiento de los anticuerpos monoclonales, pues-
serológica; el polisacárido central, que contiene to que permitieron realizar una fina disección de
ácido 2-ceto-3-desoxioctónico (KDO) y heptosa, los diferentes tipos de cadenas oligosacáridas pre-
que son compuestos exclusivos de bacterias; y, sentes en cada grupo.
finamente, el lípido A (región III) donde reside la Desde el punto de vista bioquímico, los
toxicidad. antígenos del sistema ABO están constituidos por
cadenas de oligosacáridas, formadas por azúcares
Sistema ABO unidos por enlaces a (1-2 ó 1-4) b (1-3), producto
de la acción de glicosiltransferasas -del tipo
En humanos, se conocen actualmente 19 sis- fucosil, N-acetil y galactosil transferasas- que ac-
temas de grupos sanguíneos, que suman más de túan sobre un substrato tetrasacárido denominado
200 antígenos. Sin embargo, dos de ellos el siste- paraglobósido. Este posee una galactosa como
ma ABO y el sistema Rh, son los de mayor impor- residuo terminal, unida por enlace b (1-3) o b (1-
tancia clínica desde el punto de vista transfusional, 4), según se trate de un tetrasacárido tipo I (en

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antígenos secretados) o tipo 2 (sobre eritrocitos), Es importante destacar que dentro de cada
respectivamente. Posteriormente, sobre la grupo existen variaciones: son los subgrupos de A
galactosa terminal actúa una fucolsiltransferasa de- y B, que reflejan diferencias cuantitativas, según
nominada H, que le adiciona una fucosa por enla- el número de epítopos presentes en la superficie
ce a (1-2). De esta forma, se completa una cadena del eritrocito y cualitativas, según el largo y rami-
denominada antígeno H, que está presente en la ficación de las cadenas oligosacáridas.
membrana plasmática de todos los eritrocitos, an-
clada vía una proteína integral de membrana de- 4.3. Lípidos
nominada Banda 3 (figura 5-3).
La especificidad antigénica en los individuos Los lípidos son, en general, poco inmuno-
del grupo A, está dada por la adición de N- génicos, fundamentalmente por su poca
acetilgalactosamina a la substancia H y, en los solubilidad en agua; sin embargo, al unirse a pro-
individuos del grupo B, por la adición de galactosa, teínas, algunos pueden generar epítopos. En el
azúcares que constituyen el grupo caso de lípidos compuestos, como los lipopolisa-
inmunodominante de los determinantes cáridos de las bacterias Gram negativas, la frac-
antigénicos A y B, respectivamente. Los indivi- ción lipídica participa activamente en la
duos del grupo O sólo poseen el antígeno H. mitogenicidad de estas substancias.

Figura 5-3. Estructura de los antígenos ABO de grupo sanguíneo humano. Los antígenos ABO tienen estructura de tipo
carbohidrato y están presentes en numerosos tejidos, siendo sintetizados bajo el control de varios genes que codifican para
glicosiltransferasas. Se pueden expresar de diferentes formas: como oligosacáridos en la orina, como glicoproteínas en las secreciones
y fluidos corporales y como glicolípidos en las membranas de numerosas células. El compuesto básico inicial desde el cual crecen
las cadenas oligosacáridas que conforman los antígenos ABO, es un compuesto de tipo cerámido (formado por una molécula de
glucosa y galactosa) que está anclado a un glicolípido. Sobre el paraglobósido actúa una transferasa que agrega una fucosa (Fuc)
en el azúcar terminal, formándose de esta forma el producto denominado substancia H, que posteriormente es convertida en
substancia A o B por la apropiada adición de una molécula de N-acetilgalactosamina (Galnac) o galactosa (Gal) respectivamente.
(Glu), glucosa.

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4.4. Ácidos nucleicos independientes. Entre las propiedades que pre-
sentan estos antígenos podemos mencionar las si-
Los ácidos nucleicos son poco inmuno- guientes: (a) Son moléculas de gran tamaño con
génicos ya que para inducir anticuerpos requieren epítopos repetidos, lo que les permite interactuar
ser conjugados a proteínas inmunogénicas. Sin con múltiples receptores de la superficie, dando
embargo, en varias patologías de tipo autoinmune como resultado una reacción de alta avidez que
-en que componentes normales del organismo pa- induce el coronamiento (“capping”) de los mis-
san a ser autoantígenos- es frecuente observar la mos, (b) Son mitogénicos, es decir, inducen proli-
presencia de anticuerpos anti-DNA, actividad que feración de los linfocitos B y (c) Pueden activar la
ayuda al diagnóstico de las enfermedades. De he- vía alternativa del complemento.
cho, existen anticuerpos que reconocen diferen-
tes formas de DNA como el denominado tipo Z,
entre otros. 6. CLASIFICACIÓN GENERAL DE LOS
ANTÍGENOS SEGÚN SU FUNCIÓN

5. CLASIFICACIÓN DE LOS ANTÍGENOS 6.1. Antígenos de trasplante


SEGÚN LAS CÉLULAS INMUNES INVO-
LUCRADAS EN SU RECONOCIMIENTO El trasplante de tejido incompatible y la ma-
ternidad multípara van acompañados de la induc-
5.1. Antígenos timo-dependientes ción de altos títulos de anticuerpos que reconocen
a los antígenos de histocompatibilidad, especial-
Abundante evidencia experimental muestra mente de Clase I. Esto se debe al alto polimorfismo
que la producción de anticuerpos por las células genético de la cadena pesada de estas moléculas
B contra numerosos antígenos y especialmente en la especie humana y en los animales superio-
para los de naturaleza proteica requiere de la ayu- res. Estos antisueros naturales, han sido una he-
da de células T, de ahí que se los denomine rramienta fundamental para entender las reglas que
antígenos timo-dependientes. En la década de gobiernan la histocompatibilidad y prolongar la
los 60, dos grupos de investigadores, Miller y sobrevida de los trasplantes. Los antígenos o mo-
Mitchell en Australia y Claman en Denver, demos- léculas MHC de clase II son menos potentes
traron que animales deficientes en células T, por en la inducción de anticuerpos y en la actualidad
timectomía neonatal eran incapaces de producir se usan técnicas de biología molecular para su
anticuerpos contra antígenos proteicos; sin embar- tipificación.
go, cuando se reconstituían con células tímicas,
esta capacidad se restauraba. Estudios posterio- 6.2. Antígenos tumorales
res revelaron que la capacidad de ayuda de las
células T corresponde a una subpoblación de Se han descrito numerosos anticuerpos
linfocitos T denominada T “helper” ( LT CD4+). monoclonales que son reactivos con antígenos que
Los antígenos timo-dependientes provocan se expresan exclusivamente o, en mayor cantidad
respuestas primarias caracterizadas por la síntesis en células tumorales, por lo tanto son utilizados
de anticuerpos de la clase IgM, pero en exposi- en diagnóstico clínico de humanos como marca-
ciones posteriores al antígeno maduran hacia IgG dores de la presencia de células neoplásicas. En-
(suero) o IgA (secreciones) y células de memoria, tre estos antígenos, se encuentran marcadores de
a diferencia de las respuestas a los antígenos timo- melanoma, carcinoma colo-rectal, neuroblastoma,
independientes, que sólo estimulan la producción antígeno prostático y antígenos de leucemias
de anticuerpos de la clase IgM y muy pocas célu- linfáticas, entre otros.
las de memoria.
6.3. Autoantígenos
5.2. Antígenos timo-independientes
Existen procesos patológicos en que el siste-
Algunos antígenos, como los polisacáridos ma inmunológico reconoce como antígenos com-
y lipopolisacáridos de bacterias, son capaces de ponentes propios; son las denominadas enferme-
activar linfocitos B sin la ayuda de linfocitos T dades autoinmunes. Si bien pueden afectar cual-
“helper”; son los denominados antígenos timo- quier órgano de un individuo, las más frecuentes

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incluyen: la substancia blanca del cerebro y la es- bia, el Sag se encuentra incluido en la partícula in-
pina dorsal (Esclerosis múltiple); los fecciosa como una proteína que encapsula el mate-
revestimientos de las articulaciones (Artritis rial nuclear. En el caso de algunos retrovirus, como
reumatoide); las células secretoras de la insulina el que produce tumores mamarios en algunas ce-
(Diabetes mellitus juvenil). Otras enfermedades pas endogámicas de ratón, se produce expresión de
autoinmunitarias destruyen las conexiones entre Sags después de la infección e integración del DNA
nervios y músculos (miastenia gravis), producen proviral en el genoma del hospedero.
ampollas en la piel (Pénfigo vulgar) o destruyen
los riñones y otros órganos (Lupus eritematoso 6.6. Alergenos
sistémico) (ver capítulo 23).
Los alergenos son antígenos capaces de pro-
6.4. Antígenos de diferenciación vocar reacciones de hipersensibilidad de tipo in-
mediato (minutos después de su exposición) o re-
El término antígeno de diferenciación sur- tardado (días después del desafío antigénico) (ver
ge del uso de los anticuerpos como herramienta capítulos 21 y 22). Desde el punto de vista
para identificar moléculas que se localizan en de- bioquímico, los alergenos incluyen polisacáridos,
terminados tipos celulares o tejidos. Sin embar- proteínas y haptenos de origen sintético y natura-
go, este término es ambiguo, porque se refiere tan- les. En este último caso se incluye la sustancia
to a los antígenos específicos de estado como los exudada por el Litre, compuesto que pertenece a
antígenos específicos de tejido. la familia de los urushioles, que incluyen especies
Un antígeno que se reconoce exclusivamen- como el Poyson ivy, Poyson oack y Laca Japónica,
te durante una etapa del desarrollo embrionario entre otros, que provocan severas alergias en hu-
de un organismo, pero que posteriormente no es manos susceptibles.
reconocido en células terminalmente diferencia- El Litre es un árbol de la familia
das corresponde a un antígeno específico de es- Anacardiaceae que causa una severa dermatitis de
tado; mientras que un antígeno reconocido en cier- contacto en campistas, guardabosques, scouts, etc,
to tipo celular diferenciado, que sirve como mar- que transitan por la zona central de Chile. Como
cador para distinguirlo de otro, es propiamente un resultado del metabolismo secundario de la plan-
antígeno específico de tejido. En esta última ta, se produce un compuesto identificado como 3
categoría se pueden incluir aquellos antígenos que pentadecyl-10-en catecol, que es el responsable
reconocen en tipos celulares embrionarios, son los de la alergia. Esta pequeña molécula es un clási-
denominados marcadores de linaje celular. co hapteno, es decir, sólo causa la alergia cuando
se une a proteínas de la piel del huésped. A pesar
6.5. Superantígenos de su potencia, no se ha descrito al alergeno del
litre como un inductor de anticuerpos. La reac-
Se definen como superantígenos (Sags) nu- ción alérgica es de tipo retardado, es decir los sín-
merosas proteínas de microorganismos bacterianos tomas se comienzan a observar después de 24 ho-
(estafilococos, estreptococos, micobacterias, y ras de exposición al hapteno en un individuo ya
micoplasmas, entre otras) y virales (del tipo sensibilizado y participan en ella células T CD8+.
rabdovirus y retrovirus), que se unen a moléculas Las lesiones que provoca este alergeno son
MHC clase II y que estimulan las células T predo- exudativas y presentan infiltración de macrófagos
minantemente vía unión directa al dominio Vb del y monocitos.
receptor de la célula T, fuera de la región de unión Aunque este tipo de compuestos se conoce
al antígeno (ver capítulo 7). Se les denomina Sags desde principios de este siglo, los mecanismos ce-
debido a que el número de células T involucradas lulares y moleculares que conducen a esta alergia
en la respuesta inmune es mucho mayor que el de son poco conocidos. Se sabe que la cadena
las células específicas a antígenos proteicos con- alifática es fundamental para la inmunogenicidad,
vencionales. porque solubiliza el alergeno en las membranas
Los superantígenos de microorganismos es- celulares; por otra parte, el anillo catecólico per-
tán presentes en diferentes formas. En el caso de mite la reacción electrofílica con grupos amino
las bacterias, generalmente son proteínas de las proteínas de la piel, modificándolas (véase
secretadas como por ejemplo las enterotoxinas figura 5-4).
estafilocócicas; mientras que en el virus de la ra-

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LECTURAS SUGERIDAS

Aderem, A., Ulevitch, R.J., “Toll-like receptors in


the induction of the innate immune response”,
Nature, 17, 782-787, 2000.

Barlow, D.J., Edwards, M.S., Thornton J.M.,


“Continuous and discontinuous protein antigenic
determinants”, Nature, 322: 747 – 748, 1986.

Figura 5-4. Estructura del compuesto activo del litre; 3- Benjamin C., Berzofsky JA., East IJ., Gurd, FRN.,
pentadecil (10-enil) catecol. Hannum, C., Leach SJ., Margoliash E., Michael
JG., Miller A., Prager EM., Reichlin M., Sercarz
EE., Smith-Gill SJ., Todd PE., Wilson AC. “The
De esta forma, los péptidos modificados por antigenic structure of proteins: A reapraisal”, Ann.
el Litre emergen a la superficie de las células epi- Rev. Immunol, 2: 67 – 101, 1984.
dérmicas unidas a moléculas MHC de clase I y
clase II, los cuales inician y desencadenan la re- Berzofsky, J. A., Berkower, I.J., “Immunogenicity
acción alérgica. and antigen structure” en Fundamental
Debido a que los ratones de cepas utilizadas Immunology, Editor: W. Paul, 4ª Edición, Raven
en experimentación también son sensibles al litre, Press, New York, pp. 651 – 700, 1999.
han sido un modelo muy valioso en el estudio de
los componentes celulares involucrados en la aler- Davies, D.R., Padlan, E.A., “ Antibody-antigen
gia provocada por este compuesto. La elimina- complexes”, Ann. Rev. Biochem, 59: 439 – 473,
ción selectiva de subpoblaciones de linfocitos T 1990.
con anticuerpo monoclonales específicos para cada
una de ellas (anti-CD4+ ó anti-CD8+), ha mostra- Janeway, C.A., Travers, P., Walpot, M., Capra,
do que los linfocitos T CD4+ regulan esta respuesta J.D., Immuno Biology. The immune system in
en ratones y que los linfocitos T CD8+ son los health and disease. CB Current Biology
efectores. Nuestro grupo de investigación tam- Publications Elsevier Science Ltd/Garland
bién ha encontrado evidencia de que la cadena Publishing, 1999.
alifática se metaboliza intracelularmente, lo que
sugiere que el producto final del litre que modifi- Landsteiner, K., Van der Scheer J., “Serologcal
ca las proteínas propias no sería el mismo que pro- studies on azoproteins. Antigens containing azo
duce la planta. components with aliphatic side chains”, J. Exp.
Recientemente, se ha demostrado que los Med., 59: 751 – 768, 1934.
urushioles inhiben la respiración mitocondrial a
nivel del Complejo III. Este fenómeno es especí- Laver, W.G., Gillian, M.A., “Immune recognition
fico, porque requiere la presencia de la estructura of protein antigens” en Current
catecólica y de la cadena alifática, ya que Communications in Molecular Biology, Cold
pentadecil fenol y 3 metil catecol no ejercen una Spring Harbor Laboratory, New York, 1985.
inhibición significativa en la respiración. El
alergeno del poison ivy, que posee tres veces más López C.B., Kalergis A.M., Becker M. I.,
insaturaciones en la cadena alifática, es el inhibidor Garbarino J.A., De Ioannes A.E., “Contact Der-
más potente de la respiración y el más alergénico matitis to the Urushiol Related Compound 3-
en humanos. Estudios recientes en que se analiza pentadecyl (10 enyl) catechol is Mediated by
la unión de Litreol marcado con 3H en la cadena CD8+ Cells and Regulated by CD4+ Cells in
alifática a proteínas mitocondriales, muestran la Mice”, J., Allergy and Immunology 117: 194-201,
aparición de proteínas marcadas específicamente 1998.
de una masa molecular relativa en torno a 30 kDa,
que se encuentran distribuidas en la membrana
mitocondrial interna.

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Moody, D.B., Ulrichs,T., Muhlecker, W., Young,
D.C., Gurcha, S.S., Grant, E., Rosat J.P., Brenner,
M.B., Costello, C.E., Besra, G.S., Porcelli, S.A.,
“CD1c-mediated T-cell recognition of isoprenoid
glycolipids in Mycobacterium tuberculosis
infection”, Nature, 404,884 – 888, 2000.

Palomo G., I., Pereira G., J., Fisiopatología de


las citopenias inmunes. Editorial Universidad
de Talca,1995, Talca - Chile.

Tainer, J.A., Getzoff, E.D., Paterson, Y., Olson,


A.J., Lerner, R.A., “The atomic mobility
component of protein antigeniciicity”, Ann. Rev.
Immunol, 3: 501- 535, 1985.

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Sin título-2 116 5/26/06, 10:25 AM


Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 6

RECEPTOR DE LINFOCITOS B
E INMUNOGLOBULINAS

Iván Palomo G., María Inés Becker C., Silvia Pierangeli y Ulises Vergara C.

1. Introducción 7. Bases genéticas de la diversidad de inmu-


2. Receptor de linfocitos B (BCR): Estruc- noglobulinas
tura y función 7.1. Genes de inmunoglobulinas
2.1. Inmunoglobulina de membrana 7.1.1. Genes de cadenas pesadas
2.2. Complejo Igα/Igβ 7.1.2. Genes de cadenas livianas
3. Linfocitos B y señales accesorias de 7.2. Reordenamiento génico
coestimulación 7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas
3.1. Antígenos T-dependientes y antígenos 7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas
T-independientes 7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA
3.2. Co-Receptor CD21 7.2.4. Diversificación de la región N
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2 7.2.5. Exclusión alélica
5. Estructura y función de inmunoglobulinas 7.2.6. Exclusión isotípica
5.1. Estructura general 7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas
5.2.Dominios de inmunoglobulinas y re- 7.3. Hipermutación somática
giones hipervariables 7.4. Control de la transcripción de los genes
5.3.Variaciones isotípicas, alotípicas e de inmunoglobulinas
idiotípicas 7.5. Estimación numérica de la diversidad
5.3.1. Variaciones isotípicas de anticuerpos
5.3.2. Variaciones alotípicas 8. Edición del receptor linfocitario
5.3.3. Variaciones idiotípicas 9. Biosíntesis y ensamblaje de las inmuno-
5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas globulinas
6. Respuesta inmune humoral
6.1. Avidez
6.2. Afinidad

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RESUMEN

La inmunidad específica humoral se asocia a linfocitos B y anticuerpos. Los aspectos más


importantes que revisa este capítulo son: la estructura y función del Receptor de células B
(BCR) y de inmunoglobulinas, y las bases genéticas de la diversidad de estas últimas.
El BCR es un complejo glicoproteico hetero-oligomérico transmembrana, que incluye dos
subunidades: una inmunoglobulina de membrana (IgM o IgD) responsable del reconocimiento
específico del antígeno y el complejo accesorio Ig-α/Ig-β, conservado en todos los linfocitos B
y responsable de la transducción de señales de activación. Dependiendo de la naturaleza química
del antígeno, la activación de los linfocitos B, requerirá señales accesorias de coestimulación,
proporcionadas por el correceptor CD21 (CR2) y por linfocitos T “helper”.
Las inmunoglobulinas (Igs) son una familia de glicoproteínas estructuralmente relaciona-
das, presentes en la membrana de linfocitos B y en el suero y fluidos titulares La unidad estruc-
tural básica de las inmunoglobulinas está dada por un monómero glicoproteico formado por
cuatro cadenas polipeptídicas - dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas livianas (L) idénticas:
IgG (2γ, 2κ ó 2λ), IgM (2µ, 2κ ó 2λ), IgΑ (2α, 2κ ó 2λ), IgD (2δ, 2κ ó 2λ) e IgD (2ε, 2κ ó 2λ).
Entre las regiones funcionales más importantes de la estructura de las Igs destacan la región de
unión con el antígeno (Fab), ubicada en el extremo amino y el fragmento Fc que participa en
funciones efectoras tales como: activación del sistema del complemento, activación de células
fagocíticas, citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC), inmunidad de mucosas, inmuni-
dad neonatal, hipersensibilidad inmediata y regulación de la respuesta inmune.
Cada cadena, H y L, presenta sólo un dominio variable. Las cadenas H presentan 3 ó 4
dominios constantes y las cadenas L solamente un dominio constante.
La variabilidad idiotípica de las Igs se genera somáticamente en la médula ósea (en
humano), durante un proceso de diferenciación que es independiente del antígeno y que permite
que cada linfocito B esté provisto de un BCR único. El repertorio de estos receptores y por tanto
de Igs secretadas, es generado al azar durante un proceso regulado de reordenanamiento o
recombinación de segmentos génicos V(D)J. En humanos, los genes para codificar las cadenas
H, κ y λ, se encuentran en el cromosoma 14, 2 y 22, respectivamente. La variabilidad puede
aumentar por otros mecanismos que serán descritos en el capítulo.

1. INTRODUCCIÓN ne puede reconocer una gran variedad de antígenos


distintos, sólo aquellos clones linfocitarios con
El desarrollo de una respuesta inmune hu- la especificidad apropiada para un epítopo del
moral requiere la selección, activación y expan- antígeno particular, serán expandidos por divi-
sión clonal de linfocitos B individuales provistos sión celular.
de un receptor antígeno-específico (BCR: "B cell El receptor de un linfocito B (BCR) es un
receptor") anclado en su membrana plasmática. complejo glicoproteico transmembrana que inclu-
Esta habilidad de un individuo para responder vir- ye una inmunoglobulina (Ig) de membrana pro-
tualmente a cualquier antígeno, depende de la ca- pia de cada linfocito y responsable del reconoci-
pacidad del sistema inmune para generar un re- miento específico del antígeno. Cuando un indi-
pertorio muy grande de linfocitos, cada uno de los viduo es expuesto a un antígeno extraño, sólo aque-
cuales expresa un receptor específico para un llos linfocitos cuyo BCR es capaz de reconocer
epítopo antigénico particular. Por otra parte, la un epítopo antigénico, serán activados y expandi-
naturaleza clonal del reconocimiento antigénico, dos para diferenciarse en linfocitos B de memo-
constituye un elemento esencial de la respuesta ria o en células plasmáticas productoras de
inmune, puesto que aún cuando el sistema inmu- anticuerpos. Las células plasmáticas producen

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generalmente sólo un tipo de anticuerpo y éste recombinación o reordenamiento génico, que con-
siempre corresponde a la forma secretada o so- duce al “switching isotípico” o cambio de clase de
luble de la Ig de membrana del linfocito B del cual la inmunoglobulina del BCR en linfocitos B de
deriva la célula plasmática. La forma de membra- memoria, y (iii) reordenamientos génicos secun-
na de una Ig es un componente estructural y fun- darios, que conducen a la edición del receptor.
cional del receptor BCR; su forma soluble o En el presente capítulo se describe la estructura
secretada constituye en cambio un anticuerpo, que y función del receptor linfocitario B (BCR), las ca-
conserva la especificidad por el antígeno y es racterísticas estructurales y funcionales de las dis-
además responsable de la función efectora de la tintas clases de inmunoglobulina y los mecanismos
respuesta inmune humoral: neutralización del genéticos que explican su diversidad y heterogenei-
antígeno, reclutamiento y activación de fagocitos, dad: recombinación V(D)J, hipermutación,
activación del sistema del complemento, recluta- reordenamiento de clase y edición del receptor.
miento y activación de células NK, macrófagos y
otras células capaces de realizar citotoxicidad
dependiente de anticuerpos. 2. RECEPTOR DE LINFOCITOS B (BCR):
La expresión de un receptor BCR responsa- ESTRUCTURA Y FUNCIÓN
ble de la iniciación de una respuesta inmune con-
tra diversos agentes infecciosos y otros antígenos, El receptor de los linfocitos B (BCR) es ge-
es uno de los eventos cruciales en el desarrollo de nerado somáticamente durante la diferenciación
los linfocitos B. Durante este proceso, receptores linfocitaria, lo cual permite que cada célula B esté
antígeno-específicos únicos, son expresados por provista de un receptor único que no está codifi-
linfocitos individuales después del reordenamiento cado en el DNA germinal y no está predestinado
regulado de segmentos génicos para cadenas li- a reconocer un antígeno extraño particular.
vianas y pesadas de una inmunoglobulina. La na- El repertorio linfocitario es generado al azar
turaleza azarosa del reordenamiento génico, aco- y, los linfocitos B cuyo receptor es capaz de reco-
plado a la mayor complejidad que se consigue nocer un epítopo antigénico particular serán se-
con el apareamiento de cadenas pesadas y livia- leccionados para su proliferación y expansión
nas crea una increíble diversidad en el repertorio clonal. La interacción BCR-antígeno inicia la
linfocitario B. Aunque tal diversidad permite el transducción de señales bioquímicas que condu-
reconocimiento de un gran número de proteínas cen a la activación, proliferación y diferenciación
extrañas, la independencia antigénica del linfocitaria; además gatillan la internalización
reordenamiento génico inevitablemente conduce endocítica del complejo y el procesamiento y pre-
a la generación de linfocitos B autorreactivos. Para sentación de fragmentos antigénicos a linfocitos
evitar la autoinmunidad inducida por la eventual T-antígeno específicos, en aquellos casos en que
activación de estas células autorreactivas, el sis- el desarrollo de respuesta inmune requiere de co-
tema inmune debe poner en marcha mecanismos laboración de linfocitos T "helper" (LTh).
que le permitan inducir tolerancia a antígenos pro- El BCR es un complejo glicoproteico hetero-
pios. Entre estos mecanismos se encuentran la eli- oligomérico transmembrana, que incluye dos
minación por apoptosis de las células subunidades, estructural y funcionalmente distin-
autorreactivas (deleción clonal), la inhibición de tas y no covalentemente unidas entre sí (figura 6-
su actividad (anergia clonal), o la edición de su 1). La primera subunidad corresponde a una
receptor mediante un reordenamiento secundario inmunoglobulina (Ig) de membrana, que actúa
de segmentos génicos para cadenas livianas, lo que como receptor clonotípico propio de cada linfoci-
conduce a modificar la especificidad del BCR to y responsable del reconocimiento específico
autorreactivo. del antígeno. La segunda subunidad, denominada
Linfocitos B apropiadamente activados pro- complejo accesorio Ig-α/Ig-β, es invariante o
liferan y luego diferencian en células plasmáticas (conservado) en todos los linfocitos B y, respon-
o en células B de memoria. Durante este proceso sable del transporte y expresión del receptor
de diferenciación los linfocitos B expresan estra- clonotípico en la membrana y de la transducción
tegias únicas que llevan a diversificar aun más el de señales de activación, luego de la interacción
repertorio de receptores BCR: (i) hipermutación BCR-antígeno.
somática que conduce a un aumento de la afini-
dad del receptor por su epítopo antigénico, (ii)

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Figura 6-1. Estructura del receptor linfocitario BCR y del correceptor CD21. El receptor de un linfocito B (BCR) está
constituido por una Ig de membrana, responsable del reconocimiento específico del antígeno y por un complejo accesorio Ig-α/Ig-
β, responsable del transporte y expresión del receptor BCR en la membrana y de la transducción de señales de activación, luego de
la interacción BCR-antígeno. La proliferación y diferenciación de los linfocitos B, requiere además de señales accesorias de
coestimulación proporcionadas por el correceptor CD21. Mientras el receptor BCR reconoce al antígeno, el correceptor reconoce
C3d, que se ha unido al antígeno luego de la proteolisis enzimática parcial de C3 por activación del sistema del complemento
durante el reconocimiento innato del antígeno. CD21 reconoce C3d y CD19 transduce luego las señales accesorias de coestimulación.

2.1. Inmunoglobulina de membrana Así como la capacidad para unir antígeno


reside, fundamentalmente, en la especificidad y
Todas las inmunoglobulinas, tanto de mem- afinidad de los sitios de combinación amino-
brana como de secreción, tienen una estructura terminales de una Ig, su eventual capacidad para
básica general constituida por 4 cadenas activar mecanismos efectores de respuesta inmu-
polipeptídicas: 2 cadenas pesadas (H, "heavy") ne, reside en la región constante carboxiterminal
idénticas entre sí y 2 cadenas livianas (L, "light"), de las cadenas pesadas.
también idénticas entre sí. Las cadenas pesadas y En la Ig de membrana, la región constante
livianas se asocian de modo tal que forman una carboxiterminal de sus cadenas pesadas incluye
estructura simétrica compuesta por dos una región hidrofóbica transmembrana de 25
heterodímeros H/L idénticos y unidos aminoácidos, que no está presente en la Ig de se-
covalentemente entre sí por uno o más puentes creción y es responsable del anclaje obligado de
disulfuro (figura 6-2). De esta manera, en la es- la Ig a la membrana plasmática de linfocitos B.
tructura tetramérica básica de una Ig, la interacción La región carboxiterminal de las cadenas pesadas
entre las regiones variables aminoterminales de incluye además un dominio citoplasmático, cuya
las cadenas H y L, forman dos sitios idénticos de longitud varía entre los distintos isotipos de Ig de
combinación para el antígeno. La estructura de las membrana (3 residuos aminoacídicos en IgM y
Ig se describe en el punto 5 de este capítulo. 28 residuos en IgG). El anclaje a la membrana

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Figura 6-2. Los anticuerpos están constituidos por cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas
livianas (L) unidas por enlaces disulfuro (S-S) e interacciones no covalentes. Los dominios variables de 110 aminoácidos de
cadenas pesadas y livianas forman el sitio de unión para el antígeno. Los dominios constantes (CH1 a CH3) determinan las
funciones efectoras de un anticuerpo. Las cadenas pesadas de IgM e IgE, contienen un dominio constante adicional (CH4), que no
existe en los otros isotipos inmunoglobulínicos.

impide que los dominios carboxiterminales de las minan la existencia de 5 clases de cadena pesada,
cadenas pesadas estén disponibles para reclutar denominadas µ, δ, γ, α y ε. De esta manera, la
y activar mecanismos efectores de respuesta in- asociación de una misma región variable a distin-
mune. Por lo tanto, una Ig de membrana es una tas regiones constantes pesadas, conduce a la pro-
molécula bivalente y monofuncional: tiene capa- ducción de distintas clases o isotipos de Ig (IgM,
cidad para unir específicamente el antígeno (me- IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente) que difie-
diante 2 sitios de combinación idénticos), pero ren en su capacidad para reclutar y activar distin-
carece de función efectora. tos mecanismos efectores de respuesta inmune
Los anticuerpos o Ig de secreción, que están humoral.
presentes en el plasma y otros fluidos de un indi- En su etapa final de maduración y previo al
viduo, son en cambio moléculas bifuncionales: encuentro con el antígeno, los linfocitos B vírge-
conservan la capacidad de unir el mismo antígeno, nes expresan simultáneamente en su membrana
pero además los extremos libres carboxiterminales receptores BCR que contienen IgM y receptores
de sus cadenas pesadas tienen la capacidad de BCR que contienen IgD, ambos con idéntica es-
reclutar y activar mecanismos efectores destina- pecificidad y afinidad por el epítopo antigénico
dos a la eliminación del antígeno (fagocitosis, sis- pero con distinta región constante en sus cadenas
tema del complemento y citotoxicidad dependiente pesadas. Luego del primer encuentro con el
de anticuerpos). antígeno, los linfocitos B vírgenes proliferan au-
Variaciones estructurales en la región cons- mentando el número de linfocitos epítopo-especí-
tante carboxiterminal de la cadena pesada, deter- ficos para el antígeno, los cuales se diferencian

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luego en células plasmáticas (con la habilidad de Los linfocitos B de memoria, aún cuando con-
sintetizar y secretar altos niveles de lo que será el servan las cadenas livianas y las regiones varia-
repertorio primario de anticuerpos IgM), y en dis- bles de las cadenas pesadas de su receptor
tintos linfocitos B de memoria que difieren en la clonotípico (y por lo tanto, mantienen la especifi-
clase de Ig de membrana que expresan como par- cidad por el mismo antígeno), han sufrido durante
te de su receptor BCR (figura 6-3). su diferenciación antígeno-dependiente: (i) un pro-

Figura 6-3. Diferenciación de células plasmáticas y de linfocitos B de memoria. Luego de la expansión clonal de linfocitos B
vírgenes (gatillada por su encuentro con el antígeno), los linfocitos se diferenciarán en células plasmáticas responsables de la
síntesis del repertorio primario de anticuerpos IgM, o en linfocitos B de memoria en los que se produce "switching" isotípico hacia
IgG, IgA o IgE, y mutación somática que conduce a un aumento de afinidad por el mismo antígeno. Un encuentro posterior de
cada linfocito B de memoria con el antígeno, gatillará la generación de células plasmáticas que sintetizarán los respectivos anticuerpos
de clase IgG, IgA o IgE.

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ceso de hipermutación somática, que conduce a secundarios, luego del reconocimiento e inte-
una mayor afinidad por el antígeno, y (ii) un pro- racción específica BCR-antígeno.
ceso de recombinación génica, que conduce a un Ig-α e Ig-β son proteínas de 30 a 45 kDa (va-
cambio de la región constante pesada µ expresada riaciones en el peso molecular obedece al grado
en los linfocitos B vírgenes originales, por una de glicosilación de cada molécula), cuyo dominio
región constante distinta (γ, α ó ε) en los linfocitos transmembrana contiene grupos polares que pue-
B de memoria. den interactuar con grupos similares de la región
Durante la diferenciación antígeno-indepen- transmembrana de la Ig del BCR. Las moléculas
diente de linfocitos B (que ocurre en los órganos Ig-α e Ig-β presentan además, dominios
linfoides primarios), opera un mecanismo de fil- extracelulares y dominios citoplasmáticos simila-
tro o de selección del receptor, que ha evolucio- res a los de las proteínas del complejo CD3 del
nado para seleccionar sólo aquellos linfocitos cuyo receptor TCR de linfocitos T, y que funcionan de
BCR será más útil en el desarrollo de una respues- manera también similar en la transducción de se-
tas inmune en la periferia (ver capítulo 13). Du- ñales de activación luego del encuentro con un
rante la diferenciación antígeno-dependiente (que antígeno que contiene epítopos reconocibles por
ocurre en los centros germinales de los órganos el receptor linfocitario. La valencia, grado de agre-
linfoides periféricos), opera un mecanismo de se- gación, concentración local y persistencia del
lección que ha evolucionado para seleccionar antígeno parecen tener una importante influencia
aquellos linfocitos B de memoria que presentan en la generación de las señales intracelulares que
mayor afinidad por el antígeno y que simultánea- conducirán a la tolerancia por antígenos propios
mente han realizado el “switching” isotípico o o la iniciación de una respuesta humoral contra
cambio de clase de la cadena pesada, para expre- antígenos extraños.
sar IgG, IgA o IgE como parte de su receptor BCR La unión del antígeno a la inmunoglobulina
(figura 6-3). En un siguiente encuentro con el del receptor BCR, conduce a la fosforilación de
antígeno, los linfocitos B de memoria se diferen- los dominios citoplasmáticos de Ig-α (61
ciarán en células plasmáticas que secretarán la aminoácidos) y de Ig-β (48 aminoácidos) que con-
misma clase de inmunoglobulina expresada como tienen secuencias de 26 aminoácidos ricas en
parte del receptor BCR del linfocito B de memo- tirosina (ITAM: "Immunoreceptor Tyrosine-based
ria del cual derivan. Activation Motifs") y al reclutamiento y activa-
ción de diversas tirosina quinasas.
2.2. Complejo accesorio Ig-α/Ig-β La evidencia experimental en ratones, sugie-
re que los individuos deficientes en la expresión
En los linfocitos B, las inmunoglobulinas re- de Ig-β muestran un desarrollo linfocitario B com-
cientemente sintetizadas son transportadas a la pletamente bloqueado, en un estado equivalen-
superficie celular sólo cuando están no te al de CD44-/low CD25+ del desarrollo linfocitario
covalentemente asociadas con las proteínas acce- T. Los reordenamientos V H hacia D HJ H están
sorias Ig-α (CD79a) e Ig-β (CD79b), que se en- marcadamente reducidos, mientras los reorde-
cuentran como heterodímeros covalentemente namientos DH a JH ocurren normalmente (V, D, J
unidos mediante puentes disulfuro. Los comple- se explica en punto 7 de este capítulo). De esta
jos BCR parcialmente ensamblados, en los que manera Ig-β parece involucrado en la iniciación
falta cualquiera de sus componentes polipeptídicos del reordenamiento VH hacia DHJH, antes de fun-
(cadenas H, L, Ig-α o Ig-β) son retenidos en el cionar como parte de la subunidad de transducción
retículo con la participación de diversas de señales en el receptor pre-BCR. Un ratón
chaperoninas (proteínas que ayudan a que los pro- mutante que carece de la mayor parte del dominio
cesos intracelulares ocurran adecuadamente). Ade- citoplasmático de Ig-α, exhibe sólo un trastorno
más de su participación en el ensamblaje y trans- moderado en el desarrollo B temprano, aun cuan-
porte del BCR, las cadenas Ig-α e Ig-β desempe- do está casi completamente bloqueada la apari-
ñan un rol fundamental en la transducción de se- ción de linfocitos B periféricos. Todo lo anterior
ñales de activación en los primeros estados de di- indica que se requiere un heterodímero Ig-α /Ig-β
ferenciación de los linfocitos B en los órganos intacto para el desarrollo y mantención de
linfoides primarios (hígado fetal, médula ósea o linfocitos B maduros en la periferia.
bolsa de Fabricio), y en la diferenciación de Por último, el modelo más ampliamente acep-
linfocitos B periféricos en los órganos linfoides tado sobre la organización del receptor de

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linfocitos B, sugiere que el BCR es un complejo gado al cromosoma X, representan un claro ejem-
proteico en el que la Ig de membrana está unida a plo de la importancia de las señales accesorias de
dos heterodímero Ig-α /Ig-β, uno a cada lado de coestimulación en la función de los linfocitos B
la molécula (figura 6-1). Sin embargo, estudios (ver capítulo 30). En los pacientes con este sín-
recientes sugieren que en el complejo Ig-Ig-α /Ig- drome (muy susceptibles a las infecciones
β, la molécula de Ig está asociada a un único piógenas), los niveles séricos de anticuerpos IgG,
heterodímero Ig-α /Ig-β y que, en la superficie IgA e IgE son muy bajos y en circulación sólo
celular, distintos BCR se asocian luego en expresan IgM, debido a que son incapaces de rea-
oligómeros, en microdominios, regiones o “rafts” lizar "switching" isotípico, maduración de afini-
lipídicos ricos en colesterol y esfingolípidos. dad y generación de linfocitos B de memoria. Pa-
radójicamente el síndrome de hiper-IgM ligado al
3. Linfocitos B y señales accesorias de cromosoma-X es más un defecto de los linfocitos
coestimulación T que de linfocitos B, ya que es consecuencia de
una deficiente expresión de CD40L en LTh.
La activación de linfocitos B requiere la En la respuesta a antígenos T-dependientes,
unión del antígeno a la Ig de membrana del re- la interacción BCR-antígeno y la transducción de
ceptor BCR. Sin embargo, la valencia, grado de señales a través del complejo Ig-α /Ig-β conduce
agregación, concentración local y persistencia del rápidamente a: (i) entrada de los linfocitos en el
antígeno, parecen tener una importante influen- ciclo celular, (ii) rescate de la apoptosis, (iii) au-
cia en la generación de señales intracelulares que mento en la expresión de moléculas MHC de cla-
conducirán a la tolerancia por antígenos propios se II y de las moléculas coestimuladoras CD80 y
o la iniciación de una respuesta contra antígenos CD86, y (iv) aumento de la expresión de recepto-
extraños. Por otro lado, dependiendo de la natu- res para citoquinas liberadas por linfocitos T. Sin
raleza química del antígeno, la entrada en el ci- embargo, en ausencia de las señales accesorias
clo celular y la proliferación y diferenciación de de coestimulación, el reconocimiento antigénico
los linfocitos B, requerirá señales accesorias de y la transducción de señales a través de comple-
coestimulación, proporcionadas por el corre- jo Ig-α/Ig-β inevitablemente terminan en anergia
ceptor CD21 (CR2) y por LTh antígeno-especí- o en apoptosis de los linfocitos B antígeno-espe-
ficos, que expresan moléculas coestimuladoras cíficos.
de membrana (CD40L, CD28) y liberan diver- Los antígenos T-independientes (entre los que
sas citoquinas (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IFN-γ, se encuentran polisacáridos y proteínas
TGF-β). Estas señales accesorias de coesti- poliméricas de origen bacteriano), no inducen la
mulación son indispensables para la inducción formación de centros germinales y son, por lo tan-
del "switching" isotípico y la hipermutación que to, incapaces de inducir la generación de linfocitos
conducen a la síntesis de anticuerpos con diver- B de memoria. Estos antígenos inducen general-
sas funciones efectoras y mayor afinidad por el mente anticuerpos IgM de baja afinidad, debido
antígeno. a que son incapaces de inducir la hipermutación
que conduce a la producción de anticuerpos de
3.1. Antígenos T-dependientes y Antígenos T- alta afinidad y porque el "switching" isotípico está
independientes severamente limitado en ausencia de las citoquinas
producidas por LTh.
La activación de linfocitos B puede ser T-de-
pendiente o T-independiente, dependiendo de si 3.2. Correceptor CD21 (CR2)
requiere o no de señales accesorias de
coestimulación proporcionada por LTh. Esta se- Así como los linfocitos T expresan las molé-
gunda señal de coestimulación puede ser propor- culas CD4 o CD8 que actúan como correceptores
cionada a través de CD40 que interactúa con su linfocitarios de activación celular, los linfocitos B
ligando CD40L (CD154) expresado en la mem- expresan en su membrana el correceptor CD21
brana de linfocitos T activados y por B7.1 (CD80) que funciona en coordinación con el receptor BCR,
y B7.2 (CD86) que se expresan en linfocitos B para gatillar la proliferación y diferenciación de
activados e interactúan con su ligando CD28, linfocitos B antígeno-específicos (figura 6-1).
constitutivamente expresado en linfocitos T. In- Mientras el receptor BCR reconoce al antígeno,
dividuos que sufren el síndrome de hiper-IgM li- el correceptor CD21 reconoce C3d que está

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covalentemente unido al antígeno y ha sido gene- bacterianas durante la vida fetal, mucho antes que
rado por digestión parcial de C3 durante la acti- el repertorio linfocitario de la respuesta inmune
vación del sistema del complemento inducida por adquirida sea completamente funcional. Además,
el reconocimiento innato del antígeno. De esta en el repertorio adulto, los linfocitos B1 dan ori-
manera, el receptor CD21 permite integrar el re- gen a células plasmáticas que secretan IgM y a
conocimiento innato de antígenos bacterianos por una fracción importante de células plasmáticas
el sistema del complemento, con la respuesta in- productoras de IgA en el intestino. De hecho, la
mune humoral a través de la activación y diferen- transferencia pasiva de linfocitos peritoneales B1
ciación de linfocitos B. La molécula CD21 se ex- en ratones Scid (presentan una severa
presa también en células dendríticas foliculares y inmunodeficiencia combinada), reconstituye la
es responsable de la retención prolongada del producción de IgA contra muchas bacterias intes-
antígeno en el tiempo y la mantención de los tinales. Por otro lado la transferencia pasiva de
linfocitos B de memoria. células de hígado fetal o del omentum intestinal,
El correceptor CD21 (también conocido a ratones irradiados, rápidamente reconstituye la
como CR2 o receptor para complemento tipo 2) subpoblación B1, mientras la transferencia de pre-
se expresa en la membrana de los linfocitos B cursores de médula ósea adulta reconstituye la
como un complejo proteico que incluye 3 proteí- subpoblación B2 pero no la B1.
nas distintas: CD21, CD19. y CD81 (también de- En el repertorio linfocitario adulto, los
nominado TAPA-1). En el complejo CD21/CD19/ linfocitos B1 son bastante frecuentes en la pobla-
CD81, el correceptor CD21 actúa como subunidad ción B que sufre neoplasias y en aquellos que re-
que une C3d y asocia el reconocimiento del conocen una gran variedad de autoantígenos y re-
antígeno por el sistema del complemento, a la ac- accionan cruzadamente con antígenos bacterianos
tivación de linfocito B a través de la transducción como polisacáridos y lipopolisacáridos. El reper-
de señales bioquímicas gatilladas por CD19. torio de receptores BCR es bastante más limitado
en los linfocitos B1 que en los linfocitos B2, sus
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2 reordenamientos génicos VH son más restringi-
dos, y, como no expresan la enzima TdT
En el repertorio linfocitario B (estimado en (Deoxinucleotidil Transferasa Terminal), carecen
1014 linfocitos B distintos), se distinguen al me- de regiones N en las uniones VDJ.
nos dos subpoblaciones celulares denominadas B1
y B2, que presentan características estructurales y
funcionales distintas, tienen distinta distribución 5. ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE INMU-
anatómica y se generan a distintas edades durante NOGLOBULINAS
la ontogenia de los LB. La subpoblación
linfocitaria B1 se desarrolla durante la vida fetal/ Las inmunoglobulinas son una familia de
neonatal, presenta receptores BCR polirreactivos glicoproteínas estructuralmente relacionadas, pre-
de baja afinidad, se asocia a la producción de sentes en la membrana de linfocitos B y en el
anticuerpos naturales T-independientes y se en- suero y fluidos titulares de todos los vertebrados,
cuentra mayoritariamente en el peritoneo, la cavi- con excepción de los ciclostomos. Sus genes se
dad peritoneal y en el bazo. La subpoblación expresan exclusivamente en los linfocitos B y, en
linfocitaria B2 se genera a partir de células respuesta a la exposición a un antígeno, se secretan
progenitoras de la médula ósea adulta, constituye como anticuerpos que actúan como mediadores
la mayor parte del repertorio linfocitario B, su de la inmunidad humoral específica. Aunque to-
activación es T-dependiente y se encuentra fun- dos los anticuerpos tienen una estructura
damentalmente en los órganos linfoides secunda- monomérica básica similar, se agrupan en clases
rios y en el torrente sanguíneo. estructural y funcionalmente distintas.
La mayoría de los linfocitos B1 se caracteri- En la última década, los esfuerzos de nume-
za por la expresión del marcador CD5 rosos inmunólogos se han centrado tanto en el
(glicoproteína monomérica de 67 kDa, propia de análisis de la estructura de los anticuerpos, como
linfocitos T) y aunque su función es todavía un en la comprensión de los mecanismos genéticos
misterio, se ha sugerido que la activación de estas que dan cuenta de su síntesis y del potencial prác-
células conduce a la producción de anticuerpos ticamente ilimitado del repertorio linfocitario.
que proporcionan protección contra infecciones

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5.1. Estructura general dad, ubicada entre los dominios CH1 y CH2. La
longitud de la región bisagra varía de 10 a 60
La unidad estructural básica de las aminoácidos en los distintos isotipos de Ig y su
inmunoglobulinas está dada por un monómero flexibilidad es determinante en la orientación es-
glicoproteico formado por cuatro cadenas pacial de los paratopos y en la eficiencia de la
polipeptídicas -dos cadenas livianas (L) idénticas unión antígeno-anticuerpo.
y dos cadenas pesadas (H) también idénticas- Las cadenas livianas de la Ig, tienen un peso
covalentemente unidas por puentes disulfuro y molecular en torno a 25 kDa; no contienen
estabilizadas por uniones no covalentes, como carbohidratos y están constituidas por aproxima-
puentes de hidrógeno, fuerzas de Van der Waals e damente 220 aminoácidos, separados en un do-
interacciones electrostáticas. Al asociarse una ca- minio variable (VL) aminoterminal y un dominio
dena pesada con una liviana, sus extremos constante (CL) carboxiterminal. Variaciones estruc-
aminoterminales forman un paratopo o sitio de turales en el dominio constante carboxiterminal,
unión para el antígeno; existen por lo tanto, dos permiten distinguir dos tipos de cadena liviana:
sitios de combinación por monómero de Ig (figu- kappa (k) y lambda (λ). En una Ig, las cadenas
ra 6-2). Esto significa que una Ig es una molécu- livianas son siempre idénticas entre sí; por lo tan-
la bivalente, que puede interactuar simultáneamen- to, un monómero inmunoglobulínico sólo puede
te con dos epítopos idénticos. Sin embargo, algu- tener cadenas de tipo kappa o de tipo lambda,
nos anticuerpos se secretan como multímeros pero nunca de ambas.
inmunoglobulínicos, en los cuales monómeros Ig Utilizando enzimas proteolíticas como
se asocian covalentemente entre sí mediante una papaína y pepsina, se ha logrado degradar
cadena peptídica adicional, denominada cadena monómeros de Ig y establecer que el reconoci-
J. En estos casos, anticuerpos multiméricos como miento del antígeno y la función efectora de la
IgM e IgA, presentan una valencia mayor (pro- respuesta inmune, residen en fragmentos defini-
porcional al número de sitios de unión para el dos y distintos de la molécula. La papaína ataca
antígeno) y pueden estar presentes en las selectivamente cada cadena pesada justo en el si-
secreciones, gracias a su capacidad de unirse a un tio aminoterminal del enlace disulfuro intracadena
receptor poli-Ig existente en la cara basolateral pesada, liberando tres grandes fragmentos: un frag-
de células epiteliales del tracto respiratorio, mento Fc y dos fragmentos idénticos de aproxi-
gastrointestinal y genitourinario. madamente 45 kDa, denominados Fab (fragmen-
Las cadenas pesadas tienen un peso to de unión con el antígeno) que contienen la ca-
molecular que fluctúa entre 55 y 77 kDa. Están dena liviana completa (VL y CL) y los dominios
constituidas por aproximadamente 450 ó 550 VH y CH1 de la cadena pesada (figura 6-4). Los
aminoácidos y contienen 3 a 15% de carbohidratos, fragmentos monovalentes Fab, pueden unirse
que resultan esenciales para mantener la estructu- específicamente al antígeno pero no lo precipitan,
ra del monómero inmunoglobulínico y favorecer puesto que presentan un único sitio de combina-
la activación del sistema del complemento y la ción con el antígeno. El tercer fragmento, deno-
unión a receptores Fc. Cada cadena pesada está minado Fc (fragmento cristalizable) de aproxima-
formada por segmentos o dominios de 110 damente 50 kDa, contiene el segmento
aminoácidos, que incluyen un dominio variable carboxiterminal de la cadena pesada, es responsa-
(VH) aminoterminal que forma parte del paratopo ble de la función efectora de un anticuerpo y,
y tres o cuatro dominios constantes (C H ) presenta una gran facilidad para cristalizar en so-
carboxiterminales, que determinan la función luciones amortiguadoras neutras.
efectora de un anticuerpo.
Diferencias estructurales en la región El fragmento Fc de un anticuerpo, participa
carboxiterminal, permiten reconocer, en un mis- en funciones efectoras tales como: activación del
mo individuo, cinco clases o isotipos de cadenas sistema del complemento, activación de células
pesadas, que se designan con letras griegas: fagocíticas, citotoxicidad dependiente de
gamma (γ) presente en la IgG, mu (µ) en la IgM, anticuerpos (ADCC), inmunidad de mucosas, in-
alfa (α) en la IgA, delta (δ) en la IgD y épsilon (ε) munidad neonatal, hipersensibilidad inmediata
en la IgE. y regulación de la respuesta inmune. Distintos ti-
La cadena pesada contiene además una re- pos celulares (monocitos, células NK, macrófagos,
gión bisagra, rica en prolina y de gran flexibili- células cebadas y granulocitos, entre otras) pre-

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Sin título-2 127 5/26/06, 10:25 AM


sentan en su membrana plasmática receptores Fc 5.2. Dominios de inmunoglobulinas y regiones
(FcR) isotipo-específicos para el fragmento Fc de hipervariables
distintas clases de anticuerpos (FcγR, FcαR,
FcεR). Estos receptores Fc, presentan un dominio La secuenciación completa de una molécula de
citoplasmático implicado en la transducción de inmunoglobulina, permitió definir los sitios de unión
señales de activación tales que, la naturaleza de la al antígeno y localizar las regiones responsables de
respuesta efectora dependerá del isotipo de Ig las actividades biológicas secundarias o efectoras de
unida al FcR y del tipo de célula que expresa el los anticuerpos. Se descubrió así que las cadenas
receptor. pesadas y livianas de los Igs están estructuradas en
El tratamiento de un anticuerpo con regiones o dominios homólogos y globulares, de
pepsina, genera un fragmento bivalente F(ab’)2, aproximadamente 110 aminoácidos, que forman un
que contiene dos fragmentos Fab covalente- asa o “loop” característico, unido por puentes
mente unidos entre sí y pequeños fragmentos disulfuro intracatenarios (figuras 6-1 y 6-2).
peptídicos derivados de la degradación de la La homología aminoacídica entre los distin-
región carboxiterminal Fc, de las cadenas pesa- tos dominios de la molécula, sugiere que las
das (figura 6-4). inmunoglobulinas se habrían originado a partir de
un gen ancestral común, que codificaba para un
polipéptido de 110 aminoácidos y de función des-
conocida. En el curso de la evolución este gen
habría sufrido sucesivas duplicaciones y mutacio-

Figura 6-4. Fragmentos obtenidos por acción de papaína y pepsina, sobre la molécula de inmunoglobulina. La papaína
separa la Ig en dos fragmentos monovalentes Fab que conservan la capacidad de unir específicamente el antígeno y, un fragmento
Fc, responsable de la función efectora de un anticuerpo. La pepsina en cambio, escinde la molécula en un fragmento bivalente
F(ab’)2, con dos sitios de combinación para el antígeno y, en múltiples péptidos de bajo peso molecular derivados de la degradación
del fragmento Fc.

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nes, que generaron las distintas clases y subclases giones hipervariables o regiones determinantes
de inmunoglobulinas. de complementariedad (CDR: "Complementary-
La comparación de la secuencia aminoacídica Determinig-Region"). Los CDRs que son tres seg-
de cadenas pesadas y livianas de diferentes Igs, mentos cortos de 10 aminoácidos (denominados
revela la existencia de una gran variabilidad en el CDR1, CDR2 y CDR3), no contiguos en la se-
extremo aminoterminal, que constituye precisa- cuencia primaria de cadenas pesadas y livianas.
mente el dominio variable (VH y VL) de cada ca- En ambos tipos de cadenas H y L las regiones
dena. En el extremo carboxiloterminal de las ca- hipervariables se localizan en las posiciones 25-
denas pesadas y livianas en cambio, los distintos 35, 50-60 y 90-100 de la cadena polipeptídica.
dominios presentan una muy escasa variación Adyacente a los CDR existen segmentos de
constituyendo los dominios constantes (CH o CL) aminoácidos de menor variabilidad, conocidos
de cada cadena. En las cadenas pesadas γ, α y δ como regiones marco, regiones de entramado o
existen tres dominios constantes (CH1, CH2 y CH3), regiones flanqueantes FR1, FR2, FR3 y FR4 (FR:
mientras en las cadenas pesadas µ y ε, existen "Framework-Regions"), situadas en las posicio-
cuatro dominios constantes (CH1, CH2, CH3 y CH4). nes 1-30, 35-50, 60-90 y 98-110, respectivamen-
En las cadenas livianas existe sólo un dominio te. Estas regiones FR proporcionan un marco es-
constante CL (figuras 6-1 y 6-2). tructural para la yuxtaposición de los CDR y con-
Cada dominio de la molécula de inmuno- formación del paratopo y, eventualmente, pueden
globulina tiene la forma de un cilindro compuesto estar involucradas en el contacto con el antígeno,
por dos hojas: una contiene tres hebras de cadenas especialmente cuando se trata de haptenos, donde
polipeptídicas y la otra cuatro. En cada hoja, las uno o más CDRs puede estar fuera de la región de
hebras adyacentes son antiparalelas y forman una contacto con el antígeno.
estructura secundaria tipo beta u hoja plegada. Las regiones variables de las cadenas pesa-
Ambas hojas están alineadas en forma casi parale- das y livianas pueden dividirse en subgrupos, se-
la y tienen enlaces disulfuro intracadenas entre dos gún la secuencia aminoacídica de las regiones de
cisteínas altamente conservadas, cada una pertene- entramado. El número de subgrupos depende de
ciente a una de las hélices de cada lámina (figura 6- cada especie. En humanos, existen cuatro
5). Las proteínas que presentan una estructura si- subgrupos para cadenas kappa, seis para cadenas
milar, se clasifican en el grupo denominado lambda y tres para cadenas pesadas.
superfamilia de las inmunoglobulinas.
De los 110 aminoácidos de la región varia- 5.3. Variaciones isotípicas, alotípicas e
ble de las cadenas H y L, sólo participan en el idiotípicas
sitio de unión con el antígeno alrededor de 30 re-
siduos de cada cadena, situados en las regiones de El sistema inmune es capaz de generar un
mayor variabilidad aminoacídica, denominadas re- repertorio linfocitario B estimado entre 1014 y 1016

Figura 6-5. Dominio constante y variable de una cadena liviana. Los dominios tienen una estructura beta mantenida por
puentes disulfuro. En el extremo de la región variable, las regiones hipervariables forman parte del sitio de unión al antígeno. Este
sitio se completa con las regiones hipervariables presentes en la cadena pesada.

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células distintas y capaces de originar un reper- Así, en humanos se han descrito cinco gru-
torio de anticuerpos de igual diversidad. Las fun- pos distintos de marcadores alotípicos denomina-
ciones biológicas de este repertorio de anti- dos Gm, Am, Mm (que se expresan en los domi-
cuerpos estarán fundamentalmente determinadas nios constantes de las cadenas pesadas γ, α y µ,
por variaciones en la especificidad y afinidad de respectivamente), Km que se expresa en el domi-
sus paratopos y por diferencias estructurales en nio constante de las cadenas livianas kappa y Hv
la región carboxiterminal (Fc), de sus cadenas que se expresa en el dominio variable de las cade-
pesadas. nas pesadas y debe por lo tanto ser considerado
El estudio de las variaciones estructurales y/ como marcador idiotípico. Variaciones en la re-
o funcionales de cadenas pesadas y livianas, ha gión constante de las cadenas pesadas de IgG han
permitido identificar en los anticuerpos 3 tipos permitido distinguir al menos 24 variantes distin-
distintos de variaciones, denominadas: (i) varia- tas (3 de las cuales han sido asociadas con IgG1,
ciones isotípicas expresadas en los dominios cons- 1 asociada con IgG2, 13 asociadas con IgG3 y 7
tantes de cadenas pesadas o livianas de todos los variantes que no han sido asociadas a una subclase
individuos de una especie, (ii) variaciones particular).
alotípicas expresadas en los dominios constantes
de cadenas pesadas o livianas de algunos, pero no 5.3.3. Variaciones idiotípicas
todos los individuos de una misma especie, y (iii)
variaciones idiotípicas, expresadas en las regio- La utilización de inmunoglobulinas como
nes variables o en los paratopos de distintos antígeno, ha permitido definir determinantes
anticuerpos. antigénicos específicos, denominados
idiotopos, asociados a las regiones o dominios
5.3.1. Variaciones isotípicas variables de cada Ig. El conjunto de idiotopos
de una inmunoglobulina, particularmente aqué-
Definen variaciones estructurales en la re- llos asociados al sitio de combinanción o
gión constante de cadenas livianas o pesadas de paratopo, definen el llamado idiotipo de esa
una inmunoglobulina. Así, diferencias aminoa- Ig o anticuerpo particular. Los idiotipos son
cídicas en el dominio constante, de cadenas livia- generalmente propios o específicos de
nas que expresan la misma región variable VL , anticuerpos derivados de un clon linfocitario
determinan la existencia de dos tipos o isotipos de B particular (idiotipos privados) o pueden ser
cadenas livianas, denominados kappa (κ) y lambda compartidos por varios clones linfocitarios
(λ). (idiotipos públicos).
Diferencias estructurales en la región cons-
tante de cadenas pesadas que expresan la mis- 5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas
ma región variable VH, determinan la existen-
cia de 5 clases o isotipos de cadenas pesadas En mamíferos superiores, específicamente
(denominadas µ, δ, γ, α y ε ) que conducen a la en humanos, se reconocen clases y subclases
existencia de 5 clases o isotipos de inmu- de inmunoglobulinas que difieren en tamaño,
noglobulinas que difieren en su función efectora carga, composición aminoacídica y contenido
y se denominan IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, res- de carbohidratos de sus cadenas pesadas.
pectivamente Electroforéticamente, presentan un espectro de
migración, que va desde la fracción gamma a la
5.3.2. Variaciones alotípicas alfa del suero normal. Las fracciones en que
migran más frecuentemente son: IgG en la frac-
Definen variaciones estructurales en las re- ción gamma, IgA en gamma-beta, e IgM e IgD en
giones constantes de las cadenas pesadas o livia- beta.
nas de una clase de Ig, entre diferentes individuos La tabla 6-1, presenta las características
de una misma especie. Estas variaciones se here- fisicoquímicas de las Igs humanas y la tabla 6-2
dan en forma estrictamente mendeliana y no liga- muestra sus características biológicas.
da al sexo. Los isotipos se expresan en todos los
individuos de una especie, mientras los alotipos
se expresan sólo en algunos individuos de la es-
pecie.

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Tabla 6-1. Características fisicoquímicas de las inmunoglobulinas humanas
Característica Clase de Inmunoglobulina
IgG IgM IgA IgD IgE
Cadenas H γ µ α δ ε
Subclases de cadenas H γ1, γ2, γ3, γ4 µ1, µ2 α1, α2 _ _
Cadenas L κóλ κóλ κóλ κóλ κóλ
Peso molecular (kDa) 150 970 160 - 400 184 188
Número de monómeros 1 5 1-2 1 1
Carbohidratos (%) 2-3 12 7 - 11 9 - 13 12
S 7 19 7 - 18 7 8
Valencia 2 10 2-4 2 2
Cadena J No Sí Sí, No No
polimérica
H, pesada; L, liviana; S, coeficiente de sedimentación.

Inmunoglobulina G. La IgG representa el media de aproximadamente 21 días. Entre sus pro-


70-75% del repertorio total de inmunoglobulinas, piedades biológicas destaca que todas las subclases
siendo en su mayor parte de la subclase IgG1. Es (con excepción de IgG 2 ), pueden unirse al
una glicoproteína monomérica que posee dos ca- sincitiotrofoblasto placentario a través de los do-
denas pesadas g y dos cadenas livianas (κ o λ) minios CH1 y CH2; son por lo tanto, capaces de
(figura 6-2). Su peso molecular es de aproxima- atravesar la placenta y responsables de la protec-
damente 150 kDa y está glicosilada en un 2 a 3%. ción del recién nacido en los primeros meses de
Existen cuatro subclases (IgG1 a IgG4) originadas vida. La IgG es también importante en la induc-
por pequeñas diferencias en la región constante ción de fagocitosis (opsonización) dado que sus
de la cadena pesada, particularmente a nivel de la dominios CH1 y CH2 pueden unirse a receptores
región bisagra. Son los anticuerpos predominan- (FcγR) presentes en la superficie celular de
tes en la sangre, linfa y fluidos peritoneal y cere- monocitos, macrófagos y neutrófilos. Todas las
broespinal. En cuanto a su comportamiento tér- subclases de IgG (excepto IgG4 que lo hace muy
mico, las IgG reaccionan mejor a 37°C. débilmente), unen el primer componente (C1q),
Los anticuerpos de clase IgG predominan en del sistema complemento y pueden por lo tanto,
la respuesta inmune secundaria y tienen una vida activar complemento a través del dominio CH2.

Tabla 6-2. Características biológicas de las inmunoglobulinas humanas

Característica Clase de Inmunoglobulina


IgG IgM IgA IgD IgE
Porcentaje del total de Ig
en la sangre 70 -75 10 15 - 20 £1 ≥1
Concentración en el suero 800 - 1600 50 - 200 140 - 400 0,3 - 40 0,01 - 0,1
(mg/ml)
Fija complemento Sí Sí Sí No No
Atraviesa la placenta Sí No No No No
Unión a macrófagos y Sí No No No No
neutrófilos
Unión a células cebadas y No No No No Sí
basófilos
Unión a plaquetas Sí No No No No

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Inmunoglobulina M. La IgM tiene un peso te en la respuesta inmune primaria y tiene una vida
molecular de aproximadamente 970 kDa y repre- media de 5 días. Es la Ig más eficiente en la fija-
senta el 10% del repertorio total de anticuerpos. ción de complemento, en las reacciones de lisis
Es una inmunoglobulina o anticuerpo polimérico celular y en la potenciación de las reacciones de
con 10 ó 12 sitios de unión para el antígeno (da- fagocitosis. Es una inmunoglobulina que reaccio-
dos por 5 ó 6 monómeros inmunoglobulínicos) y na bien a temperaturas inferiores a 37°C.
está glicosilada en un 12%. La estructura básica
del monómero IgM está dada por dos cadenas pe- Inmunoglobulina A. La IgA representa de 10 a
sadas m y dos cadenas livianas κ o λ. 5% del total de inmunoglobulinas corporales. Pue-
Las cadenas m poseen cuatro dominios cons- de ser monomérica (160 kDa) o dimérica (385
tantes (figura 6-6). Las subunidades se unen a tra- kDa); la forma dimérica existente en las
vés de enlaces disulfuro entre los dominios Cµ3. secreciones, se denomina IgA secretora (IgAs);
La polimerización de la molécula se ve favoreci- Los anticuerpos IgA poliméricos presentan, al
da por la existencia de la cadena J (“joining” o de igual que las IgM poliméricas, la cadena J y el
unión), de aproximadamente 15-20 kDa, que se llamado componente secretor (glicoproteína de
une a nivel de los penúltimos residuos de cisteína 70 kDa), que constituye un remanente del recep-
de cadenas µ, entre la primera y la última unida- tor poli-Ig (poli-IgR) sintetizada por las células
des monomérica del polímero. El 80% de la IgM epiteliales (figura 6-7). La cadena J se une al do-
se encuentra en el espacio intravascular. minio CH3 y el componente secretor al dominio
La IgM es la inmunoglobulina predominan- CH2 del dímero IgA.

Figura 6-6. Estructura de la Inmunoglobulina M. Las cinco unidades estructurales básicas se unen por puentes disulfuro. Las
cadenas m poseen cuatro dominios constantes. Una cadena J inicia el ensamblaje del pentámero.

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Figura 6-7. Inmunoglobulina A monomérica, dimérica y de secreción. Las IgA monomérica y dimérica corresponden a formas
séricas; la dimérica tiene una cadena J. La IgA secretora, además de la cadena J, presenta un componente secretor.

La IgA es la principal inmunoglobulina pre- de las lectinas, impide la adherencia de bacterias


sente en leche, saliva, lágrimas, y secreciones res- a la superficie de la mucosa intestinal y su por-
piratorias y digestivas. Las células epiteliales sin- ción Fc se une al receptor fagocítico Fcα-R
tetizan el poli-IgR en el retículo endoplásmico, y (CD89).
luego de pasar por el complejo Golgi será expues- Existen dos subclases de IgA (IgA1 e IgA2)
to, como receptor para las IgA e IgM poliméricas, que presentan pequeñas diferencias en las regio-
en la superficie basolateral de la célula epitelial. nes constantes de las cadenas alfa. No se han ob-
La unión no covalente, del extremo servado diferencias en la actividad biológica.
carboxiterminal del anticuerpo al receptor es de-
pendiente de la cadena J. El complejo IgA-poli- Inmunoglobulina D. La IgD tiene un peso
IgR (o IgM-poli-IgR) ingresa por endocitosis a la molecular de aproximadamente 185 kDa, está
célula epitelial y es luego transportado a la super- glicosilada en un 9 a 14% y tiene una vida media
ficie apical o luminal del epitelio (transcitosis) de 2 a 3 días. Existe controversia sobre su fun-
donde el receptor será parcialmente digerido, de- ción; sin embargo, se piensa que por encontrarse
jando un fragmento o componente secretor presente en cantidades importantes sobre la mem-
covalentemente unido al anticuerpo secretado. El brana de los linfocitos B circulantes, podría estar
componente secretor protege a IgA e IgM, de la involucrada en la activación de dichas células
acción de las enzimas proteolíticas presentes en como receptor de antígeno. Representa menos del
las secreciones (figura 6-8). 1% del total de las inmunoglobulinas y la mayor
Entre las propiedades de la IgA destacan las parte se encuentra en el espacio intravascular (fi-
siguientes: neutraliza los virus, activa el sistema gura 6-9).
del complemento por la ruta alterna y por la ruta

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Sin título-2 133 5/26/06, 10:25 AM


Figura 6-8. Proceso de secreción de la IgA. La IgA plasmática dimérica se une al receptor poli-Ig expuesto en la superficie
basolateral de la célula epitelial e ingresa a la célula como complejo poli-Ig-IgA, por endocitosis. Posteriormente, hacia el lado
luminal de la célula, el receptor poli-Ig, es parcialmente digerido, dejando un fragmento o componente secretor, covalentemente
unido a la IgA dimérica secretada.

Figura 6-9. Estructura de las inmunoglobulinas E y D. La IgD y la IgE son inmunoglobulinas monoméricas de aproximada-
mente 185 y 190 kDa, respectivamente. Las cadenas e poseen cuatro dominios constantes.

Inmunoglobulina E. La IgE es una glico- inmunoglobulinas y el 50% de ella se encuen-


proteína de aproximadamente 190 kDa, que se tra en el espacio intravascular. La región Fc de
encuentra glicosilada en un 12% y tiene una vida la IgE se une con facilidad a receptores espe-
media de 2 a 3 días. Las cadenas e presentan cua- cíficos de alta afinidad (receptores FcεRI),
tro dominios constantes (figura 6-9). La IgE re- constitutivamente expresados en la membrana
presenta menos del 1% del total de las de células cebadas, basófilos y eosinófilos, de

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Sin título-2 134 5/26/06, 10:25 AM


esta manera estas células adquieren receptores 6. RESPUESTA INMUNE HUMORAL
antígeno-específicos. La unión de antígenos
(alergenos) a las IgE unidas a mastocitos y Los anticuerpos producidos por las células
basófilos, gatilla no sólo la degranulación ce- plasmáticas -que representan el estado final de dife-
lular y la liberación (exocitosis) de mediado- renciación de los linfocitos B- son mediadores de la
res de inflamación (histamina, serotonina, respuesta inmune humoral y por lo tanto, responsa-
triptasa), sino también la síntesis de citoquinas bles de la neutralización y eliminación de diversos
(IL-4, IL-5, IL-6, TNF) y de mediadores deri- antígenos, gatillando una variedad de reacciones
vados del ácido araquidónico (leucotrieno C4, inmunológicas. Una de las características esenciales
prostaglandina D2). La liberación de estos me- de esta respuesta es su carácter específico y heterogé-
diadores de hipersensibilidad inmediata en re- neo; es decir, se sintetizan anticuerpos de distinta cla-
acciones alérgicas como asma, fiebre del heno se, avidez y afinidad, capaces de interactuar con
y urticaria, induce rápidamente edema de la epítopos antigénicos según un claro patrón temporal.
mucosa bronquial, secreción de mucus, con- En un individuo que por primera vez toma con-
tracción de la musculatura lisa y, subse- tacto con un antígeno, se distinguen cuatro fases en
cuentemente, infiltrado leucocitario en el sitio la respuesta primaria de producción de anticuerpos
de inflamación. (figura 6-10): (i) Fase de latencia, en la que no se
Un FcεR de baja afinidad y rol biológico has- detectan anticuerpos, (ii) Fase logarítmica, en la cual
ta ahora desconocido (FcεRII) se expresa el título del anticuerpo se eleva en forma exponencial,
constitutivamente en linfocitos B (receptor (iii) Fase de meseta, en cual el título de anticuerpos
FcεRIIA) o en respuesta a IL-4, en monocitos y se estabiliza, y (iv) Fase de descenso, en cual la con-
eosinófilos (receptor FcεRIIB o CD23). centración de anticuerpos disminuye por eliminación
o catabolismo.

Figura 6-10. Respuesta inmune humoral. La figura superior presenta las etapas de una respuesta inmune humoral, expresadas
como título de anticuerpos: Fase de latencia, logarítmica, de meseta y de decadencia. La figura inferior muestra diferencias entre
las respuestas inmune humoral primaria y secundaria, particularmente respecto a la clase de inmunoglobulinas y al título de los
anticuerpos. Se destaca que en la respuesta primaria, se pesquisa primero IgM en bajo título y en la respuesta secundaria predomi-
na la síntesis de IgG, en un título significativamente superior (ver cambio de clase).

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Sin título-2 135 5/26/06, 10:25 AM


Aunque estas fases de la curva de produc- el antígeno y el anticuerpo. Operacionalmente, esto
ción de anticuerpos se presentan siempre en la res- significa que mientras mayor es la afinidad de la
puesta primaria, en los posteriores contactos con interacción, es más difícil separar los componen-
el antígeno (respuesta secundaria, terciaria, etc.), tes del complejo antígeno-anticuerpo.
pueden distinguirse los siguientes aspectos (figu- Dado que las interacciones antes menciona-
ra 6-10): (i) Evolución cronológica, fase de das no son covalentes, la unión antígeno-anticuer-
latencia más corta y fases de meseta y de descen- po se puede representar por la constante de aso-
so más largas, (ii) Título de anticuerpos, en la fase ciación o afinidad Ka, (que se expresa en M-1). Se
de meseta mucho mayor concentración de obtiene asumiendo que esta reacción obedece ri-
anticuerpos, (iii) Clase de anticuerpos, en la res- gurosamente a la ley de acción de masas, como
puesta primaria para los antígenos timo-depen- sigue:
dientes, se sintetizan y secretan fundamentalmen-
te anticuerpos de isotipo IgM, de gran avidez, en
cambio en la respuesta secundaria se encuentran Ka [ AgAc ]*
casi exclusivamente anticuerpos de isotipo IgG, y Ag + Ac AgAc Ka =
(iv) Afinidad de los anticuerpos, generalmente Kd [ Ag ] x [ Ac ]
mucho mayor en la respuesta secundaria o poste-
rior. Este fenómeno se denomina maduración de * Concentración Molar
la afinidad y es consecuencia de la hipermutación
somática en los genes recombinados del anticuer-
po y de una expansión selectiva de los clones de La Ka se puede medir por varias técnicas,
alta afinidad. tales como: diálisis en equilibrio, radioinmu-
noensayo y precipitación con sulfato de amonio
6.1. Avidez de complejos antígeno-anticuerpo.

El término avidez se refiere a la fuerza con


que un anticuerpo se une a un antígeno multi- 7. BASES GENÉTICAS DE LA DIVERSI-
valente y, por lo tanto, tiene relación con la afini- DAD DE LAS INMUNOGLOBULINAS
dad y con la valencia del antígeno y del anticuer-
po. Si tanto el antígeno como el anticuerpo tienen En los vertebrados superiores el tamaño y di-
carácter multivalente, la fuerza de unión entre ellos versidad del repertorio linfocitario, aumenta la pro-
es mayor que la suma de las afinidades. babilidad que un linfocito individual encuentre un
Debido a que la avidez de un anticuerpo es antígeno que se una a su receptor de superficie y
una función de los métodos utilizados para me- gatille la proliferación y diferenciación celular a
dirla (precipitación con sulfato de amonio o con través de un proceso de selección clonal de
suero anti-Ig o, seroneutralización de fagos o bac- linfocitos.
terias, entre otros), sólo puede expresarse en uni- El receptor de un linfocito B (BCR) es ge-
dades arbitrarias. nerado somáticamente en el órgano linfoide pri-
mario, durante un proceso de diferenciación
6.2. Afinidad antígeno independiente que permite que cada
linfocito B esté provisto de un receptor único,
El término “afinidad de un anticuerpo”, es cuyas cadenas pesadas y livianas no están co-
una expresión termodinámica de la fuerza de la dificadas en el DNA germinal y no está predes-
interacción entre un epítopo del antígeno y el sitio tinado a reconocer un antígeno extraño particu-
de combinación de un anticuerpo; por lo tanto, es lar.
una medida de la compatibilidad estereoquímica El repertorio de receptores linfocitarios B
entre ambas moléculas y puede aplicarse a es generado al azar durante un proceso regula-
interacciones que involucran determinantes sim- do de reordenamiento o recombinación de seg-
ples (como los haptenos). mentos génicos V(D)J (como ocurre en huma-
La afinidad resulta de la suma de las fuerzas nos), por conversión génica (como ocurre en
de repulsión y atracción (puentes de hidrógeno, pollos y conejos) o por mutación somática
interacciones de Van der Waals, interacciones (como ocurre en ovejas). Además durante la
electrostáticas e interacciones hidrofóbicas) entre recombinación V(D)J, puede introducirse una

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mayor diversidad por: (i) corte impreciso de los 7.1. Genes de inmunoglobulinas
segmentos génicos que se recombinan, (ii)
agregado de nucleótidos al azar, en los sitios En el DNA germinal de los vertebrados su-
de corte y unión de los distintos segmentos periores no existen genes que codifiquen la sínte-
génicos y, (iii) combinación al azar de distintas sis de cadenas pesadas y livianas de una
cadenas pesadas y livianas. A estos mecanismos inmunoglobulina; al contrario estos genes deben
de generación de diversidad en el órgano ser creados o ensamblados a partir de copias múl-
linfoide primario, se agregarán luego, en los tiples de pequeños segmentos génicos, en un pro-
órganos linfoides secundarios, mecanismos ceso de recombinación sitio-específico, catalizado
antígeno-dependientes como: (i) la hipermu- por un complejo enzimático denominado
tación de las regiones hipervariables (CDRs) de recombinasa (figuras 6-11 y 6-12).
cadenas pesadas y livianas, (ii) el “switching” Los segmentos génicos que codifican las dis-
isotípico o cambio de clase de las cadenas pe- tintas regiones o dominios de cadenas pesadas y
sadas y (iii) la edición del receptor a través de livianas de una inmunoglobulina, se encuentran
reordenamientos secundarios V en las cadenas agrupados en tres grupos o familias génicas dis-
livianas. tintas: (i) una única familia génica H, que incluye

Figura 6-11. Generación del gen activo de la cadena pesada. El gen activo para una cadena H surge de cuatro genes (V, D, J y
C) de la línea germinal. Mediante recombinación somática se unen a una de las secuencias V, D y J, formando la región variable.
Los genes para región constante (nueve en el ser humano) están situados río abajo (hacia 3'). Uno de los genes constantes se une a
los segmentos ya recombinados que codifican la región variable. El montaje final de las secuencias se realiza durante el procesa-
miento del RNA.

Figura 6-12. Recombinación de segmentos génicos y generación de RNA mensajero para cadenas livianas. En la célula
precursora de un linfocito B, los distintos segmentos génicos se encuentran en configuración germinal y deben recombinarse para
generar un gen que codifique la cadena liviana de una inmunoglobulina.

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genes CH (constantes), genes VH (variables), genes denas pesadas ocupa 1250 kilobases (kb), en el
JH (unión) y genes DH (diversidad) de las cadenas brazo largo del cromosoma 14, y consiste de 123
pesadas; (ii) dos familias génicas livianas distin- a 129 segmentos génicos variables VH, 27 segmen-
tas (kappa y lambda) que incluyen genes CL (cons- tos génicos DH, 9 segmentos génicos JH y 11
tantes), genes VL (variables) y genes JL (unión). minigenes constantes CH. Los segmentos génicos
En humanos, los segmentos génicos que codifi- variables ocupan una posición muy cercana al
can las cadenas pesadas se encuentran en el telómero cromosómico y entre ellos se distinguen
cromosoma 14 y los de cadenas livianas κ y λ en 41 seudogenes y sólo 82 a 86 segmentos funcio-
los cromosomas 2 y 22, respectivamente. En el nales que se clasifican en 7 familias o subgrupos
ratón, en cambio, los genes para cadenas pesadas cuyos miembros presentan más de 70% de
se ubican en el cromosoma 12, y los genes para homología. Los minigenes constantes ocupan una
cadenas livianas κ y λ, se ubican en los posición más centromérica en el cromosoma 14
cromosomas 6 y 16, respectivamente. humano. Se han descrito además, fuera del
cromosoma 14 humano, 35 segmentos génicos
7.1.1. Genes de cadenas pesadas huérfanos y no funcionales que no contribuyen a
la síntesis de cadenas pesadas: 9 segmentos VH y
La región variable de una cadena pesada 10 segmentos DH en el cromosoma 15; 16 seg-
(VH, de aproximadamente 110 aminoácidos), se mentos VH en el cromosoma 16 y un segmento VH
genera a partir de tres segmentos génicos dis- en el cromosoma 9.
tintos: un segmento génico variable VH, de 285 Los seudogenes o segmentos génicos no fun-
pares de bases, que codifica los primeros 95 cionales, aunque no contribuyan directamente a
aminoácidos y dos segmentos génicos distintos la diversidad de las cadenas, pueden constituir un
(de diversidad DH y de unión JH) que codifican importante reservorio de diversidad, puesto que
los últimos 13 aminoácidos del dominio varia- pueden utilizarse en la recombinación desigual
ble. Cada segmento génico VH contiene ade- (conversión génica) con segmentos génicos fun-
más en su extremo 5’, una pequeña secuencia cionales y generar así nuevos segmentos génicos
nucleotídica de 60 a 90 pares de bases, que co- funcionales.
difican una secuencia aminoacídica líder o se-
ñal aminoterminal hidrofóbica de 20 a 30 7.1.2. Genes de cadenas livianas
aminoácidos, que permite la síntesis de la cade-
na liviana en ribosomas asociados al retículo La región o dominio variable de una cadena
endoplásmico celular. Iniciada la síntesis de la liviana (V L de aproximadamente 110 ami-
cadena liviana, la secuencia líder o señal es lue- noácidos), se genera a partir de dos segmentos
go, rápidamente removida del extremo amino génicos distintos: un segmento génico variable VL,
de la proteína (figura 6-11). de 285 pares de bases, que codifica los primeros
El sitio de ensamblaje de los segmentos 95 aminoácidos y, un segmento génico de unión
V(D)J codifica la tercera región hipervariable JL, de 39 pares de bases que codifica los últimos
(CDR3), de la cadena pesada, mientras las dos 13 aminoácidos del dominio variable liviano
primeras regiones hipervariables (CDR1 y CDR2), (aminoácidos 96 al 108 en dirección amino-
están codificadas dentro del segmento génico VH. carboxilo). Cada segmento génico VL contiene
La región constante de la cadena pesada está además en el extremo 5’, una pequeña secuencia
codificada por un segmento génico o minigen nucleotídica de 60 a 90 pares de bases, que codifi-
constante CH que contiene 3 ó 4 exones (CH1, CH2, ca una secuencia aminoacídica líder o señal
CH3, CH4: que codifican la región constante de las hidrofóbica, ubicada en el extremo amino de la
cadenas pesadas de los anticuerpos) y exones más cadena liviana (figura 6-12).
pequeños que codifican la región transmembrana El dominio constante de la cadena liviana
y el dominio citoplasmático de la cadenas pesa- está codificado por un segmento o minigen cons-
das de Ig del receptor linfocitario BCR (figura 6- tante (CL) que contiene un único exón de aproxi-
1). Los minigenes de cadenas pesadas de diferen- madamente 330 pares de bases, puesto que las
tes isotipos (Cµ, Cδ, Cγ, Cα y Cε), están ordena- cadenas livianas no contienen dominios
das en series (en tándem), en un orden que es ca- transmembrana y citoplasmático (figura 6-1).
racterístico de cada especie.
En humanos, el repertorio genómico de ca-

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a) Genes de cadena kappa sadas y luego los segmentos génicos que codifi-
can las cadenas livianas.
En humanos el repertorio genómico para cade- La recombinación es iniciada por un com-
nas livianas kappa (κ), ocupa 1820 kb en el brazo cor- plejo enzimático o recombinasa, que reconoce y
to del cromosoma 2 y consiste de 76 segmentos varia- corta de manera específica, una secuencia señal
bles Vκ (agrupados en 7 familias distintas, y cuyos de recombinación (RSS: "Recombination Signal
miembros muestran más de 70% de homología), 5 Sequence") que flanquea o es adyacente a cada
segmentos génicos de unión Jκ y un único gen cons- uno de los segmentos génicos V(D)J que deben
tante Cκ. Los segmentos variables Vκ, están separa- reordenarse. Cada secuencia RSS consta de un
dos en dos grupos o “clusters”: uno distal contenien- heptámero conservado (5’CACAGTG) y un
do 36 genes en 400 kb (más centromérico y en posi- nonámero también conservado (5’
ción 5’, más lejos del gen constante Cκ) y, otro más ACAAAAACC), separados entre sí por un
proximal conteniendo 40 segmentos génicos en 600 espaciador no conservado de 12 ó 23 pares de
kb (en posición más telomérica y en posición 3’, más bases (figura 6-13). Los espaciadores definen dos
cercano al gen constante Cκ). tipos distintos de secuencias de recombinación (de-
Se ha descrito además un haplotipo raro que nominadas 12-RSS y 23-RSS) y, el reor-
contiene sólo el “cluster” proximal con 40 segmen- denamiento se realiza de manera tal que una
tos génicos Vκ distribuidos en 7 familias, de los recombinación eficiente sólo ocurre cuando un
cuales 18-20 son segmentos funcionales. En este segmento génico que contiene el espaciador 12-
haplotipo se han identificado y secuenciado, ade- RSS, se reordena con un segmento génico distin-
más, 28 segmentos génicos Vκ adicionales y “huér- to que contiene el espaciador 23-RSS. Esta res-
fanos”, distribuidos en distintos cromosomas: 3 tricción del reordenamiento génico, se conoce
ubicados en el brazo corto del cromosoma 2, (pero como “la regla 12/23” y determina qué segmen-
fuera del locus mayor IgLκ), 13 segmentos en el tos podrán recombinarse entre sí, dependiendo
brazo largo del cromosoma 2, 6 segmentos en el de la posición de las secuencias 12-RSS o 23-
cromosoma 22, 1 en el cromosoma 1, 1 en el RSS, en el extremo 5’ o 3’ de cada segmento
cromosoma 15 y 4 fuera del cromosoma 2. génico (figura 6-14). La secuencia RSS se encuen-
tra en el extremo 3’ de cada segmento variable V,
b) Genes de cadenas lambda en el extremo 5’ de cada segmento de unión J y en
ambos extremos, 5’ y 3’, de los segmentos génicos
En humanos el repertorio genómico de cade- de diversidad D.
nas livianas lambda (λ), ocupa 1050 kb en el bra- El proceso de recombinación o reordena-
zo largo del cromosoma 22 y contiene: 70-71 seg- miento génico es altamente complejo e implica la
mentos variables Vλ, que ocupan 900 kb (depen- participación de una maquinaria enzimática
diendo del haplotipo), 7 a 11 segmentos constan- (recombinasa) que incluye componentes de expre-
tes (Cλ) en posición más telomérica y, además, sión exclusivamente linfocitaria y componentes
cada segmento génico constante está precedido que forman parte de la maquinaria de reparación
por un único segmento génico Jλ. Los segmentos del DNA celular.
génicos Vλ ocupan una posición más centromérica El reordenamiento V(D)J es iniciado por los
y entre ellos se distinguen 14 seudogenes y 56-57 productos de expresión linfoide-específica de los
segmentos Vλ funcionales, agrupados en 11 fa- genes RAG-1 y RAG-2 (RAG: "Recombination
milias distintas. Se han descrito además dos seg- Activating Gene") que reconocen y cortan las se-
mentos génicos huérfanos ubicados en el cuencias RSS, adyacentes a cada segmento génico
cromosoma 8 humano y dos segmentos Vλ y dos que será recombinado. Las secuencias RSS son
segmentos constantes Cλ, en el cromosoma 22, primero reconocidas por la maquinaria de
por fuera del locus mayor de cadenas livianas recombinación y luego aproximadas en estrecha
lambda. yuxtaposición o sinapsis para cortar de manera
precisa el DNA, en el límite entre el heptámero
7.2. Reordenamiento génico de cada secuencia RSS y el segmento génico
codificante. Proteínas de alta movilidad de los gru-
El reordenamiento génico se realiza de manera pos 1 y 2 (HMG1/2) parecen desempeñar un rol
definida y ordenada, recombinando primero los auxiliar en estos eventos tempranos de la
segmentos génicos que codifican las cadenas pe- recombinación génica. El corte o daño en el DNA

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agregar nucleótidos en los extremos libres de los
segmentos génicos codificantes, incrementando
notablemente la diversidad generada durante este
proceso de reordenamiento o recombinación
génica.

7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas

El reordenamiento de segmentos génicos en


el locus para cadenas pesadas, se realiza en un
orden preciso e implica la eliminación o deleción,
de todos los segmentos que separan a aquéllos
que deben recombinarse. Primero se reordena un
segmento génico de diversidad D, con un seg-
mento de unión J, eliminando toda la secuencia
nucleotídica que los separa, pero manteniendo
todos los segmentos génicos que están en posi-
ción y dirección 5’ del segmento D y en posición
y dirección 3’ del segmento J que se recombina.
Luego, uno de los segmentos génicos variables
V, se recombina con el complejo DJ ya
reordenado, eliminando los segmentos que los
separan y conservando aquéllos que están en
Figura 6-13. Recombinación de segmentos génicos V(D)J. posición y dirección 5’ de V y en dirección 3’ del
La recombinación de segmentos génicos es iniciada por un complejo DJ.
complejo enzimático (recombinasa) que reconoce y corta de El DNA ya reordenado, es ahora utilizado
manera específica una secuencia señal de recombinacion (RSS)
que flanquea los segmentos génicos que deben reordenarse. como molde para la síntesis de una RNA o
Cada secuencia RSS consta de un heptámero conservado (5’ transcrito primario que incluirá, tantos los seg-
CACAGTG) y un nonámero tambien conservado (5’ mentos génicos V(D)J recombinados, como los
ACAAAAACC), separados entre sí por un espaciador no con- genes constantes Cµ y Cδ, ubicados en dirección
servado de 12 ó 23 pares de bases. El reordenamiento se reali-
za de manera tal que una recombinanción eficiente sólo ocu- 3’ de los segmentos J. El transcrito primario es
rre cuando un segmento que contiene el espaciador 12-RSS, luego procesado de manera tal que: (i) se elimi-
se reordena con un segmento génico distinto que contiene el nan por "splicing" los segmentos J que separan
espaciador 23-RSS (regla 12/23). V(D)J de CµCδ y los segmentos génicos V, si-
tuados en dirección 5’ del complejo V(D)J
reordenado. Se eliminará además Cµ o bien Cδ,
para generar por “splicing” alternativo, dos RNA
es ahora detectado por la maquinaria celular de mensajeros distintos: uno que contiene V(D)J-
reparación del DNA, que incluye una proteína Cµ y codificará una cadena pesada de tipo mu y
quinasa DNA dependiente (DNA-PK ), reclutada otro que contendrá V(D)J-Cδ y codificará la sín-
en sitio del daño a través de su interacción con el tesis de una cadena pesada delta; (ii) se agrega
heterodímero regulador Ku70/Ku80, que recono- un capuchón de 7-metil guanosina en el extremo
ce los extremos cortados del DNA. La quinasa 5’ del RNA, y (iii) se agrega una cola de poli-A
DNA-PK es una proteína de 450 kDa, codificada (de 150 a 200 adeninas), en el extremo 3’ de
por el gen XRCC7 y perteneciente a la familia de V(D)J-Cµ y en el extremo 3’de V(D)J-Cδ, para
las fosfatidil inositol (PI) quinasas. Forma tam- generar mRNA funcionales, que serán transpor-
bién parte de la maquinaria de reparación el pro- tados desde el núcleo al citoplasma celular pro-
ducto del gen XRCC4 que se une a la DNA-PK y B, para la síntesis de las respectivas cadenas
actúa como una ligasa IV para unir los extremos pesadas Hµ y/o Hδ.
cortados del DNA codificante, en los eventos fi-
nales de reparación del DNA. Previo a la repara- 7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas
ción final del DNA, una exonuclesa puede remo-
ver nucleótidos al azar y la enzima TdT puede El reordenamiento de segmentos génicos

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Sin título-2 140 5/26/06, 10:25 AM


de cadenas livianas kappa o lambda se realiza segmento, presenta cierto grado de imprecisión
de manera similar al reordenamiento de cade- que contribuye a aumentar la diversidad del re-
nas pesadas. Primero se reordenan al azar seg- pertorio linfocitario. Esto significa que en
mentos génicos V y J, con delección del DNA linfocitos que utilizan los mismos segmentos
que separa los segmentos que se recombinan y génicos para generar las cadenas y livianas de su
mantención de los segmentos génicos que están receptor BCR, el corte impreciso del DNA con-
en dirección 5’ del segmento V y en dirección ducirá a variaciones aminoacídicas codificadas por
3’ del segmento J que se recombina. El comple- diferencias en el número de nucleótidos en la re-
jo VJ reordenado, se recombina ahora con un gión de unión de los segmentos génicos
gen constante C, eliminando todo el DNA que recombinados (figura 6-14).
los separa. Si los segmentos J y C están asocia- El reordenamiento impreciso también puede
dos en un mismo grupo o “cluster”, el reorde- llevar a reordenamientos no funcionales que es-
namiento de un J determinado implicará la tén fuera del marco de lectura, de modo que el
recombinación, del gen C asociado a ese seg- DNA no pueda transcribirse
mento génico J.
Reordenado el DNA, se sintetiza ahora un 7.2.4. Diversificación de la región N
transcrito primario que será procesado para gene-
rar el RNA mensajero que codifica la síntesis de Linfocitos que utilizan los mismos segmen-
una cadena liviana kappa o lambda. tos génicos V(D)J para generar las cadenas pesa-
das y livianas de su receptor, pueden presentar un
7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA BCR con claras diferencias aminoacídicas como
consecuencia de la remoción o agregado de
El reordenamiento de segmentos génicos y nucleótidos en la región de unión de esos segmen-
el corte de las secuencias RSS adyacentes a cada tos V(D)J. El agregado aleatorio de nucleótidos

Figura 6-14. Reordenamiento impreciso del DNA. El punto de corte nucleotídico durante la recombinación entre segmentos V
y J, puede variar en un margen de varios nucleótidos, dando lugar a diferentes secuencias nucleotídicas en el gen activo de la
cadena kappa. El aminoácido 96 podría estar codificado por los codones TGG (triptófano), CGG (arginina) y CCG (prolina).

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Sin título-2 141 5/26/06, 10:25 AM


que no están codificados en el DNA germinal es 7.2.6. Exclusión isotípica
catalizado por la enzima TdTy conduce a la gene-
ración de la llamada región N (N: "New El reordenamiento de los genes que codifi-
nucleotides") que, en algunos casos, puede incluir can inmunoglobulinas es desde luego complejo,
hasta 20 nuevos nucleótidos, en la región de unión pero es también altamente ordenado: primero se
de los segmentos génicos reordenados. reordenan los segmentos génicos que codifican
Durante la reparación del DNA en la región cadenas pesadas y luego, la familia de segmentos
de unión de los segmentos génicos, pueden tam- kappa se reordena antes que aquéllos que codifi-
bién transferirse nucleótidos desde la hebra no can la cadena liviana lambda.
codificante, a la hebra codificante del DNA, gene- El reordenamiento productivo (paterno o ma-
rando las denominadas secuencias nucleotídicas P. terno) de una cadena liviana kappa implica por lo
El agregado de nucleótidos en la región de tanto exclusión alélica materna o paterna del locus
unión de los segmentos génicos V(D)J que se kappa y simultáneamente exclusión de los
recombinan, puede llevar a reordenamientos no cromosomas que contienen los segmentos génicos
funcionales que estén fuera del marco de lectura, que codifican la expresión del isotipo liviano
generando codones sin sentido o de término, en lambda (exclusión isotípica).
dos de cada tres reordenamientos. La generación de genes funcionales que co-
difiquen la expresión de cadenas pesadas y livia-
7.2.5. Exclusión alélica nas de una inmunoglobulina depende del fenóme-
no ensayo-error durante el reordenamiento de seg-
El receptor linfocitario BCR, está constituido mentos génicos y depende de diversos elementos
por dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas li- reguladores positivos ("enhancers") y negativos
vianas también idénticas, implicando que cada lin- ("supressors"), ubicados entre los segmentos
focito B sólo puede expresar el locus paterno o ma- génicos que deben reordenarse.
terno, para la síntesis de una cadena pesada o para la
síntesis de una cadena liviana kappa o lambda. La 7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas
síntesis de una cadena pesada µ, como resultado del
reordenamiento exitoso de segmentos génicos V(D)J Una estrategia adicional para la diversifica-
en el alelo de uno de los cromosomas homólogos ción del repertorio de anticuerpos de un individuo
(materno o paterno), inhibe o excluye irreversible- es, durante la generación de linfocitos B de me-
mente el reordenamiento génico en el alelo del otro moria, el cambio de clase de la región constante
cromosoma (exclusión alélica). de la cadena pesada.
El reordenamiento génico en un cromosoma Los linfocitos B vírgenes clonalmente expan-
puede no traducirse en la síntesis de la respectiva didos luego del encuentro con su antígeno especí-
cadena polipeptídica debido a que: (i) durante el fico sufrirán una diferenciación que incluye un
reordenamiento de segmentos génicos V(D)J se proceso de recombinación génica que conduce a
produce deleción o generación de codones de tér- un cambio de la región constante m expresada en
mino de lectura, (ii) el reordenamiento es exitoso el linfocito virgen original, por una región cons-
pero no se generan mRNA funcionales, debido a tante distinta (γ, α ó ε ) en la cadena pesada del
un procesamiento inadecuado del transcrito pri- receptor clonotípico del linfocito B de memo-
mario, y (iii) el reordenamiento génico es incom- ria. De esta manera la asociación de una misma
pleto, puesto que se recombinan algunos segmen- región variable (que mantiene la especificidad
tos (DH-JH o VH-DH) pero no todos aquéllos nece- por el antígeno), a distintas regiones constantes
sarios para generar un adecuado transcrito prima- pesadas conduce a un cambio en la función
rio. efectora de los anticuerpos, que difieren así en
Si la recombinación V(D)J en un cromosoma su capacidad para reclutar y activar distintos
materno o paterno genera un reordenamiento no mecanismos efectores de la respuesta inmune
productivo, el segundo cromosoma (paterno o humoral (figura 6-15).
materno, respectivamente) será reordenado; inclu- La recombinación génica de cambio de clase
so cabe la posibilidad de corregir combinaciones es gatillada por señales accesorias de coestimu-
aberrantes en un cromosoma recurriendo a un se- lación linfocitaria (dependientes fundamentalmen-
gundo reordenamiento (reordenamiento secunda- te de CD40/CD40L y citoquinas) e implica el re-
rio) sobre el mismo cromosoma. conocimiento de secuencias nucleotídicas Ss

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Figura 6-15. Cambio de clase de cadenas pesadas. Cuando un linfocito sintetiza cadenas mu o delta, el gen de las cadenas
pesadas presenta la ordenación ilustrada en la parte superior de la figura. Las secuencias S intervienen en un proceso de recombinación
que une la secuencia VDJ a una de los otros genes para la región constante. Decidida la clase, el DNA se transcribe y el RNA se
procesa, formándose un mRNA específico para la región gamma-3, épsilon o alfa, según el ejemplo de la figura.

(“Switching sequences”) de 1 a 10 kb localizadas Growth Factor " beta (TGF-β) e IL-5 promueven
en el extremo 5’ de cada segmento o gen constan- el cambio hacia IgA. En ratones, el interferón
te pesado (excepto en el extremo 5’ del gen δ). gamma (IFN-γ) induce un cambio selectivo hacia
En general las secuencias de “switching” tie- IgG2a, que activa el sistema del complemento y
nen la forma (GAGCT)n GGGGT, donde el pri- promueve la fagocitosis de agentes infecciosos
mer elemento está repetido en tándem de 1 a 7 opsonizados por estos anticuerpos.
veces y luego la secuencia completa está repetida Por otra parte, dependiendo del sitio de en-
hasta 150 veces en una región de DNA que ocupa trada y la distribución del antígeno en el organis-
de 1 a 10 kb y está ubicada entre 1 a 4 kb hacia mo, puede inducirse una respuesta inmune carac-
arriba del extremo 5’ del gen constante. El terizada por la síntesis de distintas clase de
reordenamiento implica además la participación anticuerpos. Así un antígeno que ingresa a la cir-
de una recombinasa de "switching" que no es si- culación sanguínea o linfática inducirá la síntesis
tio-específica porque la región Ss puede variar de distintos isotipos, mientras aquellos que ingre-
enormemente en longitud y los cortes en el DNA san por vía oral o respiratoria activan preferente-
no necesariamente ocurren dentro de la región de mente inmunidad de mucosas caracterizada por
cambio de clase. la secreción de IgA. En algunos individuos existe
Aunque los componentes de la recombinasa además una clara predisposición genética (atopia)
de “switching” no han sido claramente definidos, a desarrollar alergias como resultado de la sínte-
se ha logrado establecer que no incluye los pro- sis y secreción de IL-4 e IL-5 que estimulan la
ductos de los genes RAG-1 y RAG-2 y que con- producción de IgE y la diferenciación específica
tiene componentes de la maquinaria de reparación de eosinófilos, respectivamente.
del DNA celular y un complejo proteico denomi- En el hombre, el ordenamiento de genes para
nado SWAP (“Switching Activation Protein”) en las regiones constantes de las cadenas pesadas en
el que se han identificado cuatro proteínas: dirección 5' a 3' en el cromosoma 14 es el siguien-
nucleoplasmina, poli-ADP-ribosa polimerasa, te: mu, delta, gamma (1-4), épsilon y alfa (1-2).
nucleolina y la proteína SWAP-70. En el ratón, el cromosoma 12 presenta el orden:
El cambio de clase de cadenas pesadas es re- mu, delta, gamma-3, gamma-1, gamma-2b,
gulado de manera tal que diferentes citoquinas, gamma-2a, épsilon y alfa (figura 6-16)
producidas fundamentalmente por linfocitos T
CD4+, promueven el cambio hacia un isotipo 7.3. Hipermutación somática
particular de inmunoglobulina.. En humanos por
ejemplo, la interleuquina-4 (IL-4) promueve el El proceso de recombinación V(D)J genera
"switching" IgE, mientras que "Transforming un repertorio primario de inmunoglobulinas el que,

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Sin título-2 143 5/26/06, 10:25 AM


luego del encuentro con el antígeno en los órga- Los promotores se ubican inmediatamente
nos linfoides secundarios, será enormemente hacia el extremo 5' del segmento V que se va a
diversificado en los centros germinales, a través transcribir. Su función consiste en garantizar trans-
de un proceso de mutación puntual en sus regio- cripciones exactas y específicas, determinando
nes hipervariables o CDRs. El microambiente par- dónde inicia la transcripción la ARN-polimerasa
ticular de los centros germinales, no sólo favore- II. La organización básica de todos los promoto-
ce la expansión clonal de los linfocitos antígeno- res de inmunoglobulinas presenta dos secuencias
específicos sino que también favorece el ricas en adenina (A) y timina (T). Una de ellas
"switching" isotípico y la modificación paratópica está restringida sólo a tejido linfoide y tiene un
de cadenas pesadas y livianas. Aquellos linfocitos elemento temático (“motif”) de 8 nucleótidos,
en los cuales el proceso de hipermutación genera ATTTGCAT o la secuencia inversa. La otra se-
un receptor de mayor afinidad por el antígeno, cuencia, no es restringida ya que también se en-
serán selectivamente seleccionados para continuar cuentra en otros linajes celulares, es la denomina-
su maduración en linfocitos B de memoria. da TATA “box”. Mutaciones de estas secuencias
El nivel de mutación en las regiones reducen drásticamente la transcripción de los genes
hipervariables de una inmunoglobulina, se ha es- de Igs.
timado en 10-3 pares de bases por generación, lo Los "enhancers" son secuencias de DNA cuya
cual es seis órdenes de magnitud más alto que una función principal es aumentar la tasa de transcrip-
mutación espontánea. Aunque la mayoría de estas ción de los genes recombinados. A diferencia de
mutaciones son cambios puntuales, se ha logrado los promotores, pueden actuar cuando están ubi-
establecer que las deleciones representan entre 4- cados a distancia, ya sea río arriba (hacia el extre-
7% de las mutaciones, mientras las duplicaciones mo 5') o río abajo (hacia el extremo 3'). Se han
representan casi el 1% de las modificaciones en identificado en ratones y seres humanos, para locus
las regiones hipervariables. de cadenas pesadas y livianas, demostrándose que
Las mutaciones parecen estar de alguna ma- algunos han sido muy conservados durante la evo-
nera asociadas al proceso de transcripción y con- lución; es el caso de los denominados ENHI H, y
finadas a un dominio de hipermutación ("HYM ENH3´H y ENHi k. Por ejemplo en el ratón, se cree
domain") que se extiende 2000 pares de bases (2 que una consecuencia de la recombinación VDJ
kb) hacia abajo, en dirección 5’- 3’ desde el pro- es acercar al promotor ubicado hacia 5' de un gen
motor asociado a cada segmento V que se ha V al "enhancer" localizado hacia 3’ de los seg-
recombinado. Por otro lado, la hipermutación no mentos JH, permitiendo un inicio más eficiente
parece ser un proceso al azar puesto que las tran- de la transcripción.
siciones son más frecuentes que las transversiones Se han identificado factores nucleares que son
y los nucleótidos que contienen Adenina son más activados por estímulos externos, y que se unen a
frecuentemente utilizados que aquéllos que con- "enhancer" de cadenas pesadas y livianas. Es el
tienen Timina. caso del factor llamado NF-κB; reconoce un
La figura 6-3 muestra esquemáticamente la “motif” de 10 pares de bases llamado κB que es
diferenciación celular del linfocito B en presen- crucial en la actividad de ENHi κ, puesto que mu-
cia del antígeno: activación, proliferación celular taciones de κB la eliminan. Las interacciones de
y cambio de clase. estos factores proteicos entre sí, y con secuencias
de DNA reguladoras, son críticos en la
7.4. Control de la transcripción de los genes estimulación de la transcripción de genes especí-
de inmunoglobulinas ficos de inmunoglobulina en linfocitos B.

La regulación de la transcripción de los genes 7.5. Estimación numérica de la diversidad de


de Igs, es uno de los modelos mejor estudiados anticuerpos
para entender la transcripción de genes que se ex-
presan de manera tejido-específica y dependien- Diversos mecanismos genéticos contribuyen
tes del estado de desarrollo. El mapeo de los genes a la diversidad de los anticuerpos: (i) múltiples
de Igs, revela que cada uno contiene múltiples genes V en la línea germinal, (ii) recombinación
elementos regulatorios, promotores y estimulado- de los genes VJ en las cadenas livianas y VDJ en
res ("enhancers"), que son especialmente activos las cadenas pesadas, (iii) imprecisión en la
en linfocitos B. recombinación, (iv) diversidad de región N, (v)

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Sin título-2 144 5/26/06, 10:25 AM


mutación somática, y (vi) combinación de las ca- distintos, localizados en la línea germinal.
denas H y L. Los linfocitos B periféricos no expresan si-
El aporte estimado de los mecanismos más multáneamente todo el repertorio. Las células B
clásicos a la generación de la diversidad de los maduras localizadas principalmente en los
anticuerpos en el ratón, se resume en la tabla folículos linfoides primarios y secundarios, pre-
6-3. sentan una vida media de sólo algunas semanas,
La formación de un gen activo en la región si no unen antígeno, mueren. Diariamente, la
variable de la cadena pesada puede generar un médula ósea libera a circulación más de 5 x 107
número muy grande de posibilidades genéticas. linfocitos B, de tal forma que se va renovando el
En el hombre hay 80 genes V en la línea germinal “pool” de especificidades.
y 6 genes J activos. Si se estima que los genes D
se componen de 50 miembros, la recombinación
somática VDJ puede generar, aproximadamen- 8. Edición del receptor linfocitario
te, unas 24.000 combinaciones genéticas diferen-
tes (80x6x50). Si este número se multiplica por La naturaleza aleatoria del reordenamiento
un factor de 100 debido a la flexibilidad génico, acoplada a la mayor complejidad propor-
recombinatoria, se obtiene un total de 2.400.000 cionada por la combinación de distintas cadenas
cadenas diferentes. pesadas y livianas, crea una enorme diversidad
En las cadenas livianas de tipo kappa, la unión en el repertorio de anticuerpos que, aunque per-
de uno de los cientos de genes para región varia- mite el reconocimiento de agentes infecciosos
bles (más de 150) a uno de los cinco genes J, pue- puede eventualmente contener receptores
de producir hasta 750 genes V activos diferentes autorreactivos. Para evitar una eventual respues-
(150x5). Por el mecanismo de flexibilidad ta autoinmune el sistema inmune debe poner en
combinatoria, el número potencial de recombi- marcha mecanismos que le permitan inducir to-
naciones VJ puede aumentar unas 10 veces la di- lerancia a antígenos propios: (i) la eliminación
versidad, llegando a ser de 7.500 cadenas L dife- por apoptosis de las células autorreactivas
rentes (150x5x10). (deleción clonal), (ii) la inhibición de su activi-
Si se considera la potencialidad para gene- dad (anergia clonal), y (iii) la edición o modifi-
rar diversidad que poseen las cadenas H y L, re- cación antígeno-dependiente del receptor
sulta un total posible de 18.000 millones de linfocitario BCR, mediante un reordenamiento
anticuerpos (2.400.000 posibles cadenas H x secundario de segmentos génicos, particularmen-
7.500 posibles cadenas L), generados a partir de te aquéllos que codifican cadenas livianas.
sólo aproximadamente 300 segmentos génicos Aparentemente el fenómeno de edición del re-

Tabla 6-3. Estimación de la diversidad de anticuerpos en ratón, considerando


algunos de los mecanismos genéticos involucrados

Mecanismo Cadenas H Cadenas L κ Cadenas L λ


Genes de la línea germinal
Segmentos V 250 - 1000 250 2
Segmentos J 4 4 3
Segmentos D 12 _ _
Recombinación somática
VxJxD 10.000 - 40.000 1000 6
Asociación de cadenas H – L
H x kappa 1 - 4 x 107
H x lambda 5 - 10 x 104
Potencial total de diversidad del repertorio 109 - 1011

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Sin título-2 145 5/26/06, 10:25 AM


ceptor linfocitario B, no sólo puede ocurrir a nivel LECTURAS SUGERIDAS
central en el órgano linfoide primario, sino tam-
bién en los órganos linfoides secundarios e implica Abbas, A.K.; Lichtman, A.H.; Pober, J.S., Cellu-
la reexpresión de las proteínas RAG-1 y RAG-2. lar and Molecular Immunology, Fourth Edition,
W.B. Sanders Company, USA, Capítulos 3, 9 y
9. Biosíntesis y ensamblaje de las inmuno- 14, 2000.
globulinas
Bishop, G.A., Hostager, B.S., “B lymphocyte ac-
Al igual que la mayoría de las proteínas de tivation by contact-mediated interactions with T
secreción y de membrana, las cadenas pesadas y lymphocytes”. Curr. Opin. Immunol. 13: 278-285,
livianas de las inmunoglobulinas son sintetizadas 2001.
en ribosomas unidos a la membrana del retículo
endoplásmico rugoso (RER), donde los péptidos Davies, D.R., Matzger, H., “Structural basis of
líderes son escindidos cotranslacionalmente. antibody function”, Ann. Rev. Immunol., 1: 87 -
La asociación covalente vía puentes disulfuro 117, 1983.
de cadenas H y L también se produce en el RER,
donde además se agregan a los residuos de Durandy, A., Honjo, T., “Human genetic-defects
asparragina oligosacáridos ricos en manosa. Lue- in class-swith recombinatio (hyper-IgM
go las Igs nacientes se dirigen a las cisternas del síndromes)”, Curr. Opin. Immunol. 13: 543-548,
aparato de Golgi, donde los carbohidratos ricos 2001.
en manosa se convierten en sus formas maduras
(tipo O-unido y tipo N-unido ) incorporando ca- Fagarasan, S., Honjo, T., “T-independent Immune
denas laterales de azúcares. Finalmente, las mo- Response: New Aspects of B Cell Biology”,
léculas de inmunoglobulinas son transportadas a Science 290: 89-92, 2000.
la membrana plasmática ancladas en vesículas y
son secretadas por un fenómeno de pinocitosis in- Fearon, D.T., Carroll, M.C., “Regulation of B
versa (figura 6-16). Lymphocytes Response to Foreign and Self-anti-
Otros péptidos que se unen a la estructura gens by the CD19/CD21 Complex”, Annu. Rev.
básica de las inmunoglobulinas son regulados co- Immunol. 18: 393-422, 2001.
ordinadamente, como en el caso de las cadenas J
(IgA e IgM). Fugmann, S.D.; Lee, A.I.; Shickett, P.E.; Villey,
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Figura 6-16. Biosíntesis y ensamblaje de las Kurosaki, T., “Functional dissection of BCR sig-
inmunoglobulinas. Las cadenas H y L de las inmunoglobulinas
son sintetizadas y ensambladas vía puentes disulfuro en el RER,
nalling pathways”, Curr. Opin. Immunol. 12. 276-
donde además se agregan oligosacáridos ricos en manosa, que 281, 2000.
posteriormente maduran en el aparato de Golgi incorporando
otros azúcares. Las inmunoglobulinas son transportadas a la
membrana plasmática ancladas a la membrana de vesículas y
secretadas por pinocitosis inversa.

146

Sin título-2 146 5/26/06, 10:25 AM


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148

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Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 7

RECEPTOR DE LINFOCITOS T Y SEÑALES


ACCESORIAS DE COESTIMULACIÓN

Ulises Vergara C. e Iván Palomo G.

1. Introducción 5. Genética molecular del receptor T


2. Estructura del receptor T 5.1. Genes de cadenas TCRα, TCRβ,
2.1. TCR αβ TCRγ y TCRδ
2.2. TCR γδ 5.1.1. Genes de cadenas TCRα
3. Estructura y función del complejo 5.1.2. Genes de cadenas TCRβ
CD3 5.1.3. Genes de cadenas TCRγ
4. Receptor T y reconocimiento 5.1.4. Genes de cadenas TCRδ
antigénico. 5.2. Reordenamiento génico
4.1. Linfocitos TCD4, linfocitos 6. Linfocitos T y señales accesorias de
TCD8 y restricción MHC coestimulación
4.2. Células TNK (Linfocitos 7. Homeostasis linfocitaria y desarro-
TαβNK1.1 o NKT). llo post-tímico de linfocitos T

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RESUMEN

Así como los linfocitos B reconocen el antígeno a través de receptores BCR, los linfocitos
T lo hacen a través de receptores TCR. Éstos son heterodímeros αβ o γδ que reconocen péptidos
antigénicos unidos a moléculas MHC (de clase I o II) o antígenos glicolipídicos unidos a molécu-
las CD1. Los receptores T se expresan asociados al complejo CD3, que entre otras funciones,
participa en la transducción de señales de activación de la célula, una vez que el TCR ha recono-
cido el antígeno.
El capítulo se refiere además al fenómeno de restricción MHC. Por otra parte, se describe la
subpoblación de linfocitos Tαβ, denominada células TNK, las cuales pueden ser CD4+, CD8+, o
CD4- y CD8-, y presentan marcadores de células NK.
En humanos los segmentos génicos que codifican para las cadenas TCRα y TCRδ se en-
cuentran en el cromosoma 14 y los de las cadenas TCRβ y TCRγ en el cromosoma 7. El capítulo
revisa en detalle los mecanismos de variabilidad genética del TCR, los que son similares a los
descritos para BCR. La diversidad del repertorio linfocitario T se ha estimado más elevada (1018)
que la del repertorio linfocitario B (1014). Los segmentos génicos que codifican para las cadenas
TCRβ se reordenan primero que los segmentos génicos para cadenas TCRα; en las células B se
reordenan primero los segmentos génicos de cadenas pesadas y luego aquellos de las cadenas
livianas. Al igual que en el reordenamiento génico de las inmunoglobulinas, en el reordenamiento
de segmentos génicos de cadenas del TCR también existen los fenómenos de exclusión alélica
y exclusión isotípica (Tαβ versus Tγδ).
Las células T, además del TCR y de las moléculas CD4 o CD8, expresan otros receptores de
membrana que resultan importantes en la transducción de señales accesorias de coestimulación,,
en la estabilidad de la interacción linfocito T-célula presentadora de antígeno, o en el recluta-
miento, recirculación y “homing” linfocitario. Entre estos receptores se encuentran: CD28, CD40L,
CD2, LFA-1 y CD45.

1. INTRODUCCIÓN lípidos, ácidos nucleicos, haptenos), el repertorio


de receptores linfocitarios T reconoce fundamen-
El desarrollo de una respuesta inmune hu- talmente proteínas antigénicas en forma de frag-
moral mediada por anticuerpos, se asocia prima- mentos peptídicos unidos a moléculas de presen-
riamente a los linfocitos B y requiere el reconoci- tación MHC ("Major Histocompatibility
miento antigénico por el receptor (BCR) de Complex") o antígenos glicolipídicos unidos a mo-
linfocitos B específicos. El desarrollo de una res- léculas de presentación CD1, expresadas en la
puesta inmune celular en cambio, se asocia a membrana de células presentadoras de antígeno
linfocitos T y requiere el reconocimiento (ver capítulo 9).
antigénico por el receptor (TCR ,"T cell recep- En el repertorio linfocitario B (estimado en
tor") de linfocitos T específicos. 1014 linfocitos B distintos) se distinguen al menos
Los mecanismos efectores humoral y celular dos subpoblaciones celulares, denominadas B1 y
de respuesta inmune resultan entonces de la se- B2, que presentan características estructurales y
lección, activación y expansión clonal de dos po- funcionales distintas y se generan a diferentes eda-
blaciones linfocitarias distintas, que utilizan me- des durante la ontogenia linfocitaria. La
canismos y receptores distintos de reconocimien- subpoblación B1 se desarrolla durante la vida fe-
to antigénico. Así, mientras el repertorio tal/neonatal, presenta receptores polirreactivos de
linfocitario B puede reconocer directamente baja afinidad, se asocia a la producción de
antígenos solubles o de membrana de muy diver- anticuerpos naturales T-independientes y se en-
sa naturaleza química (proteínas, carbohidratos, cuentra mayoritariamente en las cavidades

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peritoneal y pleural. La subpoblación linfocitaria reconocerán un complejo formado por un fragmento
B2 que se genera a partir de células progenitoras peptídico alojado en el bolsillo de presentación de
de la médula ósea adulta, constituye la mayor par- una molécula MHC, o un antígeno glicolipídico
te del repertorio linfocitario B, su activación es unido a una molécula CD1. La mayoría de los
linfocito T-dependiente y se encuentra, fundamen- linfocitos Tγδ no reconocen el antígeno en la for-
talmente, en los órganos linfoides secundarios y ma de un complejo MHC-péptido, aunque molé-
en el torrente sanguíneo. culas MHC-Ib no clásicas (como CD1, H-2M3 y
En el repertorio linfocitario T (estimado en Qα de ratón) pueden presentar ciertos antígenos a
1018 linfocitos T distintos) se distinguen también esta subpoblación de LT. Además algunos linfocitos
dos subpoblaciones celulares, denominadas Tγδ pueden reconocer directamente al antígeno, de
linfocitos Tαβ y linfocitos Tγδ, que presentan TCR la misma manera como hacen los linfocitos B.
con características estructural y funcionalmente Linfocitos Tγδ y Tαβ recombinan su DNA y
distintas. Entre los linfocitos Tαβ se distinguen expresan su receptor clonotípico, en momentos dis-
además 3 subpoblaciones celulares distintas de- tintos durante la ontogenia linfocitaria tímica. Así,
nominadas linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ linfocitos Tγδ emergen tempranamente desde el timo
y linfocitos TNK. Los linfocitos TNK (denomi- y expresan un receptor denominado TCR1 que se
nados también células NKT: "natural killer T genera antes que el receptor TCR2, cuya expresión
cells"), corresponden a una subpoblación está limitada a los linfocitos Tαβ, que maduran más
linfocitaria Tαβ, que presenta marcadores o re- tardíamente en el órgano linfoide primario. Aunque
ceptores propios de células NK (“natural killer”). el timo es el principal sitio anatómico de desarrollo
linfocitario T, se ha descrito en el intestino la exis-
tencia de una línea celular T distinta, generada
2. ESTRUCTURA DEL RECEPTOR T extratímicamente a partir de precursores celulares
presentes en la lámina propia intestinal.
En el receptor de un linfocito B se distinguen
dos subunidades, estructural y funcionalmente dis- 2.1. TCR αβ
tintas: el receptor clonotípico representado por una
inmunoglobulina de membrana (responsable del El 90 a 95% de los clones presentes en el
reconocimiento antigénico) y el complejo acce- repertorio linfocitario expresan copias múltiples
sorio Igα/Igβ, responsable del transporte y expre- de un receptor Tαβ, constituido por las glico-
sión del BCR en la membrana y de la transducción proteínas α y β covalentemente unidas entre sí por
de señales de activación cuando el receptor enlaces disulfuro (figura 7-1) y no covalentemente
clonotípico une específicamente un antígeno. unidas al complejo accesorio CD3 (figura 7-2) (ver
De manera similar, en el receptor de un lin- punto 3).
focito T se describen también dos subunidades es- La cadena α es una glicoproteína acídica de
tructural y funcionalmente distintas: el receptor 40-50 kDa y la cadena β es una glicoproteína bási-
clonotípico Tαβ o Tγδ (responsable del reconoci- ca o neutra de 40-45 kDa. Ambas cadenas tienen
miento específico del antígeno) y el complejo ac- similitud estructural con las cadenas pesadas y li-
cesorio CD3, responsable del transporte y expre- vianas de las inmunoglobulinas, presentando una
sión del TCR en la membrana y de la transducción región o dominio variable aminoterminal de 102-
de señales de activación cuando el receptor 119 aminoácidos (Vα y Vβ) y un dominio constan-
clonotípico T une específicamente su antígeno. te carboxiterminal de 138 a 170 aminoácidos (Cα
El receptor clonotípico TCR es un y Cβ, respectivamente). Tal como ocurre con los
heterodímero αβ o γδ formado por dos cadenas linfocitos B, la diversidad y especificidad del TCR
glicoproteicas de 40 a 60 kDa, covalentemente uni- están dadas fundamentalmente por las regiones
das entre sí por puentes disulfuro. Como ocurre en hipervariables o determinantes de complemen-
los linfocitos B, este receptor tiene una distribu- tariedad CDR1, CDR2 y CDR3 de los dominios
ción clonal, indicando que clones linfocitarios con Vα y Vβ, que se asocian y configuran de manera
distinta especificidad antigénica expresarán distin- tal que se forma un único paratopo T, que presen-
tos TCR. De la misma manera, la región variable ta por el antígeno una afinidad entre 10-5 y 10-7 M,
de los componentes clonotípicos del receptor TCR en los distintos clones linfocitarios Tαβ.
presenta, como en las inmunoglobulinas, tres re- En la región constante carboxiterminal de las
giones CDR que en el caso de los linfocitos Tαβ, cadenas Tα y Tβ (o Tγ y Tδ), se distinguen 4 domi-

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Sin título-2 152 5/26/06, 10:25 AM


Figura 7-1. Estructura esquemática del receptor linfocitario T. El receptor TCR está formado por dos cadenas polipeptídicas
covalentemente unidas entre sí por puentes disulfuro. Los receptores TCR2 presentan cadenas α β y, los TCR1 cadenas γ y δ. En
cada una de las cadenas α y β (o γ/δ), existe un dominio variable aminoterminal y un dominio constante carboxiterminal, de
manera similar a lo que ocurre en las cadenas pesadas y livianas del receptor linfocitario B (BCR).

nios estructural y funcionalmente distintos: a) un una región bisagra inmediatamente por fuera de la
dominio constante extracelular hacia el extremo membrana plasmática linfocitaria y que contiene
aminoterminal y que forma un “loop” semejante a el enlace disulfuro que une el heterodímero αβ del
los dominios constantes de inmunoglobulinas; b) receptor clonotípico Tαβ; c) un dominio
hidrofóbico transmembrana de 20 a 25 aminoácidos
y que incluye residuos polares conservados como
arginina y lisina, que permiten la unión no covalente
con residuos de ácido glutámico y ácido aspártico
negativamente cargados del complejo accesorio
CD3; d) un dominio citoplasmático carboxitermi-
nal, de 5 a 12 aminoácidos.

2.2. TCR γδ

Entre los linfocitos Tγδ pueden distinguirse di-


ferentes subpoblaciones celulares que se desarrollan
en momentos distintos de la ontogenia linfocitaria;
expresan distintos dominios variables γδ y tienen
distinta distribución tisular periférica. En ratones por
ejemplo, los linfocitos Tγδ que se encuentran en la
Figura 7.2. Complejo CD3. El complejo CD3 está constitui- piel, se desarrollan neonatalmente y expresan regio-
do por cinco proteínas transmembrana denominadas γ, δ, ε, y nes variables distintas de los linfocitos Tγδ que se
ζζ (o ζη). El complejo CD3 está funcionalmente asociado
con la expresión del TCR en la membrana y con la transducción encuentran en vagina, útero y lengua, que se dife-
de señales de activación, luego del reconocimiento antigénico. rencian más tardíamente en el timo.

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Sin título-2 153 5/26/06, 10:25 AM


Los linfocitos Tγδ constituyen entre 5 a 10% tintos, dos de los cuales corresponden a los
del repertorio linfocitario T en sangre periférica, heterodímeros γδ y δε. En aproximadamente el
bazo y ganglios linfáticos de humanos, ratones y 90% de los linfocitos T, el tercer dímero corres-
aves; pero pueden representar hasta el 50% de los ponde al homodímero ζζ y sólo el 10 % de los
linfocitos intraepiteliales en piel y mucosas intes- linfocitos T periféricos expresan el heterodímero
tinal y génitourinaria murina. En ovejas, los ζη. Los dominios transmembrana de cada una de
linfocitos Tγδ pueden representar hasta el 30% las proteínas del complejo CD3 contienen residuos
de los linfocitos T periféricos. aminoacídicos negativamente cargados, que se
Las cadenas γ (45-55 kDa) y δ (40-50 kDa) de asocian no covalentemente con residuos
receptor clonotípico Tγδ, son glicoproteínas de mem- transmembra positivamente cargados de los recep-
brana con estructura similar a las cadenas α y β del tores clonotípicos Tαβ o Tγδ.
receptor Tαβ. Ambas presentan un dominio variable
aminoterminal y un dominio constante carboxiterminal
que incluye una región bisagra, un dominio 4. RECEPTOR T Y RECONOCIMIENTO
transmembrana, y una corta cola citoplasmática. Las ANTIGÉNICO
distintas regiones γ y δ presentan características simi-
lares a las descritas para las cadenas polipéptídicas Los linfocitos Tαβ MHC-restringidos, expre-
del receptor Tαβ (figura 7-1). san receptores clonotípicos que sólo reconocen
fragmentos peptídicos presentados por moléculas
MHC de clase I o de clase II, en la superficie de
3. ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL COM- las células presentadoras profesionales y otras cé-
PLEJO CD3 lulas (figura 7-4). Los linfocitos Tαβ CD1-restrin-
gidos, expresan en cambio receptores clonotípicos
Los receptores clonotípicos Tαβ y Tγδ se ex- que sólo reconocen antígenos glicolipídicos, aso-
presan asociados de manera no covalente, al com- ciados a moléculas de presentación CD1, expre-
plejo accesorio CD3, que representa la subunidad sadas en la membrana de células presentadoras
responsable del transporte y expresión del TCR profesionales (células dendríticas, macrófagos y
en la membrana y de la transducción de señales linfocitos B).
de activación, luego del reconocimiento antigénico Linfocitos T citótoxicos Tαβ reconocen
por el receptor clonotípico T. antígenos MHC clase I-restringidos y son prima-
El complejo CD3 está constituido por cinco riamente responsables de la eliminación de célu-
proteínas denominadas γ, δ, ε, ζ y η de 25, 20, 20, las infectadas con virus o bacterias intracelulares.
16 y 22 kDa, respectivamente (figuras 7-3 y 7-4). Para la mayoría de las células, los antígenos MHC
Las proteínas del complejo CD3 se asocian entre clase I-restringidos, derivan de proteínas sinteti-
sí de manera tal que se forman tres dímeros dis- zadas en el citoplasma de la misma célula, exis-

Figura 7-3. Relación estructural TCR-CD3. La asociación entre TCR y del CD3 es no covalente. Se produce una interacción
electrostática entre aminoácidos transmembrana con carga positiva del TCR, con aminoácidos negativamente cargados del com-
plejo CD3. Existen enlaces disulfuro entre las cadenas αβ (o γδ) del receptor T, y entre los homo o heterodímeros formados por las
cadenas ζ y η.

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Sin título-2 154 5/26/06, 10:25 AM


tiendo un acceso limitado de antígenos exógenos
a esta vía endógena de procesamiento y presenta-
ción antigénica. Sin embargo, existe una
subpoblación de células presentadoras (particular-
mente células dendríticas) que pueden capturar
antígenos exógenos tejido específicos en la peri-
feria y presentarlos, asociados a moléculas MHC
de clase I, a linfocitos T citotóxicos en los ganglios
linfáticos, mediante un mecanismo de presenta-
ción cruzada (“cross-priming”). Además, en in-
fecciones con Mycobacterium tuberculosis, se
activan también linfocitos citotóxicos Tαβ CD1-
restringidos que reconocen glicolípidos
bacterianos y linfocitos citotóxicos Tγδ que reco-
nocen ligandos fosforilados.
Las células dendríticas son células de origen
medular que están normalmente presentes en un
estado inmaduro en epitelios y tejidos periféricos.
Estas células dendríticas son capaces de una efec-
tiva fagocitosis de células apoptóticas y de
endocitosis y macropinocitosis de antígenos solu-
bles, pero no expresan moléculas MHC y ligandos
coestimuladores, en los niveles requeridos para la
activación de linfocitos T. Esta forma de incorpo-
Figura 7-4. TCRαβ y reconocimiento antigénico MHC-cla- ración antigénica por células inmaduras, resulta
se II-restringido. El receptor linfocitario Tαβ, reconoce el en un mayor y mejor “cross-priming” de antígenos
complejo molecular MHC-fragmento peptídico. La molécula
CD4 actúa como co-receptor reconociendo una región con- exógenos en el contexto de moléculas MHC de
servada, en cadena β de la molécula MHC de clase II. clase I por células dendríticas maduras, lo que re-

Figura 7-5. Migración de células dendríticas y linfocitos T. Células dendríticas inmaduras capturan antígenos en los tejidos
periféricos y migran a los tejidos linfoides convirtiéndose en células maduras que expresan altos niveles de moléculas MHC y
ligandos coestimuladores para los linfocitos T. Los linfocitos se movilizan desde el torrente sanguíneo a los órganos linfoides
secundarios y luego de su activación y expansión clonal se diferencian en linfocitos T efectores y linfocitos T de memoria central
( TMC) y linfocitos de memoria efectores (TEM).

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Sin título-2 155 5/26/06, 10:25 AM


sulta fundamental, tanto para el desarrollo de una generación de nuevos linfocitos T de memoria.
respuesta inmune dependiente de linfocitos T Se ha sugerido que la expresión de CCR7,
citotóxicos, como para la inducción de tolerancia un receptor para las quimioquinas MIP
a lo propio. ("Macrophage Inflammatory Protein") y SLC
En respuesta a un estímulo inflamatorio (ge- ("Secondary Lymphoid Chemokine") controla el
neralmente proporcionado por citoquinas "homing" a órganos linfoides secundarios y per-
proinflamatorias o productos bacterianos), las mite separar los linfocitos de memoria T efectores
células dendríticas inmaduras capturan material (CCR7-) que tienen función efectora inmediata y
antigénico en la periferia (microorganismos, cé- representan la primera línea de defensa inmune
lulas apoptóticas y detritus celulares) e inician su específica, de los linfocitos de memoria centrales
diferenciación en células maduras que pierden sus CCR7+ que carecen de función efectora inme-
receptores para quimioquinas inflamatorias y au- diata pero patrullan los órganos periféricos y cons-
mentan la expresión de receptores para tituyen la línea defensiva de reserva. Los linfocitos
quimioquinas de tejidos linfoides. Las células T efectores CCR7- producen citoquinas efectoras
dendríticas en maduración se movilizan hacia los como IFN-γ, IL-4, IL-5 o expresan perforina
órganos linfoides secundarios donde culminan su (linfocitos T citotóxicos).
diferenciación expresando altos niveles de molé-
culas MHC y ligandos coestimuladores que las 4.1. Linfocitos T CD4, Linfocitos T CD8 y res-
convierten en células maduras extraordinariamente tricción MHC
eficientes en la presentación de antígenos a
linfocitos T vírgenes (figura 7-5). Mediante la se- Linfocitos Tαβ parecen reconocer sólo frag-
creción de distintos patrones de citoquinas, las mentos peptídicos presentados en asociación con
células dendríticas maduras inducen y regulan la moléculas MHC o fragmentos glicolipídicos pre-
respuesta inmune promoviendo la activación y sentados en asociación con moléculas CD1, en la
diferenciación de linfocitos T, la expansión clonal superficie de células presentadoras profesionales.
de linfocitos B, la producción de anticuerpos y la Este fenómeno se explica como resultado del pro-
estimulación de la actividad citotóxica de células ceso de “educación tímica” que permite que du-
NK y la producción de IFN-γ. rante la diferenciación en este órgano linfoide pri-
Los linfocitos T vírgenes se movilizan des- mario, precursores linfocitarios T sean positiva-
de el torrente circulatorio a las regiones T de los mente seleccionados en función de su capacidad
órganos linfoides secundarios, en busca de para reconocer antígenos asociados a moléculas
antígenos presentados por células dendríticas. de presentación antigénica en la membrana de
Como consecuencia de su estimulación, los células del epitelio tímico.
linfocitos T proliferan por expansión clonal y se La mayoría de los linfocitos periféricos Tαβ,
diferencian en células efectoras que expresan re- son linfocitos MHC restringidos que expresan el
ceptores que les permiten luego migrar a las áreas correceptor CD4 o el correceptor CD8, y han sido
de linfocitos B del órgano linfoide secundario o positivamente seleccionados en función de su ca-
hacia los sitios de inflamación en los tejidos pacidad para reconocer sólo fragmentos peptídicos
periféricos. Aún cuando la mayoría de los asociados a moléculas MHC de clase I (linfocitos
linfocitos T efectores son de corta vida media, Tαβ CD8+) o fragmentos peptídicos asociados a
unos pocos sobreviven durante varios años como moléculas MHC de clase II (linfocitos Tαβ CD4+)
linfocitos T de memoria que pueden separarse en (figura 7-6).
dos subpoblaciones de acuerdo a sus habilidades El correceptor CD4 es una glicoproteína
migratorias: (i) las llamadas células efectoras de transmembrana de 55 kDa que se expresa en aproxi-
memoria (TEM), migran a los tejidos periféricos y madamente el 65% de los linfocitos periféricos Tαβ;
(ii) las denominadas células T de memoria central reconoce una región conservada (β2) de la molé-
(TCM), permanecen en circulación. Esta última cula MHC de clase II y transduce señales acceso-
subpoblación expresa receptores de “homing” si- rias de coestimulación linfocitaria T.
milares a los de linfocitos T vírgenes que les per- El correceptor CD8 es un heterodímero αα o
mite migrar preferentemente a los órganos un heterodímero αβ, de 78 kDa, que se expresa
linfoides secundarios donde, luego de una re- en aproximadamente el 35% de los linfocitos Tαβ
estimulación con el antígeno, inducirán el desa- de sangre y tejido linfoide periférico, reconoce una
rrollo de una respuesta inmune secundaria y la región conservada (α3) de la molécula MHC de

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Tαβ restringidos por moléculas MHC de clase Ib
y linfocitos Tαβ y Tγδ restringidos por moléculas
CD1 que reconocen ligandos bacterianos altamen-
te conservados.
Durante mucho tiempo se pensó que los
linfocitos T sólo reconocían fragmentos peptídicos
presentados por moléculas MHC de clase I o de
clase II. Sin embargo, el descubrimiento de las
moléculas CD1 que presentan ligandos
glicolipídicos, ha permitido la identificación de
subpoblaciones linfocitarias Tαβ CD1-restringi-
das: TCD4+, TCD8+, TCD4-, CD8- (TDN o do-
ble negativos) y de linfocitos Tβ NK1.1 (células
TNK o NKT), que constituyen poblaciones celu-
lares heterogéneas presentes en diferentes tejidos.
Las moléculas CD1 se expresan predominan-
temente en células presentadoras profesionales e
incluyen 4 moléculas distintas en humanos (CD1a,
CD1b, CD1c y CD1d) y sólo una en ratones
(CD1d). Las moléculas son similares a las molé-
culas MHC de clase I, están no covalentemente
unidas a la β2-microglobulina, pero su bolsillo de
presentación antigénica es más estrecho y más
profundo que el de las moléculas MHC y une su
ligando glicolipídico mediante interacciones
hidrofóbicas.
Las moléculas CD1a, b y c (grupo I) se ex-
Figura 7-6. Estructura del receptor de la célula T, comple-
presan en timocitos corticales y células
jo CD3 e interacción con el complejo MHC-péptido.
dendríticas, mientras las moléculas CD1d (gru-
po II) se encuentran principalmente en células
epiteliales, timocitos corticales, hepatocitos y
clase I y transduce señales accesorias de
células presentadoras de antígeno profesiona-
coestimulación linfocitaria T, luego de su
les (células dendríticas, macrófagos y linfocitos
interacción con la molécula MHC de clase I.
B). Glicolípidos como fosfatidil inositol
Los linfocitos T CD4+ expresan funciones
manósido (PIM), lipoarabino manan (LAM),
de colaboración o “helper” por medio de
ácido micólico y hexosil-1-fosfo-isoprenoide,
citoquinas que activan macrófagos y/o linfocitos
son presentados a linfocitos Tαβ, por molécu-
B, mientras los linfocitos T CD8+ actúan prima-
las CD1 del grupo I (tabla 7-1). Tanto en huma-
riamente como células citotóxicas que destruyen
nos como en ratón, se ha descrito que las molé-
las células infectadas.
culas CD1d presentan α-galactosil ceramida
Los linfocitos T CD4+ MHC de clase II-res-
existente en esponjas marinas.
tringidos desempeñan un rol muy importante en
la inmunidad protectora contra bacterias y
4.2. Células TNK
protozoos, mientras los linfocitos T CD8+ MHC
de clase I-restringidos resultan fundamentales en
Las células TNK (linfocitos Tαβ NK1.1 o
la respuesta inmune contra infecciones virales.
NKT) corresponden a una subpoblación
Sin embargo, la respuesta inmune contra bacte-
heterogénea de linfocitos Tαβ, que presentan mar-
rias intracelulares involucra la participación no
cadores propios de las células NK o “natural killer”
sólo de linfocitos T CD4+ MHC-II restringidos,
e incluye células TNK CD4+, células TNK/CD8+
sino también de diversas subpoblaciones
y células TNK DN (CD4- CD8-) que presentan
linfocitarias entre las que se encuentran células T
distinta distribución tisular (timo, hígado, bazo,
CD8+ MHC-I restringidos, linfocitos Tγδ que
ganglios linfáticos y médula ósea). El marcador
reconocen fosfoligandos en ausencia de células
NK1.1 corresponde a NKRP1C o CD161.
presentadoras de antígeno y finalmente, linfocitos

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Sin título-2 157 5/26/06, 10:25 AM


Tabla 7-1. Antígenos lipídicos presentados por moléculas CD1 humanas

Antígeno Linfocitos T Molécula CD1

Glicolípidos bacterianos
Lípidos no definidos Tαβ CD1a
Lipoarabinomanan (LAM) Tαβ CD1b
Glucosa monomicolato Tαβ CD1b
Fosfatidil inositol (PI) Tαβ CD1b
Hesoxil 1- fosfoisoprenoide Tαβ CD1c

Glicolípidos autólogos
Lípidos no definidos Tαβ CD1a
Gangliósidos cerebrales Tαβ CD1b
Lípidos no definidos Tαβ y Tγδ CD1c
Lípidos no definidos TNK CD1d

Otras moléculas
A-Galactosil Ceramida TNK CD1d

La diversidad de su receptor Tαβ es bastan- la secreción de IL-4. El desarrollo de una respuesta


te restringida y limitada a la expresión de unas Th1 sería inhibida mediante la secreción de IL-4,
pocas cadenas TCRα (Vβ8-2, Vβ7, Vβ2 y IL-10 y TGF-β. Las células TNK también produ-
Vα14Jα281 en el ratón y de sus equivalentes cen altos niveles de quimioquinas, tales como
Vβ11 y Vα24JαQ en humanos), que resultan MIP-α y MIP-β, lo que concuerda con su capaci-
CD1d restringidas. La proporción de células TNK dad para reclutar monocitos, células dendríticas
varía en diferentes tejidos y representan mieloides y linfocitos Tαβ convencionales, e ini-
subpoblaciones funcionalmente distintas en el ciar una respuesta inmune adquirida. Finalmente
hígado (30-50%), médula ósea (20-30%) y timo la actividad efectora citotóxica de las células TNK,
(10-20%), y son menos frecuentes en órganos es mediada por perforina y granzimas.
como bazo (3%), ganglios linfáticos (0,3%), san- Se desconoce la influencia de moléculas co-
gre periférica (4%) y pulmón (7%). estimuladoras y otros receptores asociados a las
Las células TNK CD4+ y TNK DN parecen células T NK y aunque es claro que el receptor
ser de origen tímico, puesto que no se desarrollan TCR de células TNK responde a moléculas CD1d,
en ratones atímicos o en ratones neonatalmente el ligando natural de CD1d es todavía desconoci-
timectomizados. Las células TNK CD8+ en cam- do. La mayoría de las células TNK reconoce mo-
bio, parecen tener un origen extratímico, puesto léculas CD1d asociadas a un ligando hidrofóbico,
que se encuentran normalmente en la periferia en probablemente glicolipídico y de naturaleza des-
ratones timectomizados neonatalmente. conocida. Sin embargo, se ha sugerido que podría
Las células TNK constituyen una ser glicofosfatidil inositol (GPI) y/o fosfatidil
subpoblación linfocitaria heterogénea en la que inosito manósido (PIM). La molécula α-galactosil
es posible encontrar células CD1-restringidas y ceramida derivada de esponjas marinas se une a
células MHC-restringidas (estas últimas expresan moléculas CD1d, estimula linfocitos TNK CD4+
TCR de mayor diversidad), que tienen la capaci- y TNK DN y parece imitar al ligando natural de
dad de secretar diferentes citoquinas (IL-4, IFN- CD1d en humanos y ratones.
γ, TNF), dependiendo del microambiente tisular. Las células TNK tienen también la habilidad
La producción de altos niveles de IL-4 e IFN-γ, de responder no sólo a ligandos específicos deri-
sugieren un rol regulador en el desarrollo de las vados de agentes patógenos sino también a
respuestas Th1 y Th2 dependientes. El desarrollo ligandos lipídicos autólogos derivados de células
de una respuesta Th2 sería estimulada a través de tumorales y parecen desempeñar un rol impor-

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Sin título-2 158 5/26/06, 10:25 AM


tante en la regulación de la respuesta inmune a cadena TCRα) y, un segmento génico Cα
células tumorales y agentes patógenos y en la man- (codifica la región constante TCRα).
tención de la tolerancia a lo propio.
• Familia TCRβ: incluye segmentos génicos
Vβ, Dβ, Jβ y Cβ.
5. GENÉTICA MOLECULAR DEL RECEP- • Familia TCRγ: incluye segmentos génicos Vγ,
TOR T Jγ y Cγ.

El TCR es generado a partir de la • Familia génica TCRδ: incluye segmentos Vδ,


recombinación somática de segmentos génicos, Dδ, Jδ y Cδ.
durante un proceso de diferenciación que permi-
te que cada linfocito Tαβ o Tγδ esté provisto de En humanos, los segmentos génicos que co-
copias múltiples de un receptor clonotípico único difican las cadenas TCRα y TCRδ, se encuentran
que no está codificado en el DNA germinal de la en el cromosoma 14 (en región alejada del locus
célula precursora. para cadenas pesadas de Inmunoglobulinas (Ig),
La organización genómica de los TCR es si- mientras los segmentos génicos de cadenas TCRβ
milar a la organización de las inmunoglobulinas y y TCRγ, se encuentran en el cromosoma 7. En ra-
contiene tanto segmentos génicos V(D)J que co- tones, los segmentos génicos que codifican las ca-
difican la región variable, como segmentos génicos denas TCRα y TCRδ, se encuentran en el
C, que codifican la región constante de cada ca- cromosoma 14, mientras los segmentos génicos
dena del receptor clonotípico. De esta manera el que codifica las cadenas TCRβ y TCRγ, se en-
repertorio de linfocitos T (estimado en 10 18 cuentran en los cromosomas murinos 6 y 13, res-
linfocitos T distintos), es generado también al azar pectivamente.
por reordenamiento génico V(D)J y, la variabili-
dad TCR, generada por la recombinación de dis- 5.1.1. Genes de cadenas TCRα
tintos segmentos génicos, será también enorme-
mente diversificada por: (i) corte impreciso de El repertorio genómico de cadenas TCRα
los segmentos génicos que se recombinan, (ii) ocupa 1000 kilobases en el brazo largo del
agregado de nucleótidos al azar en los sitios de cromosoma 14 humano e incluye 54 segmentos
corte y unión de los distintos segmentos génicos, génicos variables Vα en posición centromérica,
(iii) combinación al azar de cadenas TCRα y 61 segmentos génicos de unión Jα y, un único seg-
TCRβ (o TCRγ y TCRδ), y (iv) edición del re- mento constante Cα, en posición más telomérica.
ceptor Tαβ o Tγδ. Como ocurre en el repertorio genómico de las
inmunoglobulinas, cada segmento TCR variable,
5.1. Genes de cadenas TCRα, TCRβ, TCRγ y está precedido de una secuencia líder o señal (L),
TCRδ en posición 5’(figura 7-7).
Los segmentos génicos VαJα, situados en po-
En el DNA germinal de un vertebrado, no sición 5’, se encuentran separados de Cα, por una
existen genes que codifiquen la síntesis de los com- región genómica que contiene los segmentos
ponentes polipeptídicos del receptor clonotípico génicos de la cadena TCRδ.
TCR. Al contrario, estos genes deben ser genera- El potencial de este repertorio genómico con-
dos o ensamblados, por una recombinasa sitio-es- siste de 41 a 47 segmentos funcionales Vα (que
pecífica que reordena segmentos génicos V(D)J, pertenecen a 35-37 subgrupos o subfamilias) y 50
distintos de aquéllos utilizados para ensamblar los segmentos funcionales Jα. Entre los segmentos va-
genes que codifican las cadenas pesadas y livia- riables se encuentran además 5 segmentos desig-
nas del receptor de linfocitos B (ver capítulo 6). nados TCRVα/Vδ que pueden reordenarse con Jα
Los segmentos génicos que codifican las dis- o con Dδ y pueden, por lo tanto, utilizarse en la
tintas regiones o dominios de las cadenas TCRα, generación de genes TCRα o TCRδ.
TCRβ, TCRγ o TCRδ, se encuentran agrupados
en cuatro grupos o familias génicas distintas: 5.1.2. Genes de cadenas TCRβ

• Familia TCRα: incluye segmentos génicos En humanos, el repertorio genómico de ca-


Vα y Jα (codifican la región variable de la denas TCRβ ocupa 620 kb en el brazo largo del

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Figura 7-7. Distribución de los segmentos génicos TCRα y TCRδ. En el cromosoma 14 humano y 14 murino, se encuentran el
locus que contiene los segmento génicos Vα y Cα asociado a segmentos Jα y Dα. Los segmentos Vα y Jα, localizados en
posición 5’, están separados de Cα por el locus TCRδ.

cromosoma 7 y consiste de 62-65 segmentos ble precedido de un exón líder (L) o señal (figura
génicos variables Vβ y de segmentos Dβ, Jβ y Cβ 7-8).
que se encuentran separados en dos grupos Se han descrito además, 6 segmentos Vβ
(“clusters”) distintos. El primer grupo, situado en huérfanos, localizados en el brazo corto del
posición 5’, contiene un segmento D1β, seis seg- cromosoma 9 humano.
mentos J1β (J1β1 a J1β6) y un segmento C1β. El
segundo grupo, situado en posición 3’ con respec- 5.1.3. Genes de cadenas TCRγ
to al primero, incluye un segmento D2β, ocho seg-
mentos J2β y un único segmento C2β. El locus TCRγ humano ocupa 165 kb en el brazo
Los segmentos Vβ se encuentran en posición corto del cromosoma 7 y consiste de 12-15 seg-
más telomérica, pero existe un segmento génico mentos génicos variables Vγ, en posición más
Vβ30, en orientación invertida con respecto a la centromérica y dos "clusters" de segmentos CγJγ.
transcripción, localizado en posición 3’, más El primer grupo contiene tres segmentos J1γ y un
centromérico que el segundo "cluster" único segmento C1γ. El segundo grupo, situado
D2βJ2βC2β. El repertorio genómico potencial en posición más telomérica, contiene dos segmen-
consiste de 39-46 segmentos Vβ funcionales, que tos J2γ y un segmento a C2γ. El repertorio poten-
pertenecen a 23 subgrupos o subfamilias. Cada cial incluye 4-6 segmentos Vγ que se agrupan en
segmento Jβ codifica 3-5 aminoácidos, mientras dos subfamilias y los dos "clusters" DγJγCγ (figu-
los segmentos, segmentos Dβ, codifican de 15 a ra 7-9).
17 residuos aminoacídicos. Cada segmento varia-

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Figura 7-8. Distribución de segmentos génicos TCRβ. En los cromosomas 7 humano y 6 murino, se encuentran distribuidos los
segmentos Vβ y los dos conjuntos Cβ con sus respectivos segmentos génicos Jβ y Dβ.

5.1.4. Genes de cadenas TCRδ se agregan, finalmente, los 5 segmentos TCRVα/


Vδ (mencionados en 5.1.1.), que pueden compor-
En humanos el locus TCRδ ocupa una región tarse como funcionales o como seudogenes.
de 60 kb localizada dentro del locus TCRα y con-
tiene un cluster formado por un segmento génico 5.2. Reordenamiento génico
Vδ (Vδ3), tres segmentos Dδ, cuatro segmentos
JδD y un único gen Cδ (figura 7-7). Al igual como ocurre en las células B
El locus TCRδ contiene además un segmen- inmaduras, respecto a las inmunoglobulinas, en
to génico Vδ (Vδ3), localizado hacia abajo en po- las células T precursoras los segmentos génicos
sición 3’ del gen Cδ y, un segmento génico varia- V(D)J y C que codifican las cadenas TCR, se en-
ble Vδ1, localizado 360 kb hacia arriba en direc- cuentran en una configuración germinal no fun-
ción 5’, entre los segmentos Vα. Todos los seg- cional y deben reordenarse por recombinación si-
mentos génicos TCR/Dδ son funcionales y a ellos tio-específica, para generar la enorme diversidad

Figura 7.9. Familia de segmentos génicos TCRγ murino y humano.

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del repertorio linfocitario T, durante un proceso eliminando los segmentos génicos que los separa.
regulado de maduración y educación tímica. Sin embargo, dada la existencia de "clusters" DJC,
La recombinación de segmentos génicos la selección de un determinado segmento D obli-
V(D)J, es fundamental en el desarrollo del siste- ga a la recombinación con los segmentos J y C,
ma inmune de los vertebrados e implica la partici- incluidos en el mismo "cluster".
pación de una recombinasa que reconoce y corta El DNA ya reordenado, será luego utilizado
secuencias específicas de recombinación (12-RSS como molde para la síntesis de un transcrito pri-
y 23-RSS) (figura 7-10) y de una compleja ma- mario, el que una vez procesado dará origen al
quinaria de reparación del DNA que incluye una correspondiente mRNA que codifica la cadena
proteína quinasa DNA-dependiente (DNA-PK), TCR (figura 7-11).
las proteínas Ku/Ku80 y Artemisa, la DNA ligasa La maquinaria de recombinación de segmen-
IV (ver capítulo 6), y diversas otras proteínas tos génicos es siempre la misma, tanto en linfocitos
como Xrcc, histona H2AX y el complejo Mre11/ B como linfocitos T. Sin embargo, sólo las Ig se
rad50/Nbs1. Deben además existir diversos fac- reordenan en linfocitos B, y sólo cadenas TCR se
tores de remodelación de la cromatina, que limi- reordenan en los linfocitos T. Además en cada una
tan el acceso a las secuencias de recombinación de estas líneas celulares existe un orden preciso
RSS de modo tal que las regiones genómicas que de reordenamiento de modo tal que las cadenas
contienen los segmentos V(D)J y C, de Ig o TCR, pesadas se reordenan siempre antes que las cade-
sólo estén disponibles en ciertos tipos celulares y nas livianas del BCR y las cadenas TCRβ se
en ciertos estados de desarrollo, según el reordenan siempre antes que las cadenas TCRα
microambiente tisular. en los linfocitos T.
El orden en el reordenamiento, es similar a La diversidad potencial de los TCR se estima
como ocurre con las inmunoglobulinas y también mayor que en las inmunoglobulinas y ello obede-
implica el cumplimiento de la regla 12/23 y la ce, fundamentalmente a una mayor diversificación
eliminación o delección de todos los segmentos de las regiones N (generada por agregado de
que separan a aquéllos que deben recombinarse nucleótidos al azar) y P (generada por transferen-
(ver capítulo 6). Así, en las cadenas TCRβ y cia de nucleótidos desde la hebra no codificante del
TCRδ, primero se reordena un segmento génico DNA. Además, a diferencia de lo que ocurre con
de diversidad D, con un segmento de unión J, eli- las inmunoglobulinas, los genes de TCR ya
minando toda la secuencia nucleotídica que los reordenados no sufren hipermutaciones en sus
separa. Luego uno de los segmentos variables V, CDRs, que conduzcan a cambios en la función o
se recombina con el complejo DJ ya reordenado, afinidad del receptor, durante la respuesta inmune.

Figura 7-10. Secuencia señal de recombinación (RSS) y segmentos génicos V(D)J. (A) Heptámero, espaciador y nonámero de
las secuencias RSS. (B) Los diversos reordenamientos de los segmentos génicos V(D)J que generan los genes que codifican las
cadenas TCRα, TCRγ, TCRβ y TCRδ. Las secuencias 12-RSS se muestran con triángulos abiertos y las secuencias 23-RSS con
triángulos cerrados.

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Figura 7-11. Reordenamiento génico y transcripción de la cadena TCRβ. El proceso se inicia con el reordenamiento de un
segmento génico Dβ y un segmento Jβ. Luego, el complejo Dβ-Jβ ya reordenado, se recombina con un segmento Vβ. Posterior-
mente, el transcrito primario será procesado para generar el mRNA que codifica la cadena TCRβ.

Finalmente, sólo uno de los dos loci de cada inmunoglobulinas, es también válido para los
una de las cadenas TCRα, TCRβ, TCRγ o genes TCR, puesto que un reordenamiento
TCRδDβ que existen en el DNA germinal, será TCRγδ excluye todo reordenamiento TCRαβ y
funcionalmente reordenado y expresado en un viceversa.
linfocito T maduro. De esta manera, al igual
que en los genes de inmunoglobulinas, el fenó-
meno de exclusión alélica impide que se 6. LINFOCITOS T Y SEÑALES ACCESO-
reordenen ambos alelos de un mismo gen. Así RIAS DE COESTIMULACIÓN
por ejemplo, sólo cuando del reordenamiento
de segmentos génicos β en uno de los Los linfocitos T, aparte del receptor TCR y de
cromosomas homólogos, se obtiene un gen los correceptores CD4 y/o CD8, expresan otros
TCRβ no funcional (que no puede ser transcrito receptores de membrana que, aunque no reco-
o el transcrito no puede ser traducido) se inicia nocen antígenos, resultan fundamentales en la
el reordenamiento de segmentos β en el otro transducción de señales accesorias de activa-
cromosoma homólogo. Si de ambos alelos β se ción celular (moléculas accesorias), en la es-
obtienen genes no funcionales, se induce tabilización de la interacción linfocitoT-célula
apoptosis de la célula T en diferenciación. El presentadora de antígeno (CPA), o en el reclu-
fenómeno de exclusión isotípica que ocurre en- tamiento, recirculación y “homing” linfo-
tre las cadenas livianas κ y λ de las citario (moléculas de adhesión) (figura 7-12).

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Figura 7-12. Activación de linfocitos T y señales accesorias de coestimulación. Además del receptor TCR, del complejo CD3
y de los correceptores CD4 o CD8, los linfocitos T expresan otros receptores de membrana (CD2, CD28, LFA-1, CD40L, etc.),
que resultan fundamentales en la transducción de señales accesorias de coestimulación, en la estabilización de la interacción
linfocito T-célula presentadora o en el reclutamiento, recirculación y “homing” linfocitario.

En ausencia de señales accesorias de • CD40L (CD154), que se expresa en linfocitos


coestimulación, el reconocimiento antigénico y la T activados y une su ligando CD40 (cons-
transducción de señales a través del complejo titutivo en la CPA).
TCR-CD3, no conduce a activación celular. Al • CD2 (LFA-2), que une su ligando LFA-3
contrario, señales aisladas transducidas por TCR- (CD58 en humanos) CD48 en ratón.
CD3, conducen a anergia celular y/o apoptosis. • LFA-1 ("Leukocyte Function Associated
Las señales adicionales requeridas para la activa- Antigen-1") que une su ligando ICAM
ción de linfocitos T, son fundamentalmente pro- ("Intercellular Adhesión Molecule-1" o
porcionadas por moléculas coestimuladoras expre- CD54).
sadas en la membrana de células vecinas o de cé- • CD45, una tirosín fosfatasa que une su ligan-
lulas presentadoras de antígeno y por mediadores do CD22. La isoforma CD45RA se expresa
solubles como citoquinas. en linfocitos T en reposo y CD45RO en
Entre las moléculas accesorias expresadas en linfocitos T activados.
la superficie de linfocitos T y que unen molécu-
las coestimuladoras, se encuentran: Además, moléculas como ICOS ("Inducible
costimulator", similar a CD28 pero no une CD80
• CD8 y CD4, que se unen a moléculas MHC o CD86), citoquinas (IL-1, IL-2 , IL-4, IL-6, IL-
de clase I y II, respectivamente, 12, TNF) y diversas moléculas de adhesión
• CD28 que une sus ligandos B7.1 (CD80) y (integrinas β1 y β2, selectinas), también propor-
B7.2 (CD86), expresados en células presen- cionan señales secundarias o terciarias que facili-
tadoras de antígeno (CPA) activadas. tan o promueven la activación y/o diferenciación

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de distintas subpoblaciones de linfocitos T. distintos clones linfocitarios están bajo control
Sin embargo, no todas las señales proporcio- homeostático. Por lo tanto, nuevos linfocitos que
nadas por citoquinas o moléculas de superficie, son continuamente generados en los órganos
proporcionan estímulos coactivadores. Así por linfoides primarios y secundarios (linfocitos vír-
ejemplo, IL-10 y TGF-β ("transforming growth genes y linfocitos activados/linfocitos memoria,
factor-β"), a menudo inhiben diversas poblacio- respectivamente) deben competir con los linfocitos
nes linfocitarias T, B y NK. De manera similar, residentes en los distintos órganos y tejidos y man-
la unión a CTLA-4 (CD152, una molécula tener la diversidad del repertorio linfocitario.
homóloga a CD28 y que se expresa en la superfi- Luego del encuentro con el antígeno, los
cie de linfocitos T activados), a sus ligandos CD80 linfocitos T vírgenes se convertirán en células T
o CD86, también proporciona señales de inhibi- efectoras o en células T de memoria, que se dis-
ción linfocitaria. tinguirán de los linfocitos vírgenes en función del
El efecto de las señales accesorias de patrón de moléculas de adhesión y de receptores
coestimulacíon va a depender de diversos facto- para citoquinas que expresan en su membrana.
res; entre éstos se encuentran: el número de com- Como la homeostasis de linfocitos vírgenes y de
plejos MHC-péptido que inician las señales de memoria se regula independientemente, nuevos
transducción, la afinidad, avidez y duración de esa linfocitos T de memoria reemplazarán sólo a otros
interacción y el nivel de moléculas linfocitos T de memoria; de esta manera el núme-
coestimuladoras que amplifican las señales inicia- ro de linfocitos vírgenes y de memoria permane-
les de activación. cerá relativamente constante y equivalente en la
Células dendríticas y linfocitos B, expresan periferia.
constitutivamente moléculas MHC, CD40, En los últimos años se ha establecido que aún
ICAM-1, LFA-3 y son bastante eficientes en la en ausencia de antígeno, la sobrevida post-tímica
captura y procesamiento de antígeno. Sin embar- de los clones linfocitarios T, es un proceso activo
go, sólo una vez activadas (y como consecuencia y requiere la interacción continua de linfocitos vír-
de la expresión de altos niveles de las moléculas genes periféricos con moléculas MHC para las
coestimuladoras CD80 y CD86 y de moléculas de cuales los linfocitos fueron positivamente selec-
presentación MHC), se convertirán en potentes cionados en el timo. En ratones por ejemplo,
células estimuladoras de linfocitos T. La madura- linfocitos T CD8 MHC de clase I (H-2Db)-restrin-
ción de la célula presentadora de antígeno, aumen- gidos sobrevivirán sin proliferar si se transfieren
ta notablemente los niveles de CD80 y CD86, pasivamente a ratones de haplotipo H-2Db, pero
que se coexpresan en microdominios de membra- no sobrevivirán si se transfieren a ratones de
na junto a moléculas MHC, lo que favorece la haplotipo H-2Dk que expresan moléculas MHC de
efectividad de las señales transducidas por TCR/ clase I distintas. Si la transferencia es hacia rato-
CD3 y CD28. La unión de CD28 a CD80 o CD86 nes que expresan bajos niveles de moléculas H-
gatilla la activación de linfocitos T, la expresión 2Db de clase I, sobrevivirá sólo una pequeña frac-
de CD40L que potencia la activación y la síntesis ción de los linfocitos T CD8 adoptivamente trans-
de IL-2 y sus receptores (IL-2R), todo lo cual con- feridos y esta fracción será proporcional al nivel
duce a la proliferación y diferenciación linfocitaria de expresión de estas moléculas MHC de clase I
(figura 7-12). En una fase posterior, las moléculas en el individuo receptor.
CD80 y CD86 las puede modular la diferencia- Aunque el antígeno no parece ser un
ción Th1/Th2 e inhibir la respuesta celular T, ya prerrequisito para la sobrevida de los linfocitos
sea directamente mediante la unión a su ligando de memoria, el tamaño de un clon linfocitario
CLA-4 (expresado en la fase final de activación antígeno-específico puede disminuir en ausencia
de los linfocitos) o indirectamente promoviendo del antígeno, simplemente por mecanismos
la generación de células T reguladoras. homeostáticos. Se ha sugerido, por lo tanto, que
la vida media de los linfocitos memoria está de-
terminada por la frecuencia con que los linfocitos
7. HOMEOSTASIS Y DESARROLLO POST- se encuentran con el antígeno y del espacio dispo-
TÍMICO DE LINFOCITOS T nible para su sobrevida en el repertorio linfocitario
T. Así, la memoria inmunológica contra un
Una de las características del sistema inmu- antígeno que se encuentra una única vez, será re-
ne es que el número total y la distribución de los lativamente corta, mientras que el encuentro fre-

165

Sin título-2 165 5/26/06, 10:25 AM


cuente con un antígeno será suficiente para man- Lanzavecchia A. and Sallusto F., “Dynamics of T
tener o aumentar el tamaño clonal de los linfocitos lymphocyte Responses: Intermediates, Effectors
T antígeno-específicos, generando una memoria and Memory Cells”, Science 290: 92-97, 2000.
inmunológica casi indefinida, debido a la genera-
ción continua de nuevas células de memoria. Lefranc, M.P., “Locus maps and genomic reper-
El compartimiento linfocitario T puede ser toire of the human T-cell receptor genes”, Immu-
mantenido o reemplazado por nuevas células que nologist 8: 72-80, 2000.
emergen desde el órgano linfoide primario o bien
por repoblamiento a partir de la expansión MacDonald H.R., Radke F., Wilson A., “T cell fate
periférica de clones linfocitario T maduros, sobre specification and αβ/γδ lineage commitment”,
todo cuando la actividad tímica disminuye como Curr. Opin. Immunol. 13: 219-224, 2001.
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166

Sin título-2 166 5/26/06, 10:25 AM


Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 8

COMPLEJO PRINCIPAL DE
HISTOCOMPATIBILIDAD

Ulises Vergara C., Iván Palomo G., Claudio Zúñiga M. y Cristina Navarrete

1. Introducción
2. Genes y moléculas del Complejo
Principal de Histocompatibilidad
2.1. Genes del MHC
2.1.1. Genes de clase I
2.1.2. Genes de clase II
2.1.3. Genes de clase III
2.1.4. Otros genes del MHC
2.2. Estructura y función de las
moléculas MHC
2.2.1. E s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e
las moléculas MHC clase I
2.2.2. E s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e
las moléculas MHC clase II
3. El concepto de restricción MHC
4. Otras moléculas de presentación
4.1. Moléculas CD1
5. Herencia de los genes HLA
6. Complejo Principal de Histocompa-
tibilidad y enfermedad
7. Nomenclatura y tipificación HLA

167

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168

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RESUMEN

El Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC) es un complejo génico altamente


polimórfico que controla la expresión de moléculas que desempeñan un rol fundamental en las
interacciones celulares que inducen y regulan la respuesta inmune a través del procesamiento y
presentación de antígenos a los linfocitos T.
Los genes de clase I del MHC (en el hombre llamado HLA) controlan la expresión de los
antígenos de histocompatibilidad clásicos HLA-A,-B,-C y no clásicos HLA-E, -F, G y MIC, y
su función principal es la de presentar péptidos antigénicos a los linfocitos T αβ citotóxicos
CD8+, linfocitos T γδ y a células NK.
Los genes de clase II (HLA-DR,-DQ y -DP en el hombre) corresponden a los antiguos
genes de respuesta inmune (genes Ir) y codifican la expresión de moléculas que presentan péptidos
a linfocitos T CD4+ (linfocitos T "helper").
Los genes de clase III codifican la expresión de los factores de complemento C4, Bf y C2.
El complejo incluye además genes que codifican la expresión de moléculas importantes en el
procesamiento antigénico como por ejemplo tapasina, LMP2, LMP7, TAP1, TAP2, DM y DO y
moléculas involucradas en la respuesta inflamatoria (TNFα, TNFβ, Linfotoxinas, hsp70).

1. INTRODUCCIÓN conducir al desarrollo de inmunodeficiencia (ver


capítulos 30 y 31) o autoinmunidad (ver capítulo
La defensa inmunológica contra diversos 23), respectivamente.
agentes infecciosos depende de la habilidad del El MHC está constituido por un conjunto de
sistema inmune para reconocer antígenos del genes que controlan la expresión de moléculas que
agente patógeno y poner en marcha un conjunto desempeñan un rol fundamental en el procesa-
de mecanismos que incluyen la activación del miento y presentación de antígenos a los linfocitos
complemento y la activación, tanto de células T y en la regulación de las interacciones celulares
fagocíticas como de distintas células inmunocom- que caracterizan la respuesta inmune. Este
petentes. El desarrollo de una respuesta inmune complejo génico parece estar presente en todos
efectiva implica entonces una compleja serie de los vertebrados y en algunos invertebrados, lo que
eventos que conducen a activación celular y la revela un origen temprano en la evolución de las
generación de células efectoras que secretan distintas especies.
anticuerpos y células citotóxicas (ver capítulo 10), El MHC es un sistema poligénico que
que destruirán al agente infeccioso, o a la célula contiene muchos genes estructural y funcional-
infectada en el caso de patógenos intracelulares. mente relacionados y altamente polimórficos,
En general, tanto la respuesta contra puesto que en la población existen múltiples alelos
antígenos extraños (inmunidad) como la tolerancia para cada gen. Los distintos genes del complejo
a antígenos propios, están sujetas a un coordinado están además estrechamente ligados y tienden a
y complejo mecanismo de regulación que incluye heredarse como una unidad, como un complejo
inmunoglobulinas (ver capítulo 6), receptores de supergénico o haplotipo, entendiéndose como tal
células T (TCR) (ver capítulo 7) receptores de a una combinación particular de genes en un
células NK (ver capítulo 10), citoquinas (ver complejo génico o en un cromosoma. En la
capítulo 11) y moléculas codificadas por el población de individuos de la especie existirá
denominado Complejo Principal de Histocom- teóricamente entonces, tantos haplotipos MHC
patibilidad (MHC, "Major Histocompatibility como diferentes combinaciones de alelos de los
Complex"). Una falla en estos mecanismos de distintos genes del complejo.
regulación de la inmunidad o la tolerancia puede El Complejo Principal de Histocompatibili-

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Sin título-2 169 5/26/06, 10:25 AM


dad fue originalmente descrito por Peter Gorer en significado biológico de las moléculas codificadas
el ratón (1936), como un locus de grupos por el Complejo Principal de Histocompatibilidad,
sanguíneos que controlaba la expresión de diversos puesto que el trasplante de tejidos es un fenómeno
antígenos en los glóbulos rojos. Gorer definió, artificial, que no ocurre espontáneamente en la
inicialmente, cuatro antígenos eritrocitarios, naturaleza. Así, en las décadas del 60 y del 70, se
denominados antígenos I, II, III y IV, y más tarde demostró que la capacidad para desarrollar una
demostró que el denominado antígeno II se respuesta inmune contra diversos antígenos natu-
expresaba también en diversos tejidos y jugaba rales y sintéticos, estaba bajo el control de genes
un rol decisivo en la susceptibilidad o resistencia MHC (genes de respuesta inmune o genes Ir).
al trasplante de tumores y en la aceptación o Finalmente, se demostró que la función biológica
rechazo del trasplante de tejidos entre distintas real de estas moléculas era la de actuar como
cepas consanguíneas o endogámicas de ratón. presentadoras de antígenos (incluido aloantígenos)
Trasplantes entre cepas genéticamente idénticas a los linfocitos T. Asimismo se demostró que estos
(cepas isogénicas o singénicas) son aceptados, antígenos altamente polimórficos al ser
mientras los trasplantes entre cepas genéticamente expresados en la membrana participaban en el
distintas (cepas alogénicas) que presentan alelos fenómeno de rechazo al trasplante de tejidos
distintos de uno o más genes son rápida y mediante un mecanismo de reconocimiento directo
fuertemente rechazados. Sólo en las cepas que e indirecto (figura 8-1). En el caso de recono-
rechazaban el trasplante, era posible detectar cimiento directo estos antígenos son reconocidos
anticuerpos que reaccionaban con el antígeno-II, directamente por las células T del receptor y
proporcionando evidencia acerca de la naturaleza reconocimiento indirecto, cuando la presentación
inmunológica de la resistencia al trasplante de de péptidos antigénicos derivados de estas
tumores y del rechazo al trasplante de tejidos. moléculas ocurre por las células presentadoras
Más tarde, en 1948, George Snell designó a autólogas. Este último mecanismo es el que está
los genes y antígenos, responsables de la involucrado en el reconocimiento de cualquier otro
compatibilidad tisular, como genes y antígenos de antígeno ya sea derivado de proteínas virales, bac-
histocompatibilidad, respectivamente. Así el lo- teria u otra molécula polimórfica.
cus y antígeno-II de grupo sanguíneo, se
designaron como locus y antígeno de
histocompatibilidad-2 (o locus y antígeno H-2, 2. GENES Y MOLÉCULAS DEL COMPLE-
respectivamente). Muy pronto se demostró que el JO PRINCIPAL DE HISTOCOMPA-
locus H-2 era en realidad un conjunto de genes, TIBILIDAD
estrechamente ligados que controlaban la
expresión de diversos antígenos de Análisis inmunogenéticos, funcionales y más
histocompatibilidad. Como estos antígenos recientemente estudios de biología molecular, han
inducían el más rápido y el más fuerte rechazo al permitido identificar más de 200 genes en el lo-
trasplante de tejidos, el conjunto génico fue cus MHC. Éstos se han separado en tres familias
definitivamente designado como Complejo Prin- o clases distintas: genes de clase I, de clase II y de
cipal de Histocompatibilidad-2 o Complejo H-2 clase III. En el complejo HLA estos genes ocupan
del ratón. una extensión de alrededor de 4 millones de pares
El MHC humano, HLA (“Human Leukocyte de bases, en el brazo corto del cromosoma 6
Antigen”), fue descrito en la década del 50 por humano. En el ratón el complejo H-2 ocupa una
Dausset y van Rood, a partir de anticuerpos extensión de alrededor de 3 millones de pares de
leucoaglutinantes encontrados en el suero de bases, en el cromosoma 17 murino.
pacientes politransfundidos y de madres Los genes de clase I y de clase II codifican la
multíparas, que reaccionaban con los leucocitos expresión de proteínas integrales de membrana que
presentes en los productos sanguíneos participan en la discriminación entre lo propio y
transfundidos lo que dio el nombre al sistema. lo ajeno, al actuar como elementos de restricción
Los antígenos de histocompatibilidad fueron en la presentación de antígenos a linfocitos T. Los
durante muchos años reconocidos como el mayor genes de clase III, en cambio, codifican la
obstáculo al trasplante de tejidos entre distintos expresión de proteínas plasmáticas que tienen una
individuos de la misma especie. Sin embargo, función completamente distinta, puesto que
parecía claro que esta no era la función o el forman parte de la cascada de activación del

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Sin título-2 170 5/26/06, 10:25 AM


Figura 8-1. Mecanismos de presentación directa e indirecta de moléculas MHC del injerto por parte de células T del
receptor.

sistema del complemento. I (Ia: HLA-A, -B y C en el humano y H-2 K, D y


En el complejo existen varios genes de clase L en el ratón) se expresan en la mayoría de las
I y de clase II, cada uno de los cuales presenta células nucleadas del organismo y son los que han
múltiples alelos (y por tanto elevado sido tradicionalmente reconocidos como el mayor
polimorfismo), que codifican la expresión de obstáculo al trasplante de tejidos entre individuos
diferentes moléculas de clase I o de clase II y por de la misma especie. La participación de estas
lo tanto con distintas capacidades para presentar moléculas en el rechazo de tejidos es sólo un efecto
fragmentos peptídicos a linfocitos T específicos. secundario de su rol fisiológico como elemento
Esta forma de organización del MHC confiere a de restricción en la presentación antigénica a
los distintos individuos una enorme capacidad para linfocitos T CD8+. Estos linfocitos (T citotóxicos
presentar y responder a una gran variedad de o T supresores), son incapaces de reconocer el
antígenos distintos, ya que los diferentes alelos de antígeno en su conformación natural y sólo lo
cada gen son codominantes, es decir los productos reconocen en la superficie de una célula
moleculares de cada alelo se expresan y funcionan presentadora de antígeno, en asociación con una
de manera independiente en la superficie celular. molécula MHC de clase I.
Estos genes presentan un alto grado de
2.1. Genes del MHC polimorfismo, es decir en la población se describe
un elevado número de variantes alélicas para cada
2.1.1. Genes de clase I uno de estos locus. Por ejemplo en el ratón, en el
locus K se han descrito más de 100 alelos,
Los genes de clase I controlan la expresión considerando las cepas de laboratorio y
de los antígenos clásicos y no clásicos. Los poblaciones silvestres. En los humanos se han
antígenos clásicos de histocompatibilidad de clase descrito, hasta ahora, 209 alelos HLA-A, 414

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Sin título-2 171 5/26/06, 10:25 AM


alelos del gen B y 101 del gen C . 2.1.2 Genes de clase II
Cada gen de clase I codifica la cadena pesada
o cadena alfa del heterodímero glicoproteico y Los genes de clase II corresponden, a los
está formado por 7 exones: el exón 1 codifica para antiguamente denominados como genes de
el péptido señal, los exones 2, 3 y 4 para los respuesta inmune (genes Ir) del Complejo Princi-
dominios α1 a α3 de la cadena α (ver punto 2.2.1), pal de Histocompatibilidad y controlan la
el exon 5 para el dominio transmembrana y los expresión de moléculas de clase II, involucradas
exones 6 y 7 para la región citoplasmática. en la presentación de fragmentos peptídicos a los
Los genes de clase I no clásicos (Ib) incluyen linfocitos T CD4+.
HLA-E, -F, -G y MIC en el humano y H2-Q, -T y En el Complejo HLA humano los genes de
-M en el ratón. Éstos son menos polimórficos, se clase II se ubican en las regiones HLA-DP, -DQ y
expresan en forma más restrigida a través de las -DR del complejo. En el ratón los genes de Clase
diversas células y tejidos y tienen una función II se ubican en las regiones I-A e I-E del sistema
diferente. La mayoría de ellos participan en la H-2 murino (figura 8-2).
interacción con receptores de células NK. Además Los genes de clase II están formados por 4
están los genes relacionados con la cadena pesada exones: el exon 1 codifica para el péptido señal, los
de clase I (MIC) A, B, C y D de los cuales sólo A exones 2 y 3 codifican para los dominios α1 y α2 y el
y B se expresan. Los genes MIC codifican para exon 4 codifica para las regiones transmembrana y
moléculas reconocidas por linfocitos T γδ en citoplasmática.
situaciones de stress. Cada región contiene por lo menos dos genes:

Figura 8-2. Organización Genética del Complejo Principal de Histocompatibilidad en humanos (Complejo HLA) y en el
ratón (Complejo H-2). Tanto en humanos como en el ratón los genes de clase I incluyen a los genes clásicos altamente polimórficos
(genes de clase Ia), como genes oligomórficos o monomórficos (genes de clase Ib). En humano los genes de clase II se ubican en
las regiones DP, DQ y DR y en el ratón corresponden a los genes de las regiones IA e IE que codifican la cadena alfa (genes A) y
genes que codifican la cadena beta (genes B) de la molécula de clase II. Los genes clase III codifican para algunos componentes
del sistema del complemento y otras proteínas.

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uno que codifica la cadena alfa (gen A) y otro que una función completamente distinta a las
codifica la cadena beta (gen B) de la molécula de clase moléculas de clase I y de clase II, puesto que
II, y el heterodímero se forma siempre a partir de codifican la expresión de moléculas como C2, C4
cadenas α y β codificadas por genes de la misma y factor B (Bf) que forman parte de la cascada de
región. En la región DR, por lo menos hay descritos 4 activación del sistema del complemento (ver
genes B funcionales (B1 y B3 ó B4 ó B5'), por lo capítulo 18) (figura 8.2).
tanto en esta región se pueden originar 2 moléculas Tanto en el Complejo HLA como en el
DR diferentes dependiendo del haplotipo. Los genes Complejo H-2, la región de los genes de Clase III
de clase II también, presentan un alto grado de contiene: el gen que codifica la expresión del
polimorfismo, al igual que los genes Ia. Sin embargo segundo factor del complemento (C2), dos genes
en el caso de estos genes solamente el DQA y DPA (C4A y C4B) que codifican la expresión de dos
son polimórficos; el DRA es relativamente formas del cuarto factor del complemento (C4),
monomórfico y hasta el momento se han descrito sólo el gen que codifica el factor B (Bf) de la ruta alterna
dos variantes. Esto en contraste a los 273 alelos DRB1, del sistema del complemento, los genes CYP-21A
21 DQA, 45 DQB, 19 DPA y 93 DPB. Por lo tanto el y CYP-21B que codifican la expresión de la 21
número de moléculas de clase II distintas que puede hidroxilasa (21-OH), enzima involucrada en la
codificar una región de clase II, depende del número síntesis de esteroides.
de combinaciones α-β que puedan formarse a partir Entre los genes de clase III están también los
de los distintos genes funcionales A y B de la región. que codifican para el Factor de Necrosis Tumoral
En un individuo heterozigoto, con un haplotipo distinto alfa (TNF-α), Linfotoxina A, B y C y aquellos que
en cada cromosoma homólogo, el número de codifican la expresión de proteínas de shock térmico
combinaciones es aún mayor, dado que no sólo pueden de 70 kDa (hsp 70) (figura 8-2). Estas moléculas
codificarse moléculas de clase II a partir de genes A y están relacionadas con fenómenos inflamatorios y
B que están en posición cis (genes en el mismo algunos autores han planteado la posibilidad de
cromosoma), sino también a partir de genes A y B en clasificar esta región como genes clase IV.
posición trans (genes en cromosomas homólogos
distintos) (figura 8-3). Sin embargo la mayoría de las 2.1.4. Otros genes del MHC
moléculas expresadas están codificadas en cis ya que
las moléculas codificadas en trans no son estables. En la región de los genes clase II se ubican
una serie de genes que codifican para moléculas
2.1.3. Genes de clase III involucradas en el procesamiento antigénico por
las moléculas de clase I tales como, tapasina (tps),
Los genes de clase III también codifican la LMP2 y LMP7, TAP1 y TAP2 y aquellas
expresión de proteínas plasmáticas que cumplen involucradas en la selección y presentación de
péptidos antigénicos a las moléculas de clase II
incluidos DMA y DMB y DOA y DOB.
No todos los genes ligados en el Complejo Prin-
cipal de Histocompatibilidad pueden clasificarse
como genes de clase I, II ó III. En esta categoría se
encuentran: (a) los genes LMP-2 y LMP-7 que
codifican subunidades de la maquinaria
citoplasmática de degradación o procesamiento de
proteínas (Proteasoma), (b) los genes TAP-1 y TAP-
2 que codifican las subunidades de un transportador
peptídico ATP dependiente (TAP, "Transporter
Associated with Antigen Processing"), (c) el gen
que codifica para la proteína Tapasina, chaperona
involucrada en la formación del complejo molécula
MHC-péptido, en el interior del retículo
Figura 8-3. Asociación de cadenas αβ del mismo cromosoma endoplásmico (d) los genes DMA y DMB que
(apareamiento cis) y de cromosomas opuestos (apareamiento codifican la expresión de las subunidades del
trans). Un individuo heterocigoto para los genes DRA1 y DRB1
heterodímero o molécula DM, involucrada en la
puede codificar para 2 cadenas α y 2 cadenas β diferentes por lo
que puede formar cuatro cadenas DR diferentes. unión de fragmentos peptídicos a las moléculas de

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Sin título-2 173 5/26/06, 10:25 AM


clase II. Todas estas moléculas están involucradas La cadena α contiene aproximadamente 330
en el procesamiento antigénico y sus genes mapean aminoácidos y su conformación en la membrana
en la región de los genes clase II. es tal que presenta distintas regiones o dominios
claramente definidos: 3 dominios extramembrana
2.2. Estructura y función de las moléculas MHC denominados α1, α2 y α3, de alrededor de 90
aminoácidos cada uno; una región hidrofóbica
2.2.1. Estructura y función de las moléculas transmembrana de alrededor de 25 aminoácidos
clase I de anclaje en la membrana y, una cola o segmento
citoplasmático de 30 aminoácidos (figura 8-4).
Las moléculas MHC de clase Ia se expresan Los dominios α1 y α2 conforman la ranura o
en todas las células nucleadas en niveles de 104 a bolsillo de unión para la presentación de
105 moléculas por célula, particularmente en células fragmentos peptídicos, de 8-9 aminoácidos, a
linfoides. Una menor expresión de estas moléculas células T CD8+. El dominio α3 presenta una
MHC de clase I se observa en células germinales y región de unión no covalente a la β2m y un sitio
glóbulos rojos. o región no polimórfica o monomórfica para
Las moléculas MHC de clase Ia y Ib son interacción con la molécula CD8, co-receptor
glicoproteínas integrales de la membrana plasmática linfocitario.
y se expresan como un heterodímero constituido Tanto el dominio α3, como la β2m
por una cadena pesada o cadena α de 45 kDa presentan una secuencia aminoacídica y una
(codificada por los genes MHC de clase I) y una conformación similar a los dominios constantes
cadena liviana de 12 kDa, la Beta-2 microglobulina de las moléculas de inmunoglobulinas (ver
(β2m) no codificada por el MHC, sino por un gen capítulo 6). Por lo tanto las moléculas de clase
situado en el cromosoma 15 en humanos y en el I se clasifican dentro del gran grupo de proteínas
cromosoma 2 en el ratón (figura 8-4). de la superfamilia de las inmunoglobulinas. La
Las moléculas clase Ia (B, C, A en el humano mayor parte del polimorfismo de las moléculas
y K, D, L en el ratón) se caracterizan por expresarse de clase I está localizado en los dominios alfa 1
en prácticamente todas las células nucleadas, y alfa 2.
también en los glóbulos rojos y plaquetas; su Los productos de los genes clásicos de clase
función se asocia a la presentación de péptidos I (HLA-A, -B y -C) interactúan con el receptor de
antigénicos principalmente de origen endógeno a las células T y con el receptor KIR (killer/immu-
los linfocitos T CD8+. noglobulin like receptor) presente en las células T
La cadenas α y β de la molécula de clase I y NK, respectivamente. Por otra parte, HLA-E
están no covalentemente unidas y sólo la cadena interactúa con los receptores tipo lectina presente
alfa se encuentra anclada a la membrana en las células NK. Los productos de los genes MIC
plasmática celular. que no están unidos a la β2m, no participan en la
presentación de antígenos a los linfocitos T αβ,
pero sí son reconocidos por linfocitos T γδ
intraepiteliales.

2.2.2. Estrcuctura y función de las moléculas


clase II

A diferencia de las moléculas MHC de


clase I, que se expresan en virtualmente todas
las células nucleadas, las moléculas MHC de
clase II tienen una distribución más restringida
expresándose en forma constitutiva en células
como linfocitos B, monocitos, macrófagos,
Figura 8-4. Esquema de las moléculas MHC de clase I. La
molécula MHC de clase I es un heterodímero glicoproteico células de Langerhans, células dendríticas y, en
formado por una cadena pesada de 45 kDa codificada por el general en células presentadoras de antígeno
complejo MHC y una cadena liviana de 12 kDa, β2m, (CPA). Células endoteliales, epiteliales y
codificada en el cromosoma 15 humano y en el cromosoma 2
estromales no expresan moléculas MHC de
murino. El bolsillo o sitio de unión de fragmentos peptídicos
se conforma de los dominios α1 y α2 de la cadena α. clase II en forma constitutiva, pero pueden

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Sin título-2 174 5/26/06, 10:25 AM


hacerlo bajo el estímulo de citoquinas como Los dominios α3 y β3 de las moléculas de
interferón gamma (IFNγ), lo que puede tener clase II, lo mismo que el dominio α3 y la β2m
importantes consecuencias en la respuesta de las moléculas de clase I, tienen una secuencia
inmune normal y/o en el desarrollo de aminoacídica y una conformación similar a los
autoinmunidad. Los linfocitos T son claramente dominios constantes de las moléculas de
negativos para moléculas MHC de clase II, pero inmunoglobulinas y se clasifican entonces
también pueden expresarlas como resultado de dentro de la misma superfamilia de las
la activación celular. inmunoglobulinas.
Las moléculas MHC de clase II también son
glicoproteínas integrales de la membrana celular
y están constituidas por dos cadenas polipeptídicas, 3. EL CONCEPTO DE RESTRICCIÓN MHC
α y β, no covalentemente asociadas y codificadas
por genes de clase II del complejo. Un linfocito T, específico para un
Tanto en la cadena α (32-34 kDa), como en la fragmento peptídico presentado en el contexto
cadena β (28 -32 kDa) del heterodímero de clase II, de una molécula MHC particular, sólo
se distinguen claramente: dos dominios reconocerá este complejo molécula MHC-
extracelulares de 90 aminoácidos, α1 y α2 y β1 y péptido y no reconocerá el mismo péptido
β2, respectivamente; una región o dominio presentado en el contexto de una molécula
hidrofóbico transmembrana de alrededor de 25 MHC de la misma clase (I o II), pero distinta.
aminoácidos para anclaje en la membrana celular y, El genotipo o la molécula MHC restringe
una pequeña cola citoplasmática de longitud vari- entonces la especificidad del linfocito T, el
able en las distintas moléculas MHC de clase II que no reconoce a la molécula MHC o al
(figura 8-5). La ranura o bolsillo peptídico de fragmento peptídico, sino sólo al complejo
presentación antigénica está conformado por los MHC-péptido específico.
dominios α1 y β1 y, normalmente, presenta a los El origen del fenómeno de restricción
linfocitos T CD4+ fragmentos peptídicos de 13 a 15 MHC se encuentra en el proceso de
aminoácidos. El polimorfismo de esta molécula está diferenciación o "educación tímica", puesto
localizado principalmente en los dominios alfa 1 y que en el timo se produce la selección positiva
alfa 2 de las moléculas y está concentrado en tres de linfocitos T, en función de su capacidad para
regiones hipervariables que son las que hacen reconocer fragmentos peptícos en el contexto
contacto directo con el pépetido antigénico y/o el de moléculas MHC propias. Sin embargo, un
receptor de células T. linfocito T citotóxico específico para un
fragmento peptídico presentado en el contexto
de una molécula MHC de clase I propia, puede
reconocer o reaccionar cruzadamente con un
fragmento peptídico extraño, presentado en el
contexto de una molécula MHC de clase I
extraña o contra un péptido propio presentado
en el contexto de una molécula de clase I
extraña o alogénica. De esta manera puede
entonces explicarse, al menos en parte, el
rechazo al trasplante de tejidos, puesto que
antígenos propios o extraños (alogénicos) están
siendo presentados en el contexto de moléculas
MHC extrañas en la superficie de células
extrañas o alogénicas, presentes en el tejido del
donante. Un fenómeno similar puede explicar
la denominada reacción del trasplante o injerto
Figura 8-5. Esquema de las moléculas MHC de clase II. La
molécula de clase II es un heterodímero glicoproteico contra el huésped (GvH, "graft-versus-host"),
constituido por una cadena α de 32-34 kDa y una cadena β de en la que linfocitos T citotóxicos presentes en
28-34 kDa. Ambas cadenas están codificadas por genes MHC el tejido trasplantado (linfocitos alogénicos)
de clase II y están asociadas no covalentemente. El bolsillo o
reaccionan contra tejidos o células del recep-
sitio de unión de fragmentos peptídicos se conforma de los
dominios α1 y β1 y de las cadenas α y β respectivamente. tor.

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Sin título-2 175 5/26/06, 10:25 AM


4. OTRAS MOLÉCULAS DE PRESENTA- de mecanismos complementarios para establecer
CIÓN una respuesta inmune adecuada en la infección con
bacterias intracelulares y abre la posibilidad del
4.1. Moléculas CD1 uso de antígenos glicolipídicos en posibles
vacunas, por ejemplo contra la tuberculosis.
Las moléculas CD1 son glicoproteínas
transmembrana constituidas por una cadena alfa 5. HERENCIA DE LOS GENES HLA
de 43-49 kDa asociada no covalentemente a una
β2m. Lo anterior indica una semejanza estructural Los genes HLA se heredan en forma
con las moléculas MHC clase I, con las cuales codominante, por tanto los alelos de ambos locus
comparten una limitada pero significativa son expresados, así dos set de moléculas HLA o
homología de secuencia (20%). Estas moléculas haplotipos pueden ser pesquisados en las células,
son codificadas por genes fuera del MHC uno heredado del padre y otro de la madre.
(cromosoma 1 humano y 3 murino) y tienen un Existe un 25% de posibilidades que 2 hijos
bajo polimorfismo. Su transporte intracelular es compartan ambos haplotipos (HLA idénticos), un
TAP o Ii independiente, moléculas importantes en 25% de posibilidades que no compartan ningún
el movimiento de las moléculas clase I y II, haplotipo y un 50% de posibilidades que
respectivamente. Aunque existe evidencia de que compartan un haplotipo (figura 8-6).
estas moléculas están presentes en, al menos, todos
los mamíferos, la mejor caracterización se ha
hecho en humano y ratón. Los miembros de la fa-
milia CD1 se dividen en dos grupos, sobre la base
de sus secuencias aminoacídicas. El grupo I
comprende sólo moléculas descritas en humano:
CD1a, CD1b y CD1c; al parecer no habría
proteínas grupo I en el ratón. El grupo II incluye a
CD1d en el humano, y CD1d.1 y CD1d.2 en el
ratón.
Las moléculas CD1 son fundamentalmente
expresadas en timocitos inmaduros y células Figura 8-6. Herencia de haplotipos HLA. En la figura, (a) y
presentadoras de antígeno, incluyendo células (b) representan los dos haplotipos maternos, y (c) y (d)
representan lo haplotipos paternos. Al heredar uno de los
dendríticas, macrófagos activados por citoquinas haplotipos de cada padre, pueden obtenerse los haplotipos (ac),
y linfocitos B. Esto es un indicio de la participación (ad), (bc) y (bd). Existe un 25% de posibilidades que dos hijos
de estas moléculas en la presentación antigénica, dean HLA idénticos (ejemplo (ac) y (ac), un 25% de
pero a diferencia de las moléculas convencionales, posibilidades que sean totalmente HLA no idénticos (ejemplo
(ac) y (bd) y 50% de posibilidades que ellos sean HLA semi-
ellas participan en la presentación de lípidos y idénticos.
glicolípidos a linfocitos CD4+, CD8+ y dobles
negativos (DN). Glicolípidos de micobacterias,
como manósidos de fosfoinositol (PIM), 6. COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOM-
lipoarabinomananos (LAM), ácido micólico y PATIBILIDAD Y ENFERMEDAD
hexosil-1-fosfoisoprenoide (hPIP) se presentan en
el contexto de moléculas CD1, grupo I. Durante muchos años se ha sabido que la
Las moléculas CD1d (del grupo II) resistencia o susceptibilidad a contraer diversas
interactúan con las recientemente descritas NKT enfermedades está en muchos casos determinada
cells. Las celulas NKT representan una por factores genéticos y, en los últimos años se han
subpoblación linfocitaria que expresa receptores identificado diversos marcadores genéticos que son
T (TCR) y NK (CD161). Estas células utilizan idénticos o están estrechamente ligados a los genes
una cadena invariante del TCR alfa (Va14Ja281 que confieren resistencia o susceptibilidad a la
en el ratón y Va24JaQ en el humano). A pesar que enfermedad. El análisis de tales marcadores permite
se sabe que estas células participan en la regulacion no sólo identificar a los individuos que están en
de la respuesta inmune, los mecanismos precisos riesgo de contraer o desarrollar una cierta
no están aún bien definidos. enfermedad, sino también estudiar o determinar la
Las moléculas CD1 forman parte, al parecer, patogénesis de la enfermedad.

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Ciertos genes o haplotipos del MHC parecen están directamente involucrados en la patología
estar asociados con la susceptibilidad o de la EC. En el caso de PAN los péptidos son
resistencia a desarrollar algunas enfermedades. derivados del aloantígeno HPA1a que son
Sin embargo, los exactos mecanismos presentados por el alelo HLA-DRB3*0101 y que
responsables de estas asociaciones son variados lleva a la producción de anticuerpos patógenos
y en general nos están claramente definidos. Se en contra de este aloantígeno, resultando en grave
postula que esta asociación puede ser debida a la trombocitopenia en el recién nacido. Finalmente
semejanza entre péptidos propios y péptidos es posible que esta asociación sea con un gen aún
derivados de patógenos como por ejemplo Kleb- no identificado que se encuentra en desequilibrio
siella, lo que llevaría al desarrollo de una de unión con algunos de los genes de HLA como
respuesta autoinmne. Este sería el mecanismo que es el caso de Hemocromatosis Hereditaria (HH)
explicaría la asociación entre HLA-B27 y y HLA-A3. Hoy se sabe que HH ocurre como
ArtritisAnquilosante (AS). Otra posibilidad es resultado de mutaciones en el gen HFE
que la asociación se deba a la presentación localizado telomérico de HLA-A. La asociación
preferencial de ciertos péptidos derivados de con HLA-A3 se debe al desequilibrio de unión
patógenos u otros antígenos como es el caso de con ese alelo en un haplotipo ancestral en el cual
la enfermedad celiaca (EC) y el Púrpura se originó la mutación inicial. En este caso se
aloinmune neonatal (PAN). En el caso de la EC habla de enfermedades ligadas al HLA.
los alelos HLA-DQ2 y DQ5 presentan péptidos En la tabla 8-1 se muestran algunos ejemplos
derivados del gluten a los linfocitos T y éstos de asociaciones entre HLA y enfermedades.

Tabla 8-1. Enfermedades asociadas y ligadas al sistema HLA

Enfermedades asociadas a HLA


Corioretinopatía de Birdshot HLA-A29
Enfermedad de Behçet's HLA- B51
Espondilitis anquilosante HLA-B27
Malaria HLA-B53

Diabetes Mellitus insulino dependiente HLA-DQ8


Artritis reumatoidea Aminoácidos 70-74 codificados por gen DRBI
(QKRAA or QRRAA)

Narcolepsia HLA-DQBI*0602/DQAI*0102
Enfermedad celiaca HLA-DQBI*0201/DQAI*0501
Deficiencia selectiva de IgA HLA-DRBI*0301/-DQBI*02

Desarrollo de anticuerpos HPA-Ia PAN HLA-DRB3*0101


No respuesta de anticuerpos con vacunas HLA-B44-DR7-DQ2 (en Caucásicos)
para VHB HLA-B8-DR-DQ2 (en Caucásicos)
HLA-B564-DR4-DQ4 (en Japoneses)
Remoción de HCV circulante HLA-DRBI*11-DQB1*0301

Enfermedades ligadas a HLA

Hemocromatosis (HLA-A3) gen HFE C282Y y H63D


Deficiencia de 21 OH (HLA-B27) gen 21 OH

PAN, Púrpura aloinmune neonatal; VHB, Virus de Hepatitis B; (), Alelo asociado

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El riesgo relativo a desarrollar una enfermedad se Campbell, R., and Trowsdale, J., “A map of the
calcula a partir de la frecuencia del alelo o human Major Histocompatibility Complex”,
haplotipo en la población enferma y su frecuencia Inmunol. Today. 18: 43-45, 1997.
en la población control sana. Así, en una tabla de
2 x 2, el número de individuos enfermos y sanos Gruen, J., and Weissman, S., “Evolving views of
que presentan o carecen de un determinado alelo the Major Histocompatibility Complex”, Blood 11:
o haplotipo HLA es: 4252-4246, 1997.

Jackson, M.R. and Peterson, P.A., “Assembly and


Alelo HLA intracellular transport of MHC class I molecules”,
+ - Ann. Rev. Cell Biology 9: 207-233, 1993.
A/D
Enfermos A B Riesgo relativo = B/C Kirberg, J., Berns, A. and von Boehmer, H., “Pe-
Sanos C D ripheral T cell survival requires continual ligation
of the T cel receptor to Major Histocompatibility
Así, por ejemplo, la Espondilitis anquilosante complex-encoded molecules”, J. Exp. Med. 8:
presenta un riesgo relativo de 87.4 y Enfermedad 1269-1275, 1997.
Celiaca 10.8.
Matsuda, J. and Kronenberg, M., “Presentation of
self and microbial lipids by CD1 molecules”, Curr.
Opin. Inmunol. 13: 19-25, 2001.
7. NOMENCLATURA Y TIPIFICACIÓN HLA
Schaible, U. and Kaufmann, H., “CD1 and CD1-
Las moléculas MHC clase I y II son muy restricted Tcells in infections with intracellular
polimórficas. En humanos (HLA) actualmente se bacteria”, Trends Microbiol. 9: 419-425, 2000.
les identifica con una nueva nomenclatura que
incluye el locus (Ej. A, de clase I), seguido de un Sette, A. and Sidney, J., “HLA supertypes and
asterisco (*) y 3 ó 4 dígitos en que los dos primeros supermotifs: a funcional perspective on HLA poly-
corresponden a la especificidad serológica y los morphism”, Curr. Opin. Inmunol. 10: 478-482,
dos segundos al número de la variante. Ejemplo: 1998.
HLA-A*0203 .
La tipificación HLA, requerida entre otras Steven, G.E., Marsh., Julia G. Bodmer ., Ekkehard
situaciones, para trasplantes y determinación de D. Albert et al., “Nomenclature for factors of the
riesgo de enfermedad, se estudia a través de HLA system”, European journal of immunogenet-
pruebas serológicas (microlinfocitotoxicidad), ics. 28:377-424. 2000.
métodos celulares y de biología molecular (ver
capítulo 42).

LECTURAS SUGERIDAS

Bahram, S., and Spies, T., “The MIC gene fam-


ily”, Res. Immunol. 147:328-334, 1996.

Barber, L.D., and Parham, P., “Peptide binding to


major histocompatibility complex molecules”,
Ann. Rev. Cell Biology 9:163-206, 1993.

Braud, V., Alland, D., “And Mc Michael A. Func-


tions of non classical MHC and non-MHC-
encodedclas I molecules”, Curr. Opin. Inmunol.
11: 100-108, 1999.

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Sin título-2 178 5/26/06, 10:25 AM


Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 9

PROCESAMIENTO, PRESENTACIÓN Y
RECONOCIMIENTO ANTIGÉNICO

Ulises Vergara C., Claudio Zúñiga M., Iván Palomo G. y Cristina Navarrete

1. Introducción
2. Linfocitos T y reconocimiento de
antígenos
2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y
reconocimiento peptídico
2.2. Linfocitos T γδ
2.3. Células NK
2.4. Células presentadoras de antígenos
3. Tráfico celular y procesamiento
antigénico
4. Antígenos endógenos y exógenos
5. Fragmentos peptídicos y moléculas
MHC
6. Procesamiento y presentación de
antígenos endógenos
7. Procesamiento y presentación de
antígenos exógenos
8. Presentación alternativa de péptidos

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RESUMEN

Los linfocitos T reconocen fundamentalmente antígenos proteicos, en forma de fragmentos


peptídicos presentados en asociación con una molécula del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC) en la membrana de una célula presentadora de antígenos (CPA). Así
la presentación antigénica en el contexto de una molécula MHC y el reconocimiento del comple-
jo molécula MHC-péptido por el receptor T, proporciona al sistema inmune de un mecanismo de
control o detección de proteínas anormales en células transformadas o tumorales y de proteínas
extrañas en células infectadas por virus, bacterias o parásitos.
Las evidencias experimentales sugieren que el procesamiento antigénico y la unión de frag-
mentos peptídicos a moléculas MHC parece depender tanto del origen del antígeno, como del
tráfico antigénico a través de distintos compartimientos celulares. Así, los antígenos intracelulares
o endógenos son procesados o degradados por la maquinaria multicatalítica citoplasmática
(Proteasoma) y los fragmentos peptídicos allí generados son luego translocados al retículo
endoplásmico, con la participación de un transportador ATP-dependiente (TAP). En el retículo,
los péptidos endógenos serán unidos a una molécula MHC clase I y sólo el complejo correcta-
mente ensamblado será transportado y expresado en la superficie celular, para su presentación a
linfocitos T CD8+. Los antígenos extracelulares serán en cambio, internalizados por la célula
presentadora y procesados en un compartimiento acídico celular (endolisosoma o fagolisosoma).
Los fragmentos peptídicos aquí generados son luego asociados a una molécula MHC clase II y
sólo el complejo correctamente ensamblado, se expresará en la membrana celular para la presen-
tación del fragmento peptídico a linfocitos T CD4+.

1. INTRODUCCIÓN epítopos conformacionales o discontinuos en


antígenos de naturaleza química tan variada como
El sistema inmune es parte de los mecanis- proteínas, hidratos de carbono, lípidos y ácidos
mos biológicos destinados a mantener la integri- nucleicos. Los linfocitos T en cambio, reconocen
dad estructural y funcional de los individuos y está fundamentalmente determinantes continuos o de
genéticamente programado para defendernos de secuencia en antígenos proteicos y, sólo en forma
la agresión de agentes infecciosos, células y mo- de pequeños fragmentos peptídicos presentados en
léculas extrañas. asociación con una molécula del Sistema o Com-
El sistema inmune está constituído por célu- plejo Principal de Histocompatibilidad, en la su-
las con capacidad para reconocer y neutralizar o perficie de una CPA. Dada la elevada homología
eliminar moléculas extrañas (linfocitos B, tanto estructural como funcional, entre el recep-
linfocitos T y células NK) y por células acceso- tor antigénico de los linfocitos B (BCR) y el re-
rias que cumplen una importante función en el pro- ceptor de los linfocitos T (TCR), no existía hasta
cesamiento y presentación de antígenos ahora una explicación satisfactoria que diera cuen-
(monocitos, macrófagos, células dendríticas, cé- ta de esta capacidad limitada o restringida de los
lulas interdigitantes, etc.). linfocitos T para reconocer fundamentalmente
epítopos o determinantes antigénicos de naturaleza
proteica. Sin embargo, todo parece indicar que esta
2. LINFOCITOS T Y RECONOCIMIENTO restricción estaba determinada por las moléculas
ANTIGÉNICO MHC, que sólo son capaces de unir o presentar frag-
mentos peptídicos. Pero con el reconocimiento de
Los linfocitos B pueden reconocer epítopos las moléculas CD1, que son capaces de presentar
estructurales, continuos o de secuencia y/o antígenos lipídicos o glicolipídicos a los linfocitos

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T CD4+, CD8+ y DN, ésta visión limitada ha cam- tesis y secreción de interleuquina 2 (IL-2),
biado y al parecer el receptor T es capaz de recono- interleuquina 12 (IL-12), interferon gamma (IFNγ)
cer antígenos de diversa naturaleza química, aun- y factor de necrosis tumoral ß (TNFβ). Los
que presentadas por moléculas diferentes a las clá- linfocitos T helper 2 (Th2) en cambio, regulan la
sicas MHC. De todas maneras, además de estos respuesta inmune humoral mediada por anticuerpos
mecanismos complementarios, la presentación y se caracterizan por la síntesis y secreción de
antigénica en el contexto de moléculas del MHC y interleuquina 4 (IL-4), interleuquina 5 (IL-5),
la detección o reconocimiento del complejo molé- interleuquina 6 (IL-6) e interleuquina 10 (IL-10).
cula MHC-péptido por el receptor de un linfocito El reconocimiento específico y restringido
T, proporciona al sistema inmune de un mecanis- por las moléculas del MHC está mediado funda-
mo de control o detección de la expresión de pro- mentalmente por linfocitos T que poseen el recep-
teínas anormales en células transformadas o tor αβ (TCRαβ).
tumorales y de proteínas extrañas en células infec-
tadas por virus, bacterias o parásitos. 2.2 Linfocitos T γδ

2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y recono- Los linfocitos T γδ se encuentran predominante-


cimiento peptídico mente en tejidos epiteliales, tienen una diversidad
restringida y forman parte de las respuestas inna-
Los linfocitos T (TCRαβ) tanto como tas a patógenos intracelulares y a tumores. Estos
citotóxicos (LTc) y linfocitos T supresores (LTs) linfocitos no requien de las moléculas clásicas
reconocen fragmentos peptídicos asociados o pre- presentadoras de antígenos ni tampoco utilizan las
sentados por moléculas MHC clase I, mientras los vías clásicas de reconocimiento antigénico utili-
linfocitos T "helper" (LTh), reconocen fragmentos zado por los linfocitos T αβ. Sin embargo, esta
peptídicos asociados a moléculas MHC clase II. subpoblación de linfocitos T si reconocen los
Esta especificidad en el reconocimiento de péptidos antígenos no clásicos de clase I, MICA y MICB
asociados a una clase particular de molécula MHC que se expresan principalmente en células
está determinado por las moléculas CD4 y CD8, tumorales de origen epitelial que han sido someti-
que actúan como co-receptor linfocitario para el das a stress. El reconocimiento específico de es-
reconocimiento de la molécula MHC. Así, la mo- tas moléculas está mediado por el receptor NK
lécula CD8 sólo se une con la molécula de clase I, (NKG2D) expresado en estos linfocitos. Los
reconociendo una región monomórfica situada en linfocitos T γδ también reconocen antígenos no
el dominio α-3 de esta molécula MHC. La molé- peptídicos (lípidos) tales como isopentenyl
cula CD4 en cambio, sólo se une con la molécula pirofosfatasa (IPP) derivados de M. tuberculosis.
MHC clase II, reconociendo una región El reconocimiento de estos antígenos es media-
monomórfica situada en el dominio β-2. do por la presencia de CD1 y en la mayoría de
El reconocimiento antigénico asociado a mo- los casos requiere de la capacitación y transpor-
léculas MHC clase I resulta en la destrucción te de antígeno a un compartimiento intracelular
citotóxica de la célula presentadora o célula blan- acídico en la CPA similar al procesamiento de
co, mientras el reconocimiento de antígenos en el péptidos restringido por las moléculas de MHC
contexto de moléculas MHC clase II conduce a la clase II (ver punto 7). Sin embargo, el sistema de
activación y proliferación de distintas transporte TAP1/TAP2 o las moléculas DM no
subpoblaciones de células T "helper", con síntesis son requeridas ya sea para la expresión de CD1
y secreción de una combinación particular de o para la función presentadora de estas molécu-
citoquinas que promueven una amplificación de las (capítulo 8).
la respuesta inmune humoral o celular, al activar
linfocitos B y/o macrófagos, y diversas células 2.3 Células NK
inflamatorias.
La respuesta inmune humoral y celular son re- Las células NK están directamente involucradas en
guladas por subpoblaciones distintas de células T la respuesta inmune en contra de virus, parásitos,
"helper". Así, los linfocitos T helper 1 (Th1) parti- bacterias intracelulares y tumores. También contri-
cipan en la regulación de la respuesta inmune celu- buyen directamente a la eliminación de células
lar (reacciones inflamatorias, de hipersensibilidad alogénicas y, mediante la secreción de citoquinas,
retardada y citotóxicas) y se caracterizan por la sín- participan en la regulación de otras funciones

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inmunológicas, como la producción de anticuerpos reconocer péptidos antigénicos, está en gran parte
y la hematopoyesis. Las células NK presentan en su determinada por las características de las células
membrana una gran variedad de receptores. Los re- presentadoras de antígeno: monocitos,
ceptores como CD2, CD69 y CD16 funcionan en macrófagos, células dendríticas, células
forma independiente de la expresión de moléculas interdigitantes, linfocitos B. etc. De éstas, las
de MHC, mientras que otros si dependen de la ex- células dendríticas (CD), son sin duda las más
presión de las moléculas clásicas y no clásicas de importantes debido a su capacidad para activar
MHC clase I. En este último grupo se encuentran linfocitos T "naive". Las CD forman parte de un
los receptores del tipo C lectin-like (NKC) por ejem- grupo heterogéneo de células que se encuentran
plo CD94/NKG2D y los "Ig like receptors" (LRC), en los órganos linfoides secundarios y en la
por ejemplo KIRs (ver capítulo 10). Los receptores periferia, en distintos estadios de diferenciación y
de la familia NKC están localizados en el cromosoma maduración. En los tejidos periféricos, las CD
12 mientras que los LRC en el cromosoma 19. Tanto inmaduras tienen un grado moderado de síntesis
los NKC como los LRC incluyen receptores de inhi- y expresión de moléculas MHC de clase II y una
bición y activación de las células NK, que tienen gran capacidad fagocítica. Luego de su
como ligandos moléculas MHC de clase I clásicas y reclutamiento y activación, ya sea por citoquinas
no clásicas (tabla 1). Estos receptores son altamente u otros estímulos capaces de señalar la presencia
polimórficos y su variación está dada no sólo por de patógenos o de daño tisular, se produce un
mutaciones en los distintos genes, sino también por aumento pasajero en la síntesis de moléculas MHC
su expresión diferencial en distintos individuos, vale de clase II, seguido de una disminución de la
decir no todos los individuos expresan el mismo capacidad fagocítica, luego de la captura o
número de receptores. incorporación de antígenos. Estas CD inmaduras,
migran luego a los órganos linfoides secundarios,
2.4 Células presentadoras de antígeno donde completan su proceso de maduración para
el adecuado procesamiento y presentación de
La posibilidad que linfocitos T puedan antígenos a linfocitos T.
Utilizando marcadores de membrana de la
serie mieloide (CD11c y CD33) se ha podido
identificar, en sangre periférica, 2 subpoblaciones
Tabla 9-1. Interacción entre moléculas MHC
de células dendríticas de origen mieloide y una
clase I y los receptores activadores e
subpoblación CD11-, de origen linfoide o
inhibidores de las células NK.
plasmocitoide. Las CD de origen mieloide son más
propensas a secretar IL-12 (una citoquina
inductora de respuesta Th1), mientras que las CD
Ligandos Receptores activadores
de origen linfoide secretan IL-10, que promueve
HLA-E CD94/NKG2C una respuesta de tipo TH2. La subpoblación
(DAP 12) mieloide tiene la capacidad de inducir respuestas
MIC NKG2D proliferativas contra diversos antígenos y
(DAP 10) aloantígenos mientras que la subpoblación linfoide
tiene una función limitada como célula presen-
HLA-C KIR2DS tadora de antígeno, pero parece tambien involu-
(DAP 12) crada en la inducción de tolerancia.
HLA-B KIR3DS La presentación de fragmentos antigénicos
(DAP 12) asociados a moléculas MHC ha llevado a los
inmunólogos a preguntarse dónde y cómo se
HLA-G KIR2DL4 realiza el procesamiento antigénico en la célula
Ligandos Receptores inhibidores presentadora y cómo y dónde se realiza la
asociación de los fragmentos peptídicos a las
HLA-E CD94/ NKG2A/
moléculas MHC clase I o clase II. ¿Existe alguna
HLA-C KIR2DL relación entre el procesamiento y presentación de
HLA-B KIR3DL antígenos y la síntesis, transporte y expresión de
las moléculas MHC en la membrana de la célula
HLA ILT2/4 presentadora?.

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Sin título-2 183 5/26/06, 10:25 AM


3. TRÁFICO CELULAR Y PROCESA- la CPA o de la célula blanco de la respuesta
MIENTO ANTIGÉNICO inmune. Estas proteínas son generalmente
sintetizadas en ribosomas libres en el citoplasma
La evidencia experimental hasta ahora o pueden corresponder a proteínas derivadas de
acumulada sugiere que el procesamiento antigénico virus, bacterias o parásitos intracelulares; pero,
y la unión de péptidos a moléculas MHC parece para todas ellas, sus fragmentos peptídicos se
depender tanto del origen del antígeno como del generan mediante proteólisis citoplasmática. Los
tráfico antigénico a través de distintos fragmentos antigénicos deben ser luego
compartimientos celulares. Así, los antígenos translocados o transportados al retículo
intracelulares y extracelulares constituyen desafíos endoplásmico, donde se encuentran las moléculas
distintos para el sistema inmune puesto que los MHC clase I sintetizadas en ribosomas asociados
fragmentos peptídicos derivados de antígenos al retículo.
intracelulares o endógenos son normalmente unidos Los antígenos proteicos exógenos corres-
a moléculas MHC clase I y presentados a linfocitos ponden a proteínas extracelulares internalizadas
T CD8+, mientras los antígenos extracelulares o mediante la unión a un receptor específico de la
exógenos se unen a moléculas MHC clase II y son superficie celular o en fase fluída mediante
normalmente presentados a linfocitos T CD4+. La vesículas membranosas en procesos de fagoci-
asociación de fragmentos peptídicos a moléculas tosis, pinocitosis o endocitosis. Las proteínas
MHC clase I o clase II es entonces función de la así internalizadas serán procesadas en un compar-
ruta de introducción del antígeno a la célula y de su timiento acídico celular (fagolisosoma o
susceptibilidad al procesamiento o degradación en endolisosoma) y los fragmentos peptídicos allí
distintos compartimientos celulares. generados serán luego asociados a una molécula
El aislamiento e identificación de líneas MHC clase II para su transporte y expresión en
celulares con defectos en el procesamiento y la superficie celular.
presentación de antígenos, ha constituído un avance
significativo en el conocimiento de la biología de
la respuesta celular T y del ensamblaje y transporte 5. FRAGMENTOS PEPTÍDICOS Y MOLÉ-
de las moléculas MHC. Así, la línea celular RMA- CULAS MHC
S derivada de células mutagenizadas de linfoma H-
2b de ratón transformadas por virus de Rauscher y La evidencia experimental indica que las
la línea linfoblastoide humana LBL 721.174, moléculas MHC clase I unen preferentemente,
expresan bajos niveles de moléculas MHC en la péptidos de 8 a 9 aminoácidos generados en el
superficie celular, aún cuando sintetizan niveles citoplasma celular. Las moléculas MHC clase II en
normales de la cadena alfa de la molécula clase I y cambio, unen preferentemente péptidos de 13 a 15
de beta-2 microglobulina (β2m). La incubación de aminoácidos, generados en un compartimiento
estas líneas celulares con péptidos virales capaces acídico celular (compartimiento endocítico MIIC).
de unirse específicamente a las moléculas MHC Esta diferencia en la longitud de los fragmentos
clase I, conduce a la expresión del complejo MHC- peptídicos que pueden asociarse a moléculas clase
péptido en la superficie celular y a su destrucción I o clase II parece depender de la estructura y
citotóxica si se les cocultiva con linfocitos T CD8+ conformación del bolsillo de unión de la molécula
citotóxicos específicos para ese complejo MHC- MHC: el bolsillo es cerrado en las moléculas de
péptido. Estos fenómenos no ocurren si las líneas clase I y abierto en las moléculas clase II. De esta
celulares se infectan con el virus original, sugiriendo manera las moléculas clase II puede unir péptidos
un defecto en el procesamiento y presentación de de mayor longitud que las moléculas clase I.
antígenos y una relación con el ensamblaje de las Cuando se purifican moléculas MHC por
moléculas MHC. inmunoprecipitación de extractos celulares con
anticuerpos monoclonales específicos para
moléculas clase I o clase II, se encuentra que ellas
4. ANTÍGENOS ENDÓGENOS Y EXÓGE- coprecipitan con los fragmentos peptídicos alojados
NOS en su bolsillo de unión. La secuenciación de los
fragmentos peptídicos, eluídos o aislados del
Antígenos proteicos endógenos son todas complejo MHC-péptido por denaturación ácida,
aquellas proteínas residentes en el citoplasma de demuestra la existencia de 2 a 3 residuos

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Sin título-2 184 5/26/06, 10:25 AM


conservados de anclaje a la molécula MHC. a esta estructura se le denomina inmunoproteasoma.
En los péptidos de 8 a 9 aminoácidos que se LMP-2 y LMP-7 ("low molecular mass protein")
unen a las moléculas MHC clase I, los residuos de codifican en la región de los genes de clase II del
anclaje se encuentran normalmente en los extremos Complejo Principal de Histocompatibilidad.
amino y carboxilo del fragmento peptídico y sólo
pueden ser ocupados por un aminoácido específico
o por residuos aminoacídicos que contienen cadenas
laterales similares o estrechamente relacionadas. El
extremo carboxiterminal es con frecuencia un
aminoácido con cadena lateral alifática (como
isoleucina, leucina o valina) o cargada positiva o
negativamente.
Péptidos distintos pueden entonces asociarse a
la misma molécula MHC, siempre y cuando los
residuos de anclaje tengan la naturaleza y la posición
que corresponde para una adecuada y estable
asociación a esa molécula. Sin embargo, cada
complejo MHC-péptido será reconocido por un
linfocito T distinto y específico para ese complejo.

Figura 9-1. Procesamiento de antígenos endógenos.


6. PROCESAMIENTO DE ANTÍGENOS Antígenos endógenos son degradados por el Proteasoma
ENDÓGENOS citoplasmático, generando fragmentos peptídicos de 8 a 9
aminoácidos que serán translocados al retículo endoplásmico
por el transportador TAP. En el retículo endoplasmático la
Los antecedentes hasta ahora disponibles molécula MHC clase I será ensamblada a partir de la cadena α
sugieren que los antígenos endógenos son de clase I, la β2m y un fragmento peptídico específico. En el
degradados o procesados en el citoplasma celular, ensamblaje participan chaperoninas como calnexina y proteínas
de shock térmico (hsp 60 y hsp 70).
generando fragmentos peptídicos de 8 a 9
aminoácidos por acción de un complejo
multicatalítico de 700 kDa, denominado
Proteasoma, Macropaína o MCP ("multicatalytic Al parecer los cambios anteriores no tienen
proteinase"), que es responsable de la degradación consecuencias drásticas en la generación de
de la mayoría de las proteínas en el citoplasma y el péptidos, pero si se inducen algunas diferencias
núcleo celular (figura 9-1). Esta estructura cilíndrica cualitativas, preferentemente en la región
está formada por 4 anillos heptaméricos de carboxiterminal de los péptidos generados. Las
subunidades alfa y beta ( alfa7beta7beta7alfa7 ), a proteínas LMP tienen alguna homología con serín-
este cuerpo central se le puede adicionar una proteasas, y aún cuando no existe evidencia directa
subunidad reguladora denominada 19S, que y convincente que muestre su actividad
corresponde a un complejo ATPasa, generando el enzimática, se supone que ellas se incorporan al
proteasoma 26S, responsable del procesamiento de proteasoma alterando sus propiedades catalíticas
la mayoria de las proteínas citoplasmáticas, unidas de endopeptidasa, de manera tal de aumentar la
a una proteina señal llamada ubiquitina. Este generación de algunos fragmentos peptídicos.
proteosoma genera péptidos con un rango entre 5– Estudios realizados utilizando líneas celulares
30 aminoácidos, y alrededor de un 15% de ellos mutantes incapaces de generar fragmentos
cae dentro del rango de 9-10 aminoácidos, que peptídicos, demuestran que la presentación
poseen la longitud apropiada para unirse a las antigénica puede restaurarse aún en ausencia de
moléculas MHC clase I. Bajo la influencia del las subunidades codificadas por los genes LMP
interferón gamma, tres subunidades beta, del sistema principal de histocompatibilidad,
denominadas X, Y y Z en el “house-keeping” indicando que no existe un requerimiento absoluto
proteasoma son reemplazadas por las subunidades de estas proteínas en la generación de péptidos.
homólogas LMP-7, LMP-2 y MECL-1, Sin embargo, esto no descarta la posibilidad que
respectivamente y también se induce la unión de las moléculas LMP incrementen la eficacia del
otra subunidad reguladora denominada 11S o PA28, complejo enzimático, generando más frecuen-

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temente fragmentos peptídicos escindidos después
de aminoácidos básicos, ácidos o hidrofóbicos.
Estudios realizados con inhibidores
específicos del proteasoma han revelado que frente
a su inactivación se inducen o se hacen evidentes
mecanismos proteolíticos compensatorios de la
pérdida de actividad del proteasoma, que pueden
corresponder a complejos proteicos semejantes o
a sistemas de endo y exopeptidasas.
El sitio preciso donde los péptidos generados
en el citoplasma se unen a las moléculas MHC es
el retículo endoplásmico. El tratamiento de células
con Brefeldina A (metabolito de hongos que
bloquea el transporte de proteínas desde el retículo
endoplásmico al Golgi) o con la proteína E19
derivada de citomegalovirus (que retiene
moléculas MHC clase I en el retículo), bloquean
o interfieren la presentación antigénica.
Los fragmentos peptídicos generados por el
complejo multienzimático deben ser translocados
desde el citoplasma al retículo donde se unirán a Figura 9-2. Tráfico antigénico y presentación de péptidos
las moléculas MHC clase I, para su transporte a la endógenos. En el contexto de MHC de clase I. En el retículo
superficie celular a través de la vía exocítica (figura endoplásmico la molécula MHC clase II correctamente
9-2). La evidencia experimental sugiere la ensamblada a partir de la cadena α, β2m y un fragmento
peptídico, es transportado al Golgi y desde aquí presentado a
participación de transportadores dependientes de un LT CD8+, en el contexto de una molécula MHC clase I.
ATP y codificados por los genes TAP-1 y TAP-2 LMP, “Low molecular mass protein”; TAP, “Transporter asso-
localizados en las proximidades de los genes de ciated with Antigen Processing”.
clase II del MHC. Las proteínas TAP-1 y TAP-2
se asociarían formando un heterodímero
transportador en la membrana del retículo
endoplásmico. asociados al retículo endoplásmico y pueden por
La transfección del gen TAP-2 en la línea lo tanto ensamblarse en el lumen del retículo. Sin
celular RMA-S y de los genes TAP-1 y TAP-2 en embargo, la evidencia experimental sugiere que
la línea LBL 721.174 restablece la expresión de la unión de un fragmento peptídico es un pre-
las moléculas MHC clase I y la adecuada requisito necesario para la conformación y
presentación de antígenos. ensamblaje estable de la molécula clase I y, en la
La molécula MHC clase I está constituída por mayoría de los casos, sólo el complejo trimolecular
una glicoproteína integral de membrana (cadena estable (péptido-cadena α-β2m) abandona el
pesada α de 45 kDa) que está asociada no retículo endoplásmico para completar su
covalentemente con una subunidad soluble de 12 glicosilación en el Golgi y luego viajar a la
kDa, la β-2 microglobulina, (β2m) que no está superficie celular por la vía exocítica. Las
codificada por genes MHC y se encuentra moléculas MHC clase I, libres o mal ensambladas
normalmente libre en el plasma y fluídos tisulares serían retenidas por proteínas residentes en el
(ver capítulo 8). La cadena pesada alfa contiene 3 retículo endoplásmico (como la proteína p88 o
dominios extracelulares, dos de los cuales (α-1 y calnexina), previniendo su degradación y
α-2) forman la región o bolsillo de unión para el manteniéndolas en una conformación compatible
fragmento peptídico. El tercer dominio (α-3), con el ensamblaje adecuado. La calnexina parece
contiene una región para el reconocimiento o funcionar como molécula chaperona o
interacción con el co-receptor CD8 del linfocito T chaperonina, para el plegamiento o conformación
citotóxico, y una región para la unión no covalente estable de diversas proteínas, incluyendo los TCR
con β2m. y las inmunoglobulinas. Si células de Droso-
Tanto la cadena α como la β2m de la phila melanogaster (que carecen de moléculas
molécula MHC clase I se sintetizan en ribosomas MHC, β2m y TAP), se transfectan con los genes

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Sin título-2 186 5/26/06, 10:25 AM


para moléculas MHC clase I y de β2m, se endoplásmico. Al parecer más que el tamaño del
encuentra que estas células son capaces de expresar péptido lo que importa para un transporte
en su superficie, el complejo MHC-β2m o adecuado desde el citosol, es la naturaleza del
moléculas MHC libres. Si además de los genes extremo carboxiterminal del fragmento peptídico.
MHC y β2m, las células se transfectan también Así en humanos, el heterodímero TAP es
con el gen para calnexina, las moléculas MHC permisivo para el transporte de péptidos con
son retenidas en el retículo mediante asociación cualquier extremo carboxi-terminal, excepto si este
con calnexina y por lo tanto, no se expresan en la contiene prolina y probablemente glicina,
superficie celular. existiendo moléculas MHC que unen
Las chaperoninas cumplen un rol fundamen- preferentemente péptidos con extremos polares y
tal en la estabilidad de diversas proteínas, otras que unen preferentemente péptidos con
impidiendo su agregación y favoreciendo un extremos carboxi-terminal hidrofóbicos. En
adecuado plegamiento, ensamblaje y retención en ratones en cambio, TAP parece restringido a
diversos compartimientos celulares. La interacción fragmentos peptídicos con extremo carboxi-termi-
de las moléculas MHC con chaperoninas nal hidrofóbico.
residentes en el retículo endoplásmico asegura que En resumen, una molécula MHC clase I
distintas moléculas MHC unan fragmentos madura y correctamente ensamblada consiste de
péptidicos en el compartimiento celular adecuado. 3 subunidades: la cadena α MHC, la β2m y el
Por otro lado, chaperoninas citosólicas de la fa- fragmento peptídico alojado en el bolsillo de unión
milia de las proteínas de shock térmico de 60 kDa formado por los dominios α-1 y α-2 de la molécula
(hsp 60) y de 70 kDa (hsp 70), el heterodímero MHC. La unión del péptido adecuado induce
transportador TAP, calnexina y tapasina aseguran pequeños cambios conformacionales en la
el transporte y asociación de los péptidos molécula MHC, lo que permite la disociación de
adecuados a las moléculas MHC de clase I (figura las proteínas chaperonas. Este complejo
9-2). Tapasina es una proteína transmembrana de trimolecular es fundamental no sólo para el
48 kDa, con una señal de retención en el retículo correcto ensamblaje de la molécula MHC de clase
endoplásmico. Esta chaperona se une a la molécula I, sino también para su glicosilación en el Golgi,
MHC clase I y sirve de nexo para asociarse al transporte efectivo por la vía exocítica y expresión
complejo TAP. Habitualmente 4 complejos MHC en la superficie celular. Así células que carecen
I-Tapasina se unen a un transportador TAP, de de β2m o del transportador TAP, acumulan en el
manera de concentrar el número de moléculas retículo cadenas α MHC o complejos MHC-β2m,
MHC vacías en el lugar de entrada de los péptidos. respectivamente.
Esta molécula, aparte de actuar como chaperona
en el ensamblaje y retención de las MHC I,
probablemente también participa como editora de 7. PROCESAMIENTO DE ANTÍGENOS
péptidos, con una función semejante a lo que EXÓGENOS
realiza la proteína DM en relación a las moléculas
MHC clase II. Se supone además la existencia de Antígenos proteicos exógenos internalizados
un transportador, distinto de TAP, pero dependiente mediante interacción ligando-receptor o en fase fluída
también de ATP, encargado del reflujo retrógado mediante vesículas membranosas (en procesos de
de fragmentos peptídicos desde el retículo al fagocitosis, pinocitosis o endocitosis), serán
citosol, para mantener un bajo nivel de péptidos procesados en un compartimiento acídico celular
en el retículo endoplásmico y favorecer la unión a (fagolisosoma endolisosoma) y los fragmentos
las moléculas MHC, de los fragmentos peptídicos peptídicos allí generados, serán luego asociados a
que presentan mayor afinidad. La glicosilación de una molécula MHC clase II para su transporte y
fragmentos peptídicos en el retículo o su presentación en la superficie celular (figura 9-3).
asociación con una molécula MHC clase I, evitaría Las moléculas MHC clase II son heterodímeros
el reflujo retrógado de péptidos al citosol. glicoproteicos constituidos por una cadena alfa de
Ahora bien, aún cuando el heterodímero TAP 33 kDa y una cadena beta de 28 kDa, sintetizadas
transporta preferentemente fragmentos peptídicos en ribosomas asociados al retículo endoplásmico
de 8 a 10 aminoácidos, ello no impide que péptidos y ensambladas en el lumen del mismo (ver capítulo
de hasta 30 aminoácidos puedan ser eficientemente 8). Al igual que las moléculas de clase I, el
transportados desde el citosol al retículo ensamblaje de las moléculas MHC clase II requiere

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ocurre completamente en el retículo endoplásmico,
mientras el ensamblaje de las moléculas clase II
se realiza en 2 etapas: (a) la primera ocurre en el
retículo endoplásmico e implica la participación
de calnexina para la asociación de las cadenas
MHC alfa y beta entre si y con la invariante Ii. (b)
La segunda etapa del ensamblaje de la molécula
de clase II ocurre en el compartimiento acídico
celular e implica la participación de un
heterodímero proteico denominado molécula DM
(molécula asociada a la región D, de clase II en el
HLA humano), que favorece tanto la digestión
parcial y remoción de la cadena invariante Ii del
bolsillo de la molécula de clase II, como la
asociación de un fragmento peptídico exógeno a
esta molécula MHC.
La proteína Calnexina retendrá en el retículo
endoplásmico las cadena α y β de las moléculas
clase II, si no se logra un correcto ensamblaje del
complejo trimolecular (α-β-Ii). El bajo pH del
compartimiento endocítico es fundamental para el
procesamiento antigénico y el ensamblaje final de
Figura 9-3. Procesamiento de antígenos exógenos y las moléculas clase II. Así, drogas lisosomo-
presentación en el contexto de molécula MHC clase II. En
trópicas (primaquina, cloroquina, monosina,
el retículo endoplásmico las moléculas MHC de clase II son
ensambladas a partir de las cadenas a y b, y la cadena invariante cloruro de amonio) que elevan el pH del
Ii. La asociación de la cadena Ii bloquea el bolsillo peptídico compartimiento endocítico, inhibirán la
de la molécula de clase II, además asegura su transporte a través presentación antigénica en el contexto de
de la vía endocítica al compartimiento acídico celular. Aquí se
moléculas MHC clase II.
realiza el procesamiento de los antígenos exógenos y se realiza
además la digestión parcial de la cadena Ii, dejando el péptido La cadena invariante Ii es una glicoproteína
CLIP alojado en el bolsillo antes citado. La molécula DM que de membrana, no polimórfica, codificada en el
es transportada por la vía endocítica en forma independiente, cromosoma 5 humano y en el cromosoma 18
participa en el desplazamiento de CLIP y en la unión de un
murino. Presenta 4 formas de distinto peso molecu-
fragmento peptídico exógeno al bolsillo MHC de clase II. El
complejo MHC clase II péptico es luego transportado a la lar (31, 33, 41 y 43 kDa) generadas por una
superficie celular para su presentación a un LT CD4+. combinación de procesamiento alternativo del
transcrito primario y el uso de distintos sitios de
iniciación de la síntesis proteica. Todas estas formas
de la cadena invariante Ii poseen un extremo o
la interacción con diversas chaperoninas, entre las dominio carboxiterminal, de 20 aminoácidos, que
que se destaca la denominada cadena invariante se une y bloquea el bolsillo peptídico de clase II
gamma o cadena invariante Ii. La proteína impidiendo así la asociación de péptidos endógenos.
Calnexina y chaperoninas de las familias de Además, en la cola citoplasmática aminoterminal
proteína de shock térmico hsp 70 y hsp 90 presentan una secuencia señal de 30 aminoácidos
favorecen el ensamblaje de las cadena α y β de la que dirige el transporte a la vía endocítica, del
molécula clase II, pero el rol más importante en complejo MHC clase II-Ii, correctamente
este proceso lo desempeña la cadena invariante Ii. ensamblado en el retículo endoplásmico. En
La cadena invariante Ii no sólo favorece el ausencia de la cadena invariante Ii, las moléculas
ensamblaje del heterodímero α-β, sino que MHC clase II pueden eventualmente unir péptidos
también impide que péptidos endógenos puedan endógenos en el retículo endoplásmico, pero su
unirse al bolsillo de las moléculas clase II y desvía transporte y expresión en la superficie celular se
o dirige el transporte del complejo trimolecular hará a través de la vía exocítica, como ocurre con
(alfa-beta-Ii) hacia la vía endocítica celular donde la presentación antigénica en el contexto de
están siendo generados los péptidos exógenos. moléculas MHC clase I.
El ensamblaje de las moléculas MHC clase I La cadena invariante, una vez sintetizada en

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el retículo endoplásmico, forma homotrímeros que II associated Ii peptide”) del bolsillo peptídico de
se ensamblarán con 3 heterodímeros α-β de clase las moléculas de clase II y (b) estabilizando los
II. De esta manera, el ensamblaje adecuado de la heterodímeros MHC de clase II vacíos o sin
molécula de clase II en el retículo endoplásmico, péptido. Esta estabilización previene la agregación
implica en realidad la formación de un nonámero y subsecuente degradación que sufren estos
proteico contituído por 3 trímeros (α-β-Ii). El heterodímeros MHC, en ausencia del fragmento
nonámero es entonces dirigido al complejo de Golgi peptídico. De este modo las moléculas DM juegan
y desde aquí el extremo amino terminal de la cadena un rol crucial en la presentación de antígenos
invariante Ii desviará o dirigirá el transporte del exógenos.
complejo al compartimiento acídico o endocítico
celular, denominado MIIC (MHC class II Compart-
ment). El bajo pH y la acción de cisteín proteasas 8. PRESENTACIÓN ALTERNATIVA DE
(principalmente las catepsinas S y L del PÉPTIDOS
compartimiento endocítico), no sólo favorecen la
degradación o procesamiento de los antígenos Péptidos endógenos pueden también
exógenos, sino también la digestión parcial del presentarse en el contexto de moléculas MHC
extremo carboxilo de la cadena invariante Ii. Se clase II. Esto puede explicarse por: (a) péptidos
genera así un fragmento peptídico, que incluye los endógenos compiten con la cadena invariante Ii
residuos aminoacídicos 81 al 104 de Ii, denominado por el bolsillo de unión del heterodímero de clase
CLIP ("Class II-associated invariant-chain pep- I, (b) péptidos endógenos, generados en el
tide"), que permanecerá unido al bolsillo del citoplasma, pueden translocarse al compartimiento
heterodímero de clase II. El heterodímero proteico acídico celular, para su asociación con moléculas
DM, anteriormente mencionado, estaría involu- de clase II, (c) proteínas endógenas que han sido
crado en la liberación del péptido CLIP del bolsillo secretadas o que se expresan en la membrana
de las moléculas MHC de clase II y en la edición celular, pueden ser internalizadas y luego
de los fragmentos peptídicos que se unirán a la procesadas en el compartimiento acídico celular
molélula MHC. En ausencia del heterodímero DM, y (d) autofagia de componentes celulares a partir
moléculas de clase II conteniendo el péptido CLIP del retículo endoplásmico y su transporte, por vía
se expresarán en la superficie celular. endocítica, al compartimiento acídico celular.
La molécula DM humana (denominada De manera alternativa, péptidos exógenos
molécula M en el ratón) está codificada por genes pueden presentarse asociados a moléculas clase I.
de la región de clase II del Complejo Principal de Este fenómeno ocurre cuando fragmentos péptidicos
Histocompatibilidad (genes HLA-DMA y HLA- o proteínas exógenas escapan del compartimiento
DMB en humanos y, genes Ma, Mb1 y Mb2 en endocítico DIC y luego de su degradación por la
ratón). Su síntesis se realiza en ribosomas maquinaria citosólica de procesamiento antigénico,
asociados al retículo endoplásmico, pero su son translocados al retículo endoplásmico para su
ensamblaje y transporte final al compartimiento asociación a moléculas MHC clase I. Algunas
endocítico celular, se realizaría en forma bacterias intracelulares secretan lisinas de membrana
independiente del complejo molécula MHC clase que favorecerían el escape de antígenos o fragmentos
II-cadena invariante Ii. peptídicos exógenos desde el compartimiento
Los péptidos derivados de proteínas endocítico al citoplasma de la célula presentadora
endógenas son altamente promiscuos y por lo tanto de antígeno.
capaces de ser presentados por una gran variedad
de moléculas MHC de clase II. De este modo las
moléculas de clase II pueden unirse a un rango LECTURAS SUGERIDAS
más amplio de péptidos en el compartimiento
endocítico, que las moléculas MHC de clase I, en Amigorena, S.; Webster P., Drake, J.; Newcomb,
el retículo endoplásmico rugoso. Es en el J.; Cresswell, P. and Mellman I., “Invariant chain
compartimiento endocítico donde se encuentra la cleavage and peptide loading in MHC class II
molécula DM, que actúa editor peptídico, vesicles”. J. Exp. Med. 181:1729-1741, 1995.
favoreciendo la presentación de péptidos de mayor
afinidad y estabilidad. Las moléculas DM parecen
funcionar: (a) removiendo el péptido CLIP (“Class

189

Sin título-2 189 5/26/06, 10:25 AM


Brocke, P., Garbi, N., Momburg, F. and Rammensee, H.G., “Chemistry of peptides asso-
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Sin título-2 190 5/26/06, 10:25 AM


Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
Editorial Universidad de Talca, 2002

Capítulo 10

ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS

Javier Puente P.

1. Introducción
2. Activación de los linfocitos T
2.1. Relación estructura-función del
complejo TCR
2.2. Secuencias de activación en el
TCR-CD3 y cadenas ξ
2.3. Proteínas tirosina quinasas en
la activación de los LT
2.4. Proteínas adaptadoras en la acti-
vación de los linfocitos
2.5. Modelo general de activación de
los LT
3. Activación de los linfocitos B
3.1. Secuencias de activación en el
BCR y sub-unidades asociadas
3.2. Modelo general de activación de
los LB
4. Activación de las células NK
4.1. Modelo de activación de las cé-
lulas NK

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Sin título-2 191 5/26/06, 10:25 AM


192

Sin título-2 192 5/26/06, 10:25 AM


RESUMEN

El reconocimiento de los antígenos por parte de los receptores específicos de los linfocitos
B y T, BCR y TCR respectivamente, es el evento que inicia la etapa de activación. El TCR (αβ),
une específicamente al antígeno peptídico procesado ligado a las moléculas de MHC (clase I o
II). El heterodímero αβ de localización mayoritariamente extracelular, está asociado en forma no
covalente a un complejo de proteínas de membrana denominado CD3-ζ cuyos componentes
están localizados mayoritariamente en el extremo citoplasmático. Participan en la unión además
los co-receptores CD4 o CD8, que se unen a determinantes no polimórficos de los MHC clase II
y clase I respectivamente. Una de las principales características estructurales de los componentes
del complejo CD3-ζ es la presencia de secuencias aminoacídicas que contienen residuos de
tirosina (ITAM) que pueden ser fosforilados por PTK. Esta acción de las PTK ocurre sólo bajo
las condiciones de la interacción TCR, y estructuras asociadas, con el antígeno. Las secuencias
ITAM están presentes en todas las sub-unidades del complejo CD3-ζ y estando fosforiladas
pueden interactuar con otras secuencias aminoacídicas del tipo SH2 presentes en diversas PTK
citoplasmáticas como Zap-70, lo que permite una masiva fosforilación de proteínas adaptadoras
citosólicas y de membrana y de enzimas. Las enzimas fosforiladas se activan y en estas condicio-
nes fosforilan a otros sustratos celulares propagando la señal, proceso que se encarga de asociar
el fenómeno de membrana con el citosol y el núcleo celular generando los cambios característi-
cos en la expresión génica. Una de las proteínas activadas por fosforilación es la fosfolipasa Cγ1
o Cγ2 que permite la generación de los segundos mensajeros IP3, Ca2+, DAG y la posterior acti-
vación de determinadas PK-C; estos primeros eventos son fundamentales para la respuesta
proliferativa y efectora del respectivo LT. Otra interacción importante ocurre entre CD28 (LT) :
B7.1, B7.2 (CPA); esta interacción aporta una segunda señal prácticamente obligatoria para una
óptima activación de los LT.
El BCR, estructuralmente una Ig de membrana de localización principalmente en el extre-
mo extracelular, se encuentra asociado a sub-unidades (Igα, Igβ) que poseen secuencias ITAM.
La interacción del antígeno con el BCR y estructuras asociadas, que también poseen este tipo de
secuencias permite el traspaso de la señal hacia el interior celular. Para ello como en el caso del
TCR, el LB posee PTK unidas a membrana y citosólicas como la p72syk que pueden interactuar
con los dominios ITAM fosforilados a través de las secuencias SH2 y otro tipo de quinasas como
la PI-3 quinasa que puede interactuar con las secuencias del tipo SH2 y SH3. Participan también
proteínas adaptadoras citosólicas que permiten agrupar una gran diversidad de proteínas y enzimas
en la superficie celular. Una de las enzimas activadas por fosforilación unida a una proteína
adaptadora, es la FL-Cγ que cataliza la hidrólisis del PIP2, la generación de los segundos mensa-
jeros y la activación de la PK-C y calcineurina en forma similar a los LT. Estos eventos iniciales
permiten la activación de otras señales que actúan a nivel del núcleo celular promoviendo los
cambios en la expresión genética típicos de este tipo de linfocitos.
La activación de las células NK, tanto la ADCC como la citotoxicidad natural, ocurre a
través de la interacción de receptores como FcγIIIR (CD16) con la fracción Fc de inmunoglobulinas
o de los receptores NCR con sus ligandos, resulta también en una propagación de la señal a través
de dominios ITAM fosforilados. En las células NK se han descrito también PTK de la familia src
y syk y proteínas adaptadoras de membrana y citosólicas. La activación de los receptores CD16
y NCR, ambos asociados a sub-unidades de tipo ζ y DAP12 presentan fosforilación de secuen-
cias ITAM y la generación de los mismos segundos mensajeros ya señalados. La descripción de
un gran conjunto de receptores de inhibición, de la familia de las inmunoglobulinas (KIR) y
lectinas (CD94-NKG2A) que reconocen segmentos conservados de los complejos MHC-I, re-
presentan uno de los aspectos fundamentales del control de su funcionalidad.

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1. INTRODUCCIÓN como tanto el BCR y TCR en conjunto con sus
moléculas asociadas, que no poseen actividad
Los linfocitos B y T, pertenecientes a la res- enzimática transmiten una señal hacia el inte-
puesta inmunológica específica, tienen la capa- rior celular; cómo diversas enzimas proteína
cidad de reconocer y discriminar, entre una vasta quinasas, bajo las determinadas condiciones de
diversidad de estructuras, a aquellas que son la interacción del antígeno con su receptor, son
agentes extraños para el organismo vertebrado, capaces de interaccionar con los extremos
especialmente de carácter infeccioso. Para lle- citosólicos de las sub-unidades de las molécu-
var a cabo estas funciones poseen receptores al- las asociadas y activarse fosforilando una serie
tamente específicos en su superficie para el re- de sustratos de membrana e intracelulares, es-
conocimiento de los antígenos: el receptor de pecialmente enzimas y proteínas adaptadoras,
antígenos de los linfocitos B (BCR) y el recep- que finalmente van a permitir la comunicación
tor de antígenos de los linfocitos T (TCR). Cada con el núcleo celular.
precursor linfocitario reordena exclusivamente Los linfocitos B y T tienen receptores
sus genes únicos para estos receptores y los oligoméricos antigénicos que reconocen funda-
linfocitos maduros permanecen en estado mentalmente distintas formas de los antígenos. Los
quiescente en la ausencia de antígeno. El con- LB para protección de patógenos extracelulares;
tacto del antígeno específico con estos linfocitos sus receptores típicamente reconocen formas na-
induce en éstas células un estado denominado tivas o desnaturadas de proteínas y carbohidratos
activación, que implica su expansión en núme- ya sea solubles, particuladas o unidas a células.
ro, y en el caso de los LB la producción de En contraste los LT protegen contra patógenos
anticuerpos y de los LT la adquisición de fun- intracelulares, el TCR reconoce péptidos
ciones efectoras tales como citotoxicidad y se- antigénicos proteolíticamente procesados (8-15
creción de mediadores de la respuesta inmune residuos) unidos a moléculas del Complejo Prin-
denominadas citoquinas. cipal de Histocompatibilidad (MHC) de la célula
Además del receptor específico, intervienen presentadora de antígenos (CPA). Sin embargo,
otras moléculas de superficie denominadas co-re- la transducción de señales que resulta de la
ceptores, moléculas de adhesión, receptores de mo- interacción de cada receptor con su antígeno son
léculas co-estimuladoras; participando no sola- muy similares.
mente en la estabilización de la interacción Las células NK, pertenecientes a la respues-
antígeno-receptor, sino también en la generación ta inmunológica innata, pueden también recono-
de las señales bioquímicas características del pro- cer ligandos. Por ejemplo el receptor CD16
ceso de activación o de inhibición de los linfocitos. (RFcγIII) de las células NK une al fragmento Fc
La especificidad de esta respuesta está influida de inmunoglobulina G, y de esta forma las células
también por la localización de los mediadores par- se activan utilizando mecanismos bioquímicos si-
ticipantes en zonas lipídicas específicas de la mem- milares a los de los LB y LT.
brana plasmática. Los tres grandes sistemas de integración de
Aun cuando entonces, la respuesta a un los organismos pluricelulares complejos son los
antígeno es comúnmente denominada activa- sistemas: endocrino, nervioso e inmunológico,
ción, este término refleja toda la complejidad cada uno de ellos responde a una variedad de se-
del proceso, que abarca desde la generación de ñales o mensajes característicos. Sin embargo,
las primeras señales bioquímicas, transducción los mecanismos bioquímico-moleculares
de señales y la producción de segundos mensa- involucrados son universales; en este caso los re-
jeros, hasta cambios en la expresión genética y ceptores de membrana (BCR y TCR), al
la morfología y funcionalidad de los linfocitos. interaccionar con el antígeno y el receptor CD16
En el presente capítulo se analizarán aquellos de las células NK al interactuar con su ligando,
aspectos estructurales de los receptores y de- activan vías mediadas por proteína quinasas,
más moléculas accesorias involucradas en el quinasas de lípidos, proteínas adaptadoras de
contacto con el antígeno respectivo y cómo esta membrana y citosólicas permitiendo la hidrólisis
situación inicia la serie de eventos bioquímicos del fosfolípido de membrana fosfatidil-inositol
que se encargan de la inter-comunicación entre (PIP2) a través de una isoenzima de la fosfolipasa
un fenómeno de membrana con el citosol y nú- C y la generación de los segundos mensajeros,
cleo celular. Para ello es indispensable aclarar inositol-trisfosfato (IP3), diacilglicerol (DAG) y

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Ca2+. Estos son también segundos mensajeros de estimuladoras como CD28 (CTLA-4), ICOS,
la acción de hormonas y de factores de crecimien- CD40L, 4-1BB, OX40; muchas de éstas son in-
to (sistema endocrino) y neurotrasmisores (sis- ducidas post-contacto con la CPA y moléculas de
tema nervioso). adhesión como CD2, CD5 y LFA-1 (figura 10-2).
Este evento de unión entonces le permite, durante
2. ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS T el desarrollo de las células T, entrar a selección
positiva o bien a apoptosis, entrar al ciclo celular,
2.1. Relación estructura-función del comple- producir citoquinas o adquirir una función efectora
jo TCR. El inmuno-receptor TCR es un citolítica. Por lo tanto, todas las responsabilida-
oligómero complejo compuesto de los produc- des de las células T están radicadas en su TCR y
tos de seis genes (figura 10-1) (ver capítulo 7), en las estructuras accesorias. La interacción esta-
todos ellos requeridos para una eficiente expre- ble entre el TCR y el antígeno presentado ha sido
sión en la membrana plasmá