Inmunologia

Fundamentos
de Inmunología
Básica y Clínica
Editores
Iván Palomo G., Arturo Ferreira V., Cecilia Sepúlveda C.,
Mario Rosemblatt S., Ulises Vergara C.
EDITORIAL
UNIVERSIDAD
DE
TALCA
UNIVERSIDAD DE
MCMXCI TALCA
EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

COLECCIÓN E-BOOK
Serie de libros electrónicos
Fundamentos de Inmunología
Básica y Clínica
Editores

Vicerrectoría Académica
COLECCIÓN E-BOOK
Serie de libros electrónicos
EDITORIAL
UNIVERSIDAD
DE
TALCA
UNIVERSIDAD DE
MCMXCI TALCA
Registro de propiedad intelectual © N° 128.873
ISBN: 978-956-7059-86-7
Talca- Chile, julio de 2009

Edición soporte papel año 2002
Diseño Editorial:
Marcela Albornoz Dachelet
Corrección de textos:
María Cecilia Tapia Castro
1
Sin título-2 1 5/26/06, 10:25 AM

Registro de propiedad intelectual Nº 128.873
ISBN: 956-7059-51-9
Talca - CHILE, 2002
Ilustraciones
BQ. Marcos Pérez Cid
Diseño gráfico
Marcela Albornoz Dachelet
Revisión de textos
María Cecilia Tapia Castro
La ilustración de la portada muestra la interacción entre una Célula Presentadora de Antígeno y un Linfocito T. Se
representan algunas de las moléculas que participan: Receptor de células T (TCR), molécula del Complejo Princi-
pal de Histocompatibilidad (MHC), Péptido Antigénico y Moléculas de Adhesión Celular.
Diagramación e impresión
Gutenberg-Talca
Impreso en Chile
Sin título-2 2 5/26/06, 10:25 AM

Fundamentos de
Inmunología
Básica y Clínica
Editores
EDITORIAL
UNIVERSIDAD
DE
TALCA
MCMXCI
Sin título-2 3 5/26/06, 10:25 AM

4
Sin título-2 4 5/26/06, 10:25 AM

UNIVERSIDAD DE TALCA
FUNDAMENTOS DE INMUNOLOGÍA
BÁSICA Y CLÍNICA
Editores
Prof. Dr. Iván Palomo González

Unidad de Inmunología y Hematología
Departamento de Bioquímica Clínica
e Inmunohematología
Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Talca
Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux

Programa Disciplinario de Inmunología
Instituto de Ciencias Biomédicas
Facultad de Medicina
Universidad de Chile
Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda Carvajal

Unidad de Inmunología
Departamento de Medicina
Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber

Fundación Ciencias para la Vida
Departamento de Biología
Facultad de Ciencias
Prof. Dr. Ulises Vergara Castillo

Escuela de Postgrado, Facultad de Medicina y
Departamento de Medicina Preventiva,
Facultad de Ciencias Veterinarias,
Universidad de Chile.
Sin título-2 5 5/26/06, 10:25 AM

AUTORES DE CAPÍTULOS
Dra. Ana María Agar Muñoz Dra. Luz P. Blanco Palma

Unidad de Inmunología Laboratorio de Inmunobioquímica
Clínica Alemana Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular
Prof. Dra. Edilia Andrews García Facultad de Ciencias Químicas y
Departamento de Microbiología Farmacéuticas
Facultad de Ciencias Biológicas Universidad de Chile
Universidad de Concepción
Prof. Dra. Eva Burger
Prof. Dra. Adriana Ardiles Sandoval Departamento de Inmunología
Policlínico de Medicina Integral Instituto de Ciencias Biomédicas
Servicio de Medicina Universidad de San Pablo, Brasil
Hospital San Juan de Dios
Prof. Dr. Antonio Cabral
Departamento de Reumatología
BQ. Alejandra Arenas Celfé Instituto Nacional de Nutrición
Sección Histocompatibilidad Salvador Subiran, México
Instituto de Salud Pública Prof. Dr. Flavio Carrión Arriagada
Dr. Miguel Barría Maldonado Facultad de Medicina
Instituto de Inmunología Universidad de Los Andes
Universidad Austral de Chile Dr. Darwins Castillo Alvarez
Sección Inmunodiagnóstico
Prof. Dra. María Inés Becker Contreras Unidad de Inmunología
Unidad de Inmunología Instituto de Salud Pública
Facultad de Ciencias Biológicas
P. Universidad Católica de Chile Prof. Dr. Edgardo Carrasco Calderón
Departamento de Medicina Oriente
Prof. Dr. Rosario Billetta D’aquila Universidad de Chile
Programa disciplinario de Inmunología Instituto Nacional del Tórax
Instituto de Ciencias Biomédicas
Facultad de Medicina Prof. Dra. Mónica Cornejo De Luigi
Universidad de Chile Unidad de Inmunología
Prof. Dra. María Rosa Bono Merino Universidad de Valparaíso
Departamento de Biología
Sin título-2 6 5/26/06, 10:25 AM

Prof. Dr. Alfredo De Ioannes Ilis Prof. Dr. Ricardo Forastiero Valcarcel
Unidad de Inmunología Unidad de Hematología
Facultad de Ciencias Biológicas Universidad Favarolo
P. Universidad Católica de Chile Buenos Aires, Argentina
Prof. Dra. Patricia Díaz Amor Prof. Dr. Enrique González Villanueva
Departamento de Medicina Experimental Laboratorio de Biología Molecular
Facultad de Medicina Instituto de Biología y Biotecnología
Universidad de Chile Universidad de Talca
Dra. Susana Elgueta Miranda Prof. Dr. Jorge González Cortés

Sección Histocompatibilidad Unidad de Parasitología
Unidad de Inmunología Departamento de Tecnología Médica
Instituto de Salud Pública Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Antofagasta
Prof. Dr. Patricio Esquivel Sánchez
Instituto de Inmunología Dra. María Antonieta Guzmán Meléndez
Facultad de Medicina Unidad de Inmunología
Universidad Austral de Chile Servicio de Medicina
Hospital Clínico
Prof. Dr. Heriberto Fernández Universidad de Chile
Jaramillo
Instituto de Microbiología Clínica Prof. Dr. Gustavo Hoecker Salas
Facultad de Medicina Unidad de Inmunogenética
Universidad Austral de Chile Instituto de Ciencias Biomédicas
Prof. Dr. Jorge A. Fernández Vargas Universidad de Chile
Unidad de Virología
Facultad de Medicina Prof. Dra. Mónica Imarai Bahamonde
Universidad de Chile Departamento de Biología
Facultad de Química y Biología
Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux Universidad de Santiago de Chile
Programa disciplinario de Inmunología
Instituto de Ciencias Biomédicas Prof. Dr. Sergio Jacobelli Gabrielli
Facultad de Medicina Departamento de Reumatología e
Universidad de Chile Inmunología Clínica
Prof. Dr. Hugo Folch Vilches P. Universidad Católica de Chile
Instituto de Inmunología
Facultad de Medicina Prof. Dra. Cecilia Koenig Samohod
Universidad Austral de Chile Departamento Biología Celular y
Molecular
P. Universidad Católica de Chile
Sin título-2 7 5/26/06, 10:25 AM

Dra. María Angélica Marinovich Prof. Dr. Iván Palomo González
Unidad de Reumatología Unidad de Inmunología y Hematología
Departamento de Medicina Interna Departamento de Bioquímica Clínica e
Universidad de Chile Inmunohematología
Hospital Clínico San Borja-Arriarán Facultad de Ciencias de la Salud
Prof. Dr. Benjamín Martínez
Rondanelli Prof. Dr. Jaime Pereira Garcés
Departamento de Patología Oral Departamento de Hematología y
Facultad de Odontología Oncología
Universidad Mayor Facultad de Medicina
Dr. Rodrigo Mora Sanhueza
Programa Doctorado en Ciencias Prof. Dra. Silvia Pierangeli
Biomédicas Departamento de Microbiología e
Facultad de Medicina Inmunología
Universidad de Chile Morehouse School of Medicine
Atlanta, Georgia, USA.
Prof. Dra. Cristina Navarrete
Departamento de Histocompatibilidad e Prof. Dr. Javier Puente Piccardo
Inmunogenética Laboratorio de Inmunobioquímica
The London Blood Transfusion Center Departamento de Bioquímica y
Londres, Inglaterra Biología Molecular
Facultad de Ciencias Químicas y
Dr. Rodrigo Naves Pichuante Farmacéuticas
Instituto Milenio de Biología Universidad de Chile
Fundamental y Aplicada
Prof. Dr. Arnoldo Quezada Lagos
Dra. Ximena Norambuena Rodríguez Departamento de Pediatría
Unidad de Inmunología Facultad de Medicina
Servicio de Pediatría Universidad de Chile
Hospital Exequiel González Cortés
Dr. Santiago Rivero Díaz
Prof. Dr. José M. Ojeda Fernández Departamento de Reumatología e
Unidad de Virología Inmunología Clínica
Facultad de Medicina Facultad de Medicina
Universidad de Chile P. Universidad Católica de Chile
Prof. Dr. Mauricio Oqueteaux Prof. Dr. Cristián Rodríguez Guiraldes

Tacchini Unidad de Inmunología
Departamento de Hematología y Facultad de Medicina
Oncología Universidad de Los Andes
Sin título-2 8 5/26/06, 10:25 AM

Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber Prof. MgCs. Marcela Vásquez Rojas
Fundación Ciencias para la Vida Unidad de Inmunología y Hematología
Departamento de Biología Departamento de Bioquímica Clínica e
Facultad de Ciencias Inmunohematología
Universidad de Chile Facultad de Ciencias de la Salud
Prof. Dr. Flavio Salazar-Onfray
Programa disciplinario de Inmunología Dra. Pilar Vega Covarrubias
Instituto de Ciencias Biomédicas Sección Inmunidad Celular
Facultad de Medicina Laboratorio CIDI
Prof. Dr. Ulises Vergara Castillo
Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda Carvajal Laboratorio de Inmunología
Unidad de Inmunología Facultad de Ciencias Veterinarias y
Departamento de Medicina Pecuarias
Facultad de Medicina Universidad de Chile
Prof. Dra. Juana Villegas Moraga
Prof. Dra. Mireya Silva Batista Departamento de Medicina Interna
Laboratorio Clínico Inmunolab Facultad de Medicina
Universidad de la Frontera
Téc. Quím.Valeska Simon Zegers
Departamento de Biología Prof. Dr. Luis Zaror Cornejo
Facultad de Ciencias Instituto de Microbiología Clínica
Universidad de Chile Facultad de Medicina
Universidad Austral de Chile
Prof. Dr. Julio Sharfstein
Instituto de Biofísica Carlos Chagos Prof. Dra. Marta Zelazko de
Filho. UFRJ Cheistwer
Laboratory of Molecular Immunology Servicio de Inmunología
CCS Hospital Nacional de Pediatría
Río de Janeiro, Brasil Juan P. Garrahan
Buenos Aires, Argentina
BQ. Carolina Valenzuela Barros
Sección Inmunodiagnóstico Dr. Claudio Zúñiga Marti
Unidad de Inmunología Laboratorio de Inmunología
Instituto de Salud Pública Facultad de Ciencias Veterinarias y
Pecuarias
Prof. Dr. Claudio Vásquez Guzmán Universidad de Chile
Departamento de Ciencias Biológicas
Universidad de Santiago de Chile
Sin título-2 9 5/26/06, 10:25 AM

PATROCINIO
International Union of Immunology Societies (IUIS)

Asociación Latinoamericana de Inmunología (ALAI)
Sociedad Chilena de Inmunología (SOCHIN)
Sociedad Chilena de Alergia e Inmunología
Network for Research and Training in Parasitic Diseases

at the Southern Cone of Latin America, SIDA, Suecia
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas
Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias
Universidad Austral de Chile
Universidad de Valparaíso
Universidad de Santiago de Chile
Universidad de la Frontera
Universidad de Antofagasta
Facultad de Ciencias Médicas
Universidad de Los Andes
Universidad Mayor
Facultad de Odontología
Universidad Favaloro (Argentina)
Instituto de Salud Pública de Chile
AUSPICIO
International Union of Immunology Societies (IUIS)
Biomérieux S.A.
Equilab
Laboratorio Clínico Talca Ltda.
10
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A nuestras queridas familias y a nuestros estimados alumnos
11
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CONTENIDOS
Página
PREFACIO 31
PRÓLOGO 35
SECCIÓN I: GENERALIDADES SOBRE INMUNIDAD 37
Capítulo 1 39
INTRODUCCIÓN A LA INMUNOLOGÍA: LAS BASES
BIOLÓGICAS DE LA INDIVIDUALIDAD
Prof. Dr. Gustavo Hoecker S.
Capítulo 2 45
HISTORIA DE LA INMUNOLOGÍA
Prof. Dr. Iván Palomo G. y Prof. Dr. Arturo Ferreira V.
1. Introducción 47
2. Dos siglos de inmunología 48
2.1. Inmunidad 48
2.2. Serología 48
2.3. Inmunoquímica 48
2.4. Inmunobiología 48
3. Premios Nobel 49
Capítulo 3 53
CÉLULAS Y ÓRGANOS DEL SISTEMA INMUNE
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Jaime Pereira G. y Prof. Dra. Cecilia Koenig S.
1. Introducción 55
2. Células del sistema inmune 55
2.1. Hematopoyesis 55
2.2. Linfocitos 57
2.3. Sistema fagocítico mononuclear 62
2.3.1. Monocitos 62
2.3.2. Macrófagos 63
2.3.3. Células dendríticas 65
2.4. Granulocitos 65
2.4.1. Neutrófilos 65
2.4.2. Eosinófilos 73
2.4.3. Basófilos 74
3. Órganos linfoides 75
3.1 Órganos linfoides primarios 75
3.1.1. Médula ósea 75
3.1.2. Timo 78
3.2. Órganos linfoides secundarios 80
3.2.1. Ganglios linfáticos 80
3.2.2. Bazo 82
3.2.3. Tejido linfoide asociado a mucosa 83
3.2.4 Amígdalas 84
12
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4. Tránsito linfocitario 84
Capítulo 4 87
INMUNIDAD INNATA
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dra. Adriana Ardiles S. y Prof. Dr. Ulises Vergara C.
1. Introducción 89
2. Componentes de la inmunidad innata o natural 90
3. Fase de reconocimiento en la respuesta inmune innata 93
4. Fase efectora en la respuesta inmune innata 94
5. Proyección clínica 98
6. Filogenia de la respuesta inmune innata 99
SECCIÓN II: ESPECIFICIDAD DE LA RESPUESTA INMUNE 101
Capítulo 5
ANTÍGENOS 103
Prof. Dra. María Inés Becker C. y Prof. Dr. Alfredo De Ioannes I.
1. Introducción 105
2. Conceptos generales 105
2.1. Antígeno 105
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad 106
2.3. Determinante antigénico 106
2.4. Haptenos 108
3. Características del antígeno que lo hacen inmunogénico 108
3.1 Tamaño 109
3.2. Presencia de grupos químicos activos 109
3.3. Conformación espacial de los epítopos 110
3.4. Movilidad atómica 110
4. Naturaleza química de los antígenos 110
4.1. Proteínas 110
4.2. Carbohidratos 111
4.3. Lípidos 112
4.4. Ácidos nucleicos 113
5. Clasificación de los antígenos según las células inmunes involucradas en su reconocimiento 113
5.1. Antígenos timo-dependientes 113
5.2. Antígenos timo-independientes 113
6. Clasificación general de los antígenos según su función 113
6.1. Antígenos de trasplante 113
6.2. Antígenos tumorales 113
6.3. Autoantígenos 113
6.4. Antígenos de diferenciación 114
6.5. Superantígenos 114
6.6. Alergenos 114
Capítulo 6 117
RECEPTOR DE LINFOCITOS B E INMUNOGLOBULINAS
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dra. María Inés Becker C., Prof. Dra. Silvia Pierangeli y Prof. Dr.
Ulises Vergara C.
2. Receptor de linfocitos B (BCR): Estructura y función 120
2.1. Inmunoglobulina de membrana 121
2.2. Complejo accesorio Igα/Igβ 124
13
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3. Linfocitos B y señales accesorias de coestimulación 125
3.1. Antígenos T-dependientes y antígenos T-independientes 125
3.2. Co-Receptor CD21 (CR2) 125
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2 126
5. Estructura y función de inmunoglobulinas 126
5.1. Estructura general 127
5.2. Dominios de inmunoglobulinas y regiones hipervariables 128
5.3. Variaciones isotípicas, alotípicas e idiotípicas 129
5.3.1. Variaciones isotípicas 130
5.3.2. Variaciones alotípicas 130
5.3.3. Variaciones idiotípicas 130
5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas 130
6. Respuesta inmune humoral 135
6.1. Avidez 136
6.2. Afinidad 136
7. Bases genéticas de la diversidad de inmunoglobulinas 136
7.1. Genes de inmunoglobulinas 137
7.1.1. Genes de cadenas pesadas 138
7.1.2. Genes de cadenas livianas 138
7.2. Reordenamiento génico 139
7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas 140
7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas 140
7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA 141
7.2.4. Diversificación de la región N 141
7.2.5. Exclusión alélica 142
7.2.6. Exclusión isotípica 142
7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas 142
7.3. Hipermutación somática 143
7.4. Control de la transcripción de los genes de inmunoglobulinas 144
7.5. Estimación numérica de la diversidad de anticuerpos 144
8. Edición del receptor linfocitario 145
9. Biosíntesis y ensamblaje de las inmunoglobulinas 146
Capítulo 7 149
RECEPTOR DE LINFOCITOS T Y SEÑALES ACCESORIAS DE COESTIMULACIÓN
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Iván Palomo G.
2. Estructura del receptor T 152
2.1. TCR αβ 152
2.2. TCR γδ 153
3. Estructura y función del complejo CD3 154
4. Receptor T y reconocimiento antigénico 154
4.1 Linfocitos TCD4 , linfocitos TCD8 y restricción MHC 156
4.2. Células TNK 157
5. Genética molecular del receptor T 159
5.1. Genes de cadenas TCRα, TCRβ, TCRγ y TCRδ 159
5.1.1. Genes de cadenas TCRα 159
5.1.2. Genes de cadenas TCRβ 159
5.1.3. Genes de cadenas TCRγ 160
5.1.4. Genes de cadenas TCRδ 161
5.2. Reordenamiento génico 161
6. Linfocitos T y señales accesorias de coestimulación 163
7. Homeostasis y desarrollo post-tímico de linfocitos T 165
14
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Capítulo 8 167
COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Prof. Dr. Iván Palomo G., Dr. Claudio Zúñiga M. y Prof. Dra. Cristina
Navarrete
2. Genes y moléculas del Complejo Principal de Histocompatibilidad 170
2.1. Genes del MHC 171
2.1.1. Genes de clase I 171
2.1.2. Genes de clase II 172
2.1.3. Genes de clase III 173
2.1.4. Otros genes del MHC 173
2.2. Estructura y función de las moléculas MHC 174
2.2.1. Estructura y función de las Moléculas MHC de clase I 174
2.2.2. Estructura y función de las Moléculas MHC de clase II 174
3. El concepto de restricción MHC 175
4. Otras moléculas de presentación 176
4.1. Moléculas CD1 176
5. Herencia de los genes HLA 176
6. Complejo Principal de Histocompatibilidad y enfermedad 176
7. Nomenclatura y tipificación HLA 178
Capítulo 9 179
PROCESAMIENTO, PRESENTACIÓN Y RECONOCIMIENTO ANTIGÉNICO
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Dr. Claudio Zúñiga M., Prof. Dr. Iván Palomo G., y Prof. Dra. Cristina
Navarrete
2. Linfocitos T y reconocimiento antigénico 181
2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y reconocimiento peptídico 182
2.2. Linfocitos T γδ 182
2.3. Células NK 182
2.4. Células presentadoras de antígenos 183
3. Tráfico celular y procesamiento antigénico 184
4. Antígenos endógenos y exógenos 184
5. Fragmentos peptídicos y moléculas MHC 184
6. Procesamiento y presentación de antígenos endógenos 185
7. Procesamiento y presentación de antígenos exógenos 187
8. Presentación alternativa de péptidos 189
Capítulo 10 191
ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS
Prof. Dr. Javier Puente P.
2. Activación de los linfocitos T 195
2.1. Relación estructura-función del complejo TCR 195
2.2. Secuencias de activación en el TCR-CD3 y cadenas ξ 196
2.3. Proteínas tirosina quinasas en la activación de los LT 196
2.4. Proteínas adaptadoras en la activación de los linfocitos 198
2.5. Modelo general de activación de los LT 198
2.6. Las dos señales necesarias para la activación de los LT 201
3. Activación de los linfocitos B 202
3.1. Secuencias de activación en el BCR y sub-unidades asociadas 202
3.2. Modelo general de activación de los LB 202
4. Activación de las células NK 205
15
Sin título-2 15 5/26/06, 10:25 AM

4.1. Modelo de activación de las células NK 205
Capítulo 11 209
CITOQUINAS
Dr. Rodrigo Naves P. y Prof. Dra. María Rosa Bono M.
2. Propiedades generales de las citoquinas 211
3. Receptores de las citoquinas y mecanismos de transducción de señales 219
3.1. Receptores de citoquinas 219
3.2. Transducción de señales 223
4. Principales actividades biológicas de las citoquinas 223
4.1. Inmunidad innata 223
4.1.1. Inmunidad antiviral 224
4.1.2. Citoquinas e inflamación 224
4.2. Citoquinas y respuesta inmune 225
4.2.1. Citoquinas y diferenciación de células linfoides 225
4.2.2. Células Th1 y Th2 226
4.2.3. Activación de linfocitos B 228
4.2.4. Respuesta inmune específica mediada por células 228
4.3. Citoquinas y hematopoyesis 229
4.3.1. Factores estimuladores de colonias 230
4.3.2. Otras citoquinas estimuladoras de la hematopoyesis 231
4.3.3. Citoquinas supresoras 232
5. Quimioquinas 232
5.1. Quimioquinas en la diferenciación linfocitaria 232
5.2. Quimioquinas en la recirculación de los linfocitos a través de los órganos linfoides
secundarios 234
5.3. Quimioquinas en el “homing” de los linfocitos a sitios efectores periféricos 235
5.4. Quimioquinas y enfermedades 235
5.5. Quimioquinas y terapia 237
Capítulo 12 239
RECEPTORES DE ADHESIÓN, “HOMING” Y ACTIVACIÓN DE LINFOCITOS
Dr. Jorge Rodrigo Mora S. y Prof. Dr. Mario Rosemblatt S.
2. Modelo general de adhesión leucocitaria 242
3. Receptores de adhesión y sus ligandos 244
3.1. Receptores de adhesión de la familia de las integrinas 245
3.2. Receptores de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas (SFIg) 246
3.3. Moléculas de adhesión de la familia de las selectinas 248
4. Interacciones linfocito-endotelio 248
4.1. Tráfico linfocitario a través del endotelio inflamado 250
4.2. Tráfico linfocitario a través del endotelio columnar (HEV) 252
4.3. Tráfico linfocitario hacia la piel 253
5. Regulación del posicionamiento (“homing”) de linfocitos 253
6. Receptores de adhesión en la diferenciación y activación linfocitaria 257
6.1. Receptores de adhesión y diferenciación temprana en la médula ósea 257
6.2. Receptores de adhesión y diferenciación en el microambiente de los OLS 258
Capítulo 13 261
ONTOGENIA Y DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS B Y T
Dr. Rodrigo Naves P. y Prof. Dr. Mario Rosemblatt S.
16
Sin título-2 16 5/26/06, 10:25 AM

2. Regulación génica de la diferenciación linfocitaria 264
3. Diferenciación y maduración de linfocitos B 266
3.1. Etapa antígeno-independiente 266
3.2. Etapa antígeno-dependiente 267
4. Diferenciación y maduración de linfocitos T 269
4.1. Migración de los precursores de linfocitos T 269
4.2. Diferenciación 269
4.3. Selección tímica 271
Capítulo 14 275
REGULACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE
Prof. Dr. Ulises Vergara C., Dr. Claudio Zúñiga M. y Prof. Dr. Iván Palomo G.
2. Regulación de la respuesta inespecífica 277
2.1. Regulación del sistema del complemento 277
2.2. Regulación de la acción de células NK 277
3. Regulación de la respuesta inmune específica 278
3.1. Mecanismos inmunológicos y no inmunológicos de regulación 279
3.2. Deleción y anergia clonal. Tolerancia inmunológica 280
3.3. Activación de linfocitos T supresores 281
3.4. Regulación mediante linfocitos Th1 y Th2 282
3.5. Regulación idiotípica o red idiotipo-anti-idiotipo 283
3.6. Regulación o “feedback” por anticuerpos y complejos inmunes 284
3.7. Regulación por Prostaglandinas 286
3.7.1. Prostaglandina E2 (PGE2) 286
3.7.2. Prostaglandina 15-d PGJ2 286
Capítulo 15 289
NEUROINMUNOLOGÍA
Prof. Dr. Hugo Folch V., Dr. Miguel Barría M. y Prof. Dr. Patricio Esquivel S.
2. Interacciones entre el sistema nervioso central, sistema endocrino y sistema inmune 292
2.1. Inervación de los órganos linfoides 293
2.2. Existencia de un eje Sistema nervioso central-hipófisis-sistema inmune 293
2.3. El SNC tiene “conocimiento” de la entrada de antígeno al organismo y responde a él 294
2.4. El sistema inmune produce hormonas 294
2.5. El sistema inmune tiene receptores para hormonas y neuropéptidos 295
2.6. Otras señales derivadas del sistema inmune tienen efecto en el sistema neuroendocrino 295
3. Resultante de la interacción del sistema nervioso, sistema endocrino y el sistema inmune:
evidencias en el organismo vivo que demuestran su efecto en la respuesta inmune 297
3.1. Efecto del “stress” en la respuesta inmune 297
3.2. Depresión e inmunidad 297
3.3. Efecto de los factores sociales en la respuesta inmune 297
3.4. Las drogas psicoactivas alteran el funcionamiento del sistema linfoide 298
3.5. Las hormonas sexuales modulan la respuesta autoinmune 298
4. Algunos casos en que el sistema inmune origina cambios o trastornos en el sistema nervioso 298
4.1. Efecto de los anticuerpos a nivel del sistema nervioso 298
4.2. Efecto de complejos antígeno-anticuerpo en el sistema nervioso central 298
4.3. Rol patogénico de linfocitos T, macrófagos y citoquinas en el tejido nervioso 298
17
Sin título-2 17 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 16 299
INMUNIDAD DE MUCOSAS
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Iván Palomo G.
2. Sistema inmune de mucosas 302
2.1. Organización estructural 302
2.2. Transporte y presentación de antígenos 304
3. Funciones efectoras de la inmunidad de mucosas 305
3.1. Respuesta inmune de anticuerpos 305
3.2. Respuesta inmune celular 306
4. Inmunización a través de mucosas 307
4.1. Uso de adyuvantes 308
5. Tolerancia inducida a través de mucosas 309
Capítulo 17 311
INMUNOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN
Prof. Dra. Mónica Imarai B. y Prof. Dra. Juana Villegas M.
2. El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva 314
2.1. El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva de la hembra 314
2.2. El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva del macho 316
3. Inducción de la respuesta inmune en la mucosa reproductiva 316
3.1. Inducción de la respuesta inmune en la mucosa reproductiva de la hembra 316
3.2. Respuesta inmune a las infecciones en la mucosa reproductiva de la mujer 317
4. El sistema inmune local en el embarazo 318
4.1. La Interfase materno fetal 318
4.2. Expresión de MHC en las células trofoblásticas 318
4.3. Las células NK de la decidua 319
4.4. Los linfocitos T de la decidua 319
4.5. Citoquinas en la preñez 320
5. Factores inmunológicos que afectan la fertilidad 320
5.1. Aborto espontáneo recurrente de causa inexplicada 320
5.2. Anticuerpos antiespermáticos 321
SECCIÓN III: MECANISMOS EFECTORES DE LA RESPUESTA INMUNE 325
Capítulo 18 327
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
Prof. Dr. Arturo Ferreira V. y Prof. Dr. Julio Scharfstein
2. Generalidades sobre la activación y regulación del Sistema del Complemento 331
2.1. Generación de enlaces covalentes por parte de C3b y C4b, al reaccionar con
estructuras de las superficies atacadas por el sistema 335
2.2. Las C3 y C5 convertasas de las rutas clásica y alterna son funcionalmente homólogas 336
3. Ruta clásica: algunos detalles moleculares 337
3.1. Unión C1 337
3.2. Activación de C4 y C2 338
3.3. Convertasa de C3 339
3.4. Convertasa de C5 340
3.5. Mecanismos que confinan la activación del complemento a las membranas
blanco (“target”) o culpables 340
3.6. Rutas de las lectinas 340
18
Sin título-2 18 5/26/06, 10:25 AM

4. Ruta alterna: algunos detalles moleculares 341
4.1. Activación de la ruta alterna 342
4.2. Papel de la properdina 344
5. Fase terminal: generación del complejo destructor de membranas 344
5.1. Generación de C5-8 344
5.2. Polimerización de C9 345
5.3. Efecto funcional de la inserción del MHC en las membranas 346
5.4. Perspectivas futuras del estudio de la fase final de la activación del complemento 347
6. Algunos aspectos genéticos del Complemento 347
7. Complemento y enfermedad 347
Capítulo 19 349
INMUNIDAD MEDIADA POR CÉLULAS
Dra. Luz Blanco P. y Prof. Dr. Javier Puente P.
2. Citolisis mediada por linfocitos T 352
2.1. Mecanismo membranolítico 355
2.2. Mecanismo dependiente de la interacción FasL-Fas 356
3. Citolisis mediada por célula NK 358
3.1. Citotoxicidad mediada por células NK 358
3.2. Receptor FcγRIIIA (CD16) 360
4. Métodos de estudio del proceso citolítico 361
5. Hipersensibilidad retardada (HR) 362
Capítulo 20 365
RESPUESTA INMUNE MEDIADA POR IgE
Prof. Dr. Arnoldo Quezada L. y Dr. Edgardo Carrasco C.
2. Características de la IgE 367
3. Mastocitos y Basófilos 367
4. Receptores para IgE y liberación de mediadores 368
5. Regulación de la síntesis de IgE 371
6. Rol biológico de la respuesta mediada por IgE 372
7. Aplicaciones biomédicas 373
SECCIÓN IV: INMUNOLOGÍA CLÍNICA 375
Capítulo 21 377
HIPERSENSIBILIDAD
Prof. Dr. Arnoldo Quezada L. y Dra. Ximena Norambuena R.
2. Clasificación de las reacciones de hipersensibilidad 380
3. Hipersensibilidad inmediata mediada por IgE (tipo I) 381
4. Hipersensibilidad citotóxica (tipo II) 382
5. Hipersensibilidad mediada por complejos inmunes (tipo III) 383
6. Hipersensibilidad retardada mediada por células (tipo IV) 384
Capítulo 22 387
ANAFILAXIS
Prof. Dra. Patricia Díaz A.
2. Fisiopatología 389
19
Sin título-2 19 5/26/06, 10:25 AM

2.1. Mastocitos 389
2.2. Degranulación de mastocitos y basófilos 390
2.3. Participación de cascadas de la inflamación en la reacción anafiláctica y anafilactoídea 393
2.4. Alteraciones Funcionales 393
3. Causas de anafilaxis 394
3.1. Fármacos 394
3.2. Látex 394
3.3. Picaduras de himenópteros 394
3.4. Alimentos 394
3.5. Anafilaxis inducida por inmunoterapia 395
3.6. Anafilaxis inducida por ejercicio 395
3.7. Anafilaxis idiopática 395
4. Causas de reacciones anafilactoídeas 395
4.1. Aditivos 395
4.2. Medios de contraste 395
4.3. Ácido acetil salicílico (AAS) y anti-inflamatorios no esteroidales (AINE) 395
5. Reacciones anafilácticas y anafilactoídeas en pabellones quirúrgicos 396
6. Signos y síntomas 396
7. Laboratorio 397
8. Tratamiento 397
Capítulo 23 399
AUTOINMUNIDAD
Dra. Ana María Agar M. y Dra. María Angélica Marinovic M.
2. Formas clínicas y características comunes 401
3. HLA y enfermedades autoinmunes 403
4. Patogenia de las enfermedades autoinmunes 404
5. Autotolerancia 404
5.1. Falla de la tolerancia central del linfocito T 405
5.2. Falla de la tolerancia periférica del linfocito T 405
5.3. Falla de la tolerancia del linfocito B 405
6. Citoquinas y enfermedades autoinmunes 406
7. Nuevos tratamientos 407
Capítulo 24 409
ENFERMEDADES REUMÁTICAS
Prof. Dr. Sergio Jacobelli G. y Prof. Dr. Santiago Rivero D.
2. Artritis Reumatoídea 411
2.1. Patogenia 412
2.1.1. Genética 412
2.1.2. Infecciones 413
2.1.3. Autoinmunidad 414
2.2. Clínica y tratamiento 416
3. Lupus eritematoso sistémico 416
3.1. Patogenia 416
3.1.1. Factores genéticos 417
3.1.2. Factores ambientales 417
3.1.3. Disregulación del sistema inmune 417
3.1.4. Inflamación y daño celular/tisular 419
3.2. Clínica y tratamiento 419
20
Sin título-2 20 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 25 423
SÍNDROME ANTIFOSFOLÍPIDO
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Antonio Cabral, Prof. Dra. Silvia Pierangeli
y Prof. Dr. Ricardo Forastiero V.
2. Antígenos y anticuerpos 425
2.1. Antígenos 425
2.2. Anticuerpos 426
3. Mecanismos de trombosis 427
3.1. Biosíntesis de eicosanoides e isoeicosanoides 427
3.2. Sistema antitrombótico de la proteína C 428
3.3. Vía del factor tisular 428
3.4. Sistema fibrinolítico 428
3.5. Anexinas y activación celular 428
3.6. Inmunidad celular y perfil de citoquinas 429
3.7. Asociación con factores genéticos de riesgo trombótico 429
4. Manifestaciones clínicas 429
4.1. Manifestaciones vaso-oclusivas 429
4.2. Manifestaciones hemocitopénicas 430
4.3. Otras manifestaciones 430
5. Laboratorio 430
5.1. Anticardiolipina por ELISA 431
5.2. Anticoagulante Lúpico 432
5.3. Pruebas de laboratorio más específicas para el diagnóstico de SAF 432
5.4. ¿Qué pruebas de laboratorio se deben usar en el diagnóstico de SAF? 432
6. Tratamiento 433
Capítulo 26 437
CITOPENIAS INMUNES
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Jaime Pereira G. y Prof. MgCs. Marcela Vásquez R.
2. Anemias hemolíticas inmunes 439
2.1. Sistemas antigénicos de los glóbulos rojos 439
2.2. Anemias hemolíticas inmunes 441
2.2.1. Anemias hemolíticas aloinmunes 442
2.2.2. Anemias hemolíticas autoinmunes 443
3. Trombocitopenias inmunes 445
3.1. Sistemas antigénicos de las plaquetas 446
3.2. Trombocitopenias inmunes 447
3.2.1. Trombocitopenias aloinmunes 449
3.2.2. Trombocitopenias autoinmunes 451
4. Neutropenias inmunes 453
4.1. Sistemas antigénicos de los neutrófilos 453
4.2. Neutropenias inmunes 454
4.2.1. Neutropenias aloinmunes 454
4.2.2. Neutropenias autoinmunes 455
Capítulo 27 459
GAMMAPATÍAS MONOCLONALES
Prof. Dra. Mireya Silva B. y Prof. Dr. Mauricio Oqueteaux T.
2. Estudio inmunológico de las gammapatías monoclonales 462
2.1. Pesquisa de una proteína monoclonal 462
21
Sin título-2 21 5/26/06, 10:25 AM

2.2. Identificación de una proteína monoclonal 463
2.3. Cuantificación de inmunoglobulinas 465
2.4. Viscosidad sérica 465
2.5. Beta-2 microglobulina 465
2.6. Proteína C reactiva 465
2.7. Interleuquina-6 466
2.8. Estudios inmunológicos en orina 466
3. Gammapatía monoclonal de significado incierto 466
3.1. Aspectos generales 466
3.2. Evolución de las MGUS en el tiempo 466
4. Mieloma múltiple 467
4.1. Manifestaciones clínicas 467
4.2. Pronóstico 468
5. Variedades infrecuentes de mieloma múltiple y otras gammapatías 469
5.1. Mieloma "indolente" 469
5.2. Leucemia de células plasmáticas 470
5.3. Mieloma osteoesclerótico 470
5.4. Plasmocitoma extramedular 470
5.5. Plasmocitoma óseo solitario 470
5.6. Macroglobulinemia de Waldenström (MW) 470
5.7. Enfermedad de cadenas livianas 470
5.8. Amiloidosis primaria 471
5.9. Enfermedad por cadenas pesadas 471
6. Diagnóstico diferencial entre MGUS y MM 471
7. Patogenia 472
7.1. Papel de la IL-6 y vía de la ciclina D1 472
7.2. Genes supresores de tumores 473
7.3. Apoptosis de CPs 473
7.4. Papel del estroma en las discrasias de CPs 473
8. Tratamiento 473
Capítulo 28 477
ENFERMEDADES ORALES DE ORIGEN INMUNOLÓGICO
Prof. Dr. Benjamín Martínez R.
2. Reacciones de hipersensibilidad orales 479
3. Manifestaciones orales de inmunodeficiencias 480
3.1. Candidiasis oral en infección por VIH 480
3.2. Leucoplasia pilosa 482
3.3. Sarcoma de Kaposi 482
4. Enfermedades autoinmunes orales 482
4.1. Síndrome de Sjögren 482
4.2. Úlcera oral recurrente (aftas) 484
Capítulo 29 489
OTRAS ENFERMEDADES INMUNOMEDIADAS
Prof. Dra.Cecilia Sepúlveda C.
2. Algunas enfermedades inmunomediadas 491
2.1. Lupus eritematoso sistémico 491
2.2. Artritis reumatoidea 492
2.3. Enfermedades mediadas por anticuerpos 492
2.4. Otras enfermedades 494
22
Sin título-2 22 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 30 495
INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS
Prof. Dra. Mónica Cornejo De L. y Prof. Dra. Marta Zelazko de Ch.
2. Inmunodeficiencias primarias 499
2.1. Aspectos genéticos de las IDP 499
2.2. Estudios de laboratorio inmunológico para el diagnóstico de IDP 500
2.3. Características de las IDP 501
2.3.1. Defectos predominantemente de anticuerpos 501
2.3.2. Defectos combinados de células T y B 503
2.3.3. Inmunodeficiencias asociadas a otros defectos 507
2.3.4. Defectos congénitos de inmunidad natural 508
3. Tratamiento de las inmunodeficiencias congénitas 509
Capítulo 31 511
INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS
Dra. María Antonieta Guzmán M. y Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda C.
2. Infección por VIH y SIDA 513
2.1. Magnitud del problema 514
2.2. Características del virus 514
2.3. Progresión de la infección por VIH-1 517
2.4. Ingreso al organismo 517
2.5. Respuesta inmune anti-VIH 518
2.6. Diagnóstico de laboratorio 530
2.7. Tratamiento 530
3. Sistema inmune fetal y neonatal 519
3.1. Inmunidad celular 519
3.2. Inmunidad humoral 519
3.3. Inmunidad innata 519
4. Envejecimiento y sistema inmune 520
4.2. Inmunidad humoral 521
5. Inmunidad y nutrición 521
5.2. Déficit de nutrientes específicos 522
6. Inmunodeficiencia inducida por cirugía y trauma 522
7. Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infecciosas 523
7.1. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones virales 523
7.2. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones bacterianas y fúngicas 524
7.3. Inmunodeficiencia secundaria a infecciones parasitarias 525
8. Inmunodeficiencia secundaria a enfermedades infiltrativas y tumores 525
8.1. Evasión de la respuesta inmune por tumores 525
8.2. Defectos inmunológicos en tumores 526
9. Inmunodeficiencia secundaria a terapia inmunosupresora 526
9.1. Mecanismos de acción 526
9.2. Impacto de la inmunodeficiencia asociada a inmunosupresora 529
Capítulo 32 531
INMUNIDAD FRENTE A BACTERIAS
Prof. Dra. Eva Burger, Prof. Dra. Edilia Andrews G. y Prof. Dr. Heriberto Fernández J.
23
Sin título-2 23 5/26/06, 10:25 AM

2. Inmunidad frente a bacterias extracelulares 533
2.1. Características generales de las bacterias extracelulares 533
2.2. Mecanismos de inmunidad natural 534
2.2.1. Mecanismos comunes a bacterias extra e intracelulares 534
2.2.2. Inmunidad natural a bacterias extracelulares 535
2.3. Inmunidad adquirida a bacterias extracelulares 536
2.3.1. Neutralización de toxinas o enzimas bacterianas por anticuerpos 536
2.3.2. Efectos directos del sistema del complemento 536
2.3.3. Efecto conjunto de anticuerpo, complemento y lisozima 536
2.3.4. Opsonización y facilitación de la fagocitosis 536
3. Inmunidad frente a bacterias intracelulares 537
3.1. Características generales de las bacterias intracelulares 537
3.2. Inmunidad natural a bacterias intracelulares 537
3.2.1. Células NK 537
3.2.2. Leucocitos polimorfonucleares neutrófilos 538
3.3. Inmunidad adquirida a bacterias intracelulares 538
3.3.1. Macrófagos activados 538
3.3.2. Linfocitos T 538
3.3.3. Efecto conjunto de linfocitos T CD4+ y CD8+ 539
3.3.4. Linfocitos T-γδ 539
3.3.5. Citoquinas 539
3.3.6. Granulomas 540
4. Análisis comparativo del desarrollo de inmunidad en infecciones por bacterias
extracelulares e intracelulares 540
5. Estrategias de intervención inmune en relación a bacterias intracelulares 540
5.1. Tipos de vacunas para bacterias intracelulares en uso 541
5.2. Desarrollo de nuevas vacunas 541
5.2.1. Identificación de antígenos protectores 541
5.2.2. Cepas vaccinales atenuadas y recombinantes 541
5.2.3. Vacunas de subunidades y empleo de adyuvantes 541
5.2.4. Vacunas DNA 542
Capítulo 33 545
INMUNIDAD FRENTE A HONGOS
Prof. Dra. Eva Burger, Prof. Dr. Luiz Zaror C., y Prof. Dr. Heriberto Fernández J.
1.1. Consideraciones históricas 547
1.2. Características generales de algunos hongos oportunistas 547
1.3. Características generales de algunos hongos patogénicos 548
1.4. Características generales de los dermatofitos 548
1.5. Conceptos sobre inmunidad a hongos patogénicos 549
2. Inmunidad natural 549
2.1. Factores hormonales 549
2.2. Concentración de hierro 549
2.3. Sistema del complemento 550
2.4. Células “natural killer” (NK) 550
2.5. Leucocitos polimorfonucleares neutrófilos (PMN) 550
2.6. Macrófagos 550
3. Inmunidad humoral a hongos 551
3.1. Papel de la inmunidad humoral 551
3.2. Mecanismos protectores de la inmunidad humoral 551
4. Inmunidad celular a hongos 552
4.1. Macrófagos 552
24
Sin título-2 24 5/26/06, 10:25 AM

4.2. Linfocitos T 522
4.3. Citoquinas 553
4.4. Granulomas 553
5. Mecanismos de inmunidad protectora 554
5.1. Mecanismo principal 554
5.2. Otros mecanismos 555
Capítulo 34 557
RESPUESTA INMUNE FRENTE A VIRUS
Prof. Dr. José M. Ojeda F. y Prof. Dr. Jorge A. Fernández V.
2. Infección viral 560
2.1. Interacción virus-huésped 560
3. Respuesta inmune en infecciones virales 560
3.1. Inmunidad antiviral natural 561
3.1.1. Producción de IFN tipo I y otras citoquinas 561
3.1.2. Células NK 561
3.1.3. Activación del complemento y fagocitosis 561
3.2. Inmunidad antiviral específica 562
3.2.1. Inmunidad humoral 562
3.2.2. Inmunidad celular 562
3.3. Evasión de la respuesta inmune por virus 564
3.3.1. Persistencia intracelular 564
3.3.2. Variación antigénica 564
3.3.3. Interacción con componentes del sistema inmune 565
3.3.4. Interferencia con la presentación antigénica 565
3.3.5. Simulación molecular 566
3.3.6. Inmunosupresión 566
Capítulo 35 567
INMUNIDAD FRENTE A PARÁSITOS
Prof. Dr.Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Jorge González C.
2. Respuesta inmune frente a protozoos 570
2.1. Desarrollo de inmunidad protectora 572
2.2. Activación de macrófagos infectados 574
2.3. Activación de linfocitos T CD8+ 575
2.4. Rol de los anticuerpos en el control de protozoos 575
3. Respuesta inmune frente a nemátodos intestinales 576
3.1. Aspectos generales de la respuesta inmune 577
3.1.1. Enterocitos 577
3.1.2. Inmunoglobulinas 577
3.1.3. Linfocitos 578
3.1.4. Células mieloides 578
3.2. Respuesta Th2 y protección inmunológica 578
3.2.1. Mecanismos efectores y resistencia a la infección 579
3.3. Respuesta Th1 y susceptibilidad a la infección 579
4. Respuesta inmune frente a tremátodos intestinales 580
4.1. Inmunidad protectora frente a Schistosoma 581
4.1.1. Eosinófilos 582
4.1.2. Macrófagos 582
4.2. Inmunidad en la rata 583
4.3. Inmunidad en el ratón 583
4.4. Interferencia con la inmunidad 584
25
Sin título-2 25 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 36 587
VACUNAS
Prof. Dr. Ulises Vergara C. y Prof. Dr. Rosario Billetta
2. Vacunas naturales o tradicionales 590
3. Vacunas recombinantes 593
4. Vacunas anti-idiotípicas 596
5. Vacunas sintéticas 596
6. Vacunas de DNA 598
7. Vacunas Genómicas 600
8. Adyuvantes, inmunomoduladores e inmunogenicidad 600
Capítulo 37 605
MECANISMOS DE INMUNIDAD ANTITUMORAL
Prof. Dr. Flavio Salazar O. y Prof. Dr. Javier Puente P.
2. Defensa inmunológica contra el cáncer 608
2.1. La hipótesis de vigilancia inmunológica antitumoral 608
2.2. Componentes de la respuesta inmune antitumoral 608
2.2.1. Respuesta inmunológica humoral 609
2.2.2. Respuesta inmunológica celular 609
3. Antígenos asociados a tumores 610
3.1. Clasificación de AAT reconocidos por LT 610
4. Estrategias tumorales de evasión inmunológica 610
4.1. Disminución de la expansión de las moléculas MHC 610
4.2. Factores inmunosupresores producidos por los tumores 613
5. Terapia inmunológica contra el cáncer 613
5.1. Anticuerpos monoclonales 613
5.2. Terapia biológica contra el cáncer 614
5.2.1. Utilización de citoquinas 615
5.2.2. Terapia celular adoptiva 615
5.3. Inmunización activa contra tumores 617
Capítulo 38 619
MECANISMOS INMUNOLÓGICOS DEL RECHAZO DE ALOINJERTOS
Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda C.
2. Rechazo de aloinjertos 621
2.1. Presentación directa de aloantígenos 622
2.2. Presentación indirecta de aloantígenos 622
2.3. Células que participan en el rechazo 623
3. Mecanismos efectores del rechazo 623
3.1 Rechazo hiperagudo 623
3.2. Rechazo agudo 624
3.3. Rechazo crónico 624
4. Prevención y tratamiento del rechazo 624
4.1 Inmunosupresión 624
4.2. Selección de donantes 625
4.3. Inducción de tolerancia 625
26
Sin título-2 26 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 39 627
INMUNOMODULADORES
Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda C. y Dra. María Antonieta Guzmán M.
2. Principales Inmunomoduladores 629
2.1. Antiproliferativos 629
2.2. Antagonistas de las Inmunofilinas 630
2.3. Glucocorticoides 631
2.4. Agentes biológicos 631
2.5. Citoquinas 632
2.6. Trasplante de médula ósea 633
2.7. Células autólogas modificadas 633
2.8. Isoprinosine 633
3. Efectos Adversos de los Inmunomoduladores 633
SECCIÓN V: MÉTODOS INMUNOLÓGICOS Y DE BIOLOGÍA

MOLECULAR 635
Capítulo 40 637
MÉTODOS INMUNOQUÍMICOS
Dr. Darwins Castillo A. y BQ. Carolina Valenzuela B.
2. Inmunoanálisis 641
2.1. Inmunoanálisis con reactivos no marcados 641
2.1.1. Reacción de precipitación 641
2.1.1.1. Reacción de precipitación en medio líquido 641
a) Precipitación en tubo 641
b) Floculación 642
c) Turbidimetría 642
d) Nefelometría 643
e) Precipitación de complejos inmunes solubles 643
2.1.1.2. Reacción de precipitación en gel 643
a) Inmunodifusión doble 643
b) Inmunodifusión radial 644
c) Inmunoelectroforesis 644
d) Inmunofijación 645
e) Contrainmunoelectroforesis 645
f) “Rocket” inmunoelectroforesis 646
g) Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional de Laurell 647
2.1.2. Reacción de aglutinación 647
a) Aglutinación directa 647
b) Aglutinación indirecta 648
c) Aglutinación pasiva 648
2.1.3. Reacción con participación del complemento 648
a) Fijación del complemento 648
b) Actividad hemolítica del complemento 648
2.2. Inmunoanálisis con reactivos marcados 648
2.2.1. Inmunoanálisis fluorescente 648
a) Microscopía inmunofluorescente 648
b) Inmunoanálisis de fluorescencia polarizada 649
c) Inmunoanálisis de fluorescencia unida a enzima 650
d) Citometría de flujo 650
27
Sin título-2 27 5/26/06, 10:25 AM

2.2.2. Enzimainmunoanálisis (EIA) 650
a) EIA homogéneo 650
b) EIA heterogéneo 651
c) Electroinmunotransferencia o “Western blot” o “Immunoblotting” 651
2.2.3. Radioinmunoanálisis (RIA) 652
a) RIA en fase soluble 652
b) RIA en fase sólida 652
c) Detección inmunorradiométrica para antígeno 652
2.2.4. Quimiluminiscencia 652
2.2.5. Bioluminiscencia 652
Capítulo 41 655
MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA INMUNIDAD CELULAR
Prof. Dr. Jorge González C. y Dra. Pilar Vega C.
2. Preparación y aislamiento de diferentes poblaciones celulares 658
2.1. Métodos de purificación tradicionales 658
2.2. Separación inmunomagnética 659
3. Estudio de la respuesta inmune celular específica 660
3.1. Estudio de las subpoblaciones de linfocitos 660
3.2. Estudio de las funciones de inmunidad celular específica 662
3.3. Estudio de la síntesis de citoquinas y sus receptores 670
3.4. “DNA microarrays” 675
3.5. Pruebas para evaluar reacciones de hipersensibilidad retardada (RHR) 676
3.6. Estudios de la especificidad de células T 676
3.7. Detección de células T “supresoras” 677
4. Estudio de la inmunidad celular inespecífica 678
4.1. Ensayos funcionales de neutrófilos 678
4.2. Ensayos funcionales de eosinófilos 679
4.3. Funciones de monocitos y macrófagos 679
5. Evaluación de laboratorios del paciente infectado con el virus de la inmunodeficiencia humana.
Un modelo del estudio de las deficiencias en la respuesta celular 682
5.1. Estudio fenotípico de linfocitos 682
5.2. Estudio de la respuesta proliferativa 683
5.3. Estudio de la respuesta citotóxica 683
5.4. Evaluación de los niveles de citoquinas y subpoblaciones de linfocitos T 684
Capítulo 42 685
LABORATORIO DE HISTOCOMPATIBILIDAD Y TRASPLANTE DE ÓRGANOS
Dra. Susana Elgueta M., BQ. Alejandra Arenas C. y Prof. Dra. Cristina Navarrete
2. Nomenclatura HLA 689
2.1. Herencia 690
3. Tipificación HLA 691
3.1. Técnica serológica 691
3.2. Técnica celular 692
3.3. Técnica molecular 692
4. Anticuerpos HLA 693
4.1. Anticuerpos reactivos con panel 693
4.2. Crossmatch 694
5. Requerimientos de histocompatibilidad para trasplante 695
6. Otras aplicaciones de la tipificación HLA 696
28
Sin título-2 28 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 43 699
CITOMETRÍA DE FLUJO: PRINCIPIOS BÁSICOS Y APLICACIONES
Téc. Quím. Valeska Simon Z. y Prof. Dra. María Rosa Bono
2. Principios generales 701
2.1. Sistemas de fluidos 702
2.2. Sistema óptico 703
2.3. Sistema electrónico 703
2.4. Reactivos para citometría de flujo 704
3. Aplicaciones de la citometría de flujo 705
3.1. Determinación de poblaciones celulares 705
3.2. Fenotipificación de neoplasias hematológicas 708
3.2.1. Fenotipificación de leucemias 708
3.2.2. Fenotipificación de linfomas 710
3.3. Enfermedad de Hodgkin 713
3.4. Trasplante de médula ósea 713
3.5. Análisis de DNA y ciclo celular 714
3.6. Análisis de enfermedad residual mínima 715
Capítulo 44 719
ANTICUERPOS MONOCLONALES
Prof. Dra. María Inés Becker C. y Prof. Dr. Alfredo E. De Ioannes I.
2. Fundamentos del desarrollo de hibridomas 722
2.1. Mielomas 722
2.2. Fusión celular 723
2.3. Medio de selección 723
3. Etapas de la producción de hibridomas murinos 724
3.1. Inmunización 724
3.2. Fusión 725
3.3. Selección y crecimiento 726
3.4. Subclonación y congelación 727
3.5. Cultivo masivo 727
4. Anticuerpos monoclonales versus anticuerpos policlonales 727
4.1. Especificidad 727
4.2. Avidez y afinidad 729
5. Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales 729
5.1. Investigación básica 729
5.2. Medicina 730
5.3. Biotecnología 731
6. Otros tipos de hibridomas 731
6.1. Heterohibridomas 731
6.2. Hibridomas humanos 732
Capítulo 45 737
MÉTODOS FUNDAMENTALES DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Prof. Dr. Claudio Vásquez G. y Prof. Dr. Enrique González V.
2. Bases de la Biología Molecular 739
2.1. El DNA es el material genético 740
2.2. Componentes del DNA 740
2.3. Estructura del DNA 741
3. Las nuevas tecnologías 741
29
Sin título-2 29 5/26/06, 10:25 AM

3.1. Endonucleasas de restricción 742
3.2. Clonamiento del DNA 742
3.3. Transferencia de “Southern” 743
3.4. Transformación de células 743
3.5. Secuenciación del DNA 744
3.6. Reacción de la polimerasa en cadena 745
3.7. Animales transgénicos y “knock out” de genes 746
4. La expresión génica en organismos eucarióticos 747
4.1. Estructura de los genes eucarióticos 747
4.2. El proceso de expresión génica y sus etapas 748
4.3. La expresión diferencial de genes y su regulación 749
5. Métodos de análisis de la expresión génica 752
5.1. Hibridación “Northern” 752
5.2. Reacción de la polimerasa en cadena acoplada a la reacción de la transcriptasa
reversa (RT-PCR) 753
5.3. Análisis del perfil transcripcional mediante el método de “differential display” de mRNAs. 753
5.4. Hibridación sustractiva 755
Capítulo 46 757
GRUPOS DE DIFERENCIACIÓN ANTIGÉNICA
Prof. Dr. Iván Palomo G., Prof. Dr. Flavio Carrión A. y Prof. Dr. Cristián Rodríguez G.
2. Estructura de los antígenos de membrana 775
2.1. Proteínas de transmembrana tipo I 775
2.2. Proteínas de transmembrana tipo II 775
2.3. Proteínas de transmembrana tipo III 776
3. Moléculas CD asociadas a líneas celulares 777
3.1. Moléculas CD expresadas principalmente en "stem cell" 777
3.2. Moléculas CD expresadas principalmente en células B 777
3.3. Moléculas CD expresadas principalmente en células T 778
3.4. Moléculas CD expresadas principalmente en células NK 779
3.5. Moléculas CD expresadas principalmente en granulocitos 780
3.6. Moléculas CD expresadas principalmente en monocitos-macrófagos 780
3.7. Moléculas CD expresadas principalmente en plaquetas 780
4. Familias de moléculas CD 781
5. Algunas aplicaciones de la nomenclatura CD en Inmunología 781
GLOSARIO 785
ÍNDICE ALFABÉTICO GENERAL DE MATERIAS 801
30
Sin título-2 30 5/26/06, 10:25 AM

PREFACIO
Nuestras primeras palabras queremos que sean para dedicar un homenaje pós-
tumo a César Milstein, quien junto a George Köhler, en la década del setenta, desarro-
llaron la metodología para obtener anticuerpos monoclonales. Tal importancia cien-
tífica representó su aporte, que recibieron el Premio Nobel en 1984 (ver capítulo 2). El
Dr. Milstein, nació el 8 de octubre de 1927 (Bahía Blanca, Argentina) y falleció a
comienzos del presente año. Después de obtener el Doctorado en Química en la Uni-
versidad de Buenos Aires (1957), obtuvo el grado de PhD en la Universidad de
Cambridge, Inglaterra, institución en la que trabajaba cuando recibió el máximo pre-
mio científico. Su conferencia (Nobel Lecture, 8 de diciembre, 1984) se tituló “From
the structure of antibodies to the diversification of the immune response”. Dada la
importancia de esta herramienta en el estudio molecular de diversas macromoléculas
y que su aplicación se realiza tanto en ciencias básicas como en clínica, dedicamos un
capítulo del libro a la descripción de los anticuerpos monoclonales (capítulo 44).
Por otra parte, en las personas de Walter Gilbert, Francis Collins y J. Craig
Venter, queremos expresar nuestro reconocimiento a todos los científicos que partici-
paron en uno de los más importantes avances de la biología moderna, nos referimos a
la decodificación del genoma humano. Mientras trabajábamos en la edición de este
libro: Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica, la noticia recorrió el mundo, a
mediados de 2000, primero, y luego a comienzos de 2001. Alrededor de 50 años des-
pués que James Watson y Francis Crick publicaran en Nature (Abril de 1953) la es-
tructura del DNA, dos grupos de investigadores (del Proyecto Genoma Humano y de
una compañía privada), publicaron, en febrero de 2001, en Nature y Science, respec-
tivamente, la información sobre el genoma humano. Describieron que los humanos
tenemos alrededor de 30.000 genes, número significativamente menor de los, aproxi-
madamente, 80.000 que se esperaba. Deseamos que el nuevo conocimiento que se
generará en los próximos años, a partir de este significativo avance científico, sea
utilizado en la búsqueda de terapias para las casi cinco mil enfermedades genéticas
conocidas y en el tratamiento del cáncer.
Adicionalmente, queremos expresar en estas líneas nuestro reconocimiento a los

inmunólogos, ex-académicos de la Universidad de Chile, Dra. Olga Pizarro y Dr. Tulio
31
Sin título-2 31 5/26/06, 10:25 AM

Pizzi, por sus contribuciones a la inmunología, en el conocimiento de la inmunogenética
H2, y por su labor en la formación de especialistas en Inmunología Clínica y los apor-
tes en el ámbito de la Enfermedad de Chagas, respectivamente.
El libro Fundamentos de Inmunología (Julio de 1998, 33 capítulos) representó

un aporte significativo a la enseñanza de la Inmunología moderna en Chile. El respal-
do del Comité Editorial de la Editorial de la Universidad de Talca, de los inmunólogos,
profesores de Inmunología y de los alumnos de pre y postgrado nos compromete a
entregar un texto de calidad internacional y que pueda ser utilizado en Chile como
también en otros países de lengua española.
Este texto cuenta con 46 capítulos, estructurados en cinco secciones: En la sec-

ción I, Generalidades sobre inmunidad, entre otros aspectos se incluye el capítulo
“Introducción a la Inmunología: las bases biológicas de la individualidad celular”,
escrito por el Dr. Gustavo Hoecker, destacado Inmunólogo y Premio Nacional de Cien-
cias; además en la sección hay un capítulo dedicado a las células y órganos del siste-
ma inmune. La sección II, Especificidad de la respuesta inmune, trata sobre molécu-
las del sistema inmune, como por ejemplo las inmunoglobulinas, los receptores de
células T, Complejo Principal de Histocompatibilidad y las citoquinas. La sección III,
Mecanismos efectores de la respuesta inmune, principalmente está dedicada al siste-
ma del complemento y a la citotoxicidad mediada por células. La sección IV,
Inmunología clínica, se refiere a las enfermedades que presentan un mecanismo
patogénico de tipo inmune. Finalmente la sección V, Métodos inmunológicos y de
biología molecular, presenta los principios de los métodos inmunoquímicos y de inmu-
nidad celular, y de biología molecular.
Salvo excepciones, los capítulos están escritos por dos o más autores, lo que
garantiza una mayor calidad al contenido. Participan 64 inmunólogos; además de
destacados inmunólogos chilenos participaron siete inmunólogos de universidades ex-
tranjeros (Estados Unidos, Inglaterra, México, Brasil y Argentina), lo cual es una for-
taleza que destacamos.
Por tratarse de un texto docente, con el propósito de facilitar la lectura, en los

capítulos se han numerado los subtítulos, y en cada uno de ellos se ha incluido, al
comienzo, un Índice de capítulo y Resumen; y al final las Lecturas Sugeridas. Para
cerrar el libro se incluye un Glosario que comprende los términos inmunológicos más
usados y un Índice alfabético general de materias.
En los últimos años se han realizado importantes avances en el conocimiento del

Sistema Inmune y en las aplicaciones de la nueva información. Ello justifica que, ac-
tualmente, los Planes de Estudios de las carreras de la salud y biológicas en general,
incluyan Inmunología como asignatura independiente. Siendo este un libro docente,
está dirigido a alumnos de carreras que, en sus Planes de Estudios, tienen esta asigna-
tura: Medicina, Odontología, Medicina Veterinaria, Bioquímica, Química y Farma-
32
Sin título-2 32 5/26/06, 10:25 AM

cia, Tecnología Médica, Biotecnología y Licenciatura en Biología, entre otras. Cree-
mos que el libro también será de gran utilidad para alumnos de postgrado y profesio-
nales que se interesen en esta disciplina.
Si bien el texto está escrito en castellano, se usarán algunos términos y siglas en

inglés por lo difundido de su uso, como por ejemplo LT “helper”, TCR, entre otros.
Agradecemos a las personas que colaboraron en la edición del libro; a la correc-

tora de textos, Profesora María Cecilia Tapia Castro, por el interés puesto en esta obra
como también por su excelente trabajo profesional; a la diseñadora gráfica Marcela
Albornoz D. y al BQ Marcos Pérez C., quien realizó las figuras del libro; a la secreta-
ria Haydée Alvarez A., nuestro reconocimiento por su destacada colaboración en el
trabajo de preedición.
Agradecemos a las instituciones que han respaldado nuestro trabajo con su pa-
trocinio: la International Union of Immunology Societies (IUIS) en la persona de la
Prof. Dr. Genevieve Milon, Chairperson IUIS Education Committee; la Asociación
Latinoamericana de Inmunología (ALAI); la Sociedad Chilena de Inmunología
(SOCHIN); y la Sociedad Chilena de Alergia e Inmunología. También agradecemos a
la Universidad Favaloro (Argentina), Universidad de Chile (Facultades de Medicina,
de Ciencias, de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, de Ciencias Veterinarias y Pe-
cuarias), Pontificia Universidad Católica de Chile (Facultad de Ciencias Biológicas),
Universidad Austral de Chile (Facultad de Medicina), Universidad de Valparaíso (Fa-
cultad de Medicina), Universidad de Santiago de Chile (Facultad de Química y Biolo-
gía), Universidad de la Frontera (Facultad de Medicina), Universidad de Antofagasta
(Facultad de Ciencias de la Salud), Universidad de Talca (Facultad de Ciencias de la
Salud), Universidad Mayor (Facultad de Odontología), Universidad de Los Andes (Fa-
cultad de Medicina) e Instituto de Salud Pública de Chile.
Damos las gracias a la Universidad de Talca, en la persona de su Rector, Prof.

Dr. Álvaro Rojas Marín, y a la Editorial de esta institución en la persona del Vicerrector
de Extensión y Comunicaciones, Prof. Dr. Pedro Zamorano Pérez, por el apoyo otor-
gado durante el desarrollo de esta obra.
Finalmente, expresamos nuestro deseo que este libro sea de utilidad e interés para
alumnos y profesionales que quieran conocer algo más sobre las células, moléculas y me-
canismos del sistema inmune, tanto en situaciones de normalidad como en enfermedad.
Dr. Iván Palomo González

Dr. Arturo Ferreira Vigoroux
Dra. Cecilia Sepúlveda Carvajal
Dr. Mario Rosemblatt Silber
Dr. Ulises Vergara Castillo
Editores
33
Sin título-2 33 5/26/06, 10:25 AM

34
Sin título-2 34 5/26/06, 10:25 AM

PRÓLOGO
Al calor de las nuevas tecnologías de biología celular y molecular, y de la re-

ciente aparición de la genómica, la proteómica y la bioinformática, la Inmunología
moderna se desarrolla de forma vertiginosa. Se produce un volumen colosal de nuevos
conocimientos, algunos de los cuales echan por tierra nuestros “dogmas” más repeti-
dos, y los nuevos descubrimientos y conceptos sobre cómo opera el sistema inmune se
convierten rápidamente en productos aplicables en la prevención y en el tratamiento
de las enfermedades, gracias a la Biotecnología. Es este el contexto donde se mueve la
enseñanza de la Inmunología de estos tiempos, que debe combinar el estímulo al ins-
tinto de experimentación y el alto rigor académico, con la idea de que es importante
convertir los conocimientos en objetos de impacto real para nuestras sociedades.
Con un extenso contenido formado por cinco secciones y cuarenta y seis capítu-
los, Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica, descolla por su cuidadosa ela-
boración, resultado del trabajo de un grupo importante de inmunólogos. Las generali-
dades de la Inmunología, los aspectos más específicos de la respuesta inmune, la
Inmunología Clínica y algunos de los métodos más empleados para la aplicación de
estos conocimientos, o para su descubrimiento, forman parte de un texto que está lla-
mado a jugar un rol importante en la docencia de esta ciencia.
Sólo me queda felicitar a los autores de este excelente texto y conminar a sus
lectores a enfrentar con esfuerzo y dedicación los nuevos retos que impone el desarro-
llo de la Inmunología en Latinoamérica para experimentadores y clínicos, más ahora
cuando tenemos el honor y el compromiso de organizar el Congreso Mundial de
Inmunología del 2007, cuya sede fue recientemente concedida a Río de Janeiro.
Jorge Victor Gavilondo Cowley, D.Sc.

Presidente de la Asociación Latinoamericana de Inmunología
(ALAI) 2000-2002
35
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36
Sin título-2 36 5/26/06, 10:25 AM

Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica
Editorial Universidad de Talca, 2002
SECCIÓN I
GENERALIDADES SOBRE INMUNIDAD
37
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38
Sin título-2 38 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 1
INTRODUCCIÓN A LA INMUNOLOGÍA: LAS BASES

BIOLÓGICAS DE LA INDIVIDUALIDAD CELULAR
Gustavo Hoecker S.*
* Premio Nacional de Ciencias, 1989.
39
Sin título-2 39 5/26/06, 10:25 AM

40
Sin título-2 40 5/26/06, 10:25 AM

El avance sorprendente de la ciencia y la a las inmunoglobulinas de los animales inyectados.
tecnología ha adquirido tal velocidad que, por una Deseo señalar en un paréntesis, que
parte, su último fruto, la biología molecular ha Landsteiner era, y fue hasta su muerte, un
conducido a identificar las moléculas responsables anatomopatólogo que hizo autopsias todos los días
de la herencia como sus productos de traducción, desde las 6 a las 8 de la mañana. De ahí, subía a su
las proteínas, y se están visualizando los caminos modesto laboratorio para leer, hacer experimentos,
complejos por los cuales discurren todas las pensar y describir sus resultados. Ambos, Ehrlich
funciones vitales. y Landsteiner, fueron Premios Nobel y son el
Los seres vivientes desde las bacterias hasta origen de la inmunología humoral clásica y sus
los elefantes, incluido el hombre, se caracterizan extensos descubrimientos acerca del origen y
por una individualidad podría decirse total o sea causas de casi todas las enfermedades infecciosas,
que no existen dos seres exactamente iguales. De y de las aplicaciones a la transfusión sanguínea.
esto se infiere que otra característica mayor de las Landsteiner mismo fue el descubridor de la mayor
especies vivientes es la heterogeneidad. Esta parte de los antígenos mayores de los glóbulos
resulta de la recombinación, tanto de los factores rojos humanos (ABO y Rh).
hereditarios, los genes, como de los factores El continuo y rápido progreso de la
ambientales que comparten los miembros de una inmunología demostró que unas células
misma especie. insignificantes, pero muy abundantes en el
En el segundo capítulo de este libro, que organismo (aproximadamente un décimo del peso
detalla el desarrollo histórico de nuestra disciplina, total), los linfocitos, eran responsables de la
verán que el avance del conocimiento ha sido el producción de las inmunoglobulinas: los linfocitos
resultado de la práctica de la crianza de plantas y B. Esta era una clara indicación de una extensa
de la observación de las propiedades y heterogeneidad celular, inaparente a la inspección
enfermedades en todos los seres vivos, algunos microscópica. Existía, también, una inmunidad
de los cuales morían y otros se recuperaban y celular.
sobrevivían. Se dedujo que la producción y la La simple observación permitió ver que al
resistencia a las enfermedades, dependían de la comienzo de las infecciones y en los primeros
individualidad de cada miembro del grupo cinco días, los organismos se defendían de los
biológico, lo que llevó a la selección artificial de agentes infecciosos y parasitarios. Existía una
las especies domésticas. Independientemente de inmunidad natural. Los elementos celulares
ésta, la selección natural, al azar, trabaja sobre centrales en esta inmunidad eran los macrófagos
todos los seres vivientes. y a nivel humoral, una serie de diferentes
La inmunología en su estado presente, podría substancias que eran activadas o existían
decirse que empezó en 1900 y ha crecido naturalmente en el suero (alexinas, substancia A,
paralelamente con el redescubrimiento y progreso complemento, etc.). Debemos a Metchnikoff, un
de la genética. Los hechos fundamentales fueron biólogo general, el descubrimiento de esta fracción
el descubrimiento en el suero de las inmu- celular fundamental de la inmunidad tanto natural
noglobulinas, que reaccionaban específicamente como inducida.
con ciertas células, bacterias, hongos o parásitos Establecida en los primeros 50 años del siglo
y sus productos de secreción. El centro de este pasado las bases de la inmunidad humoral y su
progreso fue el desarrollo de la teoría química de estructuración genética, se expandió una cantidad
los receptores y de sus agentes específicos que enorme de investigaciones acerca de la
debemos a Ehrlich en lo químico, y a Carl heterogeneidad de los linfocitos. Primero se
Landsteiner, primero, por su descubrimiento de los descubrió que la respuesta humoral era el resultado
grupos sanguíneos humanos (1900) y segundo, por de la multiplicación clonal de un escaso número
su demostración de la inmunogenicidad de de linfocitos (Jerne, 1952) portadores de
substancias químicas artificiales que, ligadas a receptores específicos para una porción menor,
proteínas naturales, reaccionaban específicamente aproximadamente 10 a 12 aminoácidos, de la
41
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macromolécula inmunogénica, el epítopo. La más débiles - 20 o más días. Peter Gorer en
unión de ambos transmitía una señal que llegaba Inglaterra e investigadores chilenos establecieron
al núcleo. Éste, a su vez, traducía la señal y sus que los genes mayores de histocompatibilidad
productos estimulaban a unos pocos clones de determinaban, un “complejo” de antígenos que se
linfocitos a multiplicarse y a diferenciarse. La heredaban estrechamente ligados (ver capítulo 8)
respuesta total puede ser la secreción de y se expresaban en prácticamente todas las células
inmunoglobulinas específicas, la conversión del del organismo (Gorer et al, 1955; Hoecker et al,
linfocito neutro en un linfocito citotóxico para los 1954 ) y que había, por lo menos, dos clases
agentes infectantes o uno de colaboración y diferentes, 1 y 2, de este sistema que se expresaban
estimulación del complejo inmunitario. diferencialmente en los linfocitos de clase 1, en
El desarrollo de la inmunología, como los linfocitos citotóxicos y los linfocitos B, y de
dependiente de los genes y éstos, a su vez, agentes clase 2 en los linfocitos originados en el timo,
inmutables, salvo excepcionales y poco frecuentes linfocitos T. Estas eran las células responsables
mutaciones, explicaban la individualidad como de la inmunidad adquirida. El sistema
resultado de las recombinaciones de los genes en inmunológico, como todas las funciones vitales,
el curso de las generaciones, pero no existía una es de una eficacia, economía y adaptabilidad
explicación para la inmensa cantidad de increíble frente a las variantes inmunogénicas
inmunoglobulinas específicas. No había una ambientales.
interpretación para esta extensa heterogeneidad Las investigaciones siguientes cuyos detalles
adaptativa del individuo que se manifestaba sólo pueden verse en los diversos capítulos de este libro,
en los linfocitos, y que tenía una base genética analizan las interrelaciones celulares y humorales
desde que se trasmitía a todos los miembros de un de la respuesta inmune, en especial, los aspectos
mismo clon y a sus productos. El único problema moleculares de estos procesos. El estado actual
comparable era el sistema nervioso. La clave de la investigación inmunológica se centra en
siguió al descubrimiento por Barbara McClintock especial en los caminos moleculares que siguen,
y Jacob y Monod (1958) de los “genes saltarines”, por una parte los factores inmunogénicos y por
o sea, de los fenómenos de recombinación genética otra la respuesta inmune específica y algunos
en células somáticas. factores estructurales y metabólicos que regulan
Susumi Tonegawa en 1976 descubrió que la respuesta inmune.
los genes característicos de las inmunoglobulinas, Scott & Rawson (Sc.Am., June, 2000 54- 64)
v por variable, j por unión (joint en inglés), y c señalan que las células de nuestro cuerpo tienen
por constante (ver capítulo 6) eran totalmente una sorprendente red de comunicaciones internas
uniformes en el embrión, inmunológicamente y que comprender estos circuitos ayuda a los
inmaduro y en cambio, en el adulto, inmu- científicos a desarrollar nuevas terapias para
nológicamente maduro, eran extremadamente muchos y serios desórdenes.
heterogéneos. De esto concluyó que la hetero- La biología molecular, en especial la genética,
geneidad era el resultado de la recombinación establecieron que la estimulación específica de los
somática de los genes para las regiones v, j y c. A genes nucleares se traduciría en proteínas
esta heterogeneidad contribuye también una alta específicas en el citoplasma. Éstas eran con
tasa de mutaciones espontáneas en este sistema. frecuencia, enzimas hidrolíticas y el citoplasma
Podríamos decir que la inmunología clásica parecía un saco de enzimas y otras moléculas. Un
termina con el descubrimiento de las bases de la sistema así no permitiría trasmitir las proteínas
especificidad de los trasplantes de tejidos. Era un inducidas. Y es característico de los seres vivientes
hecho conocido en los mamíferos que sólo los que los sistemas de comunicación intracelular, a
autotrasplantes se establecen: los alotrasplantes diferencia de las comunicaciones extracelulares,
- entre individuos de la misma especie - son se transmiten sin ningún error. Cuando se
siempre rechazados. Con mayor razón, los producen errores -mutaciones- las funciones
trasplantes entre diferentes especies - los metabólicas y orgánicas funcionan mal, o los seres
heterotrasplantes, no prenden: o sea, que los mutantes, mueren. De lo cual se deduce que en el
organismos reconocen “lo propio” y lo distinguen interior de las células existen caminos exactos
de lo ajeno. Debemos a George Snell el entre las moléculas mensajeras vgr. un antígeno,
descubrimiento de las bases de este fenómeno: los y los receptores específicos para ellas. A esta unión
genes de histocompatibilidad y, en especial, una se sigue un complejo grupo de señales moleculares
familia de ellos, los genes mayores (MHC), HLA que llega hasta el núcleo. En éste, un gen específico
y H.2 en el hombre y el ratón, respectivamente. se activa y su acción se traduce en la producción
Las diferencias entre dador y receptor entre éstos y secreción de la proteína que él determina.
provoca el rechazo del injerto en no más de 10 a Para que esto ocurra, los mensajeros cruzan
12 días, los otros genes H, determinan rechazos cada una de las estructuras celulares protegidas
42
Sin título-2 42 5/26/06, 10:25 AM

de la destrucción enzimática por su unión con
moléculas de algunos sistemas que no son
hidrolizables. Entre éstos y muy importantes, son
los antígenos mayores de histocompatibilidad
(MHC). Se sabe que las moléculas MHC de clase
1 pueden asociarse a receptores de superficie para
diversas hormonas -beta-adrenérgicas, insulina,
interleuquina -2, endorfinas y otras. Ligado a este
problema está el hecho que los linfocitos
citotóxicos sólo se activan si son portadores en la
superficie de antígenos de clase 1. Los antígenos
solubles a su vez, pueden penetrar al citoplasma
unidos a antígenos MHC de clase 2 de aquí
vuelven a la superficie celular donde las
inmunoglobulinas circulantes y el complemento
los eliminan a través de los macrófagos.
Este no es solamente un caso especial para el
sistema inmunológico sino que un proceso
continuo para todas las funciones celulares y puede
decirse que todos los sistemas están inter-
conectados incluido el sistema nervioso.
Como último comentario, creo poder predecir
que en este siglo y en base a información
inmunogenética y técnicas moleculares ya en uso,
cambiará substancialmente la farmacología: se
fabricará vacunas de DNA o RNA, se inoculará
genes para la producción de anticuerpos y células
específicas, adecuadas para la mayor parte de las
enfermedades infecciosas, bacterianas,
parasitarias, virales y autoinmunes. Como
resultado, el hombre vivirá unos cuantos años más
y aparecerán otras enfermedades o disfunciones
todavía no conocidas o estudiadas. Tendrán buena
tarea los jóvenes inmunólogos clínicos.
LECTURAS SUGERIDAS
Hoecker, G., Counce Sh., Smith, P., The antigens

determined by the H-2 locus. A rhesus-like
system in the mouse, Proceedings of the National
Academy of Sciences, 1954; 40: 1040 - 1051.
Monod, J., Le hasard et la necessité. Essai sur

la philosophie naturelle de la biologie moderne,
Editions du Seuil, Paris, 1975.
Scott J. D., Pawson R., “Cell communication: the

inside story”, Scientific American, 2000, pp. 54 -
61.
43
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44
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Capítulo 2
HISTORIA DE LA INMUNOLOGÍA
Iván Palomo G. y Arturo Ferreira V.
1. Introducción
2. Dos siglos de inmunología
2.1. Inmunidad
2.2. Serología
2.3. Inmunoquímica
2.4. Inmunobiología
3. Premios Nobel
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RESUMEN
La Inmunología tiene una historia de aproximadamente 200 años, los que se pueden separar
en dos períodos: 1796-1958 y 1959 a la fecha. Este último período se ha caracterizado por impor-
tantes avances en el conocimiento del sistema inmune a nivel molecular.
Veintitrés científicos han obtenido quince Premios Nobel por sus aportes en el campo de la
Inmunología: Boehring, Koch, Erlich, Metchnikoff, Richet, Bordet, Lansteiner, Theiler, Bovet,
Burnet, Medawar, Edelman, Porter, Yalow, Benacerraf, Dousset, Snell, Jerne, Koller, Milstein,
Tonegawa, Doherty y Zinkernagel.
En este capítulo se menciona los avances más importantes en inmunidad, serología,
inmunoquímica e inmunobiología, realizados durante los dos siglos de historia de esta ciencia.
1. INTRODUCCIÓN Metchnikoff que investigó la fagocitosis, Koch que

hizo aportes fundamentales sobre hipersensibili-
El origen de la inmunología se ha relaciona- dad y Landsteiner que demostró la existencia de
do con el descubrimiento de la vacuna contra la varios sistemas antigénicos en los glóbulos rojos
viruela, hace aproximadamente 200 años (1796), humanos.
aporte realizado por Edward Jenner, un médico Período 1959 a la fecha. Este período, se
rural inglés. Jenner, observó que las personas que inicia con los hallazgos sobre estructura de los
contraían la “vacuna” (erupción viral leve que anticuerpos realizados en 1959 por Porter y
afectaba al ganado y que se transmitía a las orde- Edelman (Premio Nobel en 1972; ver punto 3).
ñadoras), quedaban protegidas contra la viruela. Estas cuatro décadas, llamado período de la
Esta observación le llevó a transferir pus de una Inmunología Molecular, se ha caracterizado por
lesión de vacuna de una ordeñadora, al brazo de la velocidad en la generación de nuevo conoci-
un niño, al cual seis semanas más tarde volvió a miento y tecnología. Durante estos años se han
inocular, pero esta vez con pus tomado de una identificado las moléculas que son propias del sis-
pústula de viruela y el niño no enfermó. tema inmune, y de los genes que las codifican.
En dos siglos de historia de la inmunología Entre los descubrimientos más relevantes de este
se han realizado importantes avances científicos período se pueden citar, la obtención de
en áreas como la serología, inmunidad celular, anticuerpos monoclonales, el conocimiento de la
inmunología molecular e inmunogenética. Por otra genética de las inmunoglobulinas, la descripción
parte, se han postulado y demostrado mecanismos de los genes del Complejo Principal de
inmunológicos que explican la patogenia de en- Histocompatibilidad (MHC). Además, en este pe-
fermedades como las alergias, las inmu- ríodo se realizó el aislamiento de las moléculas y
nodeficiencias, las gammapatías monoclonales y genes de los receptores de células T, de citoquinas
las enfermedades autoinmunes. Además, se han y de moléculas de adhesión celular.
desarrollado áreas como son la inmunofar- Adicionalmente se han conocido importantes as-
macología, la inmunología del cáncer y la pectos moleculares de la activación linfocitaria.
inmunología de trasplante. Por otra parte, estos conocimientos de inmunología
Los doscientos años de historia de la básica han permitido importantes avances en el
inmunología pueden ser divididos en dos perío- conocimiento de la patogenia y tratamiento de di-
dos: 1796-1958 y 1959 a la fecha. ferentes enfermedades inmunes.
Período 1796-1958. Al menos treinta y cin- En este capítulo sólo se hará una relación
co destacados investigadores hicieron contribucio- de los principales investigadores en inmunología
nes seminales en este período. En 1980, casi un indicando una breve descripción de sus contribu-
siglo después que Jenner inmunizara contra la vi- ciones.
ruela, Louis Pasteur realizó importantes investi-
gaciones en relación a la atenuación de vacunas.
Otros investigadores de este período fueron
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2. DOS SIGLOS DE INMUNOLOGÍA KRAUSS, Rudolf. En 1987 observó que los
filtrados de cultivos bacterianos o los extractos de
A continuación se describen, brevemente, los bacterias lisadas, precipitaban con antisueros
aportes realizados por alrededor de setenta cientí- bacterianos.
ficos durante los doscientos años de historia de la BORDET, Jules. Obtuvo el Premio Nobel en
inmunología. Han sido separados en cuatro áreas 1919 (ver punto 3).
(inmunidad, serología, inmunoquímica e VON WASSERMANN, August. En 1906
inmunobiología) y ordenados cronológicamente desarrolló la prueba de fijación del complemento
en cada una de ellas. para el diagnóstico de la sífilis.
En este punto los Premios Nobel sólo serán COONS, Albert. En 1942 desarrolló una téc-
nombrados ya que su aporte se describe en el punto nica de marcación de los anticuerpos basada en la
3. Algunos de ellos son citados en más de un área. unión covalente del isotiocianato de fluoresceína.
COOMBS, Robin. En 1945 desarrolló la
2.1. Inmunidad prueba de antiglobulinas.
OUCHTERLONY, Örjan; OUDIN, Jacques
JENNER, Edward. En 1796 realizó la inmu- y ELECK, Stephen. Entre 1946 y 1948 desarro-
nización contra la viruela. llaron pruebas de inmunodifusión.
PASTEUR, Louis. En 1880 describió lo que GRABAR, Pierre y WILLIAMS, Curtis. En
representó la primera vacuna atenuada. Observó 1953 modificando la prueba de inmunodifusión
que los cultivos viejos del bacilo del cólera, al ser en gel, desarrollaron la técnica de inmu-
inoculados en aves no provocaban la enferme- noelectroforesis.
dad. Por otra parte, describió que la incubación de YALOW, Rosalyn. Obtuvo el Premio Nobel
Bacillus anthracis a 42°C, hacía perder la viru- en 1977 (ver punto 3).
lencia del bacilo. Posteriormente, en 1885, desa-
rrolló una vacuna contra la rabia, atenuando el 2.3. Inmunoquímica
virus causante de la enfermedad.
METCHNIKOFF, Elie. Obtuvo el Premio EHRLICH, Paul. Obtuvo el Premio Nobel en
Nobel en 1908 (ver punto 3). 1908 (ver punto 3).
NUTTALL, George. En 1888 demostró que OBERMAYER, Friedrich y PICK, Ernst. En
la sangre desfibrinada era bactericida por sí mis- 1906 observaron que la nitrificación o yodación de
ma y sugirió que en dicho fenómeno participaría las proteínas, modifican su especificidad serológica.
una sustancia termolábil presente en el suero. ARRHENIUS, Svante. En 1907 acuñó el tér-
VON BEHRING, Emil. Obtuvo el Premio mino inmunoquímica. La primera contribución
Nobel en 1901 (ver punto 3). importante, en esta rama de la inmunología, fue el
EHRLICH Paul. Obtuvo el Premio Nobel en estudio de los haptenos.
1908 (ver punto 3). LANDSTEINER, Karl. Obtuvo el Premio
WRIGTH, Almroth y DOUGLASS, Stewart. Nobel en 1930 (ver punto 3).
En 1903 demostraron que ciertas sustancias pre- MARRACK, John. En 1934 propuso un nue-
sentes en el suero, que denominaron opsoninas, vo modelo de reacción antígeno-anticuerpo, ba-
favorecían la fagocitosis de bacterias. sado en la polivalencia, es decir la presencia de
RAMON, Gastón. En 1923 observó que al varios sitios de combinación, de cada uno de ellos.
tratar las toxinas con formaldehido, éstas perdían HEIDELBERGER, Michael y KENDALL,
sus efectos nocivos y conservaban la actividad F.E. En 1935, diseñaron una técnica de precipita-
antigénica. Los toxoides resultantes comenzaron ción cuantitativa que permitió expresar la canti-
a usarse como vacunas. dad de anticuerpos en mg de proteína por ml, en
THEILER, Max. Obtuvo el Premio Nobel lugar de usar el método de titulación.
en 1951 (ver punto 3). KABAT, Elvin y TISELIUS, Arne. En 1938
ISAACS, Alick y LINDENMANN, Jean. En demostraron que los anticuerpos están en la frac-
1957 describieron el interferón. ción gamma-globulina del suero.
PORTER, Rodney y EDELMAN, Gerald.
2.2. Serología Obtuvieron el Premio Nobel en 1972 (ver punto 3).
GRÜBER, Max y DURHAM, Herbert. En 2.4. Inmunobiología

1896 demostraron la reacción de aglutinación del
Vibrio cholerae y del bacilo de la tifoidea por KOCH, Robert. Obtuvo el Premio Nobel en
antisueros específicos. 1905 (ver punto 3).
WIDAL, Georges. En 1986 desarrolló la RICHET, Charles. Obtuvo el Premio Nobel
prueba de serodiagnóstico para fiebre tifoidea. en 1913 (ver punto 3).
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LANDSTEINER, Karl. Obtuvo el Premio 1901, Von Behring
Nobel en 1930 (ver punto 3). Emil Von Behring (1854-1917) recibió el
VON PIRQUET, Clemens y SCHICK, Bela. primer Premio Nobel en Medicina. Estudió en el
En 1905 estudiaron la Enfermedad del suero. Instituto Koch en Berlín. Entre 1890 y 1892, jun-
Pirquet realizó varios aportes sobre la alergia que to a sus colaboradores, demostró que la inmuni-
siguen siendo válidos. dad contra la difteria y el tétano se basaba en anti-
EHRLICH, Paul. Obtuvo el premio Nobel en toxinas y demostró que la administración pasiva
1908. de sueros antitoxina diftérica y antitoxina tetánica,
PRAUSNITZ, Carl y KÜSTNER, Heinz. En respectivamente, podían curar estas enfermeda-
1921 publicaron sus observaciones sobre la des. Creó así una estrategia terapéutica que sería
reagina, una sustancia de tipo anticuerpo presente usada más tarde en otras patologías.
en el suero y asociada con procesos alérgicos. Hoy
se acepta que la reagina corresponde a la IgE. 1905, Koch
HAUROWITZ, Félix. En 1930 formuló la Robert Koch (1843-1910), médico que ini-
teoría del molde o plantilla para la formación de cialmente investigó sobre el Bacillus anthracis en
anticuerpos. un pequeño pueblo de Alemania y luego trabajó
BOVET, Daniel. Obtuvo el Premio Nobel en en el Instituto Koch en Berlín. Hizo contribucio-
1957 (ver punto 3). nes en metodología de cultivo y aislamiento
BURNET, Macfarlane y MEDAWAR, Peter. bacteriano, y publicó los famosos postulados de
Obtuvieron el Premio Nobel en 1960 (ver punto 3). Koch para probar la etiología. Hizo aportes en
WITEBSKY, Ernest. En 1956 estableció los varias enfermedades pero fueron sus aportes en
criterios para demostrar la existencia de una en- relación a tuberculosis: descripción del
fermedad autoinmune. Micobacterium tuberculosis y la reacción de
SNELL, George; DAUSSET, Jean y tuberculina (fenómeno de hipersensibilidad retar-
BENACERRAF, Baruj. Obtuvieron el Premio dada), los que le hicieron merecedor del Premio
Nobel en 1980 (ver punto 3). Nobel.
MILSTEIN, César; KÖHLER, George y
JERNE, Nils. Obtuvieron el Premio Nobel en 1984 1908, Metchnikoff y Ehrlich
(ver punto 3). Elie Metchnikoff (1845-1916) nació en Ru-
TONEGAWA, Susumu. Obtuvo el Premio sia y estudió zoología. En 1884, trabajando en un
Nobel en 1987 (ver punto 3). laboratorio de biología marina en Italia, realizó
DOHERTY, Peter y ZINKERNAGEL, Rolf. las observaciones iniciales sobre células
Obtuvieron el Premio Nobel en 1996 (ver punto 3). fagocíticas de estrella de mar, que le permitieron
JANEWAY, Charles; MEDZHITOV, Rusian desarrollar la teoría de inmunidad celular
y PRESTON-HURLBURT, Paula. En 1997 (fagocitosis; ver capítulos 3 y 4). Después siguió
(Nature, 388:394-397) comunicaron la existencia investigando sobre fagocitosis en el Instituto
en humanos de la proteína Toll, homóloga a la Pasteur en París.
descrita en Drosophila y que induce respuesta in- Paul Ehrlich (1854-1916), nació en Alema-
mune natural y adquirida. Se trata de una proteína nia y estudió Medicina. Realizó aportes en las
de transmembrana que presenta un dominio áreas de inmunidad, serología e inmunobiología.
extracelular rico en leucina y otro citoplasmático Ehrlich desarrolló varias tinciones citoquímicas
homólogo al que presenta el receptor de en tejidos; desarrolló las tinciones más usadas
interleuquina 1 (IL-1R). Ambas proteínas en hematología para teñir las células sanguíneas.
transducen señales a través de NF-kB. Este ha- En 1891, siendo asistente de Koch, comenzó a
llazgo ha significado el primer ejemplo de una realizar estudios inmunológicos. En 1897 hace
conexión a nivel molecular entre el sistema inmu- su primera contribución a la inmunología des-
ne innato y adaptativo. cribiendo un método para estandarizar la pre-
paración de toxina y anti-toxina diftérica.
3. PREMIOS NOBEL Ehrlich hizo contribuciones teóricas sobre la
formación de anticuerpos; postuló la hipótesis
Entre 1901 y 1996 veintitrés científicos han de las cadenas laterales. También planteó algu-
obtenido el Premio Nobel por sus aportes a la nos mecanismos en la patogenia de hemólisis
inmunología y temas afines (tabla 2-1). inmune. Más adelante hizo importantes aportes
A continuación se indican algunos anteceden- en el tratamiento de tripanosomiasis y sífilis.
tes sobre los Premios Nobel otorgados a científi-
cos que han hecho aportes significativos en
Inmunología:
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Tabla 2-1. Premios Nobel por investigaciones en Inmunología
Año Investigador Aporte
1901 Emil von Behring Terapéutica con antisueros

1905 Robert Koch Tuberculosis
1908 Paul Ehrlich Teorías sobre inmunidad
Elie Metchnikoff Fagocitosis
1913 Charles Richet Mecanismo de la Anafilaxia
1919 Jules Bordet Acción bactericida del Complemento
1930 Karl Landsteiner Grupos sanguíneos humanos
1951 Max Theiler Vacuna contra la Fiebre amarilla
1957 Daniel Bovet Antihistamínicos
1960 Macfarlane Burnet y Tolerancia inmunológica
Peter Medawar
1972 Gerald Edelman y Estructura química de
Rodney Porter las inmunoglobulinas
1977 Rosalyn Yalow Radioinmunoanálisis
1980 Baruj Benacerraf, Inmunogenética e Histocompatibilidad
Jean Dausset y
George Snell
1984 Niels Jerne Teoría selectiva
Red idiotipo/anti-idiotipo
Georges Koller y Tecnología del hibridoma
César Milstein
1987 Susumu Tonegawa Genética de las inmunoglobulinas
1996 Peter Doherty y Restricción genética de la respuesta inmune
Rolf Zinkernagel
1913, Richet poliomielitis se podía producir en primates no

Charles Richet (1850-1935). Nació en París, humanos y uno de los primeros en hacer la misma
Francia y estudió Medicina. Interesado en la fisio- observación en sífilis. Por otra parte, contribuyó
logía estudió el efecto del veneno de invertebrados a entender las bases químicas de las interacciones
marinos sobre mamíferos. Junto a Paul Portier des- antígeno-anticuerpo.
cribió la Anafilaxia (ver capítulos 21 y 22). Así
mostró que los mecanismos protectores de la in- 1951, Theiler
munidad también podrían causar enfermedad. Max Theiler (1899-1972), nació en Sudáfrica,
estudió Medicina en Inglaterra y luego viajó a Es-
1919, Bordet tados Unidos. Demostró que la Fiebre amarilla era
Jules Bordet (1870-1960) fue un médico na- causada por un virus filtrable; luego obtuvo virus
cido en Bélgica. Siendo joven fue a estudiar con atenuados y logró inmunizar contra esta infec-
Metchnikoff en el Instituto Pasteur en París. Hace ción. Sus estudios permitieron obtener la actual
importantes contribuciones al entendimiento del vacuna contra la Fiebre amarilla.
mecanismo bactericida mediado por complemen-
to (ver capítulo 18). En 1899 describe el fenóme- 1957, Bovet .
no de hemólisis específica. Luego, junto a Octave Daniel Bovet (1907- ), fisiólogo y farmacólo-
Gengou, describe el fenómeno de fijación de com- go. Trabajó con Emile Roux en el Instituto Pasteur
plemento y sus posibilidades diagnósticas. (París) en la respuesta del sistema nervioso autó-
nomo a varios productos químicos. Se interesó en
1930, Landsteiner sustancias que pudieran oponerse a la acción de la
Karl Landsteiner (1868-1943), médico de histamina y desde allí surgieron drogas
Viena. En 1901, estudiando anticuerpos antihistamínicas para el tratamiento de alergias
antieritrocitarios identificó el sistema antigénico (Asma y Fiebre del heno) (ver capítulos 21 y 22).
ABO en los glóbulos rojos (ver capítulos 4 y 26).
Posteriormente, en 1926, con Philip Levine des- 1960, Burnet y Medawar
cribe el sistema MNP y en 1940 con Alexander Macfarlane Burnet (1899-1985), médico aus-
Wiener describe el sistema Rh. En otro orden, traliano. Alrededor de 1950 Burnet junto con
Landsteiner fue el primero en demostrar que la proponer una teoría sobre la formación de
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anticuerpos (teoría de la selección clonal), postu- detección de diferentes antígenos en el orden de
ló que la respuesta inmune se desarrolla tardía- los nanogramos o picogramos ( ver capítulo 40).
mente durante la vida embrionaria e involucra un
sistema de reconocimiento de lo propio y lo ex- 1980, Benacerraf, Dausset y Snell
traño. En otras palabras planteó que el autorre- Se les otorgó el Premio Nobel a Benacerraf,
conocimiento (tolerancia a los antígenos propios) Dausset y Snell por sus trabajos en moléculas
sucede en la vida neonatal por contacto de las cé- genéticamente determinadas en la superficie ce-
lulas formadoras de anticuerpos con nuevos lular y que regulan las reacciones inmunológicas.
antígenos; cuando el feto sintetiza estas células George Snell (1903-1996) a mediados de la
por primera vez. década del cuarenta desarrolló cepas congénicas
Peter Medawar (1915-1987), inicialmente se de ratones, las que sólo se diferencian en un locus
interesó en la reparación de tejidos y problemas génico. Junto con Peter Gorer, comprobaron que
asociados a los trasplantes. Algunos años después los genes controlan la síntesis del antígeno II, de-
comprobó la teoría postulada por Burnet en ex- nominado posteriormente H-2; hoy conocido
perimentos realizados en ratones. como Complejo Principal de Histocompatibilidad,
clase II (MHC-II) (ver capítulo 8). Además de-
1972, Porter y Edelman mostraron que de estos antígenos depende el éxi-
Rodney Porter (1917-1985) de la Universi- to o el fracaso de los injertos entre ratones
dad de Oxford y Gerald Edelman (1929- ) de la congénicos. En los experimentos que condujeron
Universidad Rockefeller. Recibieron el Premio a estos fundamentales hallazgos participó Gusta-
Nobel por sus trabajos en la estructura química de vo Hoecker S, profesor e inmunólogo chileno, y
los anticuerpos (inmunoglobulinas). Ambos tra- Premio Nacional de Ciencias 1989.
bajaron con la misma inmunoglobulina, hoy co- Jean Dausset (1916- ), francés, descubrió que
nocida como IgG, pero cada investigador la trató los pacientes que reciben múltiples transfusiones
con diferentes métodos analíticos. sanguíneas producen isoanticuerpos contra los
Porter empleó diferentes enzimas; en 1958, leucocitos del dador. Dichos anticuerpos reaccio-
a partir de la molécula IgG purificada, utilizando nan con los antígenos de superficie de los
papaína obtuvo dos fragmentos Fab (fragmento leucocitos del dador (HLA, «human leukocyte
que une antígeno) iguales y un fragmento Fc (frag- antigen») (ver capítulo 8) o con el mismo antígeno
mento cristalizable) (ver capítulo 6). en los leucocitos de otras personas. Poco después
Edelman, a partir de IgG de Mieloma Múlti- se relacionó la producción de una respuesta in-
ple (ver capítulo 27) y utilizando urea (reductor), mune a los HLA con los rechazos de injertos (ver
obtuvo la separación en cadenas pesadas (H) y li- capítulo 38).
vianas (L) (ver capítulo 6). También demostró que Baruj Benacerraf (1920- ) y colaboradores
diferentes anticuerpos de cerdos guinea tenían dis- demostraron que otros genes presentes en el locus
tinta movilidad electroforética. del Complejo Principal de Histocompatibilidad,
Luego Porter y colaboradores demostraron en la región I, también participan en el control de
que cada molécula de inmunoglobulina estaba for- la respuesta inmune.
mada por dos cadenas H y dos cadenas L.
Posteriormente Porter, Edelman y otros in- 1984, Milstein, Köhler y Jerne
vestigadores realizaron la primera secuenciación César Milstein (1927- ) y George Köhler
aminoacídica parcial de las cadenas de los (1946-1995) en la década del setenta desarrolla-
anticuerpos. En 1969 Edelman y colaboradores ron la metodología para obtener anticuerpos
realizaron la secuenciación aminoacídica completa monoclonales (ver capítulo 44). Henry Kunkel y
de la molécula de inmunoglobulina, lo que ayudó colaboradores (1955) mostraron que los mielomas,
a definir sus diferentes dominios funcionales. tumores de células plasmáticas (ver capítulo 27)
producían anticuerpos monoclonales; en 1962
1977, Yalow Michael Potter mostró que dicho tumor podía ser
A comienzos de la década del 50, Rosalyn inducido en ratones y otros mostraron que podían
Yalow (1921- ) junto a su colaborador Solomon crecer indefinidamente en cultivo.
Berson, estudiaron las causas de la resistencia a la En 1974 Köhler inició un postdoctorado en
insulina en la diabetes. Demostraron la formación el laboratorio de Milstein en Cambridge; ambos
de anticuerpos anti-insulina; el complejo antígeno- emprendieron la tarea de inmortalizar células
anticuerpo lo pudieron medir desarrollando un formadoras de anticuerpo por fusión con células
método inmunorradiométrico de competencia en de mieloma, con el propósito de estudiar las ba-
que marcaban con un isótopo el antígeno. Este ses genéticas de la diversidad de los anticuerpos.
método ha servido de base a las técnicas de Para ello usaron una línea celular mutante de
radioinmunoanálisis actualmente usadas para la mieloma deficiente en la enzima hipoxantina
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fosforibosiltransferasa; células que mueren en un venía otro segmento génico adicional a V y J que
medio que contiene hipoxantina, aminoptirina y denominaron D (“diversity”, diversidad) (ver ca-
timidina (medio HAT), pero las células híbridas pítulo 6). Los trabajos de Tonegawa han tenido
(hibridomas) sobreviven, pudiendo ser seleccio- repercusión en el conocimiento de la variabilidad
nadas. Éstas sintetizan anticuerpos con una única genética de los receptores de linfocitos T (TCR).
especificidad (anticuerpos monoclonales) en for-
ma indefinida. Los anticuerpos monoclonales han 1996, Doherty y Zinkernagel
sido una poderosa herramienta en el estudio A Peter Doherty (1940- ) y Rolf Zinkernagel
molecular de diversas macromoléculas y su apli- (1944- ) se les otorgó el Premio Nobel por la de-
cación se realiza tanto en ciencias básicas como mostración de la restricción MHC en el reconoci-
en clínica. miento de antígenos virales sobre células infecta-
Nils Jerne (1912-1994) realizó varias contri- das, por parte de los linfocitos T citotóxicos. En
buciones a la inmunología. Principalmente hizo la década del setenta Doherty y Zinkernagel reali-
aportes teóricos. En 1955 fue el primer científico zaron experimentos en un sistema in vitro que
moderno que planteó la teoría selectiva para la permitía medir la capacidad de células efectoras
formación de los anticuerpos, en la cual el antígeno de destruir células blanco infectadas por virus;
selecciona el anticuerpo a partir de un repertorio utilizaron el virus de la coriomeningitis linfocítica
preformado. En 1971 postula una hipótesis sobre (LCMV) que infecta ratones. Cuando los dos ti-
el desarrollo de especificidades del repertorio de pos celulares (linfocito T citotóxico y célula blan-
células T; dice que el principal estímulo para que co) pertenecían a la misma cepa de ratón, la muerte
los linfocitos se dividan en el timo son los fue eficiente. En cambio cuando ambas células
antígenos MHC. En 1974 desarrolla la teoría más pertenecían a ratones con diferente haplotipo
importante; predijo que cada molécula de anticuer- MHC, la destrucción de las células blanco gene-
po tiene una región inmunogénica específica lla- ralmente no ocurre. Ellos concluyeron que la cé-
mada marcador idiotípico, que estimularía la for- lula efectora debía reconocer dos señales sobre la
mación de un segundo anticuerpo que reacciona- célula infectada, una derivada del virus y otra de
ría con ese marcador y así sucesivamente (red las moléculas MHC presentes en la célula blanco
idiotipo-anti-idiotipo), pudiendo representar uno (ver capítulo 9)
de los principales mecanismos reguladores de la
respuesta inmune (ver capítulo 14).
LECTURAS SUGERIDAS
1987, Tonegawa
Susumu Tonegawa (1939- ) recibió el Pre- Barret, J., Inmunología médica, Capítulo 1, Quin-
mio Nobel por sus trabajos en biología molecular ta edición, Ed. Interamericana, México, 1990.
de los genes de inmunoglobulinas, mostrando
cómo se genera la diversidad de las inmu- Hoecker, G., “Los Complejos Mayores de
noglobulinas. Histocompatibilidad”, Universum, año 9:61-72,
En 1965 Dreyer y Bennett propusieron que 1994.
podría ser necesario menos DNA para codificar
las diferentes especificidades de las Silverstein, A., A history of Immunology,
inmunoglobulinas si múltiples genes para regio- Appendix B and appendix C, Ed. Academic Press
nes variables (V) se combinaban con un único gen Inc., California, 1988.
para región constante (C) (ver capítulo 6).
En 1976 Tonegawa y Hozumi confirmaron Silverstein, A., “The history of Inmunology” en
la hipótesis de Dreyer y Bannett; demostraron que Fundamental Immunology, Chapter 2, Ed. Paul
en el DNA embrionario los segmentos génicos V W., Leppincott-Raven, Publisher, 1999.
y C estaban separados. Luego Tonegawa, Gilbert
y Maxam mostraron, en diferentes células, que Stites, D. and Terr, A., Basic and Clinical
estos dos genes estaban aún separados por DNA Inmunology, Chapter 1, Seventh edition, Ed.
no codificante (intron). Más adelante, Tonegawa Appleton & Lange, USA, 1991.
y Philip Leder, encontraron que la secuencia
amininoacídica de la región V de la cadena L te-
nía más aminoácidos que los codificados por los
segmentos génicos V. Tonegawa y colaboradores
pronto encontraron el segmento restante que lla-
maron J (“joining”, unión). Posteriormente
Tonegawa y Leroy Hood describieron que en el
caso de la región variable de las cadenas H, inter-
52
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Capítulo 3
CÉLULAS Y ÓRGANOS DEL SISTEMA INMUNE
Iván Palomo G., Jaime Pereira G. y Cecilia Koenig S.
1. Introducción
2. Células del sistema inmune
2.1. Hematopoyesis
2.2. Linfocitos
2.3. Sistema fagocítico mononuclear
2.3.1. Monocitos
2.3.2. Macrófagos
2.3.3. Células dendríticas
2.4. Granulocitos
2.4.1. Neutrófilos
2.4.2. Eosinófilos
2.4.3. Basófilos
3. Órganos linfoides
3.1 Órganos linfoides primarios
3.1.1. Médula ósea
3.1.2. Timo
3.2. Órganos linfoides secundarios
3.2.1. Ganglios linfáticos
3.2.2. Bazo
3.2.3. Tejido linfoide asociado a
mucosa
4. Tránsito linfocitario
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RESUMEN
Las células del sistema inmune que incluyen linfocitos, granulocitos y monocitos-
macrófagos, se forman en la médula ósea a partir de células pluripotentes, a través de un proceso
finamente regulado y en el que participan varias citoquinas.
Los linfocitos son las células que participan en la inmunidad adquirida o específica. Las
células T participan en la inmunidad celular y las células B en la inmunidad humoral. Una tercera
subpoblación de linfocitos, las células NK, participan en la inmunidad celular de tipo innata.
Las células del Sistema Fagocítico Mononuclear (monocitos, macrófagos y células
dendríticas) tienen como función fagocitar, actividad más desarrollada en los macrófagos, que
son células tisulares derivadas de los monocitos circulantes.
Los granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos) presentan particularidades
morfológicas y funcionales. La principal función de los neutrófilos es su capacidad fagocítica.
En el capítulo se explican los procesos de activación, quimiotaxis, fagocitosis y bacteriolisis.
Los órganos linfoides se pueden clasificar en primarios (timo y médula ósea) y secunda-
rios (bazo, ganglios linfáticos y tejido linfoide asociado a mucosas). En el timo maduran los LT
y en la médula ósea los LB. En los órganos linfoides secundarios, los linfocitos toman contacto
con los antígenos y es en ellos donde se genera la respuesta inmune específica (células efectoras
y de memoria). En estos órganos existen zonas ricas en células B, y otras en que, principalmente,
existen células T.
La capacidad de los linfocitos de recircular entre los órganos linfoides secundarios, vasos
linfáticos, conducto torácico y vasos sanguíneos le permiten tomar contacto con antígenos en
diferentes lugares del organismo.
1. INTRODUCCIÓN la médula ósea, órgano en que ocurre la

hematopoyesis, proceso por el cual se forman, di-
El sistema inmune humano, y de los ferencian y maduran las células sanguíneas.
vertebrados en general, consiste en varios órga-
nos y diferentes tipos de células, que le permiten 2.1. Hematopoyesis
al organismo distinguir lo propio y eliminar lo
extraño. En el feto la hematopoyesis ocurre en el hí-
En este capítulo se revisan los aspectos fun- gado y en el bazo. A partir del nacimiento se sus-
damentales de las células del Sistema Inmune, que pende este proceso en esos órganos y se incrementa
participan en la inmunidad específica e en la médula ósea, sitio donde había comenzado
inespecífica (ver capítulo 4), y los órganos que en los últimos meses de gestación. En la médula
componen este sistema, tanto los que participan ósea tres aspectos son importantes a considerar:
en la producción y maduración celular, como los (a) la estructura anatómica (ver punto 3.2.1): dis-
que sirven para encuentro de las células del siste- posición tridimensional de vasos sanguíneos y di-
ma inmune con los antígenos. ferentes tipos celulares; (b) el estroma: incluye va-
rios tipos celulares, (fibroblastos, adipocitos,
2. CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNE macrófagos, linfocitos y células endoteliales de
los sinusoides) y macromoléculas de la matriz
Las células del sistema inmune incluyen extracelular (colágeno, fibronectina, laminina,
linfocitos y diferentes células fagocíticas, organi- hemonectina, tenascina, trombospondina y
zadas en los tejidos linfoides. Las células del sis- proteoglicanos).
tema inmune derivan de células pluripotentes de En la médula ósea las células hemato-
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poyéticas se distribuyen en tres compartimientos eritroblástica se reconocen las etapas,
morfo-funcionales: (a) compartimiento de células proeritroblasto, eritroblasto basófilo, eritroblasto
madres, (b) compartimiento mitótico o de división poliromatófilo, eritroblasto ortocromático,
y (c) compartimiento de maduración – almacena- reticulocito y glóbulo rojo. En la línea linfoide, a
miento (figura 3-1). partir de la CFU-L, después de un proceso de di-
Figura 3-1. Compartimientos celulares en la médula ósea. Se distinguen 3 compartimientos morfo-funcionales: de células
madres (“stem cells”), mitótico y de maduración – almacenaje. En la figura, los dos últimos compartimientos ejemplifican la serie
granulótica, representándose el tamaño relativo de los diferentes compartimientos.
Las células del compartimiento “stem cell” ferenciación y maduración se originan los
(de células madres) corresponden a menos del 1% linfocitos T y linfocitos B.
de las células de la médula. No son identificables En el proceso de diferenciación y madura-
morfológicamente, por lo que deben ser estudia- ción de las diferentes líneas celulares, participan
das en cultivos in vitro. La “stem cell” o célula varios factores de maduración y citoquinas
madre pluripotente, también denominada CFU- secretadas por células del estroma (ver capítulo
ML (Unidad formadora de colonias mieloides y 11). Existen factores que actúan sobre progenito-
linfoides) tiene la capacidad de dividirse y res de multilinaje: “Kit ligand”, GM–CSF (CSF:
autoperpetuarse. Da origen a dos líneas celulares Factor estimulador de colonias), G-CSF,
principales, mieloide y linfoide (figura 3-2). En la interleuquina (IL)-3, IL-4, IL-6, IL-11, IL-12, “Flt-
línea mieloide, a partir de la CFU-GEMM 3 ligand”, Factor inhibidor de leucemia (LIF),
(granulocítica, eritroide, monocítica y Oncostatin (OSM). Algunos de estos factores par-
megacariocítica) se producen dos diferentes CFU ticipan también en la maduración de algunas lí-
“encomendadas”, CFU-GM (granulocito, neas celulares en particular. Entre los factores de
monocito) y CFU-MegE (megacariocito, maduración de los granulocitos y monocitos, se
eritroide); posteriormente se generan las CFU-G, reconocen a GM-CSF; G-CSF favorece la madu-
CFU-M, CFU-E, CFU-Meg. En el compartimiento ración a neutrófilos, M-CSF a monocitos, IL-5 a
mitótico, a partir de las CFU de las líneas celula- eosinófilos y “Kit ligand” a basófilos. Por su par-
res específicas antes mencionadas, se generan las te, el regulador fisiológico de la maduración
primeras células reconocibles morfológicamente eritroide es la eritropoyetina (EPO) y de los
de cada línea celular: mieloblasto en el caso de megacariocitos la trombopoyetina (TPO) también
los granulocitos, que posteriormente madurará a denominada “mpl-ligand”. “Kit ligand” también
promielocito y luego a mielocito etapa en la cual parece tener participación en la maduración
se diferencian las tres líneas específicas de los eritroide.
granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos); En la línea linfoide B, que a diferencia de los
las etapas posteriores de maduración de los linfocitos T, maduran en la médula ósea, el factor
granulocitos corresponden a juveniles, bacilifor- de maduración es la IL-7.
mes y segmentados. Por su parte, la serie monocí- Las células de las diferentes líneas hematopo-
tica madura en las etapas de monoblasto y monoci- yéticas presentan receptores para los factores de
to. De la CFU-Meg, la línea megacariocítica se maduración antes nombrados. En la tabla 3-1 se
reconoce las etapas de megacarioblasto, resumen los principales factores maduración
megacariocito y plaquetas; por su parte en la serie hematopoyéticos y sus receptores.
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Figura 3-2. Esquema de la Hematopoyesis. La célula madre pluripotencial autoperpetuable, da origen a una célula pluripotencial,
también denominada CFU-ML (Unidad formadora de colonias mieloides y linfoides), de la que se originan: a) el progenitor
mieloide (CFU-GEMM), a partir del cual por procesos de maduración y diferenciación se originan los granulocitos (neutrófilos,
eosinófilos y basófilos), monocitos, eritrocitos y plaquetas; y b) el progenitor linfoide (CFU-L), que después de un proceso de
maduración y diferenciación, da origen a los linfocitos T y linfocitos B. Se muestra los puntos de acción de las citoquinas (IL-1, IL-
3, IL-6 e IL-7) y factores estimuladores de colonias (CSF) específicos, que participan como factores reguladores de la granulopoyesis
y linfopoyesis. EPO, eritropoyetina; TPO, trombopoyetina.
Tabla 3-1. Factores de maduración hematopoyéticos y sus receptores
Factor Receptor
Eritropoyetina (EPO) EPOR

Kit ligand (KL) “Kit”
Interleuquina-1, etc. (IL-1, etc.) “IL-1 receptor”
Factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) “G-CSF receptor”
Factor estimulador de colonias de granulocitos-
macrófago (GM-CSF) “G-CSF receptor”
Factor estimulador de colonias de monocito-macrófago
(M-CSF, CSF-1) CSF-1R
Interferón (IFN) α, β, γ “IFN-α, β, γ receptor”
Trombopoyetina (TPO, mpl, ligand) mpl
Factor inhibidor de leucemia (LIF) “LIF receptor”
Oncostatin M (OSM) “OSM receptor”
Factor de crecimiento transformante α (TGF-α) “EGF receptor”
Factor de crecimiento tipo insulina (IGF-1) IGF-1R
“Flt-3 ligand” (FL) Flt-3, STK
“Flk-1 ligand” Flk-1
2.2. Linfocitos
Los linfocitos, junto con las células presentadoras linfocitos son uno de los tipos de células mejor
de antígeno (CPA) son la base celular de la res- estudiadas. Dado que una parte importante del li-
puesta inmune específica. Actualmente los bro trata sobre la inmunidad específica y, por lo
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tanto, sobre la ontogenia y función de las diferen- Los denominados "linfocitos activados" co-
tes subpoblaciones de linfocito, en este capítulo el rresponden a linfocitos asociados a una respuesta
tema será tratado sólo en sus aspectos generales. inmune. Estos linfocitos estimulados antigénica-
mente se caracterizan por presentar citoplasma
Características generales abundante, hiperbasófilo (azul intenso) y de bor-
des irregulares.
Los linfocitos constituyen aproximadamente A la microcospía electrónica de barrido, los
el 20-25% de los leucocitos circulantes en el adul- linfocitos en reposo presentan una superficie lisa;
to (tabla 3-2). Desde el punto de vista morfoló- que se hace irregular (velluda) al estar activados.
gico, en frotis sanguíneo teñido con May Los linfocitos, al igual que otros leucocitos,
Grünwald-Giemsa se distinguen dos tipos: los se pueden movilizar. Inicialmente se forma un
linfocitos pequeños (7-9 µm) que presentan una pseudópodo que rodea la célula y al contraerse
relación núcleo/citoplasma alta y representan la empuja el núcleo hacia delante quedando una cola
mayoría, y los linfocitos grandes (11-20 µm), citoplasmática llamada urópodo (ura: cola, podi:
que presentan citoplasma más abundante (figura pie), presentando la célula un aspecto de espejo
3-3). El núcleo generalmente es redondo u oval de mano o pera. La velocidad es de aproximada-
y compuesto predominantemente de heterocro- mente 20 µm/minuto, la que aumenta cuando la
matina. Los nucléolos pueden no observarse con célula es estimulada. El urópodo, además de per-
tinción de May Grünwald-Giemsa. En los mitir el movimiento facilita las interacciones con
linfocitos grandes puede observarse gránulos otras células (linfocitos, macrófagos), etc.
citoplasmáticos (linfocitos granulares grandes). Los linfocitos además de presentar diferen-
Tabla 3-2. Leucocitos normales en sangre periférica del humano adulto normal
Tipo de célula % Número absoluto (/µL)
Leucocitos (totales) 4 - 10 x103

Neutrófilos 60-65 2 - 7 x103
Eosinófilos 0-4 0 - 0,4 x103
Basófilos <1 0,1 - 1 x103
Monocitos 4-10 0,2 - 0,8 x103
Linfocitos 20-25 1,5 - 3,5 x103
cias morfológicas son un grupo heterogéneo es-

tructural y funcionalmente. Se dividen en tres gru-
pos funcionales diferentes: los linfocitos T (LT)
que participan en la inmunidad adquirida de tipo
celular, los linfocitos B (LB) que participan en la
inmunidad adquirida de tipo humoral y las célu-
las NK ("Natural Killer") que no expresan mar-
cadores de células T ni células B y que participan
en la inmunidad natural o innata.
Las células T y B, originadas a partir de la
CFU-L en la médula ósea (figura 3-2), experimen-
tan un proceso de maduración y diferenciación en
el timo y médula ósea (tejido bolsa equivalente en
el humano). La mayor parte de los linfocitos que
Figura 3-3. Esquema de estructura subcelular de un linfo-
se encuentran en la sangre, linfa, ganglio linfático
cito pequeño. En el frotis de sangre teñido con May Grünwald
- Giemsa los linfocitos pequeños presentan un diámetro simi- y timo son linfocitos T, en cambio un mayor por-
lar a los glóbulos rojos (7-9 mm). A la microscopía electrónica centaje de los linfocitos presentes en la médula
se observa nucléolo y un pequeño aparato de Golgi. Además, ósea son linfocitos B; en el bazo y amígdalas el
en su escaso citoplasma presenta algunos ribosomas y un pe-
porcentaje de ambas subpoblaciones es similar.
queño retículo endoplásmico y escasos gránulos.
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Las células plasmáticas generalmente presen- subpoblaciones de células T "helper": LTh1 y
tan forma ovalada. Corresponden a las células LTh2. Los LTh1 secretan IL-2, IFN-γ, IL-3 y es-
efectoras de la línea linfoide B (productoras de timulan la inmunidad mediada por células; los
inmunoglobulinas). El núcleo, con una distribu- LTh2 secretan IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 y favore-
ción radial de la heterocromatina, está ubicado cen la respuesta inmune humoral. Por su parte,
excéntricamente y el citoplasma presenta una gran los linfocitos B se reconocen por la expresión en
cantidad de retículo endoplásmico rugoso que le su membrana de inmunoglobulinas IgM y en al-
otorga la intensa basofilia que le caracteriza al ser gunos casos IgD. Además son CD19+, CD20+,
teñidas estas células con May Grünwald - Giemsa. CD22+ y también expresan moléculas MHC
A nivel perinuclear presenta un desarrollado apa- clase II. Las células NK presentan los siguientes
rato de Golgi (figura 3-4). marcadores: FcγRIII (CD16), CD56 y CD57.
Diferenciación de linfocitos
Los linfocitos se generan a partir de la CFU-

L de la médula ósea (ver punto 2.1) que presenta
desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT) en el
núcleo y expresa CD34, C-Kit y HLA-DR (tipo
de molécula MHC clase II en humanos) en la mem-
brana celular. La línea linfoide B madura en la
propia médula ósea y la línea linfoide T en el timo.
En ambos casos la maduración implica una etapa
independiente de antígeno, que ocurre en la mé-
dula ósea (línea B) y en el timo (línea T), y una
Figura 3-4. Esquema de la estructura subcelular de una etapa dependiente de antígeno que en ambas lí-
célula plasmática. Las células plasmáticas presentan un diá- neas celulares ocurre en los órganos linfoides se-
metro de 10-25 mm. Se ubican principalmente en los órganos
linfoides secundarios y muy raramente en sangre periférica.
cundarios (ver punto 3.2). La maduración de las
células B se puede separar en dos estadios previos
al LB maduro: Pro-B en que las células son TdT+,
En el estudio hematológico de rutina de los CD10+, CD19+, CD24+, CD34+, CD38+ y HLA-
linfocitos sanguíneos sólo se utiliza la tinción de Dr+ y Pre-B se caracterizan por ser TdT+, CD10+,
May-Grünwald-Giemsa, metodología que no per- CD19+, CD20+, CD24+, CD38+ y cadenas µ
mite conocer la línea celular de los linfocitos. En citoplasmáticas + (de IgM; ver capítulo 6). Las
caso de requerirse dicha información, como es el células B maduras presentan el siguiente
caso de diagnóstico diferencial de leucemias, se Inmunofenotipo: CD19, CD20, CD21, CD22,
puede recurrir a tinciones citoquímicas que identi- CD24, CD38, IgM, IgD (no siempre) y FcR.
fican la presencia o ausencia de ciertas enzimas y Las etapas finales de diferenciación de los
otras moléculas en el citoplasma de los linfocitos. LB tienen lugar en periferia, en algún órgano
Más recientemente se utiliza citometría de flujo linfoide secundario (ver punto 3.2) y son antígeno
para identificar las subpoblaciones de linfocitos dependientes. En el punto siguiente se explica muy
(ver capítulo 43). Al respecto, el uso de brevemente el proceso de activación linfocitaria
anticuerpos monoclonales conjugados con que ocurre como consecuencia de la interacción,
fluorocromos permite identificar marcadores de en este caso, entre IgM o IgD de membrana de un
superficie designados con el sistema CD ("clus- LB y el antígeno respectivo. Los LB vírgenes ex-
ter designation") a modo de ejemplo se mues- presan en su membrana IgM y IgD y son CD10-,
tran algunos en la (tabla 3-3) (ver capítulo 45). CD23-, CD38- y CD77-; de tomar contacto con
De esta forma se reconoce como marcadores de el antígeno expresa CD23. Luego, como célula
las células T al complejo CD3 y a las dos precursora del centro germinal en los folículos
subpoblaciones más importantes de esta línea ce- linfoides (ver punto 3.2) el fenotipo que le carac-
lular se les identifica por ser CD4+ (LT "helper") teriza es IgM+, e IgD+, CD10+, CD23-, CD38+ y
o CD8+ (LT citotóxicos). Basándose en el pa- CD77- (figura 3-5). Posteriormente en la zona
trón de secreción de citoquinas, se reconocen dos oscura del centro germinal, las células
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Tabla 3-3. Moléculas CD asociadas a linfocitos
CD Sinónimo Expresión Función(es)
célula
CD2 LFA-2 LT, células NK CAM

CD3 LT Transducción de señales
CD4 LT "helper" Adhesión, transducción de señales
CD7 LT y timocitos
CD8 LT citotóxicos Adhesión, transducción de señales
CD10 CALLA LT inmaduros
CD11b CR3 (α) Granulocitos, CAM. Con CD18 forma Mac-1
monocitos, NK Receptor de iC3b
CD16 FcγRIII Granulocitos, Receptor de baja afinidad para IgG
macrófagos, células NK
CD19 Células B Regulación de activación
CD20 Pre-B y LB ¿Regulación de activación?
CD21 LB Receptor de C3d y virus de Epstein Barr
Ligando de CD23
CD22 LB maduros CAM
CD23 FcεRIIa LB activados Receptor de IgE de afinidad intermedia
CD25 Receptor de IL-2 LT, LB, macrófagos Con cadena 70 KDa forma
baja afininidad Activados receptor alta afinidad IL-2
CD28 LT citotóxicos
CD29 VLA (β) Amplia CAM con CDw49a,b,c,d,e,f
CD35 CR1 Granulocitos, mono- Receptor de C3b
citos, eritrocitos LB
CD40 LB Une CD40-L. Activación de LB.
CD54 ICAM-1 Amplia CAM
CD55 DAF Amplia Regulador del complemento
CD56 NK, algunos LT
CD57 NK, algunos LT
CD, "cluster designation"; CAM, molécula de adhesión celular; LB, linfocitos B; LT, linfocitos T; LFA,
antígeno asociado a función de linfocito; ICAM, molécula de adhesión intercelular; VLA, antígeno muy
tardío; DAF, "Decay Accelerating factor"; NK, células "Natural Killer".
(centroblastos) son IgM+, IgD- CD10+, CD23-, subpoblaciones de células B, LB1 y LB2: Entre
CD38+ y CD77-; luego en la zona clara del mis- otros aspectos la subpoblación B1 presenta recep-
mo centro las células (centrocitos) presentan el tores BcR polirreactivos de baja afinidad y se en-
siguiente fenotipo; IgG+ o IgM+ o IgE+, CD10+, cuentra mayoritariamente en el peritoneo y en el
CD23-, CD38+ y CD77-. Durante la etapa de pre- bazo. La subpoblación B2, constituye la mayor
cursor del centro germinal y centroblasto ocurre parte del repertorio linfocitario B y se encuentra
el fenómeno de mutación somática y entre la eta- fundamentalmente en los órganos linfoides secun-
pa de centroblasto y de centrocito se produce el darios y en la sangre (ver capítulo 6).
fenómeno de cambio de clase (ver capítulo 6). La mayoría de los linfocitos B1 se caracteri-
La última etapa es en la que se generan células za por la expresión del marcador CD5
plasmáticas (IgG+ o IgA+ o IgE+, CD10-, (glicoproteína monomérica de 67 kDa, propia de
CD23-, CD38+ y CD77-) y células de memoria linfocitos T) y aunque su función es todavía un
(IgG+ o IgA+ o IgE+, CD10-, CD23-, CD38- y misterio, se ha sugerido que la activación de estas
CD77-). Por otra parte, se distinguen dos células conduce a la producción de anticuerpos que
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Figura 3-5. Maduración de los linfocitos B en el centro germinal de los folículos linfáticos. Los LB vírgenes toman contacto
con el antígeno en la zona oscura del centro germinal (del folículo linfoide). En esta zona ocurre la expansión clonal y mutación
somática. Luego en la zona clara del centro germinal se produce el cambio de clase, y se generan células B de memoria (recirculan)
y células plasmáticas (algunas migran a la médula ósea). CDF, célula dendrítica folicular.
proporcionan protección contra infecciones Por su parte, la maduración de las células T

bacterianas durante la vida fetal, mucho antes que se puede separar también en dos estadios previos
el repertorio linfocitario de .la respuesta inmune al LT maduro: Pro-T que son TdT+, HLA-DR+,
adquirida sea completamente funcional. Además, CD1+, CD2+, CD5+, CD7+, C-kit+ y CD3
en el repertorio adulto, los linfocitos B1 dan ori- citoplasmático +, y Pre-T que son TdT+, CD1+,
gen a células plasmáticas que secretan IgM y a CD4+, CD5+, CD7+, CD8+, CD3 citoplasmático
una fracción importante de células plasmáticas + (ver capítulo 7). Las células T maduras
productoras de IgA en el intestino. De hecho, la presentan el siguiente inmunofenotipo: CD2+,
transferencia pasiva de linfocitos peritoneales B1 CD3+, CD4+ ó CD8+, CD7+, TCRαβ+ (ver
en ratones Scid (que sufren de una severa capítulo 7). Por otra parte, en base al diferente
inmunodeficiencia combinada), reconstituye la patrón de secresión de citoquinas, se distinguen
producción de IgA contra muchas bacterias intes- dos subpoblaciones de células T “helper” (CD4+),
tinales. Por otro lado la transferencia pasiva de LTh1 y LTh2 (ver capítulos 11 y 14).
células de hígado fetal o del omentum intestinal, Mayores antecedentes sobre la diferenciación de
a ratones irradiados, rápidamente reconstituye la los linfocitos B y T, serán descritos en el capítulo 13.
subpoblación B1, mientras la transferencia de de
precursores de médula ósea adulta reconstituye la Reconocimiento antigénico
subpoblación B2 pero no la B1.
En el repertorio linfocitario adulto, los Los LB y LT presentan receptores para
linfocitos B 1 son bastante frecuentes en la pobla- antígenos específicos, como son la IgM de mem-
ción B que sufre neoplasias y en aquéllos que re- brana que forma parte del BCR (Receptor de cé-
conocen una gran variedad de autoantígenos y re- lulas B) y el TCR (Receptor de células T), respec-
accionan cruzadamente con antígenos bactarianos tivamente (ver capítulos 6 y 7).
como polisacáridos y lipopolisacáridos. El reper- Además de presentar un receptor diferente,
torio de receptores BcR es bastante más limitado las células B y células T reconocen el antígeno en
en los linfocitos B1 que en los linfocitos B2, sus diferente forma; en el caso de los LB las IgM de
reordenamientos génicos VH son más restringi- membrana reconocen el antígeno directamente, sin
dos, y, como no expresan la enzima TdT (Termi- intervención de otra célula, en cambio en el caso
nal deoxinucleotidil Transferasa), carecen de re- de los LT los TCR reconocen péptidos extraños
giones N en las uniones VDJ. que son presentados por otra célula, unidos a mo-
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léculas MHC, clase I si se trata de LTc y clase II
si es LTh. Estos péptidos se originan durante el
procesamiento del antígeno en células blanco
(cuando son presentados en moléculas MHC cla-
se I), y en las denominadas células presentado-
ras de antígeno (cuando son presentados en mo-
léculas MHC clase II). En el capítulo 9 se expli-
ca en detalle el procesamiento de los antígenos a
través de dos vías diferentes (endógena y
exógena) según los péptidos sean presentados a
LTc o LTh. Además se explica el concepto de
restricción MHC.
Las células NK, que no expresan
inmunoglobulinas ni TCR, poseen dos tipos de
receptores: de activación (KAR: "Killer
Activating Receptor") y de inhibición (KIR:
"Killer Inhibition Receptor"). Los KAR recono-
cen patrones moleculares hidrocarbonados carac-
terísticos de microorganismos y los KIR recono-
cen moléculas MHC propias en otras células; si
éstas son propias transducen señales de inhibi-
ción de los mecanismos de citoxicidad (ver capí-
tulo 19). Figura 3-6. Esquema de la selección clonal de las células B
y células T. Luego que un antígeno interacciona con la célula
T y/o B que posee el receptor que le es específico, el linfocito
Activación de los linfocitos es activado, sufriendo una transformación blástica. La activa-
ción linfocitaria lleva a una proliferación clonal y diferencia-
La unión del antígeno con el receptor espe- ción celular con producción de células efectoras y de memo-
cífico de una célula T o B activa al linfocito me- ria, tanto en la línea celular B como T.
diante un delicado proceso bioquímico que im-
plica transducción de señales al interior de la
célula, generación de segundos mensajeros (IP3, 2.3. Sistema fagocítico mononuclear
DAG, Ca2+) y fosforilación de proteínas (ver ca-
pítulo 10). Proteínas fosforiladas, se unen a se- Dada su relación ontogénica, y sus caracte-
cuencias reguladoras de genes que participan en rísticas estructurales y funcionales, a los monocitos
la activación de los linfocitos. Como consecuen- y macrófagos se les agrupa en el denominado Sis-
cia de la activación, el linfocito sufre un proceso tema fagocítico mononuclear (SFM), antes lla-
denominado transformación blástica que im- mado sistema retículo endotelial. Se describirá
plica una serie de cambios estructurales y en este punto a las células dendríticas (DC,
bioquímicos que terminan en la formación de una “Dendritic Cells”) por su origen común, aunque
célula grande, de citoplasma basófilo (por aumen- no son principalmente fagocíticas.
to de retículo endoplásmico), núcleo laxo, seme- Estas células presentan un amplio espectro
jante a un linfoblasto. La activación linfocitaria de funciones: (a) remoción de células muertas,
produce una amplificación clonal (etapa de pro- senescentes, extrañas, y alteradas; (b) regulación
liferación de células con la misma especifici- de la función de otras células; (c) procesamiento
dad antigénica), posteriormente ocurre una pro- y presentación de antígenos; (d) participación en
ducción de células efectoras, responsables de reacciones inflamatorias; (e) destrucción de
la síntesis de anticuerpos (células plasmáticas) y microorganismos y (f) destrucción de células
de la inmunidad mediada por células (LT CD4+ neoplásicas.
y LT CD8+) y células de memoria (estas dos
últimas como parte de la etapa de maduración) 2.3.1. Monocitos
(figura 3-6).
Los monocitos presentan un diámetro de 12-
15 µm (figura 3-7) y representan un 4-10% de los
62
Sin título-2 62 5/26/06, 10:25 AM

leucocitos sanguíneos (tabla 3-2). En su citoplas- (testículo, ovario, útero, oviductos), hueso
ma tienen gránulos azurófilos o primarios que (osteoclastos) e intestino. También se encuentran
contienen hidrolasas ácidas, que junto con los en la leche materna.
mecanismos oxidativos, participan en la destruc-
ción de las partículas fagocitadas; al respecto es Receptores de fagocitos mononucleares
válido lo descrito antes para los neutrófilos.
Los macrófagos y monocitos presentan una
gama importante de receptores: para región Fc
inmunoglobulinas, complemento, lipoproteínas,
citoquinas y factores quimiotácticos, entre otras
moléculas (tabla 3-4).
Las Moléculas de Adhesión Celular (CAM)
participan en las uniones célula-célula y célula-
matriz. En los monocitos y macrófagos, entre otras
moléculas de adhesión se han descrito las molé-
culas LFA1 (CD11a/CD18), Mac-1 (CD11b/
CD18) y p150,95 o CR1(CD11c/CD18) de la fa-
milia integrinas y las moléculas CD2 e ICAM-1
(CD54) de la superfamilia de las inmunoglobulinas
(SFIg) (ver capítulo 12).
2.3.2. Macrófagos
Los macrófagos pueden ser residentes (fijos

en tejidos) o libres. Entre los primeros destacan:
a) Macrófagos intestinales. Los macrófagos se

Figura 3-7. Esquema de la estructura subcelular de encuentran principalmente en la lámina pro-
monocitos y macrófagos. Los monocitos son precursores san- pia del tracto gastrointestinal. Las áreas
guíneos de los macrófagos tisulares. Ambos tipos de células corticales ricas en linfocitos asociados a in-
presentan un núcleo excéntrico arriñonado. En la indentación
presentan el aparato de Golgi. Ambos poseen escasa cantidad
testino (GAL) y las placas de Peyer contie-
de retículo endoplásmico rugoso y las mitocondrias están dis- nen muy pocos macrófagos. Respecto a su
tribuidas en el citoplasma. Los macrófagos son de mayor ta- función podrían participar en la presentación
maño que los monocitos y presentan diferente forma y fun- antigénica, en la fagocitosis de bacterias y
ciones según el tejido en que están ubicados. En los macrófagos
es posible observar microfilamentos, liposomas, gotas de gra-
células muertas.
sa y vesículas endocíticas conteniendo moléculas solubles y b) Macrófagos del hígado. Las células de
partículas de distintos tamaños que han sido internalizadas. Kupffer se ubican en las paredes
vasculares de los sinusoides hepáticos.
Pueden fagocitar un espectro amplio de
Después de salir de la médula ósea los células y partículas, entre ellos, liposomas,
monocitos circulan aproximadamente 8 horas; al bacterias, parásitos, virus, glóbulos rojos
igual que los neutrófilos, en la sangre se recono- y plaquetas opsonizadas con IgG y/o com-
cen dos compartimentos, circulante y marginal; plemento.
luego pasan a los tejidos donde se transforman en c) Macrófagos cerebrales. Estos macrófagos
macrófagos. En relación a los monocitos los son llamados células microgliales. La función
macrófagos son de mayor tamaño y presentan de estos macrófagos no es bien conocida,
mayor capacidad fagocítica y microbicida. Pue- posiblemente participan en la inducción de la
den permanecer vivos entre algunos meses y años. respuesta inmune y probablemente modulen
Se encuentran en varios órganos, destacando su la función neuronal.
presencia en el hígado (células de Kupffer), riño- d) Macrófagos peritoneales. Éstos se encuen-
nes, pulmones (macrófagos alveolares e tran entre los macrófagos de serosas; tienen
intersticiales), serosas (peritoneal y plural) bazo, capacidad para destruir células neoplásicas y
ganglios linfáticos, cerebro, aparato reproductivo bacterias. En casos de peritonitis o ascitis
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Sin título-2 63 5/26/06, 10:25 AM

Tabla 3-4. Receptores de macrófagos y monocitos
Receptores de Inmunoglobulinas
FcγRI (CD64)
FcγRII (CD32): A, B y C
FcγRIII (CD16): A y B
FcεRI
FcεRI
FcεRII (CD23): A y B
FcαR
Receptores del Complemento
CR1 (CD35)
CR3 (CD11b/CD18)
Receptores de Citoquinas
TNF-R
IL-1R
M-CSFR
IFNγR
Receptores de factores quimiotácticos
De péptidos formilados
De quimioquinas
De C5a
Receptor de lipopolisacárido (CD14)
Receptores de lipoproteínas
LDL-R
Receptor “scavenger” (de LDL modificada)
Receptores de hormonas
De Glucocorticoides
De Insulina
De Estrógenos
Otras hormonas
Receptor de transferrina
Receptor de lactoferrina
Receptor de fibronectina
maligna aumenta el número de macrófagos. ganos linfoides secundarios; allí atrapan material
e) Macrófagos de órganos reproductivos. Los extraño: macrófagos de los sinusoides esplénicos
testículos contienen un gran número de y de los senos medulares en los ganglios linfáticos.
macrófagos. Pueden participar en la fago- Los macrófagos tienen una vida vida media
citosis de espermios moribundos no eyacula- mucho más larga que los neutrófilos en los tejidos
dos y en la destrucción de microorganismos. (meses e incluso años).
En los ovarios los macrófagos pueden parti- Una subpoblación de los monocitos y
cipar en la fagocitosis de células degenerativas macrófagos, expresa en su superficie moléculas
del cuerpo lúteo. de clase II del Complejo Principal de
f) Macrófagos del hueso. Los osteoclastos se Histocompatibilidad (MHC), que participan en
encargan de la resorción ósea. la presentación del antígeno a los linfocitos T
g) Macrófagos del tejido conjuntivo: "helper" (LTh) (ver capítulos 8 y 9). Por otra par-
Histiocitos. te, sintetizan y secretan citoquinas como
h) Macrófagos renales. Céluas mesangilales de Interferón (IFN) α y β, IL-1 y Factor de necrosis
los glomérulos renales tumoral (TNF).
Los macrófagos libres están situados en ór-
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Sin título-2 64 5/26/06, 10:25 AM

2.3.3. Células dendríticas receptor de manosa, quimioquina CCR5 (ver
capítulo 11) y FcR, y no expresan la molécula
Junto a los monocitos y macrófagos las DC de adhesión ICAM-1 y molécula coestimuladora
son células presentadoras de antígeno, pero este B7. En el paso a DC maduras participan LPS
último tipo celular es el que presenta una mayor (Lipopolisacárido) de la pared bacteriana,
capacidad, siendo muy eficiente en el inicio y mo- citoquinas como IL-1 y TNFα. Las DC madu-
dulación de la respuesta inmune. Morfológi- ras expresan en su superficie altos niveles de
camente se caracterizan porque del cuerpo celular moléculas MHC clase II, de moléculas
salen prolongaciones alargadas. coestimulatorias (CD40, CD86/B7-2 y B7-1),
Durante su maduración sufren una serie de moléculas de adhesión (ICAM-1 y LFA-3) y
de cambios inmunológico-funcionales que les de receptores para quimioquinas como CCR7
permiten una mayor adaptación a las circuns- (ver capítulo 11).
tancias, así consiguen una mayor especializa- In vivo, factores, tanto de tipo infecciosos
ción en sus funciones de activación de como inflamatorios, influyen en estimular la ma-
linfocitos T. duración y el movimiento de las DC hacia los te-
Se ha demostrado la existencia de distintas jidos linfoides secundarios.
líneas de DC, con diferentes estadios madurativos
y vías de migración, lo que implica una distribu- 2.4. Granulocitos
ción anatómica diferente. A partir de la célula
pluripotencial CD34+ y en presencia de GM-CSF Como se indicó antes, en la serie
y TNFα se diferencia en: (a) CD1α+, CD14-, de granulocítica, a partir del estadio madurativo de
las que se originan las células de Langerhans (DC mielocito se reconocen tres líneas celulares dife-
de la piel) y (b) CD1α-, CD14+ que dan origen a rentes: neutrófilos, eosinófilos y basófilos. En la
las DC mieloides. tabla 3-2 se muestra el porcentaje que cada línea
Las células de Langerhans se trasladan ha- celular ocupa entre los leucocitos en los adultos y
cia tejidos no vascularizados como la epidermis el número absoluto que representa.
en la piel, y las DC mieloides lo hacen hacia zo-
nas vascularizadas, localizándose en los intersti- 2.4.1. Neutrófilos. En los adultos, los
cios (DC intersticiales). Una vez que las células neutrófilos maduros representan aproximada-
de Langerhans han incorporado el antígeno en la mente el 65% de los 4-10 x 103 glóbulos blan-
piel, migran por la linfa hacia los ganglios cos o leucocitos por microlitro de la sangre.
linfáticos donde lo presentan a las LT; las DC Los neutrófilos tienen un diámetro de 10-
intersticiales, por su parte, migran hacia el bazo a 15 µm y un núcleo segmentado con 2-5 lóbulos
través de la sangre. (figura 3-8). En su citoplasma se han descrito
Según su distribución las DC se clasifican cuatro tipos de gránulos, los primarios o
en: (a) DC del tejido linfoide (DC azurófilos (lisosomas), secundarios (específi-
interdigitantes); existen en la médula ósea y timo cos), terciarios y vesículas secretoras (tabla 3-
y se denominan de la zona marginal, cuando 5). Los gránulos primarios, son escasos en los
están presentes en bazo, (b) DC de los tejidos estadios maduros, y contienen enzimas y pro-
sólidos no linfoides (células de Langerhans, teínas microbicidas (entre otras, peroxidasa,
cuando se localizan en la epidermis y células lisozima, proteínas catiónicas) proteínas
intersticiales a las localizadas en el corazón y (elastasa, catepsina G y otras proteínas) e
riñones) y (c) DC de fluidos a las que se en- hidrolasas ácidas (entre otras, N-acetilglu-
cuentran en tránsito, tanto en los vasos linfáticos curonidasa y catepsinas B y D). Los gránulos
aferentes como en la sangre. secundarios, son los más numerosos en los
La maduración de la DC es fundamental neutrófilos maduros; contienen lisosima,
en la iniciación de la respuesta imune. Los es- colagenasa, fosfatasas alcalina, lactoferrina y
tudios de maduración in vitro de DC se realizan otras enzimas y proteínas. Los gránulos ter-
a partir de monocitos obtenidos de sangre ciarios contienen principalmente gelatinasa. Las
periférica e incubados en presencia de GM-CSF vesículas secretoras, al parecer formadas por
e IL-4; se obtiene así una población de DC endocitosis, contienen algunas proteínas
inmaduras, células que expresan en su super- plasmáticas.
ficie moléculas MHC clase II en baja densidad,
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Tabla 3-5. Contenido de los gránulos de los neutrófilos humanos
Gránulos Primarios Gránulos Secundarios Gránulos Terciarios Vesículas Secretoras

Membrana CD11b (Mac-1) CD11b (Mac-1) CD11b (Mac-1)
Citocromo b558 Citocromo b558 Citocromo b558
Receptor de FMLP Receptor de FMLP Receptor de FMLP
Receptor de laminina Receptor de laminina
Receptor de uPA Receptor de uPA
CD63 CD15 Fosfatasa alcalina
CD66c CD66a CD10, CD13, CD45
CD68 CD666 CD16
Receptor de fibronectina DAF (CD55)
Subunidad α de Proteína G CR1 (CD35)
Antígeno NB1
RAP1, RAP2
Receptor de Trombospondina
Receptor de TNF
Receptor de Vitronectina
Matriz
Agentes microbicidas
Lisozima Lisozima Lisozima
Mieloperoxidasa Colagenasa
Defensinas
Proteínas catiónicas
Proteína bactericida
permeabilizante (BPI)
Proteasas Elastasa
Catepsina G
Proteinasa 3
Hidrolasas ácidas N-Acetilglucuronidasa
Catepsinas B y D
β-Glucuronidasa
β-Glicerofosfatasa
β-Galactosidasa
β-Glucosaminidasa
α-Fucosidasa
α-Manosidasa
N-Acetil-β-glucosaminidasa
Otros Sialidasa Sialisidasa
Azurocidin Pro-uPA Pro-uPA/uPA
Ácido mucopolisacárido Apolactoferrina Gelatinasa Proteínas plasmáticas:
Proteína ligante de heparina β2-Microglobulina Acetiltransferasa Tetranectina,
Factor inactivador de C5a Histaminasa Albúmina,
Heparinasa Otras
Proteína ligante de Vitamina B12
Inhibidor de proteína Kinasa C
Otros
FMLP, péptido formil-metil-leu-phe; uPA, Activador del plasminógeno tipo uroquinasa.
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Sin título-2 66 5/26/06, 10:25 AM

factor”, (DAF, CD55), Antígeno lencocitario co-
mún (CD45) (Proteína tirosina fosfatasa).
Una vez que los neutrófilos salen de la mé-
dula ósea, permanecen en circulación aproxima-
damente 7 horas, para luego pasar al azar a los
tejidos, donde subsisten vivos 2-3 días. La pro-
ducción y destrucción diaria de neutrófilos es de
0,9x109/Kg de peso.
Para que los neutrófilos puedan cumplir su
función de fagocitar y destruir las partículas inge-
ridas deben movilizarse al foco infeccioso.
Figura 3-8. Esquema de la estructura subcelular de un
neutrófilo. Célula de 10-15 µm. Debido al pH neutro de su Quimiotaxis
citoplasma y contenido granular, éstos no se tiñen con la clási-
ca tinción hematológica de May Grünwald-Giemsa. Una ca-
racterística de los neutrófilos maduros es su núcleo segmentado.
El movimiento de los neutrófilos al sitio de
El citoplasma contiene un pequeño aparato de Golgi y retículo infección es dirigido por un gradiente químico
endoplásmico rugoso, y escasas mitocondrias y ribosomas. Los (quimiotaxis). Entre otros factores quimiotácticos
neutrófilos presentan dos tipos de gránulos, primarios y se- (tabla 3-6), para los que estos leucocitos poseen
cundarios; estos últimos más numerosos en neutrófilos madu-
ros. Además contienen numerosos y pequeños gránulos de
receptores, destacan algunas proteínas del com-
glicógeno.
plemento (C5a, C3a), péptidos formilados (Ej. N-
formil-met-leu-phe, FMLP) y lípidos derivados de
las bacterias, factor plaquetario 4 (PF4),
Algunas moléculas expresadas en la membra- metabolitos de la vía de la lipoxigenasa del
na de los neutrófilos son: (a) moléculas de adhe- metabolismo del ácido araquidónico, especial-
sión (ver capítulo 12), entre ellas LFA-1 (CD11a), mente el leucotrieno B4 (LTB4), y las llamadas
Mac-1 (CD11b), p150, 95 (CD11c), β2- integrina quimioquinas, entre ellas la IL-8. Varios de estos
(CD18), ICAM-3 (CD50), L-selectina (CD62b), (b) factores han sido clonados y secuenciados. A modo
receptores: FcγRI (CD64), FcγRII (CD32), FcγRIII de ejemplo el receptor de C5a es una proteína de
(CD16), Receptor para C5a (CD68), receptor para transmembrana de 30 kDa y presenta tres “loops”
G-CSF (CD114), (c) ectoenzimas: aminopeptidasa extracelulares e intracelulares, siete dominios
N (CD13, inactiva IL-8), endopeptidasa (CD10, transmembrana, el extremo carboxilo citoplas-
inactiva FMLP) y (d) otros: “Decay accelerating mático y el extremo amino extracelular.
Tabla 3-6. Factores quimiotácticos para neutrófilos
Factor quimiotáctico Fuente

Clásicos
Péptidos formilados Bacterias
Fragmento C5a Activación del Complemento
Leucotrieno B4 (LTB4) Metabolismo del ácido araquidónico
Factor activador de plaquetas (PAF) Metabolismo de fosfatidilcolina
Quimioquinas C-X-C
Interleuquina 8 (IL-8) Linfocitos T, monocitos, células

endoteliales, otras células.
β-tromboglobulina Gránulos α de plaquetas
gro-α Células endoteliales, monocitos,
otras células.
ENA-78 Células epiteliales
Quimioquinas C-C
MIP-1αβ Monocitos
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Sin título-2 67 5/26/06, 10:25 AM

Los factores quimiotácticos actúan a bajas Entre los receptores de opsoninas, se distin-
dosis (0,1-1mM). El efecto biológico de los fac- guen: (i) los receptores de fragmento Fc de IgG
tores quimiotácticos es lograr una migración diri- (FcγR) e IgA (FcαR) unidos a un dímero de cade-
gida de los neutrófilos. La respuesta leucocitaria nas γ, los receptores del complemento y otros
a los factores quimiotácticos es regulada positiva receptores (de colectinas y de proteínas
o negativamente por varios estímulos fisiológicos plasmáticas). Los receptores de Fc son miembros
y farmacológicos. Varias citoquinas, como por de la superfamilia de las inmunoglobulinas (ver
ejemplo, TNFα e IFNγ favorecen la quimiotaxis. capítulo 6), con 3 (FcγRIA) o 2 (otros receptores
En el caso del IFNγ participa aumentando la Fc) dominios tipo inmunoglobulina extracelu-
hidrólisis de fosfatidilcolina por la fosfolipasa D. lares, un dominio transmembrana y una corta cola
La desensibilización celular al estímulo del factor citoplasmática; FcγRIIIB, unido a glicofosfa-
quimiotáctico puede ocurrir por aumento de cAMP tidilinositol (GPI), es una excepción. En la tabla
o degradación del factor quimiotáctico. 3-7 se muestra en diferentes FcγR y el FcαR indi-
cado las células que los presentan:
Receptores que participan en la fagocitosis Los receptores del complemento incluyen
CR1, una proteína de transmembrana que une C3b,
Una etapa inicial de la fagocitosis es el reco- y dos integrinas CD11b/CD18 y CD11c/CD18, lla-
nocimiento, por parte de la célula fagocítica, de la madas también CR3 y CR4, respectivamente. Es-
partícula a ser fagocitada. Para ello las células tos dos últimos receptores unen iC3b, molécula
fagocíticas poseen 2 grupos de receptores, capa- derivada de C3b y se une covalentemente a la su-
ces de reconocer: (a) ligandos propios de los or- perficie celular.
ganismos o células a fagocitar y (b) moléculas que Otros receptores unen un grupo de molécu-
se han unido a ellas y que favorecen la fagocitosis las llamadas colectinas, entre ellas la proteína que
(opsoninas). une manosa (MBL), molécula que participa en la
Entre los receptores que unen moléculas no activación del sistema del complemento y la pro-
opsónicas y que se presentan fundamentalmente teína C reactiva (PCR) que se puede unir por ejem-
los macrófagos, se encuentran: (i) los receptores plo al carbohidrato C del Streptococcus
“scavenger” que unen varios ligandos, entre otros, pneumoniae. Además de receptores para las
proteínas modificadas, polianiones (incluye áci- colectinas también existe receptores para algunas
dos nucleicos), fosfolípidos ácidos (incluye proteínas plasmáticas que se pueden unir a los
lipopolisacárido de bacterias Gram negativas y microorganismos, por ejemplo receptores para
ácido lipoteicoico de bacterias Gram positivas y fibrinógeno y fibronectina.
(ii) el receptor de manosa, que une carbohidratos.
Tabla 3-7. Receptores de la región Fc de IgG e IgA
Receptor CD Células
FcγRI* CD64 Monocitos, macrófagos,

Neutrófilos maduros tratados con IFNγ
FcγRIIA CD32 Neutrófilos maduros, monocitos
Macrófagos, plaquetas
FcγRIIB CD32 Monocitos, macrófagos
Linfocitos B, mastocitos
FcγRIIIA CD16 Macrófagos, células NK
Mastocitos
FcαR CD89 Granulocitos, monocitos
Macrófagos
* Tres locus génicos; I, alta afinidad; II, afinidad intermedia; III, baja afinidad
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Transducción de señales en la fagocitosis DAG activa la proteína kinasa C que fosforila
proteínas que participan en los procesos de
Se describirá el mecanismo de transducción degranulación y secreción. La fosfolipasa D
de señales asociados a la fagocitosis mediada por escinde fosfatidilcolina a ácido fosfatídico y coli-
FcγR. Los receptores FcγRI, FcγIIA y FcγIIIA na; su activación se asocia a la unión de ligandos
comparten la capacidad para activar la cascada de a receptores del complemento.
tirosina kinasa. Los dominios ITAM (“inmune-
tyrosine activation motifs”) de la cadena γ de los Adhesión de neutrófilos al endotelio
receptores FcγR pueden ser fosforilados por
tirosina kinasa de la familia SyK. Esta etapa es Para que los neutrófilos lleguen a los tejidos
fundamental para la ingestión y polimerización de infectados, junto recibir la señal quimiotáctica, és-
actina. Paralelamente, la unión ligando-receptor tos deben unirse al endotelio, luego rodar sobre
activa la fosfolipasa C la cual desdobla el fosfatidil éste (“rolling”), sufrir un proceso de activación
inositol-4,5-difosfato (PIP2) en inositol-1,4,5- adicional y luego participar de un proceso de mi-
trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG) (figura gración transendotelial. En este proceso tienen
3-9). El IP3 permite que se libere Ca2+ de los de- importante participación algunas moléculas de
pósitos citoplasmáticos, el que tiene dos acciones: adhesión celular (capítulo 12), expresadas en for-
(a) desencadena el ordenamiento de los filamen- ma constitutiva e inducida en la membrana de los
tos de actina y de la proteína contráctil miosina, neutrófilos y células endoteliales.
responsables del movimiento de los neutrófilos Aproximadamente la mitad de los neutrófilos
y (b) activa la fosfolipasa A2 que convierte los circulantes forman parte del “pool” marginal, que
fosfolípidos de membrana en ácido araquidónico mantienen interacción intermitente con el
a partir del cual se obtienen otros metabolitos. El endotelio. Las moléculas de adhesión de la fami-
Figura 3-9. Activación de los neutrófilos a través de FcγR. La unión de bacterias opsonizadas con IgG a FcγR favorece la
fosforilación de las cadenas γ del FcγR por proteína kinasa. Además se activa la fosfolipasa C que desdobla el fosfatidil inositol -
4,5-difosfato (PIP2) en inositol-1,4,5-trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG). La figura muestra esquemáticamente la participación
de los segundos mensajeros (IP3, Ca2+ y DAG).
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lia selectinas (L-selectinas, CD62L en leucocitos con IgG (subclases 1 ó 3) y/o fracciones del
y E-selectinas, CD62E en células endoteliales) y complemento (C3b y/o C4b). Los neutrófilos al
sus ligandos, carbohidratos sialilados, son respon- igual que los monocitos y macrófagos, poseen
sables del “rolling” de los neutrófilos sobre el receptores para la región Fc de IgG (FcγR) y
endotelio. La interacción de los factores para C3b y C4b (tabla 3-8). La unión de estas
quimiotácticos con sus respectivos receptores ini- opsoninas con el receptor respectivo, activa la
cia el proceso de transducción de señales en los célula fagocítica, ésta emite prolongaciones que
neutrófilos, lo que inicialmente se asocia con ex- engloban al microorganismo. El fagosoma for-
presión de moléculas de adhesión de la familia mado por la membrana plasmática, posterior-
integrinas, especialmente LFA-1 (CD11a-CD18) mente se fusiona con la membrana de los grá-
que se une a su ligando de la superfamilia de las nulos citoplasmáticos que descargan su conte-
inmunoglobulinas ICAM-1 (CD54) en las célu- nido enzimático en el interior del fagosoma (fi-
las endoteliales. Este último tipo de interacción gura 3-10). El DAG, a través de la proteína
resulta en un marcado incremento de la adhesión kinasa C que fosforila proteínas, “gatilla” la
de los neutrófilos al endotelio y término del degranulación.
“rolling”. Luego los neutrófilos migran entre las
células endoteliales al tejido.
Fagocitosis
La endocitosis, proceso por el cual el mate-

rial es introducido en la célula, puede tomar la
forma de una pinocitosis (bebiendo por células) y
fagocitosis (comiendo por células). La fagocitosis
es visible al microscopio óptico; la pinocitosis se
refiere a la ingestión de macromoléculas. Ambos
procesos involucran invaginación de la membra-
na celular y la formación de vesículas o vacuolas
(fagosomas). La mayoría de las células pueden
realizar pinocitosis, pero la fagocitosis es un pro-
ceso característico de los neutrófilos, monocitos Figura 3-10. Esquema de fagocitosis. Se muestra el proceso
y macrófagos, y, en mucho menor grado, de los de fagocitosis de bacterias opsonizadas. La unión de gránulos
primarios y específicos con el fagosoma forman la vacuola
eosinófilos y basófilos. digestiva. La degradación bacteriana conduce a la formación
La fagocitosis de los microorganismos se ve de un cuerpo residual y a la expulsión (exocitosis) de compo-
favorecida si éstos están recubiertos (opsonizados) nentes no degradables.
Tabla 3-8. Receptores para inmunoglobulinas y fracciones del complemento en los

granulocitos y monocitos/macrófagos.
FcεRI FcεRII FcγRI FcγRII FcγRIII C5aR CR1 CR3
Neutrófilos - + - +? + + + +
Eosinófilos - + - - + + + +
Basófilos + - - - + + + +
Monocitos/
macrófagos ? - + + + + + +
FcεR, Receptor para IgE (I, alta afinidad; II, afinidad intermedia); Fcγ, Receptor para IgG (I, alta afini-
dad; II, afinidad intermedia; III, baja afinidad); C5aR, receptor de C5a; CR1, receptor de C3b; CR3,
receptor de iC3b.
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Sin título-2 70 5/26/06, 10:25 AM

Antes se indicó el contenido de cada uno de los tres a) Mecanismos antimicrobianos dependientes
tipos de gránulos de los neutrófilos (tabla 3-5). Así del oxígeno. Durante la fagocitosis, proceso de-
por ejemplo los gránulos azurófilos contienen pendiente de energía, se produce un aumento del
componentes antibacterianos; también contienen consumo de oxígeno, de la oxidación de la gluco-
elementos como elastasa que puede favorecer el sa y de la producción de metabolitos del oxígeno,
movimiento de los neutrófilos al hidrolizar algu- fenómeno también denominado “estallido respi-
nos componentes de la matriz extracelular. Los ratorio” (figura 3-11). La generación de estos úl-
gránulos secundarios son liberados más fácilmente timos se debe a la activación de la NADPH oxidasa
de los neutrófilos, conteniendo entre otras molé- que al oxidar el NADPH reduce el oxígeno
culas, algunas que activan el sistema del comple- molecular a ión superóxido (O-2), el que se con-
mento. También contienen colagenasa, que al igual vierte en peróxido de hidrógeno (H2O2). Los
que la elastasa puede favorecer el movimiento de metabolitos del oxígeno pueden actuar a través de
las células fagocíticas. Por otra parte, la un mecanismo dependiente o independiente de
apolactoferrina al unir hierro puede tener un efec- mieloperoxidasa (MPO), enzima presente en alta
to antimicrobiano, entre otras razones por privar concentración en los gránulos primarios, los que
de este elemento a las bacterias. Por su parte, la son degranulados al interior del fagosoma (figura
gelatinasa contenida en los gránulos terciarios 3-11). La MPO, en presencia de un ión haluro
puede participar, junto a otros componentes, en la como Cl- (o Br-), transforma el H2O2, generada por
modificación de la matriz extracelular durante el mecanismos dependientes de oxígeno pero inde-
desplazamiento de los neutrófilos. En otro orden, pendiente de MPO, en ácido hipocloroso (HOCl),
proteínas de membrana de los gránulos terciarios un potente oxidante y antimicrobiano,
y de las vesículas secretoras, pueden aumentar su (antibacteriano, antifúngico, antiviral y
expresión en la superficie celular, después de la antimicoplasma). Los radicales superóxido e
activación. hidroxilo, por sí solos tienen acción microbicida.
La oxidasa dependiente de NADPH, es un
Mecanismos microbicidas complejo multienzimático que incluye dos proteí-
nas de membrana (de dos tipos de gránulos: vesí-
Una vez fagocitados los microorganismos, culas secretoras y gránulos secundarios) y tres
éstos son destruidos por mecanismos dependien- citosólicas, cuando la célula está en reposo (figu-
tes e independientes del oxígeno, también deno- ra 3-12). El componente de membrana es un
minados mecanismos oxidativos y no oxidativos, heterodímero formado por una proteína de 91 kDa
respectivamente (tabla 3-9). (gp91phox) y una proteína de 22 kDa (p22phox).
Estas proteínas, junto con flavin adenin
dinucleótido (FAD) forman un flavocitocromo
Tabla 3-9. Mecanismos antimicrobianos de
denominado citocromo b558. Adicionalmente en la
los neutrófilos
membrana participa una proteína de unión de
nucleótidos de guanina denominada rap1. La
Dependientes del oxígeno
subunidad de 91 kDa presenta el sitio de unión
Mediados por mieloperoxidasa para el NADPH. Ambas subunidades presentan
Ácido hipocloroso (HOCl) grupos HEME. El componente citoplasmático está
Independientes de mieloperoxidasa formado por tres proteínas independientes:
Peróxido de hidrógeno (H2O2) p40phox, p74phox y p67 phox. Además participa
Ión superóxido (O2-) otra proteína de unión de nucleótidos de guanina,
¿Otros? rac2; en reposo una GDP y cuando la célula es
activada une GTP.
Independientes del Oxígeno
Precozmente durante la activación, las ve-
sículas secretoras y posteriormente los gránulos
pH ácido
secundarios, se fusionan con la membrana
Lisozima
plasmática, la cual durante la fagocitosis se
Lactoferrina
invagina y por tanto la membrana de los
Defensinas
fagosomas presentará las proteínas de membra-
Proteína bactericida permeabilizante (BPI)
na de la NADPH oxidasa. Como consecuencia
Proteínas catiónicas de los gránulos
de la activación de los neutrófilos, proceso en
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Sin título-2 71 5/26/06, 10:25 AM

Figura 3-11. Mecanismos microbicidas oxidativos. Una oxidasa cataliza la reducción de oxígeno a ión superóxido (O-2) a expen-
sas del NADPH. El NADPH es regenerado a través de la vía de las hexosas. El O-2 es transformado en peróxido de hidrógeno
(H2O2) y O2 por la superóxido dismutasa (SOD). Reacciones posteriores que comprometen al H2O2 y al O-2, llevan a la formación
de dos tipos de compuestos microbicidas: radicales libres altamente oxidantes (OH) o halógenos oxidados (por ejemplo: ácido
hipocloroso, HOCl).
Figura 3-12. NADPH oxidasa. La oxidasa dependiente NADPH está formada por proteínas de membrana (22 y 91 kDa), unidas
a flavin adenin dinucleótido (FAD) y a proteínas citosólicas (40, 47 y 67 kDa y Rac –2). Estas últimas se translocan a la membrana
cuando el neutrófilo es activado.
que p47phox es fosforilada, las proteínas NADPH oxidasa (p47phox, p67phox, p22phox
citosólicas son translocadas a la membrana o p91phox).
plasmática, formándose y activándose el comple-
jo NADPH oxidasa. b) Mecanismos antimicrobianos indepen-
La enfermedad granulomatosa crónica es dientes del oxígeno. Estos mecanismos fun-
una inmunodeficiencia primaria, caracterizada cionan en ausencia de metabolitos del oxíge-
por una mayor susceptibilidad a infecciones no, situación que se presenta en un ambiente
bacterianas y fúngicas. Es causada por muta- anaeróbico; sin embargo ambos tipos de me-
ciones que producen una pérdida o inactivación canismos, oxidativos y no oxidativos, a menu-
de una de las subunidades principales de la do participan en forma sinérgica. En los meca-
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Sin título-2 72 5/26/06, 10:25 AM

nismos microbicidas independientes del oxí- Una vez muertas las bacterias en el interior
geno participan proteínas y enzimas presentes de los fagolisosomas, son degradadas por
en los gránulos citoplasmáticos de los fagocitos hidrolasas ácidas, que por la generación de áci-
(tabla 3-3). Entre otros componentes de estos do láctico durante la glicólisis, encuentran su pH
mecanismos destacan: (a) la lisozima, enzima óptimo para actuar.
catiónica que destruye el péptidoglican de la
pared celular, principalmente de las bacterias 2.4.2. Eosinófilos. Los eosinófilos son células de
Gram positivas; (b) la proteína bactericida aproximadamente 10 µm de diámetro y cuyo nú-
permeabilizante (BPI), proteína catiónica que cleo es generalmente bilobulado (figura 3-14) y
permeabiliza la membrana bacteriana; (c) la su citoplasma anaranjado con tinción de
catepsina G, una serino proteasa con actividad hematoxilina-eosina. Representan el 1-4% de los
sobre bacterias Gram negativas y (d) las leucocitos sanguíneos (tabla 3-2); alrededor del
defensinas, péptidos de 29-34 aminoácidos, ri- 99% de los eosinófilos se encuentra en los tejidos
cos en arginina y cisteína, y que presentan acti- donde llegan luego de un breve paso de aproxi-
vidad microbicida sobre bacterias Gram positi- madamente 30 minutos por la sangre, después de
vas, Gram negativas, hongos y algunos virus. salir de la médula ósea.
En la figura 3-13 se muestra un resumen
de los mecanismos microbicidas durante la
fagocitosis.
Figura 3-14. Esquema de la estructura subcelular de los

eosinófilos. Los eosinófilos son leucocitos de aproximadamen-
te 10 µm de diámetro. Presentan un núcleo bilobulado con un
nucléolo medianamente grande. En el citoplasma se observan
ribosomas, mitocondria y pequeña cantidad de retículo
endoplásmico rugoso. El aparato de Golgi es pequeño. Un
hecho característico de los eosinófilos son sus gránulos esféri-
cos u ovales.
Gránulos
Figura 3-13. Fagocitosis y mecanismos microbicidas. (A) Los eosinófilos presentan dos tipos de grá-
Bacteria opsonisada con IgG y C3b se une a una célula nulos en su citoplasma: gránulos específicos de
fagocítica a través de los respectivos ligandos (FcγR y CR1). eosinófilos y gránulos pequeños. Los gránulos
(B) Luego de emitir pseudópodos la bacteria es fagocitada,
específicos, aproximadamente 20 por célula, en
los gránulos azurófilos y secundarios se acercan al fagosoma
en formación, y se estructura la NADPH oxidasa. (C) En el su centro presentan la proteína básica mayor
fagosoma se inicia el “estallido respiratorio” en el que a (MBP) y algunas citoquinas; en la matriz con-
partir de oxígeno molecular y con participación de la tienen proteína catiónica eosinófila (ECP),
superóxido disminutasa (SOD) se genera peróxido de hi-
peroxidasa eosinófila (EPO), neurotoxina deri-
drógeno (H2O2) y por acción de la mieloperoxidasa (MPO)
de los gránulos azurófilos se genera ácido hipocloroso vada de eosinófilos (EDN) y algunas citoquinas.
(HOCl). Adicionalmente participan otros componentes Los gránulos pequeños que almacenan
bactericidas (lisozima y otras proteínas) de los gránulos es- arilsulfatasa, se encuentran en los eosinófilos
pecíficos. La enzima glucosa 6 fosfato deshidrogenasa
maduros.
(G 6 PD) pertenece a la vía de derivación de la hexosa
monofosfato.
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Sin título-2 73 5/26/06, 10:25 AM

Otras moléculas sintetizadas en los eosinófilos Eosinófilos y patologías
Cuando los eosinófilos son estimulados Hay varias situaciones patológicas en que au-
secretan algunos mediadores derivados de mem- menta la cifra absoluta de eosinófilos en la sangre
brana: Leucotrieno C4 (LTC4), leucotrieno B4, 15- (eosinofília). Destacan: (a) las infecciosas parasi-
HETE y PAF. tarias, particularmente por helmintos, en las cua-
Los eosinófilos pueden sintetizar varias les se ha observado que los eosinófilos pueden
citoquinas proinflamatorias; se ha descrito mRNA tener una acción efectora (capítulo 35) y (b) las
para ellas: Interleuquinas (IL-1, IL-2, IL-3, IL-5, enfermedades alérgicas (capítulos 21 y 22). En-
IL-6, IL-10, IL-16) factores de crecimiento fermedades mieloproliferativas, otras neoplasias
(TGFα, TGFβ, TNFα, GM-CSF), Interferones y algunos fármacos (Ej. Penicilina, Tetraciclina,
(IFNγ) y quimioquinas (IL-8, MIP-1α y Nitrofurantoina) pueden asociarse con eosinófilos.
RANTES).
2.4.3 Basófilos. Los basófilos representan menos
Receptores de membrana del 1% de los leucocitos sanguíneos (tabla 3-2).
Al igual que los otros granulocitos maduros pre-
Uno de los receptores más importantes des- sentan un diámetro aproximado de 10 µm. En los
de el punto de vista fisiopatológico son los re- frotis sanguíneos teñidos con May-Grünwald
ceptores de Fc de IgE de baja afinidad (FcεRIII) Giemsa, los gránulos citoplasmáticos ácidos que
(tabla 3-8). se caracterizan por presentar un intenso color
azul violeta, casi cubren completamente el núcleo
Acumulación de eosinófilos en tejidos bilobulado. La figura 3-15 muestra un esquema
de su estructura subcelular.
La quimiotaxis, adhesión a células
endoteliales y matriz extracelular parece ser con-
trolada por la respuesta inmune de células T y sub-
secuente liberación de citoquinas. Las citoquinas
liberadas en procesos alérgicos son las que parti-
cipan en respuestas inmunes tipo Th2 (IL-4, IL-
5), en cambio en la reacción de hipersensibilidad
de tipo retardada (DTH) se encuentran citoquinas
asociadas a respuesta tipo Th1 (Ej. IL-2, IFNγ).
La liberación de IL-5 por LTh2 sensibilizados lue-
go de su estimulación con antígeno específico, se
puede asociar al desarrollo de eosinofilia durante
enfermedad alérgica.
Las citoquinas además de participar en la di- Figura 3-15. Esquema de la estructura subcelular de un
ferenciación de los eosinófilos a partir de los pre- basófilo. El núcleo es bilobulado y la cromatina presenta una
distribución similar a los neutrófilos y eosinófilos. Presenta
cursores, contribuyen a su acumulación en el teji- un pequeño aparato del Golgi y retículo endoplasmático; es-
do inflamado. En esta última función participan caso número de ribosomas libres y mitocondrias.
principalmente IL-3, IL-5, GM-CSF, PF4, LTB4,
IL-8 y RANTES.
En la adhesión a endolelio y migración Los basófilos son muy similares a los
transendotelial participan, al igual que para los mastocitos o células cebadas, en cuanto a la com-
neutrófilos, las moléculas de adhesión celular: posición de sus gránulos y a su función.
selectinas, integrinas y de la superfamilia de las La diferenciación a basófilos y mastocitos
inmunoglobulinas (ver punto 2.2.1). desde células inmaduras (CD34+, c-kit-, FcεRI-)
Algunas citoquinas (IL-3, IL-5 y GM-CSF) ocurre a través de varias etapas en que estos y otros
prolongan la sobrevida de los eosinófilos en los marcadores de membrana se van modificando. Las
tejidos. Estas citoquinas también aumentan la ca- células cebadas maduras presentan el siguiente
pacidad citotóxica de ellos. fenotipo FcεRI+ y c-kit+ y los basófilos son
FcεRI+, c-kit-, CD23+. Además al igual que los
eosinófilos son CD25+ y CD125+.
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Sin título-2 74 5/26/06, 10:25 AM

En la tabla 3-10 se indican las principales pro- Concavalina A), algunas citoquinas (ej. IL-1, MIP-
teínas de membrana de los basófilos y mastocitos. Am- 1α). El péptido formil-met-leu-phe sólo estimula
bos tipos de células presentan receptores de alta afini- la secreción de los basófilos.
dad para IgE (FcεRI), sólo los basófilos presentan Ambos tipos celulares participan en las eta-
integrinas y solamente los mastocitos presentan c-kit. pas iniciales del proceso inflamatorio, pero en las
etapas más avanzadas de reparación sólo lo hacen
los mastocitos. Así, inicialmente ambos secretan
Tabla 3-10. Proteínas de membrana de mediadores inflamatorios: (Histamina, IL-4,
basófilos y células cebadas quimioquinas; basófilos: IL-13; mastocitos:
TNFα, etc.), moléculas que durante el proceso van
Marcador Básofilo Mastocitos disminuyendo. Por su parte, las células cebadas
durante el desarrollo del proceso siguen liberan-
FcεRI + + do otros mediadores, ahora antiinflamatorios (IL-
FcγRII - + 10, TGF-β, etc.) y más adelante, moléculas que
Integrina CD11a/18 - + favorecen la reparación tisular (proteinasas, fac-
Integrina CD11b/18 - + tores de crecimiento y otras citoquinas).
Integrina CD11c/18 - + Varios fármacos antialérgicos y antiinflama-
IL-2R (CD25) - + torios inhiben la secreción de mediadores desde
C-Kit (CD117) + - los basófilos y mastocitos; sus acciones son múl-
IL-3Rα (CD123) - + tiples y variadas. Entre ellas se incluyen: Agonistas
IL-3/5/GMRβ - + de B 2 , antagonistas de H 1 , corticoides y
ciclosporina A, entre otros.
3. ÓRGANOS LINFOIDES
En las primeras etapas de maduración parti-
cipa el factor de “stem cell” o “c-kit ligand”. En Desde un punto de vista inmunológico, los
la maduración de células cebadas participan órganos y tejidos linfoides, se pueden clasificar
citoquinas como IL-3, IL-6. En cultivos celulares en primarios y secundarios (figura 3-16). Más re-
se han descrito las CFU de basófilo y eosinófilos cientemente se han descrito los tejidos linfoides
(CFU- baso/eo). terciarios; parte de ellos son descritos aquí como
En la diferenciación de basófilos la principal tejido asociado a mucosas (punto 3.2.3) y se in-
citoquina que participa es IL-3; también partici- cluye además en este concepto el tejido linfoide
pan GM-CSF, IL-4 e IL-5. Esta última promueve asociado a piel (ver capítulo 16).
además la diferenciación de eosinófilos. El TGF-
β, en presencia de IL-3 suprime la diferenciación 3.1. Órganos linfoides primarios
de eosinófilos y favorece la diferenciación de
basófilos. En los órganos linfoides primarios, timo y
Varias moléculas mediadoras de inflamación médula ósea en el hombre, las células linfoides
son liberadas desde ambos tipos celulares por me- experimentan un proceso de proliferación y dife-
canismos mediados por unión de IgE u otros me- renciación a células T y células B, respectivamen-
canismos. Ambas células contienen histamina, te. Este proceso no requiere presencia de antígenos
PAF, condroitinsulfato, LTB4, LTC4, IL-4 e IL-13. extraños (antígeno independiente). Allí los
Sólo en los mastocitos, óxido nítrico (NO), linfocitos adquieren el repertorio de receptores
prostaglandinas D2 (PGD2), PGF2, tromboxano A2, antigénicos específicos (LT: TCR y LB: IgM e
triptasa, carboxipeptidasa A, IL-5, IL-6, IL-8, IL- IgD) y aprenden a distinguir entre lo propio y lo
10, TNFα, TGF-β, IFNγ. Sólo en los basófilos, extraño.
MIP-1α.
Varios factores pueden activar la secreción 3.1.1. Médula ósea
de mediadores de inflamación por parte de
basófilos y células cebadoras. Entre ellos, la unión En la médula ósea, a partir de la segunda
de una molécula de IgE (o IgG) y su respectivo mitad del embarazo y en el resto de la vida, ocu-
antígeno (alergeno) a los FcεRI (o FcγRII), rre la diferenciación y maduración de los glóbu-
anafilotoxinas (C3a y C5a), lectinas (ej. los rojos, glóbulos blancos y plaquetas
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Sin título-2 75 5/26/06, 10:25 AM

Figura 3-16. Órganos linfoides. Se muestran los órganos linfoides primarios, (Médula ósea y Timo) secundarios (Bazo, Ganglios
linfáticos: cervicales, axilares mesentéricos e inguinales), tejido asociado a mucosa (GALT: intestinal; BALT: bronquial) y amíg-
dalas (palatinas, faríngea y linguales). Además se indica el lugar de drenaje de los linfocitos desde el conducto torácico a la sangre
(vena subclavia izquierda).
(Hematopoyesis, ver punto 2.1). Entre los

leucocitos, tiene especial interés en este caso la
maduración de los linfocitos B.
En el hombre y otros mamíferos, la médula
ósea es el tejido equivalente a la bolsa de
Fabricio, órgano en el que se diferencian los
linfocitos B en las aves; el origen de "B" se re-
fiere a bolsa. La bolsa de Fabricio es un órgano
linfoepitelial, que corresponde a un trozo de in-
testino modificado, localizado cerca de la cloa-
ca; los folículos están en la corteza y médula de
la bolsa.
La médula ósea se encuentra en la cavidad
medular de los huesos largos (principalmente en
las epífisis) y en los espacios existentes entre las
trabéculas de los huesos esponjosos.
Histología. La médula ósea está formada por dos

importantes compartimientos: vascular y
hematopoyético (figura 3-17). Figura 3-17. Estructura general de la médula ósea. Se des-
taca el compartimiento vascular (arterias, venas y sinusoides)
y del compartimiento hematopoyético.
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Sin título-2 76 5/26/06, 10:25 AM

Los vasos sanguíneos del compartimiento gración transitorios (<4 µm de diámetro) que se
vascular forman un esqueleto estructural en la forman en las células endoteliales de los
médula ósea. La sangre que ingresa a la médula sinusoides.
ósea lo hace por las arterias nutricias que perfo- El Compartimiento hematopoyético está
ran la diáfisis a través de los agujeros nutricios. formado por los islotes de células hematopoyéticas
Estas arterias entran en la cavidad medular y dan de las diferentes líneas celulares (serie
origen a la arteria longitudinal central, desde la granulocítica, serie monocítica, serie eritroblástica,
cual se generan pequeños vasos que irrigan tanto serie megacariocítica y serie linfoide), en sus dis-
la médula como el hueso cortical. Las ramas di- tintos estadios madurativos. En células se ubican
rigidas a la médula descargan su sangre a capila- entre los sinusoides, y entre éstos y la cortical del
res los cuales vacían en una extensa red de hueso.
sinusoides. Los sinusoides (45 a 80 µm de diá- Además de las células hematopoyéticas en
metro) están compuestos por células la médula ósea también existen otras células que
endoteliales, una lámina basal y una capa exter- forman parte de denominado estroma medular.
na de células reticulares; estas últimas cubren Entre ellas destacan: macrófagos, células
aproximadamente el 50% de la superficie reticulares y algunas células adiposas (figura 3-
endotelial. Estos sinusoides drenan en una vena 18). Estas células participan activamente en la re-
longitudinal central, que a su vez descarga su gulación de la hematopoyesis secretando
contenido en venas que salen del hueso por el citoquinas y factores de maduración.
conducto nutricio. Adicionalmente los macrófagos fagocitan núcleos
El pasaje transendotelial de células maduras, expulsados por los eritroblastos ortocromáticos al
desde el comportamiento hematopoyético a la san- madurar a reticulocitos, células alteradas y célu-
gre ocurre directamente a través de poros de mi- las muertas.
Figura 3-18. Estructura histológica de la médula ósea. La médula ósea está formada por vasos sanguíneos, sinusoides, células
del estroma y células hematopoyéticas. Los distintos tipos de células se desarrollan en islotes hematopoyéticos ubicados a diferen-
te distancia de la pared de los sinusoides, según el linaje celular.
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La hematopoyesis implica un complejo pro- llegan, en estado inmaduro, desde la médula ósea.
ceso de maduración y diferenciación celular. A En el humano, el timo comienza a originarse
partir de una célula pluripotencial se originan los hacia el final de la sexta semana de gestación. Para
diferentes tipos de leucocitos (neutrófilos, el nacimiento el timo está totalmente desarrollado.
linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos), gló- El timo es un órgano de naturaleza
bulos rojos y plaquetas. En dicho proceso partici- linfoepitelial que se ubica en el mediastino antero-
pan varias citoquinas (ver punto 2.1). Por otra par- superior, sobre los grandes vasos del corazón (fi-
te, las moléculas de adhesión celular (ver capítulo gura 3-16). Su tamaño y grado de desarrollo va-
12) presentes en las células hematopoyéticas y del rían con la edad del individuo, alcanzando su máxi-
estroma, y la matriz extracelular tienen fundamen- mo desarrollo (40 a 50 gramos), cerca de la pu-
tal participación en el proceso de maduración y bertad, después de la cual empieza a involucionar,
focalización en la médula ósea. En el caso parti- proceso que continúa hasta avanzada edad.
cular de los linfocitos, las células B maduran en la
propia médula ósea. En la figura 3-19 se muestra Histología. Es el único órgano linfoide lobulado;
esquemáticamente este proceso. está formado por dos lóbulos, derecho e izquierdo
Figura 3-19. Maduración de células B en la médula ósea. Esquemáticamente se muestra la secuencia de maduración de las
células B a partir de una célula madre (“stem cell”); durante este proceso depende de células de estroma (células reticulares, entre
otras). Otro aspecto importante es que muchas células no reordenan correctamente los segmentos génicos VDJ o VJ (ver capítulo
6) y sufren apoptosis por lo que son fagocitadas por los macrófagos medulares. Las células B vírgenes (este proceso no ha
requerido de contacto con antígeno) pasan a la sangre a través de los sinusoides y luego a los órganos linfoides secundarios donde
pueden tomar contacto con el antígeno para el cual presentan especificidad. Se indican los principales marcadores en diferentes
etapas de maduración. µ, cadena pesada mu (IgM); k, cadena liviana de Ig; TdT, desoxinucleotidil transferasa terminal.
Respecto a las células T, si bien éstas madu- unidos por tejido conectivo. Ambos lóbulos es-
ran en el timo, desde la médula ósea emigran célu- tán rodeados por una cápsula de tejido conectivo;
las “encomendadas” a madurar como linfocitos T. ésta emite numerosos tabiques al interior de los
Usando citometría de flujo (ver capítulo 43), en mé- lóbulos subdividiéndolos en miles de lobulillos de
dula ósea, se ha detectado una subpoblación que 0,5-2 mm. Cada lóbulo posee una zona periférica
coexpresa CD34 (marcador de “Stem Cells”), CD2, y más rica en células, denominada corteza y la
CD7 y CD3 citoplasmático (marcadores de línea médula. Los tabiques llegan hasta el límite
T). Sin embargo, también se propone la existencia corticomedular (figura 3-20).
de un progenitor común para ambos linajes celula- El estroma laxo, compuesto por células
res, B y T. Otros hallazgos indican que CD44 po- reticulares epiteliales entreteje la corteza y la mé-
dría participar en el "homing" de las células linfoides dula. En el retículo se encuentran linfocitos,
que llegan al timo a madurar como células T. macrófagos y células dendríticas interdigitantes.
3.1.2. Timo Las Células reticulares epiteliales tienen un as-

pecto variable. Presentan prolongaciones en for-
La principal función del timo es participar en ma de estrella, que interaccionan entre sí. En la
la maduración y diferenciación de los linfocitos T a periferia de la corteza y alrededor de los vasos san-
partir de la proliferación y diferenciación de linfocitos guíneos, estas células conforman una capa conti-
troncales inmunológicamente no competentes que nua de células planas.
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Figura 3-20. Estructura histológica del timo. En cada lóbulo del timo se pueden describir 2 regiones: corteza y médula. En
ambas zonas, corteza y médula tímica, existen células linfoides, reticulares epiteliales y macrófagos. En la corteza ocurren los
procesos de selección positiva y negativa de las células linfoides T (ver texto) en el que participan las células reticulares
epiteliales corticales. Las células linfoides a medida que maduran migran a la médula tímica desde donde emigran a la sangre. A
medida que maduran las células linfoides expresan diferentes marcadores de superficie.
En la médula existen más células reticulares llas que dejan las células retículo epiteliales. Las
epiteliales que en la corteza, conformando en la células linfoides son mucho más abundantes en la
primera los corpúsculos de Hassall. corteza que en la médula. En la corteza subcapsular
Las células reticulares epiteliales expresan en externa son células grandes (≈ 15 µm); correspon-
su superficie moléculas MHC de clase I y de cla- den a linfoblastos (células linfoides inmaduras).
se II, las que al interaccionar con las células En el resto de la corteza y médula son más peque-
linfoides son fundamentales en el proceso de ma- ños.
duración de estos últimos. Esto es especialmente Después de la pubertad, cuando el timo co-
significativo en la corteza capsular. mienza a involucionar, pierde peso y aumenta pro-
gresivamente la proporción de adipocitos (célu-
Los Macrófagos se encuentran en cantidad mo- las grasas); sin embargo durante toda la vida per-
derada en la corteza, pero son más abundantes en sisten restos de parénquima. En el adulto una vez
la médula. También expresan moléculas MHC de que se ha formado un “pool” de células T
clase I y II. periféricas, aparentemente no es necesario la pro-
ducción de grandes cantidades de linfocitos T.
Las Células dendríticas interdigitantes se en- Respecto a los Vasos sanguíneos, el timo
cuentran en abundante cantidad en el límite es irrigado por sangre que fluye a través de arte-
córticomedular y en la médula, se ubican entre el rias que ingresan por la cápsula, formando
retículo que conforman las células retículo arteriolas en los tabiques. Aquí se forman las
epiteliales. Al igual que estas últimas presentan vénulas interlobulares las cuales se vacían en la
largas prolongaciones citoplasmáticas a través de vena tímica eferente. Los capilares presentan un
las cuales toman contacto con los linfocitos. Al endotelio rodeado de una gruesa lámina basal.
igual que las células reticulares epiteliales expre- La corteza sólo es irrigada por capilares, éstos
san en su membrana moléculas MHC clase I y II, participan de la llamada barrera hematotímica,
y participan en la maduración de los linfocitos. que protegería a las células linfoides en madura-
ción en la corteza tímica, contra sustancias
Las Células linfoides se localizan entre las ma- antigénicas circulantes.
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Sin título-2 79 5/26/06, 10:25 AM

Fisiología. En el timo ocurre la maduración de asociado a mucosas (MALT). Los órganos se-
los linfocitos T, células que participan de la inmu- cundarios, son los tejidos donde los linfocitos vír-
nidad celular e indirectamente en la inmunidad genes (B y T) interactúan con los antígenos y con
humoral. otras células del sistema inmune; es aquí donde se
Células linfoides inmaduras llegan, desde la inicia la respuesta inmune. En estos tejidos existe
médula ósea (durante la gestación: del saco un microambiente linfoide altamente organizado,
vitelino, bazo e hígado) a la región subcapsular donde las células B y T toman contacto con el
de la corteza tímica donde se diferencian a células antígeno y como consecuencia de ello se activan
T inmaduras (timocitos). En el proceso de madu- y proliferan (expansión clonal), desarrollándose
ración, desde células doble negativas (CD4-, CD8- dos subpoblaciones, células efectoras y células de
) y CD3- y TCR- a células T CD4+ (LTh) o CD8+ memoria.
(LTc) y CD3+ y TCR+, las células linfoides se
movilizan desde la corteza a la médula tímica. 3.2.1. Ganglios linfáticos
Durante este recorrido interaccionan con células
reticulares epiteliales y células dendríticas Los ganglios linfáticos son pequeños órga-
interdigitantes, las cuales expresan en su membra- nos linfoides ovales y encapsulados, de 1-3 cm de
na moléculas de MHC clase I y II. diámetro. A diferencia de otros órganos linfoides,
En el proceso de maduración ocurren los pro- están interpuestos en el trayecto de los vasos
cesos de selección, positiva y negativa (ver capítu- linfáticos, actuando como filtros a través de los
lo 13). En la primera, los linfocitos que a través de cuales pasa la linfa en su camino hacia la sangre;
su TCR reconocen las moléculas MHC propias son entre otros elementos filtran bacterias, otros
seleccionados positivamente (pueden continuar el microorganismos y otras sustancias extrañas.
proceso de maduración); los otros sufren apoptosis. Los ganglios linfáticos se encuentran en nú-
Las células que pasan la primera etapa son someti- mero variable en ciertas zonas del cuerpo, pero
das a la llamada selección negativa, durante la cual son más abundantes en las regiones axilar, cervi-
son eliminadas (apoptosis) las que, a través de su cal, inguinal, en las cavidades corporales (Ej.
TCR, reconocen con alta afinidad antígenos pro- Mesenterio) y a lo largo de los vasos mayores (fi-
pios en las moléculas MHC de clase I o II de las gura 3-16).
células reticulares epiteliales o células dendríticas
interdigitantes. Durante el proceso de maduración Histología. Los elementos de sostén del ganglio
tímica sobrevive alrededor del 5% de las células linfático son: (i) cápsula: rodea al ganglio y está
linfoides que proliferaron en la corteza tímica. compuesta de tejido conectivo, (ii) trabéculas: son
Las células T maduras, (LTc y LTh), aban- prolongaciones de la cápsula hacia el interior del
donan la médula tímica a través de las venas que parénquima ganglionar, específicamente de la cor-
drenan al timo. teza y (iii) tejido reticular: red tridimensional for-
La falta de desarrollo congénita de timo se mada por células y fibras reticulares, suspendidas
denomina Síndrome de DiGeorge. Estas personas de la cápsula y trabéculas, que forma la estructura
no pueden producir linfocitos T, desarrollando una del órgano. En uno de los bordes donde la cápsula
inmunodeficiencia grave (ver capítulo 30). es más gruesa se distingue el hilio.
El parénquima del ganglio se divide en dos
3.2. Órganos linfoides secundarios regiones: corteza y médula (figura 3-21). La cor-
Los diferentes tejidos linfoides secundarios teza, es la zona más externa y separada en com-
presentan especificidades asociadas a sus funcio- partimientos por las trabéculas. Se distinguen las
nes, sin embargo tienen algunas características es- cortezas externa y profunda (o paracorteza). La
tructurales comunes: (a) presentan mecanismos corteza externa alberga los denominados folículos
para transportar los antígenos al microambiente (o nódulos) linfoides primarios que son agrega-
linfoide; (b) tienen adaptaciones vasculares espe- dos esféricos de LB (vírgenes y de memoria). Es-
cializadas para atraer linfocitos, desde la sangre, tos nódulos pueden presentar un centro
especialmente vírgenes; y (c) presentan regiones germinativo, denominándose así folículos
donde principalmente existen LT o LB, llamadas linfoides secundarios. Estos últimos se forman
zona T y zona B, respectivamente. cuando se desarrolla una respuesta inmune; en el
Los órganos linfoides secundarios incluyen centro germinal se encuentran LB llamados
los ganglios linfáticos, el bazo y el tejido linfoide centroblastos. Aquí se generarían los LB de me-
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Figura 3-21. Estructura histológica de un ganglio linfático. El ganglio posee elementos de sostén (cápsula, trabéculas y tejido
reticular). Su parénquima se divide en corteza y médula; en la corteza existe tejido linfoide organizado como folículos y en la
médula existen cordones de tejido linfoide separados por senos medulares. Vasos linfáticos aferentes y eferentes entran y salen de
los ganglios, respectivamente.
moria y células plasmáticas (células efectoras de el endotelio y migración transendotelial partici-

las células B). La región periférica de los folículos pan moléculas de adhesión, en forma similar a lo
secundarios se denomina zona del manto o calota, descrito para los neutrófilos (ver punto 2.4.1.). Los
formada por linfocitos que están emigrando del LB que ingresan migran a la corteza y la mayoría
centro germinal. de los LT, permanecen en la corteza profunda.
La corteza externa es una zona dependiente
de médula ósea o zona B. En la corteza profunda La médula corresponde a la parte más interna del
(paracorteza) no existen folículos y está poblada ganglio. Consiste en los llamados cordones
principalmente de células T. (zona dependiente de medulares constituidos por linfocitos, células
timo, zona T) Las células presentadoras de plasmáticas y macrófagos. Estos cordones están ubi-
antígeno emigran hacia esta zona para presentar cados alrededor de los senos medulares, los que con-
los antígenos en moléculas MHC clase II a los LTh. vergen a la región del hilio donde desembocan en
Si éstas se activan, ocurrirá una expansión clonal los vasos linfáticos eferentes. Los linfocitos de los
y aumentará la anchura de la paracorteza. Las cé- cordones están en proceso de emigrar desde la cor-
lulas T recién formadas emigran hacia los senos teza para entrar en los senos medulares y así vía
medulares, dejan el ganglio y van a la zona de linfáticos eferentes alcanzar el conducto torácico, y
actividad antigénica. Las vénulas de endotelio luego la circulación general (ver punto 4).
columnar (HEV) están localizadas en esta región; Los vasos que llegan al ganglio se llaman
a través de este tipo de epitelio los linfocitos de la vasos linfáticos aferentes y se introducen en él
circulación general ingresan al parénquima por varios puntos de la superficie convexa y vacian
ganglionar. En la interacción de los linfocitos con la linfa en el seno subcapsular. Este seno se conti-
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núa con los senos corticales o paratrabeculares teza profunda y otros reclutados desde la corteza
(paralelos a las trabéculas) los que descargan la externa pueden endocitar el antígeno, procesarlo
linfa en los senos medulares que a su vez drenan y presentarlo a los LTh. Por su parte, los LT CD4+
la linfa en los vasos linfáticos eferentes. Éstos facilitan la respuesta inmune humoral, particular-
abandonan el ganglio por el hilio; ambos vasos mente en el caso de los llamados antígenos timo
linfáticos, aferentes y eferentes poseen válvulas. dependientes (ver capítulo 5). Así en la paracorteza
También entran y salen a través del hilio (zona se generan pequeños focos de diferenciación y
cóncava del ganglio), los vasos sanguíneos (arte- maduración de LB a células plasmáticas las que
ria y vena) y nervios. Otros tejidos linfoides como secretarán anticuerpos (IgM, IgG) que llegan a la
las amígdalas, el bazo y el timo tienen sólo vasos sangre vía linfa eferente. Posteriormente algunos
linfáticos eferentes. LTh y LB migran a los folículos primarios de la
corteza externa amplificando la respuesta inmu-
Fisiología. Entre las funciones de los ganglios ne. Allí se generan linfoblastos, llamados en este
linfáticos, está el filtrar la linfa que ingresa vía va- caso centroblastos. Por un proceso de maduración
sos linfáticos aferentes, así los macrófagos pueden y selección por afinidad van siendo selecciona-
fagocitar alrededor del 90% de los antígenos que dos los que presentan mayor afinidad por el
ingresan a los ganglios. Esto causa un proceso in- antígeno. También ocurre aquí el fenómeno deno-
flamatorio con aumento de volumen del ganglio. minado cambio de clase (ver capítulo 6).
Además de la fagocitosis del antígeno en los
ganglios linfáticos los linfocitos B y/o T toman 3.2.2 Bazo
contacto con los antígenos. Una respuesta inmu-
ne primaria (primer contacto con el antígeno es- El bazo es el órgano linfoide de mayor tama-
pecífico) la respuesta se inicia con activación de ño del cuerpo (aproximadamente 150 g en adul-
LTh vírgenes, ubicados en la corteza profunda; tos); está situado en el peritoneo, en la región su-
aproximadamente 48 horas después de la activa- perior izquierda del abdomen.
ción se transforman en linfoblastos los que sufren El bazo está rodeado por una cápsula de teji-
mitosis generándose a los 5 días un clon de LTh do conectivo desde la cual parten trabéculas hacia
efectores y de memoria. Si el agente infeccioso es el parénquima del órgano (figura 3-22). Por el hilio
intracelular (Ej. Virus) se activan los LTc que re- entran la arteria esplénica y nervios, y salen por
conocen los antígenos expresados en moléculas la vena esplénica y vasos linfáticos. La estructura
MHC de clase I (ver capítulos 8 y 9). del órgano está dada por una red tridimensional
Al mismo tiempo que se activa la respuesta de fibras y células reticulares, conectadas a la cáp-
inmune celular los escasos LB existentes en la cor- sula y trabéculas (similar a los ganglios linfáticos).
Figura 3-22 Estructura histológica del bazo. Una cápsula de tejido conectivo rodea al bazo; de ésta se originan trabéculas hacia
el parénquima. La pulpa blanca está compuesta principalmente por linfocitos. La pulpa roja la componen sinusoides venosos,
células y fibras reticulares, eritrocitos, macrófagos, linfocitos y granulocitos.
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La arteria esplénica se ramifica en las arte- recirculante de linfocitos. La mayoría de las célu-
rias trabeculares, las que al presentar un diámetro las plasmáticas emigran a la médula ósea para sin-
de 0,2 mm dejan las trabéculas y son rodeados tetizar y secretar anticuerpos en los senos medulares;
por linfocitos denominándose a éstos vaina sólo algunas se quedan en la zona marginal para
linfática periarterial y al vaso, arteria central. hacer lo propio en los senos marginales.
Luego ésta pierde la vaina linfática y se subdivi- La pulpa roja está compuesta de sinusoides
de en varias arterias penicilares, que entran la lla- venosos separados por cordones parenquimatosos,
mada pulpa roja (ver más adelante). El extremo que consisten en mallas de células reticulares y
de las arterias penicilares corresponden a capila- fibras reticulares, en la que existen abundantes
res arteriales terminales que descargan la sangre eritrocitos, macrófagos, linfocitos, células
en los senos esplénicos. Éstos drenan en las venas plasmáticas y granulocitos. Estos macrófagos son
pequeñas de la pulpa, las que van aumentando de responsables de retirar de la circulación los gló-
calibre, llegando a formar la vena esplénica, que bulos rojos y plaquetas, senescentes y alterados.
drena en la vena cava. Desde el punto de vista inmune, el bazo pre-
El parénquima esplénico o pulpa esplénica, senta una función similar a los ganglios linfáticos,
se divide en pulpa blanca y pulpa roja. La pulpa la diferencia fundamental radica en que el bazo es
blanca está compuesta por tejido linfoide, prin- el más importante sitio de respuesta inmune a
cipalmente linfocitos, estrechamente asociados a antígenos circulantes y los ganglios linfáticos par-
la arteria central, a cuyo alrededor forman la vai- ticipan en la respuesta inmune a antígenos pre-
na linfática periarterial. En ésta existen principal- sentes en la linfa. El concepto de respuesta inmu-
mente células T (aproximadamente 70% de CD4+ ne se refiere a la respuesta inmune innata y espe-
y 30% de CD8+). Las células B están organizadas cífica, tanto celular (fagocitosis, activación de cé-
en folículos, generalmente incorporados en la vai- lulas T) como humoral (activación de células B
na linfática periarterial. Los folículos primarios con la consiguiente síntesis de anticuerpos).
contienen células B no estimuladas y los folículos
secundarios son sitios de activación y prolifera- 3.2.3 Tejido linfoide asociado a mucosa
ción de células B, y contienen centro germinal.
La pulpa blanca está rodeada por una delgada zona En muchas regiones del cuerpo, el tejido
marginal que la separa de la pulpa roja, que con- linfoide no está encapsulado como en los ganglios
tiene células B, células “helper”, macrófagos y linfáticos y el bazo. Se trata de tejido linfoide di-
células dendríticas interdigitantes (células presen- fuso sin organización especial, que no se separa
tadoras de antígeno). con precisión del tejido conectivo vecino, pero que
En la zona marginal también se encuentran presenta folículos linfoides aislados. A estos teji-
los senos marginales; aquí es donde las células y dos se le denomina tejido linfoide asociado a
antígenos transportados por la sangre tienen ac- mucosa (MALT), las localizaciones más caracte-
ceso al parénquima del bazo. Así puede ocurrir: rísticas son las asociadas a la mucosa intestinal
(i) contacto entre los antígenos y las células pre- (GALT, “gut”) y respiratoria (BALT, “broncus”)
sentadoras de antígeno; (ii) los macrófagos pue- (figura 3-16); también existe en la mucosa
den fagocitar microorganismos y células urogenital (ver capítulo 16). Además de linfocitos,
senescentes; (iii) células T y B de la sangre pue- células que se encuentran en mayor porcentaje,
den ingresar a la pulpa blanca; y (iv) los LTh, también se hallan linfoblastos, células plasmáticas
reconocen antígenos presentados en moléculas y macrófagos. Los folículos de los MALT son si-
MHC clase II por las células dentríticas milares a los existentes en el bazo y los ganglios
interdigitantes; esto dará lugar a activación y pro- linfáticos; las regiones centrales son ricas en cé-
liferación clonal en la pulpa blanca (folículo se- lulas B, igual que los centros germinales.
cundario).
A modo de resumen, los linfocitos se forman GALT. Todo el tracto gastrointestinal contiene
en la pulpa blanca, las células B de memoria y cé- MALT. Sin embargo, el intestino delgado, princi-
lulas plasmáticas en los folículos linfáticos y las palmente el íleon, además de folículos linfoides
subpoblaciones de células T en las vainas linfáticas aislados, contiene conglomerados linfoides deno-
periarteriales. Los LB y LT recién formados entran minados placas de Peyer. Éstas presentan un fo-
en los senos marginales y emigran hacia el sitio lículo formado por células B, rodeado por una
inflamatorio, o forman parte de la reserva región más laxa de células T y macrófagos que
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actúan como CPA. Las placas de Peyer no cuen- La IgA es la clase de anticuerpo que más activa y
tan con vasos linfáticos aferentes, pero sí presen- eficientemente puede ser secretada a través del
tan vasos linfáticos eferentes que drenan en los epitelio. Ello le significa una importante partici-
ganglios linfáticos mesentéricos. Los linfocitos pación en la defensa contra patógenos a nivel de
llegan a las placas a través de pequeñas arteriolas las vías respiratorias y del tracto intestinal. En el
que son drenadas por HEV. Si bien el íleon está intestino la producción de IgA se inicia por el in-
revestido por epitelio cilíndrico simple, las zonas greso de los antígenos a las placas de Peyer, don-
adyacentes a los folículos linfoides de las placas de células T de regiones interfoliculares y células
están cubiertas por células de tipo escamoso (pe- B foliculares, son estimuladas. Algunos de los
queñas y anchas) llamadas células M, a través de linfocitos B se diferencian a células productoras
las cuales los antígenos luminales penetran por de IgA y migran a la lámina propia, ubicada bajo
pinocitocis y fagocitosis. (figura 3-23) el epitelio de mucosa. Las citoquinas más impor-
tantes en el cambio de clase a isotipo IgA son el
factor de crecimiento transformante B (TGF-B) e
IL-5 (ver capítulo 6). Algunas células B activadas
migran a los centros germinales de las placas de
Peyer, donde ocurren proliferación de los LT y
mutaciones somáticas de los genes de Ig, lo que
conduce a una mayor afinidad de los anticuerpos.
Los linfocitos productores de IgA pueden perma-
necer en la lámina propia o pueden migrar a otras
mucosas u órganos linfoides.
3.2.4 Amígdalas
Las amígdalas son agregados encapsulados,

de manera incompleta, de folículos linfoides. Exis-
ten 3 tipos de amígdalas: (a) palatinas: bilaterales,
localizadas en los límites de la cavidad oral y la
faringe; (b) faríngea: única, ubicada en el techo de
la faringe nasal y (c) linguales: varias, se encuen-
tran en superficie dorsal del tercio posterior de la
lengua (figura 13-16). Por su estratégica localiza-
Figura 3-23. Participación de las células M en la incorpo- ción, las amígdalas están directamente expuestas a
ración de antígenos hasta las placas de Peyer. Las células tomar contacto con antígenos inhalados e ingeri-
M, expuestas hacia el lumen intestinal, permiten el ingreso de dos. El parénquima de los diferentes tipos de amíg-
antígenos por pinocitosis y fagocitosis. De esta forma los dalas es similar, está conformado por folículos
antígenos pueden tomar contacto con los linfocitos y
macrófagos de las placas de Peyer. linfoides ricos en células B, los que pueden presen-
tar centros germinales. Reaccionan a los antígenos
formando linfocitos y estableciendo una reacción
inflamatoria. La superficie de las amígdalas está
BALT. El tejido linfoide asociado la mucosa de recubierta por epitelio, diferente en cada caso.
bronquios es, estructuralmente, similar a las pla-
cas de Peyer, presenta folículos ricos en células 4. TRÁNSITO LINFOCITARIO
B, y sectores en que existen LT y CPA. El BALT
se encuentra en los bronquios de todos los lóbulos Una parte de los linfocitos formados en la
pulmonares; se ubica principalmente en las bifur- médula ósea pasa al timo, donde se diferencia a
caciones de los bronquios y bronquiolos. Al igual células T y otra parte se diferencia a células B en la
que en el GALT en la zona adyacente a los propia médula ósea. Luego de adquirir en los ór-
folículos linfoides el epitelio cilíndrico es reem- ganos linfoides primarios, los receptores que los
plazado por células M descritas en el GALT. Tam- caracterizan como linfocitos T (“helper” y
poco presentan vasos linfáticos aferentes, pero sí
eferentes y está ricamente vascularizado.
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citotóxicos) y linfocitos B, las células linfoides vír- LECTURAS SUGERIDAS
genes pasan a través de la circulación general a los
tejidos linfoides secundarios. El paso desde la san- Austyn, J. and Wood, K., Principles of cellular
gre por las HEV se ve favorecido por moléculas de and molecular immunology, Chapter 1, Oxford
adhesión (ver capítulo 12); moléculas que presen- University Press, New York, 1993.
tan ciertas diferencias dependiendo del tipo de lin-
focito (virgen o de memoria) y del tejido de destino Babior, B., “NADPH oxidase: An update”, Blood,
(ganglio linfático, placas de Peyer, GUT o piel). 93(5):1464-1476, 1999.
Allí toman contacto con los antígenos para los cua-
les presentan especificidad. En los órganos linfoides Bokoch, G., “Chemoattractant signaling and leu-
secundarios se ubican en zonas específicas, así los cocyte activation”, Blood 86(5):1649-1660, 1995.
folículos linfoides son ricos en LB y la paracorteza
(de los ganglios linfáticos) es rica en LT. Aquí en Degos, L; Linch, C.; Löwenberg, B., Textbook of
los órganos linfoides secundarios se generan los Malignant Haematology, Chapters 3, 4, Martin
linfocitos de memoria (T y B) y efectores (linfocitos Dunitz, 1999.
T citotóxico y células plasmáticas Los linfocitos
salen de los ganglios linfáticos a través de los va- Gartner, L. y Hiatt, J., Traducido por Sapiña, S.,
sos linfáticos eferentes, para llegar nuevamente a Histología, texto y atlas, Capítulos 10 y 12,
la circulación a través del conducto torácico y con- Interamericana, 1997.
ducto linfático derecho (figura 3-24).
En condiciones normales, los linfocitos es- Geneser, F., Histología: sobre bases moleculares,
tán recirculando permanentemente, lo cual pro- Capítulos 10, 11 y 16, Editorial Panamericana,
porciona una vigilancia inmunológica más eficien- 2001.
te, al permitir la presencia de todo el repertorio de
linfocitos antígeno-específicos, en diferentes par-
tes del organismo.
Figura 3-24. Recirculación de los linfocitos. Una vez que las células T y B salen de los órganos linfoides primarios como
linfocitos maduros, pasan a través de la circulación general a los tejidos linfoides secundarios. Desde los ganglios linfáticos, salen
a través de los vasos linfáticos eferentes y vuelven a la circulación general, fundamentalmente, por el conducto torácico.
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Sin título-2 85 5/26/06, 10:25 AM

Hampton, M.; Kettle, A.; Winterbown, C., “Inside
the neutrophil phagosome: oxidants,
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92(9): 3007 - 3017, 1998.
Lee, R.; Foerter, J.; Lukeng, J.; Pareskevas, F.;

Greer, J.; Rodgers, G., Editors, Wintrobe's clini-
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Palomo, I. y Pereira, J., “Fundamentos

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Chapter 23, 1998.
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Sin título-2 86 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 4
INMUNIDAD INNATA
Iván Palomo G., Adriana Ardiles S. y Ulises Vergara C.
1. Introducción
2. Componentes de la inmunidad
innata o natural
3. Fase de reconocimiento en la
respuesta inmune innata
4. Fase efectora en la respuesta
inmune innata
5. Proyección clínica
6. Filogenia de la respuesta
inmune innata
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RESUMEN
La inmunidad innata es la primera línea de defensa contra la infección. Posee mecanismos

de reconocimiento de diversidad limitada codificadas en la línea germinal. No posee memoria.
Está constituido por diversos tipos celulares y moléculas solubles que juegan un rol en el recono-
cimiento de microorganismos y también en la fase efectora de la respuesta innata.
Filogenéticamente es el mecanismo de defensa más antiguo y se ha conservado a lo largo de la
evolución. Actúa rápidamente para eliminar al antígeno a través de mecanismos microbicidas y
respuesta inflamatoria. Por ser sus mecanismos efectores tan potentes y con capacidad de produ-
cir daño tisular del huésped están finamente regulados por diversos mecanismos de control. La
respuesta innata tiene la capacidad de alertar y dirigir la respuesta inmune adquirida orientándola
hacia una respuesta celular o humoral específica.
1. INTRODUCCIÓN da por un conjunto de diversos tipos celulares y

factores solubles encargados de la resistencia del
El sistema inmune es parte de los mecanis- huésped ante agentes infecciosos con los cuales
mos biológicos destinados a mantener la integri- nunca éste ha tenido contacto. A diferencia de la
dad estructural y funcional de los individuos y, inmunidad específica, la inmunidad innata es de ac-
está genéticamente programado para la neutrali- ción inmediata, no requiere exposición previa al
zación y eliminación tanto de agentes infeccio- antígeno y no se modifica con exposiciones repeti-
sos, células y moléculas extrañas, como detritus y das al agente infeccioso. Su rapidez de activación
productos moleculares de células propias enveje- y, por lo tanto, rapidez de la respuesta efectora a la
cidas, transformadas o tumorales. infección, colocan a la inmunidad innata en una si-
Los componentes celulares y moleculares del tuación privilegiada para eliminar a los agentes in-
sistema inmune se han separado tradicionalmente fecciosos. Sin embargo, no debemos olvidar que
en componentes naturales o innatos y componen- en el curso de la evolución estos microorganismos
tes adquiridos o específicos que han desarrollado han desarrollado diversas estrategias para evadir,
estrategias, mecanismos y receptores distintos para distraer, suprimir o manipular en su propio benefi-
el reconocimiento inmunológico. Así, mientras la cio, los diversos mecanismos efectores de la res-
inmunidad específica se basa en el tamaño y la puesta inmune. Por otra parte, los huéspedes han
diversidad del repertorio linfocitario T (1018) y B desarrollado mecanismos defensivos cada vez más
(1014) y requiere la activación y expansión clonal selectivos y específicos. Esto ha significado mejo-
de linfocitos T y B únicos y específicos para el rar, diversificar y amplificar mediante mecanismos
desarrollo de una respuesta inmune eficiente; el de recombinación génica, el repertorio de recepto-
sistema innato utiliza unos pocos cientos de re- res linfocitarios aumentando así la probabilidad que
ceptores de expresión constitutiva y no clonal en un linfocito individual y único reconozca antígenos
las células de la inmunidad natural y, cuya especi- del microorganismo. Estos cambios evolutivos han
ficidad está dirigida a moléculas o patrones permitido el surgimiento de la inmunidad adquiri-
moleculares altamente conservados en grandes da, optimizando la defensa inmunológica de los
grupos de agentes infecciosos (PAMPs= Pathogen hospederos y por lo tanto su sobrevida en un am-
Associated Molecular Patterns). biente siempre cambiante y de gran complejidad.
La inmunidad innata es filogenéticamente más Existe una interacción bidireccional entre
antigua que la adquirida, se ha conservado a lo lar- estos dos sistemas: el sistema inmune innato
go de la escala evolutiva y constituye la primera funciona como una alerta para el sistema inmune
línea de defensa contra la infección. Está constitui- específico y puede determinar el tipo de respuesta
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adquirida, ya sea humoral o celular. Por otra parte, (tabla 4-1), se puede citar la integridad de la piel y
el sistema inmune específico utiliza los mecanis- de las mucosas del tracto respiratorio, digestivo y
mos efectores de la inmunidad innata para eliminar urogenital. Al estar las células epiteliales firme-
a los microorganismos haciendo más eficiente el mente adheridas, constituyen una barrera muy im-
proceso de fagocitosis y amplificando la respuesta portante en la resistencia del huésped a la infec-
inflamatoria mediante la activación del complemen- ción. Cada sistema posee características particu-
to por la vía clásica (figura 4-1). Del balance entre lares de acuerdo con su anatomía y fisiología. Así
la efectividad de los mecanismos inespecíficos para por ejemplo, en el aparato respiratorio, el flujo de
eliminar la infección y de la carga del agente aire o de fluidos a lo largo del epitelio, unido al
infectante va a depender la evolución de la infec- movimiento ciliar ejerce una función de barrido
ción. Si ésta persiste por más tiempo, el influjo de de microorganismos que se hayan adherido al
monocitos y macrófagos al sitio de infección va a mucus impidiendo de esta manera la adhesión a
llevar al procesamiento y presentación de antígenos las células epiteliales.
del agente infeccioso al sistema inmune específi- En la inmunidad innata participan linfocitos
co, con su consecuente activación (figura 4-2). con características especiales que los hacen más
Después de un tiempo relativamente corto de 3 a 5 afines con ésta que con la inmunidad adquirida.
días, los anticuerpos producidos por la progenie de Estos linfocitos tienen un receptor para antígeno
los clones de linfocitos B activados van a producir de diversidad limitada. Son los linfocitos T
una opsonización adicional del agente infeccioso. intraepiteliales y los linfocitos B-1. Los primeros
La fijación de anticuerpos en la superficie bacteriana producen citoquinas, activan fagocitos y causan
por sí sola puede no tener un efecto nocivo para la la muerte de las células infectadas; y los segun-
sobrevida bacteriana, sin embargo, a través de la dos, producen anticuerpos naturales clase IgM.
activación de la vía clásica de complemento y de la Constituyen un mecanismo preformado para en-
fagocitosis se acelera la eliminación de dicho agen- frentar microorganismos que sobrepasan las ba-
te. A su vez, los linfocitos T (LT) secretan citoquinas rreras epiteliales.
que activan a los monocitos y macrófagos, permi- Los mastocitos son otro tipo celular que par-
tiéndoles eliminar organismos ingeridos que resis- ticipa en la inmunidad innata. Se ubican en las
ten la destrucción por parte de células no activadas. proximidades de pequeños vasos sanguíneos y
Así, los mecanismos inespecíficos que iniciaron la posee mediadores de la inflamación preformados
reacción inmune vienen ahora a completar su efec- como histamina, serotonina, factor quimiotáctico
to, bajo la dirección y activación de la inmunidad para eosinófilos, factor quimiotáctico para
específica (figuras 4-1 y 4-2). neutrófilos, heparina, quimasa, peroxidasa, etc.
También tienen la capacidad de secretar media-
dores lipídicos de neoformación tales como las
2. COMPONENTES DE LA INMUNIDAD prostaglandinas, tromboxano y leucotrienos y
INNATA mediadores proteicos de neoformación como las
citoquinas. El lipopolisacárido puede inducir di-
Los componentes del sistema inmune innato rectamente la liberación de productos de los
son un grupo heterogéneo de células y factores mastocitos e indirectamente, a través de la activa-
solubles (tabla 4-1). Estos componentes se ubican ción del sistema del complemento. Los
en posibles puntos de entrada de los agentes in- mastocitos, por estas características, pueden ini-
fecciosos desde el medio ambiente; en la circula- ciar y orquestar la respuesta inflamatoria en los
ción, donde pueden hacer una labor de vigilancia sitios de infección.
y, en los tejidos donde finalmente se llevará a cabo Otros tipos de células que intervienen en la
la respuesta efectora si es que el agente infeccioso inmunidad innata son los polimorfonucleares
ha logrado sobrepasar estas primeras barreras. (PMN) neutrófilos, eosinófilos, los monocitos y
Estos mecanismos son de tipo físico; están las células “natural killer” (NK). Todas estas cé-
preformados o mantenidos bajo control por el lulas tienen la propiedad de circular y migrar. Ello
huésped. Deben ser activados rápidamente en res- les permite ejercer una vigilancia eficiente y una
puesta a la infección, pero debido a su alta poten- rápida llegada a los lugares de infección. Estas
cia e inespecificidad, pueden producir daño tisular, células se originan en la “stem cell” de la médula
por lo tanto, su activación debe ser regulada. ósea, la que se diferencia a un precursor mieloide
Con respecto a los componentes celulares (que genera los granulocitos, monocitos y
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Sin título-2 90 5/26/06, 10:25 AM

Figura 4-1. El sistema inmune. El sistema inmune está compuesto de dos ramas principales: inmunidad innata y adquirida. La
confrontación del sistema inmune innato con patógenos lleva a su rápida activación y capacita al sistema inmune específico para
responder apropiadamente. Existen interconexiones entre los mediadores solubles y celulares de ambos sistemas, que interactúan
aumentando la eficacia de la respuesta. Modificado de Ploegh, HL., Science 1998; 280:248.
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Sin título-2 91 5/26/06, 10:25 AM

acetílglucosamina en la pared celular bacteriana;
hidrolasas neutras y ácidas, que degradan
macromoléculas microbianas, y proteínas
catiónicas que destruyen bacterias gram negati-
vas. Los gránulos secundarios contienen lisozima,
lactoferrina, que tiene la capacidad de que el fie-
rro requerido para el crecimiento microbiano lo
que produce bacteriostasis y colagenasa que di-
giere macromoléculas bacterianas.
Los monocitos son los precursores circulan-
tes de los macrófagos tisulares. Se encuentran en
gran número en tejido conectivo, pulmón
(macrófagos alveolares e intersticiales), hígado
(células de Küpfer), bazo (macrófagos esplénicos),
cerebro (células de la microglía).
Figura 4-2. Interacciones entre inmunidad innata y adqui-
rida. Los anticuerpos producidos por los linfocitos B, al unir- Las células NK o linfocitos granulares gran-
se a los microorganismos actúan como agentes opsonizantes. des presentan actividad citotóxica directa y
Las citoquinas liberadas por las células T activan las células citotoxidad dependiente de anticuerpos y partici-
fagocíticas para destruir el material que éstos han endocitado.
pan en defensa contra células infectadas por virus
A su vez, los macrófagos y monocitos pueden presentar el
antígeno a las células T y causar su activación. precozmente durante la infección (ver capítulo 19).
No expresan receptores de linfocitos T. Poseen
receptores de activación KAR (“Killer Activating
Receptor”) que reconocen patrones moleculares
macrófagos) y a un precursor linfoide del cual o PAMPs hidrocarbonados propios de los agentes
derivan las células NK (ver capítulo 3). infecciosos y activan la citotoxicidad directa. Re-
Los polimorfonucleares son el tipo celular ceptores Fc reconocen anticuerpos específicos
más numeroso a nivel circulante. Son de corta vida unidos a la membrana de los agentes infecciosos
y se producen en gran número en la respuesta y activan la citotoxicidad dependiente de
inflamatoria. Estas células deben migrar al sitio anticuerpos. Las células NK poseen además re-
de infección abandonando el torrente sanguíneo ceptores de inhibición KIR “Killer Inhibition Re-
en respuesta a señales moleculares. Los PMN po- ceptor” que reconocen moléculas codificadas por
seen gránulos primarios y secundarios. Los grá- el Complejo Principal de Histocompatibilidad
nulos primarios contienen mieloperoxidasa, que (MHC) y transducen señales de inhibición de la
potencia la actividad microbicida del peróxido de citotoxicidad contra células propias que expresan
hidrógeno; lisozima, que hidroliza uniones estas moléculas MHC.
glicosídicas entre ácido acetilmurámico y Además de ser una barrera física, la piel y
Tabla 4-1. Componentes de la inmunidad innata
Celulares Solubles
Células epiteliales de la piel y mucosas Defensinas, lisozima y otras

Linfocitos T intraepiteliales Sistema del complemento
Linfocitos B-1 Colectinas
Mastocito Pentraxinas
Polimorfonucleares neutrófilos Factores de coagulación
Monocitos Citoquinas:
Macrófagos TNF, IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN
Células Natural Killer Quimioquinas:
IL-8, MC, MIP
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Sin título-2 92 5/26/06, 10:25 AM

mucosas poseen sustancias como ácidos grasos flamatorio secundario a la infección. Interviene en
(piel), enzimas como lisozima (presente en sali- la fase de reparación tisular y en consecuencia en
va, sudor, lágrimas) y péptidos antibacterianos la recuperación de la integridad de los tejidos. El
como defensinas con acción microbicida o sistema de la coagulación, junto a las otras casca-
inhibidora del crecimiento bacteriano. das plasmáticas enzimáticamente gatilladas, como
A nivel digestivo, participan la lisozima de el sistema de las quininas, el sistema de la fibrinolisis
la saliva, el pH ácido del estómago, las criptidinas y el sistema del complemento, son mediadores de
(péptidos antibacterianos generados en las criptas la inflamación. Estos sistemas se interrelacionan por
del intestino delgado), y la flora normal que com- lo que la activación de uno de ellos puede produci-
pite por nutrientes con microorganismos patógenos rá la activación de los otros. La puesta en marcha
y también elabora sustancias antibacterianas tales de la acción de los mediadores plasmáticos de la
como las colicinas, que previenen la colonización inflamación junto con la activación de los media-
por otro tipo de bacterias dentro del intestino. dores celulares, contribuye a la eliminación del
Además de los Componentes solubles men- agente infeccioso a través de la respuesta
cionados en relación con las barreras epiteliales y inflamatoria local. Las citoquinas son una familia
mucosas, en la inmunidad innata hay otros com- de proteínas que participan tanto en la inmunidad
ponentes de este tipo, que participan en la fase de innata como en la inmunidad adquirida (ver capí-
reconocimiento y en la fase efectora (tabla 4-1). A tulo 11). Ellas son producidas por diversos tipos
continuación se describen brevemente: celulares. Comunican células del sistema inmune
El complemento es un sistema de proteínas entre sí. Ejercen acciones locales y a distancia so-
plasmáticas que interactúan entre sí de una manera bre diferentes tipos celulares. Las citoquinas que
regulada. Es un mecanismo efector de la inmunidad participan en la inmunidad innata son generadas
humoral inespecífica y tiene un rol amplificador de por macrófagos activados en sitios de infección.
la respuesta inflamatoria. Los precursores de este Hay citoquinas de alarma o proinflamatorias
sistema deben ser activados secuencialmente por como interleuquina 1 (IL-1), factor de necrosis
reacciones bioquímicas a través de dos vías princi- tumoral (TNF) e interleuquina 6 (IL-6), las cuales
pales: clásica y alterna, que comparten una secuen- inducen en la etapa precoz de la infección una re-
cia terminal común. La vía clásica se activa por puesta inflamatoria local dirigida a contenerla y,
inmunocomplejos de IgG o IgM y la vía alterna se eventualmente, inducen una respuesta sistémica
activa por lipopolisacáridos de pared bacteriana, o de fase aguda. Otras citoquinas tienen función
polisacáridos y agregados de inmunoglobulinas. La quimiotáctica para leucocitos como interleuquina
vía de las lectinas de la activación del complemento 8 (IL-8). La interleuquina 12 (IL-12) activa célu-
es gatillada por la unión de polisacáridos microbianos las NK y estimula a los macrófagos, la
a lectinas circulante (ver capítulo 18). interleuquina 10 (IL-10) inhibe a los macrófagos
Las colectinas son una familia de proteínas y los interferones (IFN) α y β tienen actividad
caracterizadas por la presencia de un dominio antiviral.
colágeno–símil y un dominio lectina. Juegan un
rol en la inmunidad innata al actuar como recep-
tores de patrones de reconocimiento y pueden ac- 3. FASE DE RECONOCIMIENTO EN LA
tivar al complemento vía unión de C1q. RESPUESTA INMUNE INNATA
Las pentraxinas son una familia de proteínas
del plasma que contienen cinco unidades globula- La diferencia esencial entre los sistemas
res. La proteína C reactiva es el miembro más im- inmunológicos innato y adquirido es el modo a tra-
portante de esta familia: (a) es un reactante de fase vés del cual reconocen a los microorganismos. El
aguda que se sintetiza a nivel hepático, (b) su ligan- sistema inmune innato emplea proteínas codificadas
do es polisacárido bacteriano, (c) reconoce también en la línea germinal. Reconoce estructuras compar-
constituyentes fosfolipídicos de células dañadas, (d) tidas por diferentes tipos de microorganismos (pa-
funciona como opsonina y (e) puede activar el com- trones moleculares). Estas proteínas pueden ser re-
plemento por vía clásica, por su unión a C1q. ceptores de superficie celular o sustancias solubles
El sistema de la coagulación además de parti- de diversidad limitada.
cipar en la hemostasia y contribuir a evitar local- Las principales moléculas solubles de recono-
mente la diseminación de la infección, está estre- cimiento de la inmunidad innata, en general, reco-
chamente unido a la injuria tisular y al proceso in- nocen estructuras carbohidrato (tabla 4-2). Las prin-
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Sin título-2 93 5/26/06, 10:25 AM

cipales son Proteína C reactiva, Proteína amiloide Subsecuentemente la activación del macrófago es el
sérico, “mannose binding protein” (MBP), resultado de señales gatilladas por la subunidad “Toll-
“lipopolysaccharide binding protein” (LBP), CD14 like-4”. La activación de los macrófagos se eviden-
soluble y C3. Es importante destacar que algunos de cia a través de la estimulación de síntesis de proteí-
estos receptores solubles tienen la capacidad de acti- nas que van a favorecer la función microbicida
var complemento y de esa manera pueden favorecer (oxidasas, óxido nítrico sintetasa), la trombosis (fac-
la fagocitosis, amplificar la respuesta inflamatoria y tor tisular), la remodelación tisular (proteasas, facto-
lisar a microorganismos. Otros son profagocíticos. res de crecimiento, factores angiogénicos), inflama-
Claramente se puede ver que la función de reconoci- ción local y respuesta de fase aguda (IL-1, IL-6 y
miento está unida a funciones efectoras. TNF), activación de otros tipos celulares (IL-12) y
Tabla 4-2. Inmunidad innata: moléculas solubles de reconocimiento
Síntesis Ubicación Ligando: Ligando: Activación Profagocítica

hepática sérica Polisacáridos Proteína complemento
matriz
extracelular
PCR + + + + +
PAS + + + + +
MBP + + + + +
LBP + + + +
sCD14 + + +
C3 + + + + +
PCR, Proteína C reactiva; PAS, Proteína amiloide A; MBP, “Mannose binding protein”;
LBP, “Lipopolysaccharide binding protein”; sCD14, CD14 soluble.
Los principales receptores celulares de reconocimien- estimulación de la respuesta específica a través de

to de la inmunidad innata (tabla 4-3) se ubican en la presentación antigénica y de la expresión de molé-
membrana celular de polimorfonucleares neutrófilos, culas coestimuladoras. Entre otros receptores celu-
monocitos y macrófagos, dotándolos así de la capa- lares de reconocimiento que presentan los
cidad de vigilancia de microorganismos que puedan polimorfonucleares neutrófilos se encuentran el re-
haber ingresado al huésped habiendo sobrepasado ceptor para el péptido bacteriano que contiene resi-
la barrera inicial del sistema de defensa inespecífi- duos N-formil metionil y el receptor para fragmento
co. Reconocen glicoproteínas y lipopolisacáridos de complemento como CR3, que puede directamen-
bacterianos comunes a muchos patógenos y que no te reconocer bacterias para fagocitosis.
están presentes en células de mamíferos. Son los re-
ceptores de patrones de reconocimiento. Además, los
receptores solubles y celulares de reconocimiento 4. FASE EFECTORA EN LA RESPUESTA
pueden actuar en conjunto para llevar a cabo su fun- INMUNE INNATA
ción. De este modo el sistema sensor de
lipopolisacárido (LPS) del macrófago está constitui- La unión ligando-receptor induce respuestas ce-
do por tres componentes: una proteína plasmática lulares que estimulan la inflamación y la acción
de unión a LPS que es LBP, un receptor de superfi- microbicida. Entre los sistemas mediadores de
cie celular para LPS que es CD14 y un receptor la inflamación juega un rol preponderante el sis-
transductor de señales llamado receptor “Toll-like- tema de las cascadas plasmáticas enzimática-
4”. LPS circulante es inicialmente unido a LBP y mente gatilladas: sistema de la coagulación, sis-
luego es entregado a CD14 sobre la superficie del tema de las quininas, sistemas de la fibrinolisis y
macrófago donde la LBP es liberada. sistema del complemento (figura 4-3). Estos siste-
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Sin título-2 94 5/26/06, 10:25 AM

Tabla 4-3. Inmunidad innata: receptores celulares de reconocimiento
Ubicación Ligando Función
Receptor de manosa Macrófago tisular Glicoproteínas Fagocitosis

microbianas
Receptores scavenger Macrófago tisular Pared celular de Fagocitosis
bacterias y hongos
Receptor CD14/Toll-like Monocitos y macrófagos LPS Activación de macrófagos
Receptor CR3 Monocitos, macrófagos iC3b, LPS Fagocitosis, adhesión
y PMN neutrófilos
Receptor péptido N- PMN neutrófilos, Proteínas bacterianas Activación neutrófilos
formilmetionil macrófagos y macrófagos
LPS, “Lipopolysaccharide” (lipopolisacárido) ; PMN, polimorfonucleares.
mas están interrelacionados y juegan un papel am- opsonina y favorece la fagocitosis por neutrófilos
plificador de la respuesta inflamatoria. El factor y macrófagos. La activación del sistema de las
Hageman o factor XII es fundamental; su activa- quininas libera bradiquinina, que aumenta la per-
ción (por superficies cargadas negativamente, meabilidad vascular y también provoca dolor. Ade-
como colágeno, membranas basales, expuestos más, el quininógeno, de alto peso molecular, es
durante la injuria tisular) inicia la cascada de la un cofactor en la activación del factor Hageman.
coagulación, del sistema de las quininas y de la La calicreina por sí misma, al ser un activador de
fibrinolisis. La plasmina activa al sistema del com- este factor, permite la amplificación autocatalítica
plemento; factores derivados de éste participan en del estímulo inicial. Los neutrófilos y macrófagos
la inflamación aguda, como C3a y C5a, que ac- activados matan microorganismos por medio de
túan sobre el mastocito produciendo su enzimas lisosomales, intermediarios reactivos del
degranulación y liberando histamina, lo que pro- oxígeno y óxido nítrico, o sea también en relación
duce aumento de la permeabilidad vascular y con estos receptores de superficie celular se pue-
vasodilatación. C5a favorece la adhesión, de ver la unión entre función de reconocimiento y
quimiotaxis y activación de leucocitos. C3b es una funciones efectoras.
Figura 4-3. Sistemas mediadores del plasma en la inflamación. Proteínas de los sistemas de la coagulación, de la fibrinolisis, de
las cininas y del complemento interaccionan, participando como mediadores químicos de la inflamación. CAPM, cininógeno de
alto peso molecular; AP, activador del plasminógeno; PDF, productos de degradación de la fibrina.
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Sin título-2 95 5/26/06, 10:25 AM

Con respecto a mediadores de la inflamación bios vasculares de aumento de flujo y de permeabi-
de origen celular los productos derivados del me- lidad, producidos por los mediadores químicos de
tabolismo del ácido araquidónico son fundamen- la inflamación y el reclutamiento de leucocitos ha-
tales (figura 4-4). Luego de su liberación desde cia los sitios de infección con la formación subse-
fosfolípidos de membranas a través de la activa- cuente del infiltrado inflamatorio. Este recluta-
ción de fosfolipasa A2, el ácido araquidónico es miento es estimulado por citoquinas y mediado
metabolizado a través de dos vías, la vía de la por moléculas de adhesión. Estas moléculas son
cicloxigenasa y la vía de la lipoxigenasa. En la glicoproteínas unidas a la membrana celular que
vía de la cicloxigenasa se obtienen secuen- permiten a la célula interactuar con otra (ver capí-
cialmente, entre otros metabolitos, los endoperó- tulo 12). La migración de los leucocitos se realiza
xidos prostaglandinas G2 y H2, tromboxano A2 a través del endotelio de la vénula postcapilar. Pro-
(agregante plaquetario y vasoconstrictor), ductos bacterianos como lipopolisacáridos e IL-1
prostaciclina o prostaglandina I2 (antiagregante y TNF secretados por macrófagos estimulan a las
plaquetario y vasodilatador) y las prostaglandinas células endoteliales para expresar secuencialmente
E2, F2α y D2 (vasodilatadores). El tromboxano A2 selectinas e integrinas que median la adhesión pre-
se sintetiza, fundamentalmente, en las plaquetas y ferencial de diferentes tipos de leucocitos. Las
la prostaciclina en las células endoteliales. En la selectinas intervienen en la unión inicial, laxa del
vía de la lipoxigenasa se genera el ácido leucocito con la célula endotelial y las integrinas
hidroperoxieicosatetraenoico (HETE), un potente median la unión estable entre aquellas células. Esta
agente quimiotáctico para los neutrófilos. El HETE unión es previa a la migración del leucocito a tra-
puede originar el leucotrieno A4, a partir del cual se vés de los espacios intercelulares endoteliales. Los
generan los leucotrienos B4 (factor quimiotáctico) quimioatractantes activan la adhesividad de las
y leucotrienos C4, D4 y E4, que aumentan la per- integrinas y dirigen la migración de los leucocitos
meabilidad vascular. El término leucotrieno se debe de acuerdo al gradiente de concentración de fac-
a que presentan una cadena conjugada triénica y tores quimiotácticos hasta llegar al foco de infec-
que se aislaron originalmente en los leucocitos. ción (figura 4-5).
Figura 4-4. Metabolitos del ácido araquidónico. Una vez Figura 4-5. Migración de leucocitos en inflamación. Varias
desesterificado por la fosfolipasa A2, el ácido araquidónico familias de moléculas de adhesión controlan la migración de
es metabolizado a través de las vías de la cicloxigenasa y de la leucocitos durante la inflamación; las selectinas facilitan el
lipoxigenasa. PGG2 y PGH2, endoperóxidos; PGI2, rodamiento (“rolling”), las quimioquinas dan las señales que
prostaciclina; PGE2, PGF2a y PGD2, prostaglandinas; HPETE, convierten la interacción de baja afinidad mediada por
ácido hidroxieicotetranoico; LTA4-LTE4, leucotrienos. selectinas en una interacción de alta afinidad mediadas por
integrinas previa a la extravasación de leucocitos.
La respuesta inflamatoria local se evidencia

semiológicamente por los cinco signos clásicos: Los neutrófilos inician el englobamiento a
aumento de volumen, eritema, aumento de tem- través de la proyección de pseudópodos alrede-
peratura local, dolor e impotencia funcional. Di- dor del microorganismo, y luego fusionan los po-
chos signos son la expresión clínica de los cam- los distales de aquellos, para formar el fagosoma.
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Sin título-2 96 5/26/06, 10:25 AM

Los gránulos citoplasmáticos de los leucocitos tes, anemia de enfermedades crónicas y
polimorfonucleares se fusionan a la base del trombocitosis; balance nitrogenado negativo, pér-
fagosoma y descargan su contenido dentro de él. dida de masa muscular, disminución de la
Estos gránulos, como se dijo anteriormente, con- gluconeogénesis, aumento de la lipolisis del teji-
tienen enzimas y otras sustancias bactericidas o do adiposo y caquexia; disminución del zinc y del
bacteriostáticas. Cuando los fagocitos son activa- fierro sanguíneos; y aumento de la síntesis hepá-
dos por estímulos particulados o solubles, la vía tica de proteínas de fase aguda.
glicolítica y el shunt hexosamonofosfato, son es- En general, las proteínas de fase aguda tie-
timulados para producir nicotinamida adenina nen funciones destinadas a favorecer la elimina-
dinucleótido fosfato reducido (NADPH). NADPH ción de agentes infecciosos, limitar el daño tisular,
es un sustrato para la enzima NADPH oxidasa, favorecer la reparación y por lo tanto restablecer
que es activada. Esta activación reduce el oxíge- la homeostasis (tabla 4-4). Hay proteínas de fase
no molecular a anión superóxido, que es converti- aguda cuyos niveles séricos aumentan signifi-
do a H2O2, el cual por medio de la acción de la cativamente y se conoce su evolución durante el
mieloperoxidasa, también presente en fagocitos, curso de la infección. La variación de estos
forma OCl-, potente citotóxico (ver capítulo 3). parámetros tiene utilidad clínica para el seguimien-
Otra vía incluye la producción de óxido nítrico. to de las infecciones. Las proteínas de fase aguda
Los neutrófilos activados expresan una enzima cuyos niveles tienen mayor modificación son: Pro-
inducible llamada óxido nítrico sintetasa que ge- teína C reactiva y proteína amiloide sérico. Tam-
nera óxido nítrico a partir del aminoácido arginina bién aumenta MBL (“Mannose Binding Lectin”).
y oxígeno molecular; en presencia de otras espe- La Proteína C reactiva inicia su aumento sérico
cies reactivas de oxígeno dentro de la vacuola entre seis u ocho horas de iniciado el proceso, al-
fagocítica el óxido nítrico se convierte en otros canzando el máximo nivel a los dos o tres días. La
productos altamente tóxicos para microorga- Proteína C reactiva y MBL actúan como opsoninas
nismos. Hay un aumento del consumo de oxígeno y activan complemento, por lo tanto el huésped
por el neutrófilo llamado estallido respiratorio que puede disponer rápidamente de dos proteínas con
se produce inmediatamente después de la propiedades funcionales que facilitan la fagocitosis
fagocitosis. Estas vías oxidativas proporcionan y amplifican la respuesta inflamatoria. La concen-
algunos de los efectos antimicrobianos preponde- tración sérica de otras proteínas disminuye durante
rantes de los neutrófilos. La generación de radica- la respuesta de fase aguda; estas proteínas no son
les libres es regulada cuidadosamente para evitar requeridas para la defensa del huésped.
daño tisular por el sistema del glutatión, catalasa, La respuesta de fase aguda disminuye al eli-
superóxidodismutasa, etc. minarse la infección, por la inhibición de
La respuesta de fase aguda se caracteriza por citoquinas mediada por glucocorticoides y por
un conjunto de cambios que afectan al sistema ner- citoquinas reguladoras, como IL-10, que inhibe
vioso, endocrinológico y hematológico. También a los macrófagos activados. IL-10 está
se presentan alteraciones del metabolismo y de la involucrada en el control homeostático de la in-
nutrición. Pero, sin duda, lo más llamativo es la munidad innata.
respuesta febril y la síntesis de proteínas de fase En relación con la evolución temporal de la
aguda. Estos cambios reemplazan a los mecanis- respuesta inmune innata y adquirida, los mecanis-
mos homeostáticos normales por nuevos equili- mos innatos actúan inmediatamente ya que se pro-
brios y prioridades los que presumiblemente conduce el reconocimiento por efectores preformados
tribuyen a mejorar la respuesta adquirida. La ma- inespecíficos (0-4 horas). Los mecanismos de in-
yor parte de estos cambios se presentan dentro de munidad innata son seguidos horas después por
las etapas iniciales de la infección y son mediados respuestas inducidas precoces (4-96 horas) que
por IL-1, TNF e IL-6. La síntesis de estas pueden ser activados por la infección pero no dan
citoquinas es inducida por lipopolisacáridos inmunidad protectora. Estas etapas precoces ayu-
bacterianos que estimulan al macrófago. La res- dan a mantener la infección bajo control mientras
puesta de fase aguda se caracteriza por la presen- los linfocitos específicos para el antígeno y que
cia de fiebre, somnolencia, anorexia; aumento de pertenecen al sistema inmune específico son acti-
ACTH, cortisol y catecolaminas y disminución de vados (más de 96 horas). Las citoquinas y molé-
“Insulin like growth factor 1” (IGF-1); aumento culas coestimuladoras producidas durante estas
de la cantidad de neutrófilos inmaduros circulan- etapas precoces tienen un importante rol en dar
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Tabla 4-4. Proteínas de fase aguda
Reactantes positivos Reactantes negativos
Complemento: Albúmina
C3, C4, C9, Factor B, MBL, Transferrina
Inhibidor de C1, C4b-bp. Transtiretina
Coagulación y fibrinolisis: IGF-1
Fibrinógeno, Plasminógeno, Factor XII
Activador tisular de plasminógeno, α Feto proteína
Uroquinasa, Proteína S, Vitronectina,
Inhibidor I del activador de plasminógeno.
Antiproteasas:
Inhibidor α1 proteasa, α1 Antiquimotripsina,
Inhibidor de la tripsina pancreática.
Proteínas de transporte:
Céruloplasmina, Haptoglobina, Hemopexina.
Otras:
Proteína C reactiva, Amiloide A sérico,
α1-Glicoproteína ácida, Fibronectina,
Ferritina, Angiotensinógeno, LPS-bp.
MBL: “Mannose binding lectin”; C4b-bp: C4b “binding protein”; LPS-bp: “Lipopolysaccharide binding
protein”; IGF-1: “Insulin like growth factor 1”.
forma a la respuesta inmune específica y puede se asocian con mayor frecuencia a pacientes que
determinar que una respuesta sea mediada por LT presentan deficiencias de este sistema. Estos pa-
o LB. cientes presentan infecciones muy graves y recu-
En la inmunidad innata, microorganismos que rrentes especialmente bacterianas o por hongos a
son reconocidos e ingeridos por macrófagos, acti- pesar de tener un sistema inmune adquirido intac-
van macrófagos o células presentadoras de to.
antígenos (CPA) para secretar citoquinas y expre- Es así como pacientes con alteraciones de
sar moléculas coestimuladoras como B7-1 y B7- barrera cutánea como los grandes quemados pre-
2 que en conjunto con el antígeno estimulan al LT sentan infecciones muy graves y pacientes con de-
específico. Microorganismos extracelulares que ficiencias cuantitativas o cualitativas de
son reconocidos a nivel sérico pueden activar com- polimorfonucleares neutrófilos presentan infeccio-
plemento; la proteína C3d liberada durante esta nes recurrentes principalmente bacterianas (ver
activación como producto de clivaje de C3 se une capítulo 30). Las deficiencias cualitativas pueden
a CR2 de LB específico para ese antígeno y que ser primarias (deficiencias de gránulos azurófilos
ha recibido, al reconocer al microorganismo, su y específicos, deficiencias de adhesión
primera señal de activación. CR2 es un receptor leucocitaria, deficiencias de generación de
para C3d que está presente en LB maduros. La metabolitos intermediarios del oxígeno, etc.) o
unión de C3d a CR2 da la segunda señal de acti- pueden ser adquiridos (deficiencias de quimiotaxis
vación para LB y de este modo se inicia la res- y fagocitosis que se observan en Diabetes Mellitus
puesta inmune humoral específica. e Insuficiencia Renal crónica).
Las deficiencias cuantitativas también pue-
den ser primarias o adquiridas. Neutropenias me-
5. PROYECCIÓN CLÍNICA nores a 500 células/µL, conllevan un serio riesgo
de infección por hongos o bacterias cuyo pronós-
La importancia de la inmunidad innata que- tico va a depender de la rapidez de la caída de los
da de manifiesto al pensar en las patologías que neutrófilos, de la reserva medular, de la duración
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Sin título-2 98 5/26/06, 10:25 AM

y de la causa de la neutropenia. Entre las transducción de señales, disminución en la ex-
neutropenias adquiridas, las más importantes son presión de receptores en la superficie celular, al-
las autoinmunes y las secundarias a drogas teración de la estructura del citoesqueleto y dis-
citotóxicas. minución en la producción de intermediarios
Pacientes con deficiencias del sistema de reactivos del oxígeno. En los recién nacidos tam-
complemento se presentan con diferentes cuadros bién se ha descrito deficiencia de regulación de
clínicos según las fracciones del complemento expresión de moléculas de adhesión (selectinas e
que estén deficitarias (ver capítulos 18 y 30). Aque- integrinas) en PMN lo que podría explicar la falla
llos con deficiencias de C1, C2 y C4 presentan relativa de estas células para formar el infiltrado
asociación a patologías autoinmunes como Lupus inflamatorio.
Eritematoso Sistémico y discoide con mayor fre- Los monocitos en el recién nacido son seme-
cuencia que la población general. Aquellos con jantes a los de los adultos en cantidad, capacidad
déficit de C3, Factor H, Factor I, Properdina pre- fagocítica, capacidad microbicida, perfil enzimático
sentan susceptibilidad a infecciones piógenas. Por y propiedades migratorias al azar. Son
último los pacientes con déficit de los componen- funcionalmente deficientes en relación con la acti-
tes finales del sistema del complemento (Complejo vación de LT y en presentación antigénica de
de ataque a la membrana) y con déficit de los com- aloantígenos y antígenos virales. Los monocitos del
ponentes de la vía alterna son más susceptibles a recién nacido presentan menor capacidad de pro-
infecciones fulminantes por Neisserias. ducción de IL-6 y TNF. Este hecho conlleva menor
Existen déficit inmunes fisiológicos que con- reactividad inflamatoria y menor respuesta febril
tribuyen a una mayor susceptibilidad a infeccio- en esta etapa de la vida. La adhesión de los
nes en pacientes pediátricos. En el período de re- monocitos está disminuida lo que incide en el re-
cién nacido la inmadurez del sistema inmune ines- clutamiento de estas células al foco de infección.
pecífico contribuye a este hecho. Se puede evi- La actividad de las células NK en los recién
denciar también la importancia de la inmunidad nacidos está disminuida con respecto al adulto.
innata al revisar la maduración de los componen- Responden menos a señales de activación
tes de ésta durante la etapa postnatal y en los pri- exógenas.
meros años de vida y su relación con la inmuni- Durante el período de lactante hay una ma-
dad adquirida. La respuesta inmune específica a duración de los fagocitos y un aumento progresi-
la mayoría de los antígenos depende de comple- vo de las concentraciones de complemento.
jas interacciones entre macrófagos, LT y LB. Pero
la expresión completa de mecanismos de defensa
del huésped requiere la maduración de otras lí- 6. FILOGENIA DE LA RESPUESTA INMU-
neas celulares y componentes séricos relaciona- NE INNATA
dos con la fase efectora de la inmunidad. Esto in-
cluye complemento, fagocitos, mastocitos, Los mecanismos de la inmunidad innata es-
basófilos, etc., que son componentes de la inmu- tán presentes en todos los organismos en diferen-
nidad innata. En el recién nacido los niveles de te forma. La defensa del huésped en invertebra-
complemento son bajos en comparación con los dos es mediada por células y moléculas que se
del adulto, y los fagocitos presentan una inmadu- parecen a los mecanismos efectores de la inmuni-
rez fisiológica. Hay una producción defectuosa y dad innata de los organismos superiores.
una migración disminuida de polimorfonucleares Los invertebrados, por ejemplo,
al foco infeccioso. Hay una capacidad disminuida equinodermos, anélidos y artrópodos, poseen ba-
de la “stem cell” para responder a las demandas rreras defensivas físico químicas, procesos de coa-
de la infección. Además, la producción de factor gulación y cicatrización de heridas. La fagocitosis
estimulador de colonias de granulocitos y está presente en todos los invertebrados. Los
monocitos (GM-CSF) por monocitos está dismi- equinodermos y artrópodos además poseen facto-
nuida. También se ha invocado déficit funciona- res humorales defensivos naturales o inducibles y
les intrínsecos de los PMN del recién nacido. Es- un sistema lítico análogo al complemento. En al-
tos pueden presentar defectos en adherencia, agre- gunos invertebrados como esponjas, celenterados,
gación, migración, fagocitosis y funciones anélidos, artrópodos, tunicados y equinodermos
microbicidas. Esto se ha asociado con déficit de hay reacciones de reconocimiento de injertos
maduración que se expresa en alteración de la alogénicos, limitadas y de corta duración. Los
99
Sin título-2 99 5/26/06, 10:25 AM

mecanismos específicos y especializados propios Janeway, C.A.; Travers, P.; Walport, M.; Capra,
de la inmunidad adquirida se encuentran sólo en J.D., Immunobiology. The immune system in
vertebrados. No obstante lo anterior, existen se- health and disease, Fourth edition, Current
mejanzas entre reconocimiento de patógenos, vías Biology Publications, Elsevier Science Ltd./
de señales y mecanismos efectores de inmunidad Garland Publishing, London, 1999.
innata en animales inferiores y mamíferos lo que
apunta a un ancestro común de estas defensas. Jurlow, E., Ed. Inflamación y reparación tisular,
Recientemente, la inmunidad innata ha logra- Mediterráneo, Santiago, 1996.
do despertar mayor interés en investigación ya que
la permanencia de sus mecanismos en especies Kopp, E.B.; Medzilitov, R., “The Toll-receptor
más evolucionadas que cuentan con el sistema de family and control of innate immunity”, Current
inmunidad adquirida, avala su eficacia en la pri- Opinion in Immunology; 11:13-18, 1999.
mera línea de defensa, y conjuntamente con eli-
minar la infección, es capaz de estimular y orien- Mackay, I.; Rosen, F.S.; Delves, P.J.; Roitt, I.M.,
tar la respuesta inmune específica. “The immune system”, New Engl J Med; 343
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100
Sin título-2 100 5/26/06, 10:25 AM

SECCIÓN II
ESPECIFICIDAD DE LA
RESPUESTA INMUNE
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Sin título-2 101 5/26/06, 10:25 AM

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Capítulo 5
ANTÍGENOS
María Inés Becker C. y Alfredo De Ioannes I.
1. Introducción 4.2. Carbohidratos

2. Conceptos generales 4.3. Lípidos
2.1. Antígeno 4.4. Ácidos nucleicos
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad 5. Clasificación de los antígenos según
2.3. Determinante antigénico las células inmunes involucradas en
2.4. Haptenos la respuesta
3. Características del antígeno que lo 5.1. Antígenos timo-dependientes
hacen inmunogénico 5.2. Antígenos timo-independientes
3.1. Tamaño 6. Clasificación general de los antí-
3.2. Presencia de grupos químicos ac- genos según su función
tivos 6.1. Antígenos de trasplante
3.3. Conformación espacial de 6.2. Antígenos tumorales
los epítopos 6.3. Autoantígenos
3.4. Movilidad atómica 6.4. Antígenos de diferenciación
4. Naturaleza química de los antí- 6.5. Superantígenos
genos 6.6. Alergenos
4.1. Proteínas
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RESUMEN
Los antígenos son compuestos de diversa naturaleza química –provenientes del medio o
generados por el propio organismo- que son capaces de inducir una respuesta inmunológica en
los vertebrados, propiedad denominada inmunogenicidad. La interacción del antígeno con los
productos de la respuesta inmune y especialmente, con los anticuerpos –propiedad denominada
antigenicidad- ha permitido conocer la estructura y función de numerosos antígenos, demostrán-
dose que los productos de la respuesta inmune interactúan con regiones específicas del antígeno,
denominadas epítopos, los cuales pueden corresponder a una secuencia aminoacídica determina-
da (epítopos lineales) o a un arreglo espacial de la cadena polipeptídica (epítopos
conformacionales).
Aunque la capacidad inmunogénica de un antígeno depende de su naturaleza química in-
trínseca (tamaño, forma, movilidad atómica, presencia de grupos químicos activos y residuos
aromáticos) también está relacionada con la capacidad de respuesta del organismo y, en este
sentido, son determinantes sus características genéticas y su historial inmunológico.
1. INTRODUCCIÓN conceptos de vitalidad y patogenicidad eran per-

fectamente disociables de la inmunogenicidad, lo
Los conceptos de antígeno e inmunógeno son que determinó que la inmunología se
tan antiguos como la inmunología. Inicialmente independizara de la microbiología. Fue en esta
se asoció el concepto de vitalidad y patogenicidad época cuando Landsteiner, padre de la
a la capacidad de inducir una respuesta inmune inmunoquímica, acuñó el concepto de determinan-
protectora: los inmunólogos del siglo pasado se te antigénico o epítopo y definió serológicamente
resistían a pensar que algo inerte e inocuo –esen- los grupos sanguíneos humanos.
cialmente inútil- pudiera despertar una respuesta
inmune. Esa línea de pensamiento asociaba a la 2. CONCEPTOS GENERALES
microbiología como una disciplina secundaria, li-
mitando el desarrollo de vacunas para la profilaxis 2.1. Antígeno
de enfermedades graves que afectaban a la huma-
nidad. Con el tiempo, la patogenicidad como re- La definición de antígeno deriva de la esen-
quisito de la inmunogenicidad, cedió el paso al cia misma del sistema inmune: su capacidad para
uso de cepas bacterianas atenuadas, o, simplemen- reconocer en forma específica, en una molécula,
te se utilizaron microorganismos con reacción cru- características que no son constituyentes norma-
zada para inducir una protección efectiva, siendo les del organismo, mediante la activación de
el caso más notable el desarrollo de la vacuna para linfocitos B o T.
la viruela por Jener. La demostración por parte de Los antígenos pueden ser compuestos de di-
Ehrlich y Von Behring que microorganismos muer- versa naturaleza química provenientes del medio,
tos por fijación con formaldehído o por calenta- que se encuentran presentes en microorganismos,
miento eran inmunogénicos, fue un nuevo paso plantas, alimentos, fármacos y cosméticos, etc.
para acercarse a la esencia del reconocimiento Los antígenos también pueden ser compuestos que
inmunológico. se generan en el organismo como resultado del
A principios de este siglo, se pudo inducir metabolismo en el caso de la detoxificación de
inmunidad protectiva con fracciones de drogas, como resultado de una transformación
microorganismos, los toxoides, que son exotoxinas neoplásica (antígenos tumorales) o como mani-
bacterianas inactivadas, demostrándose que los festación de enfermedades autoinmunes
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Sin título-2 105 5/26/06, 10:25 AM

(autoantígenos). cuerpo, también pueden ser aplicados a la re-
lación del antígeno con receptores específicos
2.2. Inmunogenicidad y antigenicidad de las células T. Sin embargo, a los fragmen-
tos peptídicos presentados clásicamente por los
Dos propiedades de un antígeno son MHC a los Receptores de células T (TCR), se
inmunogenicidad y antigenicidad. han agregado lípidos y glicolípidos presentes
Cuando un antígeno induce una respuesta del en micobacterias que son presentados por
sistema inmune se dice que es inmunogénico, pro- CD1.
piedad que está íntimamente relacionada con la En resumen, gran parte del conocimiento dis-
capacidad de estimular linfocitos T en el caso de ponible sobre la estructura y función de numero-
las proteínas y con la actividad mitogénica de los sos antígenos se debe a que ha sido posible desa-
polisacáridos en las células B. Aunque la capaci- rrollar anticuerpos específicos contra ellos; esto
dad inmunogénica de una molécula depende de ha permitido estudiar las regiones del antígeno con
varios factores intrínsecos relacionados con su las cuales dichos anticuerpos interactúan y tam-
estructura química, esta propiedad es la sumatoria bién ha hecho posible comprender las condicio-
de una serie de influencias que reflejan tanto el nes y mecanismos fisicoquímicos que gobiernan
historial inmunológico del animal como los atri- esta interacción.
butos genéticos de que éste dispone para recono-
cerlo como tal. Es decir: el repertorio de células 2.3. Determinante antigénico
B, la actividad de células T “helper” y células T
supresoras, la red idiotipo-anti-idiotipo y el Com- El lugar de reconocimiento específico de los
plejo Principal de Histocompatibilidad (MHC) anticuerpos en el antígeno se denomina deter-
(ver capítulo 8). minante antigénico o epítopo. En general, los
Recientemente, se ha postulado que las mo- epítopos presentes en proteínas y macromo-
léculas, para ser inmunogénicas además de ser léculas corresponden a zonas flexibles que po-
capaces de ser reconocidas por los receptores seen grupos químicos ricos en posibilidades de
específicos, deberían generar señales de peli- interacción con el sitio activo de los anticuerpos.
gro para el sistema inmune por medio de recep- Como se verá más adelante, la presencia de gru-
tores de la respuesta innata, como son los de la pos aromáticos y de regiones con alta movilidad
familia Toll, descritos inicialmente en atómica es determinante en la interacción
Drosophilia melanogaster, que reconocen es- antígeno-anticuerpo.
tructuras más generales presentes en compues- Los antígenos proteicos pueden contener uno
tos bacterianos como son el LPS por el receptor o más determinantes antigénicos diferentes -a me-
TLR4, péptido glicanos, lipoproteínas nos que la proteína tenga subunidades o segmen-
bacterianas y lipoarabino-mananos de tos repetidos- y, en teoría, cada uno de ellos pue-
micobacterias por el receptor TLR2. El DNA de interactuar con un anticuerpo.
bacteriano con motif CpG es reconocido por La observación que los anticuerpos produci-
TLR9. La estimulación de estos receptores fi- dos contra una proteína nativa a menudo no reac-
nalmente converge en la activación del factor cionan con la proteína desnaturalizada, llevó a de-
NFkB, que induce la expresión de genes defen- finir dos clases de determinantes antigénicos: los
sivos y pro-inflamatorios en células claves de de tipo lineal o secuencial y los de tipo
la respuesta innata. Por esta razón, la incorpo- conformacional o discontinuo, como lo ilustra
ración de bacterias o productos de ellas en los la figura 5-1, utilizando la proteína lisozima como
adyuvantes para aumentar la inmunogenicidad modelo.
de proteínas, tiene como fundamento la Los determinantes lineales, derivan de la es-
estimulación de células accesorias del sistema tructura primaria de la proteína; corresponden a
inmune. epítopos formados por aminoácidos adyacentes en
El término antigenicidad se refiere a la la secuencia polipeptídica, y se calcula que el ta-
capacidad de interacción de un antígeno con maño necesario de un epítopo para unir un anti-
los productos de una respuesta inmune, ya sea cuerpo específico es de unos seis aminoácidos de
con anticuerpos o con células T. Aunque mu- longitud. Estos epítopos se localizan en la super-
chos de los conceptos definidos aquí han sur- ficie o en una región extendida de la molécula. Si
gido del estudio de la reacción antígeno-anti- los determinantes lineales se encuentran al inte-
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Sin título-2 106 5/26/06, 10:25 AM

Figura 5-1. Estructura antigénica de la lisozima de huevo de pollo. La lisozima es una pequeña proteína globular cuya estruc-
tura primaria consiste en una cadena polipeptídica de 129 aminoácidos unida por cuatro puentes disulfuro. Estudios cristalográficos
apoyados con antisueros convencionales de cabra y conejo y anticuerpos monoclonales murinos, han permitido definir en su
estructura antigénica 8 péptidos principales denominados de la siguiente forma: N-C; LII, pIb; una región continua entre los
aminoácidos 34 y 54 dentro de pIb; péptido 8; región del “loop” (asa) entre los residuos 60 a 83; “loop” II y “loop” III. Para
determinar la importancia de diferentes aminoácidos en la unión de los anticuerpos, se han realizado estudios con anticuerpos
dirigidos contra la región del “loop” (la más inmunogénica, junto con el péptido N-C) utilizando lisozima obtenida de huevos de
diferentes aves, péptidos derivados de la proteína nativa y péptidos sintéticos en que algunos aminoácidos han sido modificados.
Los resultados demuestran claramente que no todos los aminoácidos de esta región contribuyen a la antigenicidad de este péptido,
siendo la arginina que se encuentran en la posición 68, el requerimiento principal para la unión de los anticuerpos. Se ha demostra-
do que la antigenicidad de esta molécula depende de su estructura conformacional intacta, puesto que existe muy poca reacción
cruzada entre lisozima nativa y desnaturada.
rior de la proteína, es necesario desnaturalizarla la lisozima, el citocromo c y la albúmina del sue-

para hacer accesibles los anticuerpos. ro. Los estudios con estas proteínas han permiti-
Los determinantes conformacionales corres- do definir los siguientes conceptos sobre la estruc-
ponden a epítopos derivados del arreglo espacial tura antigénica de las proteínas: (a) prácticamente
o plegamiento de la cadena peptídica; es decir, de- toda la superficie de una proteína puede ser
penden de la estructura secundaria y terciaria de inmunogénica y antigénica a la vez y puede in-
la proteína, siendo en ciertos casos estabilizados cluir múltiples determinantes antigénicos a me-
por puentes disulfuro. nudo sobrepuestos. (b) muchos sitios antigénicos
Con ayuda de los anticuerpos monoclonales presentan un arreglo tridimensional de residuos
(ver capítulo 44) -una de cuyas propiedades más de aminoácidos que requieren la conformación
poderosas es que se unen a un sólo epítopo del nativa de la proteína, para su integridad antigénica.
antígeno- se ha logrado conocer la estructura c) en un antígeno dado, los determinantes poten-
antigénica completa de algunas proteínas globu- cialmente inmunogénicos varían de una especie a
lares, que han sido utilizadas como antígenos otra y dependen tanto de las diferencias estructu-
modelo. Entre ellas se encuentran la mioglobina, rales entre el antígeno y las proteínas propias del
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Sin título-2 107 5/26/06, 10:25 AM

huésped como de los mecanismos que regulan las masa molecular inferior a 5 kDa (alergenos, dro-
interacciones entre las diferentes subpoblaciones gas, mono u oligosacáridos y oligopéptidos) sólo
celulares que desarrollan la respuesta inmune. pueden actuar como inmunógenos al ser acopla-
De tal modo, se puede decir que en algunas das químicamente a macromoléculas de
proteínas los epítopos están suficientemente se- inmunogenicidad probada, que funcionan como
parados como para unir anticuerpos específicos transportadoras; son los denominados haptenos.
sin interferirse; pero, algunas moléculas tienen La base del concepto de la íntima relación de
epítopos sobrepuestos y, a menudo, la unión del la respuesta inmune a un antígeno con su estruc-
primer anticuerpo puede interferir estéricamente tura química, fue planteada por Landsteiner a prin-
con la unión de otro anticuerpo. Además hay ca- cipios del siglo XX. Este investigador acopló va-
sos de epítopos que se exponen a raíz de un cam- rios haptenos a diferentes proteínas transportado-
bio conformacional producido por la unión de un ras y demostró que los anticuerpos producidos
anticuerpo a otro epítopo de la molécula. Final- contra estas proteínas conjugadas artificialmente,
mente, se pueden producir neoepítopos como re- exhibían reacciones específicas con los grupos
sultado, por ejemplo, del tratamiento de una pro- introducidos (figura 5-2). Debido a que también
teína con proteasas. se formaban anticuerpos contra la proteína trans-
Cabe destacar que el conjunto de anticuerpos portadora, para evidenciar la antigenicidad del
que predominan después de una inmunización con hapteno, fue preciso emplear antígenos de prue-
una proteína nativa, no es igual al repertorio po- ba, en los que el mismo hapteno estaba acoplado
tencial total del animal. Ciertas secuencias y a a una proteína no relacionada.
veces residuos individuales sobre la superficie de Cuando se desarrollan anticuerpos
la proteína, pueden identificarse como policlonales o monoclonales contra un hapteno,
inmunodominantes: son aquellos a los cuales se se observa que, en gran parte de ellos, el recono-
dirige la mayor parte de la respuesta inmune. Esto cimiento del hapteno depende total o parcialmen-
puede deberse a propiedades estructurales espe- te de nuevas estructuras, generadas por el tipo
ciales intrínsecas de esa región y a factores de enlace químico aportado por el agente
genéticos propios del animal. acoplante. Este hecho tiene gran trascendencia:
El elemento estructural del determinante si los anticuerpos están destinados a reconocer
antigénico que se proyecta distalmente desde la el hapteno en solución como en el caso de un
masa central del antígeno y, que aporta mayor can- RIA o un ELISA de competencia (ver capítulo
tidad de energía libre para la interacción con el 40), la única forma para que esto ocurra será mo-
anticuerpo, se denomina grupo inmuno- dificando el hapteno con el mismo compuesto
dominante y determina la especificidad del anti- utilizado para acoplarlo a la proteína transporta-
cuerpo. Este concepto surgió de los estudios para dora.
determinar las fuerzas responsables de la estabili- En conclusión, los haptenos no inducen la
dad de la unión antígeno-anticuerpo. Dado que producción de anticuerpos pero sí son capaces de
ellas afectan la especificidad de la unión, se pue- reaccionar específicamente con ellos, ofreciendo
de afirmar lo siguiente: Los anticuerpos reaccio- al inmunólogo un modelo excepcional para inves-
nan más efectivamente con antígenos que estimu- tigar los mecanismos de la reacción antígeno-an-
lan su formación que con otros. Dentro de este ticuerpo, ya que la estructura de por lo menos uno
contexto, se les designa como antígenos de los reactivos, el hapteno, es conocida.
homólogos. Sin embargo, ocasionalmente, como
resultado de una reacción cruzada, algunos
anticuerpos reaccionan con mayor afinidad con un 3. CARACTERÍSTICAS DEL ANTÍGENO
antígeno heterólogo (antígeno diferente al que QUE LO HACEN INMUNOGÉNICO
generó el anticuerpo) que con uno homólogo; es
el caso de los anticuerpos denominados Como se ha mencionado, existen varios fac-
heteroclíticos. tores que influyen en la inmunogenicidad de una
proteína. Algunos son de carácter intrínseco y tie-
2.4. Haptenos nen que ver con su propia naturaleza química, lo
que determina su hidrofilicidad y su flexibilidad.
No todas las moléculas son inmunogénicas; En cambio, otros factores son extrínsecos y están
por ejemplo, numerosas substancias pequeñas de relacionados con la capacidad de respuesta del ani-
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Figura 5-2. Efecto sobre la reacción antígeno-anticuerpo de la posición y naturaleza de grupos hapténicos substituidos en
una proteína transportadora. Landsteiner desarrolló antisueros de conejo específicos contra globulina de suero de caballo
substituida con haptenos como sulfonato de m-aminobenceno (A) y p-azotoluidina (B). Luego estudió, mediante reacciones de
precipitación, el efecto que producían sobre la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo, modificaciones de la posición y
naturaleza de los grupos hapténicos substituidos en globulina de pollo. La intensidad de la reacción observada (cantidad de
precipitado) se señala en una escala arbitraria que va desde 0 a dos cruces (++). La reacción con el hapteno homólogo se destaca
en negrita.
mal y con la dosis de antígeno: concentraciones 3.1. Tamaño

muy pequeñas no producen estimulación de la res-
puesta inmune y concentraciones muy elevadas Se sabe que las proteínas de masa molecular
pueden inhibirla. superior a 10 kDa son inmunogénicas. Sin em-
En la última década, con el desarrollo de bargo, algunas proteínas de menor masa, inocula-
la tecnología de péptidos sintéticos, se ha iden- das con un coadyuvante apropiado, inducen la pro-
tificado las propiedades de una molécula que ducción de anticuerpos; también ocurre lo inver-
inciden directamente en su inmunogenicidad. so es decir existen proteínas de elevada masa
Así, construyendo péptidos de un mismo molecular que no son buenos inmunógenos; es el
aminoácido, péptidos que combinan las diferen- caso de las histonas, las protaminas y la gelatina.
tes propiedades de los aminoácidos, péptidos Su falta de inmunogenicidad se explica en parte
lineales y ramificados, elaborados exclusiva- porque carecen de grupos químicos activos.
mente con la forma D o L de los aminoácidos o
con mezclas de ambos, ha quedado en eviden- 3.2. Presencia de grupos químicos activos
cia que, para la producción de anticuerpos es
determinante la ramificación y arreglo espacial Ha quedado en evidencia que la inmuno-
del péptido, la naturaleza levogira (L) de los genicidad de las proteínas depende de la presen-
aminoácidos y la presencia de aminoácidos con cia de ciertos grupos químicos activos, especial-
núcleos aromáticos. mente los de carácter polar.
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Sin título-2 109 5/26/06, 10:25 AM

La presencia en la superficie de las proteínas 4. NATURALEZA QUÍMICA DE LOS
de aminoácidos con residuos aromáticos o con gru- ANTÍGENOS
pos cargados positivos (Lisina) o negativos
(Glutámico y Aspártico) contribuye a aumentar su En general las proteínas son las moléculas
antigenicidad. más inmunogénicas y, en orden decreciente, les
Otro aminoácido frecuentemente siguen los carbohidratos, los lípidos y los ácidos
involucrado es Tirosina y un buen ejemplo de la nucleicos.
importancia de este aminoácido es la proteína
Nicrosina presente en invertebrados. El estudio 4.1. Proteínas
cristalográfico de Nicrosina no revela en condi-
ciones normales la presencia de una tirosina ex- Las proteínas son antígenos timo dependien-
puesta en la superficie; pero la síntesis de la pro- tes, es decir, en su reconocimiento participan
teína recombinante, en la que se introduce un linfocitos T y B. Debido a su gran complejidad
cambio en el residuo de tirosina no expuesto, estructural, puesto que además de estructura
conduce a la pérdida de un epítopo. Un análisis primaria, secundaria y terciaria, poseen múltiples
de cristales de Nicrosina que incluyen el Fab de epítopos, lo que las hace a la vez antigénicas e
un anticuerpo monoclonal contra ella, muestra inmunogénicas. La agregación y la presencia de
claramente que, a consecuencia de la interacción formas poliméricas aumentan la inmunogenicidad
antígeno-anticuerpo, se produce un cambio de las proteínas.
conformacional en la proteína: la Tirosina emerge Para conocer la estructura antigénica de al-
a la superficie y participa activamente en la gunas proteínas, se ha usado la cristalografía y,
interacción. Este ejemplo, pone de manifiesto la sin duda, la herramienta más utilizada actualmen-
notable dinámica de la reacción antígeno-anti- te son los anticuerpos monoclonales, que han per-
cuerpo y la importancia de la movilidad atómica mitido realizar mapeos epitópicos precisos de nu-
en la definición de un epítopo. merosas proteínas modelo -como Lisosima,
Mioglobina y Albúmina- y también de proteínas
3.3. Conformación espacial de los epítopos utilizadas en la formulación de vacunas para hu-
manos, por ejemplo, el antígeno de superficie del
La palabra epítopo presupone que las regio- virus de la Hepatitis B y las proteínas de la cu-
nes antigénicas corresponden a prominencias so- bierta del virus del SIDA.
bre la superficie de la molécula, lo cual es válido El análisis antigénico de proteínas virales tie-
en muchos casos; pero también se ha descrito que ne gran relevancia, puesto que mediante síntesis
pueden ser hondonadas de la superficie y que el peptídica, se cree que podrían construirse vacu-
sitio de unión del anticuerpo se introduce en la nas compuestas de aquellos péptidos que produ-
cavidad epitópica. cen anticuerpos capaces de neutralizar la
infectividad viral. Esta idea ha sido abordada
3.4. Movilidad atómica experimentalemente con varios modelos, entre
ellos se ha utilizado dos antígenos de superficie
Dado que el repertorio de receptores del sis- del virus de la influenza, denominados
tema inmune humoral es finito y se genera du- Hemaglutinina (HA) y Neuraminidasa (NA).
rante el desarrollo embrionario de los También este concepto se ha aplicado en el análi-
vertebrados, antes de la exposición con los sis de antígenos de patógenos como Plasmodium
antígenos, la posibilidad de que una estructura falciparum (agente causal de la malaria) y de
antigénica se una a algún receptor depende de su Tripanosoma cruzi (agente causal de la Enferme-
capacidad de interactuar con cierta afinidad con dad de Chagas) que poseen mecanismos que les
un receptor preexistente. Por lo tanto, la flexibi- permiten evadir la respuesta inmune del hospede-
lidad de las estructuras antigénicas contribuye a ro; sin embargo, a la fecha no se tienen resultados
su antigenicidad ya que les permite adaptarse a plenamente satisfactorios.
receptores preexistentes. Este fenómeno también Otro ejemplo de antígeno proteico es el sis-
se observa en las regiones hipervariables de los tema antigénico Rh de los glóbulos rojos. El sis-
anticuerpos, que también presentan alta movili- tema Rh es uno de los sistemas sanguíneos más
dad molecular. polimórficos, ya que a la fecha se han descrito 47
antígenos diferentes, siendo comunes sólo cinco,
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que se denominan: D, C, c, E y e (ver capítulo en trasplantes y en otros procesos patológicos (ver
26). El antígeno más importante de este sistema capítulo 26).
es el antígeno proteico D, ya que su tipificación El sistema ABO fue descrito a principio de
determina que la sangre del paciente sea clasifi- este siglo por Landsteiner, quien descubrió que el
cada como Rh positiva (presencia del antígeno D) suero de dadores humanos normales aglutinaba a
o negativa (ausencia del antígeno D). La proteína los eritrocitos de otros dadores. Al analizar el pa-
D está compuesta por 417 aminoácidos, tiene una trón de reacciones, definió los principales
masa molecular en torno a 30 kDa y no es antígenos de este sistema como A, B y O, que co-
glicosilada. Presenta 12 dominios transmembrana rresponden a determinantes antigénicos de natu-
ricos en aminoácidos hidrofóbicos. La diferencia raleza oligosacárida. Los antígenos del sistema
entre los antígenos D, difiere de C/c y E/e se basa ABO se heredan en forma autosómica, siendo los
en cambio de aminoácidos. El paso de eritrocitos genes A y B codominantes entre sí y dominantes
fetales a la circulación materna puede inducir sobre O.
anticuerpos anti Rh (D+) en la madre cuando ésta El sistema ABO se caracteriza por su ubi-
carece de estos antígenos (ver capítulo 26). cuidad, puesto que los antígenos están presentes
en alta densidad sobre la superficie de los
4.2. Carbohidratos eritrocitos y células epiteliales y también se reco-
nocen en numerosas secreciones como la saliva,
Los determinantes antigénicos de numerosas leche, y mucosa gástrica, entre otras. Los antígenos
substancias de interés biológico, corresponden a del sistema ABO se caracterizan también porque
carbohidratos que se encuentran en glicolípidos y en un individuo existe la presencia natural de
glicoproteínas. Buenos ejemplos son el lipopo- anticuerpos IgM contra el producto de el o los
lisacárido (LPS) de las bacterias Gram-negativas alelos que él no posee. La formación de estos
y el sistema de antígenos de grupo sanguíneo en anticuerpos se explica en parte, por la ubicuidad
humanos, como el sistema ABO. de este tipo de oligosacáridos, ya que también se
encuentran antígenos muy similares en la pared
LPS de numerosas bacterias, algunas de las cuales se
localizan en la flora normal del intestino. Por otra
La diversidad antigénica entre las especies parte, también se postula que se formarían como
de bacterias Gram negativas, reside en las dife- consecuencia del paso de eritrocitos maternos a la
rencias estructurales de los componentes del LPS, circulación fetal en el momento del parto.
antiguamente denominado endotoxina, porque El conocimiento de la estructura química de
estaba unido a la célula y tenía carácter los antígenos ABO se facilitó enormemente por el
termoestable. El LPS es el principal blanco de la hecho que los determinantes antigénicos corres-
respuesta inmune humoral contra este tipo de ponden a oligosacáridos, que pueden ser prepara-
patógenos. dos mediante síntesis química. Por lo tanto, fue
La estructura química del LPS puede divi- posible utilizarlos en estudios de inhibición de la
dirse en tres regiones: el polisacárido O-específi- aglutinación de eritrocitos por haptenos. Posterior-
co, que también actúa como sitio receptor para mente, se realizó un avance enorme con el adve-
algunos bacteriófagos y confiere la especificidad nimiento de los anticuerpos monoclonales, pues-
serológica; el polisacárido central, que contiene to que permitieron realizar una fina disección de
ácido 2-ceto-3-desoxioctónico (KDO) y heptosa, los diferentes tipos de cadenas oligosacáridas pre-
que son compuestos exclusivos de bacterias; y, sentes en cada grupo.
finamente, el lípido A (región III) donde reside la Desde el punto de vista bioquímico, los
toxicidad. antígenos del sistema ABO están constituidos por
cadenas de oligosacáridas, formadas por azúcares
Sistema ABO unidos por enlaces a (1-2 ó 1-4) b (1-3), producto
de la acción de glicosiltransferasas -del tipo
En humanos, se conocen actualmente 19 sis- fucosil, N-acetil y galactosil transferasas- que ac-
temas de grupos sanguíneos, que suman más de túan sobre un substrato tetrasacárido denominado
200 antígenos. Sin embargo, dos de ellos el siste- paraglobósido. Este posee una galactosa como
ma ABO y el sistema Rh, son los de mayor impor- residuo terminal, unida por enlace b (1-3) o b (1-
tancia clínica desde el punto de vista transfusional, 4), según se trate de un tetrasacárido tipo I (en
111
Sin título-2 111 5/26/06, 10:25 AM

antígenos secretados) o tipo 2 (sobre eritrocitos), Es importante destacar que dentro de cada
respectivamente. Posteriormente, sobre la grupo existen variaciones: son los subgrupos de A
galactosa terminal actúa una fucolsiltransferasa de- y B, que reflejan diferencias cuantitativas, según
nominada H, que le adiciona una fucosa por enla- el número de epítopos presentes en la superficie
ce a (1-2). De esta forma, se completa una cadena del eritrocito y cualitativas, según el largo y rami-
denominada antígeno H, que está presente en la ficación de las cadenas oligosacáridas.
membrana plasmática de todos los eritrocitos, an-
clada vía una proteína integral de membrana de- 4.3. Lípidos
nominada Banda 3 (figura 5-3).
La especificidad antigénica en los individuos Los lípidos son, en general, poco inmuno-
del grupo A, está dada por la adición de N- génicos, fundamentalmente por su poca
acetilgalactosamina a la substancia H y, en los solubilidad en agua; sin embargo, al unirse a pro-
individuos del grupo B, por la adición de galactosa, teínas, algunos pueden generar epítopos. En el
azúcares que constituyen el grupo caso de lípidos compuestos, como los lipopolisa-
inmunodominante de los determinantes cáridos de las bacterias Gram negativas, la frac-
antigénicos A y B, respectivamente. Los indivi- ción lipídica participa activamente en la
duos del grupo O sólo poseen el antígeno H. mitogenicidad de estas substancias.
Figura 5-3. Estructura de los antígenos ABO de grupo sanguíneo humano. Los antígenos ABO tienen estructura de tipo
carbohidrato y están presentes en numerosos tejidos, siendo sintetizados bajo el control de varios genes que codifican para
glicosiltransferasas. Se pueden expresar de diferentes formas: como oligosacáridos en la orina, como glicoproteínas en las secreciones
y fluidos corporales y como glicolípidos en las membranas de numerosas células. El compuesto básico inicial desde el cual crecen
las cadenas oligosacáridas que conforman los antígenos ABO, es un compuesto de tipo cerámido (formado por una molécula de
glucosa y galactosa) que está anclado a un glicolípido. Sobre el paraglobósido actúa una transferasa que agrega una fucosa (Fuc)
en el azúcar terminal, formándose de esta forma el producto denominado substancia H, que posteriormente es convertida en
substancia A o B por la apropiada adición de una molécula de N-acetilgalactosamina (Galnac) o galactosa (Gal) respectivamente.
(Glu), glucosa.
112
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4.4. Ácidos nucleicos independientes. Entre las propiedades que pre-
sentan estos antígenos podemos mencionar las si-
Los ácidos nucleicos son poco inmuno- guientes: (a) Son moléculas de gran tamaño con
génicos ya que para inducir anticuerpos requieren epítopos repetidos, lo que les permite interactuar
ser conjugados a proteínas inmunogénicas. Sin con múltiples receptores de la superficie, dando
embargo, en varias patologías de tipo autoinmune como resultado una reacción de alta avidez que
-en que componentes normales del organismo pa- induce el coronamiento (“capping”) de los mis-
san a ser autoantígenos- es frecuente observar la mos, (b) Son mitogénicos, es decir, inducen proli-
presencia de anticuerpos anti-DNA, actividad que feración de los linfocitos B y (c) Pueden activar la
ayuda al diagnóstico de las enfermedades. De he- vía alternativa del complemento.
cho, existen anticuerpos que reconocen diferen-
tes formas de DNA como el denominado tipo Z,
entre otros. 6. CLASIFICACIÓN GENERAL DE LOS
ANTÍGENOS SEGÚN SU FUNCIÓN
5. CLASIFICACIÓN DE LOS ANTÍGENOS 6.1. Antígenos de trasplante

SEGÚN LAS CÉLULAS INMUNES INVO-
LUCRADAS EN SU RECONOCIMIENTO El trasplante de tejido incompatible y la ma-
ternidad multípara van acompañados de la induc-
5.1. Antígenos timo-dependientes ción de altos títulos de anticuerpos que reconocen
a los antígenos de histocompatibilidad, especial-
Abundante evidencia experimental muestra mente de Clase I. Esto se debe al alto polimorfismo
que la producción de anticuerpos por las células genético de la cadena pesada de estas moléculas
B contra numerosos antígenos y especialmente en la especie humana y en los animales superio-
para los de naturaleza proteica requiere de la ayu- res. Estos antisueros naturales, han sido una he-
da de células T, de ahí que se los denomine rramienta fundamental para entender las reglas que
antígenos timo-dependientes. En la década de gobiernan la histocompatibilidad y prolongar la
los 60, dos grupos de investigadores, Miller y sobrevida de los trasplantes. Los antígenos o mo-
Mitchell en Australia y Claman en Denver, demos- léculas MHC de clase II son menos potentes
traron que animales deficientes en células T, por en la inducción de anticuerpos y en la actualidad
timectomía neonatal eran incapaces de producir se usan técnicas de biología molecular para su
anticuerpos contra antígenos proteicos; sin embar- tipificación.
go, cuando se reconstituían con células tímicas,
esta capacidad se restauraba. Estudios posterio- 6.2. Antígenos tumorales
res revelaron que la capacidad de ayuda de las
células T corresponde a una subpoblación de Se han descrito numerosos anticuerpos
linfocitos T denominada T “helper” ( LT CD4+). monoclonales que son reactivos con antígenos que
Los antígenos timo-dependientes provocan se expresan exclusivamente o, en mayor cantidad
respuestas primarias caracterizadas por la síntesis en células tumorales, por lo tanto son utilizados
de anticuerpos de la clase IgM, pero en exposi- en diagnóstico clínico de humanos como marca-
ciones posteriores al antígeno maduran hacia IgG dores de la presencia de células neoplásicas. En-
(suero) o IgA (secreciones) y células de memoria, tre estos antígenos, se encuentran marcadores de
a diferencia de las respuestas a los antígenos timo- melanoma, carcinoma colo-rectal, neuroblastoma,
independientes, que sólo estimulan la producción antígeno prostático y antígenos de leucemias
de anticuerpos de la clase IgM y muy pocas célu- linfáticas, entre otros.
las de memoria.
6.3. Autoantígenos
5.2. Antígenos timo-independientes
Existen procesos patológicos en que el siste-
Algunos antígenos, como los polisacáridos ma inmunológico reconoce como antígenos com-
y lipopolisacáridos de bacterias, son capaces de ponentes propios; son las denominadas enferme-
activar linfocitos B sin la ayuda de linfocitos T dades autoinmunes. Si bien pueden afectar cual-
“helper”; son los denominados antígenos timo- quier órgano de un individuo, las más frecuentes
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incluyen: la substancia blanca del cerebro y la es- bia, el Sag se encuentra incluido en la partícula in-
pina dorsal (Esclerosis múltiple); los fecciosa como una proteína que encapsula el mate-
revestimientos de las articulaciones (Artritis rial nuclear. En el caso de algunos retrovirus, como
reumatoide); las células secretoras de la insulina el que produce tumores mamarios en algunas ce-
(Diabetes mellitus juvenil). Otras enfermedades pas endogámicas de ratón, se produce expresión de
autoinmunitarias destruyen las conexiones entre Sags después de la infección e integración del DNA
nervios y músculos (miastenia gravis), producen proviral en el genoma del hospedero.
ampollas en la piel (Pénfigo vulgar) o destruyen
los riñones y otros órganos (Lupus eritematoso 6.6. Alergenos
sistémico) (ver capítulo 23).
Los alergenos son antígenos capaces de pro-
6.4. Antígenos de diferenciación vocar reacciones de hipersensibilidad de tipo in-
mediato (minutos después de su exposición) o re-
El término antígeno de diferenciación sur- tardado (días después del desafío antigénico) (ver
ge del uso de los anticuerpos como herramienta capítulos 21 y 22). Desde el punto de vista
para identificar moléculas que se localizan en de- bioquímico, los alergenos incluyen polisacáridos,
terminados tipos celulares o tejidos. Sin embar- proteínas y haptenos de origen sintético y natura-
go, este término es ambiguo, porque se refiere tan- les. En este último caso se incluye la sustancia
to a los antígenos específicos de estado como los exudada por el Litre, compuesto que pertenece a
antígenos específicos de tejido. la familia de los urushioles, que incluyen especies
Un antígeno que se reconoce exclusivamen- como el Poyson ivy, Poyson oack y Laca Japónica,
te durante una etapa del desarrollo embrionario entre otros, que provocan severas alergias en hu-
de un organismo, pero que posteriormente no es manos susceptibles.
reconocido en células terminalmente diferencia- El Litre es un árbol de la familia
das corresponde a un antígeno específico de es- Anacardiaceae que causa una severa dermatitis de
tado; mientras que un antígeno reconocido en cier- contacto en campistas, guardabosques, scouts, etc,
to tipo celular diferenciado, que sirve como mar- que transitan por la zona central de Chile. Como
cador para distinguirlo de otro, es propiamente un resultado del metabolismo secundario de la plan-
antígeno específico de tejido. En esta última ta, se produce un compuesto identificado como 3
categoría se pueden incluir aquellos antígenos que pentadecyl-10-en catecol, que es el responsable
reconocen en tipos celulares embrionarios, son los de la alergia. Esta pequeña molécula es un clási-
denominados marcadores de linaje celular. co hapteno, es decir, sólo causa la alergia cuando
se une a proteínas de la piel del huésped. A pesar
6.5. Superantígenos de su potencia, no se ha descrito al alergeno del
litre como un inductor de anticuerpos. La reac-
Se definen como superantígenos (Sags) nu- ción alérgica es de tipo retardado, es decir los sín-
merosas proteínas de microorganismos bacterianos tomas se comienzan a observar después de 24 ho-
(estafilococos, estreptococos, micobacterias, y ras de exposición al hapteno en un individuo ya
micoplasmas, entre otras) y virales (del tipo sensibilizado y participan en ella células T CD8+.
rabdovirus y retrovirus), que se unen a moléculas Las lesiones que provoca este alergeno son
MHC clase II y que estimulan las células T predo- exudativas y presentan infiltración de macrófagos
minantemente vía unión directa al dominio Vb del y monocitos.
receptor de la célula T, fuera de la región de unión Aunque este tipo de compuestos se conoce
al antígeno (ver capítulo 7). Se les denomina Sags desde principios de este siglo, los mecanismos ce-
debido a que el número de células T involucradas lulares y moleculares que conducen a esta alergia
en la respuesta inmune es mucho mayor que el de son poco conocidos. Se sabe que la cadena
las células específicas a antígenos proteicos con- alifática es fundamental para la inmunogenicidad,
vencionales. porque solubiliza el alergeno en las membranas
Los superantígenos de microorganismos es- celulares; por otra parte, el anillo catecólico per-
tán presentes en diferentes formas. En el caso de mite la reacción electrofílica con grupos amino
las bacterias, generalmente son proteínas de las proteínas de la piel, modificándolas (véase
secretadas como por ejemplo las enterotoxinas figura 5-4).
estafilocócicas; mientras que en el virus de la ra-
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Sin título-2 114 5/26/06, 10:25 AM

LECTURAS SUGERIDAS
Aderem, A., Ulevitch, R.J., “Toll-like receptors in

the induction of the innate immune response”,
Nature, 17, 782-787, 2000.
Barlow, D.J., Edwards, M.S., Thornton J.M.,

“Continuous and discontinuous protein antigenic
determinants”, Nature, 322: 747 – 748, 1986.
Figura 5-4. Estructura del compuesto activo del litre; 3- Benjamin C., Berzofsky JA., East IJ., Gurd, FRN.,
pentadecil (10-enil) catecol. Hannum, C., Leach SJ., Margoliash E., Michael
JG., Miller A., Prager EM., Reichlin M., Sercarz
EE., Smith-Gill SJ., Todd PE., Wilson AC. “The
De esta forma, los péptidos modificados por antigenic structure of proteins: A reapraisal”, Ann.
el Litre emergen a la superficie de las células epi- Rev. Immunol, 2: 67 – 101, 1984.
dérmicas unidas a moléculas MHC de clase I y
clase II, los cuales inician y desencadenan la re- Berzofsky, J. A., Berkower, I.J., “Immunogenicity
acción alérgica. and antigen structure” en Fundamental
Debido a que los ratones de cepas utilizadas Immunology, Editor: W. Paul, 4ª Edición, Raven
en experimentación también son sensibles al litre, Press, New York, pp. 651 – 700, 1999.
han sido un modelo muy valioso en el estudio de
los componentes celulares involucrados en la aler- Davies, D.R., Padlan, E.A., “ Antibody-antigen
gia provocada por este compuesto. La elimina- complexes”, Ann. Rev. Biochem, 59: 439 – 473,
ción selectiva de subpoblaciones de linfocitos T 1990.
con anticuerpo monoclonales específicos para cada
una de ellas (anti-CD4+ ó anti-CD8+), ha mostra- Janeway, C.A., Travers, P., Walpot, M., Capra,
do que los linfocitos T CD4+ regulan esta respuesta J.D., Immuno Biology. The immune system in
en ratones y que los linfocitos T CD8+ son los health and disease. CB Current Biology
efectores. Nuestro grupo de investigación tam- Publications Elsevier Science Ltd/Garland
bién ha encontrado evidencia de que la cadena Publishing, 1999.
alifática se metaboliza intracelularmente, lo que
sugiere que el producto final del litre que modifi- Landsteiner, K., Van der Scheer J., “Serologcal
ca las proteínas propias no sería el mismo que pro- studies on azoproteins. Antigens containing azo
duce la planta. components with aliphatic side chains”, J. Exp.
Recientemente, se ha demostrado que los Med., 59: 751 – 768, 1934.
urushioles inhiben la respiración mitocondrial a
nivel del Complejo III. Este fenómeno es especí- Laver, W.G., Gillian, M.A., “Immune recognition
fico, porque requiere la presencia de la estructura of protein antigens” en Current
catecólica y de la cadena alifática, ya que Communications in Molecular Biology, Cold
pentadecil fenol y 3 metil catecol no ejercen una Spring Harbor Laboratory, New York, 1985.
inhibición significativa en la respiración. El
alergeno del poison ivy, que posee tres veces más López C.B., Kalergis A.M., Becker M. I.,
insaturaciones en la cadena alifática, es el inhibidor Garbarino J.A., De Ioannes A.E., “Contact Der-
más potente de la respiración y el más alergénico matitis to the Urushiol Related Compound 3-
en humanos. Estudios recientes en que se analiza pentadecyl (10 enyl) catechol is Mediated by
la unión de Litreol marcado con 3H en la cadena CD8+ Cells and Regulated by CD4+ Cells in
alifática a proteínas mitocondriales, muestran la Mice”, J., Allergy and Immunology 117: 194-201,
aparición de proteínas marcadas específicamente 1998.
de una masa molecular relativa en torno a 30 kDa,
que se encuentran distribuidas en la membrana
mitocondrial interna.
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Moody, D.B., Ulrichs,T., Muhlecker, W., Young,
D.C., Gurcha, S.S., Grant, E., Rosat J.P., Brenner,
M.B., Costello, C.E., Besra, G.S., Porcelli, S.A.,
“CD1c-mediated T-cell recognition of isoprenoid
glycolipids in Mycobacterium tuberculosis
infection”, Nature, 404,884 – 888, 2000.
Palomo G., I., Pereira G., J., Fisiopatología de

las citopenias inmunes. Editorial Universidad
de Talca,1995, Talca - Chile.
Tainer, J.A., Getzoff, E.D., Paterson, Y., Olson,

A.J., Lerner, R.A., “The atomic mobility
component of protein antigeniciicity”, Ann. Rev.
Immunol, 3: 501- 535, 1985.
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Capítulo 6
RECEPTOR DE LINFOCITOS B
E INMUNOGLOBULINAS
Iván Palomo G., María Inés Becker C., Silvia Pierangeli y Ulises Vergara C.
1. Introducción 7. Bases genéticas de la diversidad de inmu-

2. Receptor de linfocitos B (BCR): Estruc- noglobulinas
tura y función 7.1. Genes de inmunoglobulinas
2.1. Inmunoglobulina de membrana 7.1.1. Genes de cadenas pesadas
2.2. Complejo Igα/Igβ 7.1.2. Genes de cadenas livianas
3. Linfocitos B y señales accesorias de 7.2. Reordenamiento génico
coestimulación 7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas
3.1. Antígenos T-dependientes y antígenos 7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas
T-independientes 7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA
3.2. Co-Receptor CD21 7.2.4. Diversificación de la región N
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2 7.2.5. Exclusión alélica
5. Estructura y función de inmunoglobulinas 7.2.6. Exclusión isotípica
5.1. Estructura general 7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas
5.2.Dominios de inmunoglobulinas y re- 7.3. Hipermutación somática
giones hipervariables 7.4. Control de la transcripción de los genes
5.3.Variaciones isotípicas, alotípicas e de inmunoglobulinas
idiotípicas 7.5. Estimación numérica de la diversidad
5.3.1. Variaciones isotípicas de anticuerpos
5.3.2. Variaciones alotípicas 8. Edición del receptor linfocitario
5.3.3. Variaciones idiotípicas 9. Biosíntesis y ensamblaje de las inmuno-
5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas globulinas
6. Respuesta inmune humoral
6.1. Avidez
6.2. Afinidad
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RESUMEN
La inmunidad específica humoral se asocia a linfocitos B y anticuerpos. Los aspectos más

importantes que revisa este capítulo son: la estructura y función del Receptor de células B
(BCR) y de inmunoglobulinas, y las bases genéticas de la diversidad de estas últimas.
El BCR es un complejo glicoproteico hetero-oligomérico transmembrana, que incluye dos
subunidades: una inmunoglobulina de membrana (IgM o IgD) responsable del reconocimiento
específico del antígeno y el complejo accesorio Ig-α/Ig-β, conservado en todos los linfocitos B
y responsable de la transducción de señales de activación. Dependiendo de la naturaleza química
del antígeno, la activación de los linfocitos B, requerirá señales accesorias de coestimulación,
proporcionadas por el correceptor CD21 (CR2) y por linfocitos T “helper”.
Las inmunoglobulinas (Igs) son una familia de glicoproteínas estructuralmente relaciona-
das, presentes en la membrana de linfocitos B y en el suero y fluidos titulares La unidad estruc-
tural básica de las inmunoglobulinas está dada por un monómero glicoproteico formado por
cuatro cadenas polipeptídicas - dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas livianas (L) idénticas:
IgG (2γ, 2κ ó 2λ), IgM (2µ, 2κ ó 2λ), IgΑ (2α, 2κ ó 2λ), IgD (2δ, 2κ ó 2λ) e IgD (2ε, 2κ ó 2λ).
Entre las regiones funcionales más importantes de la estructura de las Igs destacan la región de
unión con el antígeno (Fab), ubicada en el extremo amino y el fragmento Fc que participa en
funciones efectoras tales como: activación del sistema del complemento, activación de células
fagocíticas, citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC), inmunidad de mucosas, inmuni-
dad neonatal, hipersensibilidad inmediata y regulación de la respuesta inmune.
Cada cadena, H y L, presenta sólo un dominio variable. Las cadenas H presentan 3 ó 4
dominios constantes y las cadenas L solamente un dominio constante.
La variabilidad idiotípica de las Igs se genera somáticamente en la médula ósea (en
humano), durante un proceso de diferenciación que es independiente del antígeno y que permite
que cada linfocito B esté provisto de un BCR único. El repertorio de estos receptores y por tanto
de Igs secretadas, es generado al azar durante un proceso regulado de reordenanamiento o
recombinación de segmentos génicos V(D)J. En humanos, los genes para codificar las cadenas
H, κ y λ, se encuentran en el cromosoma 14, 2 y 22, respectivamente. La variabilidad puede
aumentar por otros mecanismos que serán descritos en el capítulo.
1. INTRODUCCIÓN ne puede reconocer una gran variedad de antígenos

distintos, sólo aquellos clones linfocitarios con
El desarrollo de una respuesta inmune hu- la especificidad apropiada para un epítopo del
moral requiere la selección, activación y expan- antígeno particular, serán expandidos por divi-
sión clonal de linfocitos B individuales provistos sión celular.
de un receptor antígeno-específico (BCR: "B cell El receptor de un linfocito B (BCR) es un
receptor") anclado en su membrana plasmática. complejo glicoproteico transmembrana que inclu-
Esta habilidad de un individuo para responder vir- ye una inmunoglobulina (Ig) de membrana pro-
tualmente a cualquier antígeno, depende de la ca- pia de cada linfocito y responsable del reconoci-
pacidad del sistema inmune para generar un re- miento específico del antígeno. Cuando un indi-
pertorio muy grande de linfocitos, cada uno de los viduo es expuesto a un antígeno extraño, sólo aque-
cuales expresa un receptor específico para un llos linfocitos cuyo BCR es capaz de reconocer
epítopo antigénico particular. Por otra parte, la un epítopo antigénico, serán activados y expandi-
naturaleza clonal del reconocimiento antigénico, dos para diferenciarse en linfocitos B de memo-
constituye un elemento esencial de la respuesta ria o en células plasmáticas productoras de
inmune, puesto que aún cuando el sistema inmu- anticuerpos. Las células plasmáticas producen
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generalmente sólo un tipo de anticuerpo y éste recombinación o reordenamiento génico, que con-
siempre corresponde a la forma secretada o so- duce al “switching isotípico” o cambio de clase de
luble de la Ig de membrana del linfocito B del cual la inmunoglobulina del BCR en linfocitos B de
deriva la célula plasmática. La forma de membra- memoria, y (iii) reordenamientos génicos secun-
na de una Ig es un componente estructural y fun- darios, que conducen a la edición del receptor.
cional del receptor BCR; su forma soluble o En el presente capítulo se describe la estructura
secretada constituye en cambio un anticuerpo, que y función del receptor linfocitario B (BCR), las ca-
conserva la especificidad por el antígeno y es racterísticas estructurales y funcionales de las dis-
además responsable de la función efectora de la tintas clases de inmunoglobulina y los mecanismos
respuesta inmune humoral: neutralización del genéticos que explican su diversidad y heterogenei-
antígeno, reclutamiento y activación de fagocitos, dad: recombinación V(D)J, hipermutación,
activación del sistema del complemento, recluta- reordenamiento de clase y edición del receptor.
miento y activación de células NK, macrófagos y
otras células capaces de realizar citotoxicidad
dependiente de anticuerpos. 2. RECEPTOR DE LINFOCITOS B (BCR):
La expresión de un receptor BCR responsa- ESTRUCTURA Y FUNCIÓN
ble de la iniciación de una respuesta inmune con-
tra diversos agentes infecciosos y otros antígenos, El receptor de los linfocitos B (BCR) es ge-
es uno de los eventos cruciales en el desarrollo de nerado somáticamente durante la diferenciación
los linfocitos B. Durante este proceso, receptores linfocitaria, lo cual permite que cada célula B esté
antígeno-específicos únicos, son expresados por provista de un receptor único que no está codifi-
linfocitos individuales después del reordenamiento cado en el DNA germinal y no está predestinado
regulado de segmentos génicos para cadenas li- a reconocer un antígeno extraño particular.
vianas y pesadas de una inmunoglobulina. La na- El repertorio linfocitario es generado al azar
turaleza azarosa del reordenamiento génico, aco- y, los linfocitos B cuyo receptor es capaz de reco-
plado a la mayor complejidad que se consigue nocer un epítopo antigénico particular serán se-
con el apareamiento de cadenas pesadas y livia- leccionados para su proliferación y expansión
nas crea una increíble diversidad en el repertorio clonal. La interacción BCR-antígeno inicia la
linfocitario B. Aunque tal diversidad permite el transducción de señales bioquímicas que condu-
reconocimiento de un gran número de proteínas cen a la activación, proliferación y diferenciación
extrañas, la independencia antigénica del linfocitaria; además gatillan la internalización
reordenamiento génico inevitablemente conduce endocítica del complejo y el procesamiento y pre-
a la generación de linfocitos B autorreactivos. Para sentación de fragmentos antigénicos a linfocitos
evitar la autoinmunidad inducida por la eventual T-antígeno específicos, en aquellos casos en que
activación de estas células autorreactivas, el sis- el desarrollo de respuesta inmune requiere de co-
tema inmune debe poner en marcha mecanismos laboración de linfocitos T "helper" (LTh).
que le permitan inducir tolerancia a antígenos pro- El BCR es un complejo glicoproteico hetero-
pios. Entre estos mecanismos se encuentran la eli- oligomérico transmembrana, que incluye dos
minación por apoptosis de las células subunidades, estructural y funcionalmente distin-
autorreactivas (deleción clonal), la inhibición de tas y no covalentemente unidas entre sí (figura 6-
su actividad (anergia clonal), o la edición de su 1). La primera subunidad corresponde a una
receptor mediante un reordenamiento secundario inmunoglobulina (Ig) de membrana, que actúa
de segmentos génicos para cadenas livianas, lo que como receptor clonotípico propio de cada linfoci-
conduce a modificar la especificidad del BCR to y responsable del reconocimiento específico
autorreactivo. del antígeno. La segunda subunidad, denominada
Linfocitos B apropiadamente activados pro- complejo accesorio Ig-α/Ig-β, es invariante o
liferan y luego diferencian en células plasmáticas (conservado) en todos los linfocitos B y, respon-
o en células B de memoria. Durante este proceso sable del transporte y expresión del receptor
de diferenciación los linfocitos B expresan estra- clonotípico en la membrana y de la transducción
tegias únicas que llevan a diversificar aun más el de señales de activación, luego de la interacción
repertorio de receptores BCR: (i) hipermutación BCR-antígeno.
somática que conduce a un aumento de la afini-
dad del receptor por su epítopo antigénico, (ii)
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Sin título-2 120 5/26/06, 10:25 AM

Figura 6-1. Estructura del receptor linfocitario BCR y del correceptor CD21. El receptor de un linfocito B (BCR) está
constituido por una Ig de membrana, responsable del reconocimiento específico del antígeno y por un complejo accesorio Ig-α/Ig-
β, responsable del transporte y expresión del receptor BCR en la membrana y de la transducción de señales de activación, luego de
la interacción BCR-antígeno. La proliferación y diferenciación de los linfocitos B, requiere además de señales accesorias de
coestimulación proporcionadas por el correceptor CD21. Mientras el receptor BCR reconoce al antígeno, el correceptor reconoce
C3d, que se ha unido al antígeno luego de la proteolisis enzimática parcial de C3 por activación del sistema del complemento
durante el reconocimiento innato del antígeno. CD21 reconoce C3d y CD19 transduce luego las señales accesorias de coestimulación.
2.1. Inmunoglobulina de membrana Así como la capacidad para unir antígeno

reside, fundamentalmente, en la especificidad y
Todas las inmunoglobulinas, tanto de mem- afinidad de los sitios de combinación amino-
brana como de secreción, tienen una estructura terminales de una Ig, su eventual capacidad para
básica general constituida por 4 cadenas activar mecanismos efectores de respuesta inmu-
polipeptídicas: 2 cadenas pesadas (H, "heavy") ne, reside en la región constante carboxiterminal
idénticas entre sí y 2 cadenas livianas (L, "light"), de las cadenas pesadas.
también idénticas entre sí. Las cadenas pesadas y En la Ig de membrana, la región constante
livianas se asocian de modo tal que forman una carboxiterminal de sus cadenas pesadas incluye
estructura simétrica compuesta por dos una región hidrofóbica transmembrana de 25
heterodímeros H/L idénticos y unidos aminoácidos, que no está presente en la Ig de se-
covalentemente entre sí por uno o más puentes creción y es responsable del anclaje obligado de
disulfuro (figura 6-2). De esta manera, en la es- la Ig a la membrana plasmática de linfocitos B.
tructura tetramérica básica de una Ig, la interacción La región carboxiterminal de las cadenas pesadas
entre las regiones variables aminoterminales de incluye además un dominio citoplasmático, cuya
las cadenas H y L, forman dos sitios idénticos de longitud varía entre los distintos isotipos de Ig de
combinación para el antígeno. La estructura de las membrana (3 residuos aminoacídicos en IgM y
Ig se describe en el punto 5 de este capítulo. 28 residuos en IgG). El anclaje a la membrana
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Sin título-2 121 5/26/06, 10:25 AM

Figura 6-2. Los anticuerpos están constituidos por cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas
livianas (L) unidas por enlaces disulfuro (S-S) e interacciones no covalentes. Los dominios variables de 110 aminoácidos de
cadenas pesadas y livianas forman el sitio de unión para el antígeno. Los dominios constantes (CH1 a CH3) determinan las
funciones efectoras de un anticuerpo. Las cadenas pesadas de IgM e IgE, contienen un dominio constante adicional (CH4), que no
existe en los otros isotipos inmunoglobulínicos.
impide que los dominios carboxiterminales de las minan la existencia de 5 clases de cadena pesada,
cadenas pesadas estén disponibles para reclutar denominadas µ, δ, γ, α y ε. De esta manera, la
y activar mecanismos efectores de respuesta in- asociación de una misma región variable a distin-
mune. Por lo tanto, una Ig de membrana es una tas regiones constantes pesadas, conduce a la pro-
molécula bivalente y monofuncional: tiene capa- ducción de distintas clases o isotipos de Ig (IgM,
cidad para unir específicamente el antígeno (me- IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente) que difie-
diante 2 sitios de combinación idénticos), pero ren en su capacidad para reclutar y activar distin-
carece de función efectora. tos mecanismos efectores de respuesta inmune
Los anticuerpos o Ig de secreción, que están humoral.
presentes en el plasma y otros fluidos de un indi- En su etapa final de maduración y previo al
viduo, son en cambio moléculas bifuncionales: encuentro con el antígeno, los linfocitos B vírge-
conservan la capacidad de unir el mismo antígeno, nes expresan simultáneamente en su membrana
pero además los extremos libres carboxiterminales receptores BCR que contienen IgM y receptores
de sus cadenas pesadas tienen la capacidad de BCR que contienen IgD, ambos con idéntica es-
reclutar y activar mecanismos efectores destina- pecificidad y afinidad por el epítopo antigénico
dos a la eliminación del antígeno (fagocitosis, sis- pero con distinta región constante en sus cadenas
tema del complemento y citotoxicidad dependiente pesadas. Luego del primer encuentro con el
de anticuerpos). antígeno, los linfocitos B vírgenes proliferan au-
Variaciones estructurales en la región cons- mentando el número de linfocitos epítopo-especí-
tante carboxiterminal de la cadena pesada, deter- ficos para el antígeno, los cuales se diferencian
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Sin título-2 122 5/26/06, 10:25 AM

luego en células plasmáticas (con la habilidad de Los linfocitos B de memoria, aún cuando con-
sintetizar y secretar altos niveles de lo que será el servan las cadenas livianas y las regiones varia-
repertorio primario de anticuerpos IgM), y en dis- bles de las cadenas pesadas de su receptor
tintos linfocitos B de memoria que difieren en la clonotípico (y por lo tanto, mantienen la especifi-
clase de Ig de membrana que expresan como par- cidad por el mismo antígeno), han sufrido durante
te de su receptor BCR (figura 6-3). su diferenciación antígeno-dependiente: (i) un pro-
Figura 6-3. Diferenciación de células plasmáticas y de linfocitos B de memoria. Luego de la expansión clonal de linfocitos B
vírgenes (gatillada por su encuentro con el antígeno), los linfocitos se diferenciarán en células plasmáticas responsables de la
síntesis del repertorio primario de anticuerpos IgM, o en linfocitos B de memoria en los que se produce "switching" isotípico hacia
IgG, IgA o IgE, y mutación somática que conduce a un aumento de afinidad por el mismo antígeno. Un encuentro posterior de
cada linfocito B de memoria con el antígeno, gatillará la generación de células plasmáticas que sintetizarán los respectivos anticuerpos
de clase IgG, IgA o IgE.
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Sin título-2 123 5/26/06, 10:25 AM

ceso de hipermutación somática, que conduce a secundarios, luego del reconocimiento e inte-
una mayor afinidad por el antígeno, y (ii) un pro- racción específica BCR-antígeno.
ceso de recombinación génica, que conduce a un Ig-α e Ig-β son proteínas de 30 a 45 kDa (va-
cambio de la región constante pesada µ expresada riaciones en el peso molecular obedece al grado
en los linfocitos B vírgenes originales, por una de glicosilación de cada molécula), cuyo dominio
región constante distinta (γ, α ó ε) en los linfocitos transmembrana contiene grupos polares que pue-
B de memoria. den interactuar con grupos similares de la región
Durante la diferenciación antígeno-indepen- transmembrana de la Ig del BCR. Las moléculas
diente de linfocitos B (que ocurre en los órganos Ig-α e Ig-β presentan además, dominios
linfoides primarios), opera un mecanismo de fil- extracelulares y dominios citoplasmáticos simila-
tro o de selección del receptor, que ha evolucio- res a los de las proteínas del complejo CD3 del
nado para seleccionar sólo aquellos linfocitos cuyo receptor TCR de linfocitos T, y que funcionan de
BCR será más útil en el desarrollo de una respues- manera también similar en la transducción de se-
tas inmune en la periferia (ver capítulo 13). Du- ñales de activación luego del encuentro con un
rante la diferenciación antígeno-dependiente (que antígeno que contiene epítopos reconocibles por
ocurre en los centros germinales de los órganos el receptor linfocitario. La valencia, grado de agre-
linfoides periféricos), opera un mecanismo de se- gación, concentración local y persistencia del
lección que ha evolucionado para seleccionar antígeno parecen tener una importante influencia
aquellos linfocitos B de memoria que presentan en la generación de las señales intracelulares que
mayor afinidad por el antígeno y que simultánea- conducirán a la tolerancia por antígenos propios
mente han realizado el “switching” isotípico o o la iniciación de una respuesta humoral contra
cambio de clase de la cadena pesada, para expre- antígenos extraños.
sar IgG, IgA o IgE como parte de su receptor BCR La unión del antígeno a la inmunoglobulina
(figura 6-3). En un siguiente encuentro con el del receptor BCR, conduce a la fosforilación de
antígeno, los linfocitos B de memoria se diferen- los dominios citoplasmáticos de Ig-α (61
ciarán en células plasmáticas que secretarán la aminoácidos) y de Ig-β (48 aminoácidos) que con-
misma clase de inmunoglobulina expresada como tienen secuencias de 26 aminoácidos ricas en
parte del receptor BCR del linfocito B de memo- tirosina (ITAM: "Immunoreceptor Tyrosine-based
ria del cual derivan. Activation Motifs") y al reclutamiento y activa-
ción de diversas tirosina quinasas.
2.2. Complejo accesorio Ig-α/Ig-β La evidencia experimental en ratones, sugie-
re que los individuos deficientes en la expresión
En los linfocitos B, las inmunoglobulinas re- de Ig-β muestran un desarrollo linfocitario B com-
cientemente sintetizadas son transportadas a la pletamente bloqueado, en un estado equivalen-
superficie celular sólo cuando están no te al de CD44-/low CD25+ del desarrollo linfocitario
covalentemente asociadas con las proteínas acce- T. Los reordenamientos V H hacia D HJ H están
sorias Ig-α (CD79a) e Ig-β (CD79b), que se en- marcadamente reducidos, mientras los reorde-
cuentran como heterodímeros covalentemente namientos DH a JH ocurren normalmente (V, D, J
unidos mediante puentes disulfuro. Los comple- se explica en punto 7 de este capítulo). De esta
jos BCR parcialmente ensamblados, en los que manera Ig-β parece involucrado en la iniciación
falta cualquiera de sus componentes polipeptídicos del reordenamiento VH hacia DHJH, antes de fun-
(cadenas H, L, Ig-α o Ig-β) son retenidos en el cionar como parte de la subunidad de transducción
retículo con la participación de diversas de señales en el receptor pre-BCR. Un ratón
chaperoninas (proteínas que ayudan a que los pro- mutante que carece de la mayor parte del dominio
cesos intracelulares ocurran adecuadamente). Ade- citoplasmático de Ig-α, exhibe sólo un trastorno
más de su participación en el ensamblaje y trans- moderado en el desarrollo B temprano, aun cuan-
porte del BCR, las cadenas Ig-α e Ig-β desempe- do está casi completamente bloqueada la apari-
ñan un rol fundamental en la transducción de se- ción de linfocitos B periféricos. Todo lo anterior
ñales de activación en los primeros estados de di- indica que se requiere un heterodímero Ig-α /Ig-β
ferenciación de los linfocitos B en los órganos intacto para el desarrollo y mantención de
linfoides primarios (hígado fetal, médula ósea o linfocitos B maduros en la periferia.
bolsa de Fabricio), y en la diferenciación de Por último, el modelo más ampliamente acep-
linfocitos B periféricos en los órganos linfoides tado sobre la organización del receptor de
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Sin título-2 124 5/26/06, 10:25 AM

linfocitos B, sugiere que el BCR es un complejo gado al cromosoma X, representan un claro ejem-
proteico en el que la Ig de membrana está unida a plo de la importancia de las señales accesorias de
dos heterodímero Ig-α /Ig-β, uno a cada lado de coestimulación en la función de los linfocitos B
la molécula (figura 6-1). Sin embargo, estudios (ver capítulo 30). En los pacientes con este sín-
recientes sugieren que en el complejo Ig-Ig-α /Ig- drome (muy susceptibles a las infecciones
β, la molécula de Ig está asociada a un único piógenas), los niveles séricos de anticuerpos IgG,
heterodímero Ig-α /Ig-β y que, en la superficie IgA e IgE son muy bajos y en circulación sólo
celular, distintos BCR se asocian luego en expresan IgM, debido a que son incapaces de rea-
oligómeros, en microdominios, regiones o “rafts” lizar "switching" isotípico, maduración de afini-
lipídicos ricos en colesterol y esfingolípidos. dad y generación de linfocitos B de memoria. Pa-
radójicamente el síndrome de hiper-IgM ligado al
3. Linfocitos B y señales accesorias de cromosoma-X es más un defecto de los linfocitos
coestimulación T que de linfocitos B, ya que es consecuencia de
una deficiente expresión de CD40L en LTh.
La activación de linfocitos B requiere la En la respuesta a antígenos T-dependientes,
unión del antígeno a la Ig de membrana del rela interacción BCR-antígeno y la transducción de
ceptor BCR. Sin embargo, la valencia, grado de señales a través del complejo Ig-α /Ig-β conduce
agregación, concentración local y persistencia del rápidamente a: (i) entrada de los linfocitos en el
antígeno, parecen tener una importante influen- ciclo celular, (ii) rescate de la apoptosis, (iii) au-
cia en la generación de señales intracelulares que mento en la expresión de moléculas MHC de cla-
conducirán a la tolerancia por antígenos propios se II y de las moléculas coestimuladoras CD80 y
o la iniciación de una respuesta contra antígenos CD86, y (iv) aumento de la expresión de recepto-
extraños. Por otro lado, dependiendo de la natu- res para citoquinas liberadas por linfocitos T. Sin
raleza química del antígeno, la entrada en el ci- embargo, en ausencia de las señales accesorias
clo celular y la proliferación y diferenciación de de coestimulación, el reconocimiento antigénico
los linfocitos B, requerirá señales accesorias de y la transducción de señales a través de comple-
coestimulación, proporcionadas por el corre- jo Ig-α/Ig-β inevitablemente terminan en anergia
ceptor CD21 (CR2) y por LTh antígeno-especí- o en apoptosis de los linfocitos B antígeno-espe-
ficos, que expresan moléculas coestimuladoras cíficos.
de membrana (CD40L, CD28) y liberan diver- Los antígenos T-independientes (entre los que
sas citoquinas (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IFN-γ, se encuentran polisacáridos y proteínas
TGF-β). Estas señales accesorias de coesti- poliméricas de origen bacteriano), no inducen la
mulación son indispensables para la inducción formación de centros germinales y son, por lo tan-
del "switching" isotípico y la hipermutación que to, incapaces de inducir la generación de linfocitos
conducen a la síntesis de anticuerpos con diver- B de memoria. Estos antígenos inducen general-
sas funciones efectoras y mayor afinidad por el mente anticuerpos IgM de baja afinidad, debido
antígeno. a que son incapaces de inducir la hipermutación
que conduce a la producción de anticuerpos de
3.1. Antígenos T-dependientes y Antígenos T- alta afinidad y porque el "switching" isotípico está
independientes severamente limitado en ausencia de las citoquinas
producidas por LTh.
La activación de linfocitos B puede ser T-de-
pendiente o T-independiente, dependiendo de si 3.2. Correceptor CD21 (CR2)
requiere o no de señales accesorias de
coestimulación proporcionada por LTh. Esta se- Así como los linfocitos T expresan las molé-
gunda señal de coestimulación puede ser propor- culas CD4 o CD8 que actúan como correceptores
cionada a través de CD40 que interactúa con su linfocitarios de activación celular, los linfocitos B
ligando CD40L (CD154) expresado en la mem- expresan en su membrana el correceptor CD21
brana de linfocitos T activados y por B7.1 (CD80) que funciona en coordinación con el receptor BCR,
y B7.2 (CD86) que se expresan en linfocitos B para gatillar la proliferación y diferenciación de
activados e interactúan con su ligando CD28, linfocitos B antígeno-específicos (figura 6-1).
constitutivamente expresado en linfocitos T. In- Mientras el receptor BCR reconoce al antígeno,
dividuos que sufren el síndrome de hiper-IgM li- el correceptor CD21 reconoce C3d que está
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Sin título-2 125 5/26/06, 10:25 AM

covalentemente unido al antígeno y ha sido gene- bacterianas durante la vida fetal, mucho antes que
rado por digestión parcial de C3 durante la acti- el repertorio linfocitario de la respuesta inmune
vación del sistema del complemento inducida por adquirida sea completamente funcional. Además,
el reconocimiento innato del antígeno. De esta en el repertorio adulto, los linfocitos B1 dan ori-
manera, el receptor CD21 permite integrar el re- gen a células plasmáticas que secretan IgM y a
conocimiento innato de antígenos bacterianos por una fracción importante de células plasmáticas
el sistema del complemento, con la respuesta in- productoras de IgA en el intestino. De hecho, la
mune humoral a través de la activación y diferen- transferencia pasiva de linfocitos peritoneales B1
ciación de linfocitos B. La molécula CD21 se ex- en ratones Scid (presentan una severa
presa también en células dendríticas foliculares y inmunodeficiencia combinada), reconstituye la
es responsable de la retención prolongada del producción de IgA contra muchas bacterias intes-
antígeno en el tiempo y la mantención de los tinales. Por otro lado la transferencia pasiva de
linfocitos B de memoria. células de hígado fetal o del omentum intestinal,
El correceptor CD21 (también conocido a ratones irradiados, rápidamente reconstituye la
como CR2 o receptor para complemento tipo 2) subpoblación B1, mientras la transferencia de pre-
se expresa en la membrana de los linfocitos B cursores de médula ósea adulta reconstituye la
como un complejo proteico que incluye 3 proteí- subpoblación B2 pero no la B1.
nas distintas: CD21, CD19. y CD81 (también de- En el repertorio linfocitario adulto, los
nominado TAPA-1). En el complejo CD21/CD19/ linfocitos B1 son bastante frecuentes en la pobla-
CD81, el correceptor CD21 actúa como subunidad ción B que sufre neoplasias y en aquellos que re-
que une C3d y asocia el reconocimiento del conocen una gran variedad de autoantígenos y re-
antígeno por el sistema del complemento, a la ac- accionan cruzadamente con antígenos bacterianos
tivación de linfocito B a través de la transducción como polisacáridos y lipopolisacáridos. El reper-
de señales bioquímicas gatilladas por CD19. torio de receptores BCR es bastante más limitado
en los linfocitos B1 que en los linfocitos B2, sus
4. Subpoblaciones linfocitarias B1 y B2 reordenamientos génicos VH son más restringi-
dos, y, como no expresan la enzima TdT
En el repertorio linfocitario B (estimado en (Deoxinucleotidil Transferasa Terminal), carecen
1014 linfocitos B distintos), se distinguen al me- de regiones N en las uniones VDJ.
nos dos subpoblaciones celulares denominadas B1
y B2, que presentan características estructurales y
funcionales distintas, tienen distinta distribución 5. ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE INMU-
anatómica y se generan a distintas edades durante NOGLOBULINAS
la ontogenia de los LB. La subpoblación
linfocitaria B1 se desarrolla durante la vida fetal/ Las inmunoglobulinas son una familia de
neonatal, presenta receptores BCR polirreactivos glicoproteínas estructuralmente relacionadas, pre-
de baja afinidad, se asocia a la producción de sentes en la membrana de linfocitos B y en el
anticuerpos naturales T-independientes y se en- suero y fluidos titulares de todos los vertebrados,
cuentra mayoritariamente en el peritoneo, la cavi- con excepción de los ciclostomos. Sus genes se
dad peritoneal y en el bazo. La subpoblación expresan exclusivamente en los linfocitos B y, en
linfocitaria B2 se genera a partir de células respuesta a la exposición a un antígeno, se secretan
progenitoras de la médula ósea adulta, constituye como anticuerpos que actúan como mediadores
la mayor parte del repertorio linfocitario B, su de la inmunidad humoral específica. Aunque to-
activación es T-dependiente y se encuentra fun- dos los anticuerpos tienen una estructura
damentalmente en los órganos linfoides secunda- monomérica básica similar, se agrupan en clases
rios y en el torrente sanguíneo. estructural y funcionalmente distintas.
La mayoría de los linfocitos B1 se caracteri- En la última década, los esfuerzos de nume-
za por la expresión del marcador CD5 rosos inmunólogos se han centrado tanto en el
(glicoproteína monomérica de 67 kDa, propia de análisis de la estructura de los anticuerpos, como
linfocitos T) y aunque su función es todavía un en la comprensión de los mecanismos genéticos
misterio, se ha sugerido que la activación de estas que dan cuenta de su síntesis y del potencial prác-
células conduce a la producción de anticuerpos ticamente ilimitado del repertorio linfocitario.
que proporcionan protección contra infecciones
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Sin título-2 126 5/26/06, 10:25 AM

5.1. Estructura general dad, ubicada entre los dominios CH1 y CH2. La
longitud de la región bisagra varía de 10 a 60
La unidad estructural básica de las aminoácidos en los distintos isotipos de Ig y su
inmunoglobulinas está dada por un monómero flexibilidad es determinante en la orientación es-
glicoproteico formado por cuatro cadenas pacial de los paratopos y en la eficiencia de la
polipeptídicas -dos cadenas livianas (L) idénticas unión antígeno-anticuerpo.
y dos cadenas pesadas (H) también idénticas- Las cadenas livianas de la Ig, tienen un peso
covalentemente unidas por puentes disulfuro y molecular en torno a 25 kDa; no contienen
estabilizadas por uniones no covalentes, como carbohidratos y están constituidas por aproxima-
puentes de hidrógeno, fuerzas de Van der Waals e damente 220 aminoácidos, separados en un do-
interacciones electrostáticas. Al asociarse una ca- minio variable (VL) aminoterminal y un dominio
dena pesada con una liviana, sus extremos constante (CL) carboxiterminal. Variaciones estruc-
aminoterminales forman un paratopo o sitio de turales en el dominio constante carboxiterminal,
unión para el antígeno; existen por lo tanto, dos permiten distinguir dos tipos de cadena liviana:
sitios de combinación por monómero de Ig (figu- kappa (k) y lambda (λ). En una Ig, las cadenas
ra 6-2). Esto significa que una Ig es una molécu- livianas son siempre idénticas entre sí; por lo tan-
la bivalente, que puede interactuar simultáneamen- to, un monómero inmunoglobulínico sólo puede
te con dos epítopos idénticos. Sin embargo, algu- tener cadenas de tipo kappa o de tipo lambda,
nos anticuerpos se secretan como multímeros pero nunca de ambas.
inmunoglobulínicos, en los cuales monómeros Ig Utilizando enzimas proteolíticas como
se asocian covalentemente entre sí mediante una papaína y pepsina, se ha logrado degradar
cadena peptídica adicional, denominada cadena monómeros de Ig y establecer que el reconoci-
J. En estos casos, anticuerpos multiméricos como miento del antígeno y la función efectora de la
IgM e IgA, presentan una valencia mayor (pro- respuesta inmune, residen en fragmentos defini-
porcional al número de sitios de unión para el dos y distintos de la molécula. La papaína ataca
antígeno) y pueden estar presentes en las selectivamente cada cadena pesada justo en el si-
secreciones, gracias a su capacidad de unirse a un tio aminoterminal del enlace disulfuro intracadena
receptor poli-Ig existente en la cara basolateral pesada, liberando tres grandes fragmentos: un frag-
de células epiteliales del tracto respiratorio, mento Fc y dos fragmentos idénticos de aproxi-
gastrointestinal y genitourinario. madamente 45 kDa, denominados Fab (fragmen-
Las cadenas pesadas tienen un peso to de unión con el antígeno) que contienen la ca-
molecular que fluctúa entre 55 y 77 kDa. Están dena liviana completa (VL y CL) y los dominios
constituidas por aproximadamente 450 ó 550 VH y CH1 de la cadena pesada (figura 6-4). Los
aminoácidos y contienen 3 a 15% de carbohidratos, fragmentos monovalentes Fab, pueden unirse
que resultan esenciales para mantener la estructu- específicamente al antígeno pero no lo precipitan,
ra del monómero inmunoglobulínico y favorecer puesto que presentan un único sitio de combina-
la activación del sistema del complemento y la ción con el antígeno. El tercer fragmento, deno-
unión a receptores Fc. Cada cadena pesada está minado Fc (fragmento cristalizable) de aproxima-
formada por segmentos o dominios de 110 damente 50 kDa, contiene el segmento
aminoácidos, que incluyen un dominio variable carboxiterminal de la cadena pesada, es responsa-
(VH) aminoterminal que forma parte del paratopo ble de la función efectora de un anticuerpo y,
y tres o cuatro dominios constantes (C H ) presenta una gran facilidad para cristalizar en so-
carboxiterminales, que determinan la función luciones amortiguadoras neutras.
efectora de un anticuerpo.
Diferencias estructurales en la región El fragmento Fc de un anticuerpo, participa
carboxiterminal, permiten reconocer, en un mis- en funciones efectoras tales como: activación del
mo individuo, cinco clases o isotipos de cadenas sistema del complemento, activación de células
pesadas, que se designan con letras griegas: fagocíticas, citotoxicidad dependiente de
gamma (γ) presente en la IgG, mu (µ) en la IgM, anticuerpos (ADCC), inmunidad de mucosas, in-
alfa (α) en la IgA, delta (δ) en la IgD y épsilon (ε) munidad neonatal, hipersensibilidad inmediata
en la IgE. y regulación de la respuesta inmune. Distintos ti-
La cadena pesada contiene además una re- pos celulares (monocitos, células NK, macrófagos,
gión bisagra, rica en prolina y de gran flexibili- células cebadas y granulocitos, entre otras) pre-
127
Sin título-2 127 5/26/06, 10:25 AM

sentan en su membrana plasmática receptores Fc 5.2. Dominios de inmunoglobulinas y regiones
(FcR) isotipo-específicos para el fragmento Fc de hipervariables
distintas clases de anticuerpos (FcγR, FcαR,
FcεR). Estos receptores Fc, presentan un dominio La secuenciación completa de una molécula de
citoplasmático implicado en la transducción de inmunoglobulina, permitió definir los sitios de unión
señales de activación tales que, la naturaleza de la al antígeno y localizar las regiones responsables de
respuesta efectora dependerá del isotipo de Ig las actividades biológicas secundarias o efectoras de
unida al FcR y del tipo de célula que expresa el los anticuerpos. Se descubrió así que las cadenas
receptor. pesadas y livianas de los Igs están estructuradas en
El tratamiento de un anticuerpo con regiones o dominios homólogos y globulares, de
pepsina, genera un fragmento bivalente F(ab’)2, aproximadamente 110 aminoácidos, que forman un
que contiene dos fragmentos Fab covalente- asa o “loop” característico, unido por puentes
mente unidos entre sí y pequeños fragmentos disulfuro intracatenarios (figuras 6-1 y 6-2).
peptídicos derivados de la degradación de la La homología aminoacídica entre los distin-
región carboxiterminal Fc, de las cadenas pesa- tos dominios de la molécula, sugiere que las
das (figura 6-4). inmunoglobulinas se habrían originado a partir de
un gen ancestral común, que codificaba para un
polipéptido de 110 aminoácidos y de función des-
conocida. En el curso de la evolución este gen
habría sufrido sucesivas duplicaciones y mutacio-
Figura 6-4. Fragmentos obtenidos por acción de papaína y pepsina, sobre la molécula de inmunoglobulina. La papaína
separa la Ig en dos fragmentos monovalentes Fab que conservan la capacidad de unir específicamente el antígeno y, un fragmento
Fc, responsable de la función efectora de un anticuerpo. La pepsina en cambio, escinde la molécula en un fragmento bivalente
F(ab’)2, con dos sitios de combinación para el antígeno y, en múltiples péptidos de bajo peso molecular derivados de la degradación
del fragmento Fc.
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Sin título-2 128 5/26/06, 10:25 AM

nes, que generaron las distintas clases y subclases giones hipervariables o regiones determinantes
de inmunoglobulinas. de complementariedad (CDR: "Complementary-
La comparación de la secuencia aminoacídica Determinig-Region"). Los CDRs que son tres seg-
de cadenas pesadas y livianas de diferentes Igs, mentos cortos de 10 aminoácidos (denominados
revela la existencia de una gran variabilidad en el CDR1, CDR2 y CDR3), no contiguos en la se-
extremo aminoterminal, que constituye precisa- cuencia primaria de cadenas pesadas y livianas.
mente el dominio variable (VH y VL) de cada ca- En ambos tipos de cadenas H y L las regiones
dena. En el extremo carboxiloterminal de las ca- hipervariables se localizan en las posiciones 25-
denas pesadas y livianas en cambio, los distintos 35, 50-60 y 90-100 de la cadena polipeptídica.
dominios presentan una muy escasa variación Adyacente a los CDR existen segmentos de
constituyendo los dominios constantes (CH o CL) aminoácidos de menor variabilidad, conocidos
de cada cadena. En las cadenas pesadas γ, α y δ como regiones marco, regiones de entramado o
existen tres dominios constantes (CH1, CH2 y CH3), regiones flanqueantes FR1, FR2, FR3 y FR4 (FR:
mientras en las cadenas pesadas µ y ε, existen "Framework-Regions"), situadas en las posicio-
cuatro dominios constantes (CH1, CH2, CH3 y CH4). nes 1-30, 35-50, 60-90 y 98-110, respectivamen-
En las cadenas livianas existe sólo un dominio te. Estas regiones FR proporcionan un marco es-
constante CL (figuras 6-1 y 6-2). tructural para la yuxtaposición de los CDR y con-
Cada dominio de la molécula de inmuno- formación del paratopo y, eventualmente, pueden
globulina tiene la forma de un cilindro compuesto estar involucradas en el contacto con el antígeno,
por dos hojas: una contiene tres hebras de cadenas especialmente cuando se trata de haptenos, donde
polipeptídicas y la otra cuatro. En cada hoja, las uno o más CDRs puede estar fuera de la región de
hebras adyacentes son antiparalelas y forman una contacto con el antígeno.
estructura secundaria tipo beta u hoja plegada. Las regiones variables de las cadenas pesa-
Ambas hojas están alineadas en forma casi parale- das y livianas pueden dividirse en subgrupos, se-
la y tienen enlaces disulfuro intracadenas entre dos gún la secuencia aminoacídica de las regiones de
cisteínas altamente conservadas, cada una pertene- entramado. El número de subgrupos depende de
ciente a una de las hélices de cada lámina (figura 6- cada especie. En humanos, existen cuatro
5). Las proteínas que presentan una estructura si- subgrupos para cadenas kappa, seis para cadenas
milar, se clasifican en el grupo denominado lambda y tres para cadenas pesadas.
superfamilia de las inmunoglobulinas.
De los 110 aminoácidos de la región varia- 5.3. Variaciones isotípicas, alotípicas e
ble de las cadenas H y L, sólo participan en el idiotípicas
sitio de unión con el antígeno alrededor de 30 re-
siduos de cada cadena, situados en las regiones de El sistema inmune es capaz de generar un
mayor variabilidad aminoacídica, denominadas re- repertorio linfocitario B estimado entre 1014 y 1016
Figura 6-5. Dominio constante y variable de una cadena liviana. Los dominios tienen una estructura beta mantenida por
puentes disulfuro. En el extremo de la región variable, las regiones hipervariables forman parte del sitio de unión al antígeno. Este
sitio se completa con las regiones hipervariables presentes en la cadena pesada.
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Sin título-2 129 5/26/06, 10:25 AM

células distintas y capaces de originar un reper- Así, en humanos se han descrito cinco gru-
torio de anticuerpos de igual diversidad. Las fun- pos distintos de marcadores alotípicos denomina-
ciones biológicas de este repertorio de anti- dos Gm, Am, Mm (que se expresan en los domi-
cuerpos estarán fundamentalmente determinadas nios constantes de las cadenas pesadas γ, α y µ,
por variaciones en la especificidad y afinidad de respectivamente), Km que se expresa en el domi-
sus paratopos y por diferencias estructurales en nio constante de las cadenas livianas kappa y Hv
la región carboxiterminal (Fc), de sus cadenas que se expresa en el dominio variable de las cade-
pesadas. nas pesadas y debe por lo tanto ser considerado
El estudio de las variaciones estructurales y/ como marcador idiotípico. Variaciones en la re-
o funcionales de cadenas pesadas y livianas, ha gión constante de las cadenas pesadas de IgG han
permitido identificar en los anticuerpos 3 tipos permitido distinguir al menos 24 variantes distin-
distintos de variaciones, denominadas: (i) varia- tas (3 de las cuales han sido asociadas con IgG1,
ciones isotípicas expresadas en los dominios cons- 1 asociada con IgG2, 13 asociadas con IgG3 y 7
tantes de cadenas pesadas o livianas de todos los variantes que no han sido asociadas a una subclase
individuos de una especie, (ii) variaciones particular).
alotípicas expresadas en los dominios constantes
de cadenas pesadas o livianas de algunos, pero no 5.3.3. Variaciones idiotípicas
todos los individuos de una misma especie, y (iii)
variaciones idiotípicas, expresadas en las regio- La utilización de inmunoglobulinas como
nes variables o en los paratopos de distintos antígeno, ha permitido definir determinantes
anticuerpos. antigénicos específicos, denominados
idiotopos, asociados a las regiones o dominios
5.3.1. Variaciones isotípicas variables de cada Ig. El conjunto de idiotopos
de una inmunoglobulina, particularmente aqué-
Definen variaciones estructurales en la re- llos asociados al sitio de combinanción o
gión constante de cadenas livianas o pesadas de paratopo, definen el llamado idiotipo de esa
una inmunoglobulina. Así, diferencias aminoa- Ig o anticuerpo particular. Los idiotipos son
cídicas en el dominio constante, de cadenas livia- generalmente propios o específicos de
nas que expresan la misma región variable VL , anticuerpos derivados de un clon linfocitario
determinan la existencia de dos tipos o isotipos de B particular (idiotipos privados) o pueden ser
cadenas livianas, denominados kappa (κ) y lambda compartidos por varios clones linfocitarios
(λ). (idiotipos públicos).
Diferencias estructurales en la región cons-
tante de cadenas pesadas que expresan la mis- 5.4. Clases y subclases de inmunoglobulinas
ma región variable VH, determinan la existen-
cia de 5 clases o isotipos de cadenas pesadas En mamíferos superiores, específicamente
(denominadas µ, δ, γ, α y ε ) que conducen a la en humanos, se reconocen clases y subclases
existencia de 5 clases o isotipos de inmu- de inmunoglobulinas que difieren en tamaño,
noglobulinas que difieren en su función efectora carga, composición aminoacídica y contenido
y se denominan IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, res- de carbohidratos de sus cadenas pesadas.
pectivamente Electroforéticamente, presentan un espectro de
migración, que va desde la fracción gamma a la
5.3.2. Variaciones alotípicas alfa del suero normal. Las fracciones en que
migran más frecuentemente son: IgG en la frac-
Definen variaciones estructurales en las re- ción gamma, IgA en gamma-beta, e IgM e IgD en
giones constantes de las cadenas pesadas o livia- beta.
nas de una clase de Ig, entre diferentes individuos La tabla 6-1, presenta las características
de una misma especie. Estas variaciones se here- fisicoquímicas de las Igs humanas y la tabla 6-2
dan en forma estrictamente mendeliana y no liga- muestra sus características biológicas.
da al sexo. Los isotipos se expresan en todos los
individuos de una especie, mientras los alotipos
se expresan sólo en algunos individuos de la es-
pecie.
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Sin título-2 130 5/26/06, 10:25 AM

Tabla 6-1. Características fisicoquímicas de las inmunoglobulinas humanas
Característica Clase de Inmunoglobulina
IgG IgM IgA IgD IgE
Cadenas H γ µ α δ ε
Subclases de cadenas H γ1, γ2, γ3, γ4 µ1, µ2 α1, α2 _ _
Cadenas L κóλ κóλ κóλ κóλ κóλ
Peso molecular (kDa) 150 970 160 - 400 184 188
Número de monómeros 1 5 1-2 1 1
Carbohidratos (%) 2-3 12 7 - 11 9 - 13 12
S 7 19 7 - 18 7 8
Valencia 2 10 2-4 2 2
Cadena J No Sí Sí, No No
polimérica
H, pesada; L, liviana; S, coeficiente de sedimentación.
Inmunoglobulina G. La IgG representa el media de aproximadamente 21 días. Entre sus pro-

70-75% del repertorio total de inmunoglobulinas, piedades biológicas destaca que todas las subclases
siendo en su mayor parte de la subclase IgG1. Es (con excepción de IgG 2 ), pueden unirse al
una glicoproteína monomérica que posee dos ca- sincitiotrofoblasto placentario a través de los do-
denas pesadas g y dos cadenas livianas (κ o λ) minios CH1 y CH2; son por lo tanto, capaces de
(figura 6-2). Su peso molecular es de aproxima- atravesar la placenta y responsables de la protec-
damente 150 kDa y está glicosilada en un 2 a 3%. ción del recién nacido en los primeros meses de
Existen cuatro subclases (IgG1 a IgG4) originadas vida. La IgG es también importante en la induc-
por pequeñas diferencias en la región constante ción de fagocitosis (opsonización) dado que sus
de la cadena pesada, particularmente a nivel de la dominios CH1 y CH2 pueden unirse a receptores
región bisagra. Son los anticuerpos predominan- (FcγR) presentes en la superficie celular de
tes en la sangre, linfa y fluidos peritoneal y cere- monocitos, macrófagos y neutrófilos. Todas las
broespinal. En cuanto a su comportamiento tér- subclases de IgG (excepto IgG4 que lo hace muy
mico, las IgG reaccionan mejor a 37°C. débilmente), unen el primer componente (C1q),
Los anticuerpos de clase IgG predominan en del sistema complemento y pueden por lo tanto,
la respuesta inmune secundaria y tienen una vida activar complemento a través del dominio CH2.
Tabla 6-2. Características biológicas de las inmunoglobulinas humanas
Característica Clase de Inmunoglobulina

IgG IgM IgA IgD IgE
Porcentaje del total de Ig
en la sangre 70 -75 10 15 - 20 £1 ≥1
Concentración en el suero 800 - 1600 50 - 200 140 - 400 0,3 - 40 0,01 - 0,1
(mg/ml)
Fija complemento Sí Sí Sí No No
Atraviesa la placenta Sí No No No No
Unión a macrófagos y Sí No No No No
neutrófilos
Unión a células cebadas y No No No No Sí
basófilos
Unión a plaquetas Sí No No No No
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Sin título-2 131 5/26/06, 10:25 AM

Inmunoglobulina M. La IgM tiene un peso te en la respuesta inmune primaria y tiene una vida
molecular de aproximadamente 970 kDa y repre- media de 5 días. Es la Ig más eficiente en la fija-
senta el 10% del repertorio total de anticuerpos. ción de complemento, en las reacciones de lisis
Es una inmunoglobulina o anticuerpo polimérico celular y en la potenciación de las reacciones de
con 10 ó 12 sitios de unión para el antígeno (da- fagocitosis. Es una inmunoglobulina que reaccio-
dos por 5 ó 6 monómeros inmunoglobulínicos) y na bien a temperaturas inferiores a 37°C.
está glicosilada en un 12%. La estructura básica
del monómero IgM está dada por dos cadenas pe- Inmunoglobulina A. La IgA representa de 10 a
sadas m y dos cadenas livianas κ o λ. 5% del total de inmunoglobulinas corporales. Pue-
Las cadenas m poseen cuatro dominios cons- de ser monomérica (160 kDa) o dimérica (385
tantes (figura 6-6). Las subunidades se unen a tra- kDa); la forma dimérica existente en las
vés de enlaces disulfuro entre los dominios Cµ3. secreciones, se denomina IgA secretora (IgAs);
La polimerización de la molécula se ve favoreci- Los anticuerpos IgA poliméricos presentan, al
da por la existencia de la cadena J (“joining” o de igual que las IgM poliméricas, la cadena J y el
unión), de aproximadamente 15-20 kDa, que se llamado componente secretor (glicoproteína de
une a nivel de los penúltimos residuos de cisteína 70 kDa), que constituye un remanente del recep-
de cadenas µ, entre la primera y la última unida- tor poli-Ig (poli-IgR) sintetizada por las células
des monomérica del polímero. El 80% de la IgM epiteliales (figura 6-7). La cadena J se une al do-
se encuentra en el espacio intravascular. minio CH3 y el componente secretor al dominio
La IgM es la inmunoglobulina predominan- CH2 del dímero IgA.
Figura 6-6. Estructura de la Inmunoglobulina M. Las cinco unidades estructurales básicas se unen por puentes disulfuro. Las
cadenas m poseen cuatro dominios constantes. Una cadena J inicia el ensamblaje del pentámero.
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Sin título-2 132 5/26/06, 10:25 AM

Figura 6-7. Inmunoglobulina A monomérica, dimérica y de secreción. Las IgA monomérica y dimérica corresponden a formas
séricas; la dimérica tiene una cadena J. La IgA secretora, además de la cadena J, presenta un componente secretor.
La IgA es la principal inmunoglobulina pre- de las lectinas, impide la adherencia de bacterias

sente en leche, saliva, lágrimas, y secreciones res- a la superficie de la mucosa intestinal y su por-
piratorias y digestivas. Las células epiteliales sin- ción Fc se une al receptor fagocítico Fcα-R
tetizan el poli-IgR en el retículo endoplásmico, y (CD89).
luego de pasar por el complejo Golgi será expues- Existen dos subclases de IgA (IgA1 e IgA2)
to, como receptor para las IgA e IgM poliméricas, que presentan pequeñas diferencias en las regio-
en la superficie basolateral de la célula epitelial. nes constantes de las cadenas alfa. No se han ob-
La unión no covalente, del extremo servado diferencias en la actividad biológica.
carboxiterminal del anticuerpo al receptor es de-
pendiente de la cadena J. El complejo IgA-poli- Inmunoglobulina D. La IgD tiene un peso
IgR (o IgM-poli-IgR) ingresa por endocitosis a la molecular de aproximadamente 185 kDa, está
célula epitelial y es luego transportado a la super- glicosilada en un 9 a 14% y tiene una vida media
ficie apical o luminal del epitelio (transcitosis) de 2 a 3 días. Existe controversia sobre su fun-
donde el receptor será parcialmente digerido, de- ción; sin embargo, se piensa que por encontrarse
jando un fragmento o componente secretor presente en cantidades importantes sobre la mem-
covalentemente unido al anticuerpo secretado. El brana de los linfocitos B circulantes, podría estar
componente secretor protege a IgA e IgM, de la involucrada en la activación de dichas células
acción de las enzimas proteolíticas presentes en como receptor de antígeno. Representa menos del
las secreciones (figura 6-8). 1% del total de las inmunoglobulinas y la mayor
Entre las propiedades de la IgA destacan las parte se encuentra en el espacio intravascular (fi-
siguientes: neutraliza los virus, activa el sistema gura 6-9).
del complemento por la ruta alterna y por la ruta
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Sin título-2 133 5/26/06, 10:25 AM

Figura 6-8. Proceso de secreción de la IgA. La IgA plasmática dimérica se une al receptor poli-Ig expuesto en la superficie
basolateral de la célula epitelial e ingresa a la célula como complejo poli-Ig-IgA, por endocitosis. Posteriormente, hacia el lado
luminal de la célula, el receptor poli-Ig, es parcialmente digerido, dejando un fragmento o componente secretor, covalentemente
unido a la IgA dimérica secretada.
Figura 6-9. Estructura de las inmunoglobulinas E y D. La IgD y la IgE son inmunoglobulinas monoméricas de aproximada-
mente 185 y 190 kDa, respectivamente. Las cadenas e poseen cuatro dominios constantes.
Inmunoglobulina E. La IgE es una glico- inmunoglobulinas y el 50% de ella se encuen-

proteína de aproximadamente 190 kDa, que se tra en el espacio intravascular. La región Fc de
encuentra glicosilada en un 12% y tiene una vida la IgE se une con facilidad a receptores espe-
media de 2 a 3 días. Las cadenas e presentan cua- cíficos de alta afinidad (receptores FcεRI),
tro dominios constantes (figura 6-9). La IgE re- constitutivamente expresados en la membrana
presenta menos del 1% del total de las de células cebadas, basófilos y eosinófilos, de
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Sin título-2 134 5/26/06, 10:25 AM

esta manera estas células adquieren receptores 6. RESPUESTA INMUNE HUMORAL
antígeno-específicos. La unión de antígenos
(alergenos) a las IgE unidas a mastocitos y Los anticuerpos producidos por las células
basófilos, gatilla no sólo la degranulación ce- plasmáticas -que representan el estado final de dife-
lular y la liberación (exocitosis) de mediado- renciación de los linfocitos B- son mediadores de la
res de inflamación (histamina, serotonina, respuesta inmune humoral y por lo tanto, responsa-
triptasa), sino también la síntesis de citoquinas bles de la neutralización y eliminación de diversos
(IL-4, IL-5, IL-6, TNF) y de mediadores deri- antígenos, gatillando una variedad de reacciones
vados del ácido araquidónico (leucotrieno C4, inmunológicas. Una de las características esenciales
prostaglandina D2). La liberación de estos me- de esta respuesta es su carácter específico y heterogé-
diadores de hipersensibilidad inmediata en re- neo; es decir, se sintetizan anticuerpos de distinta cla-
acciones alérgicas como asma, fiebre del heno se, avidez y afinidad, capaces de interactuar con
y urticaria, induce rápidamente edema de la epítopos antigénicos según un claro patrón temporal.
mucosa bronquial, secreción de mucus, con- En un individuo que por primera vez toma con-
tracción de la musculatura lisa y, subse- tacto con un antígeno, se distinguen cuatro fases en
cuentemente, infiltrado leucocitario en el sitio la respuesta primaria de producción de anticuerpos
de inflamación. (figura 6-10): (i) Fase de latencia, en la que no se
Un FcεR de baja afinidad y rol biológico has- detectan anticuerpos, (ii) Fase logarítmica, en la cual
ta ahora desconocido (FcεRII) se expresa el título del anticuerpo se eleva en forma exponencial,
constitutivamente en linfocitos B (receptor (iii) Fase de meseta, en cual el título de anticuerpos
FcεRIIA) o en respuesta a IL-4, en monocitos y se estabiliza, y (iv) Fase de descenso, en cual la con-
eosinófilos (receptor FcεRIIB o CD23). centración de anticuerpos disminuye por eliminación
o catabolismo.
Figura 6-10. Respuesta inmune humoral. La figura superior presenta las etapas de una respuesta inmune humoral, expresadas
como título de anticuerpos: Fase de latencia, logarítmica, de meseta y de decadencia. La figura inferior muestra diferencias entre
las respuestas inmune humoral primaria y secundaria, particularmente respecto a la clase de inmunoglobulinas y al título de los
anticuerpos. Se destaca que en la respuesta primaria, se pesquisa primero IgM en bajo título y en la respuesta secundaria predomi-
na la síntesis de IgG, en un título significativamente superior (ver cambio de clase).
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Sin título-2 135 5/26/06, 10:25 AM

Aunque estas fases de la curva de produc- el antígeno y el anticuerpo. Operacionalmente, esto
ción de anticuerpos se presentan siempre en la res- significa que mientras mayor es la afinidad de la
puesta primaria, en los posteriores contactos con interacción, es más difícil separar los componen-
el antígeno (respuesta secundaria, terciaria, etc.), tes del complejo antígeno-anticuerpo.
pueden distinguirse los siguientes aspectos (figu- Dado que las interacciones antes menciona-
ra 6-10): (i) Evolución cronológica, fase de das no son covalentes, la unión antígeno-anticuer-
latencia más corta y fases de meseta y de descen- po se puede representar por la constante de aso-
so más largas, (ii) Título de anticuerpos, en la fase ciación o afinidad Ka, (que se expresa en M-1). Se
de meseta mucho mayor concentración de obtiene asumiendo que esta reacción obedece ri-
anticuerpos, (iii) Clase de anticuerpos, en la res- gurosamente a la ley de acción de masas, como
puesta primaria para los antígenos timo-depen- sigue:
dientes, se sintetizan y secretan fundamentalmen-
te anticuerpos de isotipo IgM, de gran avidez, en
cambio en la respuesta secundaria se encuentran Ka [ AgAc ]*
casi exclusivamente anticuerpos de isotipo IgG, y Ag + Ac AgAc Ka =
(iv) Afinidad de los anticuerpos, generalmente Kd [ Ag ] x [ Ac ]
mucho mayor en la respuesta secundaria o poste-
rior. Este fenómeno se denomina maduración de * Concentración Molar
la afinidad y es consecuencia de la hipermutación
somática en los genes recombinados del anticuer-
po y de una expansión selectiva de los clones de La Ka se puede medir por varias técnicas,
alta afinidad. tales como: diálisis en equilibrio, radioinmu-
noensayo y precipitación con sulfato de amonio
6.1. Avidez de complejos antígeno-anticuerpo.
El término avidez se refiere a la fuerza con

que un anticuerpo se une a un antígeno multi- 7. BASES GENÉTICAS DE LA DIVERSI-
valente y, por lo tanto, tiene relación con la afini- DAD DE LAS INMUNOGLOBULINAS
dad y con la valencia del antígeno y del anticuer-
po. Si tanto el antígeno como el anticuerpo tienen En los vertebrados superiores el tamaño y di-
carácter multivalente, la fuerza de unión entre ellos versidad del repertorio linfocitario, aumenta la pro-
es mayor que la suma de las afinidades. babilidad que un linfocito individual encuentre un
Debido a que la avidez de un anticuerpo es antígeno que se una a su receptor de superficie y
una función de los métodos utilizados para me- gatille la proliferación y diferenciación celular a
dirla (precipitación con sulfato de amonio o con través de un proceso de selección clonal de
suero anti-Ig o, seroneutralización de fagos o bac- linfocitos.
terias, entre otros), sólo puede expresarse en uni- El receptor de un linfocito B (BCR) es ge-
dades arbitrarias. nerado somáticamente en el órgano linfoide pri-
mario, durante un proceso de diferenciación
6.2. Afinidad antígeno independiente que permite que cada
linfocito B esté provisto de un receptor único,
El término “afinidad de un anticuerpo”, es cuyas cadenas pesadas y livianas no están co-
una expresión termodinámica de la fuerza de la dificadas en el DNA germinal y no está predes-
interacción entre un epítopo del antígeno y el sitio tinado a reconocer un antígeno extraño particu-
de combinación de un anticuerpo; por lo tanto, es lar.
una medida de la compatibilidad estereoquímica El repertorio de receptores linfocitarios B
entre ambas moléculas y puede aplicarse a es generado al azar durante un proceso regula-
interacciones que involucran determinantes sim- do de reordenamiento o recombinación de seg-
ples (como los haptenos). mentos génicos V(D)J (como ocurre en huma-
La afinidad resulta de la suma de las fuerzas nos), por conversión génica (como ocurre en
de repulsión y atracción (puentes de hidrógeno, pollos y conejos) o por mutación somática
interacciones de Van der Waals, interacciones (como ocurre en ovejas). Además durante la
electrostáticas e interacciones hidrofóbicas) entre recombinación V(D)J, puede introducirse una
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Sin título-2 136 5/26/06, 10:25 AM

mayor diversidad por: (i) corte impreciso de los 7.1. Genes de inmunoglobulinas
segmentos génicos que se recombinan, (ii)
agregado de nucleótidos al azar, en los sitios En el DNA germinal de los vertebrados su-
de corte y unión de los distintos segmentos periores no existen genes que codifiquen la sínte-
génicos y, (iii) combinación al azar de distintas sis de cadenas pesadas y livianas de una
cadenas pesadas y livianas. A estos mecanismos inmunoglobulina; al contrario estos genes deben
de generación de diversidad en el órgano ser creados o ensamblados a partir de copias múl-
linfoide primario, se agregarán luego, en los tiples de pequeños segmentos génicos, en un pro-
órganos linfoides secundarios, mecanismos ceso de recombinación sitio-específico, catalizado
antígeno-dependientes como: (i) la hipermu- por un complejo enzimático denominado
tación de las regiones hipervariables (CDRs) de recombinasa (figuras 6-11 y 6-12).
cadenas pesadas y livianas, (ii) el “switching” Los segmentos génicos que codifican las dis-
isotípico o cambio de clase de las cadenas pe- tintas regiones o dominios de cadenas pesadas y
sadas y (iii) la edición del receptor a través de livianas de una inmunoglobulina, se encuentran
reordenamientos secundarios V en las cadenas agrupados en tres grupos o familias génicas dis-
livianas. tintas: (i) una única familia génica H, que incluye
Figura 6-11. Generación del gen activo de la cadena pesada. El gen activo para una cadena H surge de cuatro genes (V, D, J y
C) de la línea germinal. Mediante recombinación somática se unen a una de las secuencias V, D y J, formando la región variable.
Los genes para región constante (nueve en el ser humano) están situados río abajo (hacia 3'). Uno de los genes constantes se une a
los segmentos ya recombinados que codifican la región variable. El montaje final de las secuencias se realiza durante el procesa-
miento del RNA.
Figura 6-12. Recombinación de segmentos génicos y generación de RNA mensajero para cadenas livianas. En la célula
precursora de un linfocito B, los distintos segmentos génicos se encuentran en configuración germinal y deben recombinarse para
generar un gen que codifique la cadena liviana de una inmunoglobulina.
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Sin título-2 137 5/26/06, 10:25 AM

genes CH (constantes), genes VH (variables), genes denas pesadas ocupa 1250 kilobases (kb), en el
JH (unión) y genes DH (diversidad) de las cadenas brazo largo del cromosoma 14, y consiste de 123
pesadas; (ii) dos familias génicas livianas distin- a 129 segmentos génicos variables VH, 27 segmen-
tas (kappa y lambda) que incluyen genes CL (cons- tos génicos DH, 9 segmentos génicos JH y 11
tantes), genes VL (variables) y genes JL (unión). minigenes constantes CH. Los segmentos génicos
En humanos, los segmentos génicos que codifi- variables ocupan una posición muy cercana al
can las cadenas pesadas se encuentran en el telómero cromosómico y entre ellos se distinguen
cromosoma 14 y los de cadenas livianas κ y λ en 41 seudogenes y sólo 82 a 86 segmentos funcio-
los cromosomas 2 y 22, respectivamente. En el nales que se clasifican en 7 familias o subgrupos
ratón, en cambio, los genes para cadenas pesadas cuyos miembros presentan más de 70% de
se ubican en el cromosoma 12, y los genes para homología. Los minigenes constantes ocupan una
cadenas livianas κ y λ, se ubican en los posición más centromérica en el cromosoma 14
cromosomas 6 y 16, respectivamente. humano. Se han descrito además, fuera del
cromosoma 14 humano, 35 segmentos génicos
7.1.1. Genes de cadenas pesadas huérfanos y no funcionales que no contribuyen a
la síntesis de cadenas pesadas: 9 segmentos VH y
La región variable de una cadena pesada 10 segmentos DH en el cromosoma 15; 16 seg-
(VH, de aproximadamente 110 aminoácidos), se mentos VH en el cromosoma 16 y un segmento VH
genera a partir de tres segmentos génicos dis- en el cromosoma 9.
tintos: un segmento génico variable VH, de 285 Los seudogenes o segmentos génicos no fun-
pares de bases, que codifica los primeros 95 cionales, aunque no contribuyan directamente a
aminoácidos y dos segmentos génicos distintos la diversidad de las cadenas, pueden constituir un
(de diversidad DH y de unión JH) que codifican importante reservorio de diversidad, puesto que
los últimos 13 aminoácidos del dominio varia- pueden utilizarse en la recombinación desigual
ble. Cada segmento génico VH contiene ade- (conversión génica) con segmentos génicos fun-
más en su extremo 5’, una pequeña secuencia cionales y generar así nuevos segmentos génicos
nucleotídica de 60 a 90 pares de bases, que co- funcionales.
difican una secuencia aminoacídica líder o se-
ñal aminoterminal hidrofóbica de 20 a 30 7.1.2. Genes de cadenas livianas
aminoácidos, que permite la síntesis de la cade-
na liviana en ribosomas asociados al retículo La región o dominio variable de una cadena
endoplásmico celular. Iniciada la síntesis de la liviana (V L de aproximadamente 110 ami-
cadena liviana, la secuencia líder o señal es lue- noácidos), se genera a partir de dos segmentos
go, rápidamente removida del extremo amino génicos distintos: un segmento génico variable VL,
de la proteína (figura 6-11). de 285 pares de bases, que codifica los primeros
El sitio de ensamblaje de los segmentos 95 aminoácidos y, un segmento génico de unión
V(D)J codifica la tercera región hipervariable JL, de 39 pares de bases que codifica los últimos
(CDR3), de la cadena pesada, mientras las dos 13 aminoácidos del dominio variable liviano
primeras regiones hipervariables (CDR1 y CDR2), (aminoácidos 96 al 108 en dirección amino-
están codificadas dentro del segmento génico VH. carboxilo). Cada segmento génico VL contiene
La región constante de la cadena pesada está además en el extremo 5’, una pequeña secuencia
codificada por un segmento génico o minigen nucleotídica de 60 a 90 pares de bases, que codifi-
constante CH que contiene 3 ó 4 exones (CH1, CH2, ca una secuencia aminoacídica líder o señal
CH3, CH4: que codifican la región constante de las hidrofóbica, ubicada en el extremo amino de la
cadenas pesadas de los anticuerpos) y exones más cadena liviana (figura 6-12).
pequeños que codifican la región transmembrana El dominio constante de la cadena liviana
y el dominio citoplasmático de la cadenas pesa- está codificado por un segmento o minigen cons-
das de Ig del receptor linfocitario BCR (figura 6- tante (CL) que contiene un único exón de aproxi-
1). Los minigenes de cadenas pesadas de diferen- madamente 330 pares de bases, puesto que las
tes isotipos (Cµ, Cδ, Cγ, Cα y Cε), están ordena- cadenas livianas no contienen dominios
das en series (en tándem), en un orden que es ca- transmembrana y citoplasmático (figura 6-1).
racterístico de cada especie.
En humanos, el repertorio genómico de ca-
138
Sin título-2 138 5/26/06, 10:25 AM

a) Genes de cadena kappa sadas y luego los segmentos génicos que codifi-
can las cadenas livianas.
En humanos el repertorio genómico para cade- La recombinación es iniciada por un com-
nas livianas kappa (κ), ocupa 1820 kb en el brazo cor- plejo enzimático o recombinasa, que reconoce y
to del cromosoma 2 y consiste de 76 segmentos varia- corta de manera específica, una secuencia señal
bles Vκ (agrupados en 7 familias distintas, y cuyos de recombinación (RSS: "Recombination Signal
miembros muestran más de 70% de homología), 5 Sequence") que flanquea o es adyacente a cada
segmentos génicos de unión Jκ y un único gen cons- uno de los segmentos génicos V(D)J que deben
tante Cκ. Los segmentos variables Vκ, están separa- reordenarse. Cada secuencia RSS consta de un
dos en dos grupos o “clusters”: uno distal contenien- heptámero conservado (5’CACAGTG) y un
do 36 genes en 400 kb (más centromérico y en posi- nonámero también conservado (5’
ción 5’, más lejos del gen constante Cκ) y, otro más ACAAAAACC), separados entre sí por un
proximal conteniendo 40 segmentos génicos en 600 espaciador no conservado de 12 ó 23 pares de
kb (en posición más telomérica y en posición 3’, más bases (figura 6-13). Los espaciadores definen dos
cercano al gen constante Cκ). tipos distintos de secuencias de recombinación (de-
Se ha descrito además un haplotipo raro que nominadas 12-RSS y 23-RSS) y, el reor-
contiene sólo el “cluster” proximal con 40 segmen- denamiento se realiza de manera tal que una
tos génicos Vκ distribuidos en 7 familias, de los recombinación eficiente sólo ocurre cuando un
cuales 18-20 son segmentos funcionales. En este segmento génico que contiene el espaciador 12-
haplotipo se han identificado y secuenciado, ade- RSS, se reordena con un segmento génico distin-
más, 28 segmentos génicos Vκ adicionales y “huér- to que contiene el espaciador 23-RSS. Esta res-
fanos”, distribuidos en distintos cromosomas: 3 tricción del reordenamiento génico, se conoce
ubicados en el brazo corto del cromosoma 2, (pero como “la regla 12/23” y determina qué segmen-
fuera del locus mayor IgLκ), 13 segmentos en el tos podrán recombinarse entre sí, dependiendo
brazo largo del cromosoma 2, 6 segmentos en el de la posición de las secuencias 12-RSS o 23-
cromosoma 22, 1 en el cromosoma 1, 1 en el RSS, en el extremo 5’ o 3’ de cada segmento
cromosoma 15 y 4 fuera del cromosoma 2. génico (figura 6-14). La secuencia RSS se encuen-
tra en el extremo 3’ de cada segmento variable V,
b) Genes de cadenas lambda en el extremo 5’ de cada segmento de unión J y en
ambos extremos, 5’ y 3’, de los segmentos génicos
En humanos el repertorio genómico de cade- de diversidad D.
nas livianas lambda (λ), ocupa 1050 kb en el bra- El proceso de recombinación o reordena-
zo largo del cromosoma 22 y contiene: 70-71 seg- miento génico es altamente complejo e implica la
mentos variables Vλ, que ocupan 900 kb (depen- participación de una maquinaria enzimática
diendo del haplotipo), 7 a 11 segmentos constan- (recombinasa) que incluye componentes de expre-
tes (Cλ) en posición más telomérica y, además, sión exclusivamente linfocitaria y componentes
cada segmento génico constante está precedido que forman parte de la maquinaria de reparación
por un único segmento génico Jλ. Los segmentos del DNA celular.
génicos Vλ ocupan una posición más centromérica El reordenamiento V(D)J es iniciado por los
y entre ellos se distinguen 14 seudogenes y 56-57 productos de expresión linfoide-específica de los
segmentos Vλ funcionales, agrupados en 11 fa- genes RAG-1 y RAG-2 (RAG: "Recombination
milias distintas. Se han descrito además dos seg- Activating Gene") que reconocen y cortan las se-
mentos génicos huérfanos ubicados en el cuencias RSS, adyacentes a cada segmento génico
cromosoma 8 humano y dos segmentos Vλ y dos que será recombinado. Las secuencias RSS son
segmentos constantes Cλ, en el cromosoma 22, primero reconocidas por la maquinaria de
por fuera del locus mayor de cadenas livianas recombinación y luego aproximadas en estrecha
lambda. yuxtaposición o sinapsis para cortar de manera
precisa el DNA, en el límite entre el heptámero
7.2. Reordenamiento génico de cada secuencia RSS y el segmento génico
codificante. Proteínas de alta movilidad de los gru-
El reordenamiento génico se realiza de manera pos 1 y 2 (HMG1/2) parecen desempeñar un rol
definida y ordenada, recombinando primero los auxiliar en estos eventos tempranos de la
segmentos génicos que codifican las cadenas pe- recombinación génica. El corte o daño en el DNA
139
Sin título-2 139 5/26/06, 10:25 AM

agregar nucleótidos en los extremos libres de los
segmentos génicos codificantes, incrementando
notablemente la diversidad generada durante este
proceso de reordenamiento o recombinación
génica.
7.2.1. Reordenamiento de cadenas pesadas
El reordenamiento de segmentos génicos en

el locus para cadenas pesadas, se realiza en un
orden preciso e implica la eliminación o deleción,
de todos los segmentos que separan a aquéllos
que deben recombinarse. Primero se reordena un
segmento génico de diversidad D, con un seg-
mento de unión J, eliminando toda la secuencia
nucleotídica que los separa, pero manteniendo
todos los segmentos génicos que están en posi-
ción y dirección 5’ del segmento D y en posición
y dirección 3’ del segmento J que se recombina.
Luego, uno de los segmentos génicos variables
V, se recombina con el complejo DJ ya
reordenado, eliminando los segmentos que los
separan y conservando aquéllos que están en
Figura 6-13. Recombinación de segmentos génicos V(D)J. posición y dirección 5’ de V y en dirección 3’ del
La recombinación de segmentos génicos es iniciada por un complejo DJ.
complejo enzimático (recombinasa) que reconoce y corta de El DNA ya reordenado, es ahora utilizado
manera específica una secuencia señal de recombinacion (RSS)
que flanquea los segmentos génicos que deben reordenarse. como molde para la síntesis de una RNA o
Cada secuencia RSS consta de un heptámero conservado (5’ transcrito primario que incluirá, tantos los seg-
CACAGTG) y un nonámero tambien conservado (5’ mentos génicos V(D)J recombinados, como los
ACAAAAACC), separados entre sí por un espaciador no con- genes constantes Cµ y Cδ, ubicados en dirección
servado de 12 ó 23 pares de bases. El reordenamiento se reali-
za de manera tal que una recombinanción eficiente sólo ocu- 3’ de los segmentos J. El transcrito primario es
rre cuando un segmento que contiene el espaciador 12-RSS, luego procesado de manera tal que: (i) se elimi-
se reordena con un segmento génico distinto que contiene el nan por "splicing" los segmentos J que separan
espaciador 23-RSS (regla 12/23). V(D)J de CµCδ y los segmentos génicos V, si-
tuados en dirección 5’ del complejo V(D)J
reordenado. Se eliminará además Cµ o bien Cδ,
para generar por “splicing” alternativo, dos RNA
es ahora detectado por la maquinaria celular de mensajeros distintos: uno que contiene V(D)J-
reparación del DNA, que incluye una proteína Cµ y codificará una cadena pesada de tipo mu y
quinasa DNA dependiente (DNA-PK ), reclutada otro que contendrá V(D)J-Cδ y codificará la sín-
en sitio del daño a través de su interacción con el tesis de una cadena pesada delta; (ii) se agrega
heterodímero regulador Ku70/Ku80, que recono- un capuchón de 7-metil guanosina en el extremo
ce los extremos cortados del DNA. La quinasa 5’ del RNA, y (iii) se agrega una cola de poli-A
DNA-PK es una proteína de 450 kDa, codificada (de 150 a 200 adeninas), en el extremo 3’ de
por el gen XRCC7 y perteneciente a la familia de V(D)J-Cµ y en el extremo 3’de V(D)J-Cδ, para
las fosfatidil inositol (PI) quinasas. Forma tam- generar mRNA funcionales, que serán transpor-
bién parte de la maquinaria de reparación el pro- tados desde el núcleo al citoplasma celular pro-
ducto del gen XRCC4 que se une a la DNA-PK y B, para la síntesis de las respectivas cadenas
actúa como una ligasa IV para unir los extremos pesadas Hµ y/o Hδ.
cortados del DNA codificante, en los eventos fi-
nales de reparación del DNA. Previo a la repara- 7.2.2. Reordenamiento de cadenas livianas
ción final del DNA, una exonuclesa puede remo-
ver nucleótidos al azar y la enzima TdT puede El reordenamiento de segmentos génicos
140
Sin título-2 140 5/26/06, 10:25 AM

de cadenas livianas kappa o lambda se realiza segmento, presenta cierto grado de imprecisión
de manera similar al reordenamiento de cade- que contribuye a aumentar la diversidad del re-
nas pesadas. Primero se reordenan al azar seg- pertorio linfocitario. Esto significa que en
mentos génicos V y J, con delección del DNA linfocitos que utilizan los mismos segmentos
que separa los segmentos que se recombinan y génicos para generar las cadenas y livianas de su
mantención de los segmentos génicos que están receptor BCR, el corte impreciso del DNA con-
en dirección 5’ del segmento V y en dirección ducirá a variaciones aminoacídicas codificadas por
3’ del segmento J que se recombina. El comple- diferencias en el número de nucleótidos en la re-
jo VJ reordenado, se recombina ahora con un gión de unión de los segmentos génicos
gen constante C, eliminando todo el DNA que recombinados (figura 6-14).
los separa. Si los segmentos J y C están asocia- El reordenamiento impreciso también puede
dos en un mismo grupo o “cluster”, el reorde- llevar a reordenamientos no funcionales que es-
namiento de un J determinado implicará la tén fuera del marco de lectura, de modo que el
recombinación, del gen C asociado a ese seg- DNA no pueda transcribirse
mento génico J.
Reordenado el DNA, se sintetiza ahora un 7.2.4. Diversificación de la región N
transcrito primario que será procesado para gene-
rar el RNA mensajero que codifica la síntesis de Linfocitos que utilizan los mismos segmen-
una cadena liviana kappa o lambda. tos génicos V(D)J para generar las cadenas pesa-
das y livianas de su receptor, pueden presentar un
7.2.3. Reordenamiento impreciso del DNA BCR con claras diferencias aminoacídicas como
consecuencia de la remoción o agregado de
El reordenamiento de segmentos génicos y nucleótidos en la región de unión de esos segmen-
el corte de las secuencias RSS adyacentes a cada tos V(D)J. El agregado aleatorio de nucleótidos
Figura 6-14. Reordenamiento impreciso del DNA. El punto de corte nucleotídico durante la recombinación entre segmentos V
y J, puede variar en un margen de varios nucleótidos, dando lugar a diferentes secuencias nucleotídicas en el gen activo de la
cadena kappa. El aminoácido 96 podría estar codificado por los codones TGG (triptófano), CGG (arginina) y CCG (prolina).
141
Sin título-2 141 5/26/06, 10:25 AM

que no están codificados en el DNA germinal es 7.2.6. Exclusión isotípica
catalizado por la enzima TdTy conduce a la gene-
ración de la llamada región N (N: "New El reordenamiento de los genes que codifi-
nucleotides") que, en algunos casos, puede incluir can inmunoglobulinas es desde luego complejo,
hasta 20 nuevos nucleótidos, en la región de unión pero es también altamente ordenado: primero se
de los segmentos génicos reordenados. reordenan los segmentos génicos que codifican
Durante la reparación del DNA en la región cadenas pesadas y luego, la familia de segmentos
de unión de los segmentos génicos, pueden tam- kappa se reordena antes que aquéllos que codifi-
bién transferirse nucleótidos desde la hebra no can la cadena liviana lambda.
codificante, a la hebra codificante del DNA, gene- El reordenamiento productivo (paterno o ma-
rando las denominadas secuencias nucleotídicas P. terno) de una cadena liviana kappa implica por lo
El agregado de nucleótidos en la región de tanto exclusión alélica materna o paterna del locus
unión de los segmentos génicos V(D)J que se kappa y simultáneamente exclusión de los
recombinan, puede llevar a reordenamientos no cromosomas que contienen los segmentos génicos
funcionales que estén fuera del marco de lectura, que codifican la expresión del isotipo liviano
generando codones sin sentido o de término, en lambda (exclusión isotípica).
dos de cada tres reordenamientos. La generación de genes funcionales que co-
difiquen la expresión de cadenas pesadas y livia-
7.2.5. Exclusión alélica nas de una inmunoglobulina depende del fenóme-
no ensayo-error durante el reordenamiento de seg-
El receptor linfocitario BCR, está constituido mentos génicos y depende de diversos elementos
por dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas li- reguladores positivos ("enhancers") y negativos
vianas también idénticas, implicando que cada lin- ("supressors"), ubicados entre los segmentos
focito B sólo puede expresar el locus paterno o ma- génicos que deben reordenarse.
terno, para la síntesis de una cadena pesada o para la
síntesis de una cadena liviana kappa o lambda. La 7.2.7. Cambio de clase de cadenas pesadas
síntesis de una cadena pesada µ, como resultado del
reordenamiento exitoso de segmentos génicos V(D)J Una estrategia adicional para la diversifica-
en el alelo de uno de los cromosomas homólogos ción del repertorio de anticuerpos de un individuo
(materno o paterno), inhibe o excluye irreversible- es, durante la generación de linfocitos B de me-
mente el reordenamiento génico en el alelo del otro moria, el cambio de clase de la región constante
cromosoma (exclusión alélica). de la cadena pesada.
El reordenamiento génico en un cromosoma Los linfocitos B vírgenes clonalmente expan-
puede no traducirse en la síntesis de la respectiva didos luego del encuentro con su antígeno especí-
cadena polipeptídica debido a que: (i) durante el fico sufrirán una diferenciación que incluye un
reordenamiento de segmentos génicos V(D)J se proceso de recombinación génica que conduce a
produce deleción o generación de codones de tér- un cambio de la región constante m expresada en
mino de lectura, (ii) el reordenamiento es exitoso el linfocito virgen original, por una región cons-
pero no se generan mRNA funcionales, debido a tante distinta (γ, α ó ε ) en la cadena pesada del
un procesamiento inadecuado del transcrito pri- receptor clonotípico del linfocito B de memo-
mario, y (iii) el reordenamiento génico es incom- ria. De esta manera la asociación de una misma
pleto, puesto que se recombinan algunos segmen- región variable (que mantiene la especificidad
tos (DH-JH o VH-DH) pero no todos aquéllos nece- por el antígeno), a distintas regiones constantes
sarios para generar un adecuado transcrito prima- pesadas conduce a un cambio en la función
rio. efectora de los anticuerpos, que difieren así en
Si la recombinación V(D)J en un cromosoma su capacidad para reclutar y activar distintos
materno o paterno genera un reordenamiento no mecanismos efectores de la respuesta inmune
productivo, el segundo cromosoma (paterno o humoral (figura 6-15).
materno, respectivamente) será reordenado; inclu- La recombinación génica de cambio de clase
so cabe la posibilidad de corregir combinaciones es gatillada por señales accesorias de coestimu-
aberrantes en un cromosoma recurriendo a un se- lación linfocitaria (dependientes fundamentalmen-
gundo reordenamiento (reordenamiento secunda- te de CD40/CD40L y citoquinas) e implica el re-
rio) sobre el mismo cromosoma. conocimiento de secuencias nucleotídicas Ss
142
Sin título-2 142 5/26/06, 10:25 AM

Figura 6-15. Cambio de clase de cadenas pesadas. Cuando un linfocito sintetiza cadenas mu o delta, el gen de las cadenas
pesadas presenta la ordenación ilustrada en la parte superior de la figura. Las secuencias S intervienen en un proceso de recombinación
que une la secuencia VDJ a una de los otros genes para la región constante. Decidida la clase, el DNA se transcribe y el RNA se
procesa, formándose un mRNA específico para la región gamma-3, épsilon o alfa, según el ejemplo de la figura.
(“Switching sequences”) de 1 a 10 kb localizadas Growth Factor " beta (TGF-β) e IL-5 promueven
en el extremo 5’ de cada segmento o gen constan- el cambio hacia IgA. En ratones, el interferón
te pesado (excepto en el extremo 5’ del gen δ). gamma (IFN-γ) induce un cambio selectivo hacia
En general las secuencias de “switching” tie- IgG2a, que activa el sistema del complemento y
nen la forma (GAGCT)n GGGGT, donde el pri- promueve la fagocitosis de agentes infecciosos
mer elemento está repetido en tándem de 1 a 7 opsonizados por estos anticuerpos.
veces y luego la secuencia completa está repetida Por otra parte, dependiendo del sitio de en-
hasta 150 veces en una región de DNA que ocupa trada y la distribución del antígeno en el organis-
de 1 a 10 kb y está ubicada entre 1 a 4 kb hacia mo, puede inducirse una respuesta inmune carac-
arriba del extremo 5’ del gen constante. El terizada por la síntesis de distintas clase de
reordenamiento implica además la participación anticuerpos. Así un antígeno que ingresa a la cir-
de una recombinasa de "switching" que no es si- culación sanguínea o linfática inducirá la síntesis
tio-específica porque la región Ss puede variar de distintos isotipos, mientras aquellos que ingre-
enormemente en longitud y los cortes en el DNA san por vía oral o respiratoria activan preferente-
no necesariamente ocurren dentro de la región de mente inmunidad de mucosas caracterizada por
cambio de clase. la secreción de IgA. En algunos individuos existe
Aunque los componentes de la recombinasa además una clara predisposición genética (atopia)
de “switching” no han sido claramente definidos, a desarrollar alergias como resultado de la sínte-
se ha logrado establecer que no incluye los pro- sis y secreción de IL-4 e IL-5 que estimulan la
ductos de los genes RAG-1 y RAG-2 y que con- producción de IgE y la diferenciación específica
tiene componentes de la maquinaria de reparación de eosinófilos, respectivamente.
del DNA celular y un complejo proteico denomi- En el hombre, el ordenamiento de genes para
nado SWAP (“Switching Activation Protein”) en las regiones constantes de las cadenas pesadas en
el que se han identificado cuatro proteínas: dirección 5' a 3' en el cromosoma 14 es el siguien-
nucleoplasmina, poli-ADP-ribosa polimerasa, te: mu, delta, gamma (1-4), épsilon y alfa (1-2).
nucleolina y la proteína SWAP-70. En el ratón, el cromosoma 12 presenta el orden:
El cambio de clase de cadenas pesadas es re- mu, delta, gamma-3, gamma-1, gamma-2b,
gulado de manera tal que diferentes citoquinas, gamma-2a, épsilon y alfa (figura 6-16)
producidas fundamentalmente por linfocitos T
CD4+, promueven el cambio hacia un isotipo 7.3. Hipermutación somática
particular de inmunoglobulina.. En humanos por
ejemplo, la interleuquina-4 (IL-4) promueve el El proceso de recombinación V(D)J genera
"switching" IgE, mientras que "Transforming un repertorio primario de inmunoglobulinas el que,
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Sin título-2 143 5/26/06, 10:25 AM

luego del encuentro con el antígeno en los órga- Los promotores se ubican inmediatamente
nos linfoides secundarios, será enormemente hacia el extremo 5' del segmento V que se va a
diversificado en los centros germinales, a través transcribir. Su función consiste en garantizar trans-
de un proceso de mutación puntual en sus regio- cripciones exactas y específicas, determinando
nes hipervariables o CDRs. El microambiente par- dónde inicia la transcripción la ARN-polimerasa
ticular de los centros germinales, no sólo favore- II. La organización básica de todos los promoto-
ce la expansión clonal de los linfocitos antígeno- res de inmunoglobulinas presenta dos secuencias
específicos sino que también favorece el ricas en adenina (A) y timina (T). Una de ellas
"switching" isotípico y la modificación paratópica está restringida sólo a tejido linfoide y tiene un
de cadenas pesadas y livianas. Aquellos linfocitos elemento temático (“motif”) de 8 nucleótidos,
en los cuales el proceso de hipermutación genera ATTTGCAT o la secuencia inversa. La otra se-
un receptor de mayor afinidad por el antígeno, cuencia, no es restringida ya que también se en-
serán selectivamente seleccionados para continuar cuentra en otros linajes celulares, es la denomina-
su maduración en linfocitos B de memoria. da TATA “box”. Mutaciones de estas secuencias
El nivel de mutación en las regiones reducen drásticamente la transcripción de los genes
hipervariables de una inmunoglobulina, se ha es- de Igs.
timado en 10-3 pares de bases por generación, lo Los "enhancers" son secuencias de DNA cuya
cual es seis órdenes de magnitud más alto que una función principal es aumentar la tasa de transcrip-
mutación espontánea. Aunque la mayoría de estas ción de los genes recombinados. A diferencia de
mutaciones son cambios puntuales, se ha logrado los promotores, pueden actuar cuando están ubi-
establecer que las deleciones representan entre 4- cados a distancia, ya sea río arriba (hacia el extre-
7% de las mutaciones, mientras las duplicaciones mo 5') o río abajo (hacia el extremo 3'). Se han
representan casi el 1% de las modificaciones en identificado en ratones y seres humanos, para locus
las regiones hipervariables. de cadenas pesadas y livianas, demostrándose que
Las mutaciones parecen estar de alguna ma- algunos han sido muy conservados durante la evo-
nera asociadas al proceso de transcripción y con- lución; es el caso de los denominados ENHI H, y
finadas a un dominio de hipermutación ("HYM ENH3´H y ENHi k. Por ejemplo en el ratón, se cree
domain") que se extiende 2000 pares de bases (2 que una consecuencia de la recombinación VDJ
kb) hacia abajo, en dirección 5’- 3’ desde el pro- es acercar al promotor ubicado hacia 5' de un gen
motor asociado a cada segmento V que se ha V al "enhancer" localizado hacia 3’ de los seg-
recombinado. Por otro lado, la hipermutación no mentos JH, permitiendo un inicio más eficiente
parece ser un proceso al azar puesto que las tran- de la transcripción.
siciones son más frecuentes que las transversiones Se han identificado factores nucleares que son
y los nucleótidos que contienen Adenina son más activados por estímulos externos, y que se unen a
frecuentemente utilizados que aquéllos que con- "enhancer" de cadenas pesadas y livianas. Es el
tienen Timina. caso del factor llamado NF-κB; reconoce un
La figura 6-3 muestra esquemáticamente la “motif” de 10 pares de bases llamado κB que es
diferenciación celular del linfocito B en presen- crucial en la actividad de ENHi κ, puesto que mu-
cia del antígeno: activación, proliferación celular taciones de κB la eliminan. Las interacciones de
y cambio de clase. estos factores proteicos entre sí, y con secuencias
de DNA reguladoras, son críticos en la
7.4. Control de la transcripción de los genes estimulación de la transcripción de genes especí-
de inmunoglobulinas ficos de inmunoglobulina en linfocitos B.
La regulación de la transcripción de los genes 7.5. Estimación numérica de la diversidad de

de Igs, es uno de los modelos mejor estudiados anticuerpos
para entender la transcripción de genes que se ex-
presan de manera tejido-específica y dependien- Diversos mecanismos genéticos contribuyen
tes del estado de desarrollo. El mapeo de los genes a la diversidad de los anticuerpos: (i) múltiples
de Igs, revela que cada uno contiene múltiples genes V en la línea germinal, (ii) recombinación
elementos regulatorios, promotores y estimulado- de los genes VJ en las cadenas livianas y VDJ en
res ("enhancers"), que son especialmente activos las cadenas pesadas, (iii) imprecisión en la
en linfocitos B. recombinación, (iv) diversidad de región N, (v)
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Sin título-2 144 5/26/06, 10:25 AM

mutación somática, y (vi) combinación de las ca- distintos, localizados en la línea germinal.
denas H y L. Los linfocitos B periféricos no expresan si-
El aporte estimado de los mecanismos más multáneamente todo el repertorio. Las células B
clásicos a la generación de la diversidad de los maduras localizadas principalmente en los
anticuerpos en el ratón, se resume en la tabla folículos linfoides primarios y secundarios, pre-
6-3. sentan una vida media de sólo algunas semanas,
La formación de un gen activo en la región si no unen antígeno, mueren. Diariamente, la
variable de la cadena pesada puede generar un médula ósea libera a circulación más de 5 x 107
número muy grande de posibilidades genéticas. linfocitos B, de tal forma que se va renovando el
En el hombre hay 80 genes V en la línea germinal “pool” de especificidades.
y 6 genes J activos. Si se estima que los genes D
se componen de 50 miembros, la recombinación
somática VDJ puede generar, aproximadamen- 8. Edición del receptor linfocitario
te, unas 24.000 combinaciones genéticas diferen-
tes (80x6x50). Si este número se multiplica por La naturaleza aleatoria del reordenamiento
un factor de 100 debido a la flexibilidad génico, acoplada a la mayor complejidad propor-
recombinatoria, se obtiene un total de 2.400.000 cionada por la combinación de distintas cadenas
cadenas diferentes. pesadas y livianas, crea una enorme diversidad
En las cadenas livianas de tipo kappa, la unión en el repertorio de anticuerpos que, aunque per-
de uno de los cientos de genes para región varia- mite el reconocimiento de agentes infecciosos
bles (más de 150) a uno de los cinco genes J, pue- puede eventualmente contener receptores
de producir hasta 750 genes V activos diferentes autorreactivos. Para evitar una eventual respues-
(150x5). Por el mecanismo de flexibilidad ta autoinmune el sistema inmune debe poner en
combinatoria, el número potencial de recombi- marcha mecanismos que le permitan inducir to-
naciones VJ puede aumentar unas 10 veces la di- lerancia a antígenos propios: (i) la eliminación
versidad, llegando a ser de 7.500 cadenas L dife- por apoptosis de las células autorreactivas
rentes (150x5x10). (deleción clonal), (ii) la inhibición de su activi-
Si se considera la potencialidad para gene- dad (anergia clonal), y (iii) la edición o modifi-
rar diversidad que poseen las cadenas H y L, re- cación antígeno-dependiente del receptor
sulta un total posible de 18.000 millones de linfocitario BCR, mediante un reordenamiento
anticuerpos (2.400.000 posibles cadenas H x secundario de segmentos génicos, particularmen-
7.500 posibles cadenas L), generados a partir de te aquéllos que codifican cadenas livianas.
sólo aproximadamente 300 segmentos génicos Aparentemente el fenómeno de edición del re-
Tabla 6-3. Estimación de la diversidad de anticuerpos en ratón, considerando

algunos de los mecanismos genéticos involucrados
Mecanismo Cadenas H Cadenas L κ Cadenas L λ

Genes de la línea germinal
Segmentos V 250 - 1000 250 2
Segmentos J 4 4 3
Segmentos D 12 _ _
Recombinación somática
VxJxD 10.000 - 40.000 1000 6
Asociación de cadenas H – L
H x kappa 1 - 4 x 107
H x lambda 5 - 10 x 104
Potencial total de diversidad del repertorio 109 - 1011
145
Sin título-2 145 5/26/06, 10:25 AM

ceptor linfocitario B, no sólo puede ocurrir a nivel LECTURAS SUGERIDAS
central en el órgano linfoide primario, sino tam-
bién en los órganos linfoides secundarios e implica Abbas, A.K.; Lichtman, A.H.; Pober, J.S., Cellu-
la reexpresión de las proteínas RAG-1 y RAG-2. lar and Molecular Immunology, Fourth Edition,
W.B. Sanders Company, USA, Capítulos 3, 9 y
9. Biosíntesis y ensamblaje de las inmuno- 14, 2000.
globulinas
Bishop, G.A., Hostager, B.S., “B lymphocyte ac-
Al igual que la mayoría de las proteínas de tivation by contact-mediated interactions with T
secreción y de membrana, las cadenas pesadas y lymphocytes”. Curr. Opin. Immunol. 13: 278-285,
livianas de las inmunoglobulinas son sintetizadas 2001.
en ribosomas unidos a la membrana del retículo
endoplásmico rugoso (RER), donde los péptidos Davies, D.R., Matzger, H., “Structural basis of
líderes son escindidos cotranslacionalmente. antibody function”, Ann. Rev. Immunol., 1: 87 -
La asociación covalente vía puentes disulfuro 117, 1983.
de cadenas H y L también se produce en el RER,
donde además se agregan a los residuos de Durandy, A., Honjo, T., “Human genetic-defects
asparragina oligosacáridos ricos en manosa. Lue- in class-swith recombinatio (hyper-IgM
go las Igs nacientes se dirigen a las cisternas del síndromes)”, Curr. Opin. Immunol. 13: 543-548,
aparato de Golgi, donde los carbohidratos ricos 2001.
en manosa se convierten en sus formas maduras
(tipo O-unido y tipo N-unido ) incorporando ca- Fagarasan, S., Honjo, T., “T-independent Immune
denas laterales de azúcares. Finalmente, las mo- Response: New Aspects of B Cell Biology”,
léculas de inmunoglobulinas son transportadas a Science 290: 89-92, 2000.
la membrana plasmática ancladas en vesículas y
son secretadas por un fenómeno de pinocitosis in- Fearon, D.T., Carroll, M.C., “Regulation of B
versa (figura 6-16). Lymphocytes Response to Foreign and Self-anti-
Otros péptidos que se unen a la estructura gens by the CD19/CD21 Complex”, Annu. Rev.
básica de las inmunoglobulinas son regulados co- Immunol. 18: 393-422, 2001.
ordinadamente, como en el caso de las cadenas J
(IgA e IgM). Fugmann, S.D.; Lee, A.I.; Shickett, P.E.; Villey,
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inmunoglobulinas. Las cadenas H y L de las inmunoglobulinas
son sintetizadas y ensambladas vía puentes disulfuro en el RER,
nalling pathways”, Curr. Opin. Immunol. 12. 276-
donde además se agregan oligosacáridos ricos en manosa, que 281, 2000.
posteriormente maduran en el aparato de Golgi incorporando
otros azúcares. Las inmunoglobulinas son transportadas a la
membrana plasmática ancladas a la membrana de vesículas y
secretadas por pinocitosis inversa.
146
Sin título-2 146 5/26/06, 10:25 AM

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Sin título-2 147 5/26/06, 10:25 AM

148
Sin título-2 148 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 7
RECEPTOR DE LINFOCITOS T Y SEÑALES

ACCESORIAS DE COESTIMULACIÓN
Ulises Vergara C. e Iván Palomo G.
1. Introducción 5. Genética molecular del receptor T

2. Estructura del receptor T 5.1. Genes de cadenas TCRα, TCRβ,
2.1. TCR αβ TCRγ y TCRδ
2.2. TCR γδ 5.1.1. Genes de cadenas TCRα
3. Estructura y función del complejo 5.1.2. Genes de cadenas TCRβ
CD3 5.1.3. Genes de cadenas TCRγ
4. Receptor T y reconocimiento 5.1.4. Genes de cadenas TCRδ
antigénico. 5.2. Reordenamiento génico
4.1. Linfocitos TCD4, linfocitos 6. Linfocitos T y señales accesorias de
TCD8 y restricción MHC coestimulación
4.2. Células TNK (Linfocitos 7. Homeostasis linfocitaria y desarro-
TαβNK1.1 o NKT). llo post-tímico de linfocitos T
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RESUMEN
Así como los linfocitos B reconocen el antígeno a través de receptores BCR, los linfocitos
T lo hacen a través de receptores TCR. Éstos son heterodímeros αβ o γδ que reconocen péptidos
antigénicos unidos a moléculas MHC (de clase I o II) o antígenos glicolipídicos unidos a molécu-
las CD1. Los receptores T se expresan asociados al complejo CD3, que entre otras funciones,
participa en la transducción de señales de activación de la célula, una vez que el TCR ha recono-
cido el antígeno.
El capítulo se refiere además al fenómeno de restricción MHC. Por otra parte, se describe la
subpoblación de linfocitos Tαβ, denominada células TNK, las cuales pueden ser CD4+, CD8+, o
CD4- y CD8-, y presentan marcadores de células NK.
En humanos los segmentos génicos que codifican para las cadenas TCRα y TCRδ se en-
cuentran en el cromosoma 14 y los de las cadenas TCRβ y TCRγ en el cromosoma 7. El capítulo
revisa en detalle los mecanismos de variabilidad genética del TCR, los que son similares a los
descritos para BCR. La diversidad del repertorio linfocitario T se ha estimado más elevada (1018)
que la del repertorio linfocitario B (1014). Los segmentos génicos que codifican para las cadenas
TCRβ se reordenan primero que los segmentos génicos para cadenas TCRα; en las células B se
reordenan primero los segmentos génicos de cadenas pesadas y luego aquellos de las cadenas
livianas. Al igual que en el reordenamiento génico de las inmunoglobulinas, en el reordenamiento
de segmentos génicos de cadenas del TCR también existen los fenómenos de exclusión alélica
y exclusión isotípica (Tαβ versus Tγδ).
Las células T, además del TCR y de las moléculas CD4 o CD8, expresan otros receptores de
membrana que resultan importantes en la transducción de señales accesorias de coestimulación,,
en la estabilidad de la interacción linfocito T-célula presentadora de antígeno, o en el recluta-
miento, recirculación y “homing” linfocitario. Entre estos receptores se encuentran: CD28, CD40L,
CD2, LFA-1 y CD45.
1. INTRODUCCIÓN lípidos, ácidos nucleicos, haptenos), el repertorio

de receptores linfocitarios T reconoce fundamen-
El desarrollo de una respuesta inmune hu- talmente proteínas antigénicas en forma de frag-
moral mediada por anticuerpos, se asocia prima- mentos peptídicos unidos a moléculas de presen-
riamente a los linfocitos B y requiere el reconoci- tación MHC ("Major Histocompatibility
miento antigénico por el receptor (BCR) de Complex") o antígenos glicolipídicos unidos a mo-
linfocitos B específicos. El desarrollo de una res- léculas de presentación CD1, expresadas en la
puesta inmune celular en cambio, se asocia a membrana de células presentadoras de antígeno
linfocitos T y requiere el reconocimiento (ver capítulo 9).
antigénico por el receptor (TCR ,"T cell recep- En el repertorio linfocitario B (estimado en
tor") de linfocitos T específicos. 1014 linfocitos B distintos) se distinguen al menos
Los mecanismos efectores humoral y celular dos subpoblaciones celulares, denominadas B1 y
de respuesta inmune resultan entonces de la se- B2, que presentan características estructurales y
lección, activación y expansión clonal de dos po- funcionales distintas y se generan a diferentes eda-
blaciones linfocitarias distintas, que utilizan me- des durante la ontogenia linfocitaria. La
canismos y receptores distintos de reconocimien- subpoblación B1 se desarrolla durante la vida fe-
to antigénico. Así, mientras el repertorio tal/neonatal, presenta receptores polirreactivos de
linfocitario B puede reconocer directamente baja afinidad, se asocia a la producción de
antígenos solubles o de membrana de muy diver- anticuerpos naturales T-independientes y se en-
sa naturaleza química (proteínas, carbohidratos, cuentra mayoritariamente en las cavidades
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Sin título-2 151 5/26/06, 10:25 AM

peritoneal y pleural. La subpoblación linfocitaria reconocerán un complejo formado por un fragmento
B2 que se genera a partir de células progenitoras peptídico alojado en el bolsillo de presentación de
de la médula ósea adulta, constituye la mayor par- una molécula MHC, o un antígeno glicolipídico
te del repertorio linfocitario B, su activación es unido a una molécula CD1. La mayoría de los
linfocito T-dependiente y se encuentra, fundamen- linfocitos Tγδ no reconocen el antígeno en la for-
talmente, en los órganos linfoides secundarios y ma de un complejo MHC-péptido, aunque molé-
en el torrente sanguíneo. culas MHC-Ib no clásicas (como CD1, H-2M3 y
En el repertorio linfocitario T (estimado en Qα de ratón) pueden presentar ciertos antígenos a
1018 linfocitos T distintos) se distinguen también esta subpoblación de LT. Además algunos linfocitos
dos subpoblaciones celulares, denominadas Tγδ pueden reconocer directamente al antígeno, de
linfocitos Tαβ y linfocitos Tγδ, que presentan TCR la misma manera como hacen los linfocitos B.
con características estructural y funcionalmente Linfocitos Tγδ y Tαβ recombinan su DNA y
distintas. Entre los linfocitos Tαβ se distinguen expresan su receptor clonotípico, en momentos dis-
además 3 subpoblaciones celulares distintas de- tintos durante la ontogenia linfocitaria tímica. Así,
nominadas linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ linfocitos Tγδ emergen tempranamente desde el timo
y linfocitos TNK. Los linfocitos TNK (denomi- y expresan un receptor denominado TCR1 que se
nados también células NKT: "natural killer T genera antes que el receptor TCR2, cuya expresión
cells"), corresponden a una subpoblación está limitada a los linfocitos Tαβ, que maduran más
linfocitaria Tαβ, que presenta marcadores o re- tardíamente en el órgano linfoide primario. Aunque
ceptores propios de células NK (“natural killer”). el timo es el principal sitio anatómico de desarrollo
linfocitario T, se ha descrito en el intestino la exis-
tencia de una línea celular T distinta, generada
2. ESTRUCTURA DEL RECEPTOR T extratímicamente a partir de precursores celulares
presentes en la lámina propia intestinal.
En el receptor de un linfocito B se distinguen
dos subunidades, estructural y funcionalmente dis- 2.1. TCR αβ
tintas: el receptor clonotípico representado por una
inmunoglobulina de membrana (responsable del El 90 a 95% de los clones presentes en el
reconocimiento antigénico) y el complejo acce- repertorio linfocitario expresan copias múltiples
sorio Igα/Igβ, responsable del transporte y expre- de un receptor Tαβ, constituido por las glico-
sión del BCR en la membrana y de la transducción proteínas α y β covalentemente unidas entre sí por
de señales de activación cuando el receptor enlaces disulfuro (figura 7-1) y no covalentemente
clonotípico une específicamente un antígeno. unidas al complejo accesorio CD3 (figura 7-2) (ver
De manera similar, en el receptor de un lin- punto 3).
focito T se describen también dos subunidades es- La cadena α es una glicoproteína acídica de
tructural y funcionalmente distintas: el receptor 40-50 kDa y la cadena β es una glicoproteína bási-
clonotípico Tαβ o Tγδ (responsable del reconoci- ca o neutra de 40-45 kDa. Ambas cadenas tienen
miento específico del antígeno) y el complejo ac- similitud estructural con las cadenas pesadas y li-
cesorio CD3, responsable del transporte y expre- vianas de las inmunoglobulinas, presentando una
sión del TCR en la membrana y de la transducción región o dominio variable aminoterminal de 102-
de señales de activación cuando el receptor 119 aminoácidos (Vα y Vβ) y un dominio constan-
clonotípico T une específicamente su antígeno. te carboxiterminal de 138 a 170 aminoácidos (Cα
El receptor clonotípico TCR es un y Cβ, respectivamente). Tal como ocurre con los
heterodímero αβ o γδ formado por dos cadenas linfocitos B, la diversidad y especificidad del TCR
glicoproteicas de 40 a 60 kDa, covalentemente uni- están dadas fundamentalmente por las regiones
das entre sí por puentes disulfuro. Como ocurre en hipervariables o determinantes de complemen-
los linfocitos B, este receptor tiene una distribu- tariedad CDR1, CDR2 y CDR3 de los dominios
ción clonal, indicando que clones linfocitarios con Vα y Vβ, que se asocian y configuran de manera
distinta especificidad antigénica expresarán distin- tal que se forma un único paratopo T, que presen-
tos TCR. De la misma manera, la región variable ta por el antígeno una afinidad entre 10-5 y 10-7 M,
de los componentes clonotípicos del receptor TCR en los distintos clones linfocitarios Tαβ.
presenta, como en las inmunoglobulinas, tres re- En la región constante carboxiterminal de las
giones CDR que en el caso de los linfocitos Tαβ, cadenas Tα y Tβ (o Tγ y Tδ), se distinguen 4 domi-
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Figura 7-1. Estructura esquemática del receptor linfocitario T. El receptor TCR está formado por dos cadenas polipeptídicas
covalentemente unidas entre sí por puentes disulfuro. Los receptores TCR2 presentan cadenas α β y, los TCR1 cadenas γ y δ. En
cada una de las cadenas α y β (o γ/δ), existe un dominio variable aminoterminal y un dominio constante carboxiterminal, de
manera similar a lo que ocurre en las cadenas pesadas y livianas del receptor linfocitario B (BCR).
nios estructural y funcionalmente distintos: a) un una región bisagra inmediatamente por fuera de la
dominio constante extracelular hacia el extremo membrana plasmática linfocitaria y que contiene
aminoterminal y que forma un “loop” semejante a el enlace disulfuro que une el heterodímero αβ del
los dominios constantes de inmunoglobulinas; b) receptor clonotípico Tαβ; c) un dominio
hidrofóbico transmembrana de 20 a 25 aminoácidos
y que incluye residuos polares conservados como
arginina y lisina, que permiten la unión no covalente
con residuos de ácido glutámico y ácido aspártico
negativamente cargados del complejo accesorio
CD3; d) un dominio citoplasmático carboxitermi-
nal, de 5 a 12 aminoácidos.
2.2. TCR γδ
Entre los linfocitos Tγδ pueden distinguirse di-

ferentes subpoblaciones celulares que se desarrollan
en momentos distintos de la ontogenia linfocitaria;
expresan distintos dominios variables γδ y tienen
distinta distribución tisular periférica. En ratones por
ejemplo, los linfocitos Tγδ que se encuentran en la
Figura 7.2. Complejo CD3. El complejo CD3 está constitui- piel, se desarrollan neonatalmente y expresan regio-
do por cinco proteínas transmembrana denominadas γ, δ, ε, y nes variables distintas de los linfocitos Tγδ que se
ζζ (o ζη). El complejo CD3 está funcionalmente asociado
con la expresión del TCR en la membrana y con la transducción encuentran en vagina, útero y lengua, que se dife-
de señales de activación, luego del reconocimiento antigénico. rencian más tardíamente en el timo.
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Sin título-2 153 5/26/06, 10:25 AM

Los linfocitos Tγδ constituyen entre 5 a 10% tintos, dos de los cuales corresponden a los
del repertorio linfocitario T en sangre periférica, heterodímeros γδ y δε. En aproximadamente el
bazo y ganglios linfáticos de humanos, ratones y 90% de los linfocitos T, el tercer dímero corres-
aves; pero pueden representar hasta el 50% de los ponde al homodímero ζζ y sólo el 10 % de los
linfocitos intraepiteliales en piel y mucosas intes- linfocitos T periféricos expresan el heterodímero
tinal y génitourinaria murina. En ovejas, los ζη. Los dominios transmembrana de cada una de
linfocitos Tγδ pueden representar hasta el 30% las proteínas del complejo CD3 contienen residuos
de los linfocitos T periféricos. aminoacídicos negativamente cargados, que se
Las cadenas γ (45-55 kDa) y δ (40-50 kDa) de asocian no covalentemente con residuos
receptor clonotípico Tγδ, son glicoproteínas de mem- transmembra positivamente cargados de los recep-
brana con estructura similar a las cadenas α y β del tores clonotípicos Tαβ o Tγδ.
receptor Tαβ. Ambas presentan un dominio variable
aminoterminal y un dominio constante carboxiterminal
que incluye una región bisagra, un dominio 4. RECEPTOR T Y RECONOCIMIENTO
transmembrana, y una corta cola citoplasmática. Las ANTIGÉNICO
distintas regiones γ y δ presentan características simi-
lares a las descritas para las cadenas polipéptídicas Los linfocitos Tαβ MHC-restringidos, expre-
del receptor Tαβ (figura 7-1). san receptores clonotípicos que sólo reconocen
fragmentos peptídicos presentados por moléculas
MHC de clase I o de clase II, en la superficie de
3. ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL COM- las células presentadoras profesionales y otras cé-
PLEJO CD3 lulas (figura 7-4). Los linfocitos Tαβ CD1-restrin-
gidos, expresan en cambio receptores clonotípicos
Los receptores clonotípicos Tαβ y Tγδ se ex- que sólo reconocen antígenos glicolipídicos, aso-
presan asociados de manera no covalente, al com- ciados a moléculas de presentación CD1, expre-
plejo accesorio CD3, que representa la subunidad sadas en la membrana de células presentadoras
responsable del transporte y expresión del TCR profesionales (células dendríticas, macrófagos y
en la membrana y de la transducción de señales linfocitos B).
de activación, luego del reconocimiento antigénico Linfocitos T citótoxicos Tαβ reconocen
por el receptor clonotípico T. antígenos MHC clase I-restringidos y son prima-
El complejo CD3 está constituido por cinco riamente responsables de la eliminación de célu-
proteínas denominadas γ, δ, ε, ζ y η de 25, 20, 20, las infectadas con virus o bacterias intracelulares.
16 y 22 kDa, respectivamente (figuras 7-3 y 7-4). Para la mayoría de las células, los antígenos MHC
Las proteínas del complejo CD3 se asocian entre clase I-restringidos, derivan de proteínas sinteti-
sí de manera tal que se forman tres dímeros dis- zadas en el citoplasma de la misma célula, exis-
Figura 7-3. Relación estructural TCR-CD3. La asociación entre TCR y del CD3 es no covalente. Se produce una interacción
electrostática entre aminoácidos transmembrana con carga positiva del TCR, con aminoácidos negativamente cargados del com-
plejo CD3. Existen enlaces disulfuro entre las cadenas αβ (o γδ) del receptor T, y entre los homo o heterodímeros formados por las
cadenas ζ y η.
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Sin título-2 154 5/26/06, 10:25 AM

tiendo un acceso limitado de antígenos exógenos
a esta vía endógena de procesamiento y presenta-
ción antigénica. Sin embargo, existe una
subpoblación de células presentadoras (particular-
mente células dendríticas) que pueden capturar
antígenos exógenos tejido específicos en la peri-
feria y presentarlos, asociados a moléculas MHC
de clase I, a linfocitos T citotóxicos en los ganglios
linfáticos, mediante un mecanismo de presenta-
ción cruzada (“cross-priming”). Además, en in-
fecciones con Mycobacterium tuberculosis, se
activan también linfocitos citotóxicos Tαβ CD1-
restringidos que reconocen glicolípidos
bacterianos y linfocitos citotóxicos Tγδ que reco-
nocen ligandos fosforilados.
Las células dendríticas son células de origen
medular que están normalmente presentes en un
estado inmaduro en epitelios y tejidos periféricos.
Estas células dendríticas son capaces de una efec-
tiva fagocitosis de células apoptóticas y de
endocitosis y macropinocitosis de antígenos solu-
bles, pero no expresan moléculas MHC y ligandos
coestimuladores, en los niveles requeridos para la
activación de linfocitos T. Esta forma de incorpo-
Figura 7-4. TCRαβ y reconocimiento antigénico MHC-cla- ración antigénica por células inmaduras, resulta
se II-restringido. El receptor linfocitario Tαβ, reconoce el en un mayor y mejor “cross-priming” de antígenos
complejo molecular MHC-fragmento peptídico. La molécula
CD4 actúa como co-receptor reconociendo una región con- exógenos en el contexto de moléculas MHC de
servada, en cadena β de la molécula MHC de clase II. clase I por células dendríticas maduras, lo que re-
Figura 7-5. Migración de células dendríticas y linfocitos T. Células dendríticas inmaduras capturan antígenos en los tejidos
periféricos y migran a los tejidos linfoides convirtiéndose en células maduras que expresan altos niveles de moléculas MHC y
ligandos coestimuladores para los linfocitos T. Los linfocitos se movilizan desde el torrente sanguíneo a los órganos linfoides
secundarios y luego de su activación y expansión clonal se diferencian en linfocitos T efectores y linfocitos T de memoria central
( TMC) y linfocitos de memoria efectores (TEM).
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sulta fundamental, tanto para el desarrollo de una generación de nuevos linfocitos T de memoria.
respuesta inmune dependiente de linfocitos T Se ha sugerido que la expresión de CCR7,
citotóxicos, como para la inducción de tolerancia un receptor para las quimioquinas MIP
a lo propio. ("Macrophage Inflammatory Protein") y SLC
En respuesta a un estímulo inflamatorio (ge- ("Secondary Lymphoid Chemokine") controla el
neralmente proporcionado por citoquinas "homing" a órganos linfoides secundarios y per-
proinflamatorias o productos bacterianos), las mite separar los linfocitos de memoria T efectores
células dendríticas inmaduras capturan material (CCR7-) que tienen función efectora inmediata y
antigénico en la periferia (microorganismos, cé- representan la primera línea de defensa inmune
lulas apoptóticas y detritus celulares) e inician su específica, de los linfocitos de memoria centrales
diferenciación en células maduras que pierden sus CCR7+ que carecen de función efectora inme-
receptores para quimioquinas inflamatorias y au- diata pero patrullan los órganos periféricos y cons-
mentan la expresión de receptores para tituyen la línea defensiva de reserva. Los linfocitos
quimioquinas de tejidos linfoides. Las células T efectores CCR7- producen citoquinas efectoras
dendríticas en maduración se movilizan hacia los como IFN-γ, IL-4, IL-5 o expresan perforina
órganos linfoides secundarios donde culminan su (linfocitos T citotóxicos).
diferenciación expresando altos niveles de molé-
culas MHC y ligandos coestimuladores que las 4.1. Linfocitos T CD4, Linfocitos T CD8 y res-
convierten en células maduras extraordinariamente tricción MHC
eficientes en la presentación de antígenos a
linfocitos T vírgenes (figura 7-5). Mediante la se- Linfocitos Tαβ parecen reconocer sólo frag-
creción de distintos patrones de citoquinas, las mentos peptídicos presentados en asociación con
células dendríticas maduras inducen y regulan la moléculas MHC o fragmentos glicolipídicos pre-
respuesta inmune promoviendo la activación y sentados en asociación con moléculas CD1, en la
diferenciación de linfocitos T, la expansión clonal superficie de células presentadoras profesionales.
de linfocitos B, la producción de anticuerpos y la Este fenómeno se explica como resultado del pro-
estimulación de la actividad citotóxica de células ceso de “educación tímica” que permite que du-
NK y la producción de IFN-γ. rante la diferenciación en este órgano linfoide pri-
Los linfocitos T vírgenes se movilizan des- mario, precursores linfocitarios T sean positiva-
de el torrente circulatorio a las regiones T de los mente seleccionados en función de su capacidad
órganos linfoides secundarios, en busca de para reconocer antígenos asociados a moléculas
antígenos presentados por células dendríticas. de presentación antigénica en la membrana de
Como consecuencia de su estimulación, los células del epitelio tímico.
linfocitos T proliferan por expansión clonal y se La mayoría de los linfocitos periféricos Tαβ,
diferencian en células efectoras que expresan re- son linfocitos MHC restringidos que expresan el
ceptores que les permiten luego migrar a las áreas correceptor CD4 o el correceptor CD8, y han sido
de linfocitos B del órgano linfoide secundario o positivamente seleccionados en función de su ca-
hacia los sitios de inflamación en los tejidos pacidad para reconocer sólo fragmentos peptídicos
periféricos. Aún cuando la mayoría de los asociados a moléculas MHC de clase I (linfocitos
linfocitos T efectores son de corta vida media, Tαβ CD8+) o fragmentos peptídicos asociados a
unos pocos sobreviven durante varios años como moléculas MHC de clase II (linfocitos Tαβ CD4+)
linfocitos T de memoria que pueden separarse en (figura 7-6).
dos subpoblaciones de acuerdo a sus habilidades El correceptor CD4 es una glicoproteína
migratorias: (i) las llamadas células efectoras de transmembrana de 55 kDa que se expresa en aproxi-
memoria (TEM), migran a los tejidos periféricos y madamente el 65% de los linfocitos periféricos Tαβ;
(ii) las denominadas células T de memoria central reconoce una región conservada (β2) de la molé-
(TCM), permanecen en circulación. Esta última cula MHC de clase II y transduce señales acceso-
subpoblación expresa receptores de “homing” si- rias de coestimulación linfocitaria T.
milares a los de linfocitos T vírgenes que les per- El correceptor CD8 es un heterodímero αα o
mite migrar preferentemente a los órganos un heterodímero αβ, de 78 kDa, que se expresa
linfoides secundarios donde, luego de una re- en aproximadamente el 35% de los linfocitos Tαβ
estimulación con el antígeno, inducirán el desa- de sangre y tejido linfoide periférico, reconoce una
rrollo de una respuesta inmune secundaria y la región conservada (α3) de la molécula MHC de
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Tαβ restringidos por moléculas MHC de clase Ib
y linfocitos Tαβ y Tγδ restringidos por moléculas
CD1 que reconocen ligandos bacterianos altamen-
te conservados.
Durante mucho tiempo se pensó que los
linfocitos T sólo reconocían fragmentos peptídicos
presentados por moléculas MHC de clase I o de
clase II. Sin embargo, el descubrimiento de las
moléculas CD1 que presentan ligandos
glicolipídicos, ha permitido la identificación de
subpoblaciones linfocitarias Tαβ CD1-restringi-
das: TCD4+, TCD8+, TCD4-, CD8- (TDN o do-
ble negativos) y de linfocitos Tβ NK1.1 (células
TNK o NKT), que constituyen poblaciones celu-
lares heterogéneas presentes en diferentes tejidos.
Las moléculas CD1 se expresan predominan-
temente en células presentadoras profesionales e
incluyen 4 moléculas distintas en humanos (CD1a,
CD1b, CD1c y CD1d) y sólo una en ratones
(CD1d). Las moléculas son similares a las molé-
culas MHC de clase I, están no covalentemente
unidas a la β2-microglobulina, pero su bolsillo de
presentación antigénica es más estrecho y más
profundo que el de las moléculas MHC y une su
ligando glicolipídico mediante interacciones
hidrofóbicas.
Las moléculas CD1a, b y c (grupo I) se ex-
Figura 7-6. Estructura del receptor de la célula T, comple-
presan en timocitos corticales y células
jo CD3 e interacción con el complejo MHC-péptido.
dendríticas, mientras las moléculas CD1d (gru-
po II) se encuentran principalmente en células
epiteliales, timocitos corticales, hepatocitos y
clase I y transduce señales accesorias de
células presentadoras de antígeno profesiona-
coestimulación linfocitaria T, luego de su
les (células dendríticas, macrófagos y linfocitos
interacción con la molécula MHC de clase I.
B). Glicolípidos como fosfatidil inositol
Los linfocitos T CD4+ expresan funciones
manósido (PIM), lipoarabino manan (LAM),
de colaboración o “helper” por medio de
ácido micólico y hexosil-1-fosfo-isoprenoide,
citoquinas que activan macrófagos y/o linfocitos
son presentados a linfocitos Tαβ, por molécu-
B, mientras los linfocitos T CD8+ actúan prima-
las CD1 del grupo I (tabla 7-1). Tanto en huma-
riamente como células citotóxicas que destruyen
nos como en ratón, se ha descrito que las molé-
las células infectadas.
culas CD1d presentan α-galactosil ceramida
Los linfocitos T CD4+ MHC de clase II-res-
existente en esponjas marinas.
tringidos desempeñan un rol muy importante en
la inmunidad protectora contra bacterias y
4.2. Células TNK
protozoos, mientras los linfocitos T CD8+ MHC
de clase I-restringidos resultan fundamentales en
Las células TNK (linfocitos Tαβ NK1.1 o
la respuesta inmune contra infecciones virales.
NKT) corresponden a una subpoblación
Sin embargo, la respuesta inmune contra bacte-
heterogénea de linfocitos Tαβ, que presentan mar-
rias intracelulares involucra la participación no
cadores propios de las células NK o “natural killer”
sólo de linfocitos T CD4+ MHC-II restringidos,
e incluye células TNK CD4+, células TNK/CD8+
sino también de diversas subpoblaciones
y células TNK DN (CD4- CD8-) que presentan
linfocitarias entre las que se encuentran células T
distinta distribución tisular (timo, hígado, bazo,
CD8+ MHC-I restringidos, linfocitos Tγδ que
ganglios linfáticos y médula ósea). El marcador
reconocen fosfoligandos en ausencia de células
NK1.1 corresponde a NKRP1C o CD161.
presentadoras de antígeno y finalmente, linfocitos
157
Sin título-2 157 5/26/06, 10:25 AM

Tabla 7-1. Antígenos lipídicos presentados por moléculas CD1 humanas
Antígeno Linfocitos T Molécula CD1
Glicolípidos bacterianos
Lípidos no definidos Tαβ CD1a
Lipoarabinomanan (LAM) Tαβ CD1b
Glucosa monomicolato Tαβ CD1b
Fosfatidil inositol (PI) Tαβ CD1b
Hesoxil 1- fosfoisoprenoide Tαβ CD1c
Glicolípidos autólogos
Lípidos no definidos Tαβ CD1a
Gangliósidos cerebrales Tαβ CD1b
Lípidos no definidos Tαβ y Tγδ CD1c
Lípidos no definidos TNK CD1d
Otras moléculas
A-Galactosil Ceramida TNK CD1d
La diversidad de su receptor Tαβ es bastan- la secreción de IL-4. El desarrollo de una respuesta

te restringida y limitada a la expresión de unas Th1 sería inhibida mediante la secreción de IL-4,
pocas cadenas TCRα (Vβ8-2, Vβ7, Vβ2 y IL-10 y TGF-β. Las células TNK también produ-
Vα14Jα281 en el ratón y de sus equivalentes cen altos niveles de quimioquinas, tales como
Vβ11 y Vα24JαQ en humanos), que resultan MIP-α y MIP-β, lo que concuerda con su capaci-
CD1d restringidas. La proporción de células TNK dad para reclutar monocitos, células dendríticas
varía en diferentes tejidos y representan mieloides y linfocitos Tαβ convencionales, e ini-
subpoblaciones funcionalmente distintas en el ciar una respuesta inmune adquirida. Finalmente
hígado (30-50%), médula ósea (20-30%) y timo la actividad efectora citotóxica de las células TNK,
(10-20%), y son menos frecuentes en órganos es mediada por perforina y granzimas.
como bazo (3%), ganglios linfáticos (0,3%), san- Se desconoce la influencia de moléculas co-
gre periférica (4%) y pulmón (7%). estimuladoras y otros receptores asociados a las
Las células TNK CD4+ y TNK DN parecen células T NK y aunque es claro que el receptor
ser de origen tímico, puesto que no se desarrollan TCR de células TNK responde a moléculas CD1d,
en ratones atímicos o en ratones neonatalmente el ligando natural de CD1d es todavía desconoci-
timectomizados. Las células TNK CD8+ en cam- do. La mayoría de las células TNK reconoce mo-
bio, parecen tener un origen extratímico, puesto léculas CD1d asociadas a un ligando hidrofóbico,
que se encuentran normalmente en la periferia en probablemente glicolipídico y de naturaleza des-
ratones timectomizados neonatalmente. conocida. Sin embargo, se ha sugerido que podría
Las células TNK constituyen una ser glicofosfatidil inositol (GPI) y/o fosfatidil
subpoblación linfocitaria heterogénea en la que inosito manósido (PIM). La molécula α-galactosil
es posible encontrar células CD1-restringidas y ceramida derivada de esponjas marinas se une a
células MHC-restringidas (estas últimas expresan moléculas CD1d, estimula linfocitos TNK CD4+
TCR de mayor diversidad), que tienen la capaci- y TNK DN y parece imitar al ligando natural de
dad de secretar diferentes citoquinas (IL-4, IFN- CD1d en humanos y ratones.
γ, TNF), dependiendo del microambiente tisular. Las células TNK tienen también la habilidad
La producción de altos niveles de IL-4 e IFN-γ, de responder no sólo a ligandos específicos deri-
sugieren un rol regulador en el desarrollo de las vados de agentes patógenos sino también a
respuestas Th1 y Th2 dependientes. El desarrollo ligandos lipídicos autólogos derivados de células
de una respuesta Th2 sería estimulada a través de tumorales y parecen desempeñar un rol impor-
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Sin título-2 158 5/26/06, 10:25 AM

tante en la regulación de la respuesta inmune a cadena TCRα) y, un segmento génico Cα
células tumorales y agentes patógenos y en la man- (codifica la región constante TCRα).
tención de la tolerancia a lo propio.
• Familia TCRβ: incluye segmentos génicos
Vβ, Dβ, Jβ y Cβ.
5. GENÉTICA MOLECULAR DEL RECEP- • Familia TCRγ: incluye segmentos génicos Vγ,
TOR T Jγ y Cγ.
El TCR es generado a partir de la • Familia génica TCRδ: incluye segmentos Vδ,

recombinación somática de segmentos génicos, Dδ, Jδ y Cδ.
durante un proceso de diferenciación que permi-
te que cada linfocito Tαβ o Tγδ esté provisto de En humanos, los segmentos génicos que co-
copias múltiples de un receptor clonotípico único difican las cadenas TCRα y TCRδ, se encuentran
que no está codificado en el DNA germinal de la en el cromosoma 14 (en región alejada del locus
célula precursora. para cadenas pesadas de Inmunoglobulinas (Ig),
La organización genómica de los TCR es si- mientras los segmentos génicos de cadenas TCRβ
milar a la organización de las inmunoglobulinas y y TCRγ, se encuentran en el cromosoma 7. En ra-
contiene tanto segmentos génicos V(D)J que co- tones, los segmentos génicos que codifican las ca-
difican la región variable, como segmentos génicos denas TCRα y TCRδ, se encuentran en el
C, que codifican la región constante de cada ca- cromosoma 14, mientras los segmentos génicos
dena del receptor clonotípico. De esta manera el que codifica las cadenas TCRβ y TCRγ, se en-
repertorio de linfocitos T (estimado en 10 18 cuentran en los cromosomas murinos 6 y 13, res-
linfocitos T distintos), es generado también al azar pectivamente.
por reordenamiento génico V(D)J y, la variabili-
dad TCR, generada por la recombinación de dis- 5.1.1. Genes de cadenas TCRα
tintos segmentos génicos, será también enorme-
mente diversificada por: (i) corte impreciso de El repertorio genómico de cadenas TCRα
los segmentos génicos que se recombinan, (ii) ocupa 1000 kilobases en el brazo largo del
agregado de nucleótidos al azar en los sitios de cromosoma 14 humano e incluye 54 segmentos
corte y unión de los distintos segmentos génicos, génicos variables Vα en posición centromérica,
(iii) combinación al azar de cadenas TCRα y 61 segmentos génicos de unión Jα y, un único seg-
TCRβ (o TCRγ y TCRδ), y (iv) edición del re- mento constante Cα, en posición más telomérica.
ceptor Tαβ o Tγδ. Como ocurre en el repertorio genómico de las
inmunoglobulinas, cada segmento TCR variable,
5.1. Genes de cadenas TCRα, TCRβ, TCRγ y está precedido de una secuencia líder o señal (L),
TCRδ en posición 5’(figura 7-7).
Los segmentos génicos VαJα, situados en po-
En el DNA germinal de un vertebrado, no sición 5’, se encuentran separados de Cα, por una
existen genes que codifiquen la síntesis de los com- región genómica que contiene los segmentos
ponentes polipeptídicos del receptor clonotípico génicos de la cadena TCRδ.
TCR. Al contrario, estos genes deben ser genera- El potencial de este repertorio genómico con-
dos o ensamblados, por una recombinasa sitio-es- siste de 41 a 47 segmentos funcionales Vα (que
pecífica que reordena segmentos génicos V(D)J, pertenecen a 35-37 subgrupos o subfamilias) y 50
distintos de aquéllos utilizados para ensamblar los segmentos funcionales Jα. Entre los segmentos va-
genes que codifican las cadenas pesadas y livia- riables se encuentran además 5 segmentos desig-
nas del receptor de linfocitos B (ver capítulo 6). nados TCRVα/Vδ que pueden reordenarse con Jα
Los segmentos génicos que codifican las dis- o con Dδ y pueden, por lo tanto, utilizarse en la
tintas regiones o dominios de las cadenas TCRα, generación de genes TCRα o TCRδ.
TCRβ, TCRγ o TCRδ, se encuentran agrupados
en cuatro grupos o familias génicas distintas: 5.1.2. Genes de cadenas TCRβ
• Familia TCRα: incluye segmentos génicos En humanos, el repertorio genómico de ca-

Vα y Jα (codifican la región variable de la denas TCRβ ocupa 620 kb en el brazo largo del
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Sin título-2 159 5/26/06, 10:25 AM

Figura 7-7. Distribución de los segmentos génicos TCRα y TCRδ. En el cromosoma 14 humano y 14 murino, se encuentran el
locus que contiene los segmento génicos Vα y Cα asociado a segmentos Jα y Dα. Los segmentos Vα y Jα, localizados en
posición 5’, están separados de Cα por el locus TCRδ.
cromosoma 7 y consiste de 62-65 segmentos ble precedido de un exón líder (L) o señal (figura
génicos variables Vβ y de segmentos Dβ, Jβ y Cβ 7-8).
que se encuentran separados en dos grupos Se han descrito además, 6 segmentos Vβ
(“clusters”) distintos. El primer grupo, situado en huérfanos, localizados en el brazo corto del
posición 5’, contiene un segmento D1β, seis seg- cromosoma 9 humano.
mentos J1β (J1β1 a J1β6) y un segmento C1β. El
segundo grupo, situado en posición 3’ con respec- 5.1.3. Genes de cadenas TCRγ
to al primero, incluye un segmento D2β, ocho seg-
mentos J2β y un único segmento C2β. El locus TCRγ humano ocupa 165 kb en el brazo
Los segmentos Vβ se encuentran en posición corto del cromosoma 7 y consiste de 12-15 seg-
más telomérica, pero existe un segmento génico mentos génicos variables Vγ, en posición más
Vβ30, en orientación invertida con respecto a la centromérica y dos "clusters" de segmentos CγJγ.
transcripción, localizado en posición 3’, más El primer grupo contiene tres segmentos J1γ y un
centromérico que el segundo "cluster" único segmento C1γ. El segundo grupo, situado
D2βJ2βC2β. El repertorio genómico potencial en posición más telomérica, contiene dos segmen-
consiste de 39-46 segmentos Vβ funcionales, que tos J2γ y un segmento a C2γ. El repertorio poten-
pertenecen a 23 subgrupos o subfamilias. Cada cial incluye 4-6 segmentos Vγ que se agrupan en
segmento Jβ codifica 3-5 aminoácidos, mientras dos subfamilias y los dos "clusters" DγJγCγ (figu-
los segmentos, segmentos Dβ, codifican de 15 a ra 7-9).
17 residuos aminoacídicos. Cada segmento varia-
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Sin título-2 160 5/26/06, 10:25 AM

Figura 7-8. Distribución de segmentos génicos TCRβ. En los cromosomas 7 humano y 6 murino, se encuentran distribuidos los
segmentos Vβ y los dos conjuntos Cβ con sus respectivos segmentos génicos Jβ y Dβ.
5.1.4. Genes de cadenas TCRδ se agregan, finalmente, los 5 segmentos TCRVα/

Vδ (mencionados en 5.1.1.), que pueden compor-
En humanos el locus TCRδ ocupa una región tarse como funcionales o como seudogenes.
de 60 kb localizada dentro del locus TCRα y con-
tiene un cluster formado por un segmento génico 5.2. Reordenamiento génico
Vδ (Vδ3), tres segmentos Dδ, cuatro segmentos
JδD y un único gen Cδ (figura 7-7). Al igual como ocurre en las células B
El locus TCRδ contiene además un segmen- inmaduras, respecto a las inmunoglobulinas, en
to génico Vδ (Vδ3), localizado hacia abajo en po- las células T precursoras los segmentos génicos
sición 3’ del gen Cδ y, un segmento génico varia- V(D)J y C que codifican las cadenas TCR, se en-
ble Vδ1, localizado 360 kb hacia arriba en direc- cuentran en una configuración germinal no fun-
ción 5’, entre los segmentos Vα. Todos los seg- cional y deben reordenarse por recombinación si-
mentos génicos TCR/Dδ son funcionales y a ellos tio-específica, para generar la enorme diversidad
Figura 7.9. Familia de segmentos génicos TCRγ murino y humano.
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Sin título-2 161 5/26/06, 10:25 AM

del repertorio linfocitario T, durante un proceso eliminando los segmentos génicos que los separa.
regulado de maduración y educación tímica. Sin embargo, dada la existencia de "clusters" DJC,
La recombinación de segmentos génicos la selección de un determinado segmento D obli-
V(D)J, es fundamental en el desarrollo del siste- ga a la recombinación con los segmentos J y C,
ma inmune de los vertebrados e implica la partici- incluidos en el mismo "cluster".
pación de una recombinasa que reconoce y corta El DNA ya reordenado, será luego utilizado
secuencias específicas de recombinación (12-RSS como molde para la síntesis de un transcrito pri-
y 23-RSS) (figura 7-10) y de una compleja mamario, el que una vez procesado dará origen al
quinaria de reparación del DNA que incluye una correspondiente mRNA que codifica la cadena
proteína quinasa DNA-dependiente (DNA-PK), TCR (figura 7-11).
las proteínas Ku/Ku80 y Artemisa, la DNA ligasa La maquinaria de recombinación de segmen-
IV (ver capítulo 6), y diversas otras proteínas tos génicos es siempre la misma, tanto en linfocitos
como Xrcc, histona H2AX y el complejo Mre11/ B como linfocitos T. Sin embargo, sólo las Ig se
rad50/Nbs1. Deben además existir diversos fac- reordenan en linfocitos B, y sólo cadenas TCR se
tores de remodelación de la cromatina, que limi- reordenan en los linfocitos T. Además en cada una
tan el acceso a las secuencias de recombinación de estas líneas celulares existe un orden preciso
RSS de modo tal que las regiones genómicas que de reordenamiento de modo tal que las cadenas
contienen los segmentos V(D)J y C, de Ig o TCR, pesadas se reordenan siempre antes que las cade-
sólo estén disponibles en ciertos tipos celulares y nas livianas del BCR y las cadenas TCRβ se
en ciertos estados de desarrollo, según el reordenan siempre antes que las cadenas TCRα
microambiente tisular. en los linfocitos T.
El orden en el reordenamiento, es similar a La diversidad potencial de los TCR se estima
como ocurre con las inmunoglobulinas y también mayor que en las inmunoglobulinas y ello obede-
implica el cumplimiento de la regla 12/23 y la ce, fundamentalmente a una mayor diversificación
eliminación o delección de todos los segmentos de las regiones N (generada por agregado de
que separan a aquéllos que deben recombinarse nucleótidos al azar) y P (generada por transferen-
(ver capítulo 6). Así, en las cadenas TCRβ y cia de nucleótidos desde la hebra no codificante del
TCRδ, primero se reordena un segmento génico DNA. Además, a diferencia de lo que ocurre con
de diversidad D, con un segmento de unión J, eli- las inmunoglobulinas, los genes de TCR ya
minando toda la secuencia nucleotídica que los reordenados no sufren hipermutaciones en sus
separa. Luego uno de los segmentos variables V, CDRs, que conduzcan a cambios en la función o
se recombina con el complejo DJ ya reordenado, afinidad del receptor, durante la respuesta inmune.
Figura 7-10. Secuencia señal de recombinación (RSS) y segmentos génicos V(D)J. (A) Heptámero, espaciador y nonámero de
las secuencias RSS. (B) Los diversos reordenamientos de los segmentos génicos V(D)J que generan los genes que codifican las
cadenas TCRα, TCRγ, TCRβ y TCRδ. Las secuencias 12-RSS se muestran con triángulos abiertos y las secuencias 23-RSS con
triángulos cerrados.
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Sin título-2 162 5/26/06, 10:25 AM

Figura 7-11. Reordenamiento génico y transcripción de la cadena TCRβ. El proceso se inicia con el reordenamiento de un
segmento génico Dβ y un segmento Jβ. Luego, el complejo Dβ-Jβ ya reordenado, se recombina con un segmento Vβ. Posterior-
mente, el transcrito primario será procesado para generar el mRNA que codifica la cadena TCRβ.
Finalmente, sólo uno de los dos loci de cada inmunoglobulinas, es también válido para los
una de las cadenas TCRα, TCRβ, TCRγ o genes TCR, puesto que un reordenamiento
TCRδDβ que existen en el DNA germinal, será TCRγδ excluye todo reordenamiento TCRαβ y
funcionalmente reordenado y expresado en un viceversa.
linfocito T maduro. De esta manera, al igual
que en los genes de inmunoglobulinas, el fenó-
meno de exclusión alélica impide que se 6. LINFOCITOS T Y SEÑALES ACCESO-
reordenen ambos alelos de un mismo gen. Así RIAS DE COESTIMULACIÓN
por ejemplo, sólo cuando del reordenamiento
de segmentos génicos β en uno de los Los linfocitos T, aparte del receptor TCR y de
cromosomas homólogos, se obtiene un gen los correceptores CD4 y/o CD8, expresan otros
TCRβ no funcional (que no puede ser transcrito receptores de membrana que, aunque no reco-
o el transcrito no puede ser traducido) se inicia nocen antígenos, resultan fundamentales en la
el reordenamiento de segmentos β en el otro transducción de señales accesorias de activa-
cromosoma homólogo. Si de ambos alelos β se ción celular (moléculas accesorias), en la es-
obtienen genes no funcionales, se induce tabilización de la interacción linfocitoT-célula
apoptosis de la célula T en diferenciación. El presentadora de antígeno (CPA), o en el reclu-
fenómeno de exclusión isotípica que ocurre en- tamiento, recirculación y “homing” linfo-
tre las cadenas livianas κ y λ de las citario (moléculas de adhesión) (figura 7-12).
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Sin título-2 163 5/26/06, 10:25 AM

Figura 7-12. Activación de linfocitos T y señales accesorias de coestimulación. Además del receptor TCR, del complejo CD3
y de los correceptores CD4 o CD8, los linfocitos T expresan otros receptores de membrana (CD2, CD28, LFA-1, CD40L, etc.),
que resultan fundamentales en la transducción de señales accesorias de coestimulación, en la estabilización de la interacción
linfocito T-célula presentadora o en el reclutamiento, recirculación y “homing” linfocitario.
En ausencia de señales accesorias de • CD40L (CD154), que se expresa en linfocitos

coestimulación, el reconocimiento antigénico y la T activados y une su ligando CD40 (cons-
transducción de señales a través del complejo titutivo en la CPA).
TCR-CD3, no conduce a activación celular. Al • CD2 (LFA-2), que une su ligando LFA-3
contrario, señales aisladas transducidas por TCR- (CD58 en humanos) CD48 en ratón.
CD3, conducen a anergia celular y/o apoptosis. • LFA-1 ("Leukocyte Function Associated
Las señales adicionales requeridas para la activa- Antigen-1") que une su ligando ICAM
ción de linfocitos T, son fundamentalmente pro- ("Intercellular Adhesión Molecule-1" o
porcionadas por moléculas coestimuladoras expre- CD54).
sadas en la membrana de células vecinas o de cé- • CD45, una tirosín fosfatasa que une su ligan-
lulas presentadoras de antígeno y por mediadores do CD22. La isoforma CD45RA se expresa
solubles como citoquinas. en linfocitos T en reposo y CD45RO en
Entre las moléculas accesorias expresadas en linfocitos T activados.
la superficie de linfocitos T y que unen molécu-
las coestimuladoras, se encuentran: Además, moléculas como ICOS ("Inducible
costimulator", similar a CD28 pero no une CD80
• CD8 y CD4, que se unen a moléculas MHC o CD86), citoquinas (IL-1, IL-2 , IL-4, IL-6, IL-
de clase I y II, respectivamente, 12, TNF) y diversas moléculas de adhesión
• CD28 que une sus ligandos B7.1 (CD80) y (integrinas β1 y β2, selectinas), también propor-
B7.2 (CD86), expresados en células presen- cionan señales secundarias o terciarias que facili-
tadoras de antígeno (CPA) activadas. tan o promueven la activación y/o diferenciación
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Sin título-2 164 5/26/06, 10:25 AM

de distintas subpoblaciones de linfocitos T. distintos clones linfocitarios están bajo control
Sin embargo, no todas las señales proporcio- homeostático. Por lo tanto, nuevos linfocitos que
nadas por citoquinas o moléculas de superficie, son continuamente generados en los órganos
proporcionan estímulos coactivadores. Así por linfoides primarios y secundarios (linfocitos vír-
ejemplo, IL-10 y TGF-β ("transforming growth genes y linfocitos activados/linfocitos memoria,
factor-β"), a menudo inhiben diversas poblacio- respectivamente) deben competir con los linfocitos
nes linfocitarias T, B y NK. De manera similar, residentes en los distintos órganos y tejidos y man-
la unión a CTLA-4 (CD152, una molécula tener la diversidad del repertorio linfocitario.
homóloga a CD28 y que se expresa en la superfi- Luego del encuentro con el antígeno, los
cie de linfocitos T activados), a sus ligandos CD80 linfocitos T vírgenes se convertirán en células T
o CD86, también proporciona señales de inhibi- efectoras o en células T de memoria, que se dis-
ción linfocitaria. tinguirán de los linfocitos vírgenes en función del
El efecto de las señales accesorias de patrón de moléculas de adhesión y de receptores
coestimulacíon va a depender de diversos facto- para citoquinas que expresan en su membrana.
res; entre éstos se encuentran: el número de com- Como la homeostasis de linfocitos vírgenes y de
plejos MHC-péptido que inician las señales de memoria se regula independientemente, nuevos
transducción, la afinidad, avidez y duración de esa linfocitos T de memoria reemplazarán sólo a otros
interacción y el nivel de moléculas linfocitos T de memoria; de esta manera el núme-
coestimuladoras que amplifican las señales inicia- ro de linfocitos vírgenes y de memoria permane-
les de activación. cerá relativamente constante y equivalente en la
Células dendríticas y linfocitos B, expresan periferia.
constitutivamente moléculas MHC, CD40, En los últimos años se ha establecido que aún
ICAM-1, LFA-3 y son bastante eficientes en la en ausencia de antígeno, la sobrevida post-tímica
captura y procesamiento de antígeno. Sin embar- de los clones linfocitarios T, es un proceso activo
go, sólo una vez activadas (y como consecuencia y requiere la interacción continua de linfocitos vír-
de la expresión de altos niveles de las moléculas genes periféricos con moléculas MHC para las
coestimuladoras CD80 y CD86 y de moléculas de cuales los linfocitos fueron positivamente selec-
presentación MHC), se convertirán en potentes cionados en el timo. En ratones por ejemplo,
células estimuladoras de linfocitos T. La madura- linfocitos T CD8 MHC de clase I (H-2Db)-restrin-
ción de la célula presentadora de antígeno, aumen- gidos sobrevivirán sin proliferar si se transfieren
ta notablemente los niveles de CD80 y CD86, pasivamente a ratones de haplotipo H-2Db, pero
que se coexpresan en microdominios de membra- no sobrevivirán si se transfieren a ratones de
na junto a moléculas MHC, lo que favorece la haplotipo H-2Dk que expresan moléculas MHC de
efectividad de las señales transducidas por TCR/ clase I distintas. Si la transferencia es hacia rato-
CD3 y CD28. La unión de CD28 a CD80 o CD86 nes que expresan bajos niveles de moléculas H-
gatilla la activación de linfocitos T, la expresión 2Db de clase I, sobrevivirá sólo una pequeña frac-
de CD40L que potencia la activación y la síntesis ción de los linfocitos T CD8 adoptivamente trans-
de IL-2 y sus receptores (IL-2R), todo lo cual con- feridos y esta fracción será proporcional al nivel
duce a la proliferación y diferenciación linfocitaria de expresión de estas moléculas MHC de clase I
(figura 7-12). En una fase posterior, las moléculas en el individuo receptor.
CD80 y CD86 las puede modular la diferencia- Aunque el antígeno no parece ser un
ción Th1/Th2 e inhibir la respuesta celular T, ya prerrequisito para la sobrevida de los linfocitos
sea directamente mediante la unión a su ligando de memoria, el tamaño de un clon linfocitario
CLA-4 (expresado en la fase final de activación antígeno-específico puede disminuir en ausencia
de los linfocitos) o indirectamente promoviendo del antígeno, simplemente por mecanismos
la generación de células T reguladoras. homeostáticos. Se ha sugerido, por lo tanto, que
la vida media de los linfocitos memoria está de-
terminada por la frecuencia con que los linfocitos
7. HOMEOSTASIS Y DESARROLLO POST- se encuentran con el antígeno y del espacio dispo-
TÍMICO DE LINFOCITOS T nible para su sobrevida en el repertorio linfocitario
T. Así, la memoria inmunológica contra un
Una de las características del sistema inmu- antígeno que se encuentra una única vez, será re-
ne es que el número total y la distribución de los lativamente corta, mientras que el encuentro fre-
165
Sin título-2 165 5/26/06, 10:25 AM

cuente con un antígeno será suficiente para man- Lanzavecchia A. and Sallusto F., “Dynamics of T
tener o aumentar el tamaño clonal de los linfocitos lymphocyte Responses: Intermediates, Effectors
T antígeno-específicos, generando una memoria and Memory Cells”, Science 290: 92-97, 2000.
inmunológica casi indefinida, debido a la genera-
ción continua de nuevas células de memoria. Lefranc, M.P., “Locus maps and genomic reper-
El compartimiento linfocitario T puede ser toire of the human T-cell receptor genes”, Immu-
mantenido o reemplazado por nuevas células que nologist 8: 72-80, 2000.
emergen desde el órgano linfoide primario o bien
por repoblamiento a partir de la expansión MacDonald H.R., Radke F., Wilson A., “T cell fate
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166
Sin título-2 166 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 8
COMPLEJO PRINCIPAL DE
HISTOCOMPATIBILIDAD
Ulises Vergara C., Iván Palomo G., Claudio Zúñiga M. y Cristina Navarrete
1. Introducción
2. Genes y moléculas del Complejo
Principal de Histocompatibilidad
2.1. Genes del MHC
2.1.1. Genes de clase I
2.1.2. Genes de clase II
2.1.3. Genes de clase III
2.1.4. Otros genes del MHC
2.2. Estructura y función de las
moléculas MHC
2.2.1. E s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e
las moléculas MHC clase I
2.2.2. E s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e
las moléculas MHC clase II
3. El concepto de restricción MHC
4. Otras moléculas de presentación
4.1. Moléculas CD1
5. Herencia de los genes HLA
6. Complejo Principal de Histocompa-
tibilidad y enfermedad
7. Nomenclatura y tipificación HLA
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RESUMEN
El Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC) es un complejo génico altamente

polimórfico que controla la expresión de moléculas que desempeñan un rol fundamental en las
interacciones celulares que inducen y regulan la respuesta inmune a través del procesamiento y
presentación de antígenos a los linfocitos T.
Los genes de clase I del MHC (en el hombre llamado HLA) controlan la expresión de los
antígenos de histocompatibilidad clásicos HLA-A,-B,-C y no clásicos HLA-E, -F, G y MIC, y
su función principal es la de presentar péptidos antigénicos a los linfocitos T αβ citotóxicos
CD8+, linfocitos T γδ y a células NK.
Los genes de clase II (HLA-DR,-DQ y -DP en el hombre) corresponden a los antiguos
genes de respuesta inmune (genes Ir) y codifican la expresión de moléculas que presentan péptidos
a linfocitos T CD4+ (linfocitos T "helper").
Los genes de clase III codifican la expresión de los factores de complemento C4, Bf y C2.
El complejo incluye además genes que codifican la expresión de moléculas importantes en el
procesamiento antigénico como por ejemplo tapasina, LMP2, LMP7, TAP1, TAP2, DM y DO y
moléculas involucradas en la respuesta inflamatoria (TNFα, TNFβ, Linfotoxinas, hsp70).
1. INTRODUCCIÓN conducir al desarrollo de inmunodeficiencia (ver

capítulos 30 y 31) o autoinmunidad (ver capítulo
La defensa inmunológica contra diversos 23), respectivamente.
agentes infecciosos depende de la habilidad del El MHC está constituido por un conjunto de
sistema inmune para reconocer antígenos del genes que controlan la expresión de moléculas que
agente patógeno y poner en marcha un conjunto desempeñan un rol fundamental en el procesa-
de mecanismos que incluyen la activación del miento y presentación de antígenos a los linfocitos
complemento y la activación, tanto de células T y en la regulación de las interacciones celulares
fagocíticas como de distintas células inmunocom- que caracterizan la respuesta inmune. Este
petentes. El desarrollo de una respuesta inmune complejo génico parece estar presente en todos
efectiva implica entonces una compleja serie de los vertebrados y en algunos invertebrados, lo que
eventos que conducen a activación celular y la revela un origen temprano en la evolución de las
generación de células efectoras que secretan distintas especies.
anticuerpos y células citotóxicas (ver capítulo 10), El MHC es un sistema poligénico que
que destruirán al agente infeccioso, o a la célula contiene muchos genes estructural y funcional-
infectada en el caso de patógenos intracelulares. mente relacionados y altamente polimórficos,
En general, tanto la respuesta contra puesto que en la población existen múltiples alelos
antígenos extraños (inmunidad) como la tolerancia para cada gen. Los distintos genes del complejo
a antígenos propios, están sujetas a un coordinado están además estrechamente ligados y tienden a
y complejo mecanismo de regulación que incluye heredarse como una unidad, como un complejo
inmunoglobulinas (ver capítulo 6), receptores de supergénico o haplotipo, entendiéndose como tal
células T (TCR) (ver capítulo 7) receptores de a una combinación particular de genes en un
células NK (ver capítulo 10), citoquinas (ver complejo génico o en un cromosoma. En la
capítulo 11) y moléculas codificadas por el población de individuos de la especie existirá
denominado Complejo Principal de Histocom- teóricamente entonces, tantos haplotipos MHC
patibilidad (MHC, "Major Histocompatibility como diferentes combinaciones de alelos de los
Complex"). Una falla en estos mecanismos de distintos genes del complejo.
regulación de la inmunidad o la tolerancia puede El Complejo Principal de Histocompatibili-
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Sin título-2 169 5/26/06, 10:25 AM

dad fue originalmente descrito por Peter Gorer en significado biológico de las moléculas codificadas
el ratón (1936), como un locus de grupos por el Complejo Principal de Histocompatibilidad,
sanguíneos que controlaba la expresión de diversos puesto que el trasplante de tejidos es un fenómeno
antígenos en los glóbulos rojos. Gorer definió, artificial, que no ocurre espontáneamente en la
inicialmente, cuatro antígenos eritrocitarios, naturaleza. Así, en las décadas del 60 y del 70, se
denominados antígenos I, II, III y IV, y más tarde demostró que la capacidad para desarrollar una
demostró que el denominado antígeno II se respuesta inmune contra diversos antígenos natu-
expresaba también en diversos tejidos y jugaba rales y sintéticos, estaba bajo el control de genes
un rol decisivo en la susceptibilidad o resistencia MHC (genes de respuesta inmune o genes Ir).
al trasplante de tumores y en la aceptación o Finalmente, se demostró que la función biológica
rechazo del trasplante de tejidos entre distintas real de estas moléculas era la de actuar como
cepas consanguíneas o endogámicas de ratón. presentadoras de antígenos (incluido aloantígenos)
Trasplantes entre cepas genéticamente idénticas a los linfocitos T. Asimismo se demostró que estos
(cepas isogénicas o singénicas) son aceptados, antígenos altamente polimórficos al ser
mientras los trasplantes entre cepas genéticamente expresados en la membrana participaban en el
distintas (cepas alogénicas) que presentan alelos fenómeno de rechazo al trasplante de tejidos
distintos de uno o más genes son rápida y mediante un mecanismo de reconocimiento directo
fuertemente rechazados. Sólo en las cepas que e indirecto (figura 8-1). En el caso de recono-
rechazaban el trasplante, era posible detectar cimiento directo estos antígenos son reconocidos
anticuerpos que reaccionaban con el antígeno-II, directamente por las células T del receptor y
proporcionando evidencia acerca de la naturaleza reconocimiento indirecto, cuando la presentación
inmunológica de la resistencia al trasplante de de péptidos antigénicos derivados de estas
tumores y del rechazo al trasplante de tejidos. moléculas ocurre por las células presentadoras
Más tarde, en 1948, George Snell designó a autólogas. Este último mecanismo es el que está
los genes y antígenos, responsables de la involucrado en el reconocimiento de cualquier otro
compatibilidad tisular, como genes y antígenos de antígeno ya sea derivado de proteínas virales, bac-
histocompatibilidad, respectivamente. Así el lo- teria u otra molécula polimórfica.
cus y antígeno-II de grupo sanguíneo, se
designaron como locus y antígeno de
histocompatibilidad-2 (o locus y antígeno H-2, 2. GENES Y MOLÉCULAS DEL COMPLE-
respectivamente). Muy pronto se demostró que el JO PRINCIPAL DE HISTOCOMPA-
locus H-2 era en realidad un conjunto de genes, TIBILIDAD
estrechamente ligados que controlaban la
expresión de diversos antígenos de Análisis inmunogenéticos, funcionales y más
histocompatibilidad. Como estos antígenos recientemente estudios de biología molecular, han
inducían el más rápido y el más fuerte rechazo al permitido identificar más de 200 genes en el lo-
trasplante de tejidos, el conjunto génico fue cus MHC. Éstos se han separado en tres familias
definitivamente designado como Complejo Prin- o clases distintas: genes de clase I, de clase II y de
cipal de Histocompatibilidad-2 o Complejo H-2 clase III. En el complejo HLA estos genes ocupan
del ratón. una extensión de alrededor de 4 millones de pares
El MHC humano, HLA (“Human Leukocyte de bases, en el brazo corto del cromosoma 6
Antigen”), fue descrito en la década del 50 por humano. En el ratón el complejo H-2 ocupa una
Dausset y van Rood, a partir de anticuerpos extensión de alrededor de 3 millones de pares de
leucoaglutinantes encontrados en el suero de bases, en el cromosoma 17 murino.
pacientes politransfundidos y de madres Los genes de clase I y de clase II codifican la
multíparas, que reaccionaban con los leucocitos expresión de proteínas integrales de membrana que
presentes en los productos sanguíneos participan en la discriminación entre lo propio y
transfundidos lo que dio el nombre al sistema. lo ajeno, al actuar como elementos de restricción
Los antígenos de histocompatibilidad fueron en la presentación de antígenos a linfocitos T. Los
durante muchos años reconocidos como el mayor genes de clase III, en cambio, codifican la
obstáculo al trasplante de tejidos entre distintos expresión de proteínas plasmáticas que tienen una
individuos de la misma especie. Sin embargo, función completamente distinta, puesto que
parecía claro que esta no era la función o el forman parte de la cascada de activación del
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Figura 8-1. Mecanismos de presentación directa e indirecta de moléculas MHC del injerto por parte de células T del
receptor.
sistema del complemento. I (Ia: HLA-A, -B y C en el humano y H-2 K, D y

En el complejo existen varios genes de clase L en el ratón) se expresan en la mayoría de las
I y de clase II, cada uno de los cuales presenta células nucleadas del organismo y son los que han
múltiples alelos (y por tanto elevado sido tradicionalmente reconocidos como el mayor
polimorfismo), que codifican la expresión de obstáculo al trasplante de tejidos entre individuos
diferentes moléculas de clase I o de clase II y por de la misma especie. La participación de estas
lo tanto con distintas capacidades para presentar moléculas en el rechazo de tejidos es sólo un efecto
fragmentos peptídicos a linfocitos T específicos. secundario de su rol fisiológico como elemento
Esta forma de organización del MHC confiere a de restricción en la presentación antigénica a
los distintos individuos una enorme capacidad para linfocitos T CD8+. Estos linfocitos (T citotóxicos
presentar y responder a una gran variedad de o T supresores), son incapaces de reconocer el
antígenos distintos, ya que los diferentes alelos de antígeno en su conformación natural y sólo lo
cada gen son codominantes, es decir los productos reconocen en la superficie de una célula
moleculares de cada alelo se expresan y funcionan presentadora de antígeno, en asociación con una
de manera independiente en la superficie celular. molécula MHC de clase I.
Estos genes presentan un alto grado de
2.1. Genes del MHC polimorfismo, es decir en la población se describe
un elevado número de variantes alélicas para cada
2.1.1. Genes de clase I uno de estos locus. Por ejemplo en el ratón, en el
locus K se han descrito más de 100 alelos,
Los genes de clase I controlan la expresión considerando las cepas de laboratorio y
de los antígenos clásicos y no clásicos. Los poblaciones silvestres. En los humanos se han
antígenos clásicos de histocompatibilidad de clase descrito, hasta ahora, 209 alelos HLA-A, 414
171
Sin título-2 171 5/26/06, 10:25 AM

alelos del gen B y 101 del gen C . 2.1.2 Genes de clase II
Cada gen de clase I codifica la cadena pesada
o cadena alfa del heterodímero glicoproteico y Los genes de clase II corresponden, a los
está formado por 7 exones: el exón 1 codifica para antiguamente denominados como genes de
el péptido señal, los exones 2, 3 y 4 para los respuesta inmune (genes Ir) del Complejo Princi-
dominios α1 a α3 de la cadena α (ver punto 2.2.1), pal de Histocompatibilidad y controlan la
el exon 5 para el dominio transmembrana y los expresión de moléculas de clase II, involucradas
exones 6 y 7 para la región citoplasmática. en la presentación de fragmentos peptídicos a los
Los genes de clase I no clásicos (Ib) incluyen linfocitos T CD4+.
HLA-E, -F, -G y MIC en el humano y H2-Q, -T y En el Complejo HLA humano los genes de
-M en el ratón. Éstos son menos polimórficos, se clase II se ubican en las regiones HLA-DP, -DQ y
expresan en forma más restrigida a través de las -DR del complejo. En el ratón los genes de Clase
diversas células y tejidos y tienen una función II se ubican en las regiones I-A e I-E del sistema
diferente. La mayoría de ellos participan en la H-2 murino (figura 8-2).
interacción con receptores de células NK. Además Los genes de clase II están formados por 4
están los genes relacionados con la cadena pesada exones: el exon 1 codifica para el péptido señal, los
de clase I (MIC) A, B, C y D de los cuales sólo A exones 2 y 3 codifican para los dominios α1 y α2 y el
y B se expresan. Los genes MIC codifican para exon 4 codifica para las regiones transmembrana y
moléculas reconocidas por linfocitos T γδ en citoplasmática.
situaciones de stress. Cada región contiene por lo menos dos genes:
Figura 8-2. Organización Genética del Complejo Principal de Histocompatibilidad en humanos (Complejo HLA) y en el
ratón (Complejo H-2). Tanto en humanos como en el ratón los genes de clase I incluyen a los genes clásicos altamente polimórficos
(genes de clase Ia), como genes oligomórficos o monomórficos (genes de clase Ib). En humano los genes de clase II se ubican en
las regiones DP, DQ y DR y en el ratón corresponden a los genes de las regiones IA e IE que codifican la cadena alfa (genes A) y
genes que codifican la cadena beta (genes B) de la molécula de clase II. Los genes clase III codifican para algunos componentes
del sistema del complemento y otras proteínas.
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uno que codifica la cadena alfa (gen A) y otro que una función completamente distinta a las
codifica la cadena beta (gen B) de la molécula de clase moléculas de clase I y de clase II, puesto que
II, y el heterodímero se forma siempre a partir de codifican la expresión de moléculas como C2, C4
cadenas α y β codificadas por genes de la misma y factor B (Bf) que forman parte de la cascada de
región. En la región DR, por lo menos hay descritos 4 activación del sistema del complemento (ver
genes B funcionales (B1 y B3 ó B4 ó B5'), por lo capítulo 18) (figura 8.2).
tanto en esta región se pueden originar 2 moléculas Tanto en el Complejo HLA como en el
DR diferentes dependiendo del haplotipo. Los genes Complejo H-2, la región de los genes de Clase III
de clase II también, presentan un alto grado de contiene: el gen que codifica la expresión del
polimorfismo, al igual que los genes Ia. Sin embargo segundo factor del complemento (C2), dos genes
en el caso de estos genes solamente el DQA y DPA (C4A y C4B) que codifican la expresión de dos
son polimórficos; el DRA es relativamente formas del cuarto factor del complemento (C4),
monomórfico y hasta el momento se han descrito sólo el gen que codifica el factor B (Bf) de la ruta alterna
dos variantes. Esto en contraste a los 273 alelos DRB1, del sistema del complemento, los genes CYP-21A
21 DQA, 45 DQB, 19 DPA y 93 DPB. Por lo tanto el y CYP-21B que codifican la expresión de la 21
número de moléculas de clase II distintas que puede hidroxilasa (21-OH), enzima involucrada en la
codificar una región de clase II, depende del número síntesis de esteroides.
de combinaciones α-β que puedan formarse a partir Entre los genes de clase III están también los
de los distintos genes funcionales A y B de la región. que codifican para el Factor de Necrosis Tumoral
En un individuo heterozigoto, con un haplotipo distinto alfa (TNF-α), Linfotoxina A, B y C y aquellos que
en cada cromosoma homólogo, el número de codifican la expresión de proteínas de shock térmico
combinaciones es aún mayor, dado que no sólo pueden de 70 kDa (hsp 70) (figura 8-2). Estas moléculas
codificarse moléculas de clase II a partir de genes A y están relacionadas con fenómenos inflamatorios y
B que están en posición cis (genes en el mismo algunos autores han planteado la posibilidad de
cromosoma), sino también a partir de genes A y B en clasificar esta región como genes clase IV.
posición trans (genes en cromosomas homólogos
distintos) (figura 8-3). Sin embargo la mayoría de las 2.1.4. Otros genes del MHC
moléculas expresadas están codificadas en cis ya que
las moléculas codificadas en trans no son estables. En la región de los genes clase II se ubican
una serie de genes que codifican para moléculas
2.1.3. Genes de clase III involucradas en el procesamiento antigénico por
las moléculas de clase I tales como, tapasina (tps),
Los genes de clase III también codifican la LMP2 y LMP7, TAP1 y TAP2 y aquellas
expresión de proteínas plasmáticas que cumplen involucradas en la selección y presentación de
péptidos antigénicos a las moléculas de clase II
incluidos DMA y DMB y DOA y DOB.
No todos los genes ligados en el Complejo Prin-
cipal de Histocompatibilidad pueden clasificarse
como genes de clase I, II ó III. En esta categoría se
encuentran: (a) los genes LMP-2 y LMP-7 que
codifican subunidades de la maquinaria
citoplasmática de degradación o procesamiento de
proteínas (Proteasoma), (b) los genes TAP-1 y TAP-
2 que codifican las subunidades de un transportador
peptídico ATP dependiente (TAP, "Transporter
Associated with Antigen Processing"), (c) el gen
que codifica para la proteína Tapasina, chaperona
involucrada en la formación del complejo molécula
MHC-péptido, en el interior del retículo
Figura 8-3. Asociación de cadenas αβ del mismo cromosoma endoplásmico (d) los genes DMA y DMB que
(apareamiento cis) y de cromosomas opuestos (apareamiento codifican la expresión de las subunidades del
trans). Un individuo heterocigoto para los genes DRA1 y DRB1
heterodímero o molécula DM, involucrada en la
puede codificar para 2 cadenas α y 2 cadenas β diferentes por lo
que puede formar cuatro cadenas DR diferentes. unión de fragmentos peptídicos a las moléculas de
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clase II. Todas estas moléculas están involucradas La cadena α contiene aproximadamente 330
en el procesamiento antigénico y sus genes mapean aminoácidos y su conformación en la membrana
en la región de los genes clase II. es tal que presenta distintas regiones o dominios
claramente definidos: 3 dominios extramembrana
2.2. Estructura y función de las moléculas MHC denominados α1, α2 y α3, de alrededor de 90
aminoácidos cada uno; una región hidrofóbica
2.2.1. Estructura y función de las moléculas transmembrana de alrededor de 25 aminoácidos
clase I de anclaje en la membrana y, una cola o segmento
citoplasmático de 30 aminoácidos (figura 8-4).
Las moléculas MHC de clase Ia se expresan Los dominios α1 y α2 conforman la ranura o
en todas las células nucleadas en niveles de 104 a bolsillo de unión para la presentación de
105 moléculas por célula, particularmente en células fragmentos peptídicos, de 8-9 aminoácidos, a
linfoides. Una menor expresión de estas moléculas células T CD8+. El dominio α3 presenta una
MHC de clase I se observa en células germinales y región de unión no covalente a la β2m y un sitio
glóbulos rojos. o región no polimórfica o monomórfica para
Las moléculas MHC de clase Ia y Ib son interacción con la molécula CD8, co-receptor
glicoproteínas integrales de la membrana plasmática linfocitario.
y se expresan como un heterodímero constituido Tanto el dominio α3, como la β2m
por una cadena pesada o cadena α de 45 kDa presentan una secuencia aminoacídica y una
(codificada por los genes MHC de clase I) y una conformación similar a los dominios constantes
cadena liviana de 12 kDa, la Beta-2 microglobulina de las moléculas de inmunoglobulinas (ver
(β2m) no codificada por el MHC, sino por un gen capítulo 6). Por lo tanto las moléculas de clase
situado en el cromosoma 15 en humanos y en el I se clasifican dentro del gran grupo de proteínas
cromosoma 2 en el ratón (figura 8-4). de la superfamilia de las inmunoglobulinas. La
Las moléculas clase Ia (B, C, A en el humano mayor parte del polimorfismo de las moléculas
y K, D, L en el ratón) se caracterizan por expresarse de clase I está localizado en los dominios alfa 1
en prácticamente todas las células nucleadas, y alfa 2.
también en los glóbulos rojos y plaquetas; su Los productos de los genes clásicos de clase
función se asocia a la presentación de péptidos I (HLA-A, -B y -C) interactúan con el receptor de
antigénicos principalmente de origen endógeno a las células T y con el receptor KIR (killer/immu-
los linfocitos T CD8+. noglobulin like receptor) presente en las células T
La cadenas α y β de la molécula de clase I y NK, respectivamente. Por otra parte, HLA-E
están no covalentemente unidas y sólo la cadena interactúa con los receptores tipo lectina presente
alfa se encuentra anclada a la membrana en las células NK. Los productos de los genes MIC
plasmática celular. que no están unidos a la β2m, no participan en la
presentación de antígenos a los linfocitos T αβ,
pero sí son reconocidos por linfocitos T γδ
intraepiteliales.
2.2.2. Estrcuctura y función de las moléculas

clase II
A diferencia de las moléculas MHC de

clase I, que se expresan en virtualmente todas
las células nucleadas, las moléculas MHC de
clase II tienen una distribución más restringida
expresándose en forma constitutiva en células
como linfocitos B, monocitos, macrófagos,
Figura 8-4. Esquema de las moléculas MHC de clase I. La
molécula MHC de clase I es un heterodímero glicoproteico células de Langerhans, células dendríticas y, en
formado por una cadena pesada de 45 kDa codificada por el general en células presentadoras de antígeno
complejo MHC y una cadena liviana de 12 kDa, β2m, (CPA). Células endoteliales, epiteliales y
codificada en el cromosoma 15 humano y en el cromosoma 2
estromales no expresan moléculas MHC de
murino. El bolsillo o sitio de unión de fragmentos peptídicos
se conforma de los dominios α1 y α2 de la cadena α. clase II en forma constitutiva, pero pueden
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Sin título-2 174 5/26/06, 10:25 AM

hacerlo bajo el estímulo de citoquinas como Los dominios α3 y β3 de las moléculas de
interferón gamma (IFNγ), lo que puede tener clase II, lo mismo que el dominio α3 y la β2m
importantes consecuencias en la respuesta de las moléculas de clase I, tienen una secuencia
inmune normal y/o en el desarrollo de aminoacídica y una conformación similar a los
autoinmunidad. Los linfocitos T son claramente dominios constantes de las moléculas de
negativos para moléculas MHC de clase II, pero inmunoglobulinas y se clasifican entonces
también pueden expresarlas como resultado de dentro de la misma superfamilia de las
la activación celular. inmunoglobulinas.
Las moléculas MHC de clase II también son
glicoproteínas integrales de la membrana celular
y están constituidas por dos cadenas polipeptídicas, 3. EL CONCEPTO DE RESTRICCIÓN MHC
α y β, no covalentemente asociadas y codificadas
por genes de clase II del complejo. Un linfocito T, específico para un
Tanto en la cadena α (32-34 kDa), como en la fragmento peptídico presentado en el contexto
cadena β (28 -32 kDa) del heterodímero de clase II, de una molécula MHC particular, sólo
se distinguen claramente: dos dominios reconocerá este complejo molécula MHC-
extracelulares de 90 aminoácidos, α1 y α2 y β1 y péptido y no reconocerá el mismo péptido
β2, respectivamente; una región o dominio presentado en el contexto de una molécula
hidrofóbico transmembrana de alrededor de 25 MHC de la misma clase (I o II), pero distinta.
aminoácidos para anclaje en la membrana celular y, El genotipo o la molécula MHC restringe
una pequeña cola citoplasmática de longitud vari- entonces la especificidad del linfocito T, el
able en las distintas moléculas MHC de clase II que no reconoce a la molécula MHC o al
(figura 8-5). La ranura o bolsillo peptídico de fragmento peptídico, sino sólo al complejo
presentación antigénica está conformado por los MHC-péptido específico.
dominios α1 y β1 y, normalmente, presenta a los El origen del fenómeno de restricción
linfocitos T CD4+ fragmentos peptídicos de 13 a 15 MHC se encuentra en el proceso de
aminoácidos. El polimorfismo de esta molécula está diferenciación o "educación tímica", puesto
localizado principalmente en los dominios alfa 1 y que en el timo se produce la selección positiva
alfa 2 de las moléculas y está concentrado en tres de linfocitos T, en función de su capacidad para
regiones hipervariables que son las que hacen reconocer fragmentos peptícos en el contexto
contacto directo con el pépetido antigénico y/o el de moléculas MHC propias. Sin embargo, un
receptor de células T. linfocito T citotóxico específico para un
fragmento peptídico presentado en el contexto
de una molécula MHC de clase I propia, puede
reconocer o reaccionar cruzadamente con un
fragmento peptídico extraño, presentado en el
contexto de una molécula MHC de clase I
extraña o contra un péptido propio presentado
en el contexto de una molécula de clase I
extraña o alogénica. De esta manera puede
entonces explicarse, al menos en parte, el
rechazo al trasplante de tejidos, puesto que
antígenos propios o extraños (alogénicos) están
siendo presentados en el contexto de moléculas
MHC extrañas en la superficie de células
extrañas o alogénicas, presentes en el tejido del
donante. Un fenómeno similar puede explicar
la denominada reacción del trasplante o injerto
Figura 8-5. Esquema de las moléculas MHC de clase II. La
molécula de clase II es un heterodímero glicoproteico contra el huésped (GvH, "graft-versus-host"),
constituido por una cadena α de 32-34 kDa y una cadena β de en la que linfocitos T citotóxicos presentes en
28-34 kDa. Ambas cadenas están codificadas por genes MHC el tejido trasplantado (linfocitos alogénicos)
de clase II y están asociadas no covalentemente. El bolsillo o
reaccionan contra tejidos o células del recep-
sitio de unión de fragmentos peptídicos se conforma de los
dominios α1 y β1 y de las cadenas α y β respectivamente. tor.
175
Sin título-2 175 5/26/06, 10:25 AM

4. OTRAS MOLÉCULAS DE PRESENTA- de mecanismos complementarios para establecer
CIÓN una respuesta inmune adecuada en la infección con
bacterias intracelulares y abre la posibilidad del
4.1. Moléculas CD1 uso de antígenos glicolipídicos en posibles
vacunas, por ejemplo contra la tuberculosis.
Las moléculas CD1 son glicoproteínas
transmembrana constituidas por una cadena alfa 5. HERENCIA DE LOS GENES HLA
de 43-49 kDa asociada no covalentemente a una
β2m. Lo anterior indica una semejanza estructural Los genes HLA se heredan en forma
con las moléculas MHC clase I, con las cuales codominante, por tanto los alelos de ambos locus
comparten una limitada pero significativa son expresados, así dos set de moléculas HLA o
homología de secuencia (20%). Estas moléculas haplotipos pueden ser pesquisados en las células,
son codificadas por genes fuera del MHC uno heredado del padre y otro de la madre.
(cromosoma 1 humano y 3 murino) y tienen un Existe un 25% de posibilidades que 2 hijos
bajo polimorfismo. Su transporte intracelular es compartan ambos haplotipos (HLA idénticos), un
TAP o Ii independiente, moléculas importantes en 25% de posibilidades que no compartan ningún
el movimiento de las moléculas clase I y II, haplotipo y un 50% de posibilidades que
respectivamente. Aunque existe evidencia de que compartan un haplotipo (figura 8-6).
estas moléculas están presentes en, al menos, todos
los mamíferos, la mejor caracterización se ha
hecho en humano y ratón. Los miembros de la fa-
milia CD1 se dividen en dos grupos, sobre la base
de sus secuencias aminoacídicas. El grupo I
comprende sólo moléculas descritas en humano:
CD1a, CD1b y CD1c; al parecer no habría
proteínas grupo I en el ratón. El grupo II incluye a
CD1d en el humano, y CD1d.1 y CD1d.2 en el
ratón.
Las moléculas CD1 son fundamentalmente
expresadas en timocitos inmaduros y células Figura 8-6. Herencia de haplotipos HLA. En la figura, (a) y
presentadoras de antígeno, incluyendo células (b) representan los dos haplotipos maternos, y (c) y (d)
representan lo haplotipos paternos. Al heredar uno de los
dendríticas, macrófagos activados por citoquinas haplotipos de cada padre, pueden obtenerse los haplotipos (ac),
y linfocitos B. Esto es un indicio de la participación (ad), (bc) y (bd). Existe un 25% de posibilidades que dos hijos
de estas moléculas en la presentación antigénica, dean HLA idénticos (ejemplo (ac) y (ac), un 25% de
pero a diferencia de las moléculas convencionales, posibilidades que sean totalmente HLA no idénticos (ejemplo
(ac) y (bd) y 50% de posibilidades que ellos sean HLA semi-
ellas participan en la presentación de lípidos y idénticos.
glicolípidos a linfocitos CD4+, CD8+ y dobles
negativos (DN). Glicolípidos de micobacterias,
como manósidos de fosfoinositol (PIM), 6. COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOM-
lipoarabinomananos (LAM), ácido micólico y PATIBILIDAD Y ENFERMEDAD
hexosil-1-fosfoisoprenoide (hPIP) se presentan en
el contexto de moléculas CD1, grupo I. Durante muchos años se ha sabido que la
Las moléculas CD1d (del grupo II) resistencia o susceptibilidad a contraer diversas
interactúan con las recientemente descritas NKT enfermedades está en muchos casos determinada
cells. Las celulas NKT representan una por factores genéticos y, en los últimos años se han
subpoblación linfocitaria que expresa receptores identificado diversos marcadores genéticos que son
T (TCR) y NK (CD161). Estas células utilizan idénticos o están estrechamente ligados a los genes
una cadena invariante del TCR alfa (Va14Ja281 que confieren resistencia o susceptibilidad a la
en el ratón y Va24JaQ en el humano). A pesar que enfermedad. El análisis de tales marcadores permite
se sabe que estas células participan en la regulacion no sólo identificar a los individuos que están en
de la respuesta inmune, los mecanismos precisos riesgo de contraer o desarrollar una cierta
no están aún bien definidos. enfermedad, sino también estudiar o determinar la
Las moléculas CD1 forman parte, al parecer, patogénesis de la enfermedad.
176
Sin título-2 176 5/26/06, 10:25 AM

Ciertos genes o haplotipos del MHC parecen están directamente involucrados en la patología
estar asociados con la susceptibilidad o de la EC. En el caso de PAN los péptidos son
resistencia a desarrollar algunas enfermedades. derivados del aloantígeno HPA1a que son
Sin embargo, los exactos mecanismos presentados por el alelo HLA-DRB3*0101 y que
responsables de estas asociaciones son variados lleva a la producción de anticuerpos patógenos
y en general nos están claramente definidos. Se en contra de este aloantígeno, resultando en grave
postula que esta asociación puede ser debida a la trombocitopenia en el recién nacido. Finalmente
semejanza entre péptidos propios y péptidos es posible que esta asociación sea con un gen aún
derivados de patógenos como por ejemplo Kleb- no identificado que se encuentra en desequilibrio
siella, lo que llevaría al desarrollo de una de unión con algunos de los genes de HLA como
respuesta autoinmne. Este sería el mecanismo que es el caso de Hemocromatosis Hereditaria (HH)
explicaría la asociación entre HLA-B27 y y HLA-A3. Hoy se sabe que HH ocurre como
ArtritisAnquilosante (AS). Otra posibilidad es resultado de mutaciones en el gen HFE
que la asociación se deba a la presentación localizado telomérico de HLA-A. La asociación
preferencial de ciertos péptidos derivados de con HLA-A3 se debe al desequilibrio de unión
patógenos u otros antígenos como es el caso de con ese alelo en un haplotipo ancestral en el cual
la enfermedad celiaca (EC) y el Púrpura se originó la mutación inicial. En este caso se
aloinmune neonatal (PAN). En el caso de la EC habla de enfermedades ligadas al HLA.
los alelos HLA-DQ2 y DQ5 presentan péptidos En la tabla 8-1 se muestran algunos ejemplos
derivados del gluten a los linfocitos T y éstos de asociaciones entre HLA y enfermedades.
Tabla 8-1. Enfermedades asociadas y ligadas al sistema HLA
Enfermedades asociadas a HLA

Corioretinopatía de Birdshot HLA-A29
Enfermedad de Behçet's HLA- B51
Espondilitis anquilosante HLA-B27
Malaria HLA-B53
Diabetes Mellitus insulino dependiente HLA-DQ8

Artritis reumatoidea Aminoácidos 70-74 codificados por gen DRBI
(QKRAA or QRRAA)
Narcolepsia HLA-DQBI*0602/DQAI*0102
Enfermedad celiaca HLA-DQBI*0201/DQAI*0501
Deficiencia selectiva de IgA HLA-DRBI*0301/-DQBI*02
Desarrollo de anticuerpos HPA-Ia PAN HLA-DRB3*0101

No respuesta de anticuerpos con vacunas HLA-B44-DR7-DQ2 (en Caucásicos)
para VHB HLA-B8-DR-DQ2 (en Caucásicos)
HLA-B564-DR4-DQ4 (en Japoneses)
Remoción de HCV circulante HLA-DRBI*11-DQB1*0301
Enfermedades ligadas a HLA
Hemocromatosis (HLA-A3) gen HFE C282Y y H63D

Deficiencia de 21 OH (HLA-B27) gen 21 OH
PAN, Púrpura aloinmune neonatal; VHB, Virus de Hepatitis B; (), Alelo asociado
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El riesgo relativo a desarrollar una enfermedad se Campbell, R., and Trowsdale, J., “A map of the
calcula a partir de la frecuencia del alelo o human Major Histocompatibility Complex”,
haplotipo en la población enferma y su frecuencia Inmunol. Today. 18: 43-45, 1997.
en la población control sana. Así, en una tabla de
2 x 2, el número de individuos enfermos y sanos Gruen, J., and Weissman, S., “Evolving views of
que presentan o carecen de un determinado alelo the Major Histocompatibility Complex”, Blood 11:
o haplotipo HLA es: 4252-4246, 1997.
Jackson, M.R. and Peterson, P.A., “Assembly and

Alelo HLA intracellular transport of MHC class I molecules”,
+ - Ann. Rev. Cell Biology 9: 207-233, 1993.
A/D
Enfermos A B Riesgo relativo = B/C Kirberg, J., Berns, A. and von Boehmer, H., “Pe-
Sanos C D ripheral T cell survival requires continual ligation
of the T cel receptor to Major Histocompatibility
Así, por ejemplo, la Espondilitis anquilosante complex-encoded molecules”, J. Exp. Med. 8:
presenta un riesgo relativo de 87.4 y Enfermedad 1269-1275, 1997.
Celiaca 10.8.
Matsuda, J. and Kronenberg, M., “Presentation of
self and microbial lipids by CD1 molecules”, Curr.
Opin. Inmunol. 13: 19-25, 2001.
7. NOMENCLATURA Y TIPIFICACIÓN HLA
Schaible, U. and Kaufmann, H., “CD1 and CD1-
Las moléculas MHC clase I y II son muy restricted Tcells in infections with intracellular
polimórficas. En humanos (HLA) actualmente se bacteria”, Trends Microbiol. 9: 419-425, 2000.
les identifica con una nueva nomenclatura que
incluye el locus (Ej. A, de clase I), seguido de un Sette, A. and Sidney, J., “HLA supertypes and
asterisco (*) y 3 ó 4 dígitos en que los dos primeros supermotifs: a funcional perspective on HLA poly-
corresponden a la especificidad serológica y los morphism”, Curr. Opin. Inmunol. 10: 478-482,
dos segundos al número de la variante. Ejemplo: 1998.
HLA-A*0203 .
La tipificación HLA, requerida entre otras Steven, G.E., Marsh., Julia G. Bodmer ., Ekkehard
situaciones, para trasplantes y determinación de D. Albert et al., “Nomenclature for factors of the
riesgo de enfermedad, se estudia a través de HLA system”, European journal of immunogenet-
pruebas serológicas (microlinfocitotoxicidad), ics. 28:377-424. 2000.
métodos celulares y de biología molecular (ver
capítulo 42).
LECTURAS SUGERIDAS
Bahram, S., and Spies, T., “The MIC gene fam-

ily”, Res. Immunol. 147:328-334, 1996.
Barber, L.D., and Parham, P., “Peptide binding to

major histocompatibility complex molecules”,
Ann. Rev. Cell Biology 9:163-206, 1993.
Braud, V., Alland, D., “And Mc Michael A. Func-

tions of non classical MHC and non-MHC-
encodedclas I molecules”, Curr. Opin. Inmunol.
11: 100-108, 1999.
178
Sin título-2 178 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 9
PROCESAMIENTO, PRESENTACIÓN Y
RECONOCIMIENTO ANTIGÉNICO
Ulises Vergara C., Claudio Zúñiga M., Iván Palomo G. y Cristina Navarrete
1. Introducción
2. Linfocitos T y reconocimiento de
antígenos
2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y
reconocimiento peptídico
2.2. Linfocitos T γδ
2.3. Células NK
2.4. Células presentadoras de antígenos
3. Tráfico celular y procesamiento
antigénico
4. Antígenos endógenos y exógenos
5. Fragmentos peptídicos y moléculas
MHC
6. Procesamiento y presentación de
antígenos endógenos
7. Procesamiento y presentación de
antígenos exógenos
8. Presentación alternativa de péptidos
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RESUMEN
Los linfocitos T reconocen fundamentalmente antígenos proteicos, en forma de fragmentos

peptídicos presentados en asociación con una molécula del Complejo Principal de
Histocompatibilidad (MHC) en la membrana de una célula presentadora de antígenos (CPA). Así
la presentación antigénica en el contexto de una molécula MHC y el reconocimiento del comple-
jo molécula MHC-péptido por el receptor T, proporciona al sistema inmune de un mecanismo de
control o detección de proteínas anormales en células transformadas o tumorales y de proteínas
extrañas en células infectadas por virus, bacterias o parásitos.
Las evidencias experimentales sugieren que el procesamiento antigénico y la unión de frag-
mentos peptídicos a moléculas MHC parece depender tanto del origen del antígeno, como del
tráfico antigénico a través de distintos compartimientos celulares. Así, los antígenos intracelulares
o endógenos son procesados o degradados por la maquinaria multicatalítica citoplasmática
(Proteasoma) y los fragmentos peptídicos allí generados son luego translocados al retículo
endoplásmico, con la participación de un transportador ATP-dependiente (TAP). En el retículo,
los péptidos endógenos serán unidos a una molécula MHC clase I y sólo el complejo correcta-
mente ensamblado será transportado y expresado en la superficie celular, para su presentación a
linfocitos T CD8+. Los antígenos extracelulares serán en cambio, internalizados por la célula
presentadora y procesados en un compartimiento acídico celular (endolisosoma o fagolisosoma).
Los fragmentos peptídicos aquí generados son luego asociados a una molécula MHC clase II y
sólo el complejo correctamente ensamblado, se expresará en la membrana celular para la presen-
tación del fragmento peptídico a linfocitos T CD4+.
1. INTRODUCCIÓN epítopos conformacionales o discontinuos en

antígenos de naturaleza química tan variada como
El sistema inmune es parte de los mecanis- proteínas, hidratos de carbono, lípidos y ácidos
mos biológicos destinados a mantener la integri- nucleicos. Los linfocitos T en cambio, reconocen
dad estructural y funcional de los individuos y está fundamentalmente determinantes continuos o de
genéticamente programado para defendernos de secuencia en antígenos proteicos y, sólo en forma
la agresión de agentes infecciosos, células y mode pequeños fragmentos peptídicos presentados en
léculas extrañas. asociación con una molécula del Sistema o Com-
El sistema inmune está constituído por célu- plejo Principal de Histocompatibilidad, en la su-
las con capacidad para reconocer y neutralizar o perficie de una CPA. Dada la elevada homología
eliminar moléculas extrañas (linfocitos B, tanto estructural como funcional, entre el recep-
linfocitos T y células NK) y por células acceso- tor antigénico de los linfocitos B (BCR) y el re-
rias que cumplen una importante función en el pro- ceptor de los linfocitos T (TCR), no existía hasta
cesamiento y presentación de antígenos ahora una explicación satisfactoria que diera cuen-
(monocitos, macrófagos, células dendríticas, cé- ta de esta capacidad limitada o restringida de los
lulas interdigitantes, etc.). linfocitos T para reconocer fundamentalmente
epítopos o determinantes antigénicos de naturaleza
proteica. Sin embargo, todo parece indicar que esta
2. LINFOCITOS T Y RECONOCIMIENTO restricción estaba determinada por las moléculas
ANTIGÉNICO MHC, que sólo son capaces de unir o presentar frag-
mentos peptídicos. Pero con el reconocimiento de
Los linfocitos B pueden reconocer epítopos las moléculas CD1, que son capaces de presentar
estructurales, continuos o de secuencia y/o antígenos lipídicos o glicolipídicos a los linfocitos
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T CD4+, CD8+ y DN, ésta visión limitada ha cam- tesis y secreción de interleuquina 2 (IL-2),
biado y al parecer el receptor T es capaz de recono- interleuquina 12 (IL-12), interferon gamma (IFNγ)
cer antígenos de diversa naturaleza química, aun- y factor de necrosis tumoral ß (TNFβ). Los
que presentadas por moléculas diferentes a las clá- linfocitos T helper 2 (Th2) en cambio, regulan la
sicas MHC. De todas maneras, además de estos respuesta inmune humoral mediada por anticuerpos
mecanismos complementarios, la presentación y se caracterizan por la síntesis y secreción de
antigénica en el contexto de moléculas del MHC y interleuquina 4 (IL-4), interleuquina 5 (IL-5),
la detección o reconocimiento del complejo molé- interleuquina 6 (IL-6) e interleuquina 10 (IL-10).
cula MHC-péptido por el receptor de un linfocito El reconocimiento específico y restringido
T, proporciona al sistema inmune de un mecanis- por las moléculas del MHC está mediado funda-
mo de control o detección de la expresión de pro- mentalmente por linfocitos T que poseen el recep-
teínas anormales en células transformadas o tor αβ (TCRαβ).
tumorales y de proteínas extrañas en células infec-
tadas por virus, bacterias o parásitos. 2.2 Linfocitos T γδ
2.1. Subpoblaciones linfocitarias T y recono- Los linfocitos T γδ se encuentran predominante-

cimiento peptídico mente en tejidos epiteliales, tienen una diversidad
restringida y forman parte de las respuestas inna-
Los linfocitos T (TCRαβ) tanto como tas a patógenos intracelulares y a tumores. Estos
citotóxicos (LTc) y linfocitos T supresores (LTs) linfocitos no requien de las moléculas clásicas
reconocen fragmentos peptídicos asociados o pre- presentadoras de antígenos ni tampoco utilizan las
sentados por moléculas MHC clase I, mientras los vías clásicas de reconocimiento antigénico utili-
linfocitos T "helper" (LTh), reconocen fragmentos zado por los linfocitos T αβ. Sin embargo, esta
peptídicos asociados a moléculas MHC clase II. subpoblación de linfocitos T si reconocen los
Esta especificidad en el reconocimiento de péptidos antígenos no clásicos de clase I, MICA y MICB
asociados a una clase particular de molécula MHC que se expresan principalmente en células
está determinado por las moléculas CD4 y CD8, tumorales de origen epitelial que han sido someti-
que actúan como co-receptor linfocitario para el das a stress. El reconocimiento específico de es-
reconocimiento de la molécula MHC. Así, la mo- tas moléculas está mediado por el receptor NK
lécula CD8 sólo se une con la molécula de clase I, (NKG2D) expresado en estos linfocitos. Los
reconociendo una región monomórfica situada en linfocitos T γδ también reconocen antígenos no
el dominio α-3 de esta molécula MHC. La molé- peptídicos (lípidos) tales como isopentenyl
cula CD4 en cambio, sólo se une con la molécula pirofosfatasa (IPP) derivados de M. tuberculosis.
MHC clase II, reconociendo una región El reconocimiento de estos antígenos es media-
monomórfica situada en el dominio β-2. do por la presencia de CD1 y en la mayoría de
El reconocimiento antigénico asociado a mo- los casos requiere de la capacitación y transpor-
léculas MHC clase I resulta en la destrucción te de antígeno a un compartimiento intracelular
citotóxica de la célula presentadora o célula blan- acídico en la CPA similar al procesamiento de
co, mientras el reconocimiento de antígenos en el péptidos restringido por las moléculas de MHC
contexto de moléculas MHC clase II conduce a la clase II (ver punto 7). Sin embargo, el sistema de
activación y proliferación de distintas transporte TAP1/TAP2 o las moléculas DM no
subpoblaciones de células T "helper", con síntesis son requeridas ya sea para la expresión de CD1
y secreción de una combinación particular de o para la función presentadora de estas molécu-
citoquinas que promueven una amplificación de las (capítulo 8).
la respuesta inmune humoral o celular, al activar
linfocitos B y/o macrófagos, y diversas células 2.3 Células NK
inflamatorias.
La respuesta inmune humoral y celular son re- Las células NK están directamente involucradas en
guladas por subpoblaciones distintas de células T la respuesta inmune en contra de virus, parásitos,
"helper". Así, los linfocitos T helper 1 (Th1) parti- bacterias intracelulares y tumores. También contri-
cipan en la regulación de la respuesta inmune celu- buyen directamente a la eliminación de células
lar (reacciones inflamatorias, de hipersensibilidad alogénicas y, mediante la secreción de citoquinas,
retardada y citotóxicas) y se caracterizan por la sín- participan en la regulación de otras funciones
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Sin título-2 182 5/26/06, 10:25 AM

inmunológicas, como la producción de anticuerpos reconocer péptidos antigénicos, está en gran parte
y la hematopoyesis. Las células NK presentan en su determinada por las características de las células
membrana una gran variedad de receptores. Los re- presentadoras de antígeno: monocitos,
ceptores como CD2, CD69 y CD16 funcionan en macrófagos, células dendríticas, células
forma independiente de la expresión de moléculas interdigitantes, linfocitos B. etc. De éstas, las
de MHC, mientras que otros si dependen de la ex- células dendríticas (CD), son sin duda las más
presión de las moléculas clásicas y no clásicas de importantes debido a su capacidad para activar
MHC clase I. En este último grupo se encuentran linfocitos T "naive". Las CD forman parte de un
los receptores del tipo C lectin-like (NKC) por ejem- grupo heterogéneo de células que se encuentran
plo CD94/NKG2D y los "Ig like receptors" (LRC), en los órganos linfoides secundarios y en la
por ejemplo KIRs (ver capítulo 10). Los receptores periferia, en distintos estadios de diferenciación y
de la familia NKC están localizados en el cromosoma maduración. En los tejidos periféricos, las CD
12 mientras que los LRC en el cromosoma 19. Tanto inmaduras tienen un grado moderado de síntesis
los NKC como los LRC incluyen receptores de inhi- y expresión de moléculas MHC de clase II y una
bición y activación de las células NK, que tienen gran capacidad fagocítica. Luego de su
como ligandos moléculas MHC de clase I clásicas y reclutamiento y activación, ya sea por citoquinas
no clásicas (tabla 1). Estos receptores son altamente u otros estímulos capaces de señalar la presencia
polimórficos y su variación está dada no sólo por de patógenos o de daño tisular, se produce un
mutaciones en los distintos genes, sino también por aumento pasajero en la síntesis de moléculas MHC
su expresión diferencial en distintos individuos, vale de clase II, seguido de una disminución de la
decir no todos los individuos expresan el mismo capacidad fagocítica, luego de la captura o
número de receptores. incorporación de antígenos. Estas CD inmaduras,
migran luego a los órganos linfoides secundarios,
2.4 Células presentadoras de antígeno donde completan su proceso de maduración para
el adecuado procesamiento y presentación de
La posibilidad que linfocitos T puedan antígenos a linfocitos T.
Utilizando marcadores de membrana de la
serie mieloide (CD11c y CD33) se ha podido
identificar, en sangre periférica, 2 subpoblaciones
Tabla 9-1. Interacción entre moléculas MHC
de células dendríticas de origen mieloide y una
clase I y los receptores activadores e
subpoblación CD11-, de origen linfoide o
inhibidores de las células NK.
plasmocitoide. Las CD de origen mieloide son más
propensas a secretar IL-12 (una citoquina
inductora de respuesta Th1), mientras que las CD
Ligandos Receptores activadores
de origen linfoide secretan IL-10, que promueve
HLA-E CD94/NKG2C una respuesta de tipo TH2. La subpoblación
(DAP 12) mieloide tiene la capacidad de inducir respuestas
MIC NKG2D proliferativas contra diversos antígenos y
(DAP 10) aloantígenos mientras que la subpoblación linfoide
tiene una función limitada como célula presen-
HLA-C KIR2DS tadora de antígeno, pero parece tambien involu-
(DAP 12) crada en la inducción de tolerancia.
HLA-B KIR3DS La presentación de fragmentos antigénicos
(DAP 12) asociados a moléculas MHC ha llevado a los
inmunólogos a preguntarse dónde y cómo se
HLA-G KIR2DL4 realiza el procesamiento antigénico en la célula
Ligandos Receptores inhibidores presentadora y cómo y dónde se realiza la
asociación de los fragmentos peptídicos a las
HLA-E CD94/ NKG2A/
moléculas MHC clase I o clase II. ¿Existe alguna
HLA-C KIR2DL relación entre el procesamiento y presentación de
HLA-B KIR3DL antígenos y la síntesis, transporte y expresión de
las moléculas MHC en la membrana de la célula
HLA ILT2/4 presentadora?.
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Sin título-2 183 5/26/06, 10:25 AM

3. TRÁFICO CELULAR Y PROCESA- la CPA o de la célula blanco de la respuesta
MIENTO ANTIGÉNICO inmune. Estas proteínas son generalmente
sintetizadas en ribosomas libres en el citoplasma
La evidencia experimental hasta ahora o pueden corresponder a proteínas derivadas de
acumulada sugiere que el procesamiento antigénico virus, bacterias o parásitos intracelulares; pero,
y la unión de péptidos a moléculas MHC parece para todas ellas, sus fragmentos peptídicos se
depender tanto del origen del antígeno como del generan mediante proteólisis citoplasmática. Los
tráfico antigénico a través de distintos fragmentos antigénicos deben ser luego
compartimientos celulares. Así, los antígenos translocados o transportados al retículo
intracelulares y extracelulares constituyen desafíos endoplásmico, donde se encuentran las moléculas
distintos para el sistema inmune puesto que los MHC clase I sintetizadas en ribosomas asociados
fragmentos peptídicos derivados de antígenos al retículo.
intracelulares o endógenos son normalmente unidos Los antígenos proteicos exógenos corres-
a moléculas MHC clase I y presentados a linfocitos ponden a proteínas extracelulares internalizadas
T CD8+, mientras los antígenos extracelulares o mediante la unión a un receptor específico de la
exógenos se unen a moléculas MHC clase II y son superficie celular o en fase fluída mediante
normalmente presentados a linfocitos T CD4+. La vesículas membranosas en procesos de fagoci-
asociación de fragmentos peptídicos a moléculas tosis, pinocitosis o endocitosis. Las proteínas
MHC clase I o clase II es entonces función de la así internalizadas serán procesadas en un compar-
ruta de introducción del antígeno a la célula y de su timiento acídico celular (fagolisosoma o
susceptibilidad al procesamiento o degradación en endolisosoma) y los fragmentos peptídicos allí
distintos compartimientos celulares. generados serán luego asociados a una molécula
El aislamiento e identificación de líneas MHC clase II para su transporte y expresión en
celulares con defectos en el procesamiento y la superficie celular.
presentación de antígenos, ha constituído un avance
significativo en el conocimiento de la biología de
la respuesta celular T y del ensamblaje y transporte 5. FRAGMENTOS PEPTÍDICOS Y MOLÉ-
de las moléculas MHC. Así, la línea celular RMA- CULAS MHC
S derivada de células mutagenizadas de linfoma H-
2b de ratón transformadas por virus de Rauscher y La evidencia experimental indica que las
la línea linfoblastoide humana LBL 721.174, moléculas MHC clase I unen preferentemente,
expresan bajos niveles de moléculas MHC en la péptidos de 8 a 9 aminoácidos generados en el
superficie celular, aún cuando sintetizan niveles citoplasma celular. Las moléculas MHC clase II en
normales de la cadena alfa de la molécula clase I y cambio, unen preferentemente péptidos de 13 a 15
de beta-2 microglobulina (β2m). La incubación de aminoácidos, generados en un compartimiento
estas líneas celulares con péptidos virales capaces acídico celular (compartimiento endocítico MIIC).
de unirse específicamente a las moléculas MHC Esta diferencia en la longitud de los fragmentos
clase I, conduce a la expresión del complejo MHC- peptídicos que pueden asociarse a moléculas clase
péptido en la superficie celular y a su destrucción I o clase II parece depender de la estructura y
citotóxica si se les cocultiva con linfocitos T CD8+ conformación del bolsillo de unión de la molécula
citotóxicos específicos para ese complejo MHC- MHC: el bolsillo es cerrado en las moléculas de
péptido. Estos fenómenos no ocurren si las líneas clase I y abierto en las moléculas clase II. De esta
celulares se infectan con el virus original, sugiriendo manera las moléculas clase II puede unir péptidos
un defecto en el procesamiento y presentación de de mayor longitud que las moléculas clase I.
antígenos y una relación con el ensamblaje de las Cuando se purifican moléculas MHC por
moléculas MHC. inmunoprecipitación de extractos celulares con
anticuerpos monoclonales específicos para
moléculas clase I o clase II, se encuentra que ellas
4. ANTÍGENOS ENDÓGENOS Y EXÓGE- coprecipitan con los fragmentos peptídicos alojados
NOS en su bolsillo de unión. La secuenciación de los
fragmentos peptídicos, eluídos o aislados del
Antígenos proteicos endógenos son todas complejo MHC-péptido por denaturación ácida,
aquellas proteínas residentes en el citoplasma de demuestra la existencia de 2 a 3 residuos
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Sin título-2 184 5/26/06, 10:25 AM

conservados de anclaje a la molécula MHC. a esta estructura se le denomina inmunoproteasoma.
En los péptidos de 8 a 9 aminoácidos que se LMP-2 y LMP-7 ("low molecular mass protein")
unen a las moléculas MHC clase I, los residuos de codifican en la región de los genes de clase II del
anclaje se encuentran normalmente en los extremos Complejo Principal de Histocompatibilidad.
amino y carboxilo del fragmento peptídico y sólo
pueden ser ocupados por un aminoácido específico
o por residuos aminoacídicos que contienen cadenas
laterales similares o estrechamente relacionadas. El
extremo carboxiterminal es con frecuencia un
aminoácido con cadena lateral alifática (como
isoleucina, leucina o valina) o cargada positiva o
negativamente.
Péptidos distintos pueden entonces asociarse a
la misma molécula MHC, siempre y cuando los
residuos de anclaje tengan la naturaleza y la posición
que corresponde para una adecuada y estable
asociación a esa molécula. Sin embargo, cada
complejo MHC-péptido será reconocido por un
linfocito T distinto y específico para ese complejo.
Figura 9-1. Procesamiento de antígenos endógenos.

6. PROCESAMIENTO DE ANTÍGENOS Antígenos endógenos son degradados por el Proteasoma
ENDÓGENOS citoplasmático, generando fragmentos peptídicos de 8 a 9
aminoácidos que serán translocados al retículo endoplásmico
por el transportador TAP. En el retículo endoplasmático la
Los antecedentes hasta ahora disponibles molécula MHC clase I será ensamblada a partir de la cadena α
sugieren que los antígenos endógenos son de clase I, la β2m y un fragmento peptídico específico. En el
degradados o procesados en el citoplasma celular, ensamblaje participan chaperoninas como calnexina y proteínas
de shock térmico (hsp 60 y hsp 70).
generando fragmentos peptídicos de 8 a 9
aminoácidos por acción de un complejo
multicatalítico de 700 kDa, denominado
Proteasoma, Macropaína o MCP ("multicatalytic Al parecer los cambios anteriores no tienen
proteinase"), que es responsable de la degradación consecuencias drásticas en la generación de
de la mayoría de las proteínas en el citoplasma y el péptidos, pero si se inducen algunas diferencias
núcleo celular (figura 9-1). Esta estructura cilíndrica cualitativas, preferentemente en la región
está formada por 4 anillos heptaméricos de carboxiterminal de los péptidos generados. Las
subunidades alfa y beta ( alfa7beta7beta7alfa7 ), a proteínas LMP tienen alguna homología con serín-
este cuerpo central se le puede adicionar una proteasas, y aún cuando no existe evidencia directa
subunidad reguladora denominada 19S, que y convincente que muestre su actividad
corresponde a un complejo ATPasa, generando el enzimática, se supone que ellas se incorporan al
proteasoma 26S, responsable del procesamiento de proteasoma alterando sus propiedades catalíticas
la mayoria de las proteínas citoplasmáticas, unidas de endopeptidasa, de manera tal de aumentar la
a una proteina señal llamada ubiquitina. Este generación de algunos fragmentos peptídicos.
proteosoma genera péptidos con un rango entre 5– Estudios realizados utilizando líneas celulares
30 aminoácidos, y alrededor de un 15% de ellos mutantes incapaces de generar fragmentos
cae dentro del rango de 9-10 aminoácidos, que peptídicos, demuestran que la presentación
poseen la longitud apropiada para unirse a las antigénica puede restaurarse aún en ausencia de
moléculas MHC clase I. Bajo la influencia del las subunidades codificadas por los genes LMP
interferón gamma, tres subunidades beta, del sistema principal de histocompatibilidad,
denominadas X, Y y Z en el “house-keeping” indicando que no existe un requerimiento absoluto
proteasoma son reemplazadas por las subunidades de estas proteínas en la generación de péptidos.
homólogas LMP-7, LMP-2 y MECL-1, Sin embargo, esto no descarta la posibilidad que
respectivamente y también se induce la unión de las moléculas LMP incrementen la eficacia del
otra subunidad reguladora denominada 11S o PA28, complejo enzimático, generando más frecuen-
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Sin título-2 185 5/26/06, 10:25 AM

temente fragmentos peptídicos escindidos después
de aminoácidos básicos, ácidos o hidrofóbicos.
Estudios realizados con inhibidores
específicos del proteasoma han revelado que frente
a su inactivación se inducen o se hacen evidentes
mecanismos proteolíticos compensatorios de la
pérdida de actividad del proteasoma, que pueden
corresponder a complejos proteicos semejantes o
a sistemas de endo y exopeptidasas.
El sitio preciso donde los péptidos generados
en el citoplasma se unen a las moléculas MHC es
el retículo endoplásmico. El tratamiento de células
con Brefeldina A (metabolito de hongos que
bloquea el transporte de proteínas desde el retículo
endoplásmico al Golgi) o con la proteína E19
derivada de citomegalovirus (que retiene
moléculas MHC clase I en el retículo), bloquean
o interfieren la presentación antigénica.
Los fragmentos peptídicos generados por el
complejo multienzimático deben ser translocados
desde el citoplasma al retículo donde se unirán a Figura 9-2. Tráfico antigénico y presentación de péptidos
las moléculas MHC clase I, para su transporte a la endógenos. En el contexto de MHC de clase I. En el retículo
superficie celular a través de la vía exocítica (figura endoplásmico la molécula MHC clase II correctamente
9-2). La evidencia experimental sugiere la ensamblada a partir de la cadena α, β2m y un fragmento
peptídico, es transportado al Golgi y desde aquí presentado a
participación de transportadores dependientes de un LT CD8+, en el contexto de una molécula MHC clase I.
ATP y codificados por los genes TAP-1 y TAP-2 LMP, “Low molecular mass protein”; TAP, “Transporter asso-
localizados en las proximidades de los genes de ciated with Antigen Processing”.
clase II del MHC. Las proteínas TAP-1 y TAP-2
se asociarían formando un heterodímero
transportador en la membrana del retículo
endoplásmico. asociados al retículo endoplásmico y pueden por
La transfección del gen TAP-2 en la línea lo tanto ensamblarse en el lumen del retículo. Sin
celular RMA-S y de los genes TAP-1 y TAP-2 en embargo, la evidencia experimental sugiere que
la línea LBL 721.174 restablece la expresión de la unión de un fragmento peptídico es un pre-
las moléculas MHC clase I y la adecuada requisito necesario para la conformación y
presentación de antígenos. ensamblaje estable de la molécula clase I y, en la
La molécula MHC clase I está constituída por mayoría de los casos, sólo el complejo trimolecular
una glicoproteína integral de membrana (cadena estable (péptido-cadena α-β2m) abandona el
pesada α de 45 kDa) que está asociada no retículo endoplásmico para completar su
covalentemente con una subunidad soluble de 12 glicosilación en el Golgi y luego viajar a la
kDa, la β-2 microglobulina, (β2m) que no está superficie celular por la vía exocítica. Las
codificada por genes MHC y se encuentra moléculas MHC clase I, libres o mal ensambladas
normalmente libre en el plasma y fluídos tisulares serían retenidas por proteínas residentes en el
(ver capítulo 8). La cadena pesada alfa contiene 3 retículo endoplásmico (como la proteína p88 o
dominios extracelulares, dos de los cuales (α-1 y calnexina), previniendo su degradación y
α-2) forman la región o bolsillo de unión para el manteniéndolas en una conformación compatible
fragmento peptídico. El tercer dominio (α-3), con el ensamblaje adecuado. La calnexina parece
contiene una región para el reconocimiento o funcionar como molécula chaperona o
interacción con el co-receptor CD8 del linfocito T chaperonina, para el plegamiento o conformación
citotóxico, y una región para la unión no covalente estable de diversas proteínas, incluyendo los TCR
con β2m. y las inmunoglobulinas. Si células de Droso-
Tanto la cadena α como la β2m de la phila melanogaster (que carecen de moléculas
molécula MHC clase I se sintetizan en ribosomas MHC, β2m y TAP), se transfectan con los genes
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Sin título-2 186 5/26/06, 10:25 AM

para moléculas MHC clase I y de β2m, se endoplásmico. Al parecer más que el tamaño del
encuentra que estas células son capaces de expresar péptido lo que importa para un transporte
en su superficie, el complejo MHC-β2m o adecuado desde el citosol, es la naturaleza del
moléculas MHC libres. Si además de los genes extremo carboxiterminal del fragmento peptídico.
MHC y β2m, las células se transfectan también Así en humanos, el heterodímero TAP es
con el gen para calnexina, las moléculas MHC permisivo para el transporte de péptidos con
son retenidas en el retículo mediante asociación cualquier extremo carboxi-terminal, excepto si este
con calnexina y por lo tanto, no se expresan en la contiene prolina y probablemente glicina,
superficie celular. existiendo moléculas MHC que unen
Las chaperoninas cumplen un rol fundamen- preferentemente péptidos con extremos polares y
tal en la estabilidad de diversas proteínas, otras que unen preferentemente péptidos con
impidiendo su agregación y favoreciendo un extremos carboxi-terminal hidrofóbicos. En
adecuado plegamiento, ensamblaje y retención en ratones en cambio, TAP parece restringido a
diversos compartimientos celulares. La interacción fragmentos peptídicos con extremo carboxi-termi-
de las moléculas MHC con chaperoninas nal hidrofóbico.
residentes en el retículo endoplásmico asegura que En resumen, una molécula MHC clase I
distintas moléculas MHC unan fragmentos madura y correctamente ensamblada consiste de
péptidicos en el compartimiento celular adecuado. 3 subunidades: la cadena α MHC, la β2m y el
Por otro lado, chaperoninas citosólicas de la fa- fragmento peptídico alojado en el bolsillo de unión
milia de las proteínas de shock térmico de 60 kDa formado por los dominios α-1 y α-2 de la molécula
(hsp 60) y de 70 kDa (hsp 70), el heterodímero MHC. La unión del péptido adecuado induce
transportador TAP, calnexina y tapasina aseguran pequeños cambios conformacionales en la
el transporte y asociación de los péptidos molécula MHC, lo que permite la disociación de
adecuados a las moléculas MHC de clase I (figura las proteínas chaperonas. Este complejo
9-2). Tapasina es una proteína transmembrana de trimolecular es fundamental no sólo para el
48 kDa, con una señal de retención en el retículo correcto ensamblaje de la molécula MHC de clase
endoplásmico. Esta chaperona se une a la molécula I, sino también para su glicosilación en el Golgi,
MHC clase I y sirve de nexo para asociarse al transporte efectivo por la vía exocítica y expresión
complejo TAP. Habitualmente 4 complejos MHC en la superficie celular. Así células que carecen
I-Tapasina se unen a un transportador TAP, de de β2m o del transportador TAP, acumulan en el
manera de concentrar el número de moléculas retículo cadenas α MHC o complejos MHC-β2m,
MHC vacías en el lugar de entrada de los péptidos. respectivamente.
Esta molécula, aparte de actuar como chaperona
en el ensamblaje y retención de las MHC I,
probablemente también participa como editora de 7. PROCESAMIENTO DE ANTÍGENOS
péptidos, con una función semejante a lo que EXÓGENOS
realiza la proteína DM en relación a las moléculas
MHC clase II. Se supone además la existencia de Antígenos proteicos exógenos internalizados
un transportador, distinto de TAP, pero dependiente mediante interacción ligando-receptor o en fase fluída
también de ATP, encargado del reflujo retrógado mediante vesículas membranosas (en procesos de
de fragmentos peptídicos desde el retículo al fagocitosis, pinocitosis o endocitosis), serán
citosol, para mantener un bajo nivel de péptidos procesados en un compartimiento acídico celular
en el retículo endoplásmico y favorecer la unión a (fagolisosoma endolisosoma) y los fragmentos
las moléculas MHC, de los fragmentos peptídicos peptídicos allí generados, serán luego asociados a
que presentan mayor afinidad. La glicosilación de una molécula MHC clase II para su transporte y
fragmentos peptídicos en el retículo o su presentación en la superficie celular (figura 9-3).
asociación con una molécula MHC clase I, evitaría Las moléculas MHC clase II son heterodímeros
el reflujo retrógado de péptidos al citosol. glicoproteicos constituidos por una cadena alfa de
Ahora bien, aún cuando el heterodímero TAP 33 kDa y una cadena beta de 28 kDa, sintetizadas
transporta preferentemente fragmentos peptídicos en ribosomas asociados al retículo endoplásmico
de 8 a 10 aminoácidos, ello no impide que péptidos y ensambladas en el lumen del mismo (ver capítulo
de hasta 30 aminoácidos puedan ser eficientemente 8). Al igual que las moléculas de clase I, el
transportados desde el citosol al retículo ensamblaje de las moléculas MHC clase II requiere
187
Sin título-2 187 5/26/06, 10:25 AM

ocurre completamente en el retículo endoplásmico,
mientras el ensamblaje de las moléculas clase II
se realiza en 2 etapas: (a) la primera ocurre en el
retículo endoplásmico e implica la participación
de calnexina para la asociación de las cadenas
MHC alfa y beta entre si y con la invariante Ii. (b)
La segunda etapa del ensamblaje de la molécula
de clase II ocurre en el compartimiento acídico
celular e implica la participación de un
heterodímero proteico denominado molécula DM
(molécula asociada a la región D, de clase II en el
HLA humano), que favorece tanto la digestión
parcial y remoción de la cadena invariante Ii del
bolsillo de la molécula de clase II, como la
asociación de un fragmento peptídico exógeno a
esta molécula MHC.
La proteína Calnexina retendrá en el retículo
endoplásmico las cadena α y β de las moléculas
clase II, si no se logra un correcto ensamblaje del
complejo trimolecular (α-β-Ii). El bajo pH del
compartimiento endocítico es fundamental para el
procesamiento antigénico y el ensamblaje final de
Figura 9-3. Procesamiento de antígenos exógenos y las moléculas clase II. Así, drogas lisosomo-
presentación en el contexto de molécula MHC clase II. En
trópicas (primaquina, cloroquina, monosina,
el retículo endoplásmico las moléculas MHC de clase II son
ensambladas a partir de las cadenas a y b, y la cadena invariante cloruro de amonio) que elevan el pH del
Ii. La asociación de la cadena Ii bloquea el bolsillo peptídico compartimiento endocítico, inhibirán la
de la molécula de clase II, además asegura su transporte a través presentación antigénica en el contexto de
de la vía endocítica al compartimiento acídico celular. Aquí se
moléculas MHC clase II.
realiza el procesamiento de los antígenos exógenos y se realiza
además la digestión parcial de la cadena Ii, dejando el péptido La cadena invariante Ii es una glicoproteína
CLIP alojado en el bolsillo antes citado. La molécula DM que de membrana, no polimórfica, codificada en el
es transportada por la vía endocítica en forma independiente, cromosoma 5 humano y en el cromosoma 18
participa en el desplazamiento de CLIP y en la unión de un
murino. Presenta 4 formas de distinto peso molecu-
fragmento peptídico exógeno al bolsillo MHC de clase II. El
complejo MHC clase II péptico es luego transportado a la lar (31, 33, 41 y 43 kDa) generadas por una
superficie celular para su presentación a un LT CD4+. combinación de procesamiento alternativo del
transcrito primario y el uso de distintos sitios de
iniciación de la síntesis proteica. Todas estas formas
de la cadena invariante Ii poseen un extremo o
la interacción con diversas chaperoninas, entre las dominio carboxiterminal, de 20 aminoácidos, que
que se destaca la denominada cadena invariante se une y bloquea el bolsillo peptídico de clase II
gamma o cadena invariante Ii. La proteína impidiendo así la asociación de péptidos endógenos.
Calnexina y chaperoninas de las familias de Además, en la cola citoplasmática aminoterminal
proteína de shock térmico hsp 70 y hsp 90 presentan una secuencia señal de 30 aminoácidos
favorecen el ensamblaje de las cadena α y β de la que dirige el transporte a la vía endocítica, del
molécula clase II, pero el rol más importante en complejo MHC clase II-Ii, correctamente
este proceso lo desempeña la cadena invariante Ii. ensamblado en el retículo endoplásmico. En
La cadena invariante Ii no sólo favorece el ausencia de la cadena invariante Ii, las moléculas
ensamblaje del heterodímero α-β, sino que MHC clase II pueden eventualmente unir péptidos
también impide que péptidos endógenos puedan endógenos en el retículo endoplásmico, pero su
unirse al bolsillo de las moléculas clase II y desvía transporte y expresión en la superficie celular se
o dirige el transporte del complejo trimolecular hará a través de la vía exocítica, como ocurre con
(alfa-beta-Ii) hacia la vía endocítica celular donde la presentación antigénica en el contexto de
están siendo generados los péptidos exógenos. moléculas MHC clase I.
El ensamblaje de las moléculas MHC clase I La cadena invariante, una vez sintetizada en
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Sin título-2 188 5/26/06, 10:25 AM

el retículo endoplásmico, forma homotrímeros que II associated Ii peptide”) del bolsillo peptídico de
se ensamblarán con 3 heterodímeros α-β de clase las moléculas de clase II y (b) estabilizando los
II. De esta manera, el ensamblaje adecuado de la heterodímeros MHC de clase II vacíos o sin
molécula de clase II en el retículo endoplásmico, péptido. Esta estabilización previene la agregación
implica en realidad la formación de un nonámero y subsecuente degradación que sufren estos
proteico contituído por 3 trímeros (α-β-Ii). El heterodímeros MHC, en ausencia del fragmento
nonámero es entonces dirigido al complejo de Golgi peptídico. De este modo las moléculas DM juegan
y desde aquí el extremo amino terminal de la cadena un rol crucial en la presentación de antígenos
invariante Ii desviará o dirigirá el transporte del exógenos.
complejo al compartimiento acídico o endocítico
celular, denominado MIIC (MHC class II Compart-
ment). El bajo pH y la acción de cisteín proteasas 8. PRESENTACIÓN ALTERNATIVA DE
(principalmente las catepsinas S y L del PÉPTIDOS
compartimiento endocítico), no sólo favorecen la
degradación o procesamiento de los antígenos Péptidos endógenos pueden también
exógenos, sino también la digestión parcial del presentarse en el contexto de moléculas MHC
extremo carboxilo de la cadena invariante Ii. Se clase II. Esto puede explicarse por: (a) péptidos
genera así un fragmento peptídico, que incluye los endógenos compiten con la cadena invariante Ii
residuos aminoacídicos 81 al 104 de Ii, denominado por el bolsillo de unión del heterodímero de clase
CLIP ("Class II-associated invariant-chain pep- I, (b) péptidos endógenos, generados en el
tide"), que permanecerá unido al bolsillo del citoplasma, pueden translocarse al compartimiento
heterodímero de clase II. El heterodímero proteico acídico celular, para su asociación con moléculas
DM, anteriormente mencionado, estaría involu- de clase II, (c) proteínas endógenas que han sido
crado en la liberación del péptido CLIP del bolsillo secretadas o que se expresan en la membrana
de las moléculas MHC de clase II y en la edición celular, pueden ser internalizadas y luego
de los fragmentos peptídicos que se unirán a la procesadas en el compartimiento acídico celular
molélula MHC. En ausencia del heterodímero DM, y (d) autofagia de componentes celulares a partir
moléculas de clase II conteniendo el péptido CLIP del retículo endoplásmico y su transporte, por vía
se expresarán en la superficie celular. endocítica, al compartimiento acídico celular.
La molécula DM humana (denominada De manera alternativa, péptidos exógenos
molécula M en el ratón) está codificada por genes pueden presentarse asociados a moléculas clase I.
de la región de clase II del Complejo Principal de Este fenómeno ocurre cuando fragmentos péptidicos
Histocompatibilidad (genes HLA-DMA y HLA- o proteínas exógenas escapan del compartimiento
DMB en humanos y, genes Ma, Mb1 y Mb2 en endocítico DIC y luego de su degradación por la
ratón). Su síntesis se realiza en ribosomas maquinaria citosólica de procesamiento antigénico,
asociados al retículo endoplásmico, pero su son translocados al retículo endoplásmico para su
ensamblaje y transporte final al compartimiento asociación a moléculas MHC clase I. Algunas
endocítico celular, se realizaría en forma bacterias intracelulares secretan lisinas de membrana
independiente del complejo molécula MHC clase que favorecerían el escape de antígenos o fragmentos
II-cadena invariante Ii. peptídicos exógenos desde el compartimiento
Los péptidos derivados de proteínas endocítico al citoplasma de la célula presentadora
endógenas son altamente promiscuos y por lo tanto de antígeno.
capaces de ser presentados por una gran variedad
de moléculas MHC de clase II. De este modo las
moléculas de clase II pueden unirse a un rango LECTURAS SUGERIDAS
más amplio de péptidos en el compartimiento
endocítico, que las moléculas MHC de clase I, en Amigorena, S.; Webster P., Drake, J.; Newcomb,
el retículo endoplásmico rugoso. Es en el J.; Cresswell, P. and Mellman I., “Invariant chain
compartimiento endocítico donde se encuentra la cleavage and peptide loading in MHC class II
molécula DM, que actúa editor peptídico, vesicles”. J. Exp. Med. 181:1729-1741, 1995.
favoreciendo la presentación de péptidos de mayor
afinidad y estabilidad. Las moléculas DM parecen
funcionar: (a) removiendo el péptido CLIP (“Class
189
Sin título-2 189 5/26/06, 10:25 AM

Brocke, P., Garbi, N., Momburg, F. and Rammensee, H.G., “Chemistry of peptides asso-
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190
Sin título-2 190 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 10
ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS
Javier Puente P.
1. Introducción
2. Activación de los linfocitos T
2.1. Relación estructura-función del
complejo TCR
2.2. Secuencias de activación en el
TCR-CD3 y cadenas ξ
2.3. Proteínas tirosina quinasas en
la activación de los LT
2.4. Proteínas adaptadoras en la acti-
vación de los linfocitos
2.5. Modelo general de activación de
los LT
3. Activación de los linfocitos B
3.1. Secuencias de activación en el
BCR y sub-unidades asociadas
3.2. Modelo general de activación de
los LB
4. Activación de las células NK
4.1. Modelo de activación de las cé-
lulas NK
191
Sin título-2 191 5/26/06, 10:25 AM

192
Sin título-2 192 5/26/06, 10:25 AM

RESUMEN
El reconocimiento de los antígenos por parte de los receptores específicos de los linfocitos
B y T, BCR y TCR respectivamente, es el evento que inicia la etapa de activación. El TCR (αβ),
une específicamente al antígeno peptídico procesado ligado a las moléculas de MHC (clase I o
II). El heterodímero αβ de localización mayoritariamente extracelular, está asociado en forma no
covalente a un complejo de proteínas de membrana denominado CD3-ζ cuyos componentes
están localizados mayoritariamente en el extremo citoplasmático. Participan en la unión además
los co-receptores CD4 o CD8, que se unen a determinantes no polimórficos de los MHC clase II
y clase I respectivamente. Una de las principales características estructurales de los componentes
del complejo CD3-ζ es la presencia de secuencias aminoacídicas que contienen residuos de
tirosina (ITAM) que pueden ser fosforilados por PTK. Esta acción de las PTK ocurre sólo bajo
las condiciones de la interacción TCR, y estructuras asociadas, con el antígeno. Las secuencias
ITAM están presentes en todas las sub-unidades del complejo CD3-ζ y estando fosforiladas
pueden interactuar con otras secuencias aminoacídicas del tipo SH2 presentes en diversas PTK
citoplasmáticas como Zap-70, lo que permite una masiva fosforilación de proteínas adaptadoras
citosólicas y de membrana y de enzimas. Las enzimas fosforiladas se activan y en estas condicio-
nes fosforilan a otros sustratos celulares propagando la señal, proceso que se encarga de asociar
el fenómeno de membrana con el citosol y el núcleo celular generando los cambios característi-
cos en la expresión génica. Una de las proteínas activadas por fosforilación es la fosfolipasa Cγ1
o Cγ2 que permite la generación de los segundos mensajeros IP3, Ca2+, DAG y la posterior acti-
vación de determinadas PK-C; estos primeros eventos son fundamentales para la respuesta
proliferativa y efectora del respectivo LT. Otra interacción importante ocurre entre CD28 (LT) :
B7.1, B7.2 (CPA); esta interacción aporta una segunda señal prácticamente obligatoria para una
óptima activación de los LT.
El BCR, estructuralmente una Ig de membrana de localización principalmente en el extre-
mo extracelular, se encuentra asociado a sub-unidades (Igα, Igβ) que poseen secuencias ITAM.
La interacción del antígeno con el BCR y estructuras asociadas, que también poseen este tipo de
secuencias permite el traspaso de la señal hacia el interior celular. Para ello como en el caso del
TCR, el LB posee PTK unidas a membrana y citosólicas como la p72syk que pueden interactuar
con los dominios ITAM fosforilados a través de las secuencias SH2 y otro tipo de quinasas como
la PI-3 quinasa que puede interactuar con las secuencias del tipo SH2 y SH3. Participan también
proteínas adaptadoras citosólicas que permiten agrupar una gran diversidad de proteínas y enzimas
en la superficie celular. Una de las enzimas activadas por fosforilación unida a una proteína
adaptadora, es la FL-Cγ que cataliza la hidrólisis del PIP2, la generación de los segundos mensa-
jeros y la activación de la PK-C y calcineurina en forma similar a los LT. Estos eventos iniciales
permiten la activación de otras señales que actúan a nivel del núcleo celular promoviendo los
cambios en la expresión genética típicos de este tipo de linfocitos.
La activación de las células NK, tanto la ADCC como la citotoxicidad natural, ocurre a
través de la interacción de receptores como FcγIIIR (CD16) con la fracción Fc de inmunoglobulinas
o de los receptores NCR con sus ligandos, resulta también en una propagación de la señal a través
de dominios ITAM fosforilados. En las células NK se han descrito también PTK de la familia src
y syk y proteínas adaptadoras de membrana y citosólicas. La activación de los receptores CD16
y NCR, ambos asociados a sub-unidades de tipo ζ y DAP12 presentan fosforilación de secuen-
cias ITAM y la generación de los mismos segundos mensajeros ya señalados. La descripción de
un gran conjunto de receptores de inhibición, de la familia de las inmunoglobulinas (KIR) y
lectinas (CD94-NKG2A) que reconocen segmentos conservados de los complejos MHC-I, re-
presentan uno de los aspectos fundamentales del control de su funcionalidad.
193
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1. INTRODUCCIÓN como tanto el BCR y TCR en conjunto con sus
moléculas asociadas, que no poseen actividad
Los linfocitos B y T, pertenecientes a la res- enzimática transmiten una señal hacia el inte-
puesta inmunológica específica, tienen la capa- rior celular; cómo diversas enzimas proteína
cidad de reconocer y discriminar, entre una vasta quinasas, bajo las determinadas condiciones de
diversidad de estructuras, a aquellas que son la interacción del antígeno con su receptor, son
agentes extraños para el organismo vertebrado, capaces de interaccionar con los extremos
especialmente de carácter infeccioso. Para lle- citosólicos de las sub-unidades de las molécu-
var a cabo estas funciones poseen receptores al- las asociadas y activarse fosforilando una serie
tamente específicos en su superficie para el re- de sustratos de membrana e intracelulares, es-
conocimiento de los antígenos: el receptor de pecialmente enzimas y proteínas adaptadoras,
antígenos de los linfocitos B (BCR) y el recep- que finalmente van a permitir la comunicación
tor de antígenos de los linfocitos T (TCR). Cada con el núcleo celular.
precursor linfocitario reordena exclusivamente Los linfocitos B y T tienen receptores
sus genes únicos para estos receptores y los oligoméricos antigénicos que reconocen funda-
linfocitos maduros permanecen en estado mentalmente distintas formas de los antígenos. Los
quiescente en la ausencia de antígeno. El con- LB para protección de patógenos extracelulares;
tacto del antígeno específico con estos linfocitos sus receptores típicamente reconocen formas na-
induce en éstas células un estado denominado tivas o desnaturadas de proteínas y carbohidratos
activación, que implica su expansión en núme- ya sea solubles, particuladas o unidas a células.
ro, y en el caso de los LB la producción de En contraste los LT protegen contra patógenos
anticuerpos y de los LT la adquisición de fun- intracelulares, el TCR reconoce péptidos
ciones efectoras tales como citotoxicidad y se- antigénicos proteolíticamente procesados (8-15
creción de mediadores de la respuesta inmune residuos) unidos a moléculas del Complejo Prin-
denominadas citoquinas. cipal de Histocompatibilidad (MHC) de la célula
Además del receptor específico, intervienen presentadora de antígenos (CPA). Sin embargo,
otras moléculas de superficie denominadas co-rela transducción de señales que resulta de la
ceptores, moléculas de adhesión, receptores de mo- interacción de cada receptor con su antígeno son
léculas co-estimuladoras; participando no sola- muy similares.
mente en la estabilización de la interacción Las células NK, pertenecientes a la respues-
antígeno-receptor, sino también en la generación ta inmunológica innata, pueden también recono-
de las señales bioquímicas características del pro- cer ligandos. Por ejemplo el receptor CD16
ceso de activación o de inhibición de los linfocitos. (RFcγIII) de las células NK une al fragmento Fc
La especificidad de esta respuesta está influida de inmunoglobulina G, y de esta forma las células
también por la localización de los mediadores par- se activan utilizando mecanismos bioquímicos si-
ticipantes en zonas lipídicas específicas de la mem- milares a los de los LB y LT.
brana plasmática. Los tres grandes sistemas de integración de
Aun cuando entonces, la respuesta a un los organismos pluricelulares complejos son los
antígeno es comúnmente denominada activa- sistemas: endocrino, nervioso e inmunológico,
ción, este término refleja toda la complejidad cada uno de ellos responde a una variedad de se-
del proceso, que abarca desde la generación de ñales o mensajes característicos. Sin embargo,
las primeras señales bioquímicas, transducción los mecanismos bioquímico-moleculares
de señales y la producción de segundos mensa- involucrados son universales; en este caso los re-
jeros, hasta cambios en la expresión genética y ceptores de membrana (BCR y TCR), al
la morfología y funcionalidad de los linfocitos. interaccionar con el antígeno y el receptor CD16
En el presente capítulo se analizarán aquellos de las células NK al interactuar con su ligando,
aspectos estructurales de los receptores y de- activan vías mediadas por proteína quinasas,
más moléculas accesorias involucradas en el quinasas de lípidos, proteínas adaptadoras de
contacto con el antígeno respectivo y cómo esta membrana y citosólicas permitiendo la hidrólisis
situación inicia la serie de eventos bioquímicos del fosfolípido de membrana fosfatidil-inositol
que se encargan de la inter-comunicación entre (PIP2) a través de una isoenzima de la fosfolipasa
un fenómeno de membrana con el citosol y nú- C y la generación de los segundos mensajeros,
cleo celular. Para ello es indispensable aclarar inositol-trisfosfato (IP3), diacilglicerol (DAG) y
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Sin título-2 194 5/26/06, 10:25 AM

Ca2+. Estos son también segundos mensajeros de estimuladoras como CD28 (CTLA-4), ICOS,
la acción de hormonas y de factores de crecimien- CD40L, 4-1BB, OX40; muchas de éstas son in-
to (sistema endocrino) y neurotrasmisores (sis- ducidas post-contacto con la CPA y moléculas de
tema nervioso). adhesión como CD2, CD5 y LFA-1 (figura 10-2).
Este evento de unión entonces le permite, durante
2. ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS T el desarrollo de las células T, entrar a selección
positiva o bien a apoptosis, entrar al ciclo celular,
2.1. Relación estructura-función del comple- producir citoquinas o adquirir una función efectora
jo TCR. El inmuno-receptor TCR es un citolítica. Por lo tanto, todas las responsabilida-
oligómero complejo compuesto de los produc- des de las células T están radicadas en su TCR y
tos de seis genes (figura 10-1) (ver capítulo 7), en las estructuras accesorias. La interacción esta-
todos ellos requeridos para una eficiente expre- ble entre el TCR y el antígeno presentado ha sido
sión en la membrana plasmática. Las cadenas α denominada también “sinapsis inmunológica”, que
y β forman la sub-unidad de unión al ligando, implica tanto la interacción como la propagación
responsable del reconocimiento de un péptido de una señal hacia el interior de la célula.
antigénico unido a moléculas de los complejos
mayores de histocompatibilidad clase I o clase
II de la célula presentadora, propagándose una
respuesta que implica una interacción cooperati-
va entre el TCR, el complejo CD3 y las sub-uni-
dades ζ (que pueden existir como dímeros o
heterodímeros). Tanto el receptor como diversas
proteínas que participan en la activación de los
LT, se encuentran ubicadas en zonas lipídicas
específicas de la membrana plasmática (ZLE),
denominadas también GEM (micro-dominios
enriquecidos en glico-lípidos), cuya composición
bioquímica es diferente a la del resto de la mem- Figura 10-2. Representación esquemática de algunas de las
brana. Estos dominios están enriquecidos en interacciones moleculares que ocurren durante el recono-
cimiento antigénico en la interfase de un LT y una CPA. En
colesterol y esfingolípidos y pueden ser experi-
este caso es un LT CD4, en el que las moléculas CD40L y
mentalmente visualizados en la célula y purifi- CTLA-4 son inducidas por el contacto con la CPA, las restan-
cados para su estudio in vitro. tes moléculas de superficie del LT son constitutivas.
Figura 10-1. Estructura de los receptores de los linfocitos T, B y NK. TCR, BCR, FcγIIIR (CD16), NKp46 (NCR) y de los
receptores de inhibición CD94/NKG2A y KIR2DL4 y de sus sub-unidades. El número de las sub-unidades y sus asociaciones
puede variar de acuerdo a la función celular. Las líneas interconectoras representan puentes disúlfuro. Los rectángulos negros
representan secuencias ITAM (motivos o secuencias de activación basados en tirosina del inmuno-receptor) y los rectángulos
achurados, secuencias ITIM (motivos o secuencias de inhibición basados en tirosina del inmuno-receptor).
195
Sin título-2 195 5/26/06, 10:25 AM

2.2. Secuencias de activación en el TCR-CD3 y Tabla 10-1. Secuencias ITAM
cadenas ζ. Como se puede apreciar de la figura
10-1, las sub-unidades α y β, responsables de la hζ1 YNE LNLGRR E EYDVL
unión al antígeno, tienen una estructura
mayoritariamente extra-citoplasmática, lo que hCD3γ YQP LKDR EDDQY S HL
avala muy bién la función de unión. Sin embargo, hCD3ε YE P 1 RKGQRDLY S GL
ya a nivel estructural es posible descartarles una hCD3γ YQP L RDRDDAQY S HL
función importante en cuanto a la transducción de mIgα Y E G L N L D D C S MY E D I
la señal, encontrándose por lo tanto ambas fun- mIgβ YEGLNYDQTATYED I
ciones en forma separada. La función de
transducción de señales la cumplen el complejo
CD3 y las sub-unidades ζ, que tienen una parte
importante de su estructura en la zona 2.3. Proteínas tirosina quinasas en la activación
citoplasmática, especialmente las sub-unidades ζ. de los LT. Hasta ahora se han descrito tres fami-
La relevancia de CD3 y cadenas ζ ha quedado de lias diferentes de proteínas tirosina kinasas (Src,
manifiesto al usar mutantes que carecen de algu- Syk y Tec) en la activación de los LT. Las PTK no
nas de estas sub-unidades con la consecuente al- forman parte del receptor TCR ni de sus sub-uni-
teración en la activación de los LT. Analizando dades asociadas. Dos de las más importantes PTKs
más detalladamente ahora la estructura primaria asociadas a este receptor pertenecen a la familia
del complejo CD3-ζ, se pudo determinar que pode proteínas src. La oncoproteína viral v- src fue
seen secuencias de consenso en todas las sub-uni- la primera PTK descrita; identificándose posterior-
dades, encontrándose incluso repetidas en las sub- mente una amplia variedad de enzimas en todo
unidades ζ. Estas secuencias de consenso que in- tipo de organismos que comparten un alto grado
cluyen dos tirosinas son: YXX(L/I)X(7-8)YXX(L/ de similitud estructural con esta oncoproteína, in-
I), del código de aminoácidos de una letra, siendo cluyendo dominios estructurales y regulatorios.
X cualquier aminoácido. Estas secuencias (tabla Estructuralmente las PTK de la familia src con-
10-1), se encuentran en muchas otras proteínas con sisten de uno o más sitios de acilación en el extre-
características similares a las descritas, no sopor- mo amino-terminal, requeridos para su localiza-
tan mutaciones y constituyen en la actualidad un ción en la membrana plasmática en la zona lipídica
conocimiento clave para el entendimiento de la específica; un dominio único (que define a cada
activación de los linfocitos. La nomenclatura para uno de sus miembros) una homología src SH3,
definirlas se basa en que constituyen una secuen- dominio que tiene una alta afinidad por secuen-
cia o motivo de activación de reconocimiento del cias aminoacídicas ricas en prolina; una homología
antígeno, secuencia que posee residuos de tirosina src SH2, dominio con una alta afinidad por se-
y leucina (o isoleucina) en posiciones caracterís- cuencias aminoacídicas que contengan tirosinas
ticas. En la actualidad se conocen estas secuen- fosforiladas; un dominio catalítico, responsable de
cias como ITAM (motivo de activación basado en la actividad enzimática fosforilante y una secuen-
tirosinas del inmuno-receptor). Un primer hecho cia regulatoria en el extremo carboxilo terminal
relevante de los ITAM, es que son fosforilados (figura 10-3a). Las PTK de la familia src que en
los residuos de tirosina a consecuencia de la unión forma más consistente aparecen interviniendo en
del antígeno específico al TCR, situación que tem- el proceso de activación de los LT son: la deno-
poralmente ocurre en el orden de unos pocos se- minada fyn, de 59 kDa, (p59 fyn) posee dos
gundos (5 a 30 s); mutantes en tirosina son inacti- isoenzimas una presente en el sistema inmune y
vos. En segundo lugar ni el TCR ni ninguna de las otra en cerebro y la de 56 kDa (p56lck) que se ex-
sub-unidades hasta ahora analizadas posee una presa exclusivamente en el sistema inmune (figu-
actividad fosforilante en tirosina, típica de las ra 10-3a).
enzimas proteínas tirosina quinasas (PTK) por lo Uno de los hechos más importantes en la par-
que deben actuar PTKs celulares específicas, sien- ticipación de la p56lck fue la demostración de su
do el proceso de la fosforilación un evento deter- unión no covalente a los dominios citoplasmáticos
minante en la secuencia de activación, pues ade- de los co-receptores de membrana CD4 o CD8.
más de las sub-unidades descritas, se fosforilan, Esta directa interacción obviamente sugiere un im-
río abajo, una serie de otras proteínas celulares, portante papel de esta enzima en la transducción
especialmente en residuos de tirosina. de señales mediada por el TCR y numerosas evi-
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cia el plegamiento de la proteína lo que le impide
su acción catalítica. Para mantener esta situación,
existen por un lado una PTK, la Csk, que se en-
carga de mantener siempre fosforilado ese sitio
regulador y una fosfoproteína fosfatasa específi-
ca para residuos de tirosina fosforilados, la CD45.
Esta enzima provoca la hidrólisis de ese residuo
de fosfotirosina y la transforma en una PTK acti-
va. La enzima CD45 se encuentra ampliamente
distribuida en el sistema inmune.
La PTK p59fyn también puede encontrarse
asociada directamente al TCR-CD3-ζ, específi-
camente se la ha encontrado asociada en forma no
covalente a las sub-unidades ζ y componentes
del CD3. Presenta también un rápido y transiente
aumento en su actividad en respuesta a la
estimulación del TCR y células mutantes en esta
Figura 10-3. Dominios estructurales de proteínas que par-
ticipan en transducción de señales en los linfocitos. A) Do- quinasa presentan una significativa reducción en
minios estructurales de dos familias de PTK que participan en el proceso de activación y proliferación celular lo
la activación de los linfocitos T y B. Desde el extremo amino que sugiere un importante papel de esta enzima
hacia el C terminal: U, dominio único; M, modificación por
en la transducción de señales en el linfocito.
ácido mirístico; SH3 y SH2 homologías src 3 y 2, respectiva-
mente; K, dominio quinásico; R, dominio regulado; Y, residuo El descubrimiento de otras PTK fuertemen-
de tirosina. Los sitios con residuos de tirosina fosforilables del te asociadas al TCR sólo de células T estimula-
N al C terminal pueden ser hasta tres: Y en sitio inter-domi- das, abrió la posibilidad de la existencia de una
nios (SH2 y K) fosforilada, permite asociación a otras proteí-
asociación rápida y transiente de proteínas de la
nas; Y fosforilada en sitio catalítico (K) estimula su actividad
e Y fosforilada en el sitio regulador R, bloquea su actividad. membrana con proteínas citosólicas. La PTK aso-
B) Dominios estructurales de proteínas adaptadoras de mem- ciada a la sub-unidad ζ, resultó ser una proteína
brana y citosólicas: LAT, Grb2 y SLP-76; TM, dominio trans- de 70 kDa, por lo que fue denominada ZAP-70
membrana; PY, dominio fosforilado en tirosina; PPPP, domi-
(proteína asociada a la sub-unidad zeta de 70 kDa).
nio rico en prolina.
También se le ha encontrado asociada a sub-uni-
dades CD3 y se encuentra expresada exclusiva-
mente en células T y células NK. Nuevamente sus
dencias experimentales así lo confirman: células propiedades se explican muy bien por su estruc-
T en respuesta al antígeno específico responden tura, es una enzima citosólica, que presenta dos
con un rápido y transiente aumento en la activi- homologías SH2 hacia el extremo amino-termi-
dad de esta enzima; ratones mutantes en esta en- nal de la proteína y un dominio catalítico con ac-
zima, presentan un profundo defecto en el desa- tividad de tirosina quinasa (figura 10-3a). La en-
rrollo de las células T, estudios in vitro con la zima ZAP-70 es altamente homóloga a la PTK
línea celular T Jurkat mutante en esta PTK de- syk de 72 kDa muy abundante en los linfocitos B
muestran que prácticamente no se produce el pro- y células mieloides, enzima que puede asociarse
ceso de activación en respuesta a los estímulos al BCR postulándose la función de nexo entre los
correspondientes. Otra característica extraordina- procesos de membrana y citosólico/nucleares en
riamente interesante de la p56lck también reside en ese tipo de linfocitos. Tanto Zap-70 como syk per-
su estructura. Como se puede apreciar de la figura tenecen a la familia de PTK syk. La Zap-70 es
10-3a, la enzima posee una homología SH2 y un expresada a lo largo de todo el desarrollo de los
extremo regulador C-terminal en que un residuo linfocitos T, en cambio la syk aparece ligada más
de tirosina puede encontrarse fosforilado y de he- al desarrollo temprano de los linfocitos, siendo su
cho esa situación es la observada en el estado de expresión mucho menor en los linfocitos T madu-
reposo no estimulado. De esta forma se encuentra ros. Ambas PTK tienen, a través de sus dominios
en la misma estructura proteica la posibilidad de SH2, una alta afinidad por las secuencias ITAM
interacción entre una secuencia SH2 y una secuen- fosforiladas. Más recientemente se ha incorpora-
cia que posee una tirosina fosforilable; el hecho do una nueva familia de PTK: Tec, cuyos princi-
de encontrarse fosforilada trae como consecuen- pales representantes son Tec, Ikt y Txk; si bien se
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Sin título-2 197 5/26/06, 10:25 AM

ha informado un cierto grado de redundancia en la activación y maduración. Especialmente rele-
su funcionalidad utilizando ratones transgénicos, vantes son las mutaciones en las cisteinas que su-
su principal función en la activación es la fren palmitoilación, en este caso LAT no puede
fosforilación de la FL-Cγ y por lo tanto en el con- ubicarse en la ZLE; aún cuando no se altera su
trol de los niveles de Ca2+. capacidad de unirse a la membrana, pierde su pro-
piedad de ser fosforilada y de participar como un
2.4. Proteínas adaptadoras en la activación de regulador en la transducción de señales iniciada
los linfocitos. El conocimiento de otro conjunto por el TCR. Ratones carentes del gen LAT, LAT-/-
de proteínas, denominadas proteínas adaptadoras, , sufren una completa alteración en la maduración
en la activación de los linfocitos ha permitido una de los timocitos. La proteína adaptadora SLP-76
comprensión mayor de este fenómeno. Las pro- (proteína fosforilable de los leucocitos y que po-
teínas adaptadoras se caracterizan por carecer de see dominios SH2, es una proteína citosólica 76
actividad catalítica, al menos hasta ahora conoci- kDa), específica de las células del sistema
da, y por tener la propiedad de dirigir interacciones hematopoyético; se encuentra en los linfocitos T,
específicas proteína-proteína y proteína-lípido. Se células NK, monocitos y megacariocitos, pero no
ha demostrado la participación coordinada de este en los linfocitos B. De acuerdo a su estructura
tipo de proteínas en conjunto con los demás even- posee dominios ricos en prolina, P-Y y SH2, lo
tos bioquímicos del proceso de activación de los que le permite una amplia capacidad de interacción
linfocitos. Algunos de las proteínas adaptadoras con otras proteínas. Una vez fosforilada se puede
más relevantes para los LT aparecen en la figura unir a las proteínas adaptadoras vav, Gads y a la
10-3b; se pueden apreciar algunos de los domi- PTK Ikt de la familia Tec. Al igual que en el caso
nios estructurales que median las interacciones de LAT, ratones mutantes en SLP-76 por
moleculares, además de los dominios SH2 y SH3 recombinación homóloga, provocan una comple-
ya señalados, aparecen otros como PY (sitio ta ausencia de LT en la periferia, el resultado es
fosforilable en tirosina) y PPPP (sitio rico en mas severo que la carencia de otras proteínas
prolina). Las proteínas adaptadoras pueden ser ya adaptadoras o de cualquiera de las PTK antes
sea de membrana o citosólicas, dos de las más re- mencionadas, poniendo en evidencia la importan-
presentativas de cada una de éstas son las proteí- cia de esta proteína adaptadora en los linfocitos T.
nas LAT y SLP-76. La proteína adaptadora de Como se ha podido apreciar, hasta este pun-
membrana LAT, descrita inicialmente en células to se han descrito proteínas participantes en el pro-
Jurkat y luego en linfocitos T, células NK plaquetas ceso de activación de los linfocitos que de una u
y monocitos, pero no en los linfocitos B, repre- otra manera están ubicadas en la membrana
senta el nexo de activación de los linfocitos T en- plasmática, ya sea como proteínas integrales de
tre los eventos mediados por el TCR y las PTK ésta o bien asociadas a las sub-unidades o co-
iniciales, permitiendo explicar como una gran va- receptores. Las preguntas que surgen entonces son
riedad de proteínas y enzimas se pueden asociar a ¿cómo se comunican estas estructuras con el
la membrana plasmática. LAT es una proteína de citosol y con el núcleo celular?, ¿Si bien existen
membrana, posee un sitio transmembrana que le enzimas proteína quinasas, cómo éstas
permite esta localización; posee además dos resi- interaccionan con sus sustratos citosólicos?, ¿Qué
duos de cisteina cercanos al sitio transmembrana. evento les indica a los sustratos proteicos
Estos residuos pueden ser modificados por citosólicos que se asocien en un momento deter-
palmitoilación lo que le permite a LAT, bajo esas minado a la membrana y eventualmente se modi-
condiciones, ubicarse específicamente en el área fiquen por fosforilación?. El siguiente modelo de
de las ZLE. Como posee además residuos de activación de los LT permitirá responder algunas
tirosina fosforilables (P-Y), una vez fosforilados de estas interrogantes.
estos sitios pueden interactuar con proteínas que
posean segmentos SH2 y reclutarlas a la membra- 2.5 Modelo general de activación de los LT.
na plasmática. Esto ocurre con las enzimas Manteniendo presente a la activación de los
fosfolipasa C (FL-C γ1), fosfatidil-inositol-3- linfocitos como un proceso altamente complejo,
quinasa (PI3-quinasa) y las proteínas adaptadoras podemos con los elementos proteicos estructura-
Grb2, Gads y SLP-76, entre otras. Tanto células les y enzimáticos señalados visualizar un modelo
mutantes en LAT, ya sea en tirosina, cisteína, o simple de la activación de los LT como el de la
deficientes en su expresión, sufren trastornos en figura 10-4 (a, b). La figura 10-4a indica la situa-
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Sin título-2 198 5/26/06, 10:25 AM

ción basal, previa a la interacción con el antígeno.
Indudablemente la especificidad de la respuesta
está dada por el reconocimiento por parte del TCR
del péptido antigénico presentado por el MHC de
la célula presentadora. Producida esta situación
(Figura 10-4b), quedan los co-receptores CD4 o
CD8 dependiendo del tipo de LT, topográficamente
en posición de interactuar con la misma molécula
de MHC pero en una región diferente a la de unión
al TCR. Es decir CD4 o CD8 también pueden unir-
se al MHC, a un segmento no polimórfico, pero
ese evento ocurre solamente en esta altamente res-
tringida condición. Bajo estas condiciones la
p56lck, unida al co-receptor puede quedar ahora
muy próxima a los diversos ITAM de las sub-uni-
dades CD3-ζ, produciéndose la fosforilación ma-
siva de estas secuencias. De este modo las molé-
culas co-receptoras, CD4/CD8, hacen a los
péptidos antigénicos unidos a las moléculas de
MHC, activadores mucho más eficientes de las
células T comparados a los ligandos que se unen
directamente al TCR. Esta función de fosforilación
también la pueden efectuar la PTK p59 fyn ,
postulándose en este caso una activación de la
enzima mediada por los cambios
conformacionales siguientes a la interacción del
TCR con el antígeno. Una vez generados ITAM
fosforilados, puede entrar ahora en acción una PTK Figura 10-4. Mecanismo básico de activación de los LT. a)
Tipos celulares participantes: LT que posee el complejo TCR-
como la ZAP-70, pues se satisfacen los requeri- CD3-ζ, co-receptores CD4 o CD8, CD45 y enzimas proteína
mientos para una interacción efectiva, es decir la quinasas PTK intracelulares. La CPA, que posee la molécula
presencia de homologías SH2 (ZAP-70) y de sede MHC (clase I o II) y el péptido antigénico. b) Interacción
cuencias fosforiladas en tirosina (ITAM de las sub- entre el péptido antigénico presentado y el TCR que inicia la
serie de eventos de asociación, activación y fosforilación en
unidades CD3ζ). Estando ahora unida, puede a su que participan múltiples proteínas celulares como PTK, PK-
vez ser fosforilada por las PTK de membrana ya C, fosfo-proteína fosfatasas, proteínas que poseen ITAM, pro-
mencionadas y de esta forma activarse y fosforilar teínas adaptadoras, que culmina con la generación de segun-
otros sustratos celulares propagando la respuesta dos mensajeros y traspaso de la información al núcleo celular.
El color azul de la membrana indica la zona lipídica específica
o bien por el hecho de estar fosforilada crear nue- (ZLE). Los rectángulos negros de las sub-unidades del TCR
vos sitios de reclutamiento de proteínas que po- corresponden a los segmentos ITAM, figura 10-4 a y b, los
sean secuencias SH2. Enzimas como la ZAP-70 círculos plomos adyacentes a las secuencias ITAM y también
pueden actuar de una manera pivotal, dependien- encontrados en otras proteínas, corresponden a la fosforilación
de esos segmentos (figura 10-4b); en el caso de las enzimas y
do del estado del linfocito; en reposo, ubicada en proteínas paritcipantes, los cuadrados verdes corresponden a
el citosol; en estado activado, ligada a la membra- dominios SH3, y los óvalos amarillos a dominios SH2.
na permitiendo, en conjunto con otras enzimas
activadas, el traspaso de la información hacia el
interior celular.
La localización de múltiples proteínas en la la acumulación de éstas a nivel de la membrana
zona lipídica específica durante la activación de plasmática de los LT. Entre las proteínas asocia-
los linfocitos aparece como un requerimiento das están las isoenzimas de la fosfolipasa C (FL-
crucial. La presencia masiva en esta zona, duran- C) del tipo γ1 o γ2, la PI3-quinasa y la proteína
te la activación, de la proteína adaptadora LAT, adaptadora Grb2 que inicia la vía de activación de
permite que sea fosforilada por Zap-70, lo que a ras. El desdoblamiento del PIP 2 (fosfatidil-
su vez permite la asociación con diversas proteí- inositol[4,5]bisfosfato), formando los productos
nas adaptadoras y con enzimas explicando de paso IP3 (inositol[1,4,5]trisfosfato) y DAG (diacil-gli-
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cerol) por parte de la FL-C es un hecho amplia- mación e inhibiendo por lo tanto el proceso de
mente descrito en la literatura, este tipo de enzimas activación de los LT. Este es uno de los pocos ejem-
puede ser activado ya sea por proteínas de tipo G, plos directos que muestran la conexión entre la
la isoenzima FL-Cβ; o por fosforilación en resi- membrana y el núcleo celular.
duos de tirosina, como es el caso de las isoenzimas La participación de la proteína ras, que se
FL-Cγ. En el proceso de activación de los LT se sabe inicia una vía importante en la activación de
ha observado hasta ahora, la participación sola- los LT, es insensible a la acción de CsA. La pro-
mente de isoenzimas del tipo Cγ. Un análisis muy teína ras (21 kDa) es una de las típicas proteínas
somero de la estructura de estas últimas, nos reque unen nucleótidos de guanina, GDP en el esta-
vela además de la existencia de secuencias que do inactivo y GTP en el estado activo. La
pueden ser fosforiladas, la existencia de secuen- estimulación del TCR induce una marcada y rápi-
cias tipo SH2, que le permiten por lo tanto da activación de ras que se manifiesta por su es-
interactuar con secuencias fosforiladas (en este tado de unión a GTP. Esta activación se inicia a
caso de LAT), y de esta manera formar parte de la través de la interacción de Grb2 con LAT
vía de activación. La FL-Cγ1 en estas condicio- fosforilado, Grb2 puede interactuar con otras pro-
nes es activada por fosforilación a través de la PTK teínas adaptadoras y con proteínas intercam-
Ikt. La FL-Cγ1 cataliza la hidrólisis del fosfolípido biadoras de guanina (Sos) que permiten la unión
de membrana PIP2 generando los segundos men- de GTP a ras. Ras-GTP activa a la Raf-quinasa
sajeros IP3 y DAG. Estos segundos mensajeros, con la cual se inicia la activación secuencial de
inducidos a partir del TCR, son los responsables la cascada de las MAP-quinasas, vía también fun-
del muy rápido y persistente aumento en el Ca2+ damental en la activación de los LT. La proteína
citosólico y de la activación de la enzima pivotal adaptadora SLP-76 es también fosforilada por
proteína quinasa C de la cual existen más de una Zap-70, puede interactuar con otras proteínas
docena de isoenzimas, siendo las más importan- como la PTK Ikt y con Gads. La Ikt en esa posi-
tes en los LT justamente las dependientes de Ca2+ ción activa a la FL-Cγ por fosforilación y Gads,
y DAG (isoenzimas α y β). Las PK-C activadas actuando como puente, le permite interactuar con
pueden actuar fosforilando, en serina/treonina, una LAT. Como se puede apreciar entonces estas pro-
serie de sustratos proteicos propagando de este teínas, LAT y SLP-76, actúan como andamios
modo la señal. La enzima PI 3-quinasa, también temporales que pueden reclutar una gran canti-
se asocia a LAT fosforilado, y genera a partir del dad de proteínas en la superficie celular permi-
del PIP 2 el producto PIP 3 (fosfatidilinosi- tiéndoles activarse a través de la interacción pro-
tol[3,4,5]trisfosfato) que es un activador de la PK- teína-proteína o a través de la fosforilación y de
Cζ, reforzando el papel de estas isoenzimas. El esta forma engranar toda la maquinaria
aumento del Ca2+ intracelular y activación de la bioquímica requerida en la transducción de se-
PK-C son eventos claves en la respuesta tanto de ñales.
los linfocitos T y B. La elevación del Ca 2+ Como resultado del proceso anterior, se acti-
intracelular además de activar directamente a van diferentes vías: catalizadas por diversas fa-
enzimas, conduce a la interacción de este metal milias de PTK, isoenzimas de PK-C, MAP-
bivalente con la proteína moduladora dependien- kinasas, calcineurina; lo que trae como consecuen-
te de calcio, denominada calmodulina; el comple- cia: a) cambios en el citoesqueleto, polimerización
jo calmodulina calcio produce por interacción de actina y la reorientación del MTOC hacia la
proteína:proteína la activación de diversas zona de contacto inter-celular; b) la activación de
enzimas, entre éstas la calcineurina, una diversos factores transcripcionales que permiten
fosfoproteína-fosfatasa (serina/treonina) que la síntesis de citoquinas, proteínas citotóxicas,
desfosforila al factor de activación de la transcrip- entre otras, necesarias para la funcionalidad de los
ción (NFAT) citosólico, que bajo estas condicio- LT CD4 y CD8.
nes ingresa al núcleo y participa en la expresión La transducción de señales es un proceso rá-
del gen para IL-2, citoquina vital en el proceso de pido, su término en este caso se encuentra asocia-
activación de los LT. Esta vía es inhibida por el do a la activación de mecanismos de desfos-
fármaco ciclosporina A (CsA), fármaco que se une forilación efectuadas por fosfatasas específicas
a proteínas citosólicas (ciclofilinas), siendo este (fosfotirosina fosfatasas). Nuevamente aquí se ha
complejo el inhibidor de la fosfatasa calcineurina, descrito un papel importante de CD45, esta enzi-
impidiendo de esta manera el traspaso de la informa puede aparecer, en determinados períodos, in-
200
Sin título-2 200 5/26/06, 10:25 AM

cluida o excluida de las zonas lipídicas específi- mAbs anti-TCR y simultáneamente con mAbs
cas; pudiendo actuar como agente desfosforilante anti-CD28, produce una estimulación de la pro-
que va finalizando el proceso de activación. De liferación celular debido, fundamentalmente, a
acuerdo a lo anterior, CD45 participaría inicial- la síntesis y secreción de IL-2; produciéndose
mente desfosforilando el sitio regulador de la p56lck también la síntesis y secreción de otras numero-
y posteriormente sería excluida de las ZLE. Exis- sas citoquinas. Otro aspecto relevante en la
ten muchas familias de fosfatasas, una de éstas estimulación de CD28 es su potenciación en la
denominada SHP (fosfatasa que contiene domi- generación de las zonas lipídicas específicas, lo
nios SH2), de la cual hay una gran variedad: SHP- que resultaría en una mayor concentración de las
1, 2, etc. Este tipo de enzimas tiene la importante proteínas participantes en la activación de los
propiedad de reconocer a las PTK activadas a me- linfocitos. La importancia de B7 como co-
dida que aumenta su grado de auto-fosforilación, estimulador ha quedado además de manifiesto en
y por ende de activación, pueden unirse a éstas a numerosos sistemas experimentales in vivo, un
través de los dominios SH2, desfosforilando a la ejemplo demostrado por varios grupos lo consti-
PTK y por lo tanto volviéndola al nivel basal. Este tuye el trasplante de células tumorales no
tipo de mecanismos es uno de los principales fre- inmunogénicas, que se transforma en
nos de la activación de los linfocitos. inmunogénicas al transfectarlas con el gen de B7.
Si bien el mecanismo de acción mediado por
2.6. Las dos señales necesarias para la activa- CD28 no es del todo conocido, implica la
ción de los LT. Como los LT CD4 controlan la fosforilación de su dominio citoplasmático en la
activación de los LB, macrófagos y, en algunos secuencia YXXM, por quinasas de la familia src
casos la activación de los LT CD8, su propia acti- activadas por la interacción del TCR con el
vación por parte del antígeno, puede representar antígeno. Esta secuencia bajo estas condiciones
uno de los eventos más importantes en la inicia- puede asociarse con diversas enzimas como la
ción de la inmunidad adquirida. Desde hace ya PI3-quinasa, ras y la activación de la vía de las
varias décadas atrás, se sabía que la estimulación MAP-quinasas.
antígeno específica no era suficiente para llevar a La glicoproteína CTLA-4 es altamente
cabo la expansión clonal de los LT. Posteriormen- homóloga a CD28, ambas se unen a los mismos
te se demostró la presencia de una interacción co- ligandos, pero CTLA-4 presenta algunas diferen-
estimuladora antígeno-independiente encargada cias: a) une a los ligandos CD80 y CD86 con
de aportar la necesaria segunda señal. Esta segun- mucho mayor afinidad que CD28, aproximada-
da señal, por lo tanto, no es dependiente del TCR mente 10 veces mayor, b) transmite una señal de
y se ha denominado señal co-estimuladora pues, inhibición al interior celular. La regulación de la
siendo esencial, no induce por sí misma respuesta expresión de CTLA-4 es un asunto crucial para
alguna en los LT. La interacción del TCR con el ejercer sus efectos supresores, los LT en reposo
antígeno solamente, sin las señales cono lo expresan y sólo comienza a aparecer una
estimuladoras accesorias puede llevar a la muerte vez que éstos se han activado. El extremo
del linfocito o a anergia, un estado en el que la citoplasmático de esta glicoproteína, contiene la
célula no puede ser activada, aun cuando reciba secuencia YXXM que puede ser fosforilada por
todas las señales requeridas. Por lo tanto entonces las quinasas de la familia src; una vez fosforilado
el encuentro con el antígeno puede conducir a dos puede interactuar específicamente con
respuestas bien diferentes: proliferación y adqui- fosfoproteína fosfatasas como la SHP-2, la cual
sición de funciones efectoras o inactivación y bajo estas condiciones se activa y cataliza la
muerte celular. desfosforilación de las quinasas (src, syk, tec) y
Entre las moléculas responsables de ejercer fosfoproteínas (LAT, SLP-76) requeridas para la
esta co-estimulación aportadas por la CPA, se en- transducción de señales de los LT. Al interactuar
cuentran entre muchas otras, la proteína B7 (B7.1, por lo tanto el TCR y CTLA-4, ocurriría el co-
B7.2 o CD80, CD86) (figura 10-2), siendo CD28 mienzo de la activación celular de los LT, se
el receptor en los LT. La molécula de CD28 tie- fosforila CTLA-4, estimulando la reacción de
ne una MM de 44 kDa, es un homodímero ex- desfosforilación (por su asociación a fosfatasas)
presado en la mayoría de los LT, virtualmente en y la terminación de la respuesta. Actualmente,
todos los LT CD4 y aproximadamente en el 50% existe un amplio estudio de la utilización
de los LT CD8. La estimulación de los LT con farmacológica de este efecto, utilizando proteí-
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nas análogas a CTLA-4, que compitan con B7 resultado ser muy similar al de los LT, y como
de la CPA, como fármacos inmunosupresores. veremos más adelante, al de las células NK. El
El proceso de activación de los LT, incluyen- BCR al igual que el TCR, cumple muchas funcio-
do al TCR, co-receptores moléculas de adhesión nes, permite la expansión proliferativa y diferen-
y receptores de co-estimulación; abarca un primer ciación de las células preB en células B maduras
evento constituido por la fosforilación de proteinas y sirve también como receptor para internar
en residuos de tirosina y la generación de los se- antígenos y presentarlos a los LT CD4 ayudadores.
gundos mensajeros IP3, Ca2+ y DAG. Esto consti- Estructuralmente el BCR está compuesto de una
tuye el traspaso de una señal o la transducción de molécula de Ig asociada no covalentemente con
señales desde el exterior al interior celular y que dos moléculas accesorias Ig-α (CD79a) e Ig-β
inicia a las vías bioquímicas ya señaladas, culmi- (CD79b), las que se encuentran como
nando con los típicos cambios en la expresión heterodímeros unidos por puentes disúlfuro (figura
genética y cambios morfológicos y funcionales. 10-1 y 10-5a). Las inmunoglobulinas de membra-
El bloqueo de cualquiera de estas vías ya sea por na difieren de las secretadas en cuanto a que se
inhibidores específicos o mutaciones que las encuentran integradas a la membrana plasmática,
inactiven, provoca una significativa disminución con dominios extracelular, trans-membrana y
a anulación de la respuesta. Por otra parte, agen- citoplasmático; este último puede ser muy corto,
tes que imiten los efectos de los segundos mensa- tan sólo de unos pocos aminoácidos (en general
jeros como son los ésteres de forbol (estimuladores de 3 a 35/40 residuos). Aunque es factible la ex-
de la PK-C) e ionóforos de calcio (que favorecen presión de todos los tipos de inmunoglobulinas
el ingreso de Ca2+ al interior celular), reproducen como parte del BCR, son solamente mIgM y mIgD
muchos de los efectos río abajo, iniciados por el los que se encuentran con mayor frecuencia
antígeno en contacto con el TCR. Además, exis- (aproximadamente 90%) sobre la superficie del
ten evidencias aportadas por la patología linfocito. En el caso de la mIgM, las sub-unida-
inmunológica, en muchos casos de inmunode- des Igα e Igβ, poseen 61 y 48 residuos de
ficiencias combinadas severas (SCID) se ha ob- aminoácidos citoplasmáticos respectivamente. El
servado que el factor deficitario corresponde a una análisis de la estructura primaria de estas sub-uni-
de las proteínas o enzimas de las vías bioquímicas dades permitió apreciar que cada una de éstas po-
señaladas; el caso más conocido es la deficiencia seen una copia de los dominios ITAM, abriendo
de la enzima Zap-70. la posibilidad de la participación de PTK ya sea
Finalmente, dada la importancia de las PTK de membrana o solubles en la transmisión de la
en diversos procesos tanto normales como pato- señal bioquímica al interior celular. Mutaciones
lógicos, existe en la actualidad una rama impor- en ambas tirosinas de los ITAM resultan en la to-
tante de la farmacología dedicada a la interrup- tal inactivación de los LB. Además del receptor,
ción de la transducción de señales a través de esta participan en la interacción co-receptores, CD19/
vía, diseñando inhibidores específicos de estas CD21, moléculas de adhesión y moléculas de su-
PTK que puedan ser utilizados como fármacos. perficie celular que pueden también participar en
En el caso del sistema inmune, las PTK que inter- la transducción de señales (CD40). Se encuentran
vienen en el proceso de activación se expresan en también en la superficie de las células B, molécu-
forma prácticamente exclusiva en los linfocitos, las que promueven la inhibición, como CD22 y
lo que permitiría bloquear selectivamente su ac- FcγRIIB1. Los co-receptores como CD19/CD21
ción actuando como inmunosupresores. en los LB, son de particular interés en el contexto
de la transducción de señales mediada por el re-
ceptor antigénico, puesto que contribuyen direc-
3. ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS B tamente a la formación del complejo entre el re-
ceptor y el antígeno, aumentando por lo tanto la
3.1. Secuencias de activación en el BCR y sub- sensibilidad de la interacción (figura 10-5a).
unidades asociadas. Aún cuando la información
sobre el mecanismo de activación de los linfocitos 3.2. Modelo general de activación de los LB. A
B está aun lejos de ser completa; el conocimiento continuación se analizará cómo la unión de un li-
creciente de la estructura del receptor de antígenos gando específico (antígeno) al receptor BCR, des-
de las células B (BCR) y de sus sub-unidades aso- encadena una compleja serie de eventos
ciadas ha ido dando paso a un mecanismo que ha bioquímicos que permitirán el desarrollo de la res-
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El modelo de la activación de los LB por lo
tanto es análogo al de activación a través del TCR;
la interacción con el antígeno favorece la activa-
ción de PTK de la familia src, como p53/56lyn, la
que a través de cambios conformacionales per-
miten la aproximación de la PTK a los dominios
ITAM, fosforilándolos (figura 10-5b). Este hecho
entonces puede permitir el reclutamiento masivo
de la p72syk citosólica, y otras PTK, a través aho-
ra de la interacción de los dominios SH2 con los
ITAM fosforilados en tirosina. Durante este pro-
ceso todas las PTK son fosforiladas y en general
en este estado se encuentran activadas y además y
muy importante van generando sitios de
interacción con otras enzimas que posean domi-
nios SH2 permitiendo el traspaso de la señal. La
descripción del papel de proteínas adaptadoras
citosólicas ha sido sustancial en el mecanismo de
activación de los LB. Una de éstas denominada
BLNK/SLP-65 es una proteína que posee secuen-
cias SH2, secuencias ricas en prolina y secuen-
cias fosforilables en tirosina, por lo cual puede
Figura 10-5. Mecanismo básico de activación de los LB. a) interactuar simultáneamente con diversas proteí-
Estructura del BCR y sub-unidades asociadas (Ig-α, Ig-β), co- nas participantes en la activación. Una vez
receptores CD19, CD21, CD22 y enzimas, principalmente PTK fosforilada BLNK/SLP-65 por la PTK syk, puede
intracelulares. b) Interacción del BCR y estructuras asociadas
en estas condiciones asociarse con esta quinasa, y
con el antígeno (unido a un producto proteolítico del comple-
mento) que inicia los eventos de asociación y de fosforilación con otras proteínas como Grb2, y FL-Cγ1. Por lo
de las secuencias ITAM y también de otras proteínas, la acti- anterior BLNK/SLP-65 se encuentra fuertemente
vación de proteína quinasas, generación de segundos mensa- asociada a la membrana inmediatamente de pro-
jeros y traspaso de la información al núcleo celular. El PIP3
ducida la interacción con el antígeno, favorecien-
producido por la PI3-quinasa, permite la unión de la PTK Btk
a la membrana. do de esta forma la vía de ras – MAP-quinasas a
través de Grb2 y la activación por fosforilación
de la FL-Cγ1 y γ2. Recordemos que estas
isoenzimas catalizan la hidrólisis de PIP2 y la ge-
puesta funcional de los LB. Es ya un hecho esta- neración de los segundos mensajeros IP3, DAG y
blecido la participación de diversas PTK de la fa- Ca2+.
milia src, como p55blk, p56lck, p53/56lyn, y p59fyn, El papel de los co-receptores es también re-
que tienen la posibilidad de encontrarse unidas a levante, pues se encargan de estabilizar una
la membrana plasmática o con el BCR de LB no interacción entre el receptor y el antígeno que pue-
estimulados (figura 10-5a). Estudios de unión in de ser muy débil; en el caso de los LB es también
vitro, sugieren que las src-quinasas pueden un hecho claro que estos mecanismos permiten la
interactuar con los receptores en reposo principal- amplificación de la señal recibida por el BCR. El
mente con la cadena Igα, a través de una asocia- principal co-receptor es un complejo molecular
ción con el extremo amino-terminal de la quinasa. formado por CD19 y CD21 (receptor 2 del com-
Otra PTK de importancia en la transducción de plemento, CR2). El co-receptor CD21 une un pro-
señales de los LB es la p72 syk; esta enzima ducto proteolítico del complemento (C3d) y de esta
citoplasmática, altamente homóloga a la Zap-70, forma participa en conjunto con el BCR en el re-
tiene también aquí una función similar. Nueva- conocimiento del antígeno. Además el CD19 se
mente entonces, ni el receptor ni las sub-unida- puede encontrar constitutivamente asociado al
des asociadas poseen actividad enzimática algu- BCR y es también fosforilado en su dominio intra-
na, encontrándose separados los módulos de citoplasmático por la p53/56lyn post-contacto del
unión al ligando de los módulos de transducción BCR con el antígeno. El co-receptor CD19 una
de la señal. vez fosforilado puede reclutar a enzimas como la
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PI3-kinasa, las PTK lyn y fyn y a la proteína a los LB. El CD22 está constitutivamente asocia-
adaptadora vav. Cada una de estas moléculas tie- do al BCR, por lo que su función está asociada a
ne una activa participación en los eventos la unión del BCR con el antígeno. En cambio
bioquímicos de la activación de los LB. La PI3- FcγRIIB, sólo ejerce su acción inhibitoria a través
quinasa genera como producto, el PIP3, molécula de la interacción con antígenos asociados a IgG.
que puede interactuar con los sitios PH (homología Lo interesante de estas proteínas de membrana es
tipo Plekstrin) que presentan proteínas como la que en sus dominios intra-citoplasmáticos poseen
PTK, Btk (tirosina quinasa de Bruton) y las FL- dominios compuestos de secuencias conservadas
Cγ. Las secuencias PH son dominios de aproxi- de aminoácidos denominadas ITIM (“motivos o
madamente 120 aminoácidos que reconocen al secuencias de inhibición basados en tirosina del
PIP3 de la membrana; este reconocimiento espe- inmuno-receptor”) que consisten de dos pares de
cífico les permite a estas proteínas asociarse a la YXXL separados por 26 aminoácidos. Estos resi-
membrana plasmática donde deben ejercer sus duos de tirosina pueden ser fosforilados a través
funciones. La participación de la PI3-quinasa apa- de la PTK lyn, la misma encargada de la activa-
rece como muy importante en los LB, la enzima ción de los LB; es decir, la misma señal de activa-
está compuesta de dos sub-unidades una de 110 ción puede conducir a la regulación negativa y de
kDa, sub-unidad catalítica, y una sub-unidad esta forma modular la respuesta. Una vez
reguladora de 85 kDa que posee dominios SH2 y fosforilados los ITIM pueden asociarse con
ricos en prolina. Esta enzima que aparece fuerte- fosfatasas: SHP-1, (fosfotirosina fosfatasas que
mente unida a la membrana post- activación, po- posee dominios SH2) o con la fosfatasa de lípidos
see en su sub-unidad reguladora regiones ricas en SHIP (inositol-polifosfato-5-fosfatasa que posee
prolina que son afines a los dominios SH3 de las dominios SH2). El co-receptor CD22, al igual que
src PTK y regiones SH2, es decir tiene dos mane- los receptores de inhibición de las células NK que
ras de interactuar con elementos del BCR y acti- se analizarán más adelante, se asocia con SHP-1
varse (Figura 9-5b). La proteína adaptadora vav, que se encarga de desfosforilar a las enzimas y
que es un factor intercambiador de nucleótidos de otras proteínas fosforiladas en tirosina, inhibiendo
guanina, puede activar una vez fosforilada a la la formación de IP3 y el proceso de activación en
familia de las GTPasas Rho, Rac-1, RhoA y Cdc42 general. El receptor FcγRIIB se asocia con SHIP,
que inician una de las vías de activación de las cuyo efecto es regular los niveles del PIP3 de la
MAP-quinasas JNK y p38. La estimulación de las membrana, dando como producto (PI[3,4]P2) que
Rho GTPasas regula también la polimerización de no tiene efecto regulador, impidiendo la asocia-
la actina necesaria para la óptima movilización de ción de las proteínas con dominios PH a la mem-
Ca2+. Los co-receptores de las células T pueden brana, inhibiendo por lo tanto la funcionalidad de
llegar a la proximidad del TCR a través de la los LB. El principal representante de este tipo de
interacción con la misma molécula de MHC, un moléculas es la PTK Btk. El papel de CD22 es
mecanismo fisiológico similar puede visualizarse complejo pues, independientemente, puede
aquí, pues el entrecruzamiento en la superficie del interactuar con ligandos derivados del ácido siálico
BCR con CD19/CD21, puede lograrse por la presentes en algunas glicoproteínas, y en este caso
unión a complejos inmunes que contengan tanto particular puede actuar como activador de los LB.
el antígeno y los fragmentos proteolíticos del com- Son numerosas las evidencias que validan
plemento que se unan a CD21. El desdoblamien- este modelo, especialmente evidencias genéticas.
to por lo tanto del PIP2, la consecuente elevación Algunos tipos celulares B no poseen p72syk, ob-
del Ca 2+ intracelular y la activación de las servándose fosforilación de las sub-unidades de
isoenzimas de la PK-C y de la calcineurina son membrana solamente y ausencia de respuesta bio-
parte de los mecanismos más importantes en la lógica funcional; la eliminación del gen para esta
inducción de cambios en la expresión genética en enzima (“knock-out” del gen) provoca también la
los LB. Existen claros antecedentes sobre el agru- eliminación de la respuesta funcional. La
pamiento de muchas de estas proteínas y enzimas transfección de syk (modificación genética que
en zonas lipídicas específicas, por lo cual este pro- permite la incorporación de syk al genoma celu-
ceso también operaría en la activación de los LB. lar) a estas células restaura la respuesta.
Otras proteínas de membrana de importan- Inhibidores de PTK inhiben también totalmente
cia en la transducción de señales en los LB son la funcionalidad y el tratamiento de LB con
CD22 y FcγRIIB; ambos regulan negativamente fármacos que activen a la PK-C y eleven los nive-
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les intracelulares de Ca2+, reproduce en gran me- lula blanco, provocan la activación o inhibición
dida los efectos mediados por el antígeno especí- de su función. En un capítulo posterior se analiza-
fico. La deficiencia genética de CD19, CD19-/-, rán en detalle los mecanismos que explican la
provoca una disminución de la respuesta humoral citotoxicidad, haciendo ahora sólo referencia a que
y la deficiencia genética de SHP-1, presenta una ésta puede ser de dos tipos: 1) citotoxicidad natu-
estimulación de la respuesta. La deficiencia de ral, lisa a células especialmente tumorales y trans-
lyn, provoca una compleja alteración pues altera formadas por virus y 2) citotoxicidad dependien-
tanto los procesos de activación como de inhibi- te de anticuerpos (ADCC) a través del receptor
ción. La alteración genética de Btk provoca la pa- CD16 que reconoce a las células blanco recubiertas
tología agamaglobulinemia ligada al cromosoma por anticuerpos del tipo IgG.
X humano y una inmunodeficiencia ligada al
cromosoma X en el ratón. En general la altera- 4.1. Modelo de activación de las células NK. La
ción de cualquiera de las vías señaladas va a per- activación de las células NK más conocida hasta
turbar la funcionalidad de los LB, poniendo en ahora, es la que ocurre a través de la interacción
evidencia la importancia de su funcionamiento de CD16 con células blanco recubiertas con IgG.
integral. Como se puede apreciar de la Figura 10-1, el re-
ceptor CD16 está asociado a sub-unidades; éstas
pueden ser de tipo ζ, o bien componentes del com-
4. ACTIVACIÓN DE LAS CÉLULAS NK plejo CD3. Se han descrito componentes del com-
plejo CD3 asociados a este receptor, lo que viene
Las células NK (“natural killer” o “agresoras na- a representar una cierta analogía con el receptor
turales”) son una tercera población de linfocitos, de las células T (TCR). Considerando además que
diferentes a los linfocitos B y T, pertenecientes al estas sub-unidades poseen dominios ITAM sus-
sistema inmune innato. Son una sub-población ceptibles de ser fosforiladas, el mecanismo de ac-
celular altamente heterogénea que se ha caracteri- tivación implica también un alto grado de
zado en base a su función, fenotipo y morfología: fosforilación de proteínas similar al de los LT. Se
a) función, pueden lisar en forma espontánea una han descrito en las células NK enzimas tales como:
amplia variedad de células (denominadas en ge- PTK de la familia src, syk; FL-C de tipo γ1, γ2; la
neral células blanco), tales como células tumorales, vía de ras y MAP-quinasas y la presencia de pro-
células transformadas por virus e infectadas por teínas adaptadoras como LAT, SLP-76, ya descri-
bacterias o parásitos; secretan además un conjun- tas, por lo que se desprende un modelo de activa-
to determinado de citoquinas, especialmente IFN- ción celular muy similar a los ya señalados para
γ. b) Fenotipo, expresan mayoritariamente el los linfocitos B y T. Una vez que el receptor CD16
fenotipo TCR -, BCR -, CD3 -, CD16 +, CD56 +; reconoce a las células blanco, a través del frag-
CD16, uno de los marcadores más representati- mento Fc de IgG, se inicia la maquinaria
vos, es el receptor de baja afinidad que reconoce a bioquímica de activación de las células NK. La
la fracción Fc de IgG, por lo que se denomina tam- cascada de fosforilación implica la generación
bién FcγIIIR (figura 10-1). c) Morfología, corres- posterior de los mismos segundos mensajeros IP3,
ponden a linfocitos granulares grandes. Una de las DAG y Ca2+ (figura 10-6).
características más conocidas de las células NK La descripción de receptores de inhibición
es la eficiencia de su acción citolítica ejercida so- en las células NK ha sido uno de los más impor-
bre células blanco que carecen parcial o comple- tantes aportes de los últimos años a la compren-
tamente de la expresión de moléculas MHC-I, es sión del mecanismo de acción de la citotoxicidad
decir no dependerían de la expresión de este com- de éstas células. Estos receptores, que reconocen
plejo; sin embargo, como se podrá apreciar mas a las moléculas de MHC-I, específicamente a al-
adelante, este concepto está comenzando a cam- gunas secuencias protéicas conservadas de estos
biar. La heterogeneidad de las células NK se ma- complejos, son básicamente de dos tipos o fami-
nifiesta en que las sub-poblaciones pueden ex- lias diferentes: a) los denominados KIR (“killer
presar diferentes moléculas de activación y de in- cell inmunoglobulin-like receptors”), y los LIR
hibición de su funcionalidad; es decir, moléculas humanos (“leukocyte immunoglobulin-like
que al interaccionar por ejemplo in vitro, con receptors”) que son receptores como su nombre
anticuerpos monoclonales o a través de sus lo dice de estructura extracitoplasmática similar a
ligandos naturales específicos presentes en la cé- las inmunoglobulinas; b) proteínas del tipo de las
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lectinas, como CD94-NKG2 humano y Ly-49 temente se han descrito una de las más importan-
murino. Mientras los KIR y Ly49 pueden recono- tes familias de receptores de activación que vie-
cer e interactuar con múltiples MHC-I del tipo clá- nen a responder muy satisfactoriamente al reque-
sico (A,B,C), los receptores CD94-NKG2 lo ha- rimiento principal de las células NK, es decir ac-
cen con MHC-I no clásicos (HLA-E). Estos re- tuar sobre células deficientes o que carecen por
ceptores poseen en sus dominios intra- completo de los complejos MHC-I. Estos recep-
citoplasmáticos secuencias de inhibición del tipo tores que están implicados en la citotoxicidad na-
ITIM, ya descritas para otros receptores. Al tural se han denominado justamente “receptores
interactuar la célula NK con la célula blanco, si la de la citotoxicidad natural” (NCR) y son : NKp46
célula NK posee receptores de inhibición que re- (Figura 9-1), NKp44 y NKp30; su estructura ex-
conocen a su ligando respectivo en la célula blan- terna es de la familia de las inmunoglobulinas y
co, se fosforilan los resíduos de tirosina de estas en su extremo citoplasmático se encuentran aso-
secuencias de inhibición a través de las PTK de la ciados a subunidades del tipo de CD3ζ y DAP12,
familia src; una vez fosforilados los ITIM pueden ambas poseen secuencias ITAM. Los NCR NKp46
asociarse con fosfoproteína fosfatasas SHP-1, y NKp30 se encuentran presentes exclusivamente
SHP-2 que se encargan de desfosforilar a las proen las células NK humanas, son los únicos con
teínas quinasas activadas e inhibir el proceso ge- esta característica y por lo tanto son también los
neral de fosforilación característico de la activa- únicos marcadores representativos de este tipo de
ción celular, inhibiendo por lo tanto la células. El receptor NKp44 se expresa en respuesta
funcionalidad de las células NK. Es decir, el pro- a IL-2 y está también presente en los LT. Si bien
ceso de activación de las células NK, al igual que no se les conoce con precisión sus ligandos res-
el de los linfocitos T y B, implica activación de pectivos, se sabe que pueden actuar especialmen-
quinasas y fosforilación de proteínas. El proceso te sobre células tumorales, transformadas por vi-
de inhibición mediado por los receptores recién rus e incluso también sobre células autólogas nor-
descritos, si bien requieren PTK para la males, siendo su principal elemento regulador, la
fosforilación de las secuencias ITIM, activan a presencia o ausencia de los receptores de inhibi-
fosfatasas que frenan el proceso de activación. La ción.
figura 10-1 muestra dos ejemplos de receptores Por lo tanto, las células NK poseen un reper-
de inhibición. torio de receptores de activación y un repertorio
Una complejidad adicional la representa la de receptores de inhibición; ahora, se ha observa-
existencia de receptores del tipo de los de inhibido que al enfrentarse a una célula blanco que po-
ción recién descritos, pero que carecen del sitio sea ligandos para ambos tipos de receptores, pri-
ITIM, y se comportan por lo tanto como recepto- ma la inhibición. Si se pierde esta propiedad
res de activación de las células NK al interactuar inhibitoria, principalmente por la menor o nula
con las moléculas de MHC-I. Uno de ellos el expresión de los complejos MHC-I, por parte de
CD94-NKG2C, tiene asociada la sub-unidad de- la célula blanco y está además presente el recep-
nominada DAP12 (tambien llamada KARAP), que tor de activación adecuado, en las células NK,
contiene una secuencia de activación ITAM. De ocurrirá la lisis de la célula blanco. Los recepto-
este modo, las moléculas MHC-I pueden ser re- res de inhibición también han sido descritos en
conocidas por tres diferentes grupos de los LT, por lo que representan uno de los principa-
inmunoreceptores: TCR, que reconoce al antígeno les factores de control de la activación de los
presentado por éstas moleculas; CD8, co-recep- linfocitos.
tor que reconoce a secuencias de aminoácidos La descripción de receptores de inhibición
conservadas de las moléculas MHC-I y los recep- en las células NK ha sido uno de los más impor-
tores recién descritos, que también reconocen se- tantes aportes de los últimos años. Estos recepto-
cuencias de estas moléculas que pueden inhibir o res, que reconocen a las moléculas MHC-I,
activar la respuesta funcional de las células NK. específicamente algunas secuencias conservadas
Estos últimos receptores presentan además una de estos complejos, son básicamente de dos tipos
distribución clonal en las células NK, que expli- o familias diferentes: a) los denominados KIR
ca la heterogeneidad de éstas células. (“killer cell inmunoglobulin-like receptors”), y los
Por lo que se ha analizado hasta ahora, se LIR humanos (“leukocyte immunoglobulin-like
desprende un importante papel de los complejos receptors”) que son receptores como su nombre
MHC-I en la respuesta de las células NK. Recien- lo dice de estructura extracitoplasmática similar a
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Figura 10-6. Mecanismo básico de activación de las células NK. Tipos celulares participantes en el mecanismo Citotoxicidad
dependiente de anticuerpos (ADCC): células NK que poseen el receptor CD16 y sub-unidades γ y ζ; las enzimas proteína quinasas
PTK intracelulares, proteínas adaptadoras y otras son las que aparecen descritas en las figuras 10-4 y 10-5. La célula blanco en este
caso, es reconocida por un anticuerpo (IgG), que actúa como puente entre esta célula y la célula NK.
las inmunoglobulinas. b) Heterodímeros como ceptores de activación, uno de ellos el CD94-

CD94-NKG2 humano y el homodímero Ly-49 NKG2C, tiene asociada la molécula DAP12 (tam-
murino, que son lectinas del tipo C. Mientras los bién llamada KARAP), que contiene una secuen-
KIR y Ly49 pueden interactuar con múltiples cia ITAM. De este modo, las moléculas MHC-I
MHC-I clásicos (A,B,C), los heterodímeros CD94- pueden ser reconocidas por tres diferentes grupos
NKG2 lo hacen con MHC-I no clásicos (HLA-E). de inmunorreceptores: TCR, CD8 y los recepto-
Estos receptores poseen en sus dominios intra- res recién descritos, que pueden inhibir o activar
citoplasmáticos secuencias ITIM. Los residuos de la respuesta. Estos últimos receptores presentan
tirosina de estas secuencias pueden ser fosforiladas además una distribución clonal en las células NK.
al interactuar el receptor con su ligando, a través Recientemente se han descrito una de las más
de las PTK de la familia src, o bien por el inicio importantes familias de receptores de activación
de una reacción de activación de los linfocitos a que vienen a responder muy satisfactoriamente al
través de un receptor de activación, en ambos requerimiento principal de las células NK, es de-
casos una vez fosforilados los ITIM pueden aso- cir actuar sobre células que son deficientes o que
ciarse con fosfoproteína fosfatasas SHP-1, SHP- carecen por completo de los complejos MHC-I.
2 que se encargan de desfosforilar a las proteínas Estos receptores que están implicados en la
activadas e inhibir el proceso, inhibiendo por lo citotoxicidad natural se han denominado justamen-
tanto la funcionalidad de las células NK. La figu- te “receptores de la citotoxicidad natural” (NCR)
ra 10-1 muestra dos ejemplos de receptores de in- y son : NKp46 (figura 10-1), NKp44 y NKp30; su
hibición. Algunos receptores de inhibición tienen estructura externa es de la familia de las
truncado el sitio ITIM, y se comportan como re- inmunoglobulinas y en su extremo citoplasmático
207
Sin título-2 207 5/26/06, 10:25 AM

se encuentran asociados a subunidades del tipo de
CD3ζ y DAP12, ambas poseen secuencias ITAM.
Los NCR NKp46 y NKp30 se encuentran presen-
tes exclusivamente en las células NK humanas,
son los únicos con esta característica y por lo tan-
to son también los únicos marcadores representa-
tivos de este tipo de células. El receptor NKp44
se expresa en respuesta a IL-2 y está también pre-
sente en los LT. Los NCR al ser activados por
anticuerpos monoclonales presentan un aumento
en la concentración intracelular de calcio, aumen-
to de la citotoxicidad y de la secreción de
citoquinas. Si bien no se les conoce con precisión
sus ligandos respectivos, se sabe que pueden ac-
tuar sobre células tumorales y también sobre cé-
lulas autólogas normales, siendo su principal ele-
mento regulador, la presencia o ausencia de re-
ceptores de inhibición. Por lo tanto, las células NK
poseen un repertorio de receptores de activación
y un repertorio de receptores de inhibición; al en-
frentarse con una célula blanco que posea ligandos
para ambos tipos de receptores, prima la inhibi-
ción; si se pierde esta propiedad, principalmente
por menor o nula expresión de los complejos
MHC-I y está además presente el receptor de acti-
vación adecuado, ocurrirá la lisis de la célula blan-
co. Los receptores de inhibición también se han
descrito en los LT, por lo que representan uno de
los principales factores de control de la activación
de los linfocitos.
LECTURAS SUGERIDAS
Dustin M, Chan, A., “Signaling takes shape in the

immune system”. Cell, 103, 283-294, 2000.
Janes, P., Ley, S., Magee, A. & Kabouridis, P.S.,

“The role of lipid rafts in T cell antigen receptor
(TCR) signaling”. Semin. Immunol. 12, 23-34,
2000.
Kane, L. P., Lin J. & Weiss, A., “Signal

transduction by the TCR for antigen”. Curr. Opin.
Immunol. 12, 242-249, 2000.
Kelly, M., & Chan, A., “Regulation of B cell

function by linker proteins”. Curr. Opin. Immunol.
12, 267-275, 2000.
Lanier, L., “NK cell receptors”. Annu. Rev.

Immunol. 16, 359-393, 1998.
208
Sin título-2 208 5/26/06, 10:25 AM

Capítulo 11
CITOQUINAS
Rodrigo Naves P. y María Rosa Bono M.
1. Introducción 4.3. Citoquinas y hematopoyesis

2. Propiedades generales de las 4.3.1. Factores estimuladores de co-
citoquinas lonias
3. Receptores de las citoquinas y 4.3.2. Otras citoquinas estimulado-
mecanismos de transducción de ras de la hematopoyesis
señales 4.3.3. Citoquinas supresoras
3.1. Receptores de citoquinas 5. Quimioquinas
3.2. Transducción de señales 5.1. Quimioquinas en la diferencia-
4. Principales actividades biológicas ción linfocitaria
de las citoquinas 5.2. Quimioquinas en la recirculación
4.1. Inmunidad innata de los linfocitos a través de los
4.1.1. Inmunidad antiviral órganos linfoides secundarios
4.1.2. Citoquinas e inflamación 5.3. Quimioquinas en el "homing" de
4.2. Citoquinas y respuesta inmune los linfocitos a sitios efectores
4.2.1. Citoquinas y diferenciación periféricos
de células linfoides 5.4. Quimioquinas y enfermedades
4.2.2. Células Th1 y Th2 5.5. Quimioquinas y terapia
4.2.3. Activación de linfocitos B
4.2.4. Respuesta inmune específica
mediada por células
209
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210
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RESUMEN
En este capítulo se describen algunas de las funciones de las citoquinas relacionadas con la
respuesta inmune, en conjunto con las características propias de cada citoquina. La larga lista de
citoquinas y quimioquinas que se mencionan representa sólo a aquellas más estudiadas. Las
posibilidades que existen hoy en día para identificar y aislar nuevos tipos celulares como son las
células T de memoria u otras, combinadas con las técnicas de biología molecular y el análisis de
un gran número de genes homólogos, ha llevado a definir nuevas citoquinas que de otra manera
sería imposible detectar. Por lo tanto es imposible pretender, hoy en día, tener una visión acabada
de las citoquinas y sus funciones. La producción de ratones “knock out” y transgénicos para las
citoquinas, sus receptores y las moléculas implicadas específicamente en la transducción de
señales de las citoquinas es prometedora para el entendimiento de las funciones de las citoquinas.
Sin embargo las propiedades intrínsecas de las citoquinas, tales como el pleiotropismo y su
redundancia, la compleja red de interacciones célula-citoquina que producen, hace difícil pensar
que se logrará en un futuro cercano entender la regulación a nivel de los organismos vivos.
Las citoquinas han sido implicadas en numerosas patologías las cuales a menudo se
encuentran relacionadas no sólo con la respuesta inmune sino con otros sistemas tales como, el
sistema nervioso central o el sistema endocrino. Muchas de las citoquinas enumeradas tienen
potencial uso clínico. Sin embargo, a pesar de la enorme cantidad de trabajos que se han realizado
con las citoquinas, de la explosión de conocimientos de los últimos años, y de las importantes
funciones que ellas regulan, su uso en clínica humana actualmente ha sido autorizado sólo para
un número muy reducido de citoquinas.
1. INTRODUCCIÓN quimioquinas las que en total suman actualmente

tantas como el resto de las citoquinas. Las
Las citoquinas son proteínas solubles quimioquinas serán tratadas en forma separada en
producidas en forma transitoria por efecto de un este capítulo debido a que poseen propiedades
estímulo. Éstas representan el lenguaje universal particulares y a la importancia que han ido
de las células, y gracias a ellas las células adquiriendo. Hoy en día existe una gran cantidad
reconocen lo que está ocurriendo a su alrededor y de conocimientos acerca de los mecanismos de
establecen en consecuencia una respuesta. Las acción de las citoquinas, sin embargo, sus
citoquinas participan, entre otros, en la acciones in vivo no son bien comprendidas debido
proliferación y diferenciación celular, la a la complejidad de las numerosas interacciones
hematopoyesis, la actividad microbicida, la celulares en las que ellas participan.
reacción inflamatoria, la respuesta inmune En la tabla 11-1 se muestra una cronografía
específica y no específica, y en procesos del descubrimiento de las citoquinas.
relacionados con el desarrollo de los organismos
vivos. Las citoquinas regulan la respuesta
inmune induciendo o inhibiendo la producción 2. PROPIEDADES GENERALES DE LAS
de otras citoquinas y sus respectivos receptores CITOQUINAS
así como activando mecanismos de transducción
de señales en células blanco o sobre ellas mismas. La mayor parte de las citoquinas han sido
El número de citoquinas descubiertas ha ido en caracterizadas en cuanto a peso molecular,
continuo aumento en los últimos años, así como secuencia de DNA y aminoácidos, e incluso los
los conocimientos en cuanto a los mecanismos genes que codifican para ellas han sido localizados
regulatorios de éstas. Un conjunto particular de a nivel de cromosomas tanto en humanos como
citoquinas corresponde a la familia de las en ratón. Los receptores de las citoquinas y sus
211
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Tabla 11-1. Descubrimiento de las citoquinas
1957 Descubrimiento de la primera citoquina, IFN-γ.

1960-1970 Descripción de sobrenadantes con diferentes actividades biológicas.
1966 Se descubrió la primera linfoquina, MIF, factor producido por los linfocitos
que Inhibe la migración de los macrófagos in vitro
1969 Definición de linfoquinas y monoquinas.
Terminología inexacta.
1974 Se acuñó el término de citoquina.
1979 Definición de interleuquinas, IL-1 e IL-2.
Principios de 1980 Purificación de citoquinas por métodos bioquímicos
1981 Se utilizó por primera vez una citoquina en clínica humana, IFN-α.
Mediados de 1980 Clonamiento mediante técnicas de biología molecular de las citoquinas.
1985 Se utilizó IL-2 en clínica humana.
1989 Clonamiento de MIF
1990 Se clonaron los receptores para varias citoquinas
1993 Mecanismos de transducción de señal de las citoquinas.
Caracterización de PTK y STAT asociadas a las respuestas de las
distintas citoquinas.
mecanismos de acción molecular han sido también categoría especial de citoquinas, las quimio-
ampliamente estudiados en los últimos años. En quinas, las cuales tienen propiedades quimiotác-
la mayor parte de las investigaciones se utiliza la ticas hacia diferentes tipos celulares, y poseen
citoquina recombinante la que, en general, muestra características especiales que las distinguen de las
las mismas funciones que las citoquinas citoquinas. Por esta razón, y por la relevancia que
producidas en forma natural. ellas tienen actualmente, serán discutidas en una
Las principales características de las sección separada.
citoquinas se muestran en la tabla 11-2. Las citoquinas son factores proteicos
Cuando se descubrieron las citoquinas se solubles, producidos transitoriamente frente a un
pensó que ellas estaban relacionadas únicamente estímulo. La producción de citoquinas es
con la comunicación entre los leucocitos y de allí controlada a nivel transcripcional y existe un
que se les dio el nombre de interleuquinas para segundo nivel de control dado por la inestabilidad
lo cual se utilizó la abreviatura IL seguida de un de los mRNA. La acción de las citoquinas es lo-
número (por ejemplo IL-1, IL-2, etc.). Pero luego cal, pudiendo en algunos casos, ejercer su función
se demostró que la función biológica de estos sobre la misma célula productora de la citoquina
factores solubles afectaba a células de otros (actividad autocrina) o sobre células vecinas
orígenes. Fue entonces que se acuñó el término (actividad paracrina). En algunos casos pueden
más general de citoquinas. Sin embargo, no todas tener actividad endocrina cuando son producidas
las citoquinas son denominadas según esta en grandes cantidades y pasan a la circulación.
terminología y en muchos casos se utiliza más bien En general, las citoquinas se encuentran en
una abreviatura relacionada con la función de la estado de monómeros, pero en algunos casos la
molécula (por ejemplo, TNF significa factor de forma activa está conformada por dímeros o
necrosis tumoral en inglés, primera función trímeros de la misma molécula. Esta característica
asociada a esta citoquina). Además existe una de las citoquinas es importante, ya que se piensa
212
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Sin título-2
Tabla 11-2. Características de las citoquinas
Citoquina Tamaño Fuente Célula Blanco Efecto sobre cada Bioensayo

célula blanco
213
IL-1- 17-18 kDa Monocitos/macrófagos, Timocito Coestimulador Activación de timocitos o líneas
IL-1- células de Langerhans, Endotelial Activación, inflamación, celulares T.
dendríticas, linfocitos T, B, NK, coagulación Inducción de PGE2 en
LGL, endoteliales, Hipotálamo Fiebre fibroblastos.
músculo, fibroblastos, epitelio Hígado Proteínas fase aguda
tímico, astrocitos, microglia, Músculo Catabolismo
glioma, keratinocitos.
IL-2 14-17 kDa Linfocitos T Linfocitos T Proliferación, producción de Proliferación de linfocitos T
213
citoquinas activados, de líneas celulares
NK Proliferación, activación dependientes de IL-2 o de
Linfocitos B Proliferación, sÌntesis de linfocitos B coestimulados con
anticuerpos anti-IgM.
IL-3 14-30 kDa Linfocitos T Progenitores Proliferación y diferenciación. Proliferación de líneas celulares
hematopoyéticos: Proliferación humanas TF-1, MO7e o AML-
Linfocitos B Activación 193.
Monocitos
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Estimulación de colonias
eritroides, granuloides y
mieloides en médula ósea.
IL-4 15-19 kDa Linfocitos Th2 CD4+, algunas T Linfocitos B Cambio de clase de Ig a Proliferación de células T
CD8+, mastocitos, estroma de IgE, aumento MHC-II. activadas con PHA, en presencia
médula ósea. Linfocitos T Proliferación y diferenciación. de anti-IL-2 o anti-IL-2R.
Sin título-2
Inhibición de activación. Proliferación de MO7. Aumento
Macrófagos Estimula la expresión de de CD23, IgM o MHC-II en
Endoteliales moléculas de adhesión. células B obtenidas de
Proliferación amígdalas.
Mastocitos
IL-5 40-50 kDa Linfocitos Th2 CD4+, mastocitos Eosinófilos Proliferación, diferenciación y Diferenciación de eosinófilos.
214
y eosinófilos. activación Proliferación de TF-1.
Linfocitos B En ratón, coestimulador de
proliferación de linfocitos B
activados. Aumenta la síntesis
de IgA en linfocitos B maduros.
IL-6 22-29 kDa Linfocitos T y B, macrófagos, Timocitos Coestimulador Proliferación de línea celular B9.
estroma de médula ósea, Linfocitos B maduros Proliferación Aumento de la secreción de Ig
fibroblastos, keratinocitos, Hígado en lÌneas B linfoblastoides.
astrocitos, endoteliales. Proteínas fase aguda
214
IL-7 20-28 kDa Células del estroma de médula Progenitores de Proliferación y diferenciación Proliferación de precursores de
ósea, timo o bazo. Fibroblastos. linfocitos B. linfocitos B.
Linfocitos T maduros Proliferación y diferenciación
IL-8 6-8 kDa Monocitos, linfocitos, Leucocitos Quimiotaxis y activación Quimiotaxis o activación de
granulocitos, fibroblastos, neutrófilos
endoteliales, epiteliales,
keratinocitos, hepatocitos.
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IL-9 30-40 kDa Linfocitos Th2 activados por IL-2, Linfocitos T Proliferación Proliferación de líneas T
linfoma de Hodgkin's. Mastocitos Proliferación linfoblastoides humanas
Precursores eritroides Proliferación estimuladas con PHA e IL-4.
IL-10 17-40 kDa Th0 y Th2 murinas, linfocitos T Macrófagos Inhibe la producción de citoquinas. Inhibición de la síntesis de IFN-
CD4+ y CD8+ humanos, linfocitos Inhibe expresión de por clones Th1 activados con
B Ly-1+ murinos, monocitos, MHC-II. mitógenos o antígeno o por
Sin título-2
macrófagos, keratinocitos. Proliferación y activación células mononucleares de sangre
Linfocitos B Proliferación perisférica activadas.
Timocitos Proliferación Proliferación de línea celular
Mastocitos mastocítica MC/9 murina
IL-11 23 kDa Fibroblastos estimulados con IL-1, Progenitores Proliferación Proliferación de plasmocitomas
líneas celulares de estroma de hematopoyéticos murinos dependientes de IL-6,
215
médula ósea. multipotencial, tal como T1165.
progenitores de
megacariocitos y
macrófagos.
Plasmocitomas. Proliferación
Pre-adipocitos Inhibición de adipogénesis.
IL-12 Heterodimero Macrófagos, linfocitos B y Linfocitos T Induce producción de IFN-γ Estimulación de la producción
formado por líneas celulares B Coestimulador de la proliferación. de IFN- por células de bazo.
2 cadenas de linfoblastoides. Induce producción de IFN-γ
215
35 y 40 kDa. NK Aumenta la actividad NK y ADCC.
Estimula la proliferación y
diferenciación.
LTh1
IL-13 17 kDa Linfocitos T Linfocitos B Promueve la proliferación Proliferación de células B

activados en combinación con anti-Ig humanas co-estimuladas con
o anti-CD40. Estimula la secreción anti-IgM o anti-CD40
de IgM, IgE e IgG4. Aumenta la
expresión de CD23. Prolonga la
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sobrevida.
Aumenta la expresión de MHC-II
Monocitos y CD23.
IL-14 60 kDa Linfocitos T y Linfocitos B activados Estimula la proliferación. Proliferación de linfocitos B

tumores de células B. Inhibe la síntesis de Ig. activados con
Staphyloccus aureus.
Sin título-2
IL-15 14-15 kDa Monocitos y células epiteliales. Linfocitos T Proliferación de CTL. Proliferación de linfocitos T
El mRNA es encontrado en una Generación de linfocitos T activados.
amplia variedad de tipos celulares. citotóxicos específicos.
LAK Estimulación de la proliferación.
IL-16 16-17 kDa Linfocitos T Linfocitos T CD4+ Quimiotaxis. Aumento expresión de Quimiotaxis de linfocitos T
IL-2R y MHC-II. CD4+.
Quimiotaxis
216
Quimiotaxis
Monocitos
Eosinófilos activados
IL-17 15 kDa LT activador Estroma de médula Induce producción de IL-6, IL-8, G-

ósea, células CSF y PGE2
endoteliales y
fibroblástos
GM- 22 kDa Linfocitos T, macrófagos, Progenitores Proliferación y sobrevida No existe un bioensayo
216
CSF fibroblastos y células endoteliales hematopoyéticos específico.
Granulocitos Diferenciación y activación La formación de colonias en
Monocitos Diferenciación y activación agar blando con líneas celulares
Endoteliales Proliferación provee una estimación de la
Eritrocitos Proliferación actividad.
Megacariocitos Proliferación
Linfocitos T Proliferación
G-CSF 21 kDa Macrófagos, fibroblastos, células Precursores de Proliferación, diferenciación y Formación de colonias en agar
endoteliales, estroma de médula neutrófilos. activación. blando a partir de médula ósea.
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ósea. Progenitores Estimular la proliferación, en
hematopoyéticos sinergia con IL-3
Cél. Endoteliales Proliferación y migración.
M-CSF 45-90 kDa Múltiple incluyendo linfocitos, Progenitores de Factor de sobrevida, proliferación, Formación de colonias en agar
monocitos, fibroblastos, células macrófagos y diferenciación blando a partir de médula ósea.
epiteliales, células endoteliales, macrofágos y activación.
mioblastos y osteoblastos.
Sin título-2
SCF 28-36 kDa Estroma de médula ósea, hígado, Mastocitos Proliferación Actúa en sinergia con factores
(kit cerebro, riñón, pulmón, placenta, Progenitores Desarrollo estimuladores de colonias en
ligand) fibroblastos, oocitos, testículos. hematopoyéticos ensayos realizados en agar
Gónadas Desarrollo blando a partir de células de la
Precursores mieloides Desarrollo médula ósea.
y linfoides
217
IFN-α 16-27 kDa Linfocitos, monocitos y Múltiples tipos Resistencia a virus Inhibición de la Inhibición del efecto citopático
macrófagos celulares proliferación de EMCV, VSV o SFV en líneas
Aumento de MHC-I celulares epiteliales o en la línea
celular L929 de ratón.
Inhibición de la proliferación en
DAUDI.
IFN-β 20-26 kDa Fibroblastos y células epiteliales Múltiples tipos Resistencia a virus Inhibición de la Inhibición del efecto citop·tico
celulares proliferación de EMCV, VSV o SFV en líneas
217
Aumento de MHC-I celulares epiteliales o en la línea
celular L929 de ratón.
Inhibición de la proliferación en
DAUDI.
IFN-γ 20-25 kDa Linfocitos T y NK Linfocitos T y B, Activación, proliferación y Inhibición del efecto citop·tico
macrófagos y NK. diferenciación de EMCV, VSV o SFV en líneas
Endoteliales Proliferación celulares epiteliales o en la línea
Fibroblastos Proliferación celular L929 de ratón.
Múltiples tipos Resistencia a virus, inhibición de la Inhibición de la proliferación en
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celulares proliferación, aumento de MHC-I y DAUDI.
MHC-II.
TNF-α 52 kDa Monocitos y macrófagos Múltiples tipos Mediador de respuestas Citotoxicidad en la línea celular
activados, muchos otros tipos celulares inflamatorias e inmunes. Regula la de ratón.L929.
celulares incluyendo linfocitos T, proliferación y diferenciación.
B y fibroblastos Citotóxico para células tumorales.
Sin título-2
TNF-β 25 kDa Linfocitos T y B activados Múltiples tipos Mediador de respuestas Citotoxicidad en la línea celular
(Linfoto celulares inflamatorias e inmunes. Regula la de ratón L929.
xina) proliferación y diferenciación.
Citotóxico para células tumorales.
EGF 6 kD Células ectodérmicas, monocitos, Células epiteliales Estimula proliferación Proliferación de la línea de
riñón, glándulas duodenales carcinoma A431
218
MIP-1ª 8 kDa Linfocitos T y B, células de Linfocitos B, T, NK y Quimiotaxis Quimiotaxis para eosinófilos
Langerhan, neutrófilos y eosinófilos
macrófagos Células troncales Inhibición de la proliferación
MIP-1a 7.8 kDa Linfocitos T, B y macrófagos Leucocitos Quimiotaxis Antagoniza los efectos de MIP-
Células mieloides Estimulación de la proliferación 1a. Aumenta la formación de
colonias hematopoyéticas junto
con GM-CSF.
218
MCP-1 8-18 kDa Monocitos, linfocitos T Monocitos Quimiotaxis y activación Quimiotaxis para monocitos o
fibroblastos, células endoteliales, Basófilos Activación basófilos.
músculo liso y keratinocitos.
TGF- 25 kDa Plaquetas y la mayor parte de las Múltiples tipos Inhibición de la proliferación Inhibición del crecimiento de la
células nucleadas celulares lÌnea celular MV-1-Lu.
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que la forma activa u oligomérica de las citoquinas extracelular enviada por el ligando hacia el inte-
induce la oligomerización del receptor, es decir, rior de la célula. La tabla 11-3 muestra las
pone en contacto o aproxima las diferentes características de los receptores para las pricipales
subunidades que conforman el receptor funcional. citoquinas, así como las tirosinas kinasas que se
Este reordenamiento en la membrana celular pro- activan por efecto de la unión del ligando al re-
duce la activación de proteínas que se encuentran ceptor, y los estimuladores y activadores de la
en forma latente en el citoplasma, desencadenando transcripción asociados a esta reacción.
una cascada de reacciones que lleva a los efectos Los receptores para las citoquinas son
que se les conoce a las citoquinas. proteínas de transmembrana altamente específicos,
Las citoquinas son pleiotrópicas y siendo en su mayor parte, específicos para una
redundantes lo que quiere decir que una citoquina especie (figura 11-1). Es sorprendente el hecho
puede ejercer una actividad funcional sobre varios de que jamás se haya podido demostrar que una
tipos celulares y que una determinada función puede citoquina determinada sea capaz de inhibir la unión
ser realizada por diferentes citoquinas, de otra citoquina a su receptor. La especificidad
respectivamente. Las citoquinas en general son de especie que se le atribuye a las citoquinas podría
producidas por una gran variedad de células, como explicarse a nivel de unión a su receptor.
es el caso de la IL-1 la cual es producida por todas La interacción entre la citoquina y su recep-
las células nucleadas. Por otra parte, los linfocitos T tor es de gran afinidad, con constantes de
y los macrófagos son las células que producen la disociación cercanas a 10-11 M/L. Las células
mayor diversidad de citoquinas, aunque casi pueden presentar en su superficie receptores para
cualquier célula es capaz de producir citoquinas ante varias citoquinas siendo su número muy bajo, en-
determinados estímulos. tre 100 a 1.000 receptores por célula. Sin embargo
La producción de una citoquina desencadena se necesita que sólo una fracción de los receptores
variadas reacciones. Induce la secreción de al sea ocupada para ejercer una máxima actividad
menos otra citoquina, puede suprimir la actividad biológica. El receptor funcional de una citoquina
de otras citoquinas o bien puede inducir una está, generalmente, formado por la subunidad que
cascada de citoquinas. La cantidad de citoquina une la citoquina y una o más subunidades
producida tiene relación con la actividad biológica diferentes más bien relacionadas con la
de ella misma. A menudo, las citoquinas actúan transducción de la señal. Los receptores de las
en sinergia o en forma antagónica. Por otra parte, citoquinas han sido clasificados en familias de
una citoquina puede inducir la expresión de su acuerdo a homologías estructurales, a la presencia
propio receptor en la célula que la está secretando de ciertos dominios conservados, o a homologías
o en células vecinas, o bien puede inducir la funcionales. A estas superfamilias pertenecen
expresión de un receptor para otra citoquina. Las también proteínas que no son, necesariamente,
propiedades de las citoquinas demuestran que receptores para citoquinas:
existe una red de interacciones celulares muy
compleja y dificil de estudiar en los organismos Familia de receptores hematopoyéticos. La fa-
vivos. Por esta razón, y a pesar de tener una enorme milia más numerosa es la de los receptores
cantidad de conocimientos acerca de una citoquina hematopoyéticos o receptores de tipo I, que
particular, su utilización terapéutica es hoy en día contienen en su secuencia primaria de aminoácidos
muy limitada. el motivo WSXWS en la región extracelular
además de 2 dominios extracelulares con cisteinas
conservadas. Esta familia incluye las cadenas β y
3. RECEPTORES DE LAS CITOQUINAS Y γ de IL-2R, IL-4R, las cadenas α y β de IL-3R, las
MECANISMOS DE TRANSDUCCIÓN DE cadenas α y β de IL-5R, IL-6R, gp130, IL-9R,
SEÑALES IL-12R, G-CSFR (“Granulocyte Colony Stimu-
lating Factor Receptor”), GM-CSFR (“Granulo-
3.1. Receptores de citoquinas cyte/Macrophage Colony Stimulating Factor Re-
ceptor”), CNTFR, LIFR, EpoR (“Erythropoietin
La comprensión del mecanismo de acción de Receptor”), PRLR (“Prolactin Receptor”) y GHR
las citoquinas ha avanzado gracias al conocimiento (“Growth Hormone Receptor”). La señalización
que se ha adquirido de los receptores de éstas, los a través de este tipo de receptores no está bien
cuales son responsables de transmitir la señal definida aunque se han descrito la fosforilación
219
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Tabla 11-3. Receptores, tirosinas kinasa y proteínas STATs activadas por las citoquinas
Citoquina Receptor JAKs acopladas a los STATs implicadas

diferentes receptores en la transducción
de la señal
Il-1-α 2 receptores
IL-1-b Tipo I: 80 kDa (CDw121a)
Tipo II: 60 kDa (CDw121b)
IL-2 Complejo formado de 3 cadenas. JAK1, JAK3 STAT3, STATX
Cadena-α: 55 kDa (CD25, Tac)
Cadena-β: 75 kDa (CD122)
Cadena-γ: 64 kDa (conocida como γc)
IL-3 Complejo formado de 2 cadenas. JAK2 STAT5
Cadena-α: 60-70 kDa CD123)
Cadena-β: 110-140 kDa (KH97 en humanos,
AIC2A o AIC2B en ratón)
IL-4 Complejo formado de al menos 2 cadenas. JAK1, JAK3 IL4-STAT
Cadena-α: 140 kDa (CD124)
IL-5 Complejo formado de 2 cadenas. JAK2 STAT5
IL-6 Complejo formado de 2 cadenas. JAK1, JAK2, TYK2 STAT1α (IL-6), STAT3
Cadena-β: 130 kDa (gp130)
IL-7 Complejo formado de al menos 2 cadenas.
IL-9 Una sola cadena de 64 kDa JAK1, JAK2, TYK2 STAT1α, STATX
Es probable que esté asociada a la cadena-g
de 64 kD de IL-2R conocida como γc.
IL-10 Una sola cadena de 90-110 kDa. TYK2, JAK1 STAT1α, STAT3
IL-11 Una sola cadena de 90-151 kDa.
IL-12 Una sola cadena de 180 kDa. TYK2, JAK2 STAT4, STAT3
Probablemente esta cadena esté asociada a una
componente relacionada a gp130.
IL-13 Desconocido aún, pero probablemente comparta
alguna componente con IL-4R.
IL-14 Receptor formado por una sola cadena. Peso
molecular desconocido.
IL-15 Complejo formado de 3 cadenas. JAK1,JAK3 ?
Cadena-α: desconocida, pero no es Tac.
Cadena-β: 75 kDa (CD122)
220
Sin título-2 220 5/26/06, 10:25 AM

IL-16 Desconocido aún.
GM-CSF Complejo formado de 2 cadenas. JAK2 STAT5
Cadena-α: 80 kDa (CDw116)
G-CSF Una sola cadena de 150 kDa. JAK1 STAT3
El receptor humano tiene homología con la
cadena gp130 del IL-6R.
M-CSF Una sola cadena de 150-165 kDa (CD115). ? STAT1α, STATX
El receptor es idéntico al proto-oncogen c-fms.
Receptor tiene actividad tirosina kinasa.
SCF Formado de 1 cadena de 145-150 kDa (CD117).
(c-kit Conocido como c-kit.
ligand) El receptor está estructuralmente relacionado al
proto-oncogen c-fms
IFN-α/β IFN-α/βR de 102 kDa que liga JAK1, TYK2 STAT1α, STAT1β,
IFN-β e IFN-α. STAT2
IFN-γ Complejo formado de 2 cadenas JAK2, JAK1 STAT1α, STAT1β,
IFN-gR de 90 kDa (CDw119) STAT3
Cadena accesoria llamada AF-1 o
cadena-β de IFN-γR.
TNF-α Existen 2 receptores
Tipo I de 55 kDa (CD120a)
Tipo II de 75 kDa (CD120b)
Ambos receptores ligan TNF-α y TNF-β.
TNF-β Mismo receptor que para TNF-α.
LT Tipo I de 55 kDa (CD120α)
Tipo II de 75 kDa (CD120β)
Ambos receptores ligan TNF-α y TNF-β.
EGF Una sola cadena de 170 kDa. JAK1 STAT1α, STAT3
TGF-β Existen 3 receptores
Tipo I, 53-68 kDa
Tipo II, 65 kDa
Tipo III, 250-350 kDa
Tipo I y II tienen actividad tirosina kinasa
en tirosinas y activación de varias proteínas activadoras de la transcripción llamadas STATs

celulares en respuesta a las citoquinas. Estos (STAT1, STAT2, etc). Una vez que se produce la
receptores no tienen actividad tirosina kinasa fosforilación de una o más STATs, éstas pueden
intrínseca por lo tanto se deben asociar directa o formar dímeros u oligómeros para enseguida
indirectamente con otras proteínas tirosina kinasas, translocarse al núcleo de la célula y activar directa
las Janus kinasas (JAK), las cuales activan o indirectamente la transcripción. Otros substratos
proteínas citoplasmáticas estimuladoras y incluyen PI-3K, Raf-1 y src kinasas.
221
Sin título-2 221 5/26/06, 10:25 AM

Figura 11-1. Receptores de citoquinas. Estos receptores son proteínas de transmembrana altamente específicos. (A) Se representa
esquemáticamente algunos receptores de citoquinas, indicando en cada caso los diferentes tipos de dominios que presentan. (B)
Estos receptores a menudo se asocian con una segunda proteína que les confiere funcionalidad. En algunos casos esta segunda
proteína es compartida por varios receptores.
Familia de los receptores del tipo interferón. tor”) y c-kit, también denominado SCFR (“Stem
Una familia propia de los receptores de las Cell Growth Factor Receptor”).
citoquinas es la familia de los receptores del tipo
interferón (IFN) o de tipo II, entre los cuales se Familia con actividad tirosina kinasa
cuentan IFNα/βR, IFN-γR e IL-10R. La intrínseca. La familia de los receptores con
transducción de la señal por estos receptores in- actividad tirosina kinasa intrínseca la constituye
volucra la fosforilación y activación de la familia EGFR (“Epidermal Growth Factor Receptor”),
de las kinasas JAK al igual que los de la familia PDGFR, c-kit, M-CSFR y FGFR. El mecanismo
de tipo I. Estos mecanismos han sido descritos con de transducción de señal para estos receptores in-
bastante precisión para los interferones, no así para volucra la oligomerización inducida por la unión
IL-10. de la citoquina. Esta oligomerización produce
autofosforilación del receptor, lo que a su vez lleva
Superfamilia de las inmunoglobulinas. Otra fa- a la unión de otras proteínas que contienen
milia de receptores es aquella que contiene dominios SH-2 (dominios src homólogos que se
dominios extracelulares del tipo de las unen a tirosina fosforilada) y que están
inmunoglobulinas, a la cual pertenecen además involucradas en la cascada de señales.
varias proteínas que tienen un rol fundamental en
la respuesta inmune y que no son receptores para Receptores tipo TNF. Una última familia de
citoquinas. Esta familia es caracterizada por una receptores la constituyen los receptores del tipo
unidad estructural de alrededor de 100 TNF (“Tumor Necrosis Factor”), entre los cuales
aminoácidos con un puente disúlfuro que le se cuentan NGFR (“Nerve Growth Factor Recep-
confiere un plegamiento característico de los tor”), TNFR-I (p55), TNFR-II (p75). Otras
dominios de las inmunoglobulinas. Los receptores proteínas como Fas y CD40 (la proteína Fas juega
de las citoquinas pueden contener uno o más de un rol en la inducción de la apoptosis y CD40
estos dominios. Entre los receptores para las está involucrado en la activación de los linfocitos
citoquinas que pertenecen a esta familia se B mediante contacto directo con el linfocito T)
encuentran IL-1R, IL-6R, FGFR (“Fibroblast pertenecen a esta familia de receptores. Los
Growth Factor Receptor”), PDGFR (“Platelet miembros de esta familia se caracterizan por la
Derived Growth Factor Receptor”), M-CSFR presencia de tres o cuatro motivos (dominios) de
(“Macrophage Colony Stimulating Factor Recep- alrededor de 40 aminoácidos con predominancia
222
Sin título-2 222 5/26/06, 10:25 AM

de cisteínas en la parte extracelular de la molécula. será discutida más adelante separadamente ya que
Los mecanismos de transducción de señales de esta tiene características especiales que la distinguen
familia llevan a la activación de la expresión génica de todas las citoquinas ya mencionadas.
o a la apoptosis. Estos dos mecanismos son Los mecanismos de transducción de señales
mediados por adaptadores moleculares. de los receptores de tipo I y II han sido
Tal como se ha mencionado, en numerosos extensivamente estudiados y se ha demostrado que
casos los receptores de las citoquinas están involucran las JAK kinasas y las proteínas STATs.
formados por dos o tres subunidades, una de las Se ha demostrado directamente que la unión de
cuales tiene por función unir la citoquina y las otras una citoquina a su receptor induce la transcripción
subunidades están encargadas de transmitir la señal de genes específicos a través de la activación de
hacia el interior de la célula. El receptor funcional las STATs. En la tabla 10-3 se muestran las kinasas
y de alta afinidad lo constituye el complejo y las STATs activadas por cada citoquina. Se
formado por las diferentes subunidades. En observa que citoquinas que comparten la
algunos casos la subunidad transductora de la señal subunidad transductora de la señal, como es el caso
puede ser compartida por los receptores de varias de la IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 e IL-15 para la cadena
citoquinas como es el caso de la cadena γ del re- γ, esto lleva a que se activen en todos estos casos
ceptor de IL-2 que se une al receptor de IL-4, IL- las mismas JAKs kinasas (JAK-1 y JAK-3), sin
7, IL-9 e IL-15. Otro ejemplo es la cadena β de embargo existen diferencias en cuanto a las STATs
GM-CSF que se une al receptor de IL-3 e IL-5, y que son activadas en cada caso. Al parecer son las
la subunidad gp130 que es compartida por IL- STATs las que le dan la especificidad a las
6R, CNTFR, LIFR (“Leukaemia Inhibitory Fac- citoquinas. En este mismo sentido cabe notar que
tor Receptor”) y OSMR (“Oncostatin M Recep- casi únicamente los ratones “knock out” para las
tor”). Si consideramos además que la subunidad subunidades comunes a varias citoquinas, las JAK
que comparten estos diferentes receptores es la kinasas o bien las STATs son indispensables
proteína transductora de la señal, esto permitiría haciendo la mutación letal.
explicar por qué diferentes citoquinas son capaces
de ejercer una misma función, es decir la
"redundancia" de las citoquinas. 4. PRINCIPALES ACTIVIDADES BIOLÓ-
GICAS DE LAS CITOQUINAS
3.2. Transducción de señales
Las citoquinas participan principalmente en
Por otra parte, últimamente se han la respuesta inmune innata y la reacción
descubierto formas solubles de muchos de los inflamatoria, en la respuesta inmune específica
receptores de las citoquinas. Existen varias o adquirida y en la hematopoyesis. Estas
hipótesis respecto a la función de estos receptores actividades se manifiestan en la proliferación y
solubles. Primero, los receptores solubles serían diferenciación celular, la inducción de la síntesis
producidos por ruptura enzimática con lo cual de proteínas o de mRNA, su participación en la
impedirían que la citoquina pudiese efectuar su activación celular, su papel como factores
acción sobre la célula blanco. También los quimiotácticos y también su participación en
receptores solubles podrían encontrarse en el fenómenos como la apoptosis.
espacio extracelular y como tal competirían por
la citoquina disponible actuando entonces como 4.1. Inmunidad innata
factores de regulación negativo. Sin embargo, los
receptores solubles que se encontrarían en el Un organismo puede ser infectado por
espacio extracelular podrían tener como función numerosos tipos de patógenos, para lo cual se
estabilizar la citoquina en el lugar, en cuyo caso requieren diferentes medios para su eliminación,
estarían más bien teniendo un efecto positivo sobre además de diversos mecanismos efectores. Las
la acción de ésta. Una última hipótesis discutida células implicadas en la inmunidad innata o natu-
en la literatura es que los receptores solubles se ral son capaces de desarrollar diferentes funciones
podrían ligar a proteínas de la superficie de una y de discriminar en función del patógeno qué tipo
célula que normalmente no tiene receptor para la de función efectora debe ser activada.
citoquina y de esta manera hacerla sensible a ésta. Por el contrario, las células de la inmunidad
La familia de receptores de las quimioquinas específica, los linfocitos, no presentan esta
223
Sin título-2 223 5/26/06, 10:25 AM

especialización sino después de la etapa de enzimas, entre las cuales la 2'-5'oligoadenil
activación. Los linfocitos vírgenes son, en este sintetasa es la mejor estudiada. Esta acción de los
sentido, células pluripotentes, que pueden interferones es paracrina, es decir, su acción se
diferenciarse hacia distintos linajes dependiendo lleva a cabo en las células vecinas que no han sido
de las señales que provengan del medio ambiente. infectadas. Este efecto es conocido como la
Estas señales son inducidas por el patógeno sobre inducción del estado antiviral en el cual la
las células efectoras de la inmunidad natural. Cada proliferación celular es inhibida. Los interferones
tipo de célula efectora una vez activada producirá de tipo I aumentan la expresión de las moléculas
diferentes citoquinas dependiendo de la naturaleza de histocompatibilidad de clase I (MHC clase I) e
del patógeno. Estas citoquinas producidas inhiben la expresión de las moléculas MHC clase
tempranamente en la infección, determinan II. Ya que los linfocitos citotóxicos (LTc)
finalmente el tipo de respuesta del sistema inmune reconocen los antígenos en función de las
específico. Por lo tanto la inmunidad innata y moléculas MHC clase I, la acción de este tipo de
específica están integradas en la respuesta inmune. interferón favorece el desarrollo de una respuesta
Dentro de la respuesta inmune innata inmune específica celular de tipo Th1.
consideraremos el efecto de las citoquinas en
forma separada en la respuesta a patógenos de 4.1.2. Citoquinas e inflamación
origen viral, recordando que la respuesta
establecida y la producción de citoquinas tendrán La inflamación es una respuesta fisiológica
consecuencias en la respuesta inmune específica normal al daño, ya sea mecánico o infeccioso. En
así como en la hematopoyesis. Este último tópico, las primeras etapas se encuentra localizada, pero
será tratado separadamente aunque está luego puede desarrollarse una respuesta sistémica.
directamente involucrado en la respuesta inmune Las principales alteraciones observadas son:
en su totalidad. coagulación, exudación plasmática, activación del
sistema del complemento, diapedesis y migración
4.1.1. Inmunidad antiviral leucocitaria, activación de células mononucleares
y polimorfonucleares y producción de mediadores
Existen dos tipos de respuestas a la infección solubles, entre ellos citoquinas.
por un virus. En primer lugar se estimula la Todos los procesos inflamatorios, ya sean de
producción de interferones de tipo I, es decir INF- origen inmune u otro, llevan consigo la activación
α o IFN-β, los cuales tienen como función inhibir de macrófagos residentes y la infiltración de
la replicación viral. Por otra parte, la infección viral leucocitos desde la sangre. La activación induce
provoca la activación de las células NK las cuales cambios en las células entre los cuales se incluyen
son capaces de matar una amplia variedad de la producción de citoquinas. Determinadas
células infectadas por virus. Los IFNs de tipo I citoquinas originan directa o indirectamente la
aumentan además la actividad lítica de las células cascada de eventos que genera otros mediadores
NK, las cuales pueden matar en forma más eficaz esenciales en la respuesta inflamatoria.
las células infectadas. De las numerosas citoquinas presentes en el
Existen al menos 20 genes para interferones sitio de la inflamación, dos de ellas, IL-1 y TNF-
de tipo α los cuales están localizados en una misma α (“Tumor Necrosis Factor-α”), juegan un papel
región en el cromosoma 21 en humanos. Las fundamental. Algunas de sus acciones sobre
preparaciones naturales de IFN-α comprenden una diversos tipos celulares son: la producción de
mezcla de éstos. Los macrófagos son las mejores mediadores lipídicos, enzimas proteolíticas y
células productoras de IFN-α y por esto se lo llama radicales libres, todos elementos involucrados en
interferón leucocitario. El IFN-β consiste de un el daño observado. IL-1 y TNF-α ejercen su
único producto génico, localizado en la misma actividad citotóxica sobre tejidos como el
region cromosómica del IFN-α. Estos dos tipos endotelio vascular, el cartílago, los huesos,
de interferones presentan muy poca homología músculos y las células de los islotes de Langer-
estructural, sin embargo se unen al mismo recep- hans. Otras citoquinas, tales como el IFN-γ, IL-3
tor celular. o GM-CSF, que pueden ser producidas por otras
Los interferones inducen diversos efectos células presentes o atraidas al sitio de la
sobre las células. Primero, inhiben la replicación inflamación, las cuales actúan amplificando la
del RNA o DNA viral mediante la síntesis de varias respuesta inflamatoria y aumentando la producción
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Sin título-2 224 5/26/06, 10:25 AM

de IL-1 y TNF-α por los macrófagos. osteólisis, proteólisis y citotoxicidad sobre células
Las citoquinas producidas en el sitio de la β de los islotes de Langerhans. También ejercen
inflamación participan directamente en el un fuerte efecto en el sistema nervioso central,
reclutamiento de leucocitos en el foco induciendo fiebre, somnolencia y la producción
inflamatorio. Este efecto es mediado por la de glucocorticoides.
producción de quimioquinas, tales como IL-8 y
MCP-1 (“Monocyte Chemoattractant Protein”). 4.2. Citoquinas y respuesta inmune
Además, en células endoteliales, IL-1, TNF-α+e
IFN-γ, inducen la expresión de moléculas de Las citoquinas regulan una gran variedad de
adhesión tales como ICAM-1 (“Intercellular Ad- respuestas inmunes, estimulando o inhibiendo el
hesion Molecule 1”) y VCAM (“Vascular Cell crecimiento y la diferenciación de las células que
Adhesion Molecule”) participando de esta manera componen el sistema inmune. Las citoquinas
directamente en la adherencia de células seleccionan el tipo de respuesta inmune y también
sanguíneas. Por otra parte, IL-1, TNF-α e IL-8 los mecanismos efectores. Las respuestas inmunes
alteran la permeabilidad vascular y permiten una mediadas por células involucran la activación de
extravasación de proteínas plasmáticas. macrófagos, linfocitos T "helper" (CD4+) y
La IL-6, muy abundante en los procesos linfocitos T citotóxicos (CD8+). Los linfocitos T,
inflamatorios, induce la producción de las B y los macrófagos responden a la estimulación
proteínas de fase aguda en los hepatocitos y la antigénica produciendo una variedad de citoquinas
respuesta febril junto a IL-1 y TNF-α. Lo mismo las cuales pueden estimular o inhibir células
ocurre con IL-11 y LIF. La reacción inflamatoria efectoras de la respuesta inmune. Los linfocitos B
es inhibida por varias citoquinas antinflamatorias, se activan y producen inmunoglobulinas
entre las cuales se encuentran TGF-β (“Transform- dependiendo de las señales que reciben de las
ing Growth Factor beta”), IL-4 e IL-10 que inhiben células Th. Los linfocitos B pueden producir
la producción de IL-1 y de TNF-α. Los distintas clases de inmunoglobulinas con
glucocorticoides tienen igualmente esta capacidad diferentes afinidades dependiendo de las
y son producidos por una cascada de eventos citoquinas que ellos encuentren. La activación de
iniciada por IL-1, TNF-α e IL-6 a través del los linfocitos T y B lleva al desarrollo de la me-
sistema o eje neuro-endocrino. La noción de red moria inmunológica T y B, lo que le da al sistema
de citoquinas se ilustra perfectamente con la inmune la capacidad de responder de manera más
participación de estos mediadores en la reacción rápida y eficaz frente a un estímulo posterior. Se
inflamatoria. establece así una red de complejas interacciones
Las prostaglandinas inducidas por IL-1 y que determina la respuesta global frente a un
TNF-α causan muchos de los efectos observados estímulo.
en la inflamación. Diversos tipos celulares pueden
producir prostaglandinas (siendo PGE-2 la más 4.2.1. Citoquinas y diferenciación de células
importante) en respuesta a IL-1 y TNF-α. Otro linfoides
mediador lipídico que se produce en la inflamación
es el factor activador de plaquetas (PAF) que junto En un estado temprano del desarrollo en el
con las prostaglandinas aumentan la permeabilidad timo, algunas citoquinas entre las cuales se
vascular inducida por IL-1. incluyen SCF (“Stem Cell Factor”), IL-1α, IL-2,
La producción de radicales libres, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7 y TNF-α, pueden jugar un
principalmente óxido nítrico (NO), es altamente papel importante en la diferenciación de los
eficiente en la eliminación de microorganismos. linfocitos T. Las células que conforman el estroma
Sin embargo, el estrés oxidativo provocado por tímico interactúan con los timocitos en los
los radicales libres, daña numerosas células. La diferentes estados de desarrollo y regulan la
producción de NO es inducida fuertemente a producción de citoquinas de todo el sistema. La
través de IL-1 y TNF-α en células endoteliales, combinación de SCF, IL-3, IL-6 e IL-7 mantienen
monocitos/macrófagos y fibroblastos. el crecimiento de las células troncales
En resumen, IL-1 y TNF-α tienen tanto hematopoyéticas provenientes de la médula ósea.
efectos beneficiosos como dañinos para el Los precursores tímicos linfoides expresan el re-
organismo. Entre estos últimos tenemos las ceptor para SCF (CD117), y la expresión de
lesiones vasculares, la degradación del cartílago, CD117 se correlaciona negativamente con la
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Sin título-2 225 5/26/06, 10:25 AM

iniciación del reordenamiento de la cadena β del secreción de citoquinas por estas células accesorias
TCR. La respuesta proliferativa temprana de los depende de la naturaleza del antígeno, de la vía de
timocitos a SCF se ve aumentada por la presencia introducción del antígeno así como de la
de IL-7, citoquina que es producida por las células concentración del antígeno. IL-12, IFN-γ e IL-4
que conforman el estroma. IL-1 e IL-7, así como juegan un papel crítico en la diferenciación hacia
TNF-α, están involucradas en la maduración de una u otra subpoblación de linfocito Th. Hasta hace
los precursores tempranos de los timocitos CD3- poco se pensaba que los macrófagos, las células T
CD4-CD8- hacia el estado de células pro-T que NK1.1+ y los mastocitos eran los responsables de
luego pueden dar origen a linfocitos T la producción temprana de estas citoquinas. Sin
funcionalmente competentes. IL-2 induce el re- embargo, eosinófilos, neutrófilos, células
ceptor de alta afinidad para IL-2 en forma epiteliales, células dendríticas y keranocitos
autocrina en los timocitos y regula la fase producen y pueden guardar grandes cantidades de
proliferativa temprana permitiendo el pasaje de la éstas y otras citoquinas en función del estímulo
fase G1 a la fase S del ciclo celular. IL-2 participa que ellas reciben.
además en la posterior diferenciación de las No se conocen aún marcadores de superficie
células T. El estudio de los receptores para las específicos de Th1 o Th2, aunque la molécula
citoquinas en los timocitos, demostró que los CD30 es un buen candidato para las células Th2.
receptores para IL-1, IL-2 e IL-4 están regulados Las células Th1 y Th2 tienen diferentes
en el desarrollo y que su expresión está coordinada requerimientos para la proliferación y activación.
con la producción de IL-1 por las células Las células Th1 usan IL-2 como factor de
estromales y la producción de IL-2 e IL-4 por los crecimiento autocrino y casi no responden a IL-4.
timocitos. Las células Th2 usan IL-4 como factor de
Finalmente, las citoquinas influencian crecimiento autocrino pero también proliferan en
también el reordenamiento del receptor de los respuesta a IL-2. Las células Th2 pueden ser
linfocitos T (TCR). activadas en ausencia de CPA por anticuerpos
dirigidos contra TCR/CD3, pero necesitan IL-1
4.2.2. Células Th1 y Th2 como coestímulo para proliferar. La IL-1 regula
positivamente la producción de IL-4, así como la
Polarización de las células T "helper" expresión del IL-2R. Se desconoce si aumenta la
expresión del IL-4R. Aparentemente IL-4 aumenta
Los linfocitos T maduros producen citoquinas la expresión del IL-1R. Se puede concluir de esto
en respuesta a una estimulación antigénica. La último que IL-1 e IL-4 son interdependientes. Las
producción de citoquinas por los linfocitos T células Th1 no requieren IL-1 como coestímulo
activados depende de las señales que recibe del para su proliferación y no expresan el receptor para
microambiente constituido por las células esta citoquina.
presentadoras de antígeno (CPA) y células Las células Th1 y Th2 regulan mutuamente
accesorias de la respuesta inmune. En ratón y su actividad a través de la producción de citoquinas
humanos, estudios realizados con clones de inhibitorias de la proliferación de una u otra
células Th (CD4+) han demostrado la existencia subpoblación. IFN-γ e IL-4 son antagónicas en el
de al menos 2 subpoblaciones de células Th: Th1 desarrollo de células Th2 o Th1, respectivamente.
y Th2. Estas subpoblaciones difieren en el espectro Es así como, IFN-γ inhibe la proliferación de Th2,
de citoquinas que ellas secretan una vez que son mientras que IL-10 inhibe la proliferación de Th1
activadas: Los linfocitos LTh1 secretan IL-2, IFN- mediante la inhibición de la producción de IFN-γ.
γ, TNF-β y los Th2 secretan IL-4, IL-5, IL-10. Se Esta regulación puede ocurrir también a nivel de
ha demostrado además que las células T CD8+ y las células efectoras activadas por estas
algunas células Tγδ tienen patrones de secreción subpoblaciones. Por ejemplo, en la producción de
de citoquinas similares a Th1 y Th2, aunque no diferentes isotipos de inmunoglobulinas, IL-4 in-
secretan IL-2. duce la producción de IgE, mientras que IFN-γ
La polarización de los linfocitos T se debe a induce la producción de IgG2a. De manera gene-
una secreción temprana de citoquinas por células ral Th1 regula negativamente la producción de
que participan probablemente en la inmunidad anticuerpos inducida por las células Th2 en las
natural, como son macrófagos, células NK y en células B.
algunos casos incluso células epiteliales. La
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Sin título-2 226 5/26/06, 10:25 AM

Precursores de las células Th1 y Th2 realizados en células activadas o en determinadas
patologías. Algunas respuestas inmunes parecen
Las células Th1 y Th2 derivan de una ser dominadas por una u otra subpoblación,
población Th0, capaz de secretar ambos patrones resultados inferidos a partir del espectro de
de citoquinas. Th0 puede representar un progeni- citoquinas que se produce en una patología par-
tor no comprometido con la capacidad de ticular. Por ejemplo, la inmunización con un
diferenciarse hacia una u otra población antígeno en adjuvante de Freund completo, lleva
dependiendo de las señales que reciba del a respuestas de tipo DTH (hipersensibilidad de tipo
microambiente. Es posible postular que existen retardada) e involucran IFN-γ y anticuerpos, pero
células T precomprometidas capaces de secretar no del tipo IgE. El mismo antígeno adsorbido en
ambos patrones de citoquinas, antes de alúmina provoca la producción de IgE y poca
desarrollarse en una célula comprometida hacia DTH. La infección de ratones con ciertos tipos de
un determinado linaje T. Si esto fuera cierto, la parásitos (Helmínticos) produce gran cantidad de
activación policlonal de células T debería llevar a IgE, eosinofilia y una reducida cantidad de IL-2 e
la producción del conjunto completo de citoquinas, IFN-γ. Por lo tanto se produce una respuesta
pero en realidad sólo se encuentran grandes selectiva de tipo Th2. La infección con bacterias
cantidades de IL-2. Esto implica que la célula T activa una respuesta dominante de tipo Th1, con
virgen, solamente es capaz de producir IL-2. En altos niveles de IgG2a.
otros estudios en los cuales se activan las células Diferentes cepas de ratones pueden activar
T con formol miristato (PMA) y ionóforo de Ca, selectivamente una u otra respuesta contra un
se demostró la producción de IL-2 e IL-4. La mismo antígeno. Ratones Balb/c infectados con
identidad de Th0 no está aún establecida. Leischmania mayor, producen una enfermedad
fatal la cual está dominada por altos niveles de
Función de las células Th1 y Th2 in vivo IL-4. Este efecto se puede revertir si se les inyecta
anticuerpos anti-IL-4 o transfiriendo células Th1.
La activación de las células Th por Sin embargo, C57Bl/6 produce una respuesta de
interacción con un ligando, lleva a la célula Th en tipo Th1 y elimina la infección. En general, agentes
reposo a diferenciarse hacia algún subgrupo infecciosos intracelulares expanden células Th1,
funcional caracterizado por el espectro de mientras que antígenos exógenos expanden
citoquinas que secretan. Las células Th1 secretan respuestas de tipo Th2. No se sabe cuáles son los
IL-2 e IFN-γ y activan los macrófagos y factores que activan una respuesta de tipo Th1 o
reacciones de hipersensibilidad retardada. Las Th2, pero estos hechos involucran además
células Th2 producen IL-4, IL-5 e IL-10, las cuales componentes genéticos.
son importantes para la producción de IgE, y Otro rol funcional asignado a las células Th1
suprimen la inmunidad mediada por células. Se y Th2 es su participación en el cambio de clase
ha postulado una tercera subpoblación de linfocitos de inmunoglobulinas secretada por los linfocitos
Th, Th3, la cual secretaría principalmente TGF- B. Esto último es importante, ya que el cambio de
β. En este último tiempo parece haberse isotipo lleva a un cambio en la función efectora
encontrado finalmente las células T supresoras del anticuerpo producido, sin cambiar su
postuladas hace muchos años, actualmente especificidad por el antígeno. Las células Th1
llamadas células T reguladoras. Esta regulan pricipalmente la producción de IgG2a por
subpoblación tiene la característica de coexpresar los linfocitos B, mientras que las células Th2
CD4 y CD25 en forma endógena, y de secretar regulan la producción de IgE. Ambos tipos de
principalmente IL-10, una citoquina células Th son capaces de regular la producción
reconocidamente inhibitoria. Se mencionan aquí de IgM y de IgG3. Los linfocitos Th1 son células
por su importancia aunque la caracterización es pobremente ayudadoras para los linfocitos B. Esto
aún muy reciente. Las citoquinas que produce en parte debido a la producción de IFN-γ que
cada subpoblación actúan como factores de inhibe la estimulación producida por IL-4, en par-
crecimiento autocrino. ticular para la producción de IgE. Estas células
No se sabe aún con certeza si estas presentan también actividad citotóxica contra los
poblaciones se desarrollan in vivo. Actualmente linfocitos B presentadores de antígeno, de allí que
existen evidencias indirectas de estas aparezcan como células supresoras de un
subpoblaciones ya que estos estudios han sido determinado isotipo de inmunoglobulina.
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Subpoblaciones de linfocitos Th humanos la producción de anticuerpos, sólo que el resultado
está reflejando diferentes condiciones
Los estudios realizados in vitro con clones experimentales.
de linfocitos T activados, no han permitido La función más específica de las citoquinas
demostrar la existencia de patrones de secreción sobre los linfocitos B es su participación en el
bien definidos. Los linfocitos Th humanos se cambio de isotipo de la inmunoglobulina
parecen más a los linfocitos Th0 murinos. Clones secretada. Los ejemplos más claros de esta función
de células T derivados de dadores reactivos a de las citoquinas son IL-4, la cual es absolutamente
alergenos o inmunizados con toxina tetánica, han necesaria para la producción de IgE e IFN-γ que
demostrado la presencia de clones específicos para está implicado en la producción de IgG2a. TGF-β
alergenos selectivamente enriquecidos en células en conjunto con IL-5 participan en el cambio de
capaces de producir IL-4. La inmunización con isotipo a IgA.
toxina tetánica produce preferencialmente IL-2 e La afinidad de las inmunoglobulinas
IFN-γ. Esto demuestra que la inmunización in vivo secretadas por los linfocitos B depende también
activa selectivamente subpoblaciones similares a de las citoquinas presentes en el sitio donde se está
las encontradas en el ratón. No ha sido posible llevando a cabo la reacción.
actualmente diferenciar estas respuestas in vitro
pero los estudios realizados in vivo permiten 4.2.4. Respuesta inmune específica mediada
postular la existencia de estas subpoblaciones por células
celulares en humanos.
Los linfocitos T CD4+ y CD8+ activados
4.2.3. Activación de linfocitos B secretan un grupo de citoquinas que sirven para
activar células efectoras de la respuesta inmune
Los linfocitos B en reposo pueden ser no específica o natural. Estas citoquinas
activados de manera independiente o dependiente comprenden el interferón inmune o IFN-γ, TNF-
de los linfocitos T. En cualquiera de los casos, la β o linfotoxina, IL-10, IL-5 e IL-12. Todas estas
presencia de determinadas citoquinas es citoquinas producen la activación de numerosos
indispensable. Las citoquinas tienen dos funciones tipos celulares entre los cuales los principales son
principales en las respuestas mediadas por macrófagos, células NK, linfocitos T y B, células
inmunoglobulinas: participan en las fases endoteliales, neutrófilos y eosinófilos.
proliferativas y de diferenciación de los linfocitos El IFN-γγ es producido por los linfocitos T
B y promueven selectivamente el cambio de clase CD4+ del tipo Th1, T CD8+ y células NK. La
de las inmunoglobulinas (“switch” isotípico). producción de IFN-γ es producida como
Numerosas citoquinas pueden estimular la consecuencia inmediata de la activación de la
proliferación de los linfocitos B. De las citoquinas respuesta inmune específica y es estimulada por
producidas por los linfocitos Th, IL-2, IL-4 e IL-5 IL-2 e IL-12. IFN-γ es el más potente activador
participan en la proliferación y además pueden de los macrófagos para matar microorganismos
actuar en sinergia para llevar a cabo este efecto. fagocitados. También activa macrófagos para
La IL-6, que es producida por varios tipos celulares matar células tumorales.
participa en la proliferación de los linfocitos B ya El IFN-γ actúa a nivel de la fase de
diferenciados productores de anticuerpos reconocimiento en la respuesta inmune, mediante
(plasmocitos). IL-1, IL-10 y TNF estimulan su la estimulación de la síntesis de moléculas MHC
crecimiento in vitro. La redundancia de las de clase I y la inducción de la síntesis de moléculas
citoquinas involucradas en la proliferación de los MHC de clase II en numerosos tipos celulares que
linfocitos B explica en parte por qué al bloquear normalmente no las expresan. Por lo tanto, el IFN-
la producción de una determinada citoquina, esto γ es capaz de activar tanto células T CD4+ como
no tiene efecto en la producción de anticuerpos. T CD8+. Como ya se señaló, el IFN-γ promueve
Las citoquinas participan directamente en la la diferenciación de los linfocitos T CD4+ hacia
secreción de anticuerpos en respuesta a un el fenotipo Th1 e inhibe la proliferación de células
antígeno. En el ratón ha sido demostrado que IL- Th2. La maduración de los linfocitos T CD8+ hacia
4 e IL-5 participan en esta función. En humanos LTc requiere de la presencia de IFN-γ. Como se
se ha podido demostrar que IL-2 e IL-6 aumentan vio anteriormente, el IFN-γ actúa sobre los
la producción de anticuerpos. Probablemente todas linfocitos B estimulando el cambio de isotipo de
estas citoquinas participan en ambos sistemas en
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las inmunoglobulinas hacia IgG2a e Ig3, al mismo induciendo además la producción de IFN-γ por
tiempo que inhibe el cambio a IgG1 e IgE. El IFN- estas células. Para llevar a cabo estos efectos, la
γ estimula la actividad citotóxica de las células IL-12 puede actuar además en sinergia con IL-2
NK y activa los neutrófilos, aunque de manera produciendo las denominadas células LAK (“Lym-
menos eficaz que TNF-α o LT. El IFN-γ puede phokine Activated Killer Cells”). La diferenciación
sinergizar la actividad de estas últimas citoquinas. de las células Th1 es dependiente de la presencia
El IFN-γ estimula la síntesis de numerosas de IL-12, la cual inhibe la proliferación de células
otras proteínas, entre otras, moléculas de adhesión de tipo Th2. Finalmente, la IL-12 estimula la
en células endoteliales vasculares, lo que facilita diferenciación de linfocitos T CD8+ a células T
la extravasación de linfocitos T CD4+. Todas estas citotóxicas.
acciones del IFN-γ conllevan a respuestas del tipo
Th1 y estimulan la reacción inflamatoria. 4.3. Citoquinas y hematopoyesis
La linfotoxina (TNF-β β) es una citoquina que
tiene un cierto grado de homología con TNF-α, Las células de la sangre que ayudan a
pero a diferencia de TNF-α, es sintetizada mantener la funcionalidad del organismo, tienen
exclusivamente por linfocitos T. La linfotoxina se una vida media limitada. Por lo tanto, estas células
une al mismo receptor que TNF-α, regulando en terminales deben ser reemplazadas. La producción
consecuencia los mismos tipos de reacciones. de las células sanguíneas es un proceso dinámico
TNF-β es un potente activador de los neutrófilos, finamente regulado a nivel celular e intracelular.
y por lo tanto se encuentra implicada en la reacción La regulación involucra por una parte las células
inflamatoria, y contribuye además a la lisis de la sangre y células accesorias, y por otra parte,
mediada por LTc de las células blanco. La las células que responden a la acción de las
linfotoxina, al igual que el IFN-γ, activa las células citoquinas. Entre las células accesorias, las cuales
endoteliales aumentando la adhesión de leucocitos producen diferentes citoquinas, están linfocitos,
y la producción de citoquinas. monocitos, macrófagos, granulocitos, células NK,
La IL-10 es una citoquina que tiene más bien fibroblastos, células endoteliales, adipocitos,
efectos inhibitorios sobre la respuesta inmune. Esta miocitos y células del estroma en general. Las
es producida por las células Th2 y varios otros tipos células sobre las cuales van a actuar las citoquinas
celulares. Las actividades más importantes de la IL- dependerán de la presencia en su superficie del
10 son la inhibición de las funciones accesorias del receptor adecuado para la citoquina producida por
macrófago y la producción de citoquinas por éste. la célula accesoria.
Estos efectos llevan a una inhibición de la reacción Actualmente se conocen más de 40
inflamatoria mediada por linfocitos T y a la citoquinas, que tienen efecto sobre la
estimulación de los linfocitos B. Un hecho hematopoyesis. Estas citoquinas tienen efectos
sorprendente es que el virus Epstein-Barr posee en estimulantes o supresores. Muchas de las
su genoma un gen homólogo a IL-10, lo cual podría citoquinas tienen actividad pleiotrópica, más que
significar que este virus adquirió este gen con el efectos específicos. A su vez, las citoquinas pueden
objeto de evadir la respuesta inmune. ejercer un efecto directo o indirecto en la
La IL-5 es una citoquina producida por hematopoyesis.
linfocitos Th2 y mastocitos activados. Su principal Entre las acciones directas tenemos los
acción es la de estimular la proliferación y efectos sobre las células troncales (“stem cells”)
diferenciación de eosinófilos de tal manera que ellos y progenitoras de las células de la sangre. Las
sean capaces de eliminar células infectadas con un células troncales son células multipotenciales con
determinado parásito. La IL-5 actúa en sinergia con capacidad de autorregenerarse. Dentro del
IL-2 e IL-4 para estimular el crecimiento y la compartimiento troncal existe una jerarquía. Las
diferenciación de los linfocitos B. células más inmaduras tienen más capacidad de
La IL-12 tiene gran importancia en la autorrenovarse y una mayor capacidad de
respuesta inmune por las numerosas actividades proliferación mientras que las células más maduras
biológicas en las cuales participa. El efecto glo- tienen una capacidad limitada de autorrenovarse
bal de la IL-12 está en la respuesta inmune mediada y son menos proliferativas, pero con mayor
por células, debido a los efectos que tiene sobre capacidad para diferenciarse.
las células NK y los linfocitos T. La IL-12 es el Las células progenitoras hematopoyéticas
más potente estimulador de las células NK, pueden detectarse en ensayos de proliferación en
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medio semisólido, por su capacidad formadora de hematopoyético contribuyen a mantener un amplio
colonias. Las células troncales se diferencian en rango de funciones fisiológicas. Por ejemplo, en
una variedad de células, entre las cuales tenemos conjunto con un antígeno específico presentado
las CFU-GEMM (unidades formadoras de por la CPA, la IL-2 contribuye a la proliferación
colonias granuloides, eritroides, mieloides y de linfocitos T y B, la cual en conjunto con IL-1
mielomonocíticas) y células con un linaje más promueve la producción de células NK a partir de
restringido tales como CFU-GM (colonias mixtas progenitores hematopoyéticos. La IL-2 e IFN-α
granulocítica monocítica), CFU-G (granulocítica), promueven la maduración de los linfocitos B y
CFU-M (monocítica), BFU-E (eritroides actúan directamente en la estimulación de la
tempranas), CFU-E (eritroides más maduras) y producción de IFN-γ por los macrófagos y células
BFU-MK (megacariocíticas) (ver capítulo 3). Este NK, e igualmente aumentan la capacidad
tipo de ensayo ha permitido definir solamente los citotóxica de los macrófagos.
progenitores mieloides. Los progenitores de las
células linfoides han sido definidos mediante 4.3.1. Factores estimuladores de colonias
marcadores de superficie principalmente.
Las células troncales y progenitoras son muy Las citoquinas que estimulan la
escasas en la sangre, con frecuencias menores que hematopoyesis son también responsables del
1/10.000; por lo tanto ha sido díficil demostrar un desarrollo, mantención y activación funcional de
efecto directo de las citoquinas sobre estas células. las células efectoras de la respuesta inmune. Los
Esto ha implicado tener que enriquecer o purificar linfocitos cumplen un papel fundamental en la
una determinada población para un estudio poste- respuesta inmune, pero son células tales como
rior. Estas mismas técnicas se han aplicado en los granulocitos, eosinófilos y otros que participan
trasplantes de médula ósea donde las células activamente en la primera línea de respuesta frente
troncales juegan un papel fundamental. a la agresión causada por un agente patógeno o
Durante la ontogenia las células troncales se una agresión mecánica. Las principales citoquinas
encuentran primero en el saco vitelino, luego en que estimulan la hematopoyesis son los diferentes
el hígado fetal, más tarde en el bazo fetal y "factores estimuladores de colonia", denominados
finalmente en la médula ósea. Al nacimiento, la por CSF antecedido por la inicial del tipo de células
sangre que se encuentra en el cordón umbilical y progenitoras sobre la cual actúa. Entre estos
la placenta tiene una alta concentración de células tenemos GM-CSF, G-CSF, M-CSF. Otras
troncales. En el caso de los trasplantes de médula citoquinas como IL-3 , IL-7, IL-12 y "c-kit ligand"
ósea, el número de células troncales que se o (SCF) tienen una función esencial en la
trasplantan es muy importante, por lo tanto gracias hematopoyesis. Las acciones de estas citoquinas
a estos conocimientos se ha podido desarrollar la son influenciadas por otras citoquinas, algunas de
tecnología adecuada para realizar trasplantes las cuales como TNF-α, LT, IFN-γ y TGF-β,
alogénicos en casos de compatibilidad HLA, inhiben el crecimiento de los progenitores
utilizando como fuente de células troncales la hematopoyéticos.
sangre de cordón umbilical. Debido al número de Las citoquinas que tienen un efecto
células troncales, este tipo de trasplante ha sido estimulador directo en la proliferación de las
posible sólo en niños. células progenitoras mieloides son IL-3, GM-CSF,
En adultos, la mayor fuente de células G-CSF, M-CSF e IL-5. La eritropoyetina (Epo)
troncales es la médula ósea y ésta es la fuente usada actúa sobre los progenitores eritroides. La IL-3 y
de rutina en los trasplantes autólogos y alogénicos. el GM-CSF son citoquinas que actúan sobre los
La sangre también es una fuente de células progenitores más tempranos, mientras que el G-
progenitoras, pero antes de recolectar las células CSF, M-CSF, Epo e IL-5 actúan sobre progenitores
troncales es necesario movilizarlas hacia la de linaje más restringido.
periferia usando factores de crecimiento tales Todas estas citoquinas, a excepción de IL-5, han
como GM-CSF, G-CSF, IL-3 o combinaciones de sido usadas en estudios clínicos en humanos y ellas
ellos. Sin embargo las citoquinas no sólo cumplen han acelerado la recuperación de la hematopoyesis
una función en los trasplantes sino también en la en una variedad de patologías. Sus efectos son dosis
estimulación y supresión de la hematopoyesis en dependientes y su toxicidad es mínima.
una situación determinada. Los factores estimuladores de colonias actúan
Finalmente, los factores de crecimiento en forma aditiva a sinérgica cuando se usan en
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Sin título-2 230 5/26/06, 10:26 AM

combinación. Esto ha llevado a producir citoquinas 4.3.2. Otras citoquinas estimuladoras de la
recombinantes a partir de proteínas de fusión en- hematopoyesis
tre diferentes citoquinas. Una de estas citoquinas,
PIXY321, producida por la fusión de GM-CSF e Varias citoquinas que no tienen un efecto
IL-3 por técnicas de biología molecular, es 10 directo sobre las células troncales o progenitoras,
veces más activa que la combinación de las 2 pueden aumentar el efecto proliferativo de los
citoquinas. Las razones de esta sinergia se factores estimuladores de colonias en combinación
desconocen . con ellos. Entre estas citoquinas tenemos: SCF,
Algunos de estos factores de crecimiento IL-1, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-11, IL-12, LIF,
interactúan con componentes de la matrix MIP-1α (“Macrophage Inflammatory Protein-
extracelular para contribuir a la función de los 1α”), MIP-1β (“Macrophage Inflammatory Pro-
progenitores o células efectoras. tein-1β”) y MIP-2 (“Macrophage Inflammatory
El GM-CSF es producido por linfocitos T, Protein-2”).
macrófagos, fibroblastos y células endoteliales. De todas estas citoquinas la que tiene el efecto
Esta citoquina es un factor de sobrevida y más notable es SCF. Esta citoquina está presente de
crecimiento para progenitores hematopoyéticos, manera soluble o ligada a la membrana celular debido
así como para precursores más maduros tales como al procesamiento alternativo del mRNA. SCF soluble
eritrocitos, linfocitos T, megacariocitos, e aumenta el número y el tamaño de CFU-GEMM,
igualmente para células endoteliales. Esta BFU-E, CFU-GM, CFU-G derivadas por
citoquina es además un factor de diferenciación y estimulación con Epo o Epo más IL-3, GM-CSF o
activación para granulocitos y monocitos. Por otra G-CSF. SCF actúa en sinergia con los factores
parte, GM-CSF junto con G-CSF, IL-5 y M-CSF estimuladores de colonias e IL-7. En estudios en
inducen la proliferación y diferenciación de animales, SCF ha sido asociado con aumento de la
precursores de neutrófilos, eosinófilos y monocitos hematopoyesis (aumento de células troncales y
respectivamente. progenitoras) en la médula ósea y movilización de
Es interesante notar que el receptor de GM- células troncales hacia la sangre. El receptor para
CSF, que es un complejo formado por una cadena SCF es el proto-oncogen, c-kit, de ahí que SCF sea
α de baja afinidad unida a una cadena β, comparte también conocido como "c-kit ligand", (ligando para
esta última cadena con los receptores para la IL-3 c-kit) el cual está expresado en todos los progenitores
e IL-5. Esta propiedad de los receptores podría hematopoyéticos excepto en precursores del linaje
explicar, en parte, que estas citoquinas posean B. C-kit es una glicoproteína de membrana que consta
funciones similares. de 5 dominios tipo inmunoglobulina y un dominio
El G-CSF es producido por macrófagos, tirosina kinasa intracelular. El receptor funcional es
fibroblastos, células endoteliales y células que probablemente un homodímero al igual que el SCF
conforman el estroma de la médula ósea. Este es funcional.
un factor de crecimiento, diferenciación y La IL-7 es producida por células estromales
activación de neutrófilos y sus precursores. de la médula ósea y del timo. Ésta actúa como un
Sinergiza con IL-3 para estimular el crecimiento factor de crecimiento para los progenitores de los
de progenitores hematopoyéticos, y causa linfocitos B y T, aunque también estimula el
proliferación y migración de células endoteliales. crecimiento de linfocitos T maduros.
El receptor de G-CSF está compuesto de una sola La IL-9 es una citoquina que aumenta la
molécula con una estructura híbrida que contiene proliferación de los linfocitos T y de precursores
un dominio Ig, un dominio hematopoyetina y 3 eritroides aunque su función principal es estimular
dominios FNIII. Existen formas solubles del re- a los mastocitos. Esta citoquina es producida
ceptor. principalmente por linfocitos Th2 activados.
El M-CSF es un factor de crecimiento, La IL-11 es secretada por líneas celulares
diferenciación y activación para macrófagos y sus obtenidas de células estromales de médula ósea y
células progenitoras. Este es producido por actúa sobre células troncales multipotenciales y
múltiples fuentes, incluyendo linfocitos progenitores comprometidos hacia macrófagos y
monocitos, fibroblastos, células endoteliales, megacariocitos.
mioblastos y osteoblastos. Esta citoquina puede En un estudio reciente hecho in vivo en
ser producida como una molécula soluble o una ratones, se demostró la capacidad de IL-12 para
molécula de membrana. movilizar progenitores hematopoyéticos hacia la
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sangre periférica, efecto que se produce en sinergia CX 3 C corresponden a quimioquinas cuyas
con otras citoquinas. La IL-12 es producida por cisteínas se encuentran separadas por uno o tres
macrófagos y linfocitos B. Esta citoquina aumenta aminoácidos, respectivamente. Las quimioquinas
la respuesta inmune mediada por células, mientras actúan a través de su interacción con receptores
que suprime la respuesta humoral. Los numerosos que poseen siete dominios de transmembrana
efectos estimulatorios hacen pensar de que IL-12 acoplados a la familia de proteínas G heterotri-
podría ser beneficiosa en el tratamiento de méricas y la transducción de la señal de
neoplasias. quimiotaxis es mediada por la subunidad Gi sen-
sible a la toxina de Pertussis. Los receptores de
4.3.3. Citoquinas supresoras quimioquinas se denominan de la misma manera
que los ligandos seguidos por la letra R y un
Las citoquinas involucradas como moléculas número (CCR1-9, CXCR1-5, XCR1, etc). Según
supresoras de la hematopoyesis son: lactoferrina, la nueva nomenclatura propuesta, las quimio-
la subunidad H de ferritina, las prostaglandinas quinas se designan con una letra L seguida por un
E1 y E2, TNF-α, TNF-β, IFN-a, IFN-β, IFN-γ, número correspondiente al número del gen que
TGF-β, inhibina y algunos miembros de la familia codifica para esa quimioquina (tabla 11-3).
de las quimioquinas. Probablemente la mayoría, si no todas, las
quimioquinas se han originado por duplicación
génica a partir de un gen ancestral. De hecho, los
5. QUIMIOQUINAS genes de muchas quimioquinas se encuentran
agrupados en ciertas regiones cromosómicas. Un
Las quimioquinas corresponden a un grupo gran número de genes de quimioquinas CC
de pequeñas proteínas básicas (8-14 kDa), humanas que tienen efectos sobre monocitos se
secretadas y estructuralmente relacionadas que encuentran agrupados en la región 17q11.2,
fueron inicialmente descritas como moléculas mientras que los genes de quimioquinas CXC que
inducidas por la inflamación y capaces de atraer actúan principalmente sobre neutrófilos se
monocitos, neutrófilos y linfocitos T activados. localizan en la región cromosómica 4q12-13. No
Posteriores investigaciones han mostrado que las obstante, recientemente se ha descrito que algunas
quimioquinas cumplen un importante papel en la quimioquinas CXC específicas para linfocitos T
coordinación del tráfico linfocitario a través de (CXCL9, CXCL10 y CXCL11) forman una nueva
todo el cuerpo durante la vigilancia inmune y en mini-agrupación génica separada de la principal
la dirección de complejos movimientos celulares agrupación 4q12-13. Esta diversificación
durante el desarrollo y diferenciación de los reflejaría un cierto grado de especialización
linfocitos. Las quimioquinas también tienen funcional desarrollado a través de la evolución.
efectos sobre células del sistema nervioso y el La duplicación génica de las quimioquinas
endotelio donde ejercen efectos angiogénicos. Dos explicaría su conservación entre las especies, la
propiedades generales caracterizan a estas redundancia de sus funciones y la promiscuidad
moléculas: no son especie-específicas y son con que se unen a sus receptores. Es posible que
promiscuas en el uso de sus receptores. No obs- esta multiplicidad de funciones haya surgido en
tante, también existen quimioquinas muy respuesta a la necesidad de producir una gran
específicas. Hasta ahora se han descrito más de cantidad de factores quimiotácticos que aseguraran
50 quimioquinas y en algunos casos la misma el reclutamiento de diferentes tipos de leucocitos
molécula ha sido reportada con nombres diferentes al sitio de la inflamación.
contribuyendo a crear una cierta confusión en este
campo. Por lo tanto, recientemente se ha planteado 5.1. Quimioquinas en la diferenciación
una nueva clasificación sistemática de las linfocitaria
quimioquinas (tabla 11-3). Las quimioquinas se
clasifican en cuatro familias de acuerdo al número En los órganos linfoides primarios (médula
y espaciamiento de los aminoácidos cisteínas ósea para linfocitos B y el timo para linfocitos T)
localizados cerca de su extremo amino-terminal. ocurre la diferenciación y maduración de los
La familia CC agrupa a las quimioquinas cuyas linfocitos a partir de una célula progenitora
dos cisteínas se encuentran adyacentes, la familia multipotencial (ver capítulos 3 y 13). Recientes
C presenta una sola cisteína y las familias CXC y estudios han mostrado que las células progenitoras
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Tabla 11-3. Clasificación de las quimioquinas y sus receptores
Nombre sistemático Ligando humano Ligando murino Receptores
Familia C
XCL1 Linfotactina/SCM-1α/ATAC Linfotactina XCR1
XCL2 SCM-1β desconocido XCR1
Familia CX3C
CX3CL1 Fractalquina Neurotactina CX3CR1
Familia CC
CCL1 I-309 TCA-3, P500 CCR8
CCL2 MCP-1/MCAF JE CCR2
CCL3 MIP-1α/LD78α MIP-1α CCR1, CCR5
CCL4 MIP-1β MIP-1β CCR5
CCL5 RANTES RANTES CCR1, CCR3, CCR5
CCL6 desconocido C10, MRP-1 desconocido
CCL7 MCP-3 MARC CCR1, CCR2, CCR3
CCL8 MCP-2 MCP-2 CCR3
CCL9/10 desconocido MRP-2, CCF18, MIP-1γ desconocido
CCL11 Eotaxina Eotaxina CCR3
CCL12 desconocido MCP-5 CCR2
CCL13 MCP-4 Desconocido CCR2, CCR3
CCL14 HCC-1 Desconocido CCR1
CCL15 HCC-2/Lkn-1/MIP-1γ Desconocido CCR1, CCR3
CCL16 HCC-4/LEC LCC-1 CCR1
CCL17 TARC TARC CCR4
CCL18 DC-CK1/PARC AMAC-1 Desconocido desconocido
CCL19 MIP-3β/ELC/exodus-3 MIP-3β/ELC/exodus-3 CCR7
CCL20 MIP-3α/LARC/exodus-1 MIP-3α/LARC/exodus-1 CCR6
CCL21 6Cquina/SLC/exodus-2 6Cquina/SLC/exodus-2/TCA-4 CCR7
CCL22 MDC/STCP-1 ABCD-1 CCR4
CCL23 MPIF-1 Desconocido CCR1
CCL24 MPIF-2/Eotaxina-2 Desconocido CCR3
CCL25 TECK TECK CCR9
CCL26 Eotaxina-3 Desconocido CCR3
CCL27 CTACK/ILC ALP/CTACK/ILC CCR10
Familia CXC
CXCL1 GROα/MGSA-α GRO/KC CXCR2, CXCR1
CXCL2 GROβ/MGSA-β GRO/KC CXCR2
CXCL3 GROγ/MGSA-γ GRO/KC CXCR2
CXCL4 PF4 PF4 Desconocido
CXCL5 ENA-78 LIX CXCR2
CXCL6 GCP-2 Cka-3 CXCR1, CXCR2
CXCL7 NAP-2 Desconocido CXCR2
CXCL8 IL-8 Desconocido CXCR1, CXCR2
CXCL9 Mig Mig CXCR3
CXCL10 IP-10 IP-10 CXCR3
CXCL11 I-TAC Desconocido CXCR3
CXCL12 SDF-1α/β SDF-1 CXCR4
CXCL13 BLC/BCA-1 BLC/BCA-1 CXCR5
CXCL14 BRAK/bolequina BRAK Desconocido
CXCL15 Desconocido Lungquina Desconocido
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hematopoyéticas (CPH) humanas expresan el re- lado, el receptor de esta quimioquina, CCR9, es
ceptor CXCR4 y que en experimentos in vitro son expresado por timocitos doble negativos y doble
capaces de migrar y de inducir la expresión de positivos pero cuando estos linfocitos maduran y
moléculas de adhesión en respuesta a la se transforman en linfocitos T simple positivos
quimioquina CXCL12. Esta quimioquina se ha pierden la expresión de CCR9 y adquieren CCR7
detectado tempranamente en el hígado fetal además de L-selectina. En contraste a la corteza
murino durante la colonización de las CPH (día tímica, varias quimioquinas han sido detectadas
embrionario 10.5-12.5) y decae abruptamente en la médula incluyendo a CCL22, CCL17,
cuando estas células migran desde el hígado hacia CCL19, CCL21, CCL11 y CXCL16. La
la médula ósea (día embrionario 14.5). A su vez, participación de CCL22 y CCL17 es consistente
en la microvasculatura y en las células estromales con la expresión del receptor de estos ligandos,
de la médula ósea es posible detectar CXCL12. CCR4, en timocitos que han sobrevivido al
Experimentos genéticos han mostrado que ratones proceso de selección positiva y que transitan hacia
que no expresan el gen de CXCL12 o el receptor la médula tímica. En este mismo estado de
CXCR4 (CXCR4-/-) mueren perinatalmente y maduración los linfocitos T expresan el receptor
presentan una mielopoyesis y linfopoyesis de CCR7 y muestran una aumentada capacidad de
células B reducida en el hígado fetal y responder a sus ligandos CCL19 y CCL21. El
prácticamente ausente en la médula ósea. Estos patrón de expresión de estas dos últimas
resultados sugieren que CXCL12 es el único quimioquinas y de su receptor, sugiere que ellos
ligando de CXCR4 y son un ejemplo de están implicados en la organización celular tímica
especificidad funcional de las quimioquinas. Una atrayendo a los linfocitos T hacía las vías de salida
vez que las células B han terminado su proceso de del timo.
maduración en la médula ósea, ellas abandonan
este órgano y salen a la circulación periférica. 5.2. Quimioquinas en la recirculación de los
Estudios in vitro han mostrado que a partir del linfocitos a través de los órganos linfoides
estado de diferenciación descrito como de células secundarios
B inmaduras, éstas comienzan a perder su
capacidad de respuesta a CXCL12 lo que ha sido Una vez que los linfocitos B y T maduros
interpretado como una estrategia para escapar al son liberados a la circulación, ellos viajan
efecto de retención de esta quimioquina y poder constantemente a través de los órganos linfoides
así emigrar de la médula ósea. secundarios (OLS) en búsqueda de antígeno. Para
Por otra parte, la maduración de los timocitos que esto ocurra, los linfocitos deben interactuar
implica la migración de estas células a través de con las células endoteliales columnares (HEV) de
distintos subcompartimentos tímicos que las vénulas post-capilares ubicadas dentro del OLS
comienza en la región más externa de la corteza y y luego transmigrar hacia su interior (ver capítulo
culmina en la médula tímica. Diversos estudios 12). La sospecha que las quimioquinas podrían
han mostrado la expresión diferencial de ciertas participar en este proceso provino de resultados
quimioquinas y la respuesta también diferencial que mostraron que la toxina de Pertussis, un
de los timocitos a lo largo de este proceso. Hasta inhibidor de proteínas G, bloqueaba la adhesión
ahora, en la región cortical sólo se han identificado de leucocitos al endotelio. Estudios posteriores
las quimioquinas CXCL12 y CCL25. La detección demostraron que las quimioquinas median la
de CXCL12 se correlaciona con la alta expresión activación de las integrinas hacia un estado
de su receptor CXCR4 en timocitos doble positivos conformacional de mayor afinidad, evento crucial
(CD4+/CD8+), si bien su acción puede estar en la obtención de una adhesión más firme entre
sobrepuesta con otros factores ya que el desarrollo linfocito y endotelio. La quimioquina CCL21 es
de células T ocurre normalmente en los ratones detectada con gran intensidad por HEVs de los
CXCR4-/-. CCL25 es detectada en células nódulos linfáticos y de las placas de Peyer y su
dendríticas y epiteliales tímicas en la corteza, en importancia en el "homing" de linfocitos a OLS
la médula e incluso en el timo fetal lo que sugiere está basada en el estudio de ratones plt. Debido a
que podría participar en el reclutamiento de células una mutación espontánea aún desconocida, las
progenitoras tímicas. Sin embargo, estudios in HEVs de estos ratones no pueden expresar el gen
vitro han mostrado que la neutralización de CCL25 de CCL21 y sus nódulos linfáticos y placas de
no influye sobre el poblamiento tímico. Por otro Peyer muestran un reducido números de células
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T. Además, la adhesión a HEVs y el "homing" de Los ratones deficientes en la expresión de
linfocitos T a los OLS puede ser restaurado CXCR5 como de CCR7 presentan una severa
después de que estos ratones plt son inyectados desorganización de los OLS, lo que significa que
subcutáneamente con CCL21. Se ha determinado las quimioquinas son fundamentales en el
que el receptor de esta quimioquina corresponde desarrollo y mantención de microambientes
a CCR7 el cual es expresado por linfocitos T localizados dentro de los tejidos linfoides (zonas
vírgenes. Consecuentemente, los ratones CCR7- B y T).
/- presentan el mismo fenotipo que los ratones plt,
es decir, deficiente número de linfocitos T en los 5.3. Quimioquinas en el "homing" de los
nódulos linfáticos. En el modelo murino existen linfocitos a sitios efectores periféricos
tres quimioquinas capaces de unir a CCR7: dos
isoformas de CCL21, las cuales sólo difieren en A diferencia de los linfocitos T vírgenes que
un sólo aminoácido (serina por leucina en la migran azarosamente a través de todo el cuerpo,
posición 65) y CCL19, pero solamente la isoforma los linfocitos T de memoria/efectores presentan
CCL21/serina no es expresada en los ratones plt. una migración preferencial y selectiva hacía los
Esto significa que a pesar de la presencia de los sitios efectores periféricos, proceso conocido como
otros ligandos para CCR7 (CCL21/leucina y "homing". Estudios recientes han demostrado que
CCL19) únicamente CCL21/serina puede mediar las quimioquinas podrían jugar un papel
la migración de linfocitos T a los nódulos importante en el "homing" de los linfocitos a
linfáticos. Una posible explicación para este tejidos tales como la piel (tejido cutáneo) e
resultado es que los otros dos ligandos no sean intestino (tejido mucoso). Las células T de me-
expresados en el lugar más apropiado para llevar moria cutáneas se caracterizan por la expresión
a cabo la extravasación o que cada ligando de un antígeno llamado CLA, mientras que los
transduzca diferentes señales a través del mismo linfocitos de memoria que migran preferen-
receptor. En este caso, CCL21/serina corres- cialmente al tejido intestinal expresan la integrina
pondería a otro ejemplo de especificidad de las α4β7 como marcador específico. Se ha determi-
quimioquinas. Otra interesante observación nado que el receptor de quimioquina CCR4 es
rescatada de los ratones plt es que la recirculación expresado en altos niveles en linfocitos T CLA+
de linfocitos B a los órganos linfoides secundarios pero está prácticamente ausente en linfocitos T
no se ve afectado, lo que significaría que la α4β7. A su vez, el ligando de CCR4, la
adhesión de las células B a las HEVs no depende quimioquina CCL17, ha sido detectada en células
de CCL21. Esto es corroborado por el hecho de endoteliales de vénulas de la piel inflamada, pero
que en ratones normales las células B se adhieren no en vénulas de la lámina propia de la mucosa
a una región de las HEVs en la cual no ha sido intestinal. Otra quimioquina, llamada CCL27
detectada CCL21 y a la cual no se adhieren los también es capaz de promover la migración de
linfocitos T. Por lo tanto, la expresión topológica linfocitos T de memoria a la piel a través de su
diferencial de quimioquinas podría ser el inicio interacción con el receptor CCR10, el cual es
de la segregación de linfocitos hacía las zonas B y expresado por las células de Langerhans,
T de los OLS, proceso en el cual participan otras melanocitos, fibroblastos y células endoteliales de
quimioquinas. Por otra parte, se ha mostrado que la microvasculatura dermal. Por otro lado, el re-
las células B de ratones impedidos de expresar el ceptor CCR9 es expresado específicamente por
receptor CXCR5 son incapaces de migrar desde linfocitos T de memoria α 4β 7hi con homing
la zona rica en células T hacía la zona folicular B preferencial hacia el tejido intestinal y no por los
en el bazo y en las placas de Peyer. En amígdalas linfocitos T de memoria cutáneos. Consecuente-
inflamadas este receptor es expresado por una mente, tan sólo los linfocitos T α4β7hi responden
población particular de linfocitos T de ayuda que a la quimioquina CCL25, ligando de CCR9,
asisten a las células B en la producción de aunque solamente se ha podido detectar la
anticuerpos. El ligando para este receptor, expresión del mRNA de CCL25 en el intestino.
CXCL13, ha sido detectado en el manto folicular
y en las HEVs foliculares pero no en la zona T. 5.4. Quimioquinas y enfermedades
Por lo tanto, en el folículo del OLS, la quimioquina
CXCL13 podría facilitar la interacción de células Las quimioquinas pueden ser divididas en dos
B-T necesaria para una eficiente respuesta inmune. categorías. La primera corresponde a las
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quimioquinas constitutivas u homeostáticas la detección de las quimioquinas CCL5, CCL3,
responsables del tráfico linfocitario basal y de la CCL4, CXCL10 y CCL2. La utilización de
mantención y estructuración de los órganos anticuerpos neutralizantes anti-CCL3 sugiere que
linfoides. La segunda categoría está integrada por el desarrollo de lesiones inflamatorias agudas está
las quimioquinas inducibles o inflamatorias que asociado a CCL3, mientras que CCL2 participaría
son expresadas en respuesta a un estímulo o estrés en la reincidencia de la enfermedad. A pesar de
fisiológico. Esta inducción puede significar un algunos resultados discrepantes obtenidos con
aumento en el nivel de expresión del mRNA de ratones knock out para la expresión de estas
una quimioquina de hasta 300 veces en pocas quimioquinas y de sus receptores, pareciera ser
horas de activación. Sin embargo, una alta que CCL2, su receptor CCR2 y, en menor
expresión de quimioquinas puede ser la causa de extensión CCL3 y CCR1, participarían
una descontrolada activación celular y provocar activamente en el desarrollo de esta enfermedad.
un daño tisular o enfermedad. De hecho, existe En humanos se ha encontrado que el líquido
una estrecha relación entre la expresión de ciertas cefalorraquídeo de pacientes con EM en estado
quimioquinas y enfermedades asociadas con la de reincidencia o de ataque activo contiene
infiltración de leucocitos. En seres humanos la grandes cantidades de CCL3, CXCL10, CXCL9
relación más irrefutable se encuentra en el y CCL5. El análisis de las células T presentes en
síndrome de inmunodeficiencia adquirida el líquido cefalorraquídeo demostró que estas
(SIDA), mientras que para otras patologías la expresaban CXCR3 y CCR5. Asimismo, se han
asociación ha sido inferida de modelos animales. detectado CCL2, CCL7, CCL8, CXCL10 y
En el SIDA se ha demostrado que el VIH CXCL9 dentro de las lesiones activas de cerebros
(Virus de la Inmunodeficiencia Humana) requiere autopsiados de pacientes con EM. Consistente con
de CD4 y los receptores de las quimioquinas estos resultados se encontró que macrófagos, mi-
CXCR4 y CCR5 para infectar una célula . Este croglia y linfocitos T activados expresaban los
hallazgo provino de la identificación de una receptores CCR2 y CCR5, mientras que los
deleción de 32 nucleótidos en el receptor de astrocitos reactivos presentaban CCR3 y CCR5.
quimioquina CCR5 que protege contra el SIDA a Una creciente serie de evidencias ha
individuos homozigotos y frena la progresión demostrado que la formación de placas
de la enfermedad en personas heterozigotas. Los ateroescleróticas son el resultado de una respuesta
receptores CCR5 y CXCR4 definen diferentes inflamatoria al daño arterial producido por la
poblaciones de células T (de memoria y vírgenes, hipercolesterolemia o la hipertensión. Utilizando
respectivamente) lo que probablemente esté modelos experimentales de esta enfermedad, se
relacionado con los diferentes tropismos celulares ha observado que ratones CCL2-/- presentan 65-
del virus (macrófagos y células T) y con su 85% menos acumulación de lípidos en las arterias
utilización en diferentes estados de la enfermedad que el ratón que expresa CCL2. Similares
(CCR5 en estados tempranos y CXCR4 en estados resultados fueron obtenidos al utilizar ratones con
tardíos). una deficiencia en la expresión del receptor de
Otra enfermedad relacionada con la expresión CCL2 (CCR2). En todos los casos, se observó
de ciertas quimioquinas es la esclerosis múltiple una disminución en el contenido de macrófagos
(EM). Esta es una enfermedad autoinmune, de la pared arterial. Esto sugiere que bajo
neuroinflamatoria crónica y recurrente, en la cual condiciones de hipercolesterolemia, CCL2 podría
el reconocimiento de un autoantígeno presente en participar en la quimioatracción de monocitos que
las fibras nerviosas recluta a linfocitos T y expresen CCR2 hacia los sitios de formación de
macrófagos hacia el sistema nervioso central. Esta la placa ateroesclerótica. En concordancia con
enfermedad tiene períodos de remisión lo que estos resultados, en un modelo de ratón con
implica la existencia de mecanismos inmunes de hipertensión inducida experimentalmente se
regulación. El modelo animal para estudiar la observó que CCR2 es requerido para la infiltración
EM es la Encefalomielitis Alérgica Experimental de macrófagos hacia la pared arterial. La
(EAE), la cual puede ser inducida en ratones extrapolación de estos hallazgos a los seres
mediante la inmunización con antígenos derivados humanos está fundamentalmente basada en la
de la mielina. Utilizando este modelo se ha detección de las quimioquinas CCL2, CCL5,
encontrado una correlación entre las lesiones CCL3 y CCL11 en las placas ateroescleróticas de
inflamatorias provocadas por esta enfermedad y pacientes que sufren de esta enfermedad.
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En la artritis reumatoides se ha encontrado amino-terminal mediante la retención de la
una variedad de quimioquinas que incluyen a metionina inicial de CCL5 recombinante (Met-
CCL2, CCL3, CCL5, CXCL8 y CXCL10 en el RANTES) o la adición química del radical
fluido sinovial de las articulaciones compro- aminoxipentano a la serina amino-terminal de
metidas. Estas quimioquinas han sido detectadas CCL5 (AOP-RANTES) genera dos potentes
en células sinoviales y en los leucocitos antagonistas de esta quimioquina. También ha
infiltrantes. A su vez, en las células infiltrantes se resultado interesante el empleo de un inhibidor
ha detectado la presencia de los receptores CCR2, viral de quimioquinas de la familia CC (vCCI)
CCR5, CXCR2 y CXCR3. Al igual que en el utilizado por los Poxvirus para evadir la respuesta
SIDA se ha asociado la presencia del alelo de inmune. Los efectos de estos antagonistas han sido
CCR5 que posee una deleción de 32 nucleótidos probados in vitro o en modelos animales de
con una progresión menos severa de la artritis. experimentación para algunas enfermedades
En el desarrollo del cáncer las quimioquinas relacionadas con la expresión de quimioquinas.
podrían cumplir varias funciones potenciadoras. Se ha mostrado que Met-RANTES reduce
En primer lugar, se ha observado que las propias la extensión y severidad de la artritis reumatoidea.
células tumorales pueden secretar factores Además, este antagonista es capaz de inhibir la
quimiotácticos de leucocitos, particularmente liberación de radicales libres de eosinófilos
CCL2, los cuales pueden representar una activados por quimioquinas, por lo que
importante fuente de factores angiogénicos. De potencialmente podría ser usado en enfermedades
hecho, en cáncer de mama se ha correlacionado asociadas a una infiltración de este tipo de
el grado de infiltración de los macrófagos con la leucocitos, tal como el asma alérgica.
vascularidad del tejido invadido. En segundo Adicionalmente, en este tipo de patologías podría
lugar, las mismas quimioquinas pueden actuar emplearse el inhibidor viral de quimioquinas
como factores de crecimiento para las células vCCI, el cual provoca una notable mejoría de la
tumorales. Así por ejemplo, CXCL1 estimula la función pulmonar y una disminución de la
proliferación de líneas celulares pancreáticas y de inflamación de la vía aérea y del parénquima
melanoma mientras que CXCL8 tiene el mismo pulmonar en modelos de ratón con asma inducida
efecto sobre células tumorales de pulmón. Por por alergeno. Por otra parte, AOP-RANTES ha
otro lado, la presencia de leucocitos asociados al resultado ser un potente inhibidor de la infección
tumor podría reflejar el intento fallido del sistema de células mononucleares de sangre periférica por
inmune por eliminar el cáncer. Siguiendo esta idea VIH-1 y de la replicación de este virus en
se han desarrollado varios trabajos con CCL2, macrófagos. En el caso de los antagonistas de
CCL5, CCL1, CCL20, CCL21, CXCL10 y XCL1 CCL2, basados en la deleción de aminoácidos de
con la finalidad de utilizarlas en la generación de su región amino terminal, se ha determinado que
una respuesta inmune antitumoral más potente. éstos son capaces de retrasar la aparición de la
Finalmente, las quimioquinas podrían participar artritis o de reducir sus síntomas en modelos de
en la metástasis del tumor. Varios tipos celulares ratones MRL-lpr. La transfección in vivo del
malignos expresan receptores de quimioquinas lo cDNA de uno de los antagonistas de CCL2 (7ND)
que les permitiría, una vez alcanzada la ha sido usado como terapia génica contra la
circulación, migrar en respuesta a sus ligandos ateroesclerosis suprimiendo el reclutamiento de
presentes en células de otros órganos o tejidos. monocitos hacia los vasos sanguíneos coronarios.
Finalmente, se ha observado que inhibidores de la
5.5. Quimioquinas y terapia biosíntesis del colesterol utilizados ampliamente
como drogas en la prevención de enfermedades
Debido a la importante función que las cardiovasculares también inhiben la producción
quimioquinas cumplen en diversos aspectos de la de CCL2. Esto significa que parte de los efectos
respuesta inmune y a su participación en graves benéficos de estas drogas también provienen de
patologías, varios estudios se han orientado a la su acción anti-inflamatoria y que los inhibidores
búsqueda de antagonistas de quimioquinas con de quimioquinas representan innovadoras
potenciales aplicaciones terapéuticas. La deleción herramientas farmacológicas para la prevención
de los primeros ocho aminoácidos de CCL5 o de de enfermedades cardiovasculares.
CCL2 origina proteínas incapaces de producir
quimiotaxis. Asimismo, la extensión de la región
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LECTURAS SUGERIDAS
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Blackwell Science, 1995.
Ansel, K.M., and Cyster, J.G., “Chemokines in

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Curr. Opin. Immunol. 13: 172-179. 2001.
Callard, R. and Gearing, A., Eds., The cytokine

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Campbell, J., and Butcher, E., “Chemokines in

tissue-specific and microenvironment-specific
lymphocyte homing”, Curr. Opin. Immunol.,12:
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Gerard, C., and Rollins, B., “Chemokines and

disease”, Nature Immunology 2: 108-115. 2001.
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238
Sin título-2 238 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 12
RECEPTORES DE ADHESIÓN, “HOMING”

Y ACTIVACIÓN DE LINFOCITOS
Jorge Rodrigo Mora S. y Mario Rosemblatt S.
1. Introducción 4.2. Tráfico linfocitario a través del

2. Modelo general de adhesión leuco- endotelio columnar (HEV)
citaria 4.3. Tráfico linfocitario hacia la piel
3. Receptores de adhesión y sus 5. Regulación del posicionamiento
ligandos ("homing") de linfocitos
3.1. Receptores de adhesión de la fa- 6. Receptores de adhesión en la dife-
milia de las integrinas renciación y activación linfocitaria
3.2. Receptores de adhesión de la 6.1. Receptores de adhesión y diferen-
superfamilia de las inmunoglo- ciación temprana en la médula ósea
bulinas (SFIg) 6.2. Receptores de adhesión y diferen-
3.3. Moléculas de adhesión de la fa- ciación en el microambiente de
milia de las selectinas los OLS
4. Interacciones linfocito-endotelio
4.1. Tráfico linfocitario a través del
endotelio inflamado
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RESUMEN
Para que ocurra una respuesta inmune específica, los linfocitos deben dejar la circulación
atravesando el endotelio de los órganos linfoides secundarios e ingresar a los órganos linfoides
secundarios: ganglios linfáticos periféricos, placas de Peyer (mucosa intestinal), y bazo. Por otro
lado, en el sistema inmune la regulación de la maduración y proliferación de los linfocitos a
células efectoras depende del sitio anatómico en el cual se localizan las células, y por tanto de las
interacciones que se establecen entre éstas y su microambiente. Este diálogo entre linfocitos y
estroma está regulado por la presencia, en la membrana, de linfocitos y de células estromales de
receptores y contrarreceptores específicos de adhesión y por la disponibilidad local de citoquinas
y quimioquinas.
En este capítulo se describen las diferentes familias de receptores de adhesión y sus
contrarreceptores y se presenta información sobre la participación de estos receptores en los
diferentes mecanismos y procesos involucrados en la respuesta inmune, tanto normal como pa-
tológica. Se discute el papel de estos receptores así como de sus contrarreceptores en la inicia-
ción y la duración de la respuesta inmune, así como también sobre su participación en la activi-
dad efectora, recirculación y posicionamiento o “homing” específico de los linfocitos en los
diferentes tejidos. Se presenta la información reciente que sustenta la idea de que los linfocitos
vírgenes y de memoria/efectores tienen vías de “homing” diferentes y específicas para determi-
nados tejidos, lo cual contribuye a hacer más eficiente y específica una respuesta inmune. Se
discute la evidencia reciente en el contexto de que el “homing” tejido-específico de un linfocito
sea una característica que probablemente perdure en el tiempo, dando fundamento a la idea de
considerarlo como parte de la memoria inmunológica.
1. INTRODUCCIÓN parte por la existencia de tejidos especializados

conocidos como órganos linfoides secundarios
Los linfocitos son células esencialmente (OLS), los cuales están encargados por un lado
migratorias. Estudios clásicos que datan desde los de “concentrar” los antígenos provenientes desde
años 60 indicaron que los linfocitos circulan entre tejidos no linfoides (también llamados “tercia-
la sangre y la linfa de forma constante. Nuestro rios”), y por otro de permitir la entrada preferen-
sistema inmune se caracteriza por generar una gran cial de linfocitos vírgenes, incrementando con ello
variedad en la especificidad linfocitaria, que en tremendamente la probabilidad de que un linfoci-
un adulto se estima entre 25-100 millones de to dado encuentre su antígeno específico en lo que
clones distintos. Sin embargo, el número de estos se conoce como respuesta inmune primaria, que
linfocitos capaces de reconocer un antígeno indi- es aquella donde un linfocito virgen es activado
vidual es muy limitado (algunos miles como máxi- por primera vez.
mo), lo cual genera un desafío importante, el cual Por otro lado, las células dendríticas (DC),
ha sido ilustrado en la siguiente analogía: Imagi- células presentadoras especializadas en presentar
nen balones de 150 m de diámetro circunnave- antígenos a linfocitos T naïve (vírgenes), se en-
gando la tierra (comparable al volumen de un lin- cargan de captar antígenos en los tejidos
focito en reposo [125 femtolitros] en un adulto periféricos (mediante macropinocitosis,
[75 litros]), que deban detectar dentro de horas fagocitosis, y endocitosis mediada por receptor),
estructuras mucho más pequeñas que se originan procesarlos y presentarlos en el contexto de MHC-
súbitamente en cualquier parte de nuestro planeta I (fenómeno conocido como "crosspriming") o
y que son solamente reconocibles por contacto MHC-II, y finalmente transportarlos a los OLS
directo. Este problema logístico se soluciona en para presentárselos a linfocitos T (LT). Por otro
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lado los linfocitos B, que reconocen antígenos en bio de gases y perfusión del tejido). Una etapa crí-
su forma nativa (sin necesidad de ser procesados tica para que los linfocitos puedan atravesar las
ni presentados), también son activados y se dife- vénulas postcapilares es la adhesión de estos
rencian en los OLS. Después de su activación ini- linfocitos al endotelio de estos vasos. Esta es una
cial en los OLS, los linfocitos ya transformados etapa finamente regulada, que sucede en una serie
en células efectoras y/o de memoria deben dis- de pasos secuenciales y que depende de la
persarse y viajar a aquellos sitios del organismo interacción entre múltiples receptores de adhesión
(generalmente tejidos terciarios como la piel o lá- presentes en la membrana de los linfocitos y sus
mina propia de la mucosa intestinal) donde deben respectivos ligandos desplegados por las células
eliminar al antígeno invasor y actuar como vigías endoteliales. En este capítulo se hará referencia a
frente a futuras invasiones, en lo que se denomina las diferentes familias de receptores de adhesión y
respuesta inmune secundaria. se describirán los mecanismos adhesivos que regu-
La respuesta inmune (RI) secundaria presenta lan la migración de los linfocitos a los tejidos.
varias características distintivas: (i) Existe desde
su inicio un número enormemente mayor de
linfocitos específicos capaces de reconocer al 2. MODELO GENERAL DE ADHESIÓN
antígeno, comparados con la RI primaria. (ii) La LEUCOCITARIA
respuesta de cada linfocito es intrínsecamente más
rápida, ya que se requiere un contacto de mucho El modelo actual de cómo los linfocitos se
menor duración con la célula presentadora de adhieren al endotelio de un vaso sanguíneo es
antígeno (en el caso de LT), y a su vez no se re- extrapolable a la adhesión de los leucocitos en
quiere de señales co-estimuladoras tan exigentes general (incluyendo por ej. neutrófilos). El “mo-
como en la activación inicial. Esto a su vez posi- delo de adhesión de múltiples pasos” fue origi-
bilita que células no especializadas funcionen nalmente propuesto en 1991 y consta al menos de
como células presentadoras de antígenos. (iii) No cuatro etapas, separadas temporal y mecanísti-
se requiere que esta respuesta ocurra en OLS, de camente: (a) frenado y rotación ("tethering" y
hecho la RI secundaria habitualmente se produce "rolling"), (b) activación de integrinas, (c) adhe-
en tejidos terciarios. (iv) Generalmente es una RI sión firme ("sticking") y (d) transmigración
polarizada, ya sea de tipo T helper-1 o tipo T helper- (diapédesis). Cada una de estas etapas secuenciales
2, lo cual determina que sea predominantemente es esencial para que ocurra la transmigración del
celular o humoral y a su vez que esté dominada por leucocito y depende de moléculas genéricamente
linfocitos B que producen un determinado isotipo llamadas “moléculas de adhesión”. Estas molé-
de inmunoglobulina y por último. (v) Actualmente culas se pueden agrupar estructuralmente en dife-
se ha determinado que en una RI secundaria los rentes familias, las cuales se describirán en deta-
linfocitos presentan predilección para migrar pre- lle más adelante y se mencionarán en este mo-
ferentemente a aquellos tejidos asociados al OLS mento en el contexto del modelo de adhesión de
donde se produjo la RI primaria, fenómeno que se múltiples pasos. Aunque, en general, estas etapas
conoce como “homing” tejido-específico. Inclusi- son comunes para todos los leucocitos, el proceso
ve, se ha postulado que el “homing” tejido-especí- se describirá considerando los linfocitos T (a me-
fico sería una característica adicional de lo que se nos que se indique otra cosa), por ser en ellos don-
conoce como memoria inmunológica, característi- de los fenómenos de adhesión han sido estudia-
ca que se ha transformado en la base de las terapias dos más en detalle.
actuales de vacunación. La primera etapa en la cascada de adhesión
Tanto para que pueda ocurrir una RI prima- se conoce como "tethering" y consiste en el fre-
ria como secundaria, los linfocitos deben entrar a nado ("agarre") al endotelio venular. Esta etapa
los tejidos donde se producirán estas respuestas se considera generalmente en conjunto con la eta-
(ya sea OLS o tejidos terciarios, respectivamen- pa inmediatamente siguiente conocida como
te). El paso de los linfocitos desde la sangre al "rolling", donde los linfocitos ruedan adheridos
tejido ocurre en las vénulas postcapilares, el lla- laxamente sobre el endotelio vascular. Tanto el
mado endotelio columnar o “High Endothelial "tethering" como el "rolling" dependen funda-
Venules” (HEV) (excepto en bazo, pulmones, e mentalmente de moléculas conocidas como
hígado), no en arteriolas ni capilares (con lo cual selectinas: L-selectina en los linfocitos y E- o P-
se minimiza el riesgo de interferir con el intercam- selectina en el endotelio vascular, aunque en de-
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terminadas circunstancias pueden también parti- secundaria al defecto de adhesión leucocitaria.
cipar integrinas del tipo α4 presentes en el linfo- La etapa siguiente conocida como activa-
cito (α4β7 o α4β1). En cuanto a la distribución de ción, está fundamentalmente mediada por
selectinas, L-selectina se encuentra en todos los quimioquinas presentes en el endotelio y los re-
leucocitos, aunque en los linfocitos su expresión ceptores de quimioquinas presentes en los
está restringida especialmente a linfocitos vírge- linfocitos. Respecto a las quimioquinas presentes
nes. E- y P-selectinas se encuentran principalmen- en los endotelios, actualmente no es claro en qué
te en endotelios inflamados, aunque en la piel se medida el endotelio de los diferentes tejidos par-
expresan débilmente en forma constitutiva. Una ticipa directamente en la producción de estas
característica importante de las moléculas que quimioquinas. Sin embargo, sí es claro que el
participan en el "tethering" y "rolling" de los endotelio es capaz de presentar algunas
linfocitos es el estar predominantemente localiza- quimioquinas producidas en el estroma del tejido
das en estructuras conocidas como o que vienen desde sitios distantes (como la piel).
microvellosidades linfocitarias. Esta distribución Se ha demostrado que estas quimioquinas (ej. IL-
es importante funcionalmente, como se ha demos- 8 y ELC) pueden ser transportadas
trado en experimentos en los cuales se ha reem- transcelularmente y presentadas por
plazado la porción de transmembrana e intracelular proteoglicanos en la superficie apical del endotelio
de L-selectina para localizarla predominantemente a los linfocitos. De cualquier manera, el resulta-
en zonas del linfocito diferentes de las do final es que un linfocito que está en la etapa de
microvellosidades, con lo cual se reduce "rolling", encuentra a estas quimioquinas en el
importantemente su capacidad de mediar el endotelio, y a través de sus receptores de
"tethering" y "rolling" (aún manteniendo su capa- quimioquinas gatilla una cascada de transducción
cidad de unir sus ligandos). Interesantemente, las de señales dependiente de proteína G, la que fi-
integrinas α4, que son también capaces de mediar nalmente lleva al aumento de la adhesión media-
"rolling", se localizan igualmente en las da por integrinas (lo que se denomina en general
microvellosidades del linfocito, no así otras como activación). Esta activación de las
integrinas como LFA-1 que no median "rolling". integrinas estaría dada por al menos dos mecanis-
Se piensa que esta localización dejaría estas mo- mos: (i) Aumento en la afinidad intrínseca del
léculas estratégicamente posicionadas para un pri- dímero de integrina, producido por un cambio en
mer contacto eficiente con el endotelio. Los la estructura terciaria y cuaternaria del dímero, y
ligandos para selectinas (tanto en el endotelio (ii) un aumento en la avidez, dado fundamental-
como en el linfocito) son glicoproteínas del tipo mente por un acercamiento de las integrinas entre
sialil-Lewis-X, y que comparten en común el ser sí en la membrana del linfocito. Esta etapa de
fucosiladas, sialiladas y sulfatadas. Estos ligandos activación es independiente de la etapa preceden-
se encuentran expresados en forma constitutiva en te de "rolling", ya que en linfocitos en los cuales
el endotelio de los ganglios linfáticos constituyen- se ha bloqueado la activación mediada por
do lo que se denomina Peripheral Node Addressin quimioquinas por el tratamiento con toxina
(PNAd) (ligandos para L-selectina), y también se pertussis (inhibidor de proteína G) se bloquea tam-
encuentran en linfocitos como ligandos para P y bién la adhesión firme ("sticking") sin afectar la
E-selectina, aunque la expresión de estos ligandos capacidad de hacer "rolling". Estos linfocitos nun-
en linfocitos estaría restringida a algunos subtipos ca logran adherirse y finalmente se sueltan y vuel-
funcionales, que serán descritos más adelante. La ven a la circulación. Este fenotipo, que puede
importancia de la etapa de "rolling" queda ilustra- lograrse experimentalmente, se encuentra presen-
da en experimentos en los cuales luego de blo- te en los ganglios linfáticos de animales que son
quear ya sea L-selectina o sus ligandos (PNAd), naturalmente mutantes y que carecen de las
se bloquea casi el 100% de la adhesión a HEV de quimioquinas ELC y SLC (ligandos para el re-
ganglios linfáticos. Adicionalmente, en humanos ceptor de quimioquina CCR7). En estos anima-
se ha descrito una enfermedad conocida como les los linfocitos T son incapaces de adherirse fir-
LAD-2 (“Leukocyte Adhesion Deficiency-2”) en memente a las vénulas de endotelio alto (HEV)
la cual existe una mutación en una enzima clave de los ganglios linfáticos, aún cuando efectúan el
involucrada en la síntesis de ligandos para rolling sin problema. El mismo fenotipo se ob-
selectinas (una fucosiltranferasa). Estos pacien- serva en ratones "knockout" para CCR7. Por otro
tes presentan una importante inmunodeficiencia lado, el paso de activación puede ser sobrepasado
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Sin título-2 243 5/26/06, 10:26 AM

artificialmente si las integrinas se activan previa- descripción de las moléculas de adhesión que ya
mente usando ésteres de forbol (ej. PMA) o se enunciaron en el contexto de la cascada de ad-
anticuerpos activadores de integrinas. hesión, para lo cual se han agrupado de acuerdo a
La etapa siguiente en la transvasación características estructurales en diferentes familias.
linfocitaria, ya enunciada anteriormente, se deno-
mina adhesión firme o sticking, y depende total-
mente de moléculas de adhesión heterodiméricas 3. RECEPTORES DE ADHESIÓN Y SUS
conocidas como integrinas, presentes en los LIGANDOS
linfocitos. Experimentos donde se han usado
anticuerpos monoclonales bloqueadores de estas Tres grandes familias de receptores de adhe-
moléculas, han demostrado una abolición de la sión ejercen su acción reguladora en el sistema
adhesión firme de los linfocitos (sin afectar el inmune, receptores de la Familia de las
"rolling" de éstos). Por otro lado, en humanos Integrinas, receptores pertenecientes a la
existe una enfermedad en la cual los linfocitos son Superfamilia de las Inmunoglobulinas (SFIg) y
incapaces de adherirse firmemente al endotelio de receptores de la Familia de las Selectinas. Más
los tejidos, produciendo una importante recientemente se ha incorporado la creciente Fa-
inmunodeficiencia que con el tiempo es letal. En milia de las Quimioquinas y sus Receptores. Si
esta enfermedad (afortunadamente rara), conoci- bien es cierto, las quimioquinas y sus receptores
da como LAD-1 ("Leukocyte Adhesion no participan como pares de adhesión ligando-re-
Deficiency-1"), los pacientes presentan una mu- ceptor clásicos, como se discutió previamente, se
tación de la cadena de integrina β2, con lo cual sabe que su papel es fundamental en la cascada de
carecen de las integrinas que posee esta cadena, adhesión, y adicionalmente y como se discutirá
principalmente LFA-1, la cual es esencial en casi más adelante, actualmente se acepta cada vez más
todos los fenómenos de adhesión estudiados. Los que tienen un papel muy importante en la regula-
ligandos para las integrinas, moléculas de la ción de especificidad fina del "homing" tejido-es-
superfamilia de las inmunoglobulinas (ej. ICAM- pecífico de las células inmunes (y también dentro
1 y -2, MAdCAM-1, VCAM-1), se encuentran del microambiente del tejido linfoide). Sin embar-
presentes en el endotelio de los tejidos, ya sea en go, dado que las quimioquinas y sus receptores
forma constitutiva (en los OLS y algunos tejidos son descritos en detalle en el capítulo 11, sólo se
extralinfoides) o en forma inducible en tejidos in- mencionarán aquí en el contexto de la cascada de
flamados. adhesión, así como también aquellas involucradas
Por último, una etapa que hasta el día de hoy en el "homing" tejido-específico de los linfocitos.
está muy pobremente caracterizada es la trans- Otros receptores de adhesión, o sus ligandos que
migración linfocitaria (y leucocitaria en gene- no pertenecen a ninguna de estas familias serán
ral). Una dificultad para estudiar esta etapa en presentadas desde un aspecto funcional durante este
forma aislada es el hecho de que además de ser capítulo. Los receptores de adhesión se expresan
dependiente de las etapas anteriores, es probable en la membrana de los linfocitos u otras células in-
que requiera también de las mismas moléculas que munes mientras que sus contrarreceptores o
participan en las etapas previas (ej. quimioquinas). ligandos se encuentran, fundamentalmente, en cé-
Por otro lado, se debe tener en cuenta que para lulas no inmunes, tales como células endoteliales,
que un linfocito pueda acceder finalmente al teji- células accesorias (células dendríticas, células
do, debe ser capaz de disociar (al menos transito- dendríticas foliculares, monocitos, etc.), en otros
riamente) las uniones entre las células endoteliales, linfocitos o en la matriz extracelular. En este capí-
luego la membrana basal endotelial, y finalmente tulo, se nombrará como receptor de adhesión a
abrirse paso entre los elementos de matriz las moléculas que se encuentran en la superficie de
extracelular. Cada una de estas etapas adiciona- los linfocitos u otras células inmunes (células NK,
les podría, en teoría, estar regulada y requerir nue- etc.) y como ligando a aquellas moléculas que
vos elementos tanto del linfocito (ej. interactúan con el receptor y que se localizan en la
metaloproteasas) como del tejido, por lo cual de- célula a la cual se une el linfocito, aunque en mu-
cir meramente “transmigración” puede demostrar chos casos moléculas de la misma familia deban
ser a la larga una sobresimplificación de este fe- considerarse como receptor de adhesión cuando se
nómeno. encuentra en el linfocito o como ligando si se en-
En la sección siguiente se profundizará en la cuentra en otra célula.
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Sin título-2 244 5/26/06, 10:26 AM

3.1. Receptores de adhesión de la familia de las fibronectina. Por otro lado, la cadena αV corres-
integrinas pondiente al clásico receptor para vitronectina αςβ3
puede también formar combinaciones con las ca-
Las integrinas son moléculas heterodiméricas denas β1,+β5,+β6, y β8, adquiriendo diferentes
de transmembrana que se unen a diferentes especificidades de unión. Actualmente se han des-
ligandos extracelulares y transmiten señales al in- crito más de 20 diferentes combinaciones α−β.
terior de la célula a través del citoesqueleto. Las Los receptores de la familia de las integrinas
integrinas están constituidas por dos cadenas β1 conocida también como VLA ("Very Late
polipeptídicas, α+ y β, unidas en forma no Antigen") comparten la cadena común β1 (CD29)
covalente (figura 12-1), cuyos extremos y se encuentran ampliamente distribuidas tanto en
aminoterminales forman una estructura globular linfocitos B como T. Al menos 9 diferentes cade-
que contribuye a la asociación no covalente entre nas α++(tabla 12-1) han sido identificadas en aso-
ambas cadenas y también a la unión con su ligan- ciación con β1.++Estas integrinas β1 tienen como
do. Esta unión al ligando es dependiente de ligandos una serie de proteínas de la matriz
cationes divalentes (Ca2+ y Mg2+), y su participa- extracelular (MEC) tales como fibronectina (fn),
ción es esencial para la actividad de las integrinas. colágeno (col), vitronectina (vn), y laminina (lm).
Originalmente, las integrinas fueron clasificadas Entre las integrinas expresadas por los linfocitos,
en tres subfamilias, de acuerdo a la cadena+β,+en la integrina+α5β1+(VLA-5) tiene como ligando el
las cuales cada una de las tres cadenas β++se aso- tripéptido RGD (Arg, Cly, Asp) de la fn. Por otro
ciaba con diferentes cadenas α,++generando di- lado, la integrina α4β1++(VLA-4) la más abundan-
ferentes heterodímeros. Recientemente la fami- te en linfocitos, tiene como ligandos un péptido
lia de las Integrinas se ha visto expandida por el de la región CS-1 de la fn, además de VCAM-1
descubrimiento de nuevas cadenas β y por el he- ("Vascular Cell Adhesion Molecule-1"), una mo-
cho que una misma cadena α pueden asociarse lécula que se expresa en la superficie de las célu-
con más de una cadena β. Actualmente se cono- las endoteliales en tejido inflamado y en el
cen 15 cadenas α+ y 7 cadenas β. La asociación endotelio de los órganos linfoides secundarios (ver
entre las distintas cadenas α+ y β imparten al moléculas de adhesión de la Superfamilia de las
heterodímero su especificidad frente al ligando, Inmunoglobulinas más adelante).
dándose que diferentes combinaciones α− Cuatro diferentes cadenas α+ (CD11) se aso-
β++pueden actuar como receptor para un mismo cian con la cadena β2++(CD18) formando una
ligando. Por ejemplo, la cadena β1 puede combi- subfamilia (tabla 12-1). Los linfocitos circulantes
narse con varias cadenas α, dos de las cuales, α4 y expresan fundamentalmente la molécula LFA-1
α5 imparten al heterodímero la capacidad de unir ("Lymphocyte Function Associated Molecule-1")
Figura 12-1. Moléculas de adhesión celular. Se muestra esquemáticamente la estructura de las moléculas de adhesión. (A)
Familia de las Integrinas, (B) Superfamilia de las Inmunoglobulinas y (C) Familia de las Selectinas.
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o αLβ2 formada por la combinación de CD11a con transendotelial de los linfocitos, así como en la
CD18. Esta integrina juega un papel central en el interacción de éstos con otras células durante la
proceso de transmigración linfocitaria y ha sido respuesta inmune es la molécula CD54 (ICAM-
también directamente involucrada en la actividad 1). Esta molécula, presente en el endotelio se in-
de los LT citotóxicos (CD8+) así como también duce durante los procesos inflamatorios y se une,
en la actividad de células T "helper" y células "na- a través de su primer dominio inmunoglobulina
tural killer" (NK). Las otras moléculas de la fami- amino terminal, a la integrina CD11 a CD18 (LFA-
lia β2 (CD11b, CD11c, CD11d) se expresan prin- 1) presente en linfocitos, que como se mencionó
cipalmente en monocitos, neutrófilos y células NK. cumple un rol muy importante en la etapa de ad-
Desde el punto de vista de la recirculación hesión firme o "sticking" de los leucocitos.
linfocitaria, dos de los principales ligandos de la Otra molécula de esta familia, CD102
integrina CD11aCD18 (LFA-1) son CD54 (ICAM- (ICAM-2) se expresa en forma constitutiva en el
1, "Intercelular Adhesion Molecule-1") y CD102 endotelio y en algunas células presentadoras de
(ICAM-2) receptores de adhesión pertenecientes antígeno, y participaría en los procesos iniciales
a la Superfamilia de las Inmunoglobulinas (ver de transmigración y activación linfocitaria.
más adelante). Un miembro más reciente de este grupo de
Otro receptor de adhesión perteneciente a la receptores de adhesión es CD106 (VCAM-1).
familia de las Integrinas, que cumple un rol de CD106 existe en dos formas en la membrana, una
importancia en la migración y alojamiento de los dominante que contiene 7 dominios Ig, y otra que
linfocitos en placas de Peyer y tejido mucoso es surge del procesamiento del mRNA generando una
la molécula α4β7, una molécula que comparte la molécula con 6 dominios Ig. Esta molécula no se
misma cadena α+ presente en α4β1. El principal expresa en el endotelio vascular normal y es indu-
ligando para α4β7.corresponde a MAdCAM-1 cida por citoquinas pro-inflamatorias como IL-1,
(“Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule-1”), IFN−γ o TNF−α, participando así en el proceso
una glicoproteína presente en las células de transmigración linfocitaria durante la inflama-
endoteliales del tejido mucoso, aunque ción. Datos más recientes indican que VCAM-1
α4β7++también se liga (luego de la activación se expresaría en forma constitutiva en el endotelio
linfocitaria) a fn y VCAM-1 (ver tabla 12-1). columnar (HEV, "High Endothelial Venules") de
los órganos linfoides, y participaría en el ingreso
3.2. Receptores de adhesión de la superfamilia de los linfocitos a estos órganos durante los pro-
de las inmunoglobulinas (SFIg) cesos normales de vigilancia y respuesta inmune.
Por otro lado, CD106 ha sido implicada en los
Los receptores de esta familia comparten el procesos de diferenciación temprana de linfocitos
llamado “dominio de inmunoglobulina”, compues- B a partir de precursores hematopoyéticos en la
to de 90-100 residuos de aminoácidos dispuestos médula ósea, así como también en las etapas fina-
en dos láminas formadas por cadenas de estructu- les de diferenciación de linfocitos B en los
ra β anti-paralelas estabilizadas por enlaces folículos secundarios. El ligando para VCAM-1
disulfuro (capítulo 6). Las moléculas pertenecien- es α4β1 (VLA-4).
tes a este grupo pueden dividirse en dos catego- Un miembro más reciente de esta familia de
rías; aquellas involucradas en la interacción de los receptores de adhesión es MAdCAM-1, el ligan-
linfocitos con el antígeno (ej. Inmunoglobulinas do más importante de α4β7. Esta molécula se ex-
y receptores de células T, (TCR) o con células pre- presa tanto en HEV de placas de Peyer como de
sentadoras de antígeno (moléculas MHC-I y ganglio mesentérico, y también en vénulas
MHC-II, CD4, CD8) y aquellas que participan en postcapilares de la lámina propia de mucosa in-
fenómenos adhesivos más generales, tales como testinal. Se han descrito dos formas funcionales
CD2, CD54 (ICAM-1), CD102 (ICAM-2), CD106 de MAdCAM-1, una que está presente en placas
(VCAM-1) y MAdCAM-1. Aquellas involucradas de Peyer y que tiene capacidad de unir tanto α4β7
en el reconocimiento de antígenos se expresan como L-selectina, y otra que se encuentra en lá-
fundamentalmente en linfocitos, mientras que mina propia con capacidad de unir sólo α4β7.
aquellas que actúan en fenómenos de adhesión más MAdCAM-1 actúa como “domicilina de muco-
generales se expresan en el endotelio −a excep- sa” ("mucosal addressin"), es decir, participa en
ción de CD2 que se encuentra en linfocitos. la adhesión de linfocitos efectores o de memoria
Central en los procesos de migración con "homing" hacia mucosa intestinal (ver más
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Tabla 12-1. Receptores de adhesión y sus ligandos.
Molécula de adhesión Distribución Ligando Papel en la adhesión
Selectinas *Todas unen estructuras tipo Sialil-LewisX
L-Selectina Todos los leucocitos, excepto PNAd, PSGL-1, “Homing” a ganglios
(CD62L) subgrupos de linfocitos MAdCAM-1, linfáticos y placas de Peyer
efectores/de memoria E-Selectina
E-Selectina Células endoteliales PSGL-1, ESL-1 (E- “Homing” de linfocitos
(CD62E) Selectin Ligand-1), efectores y de memoria a la
CLA piel y sitios de inflamación
P-Selectina Células endoteliales, PSGL-1, CD24, PNAd “Homing” de LT Th1 a
(CD62P) plaquetas sitios de inflamación,
adhesión de plaquetas a
HEV
Ligandos de Selectinas
Sialil-LewisX Células mieloides, algunos LT Todas las Selectinas Depende de la molécula
(sCD15) Th1, HEV que lo exprese
PSGL-1 Todos los leucocitos Ligando esencial para “Homing” de LT Th1 a
(CD162) E-Selectina, también sitios de inflamación, une
une P- y L-Selectina plaquetas activadas
PNAd HEV en ganglios linfáticos, L-Selectina y P- “Homing” de LT vírgenes y
sitios de inflamación crónica Selectina en plaquetas activadas LT de memoria centrales a
ganglios linfáticos
CLA (HECA-452) LT con “homing” a piel, E-Selectina “Homing” de linfocitos
células dendríticas, efectores /de memoria a la piel
granulocitos
Integrinas+β+β2
αLβ2 Todos los leucocitos ICAM-1, 2, 3, 4, y 5 “Homing” de todos los
(LFA-1, CD11aCD18) linfocitos a los ganglios
linfáticos, placas de Peyer,
la mayoría de los sitios de
inflamación
αMβ2 Células mieloides, algunos LT ICAM-1, Factor X, Desconocido
(Mac-1, CD11bCD18) activados fibrinógeno, C3bi
αXβ2 Células dendríticas Fibrinógeno, C3bi Desconocido
(p150,95, CD11cCD18)
αDβ2 Monocitos, macrófagos, VCAM-1, ICAM-1 y -3 Desconocido
(CD11dCD18) eosinófilos
Integrinas+α+α 4
α4β1 La mayoría de los leucocitos, VCAM-1, fibronectina, “Homing” de linfocitos
(VLA-4) excepto neutrófilos integrinas α4 efectores y de memoria a
tejidos inflamados
α4β7 Linfocitos, células NK, MAdCAM-1, “Homing” de linfocitos
(LPAM-1) mastocitos, basófilos, fibronectina, débil a a tejidos mucosos intestinales
monocitos VCAM-1
Superfamilia de las Inmunoglobulinas
ICAM-1 Mayoría de los tipos celulares integrinas αLβ2, αMβ2, Ligando crítico para
(CD54) y fibrinógeno integrinas β2
ICAM-2 Células endoteliales, integrina αLβ2 Desconocido
(CD102) plaquetas
VCAM-1 Células endoteliales, estroma Integrinas α4β1, α4β7, “Homing” de linfocitos
(CD106) de médula ósea, células y αDβ2 efectores/de memoria a
foliculares dendríticas tejidos inflamados
MAdCAM-1 HEV de placas de Peyer, Integrina α4β7, L- “Homing” de linfocitos a
lámina propia, bazo, glándula Selectina tejidos mucosos intestinales
mamaria lactante
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adelante), aunque la forma con capacidad de unir principal ligando para P-selectina es una estruc-
L-selectina participa también en la adhesión de tura del tipo SLex que se forma por modificación
linfocitos vírgenes a HEV de placas de Peyer. postraduccional sobre PSGL-1 y probablemente
otras glicoproteínas. Cabe destacar que para la
3.3. Moléculas de adhesión de la familia de las formación de ligandos tanto para P- como para E-
selectinas Selectina participan unas enzimas denominadas
fucosiltransferasas, en particular la Fuc-IV y la
La familia de las selectinas está formada sólo Fuc-VII. La expresión de estas enzimas es modu-
por tres proteínas caracterizadas por poseer un do- lada por citoquinas (en particular IL-12 y IL-4),
minio amino-terminal similar al de una lectina que a su vez regulan la presencia o no de ligandos
tipo-C, y por lo tanto capaz de ligar carbohidratos para estas selectinas en los linfocitos.
(ver figura 12-1), aunque de manera Ca2+-depen- L-selectina, originalmente designada como
diente. Dos de estas receptores, E-selectina un receptor de migración y posicionamiento de
(CD62E) y P-selectina (CD62P) se expresan en linfocitos ha sido más recientemente detectada en
células endoteliales, mientras que el tercer miem- prácticamente todos los leucocitos. Sin embargo,
bro de la familia, L-selectina (CD62L) se expresa y como veremos más adelante, esta molécula está
en leucocitos, a excepción de linfocitos de memo- expresada diferencialmente en diferentes
ria/efectores (para distinguirlos de los linfocitos subpoblaciones de LT, otorgándoles a su vez pro-
de memoria centrales que serían CD62L+. Ade- piedades migratorias o de "homing" diferencia-
más de poseer un dominio N-terminal de tipo C- les. Dos ligandos tipo mucina (que poseen
lectina que aporta la especificidad a cada selectina, carbohidratos sulfatados, sialilados y fucosilados)
estas moléculas se caracterizan por poseer, inme- parecen ser ligandos para L-selectina; GlyCAM-
diatamente a continuación de este dominio, una 1 ("Glycosilation-dependent Cell Adhesion
secuencia similar al factor de crecimiento Molecule-1") y CD34, los cuales son sintetizados
epidermal (EGF, "Epidermal Growth Factor") se- por las HEV de los ganglios linfáticos periféricos
guido por un número variable de dominios SCR (donde colectivamente se denominan PNAd:
("Short Consensus Repeats”) análogos a los en- "Peripheral Node Addressins"). Más recientemente
contrados en las proteínas reguladoras del com- se ha demostrado que además de α4β7,+la forma
plemento (2 en L-selectina, 6 en E-selectina y 9 de MAdCAM-1 presente en HEV de placas de
en P-selectina) seguido por una secuencia de Peyer también actúa como receptor de L-Selectina.
transmembrana y una cola citoplasmática. Un listado de los receptores de adhesión des-
E-selectina (CD62E) se induce fuertemente critos en el sistema inmune y sus ligandos se re-
en las células endoteliales durante la inflamación. sume en la tabla 12-2.
Durante los procesos de inflamación crónica E-
selectina se expresa en forma permanente en la
piel donde es reconocida por un ligando sialilado 4. INTERACCIONES LINFOCITO-ENDO-
(tipo SLex) denominado en linfocitos T como CLA TELIO
("Cutaneous Lymphocyte-associated Antigen"), el
cual se expresa preferentemente en una Estudios que datan de más de 30 años han
subpoblación de LT que migran a piel. Se sabe demostrado que los linfocitos tienen normalmente
que CLA es a su vez una modificación la capacidad de migrar entre la sangre y la linfa, y
postraduccional de otra proteína más general lla- pasar desde la sangre a los OLS tales como
mada PSGL-1 ("P-Selectin Glycoprotein Ligand- ganglios linfáticos periféricos (axilares,
1"), la cual puede ser modificada además para for- inguinales), ganglios mesentéricos, placas de
mar ligandos para P-selectina. Peyer, etc. transvasando a través del endotelio
P-selectina fue inicialmente caracterizada en especializado de estos órganos. Este endotelio,
plaquetas demostrándose posteriormente su pre- denominado endotelio columnar alto (HEV: "High
sencia en células endoteliales. Tanto en plaquetas Endotelial Venules"), está formado por células
como en células endoteliales, P-selectina se acu- endoteliales de morfología columnar, altamente
mula en gránulos (gránulos α en las plaquetas y especializadas en el tráfico linfocitario, lo cual se
cuerpos de Weibel-Palade en las células logra probablemente en parte por la expresión
endoteliales) desde donde se moviliza a la mem- constitutiva de ligandos para L-selectina (ej.
brana celular durante el proceso de activación. El PNAd, MAdCAM) y para integrinas (ej. ICAM-
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Tabla 12-2. Características de los linfocitos T vírgenes, de memoria centrales y de memoria efectores.
LT vírgenes LT de memoria centrales LT de memoria efectores
Fenotipo CD45RA+/ CD44LOW CD45RO+/ CD44HIGH CD45RO+/ CD44HIGH
Moléculas de adhesión L-Selectina HIGH L-Selectina HIGH L-selectina NEG

- - α4β7+ο+CLA
LFA-1+ LFA-1+ LFA-1+
Receptores de CCR7+ CCR7+ CCR7NEG
quimioquina Sin especificidad tisular Sin especificidad CCR9, CCR4,
tisular CCR6 o CCR10
Respuesta funcional al Expansión clonal Proliferación rápida Proliferación rápida
Ag (requiere priming por Dan origen a LT efectores Actividad efectora inmediata
CD) de memoria (citoquinas o CTL)
Respuesta de IL-2 (retardada) IL-2 (rápida), sin IFN-γ ni IL-2, IFN−γ, IL-4
citoquinas al Ag IL-4
Divisiones inducida Ninguna Varias Muchas
por el Ag
Tejidos blanco de OLS, médula ósea OLS (ganglios, placas de Tejidos terciarios (piel, mucosa
homing Peyer) intestinal)
1, MAdCAM). El concepto actual es que el Finalmente, dentro de los resultados importantes

fenotipo “HEV” de estas vénulas sería dinámico que han emergido en los últimos años se encuentra
(y reversible) y probablemente generado por el el descubrimiento de que existen marcadas
microambiente del OLS (entre otras cosas por la diferencias en la dotación de receptores y ligandos
salida de elementos solubles vía linfáticos). de adhesión en los diferentes endotelios.
Por otro lado, se sabe que los linfocitos son Primeramente, el endotelio plano normal (no
capaces de atravesar el endotelio vascular plano inflamado) de los órganos no linfoides no presenta
de los diferentes tejidos (no linfoides) sólo en casos en su superficie luminal ligandos que permitan la
donde existan procesos de inflamación, aunque en extravasación linfocitaria de manera importante.
el caso de algunos tejidos terciarios como la lámina Estos ligandos se inducen durante el proceso
propia del intestino parece existir expresión inflamatorio. Por otro lado, el epitelio columnar
constitutiva de moléculas de "homing" como de los OLS presenta diferentes receptores y
MAdCAM-1 y probablemente la quimioquina ligandos de adhesión dependiendo del sitio
TECK (ver más adelante). La comprensión de los anatómico donde éste se encuentre. Así,
procesos de tráfico y de extravasación linfocitarios dependiendo de sus estructuras adhesivas
se ha visto incrementada en los últimos años encontramos al menos tres grandes correlaciones;
gracias al avance en el conocimiento de los (i) HEV de los ganglios linfáticos periféricos; (ii)
receptores de adhesión y por los estudios de las HEV de los ganglios mesentéricos, placas de Peyer
estructuras moleculares presentes en el endotelio y vénulas postcapilares de lámina propia intestinal
que permiten el tráfico transepitelial. Uno de los y (iii) vénulas postcapilares de la piel. Cada uno
conceptos importantes que ha surgido de esta de estos endotelios posee ligandos adhesivos
nueva información es que existen vías migratorias propios que le permiten seleccionar subpo-
diferentes para los linfocitos vírgenes versus los blaciones linfocitarias específicas. Algunos autores
linfocitos efectores/de memoria. Este aspecto del han postulado además la existencia de estructuras
tráfico linfocitario se verá más adelante en el punto adhesivas propias en otros sitios tales como el
4 (regulación del posicionamiento o "homing" de pulmón y el tejido sinovial, aunque aún es
los linfocitos). Un segundo aspecto que ha surgido controversial si existen en realidad vías de
de investigaciones recientes es el papel central que migración eficientes y específicas para esos
juegan algunas citoquinas y quimioquinas en la tejidos.
transvasación linfocitaria en la inflamación. A continuación se revisarán los mecanismos
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involucrados en el tráfico en cada uno de estos el sitio de la inflamación. Todos estos procesos,
endotelios y de las estructuras adhesivas desde la interacción al azar de los leucocitos con
implicadas. el endotelio hasta la migración final de éstos al
sitio de inflamación están regulados por
4.1. Tráfico linfocitario a través del endotelio interacciones mediadas por moléculas de adhesión.
inflamado Una serie de estudios con anticuerpos específicos
indican que el rodar de los leucocitos sobre el
En personas que sufren de LAD-1 endotelio luego de una lesión del tejido, está
("Leukocyte Adhesion Deficiency-1"), enfer- mediado por múltiples interacciones de baja
medad en la cual los pacientes muestran una afinidad. Estos contactos involucran predominan-
especial susceptibilidad frente a infecciones temente la interacción entre selectinas y sus
bacterianas recurrentes, los leucocitos son respectivos ligandos tipo Sialil L-X. Así, en esta
incapaces de atravesar el endotelio y acumularse etapa se han demostrado la interacción de L-
en los sitios de inflamación. Estudios de adhesión Selectina presente en los leucocitos con sus
realizados in vitro con leucocitos de estos pacientes ligandos en el endotelio (GlyCAM-1 y CD34) así
demostraron que éstos son incapaces de adherirse como la de P-Selectina (constitutiva en el
a monocapas de células endoteliales. Estos datos endotelio) y E-Selectina (inducida en el endotelio
constituyeron las primeras evidencias de que los por acción de citoquinas pro-inflamatorias) con
receptores de adhesión son requeridos en el sus correspondientes estructuras sialiladas y
proceso de transvasación leucocitaria in vivo. Una fucosiladas expuestas en la membrana del
serie de estudios en estos pacientes demostró una leucocito (SLex). De este modo, el "rolling" de
deficiencia en la expresión de la cade- los leucocitos sobre el endotelio está fuertemente
na+β2++(CD18) de las integrinas, implicando a regulado por las selectinas que actuarían en forma
esta integrina en el mecanismo de migración de coordinada. Estudios más recientes han implicado,
los leucocitos desde el lumen vascular a los tejidos además de las selectinas, la acción de integrinas
durante los procesos inflamatorios. Estudios más en el "rolling" de los leucocitos sobre el endotelio.
recientes han involucrado a varios otros receptores Ciertas líneas celulares linfoides usan α4β7+para
de adhesión en la transvasación, demostrando rodar sobre VCAM-1 o sobre MAdCAM-1 en el
además la complejidad de este proceso. endotelio de las mucosas como se enunció
Una de las primeras señales de inflamación anteriormente.
es la captura de linfocitos y leucocitos por el En una segunda fase del proceso de
endotelio (figura 12-2). Una serie de trabajos que transmigración leucocitaria se produce un aumento
incluyen elegantes estudios de microscopía en la fuerza de la adhesión lo que lleva a una
intravital han ayudado a caracterizar una secuencia adhesión firme de los leucocitos al endotelio y su
de interacciones adhesivas involucradas en la detención sobre éste ("sticking"). En este proceso
migración de los leucocitos desde la sangre a los de adhesión firme participan receptores de
sitios de inflamación. Bajo condiciones normales adhesión de la familia de las integrinas en los
de flujo, la interacción de los leucocitos con el leucocitos y de la SFIg en el endotelio. La
endotelio es un fenómeno enteramente al azar participación de estos receptores de adhesión
observándose que los leucocitos ruedan ("rolling") ocurre luego de un proceso de activación de las
a lo largo del vaso sanguíneo. En las cercanías de integrinas (por cambios conformacionales en el
un sitio donde haya ocurrido un daño vascular o heterodímero), o por mecanismos que actúan para
un proceso inflamatorio, la producción de modular la avidez de las integrinas presentes en
citoquinas y otros mediadores de la inflamación los leucocitos, así como también por un aumento
inducen una disminución de la velocidad del flujo en la expresión de novo de receptores de la SFIg.
leucocitario observándose el aplanamiento de los Entre éstos encontramos la acción de ciertas
leucocitos sobre el endotelio y su firme adhesión quimioquinas (IL-8 o MIP-1β), citoquinas como
a éste. Posteriormente, algunos de los leucocitos IL-5, o quimioatractantes como C5a producidos
se “arrastran” por el endotelio buscando un sitio localmente en el sitio de la inflamación). Por otro
por el cual atravesarlo, pasando finalmente por lado, el entrecruzamiento de ciertas proteínas en
entre las células endoteliales (diapédesis). Una vez la superficie de los linfocitos tales como CD2,
que los leucocitos se encuentran en el tejido CD3, CD44 así como de las selectinas E y P del
subendotelial, éstos continúan su migración hacia endotelio por sus respectivos ligandos inducen un
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Sin título-2 250 5/26/06, 10:26 AM

Figura 12-2. Modelo de las interacciones adhesivas que actúan en la migración transendotelial. Los leucocitos toman contacto
al azar con el endotelio sobre el cual ruedan (“rolling”). En las cercanías del sitio en que ocurre un proceso inflamatorio disminuyen
la velocidad, sufriendo aplanamiento y adhesión firme al endotelio. Posteriormente los leucocitos salen del vaso sanguíneo, pasando
entre las células endoteliales (diapédesis) y llegan al sitio de inflamación. Obsérvese la participación de distintas moléculas de
adhesión por parte de los leucocitos y células endoteliales, en las diferentes etapas del proceso.
aumento en la avidez de las integrinas β2,+en leucocitos adheridos al endotelio comienzan a

especial CD11aCD18 (LFA-1). Así también, la arrastrarse sobre la superficie de éste mediante un
adhesión de LT al endotelio mediante CD31 proceso que requiere la modulación cíclica de la
(PECAM-1) una molécula de adhesión de la SFI actividad de las integrinas y sus ligandos. Algunos
presente tanto en el endotelio como en leucocitos leucocitos logran introducirse en las uniones entre
(que promueve la adhesión a través de las células endoteliales para pasar por diapédesis
interacciones homotípicas CD31-CD31) aumenta al espacio extravascular. Este fenómeno de
la actividad funcional de las integrinas β1. Por otro transmigración está fuertemente regulado por la
lado, moléculas tales como TNF-1β, IFN−γ e IL- acción de quimioatractantes como IL-8 y
1 inducen en el endotelio la expresión de VCAM- citoquinas como IL-1 y TNF−α producidos
1 y de ICAM-1, ligandos de las integrinas localmente. Dado que la adhesión es un requisito
linfocitarias α4β1 y CD11aCD18 (LFA-1), de la diapédesis, los estudios dirigidos a identificar
respectivamente. El resultado final de la inducción los receptores involucrados en el proceso de
de nuevas moléculas de adhesión o del aumento diapédesis se han visto complicados por la
de la afinidad y avidez de receptores preexistentes dificultad de distinguir entre la participación de
originan nuevas interacciones adhesivas entre los receptores de adhesión en la adhesión
integrinas y moléculas de la SFIg con sus propiamente tal o en la transmigración. Sin
respectivos ligandos provocando la adhesión firme embargo, los resultados obtenidos a la fecha
de los leucocitos al endotelio. Luego de este involucran la participación de ICAM-1 y su
proceso de adhesión firme, la gran mayoría de los receptor CD11aCD18 (LFA-1) y del par VCAM-
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1/α4β1 en el fenómeno de migración transen- descarga directa de éstos a los sinusoides en la
dotelial de los leucocitos. llamada circulación abierta.
Una vez que los linfocitos han atravesado la
pared vascular, deben adherirse a las células del Endotelio Columnar Ganglionar. En los ganglios
epitelio o a los elementos de la matriz extracelular. periféricos se han encontrado dos ligandos
La evidencia experimental sugiere que la específicos para L-Selectina denominados
activación de los LT in vivo produce un aumento domicilinas (“addressins”); GlyCAM-1
de la avidez de las integrinas β1 y β2++ por largos ("Glycosylation-dependant Cell Adhesion
períodos, lo que permitiría la mantención de los Molecule-1") y CD34. Ambos ligandos son mucinas
LT activados en el microambiente local del sitio que portan cadenas laterales de carbohidratos que
de la inflamación. Moléculas de la matriz requieren estar sialiladas, y sulfatadas para unir L-
extracelular tales como fibronectina y Selectina. Estos ligandos, que se expresan en mayor
trombospondina jugarían a través de su interacción abundancia en el endotelio de los ganglios
con α4β1 y α5β1 un rol central en este fenómeno. periféricos que en cualquier otro órgano, permitirían
Un efecto similar tendría la interacción entre la la recirculación de linfocitos vírgenes (L-
integrina α3β1 con epiligrina, una molécula de la selectina+), así como también de un subgrupo de
membrana basal de los epitelios. Aquellos linfocitos de memoria (centrales) CD62L+ hacia
linfocitos que hayan disminuido la afinidad/avidez estos ganglios. ICAM-1, presente en las HEV
de sus integrinas u otros receptores de adhesión también ha sido involucrado en la recirculación de
abandonarían el sitio de la inflamación para volver linfocitos a los ganglios periféricos ya que
a la circulación vía linfáticos. anticuerpos contra esta molécula bloquean la
migración de los linfocitos desde la sangre a los
ganglios. Puesto que CD11aCD18 (LFA-1), el
4.2. Tráfico linfocitario a través del endotelio
ligando de ICAM-1 presente en los linfocitos, se
columnar (HEV)
encuentra normalmente en un estado inactivo, éste
debe ser activado previamente para que se una a su
En los ganglios u otros órganos linfoides
receptor, lo cual está dado por las quimioquinas SLC
secundarios tales como en las placas de Peyer,
y/o ELC, las cuales se unen al receptor CCR7, el
amígdalas, etc. el endotelio venular se encuentra
que se encuentra expresado específicamente en LT
formado por un tipo específico de célula
vírgenes y de memoria centrales. El papel e
endotelial, la célula endotelial columnar (HEV:
importancia crucial de las quimioquinas en la
"High Endothelial Venules"). Estas células
cascada de adhesión ya se ilustró al inicio de este
expresan receptores de adhesión diferentes que
capítulo, pero baste recordar que se ha demostrado
las células endoteliales planas de la vasculatura
que la presencia tanto de CCR7 como de sus
periférica y están especializadas en la migración
ligandos son esenciales para permitir la adhesión
de los linfocitos hacia el interior de los órganos
firme del linfocito T. Para ilustrar aún más la
linfoides secundarios. Aproximadamente un 25%
importancia del modelo secuencial de múltiples
de los linfocitos que circulan por el endotelio
pasos, esta cascada permite explicar por qué por
columnar lo atraviesan para entrar al OLS,
ejemplo los neutrófilos (que no poseen CCR7) son
comparado con el bajo número de linfocitos que
incapaces de adherir y transmigrar en ganglios
atraviesan el endotelio vascular normal. Esto se
periféricos (aún cuando expresan L-selectina).
debe a que las HEV expresan vías de adhesión
Aunque el entrecruzamiento del TCR es capaz de
en forma constitutiva, mientras que en el
producir activación de las integrinas, se sabe que
endotelio normal estas vías de adhesión sólo se
en el endotelio esto ocurre por una vía independiente
activan durante la inflamación. Los mecanismos
de la estimulación del LT por su antígeno ya que
adhesivos que actúan en las HEV son diferentes
los linfocitos vírgenes que entran a los ganglios
y dependiendo del órgano en cuestión, ya que
como parte del proceso de vigilancia inmune normal
diferentes receptores de adhesión se expresan en
no se encuentran necesariamente activados.
los ganglios periféricos comparadas por ejemplo
Estudios recientes en endotelio aislado de amígdala
con aquellas expresadas por las HEV de placas
humana indican que VCAM-1 se expresaría en
de Peyer, ganglios mesentéricos, u otras mucosas.
forma constitutiva en este endotelio, sugiriendo la
En el bazo, por otro lado, la entrada de los
participación del par VCAM-1/α4β1 en la entrada
linfocitos no ocurre a través del endotelio sino
de los linfocitos a este órgano.
que se efectúa, fundamentalmente, por la
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Endotelio columnar de placas de Peyer. débil). E-Selectina se induce preferencialmente
Estudios de bloqueo de la adhesión con en las vénulas de la piel durante los estados de
anticuerpos específicos permitieron la hipersensibilidad de tipo retardada y durante las
identificación de una nueva molécula de adhesión inflamaciones crónicas de la piel, proporcionando
llamada MAdCAM-1 ("Mucosal Addressin Cell uno de los elementos centrales que influencia el
Adhesion Molecule-1"), la cual es virtualmente paso de linfocitos T a la piel. En humanos, estudios
específica del endotelio de mucosa intestinal. efectuados en linfocitos localizados en la piel, han
MAdCAM-1 se expresa principalmente en el demostrado que éstos expresan un carbohidrato
endotelio de placas de Peyer, en el endotelio de la específico denominado “Cutaneous Lymphocyte-
lámina propia del intestino, y en las vénulas de la associated Antigen” (CLA). Esta molécula, la cual,
glándula mamaria. Esta molécula, que presenta como se mencionó, es una modificación
dominios tipo Ig y tipo mucina, tiene dos postraduccional de PSGL-1, parece encontrarse
receptores descritos. Uno de ellos es una molécula exclusivamente en linfocitos T de tipo memoria/
de la familia de las integrinas que presenta la efector en la dermis y está ausente en otras
cadena α4 ligada a la cadena β7. El otro es L- subpoblaciones linfocitarias provenientes de otros
Selectina, aunque como se mencionó, L-selectina epitelios. CLA aparece como el principal ligando
sólo se une a la forma de MAdCAM presente en de E-Selectina en esos tejidos. Dado que E-
placas de Peyer. Experimentos de adhesión han Selectina se expresa también en otros tejidos
demostrado que células portadoras de α4β7 pero además de la piel, se ha sugerido que la interacción
no α4β1 son capaces de adherirse a HEV de placas CLA/E-Seletina no sería suficiente para explicar
de Peyer o a MAdCAM-1 directamente. Por otro la exquisita segregación de los linfocitos CLA+
lado, y de acuerdo con el modelo secuencial de en la piel. A este respecto, y al igual que para
múltiples pasos, recientemente se ha descrito que otros tejidos, se ha planteado recientemente que
el receptor de quimioquina CCR9 está presente un elemento de especificidad adicional (y
preferentemente en LT efectores y/o de memoria probablemente determinante), sería el grupo de
de lámina propia y también en linfocitos receptores de quimioquina que estaría presente en
intraepiteliales (IEL) de intestino delgado. LT CLA+. En particular, se ha planteado que
Interesantemente, su expresión está fundamen- CCR4, y más recientemente CCR10 y CCR6
talmente restringida a LT α4β7+, por lo que se ha tendrían un papel importante en la determinación
planteado que éste sería el receptor de quimioquina de especificidad migratoria fina de LT a piel, donde
encargado específicamente de activar la adhesión además se han identificado las quimioquinas y/o
mediada por esta integrina en la mucosa del ligandos para estos receptores (MDC/TARC,
intestino delgado. Adicionalmente, el único CTACK, y MIP3α, respectivamente). Sin
ligando descrito para CCR9, la quimioquina TECK embargo, hasta el momento esto último es
(CCL25) se ha descrito en endotelio de lámina controversial, ya que se ha identificado que por
propia. ejemplo CCR4 se encuentra también en LT CLA
En resumen, la presencia o ausencia de ciertos negativos y que se expresa además en linfocitos
receptores de adhesión en los linfocitos, o de Th2, por lo cual su especificidad en relación a
determinados ligandos en el endotelio columnar "homing" a piel es, a la fecha, cuestionable.
de diferentes órganos linfoides definirían las
subpoblaciones de linfocitos que migrarían a los
diferentes órganos. Así, a los ganglios periféricos 5. REGULACIÓN DEL POSICIONA-
migran linfocitos con un fenotipo L-Selectina+/ MIENTO ("HOMING") DE LINFOCITOS
+ΧCR7+/+LFA+, mientras que los linfocitos que
migran a placas de Peyer y lámina propia intestinal ¿Qué determina que un linfocito virgen
tendrían un fenotipo L-selectina-/low/+ΧCR9+/ adquiera después de activarse un potencial de
α4β7+. "homing" tejido-específico?. Para ilustrar la
importancia de esta pregunta, vale la pena recordar
4.3. Tráfico linfocitario hacia la piel que los LT vírgenes pueden migrar indistintamente
por todos los OLS (ganglios periféricos,
Estudios recientes han demostrado que el mesentérico y placas de Peyer), pero que sólo
endotelio de la piel expresa E- y P-Selectina de después de activarse y pasar a ser LT de memoria
manera inducible y también constitutiva (aunque y/o efectores adquieren preferencia para migrar a
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determinados tejidos y no otros, fenómeno que se lo cual se mencionará antecedentes que permiten
ha denominado "homing" o posicionamiento apoyarlas como también algunas de sus
tejido-específico (ej. aquellos con "homing" a debilidades.
mucosa intestinal no migran a piel y viceversa). a) La teoría actualmente más aceptada es
Es importante mencionar que el hecho de que los aquella que propone que el sitio de entrada del
linfocitos presenten restricción y especificidad en antígeno determinaría de algún modo el fenotipo
cuanto al "homing" a determinados tejidos es de "homing" de un linfocito. A este respecto,
determinante para el desarrollo o no de una existen dos trabajos que muestran (en humanos)
respuesta inmune adecuada, especialmente si se que un antígeno que entra por vía oral produce un
considera que aquellos linfocitos que presentan significativo mayor número de clones que
"homing" tejido-específico son los llamados expresan la molécula de migración específica a
efectores y/o de memoria, y que justamente son la mucosa intestinal+α4β7+y que son, al mismo
los que están encargados de proteger más tiempo, específicos contra el antígeno, comparados
eficientemente frente a un segundo encuentro con con el mismo antígeno inoculado por vía parenteral
el antígeno. Adicionalmente, en modelos animales (lo cual de hecho produce clones específicos contra
de algunas enfermedades autoinmunes intestinales el antígeno, pero que son α4β7+negativos). Estos
(ej. enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa) se ha trabajos tienen el valor de haber sido hechos en
demostrado que el bloqueo de una de las moléculas humanos, pero al mismo tiempo presentan el
implicadas en el "homing" a mucosa intestinal problema de haber usado antígenos complejos (con
(α 4 β 7 ) tendría la capacidad de disminuir muchos potenciales epítopos); cabe así la
importantemente la severidad de la enfermedad. posibilidad de inducir la respuesta de diferentes
Esto tiene la ventaja de que al posibilitarse la clones T y por tanto cabría la posibilidad de que
respuesta inmune en otros tejidos, no sería no sea la misma especificidad de linfocito la que
necesario inmunosuprimir a los pacientes (como se expande preferentemente al inmunizar por una
lo hacen las terapias inmunosupresoras estándar u otra vía, con lo cual existe la posibilidad de que
en uso actualmente). Sin embargo, la meta más en un caso se expandan clones predeterminados
ambiciosa final sería poder bloquear el "homing" para ser+α 4β 7+positivos y en el otro, clones
a un tejido sólo de aquellos clones implicados en predeterminados para ser+α4β7+negativos. Al
la respuesta patológica, dejando la posibilidad de mismo tiempo, el hecho de administrar el antígeno
que otros clones no patogénicos puedan responder por una u otra vía no garantiza que la activación
a otros antígenos en ese tejido, es decir, en el fondo se producirá sólo localmente en el tejido de entrada
un modo de establecer tolerancia específica por (de hecho, se ha demostrado que un antígeno que
esta vía. entre por vía oral puede activar también linfocitos
Volviendo a la pregunta inicial de qué en el bazo). Aunque esta es una hipótesis
determina el "homing" tejido-específico en un teleológicamente atractiva, puesto que “tiene
linfocito al activarse y pasar a ser linfocito efector sentido fisiológico” que un linfocito vuelva donde
y/o de memoria, partiremos mencionando que encontró por vez primera su antígeno, es bueno
existen al menos cuatro teorías conceptualmente ser cautelosos al interpretar los datos que la
diferentes que intentan explicar este mismo sustentan.
fenómeno. Aunque algunas de ellas tienen mayor b) Otra hipótesis sostiene que la dotación de
o menor aceptación, todas están basadas en receptores de "homing" estaría fuertemente
algunos hechos comunes. Se ha demostrado que asociada al fenotipo Th1 o Th2 de un linfocito.
si se reinfunde en un animal linfocitos tomados En lo concreto, se ha demostrado que células
desde un tejido, éstos preferentemente migrarán cultivadas en condiciones de polarización Th1,
al tejido desde donde fueron aislados (en este pero no Th2, adquieren expresión de ligandos para
sentido presentan "homing" por el tejido de origen) P y E-selectinas y por lo tanto capacidad de
y que linfocitos efectores/de memoria tomados "homing" a piel y otros tejidos inflamados.
desde piel o mucosa intestinal, presentan Tratando de conciliar este modelo con el anterior,
preferentemente receptores de "homing" cabe destacar que en mucosa intestinal se ha
específicos para piel o mucosa intestinal descrito una desviación del equilibrio de linfocitos
respectivamente. A continuación se discutirá hacia Th2, lo cual está de acuerdo con el hecho de
brevemente las diferentes teorías que intentan dar que los linfocitos activados en ese microambiente
cuenta de los hechos descritos anteriormente, para no expresarían ligandos para P/E-selectinas. Sin
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embargo, otro trabajo logró demostrar que in vivo sería el mismo, es decir, sólo se encontrarían en
no existiría una asociación predominante entre el un tejido linfocitos con un determinado fenotipo
ligando de E-selectina CLA ("homing" a piel) con de "homing" pero no otro, sin que necesariamente
el fenotipo Th1 o Th2, lo que sugiere que si bien exista un evento “instructivo” inicial en este
es cierto que bajo condiciones in vitro sería posible fenotipo. Aunque esta es una hipótesis altamente
encontrar una asociación con un fenotipo o provocativa, como se mencionó anteriormente no
molécula de "homing", esta asociación no existen evidencias que la apoyen directamente.
necesariamente ocurre in vivo. De todas las hipótesis enunciadas
c) Otros autores han propuesto que el hecho anteriormente, la más aceptada actualmente es que
de encontrar linfocitos con un fenotipo el sitio de entrada del antígeno, es decir el tejido
predominante en un tejido dependería de donde el linfocito encontraría su antígeno, jugaría
diferencias en la tasa de proliferación y/o apoptosis un rol determinante en la inducción de "homing"
de estas células en el tejido, es decir, linfocitos tejido-específico. La mayor popularidad de esta
activados en un tejido determinado tendrían una hipótesis se debe probablemente a que pensado
mejor posibilidad de sobrevivir y/o proliferar en desde un punto de vista funcional es más
ese mismo tejido. De esta manera, los partidarios “atractivo” fisiológicamente pensar que el
de esta hipótesis sostienen que la acumulación de potencial de "homing" pueda ser instruido por el
linfocitos en un tejido determinado no dependería microambiente del tejido donde es presentado el
de la entrada preferencial de estas células al tejido antígeno, de manera tal que el linfocito
(es decir no dependería de mayor adhesión de esos predominantemente regrese al sitio donde es más
linfocitos al endotelio), sino que de una mayor o probable que vuelva a encontrar el antígeno, y al
menor proliferación y/o apoptosis de estas células mismo tiempo donde realmente se necesita esta
en el tejido. Sin embargo, los datos que sustentan respuesta inmune, disminuyendo por otro lado la
esta hipótesis podrían también ser explicados en probabilidad de daño en tejidos donde esta
el contexto de una preferencia en el "homing" en respuesta no se necesita. Desde hace más de 10
vez que en diferencias de proliferación y/o años que se piensa que el potencial de "homing"
apoptosis. tejido-específico de un linfocito podría ser
d) Finalmente, una hipótesis que ha sido instruido por el “microambiente” del tejido en el
planteada recientemente es que sería el tejido en cual este linfocito es activado. Sin embargo,
sí el que seleccionaría los linfocitos con el fenotipo actualmente es completamente desconocido qué
de "homing" “adecuado”. Hasta el momento no elementos en el tejido serían los encargados de
existen datos que apoyen directamente esta determinar esta propiedad en los linfocitos. Poder
hipótesis, aunque a decir verdad tampoco existe contestar esta pregunta no sólo es importante desde
evidencia formal que permita descartarla el punto de vista mecanístico, sino porque además
totalmente. Sin embargo, los autores de esta daría la posibilidad de poder modular la respuesta
hipótesis sostienen que a la luz de los datos inmune en forma más específica.
actuales no se puede excluir que el hecho de En nuestro laboratorio hemos abordado esta
encontrar linfocitos preferentemente con un pregunta planteando como hipótesis que los
determinado fenotipo de "homing" en un tejido elementos que determinarían el "homing" dentro
podría ser el resultado de un evento inicial de un tejido serían las DC presentadoras de
estocástico donde los linfocitos al activarse antígeno. Esta hipótesis se basa, entre otras cosas,
adquieran una dotación de receptores de homing en el hecho de que para que un linfocito adquiera
al azar, y que sea el tejido en sí (con su dotación un potencial de "homing" tejido-específico debe
específica de addressins) el que seleccione en primer lugar ser activado, y que actualmente
aquellos linfocitos con la dotación de receptores se acepta que las únicas células presentadoras de
adecuada o necesaria para entrar. De este modo, antígeno capaces de activar eficientemente
por ej. si el antígeno entra por vía mucosa, esto linfocitos T virgen son las CD. Dado lo anterior,
favorecería la proliferación y sobrevida de aquellos estas células serían al menos elementos necesarios
linfocitos α4β7+ que pudieron entrar al tejido en este proceso. Los resultados de nuestro
mucoso, pero no de aquellos α 4β 7− que no laboratorio están plenamente de acuerdo con
ingresaron, lo cual a su vez contribuiría aún más a nuestra hipótesis ya que muestran que comparadas
la selección “adecuada” y proliferación de con CD de ganglios linfáticos periféricos (PLN) o
determinados clones. Con esto, el resultado final bazo las CD derivadas de placas de Peyer son
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capaces de inducir una significativa mayor LT de memoria efectores. Esta clasificación está
expresión de la integrina de "homing" a basada en la expresión diferencial de las isoformas
mucosa+α4β7 en linfocitos T y una clara respuesta CD45RA y CD45RO y de las moléculas de
a la quimioquina TECK, que como se discutió "homing" L-selectina y CCR7, así como también
anteriormente son las dos moléculas que han sido por características funcionales diferenciales. Esto
postuladas como receptores de "homing" para ha planteado un nuevo paradigma para estudios
mucosa intestinal. En acuerdo con estos resultados subsecuentes, por lo cual creemos importante
hemos logrado demostrar además que estas mencionar las propiedades generales de estas
diferencias fenotípicas se traducen efectivamente subpoblaciones descritas (tabla 12-3).
en una diferencia funcional in vivo, ya que La existencia de subpoblaciones de LT de me-
linfocitos activados con CD de placas de Peyer moria efectores se correlacionaría con lo que
migran significativamente más a placas de Peyer actualmente conocemos en relación a "homing"
y dramáticamente mejor a lámina propia del de LT a tejidos terciarios, tejidos en los cuales se
intestino comparados con aquellos activados con encuentran predominantemente LT con fenotipo
CD de PLN. Finalmente, en nuestros ensayos CD44HIGH / CD45RO / L-SelectinaNEG / y con
hemos encontrado que la mayor expresión dotación de moléculas de "homing" específicas
de+α4β7+inducida por CD de placas de Peyer no para el tejido analizado (ej. α4β7 / CCR9 para
se asocia a una mayor o menor producción de IFN− mucosa intestinal y CLA para piel). Por otro lado,
γ, lo que nos ha llevado a pensar que el fenotipo la funcionalidad de los putativos LT de memoria
de "homing" no necesariamente se correlaciona centrales sería mantener un pool de LT de memo-
con una u otra respuesta T "helper". ria (con rápida respuesta al antígeno) que mantenga
En su conjunto, nuestros resultados destacan la capacidad de acceder a OLS en el caso que el
una forma completamente nueva en la cual CD antígeno (o uno relacionado) entre por una vía
pueden “educar” a LT. diferente a aquella que utilizó la primera vez. A su
Un concepto propuesto recientemente es que, vez, frente a una segunda estimulación antigénica,
en general, existirían diferentes subpoblaciones de estos LT de memoria centrales darían origen a LT
LT, a saber: LT naïve, LT de memoria centrales, y de memoria efectores, los cuales per se tendrían
Tabla 12-3. Características de los LT naïve, de memoria central y memoria efector
LT Naïve LT de memoria central LT de memoria efector

Fenotipo CD45RA+/CD44Low CD45RO+/ CD44 High CD45RO+/ CD44 High
Moléculas de adhesión L-SelectinaHigh L-Selectina High L-Selectina Neg
α4β7-+/+CLA_ α4β7-+/+CLA _ α4β7+/−+/+CLA+/-
LFA-1+ LFA-1+ LFA-1+
Receptores de CCR7+ CCR7+ CCR7_
quimioquina Sin especificidad Sin especificidad CCR9+/−+/ CCR4+/−
tisular tisular CCR6+/−/ CCR10+/−
Respuesta funcional al Ag Expansión clonal Proliferación rápida Proliferación rápida
(requiere “priming” Dan origen a LT Actividad efectora
por CD) efectores de memoria inmediata (citoquinas o
CTL)
Respuesta de citoquinas al IL-2 (retardada) IL-2 (rápida), sin IFN-γ IL-2, IFN−γ, IL-4
Ag ni IL-4
Divisiones inducidas por el Ninguna Varias Muchas
Ag
Tejidos blanco de OLS, médula ósea OLS (ganglios, placas de Tejidos terciarios (piel,
“homing” Peyer) mucosa intestinal, otros?)
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Sin título-2 256 5/26/06, 10:26 AM

un compromiso más restringido para circular por involucradas aún no se han definido con certeza.
ciertos tejidos terciarios y no otros (pero no por
OLS). Es importante mencionar, que aunque esta
subdivisión de los LT de memoria es atractiva y 6. RECEPTORES DE ADHESIÓN EN LA
permite explicar algunos fenómenos, su DIFERENCIACIÓN Y ACTIVACIÓN
funcionalidad in vivo en términos de migración LINFOCITARIA
diferencial de estas diferentes subpoblaciones aún
no ha sido demostrada. Por otro lado, esto se ha 6.1. Receptores de adhesión y diferenciación
descrito hasta el momento en humanos, y no es temprana en la médula ósea
conocido actualmente si existe un ejemplo murino
para estos diferentes subtipos de LT. Tampoco se Aunque son escasos los estudios que ligan la
conoce qué factores determinan que durante una participación de moléculas de adhesión y sus
estimulación antigénica determinados LT ligandos en la diferenciación de linfocitos B en la
progresen hasta el estadio de LT de memoria médula ósea, algunos resultados en conjunto con
centrales y otros hasta LT de memoria efectores. datos de experimentos realizados in vivo con
A modo de resumen, y tomando en cuenta esta anticuerpos versus receptores de adhesión en pri-
última subdivisión mencionada, los linfocitos LT mates, demuestran en forma clara la importancia
podrían ser clasificados de acuerdo a su potencial de los receptores de adhesión y sus ligandos en la
de "homing" como se indica en la tabla 12-4. linfopoyesis temprana.
Tabla 12-4. Potencial de “homing” de los linfocitos T según su estado de diferenciación.
"Tethering"/"Rolling" Activación "Sticking"

LT Endotelio LT Endotelio LT Endotelio
LT naïve y LT de memoria centrales
Migración a OLS L-selectin PNAd CCR7 SLC /ELC LFA-1 ICAM-1

Sin restricción (GlyCAM-
1, CD34) /
MAdCAM-
1
LT de memoria efectores
Migración a mucosa α4β7 MAdCAM-1 CCR9? TECK? α4β7 MAdCAM-

intestino delgado LFA-1? 1
ICAM-1?
Migración a piel CLA / E / P- CCR4? MDC LFA-1 ICAM-1

Otros selectinas CCR6? /TARC? α4β1? VCAM-1?
ligandos CCR10? MIP3__
de P/E- CTACK?
selectina?
En relación a "homing" tejido-específico de Las células estromales de la médula ósea, en

linfocitos a otros territorios, al día de hoy se piensa conjunto con receptores de la matriz extracelular
que, en efecto, existirían otras vías de migración. (MEC) proporcionan el microambiente necesario
A este respecto, cabe mencionar que se han para la linfopoyesis y la hematopoyesis en gen-
postulado vías de "homing" específico a pulmón, eral. Algunas de las células que conforman el
articulaciones, mucosa de intestino grueso, médula complejo estroma medular proporcionan las
ósea, y eventualmente sistema nervioso central, citoquinas requeridas para la diferenciación de los
aunque su especificidad y las moléculas linfocitos B en la médula, mientras que otras
257
Sin título-2 257 5/26/06, 10:26 AM

señales necesarias para esta diferenciación fundamentalmente a la insuficiencia de los
provienen de la interacción directa entre las células modelos experimentales con que se cuenta para
estromales y los precursores linfocitarios. In vivo, estudiar las interacciones celulares en el timo. La
la interacción entre los precursores linfoides y el participación de receptores de adhesión en las
microambiente medular es compleja; durante las interacciones entre las células T maduras y células
primeras etapas de diferenciación los precursores accesorias o con los linfocitos B durante la ayuda
deben permanecer en ciertas zonas cercanas a la inmune se discutirá más adelante.
periferia de la médula para moverse luego hacia
el centro donde su interacción con células 6.2. Receptores de adhesión y diferenciación en
reticulares y macrófagos de la médula promueve el microambiente de los OLS
la diferenciación. Finalmente las células pasan al
seno central de la médula, en donde su interacción Los receptores de adhesión participan
con las células endoteliales permite a los linfocitos también en las etapas finales de la diferenciación
maduros salir finalmente a la circulación como de los linfocitos B activados en el microambiente
linfocitos B vírgenes. Estos procesos e de los OLS. Estas interacciones incluyen entre
interacciones requieren de la participación de otras: (i) contactos que ocurren en las zonas T del
receptores de adhesión y sus respectivos ligandos, OLS entre linfocitos T específicos para un cierto
de manera que estas moléculas juegan un papel antígeno y las DC interdigitantes (DC-I), que a
central en la regulación de la linfopoyesis. Algunas su vez son un subgrupo de las CD y (ii)
de las interacciones que han sido reconocidas en interacciones en el centro germinal entre los
este proceso incluyen contactos entre la integrina linfocitos B activados con las DC foliculares (DC-
α4β1+(VLA-4) presente en los precursores F) y los LT específicos para el mismo antígeno.
linfoides y su ligando VCAM-1 presente en células Las DC-I se encuentran en la zona T de los
del estroma medular o con fibronectina presente OLS y en otros órganos no linfoides tales como
en la MEC. Anticuerpos anti-VLA-4 o contra corazón, pulmones, riñones, etc. Estas células
VCAM-1 bloquean la adhesión de progenitores presentan una alta expresión de antígenos MHC
de líneas celulares B a cultivos de médula ósea e clase II y como se discutió son centrales en la
inhiben la diferenciación de células B en cultivos iniciación de la activación de LT, actuando como
de médula ósea de larga duración. Un receptor de células presentadoras de antígeno y entregando
adhesión presente en los linfocitos y que no además una segunda señal coestimulatoria a los LT
pertenece a ninguna de las familias antes (ej. CD80, CD86, CD2-Ligando), señal que
mencionadas es CD44. Esta molécula, que tiene depende de la interacción íntima entre el LT y la
como ligando al ácido hialurónico, es una proteína DC-I. Las DC-I expresan además numerosos
de membrana que como resultado de un proceso receptores de adhesión, incluyendo CD11aCD18
de "splicing" alternativo de su mRNA presenta (LFA-1), ICAM-1, ICAM-2 y CD44. Experimentos
múltiples isoformas en la membrana celular (una realizados con anticuerpos contra diferentes
de las cuales está presente en los linfocitos receptores de adhesión o sus ligandos bloquean la
efectores y de memoria). CD44 participa en varias respuesta de LT estimulada por DC-I. Estos
etapas durante la linfopoyesis así como en la resultados sugieren que la interacción funcional
recirculación linfocitaria. Los progenitores B entre las DC-I y los LT requiere de interacciones
presentan altos niveles de CD44 en su membrana, entre los pares adhesivos ICAM-1/LFA-1, y ICAM-
niveles que disminuyen durante la maduración 2/LFA-1. En particular, se sabe que la interacción
para volver a aumentar en el linfocito B maduro. ICAM-1/LFA-1 es esencial para la respuesta CD8
Anticuerpos anti-CD44 bloquean la interacción CTL, ya sea primaria o secundaria.
entre los precursores B y líneas celulares derivadas Por otro lado, las DC-F actúan como un
de la médula ósea e interesantemente son capaces importante sistema para atrapar antígeno en el
de inhibir la diferenciación de linfocitos B en tejido linfoide ya que ellas ligan complejos
cultivos de médula ósea. antígeno-anticuerpo en forma altamente eficiente
Por otro lado, y aunque no cabe duda de la en los denominados icosomas. Se postula que la
participación de receptores de adhesión en la interacción de los linfocitos B con los complejos
diferenciación de linfocitos T en el timo, la icosomas presentes en la superficie de las DC-F y
contribución de moléculas de adhesión específicas con los LT específicos para el mismo antígeno
en este proceso es menos clara, debido (previamente activados en la zona T por las DC-
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Sin título-2 258 5/26/06, 10:26 AM

I), conjuntamente con la producción local de duración de la respuesta inmune, así como también
citoquinas en el centro germinal, jugarían un papel la actividad efectora, recirculación y posi-
central en mecanismos tan importantes como cionamiento o "homing" específico de los linfocitos
salvar a los LB de la apoptosis, en la inducción de en los diferentes tejidos. Asimismo, cada vez es más
la síntesis de anticuerpos, en los cambios de clase claro que los linfocitos, tienen vías de "homing"
de inmunoglobulina, en la llamada maduración específicas para determinados tejidos, lo cual
de afinidad de los LB, y probablemente en la contribuye a hacer más eficiente y específica una
mantención de LB de memoria. Aunque el detalle respuesta inmune. De esta manera, el "homing"
de los mecanismos moleculares involucrados en tejido-específico sería el equivalente a dotar a los
estos procesos se desconoce, existe evidencia de linfocitos efectores y de memoria de una clave para
que los receptores de adhesión tendrían un papel entrar al tejido donde es más probable que vuelvan
central en estos importantes fenómenos. a encontrar su antígeno, y al mismo tiempo al
Recientemente se ha demostrado la presencia de bloquear la entrada a otros tejidos, se disminuyen
VCAM-1 e ICAM-1 en DC-F. Experimentos con las posibilidades de que estos linfocitos ya
anticuerpos contra estas moléculas o contra los “armados” puedan producir daño al organismo (en
respectivos receptores de adhesión α4β1++y la forma de hipersensibilidad o autoinmunidad).
CD11aCD18 (LFA-1) presentes en los LB, han Finalmente, el hecho de que el "homing" tejido-
permitido establecer la participación de estos pares específico de un linfocito sea una característica que
adhesivos en las interacciones celulares en el probablemente perdure en el tiempo, daría
centro germinal. En relación al "homing" de los fundamento a la idea de considerarlo como parte
LB en el microambiente de los folículos linfoides, de la memoria inmunológica.
se ha demostrado que el receptor de quimioquina
CXCR5 presente en LB, al igual que su ligando
BLC (CXCL13) producida específicamente por LECTURAS SUGERIDAS
DC-F en el folículo de los OLS (excepto en
ganglios periféricos, donde se piensa que este rol
Bradley, L., Watson, S., “Lymphocyte migration
es cumplido por MIP-3α o MIP-3α) son
into tissue”, Curr Opin In Immunol 8: 312-320,
requeridos para la localización del LB en los
1996.
folículos linfoides. También se ha implicado al par
SDF-1 y a su receptor CXCR4 (CXCL12) en el
Cinamon, G.; Grabovsky, V.; Winter, E.; Franitza,
"homing" microambiental de LB, aunque su rol
S.; Feigelson, P; Shamri, R.; Dwir, O.; Alon, R.,
ha sido menos documentado. En los centros
“Novel chemokine functions in lymphocyte mi-
germinales, aquellos LB que no son seleccionados
gration through vascular endothelium under shear
por el antígeno para transformarse en células de
flow”, J Leukoc Biol 69 (6) 860-6, 2001.
memoria (ya sea porque no responden al antígeno
o porque pierden afinidad por éste en el proceso
Dunon, D.; Piali, L.; Imhof, B.A., “To stick or not
de maduración de afinidad) son eliminados a través
to stick: the new leukocyte homing paradigm”,
de un proceso de apoptosis. Estudios de inhibición
Curr Opin cell Biol 8( 5):714-23, 1996.
de la adhesión con anticuerpos específicos
sugieren que la adhesión de los LB a las DC-F vía
Moser, B., Loetscher, P., “Lymphocyte traffic con-
los pares adhesivos ICAM-1/LFA-1 y VCAM-1/
trol by chemokines”, Nature Immunol 2(2):123-
α4β1 es necesaria para salvar a los LB de la
8, 2001.
apoptosis, contribuyendo en conjunto con el
antígeno a la selección de los linfocitos B.
Taub, D.D., “Chemokine-leukocyte interactions.
La información presentada en este capítulo
The voodoo that they do so well”, Cytokine Growth
muestra claramente la importancia de la
factor Rev. 7(4): 355-76, 1996.
participación de los receptores de adhesión en los
diferentes mecanismos y procesos involucrados en
Worthylake, R.A., Burridge, K., “Leukocyte
la respuesta inmune tanto normal como patológica.
transendothelial migration: orchestrating the un-
Es evidente que estos múltiples receptores y
derlying molecular machinary”, Curr Opin Cell
ligandos proporcionan señales que controlan,
Biol 13(5):569-577, 2001.
conjuntamente con los receptores específicos para
el antígeno, la especificidad, la iniciación y la
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Capítulo 13
ONTOGENIA Y DIFERENCIACIÓN
DE CÉLULAS B Y T
Rodrigo Naves P. y Mario Rosemblatt S.
1. Introducción
2. Regulación génica de la diferencia-
ción linfocitaria
3. Diferenciación y maduración de
linfocitos B
3.1. Etapa antígeno-independiente
3.2. Etapa antígeno-dependiente
4. Diferenciación y maduración de
linfocitos T
4.1. Migración de los precursores de
linfocitos T
4.2. Diferenciación
4.3. Selección tímica
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RESUMEN
La producción de células B o T maduras y funcionales involucra la conversión de una

célula troncal pluripotente, cuyo fenotipo está fundamentalmente definido por la expresión de la
molécula CD34, en una célula comprometida con uno de varios linajes. Este proceso está some-
tido a un estricto programa de regulación génica en el cual diversos genes son activados o repri-
midos mediante la acción concertada de factores de transcripción. Involucra también la diferen-
ciación y proliferación de estas células en un microambiente apropiado. Los precursores linfoides
más inmaduros no están plenamente identificados, aunque existe una serie de marcadores que
han permitido adjudicar un cierto fenotipo a este precursor. La evidencia experimental indica que
existiría una célula progenitora linfoide común para linfocitos B y T. Las señales de prolifera-
ción y diferenciación para cada tipo celular estarían dadas por el microambiente particular -
interacciones celulares y los factores solubles- en el cual madura cada uno de estos tipos celula-
res, el timo para las células T, y la médula ósea y los órganos linfoides secundarios (OLS) para las
células B. Aunque aún se desconoce muchas de estas señales.
En la diferenciación de los linfocitos B encontramos una etapa antígeno independiente que
ocurre en la médula ósea y una etapa antígeno dependiente que ocurre fundamentalmente en los
OLS. Los linfocitos B que emigran de la médula ósea (linfocitos B virgen) expresan simultánea-
mente receptor para antígeno tipo IgM e IgD. Luego de su encuentro y selección por el antígeno
en los OLS los linfocitos B sufren un cambio de clase de inmunoglobulinas y, a través de un
proceso de mutaciones, un aumento en su afinidad por el antígeno. Estos cambios de afinidad se
llevan a cabo con una mantención fiel de la especificidad por el antígeno. Los procesos de dife-
renciación tanto en la médula ósea como en los centros germinales de los OLS están regulados
por las interacciones celulares y por citoquinas producidas localmente.
La producción de linfocitos T maduros ocurre fundamentalmente en el timo. Los progeni-
tores hematopoyéticos generados en la médula ósea migran al timo donde pasan por un activo
proceso de diferenciación y proliferación. Los precursores T que llegan al timo no muestran
ninguno de los marcadores típicos de los linfocitos T maduros, son CD4-CD8- (dobles negati-
vos) y TCR-. A partir de estas células se producen timocitos dobles positivos (CD4+CD8+) que
expresan a su vez el TCR maduro. Finalmente estas células dobles positivas terminan generando
la población madura de linfocitos circulantes T "helper" (LTh) CD4+ y linfocitos T citotóxicos
(TLc) CD8+. Los timocitos dobles positivos pasan por una doble selección antes de transformar-
se en simples positivos y salir a la circulación; una selección positiva que permite generar linfocitos
T maduros que reconocen antígeno en función de su propio MHC (eliminándose los linfocitos T
que no reconocen a su propio MHC) y una selección negativa que elimina los linfocitos T
autorreactivos (que reconocen antígenos propios).
1. INTRODUCCIÓN En este capítulo es abordarán los principales me-

canismos que llevan a la maduración de los
Los estudios de los procesos de diferencia- linfocitos hacia células efectoras capaces de mon-
ción de linfocitos B y T han sido, tal vez, una de tar una respuesta inmune adaptable afectiva y se
las áreas más estudiadas de la inmunología en la discutirá a nivel celular y molecular cómo esta
última década. Aunque esta área no ha estado li- respuesta llega a ser eficaz contra patógenos, evi-
bre de controversias y muchas de las cuales aún tando el reconocimiento de los antígenos propios.
persisten, sus resultados han sido espectaculares Los mecanismos de diferenciación deben asegu-
y han sentado las bases de numerosos procesos en rar que el repertorio, tanto de linfocitos B como T
otras facetas de la biología celular y molecular. se genere en forma continua de manera de poder
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reconocer los antígenos foráneos manteniendo la Diversas evidencias han demostrado que la
eficacia de la respuesta inmune. Estos mecanismos activación del programa de expresión génica es-
llevan en última instancia a la expresión, en la su- pecífica de las células B en el siguiente estado de
perficie de los linfocitos, de receptores específicos diferenciación (pre-pro-B) está controlado por la
para antígeno y de moléculas co-estimuladoras que acción coordinada y cooperativa de los factores
aseguran la respuesta inmune. Por otro lado, mu- de transcripción codificados por el gen E2A (E12
chos de estos linfocitos se transforman en células y E47) y por el factor de células B temprano EBF.
de memoria que persisten durante largo tiempo. En Estos factores regulan la expresión y el rearreglo
este capítulo se discutirán estos mecanismos y se de los genes de IgH e Igk y son requeridos para la
definirán las etapas que llevan a la generación de adecuada expresión de los genes activadores de
células inmunocompetentes. las enzimas de recombinación (Rags). Dentro de
los genes regulados por E2A y EBF se encuentra
el gen que codifica para el factor transcripcional
2. REGULACIÓN GÉNICA DE LA DIFE- Pax-5 el cual actúa en el siguiente estado de dife-
RENCIACIÓN LINFOCITARIA renciación conocido como pro-B. Se ha observa-
do que células pro-B impedidas de expresar Pax-
La maduración de linfocitos implica la pro- 5 presentan un fenotipo de células comprometi-
gresión secuencial de una célula troncal das en el linaje de células B pero continúan ex-
pluripotente a través de estados intermedios de presando varios genes relacionados con otros li-
diferenciación para llegar finalmente a una célula najes celulares. Este resultado sumado al hecho
absolutamente funcional. Se ha observado que las de que Pax-5 puede actuar como un activador
células progenitoras troncales expresan bajos ni- transcripcional cuando es expresado en bajas con-
veles de los genes específicos de los diferentes centraciones y como un represor a altas concen-
linajes celulares que ellas son capaces de originar. traciones, han llevado a proponer que la induc-
Esto ha llevado a proponer que una vez que la cé- ción de expresión de Pax-5 llevaría a la represión
lula troncal se compromete en la diferenciación de los genes asociados con los otros linajes celu-
de un linaje celular particular ocurriría la consoli- lares.
dación de la expresión génica específica de ese En el caso de la maduración de los linfocitos
linaje y la represión de los genes que participan T una serie de decisiones deben ser tomadas a lo
en la diferenciación de los restantes linajes. largo del proceso de diferenciación. En primer lu-
En base a estudios de expresión génica dife- gar la célula progenitora linfoide puede seguir por
rencial y al análisis de ratones deficientes en la ex- la vía de maduración que conduce hacia el linaje
presión de genes específicos se ha podido establecer de las células B o T. Luego, el linfocito T puede
la participación jerárquica y combinatorial de nue- diferenciarse en células que expresan un TCRαβ
vos factores de transcripción implicados en la dife- o un TCRγδ y después, en el caso de los linfocitos
renciación de los estados más tempranos de las célu- TCRαβ, la elección debe ser tomada entre seguir
las linfoides (figura 13-1). Por ejemplo, los factores hacia el linaje CD4+ o CD8+. Señales proporcio-
de transcripción PU.1 e Ikaros participan en la dife- nadas a través del pre-TCR, el TCR, factores so-
renciación de la célula troncal hematopoyética al lubles e interacciones celulares son determinan-
estado de célula progenitora linfoide. PU.1 partici- tes en el destino final de los linfocitos T en la di-
pa en la regulación de la expresión del receptor de ferenciación. Al igual que en la maduración de las
IL-7 que es requerido en la etapa de proliferación de células B, el programa de diferenciación de las
la célula progenitora linfoide. Ratones deficientes células T está sometido a un estricto control
en la expresión de PU.1 mueren a las pocas horas o transcripcional. Entre los factores de transcripción
días de haber nacido y exhiben ausencia de células que participan en estos procesos, las proteínas
linfoides y mieloides lo que pone de manifiesto su Notch cumplen un destacado papel de regulación.
importancia en la generación de una célula Las proteínas Notch corresponden a una familia
progenitora común para ambos linajes. Por su parte, de receptores de transmembrana que regulan pro-
Ikaros es capaz de interactuar con los factores de cesos de diferenciación neuronal y epidermal.
transcripción Aiolos y Helios y participa en la espe- Trabajos publicados recientemente han mostrado
cificación, diferenciación y homeostasis linfocitaria. que la inactivación inducible del gen Notch-1 en
Un defecto en la expresión de Ikaros impide el desa- ratones recién nacidos o en células troncales de
rrollo de células precursoras tempranas. médula ósea conducen a un bloqueo temprano del
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Figura 13-1. Regulación transcripcional de la diferenciación linfocitaria. La diferenciación de una célula troncal hematopoyética
en una célula progenitora linfoide o en una célula progenitora mieloide es capaz de dar origen a todas las células sanguíneas
maduras. La activación de los factores de transcripción Ikaros y PU.1 es clave en la etapa de diferenciación hacía una CPL. La
posterior maduración de esta célula en un linfocito B o T dependerá de la acción concertada de otros factores transcripcionales, los
cuales activarán o reprimirán la actividad de diversos genes involucrados en el programa de diferenciación específico de cada
linaje celular. Algunos de ellos, tales como Ikaros, E2A (E47 y E12) y Notch participan en varias etapas de la maduración de
linfocitos B y T. Abreviaturas utilizadas: DN, doble negativo; DP, doble positivo; SP, simple positivo; PGM, progenitor granulocito/
macrófago; PME, progenitor megacariocito/eritrocito.
proceso de diferenciación de las células T sin afec- ciación del linaje de células mieloides no fue afec-
tar el desarrollo de los linfocitos B o de algún otro tada. A nivel molecular, se ha mostrado que la vía
linaje hematopoyético. La observación más inte- de transducción de señales de Notch es capaz de
resante fue que las células del timo de estos rato- interferir con la actividad de la proteína E47 codi-
nes expresaban marcadores del linaje de células ficada por el gen E2A lo que explicaría la repre-
B y que fenotípicamente se asemejaban a células sión del programa de diferenciación de las células
B inmaduras. Por otro lado, estudios complemen- B. También hay evidencias que muestran que
tarios mostraron que ratones irradiados trasplan- Notch-1 participaría en la determinación del lina-
tados con células troncales de médula ósea, que je de linfocitos T que expresan un TCRαβ o un
expresan constitutivamente la forma activa de TCRγδ, así como también en la diferenciación
Notch-1 (dominio intracelular) dieron origen a una hacia CD4+ versus CD8+. Todos estos resulta-
población de células que expresaron marcadores dos demuestran que Notch es esencial en la deter-
del linaje de células T. Lo destacado de este ex- minación del destino de las células T. Ya que se
perimento es que el desarrollo de los linfocitos T ha encontrado que el ligando de Notch está pre-
se llevó a cabo en la médula ósea, independiente sente tanto en la médula ósea como en el timo. La
de la influencia del ambiente tímico y que la dife- pregunta que aún queda por responder es cómo se
renciación de las células B fue abortado en el tem- controla la vía de transducción de señales de Notch
prano estado pre-pro-B. Sin embargo, la diferen- para que sólo se active en el timo. La respuesta
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tendría que especular la participación de factores mieloides). Recientemente, se ha identificado una
adicionales específicos de estos ambientes celu- célula progenitora (linfoide) capaz de diferenciarse
lares, que regulan la capacidad de las células específicamente hacia el linaje de las células
progenitoras para responder a los ligandos de linfoides (células B, T y NK). Esta célula
Notch. progenitora linfoide correspondería al estado más
En base a todos los recientes antecedentes temprano de diferenciación linfocitaria, que se
que hemos descrito se ha propuesto un modelo de caracteriza por una alta actividad mitótica. Estu-
diferenciación de células linfoides basado en la dios de mutación génica y el análisis de
actividad diferencial de diversos factores inmunodeficiencias primarias (ver capítulo 30),
transcripcionales (figura 13-1). Según este mohan evidenciado el requerimiento de interleuquina-
delo, en la médula ósea las células progenitoras 7 (IL-7) en esta etapa de alta proliferación. Poste-
linfoides serían refractarias a la estimulación del riormente, y debido a la activación de un progra-
ligando de Notch-l debido a la ausencia de un es- ma genético específico las células progenitoras
tímulo adicional apropiado, lo que las conduciría linfoides son conducidas hacia la diferenciación
a través de la diferenciación de células B. En es- del linaje B. La clasificación de los siguientes
tados tempranos de esta maduración la acción co- estados de diferenciación de las células B está
ordinada de los factores E2A y EBF activaría la definido, principalmente, por el rearreglo de los
expresión del programa de diferenciación génica genes de cadena liviana y pesada de las
de las células B entre los cuales se encuentra Pax- inmunoglobulinas y por la ausencia o presencia
5. A su vez, la sobreexpresión de Pax-5 reprimi- de marcadores de superficie celular. Las células
ría la expresión de los genes específicos de los en el estado pro-B no producen inmunoglobulinas
otros linajes celulares. Por su parte, la célula y se distinguen por la expresión de los marcado-
progenitora linfoide que migra desde la médula res CD19, CD43 y B220. En el siguiente estado
ósea hacia el timo, encontraría en este de diferenciación, denominado pre-B, ocurre la
microambiente las señales necesarias para activar recombinación de los genes V-D-J de las cadenas
la vía de transducción de señales de Notch. A su pesadas de las inmunoglobulinas (ver capítulo 6)
vez, Notch inhibiría la función del factor de trans- y la síntesis y expresión citoplasmática de la ca-
cripción codificado por el gen E2A bloqueando dena pesada (H) µ. Sin embargo, estas células no
así el programa de diferenciación de células B en expresan inmunoglobulinas en su membrana, ya
el timo. que aún no sintetizan la cadena liviana (L), y por
lo tanto son incapaces de reconocer o responder a
antígeno. Posteriormente, algunas de las cadenas
3. DIFERENCIACIÓN Y MADURACIÓN DE H se asocian a una "cadena L de reemplazo", mo-
LINFOCITOS B lécula estructuralmente similar a la cadena L nor-
mal pero que no posee la región variable de ésta.
El proceso de maduración de los linfocitos B La combinación de la cadena H con la cadena L
involucra dos etapas generales claves; una etapa de reemplazo constituyen el receptor de células
antígeno-independiente, que ocurre en la médula pre-B (pre-BCR), el que regularía la síntesis ulte-
ósea y una etapa antígeno-dependiente que ocu- rior de las cadenas L y la consiguiente madura-
rre, fundamentalmente, en los OLS, lugar en el ción de los linfocitos B. En la etapa siguiente de
cual los linfocitos B específicos para un determi- maduración (linfocitos B inmaduros) ocurre la
nado antígeno, toman contacto con éste. recombinación de los genes VJ de las cadenas li-
vianas y por tanto la síntesis de las cadenas livia-
3.1 Etapa antígeno-independiente nas (κ o λ) las cuales se asocian con la cadena
pesada+µ+para generar una molécula de IgM en
En los mamíferos, células troncales hematopo- el citoplasma. Estos linfocitos B no pueden gene-
yéticas pluripotentes provenientes del hígado fe- rar nuevas regiones variables (de cadenas L o H)
tal colonizan la médula ósea reclutadas por la ac- en la médula ósea y se les considera
ción de la quimioquina CXCL12 secretada por las funcionalmente inmaduros. De hecho, su encuen-
células del estroma medular. Estas células tro con antígenos propios puede llevarlos a un es-
troncales tienen la capacidad de renovarse perma- tado anérgico (inactivación funcional) o de muer-
nentemente y de dar origen a la totalidad de las te celular más que a una activación. Sin embargo,
células sanguíneas maduras (linfoides y esta es una importante etapa de selección negativa
266
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de linfocitos B autorreactivos que eventualmente días o semanas. La capacidad del sistema inmune
podrían ocasionar enfermedades autoinmunes. de producir inmunoglobulinas de diferentes
Posteriormente, los linfocitos B son capaces de co- especificidades y combatir infecciones está deter-
expresar moléculas de IgM y de IgD en la mem- minada por la posterior diferenciación de los
brana celular, las cuales pueden actuar como re- linfocitos B virgen en los órganos linfoides secun-
ceptores específicos para antígeno. En esta etapa darios, lugar donde se produce el cambio de clase
los linfocitos adquieren competencia funcional y de inmunoglobulinas y la maduración de la afini-
son denominados células B maduras (figura 13-2). dad. Estos cambios se producen con una fiel man-
Además de la regulación génica mediada por di- tención de la especificidad por antígeno. En este
versos factores de transcripción y de IL-7, se cono- sentido es importante hacer notar dos característi-
ce que proteínas tirosina quinasa de la familia Src y cas importantes del proceso de diferenciación de
ciertos procesos adhesivos entre los linfocitos B en los linfocitos B que aseguran la mantención de la
desarrollo y los elementos del estroma de la médu- especificidad antigénica: (a) la llamada "exclusión
la ósea (ver capítulo 12) actúan como factores alélica" fenómeno que permite que aunque cada
inductores de la diferenciación de células B. individuo heterocigoto recibe dos alelos de los
Los linfocitos B virgen que expresan en su genes para inmunoglobulina (uno de cada padre)
Figura 13-2. Etapas en la maduración de los linfocitos B.
membrana receptores específicos para un deter- sólo uno logra expresarse en cada linfocito y (b)
minado antígeno, salen de la médula ósea y enla denominada "exclusión del isotipo de cadena
tran en la circulación periférica. Estudios in vitro liviana" que regula la expresión de las cadenas L
han mostrado que a partir del estado de células B de manera que cada linfocito B produce ya sea
inmaduras los linfocitos experimentarían una dis- cadenas k o λ pero nunca las dos.
minución en su respuesta a la quimioquina
CXCL12 lo que les permitiría escapar a la acción 3.2 Etapa antígeno-dependiente
reclutadora de este factor y abandonar la médula
ósea. En la periferia, los linfocitos B vírgenes En las etapas siguientes de la diferenciación
migran a los órganos linfoides secundarios donde de los linfocitos B participan como elementos cen-
completarán su proceso de diferenciación. Estas trales el antígeno y los linfocito T de ayuda (Th).
células B virgen expresan, simultáneamente, IgM Ciertos antígenos, fundamentalmente antígenos no
e IgD de la misma especificidad en su membrana proteicos tales como los polisacáridos y lípidos, no
y de no encontrar antígeno mueren en unos pocos requieren de la ayuda de los LTR. Estos antígenos,
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Sin título-2 267 5/26/06, 10:26 AM

son llamados Timo-independientes. Por otro lado, Los linfocitos B (al igual que los linfocitos
los linfocitos B que reconocen antígenos Timo- T) entran al ganglio a través del epitelio columnar
dependientes sí requieren de la colaboración de que tapiza las vénulas post capilares de los OLS
los linfocitos Th. Estos antígenos son encontra- (ver capítulo 12) donde entran en contacto breve
dos por los linfocitos en los diferentes OLS: en el con los linfocitos T de ayuda, migrando posterior-
bazo para los antígenos introducidos por la vía mente a los folículos linfoides para formar allí,
sanguínea, en los ganglios para los antígenos co- luego de un proceso de diferenciación y de una
lectados por la linfa, en las Placas de Peyer y teji- activa proliferación, los CG. En el folículo, los
do mucoso para antígenos ingeridos o inhalados y linfocitos B entran en contacto con las CFD. Es-
en la piel. Es así que la respuesta humoral a tas células están especializadas en retener y pre-
antígenos T-dependientes propiamente tal comien- sentar al linfocito B, antígeno sin procesar y en
za en las zonas T de los OLS donde los linfocitos forma nativa (formando un complejo con el anti-
B antígeno-específico toman contacto con los LTh cuerpo, conocido como icosoma). Esta interacción
capaces de reconocer el mismo antígeno. Los involucra, además del antígeno y el respectivo re-
linfocitos B migran posteriormente a los folículos ceptor (IgM/IgD) por parte del linfocito B, una
donde entran en contacto con elementos celulares serie de moléculas de adhesión y sus respectivos
del estroma llegando a formar los Centros ligandos. Estas interacciones tienen como resul-
Germinales (CG), zona de alta proliferación celu- tado la producción de citoquinas que inducen en
lar. Los linfocitos B de los CG presentan una muy el linfocito B nuevos procesos de diferenciación
baja expresión de la proteína anti-apoptótica Bcl- con cambios en la clase de inmunoglobulina y
2, de manera que aquellos linfocitos B que no son activa proliferación. Como resultado de estos cam-
rescatados por las Células Foliculares Dendríticas bios se generan los CG, los cuales poseen una es-
(CFD) a través de antígeno y de otras interacciones tructura fina que contiene una zona oscura de
adhesivas mueren, pasando a otro compartimento centroblastos en activa proliferación y una zona
donde son destruidos por los macrófagos de cuer- clara que contiene los llamados centrocitos, célu-
pos tangibles que se encuentran en gran número las no proliferantes. Esta zona clara contiene ade-
en la zona B de los OLS. más la más alta densidad de CFD y una pequeña
Con el fin de revisar estas etapas del desa- proporción de linfocitos T, probablemente
rrollo del linfocito B un poco más en detalle se antígeno-específicos. Es en estos CG donde se
considerará los eventos que ocurren en un gan- generan los linfocitos B de memoria y donde ocu-
glio linfático como ejemplo de los mecanismos rren las hipermutaciones de las regiones V de las
que llevan a la diferenciación final y a la prolife- inmunoglubulinas. Estas mutaciones son consi-
ración de los linfocitos B maduros (figura 13-3). deradas necesarias para la llamada maduración de
Figura 13-3. Etapas que marcan el desarrollo final de los linfocitos B en un ganglio linfático periférico.
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Sin título-2 268 5/26/06, 10:26 AM

la afinidad de los anticuerpos séricos las cuales procesos deben generar un repertorio de linfocitos
pueden llevar a cambios de afinidad pero tam- T maduros que cumpla dos requisitos fundamen-
bién a cambios de especificidad. Los procesos tales: primero que reconozca antígeno en función
que regulan este fenómeno deben asegurar la se- del propio MHC (restricción MHC) y segundo que
lección de los mutantes de alta afinidad y la eli- estos linfocitos T no reconozcan antígenos pro-
minación de los mutantes de baja afinidad así como pios (tolerancia).
también de los linfocitos B autorreactivos que
pudieran resultar del proceso de hipermutaciones. 4.1. Migración de los precursores de linfocitos T
La maduración de la respuesta inmune humoral
favorece el aumento de la afinidad, ya que aque- Se desconoce la naturaleza exacta de la célu-
llos linfocitos cuya afinidad disminuye a causa de la precursora que da origen a los linfocitos T. En
las mutaciones, deberán competir por antígeno, humanos, una putativa célula precursora de la lí-
presentado en la superficie de las CFD, con aque- nea T ha sido identificada en base a la expresión
llos de más alta afinidad. de la molécula de superficie CD34. Esta molécu-
Las señales y mecanismos que median los la se expresa en las células troncales pluripotentes
procesos finales de migración, de diferenciación, de la médula ósea que dan origen no sólo a los
de proliferación y de mutación de los linfocitos B linfocitos T sino que también a los linfocitos B, a
dentro del CG son en gran parte desconocidos, las células dendríticas y a células endoteliales de
aunque los indicios experimentales involucran cla- la vasculatura. Estas células CD34+ de la médula
ramente la participación de moléculas de adhe- ósea (o del hígado fetal) se transforman, al ser
sión y citoquinas. Por ejemplo, la administración colocadas en un microambiente tímico en cultivo,
in vivo de anticuerpos capaces de bloquear la en linfocitos T, desconociéndose sin embargo los
interacción entre CD40 con su ligando CD40L o mecanismos que llevarían a los progenitores T de
entre las moléculas coestimulatorias CD28 (B7) la médula ósea a migrar al timo in vivo. Se postu-
con CTLA-4 bloquean las reacciones de los CG. la, sin embargo, que estos precursores expresa-
Mucho queda por investigar en esta importante rían en su superficie receptores de adhesión que
área de la respuesta inmune humoral, especialmen- se ligarían selectivamente al endotelio tímico per-
te en lo que respecta al posible papel de las mitiendo su entrada al interior del órgano. Uno
citoquinas en las etapas finales de diferenciación de estos receptores podría ser la misma molécula
y proliferación. Hasta ahora, tanto IL-2 como IL- CD34 ya que existen evidencias que esta molécu-
10 han sido involucradas en la ayuda proporcio- la interactuaría con la L-Selectina, una molécula
nada por los linfocitos T y en la "decisión" final de adhesión presente en los linfocitos.
de los linfocitos B de tomar el camino de un linfo- Una vez en el timo los precursores de los
cito B de memoria o de una célula plasmática pro- linfocitos T mantienen una alta capacidad
ductora de anticuerpos. proliferativa. Alrededor de 1 a 10 células precur-
soras pueden repoblar un timo al ser implantadas
en éste y estudios in vitro han demostrado que una
4. DIFERENCIACIÓN Y MADURACIÓN sola célula progenitora es capaz de generar alre-
DE LINFOCITOS T dedor de 105 linfocitos T maduros en un período
de 10 a 15 días, con TCRs de una amplia gama de
Es generalmente aceptado que los linfocitos especificidades distintas. Por otro lado, estudios
T se originan en la médula ósea a partir de un pre- efectuados con timos irradiados han demostrado
cursor capaz de migrar al timo, el principal órga- que a pesar de la alta capacidad de división de los
no donde se lleva a cabo la diferenciación de los precursores, éstos, una vez en el timo pierden su
linfocitos T. Este proceso de maduración de los capacidad de autorrenovación, y deben ser cons-
linfocitos T en el timo (denominados timocitos en tantemente reemplazados por nuevas células
oposición a los linfocitos T maduros que se en- progenitoras a partir de la médula ósea.
cuentran en circulación), y la generación del re-
pertorio de receptores de LT puede dividirse en 4.2. Diferenciación
tres etapas íntimamente relacionadas: (a) la mi-
gración de los progenitores de la médula ósea al Los estudios de la ontogenia y diferenciación
timo, (b) la diferenciación de estas células de los linfocitos T se han realizado fundamental-
progenitoras y (c) un proceso de selección. Estos mente usando como modelo el ratón. En este ani-
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Sin título-2 269 5/26/06, 10:26 AM

mal, los primeros precursores T se detectan en el ción durante el proceso de diferenciación, de aque-
timo en el día 11 de gestación (correspondiente llos clones de linfocitos T autorreactivos capaces
aproximadamente a la semana 7-8 en humanos) de reconocer antígenos propios.
ubicándose en la zona cortical de éste. A medida Las primeras células del linaje T que apare-
que los timocitos migran hacia zonas más inter- cen en el timo se detectan en la corteza tímica ex-
nas de la corteza éstos van avanzando en su pro- terna y no expresan los marcadores CD4, CD8,
ceso de diferenciación. En estados finales de TCR ni CD3, un marcador común de células T.
maduración los linfocitos T pasan desde la corte- Este estado de maduración es conocido como pro-
za hacia la médula y finalmente salen del timo a T y los timocitos son denominados dobles negati-
la periferia a través de las vías linfáticas o venas. vos. Estas células, que representan aproximada-
El ambiente tímico representado por las mente el 5% de los timocitos expresan CD44 (una
interacciones físicas que se establecen entre los glicoproteína adhesiva de membrana), Thy-1 (en
timocitos y los diferentes tipos celulares que allí el ratón) y HSA (antígeno estable al calor). En
se encuentran (células epiteliales, dendríticas y este momento de la diferenciación (día 13 a 14 de
macrófagos) y los factores solubles que son libe- gestación), los genes del TCR se encuentran aún
rados al medio externo son claves en los procesos en la configuración germinal. En el siguiente es-
de maduración y selección. Una serie de trabajos tado de maduración conocido como pre-T, se ini-
sugieren que el patrón diferencial de expresión de cia la recombinación y expresión de los genes de
ciertas quimioquinas y de sus receptores, en parti- la cadena β del TCR (día 15 de gestación) la cual
cular CXCL12, CCL17, CCL19, CCL21, CCL22 se asocia con una proteína invariante llamada pTα
y CCL25, estaría relacionado con la migración de y con las proteínas del complejo CD3
los timocitos a través de los diferentes (γ,+δ,+ε+ψ,+ζ) para dar origen al receptor de cé-
subcompartimentos tímicos. Entre las diferentes lulas pre-T o pre-TCR. Este complejo proteico es
citoquinas que las células estromales tímicas capaz de transducir señales a través de la vía de
secretan, se ha identificado a IL-7 como un proteínas tirosina quinasa Src y su actividad es
modulador directo de la sobrevida, diferenciación, esencial para la continuación hacia los posterio-
transcripción y rearreglo génico del TCR. Ade- res estados de maduración. Aproximadamente, el
más, la diferenciación de linfocitos T está someti- 80% de estas células dobles negativas pasan por
da a un estricto control de expresión génica me- una etapa en la cual expresan transitoriamente la
diada por factores transcripcionales tales como molécula CD8 (y el HSA) para dar origen, poste-
GATA-3, E12, E47, HEB, NF-kB, Ikaros y Notch. riormente, a un precursor CD4+ CD8+ doble po-
Dos marcadores de superficie presentes en sitivo (ver figura 13-3). Estas células dobles po-
las células T han sido de gran utilidad en propor- sitivas se encuentran en una etapa activa de
cionar información sobre los procesos de diferen- rearreglo de los genes que codifican para la cade-
ciación de los linfocitos T, éstos son las molécu- na α del receptor de las células T sin que logre
las CD4 y CD8. En base a la expresión de estos detectarse expresión del TCR en el citoplasma o
dos marcadores, la población de linfocitos T en en la membrana (día 17 de gestación). Los pri-
un individuo adulto puede ser dividida en cuatro meros rearreglos génicos y la aparición del TCRαβ
grupos: los linfocitos T dobles negativos (CD4- completo ocurren en forma coordinada con la ex-
CD8-), los dobles positivos (CD4+ CD8+) que re- presión de los otros marcadores del linaje T, esto
presentan poblaciones más o menos inmaduras de es CD4, CD8 y CD3 (ver más adelante). En este
linfocitos T y los simples positivos (CD4+ CD8- estado de células dobles positivas el TCR es com-
y CD4- CD8+) que corresponden a las poblacio- pletamente funcional y puede responder a antígeno
nes más maduras de linfocitos T. En los estudios lo que permite que los linfocitos sean sometidos a
de los procesos y mecanismos que conducen a la los eventos de selección positiva y negativa. El
formación de la población de linfocitos T madu- 20% restante de las células dobles negativas pro-
ros, los principales esfuerzos han estado dirigidos bablemente nunca expresan CD4 o CD8 pero sí
a definir los mecanismos que llevan a la genera- expresan un TCR con las cadenas γδ. Estas célu-
ción, a partir de un precursor único, de las dos las son los primeros linfocitos T que maduran en
principales subpoblaciones de linfocitos T madu- el timo y representan células que se diferencia-
ros, los linfocitos Th que presentan el fenotipo rían por una vía independiente de los linfocitos T
CD4+ CD8- y los linfocitos T citotóxicos (Tc) cuyo αβ. Aunque las células γδ expresan un TCR fun-
fenotipo es CD4- CD8+, y a explicar la elimina- cional 2 días antes que las células αβ la expresión
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de las cadenas αβ rápidamente sobrepasa la ex- gida por MHC (Selección Positiva). Estos eventos
presión de γδ de manera que al momento del naci- de selección, que llevan a la producción de linfocitos
miento los ratones tienen un repertorio de T "efectivos" ocurren en el timo luego de la expre-
linfocitos T con un 90% de células cuyo TCR es sión del TCR, CD4 y CD8 y antes que estas células
fundamentalmente del tipo αβ. Posteriormente, salgan a la periferia (figura 13-3).
los timocitos migran hacia la región tímica
medular donde se diferenciarán en dos poblacio- a) Selección Positiva. En este proceso el
nes distintas de células simples positivas; los LTh microambiente tímico, elemento central en la lla-
con fenotipo CD4+ CD8- (restringidos por MHC mada educación tímica, interacciona con los
clase II) y los LTc con un fenotipo CD4- CD8+ timocitos en desarrollo de manera de permitir la
(restringidos por MHC clase I). Estos dos tipos sobrevida sólo de aquellas células que expongan
celulares expresan en su membrana altos niveles en su superficie un TCR capaz de interaccionar
de TCRαβ y son células totalmente competentes con un péptido presentado por su propio MHC (fi-
capaces de migrar fuera del timo. El curso tem- gura 13-4). De esta manera aquellos linfocitos T
poral del proceso de maduración de los linfocitos que no presenten afinidad por su propio MHC
T se muestra en la figura 13-3. mueren en el timo. En esta etapa de selección
todos aquellos linfocitos T que por azar en el
4.3. Selección tímica reordenamiento de sus genes del TCR generaron
un receptor que no está restringido por el MHC
En el timo ocurren dos importantes eventos de propio son eliminados, ya que, posteriormente,
selección que son centrales en la generación del re- ellos serán incapaces de interactuar con las célu-
pertorio de linfocitos T maduros circulantes. Uno las presentadoras de antígeno (CPA) y reconocer
de estos procesos permite la generación de antígeno. Dado que los linfocitos T no sufren el
autotolerancia eliminando o silenciando aquellos proceso de hipermutación somática que les per-
linfocitos T que poseen una alta afinidad por mita cambiar la afinidad o especificidad antigénica
antígenos propios (Selección Negativa). El otro pro- de su receptor, como ocurre con los linfocitos B,
ceso de selección deriva en la generación de linfocitos el proceso de selección positiva permite asegurar
T maduros con un TCR capaz de reconocer el MHC la mantención de una población de linfocitos T
(Complejo Principal de Histocompatibilidad) pro- cuyos TCR pueden actuar en forma efectiva du-
pio asegurando que la respuesta inmune sea restrin- rante la respuesta inmune.
Figura 13-4. Selección positiva y negativa. Etapas en la diferenciación de los linfocitos T en el timo
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Utilizando como modelo ratones transgénicos b) Selección Negativa. El proceso de Selección
para un TCR que reconoce a antígeno en el con- Positiva recientemente descrito, genera una po-
texto de determinados MHC de clase I y de clase blación de linfocitos T cuya única restricción es
II, se determinó la presencia de linfocitos T en la la de reconocer antígeno en función de su propio
periferia solamente si el ratón expresaba el MHC MHC. Es concebible entonces que dentro de esta
homólogo con aquel reconocido por el TCR población existan clones de linfocitos T capaces
transgénico. Estos experimentos, conjuntamente de reconocer antígeno propios generados y pre-
con otros de la misma índole, lograron clarificar sentados en el estroma tímico. Esto resultaría en
el papel central del haplotipo de las células de la un importante número de linfocitos T capaces de
corteza tímica en la selección positiva de los generar autoinmunidad. Sin embargo, esto no es
linfocitos T. Estos experimentos lograron demos- la situación normal sino más bien la excepción.
trar también que la mayoría de los timocitos pro- Actualmente se sabe que la autotolerancia, es de-
ducidos en el timo no son capaces de reconocer cir la incapacidad del sistema inmune de reaccio-
antígeno en el contexto del MHC apropiado, no nar contra antígenos propios se debe principalmen-
logran su estado final de maduración, y son elimi- te (aunque no únicamente) a la eliminación o
nados por apoptosis. Pero no sólo el haplotipo silenciamiento, durante la diferenciación de las
MHC de las células de la corteza tímica juega un células T en el timo, de los clones autorreactivos.
papel importante en la selección positiva, el Este proceso de deleción física o de eliminación
péptido contenido en el bolsillo del MHC tam- funcional (anergia) de clones autorreactivos en el
bién participa como elemento de selección. Ex- timo se conoce como Selección Negativa. Este
perimentos de mutación de la molécula de MHC proceso funciona de tal forma que solamente aque-
que alteran la unión del péptido al bolsillo redu- llos linfocitos T que posean un TCR capaz de re-
cen en forma significativa la selección positiva. conocer un péptido extraño presentado por un
Los resultados de éstos y otros experimentos in- MHC propio serán finalmente seleccionados para
dican que existen ciertas combinaciones de salir a la periferia como linfocito T maduro. La
péptido-MHC particularmente efectivas en la se- eliminación de los clones T autorreactivos ocurre
lección positiva, probablemente debido a un re- en la etapa en la cual los timocitos
conocimiento directo del péptido por el TCR. La CD4+CD8+TCR+ se unen a un péptido propio
evidencia experimental parece indicar entonces presentado por moléculas MHC propios de las
que la gran mayoría de los timocitos CD4+ CD8+ células dendríticas presentes en el timo. La elimi-
sufren un proceso de muerte programada en el timo nación de los timocitos autorreactivos ocurre
y que la selección positiva los rescataría de la aparentemente por mecanismos de muerte celular
apoptosis. Este rescate estaría mediado por seña- programada causada, en este caso, por la activa-
les generadas por el TCR al enganchar al MHC ción de los timocitos provocada por los
del haplotipo correcto y que contiene a su vez un autoantígenos. La evidencia experimental indica
complemento de péptidos adecuados. que las señales intracelulares que se generan a tra-
Resultados experimentales demuestran ade- vés del TCR en un linfocito inmaduro en el timo
más que la generación, a partir de los timocitos serían diferentes de las generadas en un linfocito
CD4+ CD8+ (dobles positivos), de los linfocitos T maduro, de manera tal que en un caso causan
T simples positivos, (CD4+CD8- o CD4-CD8+), apoptosis mientras que en el otro causarían acti-
sería un proceso al azar a través del cual un vación y generación de una respuesta inmune.
timocito perdería en forma estocástica la expre-
sión de uno u otro co-receptor (CD4 o CD8) sin
la influencia de la especificidad del TCR. En LECTURAS SUGERIDAS
otras palabras, si por azar un timocito termina
con una combinación apropiada de CD4 y TCR Akashi, K.; Reya, T.; Dalma-Weiszhausz, D. and
restringido por el MHC clase II entonces ese Weissman, I.L., “Lymphoid precursors”, Curr.
timocito será estimulado y rescatado de la Opin. Immunol. 12: 144-150, 2000.
apoptosis mediante la selección positiva. Igual-
mente un timocito que por azar terminó con la
Ansel, K.M. and Cyster, J.G., “Chemokines in
molécula CD8 en su superficie, será rescatado si
lymphopoiesis and lymphoid organ development”,
tiene la combinación apropiada de TCR restrin-
gido por MHC de clase I.
272
Sin título-2 272 5/26/06, 10:26 AM

Busslinger, M.; Nutt, S.L. and Rolink, A.G.,
“Lineage commitment in lymphopoiesis”, Curr.
Opin. Immunol. 12: 151-158, 2000.
Deftos, M., and Bevan, M., “Notch signaling in T

cell development”, Curr. Opin. Immunol. 12: 166-
172, 2000.
Kee, B.L. and Murre, C., “Transcriptional factor

regulation of B lineage commitment”, Curr. Opin.
Immunol. 13: 180-185, 2001.
Osborne, B., “Transcriptional control of T cell

development”, Curr. Opin. Immunol. 12: 301-306,
2000.
273
Sin título-2 273 5/26/06, 10:26 AM

274
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Capítulo 14
REGULACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE
Ulises Vergara C., Claudio Zúñiga M. e Iván Palomo G.
1. Introducción
2. Regulación de la respuesta inespe-
cífica
3. Regulación de la respuesta inmune
específica
3.1. Mecanismos inmunológicos y no
inmunológicos de regulación
3.2. Deleción y anergia clonal. Tole-
rancia inmunológica
3.3. Activación de linfocitos T supre-
sores
3.4. Regulación mediante linfocitos
Th1 y Th2
3.5. Regulación idiotípica o red
idiotipo-anti-idiotipo
3.6. Regulación "feedback" por anti-
cuerpos y complejos inmunes
3.7. Regulación por Prostaglandinas
3.7.1. Prostaglandina E2 (PGE2).
3.7.2. Prostaglandina 15-d PGJ2
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RESUMEN
El repertorio linfocitario disponible para la activación por distintos antígenos, la

autotolerancia y el desarrollo de una respuesta inmune específica, están controlados por diversos
mecanismos de regulación tanto inmunológicos como no inmunológicos. Los mecanismos no
inmunológicos de regulación implican relaciones recíprocas entre el eje hipotálamo-hipófisis-
adrenal (HHA) y citoquinas inflamatorias como IL-1, IL-6 y TNFα. Citoquinas, hormonas como
ACTH, prolactina, progesterona y hormonas tiroideas, neurotransmisores como acetilcolina,
catecolaminas y endorfinas y mediadores biológicos como histamina, serotonina y bradiquinina,
parecen integrados en un poderoso circuito inmunorregulador o red inmuno-neuro-endocrina.
Los mecanismos inmunológicos de regulación del sistema inmune implican la disponibili-
dad del antígeno mismo, la interacción entre distintas células inmunocompetentes, la activación
de diversas subpoblaciones linfocitarias con liberación de una combinación particular de media-
dores solubles como citoquinas, leucotrienos y prostaglandinas, la regulación idiotípica (red
idiotipo-anti-idiotipo) y la regulación o "feedback" por anticuerpos y complejos inmunes. Estos
mecanismos inmunológicos de regulación del sistema inmune pueden operar tanto a nivel cen-
tral como periférico y pueden controlar la recirculación y "homing" de las distintas subpoblaciones
linfocitarias, el procesamiento y la presentación de antígenos y la activación, proliferación y
diferenciación de las distintas células inmunocompetentes.
1. INTRODUCCIÓN inespecíficos de protección como el sistema del

complemento y la actividad fagocítica y
La respuesta inmune es esencialmente destructiva de neutrófilos y macrófagos. La estra-
destructiva y orientada a la neutralización y eli- tegia de la respuesta inmune inespecífica, a dife-
minación, tanto de agentes infecciosos y de célu- rencia de la respuesta adquirida, no es reconocer
las y moléculas extrañas, como detritus y produc- un gran número de epítopos sino más bien unas
tos moleculares de células propias y de células pocas moléculas PAMP ("Pathogen-Associated
envejecidas, transformadas o tumorales. Esto im- Molecular Patterns"), altamente conservadas y
plica, necesariamente, la existencia de un sofisti- compartidas por un gran número de
cado mecanismo de regulación que permita res- microorganismos. Estos patrones moleculares son
ponder, agresivamente, contra lo extraño, al tiem- reconocidos por receptores PRR ("Pattern-
po que se acepta, tolera o no se reacciona contra Recognition Receptor") expresados en distintas
las células propias, que estén envejecidas, altera- células del Sistema Innato. Los ejemplos más co-
das o transformadas y expresen marcadores nocidos de PAMPs son lipopolisacáridos (LPS),
ACAMP (“Apoptosis Cell Associated Molecular péptidoglicanos, ácido lipoteicoico, mananos,
Pattern”). DNA bacteriano y RNA de doble hebra. La ma-
En el presente capítulo se describen distintos yoría de estas moléculas son expresadas sólo por
mecanismos de regulación tanto de la respuesta in- microorganismos, lo que implica una muy baja
mune inespecífica como de la respuesta específica. probabilidad de respuesta autoinmune por reac-
ción cruzada con patrones moleculares de los
agentes infecciosos. El reconocimiento de molé-
2. REGULACIÓN DE LA RESPUESTA culas PAMPs por receptores PRR en las células
INESPECÍFICA del hospedero, inducirán cambios que serán muy
importantes en el desarrollo tanto de la respuesta
Además de las barreras físicas a la infección, innata como de la respuesta adquirida. Así,
los individuos están provistos de mecanismos macrófagos activados iniciarán la síntesis de las
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llamadas “citoquinas de alarma” (IL-1, IL-6, IL- • Carboxipeptidasa N que actúa como inhibidor
12, TNF), la producción de interferones (IFN) -α de las anafilotoxinas C3a, C4a y C5a.
y -β, con la consiguiente inhibición de la • Inhibidores del complejo de ataque a la mem-
replicación viral y la activación de células NK. brana ("Membrane Attack Complex") como
La activación de hepatocitos por IL-6 inducirá la la proteína S o vitronectina, SP40, el factor
síntesis de proteínas de fase aguda PCR y MBP de restricción homólogo (HRF) y CD59 o
(Proteína C Reactiva y “Mannose Binding MIRL ("Membrane Inhibitor of Reactive
Protein”, respectivamente), con el consiguiente Lysis").
reclutamiento y activación del sistema del com-
plemento por la ruta de las lectinas Además las 2.2. Regulación de la acción de células NK
diversas citoquinas van a regular o determinar la
calidad de la respuesta inmune específica indu- En un individuo inmunocompetente normal,
ciendo la expresión de moléculas de presentación una alta y prolongada respuesta NK puede condu-
antigénica, de señales accesorias de coesti- cir a una respuesta autoinmune puesto que las cé-
mulación CD28, CD80, CD86, CD40, CD40L) y lulas NK son capaces de lisar células autólogas
la polarización hacia una respuesta inmune de tipo normales (precursores de linfocitos B, timocitos
Th1 o Th2. y células de la médula ósea) o suprimir la prolife-
La síntesis de IL-12 resulta fundamental en ración de células troncales eritroides. Ratones
la desviación hacia una respuesta Th1 y es re- atímicos y ratones con inmunodeficiencia severa
gulada por un mecanismo de "feedback" positi- combinada (SCID), aun cuando son incapaces de
vo, mediado por IFNγ o por un mecanismo de generar una respuesta T específica al virus de la
"feedback" negativo mediado por de IL-10. Por coriomeningitis linfocítica (LMCV), presentan una
otro lado, se ha descrito que la unión del receptor respuesta NK más elevada y más prolongada (14
CR3 del sistema del complemento, con anticuerpos días) que los ratones normales, en los cuales la
o partículas unidas a iC3b, inhiben la síntesis de activación NK no se prolonga más allá de los 3 a
IL-12 en monocitos/macrófagos humanos y de ra- 4 días. Se ha sugerido que la actividad citotóxica
tón. Lo anterior, sumado al hecho que CR2 partici- de las células NK sería negativamente regulada
pa en la activación de linfocitos B, implica que el por interleuquina-4 (IL-4) y factor de crecimiento
sistema del complemento no sólo es un mecanis- beta (TGF-β "Transforming growth factor beta"),
mo efector sino que puede también actuar como sintetizado por linfocitos T CD8+ y T CD4+ del
elemento regulador positivo de la respuesta humo- tipo Th2 (ver punto 3.4 y capítulo 11).
ral y regulador negativo de la respuesta celular.
Una vez activados, los mecanismos efectores
inespecíficos pueden actuar agresivamente, no sólo 3. REGULACIÓN DE LA RESPUESTA IN-
sobre el agente infeccioso invasor, sino también MUNE ESPECÍFICA
sobre células propias y deben, por lo tanto, po-
nerse en marcha mecanismos de regulación que El desarrollo de una respuesta inmune celu-
eviten el daño tisular. lar y/o humoral requiere el reconocimiento
antigénico por el receptor de linfocitos T (TCR) o
2.1. Regulación del sistema del complemento. linfocitos B (BCR), respectivamente. Por otro
lado, la mantención de la respuesta inmune en el
La activación del sistema del complemento tiempo requiere la presencia continua del antígeno,
es regulada a través de una rápida degradación o pero su sola administración y la existencia de
inactivación de algunos de sus componentes me- clones linfocitarios específicos no aseguran el de-
diante proteínas reguladoras unidas a membrana sarrollo de una respuesta inmune dado que la na-
o solubles en el plasma. (Ver capítulo 18): turaleza, forma fisicoquímica, dosis y vía de ad-
• Inhibidor de C1 (C1 Inh). ministración del antígeno son factores importan-
• Factor de aceleración del decaimiento (DAF tes para estimular o inhibir la activación de
o CD55) de las convertasas de C3 y C5. linfocitos T y/o B específicos. Así, polisacáridos
• Asociación del factor I y diversos cofactores bacterianos inducen una respuesta IgM mientras
(factor H, C4bp, MCP o CD46 y CDR1 o los antígenos proteicos inducen tanto una respuesta
CD35) para la disociación o degradación de inmune humoral, como una respuesta celular. Por
C4b y/o C3b. otra parte, antígenos administrados por vía sub-
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cutánea, intramuscular o intradérmica inducen res- lulas efectoras derivadas de linfocitos B o
puesta inmune, mientras los antígenos adminis- linfocitos T y la síntesis de anticuerpos y/o
trados por vía oral o vía intravenosa inducen tole- citoquinas, con la consiguiente eliminación del
rancia, fundamentalmente mediante supresión y antígeno y generación de memoria inmunológica.
anergia de clones linfocitarios. Dosis bajas del Un antígeno propio, en cambio, puede inducir un
antígeno inducen supresión mientras las dosis altas fenómeno denominado "ignorancia" o estimular
favorecen la anergia. Ratones inoculados primaria una respuesta negativa que conduce a la elimina-
y secundariamente con extracto de médula espinal ción (delección), supresión o inactivación
en coadyuvante completo de Freund, desarrollan (anergia) de clones autorreactivos específicos. El
Encefalitis Alérgica Experimental (EAE), lo que reconocimiento antigénico y señales accesorias de
no ocurre en ratones inoculados con el extracto coestimulación y citoquinas desempeñan un rol
medular luego de una administración primaria por fundamental, tanto en la delección o anergia de
vía oral, de proteína básica de mielina (MBP). Los los clones linfocitarios autorreactivos, como en la
ratones que desarrollan encefalitis ponen en mar- expansión clonal y la diferenciación que condu-
cha una respuesta celular T CD4 específica para cen al desarrollo de una respuesta inmune efectora
MBP, caracterizada por la secreción de IFN-γ, y a la eliminación del antígeno, al tiempo que se
mientras los ratones que no manifiestan la enfer- generan células de memoria para responder a un
medad desarrollan una respuesta T CD8 caracte- nuevo encuentro con el antígeno.
rizada por la producción de TGF-β e IL-4. La eliminación del antígeno se convierte en-
Las citoquinas están involucradas en la re- tonces en un importante mecanismo accesorio para
gulación cualitativa y cuantitativa de la respuesta regular el curso de la respuesta inmune, puesto
inmune dado que participan en el control de una que las células efectoras y los productos de la ac-
serie de eventos asociados a la activación, proli- tivación linfocitaria (anticuerpos, citoquinas), son
feración y diferenciación de linfocitos, con la con- por lo general de corta vida media.
siguiente adquisición de diversas funciones
efectoras o la apoptosis de las distintas 3.1. Mecanismos inmunológicos y no inmu-
subpoblaciones linfocitarias (ver capítulo 11). nológicos de regulación
Estos mediadores son liberados por, virtualmen-
te, todas las células involucradas en la respuesta En general, la regulación del sistema inmu-
inmune como linfocitos T, linfocitos B, células ne incluye tanto mecanismos inmunológicos como
NK, macrófagos, granulocitos y células no inmunológicos.
dendríticas, así como células derivadas del Los mecanismos no inmunológicos impli-
endoderma (células del epitelio tímico), ectoderma can relaciones recíprocas entre el eje hipotálamo-
(queratinocitos) o mesénquima (células hipófis-adrenal (HHA) y citoquinas inflamatorias
endoteliales). Las interacciones mutuas entre las como IL-1, IL-6 y TNFα (ver capítulo 15).
diversas citoquinas y la modulación de sus recep- Citoquinas, hormonas (ACTH, prolactina,
tores determinan la intensidad de la respuesta progesterona, hormonas tiroideas), neuro-
inflamatoria y el curso de la respuesta inmune es- transmisores (acetilcolina, catecolaminas,
pecífica al determinar si la exposición a un endorfinas) y mediadores biológicos como
antígeno determinado conducirá a tolerancia o al histamina, serotonina y bradiquinina parecen in-
desarrollo de una respuesta inmune celular y/o tegrados en un poderoso circuito inmunorre-
humoral. Tanto inmunidad como tolerancia son gulador denominado red inmuno-neuro-endocrina.
fenómenos específicos que pueden tener conse- La activación del eje hipotálamo-hipófisis-
cuencias catastróficas para el individuo si no ope- adrenal, por las citoquinas inflamatorias IL-1, IL-
ran mecanismos que permitan regular el desarro- 6 y TNFα, resulta en la producción de hormona
llo de la respuesta inmune. Así, con no poca fre- liberadora de corticotrofina (CRF) por neuronas
cuencia, las consecuencias patológicas de una en- paraventriculares del hipotálamo y la secreción de
fermedad infecciosa no son resultado directo de hormona corticotrófica (ACTH) por la hipófisis.
la acción del agente infeccioso, sino de una res- ACTH actúa sobre el sistema nervioso simpático,
puesta inmune normal o muchas veces aberrante con la secreción de epinefrina y norepinefrina, y
contra el patógeno. sobre la corteza suprarrenal estimulando la sínte-
Un antígeno extraño induce generalmente una sis y secreción de glucorticoides que tienen efec-
respuesta que conduce a la diferenciación de cé- to antiinflamatorio, inhibiendo la síntesis de
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citoquinas, al tiempo que aumentan la expresión (linfocitos B, linfocitos T y células NK; macrófagos
de receptores para estas citoquinas. Los y células dendríticas para la presentación antigénica
glucorticoides tienen un efecto inmunosupresor y células accesorias como neutrófilos, eosinófilos,
sobre linfocitos B, linfocitos T y células NK (dis- basófilos y mastocitos), la secreción de mediado-
minuyendo la producción de anticuerpos, la sín- res solubles (citoquinas, leucotrienos y
tesis y secreción de citoquinas y la actividad prostaglandinas), la activación de linfocitos T su-
citotóxica de linfocitos T y células NK). presores, la regulación idiotípica (red idiotipo-anti-
Los mecanismos inmunológicos de regula- idiotipo) y el "feedback" por anticuerpos.
ción de la respuesta inmune pueden operar a nivel
central en los órganos linfoides primarios (médu- 3.2. Deleción y anergia clonal. Tolerancia
la ósea y timo) o a nivel periférico en los órganos inmunológica
linfoides secundarios o en los distintos órganos y
tejidos. Durante el reordenamiento génico y la di- Durante la diferenciación de linfocitos T en
ferenciación celular que conducen a la generación el timo, se ponen en marcha una serie de eventos
de linfocitos B (en la médula ósea) o de linfocitos que aseguran la exclusión alélica del receptor Tαβ
T (en el timo) se producen tanto linfocitos capa- y la selección de linfocitos T capaces de recono-
ces de reconocer antígenos extraños como cer fragmentos peptídicos en asociación con mo-
linfocitos contra lo propio. Deben, por lo tanto, léculas MHC de clase I o de clase II en la superfi-
ponerse en marcha mecanismos de regulación que cie de células del epitelio tímico o de células
permitan la expansión de los linfocitos contra lo dendríticas (selección positiva) al tiempo que se
extraño y la eliminación (delección) o la eliminan (delección) o inactivan (anergia) aque-
inactivación (anergia) de los clones linfocitarios llos linfocitos autorreactivos que reconocen con
autorreactivos. alta avidez y afinidad los antígenos propios (se-
A nivel periférico el desarrollo de una res- lección negativa) (ver capítulo 13). La afinidad
puesta inmune efectiva requiere el reconocimien- del receptor TCR, del correceptor CD4 o CD8, de
to de antígenos por el receptor linfocitario, seña- las moléculas MHC y de otras moléculas de adhe-
les accesorias de coestimulación (principalmente sión, así como la concentración del péptido, pare-
las interacciones CD80/CD86/CD28 y CD40/ cen fundamentales para determinar la avidez de
CD40L) y el efecto regulador de diversas la interacción entre el linfocito T y la célula pre-
citoquinas a través de receptores específicos. Una sentadora del antígeno. Experimentos utilizando
respuesta inmune efectiva requiere entonces la ratones transgénicos han permitido demostrar que
interacción entre distintas células inmuno- existe una correlación entre la especificidad del
competentes y los mecanismos de regulación de receptor TCR por moléculas de MHC de clase I o
esta respuesta pueden operar tanto a nivel de la de clase II y el desarrollo o maduración de
recirculación y "homing" de las distintas células, linfocitos CD8 o CD4, respectivamente. Además
como a nivel del procesamiento y presentación de ratones mutantes deficientes en la expresión de
antígenos y la activación, proliferación o diferen- moléculas MHC de clase I debido al "knock out"
ciación de los clones linfocitarios específicos. A del gen de la β2 microglobulina o del gen TAP, no
nivel de la recirculación y "homing" de las distin- contienen células CD8, mientras ratones deficien-
tas subpoblaciones celulares, los mecanismos de tes en moléculas de clase II contienen muy pocos
regulación operan a través de la expresión de re- linfocitos CD4. Así y de acuerdo con el modelo
ceptores específicos en el endotelio vascular de instructivo de diferenciación, la unión coordina-
los ganglios linfáticos o en distintos tejidos no da de la molécula MHC de clase I con el receptor
linfoides y la expresión de ligandos específicos TCR y con el correceptor CD8, inhibe la expre-
expresados en las distintas subpoblaciones celu- sión de CD4 en los linfocitos T doble positivos
lares inmunocompetentes. Un ejemplo clásico, es (CD4+ y CD8+) originando linfocitos citotóxicos
la molécula PSLG-1, receptor de P-Selectina T CD8+, mientras la unión coordinada de la mo-
(CD62P), expresada sólo en linfocitos Th1 lo que lécula de clase II con TCR y el correceptor CD4
permite a estas células migrar preferencialmente inhibe la expresión de CD8 para dar origen a
a ciertos tejidos (por ejemplo a piel inflamada). linfocitos Th CD4. En contraposición a este mo-
En general, los mecanismos de regulación de delo instructivo se ha planteado un modelo
la respuesta inmune a nivel periférico implican la estocástico de diferenciación que postula que la
interacción entre distintas subpoblaciones celulares inhibición en la expresión de CD4 o CD8 es al
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azar e independiente de la especificidad de TCR respuesta inmune celular y/o humoral. Así, las
por la molécula MHC de clase I o de clase II, de células presentadoras de antígeno, y linfocitos T
manera que sólo aquellos linfocitos doble positi- y linfocitos B específicos, pueden ser destruidos
vos en los que TCR y el correceptor reconocen la por citotoxicidad directa mediada por linfocitos T
misma molécula MHC podrán diferenciarse en citotóxicos o células NK, por citotoxicidad depen-
linfocitos T CD4 o linfocitos T CD8. diente de anticuerpos (ADCC) o funcionalmente
Eventos de selección positiva y negativa ocu- inactivados por acción de mediadores solubles
rren también durante la diferenciación de como prostaglandinas y diversas citoquinas. Ade-
linfocitos B en la médula ósea para la expansión más es posible encontrar, tanto a nivel periférico
de los clones linfocitarios B maduros (que expre- como a nivel central, linfocitos con una muy baja
san IgM e IgD) capaces de reconocer antígenos densidad de su receptor o una escasa afinidad del
extraños al tiempo que se eliminan aquellos clones mismo, de manera tal que cuando se encuentran
inmaduros (sólo expresan IgM) que unen con avi- con el antígeno, simplemente no se activan o lo
dez antígenos propios multiméricos o ignoran completamente (ignorancia antigénica).
multivalentes de superficie o se inactivan aqué-
llos que unen antígenos solubles oligovalentes (ver 3.3. Activación de linfocitos T supresores
capítulo 13). Aun cuando linfocitos T y linfocitos
B utilizan distintos genes para generar el receptor Durante el desarrollo de una respuesta inmu-
antigénico y presentan requerimientos estructura- ne pueden muchas veces activarse distintas
les y funcionales distintos para reconocer el subpoblaciones de linfocitos T reguladores que
antígeno, los mecanismos generales de diferen- inhiben linfocitos T o linfocitos B específicos para
ciación en el órgano linfoide primario son simila- el antígeno, y actúan por lo tanto como linfocitos
res y en ambos casos se produce delección o T supresores. La forma como se activan estos
anergia de los clones linfocitarios autorreactivos. linfocitos T supresores y los mecanismos utiliza-
Los individuos resultan así, específica y natural- dos para inhibir el desarrollo de una respuesta in-
mente tolerantes a sus propios antígenos. mune celular y/o humoral no están aún definidos
Ahora bien, la tolerancia producida por la y son todavía materia de controversia, pero sí está
delección o anergia clonal, puede ocurrir tanto a claro que la mayoría de estas células T supresoras
nivel central como a nivel periférico (dependien- son linfocitos T CD8+ y sólo una pequeña frac-
do de si el autoantígeno se expresa en los órga- ción corresponden a linfocitos T CD4+.
nos linfoides primarios o en la periferia) y es el Los linfocitos T supresores pueden inhibir el
resultado del reconocimiento antigénico en con- desarrollo de una respuesta inmune mediante 3 me-
diciones tales que la unión al receptor linfocitario canismos distintos. El primero implica citolisis por
no conduce a la activación celular sino más bien contacto directo con liberación de perforina y
a su eliminación o inactivación debido a la au- granzimas A y B, que activan la cascada de las
sencia de las señales adecuadas de coestimulación caspasas y conducen a la apoptosis de la célula
o a la puesta en marcha de un programa de muer- blanco (linfocitos T, linfocitos B específicos o
te celular o apoptosis. Durante el desarrollo de cualquier célula que presente antígenos a estos
una respuesta humoral y luego del "switching" linfocitos). El segundo se basa en la expresión
isotípico (o cambio isotípico de la cadena pesa- aumentada de FasL (CD95L), que inicia la muer-
da de la inmunoglobulina) e hipermutación te programada por agregación de Fas (CD95) y
somática del receptor BCR en el centro germinal, activación de vía de las caspasas en la célula blan-
sólo aquellos linfocitos B que han desarrollado co. Finalmente, el tercer mecanismo implica la
un receptor con alta afinidad por el antígeno se- secreción de citoquinas citotóxicas como TNFα y
rán positivamente seleccionados para continuar linfotoxina TNFβ. Los linfocitos T supresores
su diferenciación en células plasmáticas o en cé- (CD4 o CD8), pueden secretar además citoquinas
lulas memoria, mientras el resto muere por que inhiben la respuesta inmune, como ocurre con
apoptosis. TGF-β (que inhibe la activación y proliferación
Por último es importante señalar que la tole- de células NK y linfocitos T y) , con IFNγ (que
rancia no sólo puede ser inducida contra lo propio inhibe linfocitos Th2 y el "switching" isotípico
por delección o anergia de clones linfocitarios hacia IgE en linfocitos estimulados por IL-4) y
autorreactivos, sino también contra lo extraño con IL-4 e IL-10 (que inhiben linfocitos Th1 y la
mediante diversos mecanismos de supresión de la activación de macrófagos).
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3.4. Regulación mediante linfocitos Th1 y Th2 dades infecciosas por bacterias, virus, hongos o
parásitos y la producción de IL-12 o de IL-4, lue-
Los linfocitos T "helper" (Th) cumplen un rol fun- go de la estimulación inicial del sistema inmune,
damental en el desarrollo y la regulación, tanto de parece un evento crucial en la diferenciación de
la respuesta inmune celular, como de la respuesta linfocitos Th1 o Th2 a partir de T CD4+ precurso-
humoral. Luego del reconocimiento antigénico y res (linfocitos Thp) que sólo secretan IL-2. Luego
la estimulación por IFNγ o por IL-4, los linfocitos de la estimulación inicial por el antígeno,
T CD4+ pueden diferenciarse en linfocitos Th1 o macrófagos y células dentríticas secretan IL-12,
linfocitos Th2, respectivamente. Los linfocitos Th1 activando células NK y promoviendo la produc-
secretan predominantemente IL-2, IFNγ y ción IFNγ. Altos niveles de esta citoquina, pro-
linfotoxina (TNF-β) que activan macrófagos y son ducidos por células NK y/o linfocitos T, actúan
los principales efectores de la inmunidad celular sobre linfocitos Thp favoreciendo la diferencia-
contra patógenos intracelulares y de las reaccio- ción hacia Th1, al tiempo que inhiben la produc-
nes de hipersensibilidad retardada. Los linfocitos ción de citoquinas que favorecen la diferenciación
Th2 en cambio, secretan principalmente IL-4, IL- de Th2 (IL-4, IL-10) (figura 14-1). El efecto be-
5, IL-6, IL-9, IL-10 e IL-13 (tabla 14-1) y son los neficioso de la respuesta Th1 es, al menos en par-
inductores de los altos niveles de IgG e IgE, de la te, mediada por la secreción de IFNγ que tiene
eosinofilia, de la citotoxicidad mediada por efecto antiviral directo, promueve la citotoxicidad
eosinófilos y de la activación de mastocitos. de células NK y linfocitos T citotóxicos (LTc) y
activa la capacidad destructiva de macrófagos es-
timulando la producción de radicales superóxidos,
Tabla 14-1. Citoquinas producidas por óxido nítrico y proteasas.
distintas subpoblaciones de linfocitos T. La fuente inicial de IL-4 para la diferencia-
ción de linfocitos Th2 no está claramente defini-
da, pero la evidencia experimental sugiere que
CITOQUINA Th1 Th2 T CD8
linfocitos TαßABNK1.1 (células TNK), linfocitos
T-γδ y mastocitos y basófilos son capaces de se-
IFNγ ++ - ++ cretar esta citoquina.
IL-2 ++ - +/- El desarrollo de una respuesta con exclusión
TNFβ ++ - + de la otra (Th1 versus Th2), parece tener efectos
TNFα ++ + ++ importantes en la susceptibilidad o resistencia a
GM-CSF ++ + ++ diversas infecciones y la supresión de las funcio-
IL-3 ++ ++ + nes efectoras que se observa en infecciones cróni-
IL-4 - ++ - cas, es a menudo el resultado de la producción
IL-5 - ++ - diferencial de citoquinas en etapas tempranas de
IL-6 - ++ - la misma. En ratones, la inducción de una respuesta
IL-10 - ++ - Th1 tiene un efecto protector contra el parásito
IL-13 - ++ - Leishmania major, lo que no ocurre contra el pa-
rásito Trichuris muris, donde la respuesta protec-
tora es de tipo humoral y por lo tanto activada por
Th2. Por otro lado, la infección experimental con
Leishmania major induce una respuesta protecto-
La inducción de una respuesta Th1 y la pro-
ra de tipo Th1 en los ratones de la cepa resistente
ducción de IL-2 e IFNγ inhibirá el desarrollo de
CBA/J, mientras los ratones de la cepa suscepti-
una respuesta Th2, mientras la activación de
ble Balb/c desarrollan una respuesta Th2 y mue-
linfocitos Th2 y la secreción de IL-4 e IL-10 inhibirá
ren rápidamente durante la infección. Estos resul-
el desarrollo de una respuesta Th1. Sin embargo,
tados sugieren que el desarrollo de una respuesta
tanto linfocitos Th1 como linfocitos Th2 colaboran
Th1 o Th2 es de alguna manera dependiente del
en el desarrollo de la respuesta humoral y promue-
repertorio genético del individuo y la inoculación
ven el "switching" a diferentes subclases de IgG:
de IL-12 en los ratones susceptibles Balb/c inhibe
en el ratón Th2 promueve el cambio a IgG1 e IgE y
el desarrollo de una respuesta Th2 y los ratones se
Th1 promueve el cambio a IgG2a.
hacen resistentes a la infección experimental con
El desarrollo de una respuesta Th1 o Th2 es
Leishmania major.
fundamental en la evolución de diversas enferme-
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cientes en IL-10 (pero producen altos niveles de
IL-12 e IFNγ) mueren por daño tisular caracteri-
zado por infiltrado celular y necrosis, y no por una
infección descontrolada.
Ahora bien, puesto que la respuesta inmune
contra diversas enfermedades infecciosas parece
estar determinada por la particular combinación
de citoquinas secretada por los linfocitos Th, se
ha sugerido que la incapacidad para controlar la
evolución de una enfermedad infecciosa es mu-
chas veces el resultado de una respuesta inmune
inapropiada o aberrante y no de una respuesta in-
suficiente. Así una respuesta inflamatoria Th1 que
tiene indiscutibles efectos beneficiosos en el con-
trol de diversos microorganismos, es tremenda-
mente nociva si se pone en marcha contra
antígenos propios y, en muchos casos de enfer-
medades autoinmunes órgano-específicas, la ac-
tivación de una respuesta inmune Th1 desempeña
un rol fundamental en la patogénesis de la enfer-
medad. Así ocurre en la tiroiditis autoinmune, la
Figura 14-1. Diferenciación de linfocitos Th1 y Th2. (A) esclerosis múltiple, la enfermedad de Crohn, la
Macrófagos y células dendríticas (CPA) procesan y presentan artritis reumatoide y la diabetes mellitus tipo I, de
antígenos en el contexto de moléculas MHC de clase II a
linfocitos T precursores (Thp) y secretan IL-12 activando cé-
manera que cualquier intento de inhibición de la
lulas NK y produciendo IFNγ que favorece la diferenciación respuesta Th1 o la administración de citoquinas
de linfocitos Th1 a partir de los linfocitos Thp que sólo secretan como IL-4 e IL-10 que inhiben la respuesta Th1,
IL-2. Los linfocitos efectores Th1 secretan predominantemente puede tener enorme impacto en la prevención o
IL-2, IFNγ y TNFβ con efecto antiviral directo (IFNγ) y acti-
vación de una respuesta celular mediada por linfocitos T
tratamiento de estas enfermedades. Por el contra-
citotóxicos y macrófagos activados. (B) La presentación rio, en cuadros atópicos (como la fiebre de heno,
antigénica en el contexto de moléculas MHC de clase II a el asma bronquial y la dermatitis atópica) y en el
linfocitos Thp y la estimulación por IL-4 (producida por lupus eritematoso sistémico (LES) en los que una
linfocitos CD4 NK 1.1+, linfocitos Tγδ o mastocitos) favore-
cen la diferenciación hacia linfocitos Th2 que estimulan la res-
respuesta humoral dependiente de linfocitos Th2
puesta inmune humoral promoviendo la síntesis y secreción parece estar involucrada en la inmunopatogénesis
de IgE y eosinofília. de la enfermedad, el tratamiento debe estar orien-
tado a la inhibición de esa respuesta Th2. Se des-
cribe una subpoblación de LT CD4+ denomina-
En general las infecciones parasitarias se aso- dos Tr1 o Th3, que sintetizan IL-10,TGF-β y pe-
cian con frecuencia a la estimulación de una de queñas cantidades de IFNγ pero no IL-4. Se ha
las subpoblaciones Th1 o Th2. Así una respuesta estudiado el papel regulador de estas células en el
Th2 con elevados niveles de IgE y una marcada epitelio intestinal; es probable que estén
eosinofilia es característica de las infecciones por involucradas en la regulación de la respuesta in-
helmintos como Toxocara, Filaria y Schistosoma. mune frente a la flora intestinal normal y por otro
De manera similar las infecciones por protozoos lado, alteraciones en relación a estas células po-
como Toxoplasma, Trypanosoma y Plasmodium drían estar involucradas en patologías como la
están asociadas a inmunidad celular y fenómenos Enfermedad de Crohn, donde existe una respues-
de hipersensibilidad retardada que son activados ta celular exagerada.
por una respuesta Th1.
La regulación de la respuesta Th1 por IL-10 3.5. Regulación idiotípica o red idiotipo-anti-
es fundamental para evitar los efectos nocivos de idiotipo
una respuesta celular aberrante. Así, ratones nor-
males son resistentes y sobreviven a la infección El desarrollo de respuesta inmune contra un
con Toxoplasma gondii, mientras ratones antígeno conduce a la proliferación o expansión
genéticamente manipulados para hacerlos defi- de clones linfocitarios T o B antígeno específicos
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y a la síntesis y secreción de anticuerpos específi- dos en el sitio de combinación del receptor (son
cos. El receptor de estos linfocitos (TCR o BCR) por lo tanto "imágenes internas" o similares al
y los anticuerpos sintetizados pueden luego acti- epítopo antigénico original) y aquéllos que reco-
var linfocitos capaces de reconocer determinan- nocen idiotopos ubicados por fuera del sitio de
tes antigénicos o idiotopos de la porción variable combinación, en el dominio variable del receptor
del receptor linfocitario o del anticuerpo antígeno- linfocitario.
específico (figura 14-2), poniendo en marcha un Los receptores antigénicos de los linfocitos
mecanismo de control idiotípico o red idiotipo- T (TCR), de los linfocitos B (BCR) o las molécu-
anti-idiotipo que regulará la activación de los las de inmunoglobulina se encuentran en niveles
clones linfocitarios antígeno-específicos y deter- muy bajos durante el periodo neonatal y serían
minará la evolución de la respuesta contra el por lo tanto, incapaces de poner en marcha meca-
antígeno original. nismos de tolerancia a la estructura idiotópica pro-
pia del dominio variable del receptor linfocitario.
En el repertorio linfocitario de un individuo pue-
den, por lo tanto, encontrarse linfocitos T y/o
linfocitos B, capaces de reconocer idiotopos y de
originar una respuesta anti-idiotípica contra todos
los idiotopos de ese receptor. De esta manera la
regulación idiotípica del sistema inmune contro-
laría el repertorio linfocitario disponible para ac-
tivación por un antígeno y, en último término, es-
taría involucrada en el desarrollo de inmunidad o
de tolerancia a diversos antígenos. El aislamiento
de anticuerpos neonatales, de baja afinidad y ele-
vada multirreactividad con diversos antígenos e
Figura 14-2. Regulación idiotípica. La red idiotipo-anti- idiotipos linfocitarios, que se producen de mane-
idiotipo incluye tanto: (A) linfocitos B o anticuerpos que
reconocen idiotopos en el receptor de un linfocito T o de un ra natural en ausencia de estimulación antigénica
linfocito B como (B) linfocitos T cuyo receptor reconoce evidente, y la existencia en el suero normal hu-
péptidos idiotópicos de un receptor T o de una inmunoglobulina mano de anticuerpos anti-idiotípicos de clase IgG
presentados en el contexto de una molécula MHC, por una que reaccionan o reconocen anticuerpos naturales
célula presentadora de antígeno o por un linfocito B que pro-
cesa su propio receptor BCR.
parecen apoyar la participación de la red idiotipo-
anti-idiotipo en el control del repertorio
linfocitario.
Durante el reordenamiento génico y la dife- Los idiotopos son entonces estructuras úni-
renciación celular que ocurren en el timo o en la cas de la porción variable de un receptor
médula ósea, para la generación de las distintas linfocitario o de un anticuerpo. El conjunto o la
poblaciones linfocitarias, existe una muy baja pro- suma de todos los idiotopos de un receptor
babilidad de originar linfocitos con la misma se- linfocitario particular constituye el idiotipo de ese
cuencia y especificidad en su receptor TCR o BCR, receptor o de esa molécula de inmunoglobulina.
pero sí pueden generarse linfocitos cuyo receptor En consecuencia una respuesta anti-idiotípica es-
reconoce o tiene especificidad por la región va- tará dirigida contra todos los idiotopos de un re-
riable del receptor de otro linfocito T o linfocito ceptor linfocitario o de una molécula de anticuer-
B. La secuencia aminoacídica de la región varia- po e incluirá a todos y cada uno de los linfocitos T
ble del receptor linfocitario constituye, por lo tan- y linfocitos B anti-idiotópicos que han sido
to, una estructura única y señala la individualidad específicamente activados.
de cada linfocito T o linfocito B y las diferencias
que existen entre los determinantes antigénicos o
idiotopos de los distintos receptores, tienden a 3.6. Regulación o "feedback" por anticuerpos
concentrarse en las regiones hipervariables de los y complejos inmunes
mismos. Además los anticuerpos anti-idiotópicos,
que reconocen idiotopos de un receptor linfocitario La administración pasiva de anticuerpos es-
o de una molécula de inmunoglobulina, pueden pecíficos contra un antígeno puede regular la res-
separarse en los que reconocen idiotopos ubica- puesta inmune estimulando o inhibiendo el desa-
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Sin título-2 284 5/26/06, 10:26 AM

rrollo de la respuesta humoral y/o celular depen- d) La unión, la región Fc de los anticuerpos que
diendo del isotipo de los anticuerpos administra- forman parte de complejos inmunes al recep-
dos. La administración pasiva de IgM por ejem- tor Fc de linfocitos T, promueve la puesta en
plo, puede estimular la síntesis de anticuerpos con- marcha de mecanismos de supresión de la
tra el antígeno favoreciendo el procesamiento y respuesta inmune.
presentación del antígeno por fagocitos profesio-
nales que incorporan los complejos antígeno-an- En clínica la administración de inmuno-
ticuerpo por la vía de receptores Fc, o poniendo globulina intravenosa representa un tratamiento de
en marcha un mecanismo de regulación idiotípica primera línea en pacientes con inmunodeficiencia
que amplifica la respuesta contra el antígeno. La humoral y es un agente inmunomodulador alter-
administración pasiva de anticuerpos IgG en cam- nativo o complementario en pacientes con desór-
bio, tiende a inhibir el desarrollo de la respuesta denes inflamatorios sistémicos y enfermedades
inmune debido probablemente a: autoinmunes (tabla 14-2), en los cuales suprime,
previene o retarda las manifestaciones clínicas. Los
a) La neutralización de epítopos específicos y efectos de la administración de inmunoglobulina
la eliminación del antígeno, lo que evidente- intravenosa se manifiestan a distintos niveles y a
mente conduce a la remoción del estímulo través de distintos mecanismos de acción como el
antigénico necesario para activar diversas bloqueo de receptores Fc en macrófagos
subpoblaciones linfocitarias. esplénicos, la neutralización de autoanticuerpos
b) La activación de un mecanismo de regulación circulantes, inhibición del daño mediado por com-
idiotípica que inhibe el desarrollo de la res- plemento y la modulación de la síntesis y secre-
puesta inmune. ción de citoquinas inflamatorias (tabla 14-3).
c) La unión de complejos inmunes que contie-
nen antígenos multideterminantes inhibirá la
activación de los linfocitos B antígeno-especí- Tabla 14-2. Enfermedades autoinmunes y
ficos debido a que la doble señal de reconoci- cuadros inflamatorios sistémicos en los que se
miento generada por la unión simultánea del ha mostrado efecto benéfico de
antígeno al receptor linfocitario por una parte inmunoglobulina intravenosa.
y la unión del dominio Fc del anticuerpo a re-
ceptores Fc por la otra, impide la generación
de segundos mensajeros indispensables para Púrpura trombocitopénico idiopático
la activación linfocitaria (figura 14-3). Neutropenias autoinmunes
Anemias hemolíticas autoinmunes
Eritroblastopenia autoinmune
Enfermedad de von Willebrand
Síndrome de Kawasaki
Dermatomiositis
Lupus eritematoso sistémico
Artritis reumatoide
Polimiositis
Síndrome de Gillain-Barré
Miastenia gravis
Esclerosis múltiple
Diabetes mellitus insulino dependiente
Colitis ulcerativa
Enfermedad de Crohn
Figura 14-3. Regulación o "feedback" por anticuerpos o
complejos inmunes. La doble señal de reconocimiento gene-
rada por la unión simultánea al receptor linfocitario y a recep-
tores Fc, de complejos inmunes formados en fase fluida, impi-
de la generación de segundos mensajeros indispensables para
la activación linfocitaria. Mientras el antígeno multiepitópico
del complejo se une al receptor linfocitario, el dominio Fc de
anticuerpos del mismo complejo se une a un receptor Fc,
inactivando al linfocito B.
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Tabla 14-3. Mecanismos de acción de la inmunoglobulina intravenosa
Bloqueo de receptores Fc en macrófagos esplénicos

Unión de fragmentos C3b y C4b e inhibición del daño por complemento
Modulación de la síntesis y secreción de citoquinas inflamatorias
(IL-1, IFNγ, TNF).
Neutralización anti-idiotípica de autoincuerpos circulantes
Modificación de la solubilidad, clearance y propiedades inflamatorias
de los complejos inmunes
Neutralización de superantígenos y toxinas (Síndrome de Kawasaki)
Regulación idiotípica de linfocitos B y linfocitos T
3.7. Regulación por Prostaglandinas trado que la PGE2 induce la apoptosis en células T
inmaduras (doble positivas TCD4+/CD8+) y en
Las prostaglandinas son pequeñas molécu- células T maduras inactivas, pero inhibe la
las lipídicas que regulan numerosos procesos or- apoptosis de células T maduras y activadas. En
gánicos, incluyendo función renal, agregación este último caso se ha observado que disminuye
plaquetaria, liberación de neurotransmisores y la expresión del mRNA que codifica FAS-L (“FAS
modulación de la respuesta inmune. En respuesta ligand”). La PGE2 favorece además la producción
a un estímulo inflamatorio, la producción de de IL2, IL-5 e IL-10 (respuesta Th2), probable-
prostaglandinas se inicia con la Fosfolipasa A2 que mente mediada por AMPc, e inhibe la producción
libera ácido araquidónico desde los fosfolípidos de IFNγ e IL-2 (respuesta Th1).
de membrana. El ácido araquidónico es luego En los linfocitos B, la PGE2 induce apoptosis
transformado en endoperóxidos cíclicos (PGH2) de las células inmaduras, pero no en las células
por acción de la Cicloxigenasa (Cox-1 y Cox-2). maduras. Por otra parte, en linfocitos B estimula-
La Cox-1 se expresa constitutivamente en la mados con LPS e IL-4, la PGE2 estimula la produc-
yoría de los tejidos y actúa en procesos de regula- ción de la IgG1 e IgE, en desmedro de la produc-
ción mucosa; Cox-2, en cambio, es una enzima ción de IgG3 e IgM, mediante un mecanismo de-
inducible involucrada en los procesos de regula- pendiente de AMPc
ción de la inflamación. Prostaglandina sintetasas En células presentadoras de antígeno
específicas transforman PGH 2 en distintas (CPA) de tejidos periféricos, la PGE2 activa CPA
prostaglandinas (PGI2, PGF2α, PGD2 y PGE2 ) que, profesionales (células dendríticas, macrófagos),
una vez liberadas de las células, actúan cerca de pero una vez que éstas han migrado a los órganos
su sitio de producción uniéndose a receptores de linfoides secundarios, su maduración y por tanto
membrana específicos. De la PGD2 deriva la mo- su capacidad de presentar antígenos, son inhibidas
lécula 15-d PGJ2 que es producida por diversas por PGE 2. También se ha observado que en
células. macrófagos, la PGE2 inhibe la síntesis de TNFα,
IL-1β, IL-8 e IL12.
3.7.1. Prostaglandina E2 (PGE2)
3.7.2. Prostaglandina 15-d PGJ2
La PGE2 es producida por diversas células
(incluyendo fibroblastos y macrófagos) y ejerce Esta prostaglandina es producida por diver-
su acción uniéndose a uno o varios de los recepto- sas células (mastocitos, células T, plaquetas y
res: EP1 EP2 EP3 EP4. macrófagos alveolares) y deriva de la PGD2. Se
En linfocitos T, la PGE2 inhibe la prolifera- desconoce su mecanismo de ingreso a las células,
ción de linfocitos T “helper” y T citotóxicos y pero probablemente lo hace a través de un meca-
aún cuando el mecanismo de acción no está bien nismo activo o por una molécula transportadora
establecido, se ha sugerido que inhibiría la libe- aniónica.
ración de Ca2+ intracelular y la actividad de la En linfocitos T y linfocitos B la
tirosina kinasa p59. Por otra parte, se ha demos- prostaglandina 15-d PGJ2 inhibe la proliferación
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celular e induce apoptosis. En neutrófilos, esta
prostaglandina inhibe la producción de radicales
libre de oxígeno y en macrófagos se ha descrito
que inhibe la producción de sintetasa de óxido ní-
trico (NOS), de TNFα y de IL-1β, mediante un
mecanismo que involucra la inhibición de diver-
sas quinasas.
LECTURAS SUGERIDAS
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Capítulo 15
NEUROINMUNOLOGÍA
Hugo Folch V., Miguel Barría M. y Patricio Esquivel S.
1. Introducción 3.1. Efecto del "stress" en la respuesta

2. Interacciones entre el sistema nervio- inmune
so central, sistema endocrino y siste- 3.2. Depresión e inmunidad
ma inmune 3.3. Efecto de los factores sociales en la
2.1. Inervación de los órganos linfoides respuesta inmune
2.2. Existencia de un eje Sistema nervio- 3.4. Las drogas psicoactivas alteran el
so central-hipófisis-sistema inmune funcionamiento del sistema linfoide
2.3. El SNC tiene "conocimiento" de la 3.5. Las hormonas sexuales modulan la
entrada de antígeno al organismo y respuesta autoinmune
responde a él 4. Algunos casos en que el sistema inmu-
2.4. El sistema inmune produce hormone origina cambios o trastornos en el
nas sistema nervioso
2.5. El sistema inmune tiene receptores 4.1. Efecto de los anticuerpos a nivel del
para hormonas y neuropéptidos sistema nervioso
2.6. Otras señales derivadas del sistema 4.2. Efecto de complejos antígeno-anti-
inmune tienen efecto en el sistema cuerpo en el sistema nervioso cen-
neuroendocrino tral
3. Resultante de la interacción del siste- 4.3. Rol patogénico de linfocitos T,
ma nervioso, sistema endocrino y el macrófagos y citoquinas en el teji-
sistema inmune: evidencias en el or- do nervioso
ganismo vivo que demuestran su efec-
to en la respuesta inmune
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RESUMEN
El funcionamiento del sistema inmunológico depende de múltiples factores que regulan

cada uno de los eventos, tanto celulares como moleculares, que se ponen en marcha en el mo-
mento de la entrada del antígeno. Los factores que condicionan la respuesta inmune pueden
clasificarse en intrínsecos, los que se originan en el propio sistema inmune, y en factores extrín-
secos que provienen del medio interno del organismo, alguno de los cuales se encuentran condi-
cionados por el entorno en que el individuo desarrolla su actividad. De los factores reguladores
externos al sistema inmune, el sistema neuroendocrino juega un papel preponderante.
El sistema neuroendocrino influye sobre el sistema inmune directamente mediante la
inervación de los órganos linfoides, los productos del eje hipotálamo-hipofisiario y otras hormo-
nas o neuropéptidos, para los cuales los linfocitos tienen receptores específicos. Por otro lado,
los linfocitos producen hormonas y neuropéptidos, que junto con las citoquinas que induce el
estímulo antigénico, pueden ser percibidos por el sistema nervioso central y modificar su activi-
dad.
La demostración de la interacción de los sistemas neuroendocrinos e inmunológico, permi-
ten explicar el efecto inmunodepresor producido por circunstancias que inducen "stress", facto-
res sociales adversos, consumo de drogas psicoactivas o las hormonas sexuales, entre otras.
1. INTRODUCCIÓN hesión expresadas en su superficie, citoquinas y

anticuerpos y por otro, elementos ajenos al siste-
El sistema inmune puede ser considerado ma inmune, pero que condicionan el medio interno
como un órgano sensorial capaz de reconocer esen el cual se desarrolla la respuesta inmune:
tímulos no cognoscitivos como bacterias, virus y citoquinas secretadas por células que no pertene-
tumores, mientras que el sistema nervioso central cen al sistema inmune, temperatura, nutrientes, pH,
reconoce estímulos cognoscitivos clásicos: quí- vitaminas, hormonas y neuropéptidos; elementos
micos, físicos y emocionales. Los sistemas in- éstos que, a su vez, sufren la influencia de factores
mune, nervioso central y neuroendocrino ajenos al individuo (figura 15-1).
interactúan a través de la liberación de citoquinas Esta visión integradora del sistema inmune,
y hormonas con un circuito de retroalimentación. lo hace aparecer como interdependiente del resto
En este circuito la vía aferente está representada del organismo, contrapuesta con la posición sos-
por el sistema inmune que informa al sistema ner- tenida hasta no hace mucho tiempo, en que se con-
vioso central y estimula el eje hipotálamo- sideraba al sistema inmune prácticamente como
hipofisiario-adrenal a través de la liberación de autónomo. Probablemente uno de los avances más
productos de linfocitos activados. significativos del último tiempo, haya sido el po-
La respuesta inmune, elemento efector elabo- ner en evidencia la interdependencia del sistema
rado específicamente frente a un antígeno, depen- nervioso central (SNC), sistema endocrino y sis-
de de una gran cantidad de factores, que pueden tema inmune, que establecen una red interactiva
englobarse en aquellos dependientes del medio in- que regula y condiciona fuertemente la respuesta
terno del organismo y aquellos dependientes del inmune. Este aspecto queda demostrado por la
medio externo. Entre los factores del medio exter- existencia de receptores en la membrana de
no cabe destacar temperatura ambiental, radiación linfocitos para neurotransmisores y hormonas, se
solar, ciclos estacionales, ciclo día-noche, etc. En- sabe que los linfocitos producen hormonas y que
tre los factores del medio interno destacan, por un existen células del sistema neuroendocrino que
lado, los elementos propios del sistema inmune producen citoquinas que hasta hace poco eran atri-
como linfocitos T, linfocitos B, moléculas de ad- buidos sólo al sistema linfoide (figura 15-2).
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Figura 15-1. Algunos de los aspectos más relevantes que condicionan el accionar de células B, T y macrófagos. Éstos se
encuentran divididos en 3 categorías: (a) los factores reguladores que provienen del propio sistema inmune, ( b) factores externos
al sistema linfoide, provenientes del medio interno del organismo y (c) elementos externos al individuo que juegan un rol en la
respuesta inmune actuando sobre el sistema linfoide o el medio interno.
Figura 15-2. Interacción entre el sistema neuroendocrino y el sistema inmune. El esquema muestra cómo además de las
funciones propias cada uno de estos dos sistemas homeostáticos pueden producir linfoquinas, hormonas y neuropéptidos y que las
células de ambos, tienen receptores para estos factores de regulación.
2. INTERACCIONES ENTRE EL SISTEMA que asegura que las respuestas inmunes e

NERVIOSO CENTRAL, SISTEMA EN- inflamatoria estén en armonía con otras funcio-
DOCRINO Y SISTEMA INMUNE nes del organismo. Estos sistemas usan similares
ligandos y receptores para establecer una comu-
El sistema inmune está constantemente nicación fisiológica intra e intersistema, lo que
interactuando con el sistema neuroendocrino lo juega un papel relevante en la homeostasis. Así,
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Sin título-2 292 5/26/06, 10:26 AM

no sólo las hormonas clásicas pueden ser produ- que mediante sus productos de secreción puede
cidas por células del sistema inmune, sino que una actuar directamente sobre las células del sistema
variedad de citoquinas (originalmente descritas inmune o activar a glándulas periféricas del siste-
como producidas por monocitos y linfocitos) son ma endocrino como tiroides, suprarrenales o
sintetizadas y liberadas por una variedad de glán- gónadas, cuyos productos hormonales a su vez
dulas endocrinas y tejido nervioso. Además, re- pueden actuar sobre el sistema linfoide. La estra-
ceptores específicos para estas moléculas pueden tegia más usada para poner en evidencia la exis-
encontrarse en los sistemas inmune y neuroen- tencia de este eje regulatorio es la lesión selecti-
docrino. A continuación se desarrollará brevemen- va en determinadas áreas del SNC o de la hipófisis.
te algunos expuestos de esta interacción: Al respecto se ha demostrado que la destrucción
selectiva del hipotálamo anterior reduce la
2.1 Inervación de los órganos linfoides celularidad del timo y bazo, deprime la respuesta
proliferativa de las células T a mitógenos, dismi-
Los órganos del sistema inmune están con- nuye la actividad NK (de células “natural killer”),
formados por un estroma de células y fibras orga- induce una baja en la producción de anticuerpos e
nizadas en una red tridimensional, que da sopor- inhibe el "shock" anafiláctico. Se puede concluir
te a las diferentes poblaciones celulares directa- así, de estos experimentos, que el hipotálamo an-
mente involucradas en la respuesta inmune. Las terior tiene la capacidad de influir la respuesta
células del sistema inmune son en su mayoría mó- inmune tanto celular como humoral. La hipofisec-
viles, dispuestas en compartimentos y sujetas a sú- tomía, a su vez, produce una baja en la celularidad
bita proliferación o extensos procesos de muerte de la médula ósea, una discreta anemia y una in-
programada producto de la estimulación volución tímica. En animales que presentan
antigénica. En la cinética de estos procesos la hipófisis hipofuncional, el bazo y los nódulos
inervación del estroma juega un papel importan- linfáticos se presentan atrofiados. En general los
te: el análisis de los neurotransmisores que con- reportes coinciden en que la hipofisectomía redu-
tienen los axones de un área en particular de teji- ce la respuesta inmune celular y humoral.
do linfoide, ha permitido demostrar en sus termi- Por otra parte, experimentos de diferencia-
naciones norepinefrina, neuropéptido Y, substan- ción de células T in vitro han demostrado que
cia P, el péptido relacionado con el gen de la cocultivos de explantes hipotalámicos (región
calcitonina y el péptido intestinal vasoactivo. medio basal), con hipófisis y timo representan un
Todas estas substancias son vasoactivas y como eje de acción que culmina con la diferenciación
tales pueden modificar el flujo sanguíneo local, de células de médula ósea en células Thy1+. Este
influyendo de esta forma en el tráfico celular. Por efecto opera a través del lóbulo anterior de la
otra parte, también se ha descrito una acción di- hipófisis y es dependiente de la presencia de
recta de estas substancias de origen nervioso so- hipotálamo, lo que indica la producción por parte
bre los linfocitos, derivado del hecho de que estas de esta estructura nerviosa de factores regulado-
células tienen receptores específicos para la ma- res que actuarían sobre hipófisis la cual a su vez
yoría de dichos productos. Su acción sobre la cé- liberaría factores que actuando sobre timo indu-
lula linfoide se traduce en la elevación de los ni- cen a sus células para liberar hormonas tímicas,
veles intracelulares de segundos mensajeros, lo responsables finales de la diferenciación de célu-
que con seguridad contribuye a la estimulación las T. En el eje de diferenciación de células T des-
linfocitaria y a la generación de una respuesta in- crito antes (hipotálamo-hipófisis-timo) se ha de-
mune compartamentalizada. Esto último se deri- mostrado que la hipófisis participa liberando
va de la diferente inervación que es posible obser- prolactina (PRL) e IL-6 que serían, al menos par-
var en áreas T, áreas B o zonas de interacción ce- cialmente, responsables de la liberación de hor-
lular T-B como la zona marginal del bazo. monas tímicas en esta glándula linfoide.
Estudios in vivo, demuestran que la adminis-
2.2 Existencia de un eje Sistema nervioso cen- tración de extractos hipotalámicos provenientes de
tral-hipófisis-sistema inmune animales jóvenes, restauran los niveles de timulina
circulante en animales viejos, en los cuales esta
La literatura provee múltiples evidencias hormona es inexistente. Además, estos animales
sobre la existencia de circuitos reguladores que se viejos que presentan una respuesta inmune T de-
originan en el SNC y lo conectan con la hipófisis, pendiente disminuida, cuando reciben extractos
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hipotalámicos provenientes de ratones jóvenes, su estimulación vía linfoquinas que, mediante la
presentan una respuesta T de niveles tan altos como interacción con su receptor neuronal son capaces
los detectados en el animal joven. Esto indicaría de activar las células del sistema nervioso, directa
que el "envejecimiento" del sistema inmune sería o indirectamente, generando un efecto esti-
más bien responsabilidad del hipotálamo como mulatorio de cascada en un sistema de neuronas
elemento regulador central. interconectadas. Al respecto, existen evidencias
Se sabe que la hipófisis libera una serie de hor- que el lipopolisacárido bacteriano induce la libe-
monas bien conocidas, cuya secreción se encuen- ración de interleuquinas en estructuras del siste-
tra bajo la influencia de factores hipotalámicos. De ma nervioso y de la hipófisis, siendo esa una se-
las hormonas hipofisiarias conocidas, PRL y hor- ñal importante de entrada de antígenos bacterianos
mona del crecimiento (GH) parecen jugar papeles al organismo.
importantes en la estimulación de la función inmu-
ne. Por otra parte, la hormona adreno-corticotrofina 2.4 El sistema inmune produce hormonas
(ACTH) también aparece involucrada, jugando
generalmente un papel inhibitorio de la respuesta Antiguos experimentos de Pierpaoli, demos-
inmune, ya que estimula la secreción de traron que ratones enanos hipo-hipofisiarios po-
glucocorticoides (ver tabla 15-1). dían mejorar en parte sus severos trastornos
Adicionalmente, se ha demostrado que la se- endocrinos, si eran transfundidos con linfocitos
creción hipofisiaria de otros factores de crecimien- singeneicos de animales normales, dando pie para
to e interleuquinas, también tienen influencia en pensar que las células inmunes eran capaces de
el desarrollo de la respuesta inmune (figura 15-3). producir algunas hormonas. Más tarde pudo ser
demostrado que leucocitos periféricos de anima-
2.3 El SNC tiene "conocimiento" de la entra- les infectados con virus o bacterias producen
da de antígeno al organismo y responde a él ACTH y endorfinas, idénticas a las producidas
en la adenohipófisis. Igual cosa se ha demostra-
Se sabe que el proceso de inmunización in- do para linfocitos T estimulados con super-
duce, a nivel del SNC, por un aumento de las des- antígeno estafilocócicos, los que producen
cargas eléctricas en regiones discretas del tirotrofina (TSH), GH y gonadotrofina coriónica
hipotálamo. Esto probablemente, es derivado de (GC). Adicionalmente, en líneas celulares tanto
Tabla 15-1. Modulación de la respuesta inmune por hormonas hipofisiarias
Hormona Efecto Modulador
Corticotropina Síntesis de anticuerpos

Producción de IFN-γ
Crecimiento de células B.
Endorfinas Síntesis de anticuerpos.
Actividad de células NK.
Tirotropina Aumenta síntesis de anticuerpos.
Comitogénico con ConA.
Hormona del crecimiento (GH) Células T citotóxicas.
Aumenta respuesta inmune.
Hormona luteinizantes (LH) y Producción de citoquinas.
Hormona folículo estimulante (FSH)
Prolactina (PRL) Aumenta respuesta inmune.
Induce receptores a IL-2
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Figura 15-3. Esquema de interacciones positivas (+), negativas (-) o de ambos tipos (±) que ocurren entre hipotálamo-hipófisis y
glándulas endocrinas, hipotálamo, hipófisis y glándulas endocrinas con el timo, acción de las hormonas tímicas sobre los linfocitos
periféricos, efecto de hormonas provenientes de las diferentes glándulas endocrinas y de neuropéptidos ya sea origen central o
provenientes de terminaciones nerviosas periféricos, sobre los linfocitos maduros y posible acción de productos de linfocitos
sobre estructuras nerviosas y endocrinas.
B como T se ha demostrado la presencia de la metenkephalina sobre la función T. En efecto,

mRNA para la mayoría de las hormonas conoci- receptores opioides de alta afinidad han sido iden-
das. También se ha demostrado que las células tificados en líneas celulares linfoides de diferente
nodrizas del timo, son capaces de producir origen.
oxitocina y vasopresina, pudiendo así, postularse En la tabla 15-2 se presenta un resumen de
para el sistema inmune una función en la modu- los receptores para algunas hormonas y
lación del sistema endocrino y más aún su forti- neuropéptidos en células linfoides.
ficación directa en el "concierto endocrino" del
organismo. 2.6 Otras señales derivadas del sistema inmu-
ne con efecto en el sistema neuroendocrino
2.5 El sistema inmune tiene receptores para
hormonas y neuropéptidos El estudio de elementos del sistema inmune que
pueden afectar el sistema nervioso, sirviendo de
La real comunicación de hormonas y comunicadores entre ambos sistemas, se ha cen-
neuropéptidos con las células linfoides, necesita trado en las citoquinas, elementos clásicos de
de la demostración de receptores para estas subs- comunicación dentro del sistema inmune. Al res-
tancias. Así, las primeras evidencias de la exis- pecto se sabe que IL-1 aumenta los niveles de
tencia de receptores opioides en la membrana de ACTH y corticosterona en el torrente sanguí-
los linfocitos, surgieron de la demostración del neo de ratas y ratones, actuando directamente
efecto inmuno-modulador que posee la morfina y sobre la hipófisis y paralelamente estimulando
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la producción de factor liberador de el sistema neuroendocrino.
corticotrofina (CRF) en el hipotálamo. LH, Hormona luteinizante
Adicionalmente, IL-1 induce una hipofunción Otros mensajeros inmunológicos potenciales
de la glándula tiroides. Por otro lado, IL-6 y son serotonina e histamina producidos en grandes
TNF (Factor de necrosis tumoral) aumentan los cantidades en determinados procesos inmunes.
niveles de ACTH y junto con INF-γ se ha de- Fuera de los mediadores señalados existen múlti-
mostrado afectan los mecanismos regulado- ples otras substancias generadas en el sistema in-
res del sueño a nivel del SNC. En la tabla 15-3 mune, candidatos a ejercer funciones parecidas y
se presenta el efecto de diferentes citoquinas en cuyo efecto específico espera ser demostrado.
Tabla 15-2. Receptores para hormonas y neuropéptidos en células linfoides
Péptido Células que presentan receptores
Corticotropina Linfocitos T y B
Enkefalinas Linfocitos T y B
Endorfinas Linfocitos T y B
Tirotropina Linfocitos T
Hormona del Crecimiento Linfocitos T
Prolactina Linfocitos T, B y macrófagos
Oxitocina Timocitos
VIP Linfocitos T
Somatostatina Linfocitos T y B
Sustancia P Linfocitos T
Tabla 15-3. Efecto de citoquinas en el sistema neuroendocrino
Hormonas Neuroendocrinas
Citoquina ACTH TSH PRL GH LH
IL-1 E I E E I
IL-2 E E E I I
IL-6 E I O I O
IFN-γ E I O I Nd
TNF E I E E Nd
E, Estimula; I, Inhibición; O, Sin efecto; Nd, No determinado.

ACTH, Hormona adrenocorticotrofina; TSH, Tirotrofina; PRL, Prolactina; GH, Hormona del crecimiento;
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3. RESULTANTE DE LA INTERACCIÓN plasmáticos que se produce por esta vía. Sin em-
DEL SISTEMA NERVIOSO, SISTEMA bargo, reconociendo su importancia, parece ser que
ENDOCRINO Y EL SISTEMA INMUNE: los efectos inmunológicos del "stress" no obede-
EVIDENCIAS EN EL ORGANISMO cen sólo a esa causa, ya que cuidadosos estudios
VIVO QUE DEMUESTRAN SU EFECTO en animales adrenalectomizados con la correspon-
EN LA RESPUESTA INMUNE diente terapia de reemplazo, han dado resultados
controversiales.
Al considerar al organismo como un todo, y
mediante la evaluación de parámetros inmunoló- 3.2 Depresión e inmunidad
gicos se hace evidente los efectos que los siste-
mas nervioso y endocrino tienen sobre el sistema La depresión mayor es un cuadro de bastan-
linfoide. Sobresalen al respecto los efectos del te frecuencia. Está estrechamente asociado al
“stress”, de factores sociales, de drogas psicoac- stress considerándose como una respuesta exage-
tivas y de las hormonas sexuales. rada a él desde el punto de vista biológico y clíni-
co. La depresión se acompaña de cambios
3.1 Efecto del "stress" en la respuesta inmune neuroendocrinos, particular y notoriamente un
aumento en la actividad del eje hipotálamo-
En el hombre es conocido el efecto depresor hipófisis adrenal. Por otra parte las manifestacio-
que, sobre el sistema inmune, tienen los cambios nes de la depresión incluyen cambios en las fun-
en las relaciones interpersonales de los individuos. ciones vegetativas tales como sueño, apetito y
Ejemplos clásicos en este aspecto son el falleci- otras. Dado que hay muchas evidencias que las
miento de uno de los cónyuges o el divorcio. El citoquinas están involucradas en la mayoría de
efecto del "stress" crónico, como el de una fami- estas características de la depresión, es altamente
lia que cuida a alguno de sus miembros afectados probable su participación independiente del papel
de demencia, o individuos que sufren diversos de otros neurotransmisores.
grados de depresión, también es detectado por el
sistema inmune cuyos parámetros generales, en 3.3 Efecto de los factores sociales en la respues-
estos casos, están bajo la mediana de una pobla- ta inmune
ción normal. Los individuos bajo condiciones
estresantes presentan, en general, un mayor ries- En la especie humana se correlacionan po-
go a contraer enfermedades virales y representan sitivamente con una buena respuesta inmune: una
un grupo de riesgo en relación a la ocurrencia de buena calidad de vida, un entorno social agrada-
neoplasias. Los hallazgos más recurrentes en es- ble y una familia bien avenida. Esta correlación
tos casos son una pobre respuesta blastogénica de positiva aumenta si a esta condición se adiciona
los linfocitos periféricos, alteración de la relación un buen estatus socio-económico y un alto nivel
de los linfocitos T CD4+/CD8+ y una baja nota- de educación.
ble en el número de las células NK. Estudios en roedores demuestran, por otra par-
En animales, el efecto depresor del "stress" te, que el tamaño del grupo, su composición y gra-
en el sistema inmune ha sido probado mediante do de hacinamiento influyen en forma importante
un aumento de la morbilidad y mortalidad por en la respuesta inmune. También el aislamiento o
neoplasias inducidas o trasplantadas. la privación del contacto materno en los primeros
Los animales sometidos a "stress" presentan, días de vida inducen cambios medibles en la ma-
igual que en el hombre, alteraciones importantes duración del sistema inmune. Más aún, animales
en la respuesta de sus linfocitos a mitógenos, una mantenidos en un grupo cerrado muestran diferen-
marcada disminución del número relativo de las cias en sus parámetros inmunológicos de acuerdo
células NK en los órganos linfoides periféricos y a la jerarquía social que ocupan en la colonia.
alteraciones en las células macrofágicas, que de- Como corolario de esto, se puede suponer
muestran una menor capacidad fagocítica y una que los factores sociales que rodean a cada indi-
baja capacidad germicida intracelular. viduo influyen en su resistencia a las enfermeda-
Los efectos descritos tienden a explicarse, a des infecciosas, crecimiento de neoplasias y en-
menudo, por el efecto estimulador que tiene el fermedades autoinmunes, aún cuando este punto
"stress" sobre el eje hipotálamo-pituitaria-glándula requiere mayor investigación.
suprarrenal y al aumento de los corticoides
297
Sin título-2 297 5/26/06, 10:26 AM

3.4 Las drogas psicoactivas alteran el funcio- ductos de la respuesta inmune celular:
namiento del sistema linfoide
4.1 Efecto de los anticuerpos a nivel del siste-
Es conocido que los opiáceos, la cocaína y la ma nervioso
marihuana además de su efecto estimulatorio para
el SNC, ejercen un efecto depresor de diversos Los anticuerpos unidos a receptores de mem-
parámetros inmunológicos. En general, los fuma- brana de la célula nerviosa pueden bloquear, esti-
dores crónicos de marihuana al igual que los ani- mular o alterar la función de estas estructuras. Pue-
males de experimentación que recibieron 9- den, más aún, inducir lisis celular a través de la
tetrahidrocananbinol, uno de sus principios activación de la cascada del complemento, y jun-
psicoactivos más potentes, demuestran importan- to con esto mediante la acción de sus sub-pro-
tes alteraciones en el sistema macrofágico, una ductos moleculares puede amplificar y diversifi-
reducida respuesta blastogénica de los linfocitos car los efectos de la noxa primaria. Adicionalmente
T y B, un bajo porcentaje de células NK y baja los anticuerpos dirigidos contra estructuras
producción de IL-2 e IFNγ. Los efectos de la co- intracelulares pueden bloquear el transporte axonal
caína parecen ser aún más pronunciados. y causar otros trastornos en las células nerviosas.
3.5 Las hormonas sexuales modulan la respues- 4.2 Efecto de complejos antígeno-anticuerpo
ta autoinmune en el sistema nervioso central
El hecho que para la mayoría de las enfer- El depósito de complejos inmunes a nivel de
medades autoinmunes, el género más afectado sea vasos sanguíneos cerebrales, plexo coroídeo y
el femenino, tanto en el hombre como en los ani- neuronas, al activar la cascada del complemento
males de experimentación, permite suponer que altera la barrera hemato-encefálica y los produc-
las hormonas sexuales juegan un papel importan- tos bioactivos del complemento, al igual que en el
te en la patogénesis de estas enfermedades. Esta caso anterior, pueden producir inflamación y daño
noción se refuerza cuando se constata que el em- tisular local.
barazo o el climaterio cambia a menudo en las
mujeres el curso de la enfermedad autoinmune. 4.3 Rol patogénico de linfocitos T, macrófagos
En animales experimentales la gonadectomía o la y citoquinas en el tejido nervioso
administración de esteroides gonadales permite
demostrar claramente el papel inmuno-regulador La inmunidad celular, que a menudo tiene
de estos compuestos, el que puede ser ejercido di- como blanco componentes de la mielina o direc-
rectamente sobre las diversas subpoblaciones tamente constituyentes de las células neuronales,
linfocitarias o a través del efecto modulador que pueden generar infiltrados linfocitarios y/o
estas substancias tienen sobre la glándula tímica. monocíticos con una alta producción local de
citoquinas, que en suma producen destrucción o
4. ALGUNOS CASOS EN QUE EL SISTEMA alteración del tejido nervioso circundante.
INMUNE ORIGINA CAMBIOS O TRAS-
TORNOS EN EL SISTEMA NERVIOSO
LECTURAS SUGERIDAS
Por último, pero no menos importante para
la vida de los individuos, es posible afirmar que Adder, R, Felten, D. and Cohen, N. (Eds.)
una respuesta inmune persistente como la que se Psychoneuroimmunology, second edition,
da en las enfermedades autoinmunes o en las in- Academic Press Inc., 1991.
fecciones virales crónicas pueden alterar profun-
damente el funcionamiento del SNC, causando “Immune-neuroendocrinology, special issue”,
cambios en el comportamiento de hombres y ani- Immunol Today, 15: 503-552, 1994.
males, estados de letargo y aún demencia.
Los agentes desencadenantes de estos cua- Goetzl, E., Adelman, D.C. and Sreedharan, S.P.
dros neurológicos parecen ser fundamentalmente “Neuroimmunology”. Advances in Immunology
tres: anticuerpos que dan reacción cruzada con 48: 161-184, 1990.
estructuras del cerebro, complejos inmunes y pro-
298
Sin título-2 298 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 16
INMUNIDAD DE MUCOSAS
Ulises Vergara C. e Iván Palomo G.
1. Introducción
2. Sistema inmune de mucosas
2.1. Organización estructural
2.2. Transporte y presentación de
antígenos
3. Funciones efectoras de la inmuni-
dad de mucosas
3.1. Respuesta inmune de anticuerpos
3.2. Respuesta inmune celular
4. Inmunización a través de mucosas
4.1. Uso de adyuvantes
5. Tolerancia inducida a través de
mucosas
299
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300
Sin título-2 300 5/26/06, 10:26 AM

RESUMEN
El compartimiento más conocido del sistema inmune es el sistémico, sin embargo el com-
partimiento epitelial que agrupa los tejidos linfoides asociados a la piel, mucosas y glándulas
secretoras, tiene también gran importancia.
El tejido linfoide asociado a mucosas (MALT) se ubica en mucosas de los tractos
gastrointestinal, genitourinario y respiratorio. En los tractos intestinal y respiratorio son muy
importantes las células M, especializadas en el transporte de antígenos desde el epitelio que
tapiza los folículos linfocitarios, a los sitios de inducción de la respuesta inmune. Allí se encuen-
tran células dendríticas, que capturan y procesan los antígenos para ser presentados a los linfocitos
T (LT).
La respuesta inmune de mucosas puede ser de tipo humoral y/o celular. En el primer caso
tiene una fundamental participación la IgA de secreción. La inmunidad celular, por su parte,
junto con participar en la eliminación de microorganismos a través de LT específicos, proporcio-
na señales accesorias de coestimulación para la diferenciación de linfocitos B.
En este capítulo, además, se describe las características que tiene la inmunización a través
de mucosas y las diferencias que ésta presenta respecto de la inmunización vía sistémica.
1. INTRODUCCIÓN mariamente de isotipo IgA, que previenen la

entrada de agentes patógenos a través de mucosas.
Desde un punto de vista estructural, el siste- La respuesta inmune sistémica puede eliminar de
ma inmune puede separarse en dos compartimien- manera muy efectiva las infecciones sistémicas,
tos distintos y finamente regulados: (i) el com- pero generalmente falla en la protección de las
partimiento sistémico, que incluye a la médula superficies mucosas. Así, el desarrollo de una ac-
ósea, bazo y ganglios linfáticos y (ii) el compar- tiva respuesta inmune local, es esencial para la
timiento epitelial, que incluye tejido linfoide aso- prevención de la mayoría de las enfermedades in-
ciado a la piel, las superficies mucosas y glándu- fecciosas.
las secretoras (glándulas lagrimales, glándulas Las mucosas del tracto respiratorio y
salivales y glándulas mamarias). gastrointestinal están continuamente expuestas a
Cada compartimiento incluye tanto células una gran variedad de antígenos y macromoléculas,
asociadas a la respuesta inmune humoral, como pero un número muy limitado de ellas entran al
aquéllas asociadas a la respuesta inmune celular. organismo y causan enfermedad.
Sin embargo la naturaleza y propiedades de la Las barreras epiteliales representan la primera
respuesta inmune son distintas en cada comparti- línea de defensa contra el ambiente externo, rico
miento. Así, la inmunización a través de las en potenciales patógenos. Sin embargo, el tejido
mucosas resulta frecuentemente en la estimulación linfoide asociado a distintos epitelios difiere en
tanto de una respuesta a nivel de mucosas, como su organización celular y en las estrategias utili-
de una respuesta sistémica. La inmunización zadas en la captura y presentación de antígenos,
parenteral, en cambio, sólo induce una respuesta no sólo para proporcionar resistencia a distintos
sistémica, sin activación del sistema inmune aso- agentes infecciosos, sino también para distinguir
ciado a mucosas. Los anticuerpos asociados al entre agentes dañinos y substancias inocuas. Esto
compartimiento sistémico son principalmente de es particularmente importante en el tracto digesti-
isotipo IgG, cuya función se asocia, generalmen- vo, donde respuestas no deseadas contra antígenos
te, a la neutralización de agentes patógenos en el alimentarios o contra la flora intestinal, puede con-
torrente circulatorio. Los anticuerpos asociados al ducir a alergias alimentarias, inflamación y otros
compartimiento epitelial, son por el contrario, pri- problemas.
301
Sin título-2 301 5/26/06, 10:26 AM

Aun cuando la producción de anticuerpos marcadamente reducidos en animales de labora-
poliméricos (particularlmente IgA) constituye un torio mantenidos en un ambiente libre de gérme-
componente claramente importante del sistema nes y expandidos en condiciones de elevada
inmune de mucosas, la respuesta IgE está también estimulación antigénica.
asociada a la exposición a antígenos a través de
las mucosas (alergenos). Alergias alimentarias y 2.1. Organización estructural
asma son ejemplos comunes de reacciones me-
diadas por IgE en las mucosas. Además, existe una El tejido linfoide MALT incluye una colec-
subpoblación de linfocitos que residen en los ción de linfocitos y células accesorias ubicadas
epitelios (linfocitos intraepiteliales) y pueden cons- en el epitelio y lámina propia de las mucosas aso-
tituir la primera línea de defensa contra infeccio- ciadas a los tractos gastrointestinal, genitourinario
nes en las mucosas, cumpliendo tanto funciones y respiratorio. En el tracto gastrointestinal el teji-
efectoras citotóxicas como funciones reguladoras do linfoide (GALT: “Gut Associated Lymphoid
de la respuesta inmune. Las células citotóxicas son Tissue”), incluye las placas de Peyer, apéndice y
particularmente importantes en la protección con- nódulos linfoides aislados. En el tracto respirato-
tra infecciones virales que son comunes en las rio, el tejido linfoide incluye el tejido linfoide aso-
superficies mucosas. ciado a nasofaringe que está constituido por amíg-
Por último, la incorporación oral de antígenos dalas palatinas y adenoides (NALT:
puede inducir una tolerancia periférica antígeno- “Nasopharyngeal-Associated Lymphoid Tissue”)
específica, conocida como tolerancia oral. Esta y el tejido linfoide asociado al árbol bronquial
tolerancia oral prevendría las alergias alimentarias (BALT: “Bronchus-Associated Lymphoid
y las reacciones inflamatorias contra antígenos Tissue”).
inocuos derivados de la microflora normal y pue- En el tracto intestinal, la barrera epitelial está
de tener un enorme potencial en el tratamiento de formada por una capa única de células epiteliales
enfermedades autoinmunes y de enfermedades que contiene fundamentalmente enterocitos y cé-
inflamatorias. lulas globosas o caliciformes productoras de
mucus. Las células epiteliales están selladas por
uniones estrechas, en la región apical de sus mem-
2. SISTEMA INMUNE DE MUCOSAS branas. El tejido linfoide asociado a la mucosa
se ubica a lo largo del tracto gastrointestinal y
El sistema inmune de mucosas puede ser contiene folículos linfocitarios distribuidos indi-
morfológica y funcionalmente separado en dos ti- vidualmente o en forma de grupos que constitu-
pos de estructuras: (i) tejido estructuralmente or- yen estructuras organizadas como las placas de
ganizado en la forma de tejido linfoide asociado Peyer y el apéndice. El epitelio que tapiza los
a mucosas (MALT: “Mucosal-Associated folículos linfocitarios recibe el nombre de epite-
Lymphoid Tissue”) y (ii) tejido linfoide difuso lio asociado al folículo (FAE: “Follicle-
que consiste de linfocitos intraepiteliales y célu- Associated Epithelium”) y se distingue del epi-
las presentadoras de antígeno, localizados en la telio de otros sitios del intestino, por la presen-
lámina propia del tejido mucoso. El tejido MALT cia de células M especializadas en el transporte
representa las áreas linfoides aferentes o de antígenos, a los sitios de inducción de respues-
inductivas, donde se produce el encuentro con los ta inmune en las mucosas (figura 16-1). Estas cé-
antígenos, su captura y procesamiento por células lulas pueden ocupar hasta el 10% del epitelio FAE
presentadoras (células dendríticas subepiteliales en las placas de Peyer de humanos y ratones y
y macrófagos) y, una posterior y adecuada pre- hasta el 50% en conejos. Los enterocitos pue-
sentación a linfocitos T y B, para el desarrollo de den también realizar transcitosis de
una respuesta inmune efectiva. Por su parte, las macromoléculas y probablemente de partículas
regiones de tejido difuso representan las áreas inertes, pero este transporte parece muy poco efi-
linfoides eferentes donde los antígenos entran en ciente en la estimulación de una respuesta inmu-
contacto con células efectoras diferenciadas, ne, debido a que se realiza en sitios alejados del
anticuerpos y/o células citotóxicas. El desarrollo, tejido linfoide MALT.
tanto del tejido linfoide estructuralmente organi-
zado, como del tejido linfoide difuso, es altamen-
te antígeno dependiente, de manera tal que están
302
Sin título-2 302 5/26/06, 10:26 AM

mentos celulares necesarios para inducir y regular
una respuesta inmune, pero organizados de manera
tal que facilitan el desarrollo de inmunidad. Existen
áreas de linfocitos B (folículos B) que están rodea-
das por linfocitos T. Aunque los centros germinales
contienen linfocitos B en activa división, existen re-
lativamente pocas células plasmáticas en compara-
ción con sitios similares de ganglios linfáticos y bazo.
El área entre los folículos y el epitelio de la mucosa
intestinal es rica en linfocitos B, linfocitos T,
macrófagos y células dendríticas que están estraté-
gicamente ubicados para responder a los distintos
antígenos, bacterias o partículas transportadas a tra-
vés del epitelio mucoso especializado ubicado por
encima de las placas de Peyer.
En el tracto gastrointestinal, linfocitos activa-
dos en el tejido linfoide GALT y, probablemente
células presentadoras de antígeno, pueden además
migrar a los ganglios mesentéricos que drenan las
placas de Peyer, con la consiguiente expansión de
la respuesta inmune puesto que diferentes células
efectoras pueden ahora migrar a superficies
mucosas y otros tejidos. Células efectoras tal como
células productoras de IgA, linfocitos T “helper”
(LTh), linfocitos T citotóxicos, linfocitos Tγδ y otras
poblaciones celulares migrarán a la lámina propia
submucosa y al epitelio de la mucosa intestinal. La
Figura 16-1. La estructura general del tejido linfoide aso-
ciado a mucosas es representada por el esquema de una
región submucosa conocida como lámina propia,
sección transversal de placa de Peyer. El epitelio asociado es el sitio más importante de producción de
al tejido linfoide (FAE) tapiza los folículos linfocitarios (pla- anticuerpos en las superficies mucosas y, se ha es-
cas de Peyer) y se distingue del epitelio de otras regiones del timado que alrededor del 80% de las células pro-
intestino, por la presencia de células, especializadas en el trans-
porte de antígenos. La parte inferior de la figura, muestra un
ductoras de anticuerpos están localizadas en esta
esquema ampliado del epitelio FAE (“Follicle-Associated región de las mucosas (figura 16-2).
Epithelium”) con células M que presentan un número reduci-
do de microvellosidades irregulares en su región apical y una
profunda invaginación basolateral o bolsillo intraepitelial que
contiene linfocitos T, linfocitos B y eventualmente, macrófagos
o células dendríticas.
Las placas de Peyer, linfonódulos y apéndi-

ce son los mayores sitios de inducción de una res-
puesta inmune contra antígenos gastrointestinales
y microorganismos. Las placas de Peyer y otros
Figura 16-2. Representación esquemática de la respuesta
linfonódulos se encuentran a todo lo largo del inmune, en el tejido linfoide asociado a la mucosa intesti-
tracto gastrointestinal, y en un gran número en nal. Antígenos o bacterias son transportados a las placas de
colon y recto; existen aproximadamente 15 pla- Peyer por transcitosis a través de células epiteliales especiali-
zadas (células M). Células dendríticas capturan estos antígenos
cas de Peyer o linfonódulos por cm2 en el colon y
para su procesamiento y presentación a linfocitos foliculares.
25 por cm2 en el recto. Sin embargo, este número Linfocitos activados y eventualmente células presentadoras de
no es estable, dado que existe una reducción de antígeno migran luego a los ganglios linfáticos que drenan las
hasta el 50% en el número de placas de Peyer de placas de Peyer y, después de expansión y maduración, clones
linfocitarios migrarán a la lámina propia (linfocitos B com-
los 20 a los 50 años de edad.
prometidos en la producción de IgA) o al epitelio de la muco-
Las placas de Peyer contienen todos los ele- sa intestinal (linfocitos T citotóxicos).
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Sin título-2 303 5/26/06, 10:26 AM

2.2. Transporte y presentación de antígenos antigénica, los linfocitos B proliferan y diferen-
cian en células comprometidas en la síntesis y se-
La forma como los antígenos son adquiridos, creción de IgA, IgM e IgE.
procesados y presentados por células profesiona- Las células M se caracterizan por la presen-
les, es fundamental para la inducción de inmuni- cia de microvellosidades cortas, pequeñas vesí-
dad a nivel de epitelios y a nivel sistémico. culas citoplasmáticas y la existencia de un gran
El tejido linfoide asociado a mucosas es dominio membranoso endocítico para la incorpo-
morfológicamente distinto del tejido linfoide ración de macromoléculas, partículas y agentes
sistémico y recibe antígenos a través de los diver- patógenos. Sin embargo, las células M son alta-
sos epitelios, más que de la circulación linfática o mente selectivas y no permiten la entrada de to-
sanguínea. dos los antígenos o microorganismos. Así, sólo
El epitelio estratificado de la cavidad oral, patógenos y toxinas bacterianas que pueden esti-
amígdalas, faringe, esófago, uretra y vagina care- mular los mecanismos de transporte intracelular,
ce de uniones estrechas, pero la íntima asociación pueden atravesar el epitelio intestinal vía células
entre las células epiteliales y las glicoproteínas de M, para su captura, procesamiento y presentación
la matriz intercelular, determinan que los epitelios por células dendríticas y macrófagos alojados en
sean impermeables a la mayoría de los antígenos, los bolsillos intraepiteliales. La cara basolateral
agentes infecciosos y vacunas. Proteínas o de las células M está profundamente invaginada
macromoléculas no pueden difundir pasivamente formando un gran bolsillo intraepitelial a través
a través de estos epitelios estratificados. Por lo del cual se entregan por transcitosis macromo-
tanto, los antígenos son obtenidos por células léculas y partículas. Estos bolsillos intraepiteliales
dendríticas que migran y se prolongan hasta el lí- pueden contener linfocitos B, linfocitos T y even-
mite exterior del epitelio para capturar antígenos tualmente macrófagos o células dendríticas (figu-
y luego presentarlos en el tejido linfoide local o ra 16-1). De esta manera el transporte de antígenos
en un tejido linfoide distante. solubles y partículas a través de las células M,
En el tracto gastrointestinal, la inducción de constituye el primer paso en la inducción de una
una respuesta inmune requiere que antígenos, bac- respuesta inmune en las mucosas del tracto bron-
terias o partículas sean transportadas desde el quial y del tracto intestinal. Las células M son
lumen del epitelio hacia las placas de Peyer. La además, capaces de sintetizar IL-1 y, se ha sugeri-
superficie mucosa del intestino está cubierta por do que pueden proporcionar señales accesorias de
una capa única y continua de células epiteliales coestimulación para la activación de linfocitos T
selladas por uniones estrechas, y cubiertas por y linfocitos B, en el tejido linfoide asociado a la
un fuerte glicocalix formado por una capa de mucosa.
glicoproteínas ancladas a las membranas celula- Las Células dendríticas ubicadas en la región
res. Se agregan además mucinas, enzimas diges- subepitelial o domo de las placas de Peyer, son
tivas, lactoferrina, lisozima, péptidos antimicro- probablemente las células más importantes en el
bianos e IgA secretora, como mecanismos adicio- procesamiento y presentación de los antígenos
nales de protección de las superficies mucosas, transportados a través del epitelio y en la regula-
formando una formidable barrera contra potencia- ción de la respuesta inmune humoral y celular que
les patógenos y antígenos. pondrá en marcha en el tejido linfoide asociado a
En los epitelios simples del tracto intestinal la mucosa intestinal. Las células dendríticas están
y del tracto bronquial, en los cuales los espacios fundamentalmente posicionadas para capturar y
intercelulares están sellados por uniones estrechas, procesar antígenos solubles transportados por las
existen sin embargo, células epiteliales especiali- células M, mientras antígenos particulados y bac-
zadas (células M) que por transporte transepitelial terias serán fagocitados y procesados por los
desde el lumen, entregan macromoléculas, partí- macrófagos alojados en las invaginaciones de las
culas y microorganismos, directamente al tejido células M. Antígenos ya degradados serán luego
linfoide asociado a la mucosa. Luego de entrar al liberados por los macrófagos, para su captura y
tejido MALT, los antígenos son rápidamente cap- presentación por las células dendríticas
turados y procesados por células presentadoras de subepiteliales. Se produce así una colaboración
antígeno, tales como células dendríticas entre células dendríticas y macrófagos para la in-
subepiteliales y macrófagos, para su presentación ducción de una respuesta inmune protectora: los
a linfocitos T y B. Luego de la estimulación macrófagos inducirían fundamentalmente una res-
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Sin título-2 304 5/26/06, 10:26 AM

puesta Th1 con la consiguiente activación de nado componente secretor la protege de la acción
linfocitos T citotóxicos, mientras las células de proteasas en las secreciones (ver capítulo 6).
dendríticas serían responsables de la inducción de Luego de la activación por el antígeno, los
una respuesta Th2 con la consiguiente activación linfocitos B proliferan y hacen “switching”
de linfocitos B y un “switching” isotípico (cam- isotípico a células comprometidas en la produc-
bio de clase) preferencial hacia anticuerpos IgA ción de IgA, las cuales eventualmente abandonan
(ver capítulos 6 y 14). el tejido linfoide asociado a la mucosa y migran
al sitio inicial de inducción de la respuesta inmu-
ne para su diferenciación final en células
3. FUNCIONES EFECTORAS DE LA INMU- plasmáticas secretoras de IgA (figura 16-3). Así,
NIDAD DE MUCOSAS linfocitos B, comprometidos en la secreción de
IgA, migrarán desde el tejido linfoide
Luego de la estimulación antigénica en los nasofaríngeo, al tracto digestivo alto, mientras el
sitios de inducción, células efectoras antígeno es- tracto genitourinario recibe preferentemente cé-
pecíficas, abandonan el tejido MALT vía vasos lulas productoras de IgA desde el tracto digestivo
linfáticos aferentes y alcanzan la circulación san- bajo. El tracto gastrointestinal recibe en cambio
guínea vía conducto torácico. Desde ahí se dise- células desde GALT.
minan hacia los sitios efectores de respuesta in- La migración preferencial hacia las mucosas,
mune, en la lámina propia y el epitelio de mucosas de linfocitos estimulados en el tejido linfoide aso-
de los tractos respiratorio, gastrointestinal y ciado al epitelio, se asocia claramente a la expre-
genitourinario (figura 16-2). sión de moléculas de adhesión específicas en los
Las células efectoras incluyen células linfocitos y, de sus respectivos ligandos en célu-
plasmáticas productoras de IgA, células produc- las endoteliales de vasos sanguíneos de tejido
toras de IgM y, eventualmente células comprome- mucoso y/o en células epiteliales de la mucosa.
tidas en la síntesis y secreción de IgE. Se agregan La principal función de la IgA secretada es
linfocitos efectores Tαβ de colaboración y T mantener la integridad de las barreras mucosas de
citotóxicos, además de linfocitos Tγδ y otras cé- potenciales agentes infecciosos o tóxicos. En el
lulas. En adultos, alrededor del 80% de los lumen, la IgA secretada puede neutralizar virus,
linfocitos B activados, se localizan en la lámina toxinas bacterianas, enzimas y prevenir la entrada
propia. Los otros linfocitos residen en el epitelio de virus, la adherencia microbiana y la absorción
y se les conoce como linfocitos intraepiteliales, de antígenos.
que cumplen tanto funciones efectoras, como fun- Durante su transporte a través de las células
ciones inmunorreguladoras. epiteliales de las mucosas, los dímeros de IgA
pueden unir antígenos intracelulares e inhibir el
3.1. Respuesta inmune de anticuerpos ensamblaje de algunas partículas virales.
En la lámina propia, la IgA dimérica elimina
Una característica fundamental de la inmu- antígenos que cruzan la barrera epitelial, unién-
nidad de mucosas es la producción local de IgA, dose a ellos y transportándolos a lumen o vía
que constituye más del 80% de los anticuerpos en hepatocitos hacia el conducto biliar. Además, como
los tejidos mucosos, en los cuales son inducidos, consecuencia de su resistencia a la proteolisis y
transportados y regulados por mecanismos distin- alta avidez por el mucus, la IgA secretada retiene
tos de aquéllos que caracterizan a la inmunidad sus capacidades de unión y transporte en las
sistémica. secreciones mucosas.
La IgA de secreción es de primaria impor- Aunque la secreción de IgA es un compo-
tancia en la defensa inmunológica y actúa no sólo nente importante de la inmunidad de mucosas, la
en la resistencia a agentes patógenos restringidos respuesta mediadas por IgE está también asocia-
a mucosas, sino también contra microorganismos da con la exposición transmucosal a antígenos
que producen infecciones sistémicas, a pesar que (alergenos). Alergias alimentarias y asma, son
inicialmente colonizan superficies mucosas (es- ejemplos comunes de reacciones mediadas por
pecialmente en los tractos respiratorio o IgE, luego de la exposición a antígenos en las su-
gastrointestinal). perficies mucosas. Respuestas IgE específicas, son
La IgA de secreción corresponde a un también importantes en la defensa contra enfer-
homodímero unido por una cadena J; el denomi- medades parasitarias.
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Figura 16-3. Movilización de linfocitos desde sitios de inducción de la respuesta inmune en los tejidos inmunes MALT a los
sitios efectores de la respuesta inmune. Luego de la estimulación antigénica en los sitios de inducción de una respuesta inmune
en las mucosas (GALT, BAT, NALT), linfocitos activados células abandonan el tejido linfoide vía vasos linfáticos aferentes, para
alcanzar la circulación sanguínea a través del conducto torácico. Vía sistémica, los distintos clones linfocitarios pueden ahora
diseminarse a los distintos sitios efectores de la respuesta inmune (epitelio y lámina propia de mucosas y glándulas excretoras).
3.2. Respuesta inmune celular sadas por células dendríticas y/o macrófagos.
Linfocitos Th1, linfocitos Th2 o una combinación
La inducción de una respuesta inmune efec- de ambos, parecen importantes en la mantención
tiva a nivel de mucosas, requiere la activación de de la respuesta IgA secretada. La respuesta Th2
linfocitos T específicos, los cuales no sólo contri- es importante para la diferenciación terminal de
buyen a la eliminación de infecciones, sino tam- los linfocitos B y citoquinas como interferón
bién proporcionan las señales accesorias de gamma (IFN-γ) producida por linfocitos Th1,
coestimulación para la diferenciación de linfocitos parece inducir la expresión del receptor de Ig
B, en células productoras de IgA o IgE y la secre- poliméricas, requerido para el transporte de IgA
ción de citoquinas y quimioquinas esenciales en en las mucosas. La inducción de una respuesta Th1
el desarrollo de la respuesta inmune. es esencial en la protección contra patógenos
intracelulares. La respuesta Th2 en cambio, pare-
Linfocitos Th. Los LTh son mediadores cruciales ce más importante en la protección de patógenos
en la inducción de una respuesta inmune humoral como Helicobacter pylori y de parásitos helmintos
y/o celular a nivel de mucosas y su polarización y en el control de enfermedades inmunomediadas
hacia linfocitos Th1 o Th2 está influenciada por como los desórdenes autoinmunes órgano-espe-
citoquinas, quimioquinas y otras moléculas expre- cíficos y la enfermedad de Crohn.
306
Sin título-2 306 5/26/06, 10:26 AM

La subpoblación Th2 proporciona señales ac- 4. INMUNIZACIÓN A TRAVÉS DE
cesorias de coestimulación para la activación de MUCOSAS
linfocitos B y el cambio de clase hacia anticuerpos
de isotipos IgA e IgE, mediante la expresión de La estimulación adecuada del sistema inmu-
moléculas de adhesión y la secreción de ne asociado a la mucosa es un requisito indispen-
citoquinas como IL-4, IL-5, IL-6 IL-10 e IL-13. sable para el desarrollo de una protección efecti-
Aunque las citoquinas Th2 desempeñan un rol va de las superficies mucosas contra la coloniza-
importante en la diferenciación de linfocitos B ción e invasión por diferentes agentes patógenos.
comprometidos en la producción de IgA, el factor La eficacia con la cual los antígenos admi-
transformante beta (TGF-β), producido por LTh1 nistrados por vía oral son transportados a través
y otras células, es fundamental en el “switching” del epitelio intestinal depende de la sobrevida de
IgA. Desafortunadamente, TGF-β también supri- las moléculas en el ambiente hostil del tracto
me la proliferación de linfocitos y así, ratones de- gastrointestinal. El acceso a la membrana de las
ficientes en este factor, mueren como consecuen- células epiteliales es inhibido por la capa de mucus,
cia de una masiva enfermedad linfoproliferativa por el empaquetamiento apretado de las
dentro de las primeras 4 semanas de vida. microvellosidades y por el glicocalix celular. To-
La subpoblación Th1 en cambio, se caracte- das estas estructuras en conjunto retienen diver-
riza por la secreción de IL-12, linfotoxina, factor sas enzimas y crean un ambiente altamente
estimulador de colonias granulocito-monocito degradativo en la región apical de las células
(GM-CSF) e IFN-γ y determina la inmunidad ce- epiteliales y se hace, por lo tanto, indispensable
lular regulando la función de macrófagos y célu- que los antígenos persistan en el lumen intestinal
las T citotóxicas, que resultan particularmente el tiempo necesario para un eficiente contacto con
importantes en el control de agentes patógenos las células epiteliales y su posterior transporte
intracelulares que penetran las mucosas. Los hacia el tejido MALT.
linfocitos Th1 estimulan además el “switching” Como consecuencia de lo anterior, el desa-
isotípico hacia subclases de IgG, que caracteriza rrollo de un sistema exitoso de inmunización a tra-
la respuesta sistémica inducida como consecuen- vés de las mucosas debe cumplir una serie de re-
cia secundaria de la activación del sistema inmu- querimientos: (i) el sistema debe ser resistente al
ne asociado a mucosas. ambiente enzimático y hostil del tracto
Luego de su transporte a través de células M, gastrointestinal y debe ser capaz de guiar los
bacterias intracelulares que afectan la mucosa del antígenos a través de la capa mucosa hasta los si-
tracto intestinal (como Salmonella), penetran en tios de inducción que contienen células presenta-
las placas de Peyer para infectar y sobrevivir en doras de antígeno para el desarrollo de una res-
los macrófagos. Macrófagos infectados produci- puesta inmune efectiva y no de tolerancia, (ii) la
rán IL-12 que promueve el desarrollo de una res- respuesta debe inducir inmunidad local en la mu-
puesta Th1 con la consiguiente producción de cosa (y en algunos casos en sitios efectores de
linfotoxina e IFN-γ que determinan la activación mucosas distantes), además del desarrollo de una
de los macrófagos infectados y de linfocitos T fuerte inmunidad sistémica y (iii) debe activar
citotóxicos. mecanismos efectores que incluyan la producción
de citoquinas y el desarrollo de una respuesta lo-
Linfocitos Tc. En la mucosa del tracto intestinal, cal (anticuerpos IgA) y sistémica (IgG) y de una
cerca del 80% de los linfocitos intraepiteliales respuesta Th1 que incluya la activación de
pertenecen a la subpoblación Tαβ CD8+, en con- linfocitos T citotóxicos para la protección contra
traste a lo que ocurre en la lámina propia, donde agentes infecciosos intracelulares.
la mayoría de los linfocitos T residentes pertene- Se han desarrollado así, diversas estrategias
cen a la subpoblación Tαβ CD4+. para prolongar la permanencia en el intestino de
Los linfocitos T de la subpoblación Tγδ, pue- drogas y vacunas administradas por vía oral. Se
de alcanzar hasta el 50% de los linfocitos han utilizado, por ejemplo, bioadhesinas como
intraepiteliales en algunas cepas de ratones; pero lectinas y adhesinas bacterianas que se unen al
en humanos los linfocitos Tγδ pueden constituir mucus intestinal (muco-adhesinas) o a la región
sólo cerca del 13% de los linfocitos apical de las células del epitelio intestinal. De
intraepiteliales manera similar se han desarrollado partículas sin-
téticas como liposomas, ISCOMs (“Immune
307
Sin título-2 307 5/26/06, 10:26 AM

Stimulating Complex”) y micropartículas del génicos y requieren, por lo tanto, adyuvantes
copolímero poli-DL-lactide-co-glycolide, y diver- que al ser coadministrados con los antígenos,
sos vehículos recombinantes vivos, de origen viral estimularán el desarrollo de una respuesta in-
(Vaccinia, Herpes, Adenovirus, Poxvirus) o mune protectora.
bacteriano (Salmonella), destinados a la protección Los adyuvantes pueden aumentar la vida
de los antígenos recombinantes extraños, del am- biológica o inmunogénica de los distintos
biente hostil intraluminal del intestino. Además la antígenos, facilitar su transporte y captura a tra-
conjugación de antígenos con ligandos como vés de los epitelios, estimular la producción de
lectinas, adhesimas microbianas o anticuerpos, que citoquinas y el desarrollo de una respuesta Th1
se unen a receptores de membrana de las células y/o Th2.
M, constituyen una excelente estrategia para facili- En la tabla 16-1 se muestra algunos
tar el transporte de antígenos a través del epitelio. adyuvantes que se han usado con éxito en di-
ferentes modelos experimentales y utilizando
4.1. Uso de adyuvantes distintas vías de inmunización a través de
mucosas.
Los antígenos administrados a través de las
mucosas, son generalmente poco inmuno-
Tabla 16-1. Adyuvantes que, coadministrados en el antígeno, estimulan

el sistema inmune asociado a mucosas
Adyuvante Modelo experimental Ruta de inmunización Antígeno utilizado
Toxinas bacterianas* Ratón Oral o intranasal Virus papiloma humano
Ratón Intranasal Proteína de H. nfluenzae

Ratón Oral Ureasa recombinante de
H. pylori
Ratón Intranasal Péptido sintético de Virus
Respiratorio Sincicial
IL-12 Ratón Intranasal Vacuna influenza
Toxina tetánica
Muramyl dipéptido Ratón Oral, intranasal Rotavirus y Virus Sendai
Rata Intraintestinal Porina de N. gonorrhoeae
CpG oligonucleótidos Ratón Intranasal Ag superficie Hepatitis B
Avridina Ratón Oral Virus influenza muertos
Rata Intraintestinal Toxina del cólera
Monofosforil- Ratón Intraintestinal Ovoalbúmina
Lípido A Rata Intraintestinal Toxina del cólera
Alúmina Ratón Intranasal Toxoide tetánico
MF59 Ratón Intranasal Subunidad de vacuna
virus influenza
Ratón Intranasal Proteína envoltura Virus
Respiratorio Sincicial
* Toxina del cólera producida por V. cholerae y Tóxina lábil al calor producida por E. coli.
ISCOM, “Immune Stimulating Complex”.
308
Sin título-2 308 5/26/06, 10:26 AM

5. TOLERANCIA INDUCIDA A TRAVÉS DE Chen, H., “Recent advances in mucosal vaccine
MUCOSAS development”, J. Controll. Rel. 67: 117-128, 2000.
La infección con patógenos que afectan las Hoyne, G. F., et al., “Immunological tolerance to
mucosas conduce generalmente al desarrollo de inhaled antigens”, Am. J. Respir. Crit. Care Med.
una activa respuesta inmune protectora. Sin em- 162: 5169-5174, 2000.
bargo, la administración oral de antígenos solubles
puede conducir al fenómeno llamado tolerancia Jepson, M.A., Clark, M.A. “Studying M cells in
oral, que se caracteriza por la ausencia de Peyer’s patches of the intestine”, Int. Rev. Cytol.
respuesta inmune periférica, luego de la 167: 91-159, 1998.
inoculación sistémica del mismo antígeno.
La tolerancia oral parece afectar tanto a la Kaiserlian, D., Etchart, N., “Entry sites for oral
inmunidad humoral como a la inmunidad celular, vaccines and drugs: a role for M cells, enterocytes
pero el tipo de respuesta tolerada parece depender and dendritic cells?, Semin. Immunol. 11: 217-224,
de la naturaleza del antígeno y de su forma de 1999.
ingestión. Así, la respuesta celular y la respuesta
humoral mediada por IgE se hacen fácilmente Kraehenbuhl, J.P., Neutra, M.R., “Epithelial M
tolerantes con bajas dosis de antígeno. La cells: Differentiation and function”. Annu. Rev.
tolerancia de tipo IgM o IgG ocurre en cambio, Cell. Dev. Biol. 16: 301-332, 2000.
con altas dosis de antígeno.
La tolerancia oral puede producirse por McCluskie, M.J., Davis, H.L. “Mucosal immuni-
delección de clones linfocitarios, anergia clonal o zation with DNA vaccines”, Microbes and Infec-
debido a una activa supresión de la respuesta inmune tion 1: 685-698, 1999.
producida por factores liberados por linfocitos T
(Ej.:TGF-β). La tolerancia oral, mediada por aner- Reseigno, M., Borrow,P. “The host-pathogen in-
gia o delección clonal, se produce fundamental- teraction: New Themes from Dendritic Cell Biol-
mente a altas dosis de antígeno. La ingestión de ogy”, Cell 106: 267-270, 2001.
bajas dosis de antígeno, conduce en cambio a
tolerancia mediada por subpoblaciones linfocitarias Strobel, S., Mowat, A.M., “Immune response to
T CD4+ y T CD8+ que suprimen activamente el dietary antigens: oral tolerance”. Immunol. Today
desarrollo de una respuesta inmune o de una 19: 173-181.,1998.
respuesta inflamatoria.
Aun cuando la tolerancia puede constituir una Vasquez-Torres, A., Fang, F.C., “Cellular routes
dificultad en el desarrollo de vacunas que se of invasion by enteropathogens” Curr. Opin.
administren por vía oral, la habilidad de la tolerancia Immunol. 3: 54-59, 2000.
oral para prevenir reacciones adversas puede
utilizarse para tratar diferentes enfermedades
inmunológicas y/o inflamatorias, incluyendo
enfermedades autoinmunes y el rechazo al
trasplante de tejidos.
LECTURAS SUGERIDAS
Brandtzaeg, P., et al., “Regional specialization in

the mucosal immune system: what happens in the
microcompartments?”, Immunol. Today 20: 141-
151, 1999.
Brandtzaeg, P., Farstad, I.N., Haraldsen, G., “Re-

gional specialization in the mucosal immune sys-
tem: primed do not always home along the same
track”, Immunol Today 20: 267-277, 1999.
309
Sin título-2 309 5/26/06, 10:26 AM

310
Sin título-2 310 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 17
INMUNOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN
Mónica Imarai B. y Juana Villegas M.
1. Introducción 4. El sistema inmune local en el em-

2. El sistema inmune asociado a la barazo
mucosa reproductiva 4.1. La Interfase materno fetal
2.1. El sistema inmune asociado a la 4.2. Expresión de MHC en las célu-
mucosa reproductiva de la hem- las trofoblásticas
bra 4.3. Las células NK de la decidua
2.2. El sistema inmune asociado a la 4.4. Los linfocitos T de la decidua
mucosa reproductiva del macho 4.5. Citoquinas en la preñez
3. Inducción de la respuesta inmune 5. Factores inmunológicos que afectan
en la mucosa reproductiva la fertilidad
3.1. Inducción de la respuesta inmu- 5.1. Aborto espontáneo recurrente de
ne en la mucosa reproductiva de causa inexplicada
la hembra 5.2. Anticuerpos antiespermáticos
3.2. Respuesta inmune a las infeccio-
nes en la mucosa reproductiva de
la mujer
311
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312
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RESUMEN
El sistema inmune asociado a la mucosa reproductiva de los mamíferos constituye la pri-

mera línea de defensa frente a infecciones que afectan al tracto reproductor. Las células
inmunocompetentes presentes en la mucosa reproductiva del macho y de la hembra (incluido el
ser humano), están constituidas por linfocitos T y B, macrófagos, células dendríticas, y en el
útero, por células pertenecientes al linaje de las células NK. Los microorganismos patógenos
infectan a través de los epitelios y pueden alcanzar las células del estroma, en donde células
presentadoras como los macrófagos y células dendríticas inducen la respuesta inmune. Algunos
de los epitelios que expresan MHC clase II podrían también presentar antígenos al sistema
inmune. La inmunidad humoral mediada por IgA e IgG juega un papel fundamental en la protec-
ción a la infección por algunos microorganismos como N. gonorrhoeae, mientras que para
microorganismos de infección intracelular como Chlamydias y virus Herpes, la inmunidad me-
diada por células (Th1), tiene una función importante en la eliminación del patógeno. En los
mamíferos, la capacidad del sistema inmune local de reconocer y eliminar elementos
inmunológicamente extraños debe regularse para evitar el rechazo del feto durante el embarazo o
preñez. Algunos mecanismos parecen estar relacionados con la ausencia de MHC clase II y clase
I polimórficos en el tejido fetal que se encuentra en contacto con las células inmunocompetentes
maternas (trofoblasto). Además, la presencia de MHC clase I no polimórficos en el trofoblasto,
podría mantener señales inhibitorias para la población NK de la decidua, que son las células
inmunocompetentes más abundantes durante la preñez. Por otro lado, la desviación de la res-
puesta inmune hacia la activación de células Th2 y la presencia de citoquinas inmunosupresoras
también contribuyen a mantener una relación de tolerancia al feto. Alteraciones de esta condi-
ción de inmunotolerancia podrían generar algunas patologías del embarazo en la mujer como el
aborto espontáneo recurrente y tanto en mujeres como en hombres, infertilidad mediada por
anticuerpos antiespermáticos.
1. INTRODUCCIÓN canismos de regulación que llevan a la madre

a tolerar al feto, en la creencia de que este co-
Dos de las más interesantes áreas del conocimiento permitirá desarrollar exitosas tera-
nocimiento en el campo de la Inmunología de pias de tratamiento para la infertilidad. En este
la Reproducción son la respuesta inmune a las capítulo se describe el sistema inmune local
infecciones del tejido reproductivo y la asociado a la mucosa reproductiva del macho
inmunobiología del embarazo o preñez. La pro- y de la hembra y la inducción de respuesta in-
blemática de las infecciones por diversos mune frente a algunos microorganismos. Ade-
microorganismos patógenos que producen en- más, se analiza las características del sistema
fermedades de transmisión sexual, entre las que inmune local de la madre durante el embarazo
se incluye el SIDA, ha motivado el desarrollo y la posible regulación relacionada con los te-
de la investigación destinada a caracterizar el jidos fetales. Por último, se describe algunos
sistema inmune local asociado a la mucosa aspectos del sistema inmune local que se aso-
reproductiva, conocer los mecanismos de in- cian a infertilidad.
ducción de respuesta inmune local y los meca-
nismos de inmunidad frente a las infecciones.
Por otro lado, se ha desarrollado un creciente
interés en entender cómo opera el sistema in-
mune durante el embarazo y los complejos me-
313
Sin título-2 313 5/26/06, 10:26 AM

2. EL SISTEMA INMUNE ASOCIADO A LA los agregados leucocitarios. En el estrato funcio-
MUCOSA REPRODUCTIVA nal del endometrio, los leucocitos son linfocitos
T, macrófagos y linfocitos granulares grandes
2.1. El sistema inmune asociado a la mucosa (LGL: CD56+ CD16-). Estas células LGL son una
reproductiva de la hembra población característica del endometrio y perte-
necen al linaje de las células NK. Por su parte, los
En la hembra de especies como el ratón, la linfocitos B, células plasmáticas y células NK con-
rata y en la especie humana, los leucocitos son vencionales, son muy escasos en este tejido y los
componentes normales de la mucosa del oviduc- granulocitos polimorfonucleares sólo aparecen
to, útero y vagina. Los leucocitos son linfocitos T durante la menstruación. En esta zona del
del fenotipo CD4+ y CD8+, macrófagos y endometrio, la proporción y distribución de los
granulocitos, y se encuentran dispersos en el leucocitos varía según la fase del ciclo (figura 17-
estroma de la mucosa. También se encuentran 1). En la fase proliferativa y secretora temprana,
linfocitos distribuidos en el tejido epitelial. Los los leucocitos constituyen el 10% de las células
leucocitos propios de la mucosa reproductiva tam- totales del estroma y se encuentran más bien dis-
bién residen en los ganglios linfáticos regionales persos en el tejido, mientras que en la fase secretora
que drenan estos órganos, pudiendo recircular a tardía, éstos constituyen más del 20% de las célu-
otros tejidos mucosos (ver capítulo 16). las estromales y se encuentran agregadas, adya-
En la mujer, el tejido linfoide del útero tiene centes a las glándulas y vasos sanguíneos. Este
características que dependen del ciclo menstrual. incremento se debe en gran parte al aumento de
En el estrato basal del endometrio, que no presen- LGL y a un pequeño aumento en el número de
ta variación con el ciclo, la población leucocitaria macrófagos. Los linfocitos T, dispersos en el
corresponde principalmente a linfocitos T, estroma, epitelio glandular y superficial del
linfocitos B, macrófagos y ocasionalmente célu- endometrio, no varían durante las fases del ciclo
las “natural killer” (NK). Los leucocitos se encuen- menstrual.
tran en agregados, generalmente adyacentes a las Tal como ocurre en la mucosa gastrointestinal
glándulas y dispersos en el estroma, con excep- y respiratoria, el sistema inmune local del tracto
ción de los linfocitos B que sólo se encuentran en reproductor responde frente a los antígenos
Figura 17-1 Variación de las poblaciones leucocitarias en el estrato funcional del endometrio durante las fases del ciclo
menstrual y embarazo temprano. La población leucocitaria del endometrio aumenta en la fase secretora del ciclo menstrual.
Los leucocitos que aumentan son los linfocitos granulares grandes (LGL) y, en menor magnitud, los macrófagos.
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Sin título-2 314 5/26/06, 10:26 AM

secretando inmunoglobulinas a la superficie mu- ducen y secretan IgA en la mucosa reproductiva
cosa. En estos sitios, la primera línea de defensa de la mujer son principalmente el oviducto y el
frente a las infecciones son las inmunoglobulinas. endocervix. En el útero, las células plasmáticas
En la mucosa reproductiva de la mujer, las productoras de IgA son más bien escasas por lo
inmunoglobulinas están presentes en el fluido que en este órgano la IgA debe ser transportada
oviductal, secreción uterina, moco cervical, flui- desde el suero. Una excepción notoria a la gene-
do cervico-vaginal y fluido vaginal. Las ralidad de las especies es la que se observa en el
inmunoglobulinas secretadas son del isotipo IgG útero del ratón, donde el estroma uterino contiene
e IgA y, en menor proporción, IgM. La IgG es numerosas células plasmáticas productoras de IgA,
transferida desde el suero por difusión intercelular, lo que asociado a la presencia del receptor en el
endocitosis de fase fluida y otros mecanismos que epitelio indica que esta inmunoglobulina se pro-
en conjunto se denominan transudación. La IgA duce localmente. No se conoce el significado fi-
se produce localmente en las células plasmáticas siológico de estas diferencias entre especies.
del estroma de la mucosa reproductiva y se une al Aparte de las inmunoglobulinas, en los ór-
receptor de inmunoglobulinas poliméricas presen- ganos reproductivos de la hembra se produce una
te en la cara basal del epitelio de estos órganos. gran variedad de citoquinas (ver capítulo 11). Las
El complejo IgA-receptor es transportado en ve- citoquinas tienen la función de promover la proli-
sículas a través del epitelio y la inmunoglobulina feración celular y recambio del tejido, de estable-
es liberada en el lumen unida a un polipéptido cer comunicación entre las células y entre los sis-
derivado de la proteólisis del receptor. Este temas reproductivo e inmune y de regular la res-
polipéptido se denomina componente secretor y puesta inmune local. Todas estas funciones son
permanece unido a la IgA. Esta forma de necesarias en el tracto reproductor. En el útero de
inmunoglobulina se denomina IgA secretada la mujer se sintetizan en abundancia Factor
(IgAs) (ver capítulo 6). estimulador de colonias 1 (CSF-1), Factor de cre-
La presencia de células plasmáticas produc- cimiento epidermal (EGF), Factor de crecimiento
toras de IgA y del receptor de inmunoglobulinas de fibroblastos (FGF), Factor de necrosis tumoral
poliméricas (receptor Igp), no es uniforme en los α (TNF-α), Factor transformador de crecimiento
diferentes órganos del tracto reproductor de la α (TGF-α), Interleuquina 1 (IL-1), Interleuquina
mujer, existiendo además importantes diferencias 2 (IL-2), Interferón γ (IFNγ) y Factor transforma-
entre especies (tabla 17-1). En el oviducto, dor de crecimiento β (TGF-β). Algunas de las fun-
endocervix y vagina de la mujer existen numero- ciones propuestas para estas citoquinas son el re-
sas células plasmáticas productoras de IgA, pero clutamiento de macrófagos, estimulación o inhi-
el receptor Igp sólo se encuentra en el epitelio bición de la proliferación, angiogénesis, diferen-
columnar simple del oviducto y endocervix y no ciación trofoblástica, desarrollo del miometrio,
existe en los epitelios estratificados de la vagina y función en la implantación y menstruación, etc.
ectocervix. Esto indica que los órganos que pro- Algunos de los genes que codifican para estas
Tabla 17-1. Células plasmáticas (CP) secretoras de IgA y componente secretor (CS), en el tracto
reproductor de la mujer
Especie Oviducto Útero Cervix Vagina
CP CS CP CS CP CS CP CS
Humana + + - + ++ +/- + Trazas

Ratón + ND ++ + +/- + +/- +
Rata ND ND - + - + - +
Equina + - + + + - + -
ND: no determinado
Tabla adaptada de Parr MB, Parr EL (1997)
315
Sin título-2 315 5/26/06, 10:26 AM

citoquinas contienen sitios de respuesta a de experimentación. Por lo tanto, en esta sección
estrógenos, indicando que en los órganos sólo se describe la respuesta inmune local en el
reproductivos existe una relación de regulación tracto reproductor femenino.
muy estrecha entre los niveles de hormonas
esteroidales sexuales y las citoquinas producidas 3.1. Inducción de la respuesta inmune en la
localmente. Los niveles de estradiol y/o mucosa reproductiva de la hembra
progesterona regulan la síntesis uterina de CSF-1,
EGF, FGF, TNFα, TGFα, IL-6 e IFNγ. Una etapa crítica en la inducción de la res-
puesta inmune es la incorporación y presentación
2.2. El sistema inmune asociado a la mucosa de antígenos. En el tracto reproductor femenino,
reproductiva del macho el antígeno se incorpora a la mucosa a través del
epitelio donde aparentemente no existen células
El tejido mucoso del epidídimo, de glándu- especializadas para ello, como son las células M
las accesorias (próstata, vesícula seminal y glán- del intestino delgado. Donde mejor se ha descrito
dula bulbo-uretral) y de la uretra del hombre, con- este proceso es en el ratón. La incorporación del
tiene también las células efectoras y presentado- antígeno al epitelio en la vagina y cervix del ratón
ras del sistema inmune, tales como macrófagos, es dependiente de los niveles de estradiol y
linfocitos T CD4+ y linfocitos T CD8+. Además, progesterona, de manera que ésta ocurre en ma-
la uretra contiene gran número de células yor magnitud en diestro y preñez temprana. Las
plasmáticas productoras de IgA indicando que este proteínas presentes en el útero del ratón y rata,
órgano, que es puerta de entrada para infecciones son endocitadas en el epitelio en períodos
por diversos microorganismos, tiene gran activi- progestacionales, incluyendo preñez temprana y
dad en la respuesta inmune local. también en sitios inyectados con progesterona.
La secreción prostática y líquido seminal Durante el estro y después de la administración
contienen inmunoglobulinas del isotipo IgG e IgA. de estradiol no se produce incorporación de pro-
También puede detectarse pequeñas cantidades de teínas al epitelio. Las células epiteliales del cervix,
IgM en el fluido prostático. La presencia de com- útero y oviducto de varias otras especies, inclu-
ponente secretor asociado a la IgA indica que este yendo el humano, también endocitan proteínas,
isotipo de inmunoglobulina es de origen local. La partículas y bacterias. En estos casos, no está cla-
uretra masculina también contribuye a la produc- ramente definida la influencia de las hormonas
ción local de inmunoglobulinas ya que, además esteroidales sexuales en el proceso.
de las células plasmáticas productoras de IgA, Una vez que el antígeno ha ingresado al
contiene el receptor Igp, presente además en el estroma de la mucosa, las células presentadoras
tejido epitelial. de antígenos que infiltran el tejido (células de
Varias citoquinas son sintetizadas en el testí- Langerhans, células dendríticas y macrófagos),
culo y glándulas accesorias. Algunas como CFS- pueden a su vez incorporar, procesar y presentar
1, IFN-α, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, TNFα y TGFβ el antígeno a los linfocitos de la mucosa o de los
podrían tener funciones de regulación de la res- glanglios regionales, induciendo la respuesta in-
puesta inmune local de la mucosa reproductiva mune local. Se ha postulado que las células
masculina. Sin embargo, esto sólo se ha demos- epiteliales también pueden procesar y presentar
trado en el caso de CFS-1, porque los ratones de- antígenos. El epitelio uterino y oviductal de la
ficientes en CSF-1 “knock-out”, presentan ausen- mujer y hembras de otras especies, contienen en
cia o extremada disminución de macrófagos en el su superficie moléculas MHC de clase II y molé-
tejido reproductivo. culas coestimuladoras como ICAM-1 e ICAM-2
(ICAM: Molécula de adhesión intercelular). Sin
embargo, hasta la fecha no hay evidencias direc-
3. INDUCCIÓN DE LA RESPUESTA INMU- tas que demuestren que estas células epiteliales
NE EN LA MUCOSA REPRODUCTIVA induzcan efectivamente activación de linfocitos T
frente a un antígeno específico.
La inducción de la respuesta inmune en las Los estudios realizados en la mujer y en ani-
mucosas del sistema reproductor se conoce mu- males de experimentación revelan que después de
cho mejor en el tracto reproductor de la mujer y la inmunización local con proteínas y microorga-
de las hembras de algunas especies de animales nismos, se puede inducir secreción de inmunoglo-
316
Sin título-2 316 5/26/06, 10:26 AM

bulinas específicas (IgA e IgG), en la mucosa de tipo celular, mediada por linfocitos Th1 y por
reproductiva. Esto indica que en este tejido mu- linfocitos T CD8+. En la respuesta de tipo humo-
coso existen todos los elementos para la presenta- ral, se producen anticuerpos contra la proteína prin-
ción y reconocimiento del antígeno. Cuando la cipal de membrana externa. Las inmunoglobulinas
inmunización se realiza vía sistémica se produce específicas son secretadas y se detectan en el moco
una baja o nula respuesta en la mucosa, mientras cervical de la mujer. Estos anticuerpos neutrali-
que la inmunización en otros tejidos mucosos zan la infección de células en cultivo o la infec-
como el rectal y la cavidad peritoneal, produce ción de animales de experimentación, además, la
incluso mejores niveles de respuesta en la muco- presencia de estos anticuerpos en las secreciones
sa reproductiva. Esto se debe a que existe un sis- se correlaciona con un menor número de
tema inmune mucoso común, en el que las células Chlamydias recuperadas desde el cuello uterino.
inmunocompetentes circulan y colonizan todos los Esta correlación no se produce con las
tejidos mucosos (ver capítulo 16). imunoglobulinas IgG e IgM específicas presentes
La inducción de respuesta inmune celular me- en el suero, sugiriendo que son los anticuerpos
diada por los linfocitos “helper” tipo Th1 (ver ca- producidos localmente, presentes en las
pítulos 11 y 14) también ocurre en la mucosa secreciones del tracto reproductor, los que están
reproductiva de la mujer y de animales de experi- involucrados en la eliminación del patógeno. Res-
mentación. Los linfocitos Th1 estimulan la acti- pecto a la respuesta inmune celular, se ha demos-
vación de macrófagos, linfocitos citotóxicos y pro- trado que tanto en la mujer como en el ratón, sien-
ducción de anticuerpos que activan el complemen- do los linfocitos Th1 los mediadores más impor-
to. Estos mecanismos efectores son los más im- tantes en la eliminación y resistencia a la infec-
portantes en la eliminación y resistencia a la in- ción por Chlamydias. Los linfocitos Th1 estimu-
fección por microorganismos intracelulares. lan la activación de macrófagos, linfocitos
citotóxicos y producción de anticuerpos que acti-
3.2. Respuesta inmune a las infecciones en la van el complemento. Además, estos linfocitos pro-
mucosa reproductiva de la mujer ducen IFN-γ que tiene efectos citotóxicos en las
células infectadas por Chlamydias. Se ha encon-
Los microorganismos que producen infeccio- trado que animales deficientes en IFN-γ o que no
nes de transmisión sexual, como Neisseria expresan el receptor para IFN-γ, eliminan más len-
gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, virus Her- tamente a la bacteria. Los linfocitos T citotóxicos
pes simplex 2 y otros virus que producen infec- CD8+ también reconocen células infectadas por
ciones sistémicas como el virus de la inmune de- Chlamydias. Sin embargo, ratones deficientes en
ficiencia humana (HIV), hepatitis B y hepatitis C, estos linfocitos controlan la infección por
infectan la mucosa del tracto reproductor del hom- Chlamydias, indicando que la deficiencia es com-
bre, de la mujer y de animales de experimenta- pensada por la respuesta celular mediada por
ción. La infección involucra unión, invasión, macrófagos y por la producción de inmunoglo-
replicación y transporte de los patógenos al tejido bulinas específicas en el tracto reproductivo del
subepitelial, donde normalmente inducen respues- ratón.
ta inmune local. En esta sección, se describe a Neisseria gonorrhoeae infecta la mucosa del
modo de ejemplo algunas características de la res- cuello uterino y de la trompa de Fallopio de la
puesta inmune local, que se produce frente a los mujer. En este caso se ha caracterizado muy bien
tres microorganismos que infectan con mayor fre- la respuesta inmune humoral pero no se sabe si la
cuencia el tracto reproductor de la mujer: respuesta inmune celular juega un papel impor-
Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae y tante en la protección. En la mujer, las infeccio-
virus Herpes simplex 2. En el hombre la respuesta nes por esta bacteria inducen anticuerpos de los
inmune a la infección ha sido mucho menos estu- isotipos IgA e IgG, detectables en la secreción
diada y no se describe en esta sección. cervico-vaginal. La IgA es producida localmente
Chlamydia trachomatis infecta el cuello ute- por las células plasmáticas que invaden el estroma
rino de la mujer y ocasionalmente asciende al del endocervix y las trompas de Fallopio cuando
endometrio y la trompa de Fallopio. La persisten- se produce la infección. El mecanismo efector de
cia de la infección puede llegar a producir las inmunoglobulinas es diferente según el isotipo
salpingitis e infertilidad. La respuesta inmune a la y las características de la mucosa reproductiva. IgA
infección es de tipo humoral, sistémica y local, y e IgG pueden activar el complemento presente en
317
Sin título-2 317 5/26/06, 10:26 AM

la secreción cervical que durante la infección por inducción de tolerancia inmune al feto.
N. gonorrhoeae se encuentra activado y unido a
la bacteria. La opsonización mediada por IgG pro- 4.1. La interfase materno fetal
mueve la fagocitosis por neutrófilos, mientras que,
IgA funciona principalmente neutralizando una Una característica fundamental de la preñez
variedad de moléculas y de esta manera inhibiendo de los mamíferos es la formación de la placenta,
la unión de la bacteria a los epitelios y la infec- el órgano que permite la interrelación entre la
ción. Además, los complejos inmunes formados madre y el feto en desarrollo. El desarrollo de la
por IgA y antígeno estimulan la producción de placenta involucra una serie de eventos conoci-
secreción mucosa, lo que contribuye a impedir el dos como implantación. Durante este proceso el
acceso del patógeno desde el canal cervical a la blastocisto se adhiere, penetra e invade el
cavidad uterina. endometrio (decidua) y las células del trofoblasto
El virus Herpes simplex 2 infecta la mucosa del embrión se diferencian para formar la placenta.
oral y reproductiva del ser humano. Después de En la mujer este proceso es particularmente
la infección primaria se localiza en los ganglios invasivo ya que las células trofoblásticas infiltran
sensoriales desde donde puede reinfectar la mu- incluso el miometrio.
cosa. Como respuesta a la infección por virus Desde el punto de vista anatómico en la mu-
Herpes simplex 2 se producen IgG e IgA séricas jer embarazada se pueden establecer tres zonas de
que reconocen glicoproteínas de la envoltura y interfase materno-fetal (figura 17-2). En estas zo-
cápside viral. En las secreciones cervicales, se nas es donde el tejido inmune de la madre puede
observa una respuesta IgG, IgA e IgM de especi- reconocer los antígenos fetales de origen paterno.
ficidad similar a la de las inmunoglobulinas Una de estas zonas de interfase corresponde a las
séricas. El papel que estas inmunoglobulinas jue- vellosidades placentarias, donde las células del
gan en protección no está claro, sin embargo, es- sinciciotrofoblasto de origen fetal están en con-
tos anticuerpos diluidos pueden bloquear in vitro tacto directo con la sangre materna. Otra zona de
la infección de células epiteliales, indicando que interfase la constituyen las arterias espirales del
in vivo se encuentran en concentración suficiente endometrio y miometrio, donde el endotelio ma-
como para proteger de la infección. La concentra- terno es reemplazado por células fetales deriva-
ción de IgA producida localmente se ha das del trofoblasto, denominadas citotrofoblastos
correlacionado con la disminución de partículas extravellosidades. Estos citotrofoblastos están en
virales recuperadas del tracto reproductor de la contacto directo con el tejido endometrial. La ter-
mujer, sugiriendo que esta inmunoglobulina esta- cera zona de interfase es la zona de la membrana
ría involucrada en la eliminación del virus. La in- coriónica que se encuentra en contacto con la
fección de la mucosa reproductiva por virus Her- decidua.
pes simplex 2 produce estimulación de linfocitos
T CD4+ Th1 y de linfocitos T citotóxicos (CD8+) 4.2. Expresión de MHC en las células
en la mujer y en ratones. Estos linfocitos se en- trofoblásticas
cuentran en las lesiones y en los nódulos linfáticos
regionales y transferidos a animales no inmunes, Las células trofoblásticas que están en con-
producen protección de la infección. tacto directo con las células inmunocompetentes
de la decidua no expresan los genes del MHC de
clase II, aún después de la estimulación con IFN-
4. EL SISTEMA INMUNE LOCAL EN EL γ. Tampoco expresan dos de los principales genes
EMBARAZO polimórficos del MHC de clase I, HLA-A y HLA-
B. Sin embargo, las células trofoblásticas expre-
La respuesta inmune en la mucosa reproduc- san HLA-G, un gen MHC de clase I conocido
tiva de la hembra de los mamíferos, ha debido como no-clásico (ver capítulo 8). Varias caracte-
adaptarse para tolerar al feto y a los espermato- rísticas de la proteína HLA-G sugieren que su fun-
zoides, que de otra manera serían rechazados al ción está relacionada con la tolerancia materno-
igual que los trasplantes alogeneicos (ver capítu- fetal. Primero, esta proteína se encuentra casi ex-
lo 37). A continuación se describe el sistema in- clusivamente en el citotrofoblasto extravellosi-
mune de la mujer durante el embarazo, destacan- dades y en la membrana coriónica. Además del
do aquellas características que pueden explicar la timo, no existe evidencia concluyente de que esta
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Sin título-2 318 5/26/06, 10:26 AM

Figura 17-2 Zonas de interfase materno-fetal en la placenta. Se distingue al menos dos zonas de interacción materno-fetal: a)
los sinciciotrofoblastos y la sangre materna de los espacios intervellosidades y b) los citotrofoblastos extravellosidades y tejido
linfoide del endometrio. En estas zonas de interacción, el sistema inmune de la madre puede ser estimulado por los antígenos
fetales de origen paterno.
proteína se exprese en otros tejidos. Segundo, a (células granulares de la glándula metrial). A par-
diferencia de MHC-I clásico, el gen HLA-G casi tir de la fase lutea del ciclo menstrual y en la pri-
no presenta polimorfismo, es decir, tiene muy po- mera etapa del embarazo, las células NK aumen-
cas variantes alélicas. Esto implica que durante tan en número hasta llegar a ser las más abundan-
la preñez, la proteína trofoblástica heredada de los tes en la decidua. Tanto en la mujer como en el
genes paternos será idéntica o levemente diferen- ratón, estas células disminuyen notablemente al
te a la proteína materna y por lo tanto, estas molé- término de la preñez. Las células NK se encuen-
culas no inducirán respuesta alogeneica de recha- tran en estrecha relación anatómica con las célu-
zo. Tercero, una característica propia del gen HLA- las trofoblásticas, distribuidas especialmente al-
G es que el mRNA sufre “splicing” alternativo y rededor de las arterias espirales, glándulas
se genera una forma soluble que también podría endometriales y junto a los trofoblastos que inva-
tener funciones reguladoras sobre el sistema in- den el tejido materno.
mune materno. Aunque la función de las células NK durante
Las células trofoblásticas expresan otros dos la preñez es desconocida, se sabe que estas célu-
genes MHC de clase I, HLA-E y HLA-C. El gen las tienen actividad citolítica similar a las células
HLA-E codifica también para una proteína de clase NK de sangre periférica. Las células NK de la
I no clásico, que une un grupo de péptidos muy decidua expresan los receptores inhibitorios (KIR)
restringido. Se postula que su función sería inhi- por lo que se cree que su actividad lítica es inhibida
bir el ataque al trofoblasto por parte de las células en la interfase materno fetal por la presencia de
NK. HLA-C es un gen MHC de clase I clásico los ligandos HLA-G y HLA-C (figura 17-3).
pero se expresa en niveles mucho más bajos que
HLA-A y HLA-B en tejidos normales y su fun- 4.4. Los linfocitos T de la decidua
ción es desconocida.
Los linfocitos T se encuentran dispersos en
4.3. Las células NK de la decidua la decidua y no varían en número durante la pre-
ñez. En la mujer, los linfocitos T deciduales no
Las células NK de la decidua (LGL: CD56+, proliferan en respuesta a las células trofoblásticas
CD16-), difieren fenotípicamente de las encontra- ni frente a linfocitos alogeneicos, indicando que
das en la periferia (CD56+, CD16+). En el ratón los linfocitos T de la decidua se encuentran en un
las células NK corresponden a las células GMG estado de anergia similar al encontrado en los
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Sin título-2 319 5/26/06, 10:26 AM

trofoblasto. Otras como IGF-1, TNF-α, IL-6 y
CFS-1 promueven la síntesis y secreción de hor-
monas placentarias.
Varias de las citoquinas producidas en estos
tejidos tienen además funciones inmunorregu-
latorias, así por ejemplo, IFN-γ estimula la res-
puesta inmune Th1 (inmunidad celular), IL-10
inhibe la respuesta inmune tipo Th1 y TGFβ pre-
senta actividad inmunosupresora. El equilibrio
Figura 17-3 Expresión de MHC de clase I (HLA.G y entre los niveles de tales citoquinas en el tracto
HLA.C) en las células trofoblásticas. La actividad lítica de reproductor, puede estar relacionado con la capa-
las células NK de la decidua que es estimulada por los recep- cidad de discriminación del sistema inmune lo-
tores de activación KAR, puede permanecer inhibida por la
unión del MHC del trofoblasto a los receptores KIR.
cal, entre células inmunológicamente extrañas pero
normales al individuo (tales como los espermato-
zoides y el embrión) y una variedad de microorga-
nismos patógenos que infectan el tracto
linfocitos de la mucosa intestinal. En ratones reproductor. De esta manera, el sistema inmune
transgénicos existe tolerancia sistémica a los local puede ser capaz de iniciar una respuesta in-
antígenos paternos, lo que se produce por una dis- mune de carácter y extensión apropiados al estí-
minución transiente de los linfocitos específicos mulo, es decir, una respuesta de tolerancia a los
para las moléculas MHC paternas durante la pre- espermatozoides y al embrión y de rechazo a los
ñez. También a nivel sistémico se produce des- microorganismos patógenos. Este es un campo
viación de la respuesta inmune hacia una respues- de la inmunología de la reproducción de activa
ta humoral mediada por linfocitos Th2, evitando investigación.
de esta manera el posible daño que una respuesta
celular mediada por Th1 pudiera producir en la
preñez. 5. FACTORES INMUNOLÓGICOS QUE
AFECTAN LA FERTILIDAD
4.5. Citoquinas en la preñez
Dada la relevancia de la respuesta inmune
Las citoquinas tienen una función importan- en todos los procesos involucrados en la repro-
te durante la preñez y son producidas en tejidos ducción, no es raro que fallas a este nivel conduz-
fetales y la decidua. En estos tejidos se sintetizan can a fallas en la fertilidad. En humanos existe
citoquinas inflamatorias tales como IL-1, TNFα, una intensa investigación para conocer más exac-
IL-6 e IL-8; linfoquinas tales como IFN-γ, IL-2 e tamente los mecanismos subyacentes y poder de-
IFN-α; factores de crecimiento tales como el Fac- sarrollar mejores terapias. A continuación, se des-
tor estimulador de colonias de granulocitos (G- criben como ejemplos de fallas de la fertilidad por
CSF), Factor estimulador de colonias de causa de factores inmunológicos, la alteración en
granulocitos y macrófagos (GM-CSF), Factor la implantación del embrión que conduce al abor-
estimulador de colonias de macrófagos (M-CSF) to espontáneo recurrente y también, la producción
y factores inmunosupresores como TGFβ1, de anticuerpos antiespermáticos, que pueden ser
TGFβ2 e IL-10 (ver capítulo 11). Algunas causa de falla en la fertilidad al dificultar la fe-
citoquinas producidas por los tejidos embrionarios cundación.
o maternos, tienen efectos regulatorios sobre la
implantación, el desarrollo del embrión y de la 5.1. Aborto espontáneo recurrente de causa
placenta. Su efecto se produce a través de los re- inexplicada
ceptores que se encuentran en los tejidos blanco.
Por ejemplo, IL-11 se produce en las células del El aborto espontáneo recurrente de causa
endometrio e induce diferenciación de las células inexplicada se ha relacionado con la
del estroma a células deciduales favoreciendo de desrregulación de varios aspectos de la respuesta
esta manera la implantación. Otras citoquinas inmune que se requieren para la implantación del
como CSF-1, que se produce en el citotrofoblasto, embrión a pesar de que éste puede ser considera-
promueven la invasión y diferenciación del do como un aloinjerto, al portar los antígenos he-
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Sin título-2 320 5/26/06, 10:26 AM

redados del padre. La implantación es un proceso Th1 en el endometrio peri-implantacional, mien-
esencial para la reproducción humana en la que se tras que normalmente un predominio Th2 confie-
produce invasión del endometrio materno por parte re protección. La falla del embarazo puede expli-
del concepto. Este hecho pone inevitablemente al carse por varios mecanismos inmunológicos se-
conceptus en contacto con las células inmuno- cundarios a cambios en las proporciones norma-
competentes maternas y por ello, la interacción les de los 2 grupos de citoquinas, sobre todo a ni-
materno-fetal durante el período peri-implanta- vel local en la interfase materno-fetal. Entre las
cional es crucial para determinar el éxito o el fra- citoquinas Th1, IL-12 sirve de estímulo para la
caso del proceso reproductivo. ¿Cómo escapa nor- diferenciación de células Th0 a Th1, las que por
malmente el feto a la vigilancia por parte de las efecto de IFN-γ y TNF-β, culminan en el desarro-
células NK endometriales que son el tipo llo de una respuesta citotóxica de rechazo del
linfocitario predominante en el sitio de implanta- conceptus. El aumento anormal de citoquinas Th1
ción?. Una posible explicación surge del hallazgo puede ser provocado por antígenos del trofoblasto,
de que mujeres y hombres de la misma edad po- del espermatozoide, microbianos u otros, que es-
seen claras diferencias en la actividad de las célu- timulan a las células inflamatorias e inmunes ma-
las NK. Las mujeres tienen menor actividad de ternas hacia el desarrollo de respuesta inmune ce-
células NK que los hombres de su misma edad. lular.
Asimismo, el nivel de actividad de las células NK El aborto recurrente de causa no explicada
previo a la concepción, puede predecir el resulta- se ha asociado además, con la expresión de molé-
do del embarazo, ya que mujeres con alto nivel de culas HLA-DR1 y con la presencia de
actividad NK tienen mayor riesgo de aborto. Por autoanticuerpos órgano inespecíficos como
otra parte, se ha postulado que la ausencia de las anticardiolipinas y antinucleares. Esto puede de-
moléculas MHC polimórficas, HLA-A, HLA-B y berse a la hipersecreción de TNF-α, dado que exis-
de clase II, en la interfase con el tejido materno y te un desequilibrio de ligamiento entre HLA-DR1
a la presencia de moléculas MHC clase I HLA-G, y TNF-α.
con un bajo polimorfismo en el sinciciotrofoblasto
influyen positivamente en la sobrevida del injerto 5.2. Anticuerpos antiespermáticos
fetal. Sumados estos hechos, se plantea que es a
través de estos determinantes no polimórficos, Anticuerpos con especificidad por el esper-
sumado a la ausencia de otras moléculas MHC, matozoide o alguno de sus componentes se pue-
que se logra localmente la inhibición de la den encontrar en diferentes secreciones corpora-
citotoxicidad por las células NK y de linfocitos T. les de hombres y mujeres, pero su significado
De tal manera que tanto una perturbación en la como posible causante de alteraciones de la ferti-
expresión de HLA-G, como en el estado de acti- lidad es muy variable. El hallazgo de anticuerpos
vación de las células NK influye en la sensibili- antiespermáticos en el suero no tiene relevancia en
dad del trofoblasto a la lisis y en el equilibrio man- fertilidad, en cambio sí puede tenerla cuando están
tenido en el sitio de implantación. presentes en el tracto reproductivo (tabla 17-2). Di-
La actividad de células NK es influenciada chos anticuerpos pueden desarrollarse en forma
por numerosas citoquinas, entre ellas las citoquinas primaria sin una causa reconocible. En otros ca-
secretadas por los linfocitos Th1 que son capaces sos, los anticuerpos se desarrollan secundariamen-
de activarlas se han encontrado asociadas con el te a una alteración en los mecanismos normales
aborto. Por otro lado, TGF-β sería una citoquina de supresión de la respuesta inmune, ya que el
protectora del embarazo al disminuir el grado de espermatozoide es altamente inmunogénico tanto
activación de las células NK. Ya sea como resul- para la mujer como para el mismo hombre que lo
tado de una mayor activación o una reducción en produce. Esto sucede en el hombre porque los
la inmunosupresión, las células NK de pacientes antígenos espermáticos aparecen durante la puber-
abortadoras parecen estar sujetas a un ambiente tad, es decir después que ya se ha establecido la
proclive a la activación, reflejado en un nivel de tolerancia a los antígenos propios.
actividad de células NK mayor que en embarazos Actualmente se considera que dichos
normales. Recientemente se han acumulado evi- anticuerpos son una causa de reducción de la fer-
dencias del importante papel que desempeñan las tilidad, alterando la capacidad antiespermáticos
citoquinas T “helper” en el rechazo del embarazo, fecundante del espermatozoide, inhibiendo
el cual es mediado por el predominio de citoquinas interacciones gaméticas por aglutinación o por
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Sin título-2 321 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 17-2. Hallazgo de anticuerpos antiespermáticos en secreciones humanas
Muestra Isotipo de Ig Relevancia en fertilidad
Suero (hombre) IgG, IgM Ninguna

Suero (mujer) IgG, IgM Ninguna
Moco cervical IgG, IgA Posible
Plasma seminal IgG, IgA Posible
Espermatozoide a IgG, IgA Posible
a
los anticuerpos aparecen adheridos a la superficie del espermatozoide
Referencia: Bohring C., Krause W., Reproduktionsmedizin 16: 3-7, 2000.
inmovilización del gameto masculino, o también, antiespermática es la barrera hemato-testicular

influenciando negativamente el desarrollo del constituida por las ajustadas uniones entre las cé-
embrión. Se ha sugerido que los anticuerpos uni- lulas de Sertoli en el testículo, luego por el epite-
dos a la superficie espermática participan en lio mucoso del tracto genital masculino, suplemen-
citotoxicidad mediada por complemento o tado por una barrera inmunosupresora local de
fagocitosis por macrófagos activados. Los linfocitos T supresores abundantes en el tejido
antígenos, blancos de reacciones inmunológicas intersticial del testículo y en la submucosa del
asociadas con infertilidad, son moléculas expre- epidídimo. Las células de Sertoli también
sadas en la superficie, accesibles en el espermato- fagocitan y degradan espermatozoides y produc-
zoide intacto para reaccionar con linfocitos o tos residuales de la espermatogénesis, evitando así
anticuerpos. Se ha intentado caracterizar los el contacto con el sistema inmune. Por último, los
antígenos espermáticos relevantes en fertilidad, factores inmunosupresores del plasma seminal
sin lograrlo completamente hasta ahora porque la protegen al espermatozoide incluso al encontrar-
especificidad de los anticuerpos antiespermáticos se en el tracto genital femenino. Todo lo anterior
parece ser extremadamente heterogénea. Un ejem- explica que la formación de anticuerpos
plo es el denominado antígeno de fertilización (FA- antiespermáticos se asocia en el hombre con la
1), que fue caracterizado como una glicoproteína inflamación o infecciones del tracto genital, trau-
de 49 kDa presente en espermatozoides de varias ma o torsión testicular, lesión y/u obstrucción par-
especies de mamíferos. Se afirmó inicialmente que cial de los conductos reproductivos masculinos,
este antígeno era el blanco de anticuerpos pre- vasectomía y tumores. La pérdida de continuidad
sentes en el suero de hombres y mujeres infértiles, en la superficie mucosa de los conductos
sin embargo, también lo sería para anticuerpos testiculares o eferentes permite el acceso de
presentes en individuos fértiles, con lo que su re- macrófagos al tracto reproductivo, los que
levancia para la reproducción permanece en dis- engloban y degradan espermatozoides, para lue-
cusión. Posteriormente se ha detectado una serie go presentar antígenos al sistema inmune. Confir-
de antígenos de peso molecular entre 23 y 72 kDa, mando lo anterior, alrededor del 50% de los hom-
mediante electroforesis bidimensional y “Western- bres vasectomizados presenta anticuerpos
blot” con los anticuerpos presentes en el plasma antiespermáticos en el suero y parece haber un
seminal de hombres infértiles. Esto parece confir- control genético de la tendencia a formar estos
mar la heterogeneidad ya mencionada de la espe- anticuerpos ya que en el grupo de hombres
cificidad de los anticuerpos antiespermáticos. vasectomizados que desarrollaron anticuerpos se
Debido a que el espermatozoide no está pre- encontró mayor frecuencia de HLA-A28 y Bw22.
sente en la etapa de desarrollo del individuo cuan- En la mujer, el depósito de espermatozoides
do se establece la tolerancia a los antígenos proen el tracto genital puede conducir al desarrollo
pios, es necesario su aislamiento del sistema inde anticuerpos antiespermáticos. En el caso de
mune para evitar el reconocimiento y rechazo ruptura de las barreras mucosas, hay ingreso de
como células extrañas. La primera línea de defen- antígenos espermáticos, los que son reconocidos
sa contra el desarrollo de una respuesta autoinmune por linfocitos B subepiteliales que desarrollan una
322
Sin título-2 322 5/26/06, 10:26 AM

respuesta de anticuerpos con predominio de IgA. Lim, K.J.H., et al., “The role of T-helper cytokines
La aparición de estos anticuerpos también puede in human reproduction”. Fertil. Steril; 73: 136-
reflejar una falla de los factores supresores del 142, 2000.
plasma seminal. La presencia de anticuerpos
antiespermáticos en el tracto genital femenino in- Naz, R.K., Menge, A.C., “Antisperm antibodies:
terfiere con la fecundación ya sea, porque impide origin, regulation, and sperm reactivity in human
la migración de los espermatozoides a través del infertility”. Fertil. Steril. 61: 1001-1013, 1994.
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323
Sin título-2 323 5/26/06, 10:26 AM

324
Sin título-2 324 5/26/06, 10:26 AM

SECCIÓN III
MECANISMOS EFECTORES DE LA
RESPUESTA INMUNE
325
Sin título-2 325 5/26/06, 10:26 AM

326
Sin título-2 326 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 18
SISTEMA DEL COMPLEMENTO
Arturo Ferreira V. y Julio Scharfstein
1. Introducción 3.6. Ruta de las lectinas

2. Generalidades sobre la activación 4. Ruta alterna: algunos detalles mole-
y regulación del Sistema del Com- culares
plemento 4.1. Activación de la ruta alterna
2.1. Generación de enlaces covalentes 4.2. Papel de la properdina
por parte de C3b y C4b, al reac- 5. Fase terminal: generación del com-
cionar con estructuras de las su- plejo destructor de membranas
perficies atacadas por el sistema. 5.1. Generación de C5-8
2.2. Las C3 y C5 convertasas de las 5.2. Polimerización de C9
rutas clásica y alterna son funcio- 5.3. Efecto funcional de la inserción
nalmente homólogas: del MHC en las membranas
3. Ruta clásica: algunos detalles mole- 5.4. Perspectivas futuras del estudio
culares de la fase final de la activación
3.1. Unión C1 del complemento
3.2. Activación de C4 y C2 6. Algunos aspectos genéticos del
3.3. Convertasa de C3 Complemento
3.4. Convertasa de C5 7. Complemento y Enfermedad
3.5. Mecanismos que confinan la ac-
tivación del complemento a las
membranas blanco (“target”) o
culpables
327
Sin título-2 327 5/26/06, 10:26 AM

328
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RESUMEN
El Complemento es un sistema extremadamente pleiotrópico conformado por alrededor de

40 proteínas, que interrelacionan en el sistema inmune múltiples funciones efectoras, frecuente-
mente mediadoras de mecanismos inflamatorios. Durante su activación se generan tres grupos de
péptidos con funciones que, en condiciones fisiológicas, promueven la fagocitosis, la inflama-
ción, la destrucción de membranas biológicas de agentes agresores y la estimulación tanto de
mecanismos inmunes innatos, como adquiridos. La activación del sistema puede ocurrir a través
de dos rutas, involucrando en la ruta clásica la presencia de complejos inmunes. La ruta alterna se
activa por superficies biológicas con características bioquímicas particulares, en ausencia de
anticuerpos. Una variante de la ruta clásica involucra ciertos carbohidratos y enzimas que gene-
ran directamente la convertasa clásica de C3, sin participación del componente C1, ni de
anticuerpos. Estos mecanismos generan la convertasa de C3 que activa enzimáticamente al ter-
cer componente C3, depositándolo sobre las membranas biológicas próximas al sitio de la acti-
vación. El tercer componente se une covalentemente a estas membranas por medio de enlaces
hidroxiéster o amidoéster. Estos mecanismos de acción generan también convertasas de C5 (clá-
sica y alterna) que activan enzimáticamente al quinto componente C5, continuando una serie de
interacciones no enzimáticas, que involucra a los componentes C6-C9, culminando con el en-
samblaje del MAC. Estos complejos son estructuras macromoleculares anfifilicas, que se inser-
tan en membranas biológicas agresoras, generando verdaderos tubos o canales que causan pro-
fundas alteraciones en las membranas, culminando con la lisis celular. La activación del sistema
es controlada meticulosamente por proteínas presentes en la fase soluble y también unidas a
membranas. Estas proteínas controladoras pueden mediar la degradación enzimática de compo-
nentes activos, particularmente C3b y C4b. También pueden impedir la generación de convertasas
o desensamblar aquellas ya generadas. La regulación también puede ocurrir a nivel de la genera-
ción del MAC. Aunque la mayoría de los genes que codifican las proteínas del complemento se
encuentran dispersos en el genoma, algunos de ellos se encuentran ligados en cromosomas defi-
nidos. Así, por ejemplo, los genes que codifican el segundo y cuarto componente de la ruta
clásica (C2 y C4) y el factor B de la ruta alterna, se encuentran todos ligados en el centro del
MHC, desconociéndose las implicancias funcionales de este ligamiento. En síntesis, el arte del
sistema del complemento consiste en generar funciones opsonizantes y líticas concentradas so-
bre membranas agresoras culpables y no sobre membranas vecinas, propias, inocentes, favoreci-
do esto por la función de las anafilotoxinas que facilitan el acceso al sitio de la agresión, de
numerosos elementos inmunocomponentes. La marcación indeleble u opsonización de muchas
superficies antigénicas por C3b y C4b, las “direcciona” hacia órganos linfoides, donde se inicia
la respuesta inmune específica. La incorporación de C3b y C4b sobre complejos inmunes puede
mediar la solubilización de éstos. La activación descontrolada del sistema puede generar una
serie de patologías, al igual que la deficiencia de algunos componentes.
1. INTRODUCCIÓN un estado de inmunidad que le permitirá al indivi-

duo reaccionar en forma más efectiva en la even-
Si aceptamos que el sistema inmune existe tualidad probable de reencuentros futuros con el
porque existe la agresión exógena (virus, bacte- agente agresor.
rias, hongos, parásitos en general) y endógena (cé- En el proceso de reconocimiento participan,
lulas neoplásicas principalmente), entonces, la fun- como componentes esenciales, células y
ción principal de este sistema sería el reconoci- anticuerpos. Entre las células, los linfocitos T
miento y destrucción de estos agresores. De este citotóxicos (LTc) pueden reconocer y destruir cé-
encuentro, reconocimiento y destrucción, resulta lulas infectadas en forma autosuficiente. Los LTc
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sintetizan complejos macromoleculares que, lue- Complex”). Este es un complejo macromolecular
go de contactar estrechamente con las células informado por la asociación de seis moléculas: C5b,
fectadas, los insertan en la membrana de éstas, C6, C7, C8αγ, C8β y C9. La generación de este
destruyéndolas. complejo está orientada al ataque de membranas
Por otra parte, las células B producen biológicas. Tiene propiedades físico-químicas
anticuerpos, altamente específicos, que les sirven anfifílicas (hidrofóbicas e hidrofílicas) que le per-
como receptores integrales de membrana y como miten insertarse en membranas biológicas
productos de exportación, o sea, como verdade- fosfolipídicas que se encuentren en la proximidad
ras sondas que reconocen al agente patógeno, in- inmediata al sitio de activación, alterando pro-
cluso a gran distancia del punto de producción. fundamente su estructura. Generan en ellas ver-
Sin embargo, estas sondas, por sí solas, normal- daderos forados que cambian drásticamente sus
mente no pueden matar ni destruir a los organis- propiedades de permeabilidad. Una ilustración
mos invasores. Excepcionalmente, los anticuerpos clásica y dramática de esto se logra al sensibilizar
podrán ser suficientes si bloquean, por ejemplo, glóbulos rojos con anticuerpos específicos. Los
un ligando para un receptor celular presente en un glóbulos pueden incluso aglutinarse, pero estarán
parásito, cuyo ciclo biológico implica necesaria- intactos. Al agregar suero fresco como fuente de
mente una etapa intracelular. (En este capítulo, el complemento, las células se lisarán. Si una de es-
término parásito será utilizado en un sentido am- tas células se mira al microscopio electrónico se
plio, refiriéndose a agentes agresores tales como verá la membrana perforada por una multitud de
bacterias, virus, hongos, protozoos, etc.). En otras orificios circulares, simétricos, equidistantes, pro-
palabras, los anticuerpos son moléculas cuya fun- vocados por el MAC.
ción principal es reconocer, pero, frecuentemen-
te, el reconocimiento, aunque necesario, no es su- b) Opsonización de antígenos por fragmentos
ficiente. C3b y C4b. Estas “opsoninas” se unen
En este contexto, el Sistema del Complemen- covalentemente a la superficie de células invaso-
to representa un mecanismo sérico auxiliar, efi- ras cercanas al sitio de activación. Por sí solas no
ciente de defensa innata. Es uno de los primeros producen daño, pero si las células extrañas sensi-
sistemas de amplificación biológica cuyos meca- bilizadas con ellas, son detectadas por una célula
nismos moleculares fueron descritos en detalle, fagocítica profesional, como el macrófago, serán
sirviendo como ejemplo sofisticado y didáctico so- fagocitadas muy eficientemente y luego destrui-
bre mecanismos de regulación proteolítica. Debi- das intracelularmente. Estas células fagocíticas
do a la gran versatilidad de las interacciones pro- tienen receptores de superficie para estos fragmen-
teína-proteína, la investigación sobre su modo de tos opsonizantes. Además de contribuir a la
activación y regulación ofrece ejemplos impor- fagocitosis, estas opsoninas pueden contribuir a
tantes sobre la relación entre estructura y función la focalización de antígenos hacia nódulos y
de proteínas, sobre la influencia de la variabilidad ganglios linfáticos, donde hay una gran concen-
genética y sobre las consecuencias en clínica mé- tración de linfocitos B. Esto sucede porque, simi-
dica. Capaz de generar una gama de actividades lar a lo que ocurre con los macrófagos, los
biológicas, el sistema está formado por aproxi- linfocitos B también expresan receptores para los
madamente 40 moléculas, presentes en el plasma fragmentos de C3 y C4. Además, las células
o sobre membranas biológicas, en todos los dendríticas foliculares también son portadoras de
vertebrados estudiados hasta ahora. Tal como estos receptores. Esto otorga al sistema una im-
ocurre con los procesos de activación de las portante función estimuladora de la respuesta in-
serino-proteasas responsables de la coagulación y mune, si consideramos que, para ser inmu-
de la hemostasis, la activación del sistema del nogénicos, los antígenos deben llegar a los órga-
complemento implica la activación sucesiva (“cas- nos linfoides. Por otra parte, como los complejos
cada”) de precursores enzimáticos de serino inmunes pueden activar al sistema, una tercera
proteasas plasmáticas. Las principales consecuen- función de estos fragmentos sería impedir forma-
cias biológicas de este proceso son: ción de agregados de complejos inmunes insolu-
bles en el organismo.
a) Formación de un Complejo Destructor (lítico)
de membrana, conocido también como "Killer c) Un tercer grupo de productos generados se co-
Complex" o "MAC” (“Membrane Attack noce como anafilotoxinas. Son fragmentos de
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bajo peso molecular (alrededor de 5 kDa) que se 2. GENERALIDADES SOBRE ACTIVA-
generan a partir de C3, C4 y C5. Se llaman C3a, CIÓN Y REGULACIÓN DEL SISTEMA
C4a y C5a. Han sido cristalizadas a homogenei- DEL COMPLEMENTO.
dad. Inoculadas subcutáneamente, en cantidades
de nanomoles, inducen una violenta reacción El complemento puede activarse a través de
inflamatoria local con un gran edema. Su función dos rutas principales (clásica y alterna) presenta-
principal es aumentar la permeabilidad capilar. Son das, en forma muy resumida, en la figura 18-1. C3
agentes fundamentales en el fenómeno inflama- ocupa una posición central en el sistema, siendo un
torio fisiológico que, frecuentemente, acompaña objetivo principal de estas rutas el activarlo.
a muchas infecciones. Por el hecho de tener una
potente actividad biológica, estos factores tienen Ruta clásica: Requiere de la participación de com-
vida media corta, siendo rápidamente destruidos plejos inmunes. Implica la activación de C1 a C9.
por caboxi-peptidases plasmáticas. Con una sola excepción, la secuencia de números
El nombre de anafilotoxinas es incorrecto (se refleja la secuencia de pasos en el proceso de acti-
conserva por razones históricas) ya que no son vación. La excepción tiene orígenes históricos (C4
toxinas y no inducen shock anafiláctico, que es es activado antes que C2 y C3, pero C2 y C3 fue-
una reacción generalizada. Las anafilotoxinas in- ron descubiertos antes que C4).
ducen la liberación local de varios productos de En la ruta clásica, la participación de iones
las células mastoídeas, siendo el más importante Ca2+ y Mg2+ es esencial. En ausencia de estos iones
la histamina. Una reacción similar ocurre con los la activación no ocurre. Así, si a un suero fresco
basófilos circulantes que tienen receptores para se le agrega EDTA, (ácido etelendiamino-
C3a y C5a. Los neutrófilos, en cambio, tienen tetraacético), suficiente para quelar todo el Ca2+ y
receptores sólo para C5a, induciendo en ellos una Mg2+ y luego agregamos glóbulos rojos sensibi-
fuerte actividad leucotáxica. lizados con anticuerpos, no habrá lisis. El Ca2+
Figura 18-1. Resumen de las dos vías principales de activación del Sistema del Complemento
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estabiliza a C1, formado por la asociación de 3 en la superficie de la célula hospedadora.
proteínas: C1q, C1r, C1s. Como se mencionó, la activación en cascada
Como veremos más adelante, la manosa, cares siempre acompañada de la liberación de mu-
bohidrato presente en una variedad de agentes agre- chos péptidos biológicamente importantes. Como
sores exógenos, puede mediar la activación de la convención, los péptidos o fragmentos se desig-
ruta clásica, prescindiendo de la participación de nan con letras minúsculas. Por ejemplo, C3 pue-
complejos inmunes y de C1, constituyendo así lo de generar varios fragmentos, no todos con fun-
que se conoce como “bypass” de las lectinas. ciones conocidas. Así, a partir de C3 se genera
C3b, C3a, C3c, C3g, C3d, C3dg; de C4 se genera
Ruta alterna: Su objetivo también es activar a C4a, C4b, C4c, C4d; de C5: C5a, C5b; de B: Bb,
C3. No requiere la participación de C1, C2, C4, Ba; de C2: C2a, C2b.
ni de complejos inmunes. Participan, en cambio, Los fragmentos b son de tamaño mayor que
los factores B, D y properdina (P). Requiere de la los a, sin excepción. (A pesar que esto ya fue re-
participación de Mg2+. suelto en un taller de nomenclatura internacional,
hace ya más de 15 años, algunos libros aún man-
Regulación: El sistema del complemento, por su tienen una excepción representada por C2, en que
potencial destructor para el hospedero, debe ser el fragmento mayor sería a y el menor b. En este
cuidadosamente regulado. Este trabajo es reali- texto usaremos lo convenido en ese taller).
zado por varias proteínas que funcionan en dife- En la literatura, con frecuencia, se puede en-
rentes puntos de la cascada. Estas proteínas están contrar una raya sobre un componente o enzima
presentes en el suero o unidas a membranas bio- activada. Por ejemplo⎯ C1, significa C1 activado.
lógicas. Las mejor caracterizadas son: Algunas moléculas del complemento son muy in-
teresantes, en cuanto a estructura, como es el caso
En el suero: a) Inhibidor de C1 (C1INH) de C1q y C4-bp. Estas moléculas, al igual que
b) “C4 binding protein” (C4-bp) IgG e IgM, presentan al microscopio electrónico
(Proteína ligante de C4) imágenes que parecen racionales si se piensa en
c) Inactivador de C3b y C4b (I) sus funciones.
d) Factor H (H) Las características generales de los compo-
e) Proteína S nentes del complemento se resumen como sigue:
f) Inactivador de anafilotoxinas
g) SP40, 40 a) C2, C3, C4, C5, B se fragmentan durante la
h) Properdina (P) activación generando C2a, C2b; C3a y C3b; C4a
y C4b; C5a y C5b, Ba y Bb. C1r y C1s también se
Como parte integral de membranas o actuan- fragmentan pero los productos generados se de-
do sobre ellas: signan simplemente como mayor y menor
a) CR1 : Receptor de C3b y C4b b) Todos los componentes son glicoproteínas
b) DAF: "Decay accelerating fac- c) La concentración sérica fluctúa entre 1-2 mg/
tor". (Factor acelerador del decai- ml (C3) y menos de 1 ug/ml (D)
miento, de convertasas). d) El peso molecular fluctúa entre 20 kDa (D) y
c) CR2: Receptor de C3d y C3dg, 750 kDa (C1: q, r, s)
iC3b e) Nº de cadenas: 18 (C1q); 7 (C4-bp); 3 (C4; C8);
d) MCP: "Membrane Cofactor 2 (C3, C5, C1r, C1s); 1 (C2, C6, C7, C9, B)
Protein" (Proteína cofactor de f) Precursores (no funcionales) por proteolisis limi-
membrana) tada se hacen funcionales en una reacción en casca-
da unidireccional (C1r, C1s, C4, C2, C3, C5, C3, B)
I es el único factor regulador que posee activi- g) La regulación ocurre en varios puntos de la cas-
dad enzimática. Para inactivar irreversiblemente las cada
enzimas C3 convertasas clásica y alterna, I depende h) Durante la activación se generan mecanismos
críticamente de la interacción reversible de co-facto- moleculares que concentran la acción lítica y
res especializados (C4-bp, H y CR) con sus ligandos opsonisante sobre membranas biológicas blanco
respectivos, C4b en la ruta clásica y C3b en la ruta ("culpables") y no sobre células vecinas inocentes
alterna. MCP y DAF, aceleran el decaimiento de las i) Algunos componentes se preasocian estratégi-
enzimas convertasas clásica y alterna, ensambladas camente en ausencia de estímulo
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Los genes estructurales de estas proteínas cuentra en el cromosoma 6. Se desconoce la razón
están dispersos en el genoma. Curiosamente, sin por la cual C2, B y C4 están siempre formando parte
embargo, los genes para C2, B y C4 se encuentran integral del MHC. C8 está formado por dos proteí-
en un “cluster” en el centro del “Complejo Princi- nas cuyos genes estructurales están, en humanos, en
pal de Histocompatibilidad” (MHC), en todas las el cromosoma 1. Un gen codifica las cadenas
especies estudiadas hasta ahora. Hay otras curio- alfa-gamma, que son secretadas como un precursor
sidades genéticas. El gen estructural de C3 en el de una cadena. Otro gen codifica la cadena beta.
ratón está en el cromosoma 17, ligado a H-2, pero Las tres cadenas se integran postsintéticamente para
a una gran distancia genética, 13 centimorgans, formar la molécula funcional de tres cadenas que
telomérico a la región D. En humanos, en cam- conocemos como C8. Dos cadenas (alfa y gamma)
bio, el gen estructural de C3 está en el cromosoma están unidas covalentemente, la otra no. La tabla
19, no ligado a HLA, complejo genético que se en- 18-1 resume estos datos.
Tabla 18-1. Característica generales de las proteínas del Sistema del Complemento
Componente PM Cadenas Cromosoma Concentración

(kDa) Nº kDa kDa humano (ug/ml suero) Sustrato
C1q 462 18(6A+6B+6C) A: 26.5 1 80 ---

B: 26.5 1
C: 24 1
C1r 83 1 -- 12 50 C1r, C1s

C1s 83 1 -- 12 50 C4, C2
C4 205 3 (α,β,γ) α: 97 6 600 ---
β: 75
γ: 33
C2 102 1 -- 6 20 C3, C5
C3 185 2 (α,β) α: 110 19 1300 ---
β: 75
D 24 1 -- X? 1 B
B 92 1 -- 6 210 C3, C5
C5 190 2(α,β) α: 115 9 70 ---
β: 75
C6 120 1 -- 1 55 ---
C7 110 1 -- 5 56 ---
C8 150 3 (α,β,γ) α: 64 1 55 ---
β: 64 1
γ: 22 9
C9 71 1 -- 5 59 ---
C1 INH 110 1 -- 11 200 ---
C4-bp 500 7 55 1 250 ---
I 88 2 α: 55 4 35 C4b, C3b
β: 30
S 83 1 -- 17 505 ---
P 220 4 56 20 5 ---
H 150 1 -- 1 560 ---
CR1 205 1 -- 1 -- ---
DAF 73 1 -- 1 -- ---
*Se designa como substrato sólo a aquellas moléculas que son degradadas proteolíticamente
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De acuerdo a lo mencionado, muchas de las procedimientos bioquímicos estándares.
serino proteasas del sistema complemento circu- Las enzimas (convertasas de C3 y de C5) par-
lan como precursores no funcionales (zimógenos). ticipan en la cascada, son complejas y se generan
La activación del complemento puede ser defini- durante la activación:
da entonces como una cascada de reacciones en
que precursores enzimáticos no funcionales son a) En la ruta clásica, la convertasa de C3 (C4b,
activados por proteolisis limitada y específica en C2b), generada por la acción secuencial de C1
un proceso unidireccional e irreversible. Así, la sobre C4 y C2 (figura 18-2), actúa sobre C3
proteína que en una etapa es substrato, al sufrir la generando dos fragmentos, C3b y C3a.
ruptura de un enlace peptídico se transforma en
una enzima nueva, a veces alterando sutilmente su El sitio enzimático activo de la C3 convertasa
especificidad enzimática, lo que le permite actuar está localizado en el fragmento C2b. C2 y C4
sobre un substrato distinto. La consecuencia prin- circulan preasociados. C4 al liberar su fragmento
cipal de esto es que un pequeño estímulo inicial C4a, por acción de C1s, cambia en su conforma-
puede ser amplificado tremendamente (efecto de ción terciaria y esto induce un cambio en la
cascada). Mecanismos de este tipo evidentemente conformación de C2 el que, al igual que C4, ex-
requieren de un sistema de control riguroso, que pondría un sitio susceptible de ser digerido por
opera en diversas etapas de la cascada. C1s. C4 se une covalentemente a estas membra-
Una característica muy interesante del siste- nas. A su vez, C2 sólo puede unirse a través de C4
ma del complemento es que, incluso en ausencia a la membrana que está siendo atacada.
de estímulo, muchas proteínas circulan en el C2b, disociado de C4b, es prácticamente in-
plasma ya laxamente asociadas entre sí, listas para activo, debe combinarse con C4b para poder ac-
actuar, tal es el caso de: tuar sobre C3. Se cree que la función de C4b en la
C3 convertasa es modular (“acomodar”) al
a) C1q, C1r, C1s (todos necesarios para la activa- substrato C3 en la posición adecuada para ser
ción de C4 y C2). digerido por C2b. En otras palabras, C4b es un
b) C4, C2, C4bp (C4 y C2 forman la convertasa cofactor enzimático: es esencial para que la
clásica de C3. C4-bp es cofactor de I para subunidad catalítica C2b pueda romper un enlace
inactivar a C4). peptídico en C3.
c) C3, P, B (participan en la convertasa alterna de La C3 convertasa genera muchos fragmen-
C3). tos C3b. La mayor parte de ellos pasa a la fase
d) C5, C6, C7, C8, C9 (Forman el "killer fluida, una proporción menor actúa como
complex" o Complejo de Ataque de Membranas, opsoninas y también para direccionar antígenos
MAC). hacia órganos linfoides
Se trata entonces de un conjunto de verdade- b) C5 convertasa clásica: Como paso posterior a

ros organelos flotantes, dispersos en el plasma, la activación de C3 en la ruta clásica, ocurre la
listos para actuar. En general, varios de ellos generación de la convertasa de C5 de la misma
copurifican, cuando se intenta aislarlos por ruta (figura 18-3).
Figura 18-2. Esquema simplificado de la generación de la convertasa de C3.
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Figura 18-3. Esquema simplificado de la generación de la convertasa de C5.
Una proporción menor de los fragmentos o como opsoninas se unen indeleblemente a una
C3b, generado por la convertasa respectiva, se variedad de agresores. Como puede predecirse,
asocian a la misma. Se produce así un cambio en la formación de estos enlaces requiere proximi-
la especificidad del sitio enzimático presente en dad entre C3 o C4 con células. La reacción puede
C2b. El complejo tendrá ahora especificidad por ocurrir con estructuras aceptoras presentes en di-
C5, ya sea a través de la modulación de C2b por versos patógenos, aunque accidentalmente puede
C3b (modulación de enzimática) o de la modula- involucrar a membranas de células del hospede-
ción de la molécula de C5 (modulación de ro. Es inespecífica, desde el punto de vista
substrato), al contactar con C3b. inmunológico. Esta proximidad, calculada en 40
nm desde la convertasa o desde C1s (lugares en
2.1. Generación de enlaces covalentes por par- que se genera C3b y C4b, respectivamente), es un
te de C3b y C4b, al reaccionar con estruc- elemento clave del sistema que centra la acción
turas de las superficies atacadas por el sis- en las membranas atacadas y no sobre membra-
tema nas vecinas inocentes.
En humanos existen dos isotipos de C4, co-
Uno de los aspectos más importantes y ca- dificados en el complejo HLA. Mientras el enla-
racterísticos del sistema del complemento es que, ce tioéster del isotipo C4A reacciona directa-
después de la activación, las moléculas de C3b y mente con nucleófilos aminos de la superficie ata-
C4b tienen un tiempo muy corto (fracciones de cada, el isotipo C4B es más complejo. Una vez
segundo) para unirse covalentemente a la mem- activado (por digestión de su cadena α por C1s),
brana atacada. Si no lo hacen, decaen. A nivel la histidina en posición 1106 (ácido aspártico en
molecular, esto significa que el sitio de unión C4A) ataca al enlace tioéster formando un inter-
neoformado tiene vida corta. Este sitio es mediario acil-imidazol. E tiol liberado actúa lue-
hidrofílico y aparece después de la fragmentación go como una base para catalizar la transferen-
de las moléculas por C1s (C4) o por C4b,2b (C3). cia posterior del grupo acil a nucleófilos
En el centro de la cadena alfa de C3 y C4, hidroxílicos, incluyendo el agua.
se encuentra un enlace tioéster, formado por Es posible que estos mecanismos básicos
interacción del grupo carboxilo de un ácido también operen en otras especies. De hecho, en
glutámico y el grupo sulfhidrilo de una cisteína. el ratón también existen dos isotipos de C4, co-
(Este tipo de enlace también es compartido por la dificados en el complejo H2.
α2-macroglobulina, un inhibidor de proteasas). La Los vertebrados disponen así de un meca-
activación de estos enlaces es uno de los eventos nismo defensivo de alta eficiencia que les per-
más importantes en el plasma para la eliminación mite unir covalentemente, C3b y C4b a la su-
de agresores que activan al complemento. Se ge- perficie atacada. Estos conceptos se resumen en
neran así enlaces covalentes de tipo hidroxiéster la figura 18-4.
o amidoéster con grupos hidroxilos y aminos pre-
sentes en las superficies antigénicas agresoras. De
esta manera, C3b y C4b, presentes en convertasas
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Figura 18-4. Generación de enlaces covalentes entre componentes activados y superficies receptoras.
En concordancia con lo anterior, C3 y C4 pueden

ser inactivados por amonio o hidrazima
(H2NNH2), que pueden atacar nucleofílicamente
el enlace tioéster.
2.2. Las C3 y C5 convertasas de las rutas

clásica y alterna son funcionalmente
homólogas
Esta homología se basa en que ambos tipos

de convertasas (clásica y alterna) generan produc-
tos idénticos (figura 18-5) y sus componentes tie-
nen homología estructural y genética.
Basado en estos resultados se puede proponer que:
Figura 18-5. Resumen de los productos generados por las
convertasas de C3 y C5 de las rutas clásica y alterna.
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a) Es posible que C3 y C4 sean productos de genes
duplicados ya que existe alta homología de se-
cuencia primaria en los vecindarios de los enla-
ces tioéster en la cadena alfa de ambas molé-
culas. En otras palabras, la homología va más allá
de la presencia del ácido glutámico y de la cisteína
involucrados en el enlace.
b) En ambas convertasas de C3, C3b o C4b ac-
túan como cofactores de las enzimas (C2b o Bb).
c) Es posible que tanto en las C3 convertasas
como en las C5 convertasas de ambas rutas, las
proenzimas (C2, B) sean productos de genes du-
plicados.
d) Las convertasas de C5 clásicas y alternas no
difieren en lo fundamental. En la alterna, C4b
es reemplazado por moléculas de C3b que,
posiblemente, representan una duplicación génica
de C4 o viceversa. Figura 18-6. Estructura de C1q.
e) Los productos de la acción de las convertasas

clásicas y alternas son los mismos.
porción resiste la acción de colagenasas y con-
serva la capacidad de unirse a complejos antígeno
3. RUTA CLÁSICA: ALGUNOS DETALLES anticuerpo aún después de tratada con la enzima.
MOLECULARES C1r y C1s se unen a la porción fibrilar de
C1q, en forma no covalente. Por su parte, C1q se
3.1. Unión de C1 une, en forma no covalente, a través de sus por-
ciones globulares, a las moléculas de anticuer-
La presencia o generación de complejos antígeno po del complejo antígeno-anticuerpo. Especí-
- anticuerpo desencadena la cascada a través de la eta- ficamente, C1q se une al dominio CH2 de la por-
pa de reconocimiento, que requiere la participación ción Fc de la molécula de anticuerpo. Se une
de C1. C1 está formado por las subunidades q, r, s. eficientemente a IgG1,2,3. Complejos inmunes
El reconocimiento mismo es efectuado por C1q. Al formados por IgG4 no activan al complemento.
microscopio electrónico, C1q tiene una estructura Las IgG no activan al complemento cuando
con un notable parecido a un ramo de 6 tulipanes. están libres en el suero porque C1q debe formar
La figura 18-6 resume estos conceptos. un complejo con 2 moléculas de Ac cuyos frag-
Cada una de las seis unidades de C1q (cada mentos Fc deben estar a una distancia crítica de
tulipán) consta de una porción fibrilar y una por- 30-40 nm. Se ha demostrado experimentalmente
ción globular, participando tres tipos de cadenas que el número de pares de moléculas de IgG
de peso aproximado a 25 kDa. C1q tiene entonces adecuadas para unir C1q, aumenta exponen-
18 cadenas, lo que da un peso total aproximado cialmente cuando el número total de moléculas
de 400 kDa. Las cadenas (A,B,C) son muy simi- de IgG unidas aumenta linealmente. Ej: En un
lares, pero no idénticas y probablemente repre- glóbulo rojo que tiene 1.000 moléculas de IgG
sentan el producto de tres genes duplicados unidas, sólo un 1% forma pares adecuados (pro-
(ligados en la cromosoma 1 en humanos). Los blema estadístico que asume que los antígenos
tulipanes están unidos en pares a través de sus están distribuidos al azar en la superficie). Este
cadenas C, por lo cual hay tres dímeros C-C y seis 1% aumenta al 20% cuando se unen 2.000 molé-
dímeros A-B. Todos unidos por puentes disulfuro. culas de IgG por glóbulo rojo.
La parte fibrilar tiene una estructura similar En la IgM los fragmentos Fc están a una dis-
al colágeno por lo cual es sensible a la colagenasa. tancia adecuada, ya que es un pentámero de
La parte globular es la responsable del reconoci- monómeros de inmunoglobulina tetramérica. Sin
miento de los complejos antígeno-anticuerpo. Esta embargo, no activa al complemento cuando se
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Sin título-2 337 5/26/06, 10:26 AM

encuentra libre en el suero. Se sabe también que más aceptada es que C1r, como muchos otros
una sola de estas moléculas es suficiente para lisar zimógenos, tendría una capacidad limitada de
un glóbulo rojo (de allí que se dice que es autoactivarse. Esta posibilidad se basa en la ob-
hemolíticamente más eficiente que la IgG y que, servación que C1r purificado forma dímeros en
incluso, se la llame hemolisina). La IgM, al reac- solución y que en estos dímeros se produce la
cionar con antígenos sobre una membrana celu- autoactivación, o sea que cada miembro del par
lar cambia su estructura plana a una forma es capaz de activar al otro. Es posible entonces
tridimensional, semejante a un corchete, exponien- que cuando C1 se combina con los complejos in-
do el dominio CH3 que une la porción globular munes, a través de la porción globular de C1q, las
de C1q. Con antígenos solubles, o en ausencia de relaciones espaciales en el tetrámero 2(C1r:C1s)
antígenos, tenderá a asumir la forma plana. La IgM sean favorables para que se produzca la
es la molécula diseñada para mediar el ataque autoactivación de por lo menos una molécula de
temprano de membranas biológicas por parte del C1r, la que podría activar a la otra. Las dos molé-
complemento. culas de C1r activado estarían así en condiciones
C1s y C1r son serino esterasas. Se unen de activar a las dos moléculas de C1s. Evidente-
no covalentemente a la porción fibrilar de C1q, mente, este mecanismo implica una considerable
en forma de dímeros de fórmula 2C1r: 2C1s, flexibilidad dentro del tetrámero para que se rea-
generando un tetrámero lineal (figura 18-7). Las lice la activación o autoactivación, considerando
moléculas de C1s están en los extremos de la que las moléculas de C1r están en los extremos
cadena que tiene una longitud de 50 nm. La del mismo.
estructura y contenido aminoacídico de ambas
es parecido, lo que sugiere que se originaron por 3.2. Activación de C4 y C2
duplicación génica. Cada monómero tiene un
peso de 83 kDa y está formado por una sola ca- Esta etapa cumple al menos 3 funciones, to-
dena polipeptídica. Al activarse, cada cadena se das derivadas de la asociación covalente de C4b y
fragmenta y el sitio catalítico aparece en el frag- C3b sobre la superficie activante:
mento menor. Este y el mayor permanecen uni-
dos por un puente disulfuro, lo cual implica a) Se facilita la fagocitosis a través de la unión a
la existencia de al menos una cisteína en cada los receptores para C3b y C4b presentes en la su-
fragmento. Esto permite que la actividad perficie de los fagocitos profesionales (CR1).
enzimática se mantenga incorporada al comple-
b) Se genera C3 y C5 convertasas, utilizando C4
jo C1q-Ac-Ag.
y C2, de modo que la activación pueda proseguir
Se desconoce el mecanismo exacto de la
hasta la activación de C3 y C5.
autoactivación de C1r que ocurre cuando la por-
ción globular de C1q interactúa con los fragmen- c) El depósito covalente de C3 y C5, direcciona
tos Fc de los complejos inmunes. La explicación los antígenos hacia órganos linfoides, facilitan-
do así la inducción de la respuesta inmune espe-
cífica.
La molécula de C4 no es una enzima sino

que actúa como matriz o cofactor positivo para el
ensamblaje de las C3 y C5 convertasas. Es una
molécula extremadamente versátil. Tiene al me-
nos siete dominios importantes y topográfica-
mente diferentes que le permiten interactuar con:
a) C1s de la ruta clásica, o MASP de la ruta de

las lectinas, lo que determina su activación.
b) Membranas biológicas atacadas (unión
covalente).
c) C2, para formar la convertasa de C3.
d) CR1, de células fagocíticas, lo que le permite
Figura 18-7. Unión de C1s y C1r a C1q. actuar como opsonina.
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Sin título-2 338 5/26/06, 10:26 AM

e) C4bp, lo que media su inactivación, cuando presente en fase fluida, generando gran cantidad
pasa a fase fluida. de C3b. C3 es digerido en su cadena alfa por el
f) I, lo que media su inactivación en fase fluida, sitio catalítico presente en C2b del complejo
cuando es reconocido por C4bp. C4b,2b (C3 convertasa). Esta etapa tiene al me-
g) C3, requisito para la activación de éste por parte nos 3 funciones, derivadas también del depósito
de C2b. Así, C3 puede actuar como opsonina, covalente de C3b sobre membranas biológicas:
o formar parte de la convertasa de C5.
a) Facilitar la fagocitosis.
Una vez iniciada la activación de C4 y C2, la
b) Proporcionar un sitio de unión para C5, de ma-
reacción puede ocurrir en muchos puntos de la
nera tal que C5 es modulado y puede ser digerido
membrana simultáneamente, alejándose en forma
por C2b presente en la nueva convertasa genera-
radial desde el punto en que se produjo la reac-
da (convertasa de C5 o C4b,2b,3b).
ción Ag-Ac (figura 18-8).
La fragmentación de C4 en C4b + C4a es un c) Direccionar antígenos hacia órganos linfoides,
punto de amplificación de la cascada. Así, por facilitando así la inducción de la respuesta inmu-
cada molécula de C1s activado se generan alrede- ne adquirida. Esta función sería compartida con
Figura 18-8. Esquema de la secuencia desde el reconocimiento antigénico hasta la implantación del Complejo de Ataque a
Membrana.
dor de 30 moléculas de C4b que se unirán a la C4, dado que el receptor CR1 de los linfocitos B
membrana, lo que representa no más del 5% del es común para C3b y C4b. C3 es una molécula de
C4b generado por esa molécula de C1s. 190 kDa, sintetizada como una sola cadena que es
¿Qué ocurre con los C4b que pasan a la fase luego digerida a una cadena alfa de 115 kDa y una
fluida? Para evitar el ataque a membranas propias, cadena beta de 75 kDa, que permanecen unidas
inocentes, vecinas, es importante inactivarlos. por puentes disulfuro.
Hoy, existe considerable evidencia que los
3.3. Convertasa de C3 genes estructurales de C3 y C4 se originaron por
duplicación. Esta aseveración se basa en que, apar-
Las moléculas de C3 convertasa generadas te de la importante homología génica, son
sobre la membrana biológica reaccionarán con C3, funcionalmente análogos: Se unen covalentemente
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Sin título-2 339 5/26/06, 10:26 AM

a las superficies celulares y son capaces de generar c) La corta vida de los sitios de unión de C3b y
las C3 y C5 convertasas por acción de dos serino C4b restringe la unión de estas moléculas a un área
proteasas que también son análogas (C2b y Bb). circular de 40 nm de radio, cuyo centro está dado
El 10-15% del total del C3b generado se une por la molécula de C1s o por la C3 convertasa.
a las células. Es otro paso de amplificación ya que
aproximadamente 200 moléculas de C3b se depo- Finalmente, en la figura 18-9 se muestran las
sitan sobre la célula por cada C3 convertasa. Al igual etapas en que ocurre amplificación.
que en el caso de C4b, la gran cantidad de C3b que
pasa a la fase fluida debe ser inactivada.
3.4. Convertasa de C5
La C5 convertasa fragmenta a C5 en C5a y

C5b. Este es el último paso enzimático en la ac-
tivación del complemento. C5 circula preasociado
con C6-C7-C8-C9. Al generarse C5b, el comple-
jo C5b-C9 cambia de hidrofílico a anfifílico, ex-
poniendo sectores hidrofóbicos que le permiten
insertarse en membranas biológicas.
C6, C7, C8 y C9 en el complejo destructor
MAC se encuentran en proporciones estequio-
métricas definidas. C9 se polimeriza alrededor de Figura 18-9. Etapas de amplificación en la activación del Sis-
un pilar formado por C5b-C8, formando una espe- tema del Complemento.
cie de tubo que se inserta en la membrana. Esta
estrategia es similar a la usada por las células “T
killer” o citotóxicas y NK que destruyen a la célula 3.6. Ruta de las lectinas
blanco insertando una estructura tubular (perforina)
en sus membranas plasmáticas. Es un verdadero La ruta de las lectinas, descrita más re-
misil que las células T insertan en las membranas cientemente, puede considerarse como un
que ellas, con sus receptores específicos, recono- “bypass” de la ruta clásica. Al igual que la
cen como extrañas. Esta estructura tubular tiene ruta alterna, se activa en forma independiente
una notoria similitud al MAC. de anticuerpos. Cuando los macrófagos
En la membrana celular atacada por la acti- fagocitan bacterias u otros agentes agresores,
vación de la ruta clásica podemos distinguir tres son estimulados para secretar citoquinas como
tipos de sitios topográficamente definidos. El pri- IL-1, IL-6 y TNFα. Éstas actúan sobre los
mero, donde se realiza el reconocimiento hepatocitos, los que responden produciendo
antigénico por los anticuerpos; el segundo, donde proteínas de fase aguda, entre las cuales se
se generan las C3 y C5 convertasas y, el tercero, encuentra la lectina que une manosa (“mannose
donde se inserta el MAC. binding lectin” o MBL).
Siendo la manosa un componente principal
3.5. Mecanismos que confinan la activación del de las glicoproteínas de la pared bacteriana (y
complemento a las membranas blanco probablemente de otros agresores), la MBL se
(“target”) o culpables, en la ruta clásica. une a las bacterias y otros patógenos, actuando,
no sólo como una potente opsonina, sino tam-
a) La activación de C1 requiere la unión de por lo bién mediando la activación del complemento.
menos un par de inmunoglobulinas a una distan- Concretada esta unión, un complejo proen-
cia crítica o de una molécula de IgM unidas a la zimático, unido en forma dimérica a MBL (“MBL
superficie antigénica. -associated serine protease” o MASP) se activa,
actuando sobre C4 y C2, en una manera aparen-
b) Sólo C2b, modulado por combinación con C4b temente idéntica a como lo hace C1s activado,
unido a superficies antigénicas, puede formar las presente en el complejo macromolecular C1q-
C3 y C5 convertasas. C1r2-C1s2 (figura 18-10).
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Sin título-2 340 5/26/06, 10:26 AM

Figura 18-10. Ruta de las lectinas. La manosa de la superficie bacteriana se une a MBL (“mannose binding ligand”). La MASP2
(“MBL-associated serine protease”, forma dimérica), forma complejo con MBL (MBL - MASP2) que hidroliza a C2 y C4. Se
muestra además la activación de la ruta clásica a través de un complejo antígeno-anticuerpo (Ag-Ac).
Parece, entonces, que habría similitudes fun- específicos, característica fundamental de esta ruta,
cionales y estructurales importantes entre los com- al igual que la ruta de las lectinas. Difiere de la
plejos C1q-C1r2-C1s2 y MBL-MASP2. Así, MBL ruta clásica mediada por anticuerpos, en que
tiene similitudes estructurales importantes con C1q proporciona una línea de defensa que está inme-
(de hecho, al microscopio electrónico, también diatamente disponible pues no requiere de inmu-
presenta una estructura semejante a un ramillete nización previa. Participan en ella seis proteínas
de tulipanes) y, en MASP2, un monómero sería plasmáticas: C3, B, D, H, I y P. De éstas, B, D y P
similar a C1r y, el otro, a C1s. La deficiencia de participan exclusivamente en esta ruta. Las seis
MBL ha sido asociada con susceptibilidad a un proteínas realizan una vigilancia continua que es-
amplio rango de enfermedades bacterianas. capa un poco a los conceptos inmunológicos con-
MBL también puede unirse a IgA polimérica, vencionales. Por ello, esta ruta y la de las lectinas
induciendo la activación del complemento, lo cual corresponden esencialmente a mecanismos de in-
podría explicar mecanismos defensivos mediados munidad innata
por IgA, a nivel de mucosas. ¿Cómo ocurre la discriminación entre molé-
culas del hospedador y moléculas extrañas si no
participan los anticuerpos?
4. ACTIVACIÓN DE LA RUTA ALTERNA Una de las consecuencias inevitables del ini-
cio de los mecanismos de amplificación descri-
La ruta alterna proporciona al hospedador un tos, anteriormente, es la generación de una gran
mecanismo de defensa innata, muy efectivo. Este cantidad de moléculas C3b que se unen
mecanismo se realiza en ausencia de anticuerpos indiscriminadamente a células del organismo
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agresor activador y a células del hospedador (no P: Regulador positivo. Existe en dos formas,
activadoras o inocentes o “bystanders”). En el activa e inactiva. Se activa en presencia de
hospedador existe una serie de proteínas C3b,Bb (C3b convertasa alterna) y
reguladoras que inactivan rápidamente a las mo- estabiliza este complejo. También estabiliza
léculas de C3b que atacan a sus propias células. a la C5 convertasa alterna, (C3b)n,Bb, (n>1)
Estas proteínas reguladoras están presentes en el
plasma y también como proteínas integrales de las 4.1. Activación de la Ruta Alterna
membranas celulares del hospedador.
Los organismos sensibles al ataque de la ruta Se desconoce el mecanismo exacto de gene-
alterna incluyen bacterias, hongos, virus, células ración de las primeras moléculas de C3b
tumorales inducidas por virus, otras líneas de cé- metaestables (enlace tioéster activado). Está cla-
lulas tumorales y eritrocitos humanos carentes de ro que participan sólo las seis moléculas mencio-
DAF (factor acelerador del decaimiento de nadas. Los pasos más aceptados se ilustran en la
convertasas). figura 18-11.
El C3b que se deposita en estos tipos de par- Se distinguen cuatro etapas: Iniciación, De-
tículas puede funcionar como opsonina o pasar a pósito de C3b, Reconocimiento y Amplificación.
formar parte de C3 o C5 convertasas alternas. Las
C3 convertasas neoformadas pueden generar más a) Iniciación. En la Iniciación se generaría una
C3b que se deposita hasta que la superficie es sa- forma de C3 alterado por hidrólisis de su enlace
turada o hasta que se agota el stock de C3. La ruta tioéster (sin proteolisis de la cadena alfa, como
alterna del complemento puede depositar hasta 2 ocurre en la ruta clásica y en la ruta de las lectinas).
millones de moléculas C3b en la superficie de un Designaremos a este C3 como C3(H20). Se for-
glóbulo rojo en un período menor de 5 min. maría muy lentamente en soluciones acuosas fi-
Las características principales de las proteí- siológicas (0,005% del C3 disponible) o 50 - 100
nas que participan en la ruta alterna son las sing/ml (cercano a la concentración de D). La
guientes: concentración de C3 es 1 - 2 mg/ml en todas las
especies vertebradas estudiadas.
B: Contiene histidina, ácido espártico y serina En la ruta alterna, C3(H2O), tendría todas las
en posiciones homólogas con otras serino propiedades funcionales de C3b excepto que, por
proteasas. Sin embargo, en el extremo un período corto de tiempo, esta proteína sería
amino terminal tiene 300 residuos adicio- resistente a la inactivación por H e I, dado que
nales con secuencia diferente a las de otras mantiene intacto el extremo amino terminal de su
serino proteasas. Esta es también una ca- cadena alfa. C3(H2O) forma un complejo con B
racterística de C2. nativo, en presencia de concentraciones fisiológi-
cas de Mg2+. Esta propiedad aparece inmediata-
D: Circula en forma activa. Es una proteasa
mente después de la hidrólisis del enlace tioéster.
altamente específica, ya que su único
El complejo C3(H2O),B es activado por D for-
substrato conocido es B. Rompe un enlace
mándose una C3 convertasa de fase fluida C3(H2O),
Arg-Lys en B sólo cuando está unido a C3b,
Bb. (Nótese que en esta enzima C3 no ha sido dige-
liberando el fragmento Bb. Juega un papel
rido proteolíticamente). Esta C3 convertasa de fase
similar al de C1s de la ruta clásica. No se
fluida es la primera enzima capaz de generar C3b
sabe si hay homología de secuencia prima-
metaestable. La enzima misma está confinada a la
ria entre estas dos enzimas.
fase fluida (a diferencia de la ruta clásica y de las
H: Cofactor regulador negativo. Se une a C3b lectinas, donde la C3 convertasa, C4b, 2b, está con-
y sólo en estas condiciones, la cadena alfa finada a la superficie de la célula atacada, unida
de éste se torna sensible a la digestión por I. covalentemente a través de C4b). El C3b metaestable
generado puede difundir durante 60 µseg, hasta en-
I: Serino proteasa que actúa como factor re-
contrar una superficie receptiva.
gulador negativo. Digiere las cadenas alfa
Nótese que la iniciación no necesita de par-
de C3b y C4b. Requiere de los cofactores
tículas activantes, es espontánea, y estaría ocu-
H, (sobre C3b), CR1 (sobre C3b y C4b,
rriendo siempre. Se podría decir que la ruta alter-
ambos unidos a membranas) y C4-bp (so-
na está siempre iniciada. Si continúa o no depen-
bre C4b, en fase fluida), para ejercer su fun-
derá de la naturaleza de la superficie receptiva.
ción enzimática.
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Figura 18-11. Activación de la Ruta Alterna. En este proceso se distinguen 4 etapas: Iniciación, Depósito de C3b, Reconoci-
miento y Amplificación.
b) Depósito de C3b. La habilidad del enlace activadores y no activadores ocurre poco después
tioéster del C3b metaestable para reaccionar con del depósito inicial de C3b. Esta discriminación
una amplia variedad de carbohidratos (grupos es el resultado de una capacidad diferencial de los
hidroxilos), proteínas (grupos aminos), capacita a factores reguladores para controlar el proceso de
esta ruta para depositar C3b sobre una amplia gama amplificación, dependiendo si se trata de una su-
de microorganismos. Es muy posible entonces que perficie activadora o no activadora. En general,
el primer factor de resistencia del hospedero que C3b en fase fluida y C3b unido a superficies o
encuentra un microorganismo invasor, es C3b, membranas del hospedador (no activadores por
generado constantemente por C3(H2O), Bb en fase definición) es rápidamente inactivado por H e I.
fluida. C3b se unirá covalentemente a su superfi- En cambio, cuando C3b se une a partículas inva-
cie y lo hará apetecible para los fagocitos profe- soras activantes, la C3 y C5 convertasas son pro-
sionales. tegidas de la destrucción mediada por las proteí-
Una característica muy particular de la ruta nas reguladoras de la fase fluida. Aparentemente,
alterna es que el depósito covalente de C3b pare- esto es determinado por la eficiencia con que el
ce continuo e indiscriminado tanto sobre las célu- factor H pueda interactuar con el C3 unido a la
las del hospedador como sobre las de los organis- superficie. Así, se ha determinado que C3b, uni-
mos agresores. El hospedador resuelve este pro- do a superficies activantes, no muestra afinidad
blema con moléculas reguladoras negativas que por el factor H, mientras que su afinidad por el
inactivan a C3b. Más adelante se verá cómo se factor B y la properdina permanece inalterada. En
resuelve este problema. otras palabras, la habilidad para distinguir entre
superficies activadoras y no activadoras de la ruta
c) Reconocimiento. La discriminación entre alterna es un atributo de C3b o de H o de ambos y
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Sin título-2 343 5/26/06, 10:26 AM

este atributo es expresado o modulado por carac- miento, c) Aumenta exponencialmente, debido a
terísticas bioquímicas de la superficie de la partí- la amplificación o retroalimentación y, d) Alcan-
cula. za un plateau, correspondiente al agotamiento de
Aún no está claro qué estructuras molecu- componentes o de receptores de superficie.
lares son reconocidas por la ruta alterna. Un as- La vida media de C3b,Bb (Mg2+) es alrede-
pecto común de todos los activadores es la pre- dor de 90 segundos. La presencia de concentra-
sencia de carbohidratos, pero la gran variedad y ciones fisiológicas de H acelera la disociación del
complejidad de las estructuras glucosídicas hace complejo, bajando la vida media a menos de 1 se-
difícil visualizar cuáles son los determinantes gundo.
moleculares compartidos que son reconocidos. Un
aspecto común a la mayoría de los activadores es 4.2. Papel de la properdina
la presencia de concentraciones muy bajas de áci-
do siálico. Es notorio el hecho que los glóbulos La properdina se une sólo a la convertasa de C3 o
rojos de oveja, que activan muy mal la ruta alter- de C5 alterna que se encuentran unidas a mem-
na humana, se convierten en activadores eficien- branas. Su participación comienza sólo después
tes si se elimina o modifica el ácido siálico de su que se ha iniciado el proceso de amplificación.
superficie, por ej. con neuraminidasa. Es poco Así, C3b,Bb,P tiene una vida media dos logaritmos
probable, sin embargo, que éste sea el único fac- más larga que C3b,Bb. Este efecto condujo a al-
tor implicado. Es posible que el ácido siálico cum- gunos investigadores a creer que la ruta alterna no
pla una función moduladora cuyo mecanismo no podía ser activada en ausencia de properdina.
está definido.
d) Amplificación y Regulación La retroalimen- 5. FASE TERMINAL: GENERACIÓN DEL

tación positiva, dependiente de C3b, es una ca- COMPLEJO DESTRUCTOR DE MEM-
racterística exclusiva de la activación de la ruta BRANAS
alterna del complemento, o sea, la convertasa de
C3 es capaz de generar muchas moléculas de C3b En esta fase participan siete componentes del
que tienen la capacidad potencial de generar nue- Sistema del Complemento (tabla 18-2).
vas convertasas de C3 y C5. Es importante seña- El ensamblaje del MAC puede visualizarse
lar que D convierte B en Bb sólo cuando éste está en dos etapas: a) ensamblaje del complejo C5b-8
unido a C3b. Este proceso es controlado por los y b) polimerización de C9.
factores H e I. Así, C3b depositado en una super-
ficie activadora es relativamente resistente a la 5.1. Generación de C5b-8
inactivación por H e I. Lo mismo ocurre con las
convertasas de C3 que se generen sobre este tipo C5 no tiene enlace tioéster a pesar de tener
de superficie. Este balance entre amplificación y homología de secuencia primaria con C4, C3 y
control permite a la ruta depositar C3b de la fase alfa 2 M. Por lo tanto, no forma enlaces covalentes
fluida al azar sobre partículas activantes y no con membranas. El pilar C5b-8 se encuentra uni-
activantes. Sin embargo, también le permite, am- do, por medio de C5b, a C3b de las convertasas
plificar sólo aquellas pocas moléculas que se han de C5 clásica o alterna. A su vez, ese C3b se en-
unido a superficies activantes. cuentra unido covalentemente a la superficie de
La convertasa de C3 estabilizada, C3b, Bb, la célula agresora.
P, al actuar sobre C3, genera una gran cantidad de Los componentes terminales del complemen-
fragmentos C3b parte de los cuales, en presencia to son hidrofílicos en su estado no activado. Para
de Mg2+, pueden combinarse con el factor B que expresar su función, consistente en destruir o al-
se hace sensible a la acción de D. Se genera así la terar drásticamente las membranas externas de
convertasa de C3 alterna que puede repetir el pro- los organismos invasores, estos componentes de-
ceso. ben sufrir una transición del estado hidrofílico o
En síntesis, el depósito de C3b sobre partí- un estado anfifílico, para poder insertarse en la
culas activadoras tiene cuatro características im- fase lipídica de las membranas. Esta transición es
portantes: a) Depende del tipo de partícula una característica que define a las proteínas ter-
activante, b) Tiene un período de latencia, proba- minales del complemento. Básicamente, implica
blemente correspondiente a la etapa de reconoci- una serie de interacciones proteína-proteína que
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Sin título-2 344 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 18-2. Propiedades de las proteínas terminales del Complemento
Componente Subunidades Peso molecular

(kDa)
C5 alfa 124
(S-S)n
beta 76
C6 1 cadena 120
C7 1 cadena 110
C8(αγ) alfa 64
(S-S)n
gamma 22
C8(β) beta 64
C9 1 cadena 73
S 1 cadena 80
S-S : Puente disulfuro.
se traducen en el ensamblaje de complejos superficie activante no es parte de una membrana

macromoleculares heteropoliméricos que expre- fosfolipídica, como el caso de los complejos in-
san simultáneamente dominios hidrofílicos e munes y las membranas de ciertos tipos de hon-
hidrofóbicos. gos, como el zimosan mismo, C5b-7 no tendrá
La activación proteolitíca de C5 es realizada dónde unirse y el complejo será liberado a la fase
por cualquiera de las dos C5 convertasas. C5 se fluida. Este complejo es peligroso para el
une a C3b de la C5 convertasa donde sufre modu- hospedador pues puede insertarse en membranas
lación de substrato y posterior acción proteolítica, inocentes vecinas y generar el MAC. Esto es evi-
ya sea por parte de las sub-unidades catalíticas tado por un conjunto de proteínas plasmáticas o
C2b (clásica) o Bb (alterna). Como productos se inhibidores de C5b-7.
libera C5a y el fragmento C5b permanece unido C8 se une al pilar heteropolimérico a través
a la sub-unidad C3b de la C5 convertasa y modu- de su subunidad beta. C8 alfa-gama es necesario
la a C6, para iniciar la formación de un pilar (for- para iniciar la polimerización de C9. Por lo tanto,
mado por C5b a C8) sobre el cual se ordenará C9 ambas unidades, la beta y la alfa-gamma son ne-
para formar el túbulo. C5-C9 circulan cesarias para que C8 exprese su función. Un de-
preasociados laxamente, con características fecto genético en cualquiera de los tres genes
hidrofílicas. involucrados en la generación de las 3 cadenas de
C5b se une estequiométricamente con C6. C8, resulta en la incapacidad de formar el MAC,
El complejo C5b-6 permanece aún unido al C3b con las consecuencias patológicas que correspon-
de la convertasa y modula a C7 produciéndose de (susceptibilidad aumentada a una serie de in-
una transición irreversible de un complejo fecciones bacterianas). La porción alfa-gamma de
hidrofílico a un complejo anfifílico. Esta es la pri- C8 pasa a formar parte del dominio hidrofóbico
mera oportunidad en la activación del complemen- del heteropolímero.
to en que se realiza la transición hidrofílica -
anfifílica. 5.2. Polimerización de C9
Considerando que C5b está unido al C3b de
las convertasas, este complejo está muy próximo C9 monomérico es hidrofílico, globular de
a la membrana por lo cual la inserción es muy 50-80Ao de diámetro. Si se incuba en forma pura
eficiente y se acerca al 100%. Por otra parte, si la a 37oC, en condiciones fisiológicas, se produce la
345
Sin título-2 345 5/26/06, 10:26 AM

polimerización de aproximadamente 17 molécu- En el MAC, el receptor de poli C9, esto es
las, generando un complejo tubular anfifílico (poli C5b-8, es detectado como un apéndice de 150 Ao
C9). La velocidad de polimerización es fuerte- ubicado en la salida del túbulo. Este apéndice se
mente aumentada in vitro si se incluye C5b-8. disocia en presencia de SDS, mientras que la es-
Poli C9 tiene una estructura de 160Ao de lar- tructura tubular permanece intacta. La estructura
go, 100A o de luz y está formado por 17 tubular del MAC es diferente a la de poli-C9 en-
protómeros. Este túbulo tiene un dominio samblado in vitro. El MAC está compuesto de una
hidrofóbico localizado en la cara externa de uno molécula de C6, una de C7, C8 alfa-gamma, C8
de los extremos del homopolímero y un ensan- beta y 10-17 moléculas de C9. Se trata entonces
chamiento en el otro extremo. El interior del túbulo de una estructura heteropolimérica. La figura 18-
parece ser hidrofílico. El diámetro de los túbulos 12 compara la estructura del MAC y de poli C9.
en solución y el diámetro de las lesiones produci- Es muy posible que C6, C7, C8 y C9 sean
das por el complemento es similar, lo cual indica proteínas codificadas por genes duplicados pues
que esta estructura forma parte importante del muestran cierta homología de secuencia primaria
MAC. y reactividad cruzada con algunos anticuerpos.
Si poli C9 es agregado a una suspensión de
glóbulos rojos inducirá la lisis de éstos de mane- 5.3. Efecto funcional de la inserción del MAC
ra similar a como lo hace el MAC. Esta lisis ocu- en las membranas
rrirá incluso si los glóbulos rojos y el poli C9 son
de un mismo individuo. En condiciones fisiológi- El MAC, insertado en la membrana, ocupa
cas. Esto no ocurre, pues el proceso de una área del 10.000 (AO)2. Si se insertan grandes
polimerización de C9 y su inserción a membranas números de este heteropolímero, por ej. sobre
biológicas requiere de la presencia tutelar de membranas bacterianas, la superficie total de la
C5b-8, complejo que actúa como aceptor de C9. bacteria puede aumentar más de dos veces. Evi-
La polimerización de C9 ocurre simultánea- dentemente, esta expansión dramática puede ser
mente con el desplegamiento de los monómeros devastadora si consideramos sólo el efecto mecá-
que, en su forma globular hidrofílica no activa, nico implicado. Si los atacados son glóbulos ro-
tienen un diámetro de 50Ao. Se genera así una jos, la inserción de sólo 800 MAC hará que estas
forma alargada anfifílica de 160Ao de longitud. células pierdan su forma bicóncava y adoptarán
El homopolímero tubular formado por C9 en una forma esférica. Es muy posible que sólo el
solución es resistente a la disociación por SDS. efecto mecánico de la inserción de los MACs pro-
La estabilidad del túbulo frente a SDS se explica voque la muerte celular independientemente de
por la generación de enlaces disulfuro entre los otros efectos osmóticos o metabólicos que los ca-
monómeros. Es probable que esta estabilidad nales puedan inducir. Entre estos otros efectos
bioquímica de poli C9 es un prerrequisito para que están:
pueda cumplir su función citolítica en el MAC, 1. Entrada de Ca2+ al ambiente intracelular
resistiendo las defensas proteolíticas de las célu- con la activación indiscriminada de una variedad
las atacadas. de rutas metabólicas.
Figura 18-12. Complejo de ataque a membrana (MAC) comparado con poli C9.
346
Sin título-2 346 5/26/06, 10:26 AM

2. Salida K+, entrada Na+. La célula activa 6. ALGUNOS ASPECTOS GENÉTICOS
una serie de mecanismos de bombeo compensa- DEL COMPLEMENTO
torio lo cual conduce a desembolso indiscrimina-
do de ATP, con altos gastos de energía, sucesos C2, B y C4:. Los genes que codifican C2, B y C4,
que pueden acelerar la muerte celular. sin excepción, se encuentran en el centro de los
Existen algunos tipos celulares que han de- MHC de todas las especies vertebradas estudia-
sarrollado mecanismos de escape al ataque por das. Son componentes especiales, porque partici-
MAC. Así, las bacterias Neisseria gonorrhea, pan en la formación de los 2 tipos de convertasas
Salmonella minesota, ciertos tipos de Escherichia de C3 y de C5.
coli, y algunas líneas de células neoplásicas, acti-
C3: El gen que codifica C3 se encuentra en el
van el complemento, hasta la formación del MAC,
cromosoma 17 del ratón, a 13cM de la región D.
pero, usando diferentes mecanismos, resisten la
En humanos se encuentra en el cromosoma 19, no
acción de este complejo.
ligado a HLA.
5.4. Perspectivas futuras del estudio de la fase C4-bp, H, CR1 (CD35), CR2 (CD21), DAF
final de la activación del complemento (CD55), MCP (CD46): Constituyen un con-
junto de proteínas reguladoras, que actúan ya
El descubrimiento de la polimerización de C9 sea en fase fluida (C4-bp, H o como molécu-
como el mecanismo subyacente al daño de mem- las integrales de membranas (CR1, CR2, DAF,
branas biológicas mediado por el complemento MCP). Todas estas proteínas presentan propie-
hizo renacer el interés en el estudio de esta fase de dades estructurales similares y los genes que
la activación. Por otra parte, se ha descubierto que las codifican se encuentran ubicados en un solo
los linfocitos T citotóxicos y células NK pueden cromosoma (1, en humanos y ratones). Con ex-
destruir células agresoras o extrañas, insertando cepción de DAF, todos son cofactores de I, ya
en sus membranas proteínas citolíticas o sea en fase fluida o en membranas, mediando
perforinas. La perforinas polimerizan en el cito- así la degradación de moléculas de C3b o C4b
plasma de estas células en poliperforinas, en una que se hayan insertado accidentalmente en
manera muy similar a poli-C9. La reactividad membranas propias o que hayan pasado a la
inmunológica cruzada entre C9 y poliperforina, fase fluida.
sugiere relaciones de homología entre los genes
C8: Está formado por la asociación del producto
que los codifican.
de 3 genes. C8 alfa es codificado en el cromosoma
Las imágenes al microscopio electrónico de
humano 1 (se desconoce la ubicación del gen en el
lesiones producidas por células NK o células T
ratón). C8 beta es codificado en los cromosomas 1
citotóxicas y aquellas producidas por el comple-
y 4, mientras que C8 gamma es codificado en los
mento son muy similares.
cromosomas 9 y 2, en humanos y ratones, respecti-
Probablemente, los mecanismos moleculares
vamente. A nivel proteico, las cadenas alfa y gamma
de polimerización, cambios conformacionales,
están unidas covalentemente, mientras que la ca-
transición hidrofílica-anfifílica, inserción en mem-
dena beta se asocia al dímero en forma no covalente.
branas y formación de canales transmembranas,
El dímero y el monómero se ubican en posiciones
son similares para C9 y perforinas. Es muy pro-
diferentes en el pilar molecular C5b – C9.
bable entonces que C9 y las perforinas sean miem-
bros de familias genéticamente relacionadas cuya
función es la destrucción de las membranas de
7. COMPLEMENTO Y ENFERMEDAD
agentes invasores y, posiblemente, de células
tumorales.
El sistema del complemento ha evoluciona-
Evidentemente, existen diferencias importan-
do como un medio rápido para destruir agentes
tes en las estrategias seguidas por las perforinas y
agresores, ya sea directamente lisándolos o, indi-
por C9 para lograr la inserción del “misil” en las
rectamente, mediando la activación de células
membranas extrañas, pero el resultado final sería
fagocíticas profesionales. El arte del sistema del
el mismo: muerte celular. En el primer caso, el
complemento consiste en focalizar la acción lítica
complejo macromolecular citotóxico es ensambla-
y opsonizante sobre membranas biológicas de
do intracelularmente para ser luego transferido a la
agresores. Esta tarea no es trivial, considerando
célula blanco, que contacta a la célula citotóxica.
que las distancias entre membranas de células pro-
347
Sin título-2 347 5/26/06, 10:26 AM

pias, “inocentes”, y células agresoras, “culpables”, Morgan, B.P. and Harris, C.L., Complement
son frecuentemente virtuales. Por lo tanto, el com- Regulatory Proteins, Academic Press, N.Y,
plemento puede, accidentalmente, mediar daño a USA, 1999.
tejidos propios.
Durante la activación del sistema se generan Morley, B.J. and Walport, M.J., The Complement
una serie de fragmentos flogísticos que en situa- Facts Book, Academic Press San Diego, USA,
ciones particulares pueden mediar inflamaciones 2000.
severas.
Más conocidas son las consecuencias pato- Reid, K., “The Complement System a Major
lógicas de las deficiencias en componentes del sis- Effector Mechanism in Humoral Immunity”, The
tema. Así, las deficiencias de C3, genética o deri- Immunologist, 3: 206-209, 1995.
vada de la acción de proteínas reguladoras, con-
duce a problemas de opsonización, que se mani- Ross, G., Immunobiology of the Complement
fiestan en susceptibilidad aumentada a una serie System. An Introduction for Research and
de infecciones. Las deficiencias parciales de MBL Clinical Medicine, Academic Press, INC, 1986.
conducen a infecciones piogénicas que afectan
principalmente a niños que ya han perdido la in-
munidad pasiva materna. Las deficiencias aso-
ciadas con componentes del MAC se asocian con
infecciones principalmente con Neisseria.
Deficiencias de C1q, C1r, C1s, C4 y C2: Se
asocian con enfermedades tipo lupus eritematoso
sistémico (SLE). La patogenia de estas enferme-
dades estaría asociada con la capacidad del com-
plemento para solubilizar complejos inmunes.
La deficiencia del inhibidor de C1r y C1s
(C1-INH) conduce a una activación descontrolada
de las serino proteasas, lo que conduce a
angioedema hereditario, enfermedad que afecta
principalmente a mujeres.
Finalmente, la interacción de MBL con IgA
polimérica podría explicar el depósito de proteí-
nas del complemento en nefropatías mediada por
IgA.
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas, AK.; Lichtman, AH.; Pober J.S., Cellular

and Molecular Immunology, Fourth Edition.
W.B. Saunder Company. Pennsylvania, USA,
2000.
Janeway, Ch.A.; Travers, P.; Walport, M. and

Shlomchik, M., Immunobiology, Fifth Edition,
Garland Publishing, NY, USA, 2001.
Male, D.; Cooke A.; Owen, M.; Trowsdale, J. and

Champion, B., “Complement”, Advanced
Immunology, MOSBY, New York, USA, 1996.
348
Sin título-2 348 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 19
INMUNIDAD MEDIADA POR CÉLULAS
Luz Blanco P. y Javier Puente P.
1. Introducción
2. Citolisis mediada por linfocitos T
2.1. Mecanismo membranolítico
2.2. Mecanismo dependiente de la inte-
racción FasL-Fas
3. Citolisis mediada por células NK
3.1. Citotoxicidad mediada por células
NK
3.2. Receptor FcγRIIIA (CD16)
4. Métodos de estudio del proceso citolítico
5. Hipersensibilidad retardada (HR)
349
Sin título-2 349 5/26/06, 10:26 AM

350
Sin título-2 350 5/26/06, 10:26 AM

RESUMEN
Los principales linfocitos citotóxicos son los linfocitos T CD8+ citotóxicos (LTc) pertene-
cientes a la respuesta inmunológica específica y las células NK, pertenecientes a la respuesta
inmunológica innata. Los primeros, como una característica general de los LT, basan su especifi-
cidad en el reconocimiento del antígeno a través del TCR; las células NK, que son TCR-, poseen
una amplia variedad de receptores de activación y de receptores de inhibición de la citotoxicidad
para interactuar con la célula blanco, lo que apoya su falta de especificidad. Uno de los recepto-
res de las células NK es el receptor para la porción Fc de las IgG (FcγRIII o CD16), el cual
permite explicar la citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC). El mecanismo de citolisis
es muy similar en ambos casos e implica las siguientes etapas: reconocimiento y unión de la
célula sensible o célula blanco; activación de la célula citotóxica: transducción de señales y
reorientación de los elementos del citoesqueleto hacia la zona de contacto con la célula blanco;
secreción de los componentes de los gránulos, perforina y granzimas (enzimas proteolíticas de
los gránulos) que van a provocar daño a la membrana de la célula blanco (mecanismo
membranolítico) y además los componentes de los gránulos pueden ingresar a la célula blanco y
activar el mecanismo de muerte celular programada o apoptosis de la célula blanco. La interacción
FasL - Fas inicia el proceso de apoptosis que se caracteriza por la activación de enzimas proteolíticas
(caspasas) y la posterior fragmentación del DNA. Ambos mecanismos participan simultánea-
mente en los linfocitos citotóxicos granulares, en cambio los linfocitos agranulares y otros sub-
tipos minoritarios de LT, producirían lisis solamente a través del mecanismo de apoptosis. Final-
mente, ocurre la lisis de la célula blanco y la apoptosis o el reciclamiento de la célula efectora, la
cual puede transformarse en una célula de memoria en el caso de los LTc. Los monocito/macrófagos
activados pueden ejercer la destrucción de microorganismos por fagocitosis y de células
eucarióticas por citotoxicidad. Un mecanismo que refleja muy bien estas acciones es el de hiper-
sensibilidad retardada, en el cual se logra la activación de los macrófagos a través de las citoquinas
producidas por los LT CD4+ y CD8+ post contacto con la célula presentadora del antígeno,
iniciándose un complejo proceso que culmina con la activación de los macrófagos.
1. INTRODUCCIÓN lulas tumorales, células transformadas por virus,

células infectadas con bacterias patógenas
La citotoxicidad mediada por células la ejer- intracelulares; y además, también lisan bacterias
cen principalmente los linfocitos T citotóxicos y parásitos libres. La unión entre los linfocitos
(LTc) y las células “natural killer” (NK) o agreso- citotóxicos y las células blanco resulta en una
ras naturales. Si bien ambos tipos celulares po- interacción característica que culmina con la lisis
seen una serie de propiedades comunes, existen de la célula blanco, proceso que será analizado en
importantes diferencias. Sólo las células NK, que el presente capítulo.
forman parte de la inmunidad innata, poseen La primera etapa del proceso citolítico es la
citotoxicidad espontánea y expresan constitu- etapa de unión entre la célula citotóxica y la cé-
tivamente las moléculas citotóxicas determinan- lula blanco. La unión en el caso de los LTc, impli-
tes del proceso lítico; en cambio, las células T ca el reconocimiento del antígeno asociado al
constituyentes de la inmunidad adquirida, requie- Complejo Principal de Histocompatibilidad
ren del proceso de selección por el antígeno y no (MHC) de la célula blanco por el receptor T (TCR)
expresan en reposo los genes de las moléculas y además participan numerosas moléculas de ad-
citotóxicas; es decir, en este caso corresponden a hesión de la superficie de las células en contacto.
genes inducibles. Las células sensibles a su ac- En el caso de las células NK, células altamente
ción o células blanco son fundamentalmente: cé- heterogéneas, pueden participar en la interacción
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Sin título-2 351 5/26/06, 10:26 AM

con la célula blanco una gran variedad de recep- independiente de la célula efectora, las que pueden
tores de activación e inhibición de la citotoxicidad reciclarse e iniciar nuevamente el proceso o quedar
y moléculas de adhesión; uno de éstos es el recep- como una célula de memoria en el caso de los LTc.
tor para la porción Fc de las inmunoglobulinas G: También, estas células efectoras activadas pueden
FcγRIII (CD16), responsable de la citotoxicidad sufrir apoptosis inducida por el contacto con la cé-
dependiente de anticuerpos (ADCC). Las células lula blanco y post-activación, proceso que experi-
NK también son capaces de reconocer las molé- mentan tanto los LTc como las células NK. Por su
culas MHC en la célula blanco, a través de recep- parte, la célula blanco queda bajo la acción de los
tores específicos, tanto de inhibición (en la mayo- mecanismos intracelulares que gobiernan la
ría de los casos) que genera una señal inhibitoria apoptosis y bajo la acción lítica de las moléculas
de la actividad lítica como también de activación citotóxicas que culminarán con su muerte.
de la citotoxicidad. Finalmente, en este capítulo se analiza la ac-
La etapa siguiente denominada etapa de ac- ción efectora de los macrófagos en un tipo especial
tivación, implica cambios importantes en ambos de hipersensibilidad, denominada hipersensibili-
tipos celulares, en los linfocitos citotóxicos se ini- dad retardada en que la interacción de células pre-
cia este proceso a través de la transducción de se- sentadoras de antígeno (CPA) con linfocitos T CD4
ñales (ver capítulo 10); reordenamiento de los ele- (Th1) provoca la generación de citoquinas y otros
mentos del citoesqueleto y finalmente cambios en mediadores endógenos que permitirán la migración
la expresión génica y cambios morfológicos. Esta y activación de los macrófagos y otros leucocitos
unión conducente a la activación de los linfocitos en una reacción localizada.
citotóxicos, es también determinante para la célu-
la blanco, pues genera en éstas la señal letal que
marca el punto irreversible conducente a su muer- 2. CITOLISIS MEDIADA POR LINFOCITOS T
te. Esta señal letal puede ocurrir por dos mecanis-
mos: (a) La interacción de las moléculas de la su- El establecimiento de una respuesta inmune
perficie celular ligando de Fas o FasL y Fas (“FasL requiere la interacción concertada de linfocitos T
- Fas), puede iniciar el fenómeno de muerte celu- y B activados por sus respectivos antígenos. El
lar programada o apoptosis de la célula blanco, el reconocimiento del antígeno específico por los re-
cual se caracteriza por la fragmentación inicial del ceptores B o T de los linfocitos maduros, conduce
DNA; FasL es inducido en las células citotóxicas a su proliferación y por lo tanto, a la expansión
post-contacto con la célula blanco. (b) A través de clonal. Parte de la población de linfocitos que ha
la secreción de componentes citotóxicos de los reconocido a su respectivo antígeno se diferencia
gránulos, constituidos por proteínas formadoras en células hiperreactivas al antígeno y de larga
de poro (PFP o perforina) y enzimas proteolíticas, duración, denominadas células de memoria. Den-
denominadas en general granzimas. Estos com- tro de las células T existen diferentes subtipos, por
ponentes provocan daño en la membrana de la lo que pueden ocurrir diferentes respuestas
célula blanco lo que culminará con la lisis celular efectoras: tales como la producción de citoquinas
(mecanismo membranolítico). Bajo estas circuns- a través de los linfocitos CD4+ o la generación de
tancias, las perforinas, granzimas y otros compo- una actividad citotóxica, predominantemente me-
nentes de los gránulos pueden ingresar a la célula diada por los linfocitos T CD8+ (LTc). Estas célu-
blanco y activar la vía de la apoptosis. Además, las citotóxicas se encargan de lisar selectivamente
tanto los LTc como las células NK producen y células del individuo infectadas o transformadas
secretan una serie de citoquinas que pueden parti- por mecanismos citotóxicos dependientes del con-
cipar directamente en el proceso lítico o bien, es- tacto célula-célula. Por lo tanto, la acción princi-
timular a otras células del sistema inmune. Es pal defensiva de las células citotóxicas es com-
importante señalar que la muerte de la célula blan- plementar la acción de los anticuerpos encarga-
co ocurre generalmente a través de mecanismos dos fundamentalmente de reconocer antígenos
mixtos, membranolítico y mediado por la foráneos en el organismo y activar mecanismos
interacción FasL-Fas; sin embargo, existen sub- efectores para su destrucción.
poblaciones minoritarias de LTc y células NK sin Los LTc se caracterizan por el siguiente
gránulos en su citosol, capaces de provocar fenotipo básico: TCR+, CD3+, CD8+; en algunos
citólisis aparentemente mediada sólo por casos pueden ser también CD4+. Algunos son pe-
apoptosis. La etapa de lisis propiamente tal, es queños agranulares, otros grandes y granulares,
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Sin título-2 352 5/26/06, 10:26 AM

lo que explica la existencia de los diversos meca- dendríticas son capaces de presentar antígenos
nismos citolíticos. Originalmente se pensaba que exógenos en el contexto de moléculas MHC clase
la interacción del LTc con la célula blanco ocurría I, por lo cual estas células son los principales can-
únicamente entre el complejo TCR-CD3 con el didatos para realizar la labor de “muestreo
péptido presentado en conjunto con las moléculas antigénico permanente”.
de MHC clase I o II; sin embargo, la fuerza de Las células T CD8+ que han reconocido a su
esta interacción es muy débil y son numerosas las antígeno se encuentran capacitadas para lisar a las
moléculas adicionales cuya participación es ne- células blanco y esta función efectora debe ser ejer-
cesaria, tales como: CD2, CD8, CD28 y LFA-1 y cida para que se generen LTc de memoria. La
en la célula blanco, B7, CD22, ICAM-1 o 2 y LFA- interacción de LTc con la célula blanco es fuerte-
3. Entre las principales moléculas inducidas post- mente dependiente de Mg2+, este requerimiento
contacto con las células blanco se encuentra la pro- reside principalmente en la unión LFA-1 - ICAM-
teína de superficie celular FasL, conocida también 1; Ca2+ no puede reemplazar al Mg2+ aunque pre-
como Apo1L y CD95L. La contribución de estas senta un comportamiento sinérgico a concentra-
moléculas no está limitada solamente a la unión ciones sub-óptimas de este último.
intercelular, sino que también pueden generar se- La figura 19-1 esquematiza el proceso citolítico
ñales coestimuladoras para los LTc que complemen- general: (a) unión a la célula blanco (conjugación);
tan la señal iniciada por la interacción entre los com- (b) activación de la célula efectora (reconocimiento/
plejos TCR-CD3 y MHC-péptido. En esta etapa los transducción de señales); (c) generación de la señal
LT interactúan con su célula presentadora o célula letal en la célula blanco, que abarca a los mecanis-
blanco, formando una estructura física y funcional mos de muerte celular por mecanismos:
importante o “sinapsis inmunológica”, la que per- membranolítico (exocitosis de gránulos) y/o a tra-
mite una unión óptima entre los receptores y sus vés de la interacción FasL – Fas que induce la muer-
respectivos ligandos, y la liberación de los media- te celular programada o apoptosis de la célula blan-
dores en forma localizada. co y (d) separación y reciclamiento de la célula
Como ya se ha analizado previamente, los efectora y lisis propiamente tal de la célula blanco.
LTc requieren presentación del antígeno, general-
mente un péptido proveniente del medio
intracelular unido al MHC tipo I (ver capítulo 9).
En nuestro organismo existen alrededor de 1013
células nucleadas y sólo unos cientos de LTc vír-
genes. Luego, es prácticamente imposible que cada
LTc esté permanente vigilando esta enorme canti-
dad de células en búsqueda del antígeno contra el
cual está predeterminado. De hecho, raramente se
encuentran circulando LTc en los tejidos
periféricos. Recientemente, se ha caracterizado a
la célula capaz de realizar la vigilancia
inmunológica en la periferia y de transportar a los
órganos linfoides los antígenos desde ubicaciones
distantes en el organismo. Esta es una célula pre-
sentadora derivada de la médula ósea, que
internaliza proteínas foráneas (derivadas de virus
o patógenos intracelulares) o directamente fagocita
a las células infectadas, transformadas o los res-
tos celulares y luego migra al órgano linfoide para
presentar los antígenos así adquiridos; aún no está
definido molecularmente cómo esta célula logra
presentar antígenos exógenos en el contexto de
moléculas MHC clase I, teóricamente destinado
exclusivamente a la presentación de antígenos
endógenos. En estudios realizados in vitro se ha
Figura 19-1. Diagrama representativo de las principales
demostrado que tanto macrófagos como células etapas de la citotoxicidad mediada por células T y NK.
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Sin título-2 353 5/26/06, 10:26 AM

En el programa de transducción de señales, inhiben el proceso citolítico. Además, en general,
durante la activación de los LT (ver capítulo 10) aquellos mediadores endógenos (hormonas,
ocurren básicamente una serie de eventos de neurotrasmisores) o exógenos (fármacos) que ac-
fosforilación/desfosforilación de proteínas, media- túen a través de influjos de Ca2+, en los linfocitos
dos por proteína quinasas PK y/o fosfatasas, la citotóxicos estimulan la citoxicidad y aquellos que
generación de segundos mensajeros inositol producen aumento de AMPc se comportan como
trifosfato (IP3), diacilglicerol (DAG) y Ca2+ como inhibidores.
señales positivas y otras mediadas ya sea por Estudios realizados principalmente in vitro
fosfatasas encargadas de la desfosforilación de las han demostrado que los LTc pueden quedar en un
proteínas activadas (por fosforilación) o por me- estado anérgico o tolerante al reconocer a su
diadores que desarrollen su acción a través de antígeno en ausencia de las moléculas
AMP-cíclico, actúan como señales negativas. Este coestimuladoras o cuando reconocen a un antígeno
programa también ocurre en los LTc, por lo cual modificado respecto del original (con ciertos
es conveniente tenerlo presente en el análisis del aminoácidos cambiados respecto del péptido
proceso de citotoxicidad. De particular importan- antigénico).
cia, es la participación de las isoenzimas de la PK- La señal letal en la célula blanco, definida
C en el proceso de exocitosis de los gránulos; este como el punto a partir del cual la célula blanco
tipo de enzimas es estimulado por DAG y Ca2+, y queda irreversiblemente programada para la lisis,
el proceso de exocitosis es imitado por ésteres de se puede generar en base a cualquiera de los dos
forbol e ionóforos de calcio. Los inhibidores de mecanismos: membranolítico o dependiente de la
proteínas tirosina kinasas y de proteína kinasa C, interacción FasL – Fas apoptótico, (figura 19-2)
Figura 19-2. Representación esquemática de la citotoxicidad de los LTc CD8+, frente a células blanco (CPA) Fas+ y Fas-. En
el primer caso ocurren simultáneamente los dos mecanismos de citolisis: membranolítico e interacción Fasl-Fas; FasL es inducido
postcontacto con la CPA. En este tipo de lisis hay formación de poros y apoptosis. En el caso de células Fas-, solamente ocurre el
mecanismo membranolítico. En algunos casos ocurre sólo la interacción FasL – Fas: LT agranulares y otros sub-tipos minoritarios
de LT, el mecanismo de lisis está basado solamente en esta interacción.
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los que serán analizados en detalle a continuación: nada Linfohistiocitosis hemofagocítica en la cual
se encuentra mutado el gen que codifica para
2.1. Mecanismo membranolítico perforina o PFP. Estos pacientes tienen
descontrolada su respuesta inmune predominan-
Como su nombre lo indica, el mecanismo do los LTc y macrófagos activados y también al-
membranolítico implica la secreción, por parte de tas concentraciones de IFN-γ y TNF-α en la san-
los LTc de diversos componentes contenidos en gre. En base a estos antecedentes, se ha propuesto
los gránulos (ej: perforina, granzimas y una función adicional para esta proteína la cual
proteoglicanos) los que participan en la destruc- sería esencial para el control de la respuesta in-
ción de la membrana celular y por tanto de la cé- mune ya que permitiría la eliminación de las célu-
lula blanco. Un evento importante y previo a la las activadas y/o de las células presentadoras de
secreción, es el reordenamiento de los elementos antígeno.
del citoesqueleto hacia la zona de contacto. Este Las granzimas (enzimas de los gránulos) son tam-
reordenamiento ocurre únicamente en la célula bién importantes en el proceso de lisis de la célula
efectora (en este caso LTc), no en la célula blanco blanco. La mayor parte de éstas (más del 90% de
favoreciendo la fusión de los gránulos con la mem- las proteínas de los gránulos) presentan actividad
brana para la liberación de su contenido al exte- de serina-proteasa y pueden ser divididas en dos
rior. Muy rápidamente, luego de la unión con la grupos: granzimas B, C, D, E, F y G que son alta-
célula blanco, el centro organizador de mente homólogas entre sí (aproximadamente 60-
microtúbulos (MTOC) de la célula efectora se 90%) y granzima A que está menos relacionada
orienta hacia la zona de contacto; es por esto que (aproximadamente 54-62%). Si bien su actividad
los agentes perturbadores de los microtúbulos son proteolítica las ajusta muy bien a la acción
potentes inhibidores de la citolisis, enfatizando la citotóxica de los LT, también se encuentren en los
importancia de esta etapa. La secreción de los grá- linfocitos CD4+ no citotóxicos, por lo cual podrían
nulos, como ya se mencionó, es un proceso detener otras funciones como por ejemplo la separa-
pendiente de Ca2+. ción de la célula blanco de la célula efectora, per-
La perforina o proteína formadora de poro mitiendo el reciclaje de esta última. A través del
(PFP), inicialmente también denominada estudio acucioso de los poros formados por poli-
citolisina, se encuentra en los gránulos de secre- perforina, se pudo demostrar el paso de granzimas,
ción, es la principal proteína citotóxica y por lo especialmente de la granzima B, hacia la célula
tanto la candidata esencial para explicar la blanco y de esta forma pueden activar a las enzimas
citotoxicidad mediada por los linfocitos. Es una proteolíticas cisteína proteasas o caspasas que ini-
proteína inducible en los LT, que se expresa con cian la cascada de reacciones bioquímicas condu-
su función citotóxica a las 18-30 horas post-in- centes a la apoptosis de la célula blanco. Se ha
ducción; es decir, luego de la activación del TCR demostrado además, que la granzima B ingresa a
o bien por acción de citoquinas, tales como IL-2 o la célula blanco a través de la interacción con re-
IL-7. La perforina (65 kDa) presenta y homología ceptores y una posterior endocitosis; es decir, por
estructural con los componentes C6-C9 del com- un mecanismo independiente de la formación de
plemento. La PFP es secretada al medio poros. En estas condiciones también puede iniciar
intercelular donde se une a la membrana la cascada de activación de las caspasas. Otros
plasmática de la célula blanco y polimeriza a poli- constituyentes de los gránulos son enzimas
perforina, proceso que también depende de Ca2+. hidrolíticas como fosfatasa ácida, catepsina D y
La PFP se une a fosfolípidos de la membrana, es- L-glucosidasa, las que también pueden activar la
pecialmente a residuos de fosforil-colina. De esta apoptosis de la célula blanco. Recientemente se
forma, se generan lesiones similares a las obser- ha descrito un nuevo componente de los gránu-
vadas por acción del complemento, pero en este los, la proteína granulisina que tiene una muy li-
caso mediadas por un solo tipo de proteína. De mitada actividad lítica sobre diversas células. Per-
hecho, la PFP en presencia de Ca2+ puede lisar di- tenece a las proteínas que unen lípidos activando
rectamente una gran variedad de células nucleadas, a enzimas que degradan lípidos como glucosil-
eritrocitos y vesículas lipídicas; sin embargo, tam- ceramidasa, con lo cual aumenta la concentración
bién hay células resistentes a su acción. Reciente- de ceramidas; las ceramidas son también
mente, se ha descrito una enfermedad genética activadoras de la cascada de caspasas. Mediante
muy poco frecuente y fatal en humanos, denomi- miscroscopía electrónica se ha demostrado que la
355
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granulisina provoca daño a la pared de bacterias trado que el bloqueo de la expresión de PFP no
tanto libres como intracelulares que infectan a impide la activación ni la proliferación de las cé-
células. Esta importante observación sugiere un lulas T y además, en cepas de ratones deficientes
nuevo papel a los LTc que les permite actuar di- en PFP se ha demostrado la existencia de un me-
rectamente en la destrucción de patógenos libres canismo citotóxico totalmente independiente de
e intracelulares. El mecanismo de acción de esta PFP. Esta actividad citotóxica ocurre a través de
proteína es la separación de la membrana externa la interacción de FasL, presente en las células
del citoplasma, con la consiguiente acumulación efectoras activadas, y el receptor Fas (Apo1,
de líquido en el citoplasma, alteración de la per- CD95) presente en las células blanco. El receptor
meabilidad de la membrana conducente a la lisis Fas es una glicoproteína de 35 kDa, pertenecien-
osmótica de la bacteria. te a la superfamilia de receptores para TNF; se
Los LTc sintetizan y almacenan en sus grá- encuentra expresado en linfocitos maduros, en
nulos proteoglicanos, mayoritariamente linfocitos transformados por infección viral
condroitinsulfato A; estos compuestos también son (HTLV-1, HIV, EBV) y en diversos tejidos no
secretados en el proceso citolítico y se les atribu- linfoides. Los anticuerpos anti-Fas pueden indu-
ye un papel protector de la célula efectora contra cir el proceso de apoptosis en las células que po-
las moléculas citotóxicas, ya que los LTc no son seen estas moléculas; por lo que el conjunto de la
destruidos en el proceso lítico. Además, al pH de información existente permite sugerir una directa
los gránulos, estos proteoglicanos se unen a la PFP correlación entre la presencia de Fas en la célula
y granzimas evitando la degradación o inactivación blanco y su probabilidad de sufrir apoptosis. La
de estos componentes mientras se encuentran al- molécula FasL es una proteína transmembrana
macenados. de 40 kDa, que aparece en los linfocitos activa-
Para explicar la citotoxicidad mediada por los dos; puede ser también liberada de la membrana
linfocitos, se han postulado diversos mecanismos por acción de una metaloproteinasa y de esta for-
efectores alternativos, no necesariamente ma transformarse en CD95L soluble que actúa
excluyentes entre sí. Los LT activados también como una molécula efectora citotóxica.
secretan una gran variedad de citoquinas, tales La interacción LTc con la CPA respectiva,
como: TNFα y β (linfotoxina) e IFN-γ. In vitro provoca la inducción de FasL en los primeros; si
TNF-β presenta actividad citotóxica frente a una la CPA es Fas+ se producirá la interacción que ini-
amplia variedad de células, aún cuando no se ha cia la cascada de activación de caspasas. El re-
demostrado su participación directa en la acción ceptor Fas se encuentra asociado a la proteína
de los LTc. Finalmente, también se ha postulado adaptadora FADD (proteína con dominio de muer-
un papel citotóxico a la molécula de ATP; este te asociada a Fas) y con la aspartil-proteasa, enzi-
nucleótido es efectivamente secretado al medio ma convertidora de interleuquina-1-β (ICE), que
intercelular por los LTc activados y a través de es la enzima iniciadora de la cascada de activa-
receptores purinérgicos en la célula blanco gatilla ción de las cisteína proteasas o caspasas (cisteína-
la lisis y defragmentación del DNA en distintos aspart-asas) vía que permite la activación de
tipos celulares. Los LTc son resistentes a esta ac- nucleasas con el consiguiente daño al DNA y
ción aparentemente gracias a la presencia de una muerte celular por apoptosis. Algunas de las
activa ecto-ATPasa. enzimas de esta vía participan también en otros
El mecanismo membranolítico entonces im- procesos fisiológicos tales como la activación de
plica la participación combinada de diversos agen- citoquinas pro-inflamatorias. Las caspasas se en-
tes citotóxicos que permiten explicar el daño en la cuentran como pro-enzimas, las que una vez acti-
célula blanco: muerte celular por la lisis osmótica vadas, por proteólisis limitada, pueden propagar
y por apoptosis. esta acción mediante su actividad proteolítica so-
bre residuos específicos de ácido aspártico. La
2.2. Mecanismo dependiente de la interacción inducción del proceso de apoptosis provoca una
FasL-Fas elevación pre-lítica del Ca2+ intracelular lo que
favorece la acción de las enzimas encargadas del
Los CTL agranulares y también los desenrrollamiento y fragmentación del DNA
granulares presentan la posibilidad de lisar direc- (topoisomerasas y endonucleasas) que son depen-
tamente a la célula blanco a partir solamente de la dientes de Ca2+. En suma la apoptosis de la célula
interacción de receptores y ligandos. Se ha demos- blanco se caracteriza por la condensación de la
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Sin título-2 356 5/26/06, 10:26 AM

cromatina, la formación de estructuras tipo bur- Los mecanismos efectores utilizados por los
buja en la membrana plasmática y la fragmenta- LTc CD8+ son también empleados por otras célu-
ción del DNA. Posteriormente, ocurre estrecha- las del sistema inmunológico. Tanto las células
miento celular, dilatación del retículo NK, como algunos linfocitos T CD4+, expresan o
endoplásmico y finalmente fragmentación celu- pueden expresar luego de ser activados; perforina,
lar con la formación de fragmentos membranosos granzimas y FasL, y por lo tanto ejercer funcio-
sellados denominados “cuerpos apoptóticos”, los nes citotóxicas. En base a mutaciones de cada una
cuales son eficientemente removidos por de estas vías mediadoras de la lisis se ha compro-
fagocitosis evitando de este modo la generación bado que en el ratón, los LTc CD8 + ejercen
de una respuesta inflamatoria. Los LT activados citotoxicidad principalmente por exocitosis de los
que expresan simultáneamente Fas y FasL, pue- gránulos, mientras que los LTc CD4+, la ejercen
den interactuar entre sí y autodestruirse, proceso principalmente por la interacción FasL – Fas. Un
que permite la disminución de la respuesta sub-tipo minoritario de LT, descritos principalmen-
inmunológica. Como ya se ha mencionado, la te en el ratón, se caracteriza por un fenotipo CD4+
apoptosis de la célula blanco puede ser inducida o CD4-, CD8- doble negativo (DN) y NK1.1+
también por acción de la perforina y de algunas marcador de células NK murinas, por lo que se
de las granzimas del mecanismo membranolítico. han denominado linfocitos NKT. Este tipo de LT,
La tabla 19-1 resume las principales característi- que también se ha identificado en los seres huma-
cas de los LTc CD8+. nos, expresa un TCR constituido por un restringi-
Tabla 19-1. Propiedades generales de las células citotóxicas
Linfocitos T citotóxicos
• Receptores y co-receptores que interactúan con la célula blanco1.
- TCR, CD8, CD28, CD95L2

• Función citotóxica
- Mecanismo membranolítico: Muerte celular por lisis osmótica y apoptosis
- Interacción FasL – Fas (CD95L – CD95): Muerte celular por apoptosis.
Células NK
• Receptores y co-receptores que interactúan con la célula blanco

- Receptores de activación
NKp46, NKp44, NKp30, NKG2C/D, CD2, CD16, CD28, CD44, 2B4, CD95L2
- Receptores de inhibición3
Superfamilia del tipo lectina C: NKG2A/B; Superfamilia inmunoglobulinas:KIR 2-DL1 (p58.1),

KIR2-DL2/3 (P58.2); KIR 3-DL1 (p70). LIR-1.
• Función citotóxica : Citotoxicidad natural y ADCC.
- Mecanismo membranolítico: Muerte celular por lisis osmótica y apoptosis
- Interacción FasL – Fas (CD95L – CD95): Muerte celular por apoptosis.
1
Se incluyen los receptores y co-receptores más representativos de la función citotóxica.
2
CD95L es inducido post-contacto con la célula blanco.
3
Algunas sub-poblaciones de LT CD8+ también expresan receptores de inhibición de las familias de
proteínas señaladas, actuando como inhibidores de la citotoxicidad y de la secreción de citoquinas. CD:
Antígenos de grupo de diferenciación. KIR: Receptor de citotoxicidad del tipo inmunoglobulinas; LIR:
receptor similar a inmunoglobulinas.
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Sin título-2 357 5/26/06, 10:26 AM

do conjunto de cadenas β y una cadena α mielomonocíticas en base a su origen, fenotipo y
invariante; reconocen a la molécula CD1 de la funcionalidad. Provienen de la médula ósea y se
CPA, que son similares a las moléculas MHC-I, encuentran en la sangre y tejidos linfáticos, espe-
pero se encuentran localizadas en el genoma fue- cialmente el bazo. Una de las funciones más ca-
ra de la región que codifica para las moléculas racterística de las células NK es la citolisis ejerci-
MHC-I. La molécula CD1 presenta componentes da sobre una gran variedad de células: células
lipídicos bacterianos a las células NKT. Los tumorales, células transformadas por virus, célu-
linfocitos NKT están capacitados para expresar las infectadas por bacterias intracelulares y diver-
FasL y en respuesta a la IL-12 producen perforina sos microorganismos tales como bacterias, hon-
y adquieren funciones citotóxicas frente a células gos y parásitos. Una segunda característica impor-
tumorales. tante es la secreción de citoquinas, especialmente
La expresión constitutiva de FasL por algu- IFN-γ. Morfológicamente las células NK corres-
nos tipos celulares ha permitido explicar, al me- ponden a linfocitos granulares grandes y su
nos parcialmente, la existencia de áreas fenotipo más aceptado es: CD3-, TCR-, CD2±,
inmunológicas privilegiadas, definidas como aque- CD8 ± , CD16 + , CD56 + . Existen también
llas áreas en que una alteración aun muy menor, subpoblaciones minoritarias agranulares. Las cé-
puede provocar un daño irreversible. Tal es el caso lulas NK pueden activarse a través del contacto
del ojo, las células del parénquima y testículo, las con células sensibles o células blanco o por la ac-
células de Sertoli, ambos tipos celulares expre- ción de mediadores solubles, principalmente
san FasL en forma constitutiva, lo que les permite citoquinas.
eliminar células T y células tumorales que expre- La acción citolítica mediada por estas células,
sen Fas. En estas áreas se ha observado también es mayoritariamente espontánea, es decir no re-
un menor rechazo a los trasplantes de tejido. quiere activación previa y no está restringida a la
Los LTc que han reconocido y destruido a presencia del Complejo Principal de Histo-
una célula blanco pueden diferenciarse a células compatibilidad. Este concepto actualmente ha
de memoria adquiriendo una hiper-reactividad cambiado pues se ha descrito una gran variedad
contra el antígeno reconocido y pueden durar de receptores que reconocen a los complejos MHC
meses o años localizadas en los órganos linfoides clase I de la célula blanco pero este reconocimien-
secundarios, o pueden sufrir el proceso de to, a diferencia de lo que ocurre con los LTc, en
apoptosis post-activación. Las señales que deter- las células NK genera principalmente una señal
minan el destino de estos LTc aún no están clara- negativa, inhibiéndose la lisis de la célula blanco.
mente definidas, pero en base a recientes estudios Existe una amplia variedad de receptores de inhi-
con ratones transgénicos se ha postulado la parti- bición y de receptores de activación de la
cipación de PFP en el control de la expansión de citotoxicidad; algunos de ellos tienen como
los LTc y de IFN-γ en la regulación de la ligandos moléculas de MHC-I. Una de las princi-
inmunodominancia y la fase de muerte de los LTc. pales diferencias entre las células NK y los LTc
Sin duda, en el desarrollo de vectores adecuados radica en que la capacidad efectora de estos últi-
para vacunas que requieran la inducción de inmu- mos depende finalmente del receptor TCR, en
nidad celular es importante considerar que para cambio, en el caso de las células NK, existe una
obtener LTc de memoria deben cumplirse todas variedad de receptores en la misma célula, algu-
las etapas previamente descritas, es decir no basta nos capaces de activar y otros capaces de inhibir
con la sola presentación del antígeno, sino ade- su programa citolítico.
más se requiere que los LTc hayan desplegado su
capacidad citotóxica en respuesta al antígeno re- 3.1. Citotoxicidad mediada por células NK
conocido.
La citotoxicidad mediada por las células NK
(CMC-NK) ocurre también en etapas; la primera
3. CITOLISIS MEDIADA POR CÉLULAS NK es la etapa de reconocimiento y unión a la célula
blanco. Esta etapa no es determinante en el proce-
Las células NK, pertenecientes al sistema so citolítico, ya que las células NK se unen con la
inmunológico innato, son una tercera población misma afinidad tanto a células sensibles como a
muy heterogénea de linfocitos, que se puede dife- células resistentes. Sin embargo, cuando se unen
renciar de los linfocitos B, T y células a una célula sensible (célula blanco), o se estimu-
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la alguno de los receptores activadores de la estudio de los receptores de inhibición que en su
citolisis se produce la activación, es decir la serie gran mayoría reconocen a las moléculas MHC-I.
de procesos bioquímicos que caracteriza a esta Cuando disminuye o desaparece la expresión de
etapa, fosforilación de proteínas y enzimas, espe- estos complejos, como es el caso de la infección
cialmente proteína quinasas y proteínas viral o la transformación tumoral, mecanismo que
adaptadoras y la generación de los segundos men- les permite evadir a la respuesta inmune específi-
sajeros (ver Capítulo 9). La citotoxicidad es la ca, desaparece la señal de inhibición y ocurre la
función más reconocida de estas células, la que lisis de la célula blanco. En este principio se basa
les confiere un amplio papel defensivo frente a la actividad anti-viral y anti-neoplásica de las cé-
enfermedades infecciosas y neoplásicas. La CMC- lulas NK. Se ha observado además, por análisis
NK puede ser de dos tipos: a) Citotoxicidad natu- in vitro, que muchas células tumorales expresan
ral; la ejercen sobre células tumorales, transfor- tipos de MHC-I que las protegen de la lisis de las
madas por virus, infectadas por bacterias células NK al ser reconocidos por los receptores
patógenas intracelulares y sobre algunos tipos de de inhibición de la citotoxicidad, mecanismo que
células normales; se basa en el reconocimiento aparece como una nueva posibilidad de evasión
celular por mecanismos aún no del todo comprende la respuesta inmune.
didos, pero que es espontáneo y no requiere acti-
vación previa. Existe descrito hasta ahora un am-
plio repertorio de receptores de activación y de
inhibición, que permiten explicar, en parte, la
citotoxicidad natural. b) Citotoxicidad dependiente
de anticuerpos (ADCC), ha sido hasta ahora la más
estudiada y es dependiente del receptor Fc de baja
afinidad de IgG (FcγRIII o CD16); este receptor
reconoce al fragmento Fc de los anticuerpos que
recubren a la célula blanco. Los mecanismos de
lisis celular son similares a los descritos para los
LTc; membranolítico e interacción FasL – Fas,
conducente a apoptosis de la célula blanco. En el
mecanismo membranolítico participan, perforina,
granzimas, un factor citotóxico de las células NK
(NKCF), que corresponde a una proteína con ac-
tividad citotóxica y también la proteína granulisina
con actividad lítica bacteriana. En el caso de la Figura 19-3. Activación de células NK. (a) La activación
lisis por la interacción FasL – Fas; FasL es indu- conjunta de receptores de activación y de inhibición de las
cido y expresado en la superficie de las células células NK representa la situación en que no hay lisis de la
célula blanco. (b) Si la célula blanco, pierde o disminuye la
NK postcontacto con la célula blanco. expresión del complejo MHC-I, y están simultáneamente pre-
El modelo de citotoxicidad natural más sentes los receptores de activación adecuados, hay lisis de la
aceptado hasta ahora, implica la participación si- célula blanco. En la activación de las células NK se induce la
multánea de receptores de activación e inhibición expresión de FasL; si la célula blanco expresa Fas puede ocu-
rrir también lisis mediada por esta interacción. RA: Receptor
de las células NK en su interacción con la célula de Activación; RI: Receptor de Inhibición. LA: Ligando
blanco. Los receptores de activación al ser acti- Activador.
vados ponen en marcha la maquinaria citotóxica
de las células que implica una amplia fosforilación
de proteínas y los receptores de inhibición al es- Existen dos grandes familias de receptores
tar asociados a fosfatasas, se encargan de bloquear de inhibición que reconocen a las moléculas de
la activación. Bajo esas circunstancias (figura 19- MHC-I, la superfamilia de las lectinas del tipo C
3) en el balance global de la respuesta, prima la y la superfamilia de las inmunoglobulinas (tabla
inhibición y no hay lisis de la célula blanco. Du- 19-1). Los representantes de las lectinas se encuen-
rante mucho tiempo se buscaron receptores de tran localizados en el cromosoma 6 murino y 12
activación que permitieran explicar la humano y los de la superfamilia de
citotoxicidad, sin embargo el mayor conocimien- inmunoglobulinas humana en el cromosoma 19.
to de este fenómeno hasta ahora ha provenido del Todos estos receptores poseen en su extremo
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citoplasmático secuencias ITIM (dominio o moti- tor de las células NK presenta por lo tanto reco-
vo de inhibición basado en tirosina del nocimiento y activación por el contacto con célu-
inmunorreceptor). ¿Qué es lo que reconocen los las tumorales. La mayoría de los receptores de
receptores de inhibición en las moléculas MHC- activación de las células NK actúan en forma in-
I? Para poder responder esta pregunta nos referi- dependiente del reconocimiento de los MHC-I.
remos en primer lugar a los receptores KIR (re- Gran parte de estas moléculas se conocen desde
ceptores de inhibición de células NK) que han sido hace tiempo: CD2, CD16, CD69, CD28 y el co-
los más estudiados. Estos receptores reconocen receptor 2B4, a los que se han sumado reciente-
moléculas MHC-I de los tipos A, B, C y G, mente los denominados NCR: NKp46, NKp44 y
específicamente a regiones polimórficas de los NKp30. Estos últimos se encuentran asociados a
dominios α1, aminoácidos 77 a 83. Si bien los sub-unidades que poseen secuencias ITAM, y to-
péptidos presentados por estas moléculas pueden dos activan la citotoxicidad; sin embargo no ha
afectar la conformación de la molécula en el sitio sido fácil encontrar sus respectivos ligandos en
de la interacción con los KIR, no hay ninguna evi- las células tumorales. Aparentemente existe un
dencia hasta ahora, sobre una interacción directa escape de la respuesta inmunológica innata, tal
entre el receptor y los péptidos antigénicos pre- como existe escape de la respuesta inmunológica
sentados. Por otra parte, la interacción KIR – específica, en que la transformación tumoral im-
MHC-I presenta una estequiometría 1:1 y una pide la expresión de los ligandos correspondien-
constante de disociación (Kd), del orden de 10 -6 tes. Los ligandos conocidos son CD58 para CD2,
M; valor que se encuentra en el rango de otras IgG para CD16; el co-receptor 2B4, reconoce a
interacciones célula – célula. La interacción de CD48, pero su participación depende de la expre-
los receptores tipo lectina, con los complejos sión de los NCR para ejercer su contribución a la
MHC-I, ocurre también a través del reconocimien- citolisis.
to de secuencias de los dominios α1 y α2. Las Las células NK pueden ser activadas, a tra-
células NK expresan diversas combinaciones de vés del contacto directo con células blanco, no
receptores, incluyendo los receptores de inhibi- existiendo un solo tipo de receptores involucrado
ción, lo que refuerza el papel del conjunto hetero- en la activación, lo que explicaría en parte la he-
géneo de estas células en el reconocimiento celu- terogeneidad e inespecificidad de su acción. El
lar y desarrollo de sus funciones. Los receptores FcγIIIA o CD16, ha sido uno de los más estudia-
de inhibición, descritos inicialmente en las célu- dos y merece un comentario particular pues da
las NK, se encuentran también en los LT, espe- cuenta del proceso de citolisis mediada por
cialmente en los LT CD8+ de memoria. En este anticuerpos (ADCC) (ver capítulo 10, figura
tipo de linfocitos se han descrito las mismas fun- 10-6).
ciones; es decir inhibición de la citotoxicidad y de
la secreción de citoquinas. 3.2. Receptor FcγRIIIA (CD16)
Los receptores de inhibición del tipo lectina,
que carecen de las secuencias ITIM, receptores Las células NK pueden lisar eficientemente
truncados, se comportan como receptores de acti- a células tumorales o transformadas por virus si
vación al interactuar con sus respectivos ligandos; éstas se encuentran recubiertas u opsonizadas con
tal es el caso del receptor CD94-NKG2C, asocia- anticuerpos IgG de determinadas subclases (IgG1
do a la sub-unidad DAP12, sub-unidad que posee o IgG3 en humanos). Asociados a este receptor se
secuencias ITAM (Dominio o motivo de activa- encuentran las sub-unidades ζ y también se han
ción basado en tirosinas del inmunorreceptor) en descrito las sub-unidades CD3γ y CD3ε, aún cuan-
su extremo citoplasmático, y que reconoce a modo sin la expresión total del complejo CD3; exis-
léculas MHC-I y del receptor CD94-NKG2D, aso- tiendo por lo tanto una clara similitud entre el TCR
ciado a la sub-unidad DAP10, que posee secuen- y el receptor FcγRIIIA, lo cual, permite explicar
cias SH2 en su extremo citoplasmático y que rela similitud en el mecanismo de activación de las
conoce a la molécula MICA (molécula relaciona- células NK y linfocitos T. Las células NK sólo
da a MHC-I de tipo A), una proteína homóloga expresan el receptor de baja afinidad para IgG
distante de las moléculas MHC-I inducible por (FcγRIIIA). La activación de este receptor, que
estrés, que funciona como antígeno de los LTγδ y no posee actividad enzimática, a través de células
que frecuentemente se encuentra expresada en las opsonizadas por anticuerpos o anticuerpos anti-
células epiteliales tumorales. Este último recep- CD16 resulta en la ya descrita fosforilación/
360
Sin título-2 360 5/26/06, 10:26 AM

desfosforilación principalmente en tirosina de di- Finalmente nos referiremos muy brevemente
versas proteínas y la posterior producción de las a las principales citoquinas moduladoras de la ac-
citoquinas IFN-γ y del factor estimulador de co- tividad citolítica de las células NK. Entre estas
lonias de granulocito-macrófagos (GM-CSF). La citoquinas estimuladoras se encuentran: IL-2, IL-
ADCC corresponde entonces al tipo de mecanis- 7, IL-12, IL-15, IL-18, TNF-α y los diferentes
mo efector en el que las células citotóxicas care- tipos de interferón. De éstas, la más estudiada, del
cen de especificidad por el antígeno, reconocien- punto de vista terapéutico ha sido la IL-2 pues ade-
do a través del receptor Fc la molécula de anti- más de producir la estimulación de la citolisis es
cuerpo que actúa como puente entre ambos tipos capaz, a largo plazo y bajo determinadas condi-
celulares. La tabla 19-1 resume las principales caciones in vitro, de generar una nueva estirpe celu-
racterísticas de las células NK. lar denominada células LAK (“células citotóxicas
La generación de IFN-γ es de particular im- estimuladas por linfoquinas”) que además de ser
portancia en los mecanismos defensivos contra la muy heterogéneas, se caracterizan por ampliar la
infección, pues existe una extraordinaria coordi- especificidad y la agresividad de la citotoxicidad.
nación entre la respuesta de los monocito- Las células LAK se han utilizado como terapia anti-
macrófagos y las células NK, especialmente cuan- neoplásica desde mediados de la década de los 80.
do éstos se encuentran infectados con bacterias Recientemente se les han incorporado genes de
patógenas intracelulares. El macrófago en su res- citoquinas estimuladoras como TNF-α o IL-2, para
puesta inicial al agente infeccioso (bacterias, pa- optimizar su acción terapéutica. Entre las
rásitos, toxinas) es capaz de producir una serie de citoquinas inhibitorias de las células NK están los
citoquinas (TNF-α, IL-1β, IL-12, IL-15 e IL-18) factores de crecimiento TGF- β (factor de creci-
que al interactuar con las células NK las estimu- miento transformante β) y PDGF (factor de creci-
lan para la producción de IFN-γ, esta citoquina es miento derivado de plaquetas).
capaz de activar al macrófago, estado en el que
adquiere mecanismos altamente eficientes contra
los microorganismos patógenos. Si bien, obvia- 4. MÉTODOS DE ESTUDIO DEL PROCESO
mente, esta no es la única vía de generación de CITOLÍTICO
IFN-γ, es importante en la defensa anti-infeccio-
sa temprana y representa otra de las propiedades Si bien el análisis de este tipo de metodologías
inherentes de las células NK. Las citoquinas libe- escapa a los objetivos de este capítulo, se hará una
radas por el macrófago y las células NK en este breve mención de éstos para complementar la com-
proceso también activan a los LT CD4+ y CD8+, prensión de los dos tipos de mecanismos
es decir, participan los mecanismos de la inmuni- involucrados en la lisis celular.
dad innata y de la inmunidad adquirida en con- Para medir la lisis de una célula se pueden uti-
junto. lizar colorantes vitales, los cuales son excluidos de
La persistente acción estimuladora de algu- una célula no dañada; o también se puede medir la
nas de las citoquinas provoca inactivación y muer- liberación de enzimas citosólicas al medio como
te de las células NK; así el efecto conjunto in vitro índice de daño, tales como: láctico deshidrogenasa.
de IL-12 e IL-15 o IL-2 e IL-12 por ejemplo, pro- Sin embargo, uno de los métodos más ampliamente
voca este efecto en las células NK que nos permi- utilizado es la incorporación de sales de Cr
te dar una respuesta a la situación fundamental de radiactivas (Na251CrO4). En este caso las células
eliminación de las células citotóxicas una vez ac- (blanco) captan inespecíficamente el Cr+6 y lo redu-
tivadas para evitar su acción sobre las células nor- cen Cr+3, este catión se une a las macromoléculas
males. El solo contacto de las células NK con cé- intracelulares, principalmente a las proteínas. Si la
lulas sensibles y su posterior activación, son tam- célula blanco radiomarcada sufre daño por acción
bién señales de inactivación y muerte para las cé- de las células citotóxicas, se libera el Cr+3 al medio
lulas citotóxicas; este efecto se ha denominado lo que se utiliza para calcular un índice de
activación que induce muerte celular (AIMC) y citotoxicidad. Este método no discrimina entre
también lo experimentan los LT. En este caso, la necrosis y apoptosis; sin embargo, mediante el uso
repetida estimulación antigénica sumada a la ac- de inhibidores de la apoptosis, como agentes secues-
ción de citoquinas como IL-2 y a la inducción de tradores de Ca2+ intracelular, sí se puede cuantificar
la expresión de FasL favorecerá su la contribución de cada uno de estos mecanismos
autoeliminación. en la lisis final de la célula blanco.
361
Sin título-2 361 5/26/06, 10:26 AM

Para la determinación de apoptosis existen las 24 a 48 hrs. una reacción típica localizada en
diversas metodologías, generalmente orientadas al la piel de enrojecimiento y edema. La HR tam-
análisis de la fragmentación del DNA; esto prin- bién ocurre en los seres humanos, como por ejem-
cipalmente se logra usando precursores radiactivos plo debido a la administración intradérmica del
(125I-timidina) que se incorporan al DNA de la cé- derivado proteico purificado (PPD), del
lula blanco y posteriormente durante la apoptosis Mycobacterium tuberculosis, a individuos que han
se liberan como señal de fragmentación ocurrida. padecido de tuberculosis o que han sido vacuna-
Los métodos más utilizados actualmente son el dos contra esta enfermedad, provocará en ellos la
análisis directo de los fragmentos de DNA produ- reacción de HR. El mecanismo involucrado en el
cidos mediante electroforesis en geles de agarosa inicio de la HR experimental es a través del con-
y el análisis del DNA mediante microscopía o tacto entre el antígeno extraño y LT CD4+ y CD8+
citometría de flujo. También es posible la detec- específicos, lográndose de este modo la activa-
ción de las enzimas proteolíticas caspasas activa- ción, expansión y proliferación de los LT especí-
das intracelulares de las células blanco, como ín- ficos. La siguiente etapa implica nuevamente el
dice de apoptosis, para lo cual se utilizan análo- contacto entre el antígeno y los LT a nivel perifé-
gos de sustrato de estas enzimas, unidos a rico local donde se produce como resultado la se-
fluorocromos, como rodamina, utilizando creción de las citoquinas TNF-α y TNF-β, IL-2 e
citometría de flujo para su detección. IFN-γ. Las CPA que inician la HR, pueden ser tam-
bién células endoteliales venosas que activan a los
LT; estas células tienen una activa participación
5. HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA en diversos procesos fisiopatológicos: pueden
(HR) interactuar con otras células y también producir
mediadores, especialmente de la inflamación.
Los linfocitos T, especialmente CD4+, parti- El encuentro con el antígeno provoca la di-
cipan en este particular tipo de reacción, en que ferenciación de las células T CD4+ a células del
producto de la interacción entre la CPA y LT CD4+, tipo Th1, que se caracterizan por la secreción de
se secretan diversas citoquinas que producen a su las citoquinas. El IFN-γ es un potente activador
vez múltiples efectos. Algunas de estas citoquinas de los macrófagos, aumenta la capacidad
activan a las células endoteliales de las vénulas fagocítica e induce la expresión de moléculas de
para reclutar leucocitos en el sitio y otras se en- MHC-II. La IL-2 es un estimulador de las células
cargan de activar a los monocitos para transfor- T, que en este caso puede actuar en forma autocrina
marlos en macrófagos que puedan eliminar a los y además estimular a células T no específicas para
antígenos. Es decir, el mecanismo efector final en el antígeno. El TNF-α y β o linfotoxina son dos
la HR es el efecto citotóxico mediado por los citoquinas que ejercen su acción preferentemente
macrófagos activados. Este mecanismo participa sobre las células endoteliales, las cuales producen
en la eliminación de los patógenos intracelulares, (a) mediadores de la inflamación como
tales como: Listeria monocytogenes y prostaciclina, óxido nítrico (NO) que aumentan el
Mycobacterium tuberculosis; estos flujo sanguíneo local aumentando la llegada de
microorganismos no pueden ser eliminados por los leucocitos al sitio de la inflamación; (b)
los monocitos en reposo y requieren de las quimioquinas, que son péptidos relativamente pe-
citoquinas activadoras derivadas de los LT y célu- queños con potente actividad quimioatractante y
las NK para activarse. Este mismo tipo de meca- de activación de los leucocitos; un ejemplo de
nismo puede ser iniciado por otro tipo de antígenos quimioquina es la IL-8; (c) aumento de la expre-
inocuos, tales como: antígenos proteicos solubles sión de moléculas de adhesión que favorecen la
o haptenos químicos. En este caso, sin la partici- migración y diapedesis de leucocitos hacia el sito
pación de microorganismos patógenos, la activa- de la HR. La IL-12 producida por los macrófagos
ción de los macrófagos puede generar daño tisular también provoca la diferenciación a Th1, de modo
en el sitio de la reacción, de aquí deriva el térmi- que es importante su participación en el mecanis-
no de “hipersensibilidad”. mo general. En su conjunto entonces, los cambios
Los modelos animales para el estudio de HR producidos por estos mediadores explican: la
son por ejemplo cobaya inmunizada, a la cual se vasodilatación, la adhesión de leucocitos y el au-
le aplican pinceladas del antígeno o bien inyec- mento de la permeabilidad vascular. El papel
ciones intradérmicas de éste, observándose entre efector final lo cumplen los macrófagos activa-
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dos que han migrado y que presentan una mayor familia descrita de receptores TLR, los TLR2 y
capacidad de producción de metabolitos reactivos TLR4 reconocen a componentes bacterianos;
del oxígeno, NO y enzimas lisosomales; aumento TLR4 a LPS y TLR2 a componentes de bacterias
de la expresión de moléculas MHC y del co- Gram positivas. La activación de estos receptores
estimulador B7 y un aumento también en su capa- (CD14 y TLR) desencadena una serie de eventos
cidad productora de citoquinas. Por ello pueden (especialmente de fosforilación de proteínas) que
ejercer diversas funciones, tales como: destruc- comunican la superficie celular del monocito con
ción de microorganismos por fagocitosis, secre- el núcleo y que permiten explicar molecularmente
ción a su vez de potentes mediadores de la infla- los importantes cambios morfológicos experimen-
mación, citoquinas y factores de crecimiento e tados durante la diferenciación a macrófago acti-
inclusive pueden adquirir citotoxicidad contra cé- vado y la expresión de las diferentes citoquinas y
lulas tumorales. Morfológicamente, la HR se ca- otros productos secretados, que serán capaces de
racteriza por acumulación de células actuar en estrecha coordinación con diversos ti-
mononucleares en el tejido subcutáneo y dermis. pos celulares. Por su parte, las células NK tam-
Esta acumulación es notable en venas y vénulas bién poseen receptores TLR no así CD14, lo cual
produciéndose permeabilidad microvascular, pér- explicaría su capacidad de responder al LPS en
dida de proteínas plasmáticas, edema y depósito ausencia de CD14.
de fibrina, estas serían las causas del proceso de
induración característico de las lesiones en la piel
observadas en esta reacción.
Más tardíamente en la HR, especialmente si LECTURAS SUGERIDAS
no se ha logrado eliminar a las células infectadas
se forman los denominados granulomas. Éstos Kägi, D., Lederman, B., Bürki, K., Zinkernagel,
consisten en un acúmulo de células y materiales R. & Hengartner, H., “Molecular mechanisms of
de desecho rodeados por macrófagos que han lymphocyte-mediated cytotoxicity and their role
calcificado formando, como última medida de se- in immunological protection and pathogenesis in
guridad, una barrera física de contención para vivo”. Annu Rev Immunol. 14, 207-232 (1996).
impedir la diseminación del patógeno. En este fe-
nómeno resulta muy importante la participación Moretta, A., Biassoni, R., Bottino, C., Mingari,
de la IL-12 y Eta-1 u osteopontina (citoquina de M. & Moretta, L. “Natural cytotoxicity receptors
activación temprana de los linfocitos). La Eta-1 that trigger human NK-cell-mediated cytolysis”.
es requerida tempranamente para aumentar y po- Immunology Today, 21, 228-234 (2000).
tenciar la secreción de IL-12, la producen los LT
en el sitio de la infección y tiene también un papel Trapani, J., Davis, J., Sutton, V.R. & Smyth, M.,
en el reclutamiento de los monocitos y en la pos- “Proapoptotic functions of cytotoxic granule con-
terior inhibición de la IL-10, citoquina inhibitoria stituents in vitro and in vivo”. Curr Opin Immunol.
de la formación de los granulomas. 12, 323-329 (2000).
Los agentes más estudiados que activan di-
rectamente a los monocitos y otras células impor-
tantes del sistema inmunológico, son la endotoxina
bacteriana conocida como lipopolisacárido (LPS)
y las lipoproteínas bacterianas; estas moléculas
interactúan con receptores en el monocito tales
como: CD14 en el caso del LPS y los reciente-
mente caracterizados del tipo Toll (TLR), que re-
conocen tanto el LPS como las lipoproteínas
bacterianas. La descripción de los TLR, que en su
región extracelular son homólogos a la proteína
Toll de Drosophila, ha llenado un importante va-
cío en el mecanismo de acción del LPS, pues co-
rresponde a una molécula transmembrana. CD14
es una proteína anclada en la superficie externa
de la membrana plasmática. Dentro de la amplia
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Capítulo 20
RESPUESTA INMUNE MEDIADA POR IgE
Arnoldo Quezada L. y Edgardo Carrasco C.
1. Introducción
2. Características de la IgE
3. Mastocitos y Basófilos
4. Receptores para IgE y liberación de
mediadores
5. Regulación de la síntesis de IgE
6. Rol biológico de la respuesta media-
da por IgE
7. Aplicaciones biomédicas
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RESUMEN
La respuesta inmune mediada por IgE se refiere a la unión de un antígeno con su IgE
específica que ocurre en la superficie de mastocitos o basófilos y determina la liberación de
numerosos mediadores inflamatorios con acción biológica sobre vasos sanguíneos, glándulas
secretorias, terminaciones nerviosas y músculo liso. Se describen las características de la IgE, de
los mastocitos y basófilos, enfatizando la presencia de receptores para IgE en estas células y la
liberación de mediadores. En la regulación de la síntesis de IgE se describen las células
involucradas, destacando las subpoblaciones de LTh y las citoquinas que participan en los meca-
nismos de promoción e inhibición. En relación al rol biológico se señalan las enfermedades que
cursan con altos niveles séricos de IgE, y la participación de éstas en enfermedades alérgicas y
parasitarias.
Finalmente, se comenta las aplicaciones biomédicas de la respuesta mediada por IgE.
1. INTRODUCCIÓN 2. CARACTERÍSTICAS DE LA IgE
La respuesta inmune mediada por La estructura molecular de la IgE es seme-

inmunoglobulina E (IgE), como su nombre lo indi- jante a las otras clases de inmunoglobulinas en
ca se refiere a la unión de un antígeno con su IgE cuanto a la presencia de dos cadenas pesadas y
específica en la superficie de un mastocito o dos cadenas livianas (ver capítulo 6). Sin embar-
basófilo que determina la liberación de numerosos go, su peso molecular es 190 kDa y las cadenas
mediadores inflamatorios con acción biológica so- pesadas ε (épsilon) poseen cinco dominios. No
bre vasos sanguíneos, glándulas secretorias, termi- actúa como opsonina, ni activa el complemento,
naciones nerviosas y músculo liso. La serie de even- pero tiene una alta citofilia y posee dos sitios de
tos que supone esta reacción presenta varias parti- unión a las células cebadas o mastocitos, basófilos
cularidades que se describirán en este capítulo. y otras células (células de Langerhans,
Las primeras observaciones que facilitaron macrófagos, linfocitos, eosinófilos y plaquetas).
la identificación de este tipo de reacción se atri- La zona de unión a dos tipos de receptores celula-
buyen a Prausnitz y Küstner quienes al inyectar res (FcεRI y FcεRII) se encuentran en los domi-
un extracto antigénico de pescado en la piel de nios C2 y C3 de la cadena pesada, en el segmento
sujetos “alérgicos” indujeron una reacción cutá- Fc de la inmunoglobulina.
nea de roncha y eritema. Si inyectaban suero de La cantidad de IgE sérica normalmente es
sujetos alérgicos al pescado en la piel de sujetos muy baja, 0,003% del total de inmunoglobinas, y
sanos, y los inoculaban con el antígeno, podían aumenta apreciablemente en las enfermedades
transferir pasivamente esta reacción local. atópicas. Existe IgE total o libre sérica e IgE uni-
Basados en estas observaciones se otorgó la da a los receptores de mastocitos y basófilos.
denominación de “reaginas” a los anticuerpos pre-
sentes en el suero de enfermos alérgicos, suscep-
tibles de ser detectados en la piel, con la propie- 3. MASTOCITOS Y BASÓFILOS
dad adicional de ser transferidos mediante suero a
sujetos sanos. Los mastocitos o células cebadas se originan
En los últimos años de la década del sesenta, en la médula ósea, a partir de células progenitoras
Johansson e Ishizaka en forma independiente lo- que migran a los tejidos y se diferencian in situ.
graron identificar a la IgE como responsable de Se encuentran distribuidos principal y abundante-
esta actividad reagínica. mente en la piel, mucosa intestinal y mucosa respi-
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ratoria (nasal y bronquial), alrededor de arteriolas 4. RECEPTORES PARA IgE Y LIBERACIÓN
y en conexión con fibras nerviosas sensitivas. Su DE MEDIADORES
tamaño varía entre 10 y 15 µm, poseen un solo nú-
cleo redondeado u oval excéntrico y gránulos Los mastocitos y basófilos poseen en su
citoplasmáticos de 0.1 a 0.4 µm de diámetro, en membrana celular receptores de alta afinidad para
número de 50 a 200 por célula, que contienen la IgE (FcεRI) (figura 20-1). Estos receptores tie-
histamina y otros mediadores. Estos mediadores nen una estructura tetramérica conformada por una
producen aumento de permeabilidad vascular, con- cadena α, una cadena β y dos cadenas γ idénticas.
tracción del músculo liso, hipersecreción mucosa y El sitio de unión se ubica en la porción terminal
estimulación de terminaciones nerviosas. Los grá- de la cadena α del receptor que se une a una por-
nulos citoplasmáticos electrodensos se encuentran ción de 76 aminoácidos ubicada en segmentos de
unidos a la membrana celular, se tiñen con azul de los dominios C2 y C3 de la cadena ε de la IgE
toluidina y dan un color rojo metacromático o vio- (segmento Fc). Otras células (eosinófilos,
leta. La superficie celular presenta numerosas pro- plaquetas, monocitos/macrófagos, linfocitos B y
yecciones de la membrana. El contenido de linfocitos T) poseen receptores de menor afinidad
histamina de los gránulos del mastocito es 5 veces (FcεRII).
mayor que en los basófilos.
Se han identificado subtipos de mastocitos:
existe una población dependiente de linfocitos T
que predomina en pulmones y mucosa
gastrointestinal y contienen triptasa (una proteasa
neutra que se encuentra en los gránulos
citoplasmáticos), y otra población denominada TC
(del tejido conectivo intersticial), que predomina
en la piel y en la submucosa gastrointestinal, que
contienen triptasa, quimasa y heparina.
Los basófilos (ver capítulo 3) comparten mu-
chas de las características de los mastocitos, pero
también muestran claras diferencias. Se originan
en la médula ósea, como los otros
polimorfonucleares y son elementos predominan-
temente circulantes, constituyendo el 0.5 a 1% de
la fórmula leucocitaria granulocítica del
hemograma normal. Miden 5 a 7 µm y poseen un
Figura 20-1. Estructura del receptor de IgE.
núcleo bilobular o multilobulado, con cromatina
densa en la periferia.
La superficie celular es lisa y con cortos
pseudopodios irregulares. Contienen gránulos La unión de la IgE con el receptor de alta
citoplasmáticos con histamina y presentan afinidad desencadena la degranulación de
acúmulos electrodensos de glucógeno que no se mastocitos y basófilos cuando dos moléculas de
encuentran en los mastocitos. IgE se unen a un antígeno (Ag) multivalente. Las
Si bien comparten con los mastocitos la par- cadenas β y γ de los receptores son proteínas de
ticularidad de presentar receptores de membrana membrana que aparentemente participan en la
de alta afinidad para la IgE, la importancia de los transducción de señales y activación de mastocitos
basófilos en la inmunidad y en la hipersensibili- y basófilos. La interacción Ag + IgE específica +
dad está aún por definirse, aunque se sabe que FcεRI en la superficie de estas células induce la
participan en la fase tardía de la hipersensibilidad liberación de mediadores inflamatorios
inmediata. preformados (histamina, proteasas, proteoglicanos
A diferencia de mastocitos, tienen moléculas y factores quimiotácticos de eosinófilos y
de adhesión (Mac-1 y LFA-1) que les permite mi- polimorfonucleares) y la generación posterior de
grar del torrente sanguíneo a los sitios de inflama- productos tales como leucotrienos C4, D4 y E4,
ción alérgica, atraídos por receptores de molécu- prostaglandina D2 y factor activador de plaquetas
las de adhesión del endotelio vascular. (PAF) (figura 20-2).
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Figura 20-2. Papel de la IgE en la respuesta inmune.
En la reacción de la IgE con su antígeno es- basófilos, macrófagos y linfocitos Th2, con lo cual
pecífico sobre mastocitos se ha descrito una fase se amplifica enormemente la inflamación. Por tal
inmediata o precoz que se inicia a los 5-10 minu- motivo se ha denominado también a esta fase como
tos, dura 1 a 2 horas, y es responsabilidad de inflamatoria, y está relacionada con la perpetua-
histamina, leucotrienos y prostaglandina D2 (fi- ción o mantención de la reacción alérgica, y el
gura 20-3). Como consecuencia de ella hay con- estado de hiperreactividad que caracteriza a algu-
tracción del músculo liso, vasodilatación y aumen- na de sus manifestaciones clínicas (rinitis y asma
to de la secreción de mucus. Sin mediar un nuevo alérgicas).
estímulo antigénico, a las 3 a 6 horas se produce Las dos etapas en la reacción de hipersensi-
una fase tardía, que dura 24-48 horas, caracteriza- bilidad inmediata han sido demostradas tanto en
da por un fuerte influjo tisular de células la piel, como en la nariz y bronquios, cuando se
inflamatorias provenientes de la circulación: hace una provocación con el antígeno específico.
eosinófilos, macrófagos, basófilos y linfocitos T. También se ha demostrado la expresión de
En la fase inmediata participan moléculas de un receptor de alta afinidad para IgE (FcεRI) en
adhesión de tipo ICAM-1 del endotelio vascular, las células de Langerhans de la piel. En enfermos
y LFA-1 y MAC-1 de los leucocitos, que detienen con dermatitis atópica, estudios in vitro revelaron
a las células inflamatorias, las hacen rodar sobre que las células de Langerhans que tienen unida
el endotelio, y facilitan su migración IgE son capaces de captar ácaros del polvo de ha-
transendotelial (ver capítulo 12). bitación (Dermatofagoide) para su presentación
En la fase tardía participan interleuquinas li- antigénica; en cambio en ausencia de IgE unida a
beradas desde los mastocitos y desde las otras cé- las células de Langerhans no era posible estimu-
lulas inflamatorias, especialmente eosinófilos, lar células T específicas contra este tipo de artró-
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Figura 20-3. Activación de mastocitos y basófilos. Etapas de la reacción de hipersensibilidad inmediata. Cuando dos moléculas
de IgE contiguas son ocupadas por un antígeno polivalente, se produce activación de los receptores de IgE de alta afinidad, que dan
lugar a estimulación del mastocito, con generación de una fase inmediata y otra tardía de la reacción de hipersensibilidad.
podos. Estos antecedentes inducen a pensar que rios tipos celulares, principalmente linfocitos B,
la presencia de IgE en la superficie de células pre- macrófagos, linfocitos T activados, plaquetas y
sentadoras de antígeno facilita el procesamiento eosinófilos. Se desconoce su función en forma
antigénico y ayuda a explicar las reacciones definitiva. En enfermedades alérgicas se observa
alérgicas que se desencadenan por contacto con una mayor expresión del receptor FcεRII en los
alergenos a nivel de la piel. cuatro primeros tipos celulares enumerados, indi-
Los receptores de baja afinidad para IgE cando que hay un aumento de la síntesis de IL-4
(FcεRII o CD23) se encuentran presentes en va- que participa en la regulación de la expresión de
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este receptor. Además es posible que el FcεRII IL-4, IL-5 e IL-13 actúan como estimuladoras.
participe en la regulación de la síntesis de IgE, en Además del contacto directo de linfocitos y de la
la endocitosis de complejos antigéno-anticuerpo presencia de IL-4 participan moléculas de adhe-
(IgE) y en la liberación de mediadores sión celular en la inducción de síntesis de IgE,
inflamatorios a partir de macrófagos, eosinófilos especialmente B7-1 en la célula presentadora y
y plaquetas, consecutiva a la interacción entre CD28 en el linfocito Th2.
alérgeno y su IgE específica unida a estas células.
La célula presentadora de antígeno, que
puede ser una célula dendrítica, un macrófago
5. REGULACIÓN DE LA SÍNTESIS DE IgE o un linfocito B, posee una IgE específica de
superficie que capta el antígeno correspondien-
Los mecanismos celulares y moleculares te, lo internaliza y lo procesa, de manera que lo
que participan en la regulación de la síntesis de presenta en su superficie en forma de péptidos
IgE han sido materia de mucho interés. En la eta- asociados a moléculas del Complejo Principal
pa de inducción se requieren dos señales: la pri- de Histocompatibilidad (MHC, HLA) de clase
mera es isotipo-específica y es dependiente de II que interactúan con el receptor TCR del LTh2
IL-4 liberada por los linfocitos T “helper” (LTh), inductor. Como consecuencia de esta interacción
y la segunda debe ser proporcionada por el conse produce la activación de LTh2 con liberación
tacto físico entre el linfocito B y el linfocito T de IL-4 e IL-13 que activan al linfocito B para
inductor, o por activadores de los linfocitos B secretar IgE específicas. Además de la acción
que actúan en forma sinérgica con la IL-4 para de IL-4, para completar la activación del LB, se
inducir la síntesis de IgE. El papel de los requiere del estímulo del receptor CD40 del LB
linfocitos T en la síntesis de IgE por los linfocitos por su ligando CD40L expresado en la superfi-
B es fundamental. cie del LT activado (contacto físico del LT y
Inicialmente, se demostró en ratones la exis- LB). Además de estas dos vías T dependientes,
tencia de subpoblaciones de LTh con diferentes es posible inducir síntesis de IgE por vía T in-
patrones funcionales y secreciones de citoquinas. dependiente, mediante activadores directos del
Los Th1 producen IL-2, IFNγ y linfotoxina y par- LB tales como virus de Epstein-Barr,
ticipan en la inmunidad celular e hipersensibili- hidrocortisona y anticuerpos monoclonales anti-
dad retardada. Los Th2 secretan IL-4, IL-5, IL-6, CD40, pero siempre se requiere de la acción de
IL-10 y serían responsables de la síntesis de IgE la IL-4 (figura 20-4).
por los linfocitos B y la proliferación y diferen-
ciación de los eosinófilos. Se ha demostrado que varias citoquinas
Estudios en humanos han identificado en in- pueden modular la síntesis de IgE. Además de
dividuos atópicos subpoblaciones de LT con ca- IL-4, inducen la síntesis de IgE las IL-5, IL-6 y
racterísticas similares a los Th2, en cuanto a sus TNFα, y en cambio actúan como inhibidores
propiedades funcionales y a su capacidad de pro- IFNγ, IFNα, IL-12, IL-18, TNFβ, TGFβ, IL-8,
ducir citoquinas en forma diferencial. Un área de PGE2, PAF y los neuropéptidos VIP y
gran interés para los investigadores es poder esta- somatostatina.
blecer los mecanismos que regulan la diferencia-
ción de los precursores T (Th0) hacia las En individuos atópicos los mastocitos pue-
subpoblaciones Th1 o Th2. Entre los factores den producir IL-4 y de esta manera facilitan la sín-
involucrados en este proceso se han definido a la tesis de IgE cuando un sujeto se expone a su
naturaleza del antígeno, su vía de administración, alergeno específico. Además, la IL-4 producida
las citoquinas presentes en el medio tisular en el por mastocitos condiciona una expansión de las
momento de la diferenciación, las características células Th2 en individuos alérgicos. Estas células
genéticas del huésped y las células presentadoras Th2 como ya vimos son estimuladas por células
de antígeno. presentadoras de antígeno que poseen en su su-
Numerosas investigaciones han revelado pos- perficie IgE para el alergeno inductor, y al acti-
teriormente que las subpoblaciones de linfocitos varse liberan más IL-4 y facilitan la síntesis de
T juegan un rol importante en la respuesta de IgE. IgE específica por el linfocito B. Por otro lado, la
Las células Th1 que secretan IFNγ e IL-2 actúan IL-4 inhibe la producción de IFNγ y la diferencia-
como supresoras, en cambio las Th2 que secretan ción de células Th1.
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Figura 20-4. Mecanismo involucrado en la reacción de hipersensibilidad inmediata y su regulación. Representación esque-
mática del proceso iniciado por el procesamiento del antígeno por la célula presentadora de antígenos (CPA), exposición del
epítopo alergénico unido a antígenos HLA-II, y estímulo del receptor TCR del linfocito Th2. En la activación del linfocito B para
sintetizar IgE específicas, se requiere la participación de IL-4 e IL-13 liberadas por el LTh2, y la interacción de la molécula CD40
del LB con su ligando CD40L del linfocito Th2. Dos IgE fijas en la superficie de los mastocitos, al unirse por una molécula
antigénica dan lugar a la liberación de los mediadores de la reacción de hipersensibilidad inmediata. Este mecanismo es regulado
por el linfocito Th1, a través de la secreción de IFNγ y el sistema monocito-macrofágico por liberación de IL-12 e IL-18.
6. ROL BIOLÓGICO DE LA RESPUESTA y diversos compuestos químicos. Se considera a

MEDIADA POR IgE esta IgE como la responsable, por su unión a re-
ceptores de alta afinidad en las células cebadas,
En condiciones normales, los niveles de IgE de la ulterior degranulación de éstas al contactar
en el suero alcanzan valores muy bajos compara- con el antígeno específico. La inflamación media-
dos con las otras inmunoglobulinas (aproximada- da por IgE es responsable de la llamada alergia
mente 0.05 mg/dL). Estos niveles se elevan en atópica causante de rinitis, asma y dermatitis, y
forma significativa en varias enfermedades, par- también de reacciones generalizadas como urti-
ticularmente en las condiciones llamadas caria y anafilaxia.
“alérgicas”, tales como Rinitis alérgica, Asma Se ha postulado además, que por la capaci-
bronquial, Dermatitis atópica y Aspergillosis dad de producir vasodilatación rápida, la IgE po-
broncopulmonar alérgica. También se encuentra dría tener una función facilitadora en la inflama-
aumentada en enfermedades parasitarias, en algu- ción mediada por complejos inmunes y en la in-
nas inmunodeficiencias primarias como el Síndro- flamación mediada por células, al permitir una vía
me de Hiper-IgE, la Ataxia telangectasia y el Sín- de entrada rápida de factores solubles y de células
drome de Wiscott-Aldrich; en la Reacción de in- circulantes hacia los tejidos.
jerto contra huésped y en el Mieloma múltiple Es difícil aceptar la existencia de mecanis-
IgE, caracterizado por proliferación de plasmocitos mos que participen solamente en reacciones de
con producción de IgE monoclonal. daño tisular. Así, se han acumulado evidencias de
En las enfermedades alérgicas es posible de- la participación de la IgE en la protección contra
tectar anticuerpos IgE dirigidos contra antígenos la infestación por parásitos helmínticos y se han
ambientales (pólenes, ácaros, epitelios animales, identificado anticuerpos de clase IgE relaciona-
hongos), venenos de insectos, alimentos, fármacos dos con la inmunidad protectiva contra parásitos.
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En la esquistosomiasis, la equinococosis, la LECTURAS SUGERIDAS
triquinosis, la ascaridiasis y la toxocariasis exis-
ten anticuerpos de clase IgE que pueden partici- Busse, W., Calhoun, W., Sedgwick, J.,
par en reacciones de citotoxicidad celular media- “Mechanism of airway inflammation in asthma”,
da por eosinófilos contra huevos, larvas y gusa- Am Rev Respir Dis, 147:520-4, 1993.
nos. Además, anticuerpos IgE pueden desencade-
nar reacciones anafilácticas, por ejemplo, ante la Capron, A., Capron, M., Grangette, C., Dessaint,
ruptura de un quiste hidatídico, o por la picadura J., “IgE and inflammatory cells”, Ciba Founda-
de abejas. En modelos animales y en enfermos tion Symposium, 147:153-70, 1989.
humanos se ha demostrado que el incremento no-
table de la síntesis de IgE frente a una infestación Hagan, P., “IgE and protective immunity to helm-
parasitaria se produce contra antígenos del pará- inth infections”, Parasite Immunol, 15:1-4, 1993.
sito y además en forma de IgE no específica, tra-
duciendo una alteración en la regulación de la sín- Hamawy, M., Mergenhagen, S., Siraganian, R.,
tesis normal de IgE. Existen controversias si este “Adhesion molecules as regulators of mast-cell
aumento de IgE no específica es también un me- and basophil function”, Immunol Today, 15:62-6,
canismo protectivo o por el contrario, es un fenó- 1994.
meno inducido por el parásito para evadir los efec-
tos de la IgE específica. Janeway, CH. Travers, P., Walport, M., Capra, D.,
Immunobiology, Ed. Masson, 2000.
7. APLICACIONES BIOMÉDICAS Leung, D., “Mechanisms of the human allergic

response: clinical implications”, Ped Clin N Amer,
La determinación de IgE sérica y de 41:727-43, 1994.
anticuerpos IgE específicos, ya sea directamente
en el suero, o indirectamente a través de las prue- Pritchard, D. “Immunity to helminths: is too much
bas cutáneas, son útiles en el diagnóstico de en- IgE parasite-rather than host-protective?”, Para-
fermedades alérgicas, parasitarias e inmuno- site Immunol., 15:5-9, 1993.
deficiencias.
El mejor conocimiento de la regulación de Romagnani, S., “Induction of TH1 and TH2 re-
la síntesis de IgE y de la respuesta mediada por sponses: a key rol for the natural immune re-
IgE permitirá el desarrollo de fármacos o facto- sponse?”, Immunol Today, 13:379-81, 1992.
res terapéuticos útiles en el tratamiento de enfer-
medades en que se involucra este tipo de reac- Schwartz, L., “Mast cells: function and contents”,
ción inmunitaria. La inmunoterapia con alergenos Curr Opin Immunol, 6:91-7, 1994.
produce una acción terapéutica favorable, des-
viando la reacción mediada por el linfocito Th2 Stites, D., Terr, AI., Basic and Clinical Immu-
a linfocito Th1. El IFNγ producido por linfocitos nology, Ed. Appleton & Lange, USA, 1994.
Th1 y las IL-12 e IL-18 generados por
macrófagos bloquean la acción de los LTh2 y sus Wasserman, S., “Mast cells and airway inflamma-
linfoquinas, con lo cual el LB no sintetiza IgE. tion in asthma”, Am J Respir Crit Care Med,
Otra aplicación es el uso de anticuerpos 150:539-41, 1994.
monoclonales para suprimir la IgE, procedimien-
to que se está usando con éxito en el tratamiento
de rinitis y asma alérgicas.
Finalmente, la información más completa
sobre los antígenos parasitarios y su capacidad para
inducir anticuerpos protectivos IgE, permitirá el
desarrollo de vacunas para la prevención y el con-
trol de las enfermedades parasitarias.
373
Sin título-2 373 5/26/06, 10:26 AM

374
Sin título-2 374 5/26/06, 10:26 AM

SECCIÓN IV
INMUNOLOGÍA CLÍNICA
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376
Sin título-2 376 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 21
HIPERSENSIBILIDAD
Arnoldo Quezada L. y Ximena Norambuena R.
1. Introducción
2. Clasificación de las reacciones de
hipersensibilidad
3. Hipersensibilidad inmediata media-
da por IgE (tipo I)
4. Hipersensibilidad citotóxica (tipo II)
5. Hipersensibilidad mediada por com-
plejos inmunes (tipo III)
6. Hipersensibilidad retardada media-
da por células (tipo IV)
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RESUMEN
La hipersensibilidad puede definirse como una condición adquirida de reaccionar

inmunológicamente a una sustancia antigénica de manera tal que esta respuesta inmune causa
una alteración patológica o expresión clínica de daño tisular en el huésped. Aunque existen cier-
tas discrepancias, la clasificación actualmente más aceptada de las reacciones de hipersensibili-
dad corresponde a Gell y Coombs quienes describieron cuatro tipos de respuesta de daño
inmunológico. Se señala las principales características que tipifican a las reacciones mediadas
por IgE, las reacciones citotóxicas, las reacciones mediadas por complejos inmunes y las reac-
ciones de hipersensibilidad mediada por células. Se enfatiza en los fenómenos biológicos que las
caracterizan y se da ejemplos de situaciones clínicas y enfermedades producidas por cada tipo de
reacción.
1. INTRODUCCIÓN alteración patológica o expresión clínica de daño

tisular en el huésped.
La necesidad de comprender la En las reacciones de hipersensibilidad, los
inmunopatogenia de algunas enfermedades huma- mecanismos inmunes están funcionando dentro de
nas y los principios básicos de la respuesta inmu- los marcos habituales, pero provocan diferente
ne relacionados con diferentes expresiones pato- daño tisular dependiendo de la interacción de los
lógicas han permitido profundizar en el conoci- elementos humorales y celulares involucrados.
miento del sistema inmune y su relación Desde fines del siglo XVIII ya los investiga-
fisiopatológica con los múltiples factores del me- dores biomédicos se esforzaban por controlar y
dio ambiente. mejorar el tratamiento de las enfermedades
El rol fisiológico de la respuesta inmune es, infectocontagiosas, principal problema de salud y
en términos muy generales, la protección del in- causa significativa de la mortalidad de esa época.
dividuo frente a la agresión de agentes nocivos. Así, la inmunología surgió unida a la microbiolo-
Las enfermedades del sistema inmune compren- gía y gracias a los trabajos científicos y descubri-
den varios tipos: a) las inmunodeficiencias: inca- mientos de destacados personajes como Jenner,
pacidad o falta de respuesta; b) la hipersensibili- Pasteur y von Behring se perfeccionó el método
dad, respuesta no protectora que causa daño; c) la de vacunación o “profilaxis” al introducir peque-
autoinmunidad: respuesta dirigida contra las es- ñas dosis de microorganismos con virulencia ate-
tructuras propias; y d) neoplasias del sistema in- nuada o de material antigénico para prevenir la
mune. enfermedad infecciosa correspondiente en los su-
En 1906 von Piquet reconoció que los jetos inyectados (ver capítulo 2).
antígenos eran capaces de inducir cambios en los Por otra parte, las evidencias experimentales
individuos inmunizados, señalando que la capa- de Erlich al describir el “horror autotóxico”, plan-
cidad de respuesta frente a agentes extraños era teaban que el sistema destinado a proteger a los
independiente del resultado. Si esta respuesta re- individuos era incapaz de reaccionar contra sus
sultaba protectora para el huésped se denominaba propias estructuras. Tales planteamientos retrasa-
inmunidad, en cambio si ésta era una reacción ron la interpretación de los fenómenos de
adversa para el sujeto la llamaba hipersensibili- autoagresión.
dad. La hipersensibilidad podría definirse como Las primeras evidencias de resultados adver-
la condición adquirida de reaccionar sos a un procedimiento de inmunización con fi-
inmunológicamente a una sustancia antigénica de nes protectores son atribuidas a Richet y Portier,
manera tal que esta respuesta inmune causa una quienes inyectaron a sus perros con extractos de
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Sin título-2 379 5/26/06, 10:26 AM

una anémona en un intento por protegerlos contra c) Ubicación del compromiso
el “veneno” de estas actinias y observaron, en al- • Localizadas : afectan a un solo órgano (piel,
gunos animales, una aparente protección, en cam- mucosa nasal, bronquial, etc.)
bio frente a inyecciones sucesivas otros perros pre- • Generalizadas: si presentan manifestaciones
sentaban una reacción dramática que en la mayo- generales (hipotensión, fiebre, etc.)
ría de los casos, determinaba la muerte. Denomi-
d) Naturaleza de la sensibilización
naron a este fenómeno “antifilaxis” o “anafilaxis”
• Reacciones de hipersensibilidad propia-
como término opuesto a profilaxis.
mente tal: si está dirigida contra antígenos
Junto a los procedimientos de vacunación, se
externos
desarrolló la seroterapia como método preventivo
• Fenómenos de autoinmunidad: si está diri-
y terapéutico. Prausnitz y Küstner demostraron en
gida contra antígenos propios
esa época que el suero de pacientes “alérgicos”
era capaz de transferir en forma pasiva la reac- e) Mecanismo fisiopatológico. Una de las clasi-
ción cutánea a individuos “no alérgicos”. Esta ficaciones vigentes más aceptada es la pro-
reactividad podría ser detectada en la piel y die- puesta por Gell y Coombs que las divide en
ron el nombre de “reaginas” a estas sustancias cuatro categorías de reacciones de hipersen-
involucradas en la producción de reacciones de sibilidad:
daño.
• Tipo I. Es la denominada reacción
En 1925 Coca y Cooke, señalaron la predis-
anafiláctica o hipersensibilidad inmediata.
posición especial de algunos sujetos, que deno-
El alergeno o antígeno reacciona con la IgE
minaron “atópicos” para formar reaginas, con lo
unida a las células tisulares denominadas
cual se obtuvieron las primeras observaciones so-
mastocitos y los basófilos circulantes indu-
bre el control genético en la respuesta inmune de
ciendo degranulación y activación celular que
este tipo.
determina la liberación de mediadores acti-
vos de la inflamación.
2. CLASIFICACIÓN DE LAS REACCIO- • Tipo II. Llamada también hipersensibilidad
NES DE HIPERSENSIBILIDAD citotóxica, en la cual un anticuerpo específi-
co reacciona con componentes de la superfi-
Las reacciones de hipersensibilidad requie- cie celular produciéndose opsonización,
ren de una etapa de sensibilización para la forma- citotoxicidad y activación del complemento
ción de anticuerpos y/o linfocitos T sensibiliza- con el consiguiente daño celular y tisular.
dos a un agente inductor específico. Éste, llámese
• Tipo III. Reacciones mediadas por comple-
alergeno o antígeno, produce un espectro de res-
jos inmunes. Se produce por formación de
puestas en la persona sensibilizada, cada vez que
complejos inmunes que activan el sistema de
se exponga al agente o que éste persista en el or-
Complemento, inducen agregación
ganismo sin ser neutralizado. Debe considerarse
plaquetaria, activación de leucocitos
que la respuesta en el huésped será diferente si
polimorfonucleares y liberación de enzimas
esta relación es crónica o es recurrente.
proteolíticas que causan microtrombos,
En la actualidad las reacciones de hipersen-
vasculitis y necrosis.
sibilidad se pueden clasificar según diferentes cri-
terios: • Tipo IV. Hipersensibilidad retardada o ce-
lular en la cual los linfocitos T que se han
a) Tipo de mecanismo inmunológico involu- sensibilizado y frente al estímulo antigénico
crado liberan citoquinas que inducen infiltración y
• Humorales: mediadas por anticuerpos transformación principalmente de células
• Celulares : mediadas por linfocitos T sensi- mononucleares. Se produce sin la participa-
bilizados ción de anticuerpos.
b) Tiempo entre la exposición al antígeno o
alergeno y la expresión de la respuesta
• Inmediatas: unos pocos minutos
• Mediatas : algunas horas
• Retardadas: entre 48 a 72 horas
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Sin título-2 380 5/26/06, 10:26 AM

3. HIPERSENSIBILIDAD INMEDIATA ME- autopsia de los animales así tratados, es posible
DIADA POR IgE (TIPO I) evidenciar hiperdistensión pulmonar secundaria a
broncoconstricción y signos de dilatación vascular
Las reacciones de hipersensibilidad en que generalizada. Las alteraciones descritas correspon-
participa este tipo de respuesta se llaman también den a la denominada anafilaxia generalizada en
anafilácticas, reagínicas o inmediatas. Las carac- su forma más grave, el shock anafiláctico, cuyas
terísticas de la respuesta inmune mediada por IgE manifestaciones varían en las diferentes especies.
y mastocitos/basófilos fueron descritas en el ca- En el hombre, la anafilaxia generalizada se
pítulo 20. Brevemente, luego de una exposición presenta con prurito intenso, erupción urticarial,
previa con el antígeno (fase de sensibilización), eritema, vómitos, cólicos intestinales, deposicio-
los mastocitos tisulares y los basófilos a nivel san- nes líquidas, dificultad respiratoria, edema
guíneo que tienen IgE específica unida a los re- laríngeo, obstrucción bronquial e hipotensión
ceptores celulares, en un nuevo contacto con el arterial. La broncoconstricción y la vasodilatación
antígeno liberan mediadores químicos contenidos que son causales de muerte pueden ser contrarres-
en los gránulos del citoplasma y producen una tadas con la administración de adrenalina. Este
reacción inflamatoria tisular local provocando cuadro grave puede presentarse en reacciones ad-
edema, broncoespasmo, vasodilatación o anafi- versas a drogas como penicilina y procaína y por
laxia (figura 21-1). Estos mediadores químicos son picaduras de insectos en sujetos sensibilizados. En
los que participan en las manifestaciones clínicas clínica humana son más frecuentes las reacciones
agudas de rinitis alérgica, asma, urticaria y anafi- localizadas en las vías respiratorias (rinitis alérgica,
laxia. asma bronquial alérgica) y en la piel (urticaria).
La descripción clásica incluida en la clasifi-
cación de Gell y Coombs como reacción inme-
diata comprende los fenómenos que ocurren a los
15 a 30 minutos de la interacción del alergeno con
la IgE específica unida al receptor de alta afinidad
en la membrana del mastocito, que determina la
degranulación y liberación de mediadores de la
fase inmediata.
La activación del mastocito también
incrementa la síntesis de mediadores de la respues-
ta inflamatoria generados en el metabolismo del
ácido araquidónico tales como prostaglandina A2,
tromboxano y leucotrienos los que amplifican la
respuesta tisular. Además participan linfocitos Th2
que generan citoquinas caracteristicas de la fase
tardía como componente de la misma reacción (IL-
4, IL-5, IL-10). En esta fase tardía se produce in-
filtración celular por eosinófilos, linfocitos y
macrófagos, responsables de inflamación local
iniciada por la interacción del alergeno y la IgE.
La persistencia de la hiperreactividad bronquial
Figura 21-1. Representación de hipersensibilidad de tipo I en el asma y de la hiperreactividad nasal en la
o inmediata rinitis alérgica es atribuida a la infiltración celular
típica de la fase tardía. Estos conocimientos han
permitido un tratamiento más racional de estas
Los modelos utilizados para su estudio han enfermedades que requieren fármacos antagonis-
demostrado que en animales previamente tas de los mediadores (antihistamínicos) o
inmunizados o sensibilizados con un antígeno pro- fármacos que reviertan los efectos de los media-
teico, es posible desencadenar a los pocos minu- dores sobre los receptores celulares
tos de la provocación con el antígeno una reac- (broncodilatadores) en la fase aguda combinados
ción caracterizada por dificultad respiratoria mar- con uso prolongado de medicación anti-
cada, asfixia, convulsiones, shock y muerte. En la inflamatoria (corticoides) para tratar la fase tardía
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Sin título-2 381 5/26/06, 10:26 AM

de infiltración celular responsable de la manten- efectores en este tipo de reacción:
ción de la hiperreactividad.
Los mecanismos desencadenados además a) El anticuerpo se une a los antígenos en las
producen en los tejidos locales un aumento en la células o tejidos y activa la vía clásica del sis-
permeabilidad capilar con el ingreso de molécu- tema del complemento produciendo citolisis
las biológicamente activas, anticuerpos séricos y y muerte celular. Ej: algunas reacciones
células circulantes en los órganos blancos. hemolíticas.
Además, la degranulación de mastocitos pue-
de ser provocada sin la interacción antígeno-anti- b) El anticuerpo citotóxico se une al antígeno
cuerpo, por fármacos como morfina, codeína en- celular o tisular y expone los fragmentos Fc
tre otras, por anafilotoxinas derivadas del sistema que son reconocidos por células fagocíticas
complemento y por acción de mediadores quími- las cuales pueden destruir a la célula
cos de los linfocitos T. recubierta de anticuerpos o liberar enzimas o
componentes que lesionan un tejido, en el
caso de antígenos unidos a membranas
4. HIPERSENSIBILIDAD CITOTÓXICA basales. Ej: Síndrome de Goodpasture.
(TIPO II)
c) Los anticuerpos unidos a su antígeno tisular
Este tipo de lesión mediada inmunológi- actúan como mediadores de la llamada reac-
camente se caracteriza por la presencia de ción citotóxica celular dependiente de anti-
anticuerpos dirigidos contra antígenos celulares o cuerpo (ADCC), en la cual las células
tisulares. En la actualidad, su importancia es me- efectoras pueden ser linfocitos, macrófagos
nos significativa, ya que la presencia de tales o células NK. En esta situación, la célula
anticuerpos es menos fundamental que la partici- efectora guiada por el anticuerpo citotóxico
pación de complejos inmunes en las lesiones de libera componentes que dañan el tejido don-
los tejidos. de se encuentra el antígeno (figura 21-2).
Pueden existir diferentes mecanismos
Figura 21-2. Representación de hipersensibilidad de tipo II o citotóxica.
382
Sin título-2 382 5/26/06, 10:26 AM

El modelo experimental mejor conocido en 5. HIPERSENSIBILIDAD MEDIADA POR
que se ha estudiado este tipo de reacción es la COMPLEJOS INMUNES (TIPO III)
llamada nefritis nefrotóxica que se produce en
animales inyectados con suero que contenga Corresponde al daño tisular provocado por
anticuerpos contra la membrana basal del la formación de complejos inmunes que no han
glomérulo. Estos anticuerpos son en su mayo- sido eliminados oportunamente por el sistema
ría de tipo Ig G y pueden fijar complemento. fagocítico. Los anticuerpos que participan en este
En clínica humana, en el síndrome de tipo de reacción son de diferente clase (isotipo) y
Goodpasture que se manifiesta por hemorragia su unión al antígeno puede ser reversible.
pulmonar, glomerulonefritis y anemia, es posi- El anticuerpo habitualmente de clase IgM e
ble detectar anticuerpos circulantes antimem- IgG se une al antígeno y forma un complejo in-
brana basal del capilar glomerular y pulmonar mune que induce la activación del sistema com-
conjuntamente con depósitos lineales de plemento a partir de C1q (vía clásica). La activa-
inmunoglobulinas en las membranas basales del ción del complemento genera anafilotoxinas y fac-
tejido renal y pulmonar mediante inmuno- tores quimiotácticos cuya acción determina au-
fluorescencia. mento de permeabilidad vascular y activación e
Otras enfermedades en que participaría este infiltración de neutrófilos, que ingieren los com-
mecanismo de daño citotóxico son: reacciones plejos inmunes y liberan enzimas lisosómicas da-
transfusionales, enfermedad hemolítica del recién ñando las células y tejidos donde se encuentran
nacido, anemia hemolítica autoinmune, citopenias depositados los complejos inmunes (figura 21-3).
por hipersensibilidad a drogas y rechazo El tipo de antígeno que participa en estas re-
hiperagudo de trasplantes, que se produce en su- acciones puede ser extrínseco o autoantígeno. Se
jetos receptores que tienen anticuerpos contra el manifestará como una enfermedad autoinmune
tejido injertado. cuando el antígeno corresponda a un autoantígeno
o cuando presente reacción cruzada con un
antígeno propio.
Figura 21-3. Representación de la hipersensibilidad de tipo III o por complejos inmunes.
383
Sin título-2 383 5/26/06, 10:26 AM

Hay que considerar que no todos los comen diferentes territorios tales como riñón, piel, ar-
plejos inmunes que constantemente se están for- ticulaciones y vasos sanguíneos. La denominación
mando desencadenan una respuesta nociva. Aque- de enfermedad del suero proviene de las observa-
llos inmunocomplejos que sí son capaces de des- ciones hechas en las primeras décadas del siglo
pertar respuesta de daño lo harán a través de la XX cuando se utilizaba principalmente suero de
activación del complemento, de aminas caballo como antisuero para el tratamiento de la
vasoactivas que se liberan luego de la activación difteria, el tétanos u otras enfermedades infeccio-
de los basófilos y de mastocitos. sas. Hasta un 50% de los enfermos tratados con
Los inmunocomplejos se depositarán en te- este suero heterólogo presentaban fiebre, compro-
jidos u órganos determinados según el tamaño de miso general, lesiones cutáneas urticariales y
los complejos inmunes, de factores hemodiná- eritematosas, artralgias, linfoadenopatías y
micos como áreas de turbulencias que ocasionan esplenomegalia. Actualmente ocurren reacciones
daño endotelial y también dependerá de la afini- similares en casos de alergia a la penicilina y otras
dad de unión del antígeno al anticuerpo. drogas y en enfermos trasplantados que reciben
Este grupo comprende dos tipos de reaccio- suero antilinfocitario como tratamiento o preven-
nes por inmunocomplejos en que se produce daño ción del rechazo.
tisular: el fenómeno de Arthus y la enfermedad Existen numerosos ejemplos de enfermeda-
del suero. des humanas en las cuales es posible encontrar
En el primer tipo se produce una precipita- complejos inmunes circulantes y depósitos en los
ción de inmunocomplejos extravasculares con tejidos, destacando la glomerulonefritis
necrosis tisular local, con liberación de sustancias postestreptocócica, la endocarditis infecciosa, la
proteolíticas locales e infiltración neutrofílica en infección por virus de hepatitis y enfermedades
las paredes de los vasos. En las primeras horas autoinmunitarias como artritis reumatoide y lupus
aparece eritema y edema que aumentan progresi- eritematoso sistémico, especialmente en la nefritis
vamente hasta tres a seis horas, para desaparecer lúpica.
en diez a doce horas. Las manifestaciones en esta
fase son más agudas. Ejemplos de este subgrupo
de reacciones se observan en las etapas agudas de 6. HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA
las enfermedades pulmonares denominadas MEDIADA POR CÉLULAS (TIPO IV)
neumonitis por hipersensibilidad o alveolitis
alérgicas extrínsecas que se producen en sujetos Se ha definido como hipersensibilidad tardía
expuestos por vía inhalatoria a partículas orgáni- o retardada a las reacciones en que participan
cas (esporas de hongos, proteínas aviarias, entre linfocitos T. A comienzos del presente siglo, von
otras). Los enfermos así sensibilizados desarro- Pirquet denominó "alergia tuberculínica" a la res-
llan síntomas generales como fiebre y escalofríos puesta cutánea positiva obtenida en sujetos infec-
conjuntamente con disnea, tos, leucocitosis e in- tados con bacilo tuberculoso, al estimular la piel
filtrados pulmonares, y tienen anticuerpos con preparados del mycobacterium. En 1942,
precipitantes en circulación, detectables median- Landsteiner y Chase demostraron que era posible
te las pruebas específicas. La reacción se produce transferir en forma pasiva esta reacción tardía uti-
cuatro a seis horas después de la exposición al lizando células inmunes y esto no ocurría con suero
antígeno por vía inhalatoria, generando una intensa inmune.
inflamación de la vía aérea y el tejido pulmonar Existen algunas dificultades para separar la in-
que puede resolverse en 12 a 18 horas. La persis- munidad mediada por células y la hipersensibili-
tencia de las lesiones pulmonares con progresión dad retardada, ya que ambos términos describen el
a fenómenos de alveolitis y fibrosis parecen de- mismo fenómeno inmunológico, y se refieren a la
pender de la participación de otras células respuesta inflamatoria mediada por linfocitos T que
inflamatorias especialmente linfocitos, reaccionan con su antígeno específico, sin consi-
macrófagos y fibroblastos. Otros ejemplos son las derar si el resultado final es protectivo o nocivo
reacciones post-inmunizaciones, reacciones a dro- para el individuo. En sentido más estricto las fun-
gas e intolerancia insulínica. ciones efectoras del linfocito T se pueden definir
En la enfermedad del suero la formación de como la citotoxicidad directa ejercida por linfocitos
inmunocomplejos ocurre en el compartimento citotóxicos y la inmunidad mediada por células e
intravascular y el depósito posterior se produce hipersensibilidad tardía ejercida por LTH1.
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Sin título-2 384 5/26/06, 10:26 AM

Las respuestas inflamatorias de este tipo son las plasmáticas, células epiteloideas y células gi-
importantes en la eliminación de agentes infec- gantes multinucleadas. Su formación se interpre-
ciosos intracelulares, pero pueden dirigirse conta como estimulación local persistente por
tra sustancias ambientales normalmente inocuas antígenos de baja solubilidad y degradación que
y causar enfermedad. Estas respuestas mediadas dan como resultado final esta respuesta local de
por células se expresan en 48 a 72 horas en el su- células mononucleares transformadas. Aparece en
jeto previamente sensibilizado y se caracterizan procesos infecciosos, hipersensibilidad retardada
por el infiltrado inflamatorio predominantemente a metales y partículas orgánicas y en sarcoidosis
por células mononucleares, a diferencia de la hi- y otras enfermedades granulomatosas.
persensibilidad mediada por anticuerpos que ocu- La inmunidad mediada por células y la hi-
rre en minutos o algunas horas y presentan infil- persensibilidad retardada se pueden inducir por
trado de tipo polimorfonuclear. inmunizaciones y por contacto en la piel y mucosas
El mecanismo de respuesta supone que LT con sustancias químicas sensibilizantes que mu-
inductores son activados por células presentado- chas veces son haptenos que se unen a una proteí-
ras de antígeno, con liberación de citoquinas que na transportadora como en el caso de dermatitis
expanden el clon de TH1 los cuales secretan IL-2, por contacto. También se adquiere en forma natu-
IFNγ, TNFβ, IL-3, GM-CSF, como principales ral en infecciones por patógenos intracelulares:
mediadores activos que atraen y activan virus, bacterias, hongos, protozoos y helmintos.
macrófagos, producen vasodilatación, depósitos Así, se pueden describir cuatro tipos de reac-
de fibrina, formación de granulomas y destrucción ciones en la hipersensibilidad retardada: a) la sen-
tisular local (figura 21-4). sibilidad de contacto, b) la reacción tipo
tuberculina, c) la reacción granulomatosa y d) la
reacción de Jones Mote.
La reacción de sensibilidad por contacto es
máxima a las 48 horas, es inducida por haptenos
como el níquel que son capaces de atravesar las
barreras cutáneo mucosas y se unen a las proteí-
nas. Este complejo formado por hapteno y proteí-
na transportadora es capaz de inducir la respuesta
de linfocito T, con abundante infiltrado
mononuclear en la epidermis tal como se ha ob-
servado en el eczema. La reacción de hipersensi-
bilidad de tipo tuberculina se observa entre las
48 y 72 horas manifestándose con infiltración
linfocítica mononuclear en la dermis. La reacción
granulomatosa es la observada en la sarcoidosis
y se produce por persistencia del antígeno en el
macrófago favoreciendo la formación de células
epiteloídeas y células gigantes multinucleadas. La
reacción de Jones Mote es máxima a las 24 ho-
ras y se caracteriza por predominio de basófilos
intralesionales.
Figura 21-4. Representación de la hipersensibilidad de tipo Las pruebas cutáneas para hipersensibilidad
IV o mediada por células.
retardada son útiles y sencillas para la evaluación
general de la inmunocompetencia y en el diag-
nóstico de enfermedades infecciosas. Cuando se
Las características histopatológicas de las re- usan para diagnóstico, las pruebas positivas no ne-
acciones retardadas muestran infiltrados con pre- cesariamente implican enfermedad y en la eva-
dominio de linfocitos y monocitos, depósitos de luación de la competencia inmunológica deben
fibrina, edema y destrucción tisular que en lesio- considerarse variables que pueden modificar sus
nes avanzadas origina la típica necrosis caseosa. resultados. La reactividad cutánea representa la
El elemento típico es el granuloma constituido por capacidad individual de expresar la hipersensibi-
acúmulos de linfocitos, neutrófilos escasos, célu- lidad retardada a los antígenos inyectados y su
385
Sin título-2 385 5/26/06, 10:26 AM

expresión depende de interacciones entre células LECTURAS SUGERIDAS
linfoides y monocitarias. La anergia es la ausen-
cia de reacción cutánea retardada a un grupo de Galli, S.J., Lantz, C.S., “Allergy” en Paul WE.,
antígenos habituales y bajo ciertas circunstancias Fundamental Immunology, 4ª ed.,
puede considerarse como un estado de depresión Philadelphia, Lippincott Raven,1999, pp. 1127-
de la inmunidad mediada por células. Existen nu- 1174.
merosas condiciones clínicas relacionadas con
anergia: inmunodeficiencias congénitas y adqui- Janeway C.A. Jr, Travers, P., Immunobiology:
ridas, infecciones y errores en el procedimiento The immune system in health and disease,
técnico. New York, Garland Publishing Inc.,1994.
Las reacciones de hipersensibilidad tipo IV
han demostrado ser parte de varias enfermedades Kay, A.B., “Allergy and allergic diseases” N
autoinmunes organoespecíficas como la tiroiditis Engl J Med, 344:30-37, 2001.
de Hashimoto y enfermedades del tejido conectivo
como Polimiositis. También se observa en la Re- Quezada A., Gimpel, S., Miranda, D., Las Heras,
acción Injerto contra Huésped y el Eritema nodoso. J., Andreis, M., “Ultrastructural features of
Como se comentó anteriormente la clasifi- alveolar cells in experimental hypersensitivity
cación de Gell y Coombs sigue siendo la más acep- pneumonitis”, Respiration 51: 127-36, 1987.
tada, sin embargo varios autores recientemente han
propuesto modificaciones que ayudan a explicar Quezada, A., von Stowasser, V., Murray, G.,
las relaciones entre los mecanismos efectores, los Andreis, M., “Modelo experimental de neumonitis
elementos celulares y humorales involucrados, los por hipersensibilidad en ratas”, Rev Med Chil
efectos iniciales y la expresión final del daño 111(4):389-396, 1983.
tisular. Estas modificaciones incluyen
subdivisiones de las reacciones clásicas que faci- Terr, A., “Mecanismo de hipersensibilidad” en
litan la comprensión de los avances en la interpre- Inmunología Básica y Clínica, Editores: Stites y
tación de los mecanismos patogénicos de varias Terr. Manual Moderno México, capítulo 29, pp.
enfermedades inmunológicamente mediadas (ta- 425-38, 1993.
bla 21-1)
Tabla 21-1. Clasificación de las reacciones de hipersensibilidad de Gell y Coombs modificada
TIPO I TIPO II TIPO III TIPO IV

a b a1 a2 b
IgE Ig G IgG Th 1 Th 2 LT citotóxico
ANTIGENO Antígeno Alergeno Receptores de Antígeno soluble Antígeno Antígeno Antígeno

soluble. asociado a una superficie soluble soluble asociado a una
Alergeno célula o tejido celular célula
MECANISMO Activación de Complemento Señales Células FcγR+, Activación de Eosinófilos Citotoxicidad
EFECTOR células cebadas Células FcγR+ alteradas por complemento macrófagos Basófilos directa
Fagocitos y NK anticuerpo
EJEMPLO Rinitis Alérgica Alergia a Enfermedad de Lupus Dermatitis de Inflamación Rechazo
Asma penicilina Graves Eritematoso Sist. contacto alérgica crónica trasplante
Anafilaxia Reacción Miastenia Enfermedad del Reacción Diabetes
transfusional Gravis suero tuberculínica Mellitus
Anemia
Hemolítica AI*
*AI=Autoinmune
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Capítulo 22
ANAFILAXIS
Patricia Díaz A.
1. Introducción 4. Causas de reacciones anafilac-

2. Fisiopatología toídeas
2.1. Mastocitos 4.1. Aditivos
2.2. Degranulación de mastocitos y 4.2. Medios de contraste
basófilos 4.3. Ácido acetil salicílico (AAS) y
2.3. Participación de cascadas de la anti-inflamatorios no esteroidales
inflamación en la reacción anafi- (AINE)
láctica y anafilactoídea 5. Reacciones anafilácticas y anafilac-
2.4. Alteraciones funcionales toídeas en pabellones quirúrgicos
3. Causas de anafilaxis 6. Signos y síntomas
3.1. Fármacos 7. Laboratorio
3.2. Látex 8. Tratamiento
3.3. Picaduras de himenópteros
3.4. Alimentos
3.5. Anafilaxis inducida por inmuno-
terapia
3.6. Anafilaxis inducida por ejercicio
3.7. Anafilaxis idiopática
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RESUMEN
Las reacciones anafilácticas son un conjunto de manifestaciones clínicas producidas por la

descarga masiva de mediadores de la inflamación desde los mastocitos. La liberación de media-
dores puede ser derivada de la reacción antígeno-IgE unido a mastocito (anafilaxis) o por la
descarga de mediadores no mediada por IgE (reacciones anafilactoídeas). Las manifestaciones
clínicas son las mismas en ambos casos e incluyen: urticaria, enrojecimiento de piel, obstrucción
respiratoria, cólicos abdominales, diarrea, hipotensión y shock. Las causas son múltiples e inclu-
yen todas aquellas condiciones capaces de desencadenar la activación de mastocitos en indivi-
duos sensibilizados y no sensibilizados. Es un cuadro clínico que puede ir de leve a severo,
requiere tratamiento de emergencia y aquellos individuos a riesgo deben aprender a tomar medi-
das preventivas y de automanejo de primeros auxilios.
1. INTRODUCCIÓN 2. FISIOPATOLOGÍA
El término anafilaxis fue acuñado por Portier 2.1. Mastocitos

y Richet en 1902 cuando, al intentar inducir in-
munidad, sensibilizaron a perros con veneno de Los mastocitos humanos son un grupo hete-
anémona de mar. Estos animales en contactos pos- rogéneo, multifuncional de células con roles en
teriores con el veneno, hicieron reacciones diversas condiciones como alergia, infestación pa-
anafilácticas fatales con pequeñas dosis del rasitaria, angiogénesis y remodelación tisular. Se
antígeno. Estos investigadores, llamaron anafi- originan de células hematopoyéticas derivadas de
laxis o “sin protección” a esta reacción como la médula ósea, entran a la circulación como pre-
opuesto al término profilaxis o “protección”. cursoras de células mononucleadas que expresan
Actualmente, anafilaxis se refiere a los sig- mRNA de “stem cell factor”(SCF) y receptores
nos y síntomas derivados de la reacción para SCF en su membrana. De la sangre migran a
inmunológica de hipersensibilidad inmediata me- los tejidos donde bajo la influencia de los factores
diada por IgE, que produce una descarga masiva microambientales, se diferencian y maduran como
de mediadores de la inflamación desde los mastocitos. Su origen es muy diferente a los
mastocitos y basófilos, alterando fundamentalmen- basófilos que derivan de los precursores de
te vasos sanguíneos y músculo liso. Aunque en un granulocitos al igual que los eosinófilos y entran
sentido estricto podríamos incluir en la definición a la circulación cuando ya están maduros. Al mis-
de anafilaxis las reacciones locales como los sín- mo tiempo, los basófilos no migran hacia los teji-
tomas de rinitis alérgica al inhalar y depositarse dos en condiciones normales, esta migración se
un antígeno, este término se usa para la reacción ha descrito en la fase tardía de la respuesta alérgica.
generalizada, multiforme y alejada del sitio de Los estudios inmunocitoquímicos han de-
entrada del alergeno. Esta reacción es indistin- mostrado la presencia de dos fenotipos de
guible desde el punto de vista clínico de la reac- mastocitos, dependiendo del contenido de
ción anafilactoídea, en que la descarga de me- proteasas neutrales: mastocitos Mt que contienen
diadores no es mediada por IgE. sólo triptasa y mastocitos Mtc que contienen
triptasa y quimasa. Al comienzo se atribuyó su
presencia a las diferentes localizaciones, mucosas
y tejido conectivo. Actualmente, sabemos que la
presencia de ellos depende más de la patología
que del tipo de tejido así los Mt estarían relacio-
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nados con el sistema inmune con un rol importan- a) Mediadores preformados
te en la defensa y localizados preferentemente en
las mucosas, están aumentados en número en áreas Varias moléculas se encuentran preformadas
donde hay infiltración linfocitaria y en enferme- en los mastocitos y basófilos (tabla 22-1).
dades alérgicas. En cambio los Mtc que se en- La Histamina o B-imidazoletilamina, fue sin-
cuentran preferentemente en submucosas y tejido tetizada en 1907 y denominada histamina o deri-
conectivo, no estarían relacionados con el siste- vada de tejidos (del griego histos). Posteriormen-
ma inmune y tendrían una función primaria en te, al inyectar histamina por vía endovenosa, fue
angiogénesis y remodelación tisular. posible reproducir los síntomas de animales sen-
Las reacciones de hipersensibilidad inmediata sibilizados, por lo que se consideró ser el media-
se inician cuando las moléculas de alergeno se dor humoral de las reacciones alérgicas. La
unen a dos moléculas de IgE en la superficie celu- histamina es sintetizada en el aparato de Golgi de
lar del mastocito, entrecruzando sus regiones Fab los mastocitos y basófilos, a partir de la
(ver capítulo 20). Esto permite así el movimiento decarboxilación de la histidina su aminoácido pre-
de los receptores Fc que inducen la activación de cursor. Una vez formada la histamina se une a los
la membrana celular y los eventos citoplasmáticos residuos ácidos de la cadena de glicosaminoglican
que culminan en la liberación de mediadores de la heparina u otro proteoglicano. La cantidad
preformados contenidos en los gránulos y la ge- de histamina en mastocitos humanos aislados de
neración de nuevos productos como los pulmón, piel, tejido linfoide e intestino delgado
eicosanoicos y citoquinas. es de 3-8 pg por célula. Niveles bajos de histamina
son secretados en forma continua, pero se desco-
2.2. Degranulación de mastocitos y basófilos noce su estímulo, niveles más altos de secreción
se produce cuando la célula es estimulada con
Las manifestaciones clínicas de las reacciones antígenos, anti-IgE, concanavalina A, substancia
anafilácticas y anafilactoídeas se deben a la libe- P, poliaminas, opiáceos, compuesto 48/80 y una
ración de mediadores desde los mastocitos y variedad de citoquinas. Hay evidencias que su-
basófilos a saber: gieren que subpoblaciones de mastocitos difieren
Tabla 22-1. Mediadores preformados de mastocitos humanos
Tipo de mediador Mediador Función
Amina biogénica Histamina Contracción músculo liso y células

Endoteliales
Proteasas neutrales Triptasa Rompe C3 y C3a Activa fibroblastos
Quimasa Rompe neuropéptidos
Hidrolasas B-hexosaminidasa Hidrolisa carbohidratos complejos
B-glucoronidasa Hidrolisa carbohidratos complejos
B-D-galactosidasa Hidrolisa carbohidratos complejos
Arilsulfatasa Hidrolisa sulfatos esteres aromáticos
Proteoglicanos Heparina Anticoagulante
Condroitin sulfato Desconocida
Enzimas oxidativas Superoxidismutasa Convierte O2 a H2O2
Peroxidasa Convierte H2O2 a H2O
Factores quimiotácticos ECF-A Atrae y activa eosinófilo
NCF-A Atrae y activa neutrófilos
ECF-A, Factor quimiotáctico de eosinófilo; NCF-A, Factor quimiotáctico de neutrófilos
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según el estímulo, tanto en la variedad como ve- pueden intensificar y prolongar la inflamación. Por
locidad de liberación de los diferentes mediado- otro lado la heparina al inhibir la plasmina y
res. La histamina extracelular es rápidamente calicreína, inhibe la coagulación. La quimasa es
metabolizada a través de dos vías enzimáticas, capaz de convertir la angiotensina I en
metilación (70%) y oxidación (30%). La angiotensina II y podría, teóricamente, aumentar
metilación es catalizada por una enzima la respuesta compensatoria a la hipotensión. En la
intracelular la N-metiltransferasa transformándo- tabla 22-2 se muestran mediadores neoformados.
la a N-metilhistamina que es excretada por el ri-
ñón. Parte de este producto metilado es oxidado Productos derivados del ácido araquidónico
por la monoaminoxidasa y excretada como ácido
metilimidazol acético. También, la histamina pue- Los productos derivados del ácido
de ser directamente oxidada por la diaminoxidasa araquidónico no están preformados, se forman al
(histaminasa) y eliminada como ácido imidazol activarse la célula. Ellos son prostaglandinas,
acético. leucotrienos, tromboxanos y lipoxinas. Al activar-
La histamina actúa en una gran variedad de se el mastocito mediante entrecruzamiento de los
tejidos mediante receptores específicos. Gracias receptores para Fc de la IgE u otro estímulo, se
al desarrollo de substancias químicas que activa la fosfolipasa (PLA2) mediante aumento de
antagonizan en forma específica una variedad de calcio y su fosforilación por una quinasa.
efectos farmacológicos de la histamina, ha sido El ácido araquidónico es metabolizado por
posible determinar tres subtipos de receptores: H1, dos vías, mediante las enzimas cicloxigenasa
H2 y H3. La ocupación de los receptores H1 de la (COX) y lipoxigenasa formando prostaglandinas
histamina produce contractura de la musculatura y leucotrienos respectivamente. La enzima COX
lisa gastrointestinal y de la vía área. La inhala- se encuentra en dos formas, COX 1 que se en-
ción de histamina es usada en clínica como test cuentra en forma constitutiva en diferentes tipos
para determinar el grado de hiperreactividad bron- de células. COX2 que es altamente inducible por
quial no específica en el asma bronquial. La in- la acción de citoquinas pro-inflamatorias,
yección intradérmica de histamina, causa una tri- endotoxinas, ésteres del forbol (PMA), y factores
ple respuesta, (a) eritema local producto de la de crecimiento. Tanto la enzima como su mRNA
vasodilatación arteriolar mediada por receptores es reducido con los corticoides. La generación de
H1 y H2; (b) una respuesta algo más tardía con prostanoides mediante COX2 en macrófagos,
mayor enrojecimiento producido por mastocitos y polimorfonucleares se asocia a in-
neuropéptidos con acción vasodilatadora como el flamación, dolor y fiebre. Los mastocitos huma-
péptido relacionado con el gen de la calcitonina nos y no los basófilos producen prostaglandina D2
(CGRP) y (c) luego se forma una pápula que es (PGD2) lo que ha servido para identificar su pre-
consecuencia del edema que sigue a la contrac- sencia en reacciones alérgicas ya que ambas célu-
ción de las células endoteliales de las vénulas las producen histamina.
postcapilares y la exudación de plasma. La mayor El ácido araquidónico puede ser metaboliza-
parte de la formación de mácula y pápula es por do por una variedad de lipoxigenasas, cuando es
respuesta de receptores H1, los receptores H2 jue- metabolizado por la 5-lipoxigenasa se producen
gan un rol secundario. los leucotrienos. Así el arquidonato es converti-
do a 5HPTE y luego a leucotrieno A4. LTA4 es
b) Mediadores neoformados convertido a dihidroxil leucotrieno LTB4 y luego
a cisteinil leucotrieno LTC4. El rompimiento de
La degranulación de mastocitos y basófilos glutamina y glicina produce los metabolitos LTD4
produce también la liberación de otros mediado- y LTE4, respectivamente.
res que activan otras vías de la inflamación, así la
quininogenasa de mastocitos y la calicreína de Factor activador de plaquetas
basófilos puede activar el sistema quinina. La
triptasa puede activar la calicreína, el sistema com- El Factor activador de plaquetas (PAF) es un
plemento y el fibrinógeno. El factor activador de fosfolípido ligado a un grupo éter. El PAF es sin-
plaquetas puede activar el sistema de coagulación tetizado por acción de la fosfolipasa A que hidrolisa
y producir coagulación intravascular diseminada. 1-O alquil-2 acilgliceril-3 fosforilcolina para pro-
Factores quimiotácticos atraen eosinófilos que ducir lisoPAF. Este metabolito es transformado a
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Tabla 22-2. Mediadores generados durante la activación de mastocitos
Mediador Función
LTC4, LTD4, LTE4 Contracción músculo liso

Aumento secreción vía aérea
Dilatación y aumento de permeabilidad vasos
Disminuye la contractilidad miocárdica
Contracción arterias coronarias y cerebrales
LTE4 Hiperreactividad vía aérea
LTB4 Quimiotaxis y activación neutrófilos
Aumenta adherencia leucocitos a endotelio
Aumenta función células NK
PGE2 Dilatación y aumento permeabilidad de vasos
Broncodilatación
PGD2 Broncocontricción
PGF2alfa Broncocontricción
Contricción vasos pulmonares
TxA2 Broncocontricción
Aumenta adherencia leucocitos
Aumento agregación y adherencia plaquetaria
PAF Agregación plaquetaria
Quimiotaxis y degranulación de eosinófilos y neutrófilos
Aumenta permeabilidad vascular
Broncocontricción
PAF mediante la acetilación por una enzima contricción inducida por inhalación de alergenos
acetiltransferasa. La producción de PAF fue des- en individuos asmáticos sensibilizados. Por lo tan-
crita en un comienzo por activación de basófilos to es dudoso su rol en el asma bronquial pero en
de conejos. Mastocitos humanos purificados de anafilaxis no ha sido descartado.
pulmón también producen PAF y en menor canti-
dad lisoPAF, que tiene menor actividad que PAF. Citoquinas
En contraste con las plaquetas de conejo, las hu-
manas son menos sensibles a la acción de PAF. Mastocitos purificados de pulmón humano incu-
Sin embargo, este mediador tiene acción impor- bados con SCF y anti-IgE expresan mRNA para
tante en neutrófilos humanos, en los cuales ejerce diversas citoquinas como: IL-3, IL-4, IL-5, IL-6,
una acción quimiotáctica, cambios estructurales, IL-10, IL-13, GM-CSF y TNFα (ver capítulo 11).
liberación de enzimas lisosomales y generación de
radicales libres. Estas acciones también pueden ser • Factor de Necrosis Tumoral-alfa (TNF-α):
producidas por la generación de LTB4. PAF tam- se encuentra preformado en los gránulos de
bién tiene acción quimiotáctica de eosinófilos tan- mastocitos. En mucosa nasal y bronquial se
to in vitro como in vivo, lo que ha hecho especular encuentra asociado a la subclase de mastocitos
que tendría un rol importante en la infiltración Mt y en mastocitos de piel se encuentra aso-
eosinofílica en alergias. La inhalación de PAF pro- ciado a la subclase Mtc. En individuos con
duce bronco-contricción en individuos asmáticos rinitis alérgica TNF es liberado junto con
y no asmáticos. Sin embargo, potentes antagonis- triptasa a los minutos de la provocación con
tas de PAF no son capaces de inhibir la bronco- alergeno. Esto contrasta con las células clá-
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sicas productoras de TNF como macrófagos veridad de la reacción anafiláctica se ha
y linfocitos que no guardan esta citoquina correlacionado con los niveles de la anafilatoxina
preformada y se libera después de su activa- C3a, indicando una participación de la cascada del
ción y transcripción y por lo tanto de manera complemento. Otros estudios han demostrado la
mucha más lenta que de los mastocitos. La participación del sistema calicreína en el desarro-
rápida liberación de TNF por mastocitos pue- llo de angioedema durante una crisis de anafilaxis.
de tener gran importancia en la inflamación La participación de los sistemas de comple-
alérgica, ya que TNF es crucial para la acti- mento, coagulación, y calicreína-quinina, puede
vación de NFkB, factor de transcripción que ser consecuencia de la liberación de triptasa y
aumenta la expresión de mRNA de GM-CSF, quininogenasa de los mastocitos y calicreína des-
IL,8, IL-6, E-Selectina, VCAM-1 e ICAM-1 de los basófilos, sin embargo la hipoxia y el daño
en diversas células epiteliales y endoteliales. endotelial producido durante el shock pueden ac-
• Interleuquina-5 (IL-5): es crucial para la tivar estos sistemas, como ha sido descrito en otros
maduración, activación y sobrevida de shock con hipotensión severa (cardiovascular,
eosinófilos. La producción de IL-5 se inicia endotóxico).
con la activación de mastocitos mediante en- Más recientemente en modelos experimen-
trecruzamiento de los receptores para IgE. Se tales animales, se ha demostrado la participación
produce sólo en la subclase MTt, mastocitos del óxido nítrico (NO) durante la anafilaxis. El
que están bajo control de células T y están NO es producido por el endotelio vascular en for-
aumentados en sitios de inflamación alérgica ma constitutiva, y su producción puede ser indu-
crónica. cida en diferentes células como mastocitos, célu-
• Interleuquina-4 (IL-4): es responsable del las del músculo liso y otras, por numerosos me-
estímulo y mantención de la proliferación de diadores, incluyendo histamina, leucotrieno C4,
linfocitos Th2 y de la síntesis de IgE por cé- bradiquinina y substancia P. El NO causa relaja-
lulas B. Por técnicas inmunocitoquímicas se ción del músculo liso y aumenta la permeabilidad
ha determinado la presencia de IL-4 en el vascular produciendo hipotensión.
80% de mastocitos de la mucosa bronquial.
Se encuentra en los gránulos de mastocitos 2.4. Alteraciones funcionales
Mt y Mtc.
La mayoría de los signos y síntomas de la
2.3. Participación de cascadas de la inflama- reacción anafiláctica pueden ser explicados por la
ción en la reacción anafiláctica y acción de los mediadores analizados anteriormen-
anafilactoídea te. Aunque cualquier órgano puede estar afecta-
do, lo más frecuente es que haya compromiso de
Los diversos mediadores producidos por piel, tracto respiratorio, gastrointestinal y
mastocitos y basófilos pueden activar un gran nú- cardiovascular. Éstos pueden comprender: erite-
mero de vías inflamatorias incluyendo: sistema de ma cutáneo, prurito, sensación de calor que puede
las quininas, sistema del complemento, sistema de ir progresando hasta llegar a la urticaria generali-
la coagulación y fibrinolisis. La participación de zada y angioedema. Los signos y síntomas respi-
estas cascadas proinflamatorias ha sido demostra- ratorios incluyen estornudos, laringoespasmo con
da en individuos alérgicos sometidos a estridor inspiratorio, broncoespasmo con
inmunoterapia controlada. Cuando el individuo sibilancias, y disnea. Algunos pacientes presen-
sufre una reacción sólo urticarial, no experimenta tan náuseas, vómitos, diarrea y dolores abdomi-
cambios de sus niveles sanguíneos de histamina nales. El compromiso cardiovascular se manifiesta
ni otros mediadores. Sin embargo, cuando estos por hipotensión acompañada de taquicardia y con
pacientes han experimentado shock, se elevan menos frecuencia bradicardia y arritmias. La re-
significativamente los niveles de histamina en san- sistencia al flujo de la vía aérea y la caída de la
gre periférica, la que se correlaciona con la seve- PO2 se puede atribuir al efecto contráctil directo
ridad de la hipotensión y en algunos pacientes de la histamina y otros mediadores que actúan
con episodios más severos se observa disminu- sobre el músculo liso bronquial. También a la ac-
ción de factores de la coagulación como factor V, ción de la histamina puede deberse la aparición
factor VIII, fibrinógeno, quininógeno, y de los de urticaria, sensación de calor, angioedema y sín-
componentes C3, C4 del complemento. La se- tomas gastrointestinales. Los estudios sobre
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hipotensión durante las reacciones anafilácticas y dentes familiares de alergia a drogas. La inciden-
anfilactoídeas, se han realizado cuando estos epi- cia de alergia a penicilina es de alrededor de 2%
sodios han ocurrido durante anestesia o de las personas en tratamiento y reacciones fata-
cateterización cardíaca. Esto ha permitido medir les de 1 en 32.000 inyecciones. Cuando un indi-
los fenómenos hemodinámicos, con lo cual se ha viduo ha sufrido una reacción alérgica a drogas la
determinado que el evento inicial es la conducta futura es evitarla y sólo cuando esto no
vasodilatación con pérdida masiva de líquido del es posible, intentar un tratamiento desensibilizante.
intravascular y paso al extravascular, llegando
hasta perder el 50% del volumen en 10 minutos. 3.2. Látex. Hasta 1980 esta reacción era poco fre-
La caída de la presión arterial se correlaciona con cuente, actualmente con el aumento del uso de
elevación de histamina, triptasa y C3a. Como látex ha aumentado su frecuencia y constituye un
mecanismo compensatorio se liberan problema de salud pública para grupos de riesgo.
catecolaminas; norepinefrina y epinefrina; se ac- Entre 8-17% de los trabajadores de la salud en
tiva el sistema angiotensina con conversión de USA, están sujetos a reacciones al látex. Entre
angiotensina I a angiotensina II. La respuesta los dadores de sangre se ha demostrado que alre-
vasopresora compensatoria es variable, en algu- dedor de un 6% tiene IgE anti-látex lo que explica
nos pacientes, la resistencia vascular periférica las reacciones alérgicas producidas con látex en
se eleva en forma anormal, mientras en otros cae individuos que desconocen estar en riesgo.
a pesar de la masiva liberación de catecolaminas.
Así, estos pacientes pueden estar en 3.3. Picaduras de Himenópteros. Varios grupos
vasocontricción máxima y no responden a agen- de insectos que se caracterizan por tener lanceta
tes vasopresores, por lo tanto como la causa de por la cual inyectan el veneno están comprendi-
hipotensión en el shock anafiláctico es la pérdida dos en esta clasificación, a saber las Apidae,
de líquido del espacio intravascular, la terapia de Vespidae y Formicidae. Los alergenos conteni-
elección es el reemplazo de líquido y los dos en el veneno de los himenópteros son proteí-
expandedores de volumen. nas y muchos son enzimas. También contienen
péptidos que no son alergénicos pero son res-
3. CAUSAS DE ANAFILAXIS ponsables de las manifestaciones tóxicas. Ade-
más de las proteínas y péptidos contienen aminas
Los alergenos que han sido involucrados vasoactivas como: histamina, 5-hidroxitriptamina,
como agentes causales de anafilaxis son general- dopamina, norepinefrina y acetilcolina. Las reac-
mente proteínas o fosfolípidos grandes. Sin em- ciones reportadas por veneno de abeja varían en-
bargo, moléculas pequeñas que actúen como tre un 0.4-3%. En USA alrededor de 25-50 perso-
haptenos uniéndose a proteínas del organismo nas mueren anualmente por picaduras de
pueden desencadenar reacciones alérgicas. La res- himenópteros, algunos de ellos sin tener antece-
puesta requiere de la exposición previa al antígeno dentes de reacción alérgica a insectos. La manera
y la síntesis de anticuerpo IgE. Sin embargo, la más rápida, simple y económica de identificar in-
exposición al antígeno puede pasar inadvertida y dividuos sensibilizados, es el test cutáneo. La pre-
presentarse una reacción anafiláctica frente a sencia de test cutáneo positivo a veneno de
antígenos que se desconoce estar sensibilizados. himenópteros, determina sensibilización previa,
pero no predice la forma de reaccionar del indi-
3.1. Fármacos. Los antibióticos son los fármacos viduo, y no discrimina entre aquellos individuos
que con más frecuencia producen reacciones con reacción local de los con reacción sistémica.
alérgicas y entre ellos los betalactámicos y sulfas. Niveles elevados de IgE se observan sólo en el
Es más probable que se produzca una reacción 80% de los individuos con test cutáneo positivo.
anafiláctica cuando la vía de ingreso del antibióti- Además no hay correlación entre el nivel de IgE y
co es inyectable. Se ha descrito reacciones el grado de sensibilización del individuo.
anafilácticas a la primera inyección de penicilina,
condición que es rara, indicando que la sensibili- 3.4. Alimentos. De los pacientes atendidos por
zación puede ocurrir sin que el individuo esté cons- anafilaxis en un servicio de urgencia, en un tercio
ciente de haber recibido la droga. La alergia a dro- la causa es una reacción alérgica a alimentos. Hay
gas no es más frecuente en atópicos que en la po- gran variedad de alimentos que pueden ser causa
blación general pero sí lo es cuando hay antece- de sensibilización, pero los más frecuentes en pro-
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ducir reacciones anafilácticas son: mariscos, cla- Algunos de estos aditivos han sido causantes de
ra de huevos, maní, nueces, castañas de cajú, reacciones sistémicas, en que no ha sido demos-
soya, y pescados. trada la IgE específica. Entre ellos los colorantes
sintéticos (anhilinas) como la tartrazina,
3.5. Anafilaxis inducida por inmunoterapia. carmasina, amaranto, índigo y otros; los
Durante el tratamiento con inmunoterapia con preservantes como los derivados de sulfitos que
extractos alergénicos a pacientes con rinitis cumplen múltiples funciones, los benzoatos y
alérgica y asma bronquial alérgica, se pueden pro- parabene. Estos son los que con mayor frecuen-
ducir reacciones anafilácticas. Esto ha llevado a cia han sido señalados como agente causal de re-
que en países como el Reino Unido su uso sea acciones anafilactoídeas.
prohibido y en otros como USA, comités de ex-
pertos han dado pautas de recomendaciones de uso, 4.2. Medios de contraste. Las reacciones a me-
poniendo especial cuidado en el manejo de pa- dios de contraste utilizados en exámenes
cientes asmáticos, ya que tienen más riesgo de radiológicos han disminuido con la introducción
hacer reacciones fatales. de agentes de baja osmolaridad. Las reacciones
con agentes hiperosmolares se estimaron en un 1%.
3.6. Anafilaxis inducida por ejercicio. El sín- En USA alrededor de 8 millones de personas reci-
drome de anafilaxis inducida por ejercicio fue ben anualmente medios de contraste y de ellas al-
descrito en una serie de individuos que presenta- rededor de 2700 hacen reacciones severas y 500
ban prurito de piel, urticaria, angioedema, mueren.
sibilancias e hipotensión en relación a ejercicio.
En estos pacientes se ha demostrado 4.3. Ácido acetil salicílico (AAS) y anti-
degranulación de mastocitos y elevación de inflamatorios no esteroidales (AINE). La
histamina aunque ésta no se correlaciona con los patogenia de la reacción inflamatoria inducida por
síntomas que presentan. Cerca del 70% de pa- AAS y AINE es debida a la unión inmediata de
cientes con este síndrome son atópicos. Hay una estos medicamentos con la cicloxigenasa COX-1
variante que es la anafilaxis inducida por ejerci- que previene la síntesis de prostaglandinas inclu-
cio en relación a comidas. Se ha descrito en pa- yendo PGE2, permitiendo la metabolización del
cientes que han presentado anafilaxis con ejerci- ácido araquidónico por la vía de la lipoxigenasa
cio cuando han ingerido mariscos entre 2 y 24 con la formación de leucotrienos. Se ha demos-
horas antes. En otros pacientes la sintomatología trado que las células mononucleares de los indivi-
se habría manifestado después de la ingesta de duos sensibles a la aspirina tienen gran suscepti-
apio y ellos presentaban un test cutáneo positivo bilidad por la inhibición de COX-1 con AAS com-
a apio. En este subgrupo de pacientes, las mani- parados con los individuos que no reaccionan a
festaciones de anafilaxis se presentan sólo cuan- estas drogas. Con la provocación oral con aspiri-
do hay ingesta de determinados alimentos y ejer- na en individuos que reaccionan con rinorrea, se
cicio simultáneamente. ha determinado aumento de histamina, LTC4,
triptasa y una disminución de PGE2 en líquido de
3.7. Anafilaxis idiopática. En alrededor de dos lavado nasal, indicando la participación de
tercios de los pacientes que presentan una reac- mastocitos. La sintomatología puede ser preveni-
ción anafiláctica no es posible determinar su cau- da con el uso de antileucotrienos que inhiben sus
sa. Afortunadamente estos casos son raramente receptores o su síntesis.
fatales. La incidencia reportada varía dependiendo de
la población seleccionada para el estudio. Ésta va
4. CAUSAS DE REACCIONES ANAFI- desde 2% en grupos de niños hasta 97% en adul-
LACTOÍDEAS tos con asma y rinosinusitis o pólipos nasales. En
un estudio de 51.979 pacientes que estaban ingi-
4.1. Aditivos. Los aditivos en los alimentos cum- riendo estos medicamentos se reportó 35 casos de
plen diversas funciones como colorantes, shock pero en un grupo de pacientes que habían
saborizantes y preservantes. Hay cerca de 3000 presentado reacción anafiláctica sólo el 3% tenía
substancias permitidas de ser agregadas en alimen- como agente causal a la AAS.
tos. En general se usan en pequeñas cantidades y
la gran mayoría no causa reacciones adversas.
395
Sin título-2 395 5/26/06, 10:26 AM

5. REACCIONES ANAFILÁCTICAS Y caria y el angioedema son las manifestaciones más
ANAFILACTOÍDEAS EN PABELLONES comunes, seguidas de alteraciones respiratorias
QUIRÚRGICOS con obstrucción respiratoria alta, disnea y
sibilancias y en un 33% mareos e hipotensión. Con
Se desconoce la incidencia de estas reaccio- menor frecuencia se dan las manifestaciones
nes en el acto operatorio. Hay múltiples agentes gastrointestinales incluyendo vómitos, diarrea y
utilizados durante el acto operatorio que pueden dolor abdominal. Se ha descrito colapso
causarlas, incluyendo el látex, ralajantes cardiovascular inmediato sin ser precedido por
neuromusculares derivados de amonio terciario y síntomas respiratorios o urticaria pero en un 30%
cuaternario, sustitutos del plasma y la aplicación precedidos por síntomas gastrointestinales y en el
de otras drogas endovenosas como opioides, 85% había signos neurológicos de alteración de
protaminas y otras. Hay estudios que muestran conciencia, temblor y espasmos musculares.
que las reacciones anafilácticas y anafilactoídeas El comienzo de los síntomas se produce en-
durante la anestesia estarían aumentando. Las ci- tre 5-30 minutos después de haber recibido el
fras varían entre 1 en 5.000 y 1 en 25.000 con una antígeno vía inyectable. Cuando el antígeno es
mortalidad de 3-4%. En el Reino Unido un 4.3% ingerido los síntomas aparecen habitualmente al-
de las muertes en el acto operatorio se deberían a rededor de las 2 horas, pero también pueden apa-
reacciones a drogas. Las reacciones a anestésicos recer mas tardíamente. Hay correlación entre la
como tiopental varían entre 1 en 15.000 a 1 en velocidad de aparición de los síntomas y la seve-
30.000. Los expandedores de volumen se asocian ridad del ataque. Un episodio puede desaparecer
a reacciones anafilactoídeas variando su inciden- y reaparecer después de varias horas, es lo que se
cia entre 1 en 17.000 con hidroetilalmidón y 1 en llama anafilaxis bifásica. Además los episodios
2.600 con gelatina. pueden mantenerse y reaparecer después de va-
rios días con múltiples recurrencias y largos in-
tervalos asintomáticos.
6. SIGNOS Y SÍNTOMAS La muerte por anafilaxis se debe a la obs-
trucción de la vía aérea y/o colapso cardiovascular.
En la tabla 22-3 se indica la frecuencia de En estudios post morten de pacientes con obstruc-
aparición de signos y síntomas en reacciones ción respiratoria se observa pulmón hiperinflado
anafilácticas. La serie comprende diversos estu- y edema de las vías aéreas, la obstrucción de la
dios incluyendo 747 pacientes con episodios vía aérea se debe a una combinación de espasmo
anafilácticos de diferente origen y a pesar de la muscular edema de la submucosa, y acumulación
diversidad de agentes causales, la frecuencia de de secreciones en el lumen. También se observa
signos y síntomas son similares, indicando que el infiltración celular especialmente de eosinófilos
mecanismo fisiopatológico es el mismo. La urti- en vasos pulmonares, en la lámina propia del
Tabla 22-3. Signos y síntomas en reacciones anafilácticas
Signos y síntomas Frecuencia (%)
Urticaria, Angioedema 88
Disnea, Sibilancias 47
Mareos, Hipotensión 33
Náuseas, Vómitos, Diarrea, Dolor abdominal 30
Enrojecimiento 46
Edema vía aérea alta 56
Dolor de cabeza 15
Rinitis 16
Dolor retroesternal 6
396
Sin título-2 396 5/26/06, 10:26 AM

tracto gastrointestinal. Cuando predomina el co- picaduras de insecto (abejas), alimentos etc.
lapso vascular es posible encontrar signos de 2. Cuando es factible realizar IgE específica para
isquemia miocárdica. Individuos que han muerto antígeno sospechoso.
por una reacción anafiláctica bien documentada 3. Evitar el alergeno incluyendo aquellos que ten-
se ha demostrado niveles altos de triptasa. Es po- gan reactividad cruzada.
sible obtener IgE específica y niveles de triptasa 4. Si se identifica el alergeno causal de reacciones
en suero de cadáveres hasta 15 horas post morten, anafilácticas, se debe usar identificación (braza-
esto permitiría en casos de muerte súbita, deter- lete, medalla) que lo señale.
minar si ésta ha ocurrido por una reacción 5. Enseñar al paciente a usar epinefrina inyectable
anafiláctica. para una emergencia (picadura de abeja).
6. Pacientes en riesgo deben evitar ser tratados con
7. LABORATORIO beta bloqueadores, inhibidores de la enzima
convertidora de angiotensina, y de la angiotensina
El diagnóstico de anafilaxis es clínico. Sin II e inhibidores de la monoamino-oxidasa. Estas
embargo en algunas circunstancias cuando éste no drogas disminuyen la efectividad de la epinefrina,
es claro o se debe descartar otros diagnósticos, pue- e interfieren con la respuesta endógena
de ser de utilidad la cuantificación de los niveles compensatoria de la hipotensión.
de histamina y de triptasa sérica y de histamina
en orina, ya que indica que ha habido descarga de Tratamiento del episodio agudo
mediadores de mastocitos. La histamina
plasmática se eleva a los 5-10 minutos y perma- El tratamiento del episodio agudo debe comen-
nece elevada 30-60 minutos. No ayuda si el pa- zar en el sitio donde ocurre, de inmediato acudir
ciente es visto después de una hora de ocurrida la a un servicio de urgencia, y si no cede hospitali-
reacción. En este caso se puede cuantificar zar al paciente.
histamina o sus metabolitos en orina los que per- Es importante una rápida evaluación del paciente,
manecen elevados por más tiempo. Los niveles ver la permeabilidad de la vía aérea, estado de
de triptasa sérica aumentan entre una a una hora y conciencia, medición de presión arterial y pulso.
media de ocurrido la reacción y permanecen ele- Si no presenta obstrucción bronquial, colocar al
vados por alrededor de cinco horas. En algunas paciente en posición supina y levantar los pies. Si
ocasiones es posible determinar el agente causal, la reacción anafiláctica fue por una inyección co-
especialmente cuando se trata de alimentos, me- locar torniquete en la zona proximal al sitio de
dicamentos o látex mediante la presencia de IgE inyección y remover cada 5 minutos mientras se
específica contra el antígeno sospechoso. Hay que realiza la terapia.
considerar que la sospecha diagnóstica del agente
etiológico se realiza mediante una detallada y Tratamiento inmediato:
acuciosa anamnesis y el laboratorio sirve para
confirmar la sospecha. En alrededor de dos ter- 1. Epinefrina: dosis y vía según gravedad
cios de los casos de anafilaxis se desconoce el Según evaluación
agente causal. 2. Oxígeno
3. Antagonistas H1y H2
4. Corticoides
8. TRATAMIENTO 5. Broncodilatadores
6. Vasopresores
En el tratamiento de la anafilaxis hay que 7. Infusión de líquidos endovenosos
considerar dos aspectos: a) el tratamiento preven-
tivo para reducir la incidencia de reacciones Estas últimas medidas deben ser administra-
anafilácticas y anafilactoídeas y b) el tratamiento das en unidad de cuidados intensivos.
del episodio agudo. Es posible que la anafilaxis ocurra en episo-
dios bifásicos, por lo que el paciente debe ser ob-
Medidas para reducir la incidencia de anafi- servado por lo menos 2 horas si el episodio agudo
laxia: ha sido leve y al menos 24 horas si ha requerido
hospitalización.
1. Anamnesis detallada de alergia a drogas, látex,
397
Sin título-2 397 5/26/06, 10:26 AM

LECTURAS SUGERIDAS
Gordon J.R., Burd, P.R., Galli, S.J., “Mast cells as

a source of mutifunctional cytokines”, Immunol
Today, 11: 458-464, 1990.
Lieberman, P., “Anaphylaxis and anaphylactoid

reactions” in Middeleton Jr., E., Reed, C.E., Ellis,
E.F., Adkinson Jr., N.F., Yunginger, J.W., Busse
W.W. editors, Allergy: principles and practice,
5 ed., St Louis Mo, Mosby, p. 1079, 1998.
Songzhu, An, Goetzl, E.J., “Lipid mediators of

hypersensitivity and inflammation” in Middeleton,
Jr. E., Reed, C.E., Ellis, E.F., Adkinson Jr. N.F.,
Yunginger, J.W., Busse W.W. editors, Allergy:
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Stevens, R.L., Austen, K.F., “Recente advances

in the cellular and molecular biology of mast
cells”, Immunol Today, 10: 381-386, 1998.
Terr, A.I., “Anaphylaxis and Urticaria” in Stites,

D.P., Terr, A.I. editors, Basic and Clinical
Immunology, 7 ed., Singapur, Lange Medical
Publication, p. 400, 1991.
398
Sin título-2 398 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 23
AUTOINMUNIDAD
Ana María Agar M. y María Angélica Marinovic M.
1. Introducción
2. Formas clínicas y características comu-
nes
3. HLA y enfermedades autoinmunes
4. Patogenia de las enfermedades
autoinmunes
5. Autotolerancia
5.1. Falla de la tolerancia central del lin-
focito T
5.2. Falla de la tolerancia periférica del
linfocito T
5.3. Falla de la tolerancia del linfocito B
6. Citoquinas y enfermedades autoin-
munes
7. Nuevos tratamientos
399
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400
Sin título-2 400 5/26/06, 10:26 AM

RESUMEN
Una de las propiedades fundamentales del sistema inmune radica en la capacidad de discri-
minar entre antígenos propios y no propios. Es así, como los linfocitos maduros funcionalmente
competentes son capaces de reconocer y responder a antígenos extraños, pero no pueden recono-
cer y/o responder a antígenos propios. A través de mecanismos de autotolerancia se impide la
respuesta contra estructuras propias.
Cuando se pierde esta autotolerancia se producen reacciones inmunes contra los antígenos
propios, reacciones denominadas de autoinmunidad y las patologías que ellas causan se denomi-
nan enfermedades autoinmunes.
Las enfermedades autoinmunes se caracterizan por la producción de anticuerpos y/o célu-
las T efectoras inmunes que son autorreactivas. Dado que las respuestas de células B en humanos
requiere de células T inductoras, la producción de autoanticuerpos implica un desorden del con-
trol inmunorregulatorio de las células T. Existen varios factores asociados a la aparición de una
enfermedad autoinmune, entre ellas la herencia juega un rol importante en el desarrollo de la
autoinmunidad. Sin embargo, los patrones hereditarios de estas enfermedades son, a menudo,
complejos. En la actualidad las bases genéticas de la autoinmunidad están enfocadas en los genes
del Complejo Principal de Histocompatibilidad.
Se ha evidenciado la participación de diversas citoquinas dentro de los mecanismos efectores
involucrados en las enfermedades autoinmunes. La inmunomodulación de estas sustancias ten-
dría importancia en la intervención terapéutica de ellas.
1. INTRODUCCIÓN las efectoras inmunes que son autorreactivas. Dado

que las respuestas de células B en humanos re-
Una de las propiedades fundamentales del sis- quieren de células T inductoras, la producción de
tema inmune, radica en la capacidad de discrimi- autoanticuerpos implica un desorden del control
nar entre antígenos propios y no propios. Es así, inmunorregulatorio de las células T.
como los linfocitos maduros funcionalmente com- La presencia de autoanticuerpos no es
petentes son capaces de reconocer y responder a indicadora de enfermedad autoinmunitaria, es así
antígenos extraños, pero no pueden reconocer y/o como títulos bajos de autoanticuerpos contra cier-
responder a antígenos propios. tas estructuras es un hecho, incluso, fisiológico.
El sistema inmune posee una enorme diver-
sidad, y el repertorio de especificidades antigénicas
expresadas por las poblaciones de células T y B 2. FORMAS CLÍNICAS Y CARACTERÍSTI-
incluyen muchas dirigidas contra autocompo- CAS COMUNES
nentes, sin embargo a través de mecanismos de
autotolerancia (no respuesta del sistema inmune a Las enfermedades asociadas con el fenóme-
los antígenos propios) no se producen reacciones no autoinmune tienden a distribuirse en un espec-
autoinmunes. tro que va desde las enfermedades órgano especí-
Cuando se pierde esta autotolerancia se pro- ficas, como la Tiroiditis de Hashimoto, en las cua-
ducen reacciones inmunes contra los antígenos les los anticuerpos y las lesiones destructivas es-
propios, reacciones denominadas de autoinmu- tán orientadas sólo contra un órgano del cuerpo,
nidad y las patologías que ellas causan se deno- mientras en el otro polo se encuentra como ejemplo
minan enfermedades autoinmunes. tipo, el Lupus eritematoso sistémico (LES), en el cual
Las enfermedades autoinmunes se caracteri- los anticuerpos están dirigidos contra antígenos am-
zan por la producción de anticuerpos y/o de célu- pliamente distribuidos en el organismo y las lesio-
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nes características de la enfermedad son también fermedades autoinmunes humanas se pueden
ampliamente diseminadas (tabla 23-1). reproducir en animales de experimentación,
Una serie de características en relación al si bien los métodos de inducción varían para
antígeno, tipo de lesiones y sobreposición con cada una de ellas.
otras enfermedades caracterizan a las enfermeda-
b) Edad: su aparición es mucho más frecuente
des órgano específicas y órgano inespecíficas (ta-
en las personas adultas, existiendo una co-
bla 23-2).
rrelación positiva entre la edad y la frecuen-
A pesar de que puedan afectar diversos órganos y
cia de estas enfermedades. Es muy común
además en forma muy distinta, las enfermedades
también encontrar autoanticuerpos no
autoinmunes poseen características comunes, en-
patogénicos en personas de edad avanzada.
tre las que figuran:
Un 5% de mujeres de más de 50 años poseen
títulos bajos a anticuerpos antinucleares.
a) Inducción experimental: la mayoría de las en-
c) Sexo: son más frecuentes en las mujeres. Así
ocurre con la artritis reumatoidea, el LES, la
Tabla 23-1. Espectro de enfermedades miastenia gravis, la hepatitis crónica activa,
autoinmunes la cirrosis biliar primaria y muchas otras. En
los animales de experimentación se ha ob-
servado la existencia de una relación entre
Órgano Enfermedad autoinmune el nivel de estrógenos y presencia e intensi-
específicas Tiroiditis de Hashimoto dad de procesos autoinmunes.
Mixedema primario d) Factores genéticos: existe una clara predis-
Tirotoxicosis posición familiar a sufrir estas enfermeda-
Anemia Perniciosa des. Es frecuente observar la presencia de
Gastritis atrófica autoinmune diversos procesos autoinmunes en distintos
Enfermedad de Addison miembros de una misma familia.
Menopausia prematura(*)
Diabetes juvenil e) Patología linfocitaria: las enfermedades pri-
Síndrome de Goopasture marias del sistema inmunológico se acom-
Miastenia Gravis pañan con frecuencia de procesos
Infertilidad masculina(*) autoinmunes. De esta manera, por ejemplo,
Pénfigo vulgar se observa la aparición de anemias
Penfigoide hemolíticas autoinmunes en la leucemia
Oftalmia del Simpático linfática crónica.
Uveitis Facogénica f) Factores ambientales: las infecciones virales
Esclerosis Múltiple y bacterianas se asocian con autoinmunidad,
Anemia hemolítica autoinmune y los períodos pre-infecciosos, a menudo,
Púrpura trombocitopénico inmune preceden las manifestaciones clínicas de en-
Leucopenia idiopática fermedad autoinmune. En la mayoría de es-
Cirrosis biliar primaria tos casos, el microorganismo no está presente
Hepatitis crónica activa con AgHBs en las lesiones y no es detectable en el indi-
Cirrosis criptogénica(*) viduo cuando la autoinmunidad se desarro-
Colitis ulcerosa lla. Es así como, las lesiones por
Síndrome de Sjogren autoinmunidad no se deben al agente infec-
Artritis reumatoidea cioso mismo, sino son producto de la res-
Dermatomiositis puesta inmune del huésped que pueden ser
Esclerodermia gatilladas o disreguladas por el microbio.
Lupus eritematoso discoide Entre los muchos posibles efectos de las in-
Órgano Lupus eritematoso sistémico fecciones se encuentran la activación
inespecíficas policlonal de linfocitos, la inflamación
tisular local que lleva a un aumento en la
expresión de coestimuladores, la alteración
(*) algunos casos de autoantígenos creando neoantígenos que,
402
Sin título-2 402 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 23-2. Comparación entre las enfermedades órgano específicas y las órgano inespecíficas
Enf. Órgano específicas Enf. Órgano inespecíficas
Antígeno Especialmente localizado Ampliamente

al órgano dado distribuido en el
organismo
Lesiones El antígeno en el órgano es Los complejos se
blanco para el ataque depositan en forma
inmunológico sistémica
particularmente en
piel, riñón y articulaciones
Sobreposición Con otras enfermedades Con otras enfermedades
órgano específicas órgano inespecíficas
parcialmente, presentan reacciones cruzadas desarrollo de la autoinmunidad. Sin

y daño tisular que lleva a la liberación de embargo los patrones hereditarios de estas en-
antígenos anatómicamente secuestrados. fermedades son, a menudo, complejos.
En la actualidad las bases genéticas de la
g) Alteraciones anatómicas en los tejidos: tales
autoinmunidad están enfocadas en los genes del
como inflamación o trauma pueden llevar a
Complejo Principal de Histocompatibilidad
la exposición de autoantígenos que habitual-
(MHC, HLA en humanos).
mente no están expuestos al sistema inmune.
El estudio de los HLA en grandes grupos de
Tales antígenos secuestrados no habrían in-
pacientes con varias enfermedades autoinmunes
ducido autotolerancia. Al liberarse estos
ha mostrado que algunos alelos de HLA aparecen
autoantígenos, pueden interactuar con
con una mayor frecuencia en estos pacientes que
linfocitos inmunocompetentes e inducir res-
en la población general. A partir de estos estudios
puestas inmunes específicas. Entre los
ha sido posible determinar el riesgo relativo de de-
antígenos anatómicamente secuestrados se
sarrollar una enfermedad en individuos portadores
encuentran las proteínas intraoculares y el
de varios alelos de HLA (tabla 23-3). La asocia-
semen. La uveitis pos-traumática y la orquitis
ción más fuerte se encuentra entre la Espondilitis
post-vasectomía, se cree que se deben a res-
anquilosante, una enfermedad inflamatoria y
puestas autoinmunes contra autoantígenos que
presumiblemente autoinmune de las articulaciones
son liberados de su localización normal.
vertebrales, con el alelo B27 de los HLA clase I.
Los individuos HLA B27 positivos tienen entre 90-
La inflamación tisular puede también produ-
100 veces más posibilidades de desarrollar la
cir alteraciones estructurales en autoantígenos y
Espondilitis anquilosante que los individuos que
la formación de nuevos determinantes capaces de
carecen del antígeno B27. Se desconocen los
inducir reacciones autoinmunes. La inflamación
mecanismos de esta enfermedad y las bases de la
puede llevar a la activación macrofágica por
asociación con el haplotipo señalado.
citoquinas de producción local, y estas citoquinas
Recientemente la investigación en enferme-
estimulan la expresión de coestimuladores cuyo
dades autoinmunes se ha enfocado fundamental-
resultado final puede ser la pérdida de la toleran-
mente hacia los loci pleomórficos de HLA DR y
cia periférica.
HLA DQ (moléculas clase II). Esto debido a la
participación de las moléculas MHC clase II en la
selección y activación de las células T CD4+ , y
3. HLA Y ENFERMEDADES AUTOIN-
en consideración de que las células T CD4+ regu-
MUNES
lan tanto las respuestas humorales como celulares
a antígenos proteicos.
La herencia juega un rol importante en el
403
Sin título-2 403 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 23-3. Ejemplos de enfermedades inmunológicas ligadas a HLA
Enfermedad Alelo HLA Riesgo relativo*
Artritis reumatoidea DR4 6

Pénfigo vulgar DR4 24
Hepatitis crónica activa DR3 14
Sindrome Sjogren DR3 10
Enfermedad celíaca DR3 12
Espondilitis anquilosante B27 90
* Posibilidad de desarrollar una enfermedad en individuos con un alelo particular en comparación con
individuos que carecen de ese alelo.
4. PATOGENIA DE LAS ENFERMEDADES puedan ser más probables.

AUTOINMUNES En condiciones normales el sistema
inmunitario del huésped reúne una doble condi-
Existe un gran número de vías por las cuales ción: a) desarrolla respuestas inmunitarias con
se puede iniciar una reacción autoinmune. Sin un repertorio de especificidades tan amplio como
embargo para la mayoría de las enfermedades la gran diversidad de sustancias extrañas a él y b)
autoinmunes existe un evento crítico común que mantiene un estado de tolerancia para los compo-
es la activación de linfocitos T autorreactivos, los nentes propios (autotolerancia) o un grado de res-
cuales promueven distintos mecanismos efectores puesta imperceptible clínicamente.
responsables del daño (figura 23-1). Esta doble y contradictoria condición es un
En la mayoría de las enfermedades rasgo esencial del sistema inmunitario para que
autoinmunes existe una mezcla de las clásicas res- pueda actuar como un mecanismo clave en el man-
puestas Th1 y Th2 en diversa proporción. Las tenimiento de la integridad del huésped. Cuando
subpoblaciones Th1 favorecen la respuesta inmu- se quiebra la autotolerancia ocurre autoinmunidad.
ne celular, la característica patogénica más pro-
minente de las enfermedades órgano específicas
(tiroiditis, diabetes mellitus insulinodependiente), 5. AUTOTOLERANCIA
con activación de macrófagos, linfocitos T
citotóxicos y producción de citoquinas como TNF En el año 1949 Burnett propuso la teoría de
alfa y beta. la selección clonal para explicar la autoinmunidad,
En cambio las subpoblaciones Th2 favore- él postulaba que los clones de linfocitos
cen una respuesta humoral, característica de las autorreactivos eran eliminados o delecionados
enfermedades órgano inespecíficas (LES), en las durante su desarrollo para prevenir las reacciones
cuales hay un efecto directo de los autoanticuerpos autoinmunes. Actualmente sabemos que esto es
sobre la célula blanco, inducido por lisis mediada parcialmente correcto.
por complemento, fagocitosis, formación y depó- La autoinmunidad resulta de la falla de los
sito de complejos inmunes, y en menor medida mecanismos normalmente responsables de man-
citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. tener la autotolerancia.
Además existe un número de enfermedades La autoinmunidad puede resultar de altera-
autoinmunes mediadas por anticuerpos contra ciones primarias de linfocitos T, B o ambos. Ac-
receptores de superficie celular, los cuales causan tualmente se le da un rol protagónico al linfocito
exceso de actividad o inhibición de la función del T por 2 razones principales: (a) el linfocito T
receptor. “helper” es el regulador de todas las respuestas
Se desconoce los mecanismos etiológicos de inmunes a proteínas. (b) muchas enfermedades
las enfermedades autoinmunitarias, tampoco existe autoinmunes están genéticamente asociadas o uni-
una opinión unánime en relación a las causas que das al MHC, y la función de las moléculas MHC
404
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Figura 23-1. Mecanismos iniciadores y efectores de autoinmunidad. Los linfocitos T CD4 autorrectivos que han escapado de
la selección negativa en el timo, pueden ser activados por diversos mecanismos. Estos linfocitos T a través de mecanismos efectores
producirán citoquinas del tipo Th1 o Th2, lo cual se traducirá ya sea en la producción de una respuesta inmune mediada por células
o la formación de autoanticuerpos.
es presentar péptidos antigénicos a la célula T. Por LT y reacción autoinmune tejido específica, (b)
lo tanto se cree que la falla de la autotolerancia de anergia del LT puede fallar debido a defectos en
linfocitos T es un mecanismo importante de en- las moléculas que normalmente inactivan estas
fermedad autoinmune . células, (c) mutaciones que interfieren con los
mecanismos de apoptosis de linfocitos maduros,
5.1. Falla de la tolerancia central del linfocito puede resultar en enfermedades autoinmunes, por
T. La tolerancia central es el mecanismo de selec- ejemplo: mutaciones del ligando Fas, (d) defectos
ción negativa de los linfocitos T inmaduros en la supresión mediada por LT: se ha postulado
autorreactivos que deleciona células que poseen que algunos autoantígenos normalmente inducen
receptores de alta afinidad para autoantígenos. LT reguladores que producen citoquinas
inmunosupresoras que funcionan manteniendo la
5.2. Falla de la tolerancia periférica del linfo- autotolerancia, lo cual se puede perder.
cito T. La tolerancia periférica en linfocitos T
maduros autorreactivos es mantenida por anergia, 5.3. Falla de la tolerancia del linfocito B: Se cree
deleción por apoptosis, supresión por células que muchas enfermedades autoinmunes causadas
reguladoras. La autoinmunidad que resulta de la por autoanticuerpos son debidas a falla en la tole-
falla de cada uno de estos mecanismos ha sido rancia del linfocito B. Exposición de linfocitos B
demostrada en distintos estudios experimentales: a activadores policlonales como lipopolisacáridos,
(a) expresión aberrante de coestimuladores en te- pueden activar un gran número de estas células,
jidos puede resultar en quiebre de la anergia del incluyendo algunas que son específicas para
405
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autoantígenos. Debe destacarse que en individuos determinado patógeno, dando lugar a una fuerte
normales, la falla para producir autoanticuerpos respuesta de anticuerpos cuyo idiotipo estimule
contra antígenos propios puede deberse a deleción la producción de anti-idiotipos que tengan reac-
o anergia de LT colaboradores y no a tolerancia ción cruzada con autoantígenos.
de linfocitos B. En estos casos, defectos en la
c) Activación de las células B mediante ciertas
mantención de tolerancia del LT puede resultar en
sustancias, activadores policlonales de células B,
producción de autoanticuerpos. Este mecanismo
capaces de activar inespecíficamente a los
sería importante en la patogenia de varias enfer-
linfocitos B sin necesidad de colaboración de los
medades mediadas por anticuerpos, como por
linfocitos T. En estos casos se produciría una res-
ejemplo: miastenia gravis o enfermedad de Gra-
puesta pluriespecífica dirigida contra muchas sus-
ves.
tancias, entre las cuales se encontrarían las pro-
Los antígenos propios pueden considerarse
pias. Los lipopolisacáridos y endotoxinas se en-
como antígenos T dependiente. Considerando a
cuentran entre los activadores policlonales de cé-
los antígenos T dependientes como conjuntos
lulas B más importantes.
hapteno-portador y que los linfocitos B recono-
cen a la parte hapténica, mientras que los linfocitos d) Inducción de respuestas autoinmunitarias es es-
T cooperadores reconocen al portador, la ruptura pecialmente aplicable a las endocrinopatías. Según
de la autotolerancia puede deberse a diferentes esta hipótesis los linfocitos T “helper” no se ha-
mecanismos: brían hecho tolerantes frente a estructuras muy
concretas y selectivas de ciertas células, como por
a) Mecanismo de "bypass" de las células T cola- ejemplo proteínas y receptores presentes en la
boradoras tolerantes para el portador de los membrana, y el hecho de que normalmente no exis-
autoantígenos. Esta situación puede alcanzarse a tiera una respuesta de anticuerpos sería debido a
través de varias vías: que estas células no expresan moléculas clase II,
por lo tanto, los linfocitos T colaboradores no pue-
• Reacción cruzada de una sustancia extraña con den reconocer a estas estructuras, no ayudando así
un antígeno propio de forma que el hapteno a los linfocitos B a producir anticuerpos contra ellas.
de ésta y el del extraño se parezcan, siendo Si estas estructuras en un momento dado ex-
reconocido por los linfocitos B dirigidos con- presan moléculas clase II, entonces podrían pre-
tra el antígeno propio, mientras el portador del sentar adecuadamente estos antígenos de la mem-
antígeno extraño será reconocido por otros brana a los linfocitos T colaboradores que ayuda-
linfocitos T cooperadores no tolerados, que se rían a los linfocitos B a producir anticuerpos. La
activarán y ayudarán a los B a producir expresión ectópica de las moléculas clase II en
anticuerpos contra el antígeno propio. células que normalmente no la expresan puede ser
inducida por linfoquinas como los interferones
• Drogas o fármacos se podrían unir a la parte
(IFNs) y factor de necrosis tumoral (TNF). Es pro-
portador de un antígeno propio, formándose
bable que ello no sea una condición suficiente, ya
un neo-antígeno que será reconocido por cé-
que se ha visto expresión ectópica de moléculas
lulas T colaboradoras que ayudarán a las cé-
clase II, sin que exista una respuesta
lulas B específicas para el hapteno del
autoinmunitaria contra ellas, probablemente sea
antígeno propio a producir anticuerpos con-
además necesario que los autoantígenos DR (o
tra éste, llegándose a una situación similar a
moléculas clase II) sean de un determinado tipo.
la anterior.
• Una droga o un virus, se podrían unir a la
molécula presente en la membrana de una 6. CITOQUINAS Y ENFERMEDADES
célula, si ésta posee moléculas clase II lo pre- AUTOINMUNES
sentará a los linfocitos T colaboradores y és-
tos ayudarán a linfocitos B específicos para Las citoquinas son mediadores proteicos
un autoantígeno (presente en la membrana involucrados en virtualmente, todos los procesos
de esta célula) a producir autoanticuerpos biológicos: inmunidad, inflamación, diferenciación
contra el mismo. y proliferación celular. Debido a su importancia en
inmunidad e inflamación no es sorprendente que
b) Estimulación persistente del huésped por un estén involucrados en las enfermedades
406
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autoinmunes. En el mecanismo de producción de de que el TNF es la citoquina central de la artritis
las enfermedades autoinmunes se pueden distinguir reumatoidea. Estos hallazgos sugieren que las
3 compartimientos: un aspecto inicial de inducción, reacciones Th1 predominan en la sinovitis
la patogénesis y perpetuación (figura 23-2). reumatoidea, lo cual apoyaría el concepto de un
Figura 23-2. Mecanismos de producción de las enfermedades autoinmunes.
En relación al rol de las citoquinas en la in- desbalance entre las células Th1 y Th2 , y puesto
ducción de enfermedades autoinmunes, las mo- que las citoquinas Th2 ejercen un efecto anti-in-
léculas mas íntimamente involucradas son los IFN. flamatorio La predominancia de las células Th1
Entre los interferones destaca el IFNγ, el cual re- podría indicar su importancia pro-inflamatoria.
gula la presentación antigénica y la expresión de Todas estas investigaciones han permitido di-
HLA clase II, características necesarias para la señar estrategias terapéuticas dirigidas contra
inducción inmune. citoquinas pro-inflamatorias (IL-1 y TNF-α) uti-
Ensayos terapéuticos con IFN alfa en pacien- lizando anticuerpos monoclonales.
tes con cáncer, mostraron que la infusión de altas
dosis de IFN induce tiroiditis autoinmune. Resul-
tados similares han sido reportados para la infu- 7. NUEVOS TRATAMIENTOS
sión de IL-2, pero con una menor frecuencia.
Un segundo aspecto en el cual las citoquinas Como regla general el tratamiento de las en-
son de importancia en las enfermedades fermedades autoinmunes está enfocado hacia dos
autoinmunes, es en la fase efectora de la enferme- objetivos, el primero es restablecer la función per-
dad. En líquido sinovial de pacientes con artritis dida, como por ejemplo la tiroiditis crónica con la
reumatoidea se han encontrado prácticamente to- administración de hormona tiroidea. El segundo
das las citoquinas (TNFα, IL-1, IL-6, IL-8, GM- objetivo de la terapia es disminuir la respuesta
CSF y TGF-β) lo cual no es sorprendente dado autoinmune patológica con el fin de deprimir la
que el tejido consiste en células T activadas, respuesta inmune en general, es así como se em-
macrófagos, fibroblastos y endotelio. Sin embar- plean antimetabolitos, corticoesteroides y drogas
go, al estudiar la regulación de la producción de anti-inflamatorias las cuales son útiles en desór-
citoquinas en las células sinoviales se observó que denes complejos, como LES y otras enfermeda-
el TNF- alfa era la señal regulatoria principal de des del tejido conectivo.
IL-1 a nivel articular, llevando al concepto actual Sin embargo esta terapia presenta efectos co-
407
Sin título-2 407 5/26/06, 10:26 AM

laterales y el riesgo de efectuar una inmuno- LECTURAS SUGERIDAS
supresión excesiva. Basado en los mecanismos
descritos, nuevos métodos de terapia más especí- Abbas A., Cellular and Molecular Immunology,
ficos pueden esperarse en el futuro. 4ta Edición, Capítulo 10, pp. 208-230; Capítulo18,
pp. 416-423, WB Saunders, , 2000.
Vacunas de células T. Experimentos en animales
sugieren que clones inactivados de células T Janeway, Ch., Travers, P., Walport, M.,
autorreactivas pudieran ser utilizadas como "va- Immunobiology The Immune System in Health
cunas" preventivas administrándolas al animal and Disease, 4ta Edición, Capítulo 6, pp. 209-211,
antes de que se genere una respuesta autoinmune. Capítulo 7, pp. 228-234; Capítulo 13, pp. 520-536,
1999.
Bloqueo de las moléculas MHC. Por otra parte
la activación de la célula T puede ser prevenida
Rose, N., “Autoimmune Diseases: Tracing the
bloqueando la unión del péptido autorreactivo a
Shared Threads”. Hospital Practice, Abril 15: pp.
la molécula MHC de la célula presentadora de
147-154, 1997.
antígeno. Péptidos competitivos que unen el MHC
pero fracasan en gatillar la proliferación de célu-
Theofilopoulos, A, “The basis of autoimmunity:
las T previniendo la respuesta inmune específica.
Part I”, Immunology Today, 16(2): 90-97, 1995.
Bloqueo coestimulatorio. Con el fin de efectuar
la activación, la célula T no sólo debe reconocer Theofilopoulos, A., “The basis of autoimmunity:
su determinante antigénico correspondiente a tra- Part II”, Immunology Today, 16(3): 150-57, 1995.
vés de su TCR, sino que también debe recibir se-
ñales estimulatorias a través de co-receptores o
mediadores solubles. Si las señales co-
estimulatorias no son recibidas, la célula T se hace
inactiva o anérgica. Es así como el bloqueo de
señales co-estimulatorias parece otra alternativa
para obviar la respuesta autoinmune.
Cambio en balance Th1-Th2. Una cuarta posi-
bilidad de tratar enfermedades autoinmunes, es
cambiar el balance de células Th1 y Th2. La ad-
ministración de citoquinas particulares o
inhibidores de citoquinas tendrían este efecto.
Tolerancia oral. Los antígenos administrados
oralmente pueden inducir un estado de no respues-
ta. La inducción de tolerancia oral está bajo in-
vestigación clínica para el tratamiento de varias
enfermedades incluyendo la esclerosis múltiple,
artritis reumatoide, diabetes mellitus y uveitis.
Terapia génica. Actualmente se están diseñando
estrategias de tratamiento en que se utiliza terapia
génica.
Cada uno de los enfoques terapéuticos des-

critos tiene ventajas y desventajas. El objetivo fi-
nal a largo plazo es suprimir la respuesta
autoinmune patogénica sin disminuir la inmuni-
dad protectora contra patógenos.
408
Sin título-2 408 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 24
ENFERMEDADES REUMÁTICAS
Sergio Jacobelli G. y Santiago Rivero D.
1. Introducción
2. Artritis Reumatoídea
2.1. Patogenia
2.1.1. Genética
2.1.2. Infecciones
2.1.3. Autoinmunidad
2.2. Clínica y tratamiento
3. Lupus eritematoso sistémico
3.1. Etiopatogenia
3.1.1. Factores genéticos
3.1.2. Factores ambientales
3.1.3. Disregulación del sistema
inmune
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Sin título-2 409 5/26/06, 10:26 AM

410
Sin título-2 410 5/26/06, 10:26 AM

RESUMEN
En los últimos años se han registrado importantes avances en la comprensión de la respuesta

inmune y de algunos mecanismos operacionales en la autoinmunidad. Esto ha sido especialmente
relevante en la relación entre inflamación y respuesta inmune. En efecto, la descripción de las
redes de citoquinas involucradas en la respuesta inmune, ha permitido diseñar ahora, tratamientos
altamente específicos para la Artritis Reumatoídea con resultados sorprendentes y alentadores
para muchos enfermos. Sin embargo, estos tratamientos sólo detienen la enfermedad, la que
reaparece al suspenderlos. Tanto para el Lupus como para la Artritis, necesitamos aún otro nivel
de comprensión, que nos indique los antígenos iniciales y los mecanismos de control sobre los
que pudiéramos actuar para prevenir el daño tisular y el desarrollo de la enfermedad.
1. INTRODUCCIÓN un sólo enfermo, lo que no tiene una explicación

adecuada.
La autoinmunidad sistémica se refiere a En general estos enfermos, a pesar de tener
enfermedades autoinmunes en las cuales la un aumento en la producción de autoanticuerpos,
autorreactividad, no está circunscrita a un sólo no responden tan normalmente a antígenos
órgano o tejido. Esta definición incluye enfer- exógenos, de ahí que los pacientes con Lupus y
medades como la Artritis Reumatoídea y el Lu- con Artritis Reumatoídea, sufren con mayor
pus Eritematoso Sistémico. Sin embargo no es fácil frecuencia de infecciones que los controles, lo que
presentar una definición satisfactoria, porque la se acentúa con los tratamientos que reciben. La
demostración que la causa de la enfermedad es infección por inmunosupresión terapéutica es un
autoinmune es difícil, ya que requiere la lamentable efecto secundario de los tratamientos
replicación de la enfermedad por transferencia de más comunmente usados en estas afecciones.
anticuerpos o células, datos que son difíciles de
generar. De este modo, la inferencia que una
enfermedad es autoinmune, se hace por el hallazgo 2. ARTRITIS REUMATOÍDEA
de autoanticuerpos, complemento y linfocitos T
en las lesiones tisulares. La Artritis Reumatoídea (AR) es una enfer-
Estas enfermedades tienen algunas medad crónica, sistémica, cuya expresión clínica
características comunes, que de algún modo más importante es articular, lo que lleva a grados
tendrán que ser explicadas al dilucidar su variables de invalidez. Es la forma más común de
patogenia. La primera, es su curso tan variable artropatía inflamatoria, con una prevalencia esti-
entre uno y otro enfermo, marcado por exacerba- mada en Chile de 0,5% de la población adulta,
ciones y remisiones, a veces sin mediar trata- afectando más frecuentemente a mujeres, con una
miento. Esto podría implicar potentes mecanismos proporción estimada de 3 a 4 es a 1. Desde el pun-
de control para regular la respuesta autoinmune. to de vista patológico, el sitio primario de activa-
La segunda es la susceptibilidad aumentada ción inmune está en la articulación. Los aspectos
del sexo femenino, hecho que se observa aún en más característicos son la infiltración celular de
los modelos animales experimentales. La la membrana sinovial con mononucleares, espe-
influencia hormonal en la respuesta inmune no está cialmente linfocitos T y macrófagos y la
suficientemente aclarada. Una tercera hiperplasia de las células de la íntima de la mem-
característica sorprendente, es la presentación brana sinovial.
ocasional de la sobreposición de manifestaciones Aunque la etiología de la AR es aún desco-
clínicas de varias enfermedades autoinmunes en nocida, parece cada vez más evidente que su
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Sin título-2 411 5/26/06, 10:26 AM

patogenia se caracteriza por la acción concertada de los controles. La descripción de subtipos de
de distintos tipos celulares, que a través de dife- DR4 permitió plantear una hipótesis general so-
rentes cascadas de señales, interactúan entre sí y bre esta asociación. Los genes DRB1*0401,
finalmente llevan a la destrucción de la articula- DRB1*0404 y DRB1*0405 codifican los subtipos
ción. Si bien se considera a la AR una enfermedad DR4 Dw4, Dw14 y Dw15 respectivamente, que
articular, es importante señalar que también tiene se asocian con AR en poblaciones caucásica y ja-
una gran cantidad de manifestaciones extraar- ponesa, en tanto que en ciertas poblaciones nati-
ticulares, lo que pone de manifiesto su carácter vas norteamericanas y en israelíes, la asociación
sistémico capaz de producir daño en distintos ór- se encontró con genes que codificaban HLA que
ganos mayores. En realidad, uno de los misterios no eran DR4 sino DR6 (DRB1*1402) o DR1
de esta enfermedad, es por qué la membrana (DRB1*0101) Nomenclatura HLA, ver capítulo
sinovial es el principal órgano blanco. Parece cla- 41. Al conocerse la secuencia de aminoácidos (aa)
ve para entender estos hechos, la comprensión del y la estructura tridimensional de las moléculas del
artrotropismo de los antígenos y de las células MHC, se pudo precisar que cada alelo DRB1 aso-
inflamatorias y el papel que juegan receptores es- ciado con susceptibilidad a la AR porta la secuen-
pecíficos y gradientes quimiotácticas para locali- cia QKRAA o QRRAA del aminoácido 69 a 74
zar la inflamación en la articulación. de la cadena DRβ, en tanto que los alelos DR que
La idea que la AR es un proceso multifactorial no se asocian a la enfermedad tienen secuencias
que requiere una combinación de factores diferentes en esta región. (Q, glutamina; K, lisina;
genéticos, ambientales e inmunológicos, ha ido R, arginina; A, alanina). Esta secuencia de 5 aa se
adquiriendo mayor aceptación, aunque el conoci- ha denominado el "epítopo compartido"(EC), des-
miento de la forma cómo estos factores se rela- tacando que la susceptibilidad para la AR estaría
cionan es aún incompleto. conferida por una pequeña "casete" de aa que se
encuentran en distintos DR y no sólo en el DR4.
2.1. Patogenia Al considerar este epítopo, algunos estudios lo
encuentran en hasta el 96% de los pacientes en
2.1.1. Genética algunas poblaciones, pero esto no es tan notorio
en otras, como griegos, pakistaníes y población
La existencia de una predisposición genética negra en Estados Unidos. En Chile un estudio en-
a la AR deriva, fundamentalmente, de la alta con- contró una prevalencia de este epítopo en 56% de
cordancia que se observa en gemelos univitelinos. los enfermos comparado con 34% en los contro-
La prevalencia de esta enfermedad es de alrede- les.
dor de 0,5-1% en la población general, siendo En los últimos años ha comenzado a ser
menor en algunas (0,1-0,3% en poblaciones chi- evidente que el EC podría ser más un marcador
na y africana) y mayor en otras (5% en indios Pima de gravedad de la enfermedad que de
en Estados Unidos). En gemelos univitelinos es- susceptibilidad. Un estudio demostró que los
tudiados en consultorios de la especialidad, la con- nódulos reumatoídeos, signo de gravedad, se
cordancia es de 30-50%, la que baja a 12% si se presentaron en el 100% de los pacientes que eran
estudian enfermos en la comunidad, no en ambien- homocigotos para el EC, en tanto que los enfermos
te hospitalario. En gemelos bivitelinos, la concor- que sólo tenían un alelo que codificaba para el EC
dancia es de 2-5%, similar a la de los parientes de tenían nódulos en el 59%. Al mismo tiempo, los
primer grado. Se ha estimado que alrededor de la enfermos que tenían doble dosis tenían
mitad de la predisposición genética reside en el compromiso de órganos mayores en el 61%
Complejo Principal de Histocompatibilidad comparado con 11% de los enfermos con un sólo
(MHC), estando el resto en otros loci que actual- alelo. Estudios chilenos también han encontrado
mente están siendo activamente investigados. Va- una asociación entre la aparición de erosiones
rios productos proteicos codificados por los genes óseas y la presencia del EC, especialmente en
del MHC son responsables de la presentación de doble dosis. Estos datos sugieren que hay una
péptidos antigénicos a los linfocitos T (LT). En la relación "dosis-efecto" de los genes MHC, lo que
década de los setenta, se describió la asociación implicaría que la mayor contribución de los genes
del HLA DR4 con la AR. En enfermos caucásicos del MHC a la AR es en la gravedad y no en la
con AR seropositiva se encontró que el 60-70% susceptibilidad. Esto no es aceptado universal-
eran HLA DR4 positivos comparado con el 30% mente, porque resultados de otros estudios
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Sin título-2 412 5/26/06, 10:26 AM

similares no han sido concluyentes, lo que se ha 2.1.2. Infecciones
atribuido a la inclusión de enfermos con AR leve
o transitoria y a variaciones relacionadas con el A pesar de los grandes esfuerzos realizados,
trasfondo étnico y racial. no existe aún evidencia convincente que demuestre
Es un hecho conocido que en las mujeres con una etiología infecciosa de la AR. Como el inicio
AR que tienen un embarazo en el curso de su de la AR no se agrupa en tiempo ni espacio, se ha
enfermedad, su artritis entra en remisión en alrededor planteado que un microorganismo ubicuo,
del 70% de los casos. Trabajos recientes han descrito posiblemente no patogénico, pudiera gatillar la AR
que a mayor disparidad materno-fetal de los alelos en una persona con el apropiado trasfondo
de clase II, DR y DQ, mayores son las posibilidades genético. Por otro lado, es posible que si existiera
de remisión, en tanto que la persistencia de la una infección, ésta pudiera agruparse en tiempo y
actividad artrítica a pesar del embarazo, se asoció espacio, pero no ser detectable por ser subclínica
con mayor identidad materno-fetal en estos alelos. requiriendo períodos variables de latencia antes
Esto sugiere que la mejoría de la AR que de la aparición de la inflamación articular. La idea
experimentan las mujeres con el embarazo se debe a prevalente es que la infección, si es importante
fenómenos inmunológicos específicos y no a una en la AR, no necesariamente debe estar presente
supresión inmunológica general del embarazo. en las articulaciones, sino que puede ser un
Hay una variedad de genes que se ubican en fenómeno inicial, que desencadena un proceso
el sitio del MHC, pero que no están directamente patológico, en un ambiente genético apropiado.
involucrados en la presentación de antígenos. Modelos animales de artritis han sugerido la
Estos genes que no son clase I ni clase II codifican posibilidad que agentes bacterianos tengan un
un grupo heterogéneo de proteínas que se llaman papel en la etiología o en la patogenia de esta
colectivamente MHC clase III. Polimorfismo enfermedad, aunque esto no ha podido ser
asociado con el gen del factor de necrosis tumoral comprobado fehacientemente en la enfermedad
α (TNF), con la proteína de "shock" térmico 70 y humana. El virus Epstein-Barr ha recibido espe-
con el componente C4 del sistema del cial atención, por ser un activador policlonal de
complemento, se han relacionado con la linfocitos B, por estar presente con mayor
susceptibilidad a la AR. Otros genes fuera del frecuencia en enfermos con AR que en controles
MHC han presentado cierto grado de asociación y por la homología de secuencias entre el EC y la
con la AR, como alotipos específicos de IgG y el glicoproteína Gp110 de este virus. Sin embargo,
gen del receptor de la quimioquina CCR5. los datos de prevalencia son circunstanciales y la
Recientemente ha habido un gran interés en la Gp110 es una de muchas xenoproteínas que
relación entre la AR y las alteraciones en el gen contiene la secuencia QKRAA. Así por ejemplo,
que codifica la lectina que une a la manosa (MBL). la proteína dnaj de la E. Coli, que es una proteína
En la actualidad debe considerarse como bacteriana de shock térmico, también tiene esta
preliminares todas las asociaciones genéticas con secuencia y pudiera representar una unión
la AR con excepción de la de los genes del MHC potencial entre las bacterias intestinales y la artritis
clase II. crónica.
Tabla 24-1. Posibles causas infecciosas de la artritis reumatoídea
Potencial Agente Infeccioso Mecanismo patogénico
Micoplasma Infección sinovial directa; superantígenos

Parvovirus B19 Infección sinovial directa
Retrovirus Infección sinovial directa
Bacterias entéricas Imitación molecular (QKRAA)
Mycobacterias Imitación molecular (QKRAA)
Virus Epstein-Barr Imitación molecular (QKRAA)
Membrana celular bacteriana Activación de macrófagos
413
Sin título-2 413 5/26/06, 10:26 AM

La hipótesis que una o más infecciones virales magnitud mayor que la del FR que se ve en la
pueda servir de agente gatillante de la AR en un enfermedad de Waldenström o en la crioglo-
huésped susceptible es atractiva. Se ha planteado que bulinemia y (f) La evidencia disponible señala que
esta infección debería ser con un agente similar a los el FR representa una vía importante para la
lentivirus, los cuales tienen una expresión restringida amplificación de la enfermedad articular y para el
dentro de las células y pueden permanecer ocultos a desarrollo de complicaciones extra-articulares.
los mecanismos de defensa del huésped. Los anticuerpos anticolágeno II (natural y
denaturalizado), tienen un indudable interés potencial
2.1.3. Autoinmunidad a juzgar por los datos obtenidos en modelos animales
de artritis. La mayoría de los datos en humanos son
a) Autoanticuerpos consistentes con la hipótesis que la AR no es
producida por el desarrollo de estos anticuerpos, sino
En la membrana sinovial de la AR crónica, la que la respuesta inflamatoria es amplificada por ellos.
infiltración de linfocitos de predominio células T CD4 La calpastatina es un inhibidor natural de las
(CD45RO positivo) puede organizarse como un calpainas, que son un subgrupo de cisteínas-
nódulo linfático y se distribuye perivascular, en tanto proteasas. Anticuerpos anticalpastatina se
que los escasos linfocitos B están en el centro de este encuentra en un 50% de los enfermos con AR, lo
cuerpo linfoide y las células plasmáticas migran fuera que ha hecho plantear que la neutralización de este
de él al diferenciarse. De este modo, el tejido sinovial inhibidor podría promover la sobreactivación de
es un órgano productor de anticuerpos en AR. estas proteasas en el tejido sinovial.
En la tabla 24-2 se indican los diferentes tipos Los anticuerpos antinucleares, los anti-
de autoanticuerpos encontrados en la AR. citoplasma de neutrófilos y los anticardiolipinas,
no parecen tener un papel en la patogenia.
Tabla 24-2. Autoanticuerpos en Artritis b) Inmunidad Celular

Reumatoídea
______________________________________________ Habitualmente se ha considerado que los
linfocitos T CD4+ son cruciales en la patogenia
Factor Reumatoídeo
de la AR, considerando para ello la masiva
Antinucleares
infiltración de éstos en la membrana sinovial. En
Anticolágeno tipo II
la tabla 24-3 se presentan algunas evidencias que
Anticolágeno tipo IX
refuerzan esta hipótesis.
Anticardiolipina
Anticitoplasma de neutrófilos
Antikeratina Tabla 24-3. Evidencias a favor del papel de
Antifactor perinuclear los Linfocitos T en la AR
Anticalpastatina
____________________________________________ • LT y CPA están presentes en gran cantidad en
la membrana sinovial.
Los Factores Reumatoídeos (FR) son • LT sinoviales expresan marcadores de
autoanticuerpos que reconocen la región Fc de la activación y de memoria.
IgG. El descubrimiento del FR ha sido un hito en • Parece existir cierto grado de oligoclonalidad
el desarrollo de conceptos de autoinmunidad, en los linfocitos T sinoviales.
aunque su papel en la patogenia de la AR es sólo • Las citoquinas T, IFN-γ y la IL-17 presentes
parcialmente comprendido. Algunos datos avalan en la articulación reumatoídea, son mediadores
su importancia en esta enfermedad: (a) La mayoría de efectos biológicos relacionados con la
de los enfermos con AR tienen títulos elevados de inflamación y el daño articular.
FR. (b) Los títulos altos de FR correlacionan con • Citoquinas que promueven la activación T y
enfermedad más grave. (c) La producción de FR la diferenciación Th1, como la IL-12 y la IL-
es abundante en la membrana sinovial y muestra 15 están en la articulación en concentraciones
evidencias de maduración de afinidad dirigida por significativas.
antígeno. (d) El FR puede aumentar la formación
de complejos inmunes. (e) La avidez del FR de la LT, linfocitos T; CPA, células presentadoras de
AR por la región Fc de la IgG es varias órdenes de antígeno
414
Sin título-2 414 5/26/06, 10:26 AM

Por otro lado, los tratamientos dirigidos a Citoquinas en AR. Muchas citoquinas se han
disminuir la cantidad de LT, no siempre han sido detectado en la membrana sinovial y en el líquido
exitosos, aunque hay que destacar que la linfopenia sinovial de enfermos con AR, algunas de ellas en
en sangre periférica no siempre se correlaciona concentraciones muy elevadas. La sorprendente
con la realidad en la articulación. respuesta obtenida con tratamientos dirigidos a
Los LT sinoviales son en su mayoría de me- prevenir el efecto de algunas de ellas, ha reforzado
moria (CD45RO+) que expresan un fenotipo la idea del papel preponderante de las citoquinas
curioso con marcadores de actividad tardía y en la inflamación y destrucción articular. En gen-
reciente como por ejemplo, HLA clase II y CD69 eral se ha considerado la AR como una enfermedad
y muy poca expresión de CD25 (receptor de IL-2) Th1 cuya función se asocia con hipersensibilidad
que aparece en forma intermedia en la activación. retardada y con respuestas celulares T citotóxicas.
Las células T también expresan moléculas Los niveles de IFN-γ en la articulación, son sin
coestimuladoras que reciben y transducen señales embargo muy bajos, aunque los efectos atribuidos
durante la activación, tales como, CD28, CD2, por lo menos en parte a esta citoquina, como la
LFA-1, CD6, CD60 y CD40. Por lo tanto, los LT fuerte expresión de moléculas MHC en una
no sólo son abundantes en la sinovial, sino que variedad de tipos celulares, es evidente. También
también expresan estructuras de superficie que se encuentra IL-12, que favorece la activación
facilitan las interacciones con ligandos en las CPA hacia Th1. La IL-15 y la IL-18, fácilmente
adyacentes. detectables en la sinovial reumatoídea, actúan
Persisten sin embargo, algunas observaciones probablemente en forma sinérgica con la IL-12
que no aclaran el papel de los LT. Así por ejemplo, en promover la diferenciación hacia Th1. La IL-2
no se ha podido demostrar que exista un es apenas detectable y muy pocas células expresan
autoantígeno específico, al cual respondan los el receptor de alta afinidad para esta citoquina.
linfocitos T, capaz de gatillar o perpetuar la AR. Especialmente interesantes son el TNFα y la
Esto es, no se ha podido demostrar que la AR sea IL-1β, ambas producidas por macrófagos-
una enfermedad autoinmune en su origen. Además, monocitos aunque también pueden ser sintetizadas
las citoquinas derivadas de LT son menos por células T activadas. Estas citoquinas son muy
abundantes en la sinovial, que las producidas por abundantes en la sinovial lo que unido a su
otras células y las erosiones que aparecen en el potente actividad biológica proinflamatoria, las
curso de la enfermedad no siempre se ubica en un papel central en la patogenia de la
correlacionan con el grado de inflamación clínica inflamación y destrucción articular. La reciente
observable en los pacientes. Aunque la importancia introducción de tratamiento dirigido a bloquear
relativa de distintos blancos antigénicos para las la acción de estas citoquinas, ha sido un avance
células T aún no es clara, se han hecho esfuerzos importante en el tratamiento de esta enfermedad.
grandes para identificar clones de linfocitos También están presentes en la sinovial,
patogénicos. Las diferencias en expansiones inhibidores o antagonistas fisiológicos de
clonales encontradas en distintos enfermos, citoquinas y de metaloproteinasas, sin embargo
sugieren que la inflamación en curso puede reflejar su concentración es inferior a lo que se requiere
respuestas a una diversidad de antígenos propios para abrogar la respuesta inflamatoria.
o extraños, que son procesados y presentados a
los LT sinoviales por cualquiera de las diferentes c) Interacciones intercelulares
CPA en la membrana sinovial.
La asociación del epítopo compartido con la La unión de leucocitos circulantes al
AR, hizo pensar en el papel crucial de los LT en la endotelio activado, vía moléculas de adhesión, es
patogenia, sin embargo no es claro el mecanismo un requisito indispensable para el desarrollo de
de esta asociación que puede representar entre una inflamación crónica. La combinación de
otras posibilidades, selección tímica particular, selectinas, integrinas y quimioquinas puede crear
reactividad cruzada, desequilibrio de unión con un ambiente único en la sinovial inflamada para
otros genes o alteraciones en la transducción de atraer una gran diversidad de población
señales. leucocitaria. La respuesta de los LT son gatilladas
Recientes publicaciones han señalado la por la interacción con las CPA (células dendríticas,
existencia de una probable alteración en la homeos- macrófagos y LB). Así por ejemplo, células
tasis de la respuesta inmune en esta enfermedad. dendríticas activadas están presentes en la mem-
415
Sin título-2 415 5/26/06, 10:26 AM

brana y en el líquido sinovial y se puede observar quear citoquinas específicas, abren un camino no-
al microscopio, que interactúan con "nidos" de vedoso y aparentemente muy eficaz para contro-
linfocitos. Recientemente se ha encontrado que los lar las manifestaciones de esta devastadora enfer-
LT también interactúan con fibroblastos sinoviales. medad.
La relación de los macrófagos con los fibroblastos
se realiza, principalmente, a través de citoquinas,
pero es posible pensar que también hay interacción 3. LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO
intercelular. Por otro lado, los fibroblastos entregan
señales a los LB que previenen su apoptosis. El Lupus Eritematoso Sistémico (LES) es una
Esta variada interacción celular y la red de enfermedad inflamatoria, de tipo autoinmune, de
citoquinas presente, pudiera explicar el patrón causa desconocida y que afecta con mayor fre-
inhabitual de diferenciación celular que se cuencia a las mujeres (relación 9:1).
encuentra en la sinovial reumatoídea. En este
sentido es notable el fenotipo único que exiben 3.1. Patogenia
los fibroblastos reumatoídeos, con características
de células transformadas, de crecimiento agresivo,
En el LES el daño inflamatorio celular o
que invaden tejidos vecinos y que acumulan
tisular, está mediado por mecanismos
mutaciones de genes que suprimen tumores como
inmunológicos, especialmente por autoanticuerpos
el p53. La dilucidación de si estas anomalías son
y complejos inmunes, dirigidos contra antígenos
enteramente secundarias a la inflamación crónica
propios.
o si reflejan acontecimientos primarios
Parece claro que el LES es una enfermedad
relacionados con la etiología de la enfermedad es
multifactorial por lo que se deben considerar di-
un objetivo actual central en la investigación sobre
versos aspectos en su etiopatogenia. Los factores
esta enfermedad.
principales que interactúan desarrollando la en-
fermedad, pueden agruparse en: Factores
genéticos, Factores ambientales, Disregulación del
sistema inmune e Inflamación y daño celular/
Clínicamente la AR se manifiesta con mayor
tisular crónico (tabla 24-3).
frecuencia, como una artritis de comienzo insidio-
so que afecta especialmente las articulaciones de
las manos y muñecas y que progresivamente va
comprometiendo otras articulaciones. Más rara- Tabla 24-4. Principales factores que partici-
mente, el comienzo puede ser como artritis aguda pan en la patagonia del LES
poliarticular. Finalmente también se encuentra un
comienzo intermedio entre estas dos formas. • Factores genéticos
El tratamiento de esta enfermedad ha ido - Antecedentes familiares
cambiando conceptualmente con el tiempo. De una - Marcadores genéticos
etapa que consideró a la AR como una enferme- - Expresión clínica y marcadores genéticos
dad relativamente benigna, en la cual había que
tratar de usar sólo antiinflamatorios no esteroidales • Factores ambientales
y sólo más adelante drogas que pudieran detener - Drogas
el curso de la enfermedad, a otra etapa, a partir de - Luz ultravioleta
los setenta, en que los médicos conscientes de los - Infecciones
estudios epidemiológicos que comenzaban a se-
• Disregulación del sistema inmune
ñalar el curso devastador que puede tener, comen-
- Pérdida de la tolerancia
zaron a aconsejar la introducción precoz de dro-
- Aumento en la expresión de autoantígenos
gas potentes con el fin de detener el curso de la
- Alteraciones funcionales linfocitarias
enfermedad, antes que aparecieran erosiones arti-
- Desbalance de citoquinas
culares. En la actualidad el uso de inmunosu-
- Hormonas sexuales y eje neurohipotálamo
presores, como el Metotrexato es usual en los pri-
hipofisiario
meros meses de hecho el diagnóstico. La reciente
incorporación de medicamentos ahora generados • Inflamación y daño celular/tisular
a través de ingeniería genética, capaces de blo-
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3.1.1. Factores genéticos a) Drogas. Numerosas drogas y medicamentos
pueden inducir el desarrollo de autoanticuerpos,
La susceptibilidad genética en el LES, parece in- algunos con capacidad patogénica, determinando
discutible. Apoyan su papel preponderante varias un cuadro clínico de “LES inducidos por drogas”.
observaciones bien conocidas y demostradas. Generalmente éste se manifiesta en pacientes que
son genéticamente acetiladores lentos (condición
a) Estudios familiares. Los gemelos monocigotos que favorece el aumento de moléculas relaciona-
tienen un alto grado de concordancia para la en- das a la respuesta inmune).
fermedad (14-57%) y los parientes de pacientes
con LES llegan a presentarla en un 5-12%. b) Luz ultravioleta (LUV). La LUV produce
distintas alteraciones inmunológicas en la piel, que
b) Marcadores genéticos. Los pacientes con LES pueden favorecer o reactivar el LES. Altera la ex-
tienen mayor frecuencia de ciertos marcadores presión de autoantígenos en los keratinocitos y los
genéticos específicos, comparados con la pobla- estimula a producir citoquinas inductoras de la
ción general. Éstos incluyen fenotipo HLA clase I producción de autoanticuerpos por linfocitos B
(B-8) y clase II (DR-2, DR-3, DQW1). Las defi- (IL-3, IL-6, GM-CSF, TNFα). Activa a los
ciencias genéticas de alguno de los componentes macrófagos en el procesamiento de autoantígenos.
del sistema del complemento (C1, C2 y C4) se Favorece el depósito de autoanticuerpos en la
asocian fuertemente al desarrollo LES. También membrana basal dermoepidérmica, por alteración
se han descrito trastornos genéticos para el recep- de su estructura.
tor Fc, para el receptor de C1 y para genes pro-
motores de distintas citoquinas (IL-1, IL-10). c) Infecciones. Los microorganismos pueden ac-
Algunos modelos animales han demostrado tivar el LES a través de infecciones. Es bien co-
gran importancia de trastornos de la apoptosis ce- nocida la capacidad de producir anticuerpos de
lular inducida por genes ( FAS-L, ligando de FAS), reactividad cruzada con autoantígenos, que ten-
y es probable que este trastorno intervenga tam- gan similitud estructural con antígenos
bién en el LES humano. microbianos. También, especialmente las bacte-
rias producen superantígenos que pueden estimu-
c) Expresión clínica y marcadores genéticos. lar en forma inespecífica a clones de linfocitos T
Ciertos genes tipo HLA clase II se asocian con la y/o B autorreactivos, induciendo de esta forma
producción de autoanticuerpos definidos que pue- respuestas autoinmunes.
den influir en ciertas manifestaciones clínicas es-
pecíficas: DR3, DR2 y DQ a Ac anti-DNA, DR7 3.1.3. Disregulación del sistema inmune. Cons-
a Ac-anti Sm, DR2 a Ac anti-P ribosomal, DR3 a tituye el factor crucial en el desarrollo del LES.
Ac anti-Ro (SSA), DR4 y DR2 a Ac Anti-U1-RNP, Esta alteración permite el desconocimiento de los
y los Ac antifosfolípidos a DR4, DR7 y DR53. antígenos propios (pérdida de la tolerancia) y la
Aunque el papel de la predisposición producción de una respuesta inmune humoral y
genética al desarrollo de esta enfermedad, parece celular dirigida contra éstos, capaz de producir
importante y bien demostrado, se estima que el un daño patogénico sobre células y/o tejidos que
factor genético como única causa de LES no sería pueden manifestarse clínicamente como una en-
posible, y necesita de la interacción de otros fac- fermedad potencialmente fatal. Se han reporta-
tores que serán comentados. Está bien establecido numerosas alteraciones inmunológicas en pa-
do que su influencia sería multigenética, y se ha cientes con LES, que podrían agruparse en dis-
calculado que entre 4 a 8 genes estarían compro- tintos aspectos.
metidos en la predisposición genética.
a) Pérdida de la tolerancia. Constitiuye el de-
3.1.2. Factores ambientales. Su importancia en fecto más significativo en la patogenia del LES, y
el desarrollo del LES no ha sido aún bien deter- permite el desarrollo de una respuesta inmune
minada, pero se estima que actuarían como contra distintos antígenos propios. Como se sabe,
desencadenantes de la enfermedad en aquellos el timo a través de un proceso de selección, elimi-
sujetos genéticamente susceptibles. Se han des- na o inactiva a aquellos clones capaces de reac-
crito diversos factores ambientales importantes: cionar contra antígenos propios (Selección tímica
negativa o Tolerancia central; ver capítulo 13). En
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los pacientes con LES se describen disfunción pranas de la enfermedad, (iii) disfunción del sis-
tímica que rompe la tolerancia central, lo que per- tema de señales entre células inmunes, que se
mite la presencia de clones de linfocitos T manifiestan en aumento de respuestas del calcio,
autorreactivos, capaces de generar una respuesta hiperfosforilación de sustratos proteicos
autoinmune bajo estímulos adecuados. citosólicos y disminución del factor nuclear kappa
La tolerancia periférica, que se realiza en el B, y (iv) dependencia de la producción de
sistema inmune periférico, también está alterada. citoquinas Th2 (favorecen la producción de
Se describe déficit de linfocitos T supresores anticuerpos).
(CD8+) y activación de clones autorreactivos El resultado final de éstas y otras numerosas
periféricos de LT "helper" (LTh) (CD4+). Ambas alteraciones funcionales linfocitarias, se traduce
situaciones favorecen el desarrollo de en la producción descontrolada de una gran pro-
autoinmunidad patogénica. Se describen trastor- fusión y diversidad de autoanticuerpos, eje cen-
nos de la tolerancia B con prolongación de su vida tral de la patogenia del LES.
media, tal vez por defectos en la apoptosis o defi-
ciencias del complemento. d) Desbalance de citoquinas. Los pacientes de
LES tienen en general un desbalance de citoquinas
b) Autoantígenos. La expresión de los con aumento de aquellas proinflamatorias y dis-
autoantígenos en pacientes con LES, está aumen- minución de las inmunorreguladoras, creando el
tada, probablemente como expresión de apoptosis entorno favorable para el desarrollo de
celular exagerada, que permite el desarrollo au- autoinmunidad.
mentado de nucleosomas, que resultan del plega- Se ha descrito aumento de IL-4, IL-6 e IL-
miento nuclear de la célula en apoptosis y que 10; éstas inducen a que las células B autorreactivas
contienen una alta expresión de autoantígenos se activen, proliferen y se diferencien hacia célu-
nucleares (proteínas, histonas, DNA). Al respec- las B que producen un exceso de autoanticuerpos
to se han descrito alteraciones de genes de contra muchos antígenos nucleares. No relacio-
apoptosis en pacientes con LES y en modelos nados directamente a hiperreactividad B, los
murinos. La generación de nucleosomas podría linfocitos T lúpicos producen y responden menos
inducir la respuesta autoinmune inicial en el LES, a IL-2, producen menos IFN, IL-12, TGFβ, TNFα
expresada en autoanticuerpos antinucleosomas. e IL-1. Estos últimos hallazgos no tienen aún un
La interacción de éstos con los autoantígenos nu- rol patogénico conocido.
cleares permitiría la expresión de sectores
antigénicos que naturalmente no se expresan e) Hormonas sexuales y eje neurohipotálamo
(antígenos crípticos) y que aparecen en esta situa- hipofisiario. Es un hecho bien conocido, e inde-
ción desencadenando respuestas autoinmunes su- pendiente del grupo étnico, que el LES afecta
cesivas (expansión del repertorio autoinmune), preferencialmente a mujeres jóvenes, en periodo
responsable de la gran diversidad del fértil, por lo que el papel de las hormonas femeni-
autoanticuerpos antinucleares (por ejemplo anti- nas en su patogenia, se ha planteado desde siem-
DNA nativo, anti-U1-RNP, anti-Sm, anti-Ro (SS- pre. Aún hoy, no ha podido establecerse con cer-
A), anti-La (SS-B). teza esta predilección por el sexo femenino
En ciertas circunstancias algunos hormonalmente activo. Sin embargo, hay ciertos
autoantígenos podrían ser inmunogénicos, al ser elementos de la influencia de las hormonas sexua-
procesados por células APC especiales, o en el les en el sistema inmune que se conocen.
contexto de distintas moléculas de adhesión, que La administración de estrógenos a mujeres
induzcan respuestas T ó B autoinmunes. postmenopáusicas parece duplicar su riesgo a de-
sarrollar LES. La hidroxilación del estradiol en
c) Alteraciones funcionales linfocitarias. Se han posición C-16 es mayor en LES, tanto mujeres
descrito numerosas alteraciones inmunes en como hombres, lo que acarrea más metabolitos
linfocitos T y B de pacientes con LES, sin embar- estrogénicos. Los estrógenos estimulan los
go su papel en la patogenia de la enfermedad no timocitos, los linfocitos T CD8+ y CD4+, los
se conoce. Así, se ha reportado: (i) disminución linfocitos B, los macrófagos, la liberación de cier-
de linfocitos T citotóxicos y T supresores (nor- tas citoquinas proinflamatorias, y la expresión de
malmente frenan la respuesta inmune), aumento moléculas HLA y de adhesión en células
LTh, (ii) activación policlonal de LB en fases tem- endoteliales. La suma de estos efectos favorece
418
Sin título-2 418 5/26/06, 10:26 AM

las respuestas autoinmunes de tipo humoral. Ade- Es importante destacar que además de la pro-
más presenta un efecto favorecedor del cambio ducción exagerada de complejos inmunes
de clase, desde autoanticuerpos IgM a IgG; este patogénicos en el LES, se han reportado (a) tras-
último isotipo presentaría mayor poder tornos en la depuración (clearence) de éstos, me-
patogénico. diados por disminución de receptores CR1, satu-
Por otra parte se ha observado disminución ración de éstos y de los receptores Fc de IgG
de andrógenos en mujeres con LES, y también in- (FcγR), hipocomplementemia, y (b) disfunción de
adecuada producción de progesterona. También la fagocitosis del sistema fagocítico mononuclear.
se describe en casi todos los pacientes con LES La combinación de ambos factores favorecería
disminución en los niveles séricos de DHEA entonces el daño tisular mediado por complejos
(Deshidroepiandrosterona) y de compuestos inter- inmunes.
mediarios de la síntesis de testosterona. En com- El LES es una enfermedad autoinmune,
paración a los estrógenos, los andrógenos tienen inflamatoria, crónica, por lo que los mecanismos
un efecto inmunosupresor. patogénicos deben perpetuarse por tiempo prolon-
La progesterona y la prolactina afectan tam- gado. Para este objeto la respuesta autoinmune
bién, al sistema inmune. La progesterona frena la debe mantenerse. La pérdida de tolerancia persis-
proliferación T y aumenta el número de CD8+, y te para ciertos autoantígenos, manteniéndose una
la hiperprolactinemia se ha asociado a activación permanente de clones linfocitarios
exacerbaciones del LES. Algunos estudios de- autorreactivos. Los trastornos de la regulación in-
muestran disregulación del eje hipotálamo mune (disfunción de células T y B, red idiotipo-
hipofisiario, con deficiente producción de anti-idiotipo, desbalance de citoquinas) persisten.
cortisona asociado a hiperproducción de Los mecanismos de eliminación de complejos in-
prolactina, estableciendo un balance favorable a munes están superados. El resultado final es la
una hiperreactividad inmune. persistencia de la autoinmunidad y su daño secun-
dario a través del tiempo, planteando así las ca-
3.1.4. Inflamación y daño celular/tisular racterísticas clínicas de la enfermedad.
Como resumen general, se puede decir que
La característica inmune, más destacada en la etiopatogenia del LES está sustentada en la
el LES, es la gran profusión y diversidad de suceptibilidad genética, factores ambientales y
autoanticuerpos, los cuales inducen daño a través hormonales y en la disregulación inmune. Por lo
de mecanismos directos de interacción con su tanto es multifactorial, cada uno de ellos
antígeno (alteraciones funcionales celulares), por interactuando con los otros. Probablemente la par-
activación del sistema del complemento (citólisis) ticipación de cada uno de éstos sea variable en
y por linfocitotoxicidad dependiente de cada enfermo. El mejor conocimiento de su
anticuerpos. Sin embargo, el mecanismo clásico etiopatogenia permitirá desarrollar tratamientos
de daño tisular en pacientes con LES, lo constitu- más eficientes, más específicos y con menos efec-
ye sin duda, la formación de complejos tos secundarios.
autoinmunes y su depósito en la pared vascular
(por ejemplo: glomerulonefritis lúpica, o vasculitis 3.2. Clínica y tratamiento
por complejos DNA anti DNA). Algunas mani-
festaciones clínicas son también producto de daño El LES es una enfermedad inflamatoria que
inmune por inmunidad celular o LT sensibiliza- puede comprometer diferentes órganos. Sus ma-
dos (por ejemplo: nefritis intersticial). nifestaciones clínicas más frecuentes son: síndro-
La generación de un anticuerpo como efecto me febril y compromiso del estado general; lesio-
de una respuesta inmune induce la producción de nes eritemato papulares de la piel y rash malar,
un segundo anticuerpo dirigido contra el idiotipo ambos fotosensibles; poliartralgias y poliartritis;
del anticuerpo inicial. Esta secuencia induce una alopecia; fenómeno de Raynaud: pleuro-pericar-
red de idiotipo – anti-idiotipo que tiene efectos ditis; anemia por enfermedad inflamatoria o
inmunorreguladores sobre la respuesta inmune hemolítica; leucopenia; linfopenia; trombopenia
inicial (ver capítulo 14). Esta red estaría defec- y púrpura trombopénico; y velocidad de
tuosa en LES, favoreciendo el desarrollo de múl- eritrosedimentación elevada.
tiples autoanticuerpos y también aumento en la Es frecuente, y muy importante para el pro-
activación de LT CD4+. nóstico, el compromiso renal, que puede manifes-
419
Sin título-2 419 5/26/06, 10:26 AM

tarse por distintos tipos de glomerulonefritis. La Seldin, M.F.; Amos, CI.; Ward, R. et al., “The
más grave, y que puede llegar a insuficiencia re- Genetics revolution and the assault on rheumatoid
nal, es la glomerulonefritis proliferativa difusa, ca- arthritis”, Arthritis Rheum 42:1071-1079, 1999.
racterizada por depósito de complejos inmunes
glomerulares e inflamación secundaria. Otra ma- Silman, AJ.; MacGregor, AJ.; Thomson, W. et al.,
nifestación clínica potencialmente muy grave, es “Twin concordance rates for rheumatoid arthritis:
el compromiso del sistema nervioso central, con results from a nationwide study”, Br J Rheumatol,
daño difuso o focal y eventualmente convulsio- 32:903-907, 1993.
nes.
Todas estas manifestaciones clínicas son muy Schmidt, D.; Goronzy, J.; Weyand, CM., “CD4+
variables entre distintos pacientes. El diagnósti- CD7- CD28- T cells are expanded in rheumatoid
co de LES se establece frente a la sospecha clíni- arthritis and are characterized by autoreactivity”,
ca, con las alteraciones inespecíficas del labora- J Clin Invest, 97:2027-2037, 1996.
torio general, y la presencia de distintos
autoanticuerpos, especialmente anticuerpos Wagner, U.G.; Koetz, K.; Weyand, C.M., et al.,
antinucleares y anti DNA, que tienen mayor valor “Perturbation of the T cell repertoire in rheumatoid
diagnóstico. arthritis”, Proc Natl Acad Sci USA, 95:14447-
El LES no tiene una causa conocida por lo 14452, 1998.
que no tiene un tratamiento específico. Está enca-
minado a combatir la inflamación en forma efec-
tiva (corticoesteroides); o frenar los mecanismos Lupus Eritematoso Sistémico
inmunes que la originan (inmunosupresores). La
insuficiencia renal y el compromiso neurológico Boumpas, D.T.; Fessler, B.J.; Austin, AH.; Balow,
son las causas más importantes de mortalidad li- J.; Klippel, J.; Lockshin, M.; “Systemic Lupus
gadas a la enfermedad. Otra causa frecuente es la Erythematosus: Emerging Concepts”, Ann Int
infección o la enfermedad vascular ateroes- Med, 123; 42-53, 1995.
clerótica, que están relacionadas al tratamiento
agresivo y prolongado. Cooper, GS.; Dooley, M.A.; Treadwell, E.L. et
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Capítulo 25
SÍNDROME ANTIFOSFOLÍPIDO
Iván Palomo G., Antonio Cabral, Silvia Pierangeli y Ricardo Forastiero V.
1. Introducción 4. Manifestaciones clínicas

2. Antígenos y anticuerpos 4.1. Manifestaciones vaso-oclusivas
2.1. Antígenos 4.2. Manifestaciones hemocitopénicas
2.2. Anticuerpos 4.3. Otras manifestaciones
3. Mecanismos de trombosis 5. Laboratorio
3.1. Biosíntesis de eicosanoides e 5.1. Anticardiolipina por ELISA
isoeicosanoides 5.2. Anticoagulante Lúpico
3.2. Sistema antitrombótico de la pro- 5.3. Pruebas de laboratorio más espe-
teína C cíficas para el diagnóstico de SAF
3.3. Vía del factor tisular 5.4. ¿Qué pruebas de laboratorio se
3.4. Sistema fibrinolítico deben usar en el diagnóstico de
3.5. Anexinas y activación celular SAF?
3.6. Inmunidad celular y perfil de 6. Tratamiento
citoquinas
3.7. Asociación con factores genéti-
cos de riesgo trombótico
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RESUMEN
Los anticuerpos antifosfolípidos (aFL) son un grupo heterogéneo de anticuerpos que se

encuentran en pacientes con enfermedades del tejido conectivo, infecciones y en asociación al
uso de drogas. Su presencia se ha relacionado al Síndrome Antifosfolípido (SAF) que se caracteriza
por presentar trombosis, abortos a repetición y trombocitopenia. La mayoría de los anticuerpos
aFL patogénicos presentan especificidad para algunas proteínas con afinidad por fosfolípidos
aniónicos, la más estudiada es la beta 2-glicoproteína I (β2GPI). Varios hallazgos se asocian a los
mecanismos trombogénicos de los anticuerpos aFL, destacando los efectos inhibitorios sobre los
inhibidores fisiológicos de la coagulación y los efectos que conducen a la activación celular. La
pesquisa de los anticuerpos aFL se realiza por ELISA anticardiolipina (aCL) y por pruebas de
coagulación (anticoagulante lúpico, AL), incorporándose más recientemente ensayos más
específicos como el ELISA para anti-β2GPI. En el manejo del SAF se utiliza principalmente
anticoagulación.
1. INTRODUCCIÓN 2. ANTÍGENOS Y ANTICUERPOS
Los anticuerpos aFL se conocen desde Hasta antes de 1990 se pensaba que los
comienzos del siglo XX, primero se los pesquisó anticuerpos aFL reconocían fosfolípidos aniónicos,
por el método de fijación de complemento, lo que justifica su nombre. Actualmente se sabe
posteriormente, en los años cuarenta, a través de que la mayoría de los anticuerpos aFL patogénicos
la prueba para serología de sífilis, luego, entre los tienen especificidad contra algunas proteínas con
años cincuenta y sesenta, con pruebas de afinidad por FL con carga negativa; por esta razón
coagulación. En los ochenta, Harris y colabora- también se les denomina Anticuerpos
dores, mediante un radioinmunoanálisis que antifosfolípido-proteínas.
utilizaba cardiolipina en fase sólida, aumentaron
significativamente la sensibilidad en la pesquisa 2.1. Antígenos
de los anticuerpos aFL, llamados a partir de esa
fecha aCL. Posteriormente se desarrolló un ELISA Entre las proteínas blanco de los anticuerpos
para detectar aCL. aFL se destacan la β2GPI y protrombina (PT).
Los anticuerpos aFL en asociación con las Además se han descrito otras especificidades:
complicaciones clínicas definen al SAF primario proteína C, proteína S, anexina V, kininógeno de
o secundario a otras enfermedades o fármacos. alto peso molecular, trombomodulina, etc. Dada
A partir de fines de los ochenta, los la importancia de la β2GPI como blanco de los
anticuerpos aFL han sido objeto de múltiples anticuerpos aFL, a continuación se describen
investigaciones tendientes a conocer sus especifi- algunos aspectos sobre su estructura y actividad
cidades, mecanismos de unión y su participación biológica.
en la patogenia de las complicaciones.
En este capítulo se describirán los siguientes β2GPI. Es una proteína plasmática sintetizada en
aspectos sobre el SAF: especificidad antigénica el hígado, que se une a moléculas con carga
de los anticuerpos aFL, sus mecanismos negativa, como FL aniónicos, heparina y
patogénicos de trombosis, y algunos aspectos lipoproteínas, y a plaquetas activadas. Se sabe que
sobre los métodos de pesquisa en el laboratorio, inhibe la vía intrínseca de la coagulación in vitro,
manifestaciones clínicas y tratamiento. la actividad protrombinasa de las plaquetas y la
agregación plaquetaria inducida por ADP. Sin
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embargo, la función de la β2GPI in vivo no es aún secuencia aminoacídica presente en el quinto
totalmente conocida. La β2GPI es una glico- dominio de la proteína (C 281KNKEKKC 288),
proteína formada por una cadena polipeptídica de secuencia con carga positiva debido a la presencia
326 aminoácidos (50 kDa). Presenta cinco de cuatro lisinas (K) y que se encuentra en la
dominios de aproximadamente 60 residuos. Los superficie de la proteína. Se ha postulado que
dominios I-IV presentan la estructura típica de los también participaría el primer dominio. Por otra
miembros de la superfamilia de proteínas de con- parte, se ha establecido que el dominio de unión
trol del complemento (CCP) también llamados para los anticuerpos anti-β2GPI está principal-
dominios “sushi”. El quinto dominio, que se mente en el cuarto dominio de la β2GPI, en un
encuentra hacia el extremo carboxilo, presenta 82 epítopo críptico que se expone cuando la proteína
aminoácidos que incluyen dos cisteínas adiciona- interacciona con los FL aniónicos (figura 25-2).
les (figura 25-1). El gen que codifica para la β2GPI Evidencia más reciente indica que el dominio I
humana fue clonado y secuenciado. presenta el epítopo de una gran parte de los
Se han identificado los dominios de unión anticuerpos anti-β2GPI. Existen dos teorías que
de la β2GPI a los FL aniónicos y a los anticuerpos explican la interacción entre los anticuerpos anti-
aFL. Se ha demostrado que la CL se une a la β2GPI y la β2GPI: (a) unión de los anticuerpos a
epítopos crípticos expresados en la proteína como
resultado de la interacción con FL y (b) unión de
los anticuerpos a epítopos nativos de la proteína
donde la interacción se produce sólo cuando hay
alta densidad antigénica sobre superficies celulares
o placas de ELISA. Actualmente el consenso gen-
eral es la unión de acuerdo a la segunda teoría
debido a la reconocida baja afinidad de estos
anticuerpos.
Se han descrito cuatro polimorfismos
genéticos en la β2GPI: en el segundo dominio
(Ser88Asn) y en el quinto dominio (Val247Leu,
Cys306Gly, Trp316Ser).
2.2. Anticuerpos
Figura 25-1. Estructura de la β2GPI. Esta glicoproteína posee
cinco dominios (I-V) de aproximadamente 60 aminoácidos
Los anticuerpos aFL pueden ser de clase IgG, IgM
cada uno. , glicosilación; c, cisteína. e IgA, teniendo mayor significación clínica el
Figura 25-2. Modelo de unión de los anticuerpos anti-β2GPI a la β2GP. La interacción de la β2GPI a fosfolípidos aniónicos
permite la exposición de un epítopo críptico en la β2GPI, región a la que se unen los anti-β2GPI.
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isotipo IgG, seguido de IgM. Los anticuerpos aFL estos anticuerpos juegan un rol fundamental en la
convencionales (aCL y AL) se asocian a trombosis patogenia del SAF. Varios mecanismos (tabla 25-
venosa y arterial, y a abortos a repetición. Los 1) han sido propuestos teniendo en cuenta que los
anticuerpos aFL están presentes en el 1-3% de FL y las proteínas que unen fosfolípidos tienen un
individuos normales, generalmente en títulos papel crucial en el mantenimiento de la hemostasia
bajos. En cambio, alrededor de un 50% de los e intervienen en una gran variedad de funciones
pacientes portadores de Lupus Eritematoso celulares. A continuación se presentan los
Sistémico (LES) presentan algún tipo de hallazgos más relevantes en el campo de la
anticuerpos aFL. Las embarazadas normales fisiopatogenia del SAF:
presentan cifras iguales a la población general
normal, en cambio alrededor del 20% de las
pacientes que desarrollan abortos a repetición Tabla 25.1. Sistemas involucrados en la
presentan aCL y/o AL. patogenia del SAF
Se han distinguido dos clases de aCL: aCL
independientes de β2GPI y aCL dependientes de • Biosíntesis de eicosanoides e isoeicosanoides
β2GPI. Los primeros se han encontrado principal- • Sistema antitrombótico de la proteína C
mente en pacientes con enfermedades infecciosas; • Vía del Factor Tisular
se unirían a CL en ausencia de β2GPI y no serían • Sistema Fibrinolítico
patogénicos. Los segundos en cambio, se • Anexinas y Placenta
encuentran en pacientes con enfermedades • Plaquetas y Monocitos
autoinmunes; se unen a β2GPI en presencia de CL • Inmunidad celular y Citoquinas
y tendrían un rol patogénico. • Combinación con Trombofilias hereditarias
Dos especificidades de los anticuerpos aFL
han sido las más estudiadas, anticuerpos anti-
β2GPI y anti-PT. Ambos se pueden pesquisar a
través de ELISAs específicos. Los anticuerpos 3.1. Biosíntesis de eicosanoides e isoeicosanoides.
anti-β2GPI son evaluados además en el ELISA para Estos componentes se sintetizan a partir del ácido
aCL porque uno de los reactivos usados (suero araquidónico de las membranas celulares por vía
fetal bovino) y el suero del paciente contiene enzimática (eicosanoides) o por acción de radicales
β2GPI. libres (isoeicosanoides). Varios estudios in vitro
demostraron que algunos anticuerpos aFL
Anticuerpos anti-β2GPI. En el SAF la mayoría interferían con la producción de prostaciclina
de los anticuerpos aFL se unen a β2GPI y el (PGI2), eicosanoide producido por las células
hallazgo de anticuerpos anti-β2GPI presenta alta endoteliales (CE), inhibiendo la liberación de ácido
especificidad para el SAF. Algunos anticuerpos araquidónico o la actividad de las enzimas
anti-β2GPI presentan actividad AL. Fisiológica- involucradas. Estudios más recientes mostraron
mente la unión de la β2GPI a los FL aniónicos es que las IgG de pacientes con SAF estimulan la
débil, en cambio en presencia de anticuerpos anti- síntesis de la cicloxigenasa inducible sin afectar
β2GPI la unión de la β2GPI a los FL es más fuerte, la expresión de la enzima constitutiva endotelial.
compitiendo así con los factores de la coagulación. La síntesis in vitro de tromboxano A2 (TXA2),
eicosanoide de origen plaquetario, es incrementada
Anticuerpos anti-PT. En el caso de los en presencia de β2GPI y de anticuerpos aFL
anticuerpos anti-PT la asociación con trombosis purificados de pacientes con SAF. Este efecto no
no es clara. Se sabe que la mayoría de los anti-PT se observó al utilizar anticuerpos aFL de pacientes
presentan actividad AL y el mecanismo sería simi- con sífilis. La activación plaquetaria parece ser
lar al descrito para los anticuerpos anti-β2GPI, en dependiente de la unión del fragmento Fc de las
este caso interfiriendo con la formación del IgG al receptor celular Fcγ-RIIA. La biosíntesis
complejo protrombinasa. de eicosanoides puede ser evaluada a través de la
eliminación urinaria de sus metabolitos. En
3. MECANISMOS DE TROMBOSIS estudios ex vivo se encontró un disbalance en la
relación TXA2/PGI2 con un incremento mayor del
La asociación de los anticuerpos aFL con las metabolito plaquetario indicando una alteración
complicaciones tromboembólicas sugiere que in vivo que podría tener relevancia en el desarrollo
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Sin título-2 427 5/26/06, 10:26 AM

de trombosis. El aumento del metabolito vitro no sólo aumentan la expresión del FT sino
plaquetario se asoció a la presencia de anticuerpos que además incrementan la síntesis proteica y el
aFL dependientes de β2GPI de isotipo IgG. Los mRNA del mismo. La elevación simultánea in vivo
isoeicosanoides reflejan los fenómenos de en los niveles plasmáticos del factor de crecimiento
peroxidación lipídica in vivo y poseen acción de endotelio vascular (VEGF) y de FT sugiere que
vasoconstrictora y de activador plaquetario, los anticuerpos aFL promueven la liberación del
postulándose que tendrían un rol importante en VEGF, que a su vez induciría la expresión del FT
los eventos involucrados en el desarrollo de con la consecuente activación de coagulación.
aterosclerosis y trombosis en las lesiones Recientemente se demostró además que los
vasculares. En estudios recientes se halló un anticuerpos aFL dependientes de β2GPI suprimen
aumento en la excreción urinaria de los la actividad anti-factor Xa del inhibidor de la vía
isoeicosanoides que se asociaba con el incremento del factor tisular incrementando la generación de
plasmático de los marcadores de generación de factor Xa por el FT.
trombina y de factor tisular (FT) soluble.
Recientemente se encontró que los niveles 3.4. Sistema fibrinolítico. Este sistema a través
urinarios de los metabolitos de eicosanoides e de la transformación del plasminógeno en
isoeicosanoides se correlacionan. Estos hallazgos plasmina disuelve el coágulo de fibrina. Diversos
apoyan la hipótesis que involucra a los fenómenos estudios han demostrado un incremento en los
de estrés oxidativo e inflamación en el desarrollo niveles plasmáticos del inhibidor (PAI-1) del
del SAF. activador tisular del plasminógeno (tPA). Una
hipótesis muy reciente propone que el estado
3.2. Sistema antitrombótico de la proteína C. adquirido de hipofibrinolisis en este síndrome es
Este mecanismo fisiológico de control de la causado por la unión de los anticuerpos anti-PT
hemostasia es uno de los más importantes, y varios con el plasminógeno inhibiendo su activación. La
estudios han evaluado la relación entre anticuerpos β2GPI parece proteger al t-PA de la inhibición por
aFL y este sistema. En lo que respecta a la acción el PAI-1 y este efecto es revertido en presencia de
de los anticuerpos aFL sobre la activación de la autoanticuerpos aFL que alteran esta función de
proteína C (PC) mediada por trombomodulina hay la β2GPI.
resultados contradictorios, pero existe consenso
general de que estos anticuerpos inhiben la función 3.5. Anexinas y activación celular. La anexina
de la PC activada (APC). En particular, los V tiene un rol importante al prevenir las reacciones
anticuerpos aFL previenen la inactivación del fac- de coagulación sobre la superficie placentaria.
tor Va por la APC sobre las superficies Algunos datos indican que los anticuerpos aFL
fosfolipídicas generando un estado adquirido de reducen la concentración de anexina V sobre las
resistencia a la APC con el consecuente efecto superficies trofoblásticas placentarias y CE
protrombótico. Esto es evidente principalmente acelerando la activación de coagulación sobre las
con los anticuerpos aFL dependientes de β2GPI. mismas por la mayor exposición de FL. La
Otra de las alteraciones frecuentemente activación endotelial ha recibido mucha atención
encontradas en este sistema es la reducción en los en estos años y la evidencia indica el cambio del
niveles plasmáticos de la proteína S (PS) libre (co- fenotipo normal antitrombótico del endotelio a un
factor de la PC) en los pacientes con anticuerpos fenotipo protrombótico por acción de los
aFL. La β 2GPI ejerce un efecto inhibitorio anticuerpos aFL dependientes de β2GPI. Además
fisiológico en la unión PS-proteína de unión a C4b de lo ya mencionado (PGI2, FT, anexina V), otros
(C4bBP) que es reducido en presencia de estudios han demostrado un fenotipo proadhesivo
anticuerpos aFL y se propone que los anticuerpos y proinflamatorio al expresar varias moléculas de
aFL aumentan la afinidad de la PS por C4bBP e adhesión que conducen a la adhesión y posterior
inducen una reducción en los niveles de PS libre. activación de leucocitos al endotelio. El aumento
en plasma de estas moléculas de adhesión es muy
3.3. Vía del factor tisular. La estimulación frecuente en pacientes con autoanticuerpos aFL y
inducida por los anticuerpos aFL sobre la actividad se correlaciona con el aumento de los marcadores
procoagulante de CE y monocitos es debida al que indican actividad trombínica. Utilizando un
aumento en la expresión de FT en las superficies modelo animal de microcirculación (músculo
celulares. Los anticuerpos aFL autoinmunes in cremáster de ratones) se halló que los anticuerpos
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aFL incrementan la adhesión de leucocitos al 4G/4G en el promotor del PAI-1. Los datos indi-
endotelio. Se demostró el rol fundamental de las can que la combinación de factores genéticos se
moléculas de adhesión al no observar el efecto asocia al SAF y podría contribuir al estado
trombogénico en el modelo de trombosis y de protrombótico en algunos pacientes con
activación endotelial por parte de los anticuerpos anticuerpos aFL.
aFL cuando se usaron animales knock-out en las En resumen los mecanismos de trombosis o
moléculas de adhesión. Recientemente se demos- pérdidas fetales mediados por autoanticuerpos en
tró la presencia de micropartículas endoteliales el SAF pueden ser la consecuencia de dos tipos
(EMP) en pacientes con autoanticuerpos aFL. La de interacciones: (a) la unión de los anticuerpos a
liberación de EMP en circulación podría diseminar los antígenos unidos a membranas altera la cinética
las actividades procoagulantes y proadhesivas más de las reacciones dependientes de FL y (b) la unión
allá del sitio de formación de las EMP y contribuir de los anticuerpos a los antígenos unidos a los
al estado protrombótico del SAF. Un trabajo receptores de membranas celulares induce señales
reciente indica que la β2GPI y los anticuerpos aFL de transducción y activación celular.
dependientes de β 2 GPI se acumulan en los
endosomas tardíos de las CE induciendo un
cambio en la movilización intracelular de proteínas 4. CLÍNICA (Antonio R. Cabral)
que podría contribuir a la patogenia del SAF.
Las manifestaciones clínicas asociadas a los
3.6. Inmunidad celular y perfil de citoquinas. anticuerpos aFL pueden agruparse en: (a) Vaso-
El rol de la inmunidad celular en el SAF está siendo oclusivas, (b) hemocitopénicas y, tal vez, (c) las
recientemente evaluado. Sin embargo, los ensayos que podrían deberse a la acción directa de los
in vitro muestran datos contradictorios en si las anticuerpos con tejidos ricos en fosfolípidos, v.
células T CD4 específicas para β2GPI producen gr., sistema nervioso central y trofoblasto.
citoquinas del tipo Th1 o Th2. El cambio de
fenotipo Th1 a Th2 podría tener implicancias 4.1. Manifestaciones vaso-oclusivas
clínicas ya que el tratamiento con anticuerpos
específicos anti-idiotipo resultó ser efectivo La manifestación clínica distintiva del SAF
atenuando las manifestaciones clínicas y es la trombosis venosa y/o arterial, ambas suelen
serológicas del SAF experimental en ratones. Los ser recurrentes; las oclusiones arteriales pueden
resultados sugieren que las células Th2 tienen un tener vasculopatía con gran proliferación de la
rol importante en el desarrollo del SAF y que el íntima y de la media como factor asociado. Otras
cambio Th2 a Th1 se asocia con inducción de manifestaciones son el livedo reticularis, úlceras
remisión del SAF. En un estudio reciente se halló en piernas asociadas a lesión proliferativa proba-
que la respuesta inmune del tipo 2 caracteriza a blemente debida también a microtrombosis y pér-
los pacientes con SAF primario y que aquellos con dida fetal repetida. Cuando ésta ocurre en el ter-
anticuerpos aFL sin SAF, al igual que en los cer trimestre del embarazo, parece deberse a le-
controles normales, predomina el patrón de sión trombótica y proliferativa de los vasos
citoquinas del tipo Th1. Estos hallazgos en placentarios.
pacientes con anticuerpos aFL indicarían que el Otras manifestaciones que en series grandes
cambio de fenotipo Th1 a Th2 también tendría un de pacientes han probado tener asociación signi-
cierto rol en el desarrollo del SAF en humanos. ficativa con anticuerpos aFL son la hipertensión
pulmonar y la mielitis transversa. Igualmente, la
3.7. Asociación con factores genéticos de riesgo vasculitis, neuropatía periférica, convulsiones e
trombótico. Los eventos trombóticos son isquemia cerebral transitoria son manifestacio-
multifactoriales y existen algunos pocos estudios nes clínicas más frecuentes en pacientes con por-
publicados sobre la prevalencia de factores tadores de LES y anticuerpos aFL que en los
genéticos de riesgo trombótico en pacientes con seronegativos.
anticuerpos aFL. En una serie de 105 pacientes La prevalencia de infarto del miocardio (IM)
consecutivos con anticuerpos aFL se evaluaron el en pacientes con SAF primario o secundario a LES
factor V Leiden, el polimorfismo del gen de la varía del 4 al 7%, mientras que la de aCL en el
protrombina G20210G, la variante termolábil de suero de pacientes con IM, pero sin enfermedad
la metilentetrahidrofolato reductasa y el genotipo autoinmune, oscila entre el 3 y 80%. Esta diferen-
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cia quizá dependa del momento de la toma de la cronía de púrpura trombocitopénica con anemia
muestra, de algunas variaciones en la sensibilidad hemolítica autoinmunes (síndrome de Evans) en
de los ensayos entre los diferentes laboratorios o pacientes con LES sucede casi siempre en pre-
de la selección de pacientes. Por otro lado, en una sencia de anticuerpos aFL. Una asociación en la
cohorte de 133 pacientes con IM o muerte que se hace poco énfasis, pero que varios autores
cardiaca, anidada en un estudio prospectivo de han informado su asociación con anticuerpos aFL
4081 hombres sanos, los aCL a títulos altos au- en pacientes con lupus, es la neutropenia.
mentaron el riesgo de desarrollar IM alrededor de La tabla 25-2 muestra la frecuencia de algu-
2 veces más que en los sujetos sanos sin aCL; tal nas manifestaciones clínicas vaso-oclusivas y
riesgo fue independiente del tabaquismo, la ten- hemocitopénicas en el SAF primario y sus dife-
sión arterial sistólica y de los niveles séricos de rencias con el secundario a LES.
lipoproteínas de alta y baja densidad.
Varios autores han mostrado que los pacien- 4.3. Otras manifestaciones
tes con LES y aCL tienen mayor prevalencia de
vegetaciones valvulares que los pacientes Algunas manifestaciones clínicas del SAF podrían
seronegativos. Igualmente, en un estudio deberse a la unión del anticuerpo a fosfolípidos
ecocardiográfico de 55 pacientes con SAFP hubo presentes en el sistema nervioso central o en el
una prevalencia del 38% de vegetaciones trofoblasto. Éstas incluyen la mielitis transversa,
valvulares, particularmente de las válvulas mitral desmielinización, la pérdida fetal durante el pri-
y aórtica, y sólo del 4% en el mismo número de mer trimestre y, tal vez, algunos embarazos
personas sanas. anembriónicos.
Los pacientes con LES y AL o con aCL po-
sitivos tienen mayor frecuencia de microtrombos
glomerulares, pero no de nefritis lúpica. En un 5. LABORATORIO
grupo de 667 pacientes con LES, hubo asociación
negativa de aCL séricos y síndrome nefrótico, Los ensayos que detectan anticuerpos aFL
quizá debida a la excreción urinaria de los aCL tienen importancia porque ayudan al médico en el
IgG. Además de los microtrombos glomerulares, diagnóstico del SAF. Estos anticuerpos se pueden
los pacientes con SAFP pueden tener lesiones tipo detectar mediante ensayos de fase sólida (aCL) o
microangiopatía trombótica o proliferación por medio de pruebas de hemostasia que detectan
mesangial. la prolongación de reacciones de la coagulación
Las trombosis hemorrágicas de las glándu- en las que los fosfolípidos aniónicos actúan como
las suprarrenales son alteraciones bien reconoci- catalizadores, y que no pueden ser corregidas con
das en el SAF primario. Por ejemplo, de 38 casos plasma normal (AL).
con hipoadrenalismo asociado a aCL, 30 tuvieron El diagnóstico de SAF se basa en un título
SAF primario, en la mayoría (70%) de los cuales de moderado a alto de aCL y/o en una prueba po-
la insuficiencia suprarrenal fue de iniciación sú- sitiva para AL (al menos en dos ocasiones distin-
bita. La obstrucción del flujo hepático secundaria tas), en pacientes que presentan alguna de las
a trombosis de venas suprahepáticas, síndrome de manifestaciones clínicas propia del SAF (punto
Budd-Chiari, es una manifestación clínica bien re- 4). El ELISA aCL, aunque ha probado ser una
conocida en los síndromes primario y secundario prueba de laboratorio altamente sensible, resulta
de anticuerpos aFL. En la actualidad se considera positiva también en otras enfermedades que in-
que el SAF primario es una de las principales cau- cluyen a saber: enfermedades del tejido conectivo,
sas de Budd-Chiari. enfermedades infecciosas como la sífilis, fiebre
Q y SIDA y en algunos síndromes inducidos por
4.2. Manifestaciones hemocitopénicas fármacos. Se sabe, sin embargo que los anticuerpos
aFL son clínicamente significativos solamente
La trombocitopenia fue la primera manifes- cuando están presentes en pacientes con SAF y
tación hemocitopénica reconocida como parte del particularmente si los títulos son elevados; es así
SAF. Algún tiempo después la anemia hemolítica que se ha intentado modificar el ensayo en mu-
autoinmune se asoció a anticuerpos aFL, particu- chas oportunidades para hacerlo más específico
larmente al isotipo IgM, que reconocen a la para el diagnóstico de SAF.
fosfatidilcolina como blanco antigénico. La sin- A continuación se revisarán las diferentes téc-
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Tabla 25-2. Frecuencia de algunas manifestaciones clínicas vaso-oclusivas y hemocitopénicas en
el SAF primario y sus diferencias con el secundario a LES.
Manifestación clínica SAF primario SAF secundario a LES p
VASO-OCLUSIVAS
Arteriales 18/41 (44%) 13/101 (13%) 0.0001*

Pérdida fetal repetida 20/25 (80%) 23/50 (46%) 0.01*
Livedo reticularis 14/44 (32%) 73/101 (72%) 0.00001*
Valvulopatía cardiaca 19/58 (37%) 29/56 (63%) <0.005**
HEMOCITOPÉNICAS
Anemia hemolítica 5/44 (12%) 28/101 (28%) 0.05*

4/58 (7%) 12/56 (21%) <0.05**
Neutropenia 0 6/56 (11%) <0.05**
Trombocitopenia 13/45 (28%) 53/101 (53%) 0.01*
* Tomado de Cardiel H, Grupo Multicéntrico de la Ciudad de México: Síndrome de antifosfolípido primario (SAFP). Informe
inicial de 51 pacientes. Grupo Multicéntrico de la Ciudad de México. Rev Mex Reumatol 1992; 7:4.
** Tomado de Vianna JL, Khamashta MA, Ordi-Ros J, Font J, Cervera R, Lopez-Soto A, Tolosa C, Juliane F, Selva A, Ingelmo M,
Hughes GRV: “Comparison of the primary and secondary antiphospholipid syndrome: a European multicenter study of 114 pa-
tients”. Am J Med 1994; 96:3-9.
nicas usadas para validar y mejorar la determina- SAF. El problema es que este ensayo es también
ción de aCL, así como aspectos concernientes a la positivo en otras enfermedades que no son SAF.
especificidad del ensayo. También se discutirán Sin embargo, debido a que los pacientes con SAF
nuevas pruebas que han demostrado ser más es- generalmente tienen niveles altos de aCL, la ma-
pecíficas para el diagnóstico de SAF. yor precisión en el diagnóstico se puede lograr
usando puntos de corte más altos para el ensayo.
5.1. Anticardiolipina por ELISA También se han empezado a usar otros antígenos
para cubrir las placas de ELISA que aumentan la
La asociación de una prueba aCL positiva con especificidad de la prueba y serán descritos en el
manifestaciones clínicas de SAF ocurre, princi- punto 5.3.
palmente, cuando los títulos de aCL son modera- El primer ensayo de aCL fue un radioin-
dos o altos, particularmente si son del isotipo IgG, munoensayo. Muchos laboratorios adoptaron el
que es más prevalente que el IgM. Sin embargo, ensayo de inmediato y esto acarreó la aparición
existen reportes de que la presencia de aCL de tipo de algunos problemas. Por ejemplo, con la técni-
IgA y IgM ocasionalmente también están asocia- ca utilizada, interpretación de los resultados, etc.
dos con manifestaciones clínicas de SAF. Para asegurar que la prueba presentaba valor diag-
Frecuentemente se encuentra que los resul- nóstico para el SAF, sería entonces necesario iden-
tados se expresan en rangos de positividad y ade- tificar anticuerpos por isotipo y cuantificar los re-
más en unidades GPL y MPL. Se ha demostrado sultados. También se destacó la necesidad de es-
que la variación entre laboratorios es menor en tablecer cuáles eran los métodos válidos así
estos casos. como procedimientos estandarizados para reali-
La prueba aCL es sensible y se lo encuentra zar esta determinación. Se llevó a cabo entonces,
positivo en más del 80-90% de los pacientes con el primer taller internacional de estandarización
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en 1986, seguido por otros dos talleres del mismo mente un 10-16% de los pacientes con SAF son
tipo. AL positivo y negativo para aCL y alrededor de
Desde el momento que el ensayo se puso en un 25 % son solamente positivos para aCL.
marcha, se han hecho algunos cambios tendientes
a: reducir la unión inespecífica, estandarizar la 5.3. Pruebas de laboratorio más específicas
cuantificación de los resultados y los tiempos y para el diagnóstico de SAF
temperaturas de incubación. Se recomendó, por
ejemplo, el uso de suero fetal bovino en vez de Como se destacó anteriormente, uno de los
gelatina en la solución de bloqueo y en el diluyente mayores problemas del ensayo de ELISA para aCL
porque ello mejoraba la unión de los anticuerpos es el número de falsos positivos que presenta, es
a los FL. Este fenómeno fue atribuido posterior- decir una gran variedad de pacientes con enfer-
mente a la presencia en el suero de β2GPI. Tam- medades que no son SAF, particularmente de ori-
bién se enfatizó en la necesidad de estandarizar el gen infeccioso tienen aCL positivos. Últimamen-
procedimiento para obtener valores cuantitativos te se han desarrollado modificaciones al ensayo
precisos, dada la importancia de esos valores en de aCL. Éstas incluyen por ejemplo, cubrir las pla-
el diagnóstico apropiado de la enfermedad. cas β2GPI, con fosfatidilserina o con una mezcla
de fosfolípidos aniónicos (APhL® ELISA Kit) en
Estandarización del ensayo de aCL por ELISA vez de cardiolipina, y estas modificaciones han
resultado en una mayor especificidad del ensayo.
En el primer taller de estandarización de aCL, Estudios publicados que utilizan
se discutieron y estudiaron los métodos que de- β2GPI+como antígeno, particularmente cuando se
bían usarse para medir los títulos de aCL. Se esta- cubren placas de poliestireno de “high binding” o
blecieron unidades de medida, y se propuso el uso oxidadas, han demostrado que el ensayo es relati-
de seis calibradores para que los laboratorios en vamente específico para la detección de
distintas partes del mundo pudieran realizar la de- anticuerpos presentes en pacientes con SAF. Es-
terminación de aCL con mejor precisión. En el tudios publicados provenientes de distintos labo-
segundo taller se demostró que cuando los aCL se ratorios indican que la sensibilidad del ensayo
median en forma semicuantitativa, en vez de cuan- varía del 40 al 90%. La especificidad también va-
titativa, era posible obtener mejor acuerdo (corre- ría entre los distintos grupos de investigadores,
lación o precisión) en los resultados obtenidos en dependiendo de la selección de los sueros de los
distintos laboratorios. En el tercer y cuarto taller pacientes y de la técnica utilizada. Varios estudios
se discutieron temas controvertidos, particular- han demostrado que el ensayo que utiliza la mez-
mente con respecto a la especificidad del ensayo, cla de fosfolípidos aniónicos es un método sensi-
los antígenos que estos anticuerpos reconocen y ble y específico para la identificación de pacien-
se analizaron y compararon equipos comerciales tes con SAF.
para la detección de aCL.
5.4. ¿Qué pruebas de laboratorio se deben usar
5.2. Anticoagulante Lúpico en el diagnóstico de SAF?
El AL está presente en el SAF con menos La correcta y precisa identificación de pa-

frecuencia que aCL. Se sabe que el AL es una prue- cientes con SAF es importante ya que estos pa-
ba más específica para la detección de anticuerpos cientes deben someterse a tratamientos para pre-
aFL, ya que generalmente no se encuentra positi- venir la incidencia de trombosis a repetición, que
va en enfermedades que no sean el SAF. Este en- incluyen anticoagulación de por vida, o debe de-
sayo de AL mide la habilidad de los anticuerpos cidirse si tratar o no a una mujer embarazada para
aFL de prolongar las reacciones de la coagulación prevenir la recurrencia de pérdidas fetales. Ade-
dependientes de FL. más, existen muchas otras causas de trombosis y
En publicaciones recientes, se ha demostra- más aún de pérdidas fetales. Es entonces impor-
do que los anticuerpos aFL son heterogéneos y tante realizar el diagnóstico de SAF con precisión.
que los dos tipos de anticuerpos tal vez sean enti- En general se acepta que el AL y el ensayo de aCL
dades distintas. Se sabe también que aunque la por ELISA se deben usar para confirmar el diag-
mayoría de los pacientes con SAF tienen positi- nóstico presuntivo de SAF.
vas esas dos pruebas de laboratorio, aproximada- En resumen, el diagnóstico de SAF se puede
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Sin título-2 432 5/26/06, 10:26 AM

confirmar en pacientes que presenten síntomas clí- • Pacientes con manifestaciones clínicas de
nicos de SAF (trombosis arteriales y/o venosas y/ SAF pero con pruebas de AL y aCL negati-
o pérdidas fetales) y que tengan un título de me- vas.
dio a alto de aCL (particularmente IgG, más de 40
unidades GPL) y/o AL positivo. Sin embargo, hay El algoritmo mostrado en la figura 25-3
situaciones en las que la confirmación del SAF muestra que primero se deben realizar las pruebas
puede obtenerse con uno de los ensayos más es- de aCL y de AL. Si estas pruebas (cualquiera de
pecíficos que se discutieron en la sección ante- las dos) son negativas, se debe realizar una prue-
rior, el ELISA para anticuerpos anti-b2GPI o el ba más específica que pueden incluir el ensayo de
APhL® ELISA Kit: anti-b2GPI o el APhL® ELISA Kit. Debido a que
la sensibilidad del citado “kit” es similar a la del
• Pacientes con trombosis venosas y/o arteriales ensayo de aCL, aquel ensayo que usa la mezcla
o con pérdidas fetales que son positivos ba- de FL puede remplazar al aCL y usarse en el pri-
jos IgG para aCL, o solamente positivos para mer nivel junto con el AL.
IgM o IgA aCL.
• Pacientes que presentan manifestaciones clí-
nicas no frecuentes en el SAF como por ejem- 6. TRATAMIENTO (Antonio R. Cabral)
plo trombocitopenia, tromboflebitis,
ateroesclerosis, pérdidas fetales en el primer Además de su relevancia biológica, el cono-
trimestre, livedo reticularis, úlceras en las cimiento de que el SAF es parte del lupus erite-
piernas, corea, lesiones cardíacas valvulares, matoso tiene gran importancia terapéutica, ya que
en ausencia de manifestaciones clínicas pri- las manifestaciones de éste, particularmente las
marias de SAF. vaso-oclusivas, requieren tratamiento antiagre-
Figura 25-3. Algoritmo de la secuencia de diagnóstico de laboratorio en pacientes que presentan clínica de SAF. Tomado de:
Harris EN, Pierangeli S. “Equivocal” Antiphospholipid Syndrome. J Autoimmunity 15: 81-5, 2000.
433
Sin título-2 433 5/26/06, 10:26 AM

gante plaquetario y/o anticoagulante y no el no refleje el real estado de anticoagulación; por
corticoesteroideo o el inmunosupresor. Esta última ello, se pueden determinar los niveles del factor X
noción deriva de que el bajar los niveles de cromogénico y del tiempo de protrombina-
anticuerpos aFL no tiene efecto positivo en las proconvertina. La decisión de iniciar tratamiento
manifestaciones del síndrome. Por otra parte, para anticoagulante debe considerar el hecho de que
que tales niveles bajen se requieren dosis mayores puede necesitarse a largo plazo y tal vez de por vida.
de corticoesteroides e incluso de inmunosupresores La suspensión de los anticoagulantes pide mucha
a largo plazo, quizá mayor al que lo requieren las prudencia, debe hacerse gradualmente y evitar la
manifestaciones clínicas clásicas del lupus. administración de vitamina K, pues la suspensión
La pérdida fetal repetida se puede prevenir repentina del tratamiento anticoagulante puede in-
mediante la administración de aspirina a dosis de ducir hipercoagulabilidad generalizada grave.
65 a 100 mg/día. Para ello, la aspirina debe ini-
ciarse temprano en el embarazo y, de preferencia,
antes. La administración de heparina subcutánea LECTURAS SUGERIDAS
durante el embarazo aumenta las probabilidades
de tener productos vivos y puede disminuir la apa- Alarcón-Segovia, D.; Delezé, M.; Oria, C.V.;
rición de preeclampsia. Pese a su costo, se favore- Sánchez-Guerrero, J.; Gómez-Pacheco, L.;
ce el uso de heparina de bajo peso molecular dada Cabiedes, J.; Fernández, L.; Ponce de León, S.,
la duración que deberá tener su administración. “Antiphospholipid antibodies and the
Otra forma de tratamiento que puede aumentar las antiphospholipid syndrome in systemic lupus
probabilidades de éxito es la administración de erythematosus. A prospective analysis of 500 con-
gamaglobulina endovenosa. El alto costo, sin em- secutive patients”, Medicine 1989; 68:353-365.
bargo, limita su uso a situaciones elitistas. Se ha
propuesto a la prednisona para el tratamiento de Alarcón-Segovia, D.; Pérez-Vázquez, M.E.; Villa,
la pérdida fetal, pero esta medida no confiere ven- A.R.; Drenkard, C.; Cabiedes, J., “Preliminary
taja alguna; de hecho, su uso durante toda la ges- classification criteria for the antiphospholipid syn-
tación confiere mayor riesgo de daño que de be- drome within systemic lupus erythematosus”,
neficio. Semin Arthritis Rheum 1992; 21:275-286.
Debido a que la exposición de fosfolípidos
aniónicos en la superficie de las plaquetas activa- Alarcón-Segovia, D., “On the catastrophic adjec-
das o agregadas parece tener un papel crucial en tive for the antiphospholipid syndrome”, Clin Exp
la patogenia de la trombocitopenia, se ha propuesto Rheumatol 1993; 11:587-588.
tratar ésta con aspirina a dosis bajas. Los resulta-
dos positivos de esta medida en pacientes con SAF Amengual, O.; Atsumi, T.; Khamashta, M.; Hughes,
primario no se han reproducido en los del secun- G., “Clinical significance of anti-B2 glycoprotein I
dario a LES, probablemente debido a los varios antibodies”, Ann Med Intern 1996; 147: 15-17.
autoanticuerpos antiplaquetarios presentes en el
suero de estos pacientes. En pacientes con LES el Asherson, R.A., “The catastrophic
tratamiento de la trombocitopenia, como el de la antiphospholipid syndrome” (Editorial), J
anemia hemolítica, sí requiere corticoesteroides a Rheumatol 1992; 19:508-512.
dosis altas por tiempos variables y descensos len-
tos después de la recuperación, así como Cabiedes, J.; Cabral, A.; Alarcón-Segovia, D.,
inmunosupresores u otras terapias como el “Clinical manifestations of the antiphospholipid
danazol, la gamaglobulina endovenosa y, como syndrome in patients with systemic lupus erythe-
medida extrema aunque no siempre efectiva, matosus associate more strongly with anti-β2 gly-
esplenectomía. coprotein 1 than with antiphospholipid antibod-
El tratamiento preventivo de la trombosis por ies”, J Rheumatol 1995; 22: 1899-1906.
SAF es aún muy imperfecto. Parece haber con-
senso, sin embargo, en que requiere anticoa- Cabral, A.R.; Cabiedes J., Alarcón-Segovia, D.,
gulantes a dosis ajustadas para obtener una inten- “Hemolytic anemia related to an IgM autoantibody
sidad cercana al 3.0 de INR (“international to phosphatidylcholine that binds in vitro to stored
normalization ratio”). Debe tomarse en cuenta que and to bromelain-treated erythrocytes”, J Autoim-
en presencia de anticoagulante lúpico, el INR quizá munity 1990; 3:773-787.
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436
Sin título-2 436 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 26
CITOPENIAS INMUNES
Iván Palomo G., Jaime Pereira G. y Marcela Vásquez R.
1. Introducción 3.2. Trombocitopenias inmunes

2. Anemias hemolíticas inmunes 3.2.1. Trombocitopenias aloinmu-
2.1. Sistemas antigénicos de los gló- nes
bulos rojos 3.2.2. Trombocitopenias autoin-
2.2. Anemias hemolíticas inmunes munes
2.2.1. Anemias hemolíticas aloin- 4. Neutropenias inmunes
munes 4.1. Sistemas antigénicos de los
2.2.2. Anemias hemolíticas autoin- neutrofilos
munes 4.2. Neutropenias inmunes
3. Trombocitopenias inmunes 4.2.1. Neutropenias aloinmunes
3.1. Sistemas antigénicos de las 4.2.2. Neutropenias autoinmunes
plaquetas
437
Sin título-2 437 5/26/06, 10:26 AM

438
Sin título-2 438 5/26/06, 10:26 AM

RESUMEN
Las citopenias (anemia, trombocitopenia y leucopenia) pueden estar asociadas a mecanis-

mos inmunes. En este capítulo se describen los antígenos más relevantes de los glóbulos rojos,
plaquetas y neutrófilos y las citopenias mediadas por alo y autoanticuerpos en cada tipo celular.
Se privilegia la información sobre fisiopatología más que sobre diagnóstico y tratamiento.
1. INTRODUCCIÓN oxígeno. Las anemias pueden ser clasificadas en

tres grupos de acuerdo al mecanismo que induce
En general la disminución de los glóbulos rojos la disminución de los eritrocitos: Anemias
(anemias), de las plaquetas (trombocitopenia) y hipoproliferativas (disminución en la producción
de los leucocitos (leucopenias) se asocian con dos de hematíes), Anemias hemolíticas (destrucción
mecanismos fisiopatológicos: Disminución de la aumentada de eritrocitos) y Anemias por
producción en la médula ósea y aumento de la hemorragias. En las Anemias Hemolíticas (AH),
destrucción a nivel periférico. En este último caso la destrucción puede ocurrir intravascularmente
los eritrocitos, plaquetas y granulocitos pueden ser o en el bazo y desde el punto de vista fisiopa-
el blanco de anticuerpos (alo o autoanticuerpos) tológico se les puede clasificar en dos grupos; AH
que promueven su destrucción o remoción acele- intracorpusculares que corresponde a alteraciones
rada desde la circulación. En este capítulo se abor- propias de los hematíes (membranopatías,
da la fisiopatología y se esboza el cuadro clínico, enzimopatías y hemoglobinopatías) y AH
diagnóstico y tratamiento de cada una de las extracorpusculares, en las cuales los glóbulos rojos
citopenias inmunes: Anemias hemolíticas inmu- son normales y factores externos a la célula son
nes, Trombocitopenias inmunes y Neutropenias los que inducen la hemólisis. Las AH extracor-
inmunes. pusculares se pueden clasificar en: no inmunes
(destrucción mecánica, agentes infecciosos,
componentes plasmáticos alterados y toxinas) e
2. ANEMIAS HEMOLÍTICAS INMUNES inmunes; en este último grupo participan
anticuerpos antieritrocitarios (alo o autoanti-
Los glóbulos rojos son células anucleadas y cuerpos) que provocan las denominadas Anemias
bicóncavas de, aproximadamente, 7,5 µm de Hemolíticas Inmunes (AHI).
diámetro; tienen como función fundamental el
transporte de oxígeno a los tejidos. Presentan una 2.1. Sistemas antigénicos de los glóbulos rojos
sobrevida de alrededor de 120 días, periodo
después del cual son retirados desde la circulación Se han descrito más de 250 antígenos
por el Sistema Fagocítico Mononuclear (SFM). eritrocitarios que se agrupan en 25 sistemas
En condiciones normales la masa de glóbulos sanguíneos, 7 colecciones y 2 series. Los antígenos
rojos (hematíes o eritrocitos) circulante permanece eritrocitarios residen en moléculas de diversa
constante gracias a los mecanismos de control, los estructura y función. Alguno de ellos además de
cuales están finamente regulados para satisfacer expresarse en glóbulos rojos lo hacen en tejidos
los requerimientos corporales de oxígeno. no eritroides; en la mayoría de los casos el rol
Anemia, es un término usado para denotar biológico sobre las células es desconocido. La
una condición asociada a la disminución del bioquímica y la genética molecular han permitido
número de eritrocitos y como consecuencia de la establecer la estructura y genética de la mayoría
hemoglobina disponible para el transporte de de estos antígenos.
439
Sin título-2 439 5/26/06, 10:26 AM

Los sistemas sanguíneos pueden ser divididos especificidad antigénica reside en estructuras
de acuerdo a la naturaleza bioquímica de los oligosacáridas, producto de la acción de varias
antígenos. También se les puede clasificar de glicosiltransferasas que actúan secuencialmente
acuerdo a la función del producto génico que da sobre el tetrasacárido precursor o paraglobósido.
origen al antígeno, en cinco categorías (tabla 26- La síntesis de estos antígenos requiere de la acción
1). Recientemente se han incorporado algunos de de enzimas codificadas por genes ubicados en los
los antígenos eritrocitarios a la nomenclatura CD cromosomas 9 (ABO) y 19 (H).
("cluster of diferentiation"). En 1990 se dilucidaron las bases genéticas
de los tres principales alelos del locus ABO. Los
Sistema ABO. El sistema ABO sigue siendo el antígenos del sistema han sido identificados en
más importante en la práctica transfusional, la glóbulos rojos, en secreciones y sobre la mem-
Tabla 26-1. Clasificación funcional de los productos génicos de sistemas sanguíneos
Función Sistema (símbolo ISBT)* Número de Nomenclatura

antígenos CD
Transporte o canales Rh (RH) 51 CD240

Kidd (JK) 3
Diego(DI) 18 CD233
Colton (CO) 3
Kx (XK) 1
Receptores MNSs (MNS) 42 CD235

P (P1) 1
Duffy (FY) 6 CD234
Cromer (CROMER) 10 CD55
Knops (KN) 5
Adhesión Lutheran (LU) 20

Xg (XG) 1
Landsteiner-Wiener 3 CD242
(LW) 2
Indian (IN) CD44
Enzimas ABO (ABO) 4

Kell (KEL) 26 CD238
Lewis (LE) 6 CD174
Yt (YT) 2
Hh (H) 1 CD173
Proteínas Gerbich (GE) 7 CD236

Estructurales
Otros Scianna (SC) 3

Dombrock (DO) 5
Chido/Roger (CH/RG) 9
OK
Raph
* ISBT = International Society of Blood Transfusion
440
Sin título-2 440 5/26/06, 10:26 AM

brana de células epiteliales y endoteliales. Además,
estructuras antigénicas similares han sido
detectadas en diversos organismos tales como
microorganismos y plantas. La estructura más
detallada de los antígenos de este sistema
sanguíneo se ha mostrado en el capítulo 5.
Sistema Rh. El sistema Rh es el más polimórfico

e inmunogénico de los sistemas sanguíneos
humanos y el segundo en importancia clínica. El
sistema está compuesto por aproximadamente 50
antígenos, los cuales son codificados por 2 genes
estrechamente unidos, ubicados en el cromosoma
1; uno de ellos codifica la proteína RhD que
expresa el antígeno D y sus variantes, y el otro
codifica la proteína RhCE que expresa los
antígenos C, c, E, e y sus variantes. Las proteínas
RhD y RhCE tienen pesos moleculares que
fluctúan de 30 a 34 kDa (figura 26-1). Se ha
descrito la glicoproteina Rh 50, llamada
glicoproteína asociada al Rh (RhAG, CD241),
codificada por un gen ubicado en el cromosoma
6 y que sería esencial para el ensamblaje de las
proteínas Rh en la membrana eritrocitaria, así
como para la inmunogenicidad. Existe además un
grupo de "proteínas accesorias del Rh" confor-
madas por un grupo de otras glicoproteínas
(glicoproteína LW, glicoforina B, banda 3,
proteínas asociadas a integrinas y glicoproteína
Duffy); por esta razón se considera al sistema Rh Figura 26-1. Topología de las proteínas RhD, RhCE y
glicoproteína Rh50 (RhAG). Las proteínas del sistema Rh
como un "complejo de proteínas Rh". presentan doce regiones transmembrana. Los círculos indican
Las proteínas RhD y RhCE tienen un 92% los 35 aminoácidos diferentes entre la proteína D y la CE. En
de homología entre sí y una homología del 38,5% la proteína CE se indican los aminoácidos en posición 103 y
y 39.2% con la RhAG respectivamente, además 226 donde radica el polimorfismo C/c y E/e, respectivamente.
ellas muestran una gran similitud en la topología,
por ejemplo todas presentan 12 regiones
transmembrana, sugiriendo que todas pertenecen
a una misma familia de proteínas. estos cuadros clínicos son para antígenos de los
El antígeno D es el más importante del sistemas Kell, Duffy, Kidd y MNS.
sistema. En la población blanca aproximadamente
el 15% de los individuos son designados como 2.2. Anemias Hemolíticas Inmunes (AHI)
Rh negativos por carecer de la proteína D en sus
glóbulos rojos, y el 80% de ellos se aloinmunizan Las Anemias Hemolíticas Inmunes (AHI) se
en respuesta al contacto con eritrocitos Rh pueden agrupar según participen alo o autoan-
positivos. Estos aloanticuerpos son usualmente ticuerpos (tabla 26-2). Las Anemias Hemolíticas
del tipo IgG y pueden causar reacciones Aloinmunes, son producidas por anticuerpos que
hemolíticas (ver punto 2.2.1). aparecen en una persona que se expone a antígenos
Los demás sistemas sanguíneos cobran encontrados en la misma especie, pero que no están
importancia clínica en la medida en que los presentes en sus propias células. Por su parte las
anticuerpos desarrollados causen reacciones Anemias Hemolíticas Autoimunes se producen por
hemolíticas transfusionales o enfermedad alteraciones del sistema inmune que inducen la
hemolítica del recién nacido. La especificidad de formación de autoanticuerpos (ver capítulo 23).
los anticuerpos que más frecuentemente causan
441
Sin título-2 441 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 26-2. Clasificación de la Anemias al antígeno D del sistema Rh, dado que los
Hemolíticas Inmunes hematíes fetales Rh positivos, ABO incompati-
bles, serían rápidamente hemolisados en la circu-
Anemias hemolíticas aloinmunes lación materna por acción de los anticuerpos na-
Enfermedad hemolítica del recién nacido turales, antes que el antígeno D estimule al siste-
Reacción hemolítica transfusional ma inmune materno.
El neonato que sufre EHRN presenta anemia,
Anemias hemolíticas autoinmunes ictericia y hepatoesplenomegalia; el grado de icte-
Por anticuerpos calientes ricia se correlaciona con la severidad de anemia.
Primaria El diagnóstico se basa en la detección prena-
Secundaria tal de anticuerpos maternos mediante la prueba
Síndromes linfoproliferativos de antiglobulina indirecta (PAI) Estudios de ul-
Mesenquimopatías trasonido (ecografías) y el nivel de bilirrubina en
Infecciones virales líquido amniótico pueden ayudar a predecir la se-
Enfermedades inmunológicas veridad de la enfermedad y a orientar el manejo
obstétrico de las embarazadas. En la etapa
Por anticuerpos fríos postnatal, el estudio de sangre de cordón permite
Enfermedad de las aglutininas frías detectar la anemia, reticulocitosis y presencia de
Hemoglobinuria paroxística a frigori eritroblastos; la prueba de antiglobulina directa
(PAD) suele ser positiva.
Inducidas por drogas El tratamiento en el período prenatal, si no
es posible interrumpir el embarazo, es la transfu-
sión intrauterina siempre que se cumplan deter-
minadas condiciones. En el período postnatal, se
2.2.1. Anemias Hemolíticas Aloinmunes utiliza la fototerapia si la hiperbilirrubinemia es
leve y en casos más graves se recurre al recambio
Dos son las AHI cuyo mecanismo está sanguíneo.
mediado por aloanticuerpos, la Enfermedad Para la prevención de la EHRN inducida por
Hemolítica del Recién Nacido (EHRN) y las anti-D, existen protocolos de profilaxis bien esta-
Reacciones Hemolíticas Transfusionales. blecidos que consisten en la inmunización pasiva
de madres Rh negativas, con anticuerpos anti-D
a) Enfermedad hemolítica del recién nacido comerciales (Rho IgG), cuyo objetivo es prevenir
que células Rh positivas del feto o recién nacido
La EHRN es una condición en la cual los gló- estimule la respuesta inmune materna y que los
bulos rojos del feto o del neonato son destruidos anticuerpos formados ocasionen problemas en
por anticuerpos maternos, dirigidos contra un embarazos futuros.
antígeno presente en sus glóbulos rojos, el cual es
heredado del padre. Solamente los anticuerpos IgG b) Reacción hemolítica transfusional
son transportados activamente a través de la
placenta y por lo tanto capaces de sensibilizar los Una reacción hemolítica transfusional ocu-
glóbulos rojos fetales que posteriormente son re- rre con posterioridad a la transfusión de glóbulos
tirados por el sistema fagocítico mononuclear rojos portadores de antígenos extraños para el sis-
(SFM). tema inmune del receptor, frente a los cuales éste
Los aloanticuerpos maternos pueden haberse está aloinmunizado. De acuerdo al momento de
generado por embarazos o transfusiones previas. aparición de los síntomas, éstas se clasifican como
La incompatibilidad ABO es la causa más inmediatas o tardías.
común de EHRN, la que usualmente es leve, mien-
tras que el anti-D es el anticuerpo asociado con la Reacción hemolítica transfusional inmediata.
mayoría de los casos de EHRN moderada a seve- Este tipo de reacciones ocurre cuando los
ra. Anticuerpos con otras especificidades también anticuerpos están presentes en el plasma del pa-
pueden causar esta enfermedad. Sin embargo, ciente en títulos altos. La causa más común de este
cuando la madre es ABO incompatible con el feto, tipo de reacción es la incompatibilidad ABO, la
disminuye la incidencia de inmunización frente que ocasiona el 86% de las muertes por reaccio-
442
Sin título-2 442 5/26/06, 10:26 AM

nes hemolíticas transfusionales. También pueden gran importancia en su prevención, considerar el
estar involucrados anticuerpos con especificidades historial transfusional, de trasplantes y de emba-
anti-Kell, anti-Jka y anti-Fya. razos del paciente.
Los anticuerpos que ocasionan estas reaccio-
nes son principalmente de clase IgM, ellos reac- 2.2.2. Anemias Hemolíticas Autoinmunes
cionan con su antígeno específico activando el sis-
tema del complemento (ver capítulo 18), la coa- Una de las formas más usadas en la clasifica-
gulación y el sistema de las cininas. La activación ción de las Anemias Hemolíticas Autoinmunes
del complemento induce la formación el comple- (AHAI) es de acuerdo a la temperatura en que ac-
jo de ataque a membrana (C5b6789) que provoca túan los anticuerpos involucrados; así se distin-
hemólisis intravascular en forma inmediata, con guen las AHAI por anticuerpos calientes y AHAI
liberación de hemoglobina, estroma y enzimas por anticuerpos fríos. Adicionalmente se incluyen
eritrocitarias. Producto de la activación del comen este grupo las AHAI inducidas por fármacos.
plemento también se libera C3a y C5a que actúan
como potentes anafilotoxinas, responsables de los a) AHAI por anticuerpos calientes
síntomas de fiebre, escalofríos, hipotensión y
shock. El estroma eritrocitario contiene sustancias El 70-75% de las anemias hemolíticas
tromboplásticas que activan la cascada de la coa- autoinmunes son provocadas por anticuerpos ca-
gulación induciendo Coagulación Intravascular lientes; se presentan a cualquier edad y afectan
Diseminada (CID). El complejo antígeno-anticuer- con mayor frecuencia a las mujeres. De ellas
po formado, también activa el sistema de las aproximadamente el 30% son de origen idiopático
cininas, liberando bradicinina, la que provoca y el 70% restante son secundarias a otras enfer-
hipotensión y liberación de catecolaminas que medades, tales como síndromes linfoprolifera-
causan vasoconstricción en órganos tales como el tivos, enfermedades autoinmunes e infecciones
riñón; esto sumado a la hipotensión y a la CID, (tabla 26-2).
inducen un cuadro de insuficiencia renal aguda. La destrucción eritrocitaria ocurre como con-
secuencia de la fagocitosis de los glóbulos rojos
Reacción hemolítica transfusional tardía. Las sensibilizados con autoanticuerpos IgG. Los res-
reacciones hemolíticas transfusionales tardías son ponsables de la eritrofagocitosis son macrófagos
más leves que las inmediatas. Se producen cuan- (presentan receptores para Fc de IgG: FcγR), prin-
do el título de los aloanticuerpos presentes en el cipalmente esplénicos; por ello la hemólisis es de
suero es bajo no siendo detectados por las prue- tipo extravascular y como consecuencia se obser-
bas pre-transfusionales, luego de la transfusión de va hiperbilirrubinemia.
sangre incompatible la respuesta anamnéstica hace La PAD suele ser positiva en la mayoría de
aumentar rápidamente los títulos del anticuerpo. los casos, confirmando la presencia de glóbulos
Los glóbulos rojos transfundidos sufren hemólisis rojos sensibilizados con IgG y en algunos casos,
extravascular porque se sensibilizan con anti- adicionalmente, con fracciones del complemen-
cuerpos IgG o fracciones del complemento, sien- to; la PAI puede ser positiva cuando hay una
do secuestrados por los macrófagos hepáticos o hemólisis activa.
esplénicos. Los anticuerpos están dirigidos con- En caso de existir una enfermedad asociada
tra antígenos de los sistemas Kell, Rh (D, E y c), a la AHAI, el tratamiento de ésta puede revertir el
Duffy y Kidd. Este tipo de reacciones transfu- proceso hemolítico. Además se requiere el uso de
sionales se presenta con una incidencia de 1 en corticoesteroides, los que actúan inhibiendo la sín-
3.200 transfusiones. tesis de anticuerpos y la fagocitosis de hematíes.
Los pacientes pueden presentar fiebre mo- La esplenectomía está indicada en casos de fra-
derada con escalofríos, ictericia leve, eventual- caso a otros tratamientos.
mente se puede presentar hemoglobinemia y
hemoglobinuria. b) AHAI por anticuerpos fríos
Para el diagnóstico es necesario una muestra
postransfusional en la cual se detectará anemia, Entre las AHAI por anticuerpos fríos se re-
hiperbilirrubinemia y una PAD positiva. conocen dos cuadros clínicos, Enfermedad de las
Debido a que este tipo de reacciones ocurre aglutininas frías y Hemoglobinuria paroxística a
por una respuesta inmune secundaria, resulta de frigori.
443
Sin título-2 443 5/26/06, 10:26 AM

Enfermedad de las aglutininas frías. La enfer- como consecuencia de una reacción autoinmune
medad por aglutininas frías representa aproxima- tras la administración de ciertos fármacos. Las
damente el 15% de las AHAI. Esta anemia puede AHAI inducidas por fármacos representan entre
ser idiopática o secundaria a infección por el 10-20% de las AHAI.
Mycoplasma pneumoniae o Virus de Epstein Barr Existen tres mecanismos principales por los
(Mononucleosis infecciosa). La especificidad de cuales las drogas pueden inducir la formación de
estas crioaglutininas es anti-I en un 90% y anti-i los anticuerpos asociados a AHAI (figura 26-2).
en un 8%.
En su patogenia participan anticuerpos IgM, Complejos inmunes. El fármaco se une a proteí-
que a temperaturas entre 10 y 30°C se unen a los nas plasmáticas y estimula la formación de un
glóbulos rojos e inducen hemólisis (principalmente anticuerpo anti-droga , el complejo inmune for-
intravascular) mediada por complemento. Los mado, se une inespecíficamente al glóbulo rojo u
episodios de hemólisis ocurren después de la ex- otras células por su región Fab conformando un
posición a temperaturas bajas que provocan la complejo trimolecular (droga-anticuerpo-antígeno
aglutinación de los glóbulos rojos con obstrucción de membrana) capaz de activar el complemento
de la circulación capilar que se manifiesta por una con la consiguiente hemólisis intravascular. La
coloración azul o roja de las extremidades (fenó- droga interactuaría de forma no covalente con
meno de Raynaud). componentes de membrana generando un
En el laboratorio es posible evidenciar aglu- neoantígeno que estimularía al sistema inmune.
tinación de los glóbulos rojos a temperatura am- La primera droga que se relacionó con este
biente, además se encuentra positiva la PAD, ha- mecanismo, también llamado "espectador inocen-
bitualmente por complemento (título del anticuer- te" fue estibofeno, posteriormente también se han
po mayor a 1:1000 a 4°C). descrito otros fármacos, entre ellos: quinidina,
En la enfermedad idiopática no hay trata- quinina, cefotaxima, clorambucil, clorpromacina,
miento específico, salvo que el paciente se man- isoniacida, rifampicina, sulfonamidas y tiazidas.
tenga en ambiente temperado. Dado que casi la En el laboratorio se puede encontrar la PAD
totalidad de la IgM se encuentra en circulación, positiva y la PAI negativa. En esta última situa-
en caso de ser necesario se realiza plasmaféresis. ción la prueba puede ser positiva si se preincuba
Cuando el cuadro hemolítico es secundario a otra el suero del paciente y los hematíes, en presencia
enfermedad, generalmente cederá al ser tratada de la droga y complemento.
la patología de base.
Adsorción de droga (hapteno). El fármaco o
Hemoglobinuria paroxística a frigori. Esta en- alguno de sus metabolitos se fija inespecíficamente
fermedad cuya incidencia no supera el 2%, se pro- a la superficie del eritrocito e induce la produc-
duce por la unión a los eritrocitos, después de la ción de anticuerpos IgG anti-droga, los cuales se
exposición al frío, del autoanticuerpo de Donath- unen a los glóbulos rojos cubiertos con la droga
Landsteiner, una autohemolisina bifásica de clase para posteriormente ser secuestrados por el SFM.
IgG. Los hematíes sensibilizados fijan comple- Este mecanismo se presenta en pacientes que
mento, sistema que se activa al aumentar la tem- han recibido altas dosis del fármaco. La droga más
peratura en la circulación general, provocando característica de este mecanismo es la penicilina;
hemólisis intravascular. La especificidad princi- se ha descrito también en cefalosporinas y
pal de los autoanticuerpos es anti-P, pero también tetraciclinas.
se han descrito especificidades anti-i y anti-Pr. Esta anemia cursa con la PAD positiva y la
Esta enfermedad puede tener una etiología PAI negativa. Es posible confirmar la presencia
idiopática y secundarios a infecciones virales en del autoanticuerpo si los hematíes a emplear se
niños y a sífilis no tratada en adultos. sensibilizan con la droga, antes de hacerlos reac-
La prueba de Donath-Landsteiner es positiva cionar con el suero del paciente.
y permite pesquisar la hemolisina bifásica. La PAD
es positiva y la PAI puede serlo si se realiza a 4°C. Formación de autoanticuerpos. En este meca-
nismo la droga induce la formación de
c) AHAI inducida por fármacos autoanticuerpos IgG que reconocen antígenos
eritrocitarios (principalmente antígenos del siste-
Este tipo de anemias hemolíticas se produce ma Rh), sin necesidad de que el fármaco esté uni-
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Sin título-2 444 5/26/06, 10:26 AM

Figura 26-2. Mecanismos de las Anemias hemolíticas autoinmunes (AHAI) inducidas por fármacos. Se han descrito tres
mecanismos por los cuales los fármacos pueden inducir AHAI: Tipo complejos inmunes, Adsorción de drogas (hapteno) y Forma-
ción de autoanticuerpos. Las drogas más representativas de cada mecanismo son estibofeno (droga a), penicilina (droga b) y alfa-
metildopa (droga c), respectivamente.
do a los hematíes. La droga más representativa de inmunoglobulinas. Avances en el estudio de labo-

este mecanismo es la alfa-metildopa, pero tam- ratorio han llevado en los últimos 15 años a una
bién se incluyen levadopa, procainamida y dro- explosión de información nueva acerca de estas
gas antiinflamatorias no esteroidales. patologías y al reconocimiento que las plaquetas
En el laboratorio es posible encontrar la PAD pueden ser destruidas por aloanticuerpos,
y la PAI positivas. autoanticuerpos y probablemente complejos inmu-
nes en diferentes situaciones patológicas.
Las plaquetas son elementos celulares
3. TROMBOCITOPENIAS INMUNES anucleados que se originan por fragmentación del
citoplasma de los megacariocitos en la médula
Desde 1950 se sabe que las plaquetas pue- ósea, desde donde pasan a la circulación y viven
den ser destruidas por procesos de tipo por 8 a 10 días antes de ser removidas por el SFM.
inmunológico. Sin embargo, el progreso para en- Miden entre 1,5 a 3 µm de diámetro y en reposo
tender la patogenia de las trombocitopenias inmu- presentan una forma discoide. Las plaquetas jue-
nes se vio retardado por problemas metodológicos gan un papel fundamental en las etapas iniciales
inherentes al estudio de la interacción plaquetas- del proceso hemostático (hemostasia primaria);
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Sin título-2 445 5/26/06, 10:26 AM

esta función la cumplen gracias a las propiedades agregación plaquetaria mediada por fibrinógeno.
de adhesión, agregación, secreción del contenido El complejo heterodimérico GPIIb-IIIa
de sus gránulos y expresión de superficie (CD41-CD61), es la proteína más abundante de la
procoagulante. La ocurrencia coordinada y regu- superficie de las plaquetas, representando alrede-
lada de estos procesos determina la formación del dor del 15% de la masa proteica de la membrana
tapón plaquetario sobre el cual actúan los factores con alrededor de 40.000-50.000 copias expresa-
plasmáticos de la coagulación para formar el tadas por las plaquetas normales en reposo. Debido
pón hemostático o trombo. a que su activación la transforma en el receptor de
fibrinógeno, su papel en la agregación plaquetaria
3.1. Sistemas antigénicos de las plaquetas es fundamental.
Además de las integrinas, las plaquetas po-
La membrana plaquetaria presenta glicopro- seen otro receptor glicoproteico de membrana, la
teínas (GP) que son fundamentales en los aspec- GPIb-IX (CD42b.c-CD42a), que pertenece a la
tos inmunológicos asociados a las plaquetas, ya familia de "proteínas ricas en leucina". Este com-
sea como receptores inmunes específicos o como plejo constituye el receptor para el factor von
blancos altamente inmunogénicos. Estas glicopro- Willebrand (FvW), considerado el mayor respon-
teínas son a su vez receptores funcionales que par- sable de la unión de las plaquetas a la matriz
ticipan en las reacciones de adhesión y agrega- extracelular. La GPIb-IX en la membrana
ción durante el proceso hemostático. En la tabla plaquetaria forma un complejo con la GPV; cada
26-3 se muestran las principales glicoproteínas y plaqueta contiene 20.000-30.000 moléculas del
sus características. complejo en su superficie.
Tabla 26-3. Características de las glicoproteínas de membrana de las plaquetas
Glicoproteína Integrina Peso molecular Función en las plaquetas

no reducido (kDa)
Ia/IIa α2β1 150/130 Receptor de colágeno
Ic/IIa α5 β 1 148/130 Receptor de fibronectina

Ic’/IIa α6 β 1 148/130 Receptor de laminina
IIb/IIIa αIIb/β3 145/95 Receptor de fibrinógeno, vitronectina,

Factor von Willebrand, fibronectina
Ib/IX 160/17 Receptor del factor von Willebrand
IV 85 Receptor de colágeno y trombospondina
V 82 Sustrato de trombina
VI 58 Principal receptor de colágeno
Al menos cinco glicoproteínas pertenecen a El complejo GPIa-IIa (CD49b-CD29), for-

la familia de moléculas de adhesión Integrinas: el mado por cadenas únicas de 167 y 157 kDa, res-
receptor de colágeno Ia-IIa, el receptor de pectivamente, ha sido demostrado como uno de
fibronectina Ic-IIa, el receptor de laminina Ic'-IIa, los receptores que median la interacción de las
el receptor de vitronectina VnR-IIIa y el receptor plaquetas con el colágeno, a través de la GPla.
activación-dependiente IIb-IIIa, responsable de la Las glicoproteínas de la membrana
446
Sin título-2 446 5/26/06, 10:26 AM

plaquetaria han demostrado ser estructuras alta- plaquetarios específicos se les asignó un nom-
mente polimórficas, por lo que aparte de ser im- bre basado en aquel del paciente en el cual fue
portantes receptores fisiológicos, constituyen es- descrito por primera vez. A medida que aumen-
tructuras en las que residen sistemas antigénicos tó el número de antisueros descritos, la confu-
específicos. sión de nombres hizo necesario adoptar un sis-
tema simplificado el cual fue propuesto por el
Los antígenos plaquetarios pueden ser divididos ICSH/ISBT (International Committee for
en dos grupos: (a) Aloantígenos compartidos con Standarization in Hematology/International
otras células sanguíneas (Ej. Antígenos de los sis- Society of Blood Transfusion). En este sistema,
temas ABH, Lewis), y células de otros tejidos (mo- a cada aloantígeno se le asignó un número HPA
léculas HLA clase I; HLA: “Human Leukocyte (“Human Platelet Antigen”) en orden
Antigen”) y (b) Aloantígenos plaquetarios espe- cronológico de descripción. Cada sistema HPA
cíficos. representa un polimorfismo bialélico debido a
una sustitución de un par de bases en el gen y
Aloantígenos compartidos con otras células como consecuencia una diferencia de un
sanguíneas aminoácido en la proteína madura. La anotación
“a” corresponde siempre al alelo de mayor fre-
Antígenos ABH, Lewis, 1 y P. Los antígenos de cuencia y la “w” representa una asignación
grupo sanguíneo A y B han sido demostrados en provisoria hasta que se describan los dos alelos
plaquetas, por serología convencional, por más del sistema.
de 50 años. Su importancia clínica se circunscribe
a un efecto muy discreto sobre la recuperación Características. La tabla 26-4 muestra los
de las plaquetas en el caso de transfusión de antígenos plaquetarios específicos descritos hasta
plaquetas ABO incompatibles. Se ha descrito ahora, su localización y base molecular. La GP
también que la administración crónica de más polimórfica es la GPIIIa, en la cual se han
plaquetas ABO incompatibles se asocia a mayor descrito al menos 8 antígenos diferentes.
tasa de refractariedad a la transfusión de La figura 26-3 muestra un esquema de las
plaquetas. GPIIb-IIIa y la GPIb-IX, en las que se indica la
ubicación aproximada de los HPA más importan-
Antígenos HLA. Las plaquetas poseen molécu- tes y los sectores donde se han ubicado
las HLA clase I, pero no clase II. Cerca del 73% autoantígenos.
del total de los antígenos HLA-A y B presentes en
sangre total, están contenidos en las plaquetas. 3.2. Trombocitopenias inmunes
Éstas contienen 10.000-20.000 moléculas/célula,
cifra inferior a la encontrada en linfocitos Las plaquetas pueden ser destruidas por me-
(>100.000/célula). Los antígenos HLA-C, gene- canismos inmunes en los que pueden participar
ralmente se expresan débilmente. Estudios mues- aloanticuerpos, autoanticuerpos, anticuerpos de-
tran que la mayor parte de los antígenos HLA cla- pendientes de droga y posiblemente complejos
se I son sintetizados endógenamente y son consti- inmunes. El denominador común de todos estos
tuyentes de la membrana; pero esto no excluye la procesos es una remoción acelerada de las
posibilidad que una pequeña proporción de plaquetas de la circulación y acortamiento de la
antígeno HLA sea adsorbida pasivamente por la supervivencia, que se traduce en una disminución
superficie plaquetaria desde el plasma. Los del número de plaquetas circulantes (trom-
antígenos HLA sobre la superficie de las plaquetas bocitopenia) cuando sobrepasa la capacidad de la
constituyen los blancos principales de los médula ósea de responder a la mayor demanda.
aloanticuerpos encontrados en pacientes En la tabla 26-5 se muestra los diferentes tipos de
politransfundidos, lo que se define como trombocitopenias inmunes, clasificadas según el
refractariedad inmune a la transfusión de tipo de anticuerpo responsable.
plaquetas.
Aloantígenos plaquetarios específicos
Nomenclatura. Históricamente, a los antígenos
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Sin título-2 447 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 26-4. Características de los aloantígenos plaquetarios específicos
Frecuencia
Sistema Alelos Sinónimos Localización Base molecular fenotípica (%)*
HPA-1 HPA-1a PlA1, Zwa GPIIIa Leu33→Pro33 97.9

HPA-1b PlA2, Zwb 28.8
HPA-2 HPA-2a Kob, Sibb GPIb Thre145→Met145 99.3
HPA-2b Koa, Siba 14.6
HPA-3 HPA-3a Leka, Baka GPIIb Ile843→Ser843 80.9
HPA-3b Lekb, Bakb 69.8
HPA-4 HPA-4a Pena, Yukb GPIIIa Arg143→Glu143 > 99.9
HPA-4b Penb, Yuka < 0.1
HPA-5 HPA-5a Brb GPIa Gln505→Lys505 99.0
HPA-5b Bra 19.7
HPA-6w HPA-6bw Caa, Tua GPIIIa Arg489→Glu489 2.4
HPA-7w HPA-7bw Mo GPIIIa Pro407→Ala407 0.2
a
HPA-8w HPA-8bw Sr GPIIIa Arg636→Glu636 < 0.01
HPA-9w HPA-9bw Maxa GPIIb Val837→Met837 0.6
“HPA-10” HPA-10bw Laa GPIIIa Arg62→Glu62 < 1.6
Groa GPIIIa Arg633→His633 < 0.25
Iya GIb Gly15→Gln15 0.4
Sita GPIa Thre799→Met799 0.25
*Frecuencia fenotípica de la población caucásica.
Figura 26.3. Esquema de las GPIIb-IIIa, GPIb-IX y GPIa-IIa. Se muestra los principales HPA (“Human Platelet Antigen”) y
las regiones reconocidas como autoantígenos.
448
Sin título-2 448 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 26-5. Trombocitopenias inmunes equimosis) y sangrado mucoso que se manifiesta
en las primeras horas de vida. En la mayoría de
los casos el PAIN es una enfermedad benigna
Trombocitopenias aloinmunes autolimitada, que remite espontáneamente entre
2-15 días; sin embargo, en casos graves puede
Púrpura aloinmune neonatal observarse hemorragia visceral e intracraneana.
Púrpura post-transfusional Esta última complicación se puede presentar en
forma antenatal o perinatal en un 10 a 20% de los
Trombocitopenias autoinmunes pacientes con PAIN, lo que puede causar daño
neurológico e incluso la muerte.
Púrpura trombocitopénico inmune primario
Agudo Patogenia. El PAIN es causado por la transferen-
Crónico cia materno-fetal de aloanticuerpos específicos
para los aloantígenos plaquetarios HPA-1b, HPA-
Trombocitopenias inmunes secundarias 2a, HPA-3a, HPA-3b, HPA-4a, HP-A4b, HPA-5a,
Enfermedades autoinmunes HPA-5b y los antígenos de baja frecuencia HPA-
Generalizadas (Ej. Lupus Eritema- 6w a HPA-10, Groa, Iya y Sita. Alrededor del 50%
toso Sistémico) de los casos de PAIN en las poblaciones caucásicas
Órgano específico (Ej. Tiroiditis) son el resultado de una incompatibilidad en el sis-
Enfermedades linfoproliferativas tema HPA-1; incompatibilidad que compromete
Leucemia linfática crónica el sistema HPA-5 es la segunda causa en estas
Linfomas poblaciones. A pesar que es muy frecuente encon-
Mieloma múltiple trar anticuerpos anti-HLA en las embarazadas, su
Tumores sólidos papel en la patogenia del PAIN es debatido y so-
Infección por HIV lamente 2 casos que pueden corresponder a PAIN
Post-transplante de médula ósea secundario a anticuerpos anti-HLA-A2 han sido
Infecciones virales descritos.
Fármacos
Evaluación de laboratorio. En el diagnóstico
biológico de las trombocitopenias inmunes en ge-
neral, se utilizan pruebas comunes a toda
3.2.1. Trombocitopenias aloinmunes trombocitopenia y métodos que permiten estudiar
Los aloantígenos plaquetarios específicos y el carácter inmunológico de su patogenia:
polimorfismos de las glicoproteínas de membra-
na juegan un papel clave en la patogenia de dife- a) Pruebas generales. El recuento de plaquetas,
rentes entidades clínicas como el Púrpura hemograma y mielograma se usa al iniciar la in-
aloinmune neonatal, Púrpura postransfusional y vestigación diagnóstica de la mayoría de las
Refractariedad a la transfusión de plaquetas. trombocitopenias. El estudio de sobrevida
plaquetaria, de uso excepcional en clínica, requiere
Púrpura aloinmune neonatal marcar in vitro plaquetas del paciente con 51Cr o
111
In; permite estudiar la sobrevida plaquetaria y el
El Púrpura aloinmune neonatal (PAIN) es o los órganos en que las plaquetas son secuestra-
una incompatibilidad feto-materna causada por das.
aloinmunización de la madre a antígenos
plaquetarios fetales. Su incidencia es de alrede- b) Estudio inmunológico. Entre los métodos
dor de 1:2.000 a 1:3.000 embarazos y a diferencia inmunológicos más importantes para el estudio
de la enfermedad hemolítica del recién nacido, de las trombocitopenias inmunes están aquellos
puede presentarse hasta en un 30% de los casos que permiten pesquisar anticuerpos anti-
durante el primer embarazo. El PAIN se presenta plaquetarios sin estudio de especificidad (IgG
típicamente como una trombocitopenia aislada en asociada a plaquetas y anticuerpos antipla-
un recién nacido (RN) aparentemente sano. En quetarios circulantes) y los que sí permiten es-
aquellos RN con trombocitopenia más profunda tudiar la especificidad de dichos anticuerpos. A
se puede encontrar sangrado cutáneo (petequias y continuación se describen los principios de los
449
Sin título-2 449 5/26/06, 10:26 AM

métodos más usados: vadas para liberarlas de anticuerpos que contiene
el plasma. El uso de altas dosis de IgG endovenosa,
• IgG asociada a plaquetas y anticuerpos puede servir como tratamiento de emergencia si
antiplaquetarios circulantes. El estudio no hay plaquetas disponibles. El tratamiento pue-
inmunológico inicial tiene como objetivo de- de ser pre y/o postnatal; en el primer caso la trans-
mostrar IgG asociada a las plaquetas (PAIgG) fusión de plaquetas es intrauterina.
o anticuerpos antiplaquetarios circulantes
(AcAP). Para medir la PAIgG existe un gran Púrpura Post-transfusional
número de técnicas que permiten cuantificar
la IgG presente en la superficie plaquetaria, o El Púrpura Post-transfusional (PPT) se ca-
la IgG total si las plaquetas son previamente racteriza por trombocitopenia aguda, grave que
solubilizadas. Para la determinación de la ocurre aproximadamente 5-10 días después de una
PAIgG de superficie, lo más frecuente es uti- transfusión sanguínea. Su incidencia se descono-
lizar pruebas de unión directa de un anticuer- ce, aunque es una condición muy poco frecuente.
po anti-IgG humana marcado con radioisó- La transfusión que gatilla esta condición puede
topo enzima o fluoresceína; la cantidad de IgG ser de cualquier hemocomponente y habitualmente
asociada a las plaquetas es directamente pro- se acompaña de una reacción transfusional febril.
porcional a la cantidad de ligando marcado En el suero del paciente se encuentran potentes
que permanece unido a las plaquetas. Para la anticuerpos antiplaquetarios, sobre el 80% de los
pesquisa de AcAP se utilizan, los mismos casos con especificidad anti-HPA-1a. La patogenia
métodos en forma indirecta. es desconocida pero se han propuesto tres teorías
para explicar la destrucción de las plaquetas
• Métodos para estudio de especificidad autólogas gatillada por la transfusión: (a) unión
antigénica. Estos métodos son capaces de de antígeno “soluble” presente en el producto san-
identificar la glicoproteína plaquetaria espe- guíneo (b) unión de complejo inmune compuesto
cífica a la que se une el anticuerpo, pero no por aloantígeno/aloanticuerpo y (c) producción de
cuantifica la cantidad de IgG unida. Se han autoanticuerpos por reactividad cruzada. Para el
descrito varios métodos: Western Blot diagnóstico se debe demostrar el anticuerpo en el
("Immunoblotting"), Inmunoprecipitación y suero del paciente; el hallazgo de una tromboci-
las técnicas de ELISA con captura de topenia grave y anticuerpos antiplaquetarios es-
antígeno. Estas últimas son los que se utili- pecíficos, especialmente anti-HPA-1a, hace muy
zan más ampliamente en el estudio de espe- probable el diagnóstico de PPT.
cificidad antigénica de las citopenias inmu-
nes de distinta etiología. Refractariedad a la transfusión de plaquetas
En casos con sospecha clínica de PAIN el La Refractariedad a la transfusión de

estudio inicial de laboratorio debe incluir la pes- plaquetas (RTP) se define como un aumento insu-
quisa de anticuerpos antiplaquetarios, idealmente ficiente e inesperado del recuento de plaquetas
usando plaquetas del padre del RN para incluir post-transfusional. En la mayoría de los casos la
antígenos de baja frecuencia. El hallazgo de remoción prematura de las plaquetas transfundidas
anticuerpos antiplaquetarios obliga a su identifi- obedece a causas no inmunes tales como septice-
cación, para lo cual se utilizan paneles de plaquetas mia, hemorragia activa, uso de drogas, espleno-
tipificadas en ensayos de ELISA con captura de megalia y edad de las plaquetas transfundidas.
antígenos. La incompatibilidad antigénica se de- Cuando la causa de la RTP es una aloinmunización,
muestra mediante tipificación de los antígenos en la mayoría de los casos (>75%) los anticuerpos
plaquetarios, lo que actualmente se hace median- reaccionan con determinantes expresados por las
te biología molecular. moléculas HLA presentes sobre la superficie de
las plaquetas. En estudios prospectivos no más del
Tratamiento. Al igual que en otras incompatibi- 10% de los casos de RTP ha sido el resultado de
lidades maternofetales en el PAIN, se debe pro- anticuerpos antiplaquetarios específicos. El diag-
porcionar plaquetas antígeno-negativas de la ma- nóstico de esta condición se basa en la demostra-
dre o de donantes fenotipificados negativos. Las ción de estos anticuerpos en el suero del paciente
plaquetas usadas en la transfusión deben ser la- (ver en punto 3.2.1: Evaluación de laboratorio).
450
Sin título-2 450 5/26/06, 10:26 AM

3.2.2. Trombocitopenias autoinmunes do técnicas de desarrollo relativamente reciente,
en el plasma o plaquetas de los pacientes con PTI
Púrpura trombocitopénico autoinmune prima- crónico se pueden encontrar anticuerpos de clase
rio IgG o IgM dirigidos contra glicoproteínas de mem-
brana entre las que se incluye: GPIIb/IIIa, GPIb/
El Púrpura trombocitopénico autoinmune pri- IX, GPIa/IIa, GPIV y otras. Estas técnicas se ba-
mario (PTI) es una de las causas más frecuentes san en el principio de “captura de antígeno” en la
de trombocitopenia aislada encontrada en la prác- cual un anticuerpo monoclonal anti-GP es inmo-
tica médica. La enfermedad es causada por vilizado en una fase sólida al cual se agrega un
autoanticuerpos que se unen a estructuras de la lisado de las plaquetas en estudio o plaquetas nor-
membrana plaquetaria, acortando su superviven- males sensibilizadas con el autoanticuerpo. Esto
cia. La presentación clínica es muy variable des- posibilita la captura del antígeno y cualquier
de casos agudos, muy sintomáticos a hallazgos inmunoglobulina (Ig) unida a éste, la que puede
incidentales de trombocitopenia asintomática. ser detectada por una anti-Ig adecuadamente mar-
Debido a sus diferencias clínicas, de manejo y cada.
posiblemente fisiopatológicas, se discutirá en for-
ma separada el PTI crónico del adulto, del PTI Tratamiento. El objetivo del tratamiento especí-
agudo, cuadro este último que se presenta, funda- fico es restaurar el recuento de plaquetas, o al
mentalmente, en niños. menos alcanzar niveles que aseguren una
hemostasia adecuada. Esteroides, como predni-
a) PTI crónico del adulto sona oral, seguido de esplenectomía en caso de
respuesta insatisfactoria a los esteroides, forma
Cuadro clínico. El PTI del adulto se presenta más parte del manejo inicial estándar del PTI crónico,
frecuentemente en mujeres entre la 3° y 4° déca- con el que se puede alcanzar tasa de remisión cer-
da de la vida, aunque puede ocurrir a cualquier canas al 80%. En casos de refractariedad a la
edad en hombres y mujeres. La manifestación esplenectomía y esteroides, existe una serie de tra-
clínica más característica es el púrpura, término tamientos considerados de segunda línea que in-
que denota el sangrado de piel y mucosas. cluyen: IgG endovenosa a altas dosis, IgG anti-D,
danazol e inmunosupresores. Todos estos trata-
Patogenia. En el PTI crónico las plaquetas son mientos son de alto costo o se acompañan de im-
sensibilizadas por autoanticuerpos, predominan- portantes efectos colaterales.
temente de clase IgG, con menor frecuencia IgM La transfusión de concentrados plaquetarios
y ocasionalmente IgA. La destrucción plaquetaria en las trombocitopenias inmunes, en general, debe
por autoanticuerpos IgG es similar a la fagocitosis ser excepcional, reservándose para casos de he-
extravascular (esplénica) de glóbulos rojos, me- morragias por trombocitopenias graves, dado que
diada por IgG. El bazo es también un importante el efecto sustitutivo es muy escaso por la rápida
productor de autoanticuerpos antiplaquetarios. A destrucción de las plaquetas transfundidas.
diferencia de las anemias hemolíticas autoinmu-
nes, el mecanismo de acción de los autoanticuerpos PTI secundario. En alrededor de un 40% de los
de clase IgM es poco claro, así como la importan- casos de PTI crónico del adulto éste se asocia a
cia relativa del complemento. Se ha asumido que otra enfermedad. Las patologías más frecuente-
la destrucción plaquetaria acelerada en el púrpura mente asociadas a PTI son el Lupus Eritematoso
trombocitopénico autoinmune, se acompaña de un Sistémico, enfermedades linfoproliferativas, infec-
incremento compensatorio en la producción de ción por virus de la inmunodeficiencia humana,
plaquetas por los megacariocitos. Sin embargo, infecciones y más raramente otras condiciones
estudios cinéticos sugieren que también la produc- como el hipertiroidismo, sarcoidosis, miastenia
ción de plaquetas puede estar disminuida, espe- gravis, etc. La causa de la trombocitopenia se ha
cialmente en los pacientes más afectados. atribuido en estos casos a la acción de autoanti-
cuerpos o complejos inmunes. La diferencia más
Evaluación de laboratorio. Las pruebas de labo- importante con el PTI crónico primario se encuen-
ratorio que se utiliza en el estudio de tromboci- tra en el tratamiento, ya que en el PTI secundario
topenias autoinmunes son básicamente las mismas el manejo de la enfermedad de base se acompaña
descritas en el punto 3.2.1. Brevemente, utilizan- de mejoría en el recuento de plaquetas.
451
Sin título-2 451 5/26/06, 10:26 AM

b) PTI agudo del niño. El PTI en los niños es se presentan como PTI agudo continúan con
habitualmente una enfermedad autolimitada que trombocitopenia después de los 6 meses de ini-
se presenta comúnmente con una historia corta de ciado el cuadro, catalogándose en estos casos como
sangrado mucocutáneo en niños de 2 a 10 años de un cuadro de PTI crónico similar al del adulto.
edad, de cualquier sexo. La incidencia es de alre-
dedor de 1 caso por 100.000 niños. Es muy fre- Trombocitopenias inmunes inducidas por
cuente el antecedente de una infección viral re- fármacos. La aparición de trombocitopenia gra-
ciente o vacunación. ve asociada al uso de algún fármaco, es una com-
plicación reconocida desde hace más de 100 años.
Patogenia. Debido al distinto curso clínico del PTI Muchas drogas (más de cien) han sido implicadas
agudo del niño respecto del crónico, se han suge- en la patogenia de la trombocitopenia inducida por
rido mecanismos patogénicos diferentes para los fármacos, siendo la quinina y la quinidina las más
dos síndromes. Hasta ahora, los mecanismos pro- frecuentemente reportadas y estudiadas. Los
puestos para el PTI agudo son: (a) interferencia anticuerpos asociados con esta condición general-
de un virus con la maduración de los megaca- mente requieren la presencia de la droga soluble
riocitos, (b) reactividad cruzada de anticuerpos para reaccionar con estructuras de la membrana
anti-virales con las plaquetas, (c) unión de com- plaquetaria. Estudios recientes han documentado
plejos inmunes virus-antivirus a la superficie epítopos específicos para la unión de anticuerpos
plaquetaria y (d) producción de un autoanticuerpo dependientes de droga en la GPIb-IX, GPIIb-IIIa
verdadero. De los mecanismos propuestos, el que y la molécula de adhesión celular de endotelio y
tiene mayor base desde el punto de vista experi- plaquetas (PECAM-1). Ciertas drogas (penicili-
mental, ha sido el que sostiene que en el PTI agu- nas, cefalosporinas), se unen covalentemente a la
do existiría una producción de autoanticuerpos membrana plaquetaria in vivo y estimulan la pro-
plaquetarios verdaderos. Es así como se ha de- ducción de anticuerpos dependientes de hapteno.
mostrado producción de IgG por parte de linfocitos En otro grupo de pacientes se forman verdaderos
esplénicos de niños con PTI agudo, que se une en autoanticuerpos que se hacen independientes de
forma específica a plaquetas. Por otra parte, en el la droga (metildopa). Aunque las drogas u otras
suero de niños portadores de PTI agudo, se han moléculas pequeñas pueden conjugarse a proteí-
descrito anticuerpos que reconocen a la que pare- nas in vivo, lo que puede inducir una respuesta
ce ser la GPV de la membrana plaquetaria. Re- inmune, existe muy escasa información que ex-
cientemente se ha demostrado que en un porcen- plique la perturbación del sistema inmune que lleva
taje alto de casos de PTI infantil, se encuentra un a la producción de autoanticuerpos dependientes
anticuerpo IgM con especificidad anti-GPIb. de un fármaco. En cuanto al estudio de laborato-
rio, la demostración de los anticuerpos dependien-
Evaluación de laboratorio. El estudio de labora- tes de droga se puede hacer utilizando las mismas
torio del PTI del niño es esencialmente igual al técnicas de unión indirecta de una anti-Ig huma-
descrito para el cuadro crónico del adulto; sin na, usando plaquetas blanco normales y la droga
embargo, a pesar de que en la mayoría de los ca- apropiada presente en el medio de incubación. En
sos se encuentra PAIgG elevada y en un 30% de muchos casos se puede demostrar las glicopro-
los casos, anticuerpos antiplaquetarios circulan- teínas contra las cuales están dirigidos los
tes, los estudios de especificidad antigénica con anticuerpos, mediante el uso de las técnicas de
ELISAs basados en captura de antígeno, son fre- ELISA con captura de antígeno, en presencia o
cuentemente negativos. ausencia de la droga implicada. El tratamiento de
la trombocitopenia inducida por fármacos en la
Tratamiento. Sobre el 80% de los niños con gran mayoría de los casos se reduce a la suspen-
PTI se recuperan en forma espontánea. La hemo- sión de la droga responsable, lo que es seguido
rragia intracraneana, su complicación más grave, por una rápida normalización del recuento de
se presenta en menos del 1% de los casos. En los plaquetas.
casos en que está indicado el tratamiento, una com-
binación de esteroides y dosis altas de IgG Trombocitopenia inducida por heparina
endovenosa, parece acompañarse de los mejores
resultados. Aunque en estricto sentido la Tromboci-
Aproximadamente un 10% de los niños que topenia Inducida por Heparina (TIH) es el resul-
452
Sin título-2 452 5/26/06, 10:26 AM

tado del uso de una droga, su patogenia única, cua- Tratamiento. El tratamiento de la TIH se
dro clínico y frecuencia de presentación, hacen ne- circunscribe a la suspensión de la heparina. En
cesario considerarla en forma separada. La admi- casos seleccionados se pueden utilizar análogos a
nistración de heparina endovenosa o subcutánea es la heparina que no tienen reactividad cruzada con
una causa reconocida de trombocitopenia. La fre- el anticuerpo.
cuencia de esta complicación varía de 2 a 5% en
diferentes estudios. En la TIH se ha descrito dos
formas: (a) tipo I, por acción directa de la heparina 4. NEUTROPENIAS INMUNES
sobre las plaquetas, que no es mediada
inmunológicamente y que es habitualmente leve y Los neutrófilos al igual que los hematíes y
(b) tipo II, o inmune, por acción de un plaquetas, se originan en la médula ósea a partir
autoanticuerpo antiplaquetario dependiente de de una célula pluripotencial (ver capítulos 3 y 4).
heparina. Lo más importante de este cuadro es que Los neutrófilos maduros (segmentados) represen-
los pacientes que presentan una trombocitopenia tan el mayor porcentaje (55-65%) de leucocitos
profunda asociada al uso de heparina, se compli- sanguíneos en los adultos. Tienen como función
can paradojalmente de fenómenos de trombosis principal la fagocitosis y destrucción de agentes
arterial y menos frecuentemente, venosa. infecciosos, proceso que es independiente de la
especificidad de la respuesta inmune. Después de
Patogenia. La TIH tipo II se asocia a la presencia permanecer alrededor de 8 horas en circulación
de anticuerpos que están dirigidos contra el com- pasan a los tejidos.
plejo formado entre la heparina y el factor Se entiende por neutropenia la reducción del
plaquetario 4 (PF4), una proteína básica, encon- número absoluto de neutrófilos en la sangre, va-
trada normalmente en los gránulos alfa de las lor que puede ser calculado multiplicando el nú-
plaquetas. Los complejos inmunes formados en- mero total de leucocitos sanguíneos por el por-
tre el PF4, la heparina y el anticuerpo, son reco- centaje de neutrófilos (segmentados y bacilifor-
nocidos por el receptor FcγRIIa de las plaquetas, mes) obtenido en el recuento diferencial. En ge-
lo que induce activación de las plaquetas, libera- neral se considera que el límite normal bajo para
ción del contenido de sus gránulos y agregación. niños y adultos es 1500 neutrófilos/µL. Se entien-
Simultáneamente, los heparinoides presentes so- de por neutropenia leve, moderada y grave, 1000-
bre la superficie de la célula endotelial unen PF4 1500, 500-1000 y <500 neutrófilos/µL, respecti-
y se forma el complejo con el anticuerpo, que re- vamente; clasificación que se asocia con el riesgo
sulta en daño de la célula endotelial que se trans- de presentar infección grave. Los sitios más co-
forma así en una superficie protrombótica. munes de infección incluyen cavidad oral y
mucosas, piel, y áreas perinatal y genital. Los clá-
Evaluación de laboratorio. El anticuerpo depen- sicos signos de inflamación son menos evidentes
diente de heparina se puede demostrar mediante en pacientes neutropénicos que en los individuos
técnicas inmunológicas (ELISA) o funcionales. El que presentan cifras normales o aumentadas de
ensayo de ELISA más ampliamente utilizado se neutrófilos.
basa en la fijación a la fase sólida de un complejo Existen varias causas de neutropenia: (i) Dis-
PF4:heparina, sobre el cual se agrega el suero en minución de producción por insuficiencia medular
estudio. La unión de los anticuerpos al complejo global (ej. Aplasia y Leucemias), (ii) neutropenias
se demuestra con anti-Ig humana marcada con congénitas (ej. Neutropenia cíclica), neutropenias
enzima. Los ensayos funcionales se basan en la adquiridas (ej. Por infecciones, de tipo nutricional,
capacidad que tienen los anticuerpos dependien- Síndrome de Felty, Hiperesplenismo, por activa-
tes de heparina de activar las plaquetas. Con este ción del complemento y de origen inmune)
fin se ha utilizado la agregación plaquetaria en
presencia del anticuerpo y heparina o la libera- 4.1. Sistemas antigénicos de los neutrófilos
ción de 14C-Serotonina en las mismas condicio- Los neutrófilos presentan antígenos que compar-
nes. Recientemente se han desarrollado técnicas ten con otras células (ej. moléculas HLA) y
de citometría de flujo que identifican las antígenos específicos (tabla 24-6). La nomencla-
micropartículas liberadas desde las plaquetas du- tura utilizada para identificar los antígenos espe-
rante el proceso de activación en presencia de cíficos de los neutrófílos incluye una N (neutrófilo)
heparina. seguida de una letra (A, B, C, etc.) que identifica
453
Sin título-2 453 5/26/06, 10:26 AM

los diferentes sistemas antigénicos) y un número El sistema NB también es bialélico; los antígenos
(1 ó 2) que representa el alelo. NB1 y NB2 residen en una glicoproteína de 58-
64 kDa -similar a FcγRIII- que también se une a
El sistema NA se expresa en la glicoproteína la membrana de los neutrófilos a través de GPI.
FcγRIIIb (CD16) de 50-80 kDa. La glicoproteína,
codificada en el cromosoma 1, posee dos domi- De los sistemas NC, ND y NE, se tiene menos
nios extracelulares del tipo inmunoglobulina y se información que en relación a los sistemas NA y
une a los fosfolípidos de membrana a través de la NB, y no se han encontrado alelos para los siste-
molécula glicosilfosfatidilinositol (GPI). Existen mas NC, ND y NE.
alrededor de 20.000 moléculas/célula. El sistema
NA es bialélico; los antígenos NA1 y NA2 se di- 4.2. Neutropenias inmunes
ferencian en cuatro aminoácidos (figura 26-4)
ubicados en el dominio más distal de la membra- En analogía a lo que ocurre con los eritrocitos
na celular. y plaquetas, la destrucción inmune de los
neutrófilos puede ser mediada por autoanticuerpos
y aloanticuerpos (tabla 26-7).
4.2.1. Neutropenias aloinmunes

Al igual que la anemia y trombocitopenia
aloinmune, la neutropenia aloinmune puede ser
neonatal y postransfusional. La Neutropenia
neonatal aloinmune (NNA), es causada por una
incompatibilidad feto-materna en que están
involucrados sólo los neutrófilos. La incidencia
estimada de NNA es similar a la que se presenta
en el Púrpura aloinmune neonatal (PAN), aproxi-
madamente 1-2 de cada 5000 recién nacidos vi-
vos. Al igual que en la eritroblastosis, ocurriría
una isosensibilización materna a antígenos here-
dados del padre y expresados en los neutrófilos
Figura 26-4. Estructura del receptor FcγγRIIb (CD16). En
del feto. Se han encontrado leucocitos fetales en
la figura se indica el polimorfismo que genera los antígenos la sangre materna, especialmente durante el pri-
NA1 y NA1. mer trimestre y después del parto. La especifici-
Tabla 26-6. Sistemas antigénicos específicos de los neutrófílos
Sistema antigénico Antígeno Frecuencia

antigénica*
NA NA1 54
NA2 93
NA nulo
NB NB1 92
NB2 _
NC NC1 96
ND ND1 96
NE NE1 23
* Población de Estados Unidos
454
Sin título-2 454 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 26-7. Clasificación de las neutropenias 4.2.2 Neutropenias autoinmunes
inmunes
Al igual que en la anemia hemolítica inmu-
ne, la tolerancia inmunológica se puede perder
Neutropenias por aloanticuerpos
principalmente por: (a) reacción inmune cruzada
Neutropenia neonatal aloinmune
de un antígeno extraño con un antígeno propio y
Neutropenia transfusional aloinmune
(b) disminución de la actividad supresora de las
células T sobre un clon de células B (ver capítulo
Neutropenias por autoanticuerpos
23). Como en otras enfermedades autoinmunes,
Neutropenias autoinmunes primarias
la proliferación de los linfocitos B es clonal.
Neutropenia inmune de la infancia
En la neutropenia autoinmune, los anticuer-
Neutropenia primaria crónica del adulto
pos están dirigidos con mayor frecuencia contra
Neutropenias autoinmunes secundarias
antígenos del sistema antigénico NA. La especifi-
Neutropenia secundaria a enfermedades
cidad anti-NA1 se correlaciona con HLA-DR2.
Neutropenia autoinmune inducida por drogas
También se han detectado autoanticuerpos dirigi-
dos contra el complejo glicoproteico de adhesión
CDllb/CD18 y contra actina.
La fagocitosis -por macrófagos de médula
dad más frecuentemente encontrada para los
ósea, bazo y otros órganos linfoides- de neutrófilos
anticuerpos antineutrófilos ha sido anti-NA1 y
sensibilizados con autoanticuerpos, es un impor-
anti-NA2.
tante mecanismo de destrucción de neutrófilos en
A diferencia de la EHRN y en forma similar
la neutropenia autoinmune. Si bien, a diferencia
al PAN, la NNA puede presentarse en el primer
de los hematíes, los granulocitos resisten la ac-
hijo. La mayoría de los pacientes presenta infec-
ción lítica del complemento, este mecanismo es
ciones leves.
importante en la patogenia de la neutropenia, al
aumentar el secuestro por parte de los macrófagos
La mayoría de las Reacciones transfusionales
esplénicos. Los anticuerpos antineutrófilos, ade-
febriles no hemolíticas, se deben a la presencia
más pueden afectar la función de los neutrófilos.
de anticuerpos antineutrófilos en el receptor, el que
Cuando el antígeno contra el cual está dirigi-
reacciona contra leucocitos presentes en la sangre
do el autoanticuerpo, también está presente en las
o hemoderivado transfundido. La aloinmunización
células mieloides más inmaduras, la granulopo-
por antígenos HLA y otros antígenos asociados a
yesis puede estar marcadamente afectada, lo que
leucocitos -principalmente NAl y NA2- se pre-
se traduce en una neutropenia habitualmente gra-
sentan en pacientes que reciben transfusiones de
ve por falta de regeneración.
granulocitos y plaquetas; especialmente en los
politransfundidos
Neutropenias autoinmunes primarias
Investigación serológica de los anticuerpos
En los niños y adultos, la neutropenia aisla-
antineutrófílos
da, producto de destrucción aumentada de
neutrófilos, sin asociación a otra patología que
Los métodos para estudiar los anticuerpos
pueda explicar el fenómeno, se considera prima-
antineutrófilos se pueden agrupar en: (i) Métodos
ria. Frecuentemente estos pacientes presentan
para pesquisar inmunoglobulina unida a la super-
anticuerpos anti-neutrófilos, generalmente IgG. La
ficie de los neutrófilos y (ii) Métodos que
Neutropenia inmune de la infancia se presenta
pesquisan el efecto de los anticuerpos antineu-
en niños de 3-30 meses, con un promedio de 8
trófilos. En el primer caso granulocitos heterólogos
meses. Generalmente los pacientes presentan fie-
se incuban con suero del paciente y control, y se
bre e infecciones de piel, oído medio, vías respi-
cuantifica la unión de los anticuerpos antigra-
ratorias o vías urinarias. Al igual que en el PTI
nulocitos. Para esto se pueden usar varios méto-
infantil, la neutropenia inmune de la infancia ge-
dos, como son la inmunofluorescencia, citometría
neralmente regresa en forma espontánea. La gran
de flujo, enzimainmunoensayos, radioinmuno-
mayoría de los casos de Neutropenia primaria
ensayo y proteína A estafilocósica. En el segundo
crónica del adulto se asocia a alteraciones
caso se ha usado aglutinación, opsonización y
inmunológicas o hematológicas. La mayoría de
citotoxicidad.
455
Sin título-2 455 5/26/06, 10:26 AM

los pacientes son mujeres y presentan celularidad Bergeron, D., Adams, S., “Autoimmun hemolytic
normal o aumentada en la médula ósea. anemias and drug-induced hemolytic anemias” en
Immunohematology principles and practice,
Neutropenias autoinmunes secundarias Eds. Quinley E., Chapter 16, Lippincott-Raven,
Esta es la forma más frecuente de neutropenia in- Philadelphia, 1998.
mune en el adulto. La Neutropenia autoinmune
secundaria se asocia a otras enfermedades (de tipo Cartron, J.; Bailly, P.; Le Van Kim, C.; Cherif-
autoinmunes, malignas o inmunodeficiencias) y a Zahar, B.; Matassi, Bertrand O.; Colin, Y., “In-
drogas. En la patogenia de las neutropenias se- sights into the structure and function of membrane
cundarias a otras enfermedades (ej. Lupus Eri- polypeptides carring blood group antigens”, Vox
tematoso Sistémico, Linfomas) podrían parti- Sang 1998;74(Suppl.2):26-64.
cipar complejos inmunes, activación del comple-
mento y reacción cruzada de anticuerpos con los Dacie, J., Lewis, S.M. and Waters, H., “Serologi-
neutrófilos. En la Neutropenia autoinmune in- cal investigation of auto-immune and drug-in-
ducida por drogas, los fármacos que más frecuen- duced immune haemolytic anaemias” en Practice
temente asociados incluyen antibióticos, Haematology, Eds. Dacie J., Lewis SM., Chapter
analgésicos-antinflamatorios, antiarrítmicos, 29, Seventh edition, Churchill Livingstone, Lon-
antimaláricos y antitiroídeos. don, 1991.
En el estudio de laboratorio también utilizan
las pruebas descritas en el punto 4.2.1. Foerster, J., “Alloimmune hemolytic anemias”, en
Wintrobe's Clinical Hematology, Eds. Lee, G.,
El tratamiento dependerá del tipo particular de Bithell, T, Foerster, J. et al., Chapter 40, Nigth
neutropenia y cuando corresponda de la enferme- edition, Lee & Febiger, London, 1993.
dad de base. La neutropenia immune de la infan-
cia remite espontáneamente. En otras neutropenias Garratty, G., “Review: immune hemolytic anemia
lo indicado es evitar las infecciones a repetición. and/or positive direct antiglobulin test caused by
Como en otras enfermedades hematológicas drugs”, Immunohematology, 1994;10:41-50.
autoinmunes, también se han usado como trata-
miento esplenectomía, corticoides e IgG Palomo, I., Pereira J., Fisiopatología de las
intravenosa. Por otra parte, se han usado factores citopenias inmunes, Editorial Universidad de
de crecimiento hematopoyético con el propósito Talca, 1995.
de aumentar la proliferación y acelerar la diferen-
ciación de las células progenitoras mieloides; los Sherry, C., “Acquired immune anemias of
factores de crecimiento usados son el factor increased destruction” en Clinical hematology
estimulador de colonias granulocito-macrófago principles, procedures, correlations, Eds. Stiene-
(GM-CSF) y el factor estimulador de colonia Martin, A., Lotspeich-Steininger, C., Koepke, J.,
granulocítica (G-CSF). Chapter 19, Lippincott-Raven Publishers,
Philadelphia, 1998.
LECTURAS SUGERIDAS Trombocitopenias inmunes
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citopenias inmunes, Editorial Universidad de History, clinical significance and molecular
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Bussel, J., Cines, D., “Immune thrombocytopenic McFarland, J.G., “Platelet and neutrophil
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Capítulo 27
Mireya Silva B. y Mauricio Oqueteaux T.
1. Introducción 5. Variedades infrecuentes de mielo-

2. Estudio inmunológico de las ma múltiple y otras gammapatías
gammapatías monoclonales 5.1. Mieloma "indolente"
2.1. Pesquisa de una proteína 5.2. Leucemia de células plasmáticas
monoclonal 5.3. Mieloma osteoesclerótico
2.2. Identificación de una proteína 5.4. Plasmocitoma extramedular
monoclonal 5.5. Plasmocitoma óseo solitario
2.3. Cuantificación de inmunoglo- 5.6. Macroglobulinemia de Waldenström
bulinas (MW)
2.4. Viscosidad sérica 5.7. Enfermedad de cadenas livianas
2.5. Beta-2 microglobulina 5.8. Amiloidosis primaria
2.6. Proteína C reactiva 5.9. Enfermedad por cadenas pesadas
2.7. Interleuquina-6 6. Diagnóstico diferencial entre
2.8. Estudios inmunológicos en orina MGUS y MM
3. Gammapatía monoclonal de signi- 7. Patogenia
ficado incierto 7.1. Papel IL-6 y vía de la ciclina D1
3.1. Aspectos generales 7.2. Genes supresores de tumores
3.2. Evolución de las MGUS en el 7.3. Apoptosis de células plasmáticas
tiempo 7.4. Papel del estroma en las dis-
4. Mieloma múltiple crasias de células plasmáticas
4.1. Manifestaciones clínicas 8. Tratamiento
4.2. Pronóstico
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RESUMEN
En este capítulo se analizan las Gammapatías monoclonales en relación con su concepto,

estudio, clasificación, aspectos patogénicos y tratamiento.
Concepto: se refiere a la definición de estas patologías y la estructura molecular del com-
ponente o proteína monoclonal.
Clasificación: se las diferencia en (a) Mieloma Múltiple, (b) Gammapatías Monoclonales
de Significado Incierto y (c) Variedades infrecuentes de Mieloma Múltiple y otras gammapatías.
Se destacan de ellas sus principales manifestaciones clínicas.
Estudio: se analizan, desde el punto de vista inmunológico, los procedimientos más impor-
tantes que se utilizan para el diagnóstico de estas enfermedades.
Patogenia: el papel de IL-6 y vía de la Ciclina D1, los genes supresores, la apoptosis de
Células Plasmáticas y la probable función del estroma son discutidos en este punto.
Tratamiento: se plantean, brevemente, alcances terapéuticos actuales
1. INTRODUCCIÓN gran número de CPs clonales que las originan.

Desde el punto de vista funcional se ha logrado
Las discrasias de células plasmáticas (CPs) demostrar, en ensayos in vitro, actividad de anti-
constituyen un grupo heterogéneo de enfermeda- cuerpo contra distintos antígenos, principalmente
des que se caracterizan por una expansión de CPs de origen bacteriano y, más aún, contra proteínas
monoclonales -es decir, con origen en un clon ce- autólogas (factores de coagulación, antígenos
lular singular- en la médula ósea, y por la produc- eritroides, proteínas del SNC, etc). Sin embargo,
ción de una inmunoglobulina también monoclonal en la inmensa mayoría de los pacientes no se lo-
o componente M (CM). Las inmunoglobulinas gra demostrar una actividad específica de la
monoclonales producidas por las CPs patológicas inmunoglobulina monoclonal.
suelen migrar en la fracción gamma (γ) cuando Desde un punto de vista clínico, el hecho de
son sometidas a una electroforesis, razón por la tener su origen en un clon celular único -
cual estas discrasias son también denominadas monoclonal no significa, necesariamente, que se
gammapatías monoclonales. En términos genera- trate de una neoplasia, si bien el concepto inverso
les, las inmunoglobulinas monoclonales –al igual es válido para todos los cánceres (es decir, todos
que las inmunoglobulinas normales - están cons- ellos son de origen monoclonal), dado que exis-
tituidas por dos cadenas pesadas de igual clase y ten diversos ejemplos de expansiones monoclo-
subclase (cadenas H) y dos cadenas livianas del nales que nunca llegan a constituir una neoplasia,
mismo tipo (cadenas kappa, κ o lambda λ) (ver al menos clínicamente evidente. El ejemplo más
capítulo 6). Sin embargo, en algunas discrasias es característico de expansión de CPs que permane-
posible detectar sólo un fragmento de la molécula ce bajo control sin progresión hacia tumor de cre-
de inmunoglobulina, como ocurre en la enferme- cimiento continuo se denomina Gammapatía
dad por cadenas pesadas o livianas, con expresión Monoclonal de Significado Incierto (MGUS,
exclusiva de las cadenas γ, α o µ en el primer caso "Monoclonal Gammopathy of Undetermined
y κ o λ en el segundo (también conocida como Significance"), mientras que el ejemplo más ge-
enfermedad de Bence-Jones). Así, salvo estas úl- nuino de proliferación de CPs que escapa a los
timas excepciones, las inmunoglobulinas compro- mecanismos de control y desarrolla una enferme-
metidas en estas entidades son estructuralmente dad maligna lo constituye el Mieloma Múltiple
similares a su contrapartida normal, estando pre- (MM). La incidencia de las distintas gammapatías
sentes en cantidades elevadas simplemente por el monoclonales está representada en la tabla 27-1.
461
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Tabla 27-1. Incidencia y frecuencia relativa de las diferentes
formas de Gammapatía Monoclonal
Gammapatía Monoclonal Incidencia Frecuencia Relativa
Gammapatía Monoclonal de
Significado Incierto 1 - 5% 65 -70%
Mieloma Múltiple 3 - 5* 12 - 20%
Macroglobulinemia de Wäldenstrom < 1* 1 - 4%
Enfermedad de Cadenas Livianas < 1* < 1%
Enfermedad de Cadenas Pesadas < 1* < 1%
Amiloidosis < 1* 2%
Crioglobulinemia < 1* < 1%
* Resultados expresados como número de casos nuevos/100.000 habitantes por año
2. ESTUDIO INMUNOLÓGICO DE LAS Tabla 27-2. Estudio inmunológico de las GM

En sangre (suero)
Dado que el capítulo 40 se refiere a los mé-
todos inmunoquímicos, aquí sólo se aplicará,
• Electroforesis de proteínas
resumidamente, un esquema operacional para el
• Inmunoelectroforesis de proteínas
estudio de las GM (tabla 27-2).
• (IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, κ, λ)
• Inmunofijación de inmunoglobulinas
2.1. Pesquisa de una proteína monoclonal
• (IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, κ, λ).
• Cuantificación de inmunoglobulinas
La proteína monoclonal se detecta por una
• Viscosidad sérica
imagen muy particular en el estudio electroforético
• β2-microglobulina
de las proteínas séricas y/o urinarias, electroforesis
• Proteína C reactiva (PCR)
que puede realizarse en soportes de acetato de ce-
• IL-6
lulosa o agarosa.
La imagen consiste en una fracción proteica
En orina
concentrada, de mayor o menor intensidad depen-
diendo de su concentración y de límites muy ne-
• Proteinuria
tos con migración desde las globulinas α 2 hasta
• Proteinuria 24 hrs.
las globulinas γ. En el densitograma es caracterís-
• Electroforesis de proteínas (orina concentra-
tica la presencia de una curva aguzada, elevada y
da)
de base estrecha, en relación con el sitio de mi-
• Inmunoelectroforesis de proteínas
gración de la proteína monoclonal (figura 27-1).
• (cadenas livianas κ y λ = proteínas de Bence
El componente monoclonal corresponde al
Jones)
producto de la secreción de muchas células pro-
• Inmunofijación de cadenas livianas de
venientes de un clon único de células plasmáticas.
inmunoglobulinas
Son proteínas homogéneas, idénticas entre sí, lo
que explica su migración puntual en la
electroforesis de proteínas (EFP).
Mediante la EFP pueden diferenciarse los
componentes monoclonales de los policlonales, Los componentes policlonales constituyen el
correspondiendo estos últimos a respuestas producto de la secreción de células plasmáticas
inmunológicas fisiológicas a las estimulaciones de diferentes clones celulares y son, por lo tanto,
antigénicas importantes como son las infecciones. proteínas heterogéneas entre sí, expresándose en
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Sin título-2 462 5/26/06, 10:26 AM

Figura 27-1. Patrón electroforético de proteínas séricas con presencia de componente M en región de la gammaglobulinas.
(a) Trazado electroforético, (b) densitograma (c) Base celular que lo explica.
la EFP como fracciones aumentadas, pero en for- globulinas β y γ; los complejos de hemoglobina -
ma difusa y en el densitograma como curvas au- haptoglobina, propios de la hemólisis, en
mentadas pero amplias, suaves y de base ancha globulinas alfa 2, e incluso el punto de aplicación
(figura 27-2). de la muestra en el soporte de la EFP.
Un hecho destacable es la asociación a una
fracción monoclonal de una hipogamaglo- 2.2. Identificación de una proteína monoclonal
bulinemia. Este signo es orientador hacia una GM
maligna. Frente a la pesquisa de un CM electroforético
En ocasiones existiendo una neoplasia o aún sin detectarlo claramente cuando se sospe-
monoclonal de células plasmáticas, el CM no apa- cha un mieloma múltiple, macroglobulinemia,
rece en la EFP séricas. Esta circunstancia puede amiloidosis u otras enfermedades relacionadas se
observarse en la enfermedad de cadenas livianas, debe realizar una inmunoelectroforesis o una
mieloma IgD, enfermedad de cadenas pesadas y inmunofijación de inmunoglobulinas séricas.
en el mieloma no secretor, afección en la cual la
proteína monoclonal, indetectable en sangre y ori- Inmunoelectroforesis. Esta técnica introducida
na, puede observarse e identificarse en el interior por Grabar y Williams en 1953 es muy útil para la
de los plasmocitos de la médula ósea por identificación de la proteína monoclonal, es decir
inmunofluorescencia directa. la clase de cadena pesada y el tipo de cadena li-
Por el contrario, erróneamente, pueden con- viana de la inmunoglobulina comprometida.
siderarse como componentes monoclonales cier- Brevemente, consiste en una electroforesis
tos artefactos como por ejemplo la fibrina que apa- sérica seguida de una inmunoprecipitación de las
rece como una fracción concentrada entre las cadenas pesadas y livianas de las inmunoglo-
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Sin título-2 463 5/26/06, 10:26 AM

Figura 27-2. Patrón electroforético de un componente policlonal. (a) Trazado electroforético, (b) Densitograma, (c) Base
celular que lo explica.
bulinas que contiene la muestra empleando

antisueros poli, tri y monovalentes en geles de
agarosa (figura 27-3).
Inmunofijación. Esta técnica, permite objetivar

con bastante certeza la cadena pesada y liviana de
la inmunoglobulina monoclonal del paciente, em-
pleando al igual que la inmunoelectroforesis, la
muestra a investigar (en 6 diferentes posiciones)
en placas de agarosa para obtener, por
electroforesis, la separación de las proteínas de
acuerdo con su carga neta. En la segunda etapa se
aplican los anticuerpos monoespecíficos en 5 de
los 6 trazados electroforéticos para que la fijación
ocurra. El informe y por ende el diagnóstico se
facilita puesto que el procedimiento permite com-
parar el nivel de migración del CM, si lo hay, con Figura 27-3. Patrón Inmunoelectroforético de componen-
las líneas de precipitación de las cadenas te M formado por IgG (cadenas pesadas γ) y cadenas livia-
nas κ. El esquema representa los arcos de inmunoprecipitación
monoclonales comprometidas (figura 27-4). de las cadenas pesadas γ, α, µ y livianas κ y λ del suero de un
La inmunofijación puede realizarse en sue- sujeto control normal (C) en comparación con los de un pa-
ro, orina, líquido cefalorraquídeo, etc. y posee una ciente (P) portador de una Gammapatía Monoclonal IgG-k.
mayor sensibilidad y poder de resolución que la En este último se aprecia deformación de los arcos de precipi-
tación de la cadena pesada (γ) de la IgG y de la cadena liviana
inmunoelectroforesis. κ y disminución de la concentración de los arcos de IgA, IgM
y λ lo que es habitual en las patologías avanzadas.
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Sin título-2 464 5/26/06, 10:26 AM

Figura 27-4. Inmunofijación de inmunoglobulinas. En los rectángulos del gel de agarosa se aplica suero del mismo paciente,
cuyas proteínas son separadas por electroforesis de alta resolución (EF.AR). La aplicación de antisueros monoespecíficos (γ, α, µ,
κ, λ) determina la precipitación del complejo Ag-Ac y la fijación, lineal, de las proteínas monoclonales en el mismo nivel en que
se encuentra el componente monoclonal de la electroforesis de la placa. En este ejemplo, el paciente presenta una gammapatía
monoclonal IgA-λ.
2.3. Cuantificación de inmunoglobulinas 2.5. Beta-2 microglobulina
La cuantificación o dosificación de inmuno- Esta proteína que forma parte de la estructu-

globulinas se realiza mediante técnicas de ra de las moléculas clase I del Sistema Principal
inmunodifusión radial y últimamente por de Histocompatibilidad (cadena liviana del
nefelometría. Su medición permite establecer un heterodímero) se encuentra en la superficie de to-
índice pronóstico (enfermedad benigna o malig- das las células nucleadas.
na), mantener un control evolutivo del tratamien- Puede medirse en suero como en orina y sus
to y detectar, precozmente el inicio de una niveles constituyen un factor pronóstico en los
inmunodeficiencia. síndromes linfoproliferativos, particularmente en
el MM. Los pacientes con niveles elevados tienen
2.4. Viscosidad sérica una sobrevida significativamente más corta que
los portadores de GM con niveles normales. Las
Los pacientes portadores de una GM pueden cifras elevadas se relacionan con activación y des-
evolucionar con síntomas de hiperviscosidad, trucción de linfocitos. Los valores normales son
como se ha señalado. 1.15-2.03 mg/l.
La hiperviscosidad se define en base al aumen- Como se excreta por el túbulo renal puede
to de la viscosidad relativa del suero sanguíneo com- aumentar en las insuficiencias del riñón.
parada con el agua. El valor normal es de 1.8, es
decir el suero sanguíneo es hasta 1,8 veces más vis- 2.6. Proteína C reactiva
coso que el agua. Las manifestaciones clínicas sue-
len aparecer con cifras de 5 a 6 y comúnmente esto La cuantificación de la PCR sérica es em-
ocurre cuando el CM corresponde a IgM, IgG3 e IgA. pleada comúnmente para objetivar la presencia de
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Sin título-2 465 5/26/06, 10:26 AM

un proceso inflamatorio, aunque inespecífica- de las CPs, presente entre un 1% y un 5% de la
mente. Los niveles de esta proteína se elevan en población mayor de 50 años y hasta en un 10% de
los pacientes con GM particularmente en el MM. los mayores de 80 años cuando se analiza la pre-
La IL-6 estimula la producción de PCR y la sencia de una proteína monoclonal con técnicas
medición de ésta, por lo tanto, indirectamente re- como la electroforesis. Sin embargo, si se utilizan
fleja los niveles de IL-6. El empleo de anticuerpos técnicas de mayor sensibilidad estas cifras se ele-
monoclonales anti-IL-6 disminuye la producción van aún más. Así, se han reportado incidencias de
de PCR. Su valor normal es hasta 0.6 mg/dl. hasta un 5% en individuos sanos entre 22 y 65
años y de 7-8% sobre los 55 años cuando se utili-
2.7. Interleuquina-6 za electroforesis de acetato de alta resolución. Esta
entidad se caracteriza por la proliferación de un
Se ha señalado que siendo la IL-6 un factor clon singular -o en un 2 a 3% de los casos de dos
muy importante de crecimiento de la célula clones diferentes- de CPs, con la capacidad de
plasmática tumoral, un aumento del nivel sérico, producir una proteína monoclonal o CM, pero en
constituye un índice de malignidad, severidad y, ausencia de elementos sugerentes de MM,
por ende, de mal pronóstico de las GM. macroglobulinemia, amiloidosis, etc. En términos
Ha sido comunicado que IL-6 sérica es generales, los pacientes con MGUS presentan un
indetectable en sujetos sanos o en GMSI, (<1pg/ml), componente-M < 3g/dL, menos de un 10% de CPs
a diferencia de los enfermos con GMM, en los cua- en médula ósea, escasa o nula cantidad de proteí-
les los niveles pueden ser de 20, 30 o más pg/ml. na-M en la orina y ausencia de compromiso
sistémico como lesiones óseas, anemia, hipercal-
2.8. Estudios inmunológicos en orina cemia o compromiso de la función renal.
Estos estudios inmunológicos deben realizar- 3.2. Evolución de las MGUS en el tiempo
se en orina total de 24 horas, porque es importan-
te conocer el total de la proteinuria diaria y por- Desde el punto de vista evolutivo, la MGUS
que para varias técnicas se requiere concentrar la puede dar origen a un MM característico, situa-
orina 50, 100 ó 200 veces, para pesquisar concen- ción que se observa, sin embargo, en sólo una
traciones mínimas de las proteínas monoclonales minoría de los pacientes. En un estudio realizado
excretadas. en la Clínica Mayo, de 241 pacientes seguidos
La electroforesis de proteínas ha de hacerse durante 24 a 38 años, 42 de ellos (17,4%) desa-
con orina concentrada, particularmente cuando la rrollaron un MM, 7 (2,9%) una macroglobulinemia
proteinuria es pequeña, para destacar el CM uri- y 8 (3,3%) una amiloidosis primaria; un 10% adi-
nario en el trazado electroforético, para lo cual se cional de pacientes incrementaron el componente
utilizan soportes de acetato de celulosa o agarosa. monoclonal en suero, aunque sin llegar a tener
La inmunoelectroforesis y/o inmunofijación elementos clínicos de enfermedad. Considerando
de proteínas urinarias tienen por objeto identifi- esta información, la tasa actuarial de “transforma-
car las proteínas de Bence Jones, que como se dijo ción” de las MGUS es de 14% a 10 años y de 29%
corresponden a las cadenas livianas monoclonales a 20 años, para los casos con IgG como proteína-
κ o λ de las moléculas de inmunoglobulinas. M, y de 18% y 37%, respectivamente, para aque-
Las proteínas de Bence Jones pueden obser- llas MGUS IgA. Sin embargo, tanto en el citado
varse durante la evolución de una GM típica y en estudio, como en otros, no se ha podido estable-
la enfermedad de cadenas livianas en la cual hay cer patrones que permitan predecir con claridad
una gran producción de cadenas livianas κ o λ qué grupo de enfermos tienen un mayor riesgo de
monoclonales. sufrir progresión a MM. Por esta razón, y desde el
punto de vista clínico, el avance desde una enti-
dad benigna a una maligna está dada por dos gru-
3. GAMMAPATÍA MONOCLONAL DE SIG- pos de signos, que requieren necesariamente de
NIFICADO INCIERTO un seguimiento estrecho del paciente: (a) Un au-
mento sostenido en la cantidad del componente
3.1. Aspectos generales monoclonal detectable en el suero y (b) La apari-
ción de dolores óseos con lesiones líticas óseas no
MGUS es la alteración clonal más frecuente detectadas previamente. La aparición de cualquiera
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Sin título-2 466 5/26/06, 10:26 AM

de estos signos es evidencia suficiente para eva- (TNF) o la interleuquina-1 beta (IL-1β).
luar la enfermedad como “progresiva”, de modo
que se requiere una intervención terapéutica en la Manifestaciones neurológicas. Con relativa fre-
mayoría de los casos que la presentan. cuencia existen en el MM otras dos manifestacio-
nes clínicas asociadas a la patología ósea, como
4. MIELOMA MÚLTIPLE son la hipercalcemia y las alteraciones
neurológicas. Estas últimas se presentan frecuen-
El mieloma múltiple (MM) es una neoplasia temente como radiculopatías o como un síndro-
de la línea linfoide B caracterizada por la acumu- me de compresión medular, motivadas por la com-
lación en médula ósea de una población clonal de presión de una raíz nerviosa por una lesión verte-
células de esta estirpe en su estadio final de dife- bral o por el compromiso, ya sea traumático (se-
renciación, es decir, de células plasmáticas, y por cundario a una fractura por aplastamiento) o por
la producción de lesiones osteolíticas (y el dolor el crecimiento de un plasmocitoma (tumor de CPs)
óseo secundario a ellas) que, junto a la presencia a la cavidad medular, respectivamente. Si bien
e incremento del componente M (ya sea en suero existen casos en que la manifestación neurológica
y orina), representan los hallazgos patológicos más es dependiente de una polineuropatía secundaria
frecuentes de la enfermedad. Las primeras obser- a la presencia de paraproteinemia, esta situación
vaciones sobre esta enfermedad fueron realizadas es más bien excepcional. En estos casos la proteí-
por Henry Bence-Jones en el año 1845, aunque na anómala actuaría como anticuerpo dirigido con-
los términos de mieloma múltiple o enfermedad tra determinantes antigénicos de la mielina.
de Kahler no fueron introducidos sino hasta los
años 1873 y 1889, respectivamente. Hipercalcemia. La presencia de hipercalcemia
El MM tiene su mayor incidencia durante la 7ª (>11,5 mg/dL tras corrección por los niveles de
y 8ª década de la vida, si bien un número significati- albúmina) ocurre en alrededor de un tercio de los
vo de casos es diagnosticado en edades más tempra- pacientes. Dentro de su patogenia se ha descrito
nas (un 15% de los casos tienen menos de 50 años). una alteración en el balance entre la actividad
El número de casos nuevos por cada 100.000 habi- osteoclástica (reabsorción ósea) y la osteoblástica
tantes y año es de 3 a 5, por lo que el MM constituye (formación ósea), de modo que la primera preva-
aproximadamente el 1% de todas las neoplasias y el lece sobre la segunda. Este desbalance estaría ex-
10% de las neoplasias hematológicas. plicado por la presencia y mayor actividad de cier-
A continuación se resumen algunas caracte- tas interleuquinas: factor de necrosis tumoral
rísticas clínicas más relevantes de la enfermedad: (TNF) y a la IL-1b, ambos influenciados estre-
chamente por la actividad de IL-6.
4.1. Manifestaciones clínicas
Síntomas generales. En los pacientes con MM
Dolor óseo. El síntoma más típico y frecuente del es frecuente la presencia de síntomas constitucio-
MM es el dolor óseo, que se puede encontrar en nales, tales como astenia, pérdida de peso,
un 70-75% de los pacientes en el momento del fatigabilidad, etc., muchas veces relacionados a
diagnóstico, si bien esta incidencia se ha reducido la presencia de anemia y, en algunas oportunida-
en las últimas décadas debido probablemente al des, al estado de hipermetabolismo que implica la
diagnóstico precoz, siendo actualmente de alre- enfermedad tumoral, como ocurre en los
dedor de un 40%. Éste se debe a la presencia de infrecuentes casos de leucemia de CPs.
lesiones generalmente de fácil reconocimiento por
medio de métodos radiológicos (osteoporosis, Síndrome anémico. El valor medio de la hemo-
osteolisis o fracturas patológicas). Sus localiza- globina (Hb) en la mayor parte de las series de
ciones más frecuentes son el cráneo (imagen de pacientes con MM al diagnóstico es de alrededor
“apolillamiento”), la columna vertebral de 10,5 g/dL, existiendo grados variables de ane-
(aplastamientos vertebrales y fracturas), las costi- mia en el 60-70% de los casos. Además, alrededor
llas, la pelvis y los huesos largos a nivel proximal. de un 20-25% de ellos presentan anemia severa,
Estas lesiones tienen un origen multifactorial, des- con valores de Hb inferiores a 8,5 g/dL. La anemia
tacando en su generación la activación de en el MM es de origen multifactorial en que, ade-
osteoclastos secundaria a la presencia de más del mecanismo clásico de anemia de enferme-
citoquinas como el factor de necrosis tumoral dades crónicas, existen otros factores de importan-
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Sin título-2 467 5/26/06, 10:26 AM

cia, como son: (a) reemplazo de la hematopoyesis de la activación inicial de las células B en reposo;
normal por CPs tumorales, (b) actividad (c) presencia de células T con actividad
regenerativa disminuida del tejido hematopoyético inmunosupresora; (d) defectos en la inmunidad
residual, (c) insuficiencia renal, (d) deficiencia de celular (disminución de células CD4 y alteración
hierro y (e) disminución de la sobrevida del gló- de las células NK); (e) alteración funcional de la
bulo rojo. Además, en los últimos años ha queda- actividad del complemento; (f) presencia de
do de manifiesto el papel de la eritropoyetina (Epo) granulocitopenia, secundaria tanto a infiltración
y otras citoquinas en la patogenia de la anemia en medular como al tratamiento quimioterápico; (g)
el MM, sugiriéndose que en estos enfermos exis- insuficiencia renal. Los focos y agentes más fre-
tiría una respuesta inadecuada a la Epo (para el cuentemente comprometidos son el pulmonar
grado de anemia) y/o una respuesta proliferativa (Streptococcus pneumoniae) y el urinario (baci-
disminuida de las células eritropoyéticas a nive- los Gram negativos). Si bien la mayor parte de las
les normales de esta sustancia. Por último, se ha infecciones en el MM son de origen bacteriano
demostrado que algunas citocinas (IL-1, TNF, TGF (ª90%), también se reconocen en estos pacientes
e IFN-γ) pueden disminuir tanto la eritropoyesis infecciones de origen viral (Herpes Zoster) y
como la producción de Epo. fúngicas (Cándida álbicans, etc).
Insuficiencia renal. La falla renal es un rasgo Otras manifestaciones clínicas. El síndrome de

característico del MM y es uno de los factores pro- hiperviscosidad es menos frecuente que en otros
nósticos más importantes, representando la segun- síndromes linfoproliferativos (Macroglobulinemia
da causa de muerte en estos pacientes. Aproxima- de Waldenström), pero puede presentarse en al-
damente un 30% de ellos presentan niveles de gunos casos de mielomas IgA o IgG3. Otro pro-
creatinina ≥ 2 mg/dL, incidencia que aumenta blema de relativa frecuencia lo constituye la
durante el curso de la enfermedad. Sin embargo, amiloidosis, presente en alrededor de un 10-15%
la mayoría de los enfermos son asintomáticos. Su de los casos, generalmente mielomas Bence-Jones
etiología es también multifactorial, influyendo en con excreción de cadena L lambda.
ella la eliminación de cadenas livianas,
hipercalcemia (estas dos causas presentes en un 4.2. Pronóstico
90% de los casos afectados) e hiperuricemia, des-
hidratación, infecciones urinarias a repetición, La evolución de los pacientes portadores de
hiperviscosidad, uso de drogas nefrotóxicas (es- MM es muy variable, con casos que cursan con
pecialmente antibióticos), amiloidosis e infiltra- una enfermedad agresiva que los lleva a la muerte
ción tumoral. El término “riñón mielomatoso” se en pocos meses y otros con un curso estable y
usa para designar la formación de cilindros sobrevida que puede superar incluso los 10 años,
tubulares y está invariablemente asociado a la pre- situándose la mediana de supervivencia en torno
sencia de proteinuria de Bence-Jones. a los 3 años. Esta variabilidad en el curso clínico
se debe a la presencia de diferentes factores pro-
Infecciones bacterianas. Constituyen la princi- nósticos, entre los que destacan el estado general,
pal causa de morbilidad y mortalidad en el MM, la edad, la presencia de insuficiencia renal, la ane-
siendo su incidencia global entre 0,5 y 3 episo- mia, la hipercalcemia y la hipoalbuminemia. En
dios infecciosos por paciente/año (alrededor de 7 cuanto al tipo de MM parecen ser de peor pronós-
a 15 veces superior a la población normal de la tico el IgD y el Bence-Jones. La clasificación
misma edad). La causa más importante es la alte- pronóstica más utilizada hasta ahora es la de Durie
ración de la inmunidad humoral, tanto por depre- –Salmon, resumida en la tabla 27-3. En los últi-
sión de la producción de inmunoglobulinas nor- mos años se han reconocido nuevos factores pro-
males (hipogammaglobulinemia) como por un nósticos como el nivel de beta-2-microglobulina
hipercatabolismo de las mismas. Otros factores (β2M), de IL-6, proteína C reactiva, la actividad
que parecen influir en la predisposición a las in- proliferativa de las CPs (el llamado “labelling
fecciones incluyen: (a) supresión de la producción index”), la expresión de ciertos antígenos en la
de anticuerpos y de la proliferación de células B célula plasmática, las alteraciones cromosómicas,
por parte de los monocitos/macrófagos estimula- la hipodiploidía y la expresión del gen de resis-
dos por las CPs mielomatosas; (b) reducción en la tencia múltiple a drogas (MDR-1), algunos de los
producción de interleucina 4 (IL-4), responsable cuales serán revisados brevemente.
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Sin título-2 468 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 27-3. Criterios de Etapificación de Durie-Salmon
Estadio I (baja masa tumoral: < 0,6 x 1012/m2)

Hemoglobina > 10g/dL
IgG < 5g/dL; IgA < 3g/dL; Bence Jones < 4g/24h
Nivel de Calcio normal
Presencia de máximo una lesión osteolítica
Estadio II (masa tumoral intermedia: 0,6 – 1,2 x 1012/m2)

Criterios intermedios entre estadio I y III
Estadio III (alta masa tumoral: > 1,2 x 1012/m2)

Hemoglobina < 8,5g/dL
IgG > 7g/dL; IgA > 5g/dL; Bence Jones > 12g/24h
Nivel de Calcio > 12mg/dL (ajustado por la albúmina sérica)
Presencia de lesiones osteolíticas múltiples
A Creatinina < 2mg/dL
B Creatinina ≥ 2mg/dL
β2-microglobulina. La β2M es uno de los facto- proliferativa y menor posibilidad de obtener

res pronósticos relevantes y se correlaciona estre- metafases analizables. Sin embargo, entre un 30 y
chamente tanto con la masa tumoral, el compro- 50% de los pacientes tienen un cariotipo anormal
miso renal y la clasificación de Durie-Salmon. (20-30% al diagnóstico y 35-60% post-tratamien-
Como factor independiente es capaz de predecir to). Por otro lado, con técnicas de mayor sensibi-
la supervivencia mejor que cualquiera de los otros lidad como hibridación in situ (FISH) o citometría
parámetros, por lo que debe estar incorporado en de flujo se puede observar cantidades anormales
los protocolos de estudio y tratamiento en todos de DNA (aneuploidías de DNA) en hasta un 80%
los pacientes. de los casos. Las alteraciones más frecuentes son
traslocaciones (51%) y trisomías (45%). De parti-
Proteína C Reactiva. La concentración de la PCR cular interés ha resultado el valor pronóstico omi-
es un reflejo de la actividad de IL-6, citoquina fun- noso de la pérdida de un cromosoma 13
damental en la proliferación y sobrevida de las (monosomía 13) o de alteraciones de 11q.
CPs. El valor predictivo de este parámetro parece
ser independiente de la β2M, lo que ha permitido
construir algoritmos de estratificación de riesgo 5. VARIEDADES INFRECUENTES DE
basados en estos dos parámetros. MIELOMA MÚLTIPLE Y OTRAS
GAMMAPATÍAS
Índice Proliferativo de las CPs. El PCLI ("plas-
ma cell labelling index") refleja la actividad 5.1. Mieloma “indolente”
proliferativa de las CPs que suele incrementarse con
la progresión de la enfermedad. La sobrevida de Corresponde a pacientes con criterios diag-
los pacientes con PCLI < 3% es de 56 meses, que nósticos inequívocos de mieloma pero en ausen-
disminuye a 19 meses cuando este valor es ≥ 3%. cia de anemia, insuficiencia renal, hipercalcemia
o lesiones líticas múltiples. Estos pacientes tienen
Citogenética. Las alteraciones de la composición usualmente niveles de proteína M > 3g/dL pero <
cromosómica tienen un reconocido valor en ende 4,5g/dL y > 10% de CPs atípicas en médula
fermedades hematopoyéticas como las leucemias. ósea. Estos pacientes suelen ser asintomáticos y
Hasta hace pocos años la información en el MM no requieren tratamiento hasta que se evidencie
era escasa debido a que este es un tumor de célu- una progresión de la enfermedad, lo que ocurre
las esencialmente maduras con baja tasa con una mediana de 26 meses.
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Sin título-2 469 5/26/06, 10:26 AM

5.2. Leucemia de células plasmáticas los años siguientes. En este sentido, es posible que,
aún en ausencia de criterios clásicos de MM en
Los pacientes con esta inhabitual presenta- médula ósea, en aproximadamente un 50% es po-
ción (< 5% de los pacientes) tienen un recuento sible demostrar la presencia de CPs clonales en
absoluto de CPs ≥ 2 x 106/µL. Se debe diferenciar médula ósea por medio de citometría de flujo,
entre la variedad de novo y la transformación en sugiriendo que desde un comienzo se trata de un
Leucemia de Células Plasmáticas de un mieloma MM con manifestación primariamente “tumoral”
previamente conocido. El tratamiento de estos y no infiltrativa.
pacientes suele ser ineficaz y la mediana de su-
pervivencia es de sólo 2 meses. 5.6. Macroglobulinemia de Waldenström
(MW)
5.3. Mieloma osteoesclerótico
Entidad descrita por primera vez en 1944 por
La principal característica de esta enferme- Waldenström en 2 pacientes con fatiga,
dad es la presencia de una polineuropatía sangramiento de mucosas, adenopatías y anemia
inflamatoria crónica desmielinizante causante de normocrómica asociada a un aumento de la vis-
gran incapacidad motora. Esta alteración aparen- cosidad plasmática secundaria la presencia de
temente es secundaria a una inmunoglobulina con grandes cantidades de proteína IgM circulante. A
toxicidad para las fibras nerviosas periféricas. nivel de médula ósea se observa una infiltración
Además, en esta variedad es frecuente la asocia- de células linfoplasmocitoides productoras de la
ción de alteraciones endocrinológicas (síndrome proteína IgM monoclonal, con frecuente presen-
de POEMS). La médula ósea de estos pacientes cia de basófilos tisulares (mastocitos) que ayudan
usualmente tiene proporciones normales de CPs en el diagnóstico. La edad media de presentación
(< 5%) y el diagnóstico debe confirmarse con la es sobre los 60 años, siendo más frecuente en el
biopsia de una lesión lítica. Desde un punto de sexo masculino. Si bien la presencia de
vista bioquímico, y comparado con los pacientes hiperviscosidad es la regla, sólo un 20% presenta
con MM “clásico”, estos pacientes suelen exhibir síntomas relacionados a ella (cefalea, alteracio-
niveles más elevados de IL-1β, TNF-α e IL-6, pero nes visuales, etc). En todo caso, elevaciones de
niveles inferiores de TGF-β, con un desbalance sobre 4 veces el valor normal confiere un riesgo
que favorece las citoquinas proinflamatorias. de complicaciones clínicas que obligan a consi-
derar la plasmaféresis como una de las medidas
5.4. Plasmocitoma extramedular terapéuticas en estos casos. En alrededor de un
10% de los casos se observa una neuropatía
Esta rara entidad suele afectar con mayor fre- desmielinizante sensitivo-motora crónica a nivel
cuencia el tracto respiratorio superior aunque oca- periférico; en la mitad de estos casos la
sionalmente afecta el tracto digestivo y otros ór- paraproteína IgM está dirigida contra los epítopos
ganos, en ausencia de criterios diagnósticos de un carbohidratos de la glicoproteína asociada a la
MM convencional. El tratamiento, al igual que en mielina (MAG). En términos generales la MW tie-
el caso de un plasmocitoma óseo solitario, es la ne una evolución larvada, con una mediana de
radioterapia, con lo cual se observan excelentes supervivencia de alrededor de 5 años.
resultados, incluyendo la curación en muchos de
ellos. 5.7. Enfermedad de cadenas livianas
5.5. Plasmocitoma óseo solitario La enfermedad de cadenas livianas o mieloma de

Bence Jones se caracteriza por la producción
Corresponde a una lesión osteolítica única monoclonal exclusivamente de la cadena liviana
constituida por CPs clonales, en ausencia de infil- kappa o lambda, en ausencia de la cadena pesada
tración en médula ósea. Suelen tener cantidades correspondiente. En esta entidad es frecuente la
pequeñas de componente M ya sea en suero y/o asociación a daño renal de diversa magnitud se-
en orina, la que desaparece tras radioterapia sobre cundario al paso de esta inmunoglobulina a través
la lesión. Lamentablemente sólo un 50% de estos de la membrana glomerular. Además, y especial-
casos puede ser curado, dado que la otra mitad de mente cuando la cadena liviana es de tipo lambda,
los pacientes evoluciona hacia un MM clásico en el depósito de esta proteína a nivel del glomérulo
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Sin título-2 470 5/26/06, 10:26 AM

y mesangio puede dar origen a una amiloidosis promete frecuentemente el tracto digestivo, con
renal capaz de producir un síndrome nefrótico fre- síndrome de malabsorción como síntoma habitual
cuentemente irreversible. de presentación y tiene una evolución agresiva y
fatal.
5.8. Amiloidosis primaria
Cadenas pesadas µ
Se caracteriza por la formación de fibrillas
con configuración espacial de tipo β a partir de En esta entidad es frecuente encontrar
cantidades variables de cadenas livianas hepatoesplenomegalia y, en cambio, es infrecuente
monoclonales, siendo mucho más frecuente de la presencia de lesiones osteolíticas. La electro-
observar en casos de clonalidad λ. Al igual que el foresis de proteínas puede ser normal, pero en dos
MM, la amiloidosis suele presentarse durante la tercios de los casos se observa proteinuria
séptima década de la vida (mediana 62 años) y se monoclonal. El curso clínico puede ser variable,
caracteriza clínicamente por fatigabilidad, baja de con evolución incluso de varios años.
peso, compromiso del estado general y alteracio-
nes neurovegetativas (parestesia, mareo, síncope,
etc) que resultan progresivas y muy limitantes; asi- 6. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL ENTRE
mismo, un tercio de los pacientes presenta síndro- MGUS Y MM
me nefrótico. Esta enfermedad suele ser tratada
en forma similar al MM, sin embargo, la respues- Además de la dificultad para definir el grupo
ta puede ser pobre, con compromiso progresivo de pacientes con riesgo de progresar hacia un tu-
que lleva inexorablemente a la muerte. mor clínico, la diferenciación inicial entre MGUS
y MM en algunos pacientes puede presentar difi-
5.9. Enfermedad por cadenas pesadas cultades, dado que los parámetros clínicos hasta
ahora utilizados no son suficientes para discrimi-
Corresponden a enfermedades linfoprolife- nar correctamente en todos los casos, razón por la
rativas infrecuentes caracterizadas por la produc- cual el diagnóstico se realiza en presencia de un
ción monoclonal de Igs que carecen de cadenas grupo de criterios clínicos como los definidos por
ligeras. El primer reporte fue hecho en un caso de el "Committee of the Chronic Leukemia-Myeloma
cadena pesada γ (enfermedad de Franklin). Sin em- Task Force", 1973 (tabla 27-4). Asimismo, la can-
bargo, dentro de estos síndromes es más frecuen- tidad de componente-M sérico suele ser uno de
te la enfermedad por cadenas α (enfermedad de los parámetros de mayor utilidad, dado que, mien-
Seligmann) la menos frecuente compromete a la tras mayor sea éste, mayor es la probabilidad de
cadena µ. que se trate de un proceso maligno. Los niveles
de hemoglobina, el porcentaje de CPs en médula
Cadenas pesadas γ ósea, la presencia de hipercalcemia, lesiones líticas
óseas, compromiso renal, etc., se utilizan en el
La edad media es de 60 años y usualmente se diagnóstico diferencial entre estas dos entidades.
presenta con un cuadro semejante a un linfoma Sin embargo, existen casos de MGUS que pre-
agresivo, con adenopatías, compromiso del esta- sentan, por ejemplo, valores de componente-M
do general, anemia, fiebre y hepatoesplenomegalia mayor de 3 g/dL mantenidos en el tiempo, nivel
y raramente –a diferencia del MM tradicional- con utilizado como punto de corte en el caso de la IgG.
lesiones osteolíticas. Si bien hay casos de evolu- Una característica que parece tener importancia
ción prolongada, la enfermedad suele cursar agre- en el diagnóstico diferencial es el índice de proli-
sivamente, con una mediana de supervivencia de feración celular ("labelling index"), que correspon-
alrededor de 12 meses. de a la cuantificación del número de CPs en fase
de síntesis de DNA durante el ciclo celular, aun-
Cadenas pesadas α que este método presenta una tasa de falsos nega-
tivos elevada (hasta un 30% en la evaluación de
La mayor parte de los pacientes son de ori- pacientes con MM). Por último, los niveles de IL-
gen mediterráneo, con una presentación en eda- 6, citoquina relacionada a la proliferación de las
des más precoces que las otras variantes (segunda CPs (ver punto 5), están incrementados en una
a tercera década de la vida). La enfermedad com- minoría de los pacientes portadores de MGUS,
471
Sin título-2 471 5/26/06, 10:26 AM

mientras que se elevan en el 35% a 42% de los 7. PATOGENIA
portadores de MM. El patrón inmunofenotípico
evaluado por medio de citometría de flujo presen- 7.1. Papel de IL-6 y vía de la ciclina D1
ta menor índice de error en esta discriminación;
mientras en el MM las CPs son siempre clonales Durante la última década ha quedado demos-
en ausencia de CPs normales, en prácticamente el trado que uno de los factores de crecimiento más
100% las MGUS es posible demostrar la coexis- importantes para las CPs en el MM es la IL-6, que
tencia de CPs clonales –del todo similares a las se acompaña, además, de un aumento en la expre-
CPs presentes en pacientes con MM- con CPs sión de la fracción soluble de su receptor. El ori-
policlonales inmunofenotípicamente normales. gen de este aumento y su acción es tanto autocrino
Más aún, con este tipo de metodología es posible (origen en las propias CPs) como paracrino -a par-
evidenciar la naturaleza aneuploide de las prime- tir del estroma medular- y ocurre en respuesta a
ras junto a la diploide de las segundas. Resulta otras citoquinas como el TNF o al interferón alfa
interesante cómo este hecho explicaría la diferen- (IFN-α). Así, en etapas iniciales de la enferme-
cia –muchas veces utilizada como otro criterio dad, las CPs son dependientes de IL-6 para su pro-
clínico diferencial- en la presencia de liferación, de modo que la suspensión de esta
hipogammaglobulinemia residual en el MM pero citoquina en estudios in vitro se acompaña de una
no en las MGUS, que mantienen una producción reducción en la tasa proliferativa de las células
basal normal de inmunoglobulinas por parte de tumorales y de un aumento de su apoptosis. A
estas CPs residuales. De cualquier modo, y en un medida que la enfermedad avanza, y probablemen-
sentido clínico práctico, es importante señalar que te como consecuencia de alteraciones adicionales
sigue siendo fundamental el seguimiento clínico del ciclo celular, esta dependencia de IL-6 se pierde
de los pacientes, con mediciones periódicas tanto y las CPs son capaces de mantener un ritmo
de su componente-M como el resto de las proliferativo elevado aún en su ausencia. Recien-
inmunoglobulinas séricas y la evaluación de po- temente se ha demostrado que los niveles eleva-
sibles síntomas relacionados, para intentar pesqui- dos de IL-6 estimulan la expresión de ciclina D1,
sar los casos de MM verdadero o aquellos casos con un aumento consecuente en la proporción de
de MGUS en transformación. CPs reclutadas a ingresar al ciclo celular y, por
Tabla 27-4. Criterios diagnósticos de Mieloma Múltiple
Criterios Mayores
Plasmocitoma en biopsia tisular
Plasmocitosis medular ≥ 30%
Cuantificación de la Proteína Monoclonal
IgG > 3,5 g/dL
IgA > 2 g/dL
Bence Jones ≥ 1g/24h
Criterios Menores
Plasmocitosis medular 10 – 29%
Proteína M presente en niveles inferiores a los descritos en criterios mayores
Lesiones osteolíticas
Disminución en las Inmunoglobulinas no comprometidas en el componente M
IgM < 50 mg/dL
IgA < 100 mg/dL
IgG < 600 mg/dL
El diagnóstico se confirma con al menos un criterio mayor y uno menor o tres criterios menores.
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Sin título-2 472 5/26/06, 10:26 AM

tanto, a un aumento en la proliferación celular. apoptosis en CPs mielomatosas) y disminuye con
Apoyando esta vía se ha encontrado una asocia- niveles elevados de IL-6. Todos estos datos po-
ción entre los niveles de expresión de ciclina D1 nen en evidencia la importancia del balance entre
y la masa tumoral, junto a un incremento en el estímulo proliferativo inducido por citoquinas
antígenos asociados a proliferación celular –como, –particularmente IL-6- sobre la vía de las ciclinas,
por ejemplo, Ki67- y a una mayor inmadurez ce- por un lado, y del efecto contrario dado por las
lular. Por el contrario, se ha descrito variantes de proteínas inhibidoras de estas kinasas –como p16
IL-6 con menor afinidad por la gp-130 (constitu- y p21-, por otro, en la regulación del ciclo celular
yente esencial del receptor de IL-6, IL-GR) que en las CPs del MM.
se asocian a un "down regulation" en la expresión
de ciclina D1, lo que se acompaña a su vez de una 7.3. Apoptosis de CPs
menor tasa proliferativa y de un aumento en la
apoptosis en las CPs en líneas celulares. Finalmen- La apoptosis -muerte celular programada- es
te, resulta interesante la observación de que en un proceso complejo en su regulación. Una de las
casos de MGUS las CPs no tendrían niveles familias de genes más ampliamente estudiados en
incrementados de IL-6, lo que apoya el papel de los últimos años es la familia de BCL-2, dentro de
esta vía regulatoria en el crecimiento tumoral en la cual existen genes con acción pro-apoptótica
esta enfermedad. A nivel clínico resulta interesante (BAX, BCL-X(S)) y otro con función antiapoptosis
que la proteína C reactiva (PCR) es regulada en (BCL-2, BCL-X(L)). En el caso del MM no está
su producción precisamente por la IL-6, por lo que aún bien caracterizado el estatus de esta familia
la medición de este marcador se correlaciona con de genes. Sin embargo, se han encontrado dife-
los niveles de la interleuquina estimuladora y, por rencias en la expresión de BCL-2 entre CPs de
lo tanto, de la actividad tumoral, como ya ha sido pacientes con MM y MGUS versus las CPs de
mencionado. plasmocitosis reactivas, con menor expresión en
estas últimas y mayor expresión en MM en esta-
7.2. Genes supresores de tumores dios avanzados. Además, recientemente se ha re-
portado que las CPs de MGUS tendrían un índice
Existen algunas evidencias preliminares so- apoptótico mayor que en casos de MM. Por otro
bre el papel de genes supresores en el caso del lado, existe una segunda vía de regulación de
MM. Así, se ha encontrado mutación de p53 en apoptosis en MM aparentemente independiente de
un subgrupo de pacientes, aunque con baja fre- BCL-2, constituida por la vía de APO/FAS
cuencia. Otro gen supresor es p16, que compite (CD95). Al respecto, se ha podido ver que la
con la ciclina D1 en su unión a CDK4/CDK6, apoptosis inducida por el ligando de CD95
inhibiendo la actividad kinasa de este complejo. (CD95L) se correlaciona con los niveles de CD95
Esto resulta en un aumento en la defosforilación expresados en las CPs en forma independiente del
de pRb (gen de retinoblastoma) y en un aumento estatus de BCL-2.
del arresto celular en fase G1 (es decir, limita la
capacidad proliferativa). La inactivación de este 7.4. Papel del estroma en las discrasias de CPs
gen, presente en una serie de tumores, ha sido des-
crita en algunos casos de MM, tanto a nivel es- Durante los últimos años se ha puesto espe-
tructural (cromosómico) como por cial énfasis en el papel que parece jugar el estroma
hipermetilación, con la consiguiente pérdida de en MM a través de la acción paracrina de IL-6
acción represora sobre el complejo ciclina D1/ (producida por las células dendríticas del estroma),
CDKs, como se ha evidenciado tanto en líneas el posible rol de la infección por virus Herpes tipo
celulares de MM como en casos al momento del 8, etc., que exceden el propósito de este capítulo
diagnóstico. Un tercer gen supresor en estudio es pero sobre los que debemos mantener atención en
p21, también inhibidor de kinasas dependientes los próximos años.
de ciclinas (CDKs) y que contribuyen a mantener
pRb en estado defosforilado. Se ha podido demos-
trar que en la mayoría de los casos de MM este 8. TRATAMIENTO
gen se encuentra expresado en forma constitutiva
y que esta expresión aumenta con el uso de El detalle del tratamiento en esta enferme-
dexametasona (droga conocidamente inductora de dad es complejo y excede los objetivos de esta
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Sin título-2 473 5/26/06, 10:26 AM

publicación, por lo que nos remitiremos a un re- médula ósea normal.
sumen conceptual de los elementos más impor-
tantes: Dosis altas y trasplante de médula ósea. Dado
que el incremento menor de dosis de agentes
Terapia de apoyo. Considerando la naturaleza alquilantes no ha logrado un impacto mayor en la
crónica y hasta ahora no curable de esta enferme- sobrevida de los pacientes, se ha intentado un au-
dad y las múltiples alteraciones clínicas que pue- mento mayor –en dosis capaces de producir aplasia
de producir, resulta fundamental la evaluación medular- apoyado por una reconstitución de la
constante y el tratamiento de los dolores óseos y médula ósea a través de trasplante de progenito-
fracturas en hueso patológico, anemia, res hematopoyéticos autólogos (recolectados del
hipercalcemia, etc. mismo paciente previamente). Así, la experiencia
del grupo francés demostró recientemente que este
Tratamiento citotóxico. Los pacientes inicial- tipo de terapia es capaz de lograr una remisión
mente asintomáticos usualmente tienen una masa completa de la enfermedad (ausencia de
tumoral relativamente baja y una velocidad de plasmocitosis medular y desaparición del compo-
progresión lenta. En este grupo no se ha demos- nente M) en hasta un 50% de los pacientes, lo-
trado un beneficio en términos de mediana de su- grando una significativa mayor sobrevida compa-
pervivencia con tratamiento citotóxico precoz. Por rado con dosis convencionales. Esto ha significa-
esta razón en etapas iniciales de la enfermedad do que en pacientes jóvenes (hasta 60 o incluso
sólo está indicado un seguimiento cercano, usual- 65 años) con enfermedad agresiva esta sea, ac-
mente evaluando parámetros sencillos como tualmente, la alternativa de elección en casi todos
hemograma y cuantía del componente M median- los grupos clínicos. Con respecto al trasplante
te una electroforesis de proteínas. Por el contra- alogeneico -esto es, a partir de un donante
rio, en aquellos pacientes sintomáticos y/o con histocompatible relacionado- la experiencia es me-
enfermedad de alta masa tumoral o progresiva está nor esencialmente por la edad de la mayoría de los
justificado el tratamiento, dado que mejora en for- pacientes (lo que disminuye la probabilidad de dis-
ma significativa tanto la calidad como la mediana poner de un donante) y por la toxicidad propia de
de supervivencia. El tratamiento considera dos él. Sin embargo, tanto la ausencia de contamina-
formas esencialmente distintas como son: ción tumoral de la médula ósea injertada como el
posible efecto de ésta sobre las CPs tumorales
Dosis convencionales. Las drogas clásicamente residuales (efecto “injerto contra mieloma”) han
más utilizadas son la combinación de Melfalán logrado la curación de un reducido número de pa-
(usualmente 0,2 mg/Kg) y Prednisona (usualmente cientes y puede ser una alternativa a evaluar en gru-
2 mg/Kg) dados durante 4 días cada 4 a 6 sema- pos seleccionados de pacientes.
nas. Esta terapia suele ser relativamente bien tole-
rada y poco tóxica y permite un buen control de la Otras drogas. Otras vías terapéuticas interesan-
enfermedad tanto en términos subjetivos como tes de cara al futuro lo constituyen drogas que
objetivos. Así, alrededor de un 50-70% de los pa- modulan la respuesta inmune o la actividad celu-
cientes logra una disminución en su sintomatología lar como respuesta a las CPs tumorales. En esta
después de 3 a 6 meses de tratamiento, lo que sue- línea de pensamiento están drogas como la talido-
le acompañarse de una reducción en la masa mida, los interferones y la producción de vacunas
tumoral, pero muy infrecuentemente de una des- anti-idiotipos específicos para cada paciente, que
aparición del componente M, que se mantiene por su extensión y complejidad no es posible de-
evidente en la mayoría de los casos. En aquellos sarrollar en este capítulo.
casos que no responden a estas medidas o que se
presentan con alteraciones agudas como insufi-
ciencia renal una segunda alternativa consiste en
quimioterapia endovenosa. Si bien existen dife- LECTURAS SUGERIDAS
rentes protocolos en este sentido, una de las com-
binaciones de drogas más utilizadas son la Hallek, M.; Bergsagel, P.L.; Anderson, K.C.,
Vincristina, Adriamicina y Dexametasona (VAD), “Multiple myeloma: increasing evidence for
que resulta en un rápido alivio sintomático en hasta multistep transformation process”, Blood
dos tercios de los casos, con escasa toxicidad a la 1998;91:3-21.
474
Sin título-2 474 5/26/06, 10:26 AM

Kawano, M.M.; Mihara, K.; Huang, N. et al.,
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Sin título-2 475 5/26/06, 10:26 AM

476
Sin título-2 476 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 28
ENFERMEDADES ORALES DE ORIGEN

INMUNOLÓGICO
Benjamín Martínez R.
1. Introducción
2. Reacciones de hipersensibilidad ora-
les
3. Manifestaciones orales de inmunode-
ficiencias
3.1. Candidiasis oral en infección por
VIH
3.2. Leucoplasia pilosa
3.3. Sarcoma de Kaposi
4. Enfermedades autoinmunes orales
4.1. Síndrome de Sjögren
4.2. Úlcera oral recurrente (aftas)
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RESUMEN
La mucosa oral, inclusive la encía, puede presentar distintas lesiones de origen inmunológico,
ya sea expresión por inmunodeficiencias, reacciones de hipersensibilidad, o manifestaciones de
enfermedades autoinmunes. Muchas otras enfermedades bucales tienen participación del siste-
ma inmune (por ejemplo las enfermedades periodontales tales como periodontitis y gingivitis)
pero solamente nos referimos en este capítulo a aquellas que tienen un origen netamente
inmunológico, algunas de ellas son muy frecuentes en la población como son las aftas (vulgar-
mente llamadas "fuegos"), otras ocasionan complicaciones bucales severas (síndrome de Sjögren)
y otras han adquirido gran importancia en los últimos años (Sida y sus manifestaciones bucales).
1. INTRODUCCIÓN roja o mezcla, blanco y roja, roja y ulceración.

Las sustancias causales de hipersensibilidad,
Muchas de las enfermedades de la boca, in- pueden ser cualquier sustancia que esté o no en
cluyendo las que comprometen dientes, huesos contacto con la mucosa oral, y la gran mayoría
maxilares, mucosa oral y glándulas salivales, tie- provocan una hipersensibilidad tardía o tipo IV
nen un componente inmunológico que puede ex- de la clasificación de Gell y Coombs. Es muy raro
plicar su origen, la forma como se desarrollan, encontrar otro tipo de reacción de hipersensibili-
cómo se defiende el organismo ante ellas, o por dad en boca, tal como la reacción I o anafiláctica,
qué algunos pacientes presentan grados leves y pero las tipos II y III prácticamente no se presen-
otras grandes alteraciones. El gran avance experi- tan en mucosa oral.
mentado por la inmunología básica no ha dejado La reacción de hipersensibilidad tipo IV (ver
de afectar el mejor conocimiento que se tiene de capítulo 21) es desencadenada en la boca por di-
enfermedades tales como caries, quistes de los versas sustancias tales como las que se encuen-
maxilares, cáncer oral y aftas. tran en obturaciones de dientes como por ejemplo
Indudablemente que no se puede revisar to- componentes de las amalgamas (plata, mercurio,
das las enfermedades de la boca en un capítulo, estaño, cobre), de prótesis dentarias (níquel, cro-
por lo cual hemos seleccionado aquellas condi- mo, cobalto), de otras coronas dentarias (níquel,
ciones patológicas más interesantes para el paladio), o sustancias en contacto con la mucosa,
inmunólogo clínico y que pueden estar compro- que pueden ser alimentos (naranja, chocolate,
metiendo la boca. En este capítulo se describirán nuez, almendra, flúor presente en el agua, etc.).
las manifestaciones orales de enfermedades de También cosméticos tales como lápiz labial. Para
origen inmunológico; se han agrupado en reac- establecer el diagnóstico es necesario solicitar test
ciones de hipersensibilidad, enfermedades de hipersensibilidad a materiales dentales y ali-
autoinmunes e inmunodeficiencias. mentos. En el caso del producto dental al cual el
paciente pudiera haberse sensibilizado, debiera ser
reemplazado, por ejemplo las amalgamas por re-
2. REACCIONES DE HIPERSENSIBILI- sinas, coronas de metales no nobles por metales
DAD ORALES nobles. En general la cerámica es muy poco
alergizante y pudiera preferirse en estos pacientes
Las reacciones alérgicas no son extrañas de pero tiene un costo elevado, la otra alternativa son
presentarse en la mucosa oral, y lamentablemente resinas compuestas pero también se ha descrito
muchas veces no son reconocidas por el especia- hipersensibilidad a este material. En el caso de los
lista, ya que adoptan un aspecto clínico variado el alimentos sólo nos queda aconsejar que el pacien-
cual puede ser una úlcera, vesícula, lesión blanca, te evite ingerir dicho alimento. En alergias a pró-
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tesis metálicas dentales, o pacientes con alergia a nes idénticas o similares a liquen plano, otras le-
níquel y que poseen en la boca prótesis metálicas, siones blancas tipo leucoplasias, o rojizas tipo
la alternativa es usar implantes de titanio, las que candidiasis eritematosa, o síndrome de boca urente
tienen un elevado costo. y que corresponden a hipersensibilidad. El trata-
Las manifestaciones clínicas que se pueden miento debe iniciarse después que se ha estable-
observar en pacientes con alergias a productos den- cido el agente al cual se ha sensibilizado el pa-
tales son variadas: úlceras múltiples en boca, que ciente, suprimir dicha sustancia y en caso de ser
aparecen constantemente, similares a úlceras ora- necesario administrar corticoides vía sistémica o
les recurrentes; lesiones dolorosas, con úlceras que tópica, lográndose un rápido alivio.
son de dos a seis u ocho milímetros, rodeadas por
halo rojizo, que aparecen constantemente. Esto no
significa que las aftas (también llamadas úlceras 3. MANIFESTACIONES ORALES DE
orales recurrentes) sean de origen alérgico, pero INMUNODEFICIENCIAS
sí en algunos pacientes puede demostrarse una
causa de hipersensibilización, y estos pacientes se La mayoría de los pacientes con inmunode-
pueden mejorar por completo de sus úlceras. Las ficiencias presenta lesiones orales en algún mo-
aftas (ver punto 4.1) no tienen una etiología clara mento de su evolución, desde inmunodeficiencias
pero se cree que diversos factores inmunológicos, inespecíficas, a inmunodeficiencias celulares o
tales como inmunodeficiencia celular, u otros pue- humorales. Debido a la importancia de la infec-
den contribuir a su desarrollo como estrés, facto- ción por HIV sólo se describirá ésta (ver capítulo
res hormonales, alimentos, alteraciones 30).
hematológicas, y puede que en muchos pacientes Desde el inicio de la epidemia por HIV se ha
coincidan varios factores. Existe casi completa observado frecuentemente el compromiso de la
unanimidad respecto a que la causa no es viral, boca por diferentes infecciones oportunistas es-
bacteriana o de origen microbiológico. pecialmente ocasionadas por hongos (Cándida) y
Existen pacientes que presentan lesiones de virus (Epstein-Barr, Herpes). Además de la im-
hipersensibilidad en contacto con amalgamas, o portancia que existe en reconocer o detectar un
grandes obturaciones, en estos casos las lesiones individuo infectado, lo cual eventualmente se pue-
han sido llamadas reacciones liquenoides, y se han de realizar por las manifestaciones que se obser-
confundido frecuentemente con liquen plano. El van en la boca, también es importante diagnosti-
aspecto clínico de estas lesiones son manchas ro- car y tratar adecuadamente las lesiones que se pre-
jas con halo blanquecino, o estrías blancas en la sentan ya que pueden ser causa de severa
periferia (estrías de Wickham descritas en liquen morbilidad.
plano). Ambas lesiones han sido difíciles de dis- Otro aspecto importante en las lesiones
tinguir ya que ni clínica ni histológicamente pue- bucales asociadas con HIV, es que algunas de ellas
den diferenciarse por completo; la evaluación del están asociadas con una evolución más corta, en
paciente, en conjunto con la biopsia de la lesión, otras palabras, cuando se presenta candidiasis y
el test de hipersensibilidad y la evolución pueden leucoplasia pilosa, se ha observado que los indi-
llevar a establecer su origen, y su mejor tratamien- viduos HIV positivos con dichas lesiones llegan
to. El liquen plano tiene un componente antes a SIDA.
psicosomático importante y muchos pacientes tie- Clasificación de las lesiones orales asocia-
nen cancerofobia al igual como ocurre en el sín- das con infección por HIV (como fue acordado en
drome de boca urente, entidad en la cual se exa- la Reunión del Grupo de Clasificación de la C.E.E.
mina al paciente y no se encuentra ninguna altera- para los problemas orales relacionadas con la in-
ción patológica, pero el paciente se queja de ardor fección por HIV, realizada en Londres, en septiem-
en lengua, labios y a veces en mejillas. Estos pa- bre de 1992). Todas las lesiones en los tres Gru-
cientes en raras ocasiones pueden tener el síndro- pos aparecen en orden alfabético.
me de boca urente por hipersensibilidad y, por lo
tanto, es conveniente descartar los agentes que se 3.1. Candidiasis oral en infección por VIH
han mencionado anteriormente.
Como se ha señalado a veces los pacientes La infección por HIV frecuentemente, ya sea
con reacciones de hipersensibilidad orales pueden en individuos asintomáticos o con SIDA, se acom-
presentar úlceras tipo aftas, otros presentan lesio- paña frecuentemente de infección por Cándida en
480
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Tabla 28-1. Clasificación de las lesiones orales en la infección por HIV
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Grupo I. Lesiones fuertemente asociadas con infección por HIV
Candidiasis: Eritematosa, Seudomembranosa

Enfermedad periodontal: Eritema gingival linear, Gingivitis Necrotizante (ulcerativa),
Periodontitis Necrotizante (ulcerativa)
Leucoplasia pilosa
Linfoma no Hodgkin
Sarcoma de Kaposi
Grupo II. Lesiones menos frecuentemente asociadas con infección por HIV
Estomatitis necrotizante (ulcerativa)

Enfermedad de Glándula salival
Boca seca por disminución de flujo salival
Tumoración uni o bilateral de glándulas salivales mayores.
Hiperpigmentación melanótica
Infecciones bacterianas: Mycobacterium avium-intracelular, Mycobacterium tuberculosis
Infecciones virales: Virus Herpes simplex, Virus Papiloma humano (lesiones tipo verrugas),
Condiloma acuminado, Hiperplasia epitelial focal, Verruga vulgar, Virus varicela
zoster, Herpes zoster, Varicela
Púrpura trombocitopénica
Ulceración NOS (Sin otra especificación, del inglés: "Not Otherwise Specified")
Grupo III. Lesiones observadas en la infección por HIV
Aftas recurrentes
Alteraciones neurológicas: Parálisis facial, Neuralgia del trigémino
Angiomatosis epitelioide (bacilar)
Enfermedad por arañazo de gato
Infecciones bacterianas: Actinomices israelii, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Infecciones por hongos diferentes de candidiasis: Cryptococcus neoformas,
Geotrichum candidum, Histoplasma capsulatum, Mucoraceae (mucormicosis/
cigomicosis), Aspergillus flavus
Infecciones virales: Citomegalovirus, Molusco contagioso
Reacciones a drogas (ulcerativa, eritema multiforme, liquenoide, epidermolisis tóxica).
_____________________________________________________________________________________
la boca. Esta candidiasis puede ser eritematosa, queilitis angular, como zona descamativa en las
como al parecer, empieza en muchos casos, con comisuras, con enrojecimiento. Cuando se obser-
enrojecimiento del paladar duro y dorso de len- ve alguna de estas presentaciones de candidiasis
gua, en la cual se observa área depapilada hacia el en un individuo joven y no hay algún factor
centro de ella, generalmente indolora. En la va- predisponente sistémico o localizado para expli-
riedad seudomembranosa se presentan manchas car la presencia del hongo en la boca, debiera
blanquecinas, que se pueden desprender al raspa- solicitarse exámenes para descartar la infección
do, dejando una superficie rojiza, a veces sangran- por HIV. Los factores que favorecen el desarrollo
te. Mucho menos frecuente es la variedad de la candidiasis bucal son muchos, y entre ellos
hiperplásica, que generalmente ocurre en cara in- destacan los siguientes: ingestión previa de
terna de mejillas. La otra forma de candidiasis, es antibióticos o corticoides, déficit nutricionales,
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Sin título-2 481 5/26/06, 10:26 AM

alteraciones endocrinas, neoplasias malignas, y generalmente se presenta en el paladar duro, como
otras alteraciones inmunológicas distintas de la una mancha violácea o rojiza de límite difuso, in-
ocasionada por HIV. La candidiasis también es una dolora, que en el 20% de los casos puede ser la
condición frecuente en los extremos de la vida, primera manifestación. Esta neoplasia a veces pre-
recién nacidos y ancianos, portadores de prótesis senta un aspecto tumoral, pero muchas veces se
(especialmente de acrílico), e individuos con observa como una mácula rojiza. En el primer caso
xerostomía (sequedad de la boca). Se ha demos- tiene un pronóstico peor. La casi totalidad de ca-
trado que individuos con HIV, asintomáticos, y sos observados en Chile, con SK, han sido hom-
que presentan candidiasis, desarrollarán signos bres homosexuales, y al parecer es raro de obser-
de SIDA al cabo de tres meses, en el 59% de ellos. var en otros grupos de riesgo. Este tumor es
También se sabe que cerca del 70% de individuos multifocal y en la boca puede observarse varias
con candidiasis oral tienen recuento de LT CD4 lesiones en paladar y/o encía, aunque lo más fre-
menor a 200 células/µL. El diagnóstico de la cuente es que el paciente tenga otras lesiones en
candidiasis generalmente se puede realizar por su la piel de las extremidades superiores, tórax, o piel
aspecto clínico, pero se puede complementar con de la cara. Histológicamente este tumor presenta
frotis y tinción de PAS, o cultivo. El tratamiento una proliferación de células fusadas, más o me-
de la candidiasis oral es generalmente tópico: nos arremolinadas, con formaciones de múltiples
nistatina, de 500.000 UI, tres o cuatro veces al día espacios vasculares, con células endoteliales
(disolver y después ingerir), ojalá que por lo me- atípicas, y abundante hemorragia antigua y recien-
nos durante un mes en individuos HIV positivos o te. Lamentablemente cuando se observa, son po-
con SIDA. Pueden utilizarse otros antimicóticos cos los meses de vida que le quedan al paciente, y
tal como fluconazol pero es más costoso. es también poco lo que se puede hacer, a no ser
que el paciente esté en un programa intensivo de
3.2. Leucoplasia pilosa terapia anti-retroviral.
En 1984 Greenspan y colaboradores descri-

bieron esta nueva lesión en patología bucal, la cual 4. ENFERMEDADES AUTOINMUNES
es una mancha blanca, corrugada en el borde de ORALES
lengua, bilateral, que no se desprende al raspado y
ocasionada por el virus Epstein-Barr (VEB) que se Las enfermedades autoinmunes pueden afec-
observa más frecuentemente en individuos HIV tar la boca, y la más conocida de ellas es el Sín-
positivos, pero que también ha sido descrita en otras drome de Sjögren, pero existen muchas otras que
inmunodeficiencias. Esta mancha blanca también provocan lesiones severas como son el pénfigo,
se caracteriza porque se encuentran hifas de cándi- penfigoide, y en otras que la posible naturaleza de
da en la superficie, pero es de origen viral, obser- la lesión se cree que es autoinmune. A continua-
vándose en las biopsias, hiperplasia epitelial, con ción se describirán el Síndrome de Sjögren y las
marcada paraqueratosis, células similares a aftas, debido a que son las más frecuentes en la
coilocitos (en ellas se puede demostrar presencia población.
de viriones de VEB), de citoplasma claro con cuer-
pos de inclusión intranucleares, acantosis, y ausen- 4.1 Síndrome de Sjögren
cia de infiltrado inflamatorio. El diagnóstico de esta
lesión también puede realizarse con frotis citológico El Síndrome de Sjögren (SS) consiste en una
teñido con Papanicolau. Esta lesión no requiere tra- tríada de xerostomía, queratoconjuntivitis sicca
tamiento, pero se ha observado que desaparece con (sequedad de la conjuntiva ocular) y otra enfer-
algunos antivirales, y su importancia es que está medad autoinmune, la mayoría de las veces Ar-
asociada a HIV en la mayoría de los pacientes, y tritis reumatoídea. Cuando se presenta sin otra
que en aquellos casos que se presenta, se observa enfermedad autoinmune se conoce como "Sín-
una evolución a SIDA más rápida. drome Sicca", o SS primario, y el otro caso SS
secundario, o sea con artritis reumatoídea. Para
3.3. Sarcoma de Kaposi establecer el diagnóstico de (SS), según criterio
europeo, deben presentarse 4 de las 6 siguientes
El Sarcoma de Kaposi (SK) es la neoplasia características, siendo requisito la presencia de
intraoral más común que se observa en el SIDA y (d) ó (e).
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Sin título-2 482 5/26/06, 10:26 AM

a) Uno de tres síntomas oculares salivales, especialmente de la parótida.
¿Ha tenido durante los últimos tres meses, en Además del criterio europeo para el diagnós-
forma persistente, molestias por sus ojos se- tico de SS, existe el llamado de San Diego, en que
cos? el diagnóstico se basa en presencia de hallazgos
¿Tiene en forma recurrente sensación de are- objetivos (compromiso ocular: test de Schirmer o
nilla en los ojos? rosa de bengala; compromiso oral: flujo salival,
¿Utiliza sustitutos de lágrimas más de tres sialografía, scintigrafía), y debe incluir biopsia de
veces al día? glándulas salivales labiales, y además estudio
serológico positivo (SS-A, SS-B, FR, ANA).
b) Uno de tres síntomas bucales Para establecer el compromiso ocular se pue-
¿Ha tenido durante los últimos tres meses, en de evaluar el flujo de las glándulas lacrimales con
forma persistente, sequedad de la boca? el test de Schirmer (explicación en el punto C).
¿Ha tenido tumoración recurrente o persistente En cuanto a la xerostomía debe medirse el flujo
de sus glándulas parótidas? salival, el cual en estos pacientes se hace nor-
¿Frecuentemente toma líquidos para poder malmente con estimulación con ácido cítrico al
deglutir alimentos secos? 5%. De ayuda es la biopsia de glándulas salivales
menores, normalmente de cara interna del labio
c) Test de Schirmer (menor o igual a 5 mm/5 inferior, donde se toman tres o cuatro lobulillos
min). El test de Schirmer es un test glandulares y se demuestra infiltrado focal
oftalmológico para la evaluación de la pro- linfocitario (más de un foco con 50 células
ducción de lágrimas, en el cual se coloca un mononucleares, principalmente linfocitos),
papel filtro en ambos ángulos internos del ojo periductales, que causan reemplazo de acinos glan-
y se observa su humectación al cabo de 5 mi- dulares. Otro estudio que se puede hacer es la
nutos. Si ella es menor o igual a 5 mm es su- sialografia (inyección de medio de contraste, es-
gerente de xeroftalmía y podría estar asocia- pecialmente en parótidas), aunque en la actuali-
da a síndrome de Sjögren, aunque existen dad se prefiere la cintigrafía de las gládulas
muchas causas de ella al igual que en la salivales. Tiende a utilizarse cada vez más el estu-
xerostomía. El valor normal es de 10 mm de dio de anticuerpos: SS-A, el cual está presente en
humedad para cada ojo después de 5 minu- el 70-80% de los pacientes con SS primario y
tos. menos del 10% de SS secundario. El anticuerpo
SS-B, por otra parte se encuentra en el 50-70% de
d) Biopsia de glándula salival labial con “score” los SS primarios y menos del 5% de los casos se-
mayor o igual a 1 foco/mm2 (Un foco: infil- cundarios.
trado de al menos 50 linfocitos periductales). La causa del SS es desconocida, pero pue-
den existir algunos factores genéticos y última-
e) Positivo para alguno de los siguientes mente se cree que puede estar relacionado a in-
autoanticuerpos: Factor reumatoídeo (FR), fección por VEB. Cerca del 80 a 90% de los casos
Anticuerpos antinucleares, (ANA), SS-A, SS- se observan en mujeres, cercanas a los 40 años, y
B en 15% de los pacientes que tienen artritis
reumatoídea se observa SS. El principal síntoma
f) Positivo en alguno de los siguientes exáme- oral es la xerostomía, causada por la disminución
nes: cintigrafía, sialografía, flujo salival no de la saliva, que a su vez ocasiona fácilmente in-
estimulado. fección por Cándida, en la mucosa del paladar y
dorso de lengua, y también queilitis angular. Mu-
El SS es más común en mujeres, y muchos chas veces la lengua, especialmente en casos avan-
pacientes se presentan con síntomas artríticos. La zados, se observa depapilada, y que arde. La falta
queratoconjuntivitis se manifiesta como sequedad de saliva también favorece el desarrollo de caries
y sensación de arenilla en los ojos. Las principa- cervicales, dificulta la alimentación, e impide el
les características orales son: disminución de la uso adecuado de prótesis removibles. Cerca de un
saliva, dificultad en la deglución y masticación, tercio de los pacientes pueden tener tumoración
anomalías en la sensación del gusto y una mucosa de las parótidas en el curso de la enfermedad, ge-
oral lisa y lustrosa. Algunos pacientes pueden pre- neralmente bilateral pero no dolorosa, y recurren-
sentarse con tumoración bilateral de las glándulas te. Debido a la xerostomía no es infrecuente que
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se produzca además la infección glandular. La cervicales y enfermedad periodontal.
sialografía, inyección de medio de contraste en el
conducto de Stensen, permite detectar sialectasia 4.2 Úlcera oral recurrente (aftas)
puntiforme y no se observa la trama ductal nor-
mal, por lo que se observa un aspecto de "cerezo a) Etiopatogenia
en flor" o de "frutos sin ramas", pero lo más im-
portante es determinar la presencia de zonas La úlcera oral recurrente, afta, o estomatitis
radiopacas de más de 2 mm. También con aftosa recurrente, y vulgarmente llamada "fuego",
cintigrafía de Tecnecio 99 se puede demostrar reconstituye una alteración de la mucosa de revesti-
tardo en la captación y retardo en el vaceamiento. miento de la boca. Diferentes estudios han demos-
El paciente con SS también presenta trado una frecuencia entre 5 y 66% de la pobla-
queratoconjuntivitis, y generalmente más que el ción, dependiendo del grupo en estudio. La ma-
dentista, es el oftalmólogo quien realiza o sospe- yoría de los autores distingue factores predispo-
cha primero del diagnóstico. La queratoconjun- nentes y factores etiológicos en el origen del afta.
tivitis es debido a la xeroftalmía, falta de lágri- Pero la realidad hasta el momento es que la etio-
mas, y en el SS no sólo estas glándulas están afec- logía exacta en la mayoría de los casos no se esta-
tadas sino también otras como las que se encuen- blece, por lo cual es difícil tratar de explicar cómo
tran en cualquier mucosa (respiratoria, esófago, diferentes factores etiológicos pueden llegar a oca-
genital, etc.). Las manifestaciones oculares son sionar la ruptura del epitelio, y especialmente en
menores en la mañana y aumentan en la tarde, con algunas ubicaciones de la boca, tal como en fon-
sensación de arenilla, o cuerpo extraño en los ojos. do de vestíbulo, cara interna de los labios, piso de
En los exámenes de laboratorio se observan boca, paladar blando, o sea donde se encuentra la
una serie de alteraciones tales como aumento de denominada mucosa de revestimiento, pero gene-
la velocidad de sedimentación, aumento de los ni- ralmente no se presentan estas úlceras en la mu-
veles de inmunoglobulinas, especialmente IgG. El cosa del dorso de la lengua, la encía o el paladar
estudio de autoanticuerpos puede ser de utilidad y duro. De todas maneras para entender mejor como
en los últimos años se está utilizando el factor ocurre esta lesión es importante revisar los facto-
reumatoídeo, positivo en el 75% de los casos. Anti- res predisponentes, que en muchos casos puede
SS-A y anti-SS-B, son dos anticuerpos que se en- explicar el origen del afta y demostrar en algunos
cuentran especialmente en pacientes con SS pri- casos factores que pueden corregirse y mejorar o
mario. disminuir la frecuencia de las úlceras. La mayoría
La histopatología demuestra que todas las de los pacientes que presentan aftas son en gene-
glándulas salivales están afectadas, y por esta ra- ral sanos, pero debe recordarse que a veces se aso-
zón se utiliza biopsia de glándulas salivales me- cia esta lesión con algunas condiciones generales
nores, especialmente desde la cara interna del la- tales como la enfermedad de Behçet, neutropenia
bio inferior, de donde se extirpan tres a cinco cíclica, síndrome de faringitis y fiebre periódica,
lobulillos glandulares, y si se encuentran focos de déficit nutricionales, alteraciones gastrointes-
linfocitos y plasmocitos con 50 o más células cada tinales tales como colitis ulcerativa, enfermedad
uno, se confirma el diagnóstico de SS (en una área de Crohn, y en algunas inmunodeficiencias inclu-
de 4 mm2 de tejido glandular). Entre más focos de yendo SIDA.
células inflamatorias se observán más severo es Varios estudios han demostrado, especial-
el cuadro, y dichos focos se asocian con un mayor mente en Inglaterra y Estados Unidos, déficit de
reemplazo de acinos, mayor fibrosis y enferme- fierro, ácido fólico, o vitamina B12, y se estima
dad más severa. que aproximadamente el 20% de los pacientes con
El tratamiento del SS es de apoyo en base a aftas presentan este tipo de alteraciones. Debe
lágrimas y saliva artificiales, ya que no existe nin- sospecharse de dichas alteraciones en pacientes
gún tratamiento definitivo. Los sialogogos tales con aftas que empeoran, o sea que presentan las
como pilocarpina pueden estimular la secreción úlceras cada vez con más frecuencia o mayor gra-
salival. También se utilizan corticoides pero el trado de severidad.
tamiento debe realizarlo el médico reumatólogo. Algunos pacientes con aftas correlacionan la
El dentista puede colaborar evitando, tratando o presencia de las úlceras con algunos alimentos,
ayudando a prevenir las complicaciones que apa- no existen publicaciones con suficiente número
recen en la boca, tales como candidiasis, caries de casos que corroboren dicha aseveración, y ra-
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ramente cambios en la dieta alimenticia producen B, con participación de complejos inmunes, que
algún beneficio. También existe la posibilidad de incluso se ha observado elevados en algunos pa-
reacción de hipersensibilidad a algún antígeno, que cientes, pero no precisamente en aquellos que tie-
estaría ocasionando probablemente un cuadro si- nen aftas menores. Se ha observado depósito de
milar a dermatitis por contacto, o de atopia en al- complejos inmunes en biopsias, a nivel del estra-
gunos pacientes. En algunas mujeres se ha obser- to espinoso, y hay algunas evidencias de vasculitis
vado que las aftas tienen un ciclo relacionado con por complejos inmunes que conlleva un deposito
la fase lútea del ciclo menstrual, presumiblemente de inmunoglobulinas y complemento.
asociado con los cambios en los niveles de Uno de los aspectos que durante muchos años
progestágenos. También existen factores locales se ha investigado es la asociación del afta con al-
que predisponen a la aparición de las aftas tales gún microorganismo, especialmente de origen
como trauma y en algunas personas predispuestas bacteriano, y en concreto del grupo de los
a la aparición de estas lesiones, un trauma míni- estreptococos, ya sea como patógeno directo o
mo puede desencadenar la lesión, en una mucosa como estímulo antigénico que llevaría a la gene-
no queratinizada; esto se relaciona también con la ración de anticuerpos que podrían tener una reac-
menor frecuencia de aftas que ocurre en fumado- ción cruzada con el epitelio. Inicialmente en el año
res, y la ausencia casi completa de úlceras en la 1963 se demostró que sería un Streptococcus
mucosa oral queratinizada. De todas maneras es sanguis pero posteriormente se señaló que sería
claro que las aftas y su etiología fundamental no de la cepa Streptococcus mitis, pero estudios si-
está aún clara, y en la actualidad la mayoría de los guientes no han demostrado que haya diferencias
autores concuerda que existe una alteración me- entre los sujetos con aftas y controles en cuanto a
diada por un mecanismo inmunológico, pero no su respuesta mitógenica linfocitaria. No se ha de-
existe tampoco acuerdo del mecanismo mostrado la presencia de antígenos y viriones del
inmunopatogénico que ocasiona la ulceración, que virus herpes en el afta y es claro que los trata-
explique la intermitencia de las lesiones, la natu- mientos del afta que han empleado antivirales no
raleza autolimitante de las úlceras, y la falta para tienen ningún beneficio.
responder ante drogas inmunomoduladoras.
Los estudios histopatológicos y mediante téc- b) Características clínicas
nicas de inmunohistoquímica han permitido de-
mostrar la presencia de linfocitos grandes Las úlceras orales recurrentes pueden
granulares (células NK) y de linfocitos TCD4+, clasificarse, de acuerdo a Lehner, en afta menor,
en la etapa pre-ulcerativa, mientras que la fase de afta mayor y úlceras herpetiformes. La asociación
ulceración est asociada con la aparición de con lesiones extraorales de cualquiera de las va-
linfocitos TCD8+, y estos son reemplazados por riedades anteriores, en la cual se observa compro-
células TCD4+, en la fase de reparación. También miso de mucosa genital, piel, y a veces articula-
se encuentran neutrófilos, pero a diferencia de la ciones y alteraciones neurológicas se denomina
enfermedad de Behçet donde ellos están síndrome Behçet.
hiperactivos, en el afta no se observa alteración Debido a que no hay ningún otro medio para
en la función quimiotáctica. En la fase ulcerativa hacer el diagnóstico del afta, diferente del reco-
los antígenos HLA de clase I y II se encuentran en nocimiento de sus características clínicas, es ex-
las células basales del epitelio y posteriormente tremadamente importante que el clínico que exa-
en todos los estratos epiteliales debido probable- mina la mucosa bucal, establezca este diagnósti-
mente a interferón gamma (IFNγ) liberado por los co correctamente. Esta lesión se caracteriza por la
linfocitos T. Estos antígenos pueden servir así de recurrencia de una o más úlceras de forma redon-
target para que las células epiteliales sean ataca- deada, dolorosa, a intervalos de unos pocos días o
das por linfocitos CD8+, y es posible observar en de meses. Generalmente se inicia en la niñez o
biopsias de pacientes con aftas la presencia, más adolescencia y persiste durante varios años.
allá de lo normal, de linfocitos intraepiteliales, en Lamentablemente no existen suficientes pu-
el estrato espinoso. De todas maneras el mecanis- blicaciones que permitan caracterizar los distin-
mo inmune, que inicialmente se creyó que era tos aspectos clínico-patológicos de las distintas va-
mediada por células, parece ser más probable que riedades de afta y en general uno encuentra publi-
involucre un mecanismo de citotoxicidad celular caciones que relatan características para todos los
dependiente de anticuerpos mediada por linfocitos tipos de aftas y parecería conveniente investigar
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si existen algunos factores importantes en la etio- LECTURAS SUGERIDAS
logía, la histopatología y el tratamiento en los dis-
tintos tipos de aftas. Daniels, T.E., “Sjögren's syndrome: clinical
spectrum and current diagnositic controversies”,
Afta menor. Es la variedad más común, cerca del Adv Dent Res; 10: 3-8, 1996.
80% de todas las úlceras orales recurrentes, y se
caracteriza por úlceras, entre 1 y 5, redondas u Daniels, T.E., Fox, P.C., “Salivary and oral
ovaladas de menos de 10 mm de diámetro con una components of Sjögren's syndrome”, Rheum Dis
seudomembrana blanco-grisácea y rodeada por un Clin North Am.; 18:571-589, 1992.
halo eritematoso. Generalmente este tipo de úlce-
ra se presenta en cara interna del labio, mejilla y Eversole, L.R., “Viral infections of the head and
piso de boca, y excepcionalmente puede encon- neck among HIV- seropositive patients”, Oral Surg
trarse en la encía y el dorso de la lengua. Estas oral Med Oral Pathol; 73: 155-163, 1992.
lesiones sanan dentro de 10-14 días sin dejar cica-
triz. Al parecer esta variedad es un poco más fre- Fox, R.I., “Guest Editor in Sjögren's Syndrome”,
cuente en mujeres. Muchas veces antes de pre- Rheumat Dis Cl N Am; 18: 507-711, 1992.
sentarse existe una fase prodrómica caracteriza-
da por parestesia en el sitio que posteriormente Glick, M. et al., “Oral manifestations associated
aparece la ulceración. eith HIV disease as markers for immune
suppression and AIDS”, Oral Surg Oral Med Oral
Afta mayor. Son úlceras muy dolorosas, pero afor- Pathol; 69:683-687, 1993.
tunadamente menos frecuentes que el afta menor.
El paciente generalmente tiene entre 1 y 10 úlce- Glick, M., Dental Management of patients with
ras, miden entre 10-30 mm y también recidivan HIV, Quintessence, Chicago, 1994.
con frecuencia. Afectan especialmente el paladar
blando, mejillas, cara interna de los labios, pudien- Greenspan, J.S., Greenspan, D., “Oral hairy
do demorar hasta 6 semanas en sanar y dejando leukoplakia: diagnosis and management”, Oral
una cicatriz a diferencia de lo que ocurre en el Surg Oral Med Oral Pathol; 67: 396-403, 1989.
afta menor. Esta úlcera se puede distinguir del afta
menor, además del tamaño, por que tiene un as- Greenspan, J.S., Greenspan, D., Oral
pecto crateriforme, y tendencia a presentar bor- Manifestations of HIV Infection, Quintessence,
des levantados, y al igual que el afta menor tam- Chicago, 1995.
bién tiene un exudado fibrinoso amarillento-gri-
sáceo, y una periferia rojiza. Greenspan, D.; Greenspan, J.S.; Pindborg, J.J.;
Schiodt, M., AIDS and the Dental Team.
Úlceras herpetiformes. Esta variedad de úlcera Munskgaard, Copenhagen, 1986.
tiene una frecuencia similar con el afta mayor. Se
caracteriza por la presencia de hasta 100 úlceras Hajishengallis, G., Michalek, S.M., “Current sta-
pequeñas, que pueden afectar de preferencia la mu- tus of a mucosal vaccine against dental caries”,
cosa de revestimiento, y ocasionalmente otras zo- Oral Microbiol Immunol; 14:1-20, 1999.
nas, y se inicia como pequeñas úlceras del tama-
ño de una cabeza de alfiler, que pueden ir aumen- Hooks, J.J. et al., “Classification, pathogenesis and
tando de tamaño y coalesciendo entre ellas. Pue- etiology of recurrent oral ulcerative diseases and
de haber una permanencia de las úlceras en la ca- Behcet's syndrome”, J Oral Pathol; 7: 436-438,
vidad oral, pero generalmente sanan a los 14 días. 1978.
A veces puede haber disfagia, y al igual que en el
afta mayor, podría haber perdida de peso por la Klein, R.S. et al., “Oral candidiasis in high-risk
dificultad para alimentarse. patients as the initial manifestation of the acquired
immunodeficiency syndrome”, N Eng J Med;
311:354-358, 1984.
McCartan, B.E., McCreary, C.E., “Oral lichenoid

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Scully, C., Porter, S.R., “Recurrent aphthous

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Capítulo 29
OTRAS ENFERMEDADES INMUNOMEDIADAS
Cecilia Sepúlveda C.
1. Introducción
2. Algunas enfermedades inmunome-
diadas
2.1. Lupus eritematoso sistémico
2.2. Artritis reumatoidea
2.3. Enfermedades mediadas por anti-
cuerpos
2.4. Otras enfermedades
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RESUMEN
Un grupo heterogéneo de enfermedades es mediado por mecanismos inmunes. Dicha res-

puesta inmune puede estar dirigida contra antígenos ajenos al organismo o propios.
Entre las enfermedades autoinmunes, el Lupus Eritematoso Sistémico (LES) es una de las
más características y afecta principalmente a las mujeres. Se caracteriza por ser órgano inespecífica
y en su patogenia participan complejos inmunes.
Otras enfermedades inmunomediadas, de las que se describe el mecanismo fisiopatológico
en este capítulo, son: Artritis reumatoidea, Anemia hemolítica autoinmune, Síndrome de Good
Pasteure, Enfermedad de Graves y Miastenia gravis.
1. INTRODUCCIÓN 2. ALGUNAS ENFERMEDADES INMU-

NOMEDIADAS
Las enfermedades mediadas inmunológi-
camente comprenden un grupo clínicamente hetero- 2.1. Lupus Eritematoso Sistémico
géneo. Pueden ser iniciadas por una respuesta inmu-
ne dirigida contra antígenos extraños o propios Es el prototipo de las enfermedades sisté-
(autoinmunidad). Los mecanismos patogénicos in- micas autoinmunes, aqueja principalmente a mu-
cluyen la participación de complejos antígeno-anti- jeres en edad fértil y sus manifestaciones pueden
cuerpo, autoanticuerpos dirigidos contra antígenos afectar a todos los órganos y sistemas. La mayo-
tisulares o de superficie celular, y células T. Los ría de los pacientes presentan alteraciones de la
mecanismos efectores por los cuales los anticuerpos piel (por ejemplo eritema malar en mariposa),
y los complejos inmunes inducen injuria tisular in- dolores y/o inflamación articular, manifestaciones
cluyen activación del sistema del complemento y de renales y hematológicas. Se caracteriza por perío-
células inflamatorias. Las células T reclutan y acti- dos de actividad de la enfermedad que fluctúan
van macrófagos como los efectores principales de con períodos de remisión.
hipersensibilidad retardada e injuria tisular, en otros Si bien su causa se desconoce, es ampliamen-
casos actúan directamente células T CD8+. te aceptado que se requiere la interacción de múl-
En algunas de estas enfermedades el agente tiples factores para que el LES se desencadene,
etiológico es desconocido, como por ejemplo en entre ellos factores genéticos, hormonales, am-
el Lupus Eritematoso Sistémico (LES); en otras bientales e inmunológicos (ver capítulo 24). La
de ellas el agente etiológico se conoce y el daño predisposición genética del LES está relacionada
está mediado por la respuesta inmune que se ge- con alelos del Complejo Principal de
nera contra éste o bien a través del mimetismo Histocompatibilidad (MHC, HLA en humanos),
molecular, cuando la respuesta inmune se produ- así por ejemplo HLA-DR2 y HLA-DR3 están au-
ce contra un antígeno extraño que tiene similitud mentados en pacientes con LES, y además con
antigénica con antígenos propios, como ocurre en deficiencias del complemento, por ej. con el alelo
la Enfermedad reumática. nulo C4A. Es frecuente encontrar otros miembros
Algunas de estas enfermedades son de la familia afectados por enfermedades
sistémicas, es decir, afectan a varios órganos y sis- autoinmunes o bien detectar en ellos la presencia
temas, otras en cambio, son órgano específicas. de autoanticuerpos sin manifestación alguna de
En este capítulo se incluyen algunas de las enfer- enfermedad.
medades más frecuentes: Lupus Eritematoso Entre los factores ambientales relacionados
Sistémico, Artritis Reumatoidea, Enfermedades con el LES de gran importancia es la exposición a
mediadas por anticuerpos y Otras enfermedades. las radiaciones ultravioleta y algunas drogas (LES
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inducido por drogas que es reversible al retirar la canismos indirectos por los que podría causar daño
droga). este antígeno, se postula entre otros mecanismos,
Las alteraciones inmunológicas que se en- que alteraría la inmunogenicidad de las estructu-
cuentran en estos pacientes incluyen la presencia ras articulares, actuaría a través de mimetismo
de autoanticuerpos, aumento de la funcionalidad molecular, o bien actuar como tipo superantígeno.
de las células T "helper" cooperadoras, falla de la En la sinovial inflamada se han encontrado
función de células T supresoras, disminución del múltiples citoquinas, postulándose que un
"clearence" de complejos inmunes. desbalance en su producción sería un factor deci-
Múltiples autoanticuerpos son característicos sivo en la fisiopatología de la AR. Así, por ejem-
y frecuentes en el LES, entre ellos los anticuerpos plo se encuentran aumentadas citoquinas tales
antinucleares dirigidos contra diferentes estructu- como IL-1, TNF-α e IFN-γ, las cuales pueden fa-
ras nucleares, los que pueden detectarse por la téc- vorecer la inflamación y proliferación sinovial, la
nica de inmunofluorescencia indirecta y constitu- destrucción del cartílago y del hueso adyacente y
yen un marcador presente en casi el 100% de los explicar algunas de las manifestaciones sistémicas
casos. Muchos pacientes tienen anticuerpos anti- de la enfermedad. Su relevancia en la patogenia
DNA nativo, así como autoanticuerpos dirigidos de la AR ha quedado demostrada al demostrarse
contra estructuras nucleares extractables en sali- que la terapia con anticuerpos monoclonales diri-
no (ENA). También pueden tener anticuerpos di- gidos contra el TNF-α, logran controlar estas ma-
rigidos contra células sanguíneas y otras estructu- nifestaciones.
ras. Múltiples causas pueden llevar a la aparición Al igual que lo descrito en el LES, en la AR
de estos autoanticuerpos: quiebre de la tolerancia intervienen múltiples factores. Entre ellos los fac-
a lo propio, reactividad cruzada y mimetismo tores genéticos son de gran relevancia, como por
molecular, alteración en el control de la apoptosis, ej. los alelos HLA-DR4, los más frecuentemente
estimulación policlonal de células B, etc. El daño encontrados en estos pacientes.
tisular en el LES es causado en gran medida por La presentación clínica característica es la de
complejos inmunes, incluyendo daño debido a una poliartritis simétrica, generalmente asociada
vasculitis y a glomerulonefritis. a síntomas constitucionales como fiebre y fatiga.
En la actualidad el tratamiento del LES per- Se afectan, preferentemente, las pequeñas articu-
mite una expectativa de sobrevida que supera el laciones de manos y pies, las cuales pueden llegar
90% a los 10 años del diagnóstico, sin embargo, a deformarse como consecuencia del daño causa-
muchos pacientes pueden presentar secuelas por do por la inflamación sinovial.
el daño inflamatorio del LES, por ejemplo falla En el 75-90% de los casos se encuentra la
renal. Por otra parte, pueden presentar complica- presencia de factores reumatoides en estos pa-
ciones derivadas del tratamiento sostenido con cientes. Estos son autoanticuerpos (generalmente
corticoides e inmunosupresores. de clase IgM) reactivos contra la región Fc de la
IgG. Estos autoanticuerpos no son específicos,
2.2. Artritis Reumatoidea (AR) pueden encontrarse presentes en otras enferme-
dades (inflamatorias, infecciosas, tumorales), y
La AR es una enfermedad inflamatoria cró- también hasta en un 5% de la población general,
nica sistémica, que afecta a alrededor del 1% de especialmente de edad avanzada, en títulos bajos.
la población, siendo más frecuente en mujeres, al
igual que el LES. Si bien su causa se desconoce, 2.3. Enfermedades mediadas por anticuerpos
ha podido establecerse que esta enfermedad se des-
encadena en individuos genéticamente suscepti- Muchas enfermedades inmunológicas se aso-
bles, cuando son expuestos a un agente antigénico cian con la producción de autoanticuerpos, o se
relevante (ver capítulo 24). Muchas evidencias cree que son causadas por éstos. La mayoría de
apuntan a que las células T, activadas por el estas enfermedades son órgano-específicas (tabla
antígeno, juegan un rol crítico en el inicio y per- 29-1).
petuación de la inflamación sinovial que caracte- La Anemia hemolítica autoinmune y la
riza a esta enfermedad. En cuanto a la naturaleza Trombocitopenia autoinmune son causadas por
de este antígeno, se han postulado varios agentes autoanticuerpos dirigidos contra los glóbulos ro-
infecciosos ubicuos, los que en forma directa o jos y las plaquetas, respectivamente. Los
indirecta, desencadenarían el daño. Entre los me- anticuerpos causan lisis dependiente de comple-
492
Sin título-2 492 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 29-1. Enfermedades causadas por autoanticuerpos
Enfermedad Clínica Mecanismos Autoanticuerpos

Glomerulonefritis Nefritis, Complemento, Anti-membrana
(S. de Good Pasture) hemorragia neutrófilos basal riñón y
pulmonar pulmón
Anemia autoinmune Anemia Lisis, fagocitosis Anti-proteínas

Hemolítica hemólisis membrana
Pénfigo vulgar Vesículas Disrupción Anti-uniones

en piel adhesión intercelulares
intercelular epidérmicas
Penfigoide buloso Vesículas Disrupción Anti-membrana

en piel unión dermo- basal epidérmica
epidérmica
Miastenia gravis Debilidad Bloqueo Anti-receptor

Muscular receptores acetilcolina
acetilcolina
Enfermedad de Hipertiroidismo Estimulación Anti-receptor

Graves receptor TSH TSH
mento de las células sanguíneas y las opsonizan, piel se deben a anticuerpos dirigidos contra molé-
llevando a un aumento de la fagocitosis por los culas de adhesión de las células epidérmicas o
fagocitos mononucleares (ver capítulo 26). La antígenos de la membrana basal. Los anticuerpos
anemia hemolítica autoinmune y la trombocito- alteran la adhesión de las células entre ellas o a la
penia autoinmune son generalmente de causa des- membrana basal, causando la formación de am-
conocida, aunque algunas veces se producen como pollas.
una reacción adversa a algunas drogas. En este Varias formas de vasculitis, inflamación de
último caso, pueden deberse a la presencia de los vasos sanguíneos, se asocian con
neoantígenos, creados al unirse la droga o sus autoanticuerpos reactivos con proteinasas de los
metabolitos a las membranas celulares. gránulos de los neutrófilos, éstos son los
El síndrome de Good Pasture es una enfer- anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilos
medad caracterizada por hemorragias pulmonares (ANCA) que al reaccionar con el antígeno causan
y glomerulonefritis. Es causada por un degranulación de los neutrófilos e injuria alrede-
autoanticuerpo que se une a un dominio del dor de los vasos sanguíneos.
colágeno tipo IV presente en las membranas El Síndrome antifosfolípido, caracterizado
basales de los alvéolos pulmonares y capilares por trombosis venosas y abortos recurrentes, es
glomerulares. La unión de este anticuerpo provo- causado preferentemente por anticuerpos dirigi-
ca activación local del complemento y neutrófilos. dos contra complejos proteínas-fosfolípidos
Al examen microscópico puede observarse aniónicos (ver capítulo 25).
necrosis e infiltrados neutrofílicos y por Anticuerpos dirigidos contra receptores de
microscopía de fluorescencia pueden detectarse membrana pueden causar alteraciones funciona-
depósitos de anticuerpos a lo largo de las mem- les sin involucrar otros mecanismos. Así por ejem-
branas basales. plo en la Enfermedad de Graves, una enferme-
Algunas enfermedades autoinmunes de la dad autoinmune de la glándula tiroides caracteri-
493
Sin título-2 493 5/26/06, 10:26 AM

zada por hipertiroidismo, un autoanticuerpo es- Feldmann, M.; Brenan, F.M. and Maini, R.N.,
pecífico para el receptor de la hormona estimu- “Rheumatoid arthritis”, Cell 1996; 85: 307-310.
lante de la tiroides (TSH) presente en las células
epiteliales tiroideas, se une a éstos estimulando a Harris, E.D., “Rheumatoid arthritis”, N Eng J Med
las células a producir hormonas tiroideas del mis- 1990; 322: 1277-1281.
mo modo que lo hace la TSH proveniente de la
hipófisis. Naparstek, Y., and Poltz, P.H., “The role of
Un ejemplo de inhibición de la actividad de un autoantibodies in autoimmune diseases”, Annual
receptor la vemos en la Miastenia gravis, una en- Review of Immunology 1993; 11: 79-104.
fermedad causada por autoanticuerpos que se unen
al receptor de la acetilcolina en la placa motora de la
unión neuromuscular. La unión de estos anticuerpos
interfiere con la trasmisión neuromuscular mediada
por acetilcolina. El resultado es una falla muscular
para responder a los impulsos nerviosos, que se ex-
presa en debilidad muscular progresiva.
Un muy buen ejemplo de enfermedad causa-
da por anticuerpos producidos contra antígenos
extraños que tienen reactividad cruzada con
antígenos propios ocurre en la Enfermedad Reu-
mática. Esta enfermedad se presenta como una
complicación tardía de una amigdalitis estrepto-
cócica y se caracteriza por artritis, endocarditis y
miocarditis, y alteraciones neurológicas. Se cree
que la injuria miocárdica se debe a un anticuerpo
contra una proteína de la pared celular del
estreptococo, el cual se une a un antígeno del
miocardio, con el cual esta proteína presenta un
mimetismo molecular.
2.4. Otras enfermedades
Existen varias otras enfermedades sistémicas

autoinmunes, además del LES y de la AR, como
por ejemplo la Esclerosis sistémica progresiva, el
Síndrome de Sjögren, Artritis reumatoide juvenil
Espondiloartropatías y Vasculits sistémicas. En-
tre las enfermedades órgano-específicas más fre-
cuentes cabe destacar enfermedades desmie-
linizantes del sistema nervioso central, diabetes
autoinmune, enfermedades inflamatorias del in-
testino, varias formas de hepatitis y de nefritis.
LECTURAS SUGERIDAS
Clinical Immunology Principles and Practice.

Editor in chief Robert R. Rich; 1996, vol I, sec-
ciones VI y VII.
Fan. P.; Davis, Somer T., et al. “A clinical approach

to systemic vasculitis”, Seminar Arthritis Rheum
1990; 9: 248-265.
494
Sin título-2 494 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 30
INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS
Mónica Cornejo De L. y Marta Zelazko de Ch.
1. Introducción
2. Inmunodeficiencias primarias
2.1. Aspectos genéticos de las IDP
2.2. Estudios de laboratorio inmunoló-
gico para el diagnóstico de IDP
2.3. Características de las IDP
3. Tratamiento de las inmunodeficien-
cias congénitas
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496
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RESUMEN
Existen deficiencias primarias del sistema inmune (defectos genéticos que se manifiestan
generalmente en la infancia) o más frecuentemente secundarias a otros procesos patológicos. El
defecto puede ser a nivel de la inmunidad específica (alteración de LT, B o ambos) o de la inmu-
nidad innata (defectos de fagocitos o del complemento).
Las inmunodeficiencias se manifiestan principalmente por aumento de susceptibilidad a
infecciones. La naturaleza de la infección recurrente depende del componente del sistema inmu-
ne alterado (ej. deficiencias de inmunidad humoral se asocian a infecciones por bacterias piógenas,
deficiencias de inmunidad celular a infecciones por virus y microorganismos intracelulares).
Existe, además, asociación a algunos tipos de enfermedades autoinmunes, mayor frecuencia de
tumores (especialmente linforreticulares) y en algunos casos manifestaciones alérgicas.
En la mayoría de las Inmunodeficiencias Primarias el patrón hereditario es de carácter
recesivo (mutaciones en cromosoma X o autosómico). En varias de ellas se ha localizado el
cromosoma específico, es posible detectar portadores y hacer diagnóstico prenatal. En el capítu-
lo se describen ejemplos seleccionados de deficiencias primarias de células B, T, o ambas y
defectos de Inmunidad Natural.
Las posibilidades terapéuticas en la actualidad incluyen el uso de gammaglobulina endovenosa,
trasplante de médula ósea, reemplazo enzimático y, a futuro, reemplazo del gen defectuoso.
1. INTRODUCCIÓN Tanto las Inmunodeficiencias Primarias como

Secundarias se manifiestan por un aumento de sus-
La integridad del Sistema Inmune (SI) es ceptibilidad a infecciones. La naturaleza de la in-
esencial para la defensa contra organismos infec- fección depende del componente del Sistema In-
ciosos y sus productos tóxicos y, por lo tanto, para mune alterado, así por ejemplo, defectos de in-
la sobrevida de los individuos. Defectos en uno o munidad humoral se asocian a infecciones por
más componentes del SI pueden llevar a enferme- bacterias piógenas, mientras que defectos de in-
dades graves, ocasionalmente fatales. Estas enfer- munidad celular principalmente por virus y
medades se clasifican en 2 grupos: Inmunode- microorganismos intracelulares.
ficiencias Primarias (IDP) que son defectos Además de las infecciones los pacientes con
genéticos del Sistema Inmune y se manifiestan IDP Específicas son especialmente susceptibles a
generalmente en la infancia e Inmunodeficiencias enfermedades malignas de tipo linforreticular (la
Secundarias que se desarrollan por una variedad mortalidad por cáncer en las inmunodeficiencias
de condiciones patológicas (como cánceres dise- puede ser 10 - 200 veces mayor que lo esperado
minados, enfermedades metabólicas, desnutri- para población general de la misma edad). Algu-
ción), drogas inmunosupresoras o infecciones de nas inmunodeficiencias se asocian a enfermeda-
las células del Sistema Inmune (ej. Virus de la des autoinmunes como anemia hemolítica
Inmunodeficiencia humana o VIH) (ver capítulo autoinmune, púrpura trombocitopénico idiopático,
31). lupus eritematoso, hepatitis crónica activa, entre
La respuesta deficiente puede resultar a su otros y puede haber algún papel en el desarrollo
vez de anormalidades en la inmunidad adquirida de alergias.
o innata. Defectos de inmunidad específica pue- Desde la descripción en 1952 de la primera
den deberse a desarrollo, activación o función inmunodeficiencia (Agammaglobulinemia,
anormal de LT, B o ambos. Alteración de la in- Bruton) a la fecha se han descrito un gran número
munidad innata, a defectos a nivel de los de síndromes que regularmente son clasificados
Fagocitos o del Sistema de Complemento. por un grupo de expertos de la Organización Mun-
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Sin título-2 497 5/26/06, 10:26 AM

dial de la Salud (OMS) (tabla 30-1). En los últi- varias de estas enfermedades lo que ha permitido
mos años se ha visto un gran avance en terapia y diagnósticos más específicos y terapias más efec-
en la identificación de las bases moleculares de tivas.
Tabla 30 - 1. Clasificación de Inmunodeficiencias Primarias

Grupo Científico OMS (1999)
Inmunodeficiencias Combinadas
Inmunodeficiencia Combinada Severa (IDCS) T- B+
a) Ligada al cromosoma X (deficiencia γc)
b) Autosómica recesiva (deficiencia Jak3)
Inmunodeficiencia combinada severa T- B-
a) Deficiencia de RAG 1/ 2
b) Deficiencia de adenosina desaminasa (ADA)
c) Disgenesia reticular
Inmunodeficiencia combinada severa T+ B-
a) Síndrome de Omenn
b) Deficiencia del Rα+IL - 2
Síndrome Hiper IgM ligado a X
Deficiencia de fosforilasa del nucleosido purina (PNP)
Deficiencia de CMH clase II
Deficiencia de CD3 γ o CD3 ε, ZAP-70, TAP-2
Deficiencias Predominantemente de Anticuerpos
Agammaglobulinemia ligada al X / Autosómica recesiva
Deleción gen cadena pesada Igs
Deficiencia cadena Kappa
Deficiencia selectiva de Ig
Deficiencia anticuerpos con Ig normal o elevada
Inmunodeficiencia común variable (IDCV)
Síndrome de Hiper IgM no ligado al X
Hipogammaglobulinemia Transitoria de la infancia
Inmunodeficiencia Asociada a Otros Defectos
Wiskott - Aldrich
Ataxia-Telangiectasia
Anomalía de DiGeorge
ID con albinismo
Síndrome proliferativo ligado a X
Deficiencias de Complemento
Deficiencias de Número y/o Función Fagocítica
Neutropenia congénita
Neutropenia cíclica
Defecto de adhesión leucocitaria
Deficiencia de gránulos específicos
Síndrome de Schwachman
Enfermedad Granulomatosa Crónica
a) Ligada al cromosoma X
b) Autosómica recesiva
Deficiencia de glucosa 6 fosfato deshidrogenasa
Deficiencia de mieloperoxidasa
Defectos micobactericidas
a) Deficiencia del receptor IFN γ
b) Deficiencia del receptor IL-12
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2. INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS me de Wiskott-Aldrich, Enfermedad linfoproli-
ferativa ligada al X, Síndrome Hiper IgM, Defi-
Las deficiencias de respuesta inmune espe- ciencia de properdina, Enfermedad granulomatosa
cífica se clasifican, de acuerdo al Comité de Ex- crónica.
pertos de la OMS (tabla 30-1), en tres categorías Algunos ejemplos de mutaciones a nivel de
generales: a) Inmunodeficiencias combinadas, b) cromosomas autosómicos incluyen: Deficiencia
Deficiencias predominantemente de anticuerpos de proteínas de adhesión (CD18), Inmunode-
y c) Inmunodeficiencias asociadas a otros defec- ficiencias combinadas debidas a defecto de
tos. Por su parte, las deficiencias de inmunidad Adenosina Desaminasa (ADA) o Fosforilasa del
innata comprenden: a) Deficiencias del sistema del nucleósido purina (PNP, “Purine Nucleoside
complemento y b) Deficiencias de función Phosphorylase”).
fagocítica. En la actualidad es posible detectar portado-
res en varias de estas enfermedades, así como tam-
2.1. Aspectos genéticos de las IDP bién hacer diagnóstico prenatal estudiando mues-
tras de sangre fetal, células amnióticas o por biop-
En un número permanentemente creciente sia de vellosidades coriónicas.
de IDP se ha localizado el cromosoma específico La identificación en la última década de nu-
(tabla 30-2) y se ha identificado el error biológico merosos genes implicados en la etiología de las
fundamental. Inmunodeficiencias Primarias nos ha permitido
En la mayoría de las IDP los patrones here- tener una nueva perspectiva al evaluar estas en-
ditarios son de carácter recesivo, algunos causa- fermedades. Esta nueva información obligó ade-
dos por mutaciones en genes en el cromosoma X más a reevaluar los criterios utilizados hasta aho-
y otras en cromosomas autosómicos. Se ha locali- ra para hacer diagnósticos de Inmunodeficiencias
zado el gen defectuoso en el cromosoma X en: Primarias.
Agammaglobulinemia ligada al X, Inmuno- Los nuevos criterios diagnósticos reciente-
deficiencia combinada severa ligada al X, Síndro- mente establecidos por la Sociedad Europea
Tabla 30 - 2. Localización cromosómica de inmunodeficiencias primarias
Inmunodeficiencia Cromosoma
Inmunodeficiencia combinada severa ligada al X Xq13.1 - 13.3

Agammaglobulinemia ligada al X Xq21.3 - 22
Síndrome de Hiper IgM ligado al X Xq26 - 27
Síndrome de Wiskott-Aldrich Xp11.22 - 11.3
Enfermedad Granulomatosa Crónica ligada al X Xp21.1
Síndrome Linfoproliferativo ligado al X Xq26
Deficiencia de Adenosina Desaminasa 20q13 - ter
Deficiencia Jak3 19p 13.1
Deficiencia de Fosforilasa del Nucleosido Purina 14q13.1
Deficiencia de ZAP- 70 2q12
RAG-1/RAG-2 11p12-13
Deficiencia de Cadena Kappa 2p11
Deleción de Cadena Pesada de Ig 14q32.3
Ataxia-Telangiectasia 11q23.1
Enfermedad Granulomatosa Crónica Autosómica Recesiva
p22 phox 16q24
p47 phox 7q11.23
p67 phox 1q25
Deficiencia de Adhesión Leucocitaria I 21q22.3
Síndrome de Chediak - Higashi 1q4.3
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(ESID) y el Grupo Panamericano de Inmunode- linfocitos/µl
ficiencias Primarias (PAGID) se dividen en 3 ca- • Recuento de linfocitos T por expresión de
tegorías: Definitivo, probable y posible. El diag- antígenos de diferenciación: CD3, CD4, CD8.
nóstico definitivo sólo puede hacerse, salvo en • Pruebas de hipersensibilidad retardada a dis-
algunas excepciones de IDP ligadas al X, con la tintos antígenos: PPD, candidina, etc.
documentación del defecto molecular para cada • Respuesta proliferativa in vitro a mitógenos:
caso. El hallazgo de la mutación es el método diag- PHA, ConA, PMA+Ionomicina.
nóstico más confiable, la ausencia de mRNA es- • Respuesta proliferativa a antígenos
pecífico o de proteína es suficiente para el diag- (candidina, PPD, toxoide tetánico) y células
nóstico en algunos síndromes, pero no en todos alogeneicas (cultivo mixto linfocitario).
porque el mRNA o la proteína se pueden expresar • Producción de interleuquinas: IL-1, IL-2,
sólo transitoriamente o en niveles muy bajos. IFNγ, TNF-alfa, IL-4, etc., en sobrenadantes
Los pacientes deben reunir siempre los crite- de cultivos o por detección intracitoplasmática
rios clínicos de inclusión característicos de las dis- en respuesta a mitógenos.
tintas enfermedades para evitar la incorporación • Estudios de actividad enzimática: ADA, PNP.
de pacientes que tengan variantes polimórficas de
los genes asociados con inmunodeficiencias. c) Estudio de la respuesta inmune inespecífica
2.2. Estudios de laboratorio inmunológico para Fagocitos

el diagnóstico de IDP
• Determinación cuantitativa y morfolología de
La clínica de las IDP no es claramente dis- granulocitos y monocitos.
tintiva y permite sólo sospechar y orientar el diag- • Estudio de mecanismos microbicidas oxíge-
nóstico de los diversos síndromes. En todos los no dependientes:
casos, deberán realizarse procedimientos apropia- • Prueba de reducción del nitroazul de tetrazolio
dos de laboratorio que permitan evaluar la com- (NBT).
petencia inmunológica para definir el tipo y gra- • Quimioluminiscencia, dihidrorodamina
do de compromiso. Se presenta una breve reseña (DHR), Producción de anión superóxido.
de los estudios indicados para los diferentes sec- • Estudio de la expresión de moléculas de ad-
tores de la respuesta inmune, que deberán incluir hesión: CD11, CD18, CD15.
siempre la valoración cuantitativa y funcional: • Estudios de actividad enzimática: Mielo-
peroxidasa, Glucosa 6 fosfato dehidro-
a) Estudio de la respuesta inmune humoral genasa.
• Actividad bactericida.
• Determinación de la concentración sérica de
IgG, IgM, IgA e IgE. Complemento
• Recuento de linfocitos B por expresión de
antígenos de diferenciación (CD19, CD20). • Actividad lítica del complemento: CH50 y
• Búsqueda de anticuerpos preexistentes AP50.
(Isohemaglutininas antiA y antiB) y respuesta • Determinación de la concentración sérica de
de anticuerpos a la inmunización activa con componentes del complemento.
antígenos proteicos (anticuerpo anti-tetánico, • Evaluación funcional de componentes del
anticuerpo anti-diftérico) y antígenos polisa- complemento.
cáridos (anticuerpo anti- neumococo). • Determinación cuantitativa y funcional de
• Determinación de la concentración sérica inhibidores del complemento.
de subclases de IgG: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4.
• Producción de inmunoglobulinas in vitro El reconocimiento de portadores sanos y el
mediante estimulación con mitógenos diagnóstico prenatal, son dos de las nuevas herra-
(PWM). mientas incorporadas al arsenal diagnóstico de
las IDP, que pueden ser realizados con el desarro-
b) Estudio de la respuesta inmune celular llo de técnicas de biología molecular:
• Determinación del valor absoluto de • Estudios de inactivación del cromosoma X.
500
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• Segregación de alelos relacionados con la sos debido a micoplasma.
patología. La cuantificación de Igs de estos pacientes,
• Caracterización de la mutación: a) Técnicas en la mayoría de los casos demuestra: IgG < 100
de rastreo Ej. Polimorfismo de DNA de sim- mg/dL, IgM e IgA no detectable e incapacidad de
ple cadena (SSCP) y b) Secuenciación del secretar anticuerpos en respuesta a estímulos
DNA. antigénicos. Las células B se encuentran ausen-
tes. En general la inmunidad celular no está afec-
2.3. Características de las IDP tada.
Se ha demostrado el gen de la agammaglo-
Se describirán a continuación ejemplos se- bulinemia ligada al sexo en el brazo largo del
leccionados de defectos de células B, células T, cromosoma X en posición xq21.3 - 22. Se ha iden-
ambos y de defectos de Inmunidad Natural. tificado y clonado además una molécula trans-
ductora de señales codificada por el gen llamado
2.3.1. Defectos predominantemente de Btk (Bruton tirosine kinase o Tirosina kinasa de
anticuerpos la célula B) que se expresa en etapas precoces del
desarrollo de la célula B, no se encuentra en célu-
Estas enfermedades fueron las primeras en co- las T o plasmáticas y se expresa además en célu-
nocerse debido a que la cuantificación de las mieloides. El gen Btk se supone que tiene una
inmunoglobulinas (Igs) séricas se usa como méto- función fundamental en la maduración de la línea
do de rutina desde 1950. Se definen como una re- celular B; probablemente sería la señal para que
ducción o ausencia de uno o más isotipos o las células preB reordenen los genes de cadena
subclases de Igs en ausencia de otra patología, de- liviana, una vez que han aparecido las cadenas
bido a un bloqueo de la maduración del LB o res- pesadas en su superficie. En pacientes agamaglo-
puesta defectuosa de estos linfocitos a las señales bulinémicos se generan precursores de las células
de los LT (figura 30-1). Algunos pacientes pueden B en la médula ósea con la maduración detenida
tener Ig sérica normal, pero no responden apropia- en el estadio Pre-B.
damente a patógenos. Se presentan clínicamente Las mujeres portadoras de la agammaglobu-
como infecciones piógenas recurrentes. linemia ligada al X son inmunológicamente nor-
A continuación se describirán algunos ejem- males y presentan 2 poblaciones de precursores
plos de déficit de anticuerpos enfatizando el me- de células B: una mitad que porta un cromosoma
canismo del defecto de la célula B. X activo con gen Btk normal y la otra el gen de-
fectuoso. Las células que portan Btk mutado en el
a) Agammaglobulinemia ligada al sexo (XLA). cromosoma X activo no maduran a células B. Sólo
Representa el prototipo del déficit de células B maduran a células B aquellas con cromosoma X
puro. Se hereda como un rasgo recesivo ligado al activo que tienen el gen normal. La inactivación
X. Los niños afectados generalmente no presen- no al azar del cromosoma X en las células B en
tan síntomas los primeros 9 - 12 meses de vida, las portadoras y, fundamentalmente, el hallazgo
porque están protegidos pasivamente por la IgG de la mutación en Btk permiten distinguir la XLA
transplacentaria adquirida de la madre. Posterior- de otras formas autosómicas recesivas poco fre-
mente tienen infecciones piógenas a repetición cuentes de agammaglobulinemia con ausencia de
tales como otitis media, sinusitis, conjuntivitis, LB como son las mutaciones de la cadena mu de
neumonía y piodermitis. Los gérmenes más fre- las inmunoglobulinas y mutaciones en el gen
cuentes son Haemophilus influenzae, lambda 5/14.1 componente del receptor de la cé-
Streptococcus pneumoniae y menos frecuente lula Pre-B. Algunos casos de inmunodeficiencia
Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. común variable también presentan ausencia de LB.
Si no se efectúa tratamiento profiláctico invaria-
blemente resulta en enfermedad pulmonar b) Síndrome Hiper IgM ligado al sexo: Se des-
obstructiva y bronquiectasias. Pueden presentar cribió en 1961 en 2 varones que presentaban un
además viremia persistente y adquirir Poliomielitis cuadro clínico similar a la agamaglobulinemia li-
Paralítica si se usa vacuna con virus vivo. Son gada al X con concentraciones de IgM sérica muy
susceptibles a Enterovirus y la infección con elevada, ausencia de IgA e IgG muy baja (<150
Giardia lamblia induce diarrea crónica; 35% de mg/dL). Además de presentar infecciones piógenas
los niños pueden presentar artritis, en muchos ca- recurrentes, son susceptibles a infecciones opor-
501
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tunistas en particular por Pneumonicistis carinii incidencia se estima entre 1:50.000 a 1:200.000.
y problemas autoinmunes, especialmente Clínicamente se presenta como infecciones
neutropenia recurrente, a menudo severa. La in- piógenas sinopulmonares recurrentes. Algunos
fección por Criptosporidium es causa frecuente de pacientes pueden presentar infecciones con gér-
colangitis esclerosante con daño hepático severo. menes inusuales como Pneumocistis carinii,
Aquellos pacientes que sobreviven más allá de la micobacterias y hongos y en algunos casos
segunda década, presentan un mayor riesgo de enterovirus. Los pacientes son altamente suscep-
desarrollar cánceres, especialmente del tracto tibles a otros patógenos entéricos como Giardia
gastrointestinal, hígado y vesícula. lamblia y a Herpes simplex y zoster. Existe una
El número de LB circulantes es normal, pero alta incidencia de enfermedades malignas
se detecta sólo IgM e IgD de superficie. No se linforreticulares y gastrointestinales. Puede obser-
observa desarrollo de centros germinales en varse una variedad de desórdenes autoinmunes
ganglios y bazo. El número de células T es nor- (anemia perniciosa, anemia hemolítica,
mal, sin embargo no sintetizan o expresan una neutropenia). Los familiares de estos pacientes tie-
molécula no funcional del ligando de (CD40L), nen una mayor incidencia de déficit de IgA, en-
necesario para la interacción con la célula B en el fermedades autoinmunes y condiciones malignas.
cambio de clase de Igs. La concentración de IgG y generalmente de
El gen del síndrome de hiper IgM ligado al IgA e IgM en el suero se encuentra reducida. El
X se encuentra en el brazo largo del cromosoma número de células B en general es normal aunque
X en posición q26. En la actualidad es posible efec- puede estar reducido, pero el defecto no se en-
tuar diagnóstico prenatal y de portadoras. cuentra a nivel de la diferenciación sino más bien
Teniendo en cuenta que el defecto primario de la activación in vivo de las células B. Cerca del
del síndrome se encuentra en los LT, en las últi- 60% de los pacientes tiene una respuesta
mas clasificaciones de la OMS el síndrome ha proliferativa disminuida al estimular el Receptor
sido incluido en las ID combinadas. de Células T (TCR), sin embargo no existe una
Un cuadro idéntico en las manifestaciones clí- anomalía del mismo sino probablemente un de-
nicas y perfil inmunológico ha sido descrito en fecto en la transducción de señales. En ausencia
mujeres. En esos casos el gen y la expresión del de una señal apropiada por LT no se produciría
CD40L es normal, por lo que se sospechó un de- proliferación, diferenciación ni secreción de
fecto en otras moléculas implicadas en la señali- anticuerpos por las células B.
zación de CD40. Recientemente se describió y
publicó el defecto genético de esta forma d) Deficiencia selectiva de IgA. Es una de las
Autosómica recesiva de Síndrome de Hiper IgM. IDP más frecuentes. Se presenta en 1:700 indivi-
Se trata de mutaciones en el gen de la citidina duos caucásicos y 1:18.500 japoneses. El patrón
deaminasa inducido por activación (AID). Este hereditario es variable, en algunas familias se ha
hallazgo demuestra que la presencia de AID es un demostrado herencia autosómica recesiva y aso-
requerimiento absoluto para la diferenciación ter- ciación a algunos haplotipos HLA (Complejo
minal del LB y la producción eficiente de Principal de Histocompatibilidad, MHC) Las ca-
anticuerpos. racterísticas clínicas también son variables. La
mayoría de los individuos no presentan enferme-
c) Inmunodeficiencia Común Variable. El tér- dad, otros tienen infecciones sinopulmonares. Su
mino Inmunodeficiencia Común Variable (IDCV) frecuencia es mayor en pacientes con enfermedad
se usa para designar un grupo de síndromes aún pulmonar crónica que en población normal.
no bien definidos, pero caracterizados por forma- El déficit de IgA se caracteriza por niveles
ción defectuosa de anticuerpos y en que se han ausentes o extremadamente reducidos de IgA
excluido otros defectos de inmunidad humoral. El sérica (< de 7 mg/dL) con IgG e IgM normal. Se
patrón hereditario es variado (autosómico recesivo, supone que existe un defecto a nivel de la diferen-
dominante, ligado al X) siendo lo más común los ciación de células B que expresan IgA a células
casos esporádicos. plasmáticas secretoras de anticuerpos. No se en-
En población de origen europeo es la más fre- cuentran anormalidades a nivel de células T.
cuente de las inmunodeficiencias primarias espe- La deficiencia de IgA es en realidad una
cíficas. Afecta en igual proporción a hombres y inmunodeficiencia más compleja de lo que se sos-
mujeres, generalmente entre los 20 y 30 años. Su pechaba. Podría tratarse, de una forma de expre-
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Sin título-2 502 5/26/06, 10:26 AM

sión menos grave de la IDCV. Las deficiencias de = <2.000/µL) en el primer año de vida. Existe fa-
subclases de IgG, de IgA con deficiencia de lla en el desarrollo del Timo. Los pacientes pre-
subclases de IgG y las deficiencias de función de sentan retardo del crecimiento, diarrea intermitente
anticuerpos, también podrían considerarse formas o crónica e infecciones persistentes con gérmenes
intermedias. oportunistas de baja virulencia (Cándida,
Pneumocistis Carinii, citomegalovirus). Estos
e) Deficiencia selectiva de Subclases de IgG. Se hallazgos requieren diferenciar de niños con Sín-
han descrito pacientes con nivel IgG sérico total drome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA)
normal y una o más subclases de IgG bajo lo nor- efectuando estudios para detectar Virus de la
mal. Puede asociarse a niveles bajos de IgA. El Inmunodeficiencia Humana (VIH), como son el
déficit de IgG3 es más frecuente en adultos y del aislamiento viral o reacción de polimerasa en ca-
IgG2, en niños. El nivel normal de IgG4 varía dena (PCR) para genoma viral. El diagnóstico de
ampliamente en personas sanas, por lo que es di- este tipo de inmunodeficiencia es una emergencia
fícil interpretar una deficiencia selectiva de IgG4. médica, ya que puede ser rápidamente fatal si el
En la tabla 30-3, se resumen las característi- niño afectado no es sometido a un trasplante de
cas de algunos ejemplos de IDP cuyo defecto es médula ósea. Existen numerosos síndromes de
predominantemente de anticuerpos. Inmunodeficiencia Combinada Severa (IDCS),
Tabla 30 -3. Características de algunos defectos

predominantemente de anticuerpos
Enfermedad Igs séricas Células B Defecto
Agammaglobulinemia Todos los isotipos ↓ Ausentes o Mutación gen Btk

ligada al X marcadamente ↓
Agammaglobulinemia Todos los isotipos ↓ Ausentes o Mutación cadena µ

autosomica recesiva marcadamente ↓ Mutación gen lambda
5/14.1
Inmunodeficiencia Común Reducción en uno o más No↓ Variable

Variable isotipos (generalmente IgG)
Déficit selectivo de IgA IgA1, IgA2 ↓ N o ↓ SIgA+ Falla en diferenciación

terminal de cel B IgA+
Deficiencia selectiva de ↓ uno o más subclases de IgG N o inmadura Defecto en

subclases de IgG diferenciación de isotipo
2.3.2. Defectos combinados de células T y B cuyos defectos genéticos son distintos pero que
son indistinguibles desde la clínica.
Se caracterizan clínica e inmunológicamente Considerando los hallazgos inmunológicos
por defectos tanto en las células T como en las un grupo de estos síndromes, que podrían llamar-
células B (figura 30-1). Los criterios diagnósticos se formas clásicas o típicas de IDCS, se presen-
incluyen, presentación desde los primeros meses tan con linfopenia marcada, agamaglobulinemia
de vida de infecciones severas potencialmente fa- y ausencia de función inmune celular y humoral.
tales, graves anormalidades de la inmunidad me- En este grupo de IDCS clásicas podemos enume-
diada por células, deficiencia de anticuerpos y rar, entre otras, la IDCS ligada al X (LX), la IDCS
linfopenia debido al déficit de células T (Linfocitos autosómica recesiva (AR), la deficiencia de
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Figura 30-1. Defectos combinados de células T y B. Estos defectos se caracterizan clínica e inmunológicamente por defectos
tanto en los LT y LB.
Adenosín deaminasa (ADA) y la disgenesia progenitores linfoides al no tener receptores in-

reticular . tactos de varias interleuquinas no pueden ser esti-
mulados por los factores de crecimiento necesa-
a) Inmunodeficiencia Combinada Severa liga- rios para el desarrollo y diferenciación normal de
da al sexo (IDCS-LX). Es la más frecuente de las los LT, lo que explica la marcada inmunode-
IDCS, constituye el 50 a 60% del total, lo que ficiencia que resulta. El gen anormal se encuentra
explica que la frecuencia de casos en varones sea en la región Xq13. El conocimiento del gen res-
3 veces superior a los casos en mujeres. Se carac- ponsable y la posibilidad de establecer la muta-
teriza por ausencia de linfocitos T y células NK ción mediante técnicas de biología molecular per-
con linfocitos B en número normal o aumentado mite detectar portadoras y realizar diagnóstico
pero no funcionales (fenotipo es por lo tanto T-, prenatal. Recientemente se ha podido corregir el
NK-, B+). defecto genético, insertando el gen de la cadena γ
El defecto genético en la IDCS ligada al X del receptor de interleuquina en las células
ha sido identificado como una mutación de la ca- troncales (“stem cells”) de los pacientes.
dena γ del receptor de la IL2 . La cadena γ es un En los últimos años se ha descrito una forma
componente de los receptores de varias citoquinas de IDCS , con el mismo fenotipo T-, NK-, B+,
como IL4, IL7, IL9 , e IL15. De este modo, los pero con patrón de herencia autosómica recesiva.
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Esta entidad se ha relacionado con mutaciones a tóxicos (desoxi guanosina trifosfato). Los LT son
nivel de JAK-3, molécula que interviene en la particularmente sensibles a la acumulación de d-
trasducción intracelular de señales post- GTP por lo que se afectan en mayor grado que
estimulación de la cadena γ del receptor de IL-2. los LB (a diferencia de déficit de ADA).
b) Inmunodeficiencia Combinada Severa d) Disgenesia reticular. Es un síndrome muy

autosómica recesiva (IDCS-AR). También co- infrecuente que asocia a la deficiencia inmune con
nocida como alinfocitosis. Se presenta con un fenotipo T-, NK-, B-, neutropenia y ocasionalmen-
fenotipo T-, NK+, B-, y representa aproximada- te trombocitopenia. La alteración que da lugar a
mente un 25% del total de las IDCS. esta entidad todavía no se conoce, pero tiene se-
Esta entidad podría ser dividida en dos gru- mejanzas con una enfermedad murina producida
pos: IDCS-AR sin radiosensibilidad aumentada e por mutaciones en el gen Pu-1, que afecta la linfo
IDCS-AR con radiosensibilidad aumentada. En la y la mielopoyesis.
primera se han encontrado mutaciones en los genes A diferencia de las formas clásicas que se des-
RAG-1 y RAG-2, involucrados en actividades de cribieron hasta ahora, las formas atípicas o no clá-
recombinasa para genes V(D)J de las sicas de inmunodeficiencia combinada pueden pre-
inmunoglobulinas y del receptor del linfocito T. sentarse con recuentos linfocitarios normales, gra-
En la segunda también estarían involucrados me- dos variables de hipogammaglobulinemia y en al-
canismos alterados de recombinacion genética gunos casos, sólo con alteraciones funcionales.
V(D)J, pero posiblemente a través de una proteí- Aún en una misma familia, individuos portadores
na nuclear denominada DNA-PK (protein-kinasa de la enfermedad, han desarrollado fenotipos clí-
dependiente de DNA). nicos diversos (infecciones severas en un miem-
bro y autoinmunidad en otro) y de distinta grave-
c) Deficiencia de ADA. Es otra forma clásica de dad. Dentro de este grupo de entidades se incluye,
IDCS (fenotipo variable T-, NK-, B-). Representa entre otras: deficiencia de expresión de MHC cla-
aproximadamente el 15% de la totalidad de los se II, deficiencia de CD8 o ZAP-70, deficiencia
casos de estas entidades. Se debe a mutaciones en múltiple de producción de interleuquinas, deficien-
el gen que codifica la enzima Adenosin cia de IL-2 y las deficiencias de expresión de
Desaminasa, en el cromosoma 20q13. Esta enzi- moléculas del complejo CD3 (cadenas γ y ε) (ver
ma participa en el metabolismo de las purinas y capítulo 7).
se encuentra distribuida en todos los tejidos, pero
con mayor actividad en el timo. La deficiencia de a) Defectos en la expresión de MHC. Se llamó
ADA determina la acumulación de intermediarios originalmente “Síndrome del linfocito desnudo”.
tóxicos de la síntesis de bases púricas (adenosina, Es una inmunodeficiencia heterogénea desde el
2’ deoxyadenosina y 2’-0 metiladenosina), que punto de vista genético ya que puede producirse
directa o indirectamente llevan a apoptosis de los por mutaciones en distintas proteínas que promue-
linfocitos. ven la transcripción de moléculas MHC clase II.
Recientemente se han identificado variantes Se hereda de forma autosómica recesiva.
de deficiencias de ADA, según el tipo de muta- El número de células T CD4+ en la mayor
ción encontrada. Las deleciones de la región parte de los casos está disminuido, pero el recuento
catalítica del gen se relacionan con fenotipos clí- de CD8+ es normal. Se presenta con hipogama-
nicos muy graves, mientras que las mutaciones globulinemia y ausencia de respuesta de las célu-
puntuales que dan lugar a formas inactivas o ines- las T a antígenos específicos, con respuesta nor-
tables de la proteína, se correlacionan con mal a estímulos mitogénicos.
fenotipos más benignos de la enfermedad. Es la
primera IDP en la que se ha ensayado terapia b) Defectos de activación y función de células
génica. T. Estos defectos, se caracterizan por la presencia
Otra deficiencia enzimática es también cade un número normal de células T pero que no
paz de producir enfermedad inmunológica. Se trata son capaces de proliferar o producir citoquinas en
de la deficiencia de Fosforilasa del nucleósido respuesta a estimulación con mitógenos, antígenos
purina (PNP), que se debe a defectos en el gen u otras señales de activación del TCR.
que codifica la enzima localizado en el cromosoma La caracterización a nivel molecular ha de-
14q13.1. En su ausencia se acumulan metabolitos mostrado en algunos de estos casos expresión de-
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ficiente del complejo CD3/TCR debido a muta- con LT doble positivos, CD4+ CD8+, LT CD4
ciones que dan lugar a deficiencia selectiva de la normales y ausencia de CD8, demostrando que la
subunidad γ o ε del CD3. ZAP 70 es crítica para la diferenciación intratímica
Otro de estos síndromes, es el denominado de esta última subpoblación. In vitro, las células
deficiencia de CD8 o de ZAP-70. La ZAP-70 es mononucleares de estos pacientes no responden
una proteína quinasa fundamental para los meca- al estímulo del TCR con anti-CD3, pero la res-
nismos de señalización intracelular del TCR (ver puesta es normal cuando se estimulan con PMA +
capítulo 10). Los pacientes con esta deficiencia ionomicina, evidenciando un defecto temprano de
muestran valores normales o aumentados de la estimulación del receptor del LT.
linfocitos, con células CD4 aumentadas y ausen- En la tabla 30-4, se muestran algunos ejem-
cia de CD8. El timo muestra estructura normal, plos de ID combinadas de células T y B.
Tabla 30 -4. Inmunodeficiencias Combinadas
Enfermedad Fenotipo Herencia Defecto
IDCS típicas
IDCS T - NK - B+ Ligada al X Gen cadena gama R IL-
2, 4, 7, 9 y 15
AR Gen Jak3
T- NK+B- AR Genes RAG1/RAG2

Radiorresistentes
AR Recombinación
Radiosensible
Deficiencia de ADA T-B-(↓ progresiva) AR Gen ADA

NK variable
Disgenesia Reticular T-NK-B- --- ---

Granulocitos-
IDCS atípicas
Deficiencia MHC clase II Variable.CD4↓ AR Genes CIITA, RFX5
Deficiencia de moléculas CD3↓ o ausentes AR Genes cadena γ, ε

CD3/TCR
Deficiencia de IL2 Normal AR ---
Def. de múltiples citoquinas Normal --- ---
Síndrome de Ommen Linfocitosis Th2 AR Genes RAG1/ RAG2

oligoclonal
Deficiencia de CD8 CD8 ausentes AR Gen ZAP -70
Deficiencia de PNP ↓CD3 progresiva AR Gen PNP
IDCS Típicas: con linfopenia, agammaglobulinemia y falta de repuesta a antígenos y mitógenos.

IDCS Atípicas: sin linfopenia, con o sin hipogammaglobulinemia. En algunos casos la respuesta celu-
lar in vitro es deficiente sólo a antígenos.
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2.3.3. Inmunodeficiencias asociadas a otros de- frente a antígenos polisacáridos. Es importante el
fectos aumento en el riesgo de enfermedades linfoproli-
ferativas malignas.
Son un grupo de enfermedades que compro-
meten múltiples sistemas. c) Ataxia telangiectasia. Este síndrome
autosómico recesivo se caracteriza por ataxia
a) Anomalía de DiGeorge. Resulta de un desa- cerebelar, telangiectasias (en lóbulos de las orejas
rrollo defectuoso durante la embriogénesis del 3º y conjuntivas), y, en la mayoría de los pacientes,
y 4º arcos faríngeos. Estas estructuras dan origen infecciones sinopulmonares recurrentes y marca-
al timo y paratiroides en la sexta a octava semana da incidencia de tumores. Regularmente se encuen-
de gestación y al arco aórtico y porciones de los tran niveles elevados de α feto proteína. Desde el
labios y orejas a las 12 semanas de gestación. punto de vista inmunológico, la inmunodeficiencia
La mayoría de los pacientes presentan si no está presente se desarrolla posteriormente en
deleciones a nivel del cromosoma 22q11 que se el 70% de los casos. Las alteraciones son varia-
han denominado “CATCH-22” debido a las ano- bles, siendo la más frecuente la disminución de
malías que se originan: Cardíacas, Facie Anormal Igs (IgG 2, IgG 4, IgA, IgE), y la respuesta a
(dismórfica con micrognatia) Hipoplasia o Aplasia anticuerpos específicos deficiente que conduce a
Tímica, paladar hendido (en inglés Cleft) e las infecciones recidivantes del aparato respirato-
Hipocalcemia (por ausencia de paratiroides). Se rio. La función y número de LT se encuentra re-
han descrito otros casos que se asocian a consu- ducido.
mo de alcohol o diabetes materna. El defecto genético asociado a esta enferme-
La mayoría de los niños afectados presentan dad mapea en el cromosoma 11q23.1 La proteína
tetania y/o falla cardíaca neonatal. Sólo un 20% codificada por este gen, ATM, se encuentra rela-
de ellos presenta número o función de LT dismi- cionada con el control del ciclo celular, trans-
nuidos. Los niños que sobreviven pueden adqui- ducción de señales mitogénicas, recombinación
rir células T funcionales y corregir su inmuno- meiótica y respuesta al daño del DNA. Existe un
deficiencia. Esto es probablemente por la presen- aumento de la sensibilidad a radiaciones ionizantes
cia de algo de tejido tímico o porque algún sitio debido a reparación del DNA defectuoso.
extra tímico pueda asumir la función de la madu-
ración de los LT. La existencia de estos sitios se d) Síndrome de Chediak-Higashi (CHS) y
ha sospechado pero no se han podido definir Síndrome de Griscelli (GS). Tanto el CHS
anatómicamente. incluido por la OMS entre las deficiencias
asociadas a otros defectos, como el GS, entidades
b) Síndrome de Wiskott-Aldrich. Se hereda de herencia autosómica recesiva, se caracterizan
como una enfermedad recesiva ligada al X y se fenotípicamente por presentar albinismo parcial
caracteriza por eczema, trombocitopenia y oculocutáneo, acompañado de disfunción N,
susceptibilidad a infecciones bacterianas. Las alteraciones en la quimiotaxis y un grado variable
plaquetas son pequeñas. Existe una expresión de compromiso T. Estas alteraciones redundan en
reducida de muchas glicoproteínas de superficie una predisposición a padecer infecciones piógenas.
(CD43) pero su papel en la inmunodeficiencia no El CHS, a diferencia del GS, presenta gránulos
está claro. gigantes intracitoplasmáticos en múltiples células,
El gen responsable se encuentra en el brazo siendo fácilmente distinguibles en los neutrófilos.
corto (p11.22) del cromosoma X. El producto de El fenómeno distintivo de estas entidades, es
este gen, una proteína rica en prolina llamada la presencia de “fases aceleradas”, cuadros
WASP, está involucrada en la regulación de la fun- sistémicos de activación descontrolada del siste-
ción linfocitaria y plaquetaria. Controla el ensam- ma inmune, gatilladas generalmente por
blaje de filamentos de actina que se requieren para intercurrencias infecciosas. Estos cuadros son tam-
la formación de microvesículas. La respuesta bién conocidos como síndrome hemofagocítico,
proliferativa de células T está ausente o muy dis- linohistiocitosis hemofagocítica o síndrome de
minuida. Las Igs pueden inicialmente ser norma- activación macrofágica. Clínicamente se presen-
les pero luego disminuye especialmente IgM y tan con fiebre, citopenias hemáticas (por lo me-
suele asociarse con aumento de IgA e IgE. Hay nos dos linajes afectados), esplenomegalia,
déficit de producción de anticuerpos especialmente hipertrigliceridemia y/o hipofibrinogenemia, e
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infiltración linfohistiocitaria no maligna en mé- tituye la principal línea de defensa contra orga-
dula ósea, ganglio o bazo, acompañada de nismos infecciosos. Los fagocitos y el complemen-
hemofagocitosis. to participan además en la fase efectora de la res-
El tratamiento de estos síndromes se basa en puesta inmune específica.
una potente inmunosupresión, pero sólo el tras-
plante de médula ósea despeja la posibilidad de a) Deficiencias del Complemento. Se han demos-
desarrollar nuevamente cuadros similares. trado deficiencias de todos los Componentes del
A pesar de compartir la gran mayoría de sus Complemento (C1q, C1, C4, C2, C3, C5, C6, C7, C8,
características clínicas, el CHS y el GS codifi- C9) a excepción de deficiencia de Factor B (ver
can en cromosomas distintos: el primero mapea capítulo 18).
para la proteína VPS5 en el cromosoma 1q43, En todos los casos se transmiten como de-
mientras que el segundo lo hace para la Myosin fectos autosómicos recesivos; los casos hetero-
5a, en el cromosoma 15q21. Ambas proteínas zigotos pueden detectarse porque su suero contie-
están involucradas en tráfico intracelular de ne aproximadamente la mitad del nivel normal del
organelos. componente deficiente. Las deficiencias de la vía
alterna son muy raras. El defecto más común es
e) Inmunodeficiencia con respuesta inadecua- C9 encontrado en donantes de sangre japoneses
da al virus de Epstein-Barr. Es una enfermedad (sin asociación a enfermedades). Los defectos de
de herencia ligada al cromosoma X, conocida tam- C1, C4 o C2 se asocian a una mayor incidencia de
bién como síndrome de Duncan o Purtilo. Los in- enfermedades autoinmunes y/o por complejos in-
dividuos con este síndrome, son varones aparen- munes. La ausencia de C3 con infecciones recu-
temente sanos hasta que contraen la infección con rrentes severas por gérmenes gram negativos y
el virus de Epstein-Barr y desarrollan mononu- gram positivos. En pacientes con déficit
cleosis infecciosa. La evolución de la infección es homozigoto de C5 , C6 , C7 y C8 se han demostrado
fatal en el 60-70% de los pacientes, principalmente infecciones recurrentes por Neisserias. (gonococo,
debido a una necrosis hepática causada por LT meningococo).
citotóxicos activados. La mayoría de los que so- Se han descrito asimismo deficiencias de Pro-
breviven desarrollan en distintos tiempos, linfomas teínas Reguladoras del Complemento solubles y
B o hipogammaglobulinemia. En los portadores asociadas a membranas:
de esta enfermedad, la infección con el virus de
Epstein-Barr gatilla una respuesta inmune vigo- Angioedema Hereditario o Enfermedad de
rosa y descontrolada, acompañada de una prolife- Quincke. Es una deficiencia autosómica dominan-
ración policlonal T y B. La respuesta humoral conte del C1INH. Clínicamente se presenta como
tra el virus se desarrolla normalmente contra el angioedema de la piel y mucosas causada por trau-
antígeno de la cápside viral (VCA), pero es inexis- mas o algunas veces infecciones virales que pue-
tente contra sus antígenos nucleares (EBNA). Se den llevar a la muerte por edema laríngeo. El com-
describe también una deficiente respuesta celular promiso de la mucosa intestinal produce dolor
específica contra el virus, a pesar del incremento abdominal. Los ataques duran 48 - 72 horas y ce-
de los linfocitos CD8+, así como un déficit de la den al caer los niveles de C4 y C2 . En el 85% de
función citotóxica anticuerpo-dependiente los casos hay un defecto en la síntesis de la proteí-
(ADCC), mediada esta última por las células NK. na inhibidora de C1, en el resto puede existir una
La alteración molecular relacionada con esta cantidad normal pero hay función defectuosa.
enfermedad ha sido localizada en el brazo largo Las deficiencias de factores reguladores so-
del cromosoma X (Xq26) y codifica una proteína lubles de la vía alternativa (Factor I y Factor H)
no catalítica denominada SH2D1A presente en cé- son raras. Deficiencias de proteínas reguladoras
lulas T y NK, cuya función sería la de evitar la asociadas a membranas incluyen ausencia de DAF
activación celular. (“Decay Acceleratig Factor”), HRF (Factor de res-
tricción homólogo) y CD59. En ausencia de estas
2.3.4. Defectos congénitos de inmunidad natu- proteínas se puede producir lisis por activación
ral del complemento en la superficie de glóbulo rojo
dando origen a la enfermedad conocida como
La inmunidad innata es mediada principal- Hemoglobinuria Paroxística Nocturna.
mente por los fagocitos y el complemento, y cons-
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b) Defectos de los fagocitos. Pueden existir de- La base molecular del defecto es expresión defi-
fectos en el número (neutropenia) o la función ciente o ausente de la cadena β (CD18) del
fagocítica. Esta depende del movimiento en res- subgrupo de integrinas β2 CD11a, CD18, CD11b,
puesta al estímulo quimiotáctico, adherencia, CD18 y CD11c CD18). Estas proteínas partici-
endocitosis y destrucción (“Killing”) de las partí- pan en la adhesión de los leucocitos a otras célu-
culas ingeridas. La movilidad depende de la inte- las y en la fagocitosis de partículas recubiertas de
gridad del citoesqueleto y del sistema contráctil Complemento. El gen CD18 se ha clonado y
de la célula. La endocitosis depende de la expre- secuenciado por lo que esta enfermedad es una
sión de ciertos receptores para IgG, C3b y IC3b, y más de las candidatas a terapia génica.
de la fluidez de la membrana. Los defectos de la Se ha descrito una segunda forma de defi-
función fagocítica se enumeran en la tabla 30-1 ciencia de adhesión leucocitaria (LAD-2) que se
debe a la ausencia del ligando Lewis X para las
Enfermedad granulomatosa crónica (EGC). Es moléculas de adhesión selectina en el endotelio
un grupo de defectos caracterizados por falla en vascular (ver capítulo 12)
la producción de radicales superóxido, peróxido
de hidrógeno y otros radicales de oxígeno funda-
mentales para la muerte intracelular de los 3. TRATAMIENTO DE LAS INMUNO-
microorganismos. DEFICIENCIAS CONGÉNITAS
Los pacientes afectados desarrollan infeccio-
nes recurrentes (adenitis, neumonía, osteomielitis, En teoría, la terapia de elección es reempla-
abscesos, hepatitis) por bacterias generalmente zar el gen defectuoso. Como se mencionó ante-
productoras de catalasa (Staphylococcus aureus, riormente, esta terapia se ha iniciado en algunas
Escherichia coli, Serratia marcescens), hongos inmunodeficiencias seleccionadas.
(Nocardia, Aspergillus) y otros, con formación de En la mayoría de los casos, el tratamiento
granulomas especialmente en ganglios linfáticos, actual tiene como objetivos, controlar las infec-
hígado y pulmón. ciones y reemplazar el componente defectuoso del
La reacción NADPH + 20 2 → NADP+ + 20- sistema inmune. Los procesos infecciosos deben
2
+ H+ requiere un citocromo b específico de los ser tratados rápidamente y con dosis apropiadas
fagocitos y NADPH oxidasa. El citocromo b558 del antibiótico seleccionado según antibiogra-
es un heterodímero compuesto de una cadena de ma. El uso profiláctico de antibióticos de amplio
91 kDa y otra de 22 kDa. En aproximadamente un espectro y poco generadores de resistencia, como
62% de los pacientes la enfermedad es ligada al el cotrimoxasol, es una práctica frecuente y efec-
cromosoma X y se han encontrado mutaciones del tiva entre estos pacientes.
gen que codifica la cadena 91 kDa (gp 91 phox). En todo paciente con deficiencia de la res-
El 38% restante presenta herencia autosómica puesta inmune celular, las transfusiones, si son ne-
recesiva debido a mutaciones del gen que codifi- cesarias, deben realizarse con sangre irradiada y
ca la cadena 22kDa o 1 de 2 proteínas citosólicas filtrada de leucocitos, por el riesgo de reacción
solubles (gp 47 phox o gp 67 phox). injerto contra huésped. Las inmunizaciones con
In vitro, se ha logrado corregir el defecto por gérmenes vivos como las vacunas Sabin
expresión de gp91 phox utilizando retrovirus. Des- (Poliomielitis) y la BCG (tuberculosis), están
de el punto de vista clínico el uso de IFN γ formalmente contraindicadas.
recombinante ha demostrado ser útil en prevenir Las terapias de reemplazo que han demos-
infecciones serias pero no se han comprobado trado utilidad, son las siguientes:
cambios significativos en la producción de anión
superóxido por los fagocitos. a) Gammaglobulinas. Se usa en pacientes con
deficiencia de anticuerpos, siendo la administra-
Deficiencias de adhesión leucocitaria 1 y 2. La ción endovenosa la vía de elección. Se recomien-
deficiencia de adhesión leucocitaria tipo 1 (LAD- dan dosis de 400 a 600 mg/kg/mes, que permitan
1) es una enfermedad autosómica recesiva rara que mantener niveles séricos de IgG superiores a los
se caracteriza por infecciones de la piel, 400-500 mg/dL. Son indicación absoluta de trata-
periodontitis y fístulas intestinales o perianales. miento permanente con gammaglobulina la
Existe además un retardo en la caída del cordón Agammaglobulinemia ligada al sexo, la Deficien-
umbilical y dificultad en la curación de heridas. cia con hiper IgM, y la Inmunodeficiencia Común
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Sin título-2 509 5/26/06, 10:26 AM

Variable. Las deficiencias de subclases de IgG, LECTURAS SUGERIDAS
asociadas o no a deficiencia IgA, se benefician
con el tratamiento sustitutivo con gamaglobulina. Buckley, R., “Primary immunodeficiency dis-
En la deficiencia selectiva de IgA, el uso de eases due to defects in lymphocytes”, N Engl J
gamaglobulina está contraindicado por sus poten- Med, 343:18 1319-1324, 2000.
ciales efectos adversos.
Las Deficiencias Combinadas Severas y otras Cavazzana-Calvo, M.; Hacein-Bey, S.; de Saint
deficiencias como el Síndrome de Wiskott Aldrich, Basille, G. et al, “Gene therapy of human severe
se benefician con el reemplazo de gamaglobulina combined immunodeficiency (SCID)-X1 disease”,
como tratamiento auxiliar, pero deben Science, 288: 669-672, 2000.
implementarse otros tratamientos para corregir los
defectos subyacentes. Conley, M.E.; Notarangelo L.; Etzioni A., “Diag-
El desarrollo de efectos adversos, del tipo nostic criteria for primary immunodeficiency”,
de las reacciones anafilácticas, se producen con Clin Immunol 93:3 190-197, 1999.
poca frecuencia y por mecanismos no bien
aclarados. Con la GGEV, la infusión lenta redu- Chain, M., R. (ed), “Primary T-cell immunodefi-
ce o elimina estos efectos. ciencies”, Immunol and Allergy Clinics of North
America, 20:1, 2000
b) Trasplante de médula ósea. El trasplante de
médula ósea (TMO) de donante HLA idéntico Chain M., R. (ed), “Humoral immunodeficien-
(hermanos o miembros HLA idénticos en la fami- cies”, Immunol and Allergy Clinics of North
lia) que ha llevado a una reconstitución America, 21:1, 2001.
inmunológica completa en pacientes con IDCS (in-
cluyendo deficiencia de ADA y PNP), Disgenesia Ochs, H.; Smith, E.; Puck, J., In Primary Immu-
reticular, en Síndrome de Wiskott-Aldrich, Défi- nodeficiency Diseases. A molecular and genetic
cit de adhesión leucocitaria y Déficit de molécu- approach, Oxford University Press, 1999.
las MHC clase II. Desafortunadamente 2/3 de los
pacientes no tienen un donante compatible . En Pevy, P.; Muto, T.; Levy, Y. et. al., “Activation in-
estos casos puede utilizarse médula idéntica no duced cytidine deaminase (AID) deficiency causes
relacionada proveniente de "Bancos de médula" o the autosomal recessive form of hyper-IgM syn-
se deberá realizar el trasplante con médula ósea drome (HIGM2)”, Cell, 102: 565-575, 2000.
haploidéntica siendo necesario eliminar las célu-
las T del injerto para prevenir una complicación “Primary immunodeficiency diseases: report of an
grave del TMO, la Enfermedad de injerto versus IUS scientific committee”, Clin Exp Immunol,
huésped. 118: Suppl 1:1-28, 1999.
La recuperación inmunológica post-trasplan-
te puede evaluarse por la mejoría clínica, la pre-
sencia de linajes celulares inexistentes en el re-
ceptor antes del procedimiento. Ejemplo: linfocitos
T y NK, en un paciente portador de IDCS-LX, la
recuperación de la actividad enzimática en los de-
ficientes previos, la presencia de inmunoglobulinas
séricas o la detección de quimerismo celular (co-
existencia de células del donante con las del re-
ceptor) por técnicas moleculares, entre otras.
c) Reemplazo enzimático: El reemplazo parcial

de ADA o PNP puede efectuarse con glóbulos ro-
jos congelados irradiados y ADA bovina modifi-
cada por conjugación con polietilenglicol.
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Sin título-2 510 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 31
INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS
María Antonieta Guzmán M. y Cecilia Sepúlveda C.
1. Introducción 6. Inmunodeficiencia inducida por ciru-

2. Infección por VIH y SIDA gía y trauma
2.1. Magnitud del problema 7. Inmunodeficiencia secundaria a enfer-
2.2. Características del virus medades infecciosas
2.3. Progresión de la infección por 7.1. Inmunodeficiencia secundaria a in-
VIH-1 fecciones virales
2.4. Ingreso al organismo 7.2. Inmunodeficiencia secundaria a in-
2.5. Respuesta inmune anti-VIH fecciones bacterianas y fúngicas
2.6 Diagnóstico de labororatorio 7.3. Inmunodeficiencia secundaria a in-
2.7. Tratamiento fecciones parasitarias
3. Sistema inmune fetal y neonatal 8. Inmunodeficiencia secundaria a enfer-
3.1. Inmunidad celular medades infiltrativas y tumores
3.2. Inmunidad humoral 8.1. Evasión de la respuesta inmune por
3.3. Inmunidad innata tumores
4. Envejecimiento y sistema inmune 8.2. Defectos inmunológicos en tumo-
4.1. Inmunidad celular res
4.2. Inmunidad humoral 9. Inmunodeficiencia secundaria a tera-
5. Inmunidad y nutrición pia inmunosupresora
5.1. Inmunidad celular 9.1. Mecanismos de acción
5.2. Déficit de nutrientes específicos 9.2. Impacto de la inmunodeficiencia
asociada a inmunosupresores
511
Sin título-2 511 5/26/06, 10:26 AM

512
Sin título-2 512 5/26/06, 10:26 AM

RESUMEN
En este capítulo se incluyen las inmunodeficiencias secundarias más frecuentes, tanto en el

niño como en el adulto. Se hace énfasis especial en la infección por Virus de la Inmunodeficiencia
Humana (VIH) y Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA), debido a su relevancia
como problema de salud pública en todo el mundo. Además, aun cuando no constituyen
inmunodeficiencias secundarias propiamente tales, se han incorporado algunos aspectos rele-
vantes del sistema inmune neonatal y del sistema inmune del senescente, edades extremas de la
vida en las cuales el sistema inmune presenta algunas características especiales que pueden se-
mejar una inmunodeficiencia.
1. INTRODUCCIÓN mente en algunos subgrupos de la población, por

ejemplo en hombres ancianos de origen medite-
Las inmunodeficiencias secundarias son rráneo en el caso del sarcoma de Kaposi y la
aquellas que, a diferencia de las inmunodeficiencias neumonia por Pneumocystis carinii en individuos
primarias, no son causadas por alteraciones intrín- inmunodeprimidos por terapias inmunosupresoras,
secas en el desarrollo y función de los componen- la ocurrencia de este tipo de enfermedades en per-
tes del sistema inmune. Estas inmunodeficiencias sonas jóvenes previamente sanas no tenía prece-
pueden afectar a uno o a varios de sus componen- dentes. Una característica común en esta nueva
tes y pueden ser transitorias o definitivas de acuer- enfermedad, era la presencia de una progresiva y
do a la naturaleza y posibilidades de tratamiento o severa inmunodeficiencia; de ahí su nombre, sín-
eliminación de la causa que las produce. La más drome, porque se presenta como un conjunto de
conocida es la infección por VIH y el SIDA, otros signos y síntomas relacionados, de inmuno-
ejemplos son las inmunodeficiencias secundarias deficiencia adquirida, para distinguirlo de for-
a malnutrición, enteropatías perdedoras de proteí- mas congénitas de inmunodeficiencia.
nas, tumores malignos linforreticulares, las induci- Pronto se reportaron casos de SIDA en otros
das por cirugía y trauma, tratamientos grupos de la población, tales como consumidores
inmunosupresores y quimioterapia. Como grupo, de drogas intravenosas (CDI), personas que ha-
las inmunodeficiencias secundarias son las más co- bían recibido transfusiones y productos de la san-
munes, especialmente las asociadas al VIH y a la gre como los hemofílicos y, por último, hijos de
malnutrición, pudiendo presentarse a cualquier madres con SIDA.
edad. Todo indicaba que un agente infeccioso trans-
misible por contacto sexual íntimo y por la sangre
2. INFECCIÓN POR VIH Y SIDA era el responsable de este síndrome, y en 1983 se
identificó y reconoció como agente causal del
El Síndrome de Inmunodeficiencia Adquiri- SIDA, el virus de inmunodeficiencia humano
da SIDA fue reconocido como una nueva enfer- (VIH). Este virus tiene la particularidad de dañar
medad en el mundo, en el año 1981. Los primeros al sistema de defensas del organismo, como que-
casos en ser identificados, que pusieron en alerta da de manifiesto por la severa disminución e in-
a la comunidad médica y científica, se diagnosti- cluso eliminación de los linfocitos T CD4+
caron en hombres homosexuales jóvenes, previa- ("helper") que lo caracteriza, en consecuencia, el
mente sanos, los cuales desarrollaron raras enfer- individuo queda inerme frente a la agresión de
medades tales como sarcoma de Kaposi y múltiples agentes infecciosos y la muerte se pro-
neumonia por Pneumocystis carinii. Aunque es- duce, de no mediar ningún tratamiento, principal-
tas enfermedades se habían observado ocasionalmente debido a estas complicaciones.
513
Sin título-2 513 5/26/06, 10:26 AM

2.1. Magnitud del problema demia. La detección de anticuerpos anti-VIH se
implementó en los bancos de sangre del país a
La infección por VIH y el SIDA constituyen partir del segundo semestre de 1987, frenando la
una epidemia mundial de gran magnitud, el VIH exposición por transfusiones de sangre y otros
se ha propagado y sigue propagándose por todo el productos hemoderivados. Sin embargo, se obser-
orbe, apareciendo incluso en comunidades inicial- va un aumento de casos asociados a la drogadic-
mente poco afectadas por la epidemia. Hasta fi- ción intravenosa, vía que es hoy la fundamental
nes de 2000, según las estimaciones del Programa dentro de la transmisión sanguínea. Los casos aso-
Conjunto de las Naciones Unidas sobre el VIH/ ciados a transmisión vertical constituyen el 2%
SIDA (ONUSIDA) y la Organización Mundial de del total, con una tasa de transmisión del VIH de
la Salud (OMS), copatrocinadora del ONUSIDA, la madre infectada a su hijo que alcanza al 27%,
había en el mundo un total de 36,4 millones de cifra acumulada desde el inicio de la epidemia.
personas viviendo con el VIH/SIDA, de los cua-
les más de 14 millones corresponden a mujeres. 2. 2. Características del virus
El número total de niños menores de 15 años con
VIH, infectados en su mayoría a través de su ma- El VIH está clasificado en la familia
dre antes de nacer, durante el parto o por la lac- Retroviridae y pertenece a la subfamilia de los
tancia natural, se calcula en aproximadamente 5 lentivirus. Se distinguen dos tipos de VIH: VIH-1
millones desde los inicios de la epidemia, de los y VIH-2, siendo el VIH-1 más importante debido
cuales alrededor de 3 millones ya han fallecido. a su potencial patogénico mayor, reflejado en su
Se calcula en alrededor de 16.000 las nuevas in- rápida diseminación por todo el mundo. El VIH-1
fecciones por el VIH que ocurren diariamente, de infecta las células CD4+ del sistema inmune, con-
las cuales al menos un 60% ocurre en adolescen- duciendo a una profunda depresión de la inmuni-
tes y niños. dad. Sin embargo, este virus también puede in-
En América latina y el Caribe hay aproxi- fectar otras células, como se verá más adelante.
madamente 1,8 millones de personas que viven
con el VIH, calculándose la prevalencia del VIH Estructura del VIH
en alrededor de 1 de cada 100 adultos en casi
todos los 44 países y territorios de la región. Las Al microscopio electrónico, el VIH tiene las
tasas más altas se observan en países como Bra- características de un lentivirus, con un core con
sil y Argentina, y las más bajas en Ecuador y forma de cono compuesto por proteínas. Dentro
Bolivia. de esta cápside o nucleoide se encuentran dos he-
En Chile, el primer caso de SIDA se notifi- bras idénticas de ácido ribonucleico (RNA), el ma-
có en 1984 y hasta el 30 de junio de 2000 se ha- terial genético del virus, estrechamente asociadas
bían notificado 3.741 enfermos y 3.492 portado- con la enzima transcriptasa reversa que transcribe
res asintomáticos en las trece regiones del país. el RNA viral en DNA en la célula hospedera, otras
La cifra real de portadores del VIH en el país enzimas y proteínas.
podría ascender a alrededor de 30.000-40.000 La superficie del virus se caracteriza por la
personas. presencia de 72 trímeros o tetrámeros formados
El 89,7 % de los casos de SIDA son hombres por las glicoproteínas de envoltura. Éstas se ori-
y el 10,3% mujeres, con un crecimiento mayor de ginan a partir de un precursor de 160 kDa, la
casos de SIDA en mujeres en relación a los hom- glicoproteína (gp) 160, la cual es clivada dentro
bres, incluyendo todos los mecanismos de trans- de la célula hospedera en una gp 120 externa y
misión. La proporción de casos de SIDA entre una gp 41 de transmembrana. Parte de la porción
hombres y mujeres ha disminuido con el tiempo, central y terminal de la gp41 también se expresa
desde 31,5:1 en 1990 a 8,5:1 en 1997. hacia el exterior del virión, donde se une a la gp120
Los principales grupos de edad afectados es- de manera no covalente.
tán entre los 20 y 49 años y concentran el 85,2% La gp120 del virión, localizada externamen-
de los casos. Los menores de 20 años representan te, contiene el sitio de unión para el receptor celu-
el 2,7% y los mayores de 50 el 12,1%. En cuanto lar y los dominios neutralizantes mayores. Se ha
a las categorías de exposición, la principal es la reportado que la porción externa de la gp41 y par-
exposición sexual con el 92% de los casos. La vía te de la p17, contienen epítopos de reconocimien-
sanguínea alcanza al 6% desde el inicio de la epi- to para anticuerpos neutralizantes.
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Sin título-2 514 5/26/06, 10:26 AM

Organización genómica del VIH-1 molécula CD4, presente en la membrana de las
células CD4+, en particular linfocitos T helper
El tamaño genómico del VIH-1 es de alrede- (LTh). El sitio de unión de CD4 a la gp120 del
dor de 9,8 kb. Contiene genes estructurales: gag, virus se ha localizado en D1, la misma región de
pol y env, y al menos 8 genes reguladores. CD4 de unión a las moléculas del Complejo Prin-
El transcripto primario del VIH es un RNA cipal de Histocompatibilidad (MHC) clase II. En
mensajero (mRNA) largo, el cual es traducido en el virus, la región principal de unión a CD4 está
las proteínas Gag y Pol. Por clivaje proteolítico, en la región conservada C4, cerca del extremo
se originan las proteínas y enzimas maduras. Los carboxiterminal de la gp120. En esta interacción,
productos de los genes no estructurales del VIH de gran afinidad, son importantes la conformación
constituyen una variedad de proteínas virales tanto de CD4 como de la gp120.
reguladoras y accesorias que pueden afectar la Enseguida de la unión de la gp120 a la molé-
replicación del virus en varios tipos celulares. cula CD4, la gp120 se desplaza, permitiendo la
Algunos estudios sugieren que los genes acceso- exposición del dominio de fusión de la gp41, ne-
rios pueden ser más importantes para la replicación cesario para la continuación del proceso. Este do-
del VIH-1 en los macrófagos que en los linfocitos minio se uniría a un receptor de fusión celular,
CD4+. permitiendo la fusión del VIH con la célula.
Varios estudios sobre la interacción inicial
Variación genética del VIH-1 virus-célula hospedera indicaron que el receptor
CD4 solo no era suficiente ni tampoco el único
El VIH-1 se encuentra en los individuos in- medio para permitir la entrada viral a la células.
fectados como mezcla de variantes virales De este modo, se llegó a identificar que ciertos
genéticamente relacionadas, llamadas receptores de quimioquinas actúan como
cuasiespecies, que son el resultado de una alta tasa correceptores del virus. Así, la molécula CXCR-4
de error en la actividad de la transcriptasa reversa. actúa como correceptor para cepas virales
La variación genética observada no está distribui- linfocitotrópicas, usualmente con fenotipo induc-
da uniformemente en el genoma viral, siendo env tor de sincicios, en cambio CCR-5, ayuda a las
el gen viral más variable y gag y pol más conser- cepas macrofagotrópicas no inductoras de
vados. Sin embargo, no todas las regiones de env sincicios a entrar a la célula. Una variante genética
varían en la misma forma, distinguiéndose 5 re- de CCR-5, con una deleción de 12 bp se ha rela-
giones variables (V1 a V5) y 4 regiones constan- cionado con resistencia a la infección por VIH-1
tes. La tercera región hipervariable de la gp120, e in vitro, las células mononucleares de sujetos
que tiene una estructura en asa central o loop V3, que han estado expuestos al VIH, pero que son
contiene el sitio más importante para la neutrali- homocigotos para esta mutación habitualmente son
zación por anticuerpos. El asa V3 también está resistentes a la infección. También se ha sugerido
involucrada en el tropismo celular y formación de un retardo en la progresión de la enfermedad en
sincicios. Esta gran variación genética en un mis- individuos que son heterocigotos para el alelo
mo individuo, da cuenta de la rápida emergencia mutante.
de variantes resistentes a anticuerpos neutrali- Los receptores de quimioquinas toman con-
zantes, a células T citolíticas y drogas antirretro- tacto estrecho con el asa V3, facilitando una unión
virales. Además, la naturaleza diploide del genoma más estrecha del virus con la membrana de la cé-
del VIH contribuye a aumentar la variación viral lula hospedera, facilitando así la fusión. El meca-
mediante la recombinación genética. nismo de entrada de la cápside, sin embargo, es
desconocido.
Ciclo de replicación viral Muchas células CD4- son susceptibles de ser
infectadas por VIH, incluyendo fibroblastos de la
La transmisión del VIH requiere de una ade- piel y de la pulpa dental, células foliculares
cuada interacción del virus con receptores de la dendríticas, células de la glia, células endoteliales
superficie de la célula hospedera. Luego de ésta, de capilares cerebrales, células epiteliales cervi-
se producen diversos eventos que facilitan la pe- cales, células del trofoblasto, células de epitelio
netración de la cápside viral a través de la mem- intestinal, células del epitelio renal. Se postula
brana celular. que esta infección es posible por la interacción
El principal receptor celular del VIH es la con receptores secundarios como los de
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quimioquinas o por un receptor de fusión desco- interacción de factores intracelulares con las re-
nocido. También se ha demostrado que en giones LTR (“long terminal repeat”) presentes en
neuronas actúan como receptores virales los los extremos del genoma viral. Durante este pro-
glicolípidos de membrana galacilceramida y ceso, se activan factores transcripcionales, por
galacilsulfuro. Estos receptores se han relacio- ejemplo NF-κB cuya interacción con regiones de
nado también con la infección de células intesti- los LTR puede aumentar o suprimir la replicación
nales y del epitelio vaginal. viral. Ciertas citoquinas y hormonas, así como
El VIH establece además uniones con otras proteínas transactivadoras de otros virus, pueden
moléculas presentes en la membrana de la célula también aumentar la producción del VIH vía es-
hospedera y que pueden aumentar su infectividad, tos eventos intracelulares.
como por ejemplo moléculas MHC y moléculas
de adhesión celular (LFA-1, ICAM-1, CD44), pro-
teínas que unen la manosa presente en la envoltu-
ra viral. Tabla 31-1. Ciclo celular del VIH
Un concepto clave en los eventos inicia-
les de la interacción del VIH con la célula es
que probablemente la unión a CD4 provoca • Unión de la gp120 de la envoltura viral al re-
cambios conformacionales tanto en la gp120 ceptor de superficie celular: CD4 u alternati-
como en CD4. Esta alteración causa los cam- vo.
bios necesarios para la unión con CXCR-4, • Cambio conformacional de la gp120 y qui-
CCR-5, u otros co-receptores. Luego ocurre la zás de la moléculas CD4.
fusión entre gp41 y el receptor de fusión y se • Unión de otra región de la gp120 a un co-
produce la fusión virus-células, que es pH in- receptor.
dependiente. Enseguida se produce la entrada • Desplazamiento de gp120.
del core completo en la célula. Posteriormente • Clivaje proteolítico del asa V3.
se inician eventos intracelulares como la trans- • Interacción del domino de fusión del VIH (por
cripción reversa, producción del DNA viral y ej. gp41) con un receptor de fusión de la su-
su duplicación en un DNA de doble cadena que perficie celular (posiblemente un glicolípido).
llega al núcleo en donde se integra en el DNA • Fusión virus:célula.
cromosomal. La producción del mRNA y del • Entrada del RNA viral asociado con el core
RNA genómico viral conduce posteriormente al citoplasma celular.
a la producción de las poliproteínas virales. En- • Inicio de la transcripción reversa.
seguida se incorpora el RNA genómico en la • Producción del DNA viral a partir del RNA
cápside formada en la membrana celular y en viral y su duplicación en hebras de doble ca-
compartimientos intracelulares, ocurriendo el dena, generación forma circulares unidas
procesamiento de las poliproteínas Gag y Gag- covalentemente y no covalentemente.
Pol en la membrana celular y en los viriones • Transporte del DNA copiado al núcleo, inte-
en gemación. Estas proteínas procesadas se in- gración de las formas circulares unidas no
corporan en la envoltura viral constituyendo covalentemente al DNA cromosomal.
los nuevos viriones maduros. En la tabla 31-1 • Producción del mRNA viral y del RNA
se presentan las etapas del ciclo celular del genómico viral a partir del DNA proviral in-
VIH-1. tegrado.
Mecanismos adicionales de entrada del vi- • Producción de proteínas virales.
rus a la célula hospedera pueden estar mediados • Incorporación del RNA genómico en la
por receptores Fc y del complemento. De hecho, cápside formada en la membrana celular.
en estudios sobre la respuesta humoral en la in- • Procesamiento de las poliproteínas Gag y
fección por VIH, se ha demostrado la facilitación Gag-Pol en la superficie celular y en los
de la infección viral mediada por anticuerpos. viriones en formación.
• Gemación de la cápside viral a través de la
Control de la replicación del virus membrana celular con incorporación de las
glicoproteínas de envoltura procesadas pre-
El estado de activación de las células T es sentes en la superficie celular.
importante para la replicación viral e involucra la
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Mecanismos citopáticos 10 años; los progresores rápidos, evolucionan a
SIDA en 3 a 4 años, y corresponden al 5-10% de
Muy importante en la comprensión de la los casos; y finalmente, los no progresores, o
patogénesis del VIH en el individuo infectado es progresores lentos, que corresponden a no más del
el conocimiento de los mecanismos citopáticos por 5% de los pacientes con infección por VIH, y que
los que actúan el virus o sus proteínas sobre las permanecen asintomáticos por períodos de más de
células infectadas y no infectadas. Ciertos VIH-1 10 a 15 años, manteniendo recuentos de células
aislados de individuos con enfermedad avanzada, CD4+ superiores a 400/µL, y cargas virales muy
tienen una mayor capacidad para matar células bajas o indetectables.
infectadas en cultivo que los aislados de indivi- Existen varios cofactores involucrados en la
duos asintomáticos. La muerte celular parece ser evolución a la enfermedad, como la vía de trans-
el resultado de la formación de células misión, edad al momento de la infección, estado
multinucleadas, necrosis y apoptosis. previo del sistema inmune del huésped,
La formación de células multinucleadas o primoinfección sintomática, coinfecciones con
sincicios que ocurre en cultivo, y quizás en el in- otros patógenos, etc.
dividuo, es el resultado de la fusión de células in- Se han descrito importantes asociaciones del
fectadas con células CD4+ no infectadas; parece sistema HLA ("Human Leukocyte Antigen", MHC
involucrar carbohidratos y glicolípidos de la su- en humanos) y progresión de la infección por VIH,
perficie celular y muy probablemente múltiples en este sentido, se han identificado haplotipos
interacciones gp120:CD4. VIH inductores de HLA-A1/B8/DR3/B35, asociados con una rápida
sincicios (IS) se encuentran más frecuentemente progresión a SIDA, y con una mayor susceptibili-
en individuos con enfermedad avanzada. Sin em- dad a la infección, en tanto haplotipos HLA-A9/
bargo, exceptuando el cerebro, no hay evidencias A25/ A32/ B5/ B18/ B27/ DR5/ DR6/ DR13, se
de la existencia de células multinucleadas in vivo. asocian a individuos que presentan una lenta pro-
Varias observaciones han relacionado la gresión a SIDA, y haplotipos HLA-A2/ A28/
muerte celular con toxicidad directa del virus o de DR13, a personas seronegativas, frecuentemente
la envoltura viral. El mecanismo no es claro, pero expuestas al VIH, por lo que se asocian con cierta
podría involucrar un cambio de la integridad de la resistencia a la infección.
membrana celular y/o apoptosis. Se ha descrito Otro factor importante a considerar en el cur-
actividad citotóxica a varias proteínas virales. so de la infección por VIH, es la respuesta de cé-
La apoptosis acelerada de células T que se lulas Th1 y Th2. Aparentemente se produciría un
observa en la infección por VIH-1 puede estar re- "switch" en el curso de la infección por VIH, pre-
lacionada con varios mecanismos: proteínas dominando la respuesta Th2 sobre Th1, lo que se
virales específicas que actúan como inductoras, ha relacionado con una rápida progresión a SIDA.
interacción de las proteínas del virus con la molé-
cula CD4, interacción de citoquinas con sus re- 2.4. Ingreso al organismo
ceptores (particularmente el sistema Fas/Fas-li-
gando). A todos estos mecanismos, pueden sumar- El VIH ingresa al organismo, directamente a
se defectos de las células presentadoras de antígeno través del torrente sanguíneo, o a través de muco-
que llevan a una actividad defectuosa de las célu- sas, pudiendo ingresar como virus libre o células
las T y, por último, una actividad tipo superan- infectadas, lo habitual es la transmisión sexual a
tígeno del VIH. nivel de la mucosa genital. Las primeras células
infectadas son las células dendríticas de la lámina
2.3. Progresión de la infección por VIH-1 propia, éstas se fusionan con células CD4+, y se
produce diseminación a otros tejidos. El VIH
La evolución en el tiempo de un paciente puede ser detectado en los ganglios linfáticos
con infección por VIH es muy variable, sin em- regionales, a los pocos días después de producida
bargo, se han evidenciado múltiples factores, que la infección. Posteriormente ocurre diseminación
intervienen en una mayor o menor progresión a sistémica. Lesiones en la mucosa e inflamación,
SIDA. En general, se describen tres grupos de debido a úlceras genitales, uretritis o cervicitis,
pacientes de acuerdo a su evolución: los favorecen que se establezca la infección por VIH.
progresores típicos, que corresponden al 80-90% En los ganglios linfáticos se produce
de los casos, y cuya sobrevida es aproximadamente infección de células CD4+ activadas, y
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diseminación a otros tejidos linfoides y órganos a curativo sino que está orientado a suprimir la
distancia. Es importante comprender que desde el replicación viral, permitiendo la recuperación
punto de vista virológico, no existe período de inmunológica del individuo, mejorando su estado
latencia, ya que estos órganos linfoides, de salud y calidad de vida.
constituyen un reservorio del virus, y un sitio de
constante replicación. Existe un verdadero a) Tratamiento antirretroviral
secuestro del VIH a nivel de las células dendrítico
foliculares, presentes en los ganglios linfáticos. Los objetivos terapéuticos frente a la infec-
ción por VIH han ido evolucionando en función
2.5. Respuesta inmune anti-VIH de la eficacia y seguridad de los antirretrovirales,
y de una forma esquemática se han ido planteado
En la infección por VIH, la evolución a SIDA las siguientes alternativas posibles: (i) Reducción
está relacionada con el éxito de la respuesta inmune sustancial de la carga viral, sin que necesariamen-
en controlar la replicación y diseminación del vi- te se pretenda que la viremia sea indetectable, (ii)
rus. La respuesta inmune específica, tanto humoral carga viral plasmática indetectable y (iii) erradi-
como mediada por célulass se ha demostrado en cación de la infección.
pacientes con infección por VIH, sin embargo, está Los principios generales del tratamiento fren-
claro que esta inmunidad específica al virus, no te a la infección por VIH son los siguientes: (i)
confiere adecuada protección. Esto se explica, en tratamiento intenso, con el propósito de suprimir
cierta medida, por el hecho de que las células CD4+, al máximo la replicación viral, (ii) análisis de be-
necesarias para iniciar una repuesta inmune neficios y riesgos del inicio del tratamiento
específica y protectora, son destruidas o alteradas antirretroviral, (iii) desarrollo de resistencia a los
funcionalmente; además el virus presenta un alto antirretrovirales, (iv) base de la terapéutica actual
grado de variabilidad genética, lo que lleva a son las combinaciones de antirretrovirales, (v) el
variaciones antigénicas, que le sirven al VIH para recuento de LT CD4+ y la carga viral son impres-
evadir al sistema inmune del huésped. cindibles, (vi) la adherencia al tratamiento es un
pilar esencial frente a la infección por VIH.
2.6. Diagnóstico de laboratorio Los antirretrovirales disponibles comercial-
mente pertenecen a 3 familias: (i) los inhibidores
La pesquisa de anticuerpos anti-VIH en de la transcriptasa reversa análogos de
muestras de suero es el método más comúnmente nucleósidos: zidovudina (ZDV), didanosina (ddI),
empleado para el diagnóstico de laboratorio de la zalcitabina (ddC), estavudina (d4T), lamivudina
infección por VIH. Los antígenos usados en los (3TC), (ii) los inhibidores de la transcriptasa
ELISAs y otras pruebas de tamizaje para pesqui- reversa no análogos de nucleósidos: delavirdina,
sar anticuerpos anti-VIH incluyen péptidos y (iii) los inhibidores de proteasa: ritonavir (RIT),
recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2. De- saquinavir (SAQ), indinavir (IND) y lopinavir.
bido a que estas pruebas son muy sensibles pero Cada uno de estos medicamentos tiene un perfil
no tan específicas, y dado la trascendencia del de efectos adversos que es necesario considerar, e
diagnóstico de infección por el VIH es necesaria interacciones con otros fármacos.
la confirmación de los resultados positivos. Entre
las pruebas de confirmación se pueden citar las b) Otros tratamientos
basadas en la inmunoelectrotransferencia o
“western blot” (la más usada), inmunofluores- En el paciente con infección por VIH es esen-
cencia indirecta, radioinmunoprecipitación e cial la atención integral. No sólo considerar la te-
“immunoblot” con antígenos recombinantes. rapia farmacológica, sino el apoyo psicológico
para él y su entorno, apoyo nutricional, preven-
2.7. Tratamiento ción de complicaciones oportunistas, uso adecua-
do de ciertas vacunas, prevención de reinfecciones
El tratamiento en los pacientes VIH positi- con el VIH (sexo más seguro), entre otras medi-
vos dependerá de la etapa en que se encuentra la das. En este marco también puede tener un lugar,
enfermedad. Se han establecido parámetros clíni- en casos seleccionados, la terapia inmunológica
cos y de laboratorio para decidir el momento más con citoquinas como la IL-2 para estimular la re-
adecuado para iniciar este tratamiento, que no es constitución inmunológica.
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Respuesta humoral Respuesta celular
La producción de anticuerpos con especifi- Existen evidencias de la importancia de la

cidad para varios de los componentes virales, se inmunidad celular específica anti-VIH, y de su
produce precozmente en el curso de la infección rol en la progresión a SIDA. Se han identificado
por VIH, constituyendo la base para el diagnóstico. respuestas de células Th anti-VIH, células CD8+
Hay evidencias que demuestran que una que median citotoxicidad directa de células
disminución de los anticuerpos anti-gag o anti-pol, infectadas, vía restricción MHC clase I, y también
precede la progresión a SIDA en 1 a 4 años. células CD8+ que suprimen la replicación del VIH
Existen anticuerpos que pueden neutralizar por mecanismos MHC independientes. Se han
la infectividad de virus libres, o unidos a mem- identificado los epítopos de la envoltura viral, que
brana, antes de su entrada a las células, también son el blanco de los LTh y LT citotóxicos, sin
se han reportado anticuerpos neutralizantes de embargo, se ha evidenciado respuesta a la mayoría
proteínas estructurales internas. El principal de las proteínas estructurales y reguladoras del
epítopo neutralizante, está localizado en la región virus.
hipervariable de la gp120 de la envoltura, la región Diferentes ensayos de inmunización activa,
V3, los anticuerpos con especificidad para esta en modelos animales, han demostrado que la
región son tipo-específico. respuesta inmune mediada por LT CD8+, es la que
En el genoma viral, que codifica para las gp mejor se correlaciona con protección de la
120 y gp 41, se han identificado los sitios infección por VIH.
específicos de reconocimiento antígénico, de Para desarrollar una vacuna anti-VIH eficaz,
anticuerpos neutralizantes, con propiedad ADCC es necesario comprender ampliamente los aspec-
(Citotoxicidad dependiente de anticuerpos) y tos de la inmunidad protectora anti-VIH.
reconocimiento de células T específicas.
Los anticuerpos neutralizantes contra la
región hipervariable V3 de la gp 120, al parecer 3. SISTEMA INMUNE FETAL Y NEONATAL
inhiben la infección al bloquear cambios
conformacionales de la gp120, necesarios para el El recién nacido está expuesto a infecciones
proceso de fusión y entrada del VIH a la célula. neonatales por bacterias piógenas, virus y ciertos
También se han descrito anticuerpos neutralizantes patógenos intracelulares como Toxoplasma Gondii
contra la región de unión a CD4 de la gp120, su y Listeria Monocytogenes, dada la inmadurez de su
rol protector es menos eficaz que los anteriores. sistema inmunitario, tanto humoral como celular.
Los niveles séricos de anticuerpos neutra-
lizantes, aparecen 2 a 4 semanas después de la 3.1. Inmunidad celular
primoinfección, alcanzando su "peak" durante la
fase asintomática. En etapas avanzadas de la Tanto los linfocitos T CD4+ como los T
infección, estos anticuerpos se encuentran a muy CD8+ aparecen en el hígado y bazo a las 14 se-
bajos niveles. En cuanto a los anticuerpos con manas de gestación, luego se produce un aumento
propiedad ADCC, o fijación del complemento, progresivo hasta los 6 meses de vida extrauterina
existe aún bastante controversia de su rol benéfico que declina gradualmente hasta llegar a los nive-
o deletéreo in vivo. Se ha observado que anticuerpos les del adulto durante la infancia. La relación CD4/
anti-VIH, que median ADCC de células que CD8 es mayor durante la vida fetal (3,5) vs 2,5 al
expresan gp120 o gp41, se elevan precozmente en término del embarazo. La relación en un adulto se
el curso de la infección, y son detectados a través estima entre 1,2 y 2,1.
de toda la evolución, disminuyendo sus niveles con Así, los linfocitos T en niños de término es-
el desarrollo de la enfermedad. tán aumentados en número y presentan una ma-
También se han descrito los anticuerpos yor expresión de CD38 (marcador timocitario) o
facilitantes de la infección por VIH, vía receptores de CD45RA (marcador de linfocitos T naîve, pre-
del complemento o fracción Fc de las sentes en el 90% de estos linfocitos a esta edad vs
inmunoglobulinas. El significado "in vivo" de estos un 60% de representación en la misma población
anticuerpos facilitantes es aún controvertido, T en un adulto).
aunque se ha observado que su presencia se También existe una respuesta normal a
correlaciona con progresión a SIDA. mitógenos pero una menor respuesta proliferativa
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a anticuerpos anti-CD2 y anti-CD3, lo que corres- principalmente de IgM, como por ej. Salmonellas
pondería a una propiedad general de los linfocitos y Escherichia Coli y donde los niveles de IgG pro-
T naîve más que a una característica única de los tectores son suficientes para la madre, pero no para
linfocitos T del recién nacido. el feto o recién nacido, ya que la madre puede mon-
Existe además un déficit de la producción de tar una respuesta inmune secundaria con rapidez y
linfoquinas, IL-3, IL-4, IL-5 e IFN-γ, comparado también una respuesta de IgM más rápida a estos
con la producción de los linfocitos T del adulto. antígenos de “evocación”, cuando su sistema in-
Por los factores ya mencionados y por la mune se encuentra nuevamente con el patógeno.
menor expresión de moléculas coestimuladoras, Respecto a los niveles de inmunoglobulinas,
como por ejemplo el ligando CD40 de superficie, es importante destacar que la IgM alcanza el nivel
existe una menor colaboración para la función de de un adulto al año de vida, la IgA en la adolescen-
los linfocitos B, que tienen una menor producción cia y la IgG alrededor de los 5 a 6 años. En un niño
de anticuerpos. prematuro, se observarán menores concentraciones
En general, las respuestas T citotóxicas es- de inmunoglobulinas que en un niño de término.
tán disminuidas en recién nacidos, promediando
el 30 a 60% de aquella generada por las células 3.3. Inmunidad innata
adultas.
Respecto a las concentraciones de los facto-
3.2. Inmunidad humoral res del Complemento, y su actividad funcional es-
tán disminuidas incluso en recién nacidos de tér-
Aunque existe síntesis de anticuerpos especí- mino, y estas deficiencias son aún más evidentes
ficos desde las 20 a 24 semanas de vida intrauterina, en prematuros. La vía alterna más es la afectada.
la concentración de IgM e IgA es baja al momento La síntesis de los factores del complemento
de nacer, por la falta de exposición antigénica. Res- se inicia a las 6 a 14 semanas de vida intrauterina,
pecto a la inmunoglobulina G, el neonato depende pero no es significativa hasta el tercer trimestre
del paso transplacentario de este anticuerpo para de la gestación. Al término del embarazo, los ni-
protegerse contra ciertos patógenos, lo que ocurre veles de las proteínas del complemento represen-
principalmente en las últimas 8 a 10 semanas de la tan el 50 a 75% de los niveles maternos.
gestación, por lo cual un niño prematuro es más También se ha observado que la concentra-
susceptible a desarrollar estas infecciones. Este paso ción de fibronectina, una glicoproteína de alto peso
transplacentario comienza a niveles bajos desde la molecular, que actúa como opsonina, está reduci-
octava semana de gestación, aumenta progresiva- da en el recién nacido, en especial en aquellos que
mente durante el embarazo y en el recién nacido de presentan distress respiratorio, asfixia y cuadros
término incluso excede en 5 a 10% el nivel de sépticos.
inmunoglobulina G materna. Respecto a las características del sistema
Los linfocitos B del feto y neonato humano fagocítico a esta edad, podemos señalar que el
son funcionalmente inmaduros y sus respuestas número de neutrófilos circulantes se eleva poco
de anticuerpos específicas son esencialmente IgM después del nacimiento, pero la capacidad de res-
y la respuesta a antígenos polisacáridos está seve- puesta medular y producción de nuevas células
ramente alterada. Los linfocitos B neonatales no en la presencia de cuadros infecciosos es limita-
se diferencian a células plasmáticas productoras da, especialmente en prematuros. Estas células
de IgG o IgA por falta de colaboración de los LTh alcanzan un peak a las 12 a 14 horas del nacimien-
cuya actividad también está disminuida, como to, y posteriormente disminuyen, alcanzando a las
veremos posteriormente. 72 horas los niveles sanguíneos de un adulto
También puede producirse una tolerancia El número de monocitos circulantes, está
neonatal a antígenos encontrados durante la vida normal o aumentado en recién nacidos, con una
intrauterina y desarrollarse una anergia clonal de capacidad de respuesta medular conservada. La
estos linfocitos específicos, y ello puede explicar producción de macrófagos comienza desde la cuar-
el déficit de producción de anticuerpos que puede ta semana de gestación, pero se desconoce el nú-
observarse en infecciones congénitas adquiridas mero de macrófagos tisulares en recién nacidos.
tempranamente in útero, como la Rubéola. Estas células tienen una permanencia de 2 a 3
Existe un problema adicional con ciertos meses en los tejidos, luego de un paso sanguíneo
patógenos, ante los cuales la respuesta materna es de 2 a 3 días como monocitos.
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La quimiotaxis de neutrófilos y monocitos cambios en la regulación de la función de los
está disminuida, probablemente debido a una me- monocitos/macrófagos. Por estas razones, la
nor expresión de moléculas de adhesión, defecto senescencia inmunológica más bien hay que en-
que se hace más evidente en prematuros. Por este tenderla como una disrregulación del sistema in-
motivo, la liberación de monocitos a tejidos infla- mune, que como una deficiencia.
mados o infectados, está retardada.
Las funciones fagocítica y microbicida de 4.1. Inmunidad celular
neutrófilos y monocitos provenientes de recién
nacidos sanos, están conservadas in vitro pero al- Si bien no hay cambios de los linfocitos T
teradas en niños enfermos, especialmente si son totales con la edad, se produce un aumento signi-
prematuros. ficativo del cuociente entre las dos principales
La producción de citoquinas monocitarias subpoblaciones de linfocitos T, (LT CD4+ y LT
está relativamente conservada en recién nacidos CD8+), debido a un aumento significativo de los
de término, y son capaces de secretar IL-1, IL-6, linfocitos T CD4+. A diferencia de lo que se en-
TNF-α e IL-8, en forma similar a las células de cuentra en el individuo joven, en el que predomi-
un adulto, ante un estímulo endotóxico. nan las células T CD4+ vírgenes (no han tenido
También está conservada la capacidad de pro- contacto con antígeno), que se caracterizan por el
ducir GM-CSF y G-CSF (Factor estimulador de marcador de membrana CD45RA+, en el
colonias granulocito-monocito y granulocito, res- senescente estas células T CD4+ son predominan-
pectivamente). temente linfocitos T de memoria, que llevan el
Las células natural killer (NK) representan marcador CD45RO+ . En los jóvenes, el porcen-
un 10 a 15% de los linfocitos circulantes en el taje de células T virgen excede al de células T de
adulto y en el recién nacido. Se observan en el memoria. A lo largo de la vida, la activación de
hígado fetal a partir de la sexta semana de gesta- las células T vírgenes estimula su transición a cé-
ción. Su número alcanza un peak en el primer año lulas T de memoria, y por esta razón el tamaño de
de vida y a los 4 a 5 años alcanza los niveles de un estos dos compartimientos celulares, cambia re-
adulto. Respecto a su funcionalidad, es importan- cíprocamente con la edad. Ya en las edades me-
te destacar que ésta aumenta progresivamente en dias de la vida, las células T de memoria son más
la vida fetal y postnatal, y que sólo el 50% de ellos numerosas que los LT vírgenes. Ambas
expresa el marcador CD56 al momento del naci- subpoblaciones difieren no solamente en las mo-
miento. A esta edad estas células tienen una me- léculas que ellas activan sino también en las
nor actividad citolítica. citoquinas que producen. Por estas razones, el
cuociente alterado entre estas subpoblaciones con-
tribuye en forma importante al efecto de la edad
4. E N V E J E C I M I E N T O Y S I S T E M A sobre la respuesta inmune.
INMUNE Debido a que la expansión clonal de las cé-
lulas T es una etapa importante en la respuesta
En el anciano hay una mayor incidencia de inmune, se ha estudiado extensamente la capaci-
enfermedades en general, y de enfermedades in- dad de respuesta proliferativa de los linfocitos T
fecciosas en particular. Si bien parece lógico plan- en individuos jóvenes y en senescentes. En los
tear que en el anciano, existe una inmunode- ancianos se ha encontrado que la capacidad de
ficiencia asociada con la edad, que podría expli- respuesta proliferativa de las células T a mitógenos
car esta mayor incidencia, los marcadores más como "phytohemagglutin" (PHA), "concanavalin
comunes de inmunodeficiencia no se constatan en A" (Con A) y al anticuerpo monoclonal anti-CD3,
el senescente saludable. Por ejemplo, no se pro- está disminuida. Estos cambios parecen explicar-
duce una disminución del recuento de linfocitos se por alteraciones de la expresión de diversos
totales circulantes ni de la concentración de proto-oncogenes que regulan la proliferación de
inmunoglobulinas séricas con la edad. Más bien, los linfocitos T, constatadas en estos grupos de la
la senescencia inmunológica se caracteriza por un población.
cambio en el número y competencia de las Esta menor capacidad de respuesta
subpoblaciones linfocitarias y de las citoquinas que proliferativa de las células T en los ancianos, se
ellas producen, como asimismo por un cambio en asocia con una disminución de la producción y de
el repertorio de los linfocitos (menos clones) y la respuesta a la IL-2, interleuquina que es esen-
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cial en esta etapa. Parece ser que esto se debe a no son severos, pero ellos pueden contribuir, a
una disminución de la expresión de los receptores hacer más profundas las alteraciones de la inmu-
de alta afinidad para la IL-2, que se ha constatado nidad celular que se describen antes.
en estos individuos.
La producción de otras citoquinas
inmunorreguladoras no está disminuida en el an- 5. INMUNIDAD Y NUTRICIÓN
ciano. Con la edad la producción de IFN-γ no cam-
bia y la producción de IL-4 y de IL-6 aumenta. La nutrición inadecuada, influencia
Estas citoquinas actúan como factores de creci- adversamente la mayoría de las funciones inmu-
miento de las células B, pueden contribuir al au- nes normales. La primera línea de defensa en la
mento de la producción de autoanticuerpos y de inmunidad normal es la integridad física de piel y
Igs monoclonales, que se observan en el mucosas. Deficiencias de nutrientes específicos se
senescente. han correlacionado con alteraciones de estas im-
Estos cambios en la producción de citoquinas portantes barreras, entre otras, la deficiencia de
en el anciano pueden deberse, al menos en parte, vitamina A, riboflavina y piridoxina. La deficien-
al cambio que ocurre en la proporción de células cia proteica se asocia con atrofia generalizada de
T vírgenes y de memoria, ya que la secreción de la piel y, a nivel celular, puede llevar a una
citoquinas producidas por estas dos subpobla- depleción del número de linfocitos y de células
ciones celulares, es diferente. Ambas producen IL- plasmáticas en el espacio intersticial de las mem-
2, pero las células T de memoria son las principa- branas mucosas. Estas células juegan un rol im-
les productoras de IFN, IL-4 e IL-6. La expresión portante en la producción de IgA secretora, la prin-
dominante de esta subpoblación particular de cipal inmunoglobulina de las mucosas.
linfocitos y la resultante producción de citoquinas
puede contribuir a la mayor susceptibilidad a cier- 5.1. Inmunidad celular
tas infecciones, que se produce con la edad.
La declinación de las respuestas cutáneas de La disminución de la función de las células
hipersensibilidad retardada, asociada con la edad, T y de la inmunidad celular es el hallazgo más
fue el primer indicador que demostró que la fun- consistente en la evaluación inmunológica de los
ción de las células T se altera con el envejecimien- individuos malnutridos. Hay depleción tanto de
to. Muchas personas de edad avanzada, a pesar de los linfocitos circulantes como tisulares y las res-
infección previa con el Mycobacterium tubercu- puestas cutáneas de hipersensibilidad retardada
losis, tienen respuestas débiles o no tienen respues- están disminuidas, en forma proporcional a la se-
tas cutáneas frente al PPD y otros antígenos de veridad de la malnutrición. Las respuestas
evocación. proliferativas de los linfocitos T están alteradas
en forma variable. Los mecanismos responsables
4.2. Inmunidad humoral de esta disminución de la inmunidad celular se
conocen sólo parcialmente, postulándose la parti-
La inmunidad humoral se afecta poco. En ge- cipación de numerosos factores. En niños, estas
neral, el número y función de los linfocitos B per- alteraciones se recuperan luego de una suple-
manece intacto, así como las inmunoglobulinas, mentación dietética adecuada.
que pueden estar normales o levemente aumenta-
das. Hace excepción la IgE, que puede estar muy 5.2. Déficit de nutrientes específicos
alta, independientemente de la contribución de
otros factores, tales como parasitosis o alergia, Se ha demostrado que las deficiencias de
reflejando una regulación defectuosa de su pro- nutrientes específicos, incluyendo vitaminas esen-
ducción por las células T. ciales y minerales, tienen un efecto adverso sobre
Otros componentes del sistema de defensas varios parámetros de la inmunidad. El problema
inespecífico, tales como el sistema fagocítico, de las interacciones de los micronutrientes con el
tambien está disminuido en la malnutrición, tan sistema inmune es complejo, debido a la asocia-
frecuente en el anciano. La fagocitosis general- ción frecuente con otras deficiencias nutricionales,
mente se mantiene intacta, pero algunos estudios la presencia de infecciones clínicas o subclínicas,
han mostrado una migración y una capacidad las cuales por sí mismas tienen un efecto sobre el
bactericida deficiente. En general, estos defectos sistema inmune. Las deficiencias aisladas de
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micronutrientes son raras, exceptuando las de fie- saria para la reparación de la herida y para la de-
rro, la vitamina A y zinc. fensa local contra los microorganismos.
El rol de la deficiencia de vitamina A en la Esta reacción también evoca una respuesta
disminución de las respuestas inmunes parece ser sistémica que, en general, es depresora de la in-
muy importante, como queda demostrado por la munidad, cuya finalidad sería proteger al orga-
significativa disminución de la morbimortalidad nismo de un síndrome de inflamación sistémico
que se ha observado en poblaciones deprivadas, que podría llegar a ser deletéreo. El grado de
sometidas a suplementación dietética con esta vi- inmunodeficiencia se correlaciona con el grado
tamina. La vitamina A parece jugar un papel im- de injuria y estrés y es causa de mayor morbilidad
portante en las funciones inmunes, como se men- y mortalidad en pacientes quirúrgicos y
cionó, en la mantención de la integridad de las traumatizados, entre otras, sepsis y falla orgáni-
barreras anatómicas, pero además, se han docu- ca múltiple.
mentado otros defectos inmunológicos en el défi- Los individuos con mayor riesgo son los re-
cit de vitamina A: leve reducción del peso del timo, cién nacidos, senescentes, pacientes con enferme-
disminución de la respuesta de los linfocitos T a dades severas subyacentes, especialmente las que
los mitógenos, disminución de la producción de afectan al sistema inmune, malnutridos y alcohó-
anticuerpos específicos, disminución de la proli- licos. La identificación de estos pacientes es im-
feración de los linfocitos T in vitro y aumento de portante y en pacientes con cirugía electiva es útil
la adherencia bacteriana a las células epiteliales la evaluación previa de la inmunocompetencia, ya
respiratorias. que pacientes anérgicos o que se hacen anérgicos
La deficiencia de zinc se ha estudiado más con la cirugía tienen mayor riesgo de sepsis y tam-
extensamente que otras deficiencias. Estos estu- bién mayor mortalidad.
dios han demostrado que el zinc tiene los siguien-
tes efectos profundos sobre la función inmune:
atrofia de tejidos linfáticos en animales de experi- 7. INMUNODEFICIENCIA SECUNDARIA
mentación, depleción linfocitaria, disminución de A ENFERMEDADES INFECCIOSAS
las respuestas de hipersensibilidad cutánea retar-
dadas, disminución de la respuesta proliferativa Existen diversos mecanismos por los cuales
de los linfocitos a mitógenos, menor quimiotaxis un agente infeccioso puede producir una altera-
de los neutrófilos, entre otras. ción de la respuesta inmune.
La deficiencia de vitamina E se asocia con Es un hecho conocido que después de algu-
una disminución de la inmunidad celular, dismi- nas infecciones, como por ejemplo el sarampión,
nución del recuento de linfocitos T y de las res- el paciente que la ha experimentado queda pro-
puestas de las células NK. También se han obser- penso a tener otras infecciones, lo que da cuenta
vado síntesis de anticuerpos disminuidas. Estos de un deterioro de la respuesta inmune. Este défi-
efectos son mayores cuando existe concomitante- cit suele ser transitorio en la mayor parte de las
mente un déficit de selenio. patologías infecciosas que lo producen, pero exis-
No existe mucha información acerca de los ten otras, como la infección por VIH (ver punto
efectos de la malnutrición y, en particular, de dé- 2) que conducen a un deterioro progresivo del sis-
ficit específicos de micronutrientes, en población tema inmune.
anciana. La mayor parte de los trabajos, a este res- Entre estos mecanismos de depresión
pecto, se han efectuado en niños. inmunitaria están la infección directa de las células
del sistema inmune, la alteración de subpoblaciones
linfocitarias con linfopenia generalizada, supresión
6. INMUNODEFICIENCIA INDUCIDA POR de la respuesta de LTh, activación de linfocitos T
CIRUGÍA Y TRAUMA supresores, y la generación de mediadores solubles
que afectan la acción de células o mediadores
El trauma quirúrgico, ya sea accidental o en inmunológicos (interferones y citoquinas derivadas
el pabellón gatilla una respuesta inflamatoria y del huésped y factores supresores y superantígenos
metabólica, destinada a controlar sus efectos y a derivados del patógeno).
la reparación. En general, el estrés quirúrgico evo- Existen diversos estudios epidemiológicos
ca una respuesta pequeña y controlable. La infla- que muestran la mayor incidencia de infecciones
mación local producida por este proceso es nece- respiratorias altas y bajas durante epidemias de
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influenza, e infecciones por virus sincicial respi- presores. Los primeros estarían encargados de eli-
ratorio y adenovirus, en estos pacientes. También minar los linfocitos B infectados y los linfocitos
se ha observado la asociación de infecciones si- supresores más bien inhibirían la proliferación B y
multáneas, como por ejemplo, neumopatías por mantendrían al virus en estado latente. En esta en-
Citomegalovirus y Herpes simplex, e infección por fermedad, existiría un estímulo de la IL-10, prove-
virus de Epstein-Barr con Candidiasis disemina- niente de linfocitos Th2, y también por un homólo-
da, entre otros ejemplos. A continuación se anali- go viral de esta IL-10, que actúan en forma
zan algunos de los principales patógenos asocia- inhibitoria, de la actividad Th1, de la liberación de
dos con inmunodepresión: citoquinas y de la síntesis de IL-12, actuando sobre
los macrófagos para inhibir la activación Th1.
7.1. Inmunodeficiencia secundaria a infeccio- También se ha observado un aumento tem-
nes virales poral del número de células NK, que presentan,
sin embargo, una función disminuida, que dura
Sarampión. Este virus infecta directamente aproximadamente 4 semanas, durante el curso de
a las células linfoides, incluyendo monocitos, una MNI.
linfocitos T y B, también es capaz de alterar la La infección por virus de Epstein-Barr tam-
actividad de células NK y la síntesis de bién se ha asociado con defectos inmunitarios más
inmunoglobulinas. Este período de inmunode- severos y permanentes.
presión habitualmente se manifiesta por unas po-
cas semanas, pudiendo conducir al desarrollo de Citomegalovirus. La infección por este virus de
otras infecciones en ese momento. Este virus, se la familia de los Herpes virus puede manifestarse
une a CD46, una proteína regulatoria del comple- por un síndrome mononucleósico o por patolo-
mento, que actúa como receptor viral, y esta unión gías habitualmente más graves, cuando ocurre una
impide la producción de interleuquina 12 por reactivación de la infección en condiciones de
monocitos y macrófagos, in vitro. La IL-12 es crí- depresión inmunitaria (Infección VIH, uso de
tica en el desarrollo de la inmunidad celular, ya inmunosupresores, etc), con diseminación de la
que es un potente inductor de IFN-γ en linfocitos infección y compromiso orgánico generalizado.
T y células NK y es importante en el desarrollo de Una vez que este agente infecta los monocitos, se
respuestas de tipo Th1 y respuestas de hipersen- replica en ellos e induce la producción de una
sibilidad retardada. Si se mide la producción de molécula inhibitoria de la actividad de la IL-1.
IL-12 por monocitos de sangre periférica de pa- Una vez que las personas superan la
cientes con sarampión, se observa una marcada primoinfección por Citomegalovirus, la mayor
supresión de la producción de esta citoquina. Este parte queda como portadora de la infección en
fenómeno es objetivable hasta varios meses des- estado latente, y esta infección puede reactivarse
pués de la infección aguda. con gran agresividad en casos de inmunode-
En esta patología, como existe un déficit ficiencias posteriores.
inmunitario global, comandado por la supresión
de la proliferación T ante el estímulo antigénico, Otros Herpes virus. La infección por virus her-
también es posible encontrar anergia cutánea en pes simplex se asocia con una expansión de la
las pruebas de hipersensibilidad retardada, que es población T supresora, lo que se manifiesta con
una característica común de infecciones donde el una linfoproliferación disminuida y una menor
compromiso de la inmunidad celular es prepon- producción de anticuerpos. Las glicoproteínas
derante. virales pueden inhibir directamente la citolisis
mediada por complemento, y, a través de la unión
Virus de Epstein-Barr. Este es un virus de la fa- al fragmento Fc de la IgG, impedir una adecuada
milia de los Herpes virus, causante de la fagocitosis. A nivel de recuentos hematológicos,
Mononucleosis Infecciosa (MNI), capaz de infec- puede existir una linfopenia transitoria.
tar directamente a los linfocitos B uniéndose al re- El virus herpes 6, causante de la Roseola infantil,
ceptor CD21 de la superficie linfocitaria, y trans- puede infectar directamente las células NK. Tam-
formarlos produciendo una expansión policlonal de bién se han reportado alteraciones en distintas fun-
linfocitos B, con aumento de la producción de ciones inmunitarias en la fase temprana de
anticuerpos, y por otra parte, existe una intensa pro- reactivación de infecciones por virus varicella
liferación de linfocitos T CD8+, citotóxicos y su- zoster.
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Sin título-2 524 5/26/06, 10:26 AM

Virus Influenza. La infección aguda produce una la presencia de un mayor número de linfocitos T
linfopenia global transitoria, con disminución de CD 8 supresores y defectos en las células T CD4+.
la proliferación linfocitaria, incremento de la ac-
tividad NK debido a producción de IFN y genera- Virus de la Rabia. Este virus expresa un
ción de linfocitos supresores que inhiben la pro- superantígeno viral, que puede producir notorios tras-
ducción de IL-2. tornos inmunitarios, ya sea por deleción clonal o
poderosas respuestas proliferativas de linfocitos T.
Rinovirus. Es el agente del resfrío común, con
una gran variedad de serotipos, lo cual representa 7.2. Inmunodeficiencia secundaria a infeccio-
un ejemplo de estrategia de evasión viral a la res- nes bacterianas y fúngicas
puesta inmunitaria, que es específica de cada
serotipo. Existe un receptor natural del virus, la Existen distintas alteraciones inmunológicas,
molécula de adhesión intercelular ICAM-1 comunicadas en humanos, que se han observado
(CD54). La infección por este virus lleva a un au- en infecciones bacterianas graves, que incluyen
mento de la producción de IFN-γ y de la actividad alteración de la quimiotaxis leucocitaria, dismi-
de las células NK. nución de la eliminación de partículas por el sis-
tema fagocítico-mononuclear, fagocitosis dismi-
Adenovirus. La infección por este virus se carac- nuida y alteración transitoria de la función
teriza por un déficit en la producción de IL-2 y de bactericida. Estas alteraciones no son consisten-
la capacidad de respuesta inmunitaria a esta tes en todos los estudios publicados y se refieren
citoquina. Este virus produce una proteína capaz a la presencia de linfopenia y cambios de las
de antagonizar los efectos de los interferones y subpoblaciones de linfocitos T CD3+, CD4+ y
otra proteína que se une a las moléculas del MHC CD8+.
clase I, dificultando así la respuesta citotóxica de Componentes aislados de algunos microor-
los linfocitos T CD 8+. ganismos tienen efectos supresores de la inmuni-
dad, como por ejemplo, el Lipoarabinomannan,
Virus Sincicial Respiratorio. Existen diversos de origen micobacteriano o componentes de
estudios sugerentes de una modulación del siste- Candida Albicans, que afectarían especialmente
ma inmune por parte de este agente, sin que poda- la función linfocitaria T.
mos claramente hablar de una inmunodepresión Distintos productos bacterianos ejercen un
secundaria. Lo que se ha observado es una efecto de superantígeno sobre los linfocitos T, lo
inmunomodulación viral específica a nivel de los que puede conducir a estas células a su deleción
linfocitos T helper 2 de memoria, que participa- clonal o a su inactivación funcional. Entre ellos
rían en la expresión de manifestaciones podemos mencionar toxinas estafilocócicas y
obstructivas respiratorias, inclusive asma que pre- estreptocócicas. Otros agentes no bacterianos aso-
sentan algunos sujetos, pero existe aún bastante ciados a un efecto de superantígeno son el virus
controversia sobre este tema. de la rabia y el virus de la inmunodeficiencia hu-
mana.
Virus Rubéola. Este virus es capaz de infectar
directamente diversas células del sistema inmu- 7.3. Inmunodeficiencia secundaria a infeccio-
ne, lo que se ha evidenciado en diversos estudios nes parasitarias
que han utilizado citometría flujo.
Algunas infecciones parasitarias severas se
Papilomavirus. Este agente es el causante de pa- asocian con algunos déficit inmunitarios, entre
tologías cutáneas como verrugas y condilomas ellas podemos mencionar la Malaria (asociada con
acuminados, que en general, son difíciles de erra- alteración de la respuesta de anticuerpos a
dicar, pese a respuestas celulares y humorales antígenos proteicos y polisacáridos), la
medibles contra este agente, lo que sugiere una Esquistosomiasis (asociada con disminución de
inmunosupresión funcional. Se ha identificado la respuestas linfocitarias a mitógenos in vitro y con
presencia de un factor soluble, derivado de escasa respuesta inflamatoria alrededor de los pa-
linfocitos de sangre periférica, en estos pacientes, rásitos tisulares in vivo), la Enfermedad de Chagas
inhibitorio de la producción y actividad de IL-2. (asociada con producción de moléculas capaces
También se han reportado, en algunos pacientes, de bloquear la activación del complemento) y otras
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Sin título-2 525 5/26/06, 10:26 AM

Tripanosomiasis (asociadas con depresión de res- cionar según la etapa de desarrollo en que este
puestas celulares y humorales) y algunas infec- tumor se encuentre. Respecto a la expresión
ciones por Nemátodos (asociadas con disminución de antígenos por las células tumorales, es
de respuestas proliferativas in vitro hacia antígenos importante destacar que existen los llamados
parasitarios e incapacidad de producción de cier- antígenos de diferenciación, asociados a tu-
tas citoquinas como IL-1, IL-2 e IFN-γ. mores, que requieren de otras señales
antigénicas para su reconocimiento, ya que
representan epítopos celulares normales y que
8. INMUNODEFICIENCIA SECUNDARIA también existe expresión de neoantígenos, que
A ENFERMEDADES INFILTRATIVAS Y contienen epítopos diferentes a los de
TUMORES antígenos normales, que se han utilizado en
ciertas estrategias de tratamiento antitumoral.
Se han observado diferentes alteraciones en (e) Los tumores pueden antagonizar funciones
las respuestas inmunológicas de pacientes con cán- inmunológicas a través de la producción de
cer, tanto in vivo como in vitro, dadas por su en- factores solubles, la baja expresión de
fermedad de base, a las cuales se pueden agregar citoquinas en el microambiente tumoral o la
las propias de las terapias antitumorales corres- inducción de defectos moléculares en el re-
pondientes. ceptor del linfocito T.
Estos pacientes presentan una mayor suscep-
tibilidad a infecciones, una menor respuesta en prue- Estas acciones no son comunes a todos los
bas cutáneas de hipersensibilidad retardada y una tipos de cáncer existentes, y se observan distintas
menor respuesta de inmunoglobulinas específicas alteraciones asociadas a distintas patologías
ante vacunaciones, entre otros defectos. neoplásicas. Así por ejemplo, se sabe que en el
linfoma de Hodgkin y en algunos Gliomas malig-
8.1. Evasión de la respuesta inmune por tumo- nos, existe secreción de prostaglandinas por las
res células tumorales, como prostaglandina E2 que es
capaz de aumentar la actividad de células
Ante el hecho de que ocurra la expansión de supresoras de la actividad monocitaria.
un tumor, al menos en su etapa inicial, podría pen- Las células tumorales (y también los
sarse en una falla inmunológica que permita el linfocitos T humanos), son capaces de producir
desarrollo y diseminación posterior de éste. Lo que TGF-β (factor de crecimiento transformante-β),
ocurre es que estas células tumorales pueden eva- que dependiendo de la concentración, tiene efec-
dir los mecanismos de control del sistema inmune tos supresores la respuesta inmune, afectando la
de varias formas, entre ellas: función de linfocitos T, B y células NK, la pro-
ducción de IL-1, además de la función macrofágica
(a) Disminuir la expresión de las moléculas MHC y la producción de células inmunocompetentes en
clase I en su superficie, dificultando el pro- la médula ósea.
cesamiento y presentación antigénica a Las células tumorales normalmente son des-
linfocitos citotóxicos. truidas por diversos mecanismos inmunológicos,
(b) Disminuir la expresión de moléculas de adhe- como la citotoxicidad mediada por linfocitos T
sión y de β-2 microglobulina de superficie, CD8+ y células NK, y la lisis celular mediada por
dificultando el reconocimiento antigénico y complemento, activada por las vías clásica y al-
causando la pérdida de la inhibición del creci- terna. Las células normales expresan inhibidores
miento por contacto entre las células, fenóme- del complemento que las protegen de esta casca-
no que ocurre en tejidos sanos normalmente. da lítica en condiciones fisiológicas. Se ha obser-
(c) Falta de expresión de moléculas coestimu- vado que varios tumores pueden expresar estas
ladoras en tejidos tumorales, como por ejem- moléculas en alta concentración, como por ejem-
plo la molécula B7 (CD80), lo que dificulta plo carcinomas, sarcomas, glioblastomas,
su reconocimiento por distintos subgrupos de melanomas y papilomas. Estos factores
linfocitos T. inhibidores son CD59, DAF (factor activador de
(d) Las células tumorales pueden ser pobremen- la degradación del complemento) y CLI (inhibidor
te inmunogénicas, dependiendo de los de la citolisis por complemento). Estudios in vitro
antígenos que expresen, lo cual puede evolu- muestran que la expresión de los mRNA de estas
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Sin título-2 526 5/26/06, 10:26 AM

moléculas se correlaciona con la resistencia a la 9. INMUNODEFICIENCIA SECUNDARIA
citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. A TERAPIA INMUNOSUPRESORA
En investigaciones basadas en modelos de
carcinoma de colon humano, se han observado di- Existen numerosas enfermedades autoin-
versos defectos moleculares del receptor del lin- munes e inflamatorias cuyo tratamiento farma-
focito T, que se presentan progresivamente a me- cológico necesariamente induce un déficit
dida que se desarrolla el tumor, y que comprome- inmunitario iatrogénico. Algunos de estos
ten su estructura interna y su función. fármacos también se utilizan en la prevención del
rechazo de trasplantes. Dichos fármacos
8.2. Defectos inmunológicos en tumores inmunosupresores se presentan en la tabla 31-2.
Todos estos complejos mecanismos desarro- 9.1. Mecanismos de acción

llados por las células tumorales y su interacción
con las células normales, finalmente conducen a Estas terapias tienen distintas especificidades
la expresión de una serie de defectos sobre el sistema inmune, y así, algunos fármacos
inmunológicos, entre los que podemos mencio- actúan más selectivamente o más generaliza-
nar la disminución de las respuestas de hipersen- damente, como analizaremos a continuación.
sibilidad retardada, de respuestas proliferativas a Las sustancias que actúan sobre las células
mitógenos, de síntesis de inmunoglobulinas, de en división (Agentes alquilantes, antiprolife-
respuestas monocitarias oxidativas, de producción rativos, inhibidores del metabolismo de las
de citoquinas y el aumento de la actividad purinas) y las radiaciones ionizantes disminuyen
supresora a nivel monocitario. En algunos tumo- la producción de linfocitos B y T maduros en el
res, como linfomas y leucemias, se puede obser- timo y médula ósea. Cuando son administrados
var además la presencia de linfopenia. junto a un antígeno, actúan selectivamente sobre
En resumen, podemos concluir que existen linfocitos T y B activados, sin afectar los linfocitos
diversas estrategias desarrolladas, a veces en for- de memoria en fase G0 del ciclo celular.
ma evolutiva por las células tumorales, que les per- Los linfocitos T de memoria que circulan
miten por un lado escapar del control inmuno- entre la sangre y la linfa son relativamente insen-
lógico y por otra, alterar esta respuesta inmune sibles a los tratamientos inmunosupresores, pero
afectando el número y la función de distintos gru- pueden destruirse por irradiación linfoide total,
pos de células inmunocompetentes. drenaje prolongado del conducto torácico, proce-
Tabla 31-2. Categorías de Fármacos Inmunosupresores
Antiproliferativos
Metotrexato, Ciclofosfamida, Azatioprina, Mizobirina/Micofenolato, Brequinar,
Deoxispergualina
Antagonistas de las Inmunofilinas, Sirolimus, Ciclosporina A, Tacrolimus (FK506), Rapamicina
Glucocorticoides
Antinflamatorios no esteroidales
Agentes biológicos
Globulinas antilinfocito y antitimocito, Gammaglobulina endovenosa, Anticuerpos monoclonales.
Citoquinas y antagonistas de sus receptores

Otros:Talidomida, Dapsona.
Radiaciones ionizantes
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dimientos de aféresis repetidos e inyecciones de timidilato, la síntesis de novo de purinas y la divi-
anticuerpos antilinfocitarios, que retiran una par- sión celular. En dosis altas, produce una fuerte
te de los linfocitos T de larga vida. La renovación toxicidad hematológica y digestiva, aunque este
celular por parte del timo es más efectiva en indi- efecto puede neutralizarse con la administración
viduos jóvenes que en ancianos. preventiva de ácido fólico. A dosis bajas, no se
Algunos inmunosupresores actúan sobre la asocia con mayor riesgo de mutagenicidad ni
presentación de antígenos a los linfocitos T (IL-10, teratogenicidad, pero posee toxicidad hepática y
Deoxispergualina) o sobre las interacciones celu- puede producir fibrosis pulmonares.
lares generadoras de señales coestimuladoras La Azatioprina, derivado de la 6-Mercapto-
(Anticuerpos anti-CD4, anti-LFA-1). Otros inhiben purina, no es activa por sí misma, sino por sus
la transcripción de los genes de citoquinas por las derivados. Bloquea la transformación del ácido
células T activadas (Ciclosporina A, FK506, inosínico en ácido adenílico, precursor de bases
Glucocorticoides) o bloquean las señales de pro- purínicas (guanina, hipoxantina). Su acción se ejer-
gresión de la fase G1 a la fase S del ciclo celular ce, principalmente, sobre los linfocitos T CD4+ y
(Rapamicina, Anticuerpos anti-CD25). Las molé- CD8+ y sobre las células NK, pero también sobre
culas que interfieren con el metabolismo de las el conjunto de células hematopoyéticas, por lo cual
purinas inhiben la expansión clonal de los linfocitos se requiere un ajuste muy preciso de sus dosis. La
T activados (Azatioprina, Mizobirina, Brequinar, administración concomitante de inhibidores de la
Mofetil micofenolato metabolizado al producto síntesis de ácido úrico (alopurinol) debe evitarse
activo, el ácido micofenólico en el organismo. Los debido al riesgo de aplasia medular. La sobredosis
agentes alquilantes (Mostaza nitrogenada, puede producir pancitopenia, macrocitosis aisla-
Ciclofosfamida, Clorambucil) y el Metotrexato tam- da y lesiones hepáticas. Este fármaco es utilizado
bién actúan en este estado, pero sin ninguna espe- principalmente en trasplantes de órganos, con fre-
cificidad frente a los linfocitos T. Además, algunos cuencia asociado a corticoides. En enfermedades
fármacos actúan sobre la diferenciación de los autoinmunes, la Azatioprina se utiliza, principal-
linfocitos T y B activados por antígenos mente, en las formas corticorresistentes o
(Deoxispergualina y Citoquinas que controlan el corticodependientes con el fin de reducir la dosis
desarrollo celular Th1 y Th2 (IFN-γ, IL-4). Se pro- de éstos y sus efectos indeseables.
fundizará brevemente los mecanismos de acción y
efectos colaterales de algunos de estos fármacos. Nuevos inhibidores de la biosíntesis de
nucleótidos
Agentes Alquilantes
Son tres fármacos que inhiben en forma si-
Estos agentes forman uniones covalentes con milar las respuestas linfocitarias T y B, pero con
el DNA, y cuando se administran a altas dosis, con- una menor incidencia de mielosupresión que los
ducen a la muerte celular. Actúan, principalmente, agentes anteriormente analizados.
en células en división y su uso implica riesgos como
el desarrollo de aplasia medular, alopecía, esterili- La Mizobirina y el Ácido Micofenólico inhiben
dad, cistitis hemorrágica, y a largo plazo, el desa- la acción de la inosinmonofosfatodehidrogenasa,
rrollo de tumores, como cáncer vesical y leucemia suprimiendo la síntesis de nucleótidos guanínicos.
mieloide. Por tener efectos mutagénicos y Brequinar inhibe una enzima requerida para la
teratogénicos, es indispensable el uso de un trata- síntesis de novo de pirimidinas (Dihidroorotato
miento anticonceptivo paralelo. Su acción se ejer- dehidrogenasa).
ce principalmente sobre los linfocitos B (Supresión
de la producción de anticuerpos e hipo- Antagonistas de Inmunofilinas
gammaglobulinemia), los linfocitos T CD8+ a ba-
jas dosis y los linfocitos T CD4+ a altas dosis. La Ciclosporina A es un derivado de origen
fúngico, descubierta en 1976, que actúa
Inhibidores del metabolismo de las purinas y selectivamente frente a linfocitos T activados. Se
pirimidinas une a receptores intracitoplasmáticos, las
ciclofilinas A, B, C y D de la familia de las
Uno de ellos es el Metotrexato; al inhibir la inmunofilinas y este complejo inhibe la acción de
tetrahidrofolato reductasa, bloquea la síntesis de la fosfatasa 2B o Calcineurina. Este efecto condu-
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Sin título-2 528 5/26/06, 10:26 AM

ce a un bloqueo de la transcripción, calcio depen- leucotrienos, y la actividad de la fosfolipasa A2,
diente, del gen de IL-2 y de otras citoquinas como además de inhibir la ciclooxigenasa de los
IL-3, IL-4 e IFN-γ. Al contrario de los fármacos ya macrófagos.
analizados, que actúan sobre todas las células que Los corticoides también son inhibidores de
sintetizan activamente DNA, este fármaco actúa distintas proteasas: colagenasa, elastasa y
exclusivamente sobre los linfocitos activados, prin- activador del plasminógeno y de la producción de
cipalmente sobre los linfocitos T CD4+. No tiene derivados del óxido nítrico. Por otra parte, actúan
efectos adversos sobre la hematopoyesis y no mo- sobre las células endoteliales e inhiben la per-
difica la población de linfocitos T de memoria. Su meabilidad vascular inhibiendo la expresión de los
acción inmunosupresora es rápidamente reversible genes MHC clase II y de las moléculas de adhe-
después de suspender la terapia. Entre sus efectos sión ELAM-1 e ICAM-1. En el hombre, sólo los
secundarios podemos mencionar: nefrotoxicidad, timocitos y los linfocitos T activados son suscep-
con hipertensión arterial secundaria. tibles a la lisis por apoptosis.
Los corticoides más utilizados como
El FK506 es un macrólido de origen fúngico, que inmunosupresores son la Prednisona y la
actúa a menores dosis que la Ciclosporina A. Este Metilprednisolona. Los efectos secundarios son
fármaco se liga a una inmunofilina citoplasmática, múltiples: síndrome Cushingoide, hipertensión
y este complejo también inhibe, a nivel arterial, osteoporosis, cataratas, diabetes, altera-
transcripcional, la síntesis de IL-2 y otras citoquinas. ción del crecimiento, acné, defectos de cicatriza-
ción, entre otros.
La Rapamicina es otro macrólido que se une al
mismo receptor citoplasmático que FK506 pero Globulinas antitimocitos y Anticuerpos
sus efectos son distintos. Este fármaco bloquea la monoclonales
actividad de una serintreoninquinasa y su asocia-
ción con la ciclina D1, que controla la entrada de Las globulinas antitimocitos o antilinfocitos
las células a la fase S del ciclo celular. Por ello, la se obtienen inmunizando conejos o caballos con
Rapamicina no disminuye la síntesis de citoquinas estas células de origen humano y se utilizan, pri-
pero impide la expansión clonal de linfocitos T mordialmente, en la prevención y tratamiento de
estimulados por antígenos. los rechazos de trasplante. Tienen el severo riesgo
de inducir una Enfermedad del suero, debido a la
Glucocorticoides producción de anticuerpos contra estos anticuerpos
heterólogos (de otra especie), que se manifiesta
Se unen a receptores intracitoplasmáticos y clínicamente en 10 a 30% de los pacientes, alre-
son traslocados al núcleo celular, donde el com- dedor del décimo día de tratamiento, con la apari-
plejo se fija a secuencias reguladoras específicas, ción de fiebre, artritis, adenopatías dolorosas, y
los elementos de respuesta a glucocorticoides, mo- leucocitosis con trombopenia y caída del nivel
dulando positiva o negativamente la transcripción plasmático del fármaco administrado. Esta pato-
de ciertos genes, en particular, genes que codifi- logía implica la detención de la terapia o el cam-
can para citoquinas. También tienen efectos sobre bio por un anticuerpo de otro origen.
la traducción del RNA, la síntesis y la secreción Los anticuerpos monoclonales anti-CD3 u
de citoquinas ( IL-2 e IFN-γ). OKT3, tienen un poderoso efecto inmunosupresor.
In vivo, los glucocorticoides inhiben el acce- El sitio probable de acción de este fármaco es la
so de los leucocitos a focos inflamatorios. A dosis interferencia con transducción de señales que si-
altas, inducen una neutrofilia por movilización del guen al reconocimiento del receptor T (TCR) al
pool marginal y una linfopenia que afecta princi- antígeno presentado por células presentadoras de
palmente a linfocitos T CD4+, por redistribución antígeno. Además existiría un efecto de lisis di-
de éstos. Tienen, por lo tanto, su mayor efecto so- recta de los linfocitos T CD3 debido a que se pro-
bre la inmunidad celular. duce una rápida caída de los recuentos
Su acción antinflamatoria se explica, princi- linfocitarios. Se utiliza ampliamente en la preven-
palmente, por los efectos que poseen sobre ción y tratamiento del rechazo de alotrasplantes.
macrófagos y neutrófilos. Ellos inhiben la sínte- Como estos fármacos son de origen murino,
sis de IL-1, IL-6 y en menor grado de TNF. Tam- tienen el potencial de inducir anticuerpos huma-
bién disminuyen la síntesis de prostaglandinas y nos y desencadenar una Enfermedad del suero. La
529
Sin título-2 529 5/26/06, 10:26 AM

modificación de este tipo de fármacos sustituyen- Mellors, J.W.; Muñoz, A.; Giorgi, J.V. et al., “Plas-
do la región Fc por la secuencia aminoácida de ma viral load and CD4+ lymphocytes as prognostic
IgG humana, puede colaborar en producir markers of HIV infection”, Ann Intern med 1997;
anticuerpos monoclonales menos sensibilizantes 126: 946-954.
y con mejor cinética in vivo.
Pantaleo, G.; Menzo, M.; Vaccarezza, C.; Graziosi,
9.2. Impacto de la inmunodeficiencia asocia- O.J.; Cohen, J.F.; Demarest, D.; Montefiori, J.M.;
da a inmunosupresores Orenstein, C.; Fox, L.K.; Schrager, J.B.;
Margolick, S.; Buchbinder, J.V.; Giorgi and A.S.
Los tratamientos inmunosupresores produ- Fauci, “Studies in subjects with long-term
cen un déficit inmunitario que puede traducirse nonprogressive human immunodeficiency virus
en patologías infecciosas o tumorales, por lo cual infection”, N. Engl J. Med 332: 209-216, 1995.
estas terapias deben ser cuidadosamente vigila-
das del punto de vista clínico y de laboratorio. Rich, R. (editor in chief), Clinical Immunology,
La inmunosupresión intensa acarrea el riesgo de Principles and Practice, Vol I. Secondary
infecciones oportunistas, particularmente por Immunodeficiencies, pp. 707-836, 1996.
hongos, virus y protozoos, así como a la emer-
gencia de tumores asociados a infecciones virales Rich, R. (editor in chief), Clinical Immunology,
crónicas. Principles and Practice Vol II. Therapy of
immunologic diseases, caps. 126, 129 y 130, 1996.
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tores), SIDA, tercera edición. Publicaciones Téc-
Atabani, S.; Byrnes, A.; Jaye, A.; Kidd, M.; nicas Mediterráneo Ltda., Santiago, Chile, 2002.
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lud, junio de 1998.
530
Sin título-2 530 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 32
INMUNIDAD FRENTE A BACTERIAS
Eva Burger, Edilia Andrews G. y Heriberto Fernández J.
1. Introducción 3.2.2. Leucocitos polimorfonucleares

2. Inmunidad frente a bacterias extra- neutrófilos
celulares 3.3. Inmunidad adquirida a bacterias
2.1. Características generales de las bacte- intracelulares
rias extracelulares 3.3.1. Macrófagos activados
2.2. Mecanismos de inmunidad natural 3.3.2. Linfocitos T
2.2.1. Mecanismos comunes a bacterias 3.3.3. Efecto conjunto de linfocitos T
extra e intracelulares CD4+ y CD8+
2.2.2. Inmunidad natural a bacterias 3.3.4. Linfocitos Tγδ
extracelulares 3.3.5. Citoquinas
2.3. Inmunidad adquirida a bacterias 3.3.6. Granulomas
extracelulares 4. Análisis comparativo del desarrollo de in-
2.3.1. Neutralización de toxinas o enzimas munidad en infecciones por bacterias
bacterianas por anticuerpos extracelulares e intracelulares.
2.3.2. Efectos directos del sistema del com- 5. Estrategias de intervención inmune en re-
plemento lación a bacterias intracelulares
2.3.3. Efecto conjunto de anticuerpo, com- 5.1. Tipos de vacunas para bacterias intra-
plemento y lisozima celulares en uso
2.3.4. Opsonización y facilitación de la 5.2. Desarrollo de nuevas vacunas
fagocitosis 5.2.1. Identificación de antígenos pro-
3. Inmunidad frente a bacterias intra- tectores
celulares 5.2.2. Cepas vaccinales atenuadas y
3.1. Características generales de las bacte- recombinantes
rias intracelulares 5.2.3. Vacunas de subunidades y empleo
3.2. Inmunidad natural a bacterias intra- de adyuvantes
celulares 5.2.4. Vacunas DNA
3.2.1. Células NK
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RESUMEN
En este capítulo se presenta algunas características de las bacterias extracelulares e

intracelulares, incluyendo principios de su patogenicidad y virulencia. Algunos aspectos de la
inmunidad frente a bacterias son abordados separadamente, cuando los mecanismos inmunológicos
activos son diferentes en estos dos grupos de microorganismos.
Se describen los componentes de la respuesta inmune innata o natural comunes a ambos
grupos bacterianos, tales como la influencia de la especie, el papel de la piel, de la concentración
de hierro y de substancias inhibitorias no inmunológicas como por ejemplo la lisozima. Se discu-
te la participación de las citoquinas inflamatorias en la inmunidad natural a bacterias extracelulares
y de las células NK y de los leucocitos polimorfonucleares neutrófilos en la inmunidad natural a
bacterias intracelulares.
Consecuentemente, se analiza la participación de la respuesta inmune adquirida en la pro-
tección contra infecciones bacterianas. Los mecanismos efectivos relevantes son el brazo humo-
ral de la respuesta inmune en el caso de las bacterias extracelulares y el brazo celular de la
respuesta inmune en el caso de las bacterias intracelulares. Tratándose de mecanismos completa-
mente diferentes, éstos fueron abordados separadamente. Así, en el tópico inmunidad adquirida a
bacterias extracelulares, se presenta la neutralización de toxinas o de enzimas bacterianas por
anticuerpos, los efectos del sistema complemento, ya sean directos o en conjunto con anticuerpos
y lisozima, además de la opsonización y facilitación de la fagocitosis por el fragmento Fc de IgG
y/o el componente C3b del complemento. En lo tocante a inmunidad adquirida a bacterias
intracelulares se analiza la participación de varias poblaciones celulares, tales como macrófagos
activados, linfocitos T, linfocitos T CD4+ y sus subpoblaciones, linfocitos T CD8+, linfocitos T-
γδ, estudiándose también la participación de citoquinas y granulomas.
Finalmente, se presentan estrategias de inmunointervención en la prevención de infeccio-
nes causadas por bacterias intracelulares, destacándose las vacunas ya en uso y las nuevas vacu-
nas en desarrollo, comprendiendo la identificación de antígenos protectores, cepas atenuadas y
recombinantes, vacunas de subunidades y de DNA y el efecto de adyuvantes.
1. INTRODUCCIÓN 2. INMUNIDAD FRENTE A BACTERIAS

EXTRACELULARES
En el contexto de un libro de Inmunología,
interesa estudiar los microorganismos de acuerdo 2.1. Características generales de las bacterias
con la respuesta inmune que inducen y no según extracelulares
su clasificación taxonómica. Considerando que en-
tre la respuesta inmune frente a bacterias Las bacterias extracelulares son capaces de
extracelulares e intracelulares existen diferencias replicarse fuera de las células del hospedero, como
fundamentales, en este capítulo, su estudio será por ejemplo en la circulación, en el tejido
presentando dividido bajo ese aspecto, con excep- conectivo y en espacios tisulares como las vías
ción de aquellos mecanismos de inmunidad natu- aéreas y el lumen intestinal.
ral comunes a ambos tipos de bacterias. Entre las bacterias extracelulares se cuentan
las cocáceas Gram (+) piogénicas
(Staphylococcus, Streptococcus) y los bacilos,
principalmente anaerobios (Clostridium). Dentro
de las Gram (-) se encuentran cocos (Neissera
meningitidis, N. gonorrhoeae y otras Neisseria) y
533
Sin título-2 533 5/26/06, 10:26 AM

una gran gama de bacilos, incluyendo los san ser procesadas. Este complejo es, entonces,
microorganismos entéricos (Escherichia coli). reconocido por linfocitos T CD4+ αβ expresando
Las bacterias extracelulares causan enferme- receptores de antígeno de cierto Vβ. En resumen,
dad por varios mecanismos: estos superantígenos se ligan a moléculas del MHC
clase II y simultáneamente al TCR de un alto por-
Producción de exotoxinas. La patogenicidad centaje de los linfocitos T, independientemente del
bacteriana puede ser producida por la secreción de péptido que esté siendo presentado. Las respues-
proteínas, las cuales son las toxinas más potentes tas tóxicas se deben a la estimulación de linfocitos
conocidas y que tienen varios efectos patológicos. T y a la consiguiente excesiva producción de
Estas toxinas pueden ser exotoxinas, activamente citoquinas.
secretadas por las bacterias y también, endotoxinas,
las que forman parte de la pared bacteriana. Secreción de lipopolisacáridos (LPS). El LPS es
Las exotoxinas son citotóxicas y tienen la ca- otra clase de molécula que actúa indirectamente,
pacidad de translocarse a células de mamíferos. El causando autointoxicación del hospedero. El LPS
mecanismo general por el cual ello ocurre es por la liberado por las bacterias se une con gran afinidad
unión específica de una porción de la molécula a la por la porción altamente conservada en todas las
superficie de la célula, mientras que otra parte de la enterobacterias (lípido A) a la proteína de fase
molécula es el dominio tóxico. Estas dos porciones aguda LPS-ligante. El complejo se une a
pueden ser producto de un gen único o de dos genes. macrófagos, induciendo la formación de TNF-α e
Los lugares blancos intracelulares son diferentes, IL-1, las cuales desencadenan una cascada de
así como también su modo de acción. Como ejem- citoquinas por parte de varias células del sistema
plos de exotoxinas se pueden citar las toxinas inmune, desencadenando la sintomatología carac-
diftérica, colérica, tetánica y clostrídica. terizada por leucocitosis, choque y coagulación
La respuesta inmune contra bacterias intravascular diseminada.
extracelulares tiende a destruir las bacterias y a
neutralizar los efectos de sus toxinas. Invasión bacteriana. Algunas bacterias secretan
substancias nocivas como hialuronidasa (lisa el
Inducción de la respuesta inflamatoria excesi- ácido hialurónico del tejido conectivo y permite
va. Las bacterias piogénicas inducen una respuesta la diseminación bacteriana), estreptoquinas (en-
inflamatoria muy acentuada la cual puede llevar a zima fibrinolítica capaz de disolver coágulos),
lesión tisular. colagenasas y elastasas que destruyen la estructu-
ra del tejido conjuntivo.
Secreción de superantígenos. Los Staphylococcus
y los Streptococcus del grupo A producen toxinas 2.2. Mecanismos de inmunidad natural
que tienen la capacidad de activar un porcentaje
muy alto de linfocitos T. Los síntomas clínicos va- 2.2.1. Mecanismos comunes a bacterias extra
rían pero en general incluyen choque sistémico. La e intracelulares
respuesta inmune a estas substancias y a proteínas
relacionadas con ellas las torna únicas en términos influencia de la especie. Existe la resistencia de
de efectos biológicos y patológicos. Los efectos determinadas especies a ciertas infecciones. La
patológicos de las enterotoxinas estafilocócicas son resistencia de las gallinas a Brucella abortus es
mediadas por citoquinas, como el TNF-α. un ejemplo de esta condición, la cual es una ma-
Las enterotoxinas estafilocócicas son algu- nifestación de factores genéticos.
nos de los mitógenos naturales más potentes
para linfocitos T, actuando en concentraciones Integridad de la piel. La piel íntegra sustenta una
de 10-9 M o menos, uno de cada cinco linfocitos alta densidad de bacterias comensales y potencial-
T responde a ella. La respuesta a enterotoxinas mente patogénicas pero, luego, por debajo de la
estafilocócicas requiere de células presentadoras superficie ella es estéril. En la piel íntegra, es im-
de antígeno expresando moléculas del Complejo posible la penetración de bacterias o de otros
Principal de Histocompatibilidad (MHC) clase II. microorganismos excepto la de cercarias de
Estas enterotoxinas se unen directamente a la por- Schistosoma. Heridas pequeñas permiten la en-
ción constante de las moléculas clase II (por fuera trada de staphylococcus y/o streptococcus mien-
del sitio de unión para los antígenos) y no preci- tras que heridas más profundas y la destrucción
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de los tejidos generan un medio anaerobio y per- son bactericidas para bacterias Gram (+).
miten el acceso de clostridium.
Contenido de hierro. Un factor determinante del
Substancias inhibitorias no inmunológicas. La éxito o no de una invasión bacteriana es el conte-
relativa poca frecuencia de infecciones bacterianas nido de hierro en los fluidos orgánicos. Muchas
debido a pequeñas heridas, indica la capacidad de bacterias, como Staphylococcus aureus,
los tejidos animales para contener la invasión pasteurella multocida, Mycobacterium tuberculo-
bacteriana. Parte de esta resistencia se debe a la sis y Escherichia coli necesitan de hierro para su
presencia de potentes substancias con propieda- crecimiento. En el cuerpo, sin embargo, el hierro
des antibacterianas en los tejidos: en su mayor parte se encuentra secuestrado, aso-
ciado a proteínas (transferrina, lactoferrina,
Lisozima. La más importante de estas substan- haptoglobina y ferritina).
cias inhibitorias es la lisozima, encontrada en teji- Después de una invasión bacteriana, cesa
dos y en todos los fluidos corporales con excep- la absorción intestinal de hierro. La IL-1 libe-
ción del líquido cefalorraquídeo (LCR), sudor y rada de macrófagos causa un aumento en la pro-
orina. Se encuentra en altas concentraciones en ducción de transferrina y haptoglobina por los
las lágrimas y en la clara de huevo. Tiene la capa- hepatocitos y aumento de incorporación de hie-
cidad de lisar la capa de peptidoglicano de la pa- rro en el hígado. El resultado final es la falta de
red y los acilaminopolisacáridos de las cápsulas disponibilidad (escasez) de fierro para la bacte-
de algunas bacterias Gram (+), induciendo su ria invasora. De modo análogo, la invasión
muerte. En acción sinérgica con la lactoferrina, bacteriana a la glándula mamaria determina la
en condiciones de baja osmolaridad, mata varias liberación del contenido de lactoferrina de los
bacterias Gram (-). Actuando conjuntamente con PMN aumentando, así, el poder bactericida de
el complemento, lisa bacterias Gram (-). La la leche.
lisozima es más eficaz contra las bacterias Gram Las bacterias han desarrollado mecanismos
(+) porque en las Gram (-) la pared de para la adquisición de hierro para su sobrevivencia
peptidoglicano está protegida por la membrana y su crecimiento. Las enterobacterias secretan
externa. A pesar que las bacterias así lisadas no quelantes de fierro denominados sideróforos, los
sean patogénicas, esta ausencia de patogenicidad que compiten exitosamente por el hierro libre.
podría deberse, justamente, a su susceptibilidad a Luego, por receptores proteicos específicos ubi-
la acción de la lisozima. Esta enzima se encuentra cados en la membrana, absorben el sideróforo re-
en alta concentración dentro de los leucocitos pleto de hierro y lo transportan a receptores de
polimorfonucleares neutrófilos (PMN) y, por tan- hierro intracelulares. En seguida, el complejo
to, se acumula en los lugares donde existe infla- sideróforo/hierro internalizado es clivado para ori-
mación aguda, incluso sitios de invasión ginar hierro libre para la bacteria.
bacteriana. El pH ideal para ejercer su acción (pH Algunas bacterias, como Neisseria y
3-6) se alcanza en situaciones fisiológicas, tanto Haemophilus influenzae no producen sideróforos
en los lugares de invasión bacteriana como dentro pero, adquieren el hierro directamente de la
de fagosomas. lactoferrina o de la transferrina. Otras bacterias,
como Mycobacterium tuberculosis o Escherichia
Otras substancias inhibitorias. Incluyen la coli, producen compuestos con una poderosa ca-
espermina y la espermidina, que son tetraaminas pacidad quelante (micobactina y enteroquelina),
presentes en riñón, páncreas y próstata las que, en que retiran el hierro de las proteínas séricas, de-
conjunto con una alfa-globulina sérica, forman un jándolas disponibles para las bacterias, las que en-
complejo antibacteriano activo contra bacterias tonces podrán invadir el organismo.
ácido-alcohol resistentes y Bacillus anthracis.
Otras substancias inhibitorias, son los péptidos y 2.2.2. Inmunidad natural a bacterias
proteínas básicas beta-lisina y fagocitina, ricas en extracelulares
lisina y arginina, originadas de la digestión de pro-
teínas por enzimas proteolíticas liberadas de PMN Citoquinas inflamatorias. Debido al hecho de
o de plaquetas y que presentan un potente efecto que las bacterias extracelulares son muertas
antibacteriano. Los ácidos grasos libres inhiben el eficientemente por los mecanismos microbicidas
crecimiento bacteriano, mientras que los insaturados de los fagocitos, el principal mecanismo de inmu-
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nidad natural a estos microrganismos es la bacterianas en los tractos respiratorio y
fagocitosis por PMN, monocitos y macrófagos gastrointestinal y evita la colonización de los teji-
tisulares. La resistencia de las bacterias a la dos extraluminales.
fagocitosis y a la digestión intracelular es, por tan-
to, una importante determinante de su virulencia. 2.3.2. Efectos directos del sistema del comple-
Las endotoxinas, como el LPS estimulan la mento
producción de citoquinas por macrófagos y por otras
células, como por ejemplo el endotelio vascular. Varios componentes del sistema del comple-
Estas citoquinas incluyen TNF-α, IL-1, IL-6 y mento pueden atacar directamente y destruir bac-
quimioquinas (ver capítulo 11). La función fisioló- terias. Como los productos intermediarios resul-
gica principal de las citoquinas derivadas de tantes de la activación del sistema tienen acción
macrófagos es la de estimular la inflamación. Estas quimiotáctica, pueden reclutar fagocitos hacia el
citoquinas inducen la adherencia de neutrófilos y sitio de la infección.
monocitos al endotelio vascular en los sitios de
infección, fenómeno que es seguido por la migra- 2.3.3. Efecto conjunto de anticuerpo, comple-
ción, acúmulo en el lugar afectado y activación de mento y lisozima
células inflamatorias. Las células inflamatorias tie-
nen la función de eliminar las bacterias. Tanto la IgM como la IgG activan el sistema
del complemento, llevando a la producción del
2.3. Inmunidad adquirida a bacterias complejo de ataque a membranas bacterianas de
extracelulares efecto microbicida y a la liberación de mediado-
res de la inflamación aguda. La función del com-
El principal mecanismo capaz de conferir in- plejo de ataque a membranas bacterianas es ejer-
munidad específica contra bacterias extracelulares cida sólo en algunas infecciones, pues la deficien-
es la inmunidad humoral. Algunos de los compo- cia en los componentes tardíos C5 a C8 está aso-
nentes más inmunogénicos de paredes y cápsulas ciada al aumento de la susceptibilidad a la infec-
bacterianas son polisacarídicos y constituyen ción por Neisseria, pero no a la de otras bacterias.
ejemplos típicos de antígenos timo independien- El complejo de ataque a membranas no consigue
tes, estimulando directamente linfocitos B y ori- lisar bacterias Gram (-) pero, al insertarse a la pa-
ginando fuertes respuestas específicas de red bacteriana, provee un substrato a la lisozima,
anticuerpos IgM. Otros isotipos pueden ser origi- la cual, actuando en secuencia al complemento,
nados debido a la producción de citoquinas que produce la lisis de la bacteria. Individuos no in-
inducen cambio de clase (“switch” isotípico), munes pueden lisar bacterias a través de la activa-
como por ejemplo la producción de IgG2 en hu- ción de la vía alterna del complemento, pues las
manos en respuesta a la cápsula polisacárida de células bacterianas permiten la producción de la
Streptococcus pneumoniae, antígeno típicamente convertasa de C3 de la vía alterna (C3bBbP) (ver
T-independente. capítulo 18).
2.3.1. Neutralización de toxinas o enzimas 2.3.4. Opsonización y facilitación de la

bacterianas por anticuerpos fagocitosis
Muchos productos agresivos necesitan ligar- Opsonización por Fc de IgG. La eficiencia de la

se a receptores celulares. Esto es evitado por la fagocitosis aumenta cuando la membrana del fago-
molécula de anticuerpo que se liga a epítopes im- cito se liga al objeto a ser fagocitado. Los
portantes de la toxina, causando impedimento es- anticuerpos IgG opsonizan las bacterias y favore-
pacial. Este fenómeno puede ser a través de la mo- cen la unión de macrófagos, monocitos y neutrófilos
lécula completa o solamente por la región Fab o a través de sus receptores para Fc gamma (FcγR).
F(ab)’2. Tanto anticuerpos IgG como IgM neu-
tralizan toxinas bacterianas y evitan su unión a las Opsonización por C3b. Los fagocitos también tie-
células blanco. La neutralización involucra la com- nen receptores para C3b. Las personas deficien-
petencia entre el anticuerpo y el receptor en la tes en C3 son muy susceptibles a infecciones
célula blanco por la molécula de toxina. La IgA bacterianas piogénicas.
presente en las secreciones neutraliza las toxinas
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Opsonización por Fc de IgG y por C3b. Las con- hasta la forma lepromatosa con inmunidad celu-
secuencias de la opsonización con C3b o Fc de lar deficiente y muchos bacilos. Parasita una gran
IgG y más aún, su efecto conjunto, son el aumen- variedad de células.
to de la unión de la partícula a ser fagocitada y la
activación metabólica de los fagocitos. Los Listeria monocytogenes y listeriosis: Es una en-
anticuerpos IgG e IgM activan el sistema del com- fermedad de ovinos y bovinos pero puede afectar
plemento, generan C3b e iC3b que se ligan a los al hombre. La enfermedad experimental en rato-
receptores CR1 y CR3, respectivamente, y pro- nes es aguda. Parasita preferentemente células
mueven la fagocitosis. presentadoras no profesionales (endoteliales,
hepatocitos), además de macrófagos.
3. INTRODUCCIÓN A BACTERIAS Brucella abortus. Cuando penetra al organismo,

INTRACELULARES es captada y transportada por células fagocíticas
hacia los órganos del sistema fagocítico
3.1. Características generales de las bacterias mononuclear estableciendo una infección crónica.
intracelulares En bovinos se ubica en órganos del aparato génito-
urinario, posiblemente debido a la presencia de
Las bacterias intracelulares causan enferme- eritritol en la superficie de las células epiteliales.
dades conocidas desde antiguo (Mycobacterium tu- Respecto a la patogenicidad y virulencia de bac-
berculosis, Mycobacterium leprae, Salmonella terias intracelulares, éstas entran al hospedero a
typhi) que afectan a más de medio billón de perso- través de las mucosas, principalmente por el in-
nas, y otras enfermedades, conocidas como emer- testino o por el pulmón. Luego, atraviesan las ca-
gentes, que afectan a pacientes con SIDA pas epiteliales. Enseguida, sufren los efectos de
(Mycobacterium intracellulare). Estas bacterias los mecanismos inespecíficos de defensa, desde
viven dentro de las células del hospedero vertebrado los físicos y físicoquímicos hasta aquellos que
durante gran parte de su vida y deben, por tanto, involucran la inmunidad natural. Si son capaces
tener baja toxicidad, lo que tiene consecuencias de sobrevivir, colonizarán los tejidos situados más
sobre la respuesta inmune que ellas desencadenan. profundamente y van a provocar el establecimiento
En relación a su hábitat, las bacterias de una respuesta inmune específica. En situacio-
intracelulares pueden ser: (a) intracelulares facul- nes ideales, se consigue la erradicación de las bac-
tativas, que prefieren fagocitos mononucleares, terias, o si no, ellas permanecen en nichos poco
(Mycobacterias, Salmonella, Brucella, Legionella accesibles al sistema inmune.
y Listeria) pero pueden infectar otras células, y (b)
intracelulares estrictas, que no sobreviven fuera 3.2. Inmunidad natural a bacterias
de las células y que prefieren células presentadoras intracelulares
no profesionales (endoteliales y epiteliales), a pe-
sar de poder infectar monocitos mononucleares El principal mecanismo de inmunidad natural
(Rickettsia y Chlamydia). Algunos ejemplos de contra microorganismos intracelulares es la
bacterias intracelulares son los siguientes: fagocitosis, aunque las bacterias intracelulares
patogénicas son relativamente resistentes a la lisis
Mycobacterium tuberculosis y tuberculosis: M. dentro de los fagocitos mononucleares. Por tanto,
tuberculosis es una bacteria aerobia estricta. Por no es sorprendente que la inmunidad natural sea,
tener muchos lípidos, glicolípidos y elementos generalmente, bastante ineficiente en controlar la
grasos, es hidrofóbico y resistente a la lisis por colonización por estos microorganismos y su conse-
complemento, a ácidos y álcalis. Es el patógeno cuente diseminación. La resistencia a la fagocitosis
responsable del mayor número de muertes e ines también una razón por la cual estas bacterias tien-
fecta entre 1/3 y 1/2 de la humanidad. Parasita den a causar infecciones crónicas que pueden durar
prácticamente sólo a macrófagos. años, frecuentemente de difícil erradicación y recru-
deciendo después de curas aparentes.
Mycobacterium leprae y lepra: Es una enferme-
dad muy crónica, espectral, yendo desde la forma 3.2.1. Células NK
tuberculoide, con fuertes reacciones inmunes ce-
lulares y lesiones con pocos microorganismos, Las bacterias intracelulares activan células
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NK, ya sea directamente o estimulando la produc- de los macrófagos constituye uno de los pasos fun-
ción de IL-12 por los macrófagos y PMN. Las damentales en la resistencia a bacterias
células NK producen IFN-γ que, a su vez, activa intracelulares. Muchas de las actividades descri-
macrófagos y promueve la lisis de las bacterias tas para estas células no son expresadas
fagocitadas. Así, las células NK constituyen una constitutivamente en ellas. La expresión plena de
línea de defensa en una fase inicial de la infección las actividades antibacterianas de estas células
por este tipo de bacterias, antes del desenvolvi- depende del estímulo adecuado por citoquinas, de
miento de la respuesta inmune específica. De he- las cuales la más importante es el IFN-γ. Su efec-
cho, ratones con SCID (Inmunodeficiencia com- to transforma los macrófagos de células que per-
binada severa) que son, deficientes en linfocitos miten la replicación microbiana en células
T y B son capaces de controlar, por lo menos tem- efectoras que restringen o eliminan su capacidad
poralmente, infecciones producidas por Listeria de sobrevivencia. En macrófagos murinos, el IFN-
monocytogenes a través de la producción de IFN- γ es el principal activador de macrófagos, los que
γ por células NK. se tornan capaces de lisar L. monocytogenes o
Brucella y de inhibir el crecimiento de M. tuber-
3.2.2. Leucocitos polimorfonucleares neutrófilos culosis y de M. bovis.
Los principales efectores de la actividad
Como estas células tienen alto potencial antibacteriana de los macrófagos son los interme-
bactericida, pueden matar muchas bacterias diarios del metabolismo del nitrógeno. Estos me-
intracelulares. Sin embargo, son de corta vida y las canismos aun no están bien entendidos en los se-
bacterias intracelulares están secuestradas en nichos. res humanos, pues todavía no ha sido demostrada
En la fase inicial de la infección disminuyen la car- la producción de reactivos del nitrógeno en
ga infectante como por ejemplo en la listeriosis, en macrófagos humanos y el IFN-γ casi no induce
la que se observa una gran afluencia de PMN. inhibición del crecimiento de M. tuberculosis. Sin
La muerte de bacterias intracelulares por embargo, TNF-α causa inhibición del crecimien-
macrófagos o por PMN es realizada por molécu- to de M. intracellulare e IFN-γ, en conjunto con
las tóxicas, particularmente metabolitos reactivos TNF-α, producen inhibición del crecimiento de
del oxígeno e intermediarios reactivos del nitró- M. tuberculosis.
geno (ver capítulo 3). Alguna deficiencia en el
anión superóxido favorece la susceptibilidad a 3.3.2. Linfocitos T
muchas infecciones bacterianas (enfermedad
granulomatosa crónica). La resistencia adquirida a infecciones por
bacterias intracelulares depende crucialmente de
3.3. Inmunidad adquirida a bacterias linfocitos T, que promueven la erradicación esté-
intracelulares ril de las bacterias susceptibles (L. monocytogenes)
y “clearence” parcial y contención, a través de le-
La inmunidad mediada por células es la prin- siones granulomatosas de las bacterias resistentes
cipal respuesta inmune protectora a infecciones (M. tuberculosis). La formación y la mantención
por bacterias intracelulares. Individuos que pre- de los granulomas es gobernada por los linfocitos
sentan deficiencias en la inmunidad celular son T y la coordinación entre linfocitos T, macrófagos
extremadamente susceptibles a estas infecciones, y otras células es promovida por las citoquinas.
como lo son, por ejemplo, los pacientes con SIDA. La necesidad de linfocitos T se ilustra y queda en
Las principales respuestas inmunes protec- evidencia en pacientes deficientes en linfocitos T
toras son de dos tipos. Uno es la lisis de las bacte- (enfermos de SIDA) y en animales atímicos.
rias intracelulares fagocitadas como resultado de
la activación de macrófagos por citoquinas deri- a) Linfocitos T CD4+. Las bacterias intracelulares
vadas de linfocitos T, principalmente IFN-γ y, el residen dentro de endosomas de macrófagos, pu-
otro, es la lisis de las células infectadas, por diendo ser procesada como antígeno endógeno y
linfocitos T CD8+ citolíticos. ser presentada en el contexto de moléculas clase
II. Los linfocitos CD4+ pueden responder tam-
3.3.1. Macrófagos activados bién a antígenos de las bacterias, los que son
internalizados y presentados en moléculas clase
La activación de las funciones antibacterianas II, como por ejemplo el ppd de M. tuberculosis.
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Las infecciones por bacterias intracelulares, intrafagosomal de M. tuberculosis, lo que resulta-
incluyendo la tuberculosis, la listeriosis y la ría en la presentación del antígeno restringida por
brucelosis experimentales, se caracterizan por una moléculas MHC clase II. La explicación para la
preponderancia de efectos de linfocitos Th1. Apa- presentación en el contexto de moléculas MHC
rentemente las bacterias intracelulares estimulan clase I sería por drenaje de proteínas secretadas
la producción de IL-12 y de IFN-γ por células de por las bacterias viables al citoplasma a partir del
la respuesta inmune natural. Solamente en la fase fagosoma, o por la presencia de M. tuberculosis
lepromatosa de la lepra ocurren fenómenos Th2, libre en el citoplasma, de acuerdo a lo establecido
los que parecen contribuir a la inmunosupresión. en recientes estudios realizados con microscopía
electrónica. En la tuberculosis, la enfermedad se
b) Linfocitos T CD8+. Además de linfocitos T exacerba en ratones depletados de una de las dos
CD4+ restringidos por MHC clase II, también los poblaciones de linfocitos T y la enfermedad se
linfocitos T CD8+ restringidos por MHC clase I torna fatal (M. tuberculosis) o más grave (M. bovis)
participan en la resistencia adquirida a infeccio- en animales que no expresan moléculas clase I.
nes por bacterias intracelulares. En la lepra y la tuberculosis, los granulomas
Listeria, al ser capaz de dejar el endosoma y están constituidos por linfocitos T CD4+ rodea-
entrar al citoplasma puede ser procesada a través dos por linfocitos T CD8+.
de la vía de presentación de antígeno endógeno,
interactuar con MHC clase I y promover la acti- 3.3.4. Linfocitos T-γδ
vación de linfocitos T CD8+. Deben existir otros
mecanismos de presentación en el contexto de cla- Existen evidencias circunstanciales del pa-
se I, ya que otras bacterias, que no van al citoplas- pel de la LTγδ en la inmunidad a bacterias
ma (M. bovis, S. typhimurium) también producen intracelulares. Este tipo de linfocitos de individuos
respuesta de linfocitos T CD8+, tal vez por sanos o inmunes son muy estimulados por los com-
translocación al citoplasma de algunos péptidos ponentes de las mycobacterias.
bacterianos durante la replicación bacteriana. Han sido identificados muchos linfocitos Tγδ
La importancia de la población de linfocitos en los sitios donde existen lesiones en las cuales
T CD8 + en el control de la brucelosis se ha ocurre una rápida replicación de L. monocytogenes
demostrado en experimentos realizados con y M. bovis, en estadios reactivos de lepra y en lu-
ratones "knock out" en moléculas clase I, en los gares de hipersensibilidad de tipo tardía (HTT)
que observó una aumentada susceptibilidad a la contra lepromina y en los centros necróticos de
brucelosis. Estas células tienen potencialmente dos las lesiones de la tuberculosis y muy pocos en le-
funciones: pueden lisar células infectadas y pueden siones crónicas de la tuberculosis o de lepra
también producir INF-γ. tuberculoide.
3.3.3. Efecto conjunto de linfocitos T CD4+ y 3.3.5. Citoquinas

CD8+
El estudio del papel de varias citoquinas en
Estas dos poblaciones de células efectoras la inmunidad a bacterias intracelulares experimen-
actúan complementariamente. En la listeriosis, los tó un enorme impulso con el uso de citoquinas
linfocitos T CD4+ producen IFN-γ que activa los recombinantes, de anticuerpos monoclonales para
macrófagos para destruir las bacterias fagocitadas. su neutralización y de ratones “knock-out” para
Sin embargo, L. monocytogenes escapa al citoplas- establecer su expresión génica.
ma, protegiéndose de los productos del metabo- Por ejemplo, el tratamiento con anticuerpos
lismo del oxígeno que actúan en los fagolisosomas. anti-IFN-γ o anti-TNF-α produce un agravamien-
Los linfocitos CD8+, entonces, lisarán esta célula to en la listeriosis haciéndola fatal así como tam-
que contiene bacterias en su citoplasma. bién con anti-receptor de IL-1. Por otro lado, la ad-
En la tuberculosis existe consenso que los ministración de IFN-γ, TNF-α, IL-1 o IL-6
linfocitos T CD8+ son cruciales para la protec- recombinantes, aumenta la resistencia a la listeriosis.
ción, ya que animales carentes de beta-2 El tratamiento con anti-IFN-γ o anti-TNF-α em-
microglobina o de T CD8+ mueren de tuberculo- peora un poco la tuberculosis y, en cambio, el trata-
sis experimental. Este importante papel protector miento con anti-IL-4 tiende a mejorarla. Ratones
está en aparente conflicto con el hábitat sin receptores para IFN-γ son mucho más suscepti-
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bles a la infección por Listeria que sus controles. 4. ANÁLISIS COMPARATIVO DEL DESA-
En infecciones experimentales por B. abortus se RROLLO DE INMUNIDAD EN INFEC-
ha observado que IL-12 se produce in vivo sólo CIONES POR BACTERIAS EXTRACE-
durante la infección con bacterias vivas, también LULARES E INTRACELULARES
se ha observado que ratones "knock-out" en recep-
tor para TNF son severamente deficientes en la Tanto las bacterias extracelulares como las
producción de IL-12, la cual regula positivamen- intracelulares infectan, transitoriamente, las células
te la producción de INF-γ de linfocitos T. epiteliales como parte de sus mecanismos invasivos.
La cantidad de información acumulada en los Los mediadores de la respuesta inmune a bac-
últimos años hace imposible enumerar, en este ca- terias intracelulares son los linfocitos T que no
pítulo, los efectos producidos por la gran cantidad interactúan directamente con ellas pero sí con la
de citoquinas existentes (ver capítulo 11). Sin célula infectada del hospedero. Los principales
embargo, es indiscutible el importante papel del mediadores de la respuesta inmune contra las bac-
IFN-γ en la defensa contra infecciones causadas terias extracelulares son los anticuerpos.
por bacterias intracelulares, así como el de otras Las bacterias intracelulares son de baja o de
citoquinas que favorecen la respuesta Th1. En ninguna toxicidad, siendo la patología la resultante
general, el papel de las citoquinas Th2 es actuar de las reacciones inmunes. Las bacterias
ante el agravamiento de la enfermedad. Sin em- extracelulares producen varias toxinas responsa-
bargo, en algunas situaciones, es necesaria la pre- bles directamente de la lesión tisular.
sencia de IL-10 para controlar una respuesta in- Las bacterias intracelulares coexisten con su
mune excesiva. hábitat intracelular por mucho tiempo, dando como
resultado períodos de incubación prolongados y
3.3.6. Granulomas enfermedad crónica. Las bacterias extracelulares
causan enfermedad aguda que desaparece cuando
El encuentro entre las bacterias intracelulares se establece la respuesta inmune.
y los mecanismos de defensa del hospedero es un Las reacciones tisulares contra bacterias
evento local, que se verifica en la lesión intracelulares son granulomatosas y tanto la res-
granulomatosa, la cual constituye el núcleo de la puesta inmune protectora como la patología se
protección antibacteriana. centran en esta característica. La ruptura del
La ausencia de desarrollo de un granuloma o granuloma promueve la diseminación bacteriana
la destrucción de un granuloma organizado, lleva y nuevas lesiones en otras zonas. Las reacciones
a la exacerbación de la enfermedad, pudiendo ser, tisulares contra las bacterias extracelulares son
entonces, fatal. Por otro lado, los granulomas purulentas y llevan a la formación de abscesos o
expansivos impiden las funciones fisiológicas de reacciones sistémicas.
los tejidos, lo que es crucial para la patogénesis. Las infecciones por bacterias intracelulares
De hecho, los granulomas tienen efecto protector se acompañan de reacciones de hipersensibilidad
contra M. tuberculosis y M. bovis pero no contra de tipo tardío que pueden expresarse después de
L. monocytogenes, donde las lesiones excesivas la administración local de antígeno soluble como
son perjudiciales. una reacción tisular tardía mediada por linfocitos
Los mecanismos por los cuales los T y llevada a cabo por macrófagos.
granulomas restringen el crecimiento bacteriano
y confinan la infección, confiriendo protección,
se deben a diversos factores como macrófagos 5. ESTRATEGIAS DE INTERVENCIÓN IN-
activados que inhiben el crecimiento bacteriano, MUNE EN RELACIÓN A BACTERIAS
la encapsulación promovida por la fibrosis aísla INTRACELULARES
las bacterias y la necrosis reduce la oferta de
nutrientes y de oxígeno. Un conocimiento detallado acerca de la bio-
Existen varias citoquinas involucradas en la logía de las infecciones por bacterias intracelulares
formación y/o mantención de los granulomas, en- y de la respuesta inmune inducida por ellas, nos
tre ellas, TNF-α, IFN-γ e IL-4. permite entender no sólo la compleja relación en-
tre patógeno y el huésped, sino que también desa-
rrollar medidas preventivas y estrategias de inter-
vención terapéuticas.
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Sin título-2 540 5/26/06, 10:26 AM

Aunque en general, la vacunación es la me- • Que incluya antígenos expresados por la bac-
dida profiláctica más exitosa contra las enferme- teria en el huésped y por varias otras cepas
dades infecciosas, la mayoría de las vacunas (ver similares prevalentes.
capítulo 36) en uso están dirigidas contra • Inmunogenicidad para todos los haplotipos
microorganismos extracelulares. El éxito de estas del Complejo Principal de Histocompati-
vacunas está basado principalmente en la forma- bilidad (HLA en humanos) dentro de la po-
ción de anticuerpos que actúan impidiendo la in- blación.
vasión del patógeno o neutralizando toxinas o fac-
tores de virulencia.
5.2.1. Identificación de antígenos protectores
5.1. Tipos de vacunas para bacterias
intracelulares en uso Es importante primero definir los antígenos
que son protectores. Una vacuna contra una bac-
Actualmente existen sólo dos vacunas con- teria intracelular debería contener aquellos
tra bacterias intracelulares y en ambos casos con antígenos capaces de inducir la combinación apro-
limitado éxito. El BCG, es una cepa atenuada de- piada de células T CD4+ y CD8+ que produzcan
rivada de la cepa virulenta M. bovis. Desde su pri- IFN-γ para, subsecuentemente, activar macrófagos
mer uso en 1921, ha sido administrado con pocos para eliminar la bacteria.
efectos colaterales pero, su eficacia protectora
contra la tuberculosis pulmonar es muy variable 5.2.2. Cepas vaccinales atenuadas y re-
(0 a 80%). La otra vacuna contra bacterias combinantes
intracelulares corresponde a la cepa atenuada de
Salmonella typhi Ty21. Por su baja protección y El uso de bacterias vivas atenuadas como va-
poca duración, se administra sólo a viajeros que cunas tiene la ventaja de que los microorganismos
visitan áreas donde existe alto riesgo de contraer se replican en el huésped, al menos por un tiem-
fiebre tifoidea. po, con lo cual generalmente inducen inmunidad
específica duradera. Además, por su gran
5.2. Desarrollo de nuevas vacunas homología con el patógeno virulento pueden in-
ducir una respuesta inmune similar. Tal es el caso
Existe la necesidad de disponer de formas de para las vacunas en humanos contra la tuberculo-
vacunas más efectivas, baratas y fáciles de apli- sis (M. bovis BCG) y fiebre tifoídea (S. typhi Ty21)
car, no sólo contra TBC y fiebre tifoidea, sino que y para las vacunas utilizadas en el ganado (B.
también contra otras bacterias intracelulares de abortus RB51 B. melitensis Rev-1).
importancia en salud pública. La identificación de factores de virulencia ha
El desarrollo racional de una nueva genera- permitido la generación de cepas mutantes por
ción de vacunas debe considerar el carácter parti- deleción genética creando cepas atenuadas que no
cular que tiene la respuesta inmune efectiva con- producen daño en el hospedero y retienen su po-
tra el respectivo patógeno. Los requerimientos para tencial inmunogénico. La cepa de S. typhimurium
tal vacuna incluyen: Aro A- fue creada por mutagénesis, es una mutante
auxotrófica que tiene un defecto en la biosíntesis
• Inducción de la población de células T ade- aromática. Puede conferir protección en ratones.
cuada y secreción rápida de las citoquinas Otra aproximación, es el uso de bacterias vi-
apropiadas que medien inmunidad protecto- vas atenuadas como transportadoras de antígenos
ra y al mismo tiempo dejen memoria recombinantes, los cuales pueden ser expresados
inmunológica. solos o junto con las citoquinas que son importan-
• Activación de los mecanismos efectores más tes en el control de los microorganismos
apropiados que impidan que la infección se intracelulares (IL-12, GM-CSF e IFN-γ).
establezca o permitan eliminar el agente in-
feccioso. 5.2.3. Vacunas de subunidades y empleo de
• Especificidad frente al patógeno responsable adyuvantes
para evitar el riesgo de una enfermedad
autoimune a través de antígenos de reacción El uso de proteínas nativas o recombinantes
cruzada. como antígenos vacunales tiene ventajas y des-
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ventajas: Son vacunas altamente específicas y tie- El plásmido es fabricado sin su origen de
nen bajo riesgo de efectos colaterales. Sin embar- replicación funcional en células eucariontes, por
go, cuando se administran solas, su eficacia lo tanto no se replica ni se integra al DNA
inmunoestimulatoria y protectora es generalmen- cromosomal de la célula huésped transfectada. La
te débil y de corta vida. La administración de integración de una secuencia líder en el plásmido
subunidades bacterianas como vacunas depende, permite la exportación del antígeno por la célula.
fuertemente, de adyuvantes inmunoestimulatorios El gen codificado por el plásmido se expresa has-
que simultáneamente generen el medio requerido ta que éste es expulsado a través de la división
para la estimulación de células T protectoras y celular. El plásmido puede ser administrado en la
además un reservorio para la liberación lenta de piel dentro de partículas, o a través de transporta-
antígeno en el lugar de la administración para fa- dores bacterianos. Posteriormente el antígeno pue-
cilitar protección duradera. El único adyuvante de ser fagocitado por monocitos y células
aprobado para uso en humanos es el aluminio, que dendríticas las cuales estimularán células T
favorece respuestas de tipo Th2. El uso de "helper". La vacunación por ácidos nucleicos in-
adyuvantes capaces de estimular una respuesta duce tanto la inmunidad humoral como la inmu-
Th1, que es lo que se requiere para vacunar con- nidad mediada por células. Se observa una reac-
tra bacterias intracelulares, presenta dificultades ción inflamatoria inducida por secuencias DNA
por la severa inflamación que acompaña su admi- bacteriano tales como los motivos CpG, que pro-
nistración. Algunos glicolípidos y oligonu- mueve la infiltración de monocitos, estimulación
cleótidos, por sus propiedades proinflamatorias, de células B para producir anticuerpos específi-
pueden ser considerados adyuvantes naturales para cos contra el antígeno soluble, estimulación de
microorganismos intracelulares células T CD8+ para diferenciarse a linfocitos T
Las vacunas basadas en péptidos, escogidos citotóxicos y también de células T CD4+ para di-
entre epítopes protectores pueden disminuir el ries- ferenciarse a células Th1 y secretar citoquinas
go de reactividad cruzada por su especificidad úni- como IL-2 e INF-γ. En distinta medida todas es-
ca pero, tienen la desventaja de ser menos tas vías de activación son importantes en la pro-
inmunogénicos. Debido a la existencia de distintos tección contra microorganismos de vida
haplotipos de HLA, una vacuna basada en péptidos intracelular, además la inclusión de genes codifi-
antigénicos tendría que cubrir la mayoría de las cando citoquinas y moléculas coestimulatorias en
posibilidades del repertorio de epítopes de células el mismo plásmido puede promover una respues-
T presentes en una población susceptible. ta inmune más apropiada. Este tipo de vacuna es
seguro y fácil de producir, mantener y adminis-
5.2.4. Vacunas DNA trar. La facilidad de construir y manipular los in-
sertos de los genes, el bajo costo, la estabilidad
En los últimos años, han aparecido métodos de del DNA, representan características deseables
vacunación con ácidos nucleicos (ver capítulo 36), para una vacuna. Además la inmunización con
los cuales constituyen un nuevo medio de expresión ácidos nucleicos presenta como ventaja la capaci-
in situ de un antígeno seleccionado para la genera- dad de inducir mayores respuestas inmunológicas
ción de una respuesta inmune humoral y celular que, celulares que las vacunas de cepas vivas atenua-
eventualmente, puede inducir una respuesta inmune das, asociado a inmunidad a largo plazo.
protectora. La inmunización con DNA ha sido usa- La inmunización con inyección directa de
da para virus, bacterias y parásitos. plasmidios DNA codificando genes para antígenos
La vacunación con un plásmido bacteriano proteicos específicos, se ha evaluado experimen-
que tiene un gen que codifica para un antígeno talmente en varios modelos de infección, tales
seleccionado, se basa en la expresión del gen bajo como virus de influenza, virus de la
control de un promotor viral fuerte como por ejem- inmunodeficiecia adquirida (HIV), Mycoplasma
plo, el promotor de citomegalovirus (CMV), lo pulmoniae, L. mayor, B. burgdorferi, así como con
cual permite la expresión de genes codificados por varios antígenos de M. tuberculosis.
las células eucariontes transfectadas. El plásmido La vacunación con DNA representa un avan-
se replica en una bacteria (E. coli), se purifica y ce promisorio e importante en el control de las
luego se inyecta vía intramuscular en el huésped. infecciones por bacterias intracelulares.
Las células del huésped son capaces de sintetizar,
procesar y presentar el antígeno a los linfocitos.
542
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LECTURAS SUGERIDAS
Schaible, E., Collins, H. y Kaufmann, S., “Con-

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Immune System”, Adv. Immunol. 71:267-377,
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Splitter, G.; Oliveira, S.; Carey, M.; Miller, C.; Ko,

J. and Covert, J., “T lymphocyte mediated protec-
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Felgner, P.; Dwarki, V.; Gromkowski, S.; Deck,
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12 is involved in resistance to Brucella abortus
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Sin título-2 543 5/26/06, 10:26 AM

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Capítulo 33
INMUNIDAD FRENTE A HONGOS
Eva Burger, Luiz Zaror C., y Heriberto Fernández J.
1. Introducción 2.6. Macrófagos

1.1. Consideraciones históricas 3. Inmunidad humoral a hongos
1.2. Características generales de algu- 3.1. Papel de la inmunidad humoral
nos hongos oportunistas 3.2. Mecanismos protectores de la in-
1.3. Características generales de algu- munidad humoral
nos hongos patogénicos 4. Inmunidad celular a hongos
1.4. Características generales de los 4.1. Macrófagos
dermatofitos 4.2. Linfocitos T
1.5. Conceptos sobre inmunidad a 4.3. Citoquinas
hongos patogénicos 4.4. Granulomas
2. Inmunidad natural 5. Mecanismos de inmunidad protec-
2.1. Factores hormonales tora
2.2. Concentración de hierro 5.1. Mecanismo principal
2.3. Sistema del complemento 5.2. Otros mecanismos
2.4. Células “natural killer” (NK)
2.5. Leucocitos polimorfonucleares
neutrófilos (PMN)
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RESUMEN
En este capítulo se presentan algunas características de los hongos oportunistas, de los

hongos patógenos primarios agentes de micosis sistémicas y de los dermatofitos. Se introduce y
analiza el concepto de que no existe un mecanismo protector específico capaz de conferir inmu-
nidad protectora contra las micosis, haciendo énfasis en la participación y acción conjunta de
varios mecanismos inmunológicos, los que también son efectivos en diferentes infecciones de-
terminadas por otros agentes infecciosos.
También se describen los diferentes componentes de la respuesta inmune innata o natural,
tales como factores inespecíficos (hormonios, concentración de hierro), factores solubles (com-
ponentes del sistema del complemento) y células efectoras (células killer (NK), leucocitos
polimorfonucleares neutrófilos (PMN) y macrófagos alveolares y residentes).
Igualmente, se discute la participación de la respuesta inmune adquirida. Se analiza el pa-
pel protector o no protector de la inmunidad humoral como también los mecanismos efectores
activos, tales como la opsonización de hongos por anticuerpos, citotoxicidad dependiente de
anticuerpos (ADCC) y la opsonización y/o lisis de hongos por complemento. Se estudia la parti-
cipación preponderante de la inmunidad celular en la protección a infecciones fúngicas y el rol
de las poblaciones celulares responsables de ella, como los macrófagos y sus productos
antifúngicos, los linfocitos T CD4+ y T CD8+ y las subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y sus
productos de secreción (citoquinas). Finalmente, se discute también el papel de los granulomas
en la infección por hongos.
1. INTRODUCCIÓN tes con deficiencias en la respuesta inmune y con

tiempos de sobrevida más prolongados. Estos in-
1.1. Consideraciones históricas dividuos constituyen una población extremada-
mente susceptible a las infecciones fúngicas.
En la mayoría de los textos de Inmunología, En la historia natural de los hongos y en su
cuando se trata el tema “Inmunidad a Infeccio- relación con el hombre y los animales, su estado
nes”, el asunto “Inmunidad frente a Hongos” o de parasitismo es un accidente o una necesidad
está ausente o es de escasa extensión. Esto se debe poco apremiante y, por este motivo, hasta hace
a que, hasta hace poco, existía considerablemente poco tiempo, eran considerados por muchos in-
menos información sobre la respuesta inmune vestigadores como organismos con poca capaci-
frente a hongos que frente a las bacterias, virus e, dad invasiva y poca adaptación para el parasitis-
incluso, protozoos y helmintos. Esto se debía a mo. A la luz de lo expuesto precedentemente, es-
que las infecciones por hongos representaban un tos conceptos deben ser necesariamente revisados.
flagelo de mucho menor importancia para la hu-
manidad que las infecciones de origen bacteriano. 1.2. Características generales de algunos hon-
Actualmente, con el infortunado advenimiento del gos oportunistas
Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida
(SIDA), este cuadro ha sido completamente mo- Los hongos oportunistas expresan capacida-
dificado. des patogénicas sólo en hospederos inmunocom-
Con la introducción de tratamientos prometidos. Algunos ejemplos de estos hongos se
inmunosupresivos en oncología y en trasplantes, muestra en la tabla 33-1.
el perfil inmunológico de la humanidad viene sien-
do drásticamente alterado, propiciando la apari-
ción de un contingente cada vez mayor de pacien-
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Tabla 33-1. Hongos oportunistas
Hongo Características
Candida albicans Forma parte de la flora normal (organismo endógeno).

Infección mucocutánea por pérdida de la resistencia; en los
tejidos infectados aparece formando pseudohifas.
Cryptococcus neoformans Hongo capsulado, el tamaño de la cápsula varía de acuerdo

con la virulencia de cada cepa.
Diseminación hematógena al cerebro y a las meninges; en
casos graves compromete el sistema nervioso central.
Grupo de riesgo: portadores de neoplasias malignas, pacien-
tes con SIDA y trasplantados renales.
1.3. Características generales de algunos hon- parasitismo. En la tabla 33-2, se muestra algunos
gos patogénicos ejemplos.
Los hongos patogénicos, hongos considera- 1.4. Características generales de los derma-
dos patógenos primarios, o sea, capaces de indu- tofitos
cir infección y enfermedad en hospederos
inmunocompetentes. Son todos hongos dimór- En la tabla 33-3 se muestra algunos ejem-
ficos, lo que ha inducido a algunos autores a con- plos de dermatofitos
siderar esta característica como una adaptación al
Tabla 33-2. Hongos patogénicos
Coccidioides immitis Presente en suelo de regiones áridas. La infección se produce por

inhalación de esporas (artroconidias).
En los tejidos ocurre crecimiento (esférulas) y fragmentación
(endosporo).
La enfermedad varía desde asintomática a diseminada (articulacio-
nes, huesos, meninges y tracto génitourinario).
Histoplasma capsulatum Infección por inhalación de conidias.

Infección subclínica o leve; a veces produce epidemias.
Enfermedad pulmonar progresiva; diseminación hematógena fatal
en individuos inmunosuprimidos.
Parásito intracelular facultativo de macrófagos.
Blastomyces dermatitidis La infección se inicia en los pulmones.
Forma progresiva: diseminación hematógena hacia el tracto
génitourinario, huesos.
Paracoccidioides brasiliensis Enfermedad granulomatosa progresiva crónica.

Infección primaria del pulmón, diseminación hacia las mucosas oral,
nasal, tracto gastrointestinal, órganos viscerales, linfonodos.
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Tabla 33-3. Dermatofitos
Epidermophyton Representan las micosis superficiales más frecuentes en Chile.

Microsporun Atacan las áreas queratinizadas (piel, pelos y uñas).
Trichophyton No forman parte de la biota de estas estructuras.
Adaptados para utilizar la queratina como nutriente.
El grado de inflamación producido depende del tipo de dermatofito (geofílico,
zoofílico o antropofílico) y también del estado inmunológico del paciente.
1.5. Conceptos sobre inmunidad a hongos bres que en mujeres. La transición de la fase
patogénicos miceliar a la fase levaduriforme es inhibida por el
17-beta estradiol, a través de la interacción con
El reino Fungi comprende una gran variedad un receptor presente en el hongo.
de especies que causan un amplio espectro de en-
fermedades de diferentes tipos. Los hongos Candida albicans. La candidiasis vaginal aumen-
patogénicos no causan un número elevado de ta en mujeres hacia el final de la gestación y al
muertes, considerando que muchos de ellos son final de la fase lútea del ciclo menstrual. Los
controlados eficientemente mientras el sistema estrógenos y los receptores de esta hormona
inmune mantenga su integridad. La producción de influencian la conversión levadura/hifa. Al final
enfermedad, y particularmente de enfermedad gra- del ciclo menstrual, cuando existen altos niveles
ve, ocurre en determinadas circunstancias, las que de progesterona y bajos niveles de estradiol, se
serán descritas a continuación. produce una disminución de la proliferación de
El sistema inmune, como un todo, es necesa- linfocitos T frente a antígenos de C. albicans, lo
rio para dar combate efectivo a las infecciones que estimula el crecimiento de esta levadura.
micóticas. La inmunidad protectora frente a in-
fecciones producidas por hongos exige la partici- Dermatofitos. Los dermatofitos presentan una
pación eficiente de diversos mecanismos, los que distribución por edad, observándose Microsporun
incluyen diferentes células y moléculas. principalmente en niños. En cambio, los
A continuación se describen aspectos de la Trichophyton se observan preferentemente en
inmunidad natural o innata e inmunidad específi- adultos, lo que tiene que ver con la presencia de
ca o adquirida (humoral y celular) asociada a in- distintos ácidos grasos en la infancia y la puber-
fecciones micóticas. tad, los que presentan diferentes espectros de ac-
ción sobre estos hongos. En las inmunodefi-
ciencias como el SIDA, hay un notorio aumento
2. INMUNIDAD NATURAL de las dermatofitosis. En cambio, en la diabetes,
el aumento de las dermatofitosis es levemente
2.1. Factores hormonales mayor, sin que éste sea estadísticamente signifi-
cativo .
Coccidioides immitis. Existe una mayor predis-
posición para la coccidioidomicosis durante el em- 2.2. Concentración de hierro
barazo. La maduración de la fase tisular de C.
immitis (esférulas/endosporos) se ve acelerada por Histoplasma capsulatum y Paracoccidioides
efecto de esteroides, como por ejemplo del 17- brasiliensis necesitan de hierro para su crecimien-
beta estradiol presente en el suero durante el em- to. En el organismo, el hierro está asociado a
barazo. transferrina (proteínas transportadora) y ferritina
(proteína de almacenamiento). Los hongos tienen,
Paracoccidioides brasiliensis. La paracoccidioi- también, capacidad para secuestrar hierro para su
domicosis es 20/90 veces más frecuente en hom- crecimiento. Por tanto, existe una competencia
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entre el hospedero y el hongo por este elemento, cientes con paracoccidioidomicosis tienen un
especialmente en su forma libre. Así, el aumento mayor número de células NK que los individuos
de hierro sérico aumenta la susceptibilidad las in- normales pero, éstas, son de menor actividad.
fecciones fúngicas.
En los dermatofitos, la transferrina no satu- 2.5. Leucocitos polimorfonucleares neutrófilos
rada puede prevenir el desarrollo de éstos en las (PMN)
capas profundas de la piel, por competencia por
el hierro. Los PMN destruyen eficientemente los hon-
gos siendo, incluso, más eficaces que otras célu-
2.3. Sistema del complemento las de la inmunidad natural pero, como tienen corta
vida y las infecciones fúngicas son crónicas, su
El sistema del complemento puede ser activado efecto es limitado. Así, en la fase inicial de las
por la vía clásica y alterna. infecciones fúngicas los pmn diminuyen la carga
infectante. Por otro lado, el papel de los pmn y su
Activación por la vía alterna. Esta vía es activada influencia en el tipo y la magnitud de la respuesta
por las paredes de P. brasiliensis, B. dermatitidis, inmune adquirida debe ser estudiado con mayor
C. albicans, F. pedrosoi, C. immitis, y H. capsulatun profundidad.
y por la cápsula de C. neoformans. Como resulta-
do, se genera C3b, que opsoniza los hongos y favo- PMN frente a hongos oportunistas. Los PMN son
rece su fagocitosis. También aparecen diversos pro- esenciales en la resistencia a la aspergilosis y a la
ductos quimiotácticos que reclutan y activan candidiasis sistémica. De hecho, la susceptibilidad
leucocitos y, finalmente, aparece el complejo de a la Candida sp. y a Aspergillus sp. aumenta en ca-
ataque a membranas (MAC) con actividad lítica sos de neutropenia grave, enfermedad granu-
sobre los hongos. En el caso de los dermatofitos, al lomatosa crónica en la cual existe una deficiencia
gatillar el sistema del complemento, se produce la de anión superóxido, la que lleva a una alteración
atracción quimiotáctica de los neutrófilos. en los niveles de mieloperoxidasa. Estas células son
competentes para lisar extracelularmente hifas gran-
Activación por la vía clásica. Los hongos des de C. albicans y de A. fumigatus y tienen una
patogénicos son inmunogénicos e inducen la sínte- significativa presencia en las fases iniciales de la
sis de anticuerpos específicos, favoreciendo la ac- candidiasis y de la criptococosis.
tivación también por esta vía. Aún sin la participa-
ción de anticuerpos, esta vía puede ser activada PMN frente a hongos patogénicos. Los efectos
pues, en la composición de su pared, muchos hon- antifúngicos de los PMN dependen de la especie
gos presentan manosa, la cual se une a un receptor de hongo patogénico. En la tabla 33-4 se mencio-
específico semejante al primer componente de la na algunos casos específicos.
vía clásica (C1q).
2.6. Macrófagos
2.4. Células “natural killer” (NK)
Macrófagos alveolares. Estas células fagocitan
Mecanismos. El mecanismo de acción de las partículas infectantes de H. capsulatun, C. immitis,
células NK se puede expresar tanto por un efecto C. neoformans, A. funigatus, C. albicans y B.
fungicida directo o un efecto indirecto, a través dermatitidis. Fagocitan y matan hongos oportu-
de la producción de citoquinas, principalmente nistas y fagocitan, pero no matan, hongos
IFN-gama pero, también, de TNF-α y de GM-CSF. patogénicos primarios.
Efectos de las células NK sobre algunos
hongos. Los efectos antifúngicos de las células Macrófagos residentes. Cuando no son estimu-
NK dependen de la especie de hongo de que se lados por citoquinas presentes durante la respues-
trate. Así, estas células presentan actividad anti ta inmune adquirida, permiten la proliferación de
H. capsulatun y juegan un papel en su “clearence”. H. capsulatun, P. brasiliensis y C. immitis.
También ha sido verificado que las células NK Producen óxido nitroso que inhibe el creci-
inhiben C. immitis y C. albicans y son fungistáticas miento de hongos patógenos fagocitados y serían
para C. neoformans y P. brasiliensis. activos contra hongos superficiales, como los
En otros estudios se ha observado que los pa- dermatofitos.
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Tabla 33-4. PMN y hongos patogénicos
Hongo Papel de los PMN

C. immitis Lisan alrededor del 20% de las artroconidias fagocitadas, digieren la pared
de esférulas y no lisan endosporos.
H. capsulatun Son poco eficaces en humanos y tienen importancia relativa en la respuesta

primaria de animales.
B. dermatitidis Pueden lisar células levaduriformes cuando son estimulados por IFN-γ.
P. brasiliensis En pacientes, su capacidad fagocítica es normal pero su efecto fungicida es
deficiente.
In vitro son fungistáticos y cuando son estimulados por IFN-γ se tornan
fungicidas.
Dermatofitos Los neutrófilos y los monocitos/macrófagos aparecen como un importante

mecanismo de defensa contra los dermatofitos a través de procesos
microbicidas: oxidantes microbicidas (superóxidos, agua oxigenada, ácido
hipocloroso) y monocloramina.
Por muerte de los neutrófilos se producen substancias microbicidas no
oxidativas: catepsinas, defensinas, lactoferrina, lisozima, azuricidina, pro-
teínas microbicidas que incrementan la permeabilidad. Los PMN tienen grá-
nulos de Ca y Zn ligados a calprotectina.
Otras Células. Las células de la capa basal de la Papel no protector. Altos títulos de anticuerpos
piel producen el crecimiento continuo de la epi- específicos se presentan en las formas clínicas
dermis hacia su derivación en queratinocitos. És- graves de coccidioidomicosis y paracoccidioi-
tos, representan una barrera estructural contra domicosis. La activación policlonal de linfocitos
antígenos externos y son importantes por mediar B ocurre en formas clínicas graves de
la respuesta inmune cutánea, secretando factores coccidioidomicosis y paracoccidioidomicosis. En
solubles capaces de estimular o disminuir la res- estas micosis, una respuesta inmune humoral exa-
puesta inmune. Producen marcadores de superfi- cerbada representa un mal pronóstico.
cie, moléculas de adhesión, citoquinas En las dermatofitosis las precipitinas son produ-
quimiotácticas que serían responsables de la in- cidas infrecuentemente encontrándose bajos nive-
flamación en las lesiones cutáneas, eicosanoides les de anticuerpos contra T. rubrum, los que po-
(PGE2), factores de crecimiento e interleuquinas. drían determinar reacciones cruzadas con otros
organismos.
3. INMUNIDAD HUMORAL A HONGOS 3.2. Mecanismos protectores de la inmunidad

humoral
3.1. Papel de la inmunidad humoral
Opsonización de hongos por anticuerpos. El pa-
Papel protector. Las infecciones fúngicas deter- pel de las células fagocíticas que presentan recep-
minan la formación de anticuerpos específicos. tores para la región Fc IgG (FcγR), se ve facilita-
Estos tienen efecto protector, pero su función es do por la opsonización producida por los mismos
auxiliar. Sin embargo, la respuesta inmune humo- anticuerpos. Así, PMN y monocitos humanos lisan
ral es importante en la fase inicial de la infección C. neoformans opsonizados por anticuerpos,
por S. schenkii y para evitar la candidiasis disemi- macrófagos de roedores o monocitos humanos
nada. ingieren C. neoformans encapsulados opsonizados
por anticuerpos y los PMN se adhieren más a H.
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capsulatum opsonizado por anticuerpos que a dimórficos patogénicos. Formas clínicas graves de
aquellos no opsonizados. algunas micosis están asociadas a la anergia de
las respuestas mediadas por linfocitos T. Ciertas
Citotoxicidad dependiente de anticuerpos deficiencias en los linfocitos T, como aquella ob-
(ADCC). Este mecanismo fue descrito contra C. servada en pacientes con SIDA o en ratones
neoformans, promoviendo un efecto fungistático. atímicos, determinan formas infecciosas graves.
De hecho, a través de modelos experimenta-
Opsonización de hongos por complemento. Los les fue posible comprobar un aumento en la gra-
PMN y monocitos humanos lisan C. neoformans, vedad de la infección por H. capsulatun en ani-
H. capsulatun, S. schenkii opsonizados por comple- males atímicos o depletados de linfocitos T, así
mento. Los macrófagos no activados no fagocitan como su incapacidad para eliminar C. neoformans
C. neoformans opsonizado por complemento. y controlar su diseminación al sistema nervioso
central. Sin embargo, no fue posible demostrar
Lisis de hongos por complemento. El complejo aumento de carga fúngica o exacerbación de la
de ataque a las membranas tienen efecto fungicida enfermedad causada por C. albicans.
sobre C. neoformans. Un fenómeno interesante es
que una deficiencia en el componente C5 de la Linfocitos T CD4+
vía efectora del sistema del complemento no im-
plica en aumento de susceptibilidad a varias mi- Todos los hongos patogénicos causan reac-
cosis profundas. ciones de hipersensibilidad de tipo tardío (HTT).
El desarrollo de fuertes reacciones de HTT está
asociado a formas clínicas benignas en pacientes
4. INMUNIDAD CELULAR A HONGOS con paracoccidioidomicosis y coccidioidomicosis.
En modelos experimentales de varias micosis pro-
La inmunidad celular tiene importancia de- fundas se observó un paralelismo entre HTT y la
cisiva en la protección contra micosis profundas cura o una buena evolución de la enfermedad,
y en la candidiasis mucocutánea. Repetidamente muchas veces precediendo al “clearence” de los
ha sido verificado que los hongos patogénicos tie- hongos.
nen un efecto supresor sobre su inducción y/o so- Muchos pacientes con dermatofitosis presen-
bre su expresión. tan HTT a antígenos de dermatofitos y también
una vigorosa transformación de linfocitos como
4.1. Macrófagos respuesta al antígeno pudiendo, éstos, acceder a
la epidermis junto con neutrófilos.
Como ya fue visto, al contrario de los Las respuestas de HTT participan en la lisis
macrófagos residentes, que no lisan hongos de los hongos de menor patogenicidad y del
patogénicos, los macrófagos activados por IFN-γ “clearence” parcial y la contención de hongos de
son competentes fungicidas. Los efectos mayor patogenicidad, incluyendo la formación de
antifúngicos de estos macrófagos dependen tanto granulomas, se muestra en la tabla 33-5.
del hongo (especie, virulencia de la cepa) como A continuación se describe el papel de
de las características del macrófago (tipo, lugar subpoblaciones de células T CD4+ (LTh1 y LTh2)
de origen, especie del hospedero). en la inmunidad células frente a algunos hongos.
Substancias fúngicas relevantes. Los fagocitos C. albicans y C. neoformans. En la respuesta

lisan hongos a través de metabolitos tóxicos depen- inmune que se establece frente a estos hongos
dientes de NO (P. brasiliensis, H. capsulatun, B. existe una asociación entre patrón de curación
dermatitidis, C. neoformans), dependientes de O2 de la infección sistémica y respuesta predomi-
(H. capsulatun, C. immitis, C. albicans) y también nantemente Th1 y entre patrón de no curación y
por medio de proteínas catiónicas (C. immitis). el establecimiento de una respuesta predominan-
temente Th2, constituyendo, así, un perfil clara-
4.2. Linfocitos T mente dicotómico de producción de citoquinas
Th1 y Th2.
Esta población celular es esencial para la re-
sistencia a las infecciones causadas por hongos
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Sin título-2 552 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 33-5. Papel de linfocitos T CD4(+) en la inmunidad celular a algunos hongos
Hongo Papel de los linfocitos T CD4 (+)

C. immitis Son necesarios para la inmunidad protectora en los pulmones, lo que fue
confirmado por experimentos de transferencia de células.
H. capsulatun Su ausencia determina un notorio aumento de la susceptibilidad y muerte

por dosis menor del hongo que las usualmente conocidas.
C. neoformans Son necesarios para el “clearence” de los hongos del pulmón.
P. brasiliensis, B. dermatitidis, C. immitis. En involucradas en la exacerbación de infecciones

las infecciones por estos hongos existe una res- fúngicas, en la anergia de reacciones de HTT y en
puesta Th1 inicial seguida de una respuesta Th2, la desactivación de macrófagos.
lo que se correlaciona con el agravamiento de la TNF-α y GM-CSF estimulan la actividad
enfermedad. El patrón de producción de citoquinas antifúngica de PMN, monocitos y macrófagos.
Th1 y Th2 difiere entre los diferentes hongos, tanto En la tabla 33-7 se muestra la participación
en cuanto a su cinética como a los niveles produ- de algunas citoquinas en la inmunidad celular de
cidos. algunos hongos.
Linfocitos T CD8+. Los LT citotóxicos (LT
CD8+) participan, en conjunto con linfocitos t 4.4. Granulomas
CD4+, en la inmunidad protectora contra varios
hongos patogénicos, como H. capsulatun y C. La formación de granulomas tiene el propó-
neoformans. Los mecanismos por los cuales esta sito de restringir el crecimiento fúngico y confi-
protección se produce pueden ser varios: lisis de nar la infección.
macrófagos infectados (H. capsulatun), efecto Los macrófagos activados inhiben el cre-
fungicida directo (C. neoformans) o secuestro en cimiento fúngico. Cuando esto no es posible,
granulomas (C. neoformans). ocurre la fusión de macrófagos formándose cé-
En la tabla 33-6 se describe la participación lulas gigantes multinucleadas para contener el
de las células T CD8+ en algunas infecciones desarrollo fúngico. La encapsulación promo-
micóticas. vida por la fibrosis también tiene efecto de con-
tención sobre los hongos. Como ocurre
4.3. Citoquinas. Las citoquinas Th1 (IFN-γ, IL- necrosis, se reduce la oferta de nutrientes y de
2) tienen un papel importante en la protección oxígeno necesarios para la proliferación de los
contra infecciones fúngicas, en el desarrollo de hongos.
reacciones de HTT y en la activación de Los principales tipos celulares encontradas
macrófagos. en varias micosis, como las causadas por B.
Las citoquinas Th2 (IL-4, IL-10) están dermatitidis, C. immitis, S. schenkii, H.
Tabla 33-6. Linfocitos T CD8+ y algunos hongos
Hongo Papel de los linfocitos T CD8 (+)
C. immitis Son necesarios para la inmunidad protectora en el pulmón.

H. capsulatun Su ausencia determina un relativo aumento de la susceptibilidad pero no
causa la muerte.
C. neoformans Son necesarios para el “clearence” de estos hongos de los pulmones.
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Tabla 33-7. Citoquinas e infecciones micóticas
Hongo Papel de las citoquinas
C. albicans IFNγ está asociada con el patrón de curación de la infección y, en contrapar-

tida, IL-4 e IL-10 con el desarrollo de enfermedad crónica.
IL-12 presenta efecto protector contra la diseminación del hongo, además
de ser un poderoso inductor de la respuesta Th1 IFN-γ, GM-CSF y TNF-α
son mediadores de la lisis intracelular.
C. immitis TNF-α, IL-1 y IL-6 están involucrados en el síndrome respiratorio agudo y

choque séptico, importantes en la patogénesis.
IFN-γ y IL-12 son mediadores de la lisi intracelular de artroconidias.
IL-12 tienen efecto protector también por inducción de la expresión de
citoquinas Th1.
H. capsulatun IL-12 tienen efecto protector indirecto, por la producción de IFNγ y rele-
vancia en la respuesta inmune primaria.
TNFα en conjunto con IL-12 aumentan la producción de IFNγ es el princi-
pal mediador de la lisis intracelular.
TNFα en conjunto con IFNγ determinan la exacerbación del efecto protec-
tor.
IL-4 modula la inmunidad protectora mediada por IFNγ
C. neoformans TNFα, IL-12, IL-1, IFNγ son producidos al inicio de la infección, con un
importante papel en la inducción de inmunidad celular protectora.
IL-12 presenta efecto protector contra la diseminación.
IFNγ, GM-CSF y TNFα son mediadores de la lisis intracelular.
Dermatofitos El IFNγ está involucrado en gatillar la HTT y es responsable de las mani-

festaciones cutáneas y en la defensa del huésped contra la infección. Es
producido por linfocitos periféricos en la dermatofitosis inflamatoria agu-
da, siendo baja su concentración en las formas crónicas.
Liberan IL-8 por efecto de antígenos de dermatofitos iniciando la inflama-
ción como defensa.
Los niveles de IL-1α inducidos por T. mentagrophytes son más altos que los
producidos por el hongo antropofílico T.
rubrum, lo que se relaciona con una respuesta inflamatoria más severa en el
caso del hongo geofílico.
Las células de Langerhans (2-5% de las células de la epidermis) producen
marcadores de superficie y moléculas de adhesión (LFA-3, ICAM-1, B7) y
citoquinas (IL-1B, IL-6, TNF-α), actúan como procesadoras y presentado-
ras del antígeno para activar los linfocitos T, además de fagocitosis de
antígenos.
capsulatun y C. neoformans, son PMN, 5. MECANISMOS DE INMUNIDAD PRO-

linfocitos, células epiteliales y células gigantes TECTORA
multinucleadas.
Los granulomas se presentan circunscritos en 5.1. Mecanismo principal
la enfermedad controlada y diseminados en las en-
fermedades graves. El principal mecanismo protector que actúa
en las micosis profundas es la producción de
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citoquinas como el IFNγ por linfocitos T, llevan-
do a la activación de macrófagos, con el consi-
guiente aumento de su capacidad fungicida.
5.2. Otros mecanismos
Además de éste, existen otros mecanismos

capaces de conferir inmunidad protectora en in-
fecciones fúngicas. De estos otros es necesario
citar el desarrollo primordial o preferencial de una
fuerte respuesta del tipo Th1, el efecto conjunto
de linfocitos T CD4+ y T CD8+ además del efec-
to de otras poblaciones celulares y del efecto indi-
vidual o sinérgico de varias citoquinas.
LECTURAS SUGERIDAS
Kwon-Chong, K.J. & Bennet, J.E., Medical My-

cology, Lea & Febiger Ed., Philadelphia, 1992.
Journal of Medical and Veterinary Mycology,

Volume 30, Supplement 1, 1992 (Proceeding of
the XI Congress of ISHAM).
Medical Mycology, Volume 36, Supplement 1,

1998 (Proceedings of the XIII Congress of
ISHAM).
Medical Mycology, Volume 38, Supplement 1,

2000 (Proceedings of the XIV Congress of
ISHAM).
Sarosi, G.A & Davies, S.F., Doenças Fúngicas

do pulmão. Revinter Ed., 2001.
555
Sin título-2 555 5/26/06, 10:26 AM

556
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Capítulo 34
RESPUESTA INMUNE FRENTE A VIRUS
José M. Ojeda F. y Jorge A. Fernández V.
1. Introducción 3.3. Evasión de la respuesta inmune

2. Infección viral por virus
2.1. Interacción virus-huésped 3.3.1. Persistencia intracelular
3. Respuesta inmune en infecciones 3.3.2. Variación antigénica
virales 3.3.3. Interacción con componentes
3.1. Inmunidad antiviral natural del sistema inmune
3.1.1. Producción de IFN tipo I y 3.3.4. Interferencia con la presen-
otras citoquinas tación antigénica
3.1.2. Células NK 3.3.5. Simulación molecular
3.1.3. Activación del complemen- 3.3.6. Inmunosupresión
to y fagocitosis
3.2. Inmunidad antiviral específica
3.2.1. Inmunidad humoral
3.2.2. Inmunidad celular
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Sin título-2 557 5/26/06, 10:26 AM

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RESUMEN
Aún cuando en su mayoría las infecciones virales son de tipo subclínico o asintomáticas, en
general inducen respuesta inmune.
En este capítulo se revisa, brevemente, cómo ocurren las infecciones virales, indicando el
tipo de interacciones ligando-receptor que se requieren para que estos parásitos intracelulares
infecten las células blanco.
La mayor parte del capítulo se refiere a la respuesta inmune que se puede generar en las
infecciones virales. En lo que se refiere a la inmunidad antiviral natural o innata, participan el
interferón (IFN) tipo I, células NK y el sistema del complemento. Respecto a la inmunidad antiviral
específica o adquirida, se describe la participación de los anticuerpos (inmunidad humoral) y de
linfocitos T citotóxicos (inmunidad celular).
Finalmente, en el capítulo se explican las diferentes estrategias que utilizan los virus para
evadir la respuesta inmune: persistencia intracelular, variación antigénica, interacción con com-
ponentes del sistema inmune, interferencia con la presentación antigénica, simulación molecular
e inmunosupresión.
1. INTRODUCCIÓN sus enfermedades comprende una secuencia de

interacciones entre los virus y sus hospederos.
Los virus, son agentes infecciosos capaces Éstas incluyen la entrada de los virus al organis-
de ejercer diversas interacciones con los hospe- mo, su diseminación y localización en los tejidos
deros que infectan, algunas de las cuales afectan a u órganos blancos, evadiendo al mismo tiempo los
células, tejidos y órganos manifestando su poder mecanismos inmunes del hospedero.
patógeno. En estas interacciones, que conducen La respuesta inmune frente a virus se carac-
al desarrollo de enfermedad, participan factores teriza por:
propios del agente infeccioso, del hospedero y del
ambiente. La patogenia de las enfermedades in- a) Estar mediada por ambos tipos de inmunidad,
fecciosas involucra etapas que son determinadas tanto innata, como adquirida, aunque en una
por la acción de estos factores. Los factores de- primoinfección predominan los mecanismos in-
pendientes del hospedero ejercen su acción a tra- natos, cuya respuesta aislada se caracteriza por ser
vés de mecanismos de inmunidad natural o siempre de igual magnitud frente al mismo estí-
inespecífica y de los mecanismos específicos o de mulo antigénico y carecer de memoria.
inmunidad adquirida (ver capítulo 3). Entre los
mecanismos de inmunidad natural, que tienen im- b) Diferentes tipos de virus estimulan distintas
portancia en el control de las infecciones, están: respuestas y mecanismos efectores inmunes, ya
la fagocitosis, la acción del sistema complemen- que los virus difieren en sus patrones de infec-
to, células NK, las barreras cutáneas y de las su- ción, inmunogenicidad y por tanto su eliminación
perficies epiteliales, el pH gástrico, los movimien- implica diversos sistemas efectores.
tos ciliares, las secreciones en las mucosas, la flo-
ra gastrointestinal normal y otros. Los mecanis- c) La sobrevivencia y patogenicidad de los virus
mos de inmunidad específica (Linfocitos B, T, en el hospedero dependen de su habilidad para
anticuerpos), serían de escasa o nula utilidad si no evadir o resistir los mecanismos inmunes. Los vi-
contaran con los mecanismos de inmunidad natu- rus en su evolución han desarrollado una varie-
ral. dad de estrategias y eficientes mecanismos para
La evolución de las infecciones virales y de su sobrevivencia, evadiendo la respuesta inmune.
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d) El daño tisular y enfermedades derivadas de plique y exprese, generando nuevas copias de áci-
las infecciones por virus patógenos pueden ser do nucleico y proteínas o antígenos virales.
causadas por la respuesta del hospedero contra La replicación viral produce inhibición de la
el agente infeccioso, más que por la acción direc- síntesis de ácidos nucleicos y proteínas celulares,
ta de él. La inmunidad, al igual que muchos otros lo que conduce a alteraciones celulares que se ma-
mecanismos homeostáticos, es fundamental en la nifiestan de diversas formas denominadas efectos
protección del hospedero ante las agresiones ex- citopáticos y que suelen concluir con la lisis o
ternas, pero también tiene la capacidad de provo- muerte celular. Algunos virus producen infeccio-
carle daño. nes sin generar efectos citopatológicos evidentes,
estableciendo infecciones a nivel celular de ca-
2. INFECCIÓN VIRAL rácter latente o persistente. En algunos casos las
células, así infectadas expresan proteínas o
Los virus pueden infectar a los individuos y antígenos virales que pueden estimular la inmu-
causar enfermedad, si poseen capacidad o poder nidad específica, la que actúa a través de reaccio-
patógeno en dicho huésped. Sin embargo, las in- nes de hipersensibilidad produciendo el daño ce-
fecciones virales son en su mayoría de tipo lular. Este tipo de reacciones suele observarse en
subclínico o asintomáticas, sin generar procesos infecciones por el virus de la Coriomeningitis
patológicos, pero sí una respuesta inmune. linfocitaria en ratones y por virus de la Hepatitis
B en los seres humanos.
2.1. Interacción virus-huésped 3. RESPUESTA INMUNE FRENTE A VIRUS
Los virus son organizaciones macromole- La inmunidad contra los virus opera en dos
culares constituidas por ácido nucleico y proteí- etapas: En la fase inicial de infección, antes de
nas. Sólo algunos virus poseen además una en- que un virus haya entrado en las células (virus
voltura o membrana lipídica con glicoproteínas extracelular) y después de su penetración, cuando
insertas. Las partículas virales poseen capacidad el virus se encuentra en el interior de las células
infectiva y por carecer de maquinaria de biosíntesis infectadas y es inaccesible para los mecanismos
de sus macromoléculas, aprovechan la maquina- de inmunidad humoral (anticuerpos y complemen-
ria metabólica de la célula hospedera, ejerciendo to) y los fagocitos.
el carácter de parásitos estrictamente intracelu- La estimulación misma del sistema inmune
lares. La utilización de los sistemas de biosíntesis en una infección viral puede tener tres consecuen-
celulares le permiten a los virus replicarse en el cias generales:
interior de las células infectadas. Activación de componentes del sistema in-
Los virus animales entran a las células unién- mune no específicos para antígenos virales, lo que
dose a receptores moleculares presentes en la su- puede significar la inducción de un proceso infla-
perficie celular y que corresponden a entidades matorio que favorece la eliminación del virus, pero
que son fisiológicamente activas. Algunos ejem- que también pude causar daño en las células y te-
plos son: (i) Virus de la inmunodeficiencia hu- jidos del huésped. También la activación puede
mana-1 (VIH-1), el cual se une a la molécula CD4 conducir al desarrollo de un estado patológico que
presentes en las células T "helper" humanas, (ii) tienda a persistir en el tiempo, independiente de
Virus Epstein-Barr (VEB), que se une al receptor la presencia del virus.
tipo 2 del complemento en los linfocitos B huma- Activación de componentes del sistema in-
nos, y (iii) Los Rinovirus, agentes causantes del mune que exhiban especificidad para interactuar
resfrío común, que se unen a la molécula de adhe- con estructuras virales. La interacción de meca-
sión intercelular (ICAM-1), expresada en el epi- nismos efectores específicos del sistema inmune
telio de la vía áerea. con antígenos virales promueve la eliminación
Después del proceso de unión a los recepto- progresiva de virus.
res los virus son internalizados a la célula por Modificaciones en componentes del sistema
fagocitosis (viropexia) o por fusión de las mem- inmune, algunas de ellas irreversibles, que perdu-
branas viral y celular. En el interior de las células ran después de la eliminación del virus, que pue-
infectadas los virus se liberan de su cubierta den conducir a variaciones en el repertorio de re-
proteica, permitiendo que el genoma viral se receptores de células T (TCR) (ver capítulo 7), ge-
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neración de poblaciones celulares de memoria puestas celulares similares.
inmunológica y tolerancia. El IFN producido por las células infectadas
es secretado al exterior, donde se une a receptores
3.1. Inmunidad antiviral natural presentes en la superficie de las células vecinas.
Esta interacción IFN-receptor provoca una casca-
Hay dos mecanismos principales de inmuni- da de eventos moleculares similar a otra
dad antiviral natural: transducción de señales, que culmina con la acti-
(i) producción de Interferón (IFN) tipo I (α y vación de genes e inducción de proteínas
β ) y otras citoquinas, que generan un estado antivirales como son: una proteína quinasa y una
antiviral, y (ii) participación de células NK ("Na- 2',5'-oligoadenilato sintetasa. La proteína quinasa
tural Killer") en la destrucción de las células in- inactiva por fosforilación al factor proteico de ini-
fectadas. El (IFN) I puede aumentar la actividad ciación (eIF-2) necesario para la síntesis de pro-
citolítica de las células NK. Ambos mecanismos teínas virales. La sintetasa genera oligoadenilatos
operan en la fase temprana de las infecciones que activan una endorribonucleasa que degrada
virales, antes de que actúen los mecanismos de los ácidos ribonucleicos virales. El efecto antiviral
inmunidad específica. de estos IFNs es por tanto paracrino, dado que la
Por otra parte, la activación del sistema del célula infectada secreta IFNs para proteger a las
Complemento y la fagocitosis participan en la eli- células vecinas aún no infectadas, produciendo el
minación de virus extracelular presente en los flui- estado antiviral.
dos corporales y constituyen también formas de
inmunidad antiviral natural. 3.1.2. Células NK
3.1.1. Producción de IFN tipo I y otras Las células NK (ver capítulo 19) destruyen
citoquinas una gran variedad de células infectadas por virus.
La actividad lítica de las células NK pueden ser
La infección viral estimula la producción de uno de los principales mecanismos de inmunidad
IFN tipo I y citoquinas en ciertos tipos de células en contra de los virus, tempranamente o durante
(ver capítulo 10). Los interferones son proteínas el curso de la infección, antes de que las respues-
que ejercen sus efectos antivirales a través de di- tas inmunes específicas se hayan desarrollado. Los
versos efectos como: (i) mayor expresión de las IFNs tipo I ejercen un efecto sinérgico aumentan-
moléculas MHC clase I y II, lo que facilita el re- do la capacidad de las células NK para lisar las
conocimiento de los antígenos virales por parte células infectadas. Las células NK destruyen o
del sistema inmune, (ii) activación de las células lisan estas células liberando el contenido de sus
NK y macrófagos con capacidad de destruir las gránulos que consiste en perforinas o proteínas que
células infectadas por los virus. El IFN-β estimu- generan canales en las membranas celulares, pro-
la también a los linfocitos B, (iii) inhibición di- duciendo lisis osmótica y granzimas, que son
recta de la replicación viral. Diversos mecanismos endonucleasas que degradan DNA. También las
contribuyen a producir este efecto. células NK inducen Apoptosis (muerte celular pro-
Los IFN-α corresponden a una familia de 20 gramada) de la célula infectada.
polipéptidos (18 kDa) relacionados estructural-
mente entre sí y codificados por genes separados, 3.1.3. Activación del Complemento y
en cambio el IFN-β es un polipéptido (20 kDa) Fagocitosis
codificado por un solo gen. Las principales célu-
las productoras de IFN-α son los fagocitos El Complemento y la Fagocitosis pueden eli-
mononucleares y en el caso de IFN-β son los minar virus desde sitios extracelulares y desde la
fibroblastos y las células infectadas por virus. La circulación y fluidos corporales. La activación del
señal natural más potente para la síntesis de IFNs complemento, como mecanismo de inmunidad
tipo I es la infección viral. Ambos tipos de IFNs natural, sería a través de la vía alterna. Constante-
son secretados también durante la respuesta in- mente se está formando en el plasma C3b a partir
mune a antígenos, al ser estimulados los fagocitos de C3. Si este C3b se deposita covalentemente
mononucleares por los linfocitos T. Aunque los sobre una membrana biológica (como puede ser
IFNs α y β muestran poca similitud estructural, la de los virus con envoltura), o sobre una superfi-
se unen al mismo receptor celular e inducirían res- cie proteica (virus desnudos), y si es que estas
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superficies, a diferencia de las membranas celula- anticuerpo capaces de activar el sistema comple-
res, no poseen proteínas regulatorias como: H, mento, generando destrucción de la partícula viral
CR1, MCP o CD59 puede producirse, en el caso (virolisis) o promoviendo la fagocitosis.
de los virus envueltos, virolisis por ruptura de su Los anticuerpos que no son opsonizantes ni
envoltura lipídica al formarse MAC, o bien por activan complemento, como IgA, IgE e IgG4 des-
opsonización y fagocitosis por las células del sis- empeñan funciones neutralizantes importantes a
tema fagocítico mononuclear que poseen recep- nivel de inmunidad local, especialmente en infec-
tores para C3b (CR1, CR3 y CR4). ciones del tracto respiratorio e intestinal.
La manipulación de la inmunidad humoral
3.2. Inmunidad antiviral específica ha sido fundamental en el establecimiento de la
vacunas antivirales a virus atenuado o inactivado,
La inmunidad específica contra las infeccio- ya que el éxito de la función protectora de una
nes virales es mediada por una combinación de vacuna está relacionada con la capacidad de indu-
mecanismos celulares y humorales. Ambos me- cir una respuesta inmune de anticuerpos específi-
canismos participan en el control de la infección, cos contra determinados antígenos virales que son
ya sea actuando directamente sobre las partículas determinantes de la infección y poder patógeno.
virales o bien sobre las células infectadas. La inmunidad humoral desempeña su función
protectora, en gran parte por la función
3.2.1. Inmunidad humoral neutralizante de los anticuerpos. Sin embargo es
importante considerar que esta protección es efec-
Durante la infección viral se estimulan los tiva sólo en la fase temprana de la infección, es
linfocitos B, haciendo que éstos proliferen y se decir antes que el virus entre a la célula. Por otro
diferencien en células plasmáticas capaces de sin- lado, es difícil transferir inmunidad antiviral me-
tetizar anticuerpos específicos que reconocen y diante anticuerpos purificados y la capacidad
reaccionan contra diferentes antígenos virales, ya neutralizadora de un anticuerpo in vitro, general-
sea estructurales (que forman parte de la partícula mente muestra poca o ninguna correlación con su
viral) o no estructurales (proteínas virales que se capacidad protectora in vivo. Estas consideracio-
generan durante la infección viral, pero que no nes muestran que los anticuerpos son un compo-
forman parte de la partícula viral). nente importante de la inmunidad antiviral, pero
que no son suficientes para eliminar muchas in-
Anticuerpos neutralizantes. Estos anticuerpos fecciones virales. Estos hechos se evidencian tam-
específicos son importantes por su acción protec- bién en que determinadas deficiencias de la in-
tora, ya que su función es la neutralización de la munidad humoral aumenta la susceptibilidad de
capacidad infectiva. Se unen a las proteínas de determinadas infecciones virales.
infectividad, que son aquellas que permiten la
unión del virus a sus receptores celulares, impi- 3.2.2. Inmunidad celular
diendo así su entrada y replicación.
La respuesta inmune celular específica está
Anticuerpos opsonizantes. Los anticuerpos dada por complejas interacciones entre la célula
subclase IgG1 e IgG3 tienen propiedades infectada y células del sistema inmune. La
opsonizantes, se unen a los antígenos virales au- interacción más importante, referente al control
mentando la fagocitosis de las partículas virales de la infección es la que se establece entre los
por células fagocíticas que poseen receptores Fc. linfocitos T citotóxicos (LTc) y la célula infecta-
Sin embargo, estos anticuerpos pueden en algu- da. En esta interacción se produce un reconoci-
nos casos facilitar la entrada de las partículas miento por parte de ambas células, en la que es
virales a estas células donde ciertos virus inician crucial la expresión de ciertos polipéptidos virales,
procesos infectivos y replicativos, como es el caso que dan la especificidad de la respuesta y la ac-
de la infección de fagocitos mononucleares por ción citotóxica en sí, que es respuesta a este reco-
VIH. nocimiento.
La principal población celular que ejerce esta
Anticuerpos activadores del complemento. acción citotóxica son las células CD8+, las que
Otros anticuerpos son aptos para unirse a las reconocen péptidos o antígenos virales sintetiza-
particulas virales formando complejos antígeno- dos en la célula infectada, en asociación con mo-
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léculas MHC de clase I. Una proporción menor, las de la meninge, expresando péptidos y
pero detectable de linfocitos citotóxicos de huma- antígenos virales, pero sin destruirlas. Además
nos y de ratones, corresponde a linfocitos CD4+ el VCML estimula el desarrollo de LTc específi-
que reconocen péptidos virales en asociación con cos que son los que reconocen las células infec-
moléculas MHC de clase II. Esta acción citotóxica tadas y las destruyen. Los ratones infectados con
de las células CD4+ se ejerce sobre células infec- VCML, pero deficientes en células T, son porta-
tadas que expresan tanto MHC-II, como péptidos dores crónicos del virus, pero no desarrollan
virales. La diferenciación de los LTC de tipo CD8+ meningitis, mientras que sí se desarrolla en los
requiere de citoquinas producidas por células las ratones normales infectados.
células CD4+. La infección del virus de la hepatitis B en
El efecto antiviral de los LTc conduce a la humanos muestra algunas similitudes con la in-
lisis de la célula infectada, la que se debe a diver- fección por VCML en ratones. Las personas
sas acciones como: producción de perforinas, inmunodeficientes que llegan a infectarse no de-
estimulación de enzimas intracelulares que degra- sarrollan la enfermedad, pero pueden ser portado-
dan genomas y proteínas virales, secreción de res del virus y transmitir la infección a personas
citoquinas como IFN, inducción de apoptosis y sanas. Por otra parte, el hígado de pacientes con
otros (ver capítulo 19). hepatitis aguda contiene gran cantidad de células
La importancia de los LTc en el control de T CD8+.
las infecciones virales ha sido demostrada en La respuesta inmune a infecciones virales,
sistemas experimentales. Los ratones pueden puede estar también relacionada a procesos de de-
ser protegidos contra el virus de influenza, a tra- sarrollo de enfermedad, ya que como consecuen-
vés de la transferencia de LTc específicos para cia de infecciones persistentes por algunos virus
el virus y del mismo tipo de MHC del animal. se forman complejos inmunes circulantes de
Sin embargo, una gran proporción de LTc es- antígenos virales con anticuerpos específicos.
pecíficos para virus influenza, no son serotipos Estos complejos antígeno-anticuerpo se depositan
específicos, porque ellos reconocen péptidos de- en los vasos sanguíneos y suelen conducir a pro-
rivados de las proteínas virales como son las cesos inflamatorios de vasculitis y destrucción
proteínas internas de la partícula viral, y que no vascular.
se relacionan antigénicamente con las Algunos virus contienen proteínas
glicoproteínas de la envoltura proteicas antigénicas, cuyas secuencias de aminoácidos po-
(hemaglutinina y neuroaminidasa) que son las seen cierta homología con proteínas celulares.
que determinan el serotipo. Por otra parte, la Algunas de estas proteínas virales, se expresan
inmunidad adquirida activamente en el caso de en la superficie celular de ciertos tejidos. Se ha
infecciones por virus influenza es serotipo es- postulado que debido a esta similitud molecular,
pecífica, lo indica que tanto los anticuerpos la inmunidad antiviral puede conducir a respues-
como los LTc participan en la respuesta inmune tas de daño tisular. La tabla 34-1 muestra algu-
para proteger la célula hospedera, bloqueando nas proteínas virales homólogas a proteínas ce-
la entrada del virus a la célula o inhibiendo la lulares y que poseen funciones biológicas deter-
replicación viral. minantes en las propiedades patogénicas de cier-
tos virus. Algunas de estas proteínas pueden
Respuesta inmune antiviral y daño celular interactuar directamente con componentes del
sistema inmune, como son las proteínas gVC-1
En la mayoría de las infecciones virales agu- y gE de los virus HSV, que se unen a C3b del
das se produce destrucción celular y tisular por complemento y Fc de las inmunoglobulinas res-
acción directa del virus sobre las células (citolisis) pectivamente. Otras de proteínas virales son
como consecuencia de sus efectos citopáticos. homólogas a interleuquinas, como la proteína
La respuesta inmune de los LTc puede ser codificada por el gen K2 del virus HHV-8 que es
el factor más importante en producir daño celu- similar estructural y funcionalmente con IL-6.
lar en los tejidos infectados por virus no También existen proteínas virales que actúan en
citopáticos. El mejor ejemplo son las infeccio- forma similar a proteínas celulares, como es el
nes por virus de la coriomeningitis linfocitaria caso de la proteína VGF de los virus Vaccinia
(VCML), el cual induce inflamación de las que actúa igual que EGF, estimulando el creci-
meninges en ratones. El VCML infecta las célu- miento de células epiteliales.
563
Sin título-2 563 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 34-1. Proteínas virales homólogas a proteínas celulares
Virus Proteína viral Función

Adenovirus E3 Impide translocación de MHC-I
Interfiere con señal de
E1b transducción de TNF
Herpes simplex 1 y 2 (HSV) g C-1 Se une a C3b

gE Se une a Fc de Ig
Citomegalovirus (CMV) UL 18 Se une a ß2 MG
Epstein – Barr (EBV) BHRF – 1 Homólogo a Bcl – 2

BCRF – 1 Homólogo a IL – 10
Herpes Humano – 8 (HHV-8) K2 Homólogo IL-6

ORF – 4 Se une a Complemento
ORF – 16 Homólogo α Bcl 2
ORF – 72 Homólogo α Ciclina D
Vaccinia VGF Homólogo a EGF/TGFα

VCP Se une a C4b
El establecimiento de la secuencia génica de infecciones virales a nivel celular. Si un virus es

varios virus ha permitido establecer y comprobar capaz de expresar funciones inhibitorias para los
la homología de genes y proteínas virales con sus MHC clase I o su presentación antigénica, se hará
contrapartes celulares. Se postula que estos genes indetectable para los linfocitos T y podrá perma-
virales han sido secuestrados o capturados de los necer y replicarse en las células infectadas.
genomas celulares durante los procesos evoluti- Existen diversos mecanismos por los cuales
vos y que han sido parcialmente modificados, con las infecciones virales escapan al control de la
el fin de permitir obtener ventajas selectivas a los respuesta inmune, estableciendo infecciones de ca-
virus para su existencia, replicación y transmi- rácter crónico, ya sea con persistencia de partícu-
sión. las virales infectivas o por estados de latencia y
transformación viral.
3.3. Evasión de la respuesta inmune en las in-
fecciones virales 3.3.1. Persistencia intracelular
Los virus han desarrollado diversos mecanis- La permanencia intracelular de los virus, sin
mos para evadir los mecanismos de defensa expresión de antígenos de reconocimiento y
antiviral del sistema inmune, los que han permiti- reactividad inmunológica, es el mecanismo más
do su supervivencia. Se han identificado varios obvio por el cual ellos pueden escapar de las célu-
genes virales y sus proteínas que modulan la res- las y moléculas de la respuesta inmune, como es
puesta inmune y posiblemente existan muchos el caso de las infecciones de ciertas neuronas por
otros genes y proteínas virales con estas propie- los virus Herpes simplex, donde se encuentran la-
dades. tentes.
Varios virus son capaces de inhibir la pre-
sentación de sus propios antígenos a los linfocitos 3.3.2. Variación antigénica
T citotóxicos. Estos linfocitos CD8+ con activi-
dad citolítica restringida a MHC clase I, constitu- Existen virus capaces de presentar gran va-
yen el principal mecanismo de defensa contra las riación antigénica, especialmente en sus proteí-
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Sin título-2 564 5/26/06, 10:26 AM

nas de infectividad, como es el caso de los virus b) Los virus Herpes simplex, ya sea tipo 1 ó 2,
influenza (Hemaglutinina y Neuroaminidasa). expresan una proteína viral no estructural
Estas variaciones ocurren por mutaciones puntua- ICP-47, en las células infectadas, que se une
les, recombinaciones y reordenamientos genéticos al sitio de unión del péptido del transportador
entre cepas virales diferentes. Como resultado, los asociado con la presentación antigénica TAP
nuevos virus no son susceptibles a la inmunidad e impide que los péptidos virales citosólicos
generada en la población por infecciones previas. se unan al TAP y sean transportados al retícu-
Existen muchos tipos antigénicos de rinovirus lo endoplásmico para unirse al MHC clase I
(más de un centenar) por lo que la inmunidad es- (ver capítulo 9).
pecífica contra un tipo antigénico no protege de la c) La proteína E3 de algunos Adenovirus (19
infección por otro tipo. Ciertos virus RNA como kDa) se une y retiene a los MHC clase I en el
VIH acumulan mutaciones durante su replicación retículo endoplásmico.
por carecer de maquinaria de reparación de sínte- d) La proteína US3 (codificada por un gen loca-
sis de ácidos nucleicos, de aquí que a su alta va- lizado en la secuencia única 3) del
riación genética se asocia la variación antigénica. Citomegalovirus (CMV) humano es capaz de
secuestrar moléculas de MHC clase I en el
3.3.3. Interacción con componentes del sistema retículo endoplásmico y una proteína del
inmune CMV murino retiene MHC clase I en el cis
Golgi.
Ciertos virus como Epstein Barr infectan a e) Las proteínas US2 y US11 del CMV se unen
células del sistema inmune como son los LB. Por a moléculas de MHC clase I en el retículo
otra parte, VIH infecta LT CD4+ y otros virus in- endoplásmico y las llevan o descargan en el
fectan secundariamente a otras células del siste- citosol, donde no pueden unirse a los péptidos
ma inmune incluyendo macrófagos. La infección de presentación y son degradadas.
de las células del sistema inmune por estos virus f) Las proteínas Vpu y Nef del virus de la
provoca un desbalance que conduce a formas de inmunodeficiencia humana también inhiben
evasión de la respuesta inmune antiviral. la expresión de moléculas MHC clase I en
las células infectadas.
3.3.4. Interferencia con la presentación
antigénica La consecuencia del bloqueo de MHC clase
I y su asociación con los péptidos de presentación
Existen ciertos virus que durante la infección en todos estos casos es que las células infectadas
viral expresan proteínas que interfieren con la pre- muestran una reducida expresión de moléculas
sentación antigénica, especialmente la relaciona- estables de MHC clase I en la superficie celular y
da con los MHC, que es fundamental en el recono presentan los péptidos virales para el recono-
nocimiento y destrucción de la célula infectada cimiento y acción citolítica de los linfocitos T
por los LT. CD8+. Sin embargo, es difícil de demostrar que
Varios virus son capaces de inhibir la pre- estos genes virales que codifican para las proteí-
sentación de sus propios antígenos a los linfocitos nas que inhiben la presentación de MHC clase I
T citotóxicos. Estos linfocitos CD8+ con activi- son genes de virulencia o patogenicidad de dichos
dad citolítica restringida a MHC clase I, constitu- virus.
yen el principal mecanismo de defensa contra las Un ejemplo de esta compleja interacción es
infecciones virales a nivel celular. Si un virus es la adaptación del sistema inmune de los mamífe-
capaz de expresar funciones inhibitorias para los ros para reconocer células deficientes en MHC
MHC clase I o su presentación antigénica, se hará clase I, de esta manera los virus tratan de evadir
indetectable para los linfocitos T y podrá perma- la respuesta inmune de los LTc inhibiendo MHC
necer y replicarse en las células infectadas. Cada clase I, pero los linfocitos NK han desarrollado
una de las etapas de la presentación antigénica la capacidad para responder ante la ausencia de
puede ser inhibida por productos virales: MHC clase I en las células infectadas por virus.
El resultado de este continuo evolutivo determi-
a) La transcripción de los genes de MHC clase I na si los virus o sus huéspedes logran el control
es inhibida por la proteína E1A de cepas celular.
patogénicas de ciertos Adenovirus.
565
Sin título-2 565 5/26/06, 10:26 AM

3.3.5. Simulación molecular
Debido a la homología que poseen ciertos

genes y proteínas virales con genes y proteínas
celulares, estas proteínas virales pueden interactuar
con elementos de la respuesta inmune bloquean-
do su efectividad y permitiendo la evasión y mu-
chas veces provocando enfermedad. Ejemplos son
la modulación de la presentación y reconocimiento
en el caso de la proteína viral CMV que se une a
la beta 2 microglobulina por poseer un dominio
homólogo al MHC.
3.3.6. Inmunosupresión e infección viral
Algunos virus infectan células del sistema in-

mune, impidiendo su función y dando como re-
sultado la inhibición de la respuesta inmune espe-
cífica. El ejemplo más representativo son las in-
fecciones por VIH, en las que se produce severa
inmunodeficiencia por destrucción de las células
CD4+ infectadas, lo que se manifiesta clínica-
mente en el síndrome de la inmunodeficiencia
humana (SIDA). También se ha descrito
inmunosupresión en infecciones virus Epstein-
Barr, en las que la expresión de un gen viral ho-
mólogo al gen celular que codifica para la IL-10,
sería responsable de los efectos inhibitorios de la
respuesta inmune, los que son similares a los de
esta citoquina.
LECTURAS SUGERIDAS
Abbas, A. K.; Liehtman, A.H.; Pober, J. S.,

Cellular and molecular Immunology, Chapter
15, Editorial W.B. SAUNDERS, 2001.
Dietz, M., “Viral Cytokines”, The Oncologist 5:

77-80, 2000.
Gianani, R., Savetnik, N., “Viruses, Cytokines,

Antigens and autoimmunity”, Proc. Natl. Acad.
Sci., U.S.A.; 93:2257-2259, 1996.
Roitt, I.; Brostoff, J.; Male, D., Inmunología,

Capítulo 16: “Inmunidad frente a virus, bacterias
y hongos”, Tercera edición, 1991.
Stites, D.P., Abba, L.T., Basic and Clinical

Immunology, Chapter 50, Séptima edición, 1991.
566
Sin título-2 566 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 35
INMUNIDAD FRENTE A PARÁSITOS
Ulises Vergara C. y Jorge González C.
1. Introducción 3.2. Respuesta Th2 y protección

2. Respuesta inmune frente a protozoos inmunológica
2.1. Desarrollo de inmunidad protec- 3.2.1. Mecanismos efectores y re-
tora sistencia a la infección
2.2. Activación de macrófagos infec- 3.3. Respuesta Th1 y susceptibilidad
tados a la infección
2.3. Activación de linfocitos T CD8+ 4. Respuesta inmune frente a tremá-
2.4. Rol de los anticuerpos en el con- todos intestinales
trol de protozoos 4.1. Inmunidad protectora frente a
3. Respuesta inmune frente a nemá- Schistosoma
todos intestinales 4.1.1. Eosinófilos
3.1. Aspectos generales de la respues- 4.1.2. Macrófagos
ta inmune 4.2. Inmunidad en la rata
3.1.1. Enterocitos 4.3. Inmunidad en el ratón
3.1.2. Inmunoglobulinas 4.4. Interferencia con la inmunidad
3.1.3. Linfocitos
3.1.4. Células mieloides
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Sin título-2 567 5/26/06, 10:26 AM

568
Sin título-2 568 5/26/06, 10:26 AM

RESUMEN
En este capítulo se describe los mecanismos efectores asociados con resistencia a un grupo
selecto de parásitos y se ha enfocado particularmente en parásitos que ilustran la diversidad de
los mecanismos efectores que contribuyen a inmunidad protectora. La respuesta inmune reque-
rida para eliminar protozoos intracelulares es bastante distinta de aquélla requerida para contro-
lar nemátodos intestinales y pueden dividirse en respuestas tipo Th1 y Th2. Sin embargo, mien-
tras la respuesta de tipo Th1 controla las infecciones por protozoos intracelulares, la respuesta
Th2 controla infecciones por nemátodos intestinales.
1. INTRODUCCIÓN pular en su propio beneficio, la respuesta inmune

del hospedero. Un individuo infectado, debe a su
Los organismos cuya forma de vida depende vez poner en marcha mecanismos de regulación
de la colonización de otro individuo, deben ven- de la respuesta inmune que le permitan controlar
cer diversos obstáculos para lograr su objetivo de el curso de la infección y /o de la enfermedad y
instalación en un órgano o tejido que le propor- limitar el eventual daño de una respuesta
cione las condiciones necesarias para reproducir- incontrolada.
se y completar su ciclo biológico. De esta mane- Como consecuencia de las complejas
ra, la evolución del parasitismo como forma de interacciones hospedero-parásito, las infecciones
vida, ha requerido el desarrollo de una gran varie- parasitarias pueden convertirse en cuadros cróni-
dad de adaptaciones biológicas que permiten que cos y progresivos que debilitan de manera severa
la fisiología del parásito coincida, al menos en la salud del hospedero, o en infecciones latentes
parte, con la fisiología del hospedero del cual ob- que, luego de la resolución de la fase aguda, per-
tendrá los metabolitos que le son indispensables sisten durante la vida del individuo sin causar sín-
para completar su ciclo biológico. Así, los parási- tomas o signos clínicos de enfermedad (a menos
tos han desarrollado nuevas y complejas vías que el hospedero haga un cuadro de inmunode-
metabólicas pero al mismo tiempo han perdido ficiencia o inmunodepresión).
otras y, aunque en muchos casos se desconocen El conocimiento, tanto de las características
las ventajas o desventajas de estos cambios, su del ciclo de vida y la variabilidad biológica del
conocimiento es fundamental para el desarrollo parásito, como de sus distintas formas de
de nuevas estrategias quimioterapéuticas que per- interacción con el organismo hospedador, son
mitan bloquear el desarrollo del parásito. esenciales para establecer métodos de control y
La sobrevida de un parásito depende de un eventual erradicación de las enfermedades para-
delicado equilibrio entre sus propiedades sitarias. Sin embargo cualquier intento de control
inmunogénicas y los mecanismos efectores de res- y eventual erradicación de las infecciones de ori-
puesta inmune del hospedero. Un parásito exitoso gen parasitario, deberá siempre considerar la uti-
debe ser inmunogénico y, por lo tanto, capaz de lización de estrategias múltiples y complementa-
inducir una respuesta inmune que mantenga el nú- rias como:
mero de parásitos en niveles compatibles con la
sobrevida del hospedero Al mismo tiempo, el pa- 1. Reducción o eliminación del agente parasita-
rásito debe ser capaz de evadir los mecanismos de rio por farmacoterapia
defensa del individuo colonizado y, durante los 2. Reducción de la contaminación ambiental me-
millones de años de coevolución con el sistema diante educación sanitaria y mejoramiento de
inmune, los parásitos han desarrollado diversas la vivienda y de las condiciones nutricionales
estrategias para evadir, desviar, suprimir o mani- y sanitarias de la población
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3. Reducción de los hospederos intermediarios y 2. RESPUESTA INMUNE FRENTE A
modificación de su hábitat PROTOZOOS
4. Reducción de la exposición al riesgo de con-
taminación o infección Aunque Leishmania, Trypanosoma cruzi,
5. Desarrollo de estrategias inmunológicas que Toxoplasma gondii y Cryptosporidium, son todos
permitan controlar el curso de la infección protozoos intracelulares, ellos difieren substan-
y/o de la enfermedad. cialmente en sus ciclos de vida.
Leishmania existe en dos estadios distintos,
Los mecanismos efectores innatos y adquiri- los promastigotes metacíclicos y los amastigotes.
dos, necesarios para la protección inmunológica Los promastigotes son formas alargadas, flageladas
contra cualquier infección parasitaria, son bastante y extracelulares que se multiplican en el intestino
variados y dependen de las características especí- de las hembras del insecto vector (de los géneros
ficas de cada parásito, como son su forma de en- Phlebotomus y Lutzomya) para migrar luego a la
trada y localización en el hospedero, su ciclo bio- parte anterior del insecto, donde permanecerán hasta
lógico, los estadios infectantes y las diferentes ser inoculados en un nuevo hospedero vertebrado.
estrategias de evasión de la respuesta inmune. Una vez inoculados en un hospedero mamífero, los
La respuesta inmune innata, que reconoce pa- promastigotes invaden rápidamente macrófagos y
trones moleculares parásito-específicos, rara vez otras células del linaje monocito-macrofágico,
proporciona protección contra la infección pero transformándose en amastigotes ovalados e inmó-
desempeña un importante papel, tanto en la pues- viles, que se multiplican en el citoplasma de la cé-
ta en marcha de señales tempranas de alarma que lula infectada (figura 35-1)
alertan al hospedero respecto de la presencia de
un organismo invasor, como en el subsecuente
desarrollo y regulación de una respuesta inmune
específica. La regulación de los distintos meca-
nismos efectores específicos permitirá que ellos
puedan luego operar simultáneamente en el curso
de la infección o de manera restringida en función
de las diferentes fases del ciclo de vida del parási-
to, de sus distintas formas infectantes o de sus di-
ferentes localizaciones tisulares.
Entender la complejidad de los mecanismos
efectores que se ponen en marcha durante una in-
fección parasitaria y determinar cuál de ellos re-
sulta crucial para el control de la infección, es
fundamental para el desarrollo de terapias efica-
ces que conduzcan al control de las enfermeda-
des parasitarias.
En el presente capítulo, se describen los as-
pectos más relevantes de la respuesta inmune fren-
te a protozoos y helmintos parásitos. Se analiza
primero la respuesta inmune frente a protozoos
intracelulares como Leishmania, Toxoplasma, y
Trypanosoma cruzi, que aunque pueden encontrar-
se fuera de las células, desarrollan una parte sus-
tancial de su vida dentro de las células del hospe-
dero mamífero, y gatillan una respuesta inmune
polarizada de tipo Th1, que resulta crucial para el
control de la infección. Se discute luego la res- Figura 35-1. Ciclo biológico de Leishmania. Leishmania es un
puesta inmune frente a la infección por helmintos protozoo parásito, que tiene un ciclo de vida dimórfico que incluye
y el repertorio de mecanismos efectores necesa- promastigotes flagelados y extracelulares , que se multiplican en el
rios para la eliminación de estos parásitos intestino del insecto vector (de los géneros Phlebotomus y Lutzomya)
y amastigotes inmóviles eintracelulares que residen y se multipli-
multicelulares. can en macrófagos y otras células del hospedero mamífero.
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Sin título-2 570 5/26/06, 10:26 AM

En Trypanosoma cruzi, las formas infectantes
(tripomastigotes metacíclicos) son transmitidas
por las deyecciones de insectos vectores
reduviideos (Triatoma, Rhodnius y Panstrongylus
y pueden introducirse al organismo a través del
orificio de la picadura, heridas o escoriaciones de
la piel o atravesando directamente la mucosa ocu-
lar, nasal o bucal y de manera análoga a
Leishmania, los parásitos invaden macrófagos
transformándose en amastigotes intracelulares que
se multiplican activamente por fisión binaria. Sin
embargo, a diferencia de Leishmania, T. cruzi
pueden invadir todas las células nucleadas y des-
pués de varios ciclos de división intracelular, los
organismos se transforman en tripomastigotes
flagelados, que abandonan las células infectadas
y circulan libres en la sangre. Los tripomastigotes
pueden reinvadir otras células, repitiendo así va-
rias veces el ciclo de división intracelular (figura
35-2).
Toxoplasma gondii, tiene por su parte un ci-
clo de vida más complejo que Leishmania o T.
cruzi. En el citoplasma de células del epitelio in-
testinal del gato, los parásitos desarrollan proce-
sos de reproducción sexual que culminan con la
producción de ooquistes, que se vuelven
infectivos después ser expulsados al medio con
las deposiciones del hospedero. Toxoplasma pue- Figura 35-2. Ciclo de vida de Trypanosoma cruzi. En el in-
de multiplicarse sexualmente sólo en el intestino testino de insectos reduviideos (Triatoma, Rhodnius y
Panstrongylus), el parásito se multiplica en forma de
del gato y otros felinos, pero sus ooquistes pue-
epimastigotes que dan luego origen a numerosos
den infectar una gran variedad de especies tripomastigotes metacíclicos que constituyen las formas
vertebradas en las cuales los parásitos invaden el infectantes para el hospedero vertebrado. Los tripomastigotes
epitelio intestinal y se transforman en taquizoitos, son transmitidos por las deyecciones del insecto vector y
pueden introducirse en el hospedero a través del orificio de la
que entran en rápida multiplicación. Los parási-
picadura, a través de heridas y escoriaciones en la piel o di-
tos pueden entonces diseminarse siendo capaces rectamente a través de la mucosa ocular, nasal o bucal. Los
de invadir cualquier célula nucleada del organis- parásitos invaden macrófagos y células de diversos tejidos,
mo. Una vez que una respuesta inmune eficaz se transformándose en amastigotes intracelulares que se multi-
plican activamente para dar luego origen a tripomastigotes
ha establecido, un estadio parasitario de lenta di-
flagelados que abandonan la célula infectada y pueden circu-
visión, el bradizoíto, puede sobrevivir dentro de lar libres en la sangre para invadir nuevas células.
los quistes. Así, la infección por Toxoplasma pre-
senta a menudo una fase aguda, asociada con rá-
pida multiplicación de taquizoítos, y una fase cró-
nica, donde quistes que contienen bradizoítos per-
sisten en el huésped, generalmente de por vida (fi- eliminan con las deposiciones del hospedero in-
gura 35-3). fectado.
Cryptosporidium sp., infecta a diferentes es- Además de las obvias diferencias en sus ci-
pecies de animales incluyendo el hombre, que clos de vida, estos parásitos utilizan diferentes
adquiere la infección al ingerir alimentos o aguas estrategias para sobrevivir dentro de las células
contaminadas con ooquistes del parásito. A nivel del hospedero. Por ejemplo, T. cruzi secreta una
del epitelio intestinal los parásitos desarrollan hemolisina, que asociada a la acción de una
procesos de reproducción asexual y luego de re- transialidasa, facilita el escape del parásito desde
producción sexual que culminan con la produc- el fagolisosoma al citoplasma, evitando así el
ción y liberación de ooquistes maduros que se ambiente tóxico producto de la fusión de lisosomas
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Figura 35-3. Ciclo biológico de Toxoplasma gondii. En las células epiteliales del intestino del hospedero definitivo, las formas
infectantes (quistes, ooquistes y taquizoitos) se multiplican primero asexualmente por esquizogonia y luego sexualmente por
esporogonia, para generar ooquistes que son eliminados con las heces del gato. El hombre y diversos mamíferos ingieren el
parásito por vía oral y a partir de ooqistes se generan taquizoitos que invaden las células del hospedero para reproducirse y generar
numerosos taquizoitos o quistes con bradizoitos.
al fagosoma. Toxoplasma crea su propia vacuola que células T CD8+ parásito-específicas, juegan
parasitófora, que impide la fusión con lisosomas. en la protección contra la infección por
En contraste, Leishmania ha desarrollado meca- Leishmania. En el caso de Cryptosporidium, la
nismos de resistencia que le permiten sobrevivir respuesta inmune del hospedero no es del todo
incluso después que el fagosoma se ha fusionado conocida, pero parece involucrar mecanismos de
con los lisosomas. Por su parte, Cryptosporidium, presentación antigénica tanto en el contexto de
a diferencia de otros patógenos intracelulares no moléculas MHC de clase I como de clase II. Por
se localiza en el citoplasma, puesto que invade último es necesario señalar que la resistencia con-
las células localizándose justo entre la membrana tra todas estas infecciones parasitarias, requiere
celular y el citoplasma. la participación de células T CD4+.
Las consecuencias inmunológicas de estas di-
ferencias se traducen en que proteínas de T. cruzi 2.1. Desarrollo de inmunidad protectora
y Toxoplasma parecen entrar más rápidamente en
la vía de presentación antigénica por moléculas La IL-12 juega un papel central en el desa-
MHC de clase I, generando así una respuesta in- rrollo de inmunidad protectora contra estos
mune protectora que involucra la participación de protozoos intracelulares, promoviendo la polari-
linfocitos T citotóxicos. En la leishmaniasis, tam- zación hacia una respuesta Th1 y la producción
bién opera la vía de presentación MHC de clase de IL-2 e IFN-γ. Los macrófagos y las células
I, sin embargo, no está claramente definido el rol dendríticas (CDs) son las principales fuentes de
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IL-12, y se piensa que la infección o la exposición gotes por macrófagos humanos. Resultados simi-
a productos moleculares de los parásitos inducen lares se han obtenido, tanto in vivo como in vitro
la producción de estas citoquinas. Sin embargo, utilizando el modelo murino. Las quimioquinas
la infección in vitro de macrófagos con parecen inducir actividad tripanocida mediante
promastigotes metacíclicos o con amastigotes de la producción de óxido nítrico (NO).
Leishmania no induce la producción de IL-12, Considerando que todos estos parásitos
aunque DCs sí puede producir IL-12 después de intracelulares pueden infectar células presentado-
la infección con el parásito. Es más, la infección ras de antígeno, la activación de células de T CD4
de macrófagos puede suprimir la producción de + pueden explicarse por interacción con macró-
IL-12 estimulada por algunos productos fagos o CDs que han sido infectadas o que han
moleculares de Leishmania. La búsqueda de una tomado contacto con parásitos muertos. Las
explicación para este fenómeno permitió estable- quimioquinas parecen jugar un papel importante
cer que la unión de CD40 con linfocitos T que en la migración de CDs que han capturado parási-
expresan el ligando CD40L, constituye una señal tos o antígenos parasitarios en los sitios periféricos
crítica de coestimulación que conduce a la pro- de infección y los llevan a los ganglios linfáticos
ducción de IL-12, como lo sugiere el hallazgo que para su presentación a linfocitos T CD4+. Así, la
ratones deficientes en CD40 o CD40L son sus- proteína quimiotáctica MCP-1 (“Monocyte
ceptibles a infección y que esta susceptibilidad Chemoattractant Protein-1”) se produce tempra-
puede ser revertida mediante el tratamiento con namente en la infección por Leishmania y parece
IL-12. contribuir a la migración de CDs, puesto que en
Más recientemente, otra vía crítica que lleva ratones deficientes en CCR2, la migración de CDs
a la producción IL-12, parece involucrar la parti- se encuentra afectada y este deterioro contribuye
cipación de quimioquinas. Así, se ha observado a aumentar la susceptibilidad de los ratones a la
que lisados de Toxoplasma son capaces de esti- infección por Leishmania major. Por otro lado,
mular la producción de MIPla y MIP1b que cons- luego de una inyección intravenosa con antígeno
tituyen ligandos para el receptor de quimioquinas de Toxoplasma, las CDs se movilizan desde la
CCR5 y que la unión de CCR5 a células pulpa roja y las zonas marginales del bazo a las
dendríticas, conduce a la producción de IL-12. La regiones de células T de los linfonódulos
importancia de esta vía de activación en iniciar el periarteriales, y esta migración depende de la ex-
desarrollo de una respuesta inmune protectora fue presión del receptor de quimioquinas CCR5.
demostrada por la observación que ratones defi- Existe consenso que en las infecciones por
cientes en CCR5 son más susceptibles a infec- Cryptosporidium, los mecanismos responsables de
ción por Toxoplasma gondii. la eliminación del parásito del tracto intestinal
Cryptosporidium parvum, causa inflamación requieren la participación IFN-γ puesto que rato-
de la mucosa intestinal con numerosos neutrófilos nes “knockout” para IFN-γ desarrollan un parasi-
intraepiteliales e importantes infiltrados de tismo masivo de todo el intestino y mueren en dos
neutrófilos y células mononucleares en la lámina a tres semanas luego de una infección experimen-
propia. Las células epiteliales humanas son capa- tal con C. parvum mientras los controles se mues-
ces de secretar y expresar IL-8 y la quimioquina tran libres de la infección hasta por treinta días.
del tipo CXC denominada GRO-α (“Growth- Además, distintas cepas de ratones presentan di-
related oncogene α”) y se ha observado que en la ferencias significativas en la sobrevida a la infec-
infección por C. parvum la respuesta de ción con el parásito y estas diferencias se asocian
quimioquina CXC es más tardía que la observada a su habilidad en producir IFN-γ. Estudios utili-
en la infección con otros protozoos intestinales y zando ratones con insuficiencia severa combina-
no parece participar como un mecanismo efector da (ratones SCID), mostraron que estos ratones
sino más bien en el reclutamiento y activación de permanecen infectados por largo tiempo sin mues-
diversas poblaciones celulares. tras de enfermedad, mientras los ejemplares in-
De igual manera, la actividad de quimio- capaces de producir IFN-γ mueren rápidamente.
quinas del tipo CC parece ser importante para el De igual manera, células T CD4+ participan en la
hospedero, en las infecciones por T. cruzi. Así, resolución tanto de las formas agudas como cró-
estudios in vitro han mostrado que quimioquinas nicas de la infección en ratones, puesto que la in-
como RANTES, MIP-1α y MIP-1β aumentan la munidad es dependiente del aumento en el núme-
captura y destrucción intracelular de tripomasti- ro de células T CD4+ en la población de linfocitos
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intraepiteliales del intestino y la subsecuente ge- depletados de IFN-γ por administración de anti-
neración de IFN-γ. cuerpo monoclonal anti-IFN-γ o lratones
“knockout” para IFN-γ son altamente suscepti-
2.2. Activación de macrófagos infectados bles a la infección con Leishmania, Toxoplasma,
y T. cruzi.
La actividad microbicida de macrófagos es La importancia de TNF en el control de la
un mecanismo efector primario que lleva al con- infección por parásitos intracelulares, se estable-
trol de patógenos intracelulares. Los macrófagos ció al observar que ratones deficientes en el re-
activados muestran cambios importantes que in- ceptor de TNF (ratones TNFR), son altamente
cluyen el aumento en la expresión de moléculas susceptibles a la infección con Leishmania o
MHC de clase II, aumento en la actividad Toxoplasma. Sin embargo, ratones “knockout”
fagocítica y generación de radicales libres alta- TNFRp55 y TNFRp55p75 infectados con L.
mente tóxicos. Mientras los reactivos intermedia- major son capaces de controlar y eliminar la ma-
rios de oxígenos (ROls) y los reactivos interme- yoría de los parásitos, sugiriendo que señales ac-
diarios de nitrógeno (RNIs), son efectivos agen- cesorias como la interacción CD40/CD40L, po-
tes microbicidas, el óxido nítrico parece particu- drían compensar la ausencia de TNF. Un papel
larmente importante en el control de parásitos crítico para TNF en el control de parásitos
intracelulares. intracelulares se observó luego de la infección
El óxido nítrico se genera a partir L-arginina con L donovani de ratones deficientes en IFN-γ,
en una reacción catalizada por la forma inducible los cuales resultaron inicialmente mucho más sus-
de la enzima óxido nítrico sintetasa (iNOS). Ra- ceptibles a la infección con el parásito. Sin em-
tones deficientes en la enzima (iNOS - /-) son al- bargo, después de 8 semanas de infección, la
tamente susceptibles a la infección con L. mayor replicación del parásito fue parcialmente contro-
o T. cruzi. Más aún, una comparación directa de lada. En estos ratones “knockout” para IFN-γ, el
la importancia relativa de ROIs y RNIs en el con- control temprano de la infección, puede ser in-
trol de la infección por L. donovani, mostró que ducido mediante la administración de IL-12, pero
aunque ROIs puede contribuir al control del pará- no mediante la administración de IL-12 más
sito en etapas tempranas de la infección, óxido anticuerpos anti-TNF.
nítrico es la molécula efectora de central impor- Mientras la mayoría de los estudios de pará-
tancia en el control de L. donovani. sitos intracelulares se han centrado en los
En contraste, la infección de ratones iNOS - macrófagos, es evidente que Toxoplasma y T. cruzi
/ - por Toxoplasma, muestra un cuadro más com- infectan además otras células distintas de los
plejo, dado que la resistencia a estas infecciones fagocitos, pero que igualmente requieren elimi-
se asocia tanto con mecanismos iNOS dependien- nar los parásitos para controlar la infección. Se ha
tes como con mecanismos iNOS independientes. sugerido que óxido nítrico proveniente de
Así, los ratones “knockout” para iNOS son capa- macrófagos activados situados en la vecindad de
ces de controlar Toxoplasma durante la fase agu- las células infectadas, puede matar parásitos en
da de la infección, pero mueren durante la fase células no hematopoyéticas. La creación de qui-
crónica. Sin embargo, luego de la vacunación con meras de médula ósea entre ratones normales y
cepas avirulentas de Toxoplasma, los ratones ratones deficientes en el receptor para IFN-γ (IFN-
“knockout” para iNOS resultan tan resistentes R), permitió establecer que la resistencia a la in-
como los ratones normales en el control de la in- fección con Toxoplasma, es dependiente de la ex-
fección con formas virulentas del parásito. La presión del receptor para IFN-γ, tanto en células
importancia de óxido nítrico en la resistencia a la hematopoyéticas como en células no hematopo-
infección con protozoos intracelulares es, por lo yéticas. Sin embargo, el mecanismo mediante el
tanto, relativa y depende del parásito intracelular cual IFN-γ ejerce sus efectos en células no
que se examina y de la fase de la infección que se hematopoyéticas no está claro. Se ha mostrado que
analiza. IFN-γ puede aumentar la actividad de la
El modelo actualmente aceptado para expli- dioxigenasa de indoleamina en fibroblastos infec-
car la activación de macrófagos, sugiere que IFN- tados con Toxoplasma, lo que conduce a la degra-
γ es una citoquina fundamental en la activación dación de triptofano necesario para la replicación
de estas células, aún cuando otras citoquinas como de los parásitos. No obstante, esta vía no opera en
TNF pueden facilitar este proceso. Ratones macrófagos humanos ni tampoco en la infección
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por T. cruzi. Así, los mecanismos independientes El papel que las células de T CD8+ juegan
de iNOS que operan en el control de Toxoplasma en leishmaniasis es menos claro, puesto que rato-
o T. cruzi, permanecen sin definir. Sin embargo, nes deficientes en células T CD8+ pueden resis-
algunas respuestas a este problema podrían pro- tir la infección primaria con L. mayor. Como
venir de los estudios con ratones carentes de pro- Leishmania reside dentro del fagolisosoma, po-
teínas ligadoras de GTP (IGTP) que es regulada dría predecirse que células de T CD8+ no se acti-
por IFN-γ. En efecto, ratones que no poseen esta van durante infección. Sin embargo, tanto en in-
molécula pueden controlar infecciones por fecciones humanas como en infecciones experi-
patógenos intracelulares como Listeria mentales, por Leishmania las células T CD8+
monocytogenes y Citomegalovirus, pero son in- antígeno-específicas se encuentran aumentadas y
capaces de controlar infecciones por Toxoplasma. estudios in vitro muestran que células infectadas
pueden presentar antígenos a células de T CD8+.
2.3. Activación de linfocitos T CD8+ La importancia de las células de T CD8+ en
leishmaniasis ha sido demostrada mediante estu-
La importancia de las células T CD8+ en la dios que indican que ellas contribuyen a la resis-
resistencia a T. cruzi y Toxoplasma ha sido bien tencia a la infección o el desafío secundario y a la
establecida, observándose un aumento en la sus- resistencia inducida por vacunación. La manera
ceptibilidad a la infección en ratones deficientes cómo las células de T CD8+ influencian la infec-
en células T CD8+. ción por Leishmania no está bien establecida. Sin
Las células de T CD8+ reconocen antígenos embargo, estudios in vitro indican que macrófagos
presentados en el contexto de moléculas MHC de infectados no actúan como blancos para el citolisis
clase I, lo que facilita la detección de infecciones por las células T CD8+, sugiriendo que su fun-
por patógenos intracelulares en cualquier célula ción protectora se asocia más a la producción IFN-
del organismo, aspecto que resulta particularmente γ, en lugar de actuar como células citotóxicas.
importante en el control de infecciones por T. cruzi En Cryptosporidium spp el papel de las cé-
y Toxoplasma. Los linfocitos T CD8+ secretan lulas T CD8+ no está claro, no obstante parecen
citoquinas como IFN-γ que activa macrófagos, jugar algún papel en el control de la infección en
pero son también capaces de lisar células infecta- ratones.
das, mediante la liberación de perforina. Ratones
“knockout” para perforina, muestran una signifi- 2.4. Rol de los anticuerpos en el control de
cativa mayor susceptibilidad a la infección por protozoos
Toxoplasma durante la fase crónica de infección.
Sin embargo, los ratones deficientes en perforina, La infección con T. cruzi, Toxoplasma, o
pero vacunados con una cepa avirulenta de Leishmania se asocia a la producción de
Toxoplasma son tan resistentes como ratones con- anticuerpos específicos que parecen tener una va-
troles, a la infección con cepas virulentas del pa- riedad de funciones, eventualmente involucradas
rásito. Lo anterior hace pensar que las células T en el control de estos parásitos. Los anticuerpos
citolíticas pueden ser importantes para el control pueden, por ejemplo, unirse a las formas
de la fase crónica de toxoplasmosis (cuando los infectantes que se movilizan de una célula a otra
quistes están presentes en el cerebro), pero menos o que circulan libremente circulan en la sangre.
importante durante la fase aguda, cuando los Además pueden neutralizar o modular la invasión
taquizoítos se multiplican rápidamente. de nuevas células, de promover la fagocitosis de
Un resultado diferente se observa en la in- estas formas parasitarias (opsonización), o bien
fección con T. cruzi, donde se encontró que aún producir su lisis por activación del sistema del
en las infecciones con cepas avirulentas, se re- complemento y/o mediante mecanismos de
quieren linfocitos T CD8+ para la protección con- citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos
tra el parásito. Sin embargo, ratones “knockout” (ADCC). Mientras muchos estudios in vitro han
para perforina y granzima B, son tan resistentes a sugerido algún rol de los mecanismos efectores
la infección por T. cruzi, como los ratones con- que involucran la participación de anticuerpos, su
troles, indicando que las células T CD8+ que pro- importancia en el control de la infección, ha sido
tegen contra T. cruzi, no requieren de mecanis- más difícil de establecer in vivo.
mos de citotoxicidad que involucren perforina o El uso de animales deficientes en células B
granzima B. o en receptores Fc (ratones FcR), ha permitido
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mostrar inequívocamente que células B y En infecciones por Cryptosporidium spp., no
anticuerpos son requeridos para la protección conse han observado diferencias entre ratones nor-
tra T. cruzi y Toxoplasma. Así, ratones deficientes males y aquellos depletados de células B, sugi-
en células B infectados con Toxoplasma, mueren riendo que la síntesis de anticuerpos no cumple
durante la fase crónica de infección, mostrando un rol en el control de la infección.
un elevado número tanto de taquizoitos, como de
quistes en cerebro y pulmones. Los anticuerpos
no son, por lo tanto, necesarios para la protección 3. RESPUESTA INMUNE FRENTE A
durante la fase aguda de la infección. NEMÁTODOS INTESTINALES
Ratones deficientes en linfocitos B, inocula-
dos con Toxoplasma son mucho más susceptibles El intestino de vertebrados es, para los pará-
a la infección que los controles normales. No obs- sitos nemátodos, uno de los principales sitios
tante, el uso de ratones deficientes en FcR y C5 ancestrales de invasión, dado que en el curso de
ha permitido establecer que aunque células B son la evolución, la ingestión accidental de vermes o
esenciales para la resistencia a la infección por de sus formas infectantes, resultó un mecanismo
Toxoplasma, ni la activación de mecanismos simple de acceso a los hospederos vertebrados. La
efectores Fc-dependientes o de lisis mediada sobrevida de los parásitos en el intestino fue favo-
por complemento, son requeridos para el efecto recida por la existencia de una oferta nutritiva ili-
protector de los anticuerpos. mitada, mientras el desarrollo de su ciclo evoluti-
En la infección por T. cruzi, los ratones defi- vo resultó facilitado por la posibilidad de salida y
cientes en linfocitos B sobreviven más tiempo escape fácil desde el hospedero. De esta manera,
que los ratones deficientes en células T CD4+ o aún cuando diversos helmintos pueden invadir
que los deficientes en células T CD8+. Sin em- distintos órganos y tejidos, la mayor parte de ellos
bargo, los anticuerpos y particularmente aquéllos residen en el intestino. El intestino se ha manteni-
denominados “anticuerpos líticos”, parecen im- do como el sitio ideal para el desarrollo de los
portantes en el control de la infección. Estos parásitos adultos, aún cuando el ingreso al hospe-
anticuerpos, que están presentes en el suero de dero se produzca a través de la piel y complejos
pacientes humanos, y en ratones crónicamente mecanismos de migración deban ponerse en mar-
infectados, corresponden a IgG de las subclases cha antes de llegar al intestino.
IgG2a e IgG2b y son generalmente inducidos por Muchos estudios han demostrado que el in-
parásitos vivos pero no por aquéllos que han sido testino no es un simple hábitat para los helmintos.
fijados o lisados. De esta forma, cuando Nemátodos grandes como Ascaris lumbricoides
tripomastigotes que son habitualmente resisten- viven en el lumen, mientras especies de menor
tes a la acción del complemento, se incuban con tamaño como las uncinarias y Trichostrogylus,
suero de infectados crónicos que contiene entran en estrecha relación con la mucosa y por
anticuerpos líticos, la IgG se une específicamente ello se encuentran en condiciones microambien-
a los parásitos haciéndolos sensibles a la lisis por tales muy diferentes. Mientras algunas especies
complemento. viven en la mucosa durante la mayor parte de su
Estudios recientes utilizando ratones deficien- desarrollo y sólo emergen al lumen como formas
tes en linfocitos B, indican que estas células no maduras, otras permanecen en la mucosa durante
participan en la susceptibilidad o resistencia a la todo su ciclo de vida intestinal.
infección con L. mayor. Sin embargo, estudios con Los nemátodos presentan problemas particu-
L. amazonensis indican que en ausencia de células lares para el desarrollo de una respuesta inmune
de B o de FcR, la infección por L. amazonensis es en el hospedero. Su cutícula es relativamente grue-
menos severa. Estos resultados sugieren que la sa y sus movimientos son muy activos y, aunque
unión de anticuerpos a los FcR aumenta la captura no son inertes desde el punto de vista inmuno-
y sobrevida de los parásitos o que los FcR activan lógico ni metabólico, su cutícula los protege de la
señales de alarma que modulan la respuesta del respuesta inmune y sólo pueden ser atacados por
hospedero frente a la infección. Por otro lado, se ha los orificios naturales. La cutícula es altamente
observado que la activación vía FcR conduce a un inmunogénica y puede ser dañada por mecanis-
aumento en la producción de IL-10, la cual podría mos efectores de la respuesta inmune, sin embar-
regular negativamente el desarrollo de una respuesta go no está claro si esta respuesta desempeña al-
inmune protectora. gún papel importante en la inmunidad contra pa-
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rásitos intestinales. Además, es muy probable el 3.1. Aspectos generales de la respuesta inmune
desarrollo de una respuesta efectora contra
antígenos secretados o excretados por los La respuesta inmune frente a nemátodos in-
helmintos. testinales, tiene relación inevitable con las condi-
En humanos, se conoce poco respecto a la ciones y arquitectura particular del sistema diges-
respuesta frente a helmintos. Datos epidemioló- tivo. De esta manera en la generación de esta res-
gicos sugieren la existencia de inmunidad adqui- puesta participan distintas células y mecanismos
rida frente a la infección; no obstante algunos efectores.
nemátodos como Trichuris persisten por largo
tiempo y la reinfección es muy frecuente. 3.1.1. Enterocitos
Sin embargo, los nemátodos gastrointesti-
nales constituyen uno de los grupos parasitarios El intestino es la principal vía de entrada de
más exitosos, estimándose que en la población hu- antígenos al organismo, no sólo de aquellos deri-
mana actual una de cada cinco personas alberga, vados de eventuales parásitos, sino también los
a lo menos, una de estas especies. La infección que son aportados por los alimentos, los conta-
por estos patógenos generalmente no es fatal, pero minantes ambientales y la flora bacteriana. Los
constituyen cuadros insidiosos, a menudo con un enterocitos que forman el epitelio de la mucosa
grado alto de morbilidad, particularmente en ni- intestinal, constituyen una barrera física que ade-
ños. Un rasgo particularmente importante de este más puede capturar antígenos desde el lumen. Este
tipo de infecciones parasitarias (y que la distin- proceso es aún más activo y eficiente cuando como
gue de otras infecciones) es que el grado de in- producto de una inflamación aumenta la permeabi-
fección o la carga parasitaria del hospedero, es un lidad de la capa epitelial. Citoquinas liberadas
reflejo del número de eventos de invasión. Los durante la inflamación inducen un aumento en la
nemátodos intestinales, generalmente no se mul- expresión de moléculas MHC en los enterocitos,
tiplican dentro del hospedero y la carga parasita- permitiendo que puedan de esta manera partici-
ria se adquiere por eventos de infección múltiples, par como células presentadoras de antígeno. La
y no a través de un único contacto con las formas captura y transcitosis de antígenos es además cla-
infectantes. ramente facilitada por la existencia de células M,
La respuesta inmune frente a helmintos di- asociadas al epitelio que tapiza las placas de Payer.
fiere claramente de aquélla inducida por protozoos. Los antígenos también pueden ser capturados
Los helmintos son organismos pluricelulares de mediante mecanismos que involucran la partici-
mayor tamaño, que no se replican dentro del hos- pación de anticuerpos presentes en la superficie
pedero. La diferencia en tamaño limita los meca- de la mucosa.
nismos efectores de respuesta inmune y la caren-
cia de replicación tiene repercusiones importan- 3.1.2. Inmunoglobulinas
tes en las estrategias de sobrevida desarrolladas
tanto por el hospedero como por el parásito. El principal isotipo de anticuerpos que se en-
Debido a la dificultad para estudiar la infec- cuentran en la mucosa intestinal corresponde a IgA
ción en condiciones naturales, la mayor parte de dimérica, la cual puede ser secretada a través de
nuestro conocimiento actual sobre la infección por los enterocitos o junto a la bilis luego de pasar por
nemátodos intestinales proviene de las investiga- el epitelio del ducto biliar como ocurre en roedo-
ciones realizadas en roedores de laboratorio infec- res. Las moléculas de IgA permanecen intactas y
tados experimentalmente con parásitos tan diver- actúan a nivel del lumen intestinal debido a la
sos como Nippostrongy1us brasiliensis, Trichinella presencia de la porción secretora que la protege
spiralis, Trichuris muris, Heligmosomoides, y de la degradación por proteasas intestinales. La
Polygyrus Strongyloides spp. La mayor parte del IgM es también transportada a través del epitelio
trabajo se ha concentrado en modelos en los que y permanece activa en el lumen intestinal. Por otra
luego de la infección primaria, ocurre expulsión parte, IgG es producida localmente por células
natural de los parásitos del tracto gastrointestinal plasmáticas localizadas en la lámina propia. A di-
(N. brasiliensis de T. spiralis y Strongyloides), aun- ferencia de IgA, los anticuerpos IgM e IgG son
que interesantes resultados se están generando en rápidamente degradados por proteasas, no obstante
sistemas en los cuales puede ocurrir una infección sus fragmentos Fab pueden permanecer funcio-
crónica natural (T. muris y de H. polygyrus). nales por algún tiempo.
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3.1.3. Linfocitos activación de linfocitos Th2, y mastocitos y la pro-
ducción de citoquinas como IL-4, IL-9, IL-10, IL-
Una cantidad apreciable de linfocitos T y B 13 e IL-18. Ratones “knockout” para IL-18 son
están presentes en la lámina propia del intestino. altamente resistentes a la infección con T. spiralis,
Las células B contribuyen fundamentalmente a la expulsan más rápidamente los gusanos adultos y
generación de células plasmáticas secretoras de desarrollan niveles más bajos de enquistamiento
las inmunoglobulinas que estarán presentes en el larval en el músculo esquelético. La expulsión de
epitelio y el lumen intestinal. Subpoblaciones los gusanos se asocia a un alto número de
linfocitarias T CD4+ y T CD8+ se encuentran en mastocitos en la mucosa intestinal y secreción
la lámina propia, no obstante las células T CD4+ aumentada de IL-10 e IL-13
parecen más importantes en términos de una res- Ratones “knockout” para IL-4 muestran sólo
puesta antiparasitaria. pequeñas alteraciones en la cinética de expulsión
de T. spiralis, en comparación con los ratones nor-
3.1.4. Células mieloides males no deficientes, sugiriendo que la expresión
de IL-4 no es esencial para la expulsión de los
En la mucosa normal existen diversas célu- gusanos.
las efectoras linfoides y no linfoides, que aumen- No obstante, se ha demostrado que la IL-13
tan durante las infecciones parasitarias. Entre ellas
se encuentran células “natural killer”, macrófagos,
eosinófilos, neutrofilos y además basófilos y
mastocitos. Estas últimas poseen aminas y otros
mediadores así como también receptores de alta
afinidad para IgE (FcεRI). La infiltración de la
mucosa por mastocitos, basófilos y eosinófilos,
durante la infección es dependiente de la libera-
ción de citoquinas por parte de linfocitos T espe-
cíficos. Estas citoquinas y otros mediadores solu-
bles son responsables de la inflamación intesti-
nal, que tiene obvias consecuencias en la estruc-
tura y función intestinal, alterando la cantidad y
propiedades del mucus intestinal.
3.2. Respuesta Th2 y protección inmunológica
Distintos estudios han sugerido que la expul-

sión de nemátodos intestinales, es principalmen-
te consecuencia de una respuesta asociada a la se-
creción de citoquinas TCD4 del tipo Th2. Así, en
el modelo murino la IL-4 parece desempeñar un
rol importante en la respuesta inmune que permi-
te la expulsión de H. polygyrus y T. muris del
intestino delgado de los ratones experimentalmen-
te infectados.
Linfocitos T activados en los nódulos
linfáticos mesentéricos durante el curso de la in-
fección, resultan fundamentales en la inmunidad
protectora contra muchos nemátodos intestinales,
Figura 35-4. Ciclo de vida de Trichinella spiralis. El parási-
incluyendo Trichinella spiralis. Este parásito in- to desarrolla su ciclo biológico en un único hospedero que
fecta el intestino y los gusanos adultos liberan lar- puede ser omnívoro o carnívoro. El hombre se infecta al inge-
vas que penetran la pared intestinal y se enquistan rir carne mal cocida, que contiene larvas enquistadas en los
músculos esqueléticos. La larvas liberadas en el intestino,
luego en los músculos esqueléticos (figura 35-4).
maduran rápidamente y las hembras fecundadas darán origen
El mecanismo de expulsión del parásito adulto del a larvas jóvenes que vía sanguínea o linfática migran a los
intestino es un proceso complejo que involucra la tejidos para enquistarse en los músculos estriados.
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(una citoquina estrechamente relacionada con IL- ciones experimentales con T. spiralis, la resisten-
4), parece desempeñar un rol importante en la ex- cia inducida por IL-9 se expresa fundamentalmen-
pulsión de muchos nemátodos intestinales. Rato- te mediante la inducción de mastocitosis intesti-
nes “knockout” para IL-13, por ejemplo, tardan nal, y en modelos de infección T. muris, la neutra-
bastante más tiempo en expulsar los gusanos del lización de IL-9 mediante anticuerpos específicos,
intestino, cuando se les infecta experimentalmen- induce infección crónica en ratones normalmente
te con N. brasiliensis. De la misma manera, rato- resistentes.
nes doble “knockout” para IL-4/IL-13 tardan
mucho más en la expulsión de los parásitos, que 3.2.1. Mecanismos efectores y resistencia a la
los ratones con “knockout” único. infección.
Una situación similar ocurre en las infeccio-
nes experimentales con T. spiralis, puesto que ra- El rol de las citoquinas producidas por
tones doble deficientes en IL-4/IL-13, muestran linfocitos Th2 en la expulsión de nemátodos in-
un marcado retraso en la expulsión del parásito, testinales está bien establecida; sin embargo, per-
lo que no ocurre en ratones normales o en ratones manecen todavía sin definir, los mecanismos
deficientes sólo en IL-13. efectores que conducen a la expulsión de los pa-
La importancia relativa de IL-4 e IL-13 en la rásitos. Muchas infecciones parasitarias inducen
resistencia a nemátodos intestinales es también aumento en el número de eosinófilos de los indi-
influenciada por el repertorio genético del hospe- viduos afectados, pero no existe evidencia que
dero. Así, ratones C57BL/6 deficientes en IL-4, sugiera que estas células están de alguna manera
son uniformemente susceptibles y desarrollan in- involucradas en la protección del hospedero. Por
fecciones crónicas a T. muris, mientras los rato- otro lado la participación de mastocitos en la re-
nes de tipo silvestre expelen su carga de gusanos. sistencia a los helmintos intestinales, ha sido tam-
Por otro lado, ratones BALB/c deficientes en Il- bién controversial. La evidencia más convincente
4, muestran una sensibilidad sexo-dependiente ha surgido de modelos murinos de infección ex-
puesto que, mientras los machos desarrollan in- perimental con T. spiralis, que demuestran que la
fección crónica, las hembras expulsan sus parási- supresión de mastocitos, produce un retraso sig-
tos. La expulsión de parásitos en estas hembras es nificativo en la expulsión de los parásitos desde el
mediada por IL-13, como lo muestran experimen- intestino. Por otro lado, ratones deficientes en una
tos en que se administra la proteína de fusión IL- proteasa específica de mastocitos, denominada
13Ra2. MMCP1, muestran un retardo significativo en la
La importancia de IL-4/IL-13 y de IL-4Ra expulsión de T. spiralis del intestino. Aunque la
en la respuesta a nemátodos intestinales, sugiere función de MMCP1 permanece sin definir, se ha
una importante función para la molécula STAT6 sugerido que proteasas de mastocitos, podrían
en la generación de una respuesta protectora. Ra- tener como blanco las uniones firmes existentes
tones deficientes en STAT6 son más susceptibles entre las células del epitelio intestinal. Cambios
a T. spiralis que los ratones normales y muestran en la contractibilidad de la musculatura lisa intes-
una deprimida respuesta de mastocitos intestina- tinal y cambios asociados al aumento de la per-
les y de citoquinas del tipo Th2 y supresión de meabilidad intestinal y la disminución de la ab-
la síntesis de IgG parásito-específicas. Estos mis- sorción de fluidos, se producen a menudo duran-
mos ratones “knockout” para STAT6 muestran te la expulsión de H. polygyrus y T. spiralis.
una expulsión retardada de N. brasiliensis, pero
en este caso la respuesta de citoquinas y 3.3. Respuesta Th1 y susceptibilidad a la in-
mastocitos no están deprimida. fección
Además de IL-4 e IL-13, otras citoquinas
(como IL-3 e IL-9) parecen estar también Las infecciones naturales por nemátodos in-
involucradas en la protección a helmintos intesti- testinales tienden a ser cuadros de tipo crónico y
nales. IL-3 parece importante en la protección muy pocos estudios han investigado los mecanis-
contra infecciones por Strongyloides y T. spiralis mos responsables de la cronicidad y susceptibili-
y la utilización de ratones transgénicos ha permi- dad a estas infecciones, aunque es cierto que cuan-
tido demostrar que IL-9 induce un aumento en la do la respuesta de tipo 2 está deprimida, la expul-
expulsión de parásitos tales como T. spiralis, T. sión de los gusanos está claramente retardada.
muris, N. brasiliensis y H. polygyrus. En infec- En condiciones naturales, hay factores como
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la coinfección y el estado nutricional del hospe- ciada con una respuesta Th2 y no con un cambio
dero, que pueden estar involucrados en el desa- significativo a una respuesta dominante de
rrollo de resistencia. Así por ejemplo, un estudio citoquinas Th1. Sin embargo, es importante notar
reciente de infección experimental por H. que la infección crónica puede asociarse con una
polygyrus, sugiere la importancia de la dieta regulación negativa de ciertas citoquinas Th2,
proteica en la resistencia a la infección, puesto que como IL-9 e IL-10 y una regulación negativa de
hospederos expuestos a dietas pobres en proteína la mastocitosis intestinal. La base para la regula-
muestran una depresión en la respuesta Th2 y un ción negativa de la respuesta de citoquinas tanto
marcado retardo en la expulsión de los gusanos para T. muris como H polygyrus permanece sin
en comparación con aquellos animales que reci- definir, pero se piensa que involucra la participa-
bieron dietas ricas en proteínas. ción de factores inmunomoduladores produci-
Algunos modelos de infección experimen- dos por el parásito. En el modelo de T. muris, hay
tal inducen de manera natural un cuadro crónico, evidencias que sugieren que el parásito puede
lo que ha permitido identificar importantes facto- producir una citoquina semejante a IFN-γ. El con-
res asociados a la susceptibilidad a la infección. cepto que los nemátodos del intestino producen y
En el modelo T. muris, mientras la mayor parte de secretan moléculas inmunomoduladoras se
las cepas de puras o “inbred” de ratones expulsan refuerza mediante la observación que extractos de
una moderada o alta carga parasitaria, unas pocas N. brasiliensis pueden inducir una fuerte respues-
cepas fallan en expulsar los gusanos y muestran ta Th2 en ausencia de infección.
altos niveles de parasitismo que evoluciona hacia El modelo de T. muris agrega otra faceta in-
una infección crónica. Está ahora claro, que en teresante a la inducción de infección crónica lue-
estos animales, se desarrolla una respuesta domi- go de la exposición a diferentes niveles de infec-
nante de tipo Th1, mediada por IFN-γ. La neutra- ción. En cepas de ratones resistentes, que normal-
lización de IFN-γ o IL-12 en cepas susceptibles mente expelen una moderada o alta cantidad de
de ratones induce la expulsión de los gusanos, con gusanos, ello no ocurre en infecciones producidas
un coincidente aumento en la respuesta de tipo por bajas cargas parasitarias (10 a 20 gusanos) y
Th2. Sin embargo, la administración de IL-12 a tienden a desarrollar cuadros crónicos. El hospe-
los animales resistentes induce susceptibilidad, la dero genera en estos casos una respuesta domi-
cual es dependiente de IFN-γ. Ratones “knockout” nante de tipo Th1, mientras las infecciones con
para IL-12 son altamente resistentes a la infec- alta carga parasitaria se genera una fuerte respuesta
ción, como lo son también los ratones deficientes Th2 y resistencia al desafío parasitario. Esta res-
en el receptor de IFN-γ. RKO. Trabajos más repuesta es además difícil de alterar aún después del
cientes han identificado a IL-18 como el princi- tratamiento con IL-12, que normalmente induce
pal factor involucrado en la inducción de sus- una fuerte respuesta Th1 y por lo tanto susceptibi-
ceptibilidad. Las cepas de ratones susceptibles lidad. Tomando estos datos en su conjunto, espe-
muestran una fuerte y temprana regulación posi- cialmente aquellos derivados de experimentos con
tiva de los mRNA para IL-18 en el intestino in- bajos niveles de infección y que más estrechamen-
fectado y esto es seguido por una regulación po- te reflejan lo que ocurre en infecciones naturales,
sitiva de IL-12 y IFN-γ. Ratones deficientes en es posible sugerir que bajos niveles de infección
IL-18 son altamente resistentes a la infección, y llevan a susceptibilidad mientras que repetidos
la administración de IL-18 induce cronicidad. En desafíos con bajos inóculos pueden llevar a re-
este caso, pareciera ser que más que inducir altos sistencia. Esta condición de “resistencia” es difí-
niveles de IFN-γ la IL-18 podría regular la pro- cil de alterar una vez que es adquirida.
ducción de IL-13 . La acción de IL-18 podría ser
muy sensible a la influencia del medio, ya que 4. Respuesta inmune frente a tremátodos in-
datos recientes muestran que IL-18 también pue- testinales
den promover la síntesis de IL-4 y el desarrollo
de respuesta Th2. Un paradigma en el estudio de la respuesta
En el modelo H. polygyrus, la mayoría de las inmune a tremátodos es el modelo de infección
cepas de ratones desarrollan infecciones prima- por ejemplares del género Schistosoma. Los
rias crónicas, aunque algunas cepas empiezan a esquistosomas son platelmintos tremátodos que
eliminar vermes varias semanas después de la in- viven en los vasos sanguíneos tanto en hospede-
fección. La infección primaria crónica está aso- ros mamíferos como en aves. La mayoría de los
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tremátodos son hermafroditas, pero los
esquistosomas presentan dimorfismo sexual. Su
ciclo evolutivo es indirecto e involucra la partici-
pación de caracoles como hospederos intermedia-
rios (figura 35-5). Los huevos son liberados por
las hembras hacia las deposiciones o la orina, de-
pendiendo de la especie de esquistosoma. En con-
tacto con el agua, se libera el miracidio móvil que
debe entrar en contacto con un caracol para conti-
nuar su ciclo biológico. En el caracol se desarro-
lla el esporocisto, que genera una segunda gene-
ración de esporocistos y luego las cercarias. Du-
rante este proceso de reproducción asexuada, el
parásito aumenta en número y en potencial
reproductivo. Por ejemplo, en Schistosoma
mansoni, un esporocisto es capaz de generar
200.000 cercarias. Las cercarias abandonan el ca-
racol y constituyen las formas infectantes que
penetran activamente la piel de su hospedero de-
finitivo. Esta fase del ciclo de vida va acompaña-
da de profundos cambios en la estructura y fisio-
logía de la cercaria, que se transforma en un esta-
dio denominado esquistosómula. La esquistosó-
mula migra vía vasos sanguíneos hacia los pul-
mones y desde allí al hígado, donde alcanza el
estado adulto. Los vermes adultos se aparean y
migran a las venas mesentéricas o hacia aquellas Figura 35-5. Ciclo biológico de Schistosoma. Las formas
localizadas en las cercanías de la vejiga. Los adul- larvales o cercarias que nadan libremente en aguas infectadas,
tos viven 5 a 6 años liberando entre 300 (S. pueden penetrar a través de la piel humana, convirtiéndose en
mansoni) y 3000 (S. japonicum) huevos por día. equistosómulas que vía circulatoria viajan a los pulmones y
luego al hígado, donde se convertirán en gusanos adultos y
Los huevos son depositados en vasos de pequeño maduros. Desde el hígado los parásitos migran hasta los vasos
diámetro donde quedan atrapados. El miracidio sanguíneos del intestino, donde luego de reproducirse
se desarrolla precozmente dentro del huevo, de sexualmente, darán origen a numerosos huevos que son ex-
manera que enzimas secretadas por este estadio pulsados a través de las deposiciones u orina del hospedero.
En el agua, los huevos dan origen a larvas ciliadas o miracidios
facilitan el pasaje del huevo a través de los tejidos que al entrar en un caracol, que actúa como hospedero inter-
hasta el intestino o la vejiga. mediario, se reproducen asexualmente generando esporoquistes
Los hospederos son infectados por un elevado a partir de los cuales se originan finalmente las cercarias
número de vermes y por un largo período de tiempo, infectantes para diversos hospederos mamíferos.
de esta forma la infección está asociada a una res-
puesta inmune amplia y variada. La penetración ini-
cial de las cercarias produce escasa respuesta, no
obstante en infecciones masivas puede existir res- 4.1. Inmunidad protectora frente a Schistosoma
puestas de hipersensibilidad local. Entonces, aunque
el desarrollo inicial puede estar asociado a reaccio- En el hombre, existen claras evidencias acer-
nes alérgicas, generalmente la primera respuesta evi- ca de la existencia de inmunidad adquirida y re-
dente es aquella derivada de la producción y libera- sistencia a la infección. El hecho que los indivi-
ción de los huevos. La liberación constante de estos, duos sobreviven en áreas endémicas con elevada
induce una fuerte respuesta de tipo celular y lleva transmisión y la observación de que los niveles de
también a procesos inmunopatológicos. Los gusa- infección llegan a un equilibrio después de la se-
nos adultos no son directamente patogénicos pero gunda década de vida, se consideran evidencias
son fuertemente inmunogénicos, al liberar antígenos de tal inmunidad. De igual manera se acepta que
de su tegumento, de su intestino y aquellos deriva- la habilidad para expresar esa resistencia se desa-
dos de su metabolismo. rrolla de manera paulatina y que los niveles de
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resistencia varían de un individuo a otro. Estudios Los eosinófilos unen moléculas de IgE mediante
en diferentes poblaciones humanas han mostrado receptores de baja afinidad FcεII, lo que les per-
que la resistencia a la infección aumenta con la mite adherirse a la larva reconociendo la porción
edad y que la respuesta inmune específica incluye Fc de las IgE que se han unido a antígenos larvales
la participación de IgE, eosinófilos, IL-4 e IL-5, específicos. En la rata, se han descrito reacciones
lo que se asocia además a bajos niveles de ADCC con participación de eosinófilos e IgG2a
reinfección luego de la quimioterapia. que se producen durante las primeras 6 semanas
En modelos animales existe clara evidencia de la infección, puesto que más tarde IgE será el
que la inmunidad depende del tipo de hospedero anticuerpo predominante. Las IgG reconocen
utilizado. Frente a la infección experimental por antígenos presentes en el tegumento tanto en lar-
S. mansoni, monos y ratones desarrollan una fuerte vas como en parásitos adultos, y esto explica por
respuesta inmune y aunque la infección primaria qué los gusanos adultos generan inmunidad con-
persiste por varios meses, los individuos se hacen tra las larvas. Los anticuerpos IgG2a pueden tam-
resistentes a las reinfecciones. En ratas se desa- bién unirse a mastocitos y la destrucción de
rrolla una respuesta inmune capaz de erradicar la esquistosómulas por eosinófilos y anticuerpos es
infección primaria y de inducir una fuerte resis- estimulada en presencia de mastocitos Este fenó-
tencia a la reinfección. Los monos Rhesus son meno que se asocia a la liberación de tetrapéptidos
capaces de destruir la mayoría de los vermes de como el factor eosinofílico quimiotáctico de ana-
S. mansoni producidos en la reinfección, pero son filaxis (ECF-A). La participación de IgA en reac-
incapaces de eliminar aquellos establecidos en la ciones de ADCC con participación de eosinófilos
infección inicial. De igual manera, la inmunidad también ha sido descrita y luego de adherirse a la
a la infección puede estimularse por exposición larva, estas células quedan en estrecho contacto
de los monos a cercarias irradiadas o por trasplan- con el tegumento del parásito, y sus gránulos de
te de vermes adultos al sistema vascular. Así la secreción de la célula se localizan adyacentes a la
inmunidad a la reinfección puede ser estimulada zona de contacto, se fusionan con la membrana
por los gusanos adultos para actuar contra los es- celular y su contenido se vierte sobre el verme.
tadios larvales, sin afectar a los adultos (fenóme- Estos gránulos contienen una variedad de media-
no de inmunidad concomitante). Hoy se acepta que dores incluyendo enzimas como peroxidasa y
la inmunidad concomitante frente a esquistosomas fosfolipasa B y la llamada proteína básica princi-
se manifiesta en diferentes hospederos y resulta pal, todas las cuales tienen efecto deletéreo para
por lo tanto particularmente interesante estable- el tegumento. Así la permeabilidad del tegumento
cer los mecanismos que permiten a los vermes parasitario es seriamente alterada y los eosinófilos
adultos evadir la respuesta inmune y los mecanis- pueden también invadir activamente el tegumen-
mos efectores que conducen a la destrucción de to. Se ha demostrado además que los eosinófilos
las cercarias. pueden expresar moléculas coestimulatorias como
Estudios in vitro han mostrado que una va- CD28 y CD86 y participan en la secreción selec-
riedad de mecanismos efectores que involucran tiva de citoquinas Th1 como IL-2 y IFN-γ.
células y anticuerpos, pueden actuar contra las lar- Estudios inmunoepidemiológicos han mos-
vas de equistosomas. Así, las esquistosómulas trado, que en el hombre existe correlación entre
pueden ser destruidas por lisis mediada por com- niveles de anticuerpos IgE y resistencia a la
plemento. La interacción de las células efectoras reinfección. Se ha mostrado que eosinófilos,
con las larvas opsonizadas ocurre por medio de macrófagos y plaquetas son capaces de matar
receptores para Fc y/o C3b. Aunque varias célu- esquistosómulas en presencia de IgE. Existe una
las actúan contra las esquistosómulas in vitro, los fuerte evidencia de que reacciones de ADCC me-
tipos celulares más importantes son macrófagos y diadas por IgE pueden ser un componente impor-
eosinófilos tante de la inmunidad protectora aunque otros
mecanismos también podrían participar y la ma-
4.1.1. Eosinófilos yor o menor participación de un determinado me-
canismo puede depender del modelo utilizado.
Cuando las larvas se exponen a anticuerpos
específicos y se activa el sistema del complemen- 4.1.2. Macrófagos
to, la adherencia de eosinófilos a la larva puede
ocurrir por medio de receptores para Fc o C3b. La muerte de esquistosómulas por macró-
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fagos parece operar de dos maneras distintas. Por 4.3. Inmunidad en el ratón
un lado, linfocitos T activados liberan IFN-γ que
va a estimular macrófagos con la consiguiente El ratón es un hospedero permisivo, en el que
producción de metabolitos tóxicos y óxido nítri- se produce la sobrevida y establecimiento de po-
co. El segundo mecanismo es específico y requie- blaciones reproductivas del verme. La infección
re la participación de anticuerpos IgE, los cuales primaria, lleva al desarrollo de patología hepáti-
no son opsonisantes pero permiten la adhesión del ca, seguida de la formación de granulomas alre-
macrófago y la liberación de enzimas sobre el te- dedor de los huevos que quedan atrapados en los
gumento del parásito. capilares mesentéricos. Las infecciones secunda-
Entre los mecanismos efectores contra rias producen bajo número de vermes adultos, pero
esquistosómulas se encuentra la citotoxicidad de- este fenómeno resulta en parte por la formación
pendiente de anticuerpos (DAC) que resulta muy de anastomosis portal y cava que permite una
eficiente contra larvas jóvenes. Esta susceptibili- menor población de vermes en el hígado. Los ra-
dad de las larvas decrece con el tiempo, puesto tones pueden sin embargo ser inmunizados con
que el rápido desarrollo de resistencia a la ADCC cercarias y esquistosómulas irradiadas las cuales
es fundamental en la sobrevida del parásito, aún no maduran a adultos productores de huevos per-
en infecciones primarias. Aunque anticuerpos no mitiendo el estudio de la inmunidad en ausencia
están presentes en las etapas iniciales de la infec- de patología.
ción, la activación de la ruta alterna del sistema En el ratón, la inmunidad inducida por vacu-
del complemento resulta en la adherencia de C3b. nación es generalmente T-dependiente con parti-
La pérdida de la susceptibilidad se correlaciona cipación de subpoblaciones T CD4+. Las reaccio-
con alteraciones en la antigenicidad de la superfi- nes de ADCC (con participación de IgG) y la acti-
cie de las esquistosómulas, que conducen a dis- vación de macrófagos por linfocitos T serían los
minuir la unión de anticuerpos y de factores del principales mecanismos efectores, pero es posi-
complemento y el tegumento del parásito mues- ble que la relevancia de los distintos mecanismos
tra una mayor resistencia a los mecanismos efectores dependa de la localización tisular del
efectores de inmunidad. Aunque esquistosómulas parásito. Eosinófilos y neutrófilos han sido impli-
son el principal blanco de la respuesta protectora, cados en la respuesta a nivel de la piel mientras
estadios posteriores (postpulmonares) e incluso que macrófagos juegan un papel central en el hí-
adultos pueden ser afectados por la inmunidad. gado. Estudios de respuesta inmune frente a esta-
dios pulmonares sugieren que la respuesta Th1 es
4.2. Inmunidad en la rata de fundamental importancia. Luego de la
estimulación antigénica, estas células liberan IFN-
La rata es un hospedero relativamente no per- γ que activa macrófagos los que interactúan con
misivo, que desarrolla una fuerte respuesta inmu- esquistosómulas y otras citoquinas, para iniciar el
ne a la infección primaria, de manera que los gu- desarrollo de un foco inflamatorio en el cual la
sanos adultos no se reproducen y son rápidamen- larva es atrapada. El mecanismo de daño mediado
te eliminados. De igual modo, la infección prima- por macrófagos involucra intermediarios reactivos
ria confiere inmunidad al desafío o a la reinfección de oxígeno, nitrógeno y TNF. La inmunidad es
y los pulmones parecen ser el principal sitio de reducida si los ratones infectados se tratan con
destrucción de parásitos. Esta inmunidad es de- anticuerpos anti-IFN-γ.
pendiente de células T, pero se ha mostrado la par- Estudios de inmunoprotección han mostra-
ticipación de anticuerpos y la actividad protecto- do que en el hombre y la rata la protección estaría
ra de sueros inmunes está asociada a los isotipos dada por mecanismos efectores mediados por
IgG2a e IgE. Datos obtenidos in vitro muestran subpoblaciones Th2, mientras que en el ratón la
que estos anticuerpos participan en reacciones de inmunidad protectora estaría dada por Th1 con la
tipo ADCC en las cuales los eosinófilos juegan un participación de IFN-γ e IL-12. Estudios in vitro
papel central. Estudios de vacunación utilizando utilizando tanto células humanas como de ratón,
el antígeno recombinante Sm28GST, han confir- sugieren que reacciones ADCC participan en la
mado la participación de IgE en la inmunidad pero muerte de las larvas de esquistosoma. Este meca-
han mostrado también que IgA pueden participar nismo parece mediado por IgE con la participa-
en la protección citotóxica dependiente de ción de células efectoras como eosinófilos y
eosinófilos plaquetas. Dado la importante contribución de IL-
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4 e IL-5 en la inducción de anticuerpos IgE y de 4.4. Interferencia con la inmunidad
eosinofilia, parece claro que una respuesta Th 2
es un respuesta protectora en estas especies. En las poblaciones humanas expuestas a la
Estudios de protección con cercarias irradia- infección, el desarrollo de inmunidad es lento y
das muestran claramente la importancia de célu- depende de la intensidad de la transmisión. Estu-
las T CD4+ en la resistencia, la cual es claramen- dios serológicos de reinfectación realizados en es-
te dependiente de IFN-γ. De igual manera, la in- colares tratados en áreas endémicas, sugieren que
munidad es reducida en ratones deficientes en cé- el estado de inmunidad es determinado por el ba-
lulas CD4+, células B, IFN-γ o IL-12, sugiriendo lance entre los anticuerpos IgG4 e IgE. La
que linfocitos Th1 son particularmente importan- reinfección está significativamente reducida en los
tes en el desarrollo de una respuesta efectiva con- niños con altos niveles de IgE contra gusanos adul-
tra el parásito. De hecho, ratones vacunados que tos y mucho más reducida en aquéllos con altos
desarrollan una respuesta Th1 y altos niveles de niveles de IgG4. La explicación para este fenó-
IL-12 resultan fuertemente protegidos. Aunque los meno se asocia al hecho que IgG4 bloquea las
mecanismos que operan en esta protección me- reacciones ADCC en que participan los eosinófilos
diada por Th 1, no están definidos, existe fuerte y podría además interferir con otros mecanismos
evidencia que sugiere que podría estar mediada efectores (degranulación de mastocitos, por ejem-
por IFN-γ, TNF-α, macrófagos activados y célu- plo). El concepto de anticuerpos bloqueadores está
las endoteliales. No obstante, cuando ratones re- bien documentada en la relación esquistosoma-
ciben una vacunación de refuerzo mediante hospedero, y en humanos se ha mostrado que
cercarias irradiadas, se desarrolla una mezcla de anticuerpos IgM dirigidos contra epítopos parti-
respuestas Th1/Th 2 con producción de culares de la superficie de esquistosoma, bloquean
anticuerpos parásito-específicos y capaces de pro- efectivamente la unión de IgG dirigidas contra el
teger mediante transferencia pasiva a ratones no mismo epítopo. En ratas el monoclonal IgG2c
inmunizados. Estas observaciones, sugieren que bloquea la muerte por eosinófilos dependiente del
respuestas efectoras Th1 y Th 2 podrían contri- monoclonal IgG2b mientras que en el ratón
buir a la inmunidad protectora de ratones vacuna- monoclonales IgM bloquean la ADCC mediada
dos con múltiples dosis. Características importan- por IgG. Estos anticuerpos bloqueadores mues-
tes de la respuesta inmune frente a esquistosomas tran especificidad por epítopos de carbohidratos
se han conocido mediante el uso de ratones doble presentes tanto en la larva como en los huevos.
“knockout” que muestran respuestas altamente Estos anticuerpos originados en respuesta a la in-
polarizadas para Th 1 (ratones deficientes en IL- fección por adultos productores de huevos, inter-
10/IL-4) o Th 2 (ratones deficientes en IL-10/IL- fieren cruzadamente la inmunidad contra las lar-
12). Los hallazgos más significativos se observa- vas invasivas.
ron en animales deficientes en IL-10, los cuales La síntesis de un particular isotipo de
desarrollaron respuesta protectora tanto Th1 como anticuerpos es regulada por citoquinas produci-
Th 2, con altos títulos de anticuerpos específicos, das por células T. Trabajos de infección por
alta proliferación de linfocitos, elevada respuesta esquistosoma en el ratón, han mostrado que el
inflamatoria pulmonar y aumento en el número comienzo de la produccción de huevos esta aso-
de células productoras de IFN-γ e IL-4. Estos ciada a un cambio desde una respuesta predomi-
resultados sugieren que, en esquistosoma, una nantemente Th1 a una de tipo Th2, una regula-
óptima respuesta inmune no se basa en una res- ción negativa de las citoquinas IFN-γ e IL-2 y
puesta polarizada Th1 o Th2, sino más bien en la un aumento en la producción de IL-4, IL-5 e IL-
inducción de ambas. Estos hallazgos son seme- 10. Muchos de los eventos inflamatorios que ocu-
jantes a los obtenidos en animales tratados con rren en ese momento se pueden asociar al patrón
IL-12, los cuales al ser expuestos a cercarias irra- de citoquinas secretado y el balance de citoquinas
diadas, muestran un aumento significativo de las también determina la producción de determina-
respuestas humoral y celular, aunque a diferencia dos isotipos de anticuerpos.
de lo que ocurre con ratones deficientes en IL-10, La esquistosomiasis es una de las pocas
la IL-12 induce una respuesta polarizada de tipo parasitosis en las que la patología asociada a la
Th1. infección es causada no por la presencia directa
del gusano sino por la respuesta inmune e
inflamatoria del hospedero. En el daño
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inmunopatológico, destacan la dermatitis que si- Carruthers, V. B., “Host cell invasion by opportu-
gue a la penetración de las cercarias, la alergia nistic pathogen Toxoplasma gondii”, Acta Tropica
aguda causada por la migración a través del pul- 81: 111-122, 2002.
món, la fase alérgica tardía observada en infec-
ciones por S. mansoni y las enfermedades por Helmby, H., Grencis, R.K. “IL-18 regulates intes-
inmunocomplejos. No obstante la entidad mejor tinal mastocytosis and Th2 cytokine production
estudiada son las reacciones asociadas a la infec- independently of IFN-γ during Trichinella spiralis
ción crónica con S. mansoni la cual es responsa- infection”, J. Immunol. 169: 2553-2560, 2002.
ble de los importantes cambios que se observan
en el hígado. Aunque algunos huevos son elimi- Kaufmann, S.H.E., Sher, A., Ahmed, R. Immu-
nados por las heces del hospedero, otros, aunque nology of Infectious Diseases, American Society
no permanecen en las venas y capilares mesen- of Microbiology, 2002; 495.
téricos son capaces de pasar a la vena porta y
llegar al hígado donde quedan atrapados en las Theodos, C.M., “Innate and cell-mediated immune
vénulas presinusoidales. En huéspedes crónica- response to Cryptosporidium parvum”, Adv.
mente infectados, los miracidios secretan poten- Parasitol. 40:87-119, 1998.
tes inmunógenos (Antígenos solubles del huevo,
ASH), estimulando hipersensibilidad retardada, Wakelin, D., Immunity to parasites. How para-
por lo que cada huevo es foco de producción del sitic infections are controlled, Second edition.
granuloma. Los ASH son liberados por los poros Cambridge University Press, 1996; 204.
del huevo y corresponden a estructuras complejas
de proteínas, lipoproteínas, carbohidratos y
glicolípidos. Algunos de estos componentes son
reconocidos por linfocitos TCD4 que participan
en la iniciación, desarrollo y modulación del
granuloma. Los linfocitos T helper y sus
citoquinas al aumento local de macrófagos,
eosinófilos y otras células inflamatorias, que se
localizan alrededor de cada huevo produciendo un
foco de inflamación. Los ASH parecen promover
una selectiva respuesta Th2 con liberación de IL-
5 responsable de la acumulación de eosinófilos.
La respuesta inmune lleva entonces a la forma-
ción de granulomas, pero también protege del daño
por hepatotoxinas liberadas por los miracidios. El
ataque inmunológico consigue destruir los
miracidios y ratones deficientes en linfocitos T
aunque no forman granulomas sufren severo daño
hepático, caracterizado por necrosis en las áreas
inmediatamente vecinas a los huevos atrapados.
LECTURAS SUGERIDAS
Bogdan, C., Rollinghoff, M. “How do protozoan

parasites sirvive inside macrophages?, Parasitol.
Today 15: 22-28, 1999.
Brenier-Pinchard, M,P. et al., “Chemokines in

host-protozoan-parasite interactions”, Trends in
Parasitol. 17: 292-296, 2001.
585
Sin título-2 585 5/26/06, 10:26 AM

586
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Capítulo 36
VACUNAS
Ulises Vergara y Rosario Billetta
1. Introducción
2. Vacunas naturales o tradicionales
3. Vacunas recombinantes
4. Vacunas anti-idiotípicas
5. Vacunas sintéticas
6. Vacunas de DNA
7. Vacunas Genómicas
8. Adyuvantes, inmunomoduladores e
inmunogenicidad
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RESUMEN
La vacunación contra diversas enfermedades infecciosas ha sido uno de los mayores éxitos
en el campo de la inmunología desde los tiempos de Jenner. Bacterias y virus vivos atenuados
que conservan su capacidad de replicación y su inmunogenicidad pero no su patogenicidad;
bacterias y virus muertos que sólo conservan su inmunogenicidad; fraccciones antigénicas puri-
ficadas; proteínas, subunidades proteicas y toxinas bacterianas se han utilizado como vacunas
para controlar diversos agentes infecciosos. Sin embargo, aún cuando estas vacunas han logrado
disminuir la incidencia, morbilidad y mortalidad de un gran número de enfermedades infeccio-
sas, existen todavía enfermedades que son difíciles de prevenir y controlar por medios profilác-
ticos, porque no existe una vacuna disponible, o las que existen son menos seguras o menos
efectivas de lo deseado. Carencia de suficiente material a partir de fuentes naturales de material
biológico, efectos colaterales adversos, inestabilidad de la vacuna en su forma atenuada, material
biológico contaminante, baja inmunogenicidad de sus componentes y dificultades en su produc-
ción, almacenamiento transporte y forma de administración, son algunas de las causas que expli-
can la ausencia o baja efectividad de algunas de nuestras vacunas. Los recientes avances en
biotecnología ofrecen hoy en día nuevas posibilidades para el desarrollo de vacunas efectivas
basadas en antígenos recombinantes altamente purificados, bacterias o virus recombinantes vi-
vos, anticuerpos anti-idiotípicos que representan imágenes internas de epítopes protectores, frag-
mentos peptídicos químicamente sintetizados y vacunas génicas y genómicas de DNA, que codi-
fican respectivamente, la expresión de antígenos protectores individuales o del repertorio antigénico
completo en forma de genes
1. INTRODUCCIÓN 200 años y el proceso ha sido bastante conser-

vador desde los tiempos de Jenner, manteniendo
La vacunación contra diversas enfermedades el objetivo de inducir una respuesta inmune hu-
infecciosas ha sido uno de los mayores logros en moral y/o celular que proporcione protección fren-
el campo de la inmunología desde 1798 cuando te a la infección natural con el patógeno. El
Edward Jenner demostró que la inoculación de inmunógeno de elección ha sido siempre el agen-
virus vivos provenientes del ganado (poxavirus te infeccioso muerto o atenuado y sólo en los últi-
del género vaccinia) proporcionaba inmunidad mos 15 años se han hecho esfuerzos para reem-
contra la viruela en la especie humana. Este im- plazar las vacunas que utilizan el patógeno com-
portante hallazgo se basó en la observación, du- pleto por vacunas basadas en subunidades o por-
rante una epidemia de viruela, de la ausencia de ciones no viables o no infecciosas que contengan
la enfermedad en ordeñadoras que habían perma- fraccciones antigénicas altamente purificadas y
necido en contacto con el ganado bovino. Hoy todavía capaces de inducir una respuesta inmune
día estos virus están siendo genéticamente protectora. El uso de vacunas de subunidades del
manipulados in vitro y utilizados como vectores agente infeccioso ha resultado atractiva porque
para la introducción de diversos determinantes evita los problemas asociados a la inactivación
antigénicos de manera que su expresión, en las o atenuación incompleta del patógeno y la
células infectadas con el virus recombinante, con- posibilidad de contaminación biológica durante
duzca al desarrollo de una respuesta inmune pro- el cultivo del agente infeccioso a gran escala.
tectora contra el agente infeccioso del cual deri- Inmunógenos específicos pueden ahora producir-
van esos antígenos. se a través de la purificación de proteínas indivi-
La vacunación para prevenir diversas enfer- duales, el uso de anticuerpos anti-idiotípicos que
medades infecciosas ha sido practicada por casi representan imágenes internas de ciertos deter-
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minantes antígenos del agente infeccioso o de respuesta a la estimulación antigénica y se re-
mediante la utilización de la tecnología del DNA quiere, muchas veces, una mayor cantidad de
recombinante y la síntesis química de péptidos. antígeno para lograr la respuesta inmune deseada.
Una vez aislado e identificado un agente in- Luego de identificados los inmunógenos que
feccioso, cualquier intento de generación de una pueden servir de base para la generación de una
vacuna contra la enfermedad debe considerar una vacuna contra un agente infeccioso, el desarrollo
serie de factores que pueden favorecer o compli- de la misma debe cumplir 3 rigurosas etapas o fa-
car el desarrollo de la misma. Estos factores pue- ses, que ponen a prueba su eficacia, seguridad y
den estar relacionados con el agente infeccioso, estabilidad, antes de su uso masivo para el control
con la enfermedad y con sus posibilidades de con- de la enfermedad (tabla 36-3)
trol o erradicación (tablas 36-1 y 36-2). Además,
la inducción de una respuesta inmune protectora
humoral y/o celular en los individuos vacunados, 2. VACUNAS NATURALES O TRADICIO-
dependerá en último término de la naturaleza y NALES
forma fisicoquímica de los antígenos utilizados,
de su forma de administración, del destino La defensa contra una gran variedad de agen-
metabólico de los mismos y del repertorio genético tes infecciosos depende de la habilidad del siste-
del individuo y los diversos mecanismos de regu- ma inmune para reconocer, neutralizar y eliminar
lación de la respuesta inmune. La edad del indivi- antígenos del agente patógeno y el objetivo de la
duo es tambien un factor a considerar en la induc- vacunación es inducir una adecuada respuesta in-
ción de respuesta inmune a una vacuna, puesto mune protectora contra la infección natural. Así,
que existen diferencias en la capacidad de respues- bacterias y virus vivos atenuados que conservan
ta en los primeros meses de vida y durante la su capacidad de replicación y su inmunogenicidad,
senescencia. La presencia de altos niveles de pero no su patogenicidad; bacterias y virus muer-
anticuerpos maternos adquiridos en forma pasiva tos que sólo conservan su inmunogenicidad; frac-
en los primeros meses de vida, dificultan o alte- ciones antigénicas purificadas; proteínas,
ran la respuesta inicial a algunas vacunas. En los subunidades proteicas y toxinas bacterianas, se
ancianos existe una disminución en la capacidad han utilizado como vacunas para controlar diver-
Tabla 36-1. Factores que favorecen el desarrollo de vacunas efectivas
Del agente infeccioso
• Sólo uno o pocos serotipos, con poca variación antigénica

• Patógeno moderada o escasamente infeccioso
• Antígenos con epítopos B y T fácilmente identificables
• Inmunidad sistémica de fácil inducción.
De la enfermedad
• Infección induce respuesta inmune protectora

• Existencia de un modelo animal que reproduce la evolución de la infección y/o la enfermedad.
De la erradicación
• La infección está limitada a humanos y no existen otros reservorios naturales

• La infección induce un cuadro clínico característico y no existen infecciones subclínicas o porta-
dores sanos.
• Existencia de un marcador simple de vacunación exitosa
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Tabla 36-2. Factores que complican el desarrollo de vacunas efectivas
Del agente infeccioso
• Existencia de variación antigénica y por lo tanto múltiples serotipos

• El patógeno es altamente infeccioso
• Eventual variación en el tropismo del patógeno
• Patógeno provisto de mecanismos de evasión de la respuesta inmune
De la infección
• Infección puede ser transmitida por células infectadas que no expresan antígenos del patógeno
• Integración de genes del patógeno en el genoma del hospedero
• La infección no induce una respuesta inmune protectora
• Inducción de mecanismos de supresión de la respuesta inmune
• Infección y/o destrucción de subpoblaciones linfocitarias
• Ausencia de un modelo animal que simule la infección o la enfermedad en humanos
De la erradicación
• Existencia de reservorios naturales
• Distintas manifestaciones clínicas de la infección o enfermedad y existencia de formas subclínicas
y de portadores sanos.
Tabla 36-3. Fases en el desarrollo de una vacuna
Fase I : Corresponde a la fase de seguridad que determina la ausencia de reacciones adversas en vo-
luntarios inoculados
Fase II: Corresponde al desafío, de los voluntarios inmunizados, con el agente infeccioso en condi-
ciones restringidas. Esta fase requiere la disponibilidad de drogas para control del patógeno y
eventual tratamiento de los voluntarios.
Fase III: Exposición de los voluntarios inmunizados, a la infección natural con el patógeno en una
región en la que la infección o la enfermedad es endémica. Requiere tambien drogas para el
control del patógeno y eventual tratamiento de los voluntarios
sos agentes infecciosos. Sin embargo, aún cuan- cia de suficiente material biológico a partir de
do estas vacunas convencionales han ciertamente fuentes naturales, efectos colaterales no deseados,
disminuido la incidencia, morbilidad y mortali- efectos nocivos por insuficiente atenuación o ines-
dad de un gran número de enfermedades infec- tabilidad de la vacuna en su forma atenuada, baja
ciosas, existen todavía enfermedades que son di- inmunogenicidad de sus componentes, presencia
fíciles de controlar y prevenir por medios profi- de material biológico contaminante y dificultades
lácticos, ya que no existe una vacuna disponible en la producción, almacenamiento, transporte y
o las que existen son menos seguras o menos efec- forma de administración de la vacuna. Una vacu-
tivas que lo deseado. Las razones que explican na ideal debe desde luego reproducir la respuesta
la ausencia de estas vacunas son desde luego di- inmune protectora inducida por la infección natu-
versas y entre ellas podemos mencionar la caren- ral, debe ser estable y carecer de efectos colatera-
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les adversos, pero además debe ser de bajo cos- que no sólo simulan la infección natural, sino que
to, sin dificultades de producción, almacenamiento además se multiplican en el receptor producien-
o transporte y debe ser fácil de administrar en los do gran cantidad de antígenos.
distintos individuos. Muchas de las vacunas con- La atenuación del agente infecioso puede
vencionales actualmente disponibles no son idea- obtenerse por modificación de las condiciones de
les debido a su alto costo de producción (hepatitis crecimiento o de cultivo del patógeno (como por
B, rabia), por sus potenciales efectos tóxicos o ejemplo bacilo de Calmette y Guèrin de
virulentos (pertussis, rubéola) o por la inadecua- Mycobacterium tuberculosis), pero una vacuna
da protección inducida (cólera, tifus). atenuada puede tambien generarse mediante la
Ahora bien, la preparación de una vacuna a utilización de especies o variantes distintas del
partir de fuentes naturales de material biológico, patógeno y que son virulentas para hospederos
requiere la obtención del agente patógeno a partir heterólogos, distintos de aquél que se pretende
de fuentes humanas o de animales infectados, su proteger con la vacuna. El ejemplo más conocido
identificación y caracterización, su mantención en es el del virus vaccinia (cowpox de bovinos) que
cultivo de tejidos o diversos medios de cultivo in protege contra la viruela humana y representa uno
vitro y los variados procesos de atenuación o de los éxitos más espectaculares en el control de
inactivación. una enfermedad infecciosa, la que se considerada
Prevenir la replicación del agente infeccio- erradicada desde 1980. En este grupo de vacunas
so (mediante tratamiento con luz ultravioleta, atenuadas se encuentran también las vacunas con-
fenol, formaldehido, beta propiolactona, imina) pa- tra sarampión, rubéola, parotiditis, fiebre amari-
rece la forma más simple de destruir su caracter lla y la vacuna Sabin contra poliomielitis.
patogénico, pero el proceso de inactivación no debe Algunas bacterias producen enfermedad no
alterar la estructura antigénica necesaria para la in- por efecto directo sino por la liberación de toxinas
ducción de una respuesta inmune protectora. La que pueden tener enormes efectos destructivos en
inmunidad conferida por microorganismos muer- órganos o tejidos distintos del sitio de infección.
tos (difteria, tétanos, tifoidea, influenza, rabia, vi- Así, exotoxinas bacterianas inactivadas por calor o
rus polio Salk) no induce inmunidad permanente químicamente modificadas por tratamiento ácido,
con una única dosis y requiere dosis repetidas y tratamiento con formaldehido o con enzimas
refuerzos para mantener la respuesta inmune pro- proteolíticas, han dado origen a vacunas basadas
tectora. La inmunidad conferida por las vacunas en este producto detoxificado denominado toxoide.
inactivadas o muertas es en muchos casos menor Vacunas basadas en toxoides de diphteria y tetanus
que la conferida por las vacunas vivas, ya que la inducen una respuesta de anticuerpos protectores
replicación del agente infeccioso permite la expo- que neutralizan la toxina y facilitan su fagocitosis.
sición a una dosis mayor y sostenida de antígeno, Las vacunas naturales o tradicionales pueden,
al tiempo que favorece el procesamiento y la pre- en general, agruparse en:
sentación de los mismos. Este fenómeno es parti-
cularmente importante en las enfermedades virales, • Aquéllas que utilizan microorganismos
que requieren de la infección celular para la expre- inactivados o muertos, por ejemplo cólera
sión de ciertos antígenos y una adecuada inducción (Vibrio cholerae), fiebre tifoidea (Salmonella
de respuesta inmune celular. Las vacunas naturales tiphi), tos convulsiva (Bordetella pertussis)
inactivadas o no infecciosas entonces, son en gene- y antrax.
ral bastante estables y seguras pero requieren habi-
tualmente de altas dosis de inoculación por vía • Las que utilizan patógenos atenuados como
parenteral, lo que puede provocar reacciones de hi- poliomielitis, parotiditis, fiebre amarilla, in-
persensibilidad. fluenza, varicela, adenovirus, viruela y tuber-
El proceso de atenuación de un patógeno pre- culosis
tende producir un agente infeccioso modificado
que mantenga o imite la conducta natural del mi- • Las que utilizan toxinas detoxificadas
croorganismo original, pero sin causar enferme- (toxoide) ya sea solas o unidas a un carrier
dad. Así ha ocurrido con las vacunas contra sa- proteico. En este grupo se encuentran las va-
rampión, rubéola, fiebre amarilla, poliomielitis cunas contra botulismo (Clostridium
(Sabin) y parotiditis que confieren inmunidad de botulinum), difteria (Corynebacterium
por vida o permanente con una sola dosis, puesto diphteriae) y tétanos (Clostridium tetani)
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• Las que utilizan material capsular soluble 3. VACUNAS RECOMBINANTES
(como polisacáridos de Streptococcus
pneumoniae, Neisseria meningitidis, La preparación de cualquier vacuna contra
Salmonella typhi y Haemophilus influenzae) un agente infeccioso requiere la obtención del
patógeno a partir de fuentes humanas o animales
• Las que utilizan fracciones antigénicas puri- de material biológico, y su mantencion en cultivo
ficadas, como por ejemplo influenza y para la producción de los antígenos implicados en
antígeno de superficie de hepatitis B. la inducción de una respuesta inmune protectora.
Sin embargo, muchos agentes infecciosos son di-
Ahora bien, cuando se inocula un agente in- fíciles o imposibles de cultivar y otros ofrecen un
feccioso, ya sea vivo o muerto o partes substanciales muy bajo rendimiento, aún despues de cultivos ma-
de él, se está introduciendo en los individuos sivos a gran escala. Este es el contexto en el que
material biológico que es, en gran parte, descono- los recientes avances en biotecnología ofrecen sor-
cido y altamente mutable. Si el agente infeccioso prendentes y atractivas posibilidades para la pro-
ha crecido en cultivo de tejidos, es imposible ga- ducción de una nueva generación de vacunas efec-
rantizar la ausencia de contaminación biológica tivas contra diversos agentes infecciosos.
y mientras más aprendemos sobre mutabilidad y Una aproximación para generar grandes can-
latencia viral, mayor debe ser la preocupación tidades de un inmunógeno proteico específico, es
por los efectos a largo plazo de nuestras vacunas. la utilización de la tecnología del DNA recom-
El hecho es que junto a los determinantes binante que involucra el aislamiento del DNA que
antigénicos indispensables para la inducción de una codifica la expresión del antígeno protector, su
respuesta inmune protectora, estamos tambien in- inserción en un vector de clonamiento
troduciendo al vacunar, moléculas innecesarias e autorreplicante (plásmido o virus) y su amplifica-
irrelevantes que pueden ser inmunogénicas y por ción en bacterias (E. coli), levaduras o células de
lo tanto capaces de activar linfocitos T supresores mamífero (figura 36-1). Si el DNA no está dispo-
o de inducir la síntesis de anticuerpos que partici- nible, se purifica el RNA mensajero del agente
pan en la formación de complejos inmunes que infeccioso y se le utiliza como molde para gene-
pueden tener algún efecto patogénico al fijarse en rar por transcripción inversa un DNA complemen-
diversos órganos o tejidos. tario (cDNA) que se insertará en el vector de
Partiendo del supuesto que la respuesta in- clonamiento.
mune contra un agente infeccioso está en su ma- En general, las estrategias utilizadas para la
yor parte dirigida contra moléculas de la super- introducción de DNA extraño en un vector de
ficie del agente patógeno, los esfuerzos de los clonamiento autorreplicante pueden conducir a la
investigadores se han concentrado en la identi- la construcción de una biblioteca genómica
ficación y caracterización de estos antígenos con (genoteca) a partir del DNA del agente infeccioso
el objeto de reemplazar las vacunas que utilizan (figura 36-1), o la generación de una genoteca de
agentes infecciosos vivos o muertos, por frac- cDNA a partir del RNA mensajero del mismo pa-
ciones antigénicas altamente purificadas, por tógeno.
antígenos recombinantes, por fragmentos
peptídicos químicamente sintetizados o por la La construcción de una genoteca implica:
inoculación directa del DNA o RNA que codifi-
ca la expresión de un antígeno protector. Ade- a) Elección y purificación del vector de
más algunos virus están siendo genéticamente clonamiento, plásmido o virus, más adecuado.
manipulados para eliminar del genoma aquellas
b) Purificación de DNA total, del agente infec-
regiones que codifican la expresión de los fac-
cioso
tores responsables de su virulencia, y de esta
manera desarrollar vacunas efectivas, de virus c) Tratamiento, bajo condiciones apropiadas, del
vivos que conserven intacta su capacidad de vector de clonamiento y del DNA del agente
replicación y su capacidad para inducir una res- infeccioso (DNA foráneo o extraño) con la
puesta inmune protectora, al tiempo que care- misma enzima o nucleasa de restricción. De
cen de la posibilidad de revertir a una forma esta manera el DNA circular del vector de
patogénica. clonamiento se convierte en una estructura li-
neal, mientras el DNA del agente infeccioso
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Figura 36.1. Estrategia general utilizada en la tecnología del DNA recombinante. El vector de clonamiento elegido es el
plásmido pBR322 que confiere resistencia a los antibióticos ampicilina y tratraciclina, a las bacterias que lo poseen o lo incorpo-
ran. Tanto el plásmido como el DNA del agente infeccioso se tratan con la misma enzima de restricción para convertir el DNA
circular del plásmido en una estructura abierta y lineal, mientras en el DNA del agente infeccioso se generan diversos fragmentos
de restricción. El vector de clonamiento y los fragmentos de DNA se mezclan y unen luego en presencia de la enzima DNA ligasa,
para generar vectores recombinantes que incorporan algún fragmento de DNA (gen) extraño del agente infeccioso (la inserción del
DNA extraño, en el gen de resistencia a ampicilina, determina la inactivación del mismo). La amplificación de los plásmidos en
cultivos de E. coli, permitirá seleccionar bacterias tetracilina resistentes por incorporación de un plásmido recombinante.
se convierte en pequeños "fragmentos de res- d) Mezcla y unión de la forma lineal del vector
tricción", algunos de los cuales contendrán el de clonamiento y con los fragmentos de DNA
gen de interés. Como alternativa, la fragmen- extraño, y tratamiento con la enzima DNA
tación del DNA del agente infeccioso se pue- ligasa para generar vectores recombinantes
de obtener por metodos físicos como ruptura (clonamiento del DNA).
de las moléculas de DNA por pasaje a través
e) Introducción y amplificación de cada vector
de una jeringa o por sonicación, entre otros.
de clonamiento en bacterias, levaduras o célu-
Finalmente se puede tratar enzimáticamente el
las de mamífero en cultivo, en condiciones que
DNA total mediante digestión parcial con
sólo permiten el crecimiento de los vectores
DNAsa, esto evita el uso de enzimas de res-
recombinantes que han incorporado algún gen
tricción que pueden cortar en medio de la se-
o fragmento génico del DNA extraño (selec-
cuencia codificante de los genes.
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ción positiva). De esta manera se genera una DNA o RNA, mediante una sonda marcada (por
genoteca, que contiene fragmentos de todo el ejemplo un anticuerpo o un ligando específico
genoma del agente infeccioso y está por lo tan- radiactivamente marcado), que permitan detectar
to constituida por la colección completa de la expresión del antígeno mismo en cultivos de
vectores recombinantes generados durante el bacterias, levaduras o células de mamífero trans-
proceso de clonamiento. fectadas con los clones o vectores recombinantes
(ver capítulo 30).
La estrategia alternativa de clonamiento a La producción de antígenos mediante téc-
partir de RNA mensajero del agente infeccioso y nicas de biología molecular ofrece un alto rendi-
la consiguiente construcción de una genoteca de miento del inmunógeno en cuestión, el que será
cDNA implica: similar, si no idéntico a la proteína original expre-
sada por el agente infeccioso. Regiones seleccio-
a) Purificación del RNA mensajero total o de una nadas del genoma del agente infeccioso (que co-
fracción del RNA mensajero del patógeno. difican la expresión de proteínas involucradas en
la inducción de una respuesta inmune protectora)
b) Transcripción inversa del RNA mensajero, para
pueden, luego de su inserción en el vector de
generar una copia de DNA complementario
clonamiento, ser amplificadas y expresadas en
(cDNA). La reacción es catalizada por la en-
cultivos de bacterias, levaduras o células de ma-
zima transcriptasa inversa, que utiliza la mo-
mífero, a partir de los cuales se purificará el
lécula de mRNA como molde para la síntesis
"antígeno recombinante". El crecimiento de
de una molécula de cDNA.
plásmidos o virus recombinantes en estos culti-
c) La hebra simple de cDNA es convertida en una vos a gran escala, ofrece un gran potencial, tanto
doble hélice de DNA en una reacción para el desarrollo de vacunas recombinantes no
catalizada por la enzima DNA polimerasa. infecciosas que reemplacen las vacunas tradicio-
nales ya existentes, (B. pertussis, H. influenzae,
d) Corte del vector de clonamiento con enzima
pneumococcus, meningococcus, hepatitis B, sa-
de restricción y agregado de pequeñas secuen-
rampión, polio), como para la generación de va-
cias nucleotídicas homopoliméricas en los ex-
cunas contra agentes infecciosos que son difíciles
tremos abiertos del vector y de secuencias
o imposibles de cultivar en el laboratorio.
homopoliméricas complementarias en los ex-
Una alternativa adicional en la generación de
tremos del cDNA.
vacunas recombinantes es la utilización de bacte-
e) Inserción de las moléculas de cDNA en el rias o virus recombinantes vivos como inmunó-
vector de clonamiento, en presencia de la en- geno. La estrategia de preparación de estas vacu-
zima DNA-ligasa. Se generan así vectores nas consiste en escoger el DNA del agente pató-
recombinantes de cDNA geno que codifica la expresión de una proteína
capaz de inducir una respuesta inmune protecto-
f) Introducción y amplificación de cada vector
ra, e insertarlo en el genoma de un virus o bacte-
de clonamiento en bacterias, levaduras o célu-
ria de reconocida seguridad y eficacia como va-
las de mamífero en cultivo, en condiciones que
cuna viva. Virus como vaccinia, herpes, varicela,
sólo permitan el crecimiento de vectores
adenovirus, papiloma, SV40 y polio y bacterias
recombinantes. Se genera así una genoteca de
como Salmonella, BCG y Escherichia coli están
cDNA que contiene sólo las regiones que se
siendo utilizados como vectores de clonamiento
transcriben del genoma del patógeno y está
para el desarrollo de estas vacunas recombinantes
constituida por la colección completa de
vivas. El segmento génico protector es insertado
vectores recombinantes generados a partir del
en el genoma viral o bacteriano de manera tal que
mRNA del agente infeccioso.
la replicación del vector recombinante desenca-
dene en los individuos inoculados, una respuesta
Una vez construida una biblioteca genómica
mixta contra el vector y contra el producto génico
o una biblioteca de cDNA, debe realizarse la iden-
del DNA extraño del agente infeccioso. Este DNA
tificación de los clones recombinantes que con-
extraño del patógeno debe ser insertado en un lu-
tienen el gen que codifica la expresión del antígeno
gar tal del genoma del vector recombinante, que
de interés. Esta identificación y selección de clones
no se alteren los mecanismos de replicación ni la
recombinantes específicos puede hacerse por
sobrevida del vector en el hospedero. Al incorpo-
hibridización in situ con una sonda radiactiva de
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rarse en la célula del individuo vacunado, el vector desarrollar una respuesta inmune contra un
recombinante dirigirá la síntesis de sus propias antígeno al cual nunca ha estado expuesto.
moléculas incluyendo la proteína codificada por Los antígenos de muchos agentes infeccio-
el gen extraño del patógeno. Esta proteína será sos son de naturaleza hidrocarbonada o lipídica y
luego adecuadamente procesada, glicosilada e in- no pueden prepararse por DNA recombinante o
sertada en la membrana de la célula infectada o síntesis química, pero anticuerpos anti-idiotípicos
bien procesada y presentada al sistema inmune del que representen imágenes internas de tales
hospedero, en asociación con una molécula MHC antígenos pueden constituir excelentes vacunas,
en la superficie de la misma célula. las que pueden además prepararse a través de la
La estrategia de virus o bacterias recombi- producción de anticuerpos monoclonales anti-
nantes ha sido utilizada con éxito para el antígeno idiotípicos.
de superficie de la hepatitis B, glicoproteína D del Existen numerosos ejemplos de infecciones
virus Herpes simplex, hemoaglutinina del virus experimentales en las que se ha demostrado in-
influenza, glicoproteína del virus rabia, ducción de una efectiva repuesta inmune protec-
glicoproteína gp 160 y otra proteínas de HIV, vi- tora mediante la inmunización anti-idiotípica.
rus Epstein-Barr, cytomegalovirus, parainfluenza, Entre ellas podemos mencionar infecciones virales
sarampión y virus respiratorio sincicial. por virus Sendai, virus rabia, herpes simplex, po-
Finalmente es importante señalar que una li- lio hepatitis B y el virus de la inmunodeficiencia
mitación de la tecnología del DNA recombinante humana (VIH) para el cual se ha preparado un an-
es que ella no es aplicable a la síntesis de antígenos ticuerpo anti-idiotípico que representa la imagen
hidrocarbonados o lipidicos o péptidos glicosila- interna de CD4 y por lo tanto compite en la unión
dos en los que epitopo inductor de la respuesta con el virus; bacterias como Streptococcus
inmune protectora reside en la porción hidrocarbo- pneumoniae, Lysteria monocytogenes, E. coli; in-
nada de la molécula. Pero anticuerpos anti- fecciones parasitarias como malaria, schistoso-
idiotípicas que imiten o representen imágenes in- miasis, trypanosomiasis africana y leishmaniasis.
ternas de estas estructuras epitópicas, pueden cons-
tituir una alternativa para el desarrollo de vacunas
protectoras. 5. VACUNAS SINTÉTICAS
Un tercer camino para la preparación de va-

4. VACUNAS ANTI-IDIOTÍPICAS cunas distintas de las vacunas tradicionales lo
constituye la utilización de péptidos sintéticos que
Un camino alternativo para la producción de contienen o representan la secuencia aminoacídica
vacunas efectivas es la utilización de anticuerpos de epítopos protectores derivados de antígenos
anti-idiotípicos que reconocen el sitio de combi- proteicos.
nación o paratopo, de un anticuerpo específico para Aunque la respuesta inmune contra una pro-
un agente infeccioso. teína extraña es bastante compleja, se ha demos-
Por definición un suero anti-idiotípico pro- trado que pequeños péptidos derivados de la pro-
ducido contra inmunoglobulinas específicas para teína original reaccionan con anticuerpos produ-
un epítopo determinado, contendrá anticuerpos cidos contra la proteína completa. Además la fre-
que reconocen determinantes antigénicos cuencia con la cual anticuerpos contra pequeños
idiotópicos presentes en la porción variable del péptidos de menos de 20 aminoácidos reaccionan
anticuerpo que reconoce al epítopo original (ver o reconocen la proteína de la cual derivan, es bas-
capítulo 13). Algunos de estos anticuerpos anti- tante más elevada de lo que se esperaba y algunos
idiotípicos poseen un sitio de combinación que se péptidos han sido tan efectivos como inmunógenos
asemeja o representa al determinante antigénico que muchos investigadores han centrado su inte-
original contra el cual está dirigido el idiotipo. rés en la síntesis de péptidos que, presentados y
La inoculación de anticuerpos anti-idiotípicos administrados de manera apropiada, puedan esti-
que poseen tal imagen interna de un epítopo, pue- mular una respuesta inmune protectora efectiva
de inducir una respuesta inmune contra ese contra antígenos de agentes infecciosos. En la
determiante antigénico o más ampliamente con- búsqueda de epítopos individuales, la atención se
tra el antígeno o el agente infeccioso que posea ha centrado en los epítopos estructurales o conti-
tal epítopo. De esta manera un individuo puede nuos, que están confinados a una corta secuencia
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aminoacídica de la proteína y que pueden ser fá- ficie de la molécula en solución. Péptidos sintéti-
cilmente sintetizados. cos pueden entonces sintetizarse para identificar
El atractivo de los péptidos sintéticos como epítopos protectores los que serán acoplados más
vacunas parece bastante claro: ellos evitarían la tarde a un carrier adecuado para generar un pre-
necesidad de vacunas compuestas de preparados parado antigénico eventualmente seguro y eficaz
inactivos o de cepas no patógenas del agente in- como vacuna sintética.
feccioso. Evitarían además la necesidad de una Por otro lado, conociendo la secuencia
fuente de material biológico o la sangre de indivi- aminoacídica de una proteína es posible estable-
duos afectados a partir de los cuales se preparan cer o confeccionar una biblioteca peptídica cons-
las fracciones antigénicas que sirven de base para tituida por todos los pequeños péptidos de secuen-
las vacunas tradicionales. No requieren del culti- cia aminoacídica superpuesta que puedan
vo y manipulación de organismos patógenos y sintetizarse cubriendo toda la secuencia desde el
evitan el complejo proceso biotecnológico impli- extremo amino al extremo carboxilo de la molé-
cado en la manipulación genética de virus, bacte- cula. Así, si la biblioteca se construye en base a
rias, levaduras o células eucariontes para la pro- péptidos de 10 aminoácidos, el primer péptido in-
ducción masiva de proteínas antigénicas cluirá desde el aminoácido 1 al 10, el segundo in-
recombinantes. Todo esto es reemplazado por un cluirá los aminoácidos 2 al 11, el tercero irá del
proceso de sintesis química de péptidos, de bas- aminoácido 3 al aminoácido 12 y así sucesivamen-
tante menor costo que el de las vacunas tradicio- te hasta el último residuo en el extremo carboxilo
nales o de las vacunas recombinantes. Las vacu- de la proteína. Los distintos péptidos se prueban
nas basadas en péptidos sintéticos son uniformes, luego para determinar su habilidad para ser reco-
específicas y su contenido perfectamente conoci- nocidos por la respuesta inmune protectora contra
do y libre de los innecesarios e indeseables com- la proteína original y para inducirla bajo condicio-
ponentes del huésped o del agente infeccioso. nes adecuadas. De esta manera se logra identificar
Para sintetizar un péptido antigénico es ne- los péptidos sintéticos que contienen o imitan
cesario determinar la secuencia aminoacídica del (mimotopos) la estructura de epítopos antigénicos
epítopo reconocido por el sistema inmune del in- y que pueden por lo tanto utilizarse como base
dividuo. Luego debe ser administrado en la for- para el desarrollo de una vacuna sintética.
ma, dosis y ruta más apropiada para la inducción Diferentes modelos experimentales han mos-
de una respuesta inmune protectora. trado que péptidos sintéticos pueden inducir in-
La identificación y aislamiento de antígenos munidad protectora contra diversos agentes infec-
protectores mediante las técnicas de biología ciosos: tetradecapéptido 188-201 de toxina
molecular, permite determinar la secuencia diftérica, péptido 135-155 de antígeno de superfi-
nucleotídica de los respectivos genes y deducir la cie de hepatitis B; péptido 91-108 de
secuencia aminoacídica de las proteínas que co- hemaglutinina del virus influenza, péptido 134-
difican. Analizando luego la secuencia aminoa- 160 de proteína VP1 del virus aftosa y diversos
cídica de una proteína, es posible predecir qué re- péptidos de tóxina del cólera, glicoproteína D del
giones o segmentos de la molécula estarán expues- virus herpes, proteína M de Streptococcus
tos en la superficie de la proteína en solución y, pyogenes, Mycobacterium tuberculosis, pilina de
por lo tanto, disponibles para interactuar o ser re- E. coli, pilina de Neisseria gonorrohoeae, proteí-
conocidos por el sistema inmune del individuo. na circumsporozoítica de Plasmodium falciparum
La técnica de difracción de rayos X de pro- y otros plasmodios de la malaria, etc. En la mayo-
teínas, purificadas y cristalizadas, puede detectar ría de los casos los péptidos han sido administra-
las regiones que protruyen o sobresalen en la su- dos con un adyuvante y covalentemente acopla-
perficie de la molécula permitiendo predecir dos a un carrier proteico para hacerlos
epítopos que estimulen linfocitos B o linfocitos T. inmunogénicos. La elección de un adyuvante y de
Existen además programas computacionales que un carrier apropiado es por lo tanto de primera
partiendo de la secuencia aminoacídica de una pro- importancia para el desarrollo de vacunas sintéti-
teína pueden combinar la detección de estructu- cas de uso humano.
ras beta con la hidropaticidad o anfipaticidad de Finalmente debe señalarse que un aspecto im-
las distintas regiones de la molécula (existencia portante a considerar en el desarrollo de vacunas
de dominios hidrofílicos o hidrofóbicos) para pre- sintéticas es la calidad e intensidad de la respues-
decir qué dominios estarán expuestos en la super- ta inmune protectora y la inducción o no de me-
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moria inmunológica por un tiempo prolongado, maria; la respuesta requiere entonces sensibiliza-
en comparación con la respuesta inmune induci- ción previa con el carrier, para la activación de
da por la proteína original o por el agente infec- linfocitos T helper carrier específicos. En el fenó-
cioso completo. La inducción de una respuesta meno de supresión epitópica, en cambio, la sensi-
inmune requiere de un cierto grado de compleji- bilización previa con el carrier, estimula la acti-
dad antigénica para estimular las necesarias vación de linfocitos T supresores carrier específi-
interacciones celulares entre macrófagos, células cos que inhiben la respuesta contra el péptido
presentadoras de antígeno, linfocitos T y linfocitos (hapteno) en el encuentro secundario con el mis-
B que conducen al desarrollo de una efectiva res- mo carrier.
puesta protectora. La omisión de cualquiera de
estos epítopos funcionales limitará la eficacia de
una vacuna sintética. 6. VACUNAS DE DNA
Como es difícil estabilizar una estructura
peptídica en el caso de un péptido que representa Al inicio de la década de los 90, evidencias
un epítopo B de tipo conformacional, se han em- experimentales demostraron que inoculaciones di-
pleado estrategias alternativas para preservar la rectas in vivo de genes incluidos en vectores de
estructura antigénica de una secuencia peptídica. expresión eucarióticos en animales de laboratorio
En general, se han usado regiones “beta-loops” pueden facilitar una fuerte respuesta inmune con-
de varias proteínas andamio donde se ha expresa- tra los antígeno expresados. Este método se ha
do el péptido de interés. Así, se han utilizado en- denominado “Inmunización Genética” o “Vacu-
tre otras, las regiones hipervariables de nas de DNA” y ha sido utilizado para promover
inmunoglobulinas, regiones “beta-loops” de pro- una efectiva respuesta inmunoprotectora de tipo
teína de superficie de virus filamentosos de E. coli, humoral y celular en una amplia variedad de mo-
de la proteína gp120 del virus VIH y la proteína delos animales pre-clínicos para enfermedades
sérica humana transferrina. infecciosas, alergia, cáncer y cuadros autoinmunes.
El desarrollo de una eventual vacuna sintéti- La vacunación de DNA es particularmente
ca contra un agente infeccioso no es entonces una efectiva para la inducción de células T
tarea fácil. Requiere un conocimiento de la secuen- citotóxicas. Recientemente, se ha reportado la
cia aminoacídica de la proteína protectora, requiere primera vacuna en una ensayo clínico contra
la identificación de epítopos T y epítopos B y linfoma y malaria y existen resultados prelimi-
muchas veces los epítopos B son epítopos nares en ensayos clínicos humanos en infección
conformacionales que no son fácilmente imitados por VIH, lo que ha confirmado el valor e interés
por péptidos sintéticos. Los péptidos, por lo gene- por esta estrategia de inmunización en el mode-
ral, no inducen síntesis de anticuerpos y deben lo humano. Efectivamente, la vacuna de DNA
conjugarse a un carrier que contenga epítopos T y es el método más cercano para imitar la inmuni-
administrarse junto a un adyuvante para hacerlos dad natural y puede ser utilizado como una es-
inmunogénicos. Surge entonces el problema de trategia para programar el sistema inmune a res-
seleccionar carriers y adyuvantes apropiados para ponder contra una gran variedad de antígenos, e
uso humano. La toxina tetánica por ejemplo, ha inducir de esta manera protección contra diver-
sido usada para vacunación humana por muchos sas enfermedades.
años sin efectos colaterales adversos y ha funcio- Las vacunas de DNA consisten en un
nado muy bien como adyuvante en modelos ex- plasmidio bacterial que contiene un promotor viral
perimentales con diversos animales, pero su utili- fuerte como Cytomegalovirus (CMV), Rous Sar-
zación como adyuvante en humanos induce la ac- coma Virus (RSV), Simian Virus 40 (SV40), el
tivación de linfocitos T supresores que inhiben la gen de interés, una secuencia de terminación
respuesta inmune contra el péptido (supresión transcripcional y de polyadenylation, y finalmen-
epitópica). Este fenómeno de "supresión epitópica" te un Intron. El plasmidio es cultivado en E. coli,
es similar pero opuesto, al "efecto carrier" descri- purificado y posteriormente inyectado en el hués-
to para los conjugados carrier hapteno. En el efecto ped usando una solución salina o con la ayuda de
carrier, la respuesta secundaria de anticuerpos con- un adyuvante. El plasmidio inyectado es adsorbido
tra un hapteno específico requiere la inoculación por las células del hospedero y producirán luego
de un complejo carrier-hapteno formado con el la proteína codificada por el DNA incluido en el
mismo carrier utilizado en la inmunización pri- vector. La expresión de plasmidios usados para
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la Inmunización Genética no es replicada en el nerar una respuesta inmune sin necesidad de un
huésped mamífero y no se integra al DNA vector vivo autorreplicante. La expresión del gen
cromosomal del individuo, aunque recientemente extraño, por las células del hospedero, puede con-
se han reportado dos casos de integración ducir a la síntesis de una proteína mucho más cer-
cromosomal del gen inyectado. cana a la proteína original del agente infeccioso y
El éxito logrado en la inmunización puede ser más adecuadamente procesada y pre-
intramuscular de animales de experimentación con sentada al sistema inmune. Las vacunas de DNA
vacunas que contienen DNA, ha proporcionado tendrían además, un menor costo de producción
un sorprendente y revolucionario método para la que cualquier otro tipo de vacunas y podrían se
generación de anticuerpos y la activación de convertidas en un "pellet" seco, estable a tempe-
linfocitos T citotóxicos específicos contra la pro- ratura ambiente, de fácil almacenamiento y trans-
teína codificada por ese DNA. La eficacia de es- porte y, de fácil reconstitución ya que sólo reque-
tas vacunas génicas parece depender de la eficien- riría de agua antes de su administración.
cia de la transfección (o incorporación y expre- Sin embargo, es importante señalar que el
sión del DNA) y la eficiencia con que las células uso de vacunas de DNA conlleva también una
transfectadas presentan al sistema inmune las serie de riesgos como las eventuales consecuen-
proteínas codificadas por el DNA. cias a largo plazo, de la de existencia de un
La eficacia de la inmunización con DNA, fue plásmido u otro vector de clonamiento en las
inicialmente demostrada usando la inoculación células del hospedero y la expresión constitutiva
intramuscular de ratones con un plasmidio de DNA de un gen extraño en las células de los indivi-
que codifica la hemoaglutinina (HA), una duos inmunizados. El DNA del vector puede ade-
glicoproténa de superficie del virus influenza A. más incorporarse en el genoma del hospedero con
El experimento demostró la posibilidad de gene- el consiguiente riesgo de transformación celular
rar altos niveles de anticuerpos anti-HA que propor integración de un oncogen, activación de un
tegen a los ratones inmunizados, en experimentos proto-oncogen o inactivación de un gen supre-
de desafio con cepas homólogas del virus de la sor de oncogenes.
influenza. En respuesta a esta preocupación, se han es-
Este modelo de vacunación en animales, ha tablecido desde la mitad de los años 90, una serie
sido usado también ocupando el gen que codifica de normas y reglamentaciónes que regulan el uso
una proteína interna conservada (la nucleo- de las vacunas de DNA Diversas normas han sido
proteína) del virus influenza A. Los animales así establecidas por agencias Norteamericanas y Eu-
inmunizados desarrollaron tanto anticuerpos ropeas basadas en las experiencias obtenidas a
nucleoproteína-específicos, como una respuesta partir de estudios preclínicos y clínicos. Entre los
celular de tipo citotóxico. La inyección varios requerimientos de seguridad se incluyen
intramuscular de 100 microgramos de plásmido, conocimiento sobre la distribución en tejidos, la
que contiene el DNA codificante de la persistencia en el organismo y la eventual inte-
nucleoproteína del virus influenza, induce en ra- gración en el genoma del hospedero, del DNA ino-
tones la expresión citosólica de la proteína y un culado.
adecuado procesamiento y presentación al siste- En conclusión, la Inmunización Genética,
ma inmune, de fragmentos peptídicos asociacidos ciertamente, ofrece potenciales soluciones a algu-
con moléculas del Complejo Principal de nos de los desafíos asociados al desarrollo de va-
Histocompatibilidad. Se genera así una buena res- cunas: brinda una amplia protección contra dife-
puesta inmune contra la proteína, pero ésta es aún rentes cepas virales debido a la respuesta T
mayor si la vacuna génica se co-inyecta con, o citotóxica mediada por linfocitos T que recono-
contiene plásmidos que codifican citoquinas como cen epítopos de proteínas conservadas e inducen
GM-CSF (factor estimulador de colonias de una respuesta inmune duradera. La respuesta de
granulocitos y macrófagos). El método ha sido células T helper facilita la combinación de dife-
utilizado tambien con éxito para la generación de rentes inmunógenos y adyuvantes moleculares en
una eficiente respuesta inmune contra la una preparación única, induciendo una fuerte e
glicoproteína del virus rabia y contra inmunomodulada respuesta inmune con la opción
Mycobacterium tuberculosis. de inmunización simultánea para varias enferme-
Las ventajas de las vacunas génicas sobre dades.
otros tipos de vacunas son múltiples: pueden ge-
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7. VACUNAS GENÓMICAS con patógenos con genomas mayores tales como
las bacterias y parásitos. “Expression Library
Un nuevo método para el desarrollo de va- Immunization” usado con genotecas de espresión
cunas, llamado “Inmunización Genómica” o de cDNA e Inmunización Genética pueden bási-
“Expresion Library Immunization” (ELI), hace camente identificar los genes protectores dentro
uso de técnicas de Inmunización con DNA par- de un genoma ofreciendo un sistema imparcial
tiendo de la suposicón o del conocimiento que la para descubrir candidatas para vacunas en varios
colección completa de antígenos de un patógeno, modelos de enfermedad.
debe estar necesariamente codificada en su
genoma. Utilizando entonces como inmunógeno
genético, toda la “Genoteca de Expresión” del 8. ADYUVANTES, INMUNOMODULA-
DNA de un agente patógeno (o toda la colección DORES E INMUNOGENICIDAD
génica o genómica de cualquier patógeno) pue-
den obtenerse resultados efectivos de presentación Los adyuvantes, a diferencia de los carriers
antigénica y de protección inmunológica en for- proteicos son substancias que no forman enlaces
ma de una “vacuna viva sin riesgo”. La evidencia covalentes con los antígenos con que adminis-
experimental en modelo murino ha demostrado tran y están destinados a aumentar la inmuno-
que aún una “Genoteca de Espresión” parcial he- genicidad de moléculas como proteínas, péptidos
cha a partir del DNA de Mycoplasma pulmonis, e hidratos de carbono, que son muy poco inmuno-
Leishmania major, Trypanosoma cruzi y génicas.
Plasmodium chabaudi son capaces de proporcio- La asociación de proteínas con adyuvantes
nar protección contra la agresión por el agente tradicionales como hidróxido de aluminio (alúmi-
patógeno. na) o su emulsión con adyuvantes que contienen
El reciente desarrollo de la Inmunización aceites minerales y productos bacterianos (tabla
Genómica se ha perfeccionado en base a la dispo- 36-4), permiten convertir moléculas solubles en
nibilidad de la información de las secuencias un complejo particulado que será más fácilmente
genómicas de varios patógenos. Esta tecnología ingerido por fagocitos profesionales y adecuada-
está basada en las sorprendentes evidencias recién mente procesado y presentado para la inducción
encontradas que fragmentos amplificado por PCR, de una respuesta efectiva. En general los diversos
pueden ser hechos transcripcionalmente activos adyuvantes retardan la liberación de los antígenos
simplemente cruzándolos con secuencias activas en el sitio de inculación, facilitan su ingestión por
de tipo promotor y terminador. Cuando se mez- macrófagos y otros fagocitos profesionales e in-
clan secuencias codificante, promotora y ducen la activación de los mismos, lo que favore-
terminadora se cruzaron por hibridación espontá- ce el procesamiento y presentación de antígenos
neamente para formar "Elementos de Expresión en asociación con moléculas del complejo princi-
Linear" (LEE). Ademas, cuando estas LEE fue- pal de histocompatibilidad.
ron transfectadas en cultivo celular o inyectadas Los complejos inmunoestimuladores
en animales se obtuvo un considerable nivel de (ISCOM= “immune stimulating complex”) son
expresión de la secuencia codificada. Significa- glicósidos que pueden formar complejos
tivamente, cuando genes/antígenos del genoma del multiméricos con diversos antígenos y pueden
patógeno humano, Mycobacterium tuberculosis, atravesar las membranas celulares, como hacen
fueron utilizados como secuencias codificadas y los liposomas. Esto permite el ingreso de antígenos
las secuencias LEE transcripcionalmente activas al citoplasma celular facilitando su adecuado pro-
fueron administradas por Inmunización del DNA cesamiento y presentación.
intradérmica por “gene gun” o inyectadas Por último es importante señalar que
intramuscularmente, los animales inyectados de- citoquinas como interleuquina- 12 (IL-12), que
sarrollaron anticuerpos contra el antígeno de la estimula la inducción de una respuesta celular Th1
tuberculosis. dependiente e inhibe el desarrollo de una respues-
Estas dos nuevas tecnologías, cuando propia- ta Th2, pueden constituirse en coadyuvantes o
mente asociadas a un método de “screening”, pue- inmunomoduladores importantes para el desarro-
den proporcionar una solución al dificil problema llo de vacunas efectivas contra una enfermedad
de descubrir qué gen del patógeno incluir en el infecciosa.
vector genético de inmunización especialmente El rol adyuvante de ciertas secuencias
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inmunoestimuladoras (ISSs)de DNA bacterianos, supresor en la síntesis de IgE, pero promueven la
ha sido recientemente propuesto en función de sus síntesis de IgG2a y la producción de IFN-γ.
habilidades estimulatodoras de respuesta T Adicionalmente, la secuencia ISS promueve la
helper-1 (Th1) en animales vacunados con genes secreción de un particular patrón de citoquinas,
o proteínas. Se trata de motivos de secuencia que como IFN-γ, IFN-α, IFN-β, IL-12 e IL-18, que
contienen dinucleótidos demetilado CpG y que favorecen la respuesta humoral TH1 y la inmuni-
comúnmente se encuentran en DNA bacteriano. dad celular. La adición de la secuencia ISS como
Regiones no codificantes de plásmido de DNA adyuvante molecular o como subunidad en vacu-
enriquecido en ISS o ISS oligonucleótidos (ISS- nas con virus inactivados, pouede conducir a la
ODNs), estimulan una potente respuesta inmune generación de una respuesta inmune efectiva a
al ser coadministrado con antígenos. Estas secuen- las infecciones virales, tanto en la inmunización
cias ISS activan directamente macrófagos, célu- con DNA como en la inmunización con antígeno
las NK y linfocitos, induciendo síntesis y secre- proteico tradicional.
ción de citoquinas, quimioquinas e inmuno- El desarrollo entonces de adyuvantes e
globulinas como parte de la respuesta inmune in- inmunoduladores apropiados es una necesidad
nata inducida por interación de las secuencias CpG evidente para la administración de vacunas en una
con receptores específicos de la familia de recep- forma inmunogénicamente adecuada para la in-
tores “Toll-like”, en la superficie de estas células. ducción de una respuesta inmune protectora efec-
Se ha demostrado que ISS-DNAs juegan un papel tiva un agente infeccioso.
Tabla 36-4. Adyuvantes que aumentan la inmunogenicidad de diversos antígenos e inducen una
respuesta inmune efectiva
Adyuvante Composición Mecanismo de acción
Adyuvante Incompleto Emulsión de aceite Retarda la liberación de

de Freund mineral y agua antígenos y facilita su
ingestión por fagocitos
Adyuvante Completo Emulsión de aceite Retarda liberación de Ag.

de Freund`s mineral , agua y facilita su ingestión y
mycobacterias muertas activa macrófagos
Adyuvante de Freund`s Emulsión de aceite Retarda liberación de Ag.
con péptidoglicano mineral, agua y MDP facilita su ingestión
muramil dipéptido de mycobacterias activa macrófagos
(MDP= N-acetyl-muramyl
L-alanil.D isoglutamine)
Alúmina o Hidróxido Gel de hidróxido de Retarda liberación de Ag.

de Aluminio aluminio facilita su ingestión y
activa macrófagos
Polinucleótidos de Poli-inosina y ácido Activación de linfocitos

doble hélice policitidílico (poli-IC) T antígeno específicos y
o ácido poliadenílico- activación de macrófagos
poliuridílico (poli-AU)
Complejos Inmuno- Matriz de Quail A, Entrega antígenos en el
estimulantes (ISCOMs) componente activo de citosol y activa
la saponina linfocitos T citotóxicos
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Sin título-2 603 5/26/06, 10:26 AM

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Capítulo 37
MECANISMOS DE INMUNIDAD ANTITUMORAL
Flavio Salazar O. y Javier Puente P.
1. Introducción 4. Estrategias tumorales de evasión

2. Defensa inmunológica contra el inmunológica
cáncer 4.1. Disminución de la expansión de
2.1. La hipótesis de vigilancia inmu- las moléculas MHC
nológica antitumoral 4.2. Factores inmunosupresores pro-
2.2. Componentes de la respuesta inducidos por los tumores
mune antitumoral 5. Terapia inmunológica contra el
2.2.1. Respuesta inmunológica hu- cáncer
moral 5.1. Anticuerpos monoclonales
2.2.2. Respuesta inmunológica ce- 5.2. Terapia biológica contra el cáncer
lular 5.2.1. Utilización de citoquinas
3. Antígenos asociados a tumores 5.2.2. Terapia celular adoptiva
3.1. Clasificación de AAT reconoci- 5.3. Inmunización activa contra tumores
dos por LT
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RESUMEN
Una de las funciones asignadas al sistema inmune es la inmuno-vigilancia, propiedad que

le permitiría controlar el desarrollo de células tumorales. Sin embargo, la gran mayoría de las
células tumorales son débilmente inmunogénicas, hecho sumado a que individuos
inmunosuprimidos, ya sea por tratamiento farmacológico o por inmunodeficiencias genéticas no
presentan una mayor incidencia de tumores. Las células tumorales presentan además diversas
estrategias de evasión de la respuesta inmunológica; disminución de la expresión de las MHC y
la producción de moléculas inmunosupresoras. La especificidad de los LT, especialmente los LT
CD8+, ha permitido ir conociendo un gran conjunto de antígenos asociados a tumores (AAT),
muchos de los cuales corresponden a proteínas normalmente expresadas y una muy pequeña
fracción a antígenos tumorales propiamente tales. Además, en algunos casos, han podido utili-
zarse anticuerpos monoclonales que reconozcan a antígenos tumorales en diagnóstico y terapia.
La inmunoterapia antitumoral (terapia celular adoptiva) ha emergido de forma tal de esti-
mular los mecanismos defensivos del individuo y se basan en la estimulación in vitro de LT
específicos (células TIL) o de células NK (células LAK) del paciente las que una vez activadas
son readministradas al paciente. En este mismo sentido se han utilizado citoquinas estimuladoras
de la respuesta inmunológica como tratamiento en forma individual y en conjunto con la terapia
celular adoptiva. Entre las estrategias más recientes se encuentra la utilización de células tumorales
modificadas genéticamente, péptidos antigénicos tumorales y DNA que exprese a los péptidos
antigénicos y a moléculas co-activadoras. Todos estos casos son representativos de la denomina-
da vacuna contra el cáncer, vacuna de características terapéuticas diseñada para estimular la
respuesta inmunológica del paciente. Este conocimiento también ha permitido utilizar células
dendríticas a las que se les incorpora in vitro el péptido antigénico, y se le inserta el gen de
moléculas co-activadoras transformándolas en células presentadoras de antígenos tumorales y de
las señales coactivadoras necesarias para una interacción eficiente con los LT específicos.
1. INTRODUCCIÓN químicas, como las producidas por el humo del

tabaco, la irradiación de rayos ultravioleta, algu-
Las neoplasias son tejidos formados por cé- nas infecciones virales y mutaciones genéticas
lulas que debido a mutaciones en su material heredadas son algunos de estos factores. Junto con
genético, ven alterada la regulación de su ciclo la proliferación celular descontrolada, estos cam-
celular y comienzan a proliferar descontro- bios genéticos dan origen a cambios en la expre-
ladamente. La acumulación de células neoplásicas sión de proteínas en la célula maligna, lo que se
asociadas a células infiltradas del sistema inmune manifiesta en la sobre-expresión de algunos genes
forman los tumores. Las células tumorales a su o en la activación de genes que generalmente no
vez, adquieren mediante un proceso de acumula- se expresan en ciertos tejidos normales. Estos
ción de mutaciones, la capacidad de invadir otros genes dan lugar a proteínas que pueden ser reco-
tejidos distantes formando las denominadas me- nocidas como aberrantes por el sistema inmune y
tástasis. Las neoplasias con capacidad de produ- propiciar una respuesta antitumoral.
cir metástasis constituyen los tumores malignos Aunque esta respuesta inmunológica puede
y producen un grupo de enfermedades llamadas ser humoral, a través de anticuerpos que recono-
cáncer. cen proteínas expresadas en la membrana de las
Existen ciertos factores que permiten a algu- células tumorales, experimentos realizados en ani-
nas células liberarse paulatinamente de las condi- males y estudios recientes en humanos demues-
ciones que regulan la división celular. Sustancias tran que el papel principal en la reacción inmune
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antitumoral está dado por la respuesta celular, prin- pueden ser reconocidos por el sistema inmune y
cipalmente los linfocitos T (LT), los que recono- pueden generar una respuesta contra las células
cen antígenos procesados y presentados en aso- neoplásicas. Experimentos realizados en ratones
ciación con las moléculas del Complejo Principal singénicos, en la década del 40, demostraron que
de Histocompatibilidad (MHC). tumores inducidos químicamente y luego extirpa-
La paradoja existente entre la existencia de cé- dos conferían resistencia contra un desafío con el
lulas antitumorales en los pacientes con cáncer y la mismo tumor en otro ratón de la misma cepa. Esta
progresión sistemática de la enfermedad, sugieren resistencia estaba principalmente mediada por los
la existencia de mecanismos mediados por el tu- linfocitos, ya que al ser estos trasplantados desde
mor para evadir la respuesta del sistema inmune. un animal resistente a uno no resistente transmi-
Una de las mayores preocupaciones de la me- tían la inmunidad.
dicina a lo largo del tiempo, lo representa el cono- Estas y otras observaciones posteriores lle-
cimiento del cáncer, hecho que se ha transforma- varon al científico australiano Sir Frank
do en una verdadera lucha contra esta enferme- Macfarlane Burnet (1899-1985) a elaborar, en
dad. Entre las numerosas alternativas de tratamien- 1970, la hipótesis de vigilancia inmunológica
to del cáncer, están obviamente las más conven- antitumoral. En ella se postula que una de las
cionales: la erradicación del tumor mediante ciru- principales funciones del sistema inmune sería la
gía, procedimiento que sigue siendo una de las de reconocer a las células neoplásicas y eliminar-
mejores alternativas; la quimioterapia y radiote- las antes de que formen tumores. Esta afirmación
rapia, las que en su conjunto apuntan hacia la implica que, en ausencia del sistema inmune, la
destrucción de las células tumorales, aprovechan- incidencia de tumores sería enormemente mayor.
do especialmente la propiedad de activa división Sin embargo, observaciones realizadas en ratones
de estas células. Considerando el papel propuesto inmunosuprimidos por alteraciones genéticas o por
para el sistema inmune, de reconocimiento de los manipulación experimental, no concuerdan plena-
antígenos tumorales y la eliminación de las célu- mente con esta hipótesis ya que la incidencia de
las que los presentan, ha emergido la tumores en éstos no se ve, significativamente, alte-
inmunoterapia del cáncer. Esta se basa en la rada. En humanos, excepto por algunos tumores del
posibilidad de uso de anticuerpos monoclonales sistema linforreticular, como el linfoma asociado a
contra antígenos tumorales específicos, los que Epstein Barr virus, con una incidencia aumentada
también van con el objetivo de la destrucción del en pacientes postrasplantados y por lo tanto
tumor, y en la denominada terapia biológica con- inmunosuprimidos, o el Sarcoma de Kaposi fre-
tra el cáncer, que utiliza principios diferentes a cuente en pacientes con Síndrome de
los anteriormente mencionados en la acción Inmunodeficiencia Adquirida, no existen eviden-
antitumoral. La terapia biológica contra el cáncer, cias de un aumento significativo de la incidencia
no va dirigida a destruir por sí misma al tumor, de tumores por inmunosupresión que avalen la hi-
sino que a provocar la activación de los propios pótesis. De todas formas, los avances en la com-
mecanismos inmunológicos del paciente para que prensión celular y molecular de los procesos de
puedan actuar efectivamente contra el tumor. presentación y reconocimiento de antígenos aso-
En este capítulo se revisarán los mecanismos ciados a las moléculas MHC y la manipulación te-
efectores de inmunidad antitumoral, las caracte- rapéutica del sistema inmune en la lucha contra el
rísticas de los antígenos tumorales, las estrategias cáncer, le ha conferido nuevamente validez al con-
de evasión utilizada por los tumores y los méto- cepto de escape de la inmunovigilancia antitumoral
dos inmunoterapéuticos para tratar el cáncer. pero ahora con relación a la inmunoterapia.
2.2. Componentes de la respuesta inmune

2. DEFENSA INMUNOLÓGICA CONTRA antitumoral
EL CÁNCER
El sistema inmune consiste en una serie de
2.1. La hipótesis de vigilancia inmunológica estrategias complejas desarrolladas durante la evo-
antitumoral lución para combatir la invasión de
microorganismos y para detectar, eliminando, cé-
La inmunología antitumoral está basada en lulas anómalas propias que puedan poner en peli-
la premisa de que existen antígenos tumorales que gro la supervivencia del organismo. Ambos bra-
608
Sin título-2 608 5/26/06, 10:26 AM

zos del sistema inmune, el de la inmunidad inna- 2.2.2. Respuesta inmunológica celular
ta y el del sistema inmune adquirido participan
en la defensa inmunológica antitumoral. El pri- Sin duda, la actividad inmunológica
mero tiene uno de sus principales exponentes en antitumoral más importante está dada por la res-
las células NK (ver capítulos 10 y 19). Las célu- puesta celular. Durante las últimas tres décadas
las NK han sido identificadas por su capacidad se ha experimentado un enorme avance en la
de reconocer espontáneamente ciertas líneas ce- comprensión del funcionamiento del sistema in-
lulares tumorales in vitro, células infectadas por mune especialmente con relación al reconoci-
virus y células alogénicas. Estudios realizados, miento antigénico. Esta acumulación de conoci-
in vivo e in vitro, han establecido la capacidad de mientos, sumados al gran impulso de técnicas de
las células NK de reconocer células tumorales biología molecular que facilitan el clonamiento
deficientes en la expresión de moléculas MHC de genes y la producción de proteínas
clase I. Tumores deficientes en moléculas MHC recombinantes, han permitido la identificación
clase I son más eficientemente eliminados por de antígenos asociados a tumores y su posterior
ratones no inmunizados, efecto que desaparece caracterización.
totalmente con la neutralización de las células Experimentos pioneros demostraron que el
NK. Sin embargo, el papel fisiológico de las crecimiento de tumores singénicos podía ser pre-
células NK en la respuesta inmunológica venido en ratones inmunizados con el mismo tu-
antitumoral no está lo suficiente bien clarifica- mor irradiado para evitar su proliferación. Guia-
do, aunque existen indicios que permiten dedu- dos por estudios en modelos animales, los
cir una función relacionada con el control de las linfocitos T humanos han mostrado ser capaces
metástasis. de lisar específicamente tumores autólogos in
vitro. Las células T son también capaces de secre-
2.2.1. Respuesta inmunológica humoral tar citoquinas como IL-2, IFN-γ, GM-CSF y TNF-
α, y proliferar en respuesta a la estimulación con
Durante varios años la atención de los células tumorales autólogas. Las células T
inmunólogos del cáncer estuvo enfocada al brazo antitumorales pueden ser expandidas in vitro y
humoral de la respuesta antitumoral. Se partía de transferidas adoptivamente para tratar incluso
la hipótesis de que existirían proteínas de mem- grandes cargas tumorales en ratones y humanos.
brana específicas de los tumores o sobreexpresadas En conjunto, estos resultados proveen evidencias
en éstos, que permitirían una discriminación en- innegables de que una respuesta mediada por
tre la neoplasia y el tejido normal. Si bien varias linfocitos T puede ocurrir contra los tumores
proteínas han sido identificadas como antígenos autólogos.
asociados al tumor (AAT), con presencia de Las células presentadoras de antígenos
anticuerpos específicos en el suero de los pacien- (CPA) juegan un papel fundamental en la gene-
tes con cáncer, estos anticuerpos tienen una im- ración de una respuesta antitumoral mediada por
portancia menor en los mecanismos de rechazo linfocitos T. Estas células especializadas, entre
de los tumores y más bien adquieren relevancia las que se incluyen los macrófagos, los
con relación al diagnóstico y a terapias linfocitos B y las células dendríticas (DC),
inmunológicas. Debido a que muchos antígenos poseen la capacidad de capturar antígenos
tumorales no son necesariamente inmunogénicos tumorales y presentarlos asociados a las molé-
en el hospedero del tumor, su identificación se ha culas MHC. Además expresan gran cantidad de
realizado con anticuerpos xenogenéicos, o sea a moléculas coestimuladoras, las que proveen se-
través de la inmunización de otras especies con el ñales cruciales que garantizan la efectividad de
tumor. Desde el punto de vista práctico, son más la respuesta mediada por linfocitos T. Destacan
bien marcadores tumorales aunque, a veces, se en este aspecto las DC, también llamadas CPA
encuentran en pequeñas cantidades en células nor- profesionales, ya que se encuentran estratégi-
males o en tumores benignos. Ejemplos de estos camente localizadas en los sitios de concentra-
antígenos son la α-fetoproteína (α-FP), el ción antigénica, internalizan, procesan y presen-
Antígeno Carcinoembrionario (CEA) y el tan eficientemente antígenos solubles en el con-
Antígeno asociado a la Próstata (PSA). texto de MHC clase I y II, siendo las más efi-
cientes en la inducción de una respuesta prima-
ria de LT.
609
Sin título-2 609 5/26/06, 10:26 AM

3. ANTÍGENOS ASOCIADOS A TUMORES las cancerígenas.
Péptidos derivados de estas proteínas, nor-
Los linfocitos T citotóxicos (LTc) CD8+ tie- males o mutadas, pueden ser reconocidos por LT.
nen la capacidad de reconocer tumores a través de Existe una clara relación entre algunos tipos de
fragmentos peptídicos de 8-10 aminoácidos deri- cáncer e infecciones virales. El virus papiloma
vados de proteínas citoplasmáticas o nucleares que humano (HPV) ha sido asociado a ciertos tumo-
estén asociados al MHC clase I. Los LTc res cervicales y el virus Epstein Barr (EBV) a al-
melanoma-específicos, transferidos adoptiva- gunos linfomas tipo B. Las células tumorales in-
mente o activados in vivo por epítopos de antígenos fectadas con estos virus presentarían antígenos
asociados a melanoma, poseen capacidad terapéu- virales en el contexto de moléculas MHC, los que
tica, pudiendo inducir la regresión de tumores y serían reconocidos por las células LT.
sus micrometástasis. Durante los últimos años
varios antígenos melanoma-asociados reconoci- A la luz de las investigaciones llevadas hasta
dos por LTc han sido identificados y sus epítopos ahora resulta cada vez más clara la casi inexisten-
peptídicos caracterizados utilizando métodos cia de antígenos tumorales propiamente tales, ex-
genéticos y bioquímicos. cepto los de origen embrionario, que se expresan
única o especialmente en los tumores. El recono-
3.1. Clasificación de AAT reconocidos por LT cimiento de AAT por parte del sistema inmune se
debería principalmente a la sobreexpresión o a la
Los AAT reconocidos por linfocitos T pue- expresión inadecuada de algunas proteínas en cier-
den ser agrupados de acuerdo al origen de las pro- tos tejidos, lo que relaciona a la respuesta inmune
teínas de las cuales derivan, de los niveles de su antitumoral con fenómenos de autoinmunidad.
expresión y de su distribución en distintos teji-
dos. El primer grupo está conformado por los lla-
mados Antígenos tumor-específicos. Los genes 4. ESTRATEGIAS TUMORALES DE EVA-
de estos antígenos codifican proteínas de origen SIÓN INMUNOLÓGICA
embrionario, silentes en células adultas y solamen-
te expresados en el tejido tumoral. El científico Los tratamientos inmunoterapéuticos utili-
belga Thierry Boon y colaboradores han definido zados hasta hoy para combatir el cáncer no han
varios antígenos de este tipo tales como MAGE- sido del todo exitosos, produciendo una respuesta
1, MAGE-3, BAGE y GAGE entre otros. Células positiva solamente en una parte de los pacientes.
tumorales que expresan estos antígenos han sido Varias razones incidirían en las dificultades para
encontradas en tumores de distinto origen (tabla activar óptimamente al sistema inmune de los pa-
37-1). Entre los llamados Antígenos de diferen- cientes con cáncer. Algunos se deberían a la
ciación tisular o tejido-específicos se agrupan la inmunosupresión propia de estos enfermos, aun-
mayoría de los antígenos reconocidos por los que la mayoría está más relacionada con altera-
linfocitos infiltrantes de tumor (TIL) de pacientes ciones del sistema inmune inducidas por el pro-
con cáncer. Estas proteínas se expresan no sólo en pio tumor. Los mecanismos de evasión tumoral
el tumor sino que también en los tejidos normales han sido resumidos en la tabla 37-2 y algunos de
de los cuales éstos derivan. También pueden ser ellos discutidos más abajo.
encontrados en otros tejidos normales aunque en
niveles de expresión mucho menores. En 4.1. Disminución de la expresión de las molé-
melanoma, uno de los tumores más caracteriza- culas MHC
dos, existen varias proteínas asociadas a la sínte-
sis y control de la melanina como MART-1/Melan- La mayoría de los péptidos asociados al MHC
A; gp100, tirosinasa y MC1R que son AAT. Un clase I derivan de proteínas propias intracelulares
tercer grupo lo conforman los Antígenos deriva- o de microorganismos infecciosos (ver capítulo
dos de Oncogenes y Proto-Oncogenes. P53, p- 9). Estas proteínas son cortadas en segmentos
Ras, y HER2/neu son genes que codifican proteí- polipeptídicos y transportadas por distintas pro-
nas relacionadas directamente con el control del teínas chaperonas hasta asociarse a moléculas
ciclo celular. Ha sido demostrado que muchos tu- MHC y ser presentadas en la superficie celular a
mores poseen mutaciones en estos genes o bien los linfocitos T. Defectos en el funcionamiento de
éstos se encuentran sobreexpresados en las célu- cualquiera de los componentes del procesamiento
610
Sin título-2 610 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 37-1. Antígenos tumorales humanos reconocidos por células T MHC clase I restringidas
Tipo de antígeno tumoral Neoplasias que Péptido Molécula MHC-I

presentan el péptido presentadora
Productos de oncogenes
activados
Ras 10 % de tumores CLLDILDTAGL A2
Producto p210 del reor- humanos VVVGAVGVG B35
Denamiento de bcr/abl Leucemia mieloide SSKALQRPV A2
crónica, leucemia ATGFKQSSK A3
linfoblástica aguda KQSSKALQR A3
ATGFKQSSK A11
HER-2/neu/c-erb/p185 Carcinomas pancreático, GFKQSSKAL B8
mamario, ovárico, KIFGSLAFL A2
gástrico, colorectal y IISAVVGIL A2
melanoma VMAGVGSPYV A2
ELVSEFSRM A2
QLFEDNYAL A2
RLLQETELV A2
ILHNGAYSL A2
ALCRWGLLL A2
VLRENTSPK A3
Productos de genes
supresores de tumor
p53 mutada
50% de tumores humanos LLPENNVLSPL A2
GLAPPQHLIRV A2
RMPEAAPPV A2
KTCPVQLWV A2
Producto de genes
embrionarios reactivados
MAGE-1 Melanomas, carcinomas, EADPTGHSY A1
sarcomas y otros SAYGEPRKL CW*1601
MAGE-2 KMVELVHFL A2
YLQLVFGIEF A2
MAGE-3 EVDPIGHLY A1
FLWGPRALV A2
BAGE KVAELVHFL A2
GAGE MEVDPIGHLY B44
RAGE AARAVFLAL CW*1606
YRPRPRRY CW6
SPSSNRIRNT B7
Antígenos de diferenciación
tejido-específicos
MART-1/Melan-A Melanomas y otros AAGIGILTV A2
ILTVILGVL A2
gp100/Pmel 17 ITDQVPFSV A2
LLDGTATLRL A2
VLYRYGSFSV A2
611
Sin título-2 611 5/26/06, 10:26 AM

Tirosinasa KTWGQYWQV A2
YLEPGPVTA A2
YMDGTMSQV A2
MC1R MLLAVLYLL A2
AFLPWHRLF A24
SEIWRDIDF B44
TILLGIFEL A2
Antígeno específico prostático FLALIICNA A2
AIIDPLIYA
Antígeno específico prostático Carcinomas prostáticos KLQCVDHLV A2

de membrana FLTPKKLCQV A2
VISNDVCAQV A2
LLHETDASV A2
ALFDIESKV A2
Proteínas propias A2
ampliamente expresadas A2
Antígeno carcinoembrionario Variados carcinomas YLSGANLNL
mamarios, ováricos y IMIGVLVGV A2
MUC-1 carcinomas pancreáticos STAPPAHGV A2
A11
A2
Productos de genes virales
Proteínas E6 y E7 del virus Carcinoma cervical FAFRDLCIV A2
papiloma humano LLMGTLGIV A2
YMLDLQPETT A2
Proteínas del virus Epstein- Enfermedad de Hodgkin TLGIVCPI A11
Barr Linfoma de Burkitt y AVFDRKSVAK A11
carcinomas IVTDFSVIK A2
nasofaríngeos, CGLGLLTMV A3
Proteínas del virus hepatitis B Carcinoma hepatocelular RLRAEAGVK A2
FLPSDFFPSV A11
Proteínas del virus-1 de la Leucemia de células T YVNVNMGLK A2
Leucemia de células T LLFGYPVYV B14
Humana VPYKRIEEL
Antígenos mutados
CDK4-R24C-1 mutada Melanoma EEKLIVVLF B-44
ACDPHSGHFV A2
b-catenina SYLDSGIHF A24
Tabla adaptada de Salazar-Onfray et al. Med Oncol, 1999.
y presentación antigénica incide en una incapaci- microglobulina o en otros genes del complejo
dad de los linfocitos T de reconocer a la célula MHC. Recientemente defectos en otras proteínas
presentadora, en este caso la célula tumoral. La relacionadas con la presentación antigénica como
pérdida de uno o varios alelos de HLA ("Human los proteosomas y las TAP han sido también des-
Leukocyte antigen", MHC en humanos) es un critos en melanomas y otros carcinomas.
evento común en varios tipos de tumores espe-
cialmente en las metástasis. Estos defectos han
sido atribuidos a mutaciones puntuales en la β2-
612
Sin título-2 612 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 37-2. Mecanismos de escape a la vigilan- alta afinidad inactivando los LT, células NK y a
cia del sistema inmune utilizada por los tumores las células LAK (células NK activadas por
linfoquinas). En humanos el TGF-β ha sido
• Pérdida de la expresión de MHC para evitar el involucrado en el aumentado potencial metastásico
reconocimiento por los LT. de melanomas y otros carcinomas. La IL-10 es
• Disminución o pérdida en el tumor de la ex- una citoquina del tipo Th2, la que favorece una
presión de antígenos asociados al tumor. respuesta de tipo humoral más que celular, siendo
• Disminución o pérdida de la expresión de esta última la más efectiva contra los tumores. La
moléculas coestimuladoras, en el tumor o en IL-10 inhibe además la producción de citoquinas
las células dendríticas, requeridas para una efi- pro-inflamatorias en monocitos y macrófagos y
ciente interacción con los LT. reduce la expresión de MHC clase I y II en las
• Neutralización de la respuesta inmune a tra- células presentadoras de antígenos. Esto redunda
vés de la inducción de anergia o debido a la directamente en la inhibición del crecimiento y
eliminación clonal de los LT específicos. activación de linfocitos T y células NK y por lo
• Activación, mediada por el tumor, de células tanto en el escape de los tumores. La IL-10, que
supresoras o células del sistema inmune que es producida por una gran variedad de tumores,
secretan citoquinas inhibidoras. inhibe la expresión de MHC clase I y II en éstos a
• Cambios, inducidos por el tumor, en las molé- través de la inhibición de componentes del proce-
culas transductoras de señales en los LT. samiento y presentación antigénica como las TAP
• Utilización de factores estimulantes, que fa- y los proteosomas.
vorecen el crecimiento tumoral, producidos
luego de la activación del sistema inmune
(TGF-β). 5. TERAPIA INMUNOLÓGICA CONTRA
• Secreción de factores inmunosupresores por EL CÁNCER
los tumores (Prostaglandina E2 e IL-10).
La utilización del sistema inmune para com-
Tabla adaptada de Salazar-Onfray et al. Med batir el cáncer es una antigua idea, extensamente
Oncol, 1999. investigada durante varias décadas. Algunos pe-
ríodos de la historia de la inmunología antitumoral
han estado marcados por un excepcional entusias-
mo y optimismo respecto de los beneficios que
4.2. Factores inmunosupresores producidos estas terapias proporcionarían a los pacientes con
por los tumores cáncer, mientras que otros son acompañados por
la frustración y el escepticismo. De todas formas,
Numerosos factores inmunosupresores pro- ciertas terapias inmunológicas han dado resulta-
ducidos por las células tumorales han sido identi- dos esperanzadores, lo que unido con una com-
ficados y estudiados en relación al escape tumoral. prensión más profunda del funcionamiento del sis-
Un ejemplo clásico es la Prostaglandina E2 tema inmune abre buenas perspectivas para el tra-
(PGE 2 ). La PGE 2 ha sido implicada en la tamiento generalizado de cierto tipo de tumores.
patogénesis del cáncer actuando a través de la
inmunorregulación. Evidencias indirectas que in- 5.1 Anticuerpos monoclonales. La capacidad de
dican que el tratamiento profiláctico con ácido los anticuerpos de reconocer proteínas aberrantes
acetil-salicílico, un inhibidor de la síntesis de en la membrana celular y el desarrollo de la técni-
PGE2, reduce la incidencia de cáncer colo-rectal, ca de producción de anticuerpos monoclonales
respalda el rol de la PGE22 en la progresión de los (AcMo), ha permitido la utilización de estos últi-
tumores. El Factor de Crecimiento Transfor- mos en tratamientos contra algunos tipos de cán-
mante-β (TGF-β) y la Interleuquina-10 (IL-10) cer con buenos resultados. Recientemente se ha
son las citoquinas con mayor efecto inmunosu- demostrado un aumento en la sobrevida de pacien-
presor. Experimentos en animales indican que la tes con carcinomas colo-rectales tratados con
mayor actividad de la TGF-β in vivo es la promo- AcMo contra CEA. Otros AcMo, actualmente en
ción de la invasión y la metástasis. In vitro el TGF- uso clínico o en las últimas fases de desarrollo son:
β inhibe la expansión de las LTc y de los linfocitos anti-Her2/Neu en el caso de cáncer mamario y anti-
B, inhibe la expresión de receptores de IL-2 de CD20 en linfoma (tabla 37-3). Existirían varios
613
Sin título-2 613 5/26/06, 10:26 AM

mecanismos por los cuales los AcMo pueden des- cos para la célula como radionuclidos o toxinas,
truir a los tumores. Uno, es la activación del siste- estos conjugados se denominan inmunotoxinas.
ma de complemento, esto determinado por el El mecanismo general de estos agentes se basa en
isotipo del AcMo. Los AcMo pueden también in- la interacción específica con la célula tumoral y
ducir citotoxicidad celular dependiente de Ac en su posterior internación. La toxina una vez en
(ADCC) contra los tumores. La ADCC es el interior celular puede ejercer su acción tóxica.
eficientemente mediada por las células NK, pero
además puede ser mediada por monocitos, 5.2 Terapia biológica contra el cáncer. Esta
macrófagos y granulocitos. Estas células contie- inmunoterapia conceptualmente corresponde a la
nen receptores para los Fc que activan la activación de los mecanismos defensivos del pa-
citotoxicidad. Finalmente los AcMo podrían ser ciente, en este caso dirigidos contra el tumor. El
directamente letales para las células tumorales por creciente conocimiento acerca de las diversas
la inducción de apoptosis, a través del bloqueo de citoquinas, historia que comenzó a fines de la dé-
receptores de membrana esenciales para algún fac- cada del ‘50 con la descripción de la molécula de
tor de crecimiento o la inhibición del contacto interferón, creó grandes expectativas de
intercelular. Otra estrategia basada en los AcMO inmunoterapia contra el cáncer y otras enferme-
pero también con pocos exponentes en uso clíni- dades, especialmente infecciosas. Entre muchos
co son los anticuerpos unidos a compuestos tóxi- intentos fallidos, al inicio de la década de los ‘80
Tabla 37-3. Inmunoterapia del Cáncer1
Células activadas o modificadas genéticamente2

a) Células LAK
b) Células TIL
Células TIL CD4+ o CD8+
Células TIL modificadas genéticamente. Introducción de genes de citoquinas
o de factores de crecimiento.
c) Células tumorales modificadas genéticamente

Introducción de genes de citoquinas, factores de crecimiento y otros MHC, B7.
d) Células dendríticas modificadas.
Presentación de antígenos tumorales (incorporados in vitro)
Introducción de genes de moléculas co-activadoras.
Anticuerpos y citoquinas2
Citoquinas: IL-2, IFN-α, IFN-γ.

Anticuerpos monoclonales contra los antígenos CEA (cáncer colo-rectal),
Her-2Neu (cáncer mamario), CD20 (linfoma).
Antígenos tumorales2
Péptidos antigénicos
DNA: con información para la expresión del antígeno tumoral
y para la expresión de moléculas co-activadoras.
1
Estos tratamientos se aplican, en general, de forma mixta y también en conjunto con los tratamientos
convencionales: quimioterapia, radioterapia, hormonoterapia.
2
Muchos de estos tratamientos se encuentran aún en fases clínicas de desarrollo.
LAK, células NK activadas por linfoquinas; TIL, linfocitos infiltrantes de tumor
614
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comenzó la visión de una terapia basada en el uso inducir la presentación antigénica en las CPA in-
de células citotóxicas del propio paciente: cluyendo las células tumorales. Hasta ahora, el prin-
inmunoterapia adoptiva primero inespecífica, cé- cipio utilizado ha sido el uso de una citoquina
lulas LAK, y posteriormente específica, células estimuladora en altas concentraciones. Tomando en
TIL, péptidos antigénicos y células dendríticas cuenta la amplia variedad de estos compuestos y
(figura 37-1). de otros mediadores endógenos que modulan la
Figura. 37-1. Esquema general de obtención de linfocitos activados o de células tumorales modificadas genéticamente
utilizados en la terapia biológica contra el cáncer.
5.2.1 Utilización de citoquinas. En el caso de respuesta inmune en un delicado balance, no pare-

citoquinas únicamente como inmunoterapia, se han ce ser la mejor de las opciones. Este punto se ha
utilizado IFN-α, IFN-γ, IL-2 y GM-CSF, entre visto reforzado por una observación que cada vez
muchas otras. También se ha intentado mezclas de se hace más general en la respuesta inmune: los
citoquinas y citoquinas más tratamientos conven- mecanismos de activación celular pueden culmi-
cionales (tabla 37-3). La base del uso de las nar en la destrucción de la célula activada por me-
citoquinas es la acción estimuladora de la respues- canismos de muerte celular programada o apotosis.
ta inmune del hospedero y no necesariamente una En el caso de las células NK este tipo de mecanis-
acción directa sobre las células tumorales. La mo ya está claramente establecido, la estimulación
citoquina IL-2 ha sido una de las más estudiadas; simultánea por ejemplo por IL-2 e IL-12 o IL-12 e
de 15,5 kDa, es producida por los linfocitos T acti- IL-15, provoca inicialmente estimulación celular y
vados, presenta un t1/2 de 8 horas en la circulación posteriormente apoptosis. Por lo tanto, es posible
y se la ha utilizado en protocolos de altas y bajas que la toxicidad de los tratamientos en base a
dosis. El efecto antitumoral de esta citoquina pare- citoquinas podría deberse, en parte a este fenóme-
ce derivar de al menos dos acciones diferentes: La no. Estos tratamientos tienen un efecto parcial y
IL-2 puede mediar la generación de células varios efectos colaterales si se utilizan dosis altas,
citotóxicas inespecíficas, a partir de linfocitos pre- tales como náuseas, fiebre y dolores musculares
cursores en reposo, que pueden destruir las células intensos. Su efecto en todo caso, es lo suficiente-
tumorales. Además de esta acción antitumoral, esta mente importante como para ser un tratamiento al-
citoquina puede expandir a las células T que reco- ternativo en algunos tipos de cáncer.
nocen específicamente antígenos tumorales, pro-
vocando una respuesta específica. Este tipo de tra- 5.2.2. Terapia celular adoptiva
tamientos ha tenido una respuesta objetiva (remi-
sión completa y/o parcial) del orden del 20%. Otra a) Precursores células NK. Se basa en la activa-
citoquina muy utilizada, especialmente en ción general in vitro de linfocitos sanguíneos
melanomas, es el IFN-γ cuyo efecto principal es periféricos, con altas dosis de las citoquinas IL-2,
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IL-7 o IL-12. Bajo estas condiciones de cultivo, de fracciones celulares altamente purificadas para
se genera una nueva estirpe celular inespecífica su uso potencial en terapia.
(células LAK) cuyos precursores son las células
NK circulantes, y que se caracteriza por adquirir b) Precursores células T. Se basa en la activa-
una mayor agresividad y una acción lítica más ción de los linfocitos que han infiltrado el tumor,
amplia. La clave de su utilización como es decir que ya han reconocido antígenos
inmunoterapia la dio la observación que estas cé- tumorales, pero que obviamente, en su totalidad,
lulas eran capaces de lisar muy eficientemente in la respuesta no ha sido suficiente para erradicar el
vitro las células del tumor autólogo; acción de la tumor. El proceso por lo tanto requiere la extirpa-
que las células NK precursoras carecían. Una vez ción quirúrgica del tumor o bien el manejo de una
obtenidos los linfocitos a través de un procedi- biopsia, la que debe ser disgregada por tratamien-
miento denominado leucoféresis, que permite tos enzimáticos convencionales para la obtención
obtenerlos en grandes cantidades, se tratan in vitro de células a partir de un tejido, separación de los
con la citoquina, principalmente IL-2 y posterior- linfocitos infiltrantes del tumor (TIL) y cultivo
mente se readministran al paciente, generalmente de éstos en el laboratorio en presencia de IL-2 para
en protocolos mixtos: células activadas más la lograr una densidad celular que permita
citoquina activadora. En los seres humanos nor- readministrarlos al paciente, generalmente también
males, la mayoría de las células NK circulantes en forma mixta: células infiltrantes más la
se encuentra en reposo, por lo tanto, la genera- citoquina utilizada. Este tipo de linfocitos es
ción de las células LAK, se puede seguir, además CD4+, CD8+; principalmente CD8, que ha de-
de su citotoxicidad, por el aumento de las propor- mostrado actividad citolítica específica in vitro
ciones de células CD56+, CD25+ (IL-2αR; indi- contra las células del tumor autólogo y además
cador de activación de los linfocitos). Han sido una efectividad, en modelos animales, de uno a
ampliamente utilizados en cáncer renal dos órdenes de magnitud mayor a las células LAK
metastásico y melanomas malignos, con un máxi- en lo que se refiere a reducción de las metástasis.
mo de respuesta objetiva (remisiones completas La mayoría de las células TIL expresan los mar-
y parciales) de un 30-40 %. La distribución de cadores de activación CD25 y CD28 (el ligando
las células LAK in vivo en modelos animales y en de B7). Han sido utilizadas también preferente-
algunos pocos casos de tratamiento en la patolo- mente como tratamiento de cáncer renal
gía humana, ha demostrado que se distribuyen metastásico y melanoma maligno y con resulta-
primeramente en los pulmones y posteriormente dos porcentuales no mayores a los obtenidos con
en hígado y bazo y no necesariamente en el sitio las células LAK. Un hecho de gran relevancia de
del tumor. Por ello también se han administrado estas células fue que se demostró que debido a su
localmente en el sitio del tumor o sitios adyacen- especificidad, una vez administradas podían ser
tes. Si bien constituyen una alternativa real, exis- detectadas en el sitio del tumor, es decir pueden
ten riesgos como la toxicidad del tratamiento, lo volver al tumor original. La figura. 37-1
que implica un riguroso control del paciente en esquematiza la obtención de estos tipos celulares
todas las etapas del tratamiento. Las células LAK para la utilización clínica.
se utilizan también en conjunto con tratamientos Si bien no son del todo conocidos los meca-
convencionales, quimio y radioterapia en donde nismos por los cuales estas células citotóxicas
se ha observado una potenciación de su acción. (LAK y TIL) median sus efectos terapéuticos, ob-
También se han utilizado células A-NK, una viamente la destrucción del tumor mismo o de sus
subpoblación de células NK activadas por IL-2 y metástasis y la eliminación de las células tumorales
adherentes, ambas características necesarias para debería ser uno de los más importantes. Las célu-
su aislamiento desde la sangre periférica o del las TIL son principalmente LTc CD8+ y por lo
bazo. Las células A-NK, expresan CD11a/CD18, tanto capaces de reconocer y lisar a células que
son muy eficientes en la producción de citoquinas, presenten antígenos tumorales. De hecho las cé-
migración e ingreso a órganos sólidos y muy efi- lulas TIL se han utilizado como precursores para
cientes también en la eliminación de las metásta- identificar nuevos antígenos principalmente de
sis. La utilización de anticuerpos monoclonales melanoma. Tanto las células LAK y TIL median
(ver capítulo 43) unidos a soportes magnéticos y sus efectos citotóxicos a través del mecanismo
la citometría de flujo (ver capítulo 42) han sido membranolítico y dependiente de FasL-Fas. Sin
contribuciones fundamentales para la obtención embargo, además de la citotoxicidad el contacto
616
Sin título-2 616 5/26/06, 10:26 AM

de las células LAK y TIL con las células tumorales actualidad uno de los últimos y más esperan-
provoca la liberación de diversas citoquinas y fac- zadores enfoques terapéuticos. Actualmente el
tores de crecimiento. Este último mecanismo, es enfoque de terapia del cáncer de Coley, se puede
de especial importancia, pues la liberación en el considerar como de activación no específica del
sitio del tumor, de citoquinas como TNF-α, GM- sistema inmune. Ese enfoque se sigue aplicando,
CSF, IFN-γ, que poseen propiedades citotóxicas siendo uno de los ejemplos más representativos el
y de reclutamiento y activación de otras células tratamiento del cáncer a la vejiga por tratamiento
inmunocompetentes, se encamina justamente al a nivel local con el bacilo Calmette-Guérin o BCG,
objetivo de destrucción del tumor por los propios el cual genera una respuesta inflamatoria. Por lo
mecanismos inmunológicos del paciente. Además, tanto, son los mediadores de la inflamación los
se ha intentado purificar la población celular activadores de la respuesta que ataca al tumor.
efectora; es necesario enfatizar que estas poblacio- En contraste con las vacunas contra agentes
nes celulares son altamente heterogéneas y que infecciosos extracelulares, en las cuales la estra-
además su rendimiento va a depender del estado tegia más importante es la activación del sistema
del paciente del cual se obtienen, lo que por sí mis- inmune humoral y la generación de anticuerpos
mo constituye un proceso altamente complejo. neutralizantes, el foco de las vacunas contra el cán-
Una alternativa que resume varias caracte- cer está dirigido a la generación de la respuesta
rísticas terapéuticas importantes la constituye el celular específica mediada por linfocitos T. Hasta
uso de células TIL modificadas genéticamente. ahora, las vacunas contra el cáncer no son pre-
Considerando las propiedades de estas células, es- ventivas, sino más bien terapéuticas. Éstas inten-
pecialmente su localización en el sitio del tumor, tan la activación del sistema inmune contra molé-
la posibilidad de inserción de un gen, culas sobreexpresadas o mutadas, presentes en las
específicamente de alguna citoquina, que permita células tumorales, con el fin de eliminar tumores
su secreción en el mismo sitio del tumor aparecía preexistentes en el hospedero.
como una posibilidad muy interesante. En mode- Las células tumorales por lo general son poco
los animales el esquema de tratamiento con célu- inmunogénicas y además capaces de inducir to-
las TIL modificadas genéticamente ha funciona- lerancia activamente. Esto principalmente debido
do muy bien; en el caso de inmunoterapia para el a la carencia de moléculas co-estimuladoras y a la
cáncer humano, se han insertado a células TIL los secreción de factores inmunosupresores. La estra-
genes de IL-2, TNF-α, IFN-γ, alternativas que se tegia de las vacunas antitumorales es quebrar este
encuentran en estudio. estado de tolerancia aumentando la densidad de
Actualmente, se utilizan además tratamien- los antígenos expresados en las moléculas MHC
tos de terapia biológica en conjunto con tratamien- acompañada de un incremento de las moléculas
tos convencionales de quimioterapia o radiotera- co-estimuladoras.
pia. La tabla 37-3, resume algunas de las alterna- La forma más simple de intentar inmunizar
tivas más utilizadas hasta ahora en esta área de la pacientes con cáncer, consiste en utilizar células
biomedicina. tumorales autólogas irradiadas o tratadas quími-
camente para evitar su proliferación una vez
5. 3. Inmunización activa contra tumores reinyectadas en el paciente. Estas células tumorales
pueden ser genéticamente modificadas con el fín
El comienzo de la historia basada en la idea de que expresen moléculas co-estimuladoras y/o
que el sistema inmune puede detener el desarrollo citoquinas proinflamatorias como IL-2, IL-4, IFN-
de un tumor, comienza a fines del siglo pasado, γ o GM-CSF, (ver figura. 37-1) lo que eleva la
cuando se observó la regresión de esta enferme- inmunogenicidad de los tumores generando una
dad en algunos pacientes que contraían enferme- respuesta más eficiente contra las metástasis.
dades infecciosas bacterianas. Uno de los hitos im- Nuevamente en base a modelos animales se ha
portantes fue el logrado por el médico William B. podido formar el siguiente escenario que permite
Coley, quien llegó a utilizar bacterias atenuadas explicar esta acción: las células tumorales
como tratamiento de pacientes con cáncer. Desde genéticamente modificadas, deben secretar in vivo
luego, este tipo de enfoque inespecífico, corres- la citoquina que expresan, lo que a su vez debe
ponde a lo que actualmente conocemos como traer como consecuencia la activación y/o reclu-
inmunoterapia, y más aún a un intento de vacuna tamiento de linfocitos CD4, CD8, células NK y
contra el cáncer, que justamente representa en la de CPA. Como resultado de esta acción deberían
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Sin título-2 617 5/26/06, 10:26 AM

destruirse las células tumorales, favoreciéndose antitumoral, si bien no ha sido lo suficientemente
además la presentación de los antígenos tumorales exitosa desde el punto de vista terapéutico, ha per-
por las células presentadoras. Finalmente enton- mitido avanzar enormemente en la comprensión
ces, el tumor debería ser rechazado mediante la del sistema inmune y continúa abriendo perspec-
acción de células efectoras específicas. Una de tivas en la utilización de las defensas naturales de
las posibilidades más interesantes de este tipo de nuestro organismo en el combate contra el cáncer,
tratamientos ha sido la utilización de células uno de los enemigos más enconados de la especie
tumorales (melanoma, cáncer prostático, cáncer humana.
renal) modificadas genéticamente por la inserción
del gen de GM-CSF. Esta citoquina es un factor
de crecimiento muy importante para las DC, de LECTURAS SUGERIDAS
modo que estas células pueden activarse en estas
condiciones y por lo tanto capturar y procesar Greten, T.F. y Jaffee, E.M., “Cancer vaccines”, J
antígenos tumorales. Bajo estas condiciones, las Clin Oncol 17:1047-1060, 1999.
DC también pueden expresar la molécula co-
estimuladora B7, necesaria para la respuesta me- Rosenberg, S.A., “A new era for cancer immuno-
diada por los LT. therapy based on the genes that encode tumor an-
La identificación de epítopos de AAT ha per- tigens”. Immunity 10: 281-287, 1999.
mitido explorar la inmunización con péptidos
recombinantes derivados de los antígenos gp100 Salazar-Onfray, F., “Interleukin-10: a strategy used
y MART-1 en melanoma y Her2/Neu en cáncer by tumors to escape from the immune system (Re-
ovárico. Estos intentos no han sido del todo view)”. Med Oncol 16: 86-94, 1999.
exitosos, pero han permitido mejorar los protoco-
los de inmunización. Durante los últimos dos años, Van den Eynde, B.J. y van der Bruggen, P., “T
ha adquirido mayor relevancia el papel de las cé- cell defined tumor antigens”, Curr Opin Immunol
lulas presentadoras de antígeno profesionales 9: 684- 693, 1997.
como las células dendríticas, en la inducción de
la respuesta inmune contra los tumores. Las DC,
derivadas de monocitos de sangre periférica, pue-
den ser activados in vitro utilizando IL-4 y GM-
CSF y expandidas en cantidades suficientes para
inmunizar. Previo a la inmunización, las DC son
cargadas exógenamente con péptidos antigénicos
o transfectadas con genes que codifican estos
antígenos. Las respuestas a estos tratamientos son
las más promisorias y pareciera que sería la estra-
tegia a seguir. La combinación in vitro de DC con
células tumorales apoptóticas, permite la presen-
tación de múltiples antígenos tumorales en una
misma célula presentadora, en un contexto ade-
cuado para la inducción de respuesta.
Una de las técnicas más modernas de inmu-
nización, consiste en la utilización de DNA des-
nudo conteniendo los genes codificadores de
antígenos tumorales, generalmente asociado a
genes que inducen la inflamación, citoquinas, pro-
teínas bacterianas etc. Las vacunas de ADN,
sorprendentemente eficientes, están siendo explo-
radas no solamente en el contexto de la
inmunología antitumoral, sino que además como
estrategia antiviral o contra otros patógenos, (ver
capítulo 35).
En resumen, el desarrollo de la inmunología
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Capítulo 38
MECANISMOS INMUNOLÓGICOS
DEL RECHAZO DE ALOINJERTOS
Cecilia Sepúlveda C.
1. Introducción
2. Rechazo de aloinjertos
2.1. Presentación directa de aloantígenos
2.2. Presentación indirecta de aloantíge-
nos
2.3. Células que participan en el rechazo
3. Mecanismos efectores del rechazo
3.1. Rechazo hiperagudo
3.2. Rechazo agudo
3.3. Rechazo crónico
4. Prevención y tratamiento del rechazo
4.1. Inmunosupresión
4.2. Selección de donantes
4.3. Inducción de tolerancia
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RESUMEN
En la actualidad los trasplantes son cada vez más frecuentes. Muchas personas requieren
ser sometidas a este tipo de tratamiento en el cual se reemplazan células, tejidos u órganos enfer-
mos, por otros, provenientes de un donante sano. Una barrera importante al éxito de los trasplan-
tes es, sin embargo, la barrera inmunológica, lo que conocemos como rechazo. En este capítulo
se presenta y discute los principales mecanismos de rechazo, sus características y componentes.
Asimismo se discute las estrategias más importantes para lograr un mayor éxito en la sobrevida
y funcionamiento de los trasplantes, ya sea efectuando trasplantes entre individuos con la mayor
semejanza posible o a través del uso de terapias inmunosupresoras.
1. INTRODUCCIÓN La respuesta inmune del receptor a los

aloantígenos del donante presentes en el injerto
Trasplante es el proceso de tomar células, es muy intensa y se denomina rechazo. Esta res-
tejidos u órganos (el trasplante o injerto) de un puesta de rechazo es una de las principales barre-
individuo y colocarlo (generalmente) en otro in- ras al éxito de los trasplantes, por lo que su estu-
dividuo. El individuo que proporciona el injerto dio y comprensión es de la mayor importancia.
es el donante y el que lo recibe es el receptor.
Un injerto trasplantado en el mismo indivi-
duo del cual se obtuvo se denomina trasplante 2. RECHAZO DE ALOINJERTOS
autólogo o autotrasplante. Un injerto trasplan-
tado entre individuos genéticamente idénticos o La respuesta inmune a los aloantígenos pue-
singeneicos se denomina trasplante singeneico. de ser tanto humoral como celular, siendo en
Un trasplante efectuado entre individuos general, la respuesta inmune celular la de mayor
genéticamente diferentes pero que pertenecen a importancia.
la misma especie se llama trasplante alogeneico o El reconocimiento del mosaico antigénico
alotrasplante. Un injerto entre individuos de esque significa el injerto, ya sea como propio o extra-
pecies diferentes es un trasplante xenogeneico o ño, está determinado principalmente por las molé-
xenotrasplante. culas codificadas por el Complejo Principal de
Las moléculas que son reconocidas como ex- Histocompatibilidad (MHC), presentes en las mem-
trañas por el sistema inmune del receptor en los branas celulares. Como es conocido, las moléculas
alotrasplantes son los aloantígenos y las de los MHC juegan un rol crítico en la respuesta inmune
xenotrasplantes son los xenoantígenos. Los a antígenos extraños, principalmente en la presen-
linfocitos y anticuerpos que reconocen aloan- tación de péptidos derivados de antígenos proteicos
tígenos o xenoantígenos se denominan alorreac- de una forma que ellos puedan ser reconocidos por
tivos o xenorreactivos, respectivamente. las células T. Por ello, el rol de las moléculas MHC
La mayor parte de los trasplantes que se efec- como aloantígenos es incidental.
túan en la actualidad son alotrasplantes. Los más Las moléculas MHC alogénicas pueden ser
comunes son los de riñón, corazón e hígado, pero presentadas para el reconocimiento de las células
es cada vez más frecuente el injerto de otros órga- T del receptor por dos vías fundamentalmente di-
nos como páncreas, intestino y pulmón. La trans- ferentes. La primera es la llamada presentación
fusión de sangre, trasplante de células sanguíneas directa e involucra el reconocimiento de molécu-
circulantes y/o plasma de un individuo a otro, es las MHC intactas expresadas en la membrana de
también muy frecuente, así como el trasplante de células presentadoras de antígenos (CPA) del do-
médula ósea. nante en el injerto y es una consecuencia de la
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similitud entre moléculas MHC intactas del injer- expresadas en las membranas celulares normal-
to y las del receptor. La segunda vía, llamada pre- mente tienen péptidos unidos. Como durante el
sentación indirecta, involucra el procesamiento proceso de tolerancia central se eliminan o
de las moléculas MHC del donante por CPA del inactivan sólo las células T que reconocen péptidos
receptor y la presentación de los péptidos deriva- propios unidos a MHC propios, las células T es-
dos de estas MHC alogénicas asociadas con las pecíficas para reconocer péptidos propios unidas
MHC propias del receptor. En este caso, las molé- a MHC alogénicos persisten a este proceso de
culas MHC del injerto son procesadas y presenta- selección y son capaces de responder a los
das como cualquier antígeno extraño, siendo los aloinjertos. Se ha calculado que hasta un 2% de
mecanismos de la presentación indirecta las células T son capaces de reconocer y respon-
indistinguibles de los que normalmente utiliza el der directamente a una sola molécula MHC ex-
sistema inmune (figura 38-1). traña y esta alta frecuencia de células T reactivas
Figura 38-1. Vías de presentación de Ag de trasplante: directa e indirecta.
2.1. Presentación directa de aloantígenos con moléculas MHC alogénicas es una de las ra-
zones del por qué los aloinjertos generan respues-
El reconocimiento directo de moléculas tas inmunes intensas in vivo.
MHC extrañas se debe a que los receptores de
células T normales presentes en el receptor, selec- 2.2. Presentación indirecta de aloantígenos
cionadas para reconocer moléculas MHC propias
asociadas a péptidos extraños, reconocen las mo- Moléculas MHC alogénicas pueden también
léculas MHC alogénicas del injerto asociadas a ser reconocidas como moléculas extrañas conven-
péptidos, debido a la similitud estructural entre cionales. Como las moléculas MHC extrañas di-
éstas (reacción cruzada). fieren estructuralmente de las del receptor, ellas
Las moléculas MHC alogénicas con un pueden ser procesadas y presentadas de la misma
péptido unido pueden imitar el determinante for- manera que cualquier antígeno extraño, esto es,
mado por una molécula MHC propia más un de- como péptidos asociados con las moléculas MHC
terminado péptido extraño. Las moléculas MHC propias del receptor. La presentación indirecta
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usualmente implica el alorreconocimiento por cé- moléculas MHC alogénicas. Se presume que las
lulas T CD4+ ya que los aloantígenos usualmente células B específicas para los aloantígenos son es-
son procesados por las CPA del receptor por la vía timuladas por mecanismos similares a los que
vesicular endosómica y requiere la presentación operan frente a proteínas extrañas.
por moléculas MHC clase II. Es posible, sin em-
bargo, que algunos aloantígenos sean reconocidos
por células T CD8+ y presentados vía moléculas 3. MECANISMOS EFECTORES DEL RE-
MHC clase I. CHAZO
También otros aloantígenos polimórficos
pueden causar reacciones de rechazo Tanto células T CD4+ como CD8+ y
inmunológico, habitualmente más débiles y len- aloanticuerpos participan en el rechazo del
tas, y se los conoce como antígenos menores de aloinjerto, a través de diferentes mecanismos
histocompatibilidad. efectores. Estos mecanismos se clasifican según
la histopatología que los caracteriza, y según el
2.3. Células que participan en el rechazo tiempo después del trasplante en que se manifies-
tan. De acuerdo a la experiencia de los trasplantes
Pueden participar tanto células T CD4+ como renales, estos son: rechazo hiperagudo, agudo y
CD8+, que reconocen las moléculas MHC del in- crónico.
jerto presentadas tanto en forma directa como in-
directa. Las CPA del receptor y del donante están 3.1. Rechazo hiperagudo
involucradas en el proceso de rechazo, siendo tal
vez las más importantes las células dendríticas. El rechazo hiperagudo se caracteriza por he-
Estas CPA presentan los antígenos a las células T morragia y oclusión trombótica de la circulación
del receptor presentes en el injerto y también CPA del injerto y ocurre en minutos u horas de coloca-
del donante podrían migrar a los ganglios linfáticos do éste. Está mediado por anticuerpos preexis-
donde activarían células T naive en forma directa. tentes que se encuentran en la circulación del re-
Por otra parte, CPA del receptor pueden entrar al ceptor y que se unen a antígenos del endotelio
injerto y transportar los aloantígenos a los ganglios vascular del injerto. Esta unión activa al sistema
linfáticos y presentarlos a los linfocitos por la vía del complemento causando daño endotelial y pro-
indirecta. Estas CPA también proveen moléculas moviendo la trombosis intravascular del injerto.
coestimuladoras que contribuyen a la expansión Este tipo de rechazo puede ser provocado por
y diferenciación de las células T alorreactivas. aloanticuerpos dirigidos contra antígenos de gru-
po sanguíneo ABO u otros, que se expresan tam-
La reacción mixta linfocitaria (RLM) es un bién en las células del endotelio vascular. En la
modelo in vitro muy útil del reconocimiento di- práctica esto no sucede o no debiera suceder, ya
recto de las moléculas MHC alogénicas y se utili- que donantes y receptores se seleccionan consi-
za como predictor del rechazo de aloinjertos. Esta derando que deben tener grupo sanguíneo com-
reacción es inducida cultivando in vitro células patible.
mononucleares provenientes de dos individuos El rechazo hiperagudo puede ocurrir por
diferentes, esto determina que se produzca una aloanticuerpos de la clase IgG dirigidos contra
respuesta proliferativa a los 4-7 días de cultivo, moléculas MHC o contra otros antígenos que no
denominada RLM alogénica. Puede ser son de grupo sanguíneo presentes en las paredes
bidireccional o unidireccional, en este último caso endoteliales. Estos aloanticuerpos se generan en
se procesa una de las dos poblaciones linfocitarias exposiciones previas a aloantígenos, por ej., por
para que no prolifere. Durante este proceso son transfusiones, embarazos múltiples, trasplantes
estimuladas tanto células T CD4+ como CD8+. anteriores. Si el título de anticuerpos es bajo el
Las CD8+ se diferencian a células citolíticas y las rechazo puede producirse en el transcurso de va-
células CD4+ en células productoras de citoquinas, rios días, siendo entonces denominado "acelera-
tal cual ocurre en una reacción inmune contra do ".
antígenos proteicos restringida por moléculas En los pacientes que van a recibir un
MHC clase I o II, respectivamente. aloinjerto se investiga rutinariamente la posible
Menos conocidos son los mecanismos que presencia de aloanticuerpos preexistentes contra
llevan a la producción de aloanticuerpos contra el posible donante, con el fin de seleccionar el re-
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Sin título-2 623 5/26/06, 10:26 AM

ceptor más adecuado, con mayores probabilida- estrategias posibles son: minimizar la intensidad
des de éxito del injerto, y evitar la pérdida de éste de la respuesta inmune alogénica efectuando tras-
por un rechazo hiperagudo. plantes entre individuos con la mayor semejanza
posible y, por otro lado, a través del uso de
3.2. Rechazo agudo inmunosupresores.
El rechazo agudo se caracteriza por injuria 4.1. Inmunosupresión

vascular y parenquimatosa del injerto, mediada por
células T, macrófagos y anticuerpos, que se pre- Existen varios grupos de fármacos
senta usualmente después de la primera semana inmunosupresores que se utilizan en clínica, entre
de efectuado el trasplante. Las células T CD8+ ellos se encuentran los inmunosupresores tradi-
activadas causan lisis directa de las células del cionales, como la azatioprina y la ciclofosfamida
injerto y las células T CD4+ a través de la produc- y aquellos más selectivos, que no deprimen todas
ción de citoquinas que reclutan y activan células las respuestas inmunes sino que principalmente a
inflamatorias, las cuales causan necrosis. En in- las células estimuladas por los antígenos alogé-
jertos vascularizados, un hallazgo frecuente en los nicos. Entre estas últimas se encuentran la
episodios de rechazo agudo es una endotelialitis ciclosporina, el mofetil micofenilato, la rapamicina
microvascular, indicando que las células y la llamada FK-506.
endoteliales son un blanco importante en el re- Una de las más usadas es la ciclosporina, cuyo
chazo agudo. También los anticuerpos pueden principal mecanismo de acción es inhibir la trans-
participar en el rechazo agudo. cripción de ciertos genes, especialmente los que
codifican IL-2. El resultado es que la ciclosporina
3.3. Rechazo crónico bloquea la proliferación y diferenciación de las
células T dependientes de esta citoquina, por la
El rechazo crónico se caracteriza por fibrosis tanto, bloquea las células T que están siendo acti-
con pérdida de las estructuras normales de los ór- vadas por los aloantígenos y es por esto que esta
ganos la cual ocurre en un período de tiempo droga actúa "selectivamente". Además, la
prolongado, entre 6 meses a un año después del ciclosporina induce la síntesis de una citoquina
trasplante. En la medida que el tratamiento del re- inmunosupresora, el factor transformante beta
chazo agudo ha ido permitiendo su mejor control, (TGF-β).
el rechazo crónico ha emergido como la principal También se utilizan anticuerpos dirigidos
causa de la pérdida de los aloinjertos. No se cono- contra moléculas de membrana de las células T,
ce bien la patogenia de este tipo de rechazo pero especialmente en el tratamiento de los episodios
en muchos casos se ha observado una de rechazo agudo. Entre estos están los anticuerpos
arterioesclerosis acelerada o de injerto, con proli- monoclonales anti-CD3 (OKT3) y anti-CD25; el
feración de las células musculares lisas de la ínti- primero se une a la molécula CD3 de las células
ma. Ésta puede representar una forma especiali- T bloqueando su funcionamiento, causando lisis
zada de hipersensibilidad retardada en la cual los directa por activación del complemento y aumen-
linfocitos activados inducen a los macrófagos a tando su remoción por fagocitosis, y el anti-CD25
secretar factores de crecimiento de las células que bloquea la activación de las células T blo-
musculares. Es frecuente en trasplantes cardíacos queando la unión de la IL-2 a su receptor y favo-
y de riñón. En modelos experimentales se ha de- reciendo también la lisis y remoción de estas cé-
mostrado participación importante de células T lulas.
CD4+ y de células B en este tipo de rechazo. También tiene un rol importante el uso de
agentes antiinflamatorios como los corticoides,
que bloquean la síntesis y secreción de diferentes
4. PREVENCIÓN Y TRATAMIENTO DEL factores solubles por los macrófagos, tales como
RECHAZO citoquinas (TNF e IL-1), generación de prostaglan-
dinas, metabolitos del oxígeno, y óxido nítrico.
Si el receptor tiene un sistema inmune com- El uso de los inmunosupresores, especial-
petente, siempre se producirá alguna forma de re- mente de la ciclosporina y más recientemente del
chazo. Para lograr un mayor éxito en la sobrevida mofetil micofenilato, ha permitido un dramático
de los trasplantes y el menor rechazo posible, las aumento de la sobrevida de los aloinjertos, espe-
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Sin título-2 624 5/26/06, 10:26 AM

cialmente de aquellos que provienen de donante- 4.3. Inducción de tolerancia
cadáver. Previamente al uso de estas drogas, la
sobrevida a un año de los injertos provenientes de La tolerancia específica frente a los
donante-cadáver era de un 50-60%, aumentando aloantígenos del donante sería el método ideal para
a un 90% gracias al uso de ellas. En el caso de prevenir el rechazo de los aloinjertos. No sería
usar donante vivo relacionado (familiar) la necesaria la inmunosupresión, no habría riesgo de
sobrevida es de un 90%. rechazo ni de complicaciones derivadas de la
La inmunosupresión mantenida en el tiempo inmunosupresión crónica. Experimentalmente se
es responsable de un aumento de la susceptibili- ha podido inducir tolerancia, tanto central como
dad a infecciones y tumores oportunistas en estos periférica. Un ejemplo de ello es la anergia
pacientes. Esto es particularmente notorio en el periférica que se induce bloqueando la interacción
trasplante de médula ósea, el cual requiere de una de señales coestimuladoras necesarias para la ac-
intensa inmunosupresión preparatoria. Además, en tivación de las células T.
este tipo de trasplante, puede producirse una res-
puesta de los linfocitos de la médula ósea contra
los aloantígenos del receptor, causando la llama- LECTURAS SUGERIDAS
da enfermedad de injerto versus huésped (Graft
Versus Host Disease, GVHD). Abbas, A., Litchman, A., Pober, J., Cellular and
Molecular Immunology, Edition WB Saunders,
4.2. Selección de donantes chapter 16, 2000.
Para evitar el rechazo hiperagudo, deben Denton, M.D., Magee, C.C., Sayegh M.H.
seleccionarse donantes que compartan antígenos “Immunosuppressive strategies in transplantation”.
de grupo sanguíneo ABO con el receptor. Asimis- Lancet 353:1083-1991, 1999.
mo, que no posean anticuerpos preformados con-
tra antígenos del donante. Esto último se realiza a Gould, D.S., Auchincloss, A. Jr., “Direct and
través de la técnica del "cross matching", que con- indirect recognition: the role of MHC antigens in
siste en colocar en contacto suero del receptor (que graft rejection”, Immunology Today 20:77-82,
contiene los posibles anticuerpos) con células del 1999.
donante, en presencia de complemento. En caso
de haber anticuerpos preexistentes se va a produ- Kahan, B., Clark, J., Transplantation of sdolid
cir una lisis celular, cuya intensidad va a ser pro- organs in Samter's Immunological Diseases, ed.
porcional a la cantidad de anticuerpos presentes 5, Boston, Little Brown, 1994.
en el receptor. Además, se realiza el estudio de
tipificación HLA utilizando una técnica de Sherman, L.A., Chattopadhyay, S., “The molecular
microlinfocitotoxicidad en placa (técnica de basis of allorecognition”, Annual Review of
Terasaki), buscando la mayor identidad entre las Immunology 11:385-402, 1993.
moléculas MHC del donante y las del receptor (ver
capítulo 42).
En el trasplante renal, se ha constatado que,
a mayor número de alelos MHC compartidos en-
tre donante y receptor, mejor es la sobrevida del
aloinjerto, especialmente en el primer año después
del trasplante. La experiencia clínica demuestra
que los de mayor relevancia son los antígenos HLA
A, B y DR.
Los estudios de tipificación HLA requieren
tiempo y no son posibles de realizar en todos los
trasplantes, algunos órganos, como corazón e hí-
gado, no pueden preservarse por muchas horas sin
sufrir deterioro y deben ser trasplantados lo más
pronto posible.
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Capítulo 39
INMUNOMODULADORES
Cecilia Sepúlveda C. y María Antonieta Guzmán M.
1. Introducción
2. Principales Inmunomoduladores
2.1. Antiproliferativos
2.2. Antagonistas de las Inmunofilinas
2.3. Glucocorticoides
2.4. Agentes biológicos
2.5. Citoquinas
2.6. Trasplante de médula ósea
2.7. Células autólogas modificadas
2.8. Isoprinosine
3. Efectos Adversos de los Inmuno-
moduladores
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RESUMEN
Existen numerosas enfermedades de base inmunológica: autoinmunes e inflamatorias,

inmunodeficiencias, alérgicas y de hipersensibilidad, cuyo tratamiento se basa en el uso de fármacos
y agentes biológicos inmunomoduladores, ya sea capaces de aumentar (inmunoestimuladores) o
de suprimir (inmunosupresores) las respuestas del sistema inmune alterado o deficiente. Algunos
de estos fármacos también se utilizan en la prevención y tratamiento del rechazo de trasplantes,
situación en la cual el sistema inmune reacciona frente a la agresión causada por los antígenos
extraños del trasplante. En este capítulo se hará mención a algunos de los inmunomoduladores de
mayor aplicación clínica actual.
1. INTRODUCCIÓN origen biológico, están actualmente disponibles en

cantidades ilimitadas, y en formas extraordinaria-
Un inmunomodulador puede definirse como mente puras gracias a las tecnologías de DNA
una sustancia biológica o no biológica que influen- recombinante, de hibridomas y de clonación ce-
cia directamente una función inmune específica, lular. Los más conocidos y en uso clínico se seña-
o indirectamente al modificar uno o más de los lan en la tabla 39-1.
componentes del sistema inmune. Así, por ejem-
plo, los inmunomoduladores pueden participar en: 2.1. Antiproliferativos
(a) la reconstitución de un sistema inmune
globalmente deficiente, (b) la reconstitución se- En este grupo se encuentran los agentes
lectiva de un defecto inmune específico, (c) la alquilantes y los inhibidores del metabolismo de
estimulación de una función normal, por ejemplo las purinas y pirimidinas, incluidos varios nuevos
de células supresoras o citotóxicas y (d) la elimi- inhibidores.
nación o supresión selectiva de un tipo celular o
de una función inmune específica, por ejemplo, a) Agentes Alquilantes
de células tumorales o de células supresoras acti-
vadas. Estos agentes forman uniones covalentes
Pese a los enormes avances en la obtención con el DNA, y cuando se administran a altas do-
de inmunomoduladores selectivos y específicos, sis, conducen a la muerte celular. La mayoría de
la principal limitación de su uso clínico reside en las drogas de este grupo fueron originalmente
la complejidad del sistema inmune, que hace prác- aplicadas en dosis altas en el tratamiento del cán-
ticamente imposible modular un componente ais- cer. Sin embargo, en dosis más bajas o en forma
lado de esta red sin perturbar la homeostasis de de "pulsos" intravenosos de aplicación periódica
todo el sistema. se han demostrado útiles como agentes
inmunosupresores y antinflamatorios. Su acción
2. PRINCIPALES INMUNOMODULADO- se ejerce, principalmente, sobre los linfocitos B
RES pudiendo llegar a causar la supresión de la pro-
ducción de anticuerpos e hipogammaglo-
Aunque la experiencia con inmunomodula- bulinemia, los linfocitos T CD8 a bajas dosis y
dores en estudios clínicos controlados es aún li- los linfocitos T CD4 a altas dosis.
mitada, algunos de estos agentes constituyen las Actúan principalmente en células en división
modalidades terapéuticas de elección en ciertas pa- y su uso implica riesgos como el desarrollo de
tologías, habiendo sido aprobados para su uso clí- aplasia medular, alopecía, esterilidad, cistitis
nico. Algunos de estos agentes, originalmente de hemorrágica. Usados a largo plazo puede llegar a
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Tabla 39-1. Inmunomoduladores ce, principalmente, sobre los linfocitos T CD4 y
CD8 y sobre las células NK, pero también sobre
el conjunto de células hematopoyéticas, por lo cual
Antiproliferativos se requiere un ajuste muy preciso de sus dosis. La
Alquilantes administración concomitante de inhibidores de la
Inhibidores del metabolismo de las purinas síntesis de ácido úrico (alopurinol), debe evitarse
y de las pirimidinas debido al riesgo de aplasia medular. La sobredosis
Antagonistas de las Inmunofilinas puede producir pancitopenia, macrocitosis aisla-
Glucocorticoides da y lesiones hepáticas. Este fármaco es utilizado
Agentes biológicos principalmente en la prevención del rechazo de
Globulinas antilinfocito y antitimocito trasplantes de órganos, con frecuencia asociado a
Gammaglobulina endovenosa corticoides. Una vez que el esquema terapéutico
Anticuerpos monoclonales se establece, la dosis se mantiene salvo la ocu-
Citoquinas rrencia de una patología infecciosa. La azatioprina
Trasplante de médula ósea ha sido utilizada en forma prolongada en tras-
Células autólogas modificadas plantes dada la ausencia de nefrotoxicidad a dosis
Inmunoestimuladores sintéticos habituales, y que en todo caso, requiere ajuste de
dosis si existe insuficiencia renal. La tioguanosina,
uno de sus metabolitos, es capaz de producir rup-
turas cromosómicas, pero el riesgo oncogénico de
la azatioprina en monoterapia no está bien esta-
desarrollarse tumores, como cáncer vesical y blecido. En las enfermedades autoinmunes, la
leucemia mieloide. azatioprina se utiliza principalmente en las for-
Uno de los más usados es la ciclofosfamida, mas corticorresistentes o corticodependientes con
de gran utilidad en el tratamiento de formas seve- el fin de reducir la dosis de éstos y sus efectos
ras de enfermedades reumatológicas autoinmunes indeseables.
e inflamatorias.
c) Nuevos inhibidores de la biosíntesis de
b) Inhibidores del metabolismo de las purinas nucleótidos
y pirimidinas
Estos fármacos que inhiben en forma similar
Metotrexato. Es un inhibidor de la tetrahidrofolato las respuestas linfocitarias T y B, pero con una
reductasa bloqueando así la síntesis de timidilato, menor incidencia de mielosupresión que los agen-
la síntesis de novo de purinas y la división celular. tes anteriormente analizados. La mizobirina y el
En dosis altas, produce una fuerte toxicidad ácido micofenólico inhiben la acción de la
hematológica y digestiva, aunque este efecto pue- inosinmonofosfatodehidrogenasa, suprimiendo la
de neutralizarse con la administración preventiva síntesis de nucleótidos guanínicos. Su uso es cre-
de ácido fólico. A dosis bajas inhibe la función de ciente en la prevención del rechazo de alotras-
las células B, suprime la función macrofágica, la plantes, con muy buenos resultados. Brequinar
quimiotaxis de los neutrófilos, la producción de inhibe la enzima dihidroorotato dehidrogenasa,
ciertos leucotrienos, y la producción de citoquinas requerida para la síntesis de novo de pirimidinas.
como la IL-1 (IL: Interleuquina). No se asocia con
mayor riesgo de mutagenicidad ni teratogenicidad, 2.2. Antagonistas de las Inmunofilinas
pero posee toxicidad hepática y puede producir
fibrosis pulmonar. Se utiliza en el tratamiento de Ciclosporina A. Es un derivado de origen fúngico,
enfermedades reumatológicas autoinmunes e descubierto en 1976, que actúa selectivamente
inflamatorias. frente a linfocitos T activados. Se une a recepto-
res intracitoplasmáticos, las ciclofilinas A, B, C y
Azatioprina. Es un derivado de la 6-mercapto- D de la familia de las inmunofilinas; el complejo
purina; no es activo por sí mismo, sino por sus formado inhibe la acción de la fosfatasa 2B o
derivados. Bloquea la transformación del ácido calcineurina. Este efecto conduce a un bloqueo
inosínico en ácido adenílico, precursor de bases de la transcripción, calcio dependiente, del gen de
purínicas (guanina, hipoxantina). Su acción se ejer- IL-2 y de otras citoquinas como IL-3, IL-4 e
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interferón gamma (IFN-γ). Al contrario de los en particular, genes que codifican para citoquinas.
fármacos ya analizados, que actúan sobre todas También tienen efectos sobre la traducción del
las células que sintetizan activamente DNA, este RNA, la síntesis y la secreción de citoquinas ( IL-
fármaco actúa exclusivamente sobre los 2 e IFN-γ)
linfocitos activados, principalmente sobre los In vivo, los glucocorticoides inhiben el acce-
linfocitos T CD4. No tiene efectos adversos so- so de los leucocitos a focos inflamatorios. A dosis
bre la hematopoyesis y no modifica la pobla- altas, inducen una leucocitosis por movilización
ción de linfocitos T de memoria. Su acción del "pool" marginal y una linfopenia que afecta
inmunosupresora es rápidamente reversible des- principalmente a linfocitos T CD4, por redistri-
pués de suspender la terapia. bución de éstos. Tienen por lo tanto su mayor efec-
Por su gran potencia inmunosupresora y su to sobre la inmunidad celular.
relativa mayor selectividad de acción este agente Su acción antinflamatoria se explica, princi-
farmacológico ha revolucionado la era de los tras- palmente, por los efectos que poseen sobre
plantes, mejorando muy significativamente la macrófagos y neutrófilos. Ellos inhiben la sínte-
sobrevida y la calidad de vida de los pacientes. sis de IL-1, IL-6 y en menor grado, de TNF. Tam-
También se utiliza en formas severas de enferme- bién disminuyen la síntesis de prostaglandinas y
dades autoinmunes e inflamatorias. de leucotrienos, y la actividad de la fosfolipasa
Entre sus efectos secundarios podemos men- A2, además de inhibir la cicloxigenasa de los
cionar: nefrotoxicidad, con hipertensión arterial macrófagos. Inhiben la óxido nítrico sintetasa y
secundaria, hipertrofia gingival, hipertricosis, así la producción del vasodilatador local, óxido
parestesias distales, síndromes del tipo hemolítico- nítrico (NO). También son inhibidores de distin-
urémico, y raramente, hepatitis con patrón tas proteasas: colagenasa, elastasa y activador del
colestásico. plasminógeno y de la producción de derivados del
NO. Actúan sobre las células endoteliales e inhiben
FK506. Es un macrólido de origen fúngico, que la permeabilidad vascular inhibiendo la expresión
actúa a menores dosis que la ciclosporina A. Este de los genes MHC de clase II y de las moléculas
fármaco se liga a una inmunofilina citoplasmática, de adhesión ELAM-1 e ICAM-1. En el hombre,
la FKBP, y este complejo también inhibe, a nivel sólo los timocitos y los linfocitos T activados son
transcripcional, la síntesis de IL-2 y otras susceptibles a la lisis por apoptosis.
citoquinas. Los corticoides de síntesis más utilizados
como inmunosupresores son la prednisona y la
Rapamicina. Es otro macrólido que se une al metilprednisolona. Los efectos secundarios son
mismo receptor citoplasmático que FK506 pero múltiples: síndrome Cushingoide, hipertensión
sus efectos son distintos. Este fármaco bloquea la arterial, osteoporosis, cataratas, diabetes, altera-
actividad de una serintreoninquinasa y su asocia- ción del crecimiento, acné, defectos de cicatriza-
ción con la ciclina D1, que controla la entrada de ción, entre otros.
las células a la fase S del ciclo celular. Por ello, la
rapamicina no disminuye la síntesis de citoquinas 2.4. Agentes biológicos
pero impide la expansión clonal de linfocitos T
estimulados por antígenos. Globulinas antitimocitos o antilinfocitos. Se
obtienen inmunizando conejos o caballos con es-
2.3. Glucocorticoides tas células de origen humano y se utilizan, princi-
palmente, en la prevención y tratamiento de los
Los glucocorticoides constituyen uno de los rechazos de trasplante. Tienen el severo riesgo de
grupos de drogas más importantes en el tratamien- inducir el desarrollo de la enfermedad del suero,
to de enfermedades mediadas inmunológicamente. debido a la producción de anticuerpos contra es-
Son además, los más potentes antinflamatorios tos anticuerpos heterólogos (de otra especie), que
conocidos. Estos fármacos son capaces de unirse se manifiesta clínicamente en 10 a 30% de los
a receptores intracitoplasmáticos y son traslocados pacientes, alrededor del décimo día de tratamien-
al núcleo celular, donde el complejo se fija a se- to, con la aparición de fiebre, artritis, adenopatías
cuencias reguladoras específicas, los elementos de dolorosas, y leucocitosis con trombocitopenia y
respuesta a glucocorticoides, modulando positiva caída del nivel plasmático del fármaco adminis-
o negativamente la transcripción de ciertos genes, trado. Esta patología implica la detención de la
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Sin título-2 631 5/26/06, 10:26 AM

terapia o el cambio por un anticuerpo de otro ori- tienen el potencial de inducir anticuerpos en el in-
gen. dividuo y desencadenar una enfermedad del sue-
ro y otros síndromes de hipersensibilidad, pero esto
Inmunoglobulinas intravenosas: Se utilizan es raro.
inmunoglobulinas intravenosas como terapia de La modificación de este tipo de fármacos sus-
reemplazo en pacientes con inmunodeficiencias tituyendo la región Fc de la inmunoglobulina por
primarias de anticuerpos (ver capítulo 30), y tam- una secuencia aminoacídica de anticuerpo huma-
bién en algunas inmunodeficiencias secundarias no, puede colaborar en producir anticuerpos
con déficit de inmunoglobulinas. monoclonales menos sensibilizantes y con mejor
Existen variadas inmunoglobulinas intrave- cinética in vivo.
nosas comerciales. Estas deben estar libres de agre- Actualmente su producción in vitro en siste-
gados, y provenir de un "pool" de más de 1.000 ma de producción industrial, está llevando a un
donantes en los cuales se ha descartado la presen- requerimiento cada vez menor del uso de anima-
cia de infecciones trasmisibles como la causada les. A través de la ingeniería genética se están ge-
por el VIH y otros virus. nerando anticuerpos monoclonales quiméricos,
La terapia de reemplazo con inmunoglo- humanizados e incluso humanos.
bulinas está indicada en pacientes con niveles de
IgG significativamente disminuidos y que tienen 2.5. Citoquinas
una deficiencia de anticuerpos documentada, de
significado clínico. Su propósito es proveer canti- Interferones. Comprenden una familia de proteí-
dades suficientes de anticuerpos específicos, para nas (glicoproteínas en el estado natural y proteí-
disminuir la frecuencia y severidad de las infec- nas no glicosiladas producidas por tecnología de
ciones que presentan estos pacientes y mejorar su DNA recombinante) clasificadas como alfa, beta
calidad de vida. y gamma (ver capítulo 11). El IFN-α es produci-
do por los leucocitos polinucleares, el IFN-β por
Anticuerpos monoclonales. Producidos por un los fibroblastos, y el IFN-γ por los linfocitos T.
solo clon de células B, son monoespecíficos y Además de sus conocidas propiedades
homogéneos. Los anticuerpos monoclonales se antivirales, los interferones tienen efectos
utilizan como agentes terapéuticos principalmen- antiproliferativos contra células tumorales, y efec-
te en el tratamiento del rechazo agudo de tos específicos sobre las funciones inmunológicas.
alotrasplantes, in vitro en la eliminación de célu- El IFN-α está estructuralmente relacionado al IFN-
las de la médula ósea, como agentes anti-tumorales β y ambos son producidos en respuesta a la
y en el tratamiento de ciertas enfermedades estimulación con virus y polirribonucleótidos. En
inflamatorias crónicas. cambio, el IFN-γ no está relacionado estructu-
Entre los anticuerpos monoclonales más usa- ralmente con ellos, y es producido por los
dos, especialmente en el tratamiento del rechazo linfocitos T en respuesta a estímulos específicos,
agudo de trasplantes se encuentra el anticuerpo mitógenos e IL-2. Además, tiene importantes pro-
monoclonal anti-CD3 (OKT3), con poderoso efec- piedades inmunomoduladoras que no poseen los
to inmunosupresor. El sitio probable de acción de otros interferones.
este fármaco es la interferencia con señales de Los IFNs que están actualmente en uso clí-
transducción que siguen al reconocimiento del nico son IFNs naturales parcial o altamente puri-
receptor T al antígeno presentado por células pre- ficados, e IFNs altamente purificados producidos
sentadoras de antígeno. Además existiría un efec- por ingeniería genética o recombinantes. Su uso y
to de lisis directa de los linfocitos T CD3 debido a eficacia han sido difíciles de probar, tanto por sus
que se produce una rápida caída de los recuentos variadas preparaciones, vías de administración y
linfocitarios. dosis, como por la heterogeneidad de las situacio-
Existen otros anticuerpos monoclonales apro- nes clínicas en las que se han evaluado.
bados para su uso clínico, utilizados también en Sólo recientemente han surgido algunas in-
la prevención y manejo de rechazos de trasplan- dicaciones precisas en el uso de estos agentes. Fun-
tes, algunos tumores y en enfermedades damentalmente éstas se refieren al uso del IFN-α
inflamatorias como la artritis reumatoidea y la en el tratamiento de las hepatitis virales crónicas
enfermedad de Crohn. por virus B y virus C, IFN-β en la esclerosis múl-
Como estos fármacos son de origen murino, tiple e IFN-γ en la enfermedad granulomatosa cró-
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nica, una inmunodeficiencia primaria que se ca- las LAK. Método descrito en 1980, ha sido exten-
racteriza por un defecto del metabolismo oxidativo samente estudiado en una variedad de tumores
de los leucocitos (ver capítulo 30). metastásicos y en la actualidad se evalúan varias
En la actualidad se dispone de algunos IFNs modificaciones del método original: células LAK
"pegilados"; esto es, unidos a polietilenglicol, lo alogénicas, infusión arterial directa de células LAK
que facilita su utilización permitiendo su admi- y de IL-2 en los órganos afectados, células
nistración semanal, con menos efectos adversos. infiltrantes del tumor activadas (células TIL), etc.
Interleuquina-2. Esta citoquina producida por los 2.8. Isoprinosine

linfocitos T activados, facilita y permite la expan-
sión clonal de estas células. Además, estimula la Isoprinosine es un complejo que contiene
producción de células NK, células killer activa- inosina y paracetaminobenzoato de dimetilamino-
das con linfoquinas (células LAK) (ver capítulo 2-propanol. Gracias a su componente inosina, este
37), y de linfocitos B. Estimula la actividad NK fármaco estimula a los linfocitos T lo que puede
directamente y quizás también indirectamente es- ser verificado por un aumento de la respuesta de
timulando la producción de IFN-γ. Puede también estas células a los mitógenos. Además de este efec-
estimular a los linfocitos T a producir otras to sobre los linfocitos T, parece aumentar su nú-
linfoquinas activadoras de los linfocitos B. mero así como el número y función de las células
La IL-2 se ha estudiado en pacientes con cán- NK. También aumenta la función de los linfocitos
cer y en la infección VIH/SIDA. En la actualidad B activados por el Ag.
se utiliza, combinada con IFN-α, en el tratamien- Isoprinosine estimula la síntesis de RNA en
to del cáncer renal metastásico, y asociada con te- linfocitos activados, a través de la activación de
rapia antirretroviral específica, en ciertos casos de la vía "salvaje" de las purinas.
SIDA. Muchas infecciones virales frecuentemente
También se está evaluando la administración disminuyen la inmunidad celular en forma transi-
intratumoral de genes de citoquina para lograr una toria, en muchos casos esta forma de inmunosu-
secreción paracrina de citoquinas inmunoesti- presión puede corregirse con el uso de
muladoras, por ejemplo, del gen de la IL-2 en cán- isoprinosine.
cer renal metastásico.
2.6. Trasplante de médula ósea 3. EFECTOS ADVERSOS DE LOS INMU-

NOMODULADORES
El objetivo del trasplante de médula ósea es
el reemplazo de las células defectuosas o ausen- Los tratamientos inmunosupresores producen
tes del receptor, con células inmunocompetentes un déficit inmunitario que puede traducirse en pa-
normales capaces de autorreplicarse. La médula tologías infecciosas o tumorales, por lo cual estas
ósea normal contiene células pluripotenciales que terapias deben ser cuidadosamente vigiladas del
pueden dar origen a eritrocitos, granulocitos, cé- punto de vista clínico y de laboratorio.
lulas de la línea monocito-macrofágica, La inmunosupresión intensa acarrea el ries-
megacariocitos, y células T y B inmunocom- go de infecciones oportunistas, particularmente
petentes. Constituye actualmente la única forma pneumocystosis, toxoplasmosis, listeriosis,
de terapia adecuada para pacientes con legionellosis, aspergillosis y criptosporidiosis.
inmunodeficiencias severas, celulares y combina- Las infecciones virales son frecuentes en los
das. En trasplantes HLA-idénticos la sobrevida es inmunodeprimidos, especialmente por citome-
de un 80%, con evidencias de injerto exitoso de galovirus, herpes simplex 1 y 2, virus de Epstein-
células T y células pluripotenciales del donante. Barr, virus varicella zoster, papilomavirus e inclu-
En trasplantes HLA-haploidénticos, aproximada- so, por virus de Hepatitis B y C.
mente el 54% de los pacientes sobrevive. La mayor parte de las infecciones virales cró-
nicas pueden conducir al desarrollo de cánceres,
2.7. Células autólogas modificadas especialmente después de terapias inmunosu-
presoras prolongadas: epiteliomas espinocelulares,
Son linfocitos T y células NK activadas por cáncer de cuello uterino, linfomas, hepato-
incubación con IL-2, a las que se denomina célu- carcinomas, entre otros.
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Existen distintos protocolos terapéuticos en
trasplantes y en enfermedades autoinmunes, y ac-
tualmente están en ensayo diferentes metodologías
de manipulación de la respuesta inmune, que pre-
tenden minimizar las consecuencias negativas de
estas terapias.
LECTURAS SUGERIDAS
Bounpas, D., "Glucocorticoid Therapy for

Immune-mediated Diseases: Basic and Clinical
Correlates", Ann Int Med., 119:1198,1993.
Buckley, R., "Bone marrow reconstitution in

primary immunodeficiency" en Clinical
Immunology (Rich R., editor), Mosby-Year Book,
Inc St Louis, Nissouri, 1996.
Calabresi, P., Chabner B., "Antineoplastic agents"

in Goodman and Gillman's, The Pharmacologic
Basis of Therapeutics, 8va. Edición, McGraw
Hill, New York, 1993.
Hong J.C., Kahan B.D. "Immunosuppressive

agents in organ transplantation: past, present, and
future", Sem nephrol 20; 108, 2000.
International Chronic Granulomatous Disease

Cooperative Study Group, "A controlled trial of
interferon gamma to prevent infection in chronic
granulomatous disease", N Eng J Med,
324:509,1991.
Rosenberg, S.; Yannelli, J.; Yang, J. et al.,

"Treatment of patients with metastasic melanoma
using autologous tumor infiltrting lymphocytes
and interleukin-2, J Natl Cancer Inst, 86: 1159,
1994.
Rovira P.; Mascarell, L.; Truffa-Bachi, P., "The

impact of immunosuppressive drugs on the
analysis of T cell activation", Curr Medicin Chem
7: 673; 2000.
634
Sin título-2 634 5/26/06, 10:26 AM

SECCIÓN V
MÉTODOS INMUNOLÓGICOS Y DE
BIOLOGÍA MOLECULAR
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Capítulo 40
MÉTODOS INMUNOQUÍMICOS
Darwins Castillo A. y Carolina Valenzuela B.
1. Introducción c) Aglutinación pasiva

2. Inmunoanálisis 2.1.3. Reacción con participación del
2.1.Inmunoanálisis con reactivos no mar- complemento
cados a) Fijación del complemento
2.1.1. Reacción de precipitación b) Actividad hemolítica del comple-
2.1.1.1. Reacción de precipitación mento
en medio líquido 2.2. Inmunoanálisis con reactivos marcados
a) Precipitación en tubo 2.2.1. Inmunoanálisis fluorescente
b) Floculación a) Microscopía inmunofluorescente
c) Turbidimetría b) Inmunoanálisis de fluorescencia
d) Nefelometría polarizada
e) Precipitación de complejos inmu- c) Inmunoanálisis de fluorescencia
nes solubles unida a enzima
2.1.1.2. Reacción de precipitación d) Citometría de flujo
en gel 2.2.2. Enzimainmunoanálisis (EIA)
a) Inmunodifusión doble a) EIA homogéneo
b) Inmunodifusión radial b) EIA heterogéneo
c) Inmunoelectroforesis c) Electroinmunotransferencia o
d) Inmunofijación “Western blot” o “Immunoblotting”
e) Contrainmunoelectroforesis 2.2.3. Radioinmunoanálisis (RIA)
f) “Rocket” inmunoelectroforesis a) RIA en fase soluble
g) Inmunoelectroforesis cruzada o b) RIA en fase sólida
bidimensional de Laurell c) Detección inmunorradiométrica
2.1.2. Reacción de aglutinación para antígeno
a) Aglutinación directa 2.2.4. Quimiluminiscencia
b) Aglutinación indirecta 2.2.5. Bioluminiscencia
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RESUMEN
La base de los métodos inmunoquímicos es la unión del antígeno y/o hapteno con el anti-
cuerpo, es una reacción específica, de alta afinidad y reversible. Está definida por una constante
de equilibrio o de asociación intrínseca (K) que es una medida de fuerza de la interacción de la
reacción para formar complejos estables.
Los anticuerpos son proteínas relativamente estables, y sus reacciones con haptenos o
antígenos pueden ser estudiados en un amplio rango de condiciones. Las modificaciones en la
constante de asociación inciden en las fuerzas que estabilizan los complejos antígeno-anticuerpo
(Ag-Ac). La reacción es dependiente de algunos parámetros como: temperatura, pH y fuerza
iónica del medio que deben considerarse al llevar a cabo un inmunoanálisis.
Los inmunoanálisis pueden ser divididos en métodos que requieren de sistemas Ag-Ac no
marcados y marcados. La mayoría de los inmunoanálisis no marcados se basan en reacciones
inmunes secundarias (precipitación). Los inmunoanálisis marcados se basan en reacciones in-
munes primarias (inmunoanálisis fluorescentes).
En el inmunoanálisis con reactivos no marcados, la interacción de antígenos solubles
macromoleculares y anticuerpos específicos llevan a la formación de complejos, que en una
relación molar equivalente precipitan en solución (precipitación). Existe una reacción anómala
llamada floculación, en que la precipitación se observa sólo en un rango muy estrecho de la
proporción Ag/Ac. La interacción de antígenos particulados con sus anticuerpos específicos pro-
ducen aglutinación. La turbidimetría y nefelometría determina niveles de antígeno o de anti-
cuerpo en baja concentración, formando pequeños agregados que producen una turbidez que
puede ser medida por disminución y dispersión de la luz incidente, respectivamente.
Los métodos de precipitación en gel detectan la presencia y/o concentración de antígenos
y/o anticuerpos por la formación de bandas, anillos o arcos de precipitado que corresponden a
complejos antígeno-anticuerpo en la zona de equivalencia (inmunodifusión doble,
inmunodifusión radial, inmunoelectroforesis, inmunofijación, contrainmunoelectroforesis,
“rocket” inmunoelectroforesis e inmunoelectroforesis cruzada).
El inmunoanálisis con reactivos marcados se clasifica en homogéneo o heterogéneo y
puede ser de dos tipos competitivo y no competitivo. El inmunoanálisis fluorescente incluye la
microscopía inmunofluorescente que corresponde a la tradicional inmunofluorescencia (IF)
que es una técnica inmunohistoquímica o inmunocitoquímica que permite la localización de
antígenos en células ó tejidos, y la detección y titulación de anticuerpos específicos; el
inmunoanálisis de fluorescencia polarizada (FPIA) que es homogéneo y competitivo; el
inmunoanálisis de fluorescencia unida a enzima (ELFIA) que es heterogéneo y puede ser
competitivo o no competitivo; y la citometría de flujo que permite medir la cantidad de anti-
cuerpo monoclonal fluorescente unido en cada célula que atraviesa un láser e identificarla según
su tamaño y granularidad de acuerdo a la forma que deflecta o dispersa la luz del láser.
El enzimainmunoanálisis (EIA) se basa en dos fenómenos biológicos: reacción
inmunológica (unión Ag-Ac) y la amplificación por reacciones químicas (enzima que actúa so-
bre el sustrato). Se dispone de EIA homogéneo representado por el “enzyme-multiplied
immunoassay technique” (EMIT) que además es competitivo y de EIA heterogéneo, como el
"enzyme-linked inmunosorbent assay" (ELISA) y el "microparticle enzyme immunoassay"
(MEIA) que además son no competitivos. La electroinmunotransferencia combina la
electroforesis en gel SDS-poliacrilaminada y el enzimainmunoanálisis. El radioinmunoanálisis
(RIA) utiliza antígeno o anticuerpo, generalmente marcados con isótopos como 125I o, eventual-
mente, 131I y este inmunoanálisis puede llevarse a cabo en fase soluble o sólida.
Finalmente existe el inmunoanálisis quimiluminiscente que utiliza la emisión de luz pro-
ducida en ciertas reacciones químicas de oxidación, como por ejemplo, la oxidación del luminol
y el inmunoanálisis bioluminiscente que se basa en un sistema natural la D-luciferina/luciferasa,
en que la luciferasa cataliza la oxidación de la D-luciferina en presencia de ATP y Mg+2 a
oxiluciferina, con emisión de luz a 546 nm.
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1. INTRODUCCIÓN como ultracentrifugación, "quenching" fluores-
centes, y otros. Pero, el método que se utiliza
La unión del antígeno (Ag) con el anticuer- corrientemente es el equilibrio de diálisis.
po (Ac) es una reacción fundamental en la meto- En forma práctica, en el laboratorio se calcula
dología inmunoquímica. En general, la mayoría la constante de asociación intrínseca promedio
de los antígenos son macromoléculas, especial- (Ko) obtenida a través de la ecuación de Scatchard,
mente proteínas con una estructura completamente que se define por la concentración de hapteno o
establecida en que regularmente no conocemos la ligando libre requerida para ocupar la mitad de
identidad, ni la conformación del determinante los sitios activos o de unión de los anticuerpos.
antígénico que reacciona con el anticuerpo, ni el De acuerdo a esta premisa, en la ecuación 2:
número por molécula de Ag. Para comprender la
reacción Ag-Ac y evitar reacciones complicadas [Hp Ac] = [Ac], por lo tanto,
con Ags macromoculares, en adelante se van a
considerar reacciones de Acs específicos con mo-
léculas de haptenos (Hp) simples. 1
La producción de Acs contra Hp se obtiene Ko=
generalmente inmunizando animales con el Hp [Hp]
unido covalentemente a una proteína. La forma-
ción de complejos específicos Hp-Ac puede ser
examinados en detalle con sistemas relativamen- La unidad de Ko es el recíproco de la concentra-
te simples y los anticuerpos que reaccionan son ción, es decir, litro/moles.
fácilmente aislados e identificados.
Como se ha señalado, la base de los métodos Los anticuerpos son proteínas relativamente
inmunoquímicos es la unión del antígeno y/o estables y sus reacciones con haptenos o antígenos
hapteno con el anticuerpo. Esta reacción se carac- pueden ser estudiados en un amplio rango de
teriza por ser específica, de alta afinidad y rever- condiciones. Las modificaciones que se producen
sible. Está definida por una constante de equili- en la constante de asociación inciden en las fuerzas
brio o de asociación intrínseca (K) que es una que estabilizan los complejos Ag-Ac. Por lo tanto,
medida de la fuerza de interacción de la reacción las características de la reacción es dependiente
para formar un complejo estable. de varios parámetros como: temperatura, pH y
fuerza iónica del medio. Por ejemplo, un aumento
k de la temperatura puede afectar la interacción del
Hp + Ac [Hp Ac] (1) anticuerpo con hapteno o antígeno que puede
k' disminuir o no la constante de asociación y, por lo
tanto, modificar la afinidad. Sin embargo, la
práctica general es incubar la mezcla de
k [Hp Ac] anticuerpos y antígenos a 37ºC o a temperatura
K= = (2) ambiente (aproximadamente 22º C).
k' [Hp] [Ac] La unión del hapteno p-aminobenzoato con
el anticuerpo anti-p-aminobenzoato disminuye
tanto con la reducción de pH de 7 a 4, como con el
aumento de la concentración de cloruro de sodio
k : constante de asociación (NaC1) desde 0,1 a 1 M. Sin embargo, idénticos
k': constante de disociación cambios no afectan a la unión del hapteno 2,4-
dinitroanilina (DNP) a su anticuerpo anti-DNP. La
explicación se debería probablemente a que el
K representa la afinidad intrínseca de un sitio grupo COO- del benzoato interactúa con un grupo
activo representativo del anticuerpo por un hapteno cargado positivamente del sitio de combinación
o ligando en término de concentración en de los anticuerpos y que en cambio, en el grupo
equilibrio, que puede calcularse midiendo la DNP las interacciones iónicas no son importantes
concentración de hapteno o ligando libre. para la unión con el sitio de su anticuerpo.
Existen varios métodos para distinguir
hapteno libre (Hp) de hapteno unido (Hp-Ac),
640
Sin título-2 640 5/26/06, 10:26 AM

2. INMUNOANÁLISIS (Ag-Ac) con relación variable de Ag o de Ac, que
frecuentemente llegan a ser insolubles y precipitan
Los inmunoanálisis son actualmente en solución. Esta se conoce como reacción de
herramientas de amplio uso en los laboratorios precipitación que es dependiente de la relación
para medir diferentes analitos biológicos, debido molar Ag y Ac. La formación de complejos de
a su facilidad de trabajo, como en la obtención de haptenos o de pequeños antígenos univalente con
resultados sensibles y específicos. sus anticuerpos son solubles. La interacción de
Los inmunoanálisis pueden ser divididos en antígenos particulados, como microorganismo o
métodos que requieren de sistemas Ag-Ac no células con sus anticuerpos específicos producen
marcados y marcados. La mayoría de los la reacción de aglutinación. En la tabla 40-1 se
inmunoanálisis no marcados se basan en muestran los métodos de inmunoanálisis con
reacciones inmunes secundarias, como por reactivos no marcados.
ejemplo, precipitación y aglutinación. Se miden
por métodos cuya base es la dispersión de la luz o 2.1.1. Reacción de precipitación
por recuento de partículas o células Los
inmunoanálisis marcados se basan en reacciones 2.1.1.1. Reacción de precipitación en medio
inmunes primarias, como por ejemplo, inmunoa- líquido
nálisis fluorescente y enzimainmunoanálisis.
a) Precipitación en tubo. La precipitación en tubo
2.1. Inmunoanálisis con reactivos no marcados es un procedimiento que no se usa corrientemente
en el laboratorio, pero que es necesario conocer
La interacción de antígenos solubles para apreciar las características generales de la
macromoleculares (polivalentes) y anticuerpos reacción de anticuerpo con antígeno de alto peso
específicos llevan a la formación de complejos molecular en medio líquido. En forma práctica se
Tabla 40-1. Inmunoanálisis con reactivos no marcados
Reacción de precipitación
En medio líquido
Precipitación en tubo
Floculación
Turbidimetría
Nefelometría
Precipitación de complejos inmunes solubles
En gel
Inmunodifusión doble
Inmunodifusión radial
Inmunoelectroforesis
Inmunofijación
Contrainmunoelectroforesis
“Rocket” inmunoelectroforesis
Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional de Laurell
Reacción de aglutinación
Aglutinación directa
Aglutinación indirecta
Aglutinación pasiva
Reacción con participación del complemento

Fijación del complemento
Actividad hemolítica del complemento
641
Sin título-2 641 5/26/06, 10:26 AM

realiza en una batería de tubos que contienen un acuerdo a la teoría del enrejado (“lattice theory”)
volumen fijo de antisuero (concentración fija de de Heidelberger, Kendall y Marrack. Ellos
anticuerpo) a los que se les añade diferentes sugirieron que la precipitación puede ser
concentraciones de antígeno, midiendo la proteína consecuencia del crecimiento del agregado
total del precipitado formado y detectando el antígeno-anticuerpo de tal manera que la molécula
excedente de Ac o de Ag en el sobrenadante. del antígeno se une a más de una molécula de
Como se muestra en la figura 40-1, a una anticuerpo y cada molécula de anticuerpo se une
concentración definida de anticuerpos, la cantidad a más de una de antígeno en que participan
de complejo Ag-Ac precipitado aumenta con la activamente interacciones Fc-Fc, de manera que
cantidad de antígeno añadido hasta un valor cuando el agregado excede un volumen crítico,
máximo, que sobrepasándolo lleva a una precipita espontáneamente.
disminución progresiva de la precipitación. Se El precipitado formado puede disociarse y
produce precipitación de una cantidad máxima de volver al equilibrio con adición de Ag fresco. Cuando
anticuerpos por una cantidad óptima de antígeno. se produce un exceso suficiente se forman pequeños
Figura 40-1. Curva de precipitación para un complejo específico Ag-Ac.
En la curva de precipitación se encuentra una complejos solubles y el precipitado se solubiliza.

zona de exceso de anticuerpos, el sobrenadante
contiene anticuerpo libre, una zona de exceso de b) Floculación. La floculación es una reacción de
antígeno, el sobrenadante contiene antígeno libre precipitación anómala, donde la precipitación se
y una zona de equivalencia o punto de equivalen- observa solamente en un rango muy estrecho de la
cia, el sobrenadante está libre de anticuerpo y proporción Ag/Ac. Los agregados insolubles se
antígeno libre. forman en una relativa gran cantidad de Ag. Estas
Es importante tener presente que en las zo- reacciones se dan sólo con algunos antisueros, como
nas de exceso de anticuerpos y de antígenos se por ejemplo, sueros de caballos antitoxina diftérica,
detectan complejos inmunes solubles. En la zona antitoxina tetánica y antitoxinas estreptocócicas y
de exceso de antígeno los sobrenadantes contienen suero humano anti-tiroglobulina. Es posible que los
complejos solubles de varias composiciones como antisueros que floculan contengan algunos
Ag4 Ac3, Ag3 Ac2 y Ag2 Ac. En el extremo de anticuerpos no precipitantes de alta afinidad que
esta zona los complejos que principalmente se deben ser previamente saturados con el antígeno.
forman son Ag2 Ac que se atribuye a los dos sitios
activos o a la divalencia de la molécula de anti- c) Turbidimetría. La turbidimetría cuantifica la
cuerpo IgG. Este fenómeno es explicado de nubosidad o turbidez de una solución en que
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Sin título-2 642 5/26/06, 10:26 AM

reacciona el antígeno con el anticuerpo en baja 2.1.1.2. Reacción de precipitación en gel
concentración. El fotodetector está en línea a la
luz incidente y la solución, en ángulo de 0° o 180° Los métodos de precipitación en gel
y mide una disminución de la señal o reducción permiten detectar la presencia y/o concentración
en la intensidad de la luz que ocurre como de antígenos y/o anticuerpos presente, por la
resultado de la combinación de la reflexión, formación de bandas opacas de precipitado que
absorción o dispersión de la luz incidente. corresponden a complejos antígenos-anticuerpos
en la zona de equivalencia.
d) Nefelometría. La nefelometria es una técnica
que permite determinar niveles de antígeno o de a) Inmunodifusión doble. La inmunodifusión
anticuerpo en soluciones a muy baja concen- doble fue desarrollada principalmente por
tración. La nubosidad o turbidez que producen los Ouchterlony en Suecia. Se basa en la difusión del
pequeños inmunocomplejos es medida por la luz Ag y el Ac en un medio semisólido (gel de agar),
que se dispersa (“scattered light”), a través de un formando bandas de precipitación donde los
fotodetector que está en un ángulo diferente a la reactantes están en proporciones equivalentes.
fuente de luz incidente (30° a 90°). Se puede Estos complejos son insolubles y pueden ser
obtener una gran sensibilidad usando luz analizados visualmente.
monocromática de un rayo láser y por adición de La técnica se basa en preparar un gel uniforme
polietilenglicol que aumenta el tamaño de los de agar en una placa Petri o portaobjeto. En el agar
agregados. En el laboratorio clínico se está usando se practica perforaciones de un diámetro y esquema
masivamente por sus ventajas en la cuantificación previamente establecidos. Las soluciones que
de proteínas, como: rápido, altamente automa- contiene el antígeno y el anticuerpo se colocan en
tizado, simple de operar, usa pequeños volúmenes perforaciones adyacentes y se deja difundir hasta
de muestra y reactivo, alta sensibilidad (menor que formar líneas o bandas de precipitación. La
1 ng/litro) y excelente precisión. intensidad, nitidez y posición de estas bandas es
dependiente de la concentración del Ag y Ac.
e) Precipitación de complejos inmunes solubles. La inmunodifusión doble se utiliza para análisis
Existen algunas situaciones que hacen necesario de antígenos y anticuerpos. Permite determinar la
precipitar complejos inmunes solubles para relación inmunoquímica entre dos antígenos a través
identificar el antígeno o determinar el contenido de de componentes idénticos o de reactividad cruzada.
anticuerpos, que se lleva a cabo modificando la Se distinguen tres patrones de reactividad: reacción
solubilidad del complejo con polietilenglicol al 2% de identidad, de no identidad y de identidad parcial
o sulfato de amonio al 50% o por adición de un o cruzada (figura 40-2). También, puede utilizarse
reactivo anti-inmunoglobulinas (anticuerpos anti- para determinar monoespecificidad de un antisuero
inmunoglobulinas o proteína A de estafilococo). y para conocer el título de los anticuerpos.
Figura 40-2. Inmunodifusión doble. Reacciones de precipitación en agar que ilustran reacciones de identidad, identidad parcial
y no identidad.
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Sin título-2 643 5/26/06, 10:26 AM

La figura 40-3 muestra la utilidad de la húmeda y temperatura constante, se leen los
inmunodifusión doble en la detección de antígenos diámetros del halo de precipitación. Se construye
proteicos en orina. un gráfico o se obtiene la ecuación de la recta con
las concentraciones de referencias versus área o
b) Inmunodifusion radial. La inmunodifusión diámetro del anillo y se interpola la lectura de la
radial es una técnica de precipitación en gel, en muestra problema.
que el agar se ha mezclado con un antisuero mono- Este procedimientos ha sido ampliamente
específico sobre un portaobjeto o placa de Petri. adaptado para medir muchos antígenos, como por
Se hacen perforaciones cilíndricas que se llenan ejemplo, inmunoglobulinas en diversos líquidos
con volúmenes fijos de soluciones de referencia biológicos y su sensibilidad puede llegar a 0,1 mg/
de antígeno para el cual el antisuero es específico ml y su coeficiente de variación es menor al 20%
y con soluciones o muestras problemas. La (figura 40-4).
difusión del Ag en el agar permite la formación
de anillos de precipitación, cuya área es c) Inmunoelectroforesis. La inmunoelectroforesis
proporcional a la concentración inicial del Ag. Al (IEF) desarrollada por Grabar y Williams, es una
término de 16 a 48 horas de difusión en cámara técnica cualitativa que permite la identificación
Figura 40-3. Inmunodifusión doble de una muestra de orina. Se observa un elevado nivel de albúmina y ausencia de IgG, lo
que indica un posible daño inicial del glomérulo.
Figura 40-4. Cuantificación de IgG humana por Inmunodifusión radial. Curva de referencia IgG (pocillos 1 al 4) y muestras
de suero de pacientes (pocillos 5 al 8).
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Sin título-2 644 5/26/06, 10:26 AM

de diferentes antígenos en mezclas complejas, que electroforesis se aplican antisueros monoespe-
pueden tener semejante movilidad electroforética cíficos y la presencia del antígeno complementario
y peso molecular, pero diferentes determinantes forma complejos antígeno-anticuerpo que
antigénicos. precipitan. La formación de un precipitado estable
Esta técnica se realiza en geles de agar o antígeno-anticuerpo fija la proteína en el gel
agarosa y se distinguen dos etapas: (1) la solución (figura 40-6). Se utiliza esencialmente en la
de proteínas se somete a separación electroforética caracterización de inmunoglobulinas mono-
y (2) terminada la electroforesis, las proteínas son clonales.
analizadas con antisueros poli o monoespecíficos La inmunofijación y la inmunoelectroforesis
en el agar en un canal paralelo al eje de migración. son técnicas complementarias en la identificación
Luego de un período de difusión en cámara de una gamapatía monoclonal. La inmunofijación
húmeda, se observan arcos de precipitación cuya debiera ser utilizada frente a proteínas anómalas
forma y posición dependen de las características que son difíciles de caracterizar por inmuno-
inmunoquímicas y de la concentración de cada electroforesis.
antígeno.
La IEF es de gran utilidad para el análisis e e) Contrainmunoelectroforesis. La contrain-
identificación de componentes monoclonales que munoelectroforesis se realiza en gel agar, donde
caracterizan las enfermedades asociadas con el pH del tampón de electroforesis permite que el
gammapatías monoclonales (figura 40-5). anticuerpo de cargue positivamente y el antígeno
negativamente. La sensibilidad del método es
d) Inmunofijación. La inmunofijación es un aproximadamente 20 veces mayor que la doble
procedimiento que utiliza, en una primera etapa, difusión. Actualmente el uso más importante es
la electroforesis de proteína en gel de agarosa y en el diagnóstico de enfermedades infecciosas
luego, la inmunoprecipitación. Sobre la placa de cuyos antígenos migran hacia el polo positivo en
agarosa en que se han separado las proteínas por el agar (figura 40-7).
Figura 40-5. Electroforesis e inmunoelectroforesis del suero de un paciente (p) con gammapatía monoclonal IgG, κ. Suero
control (c), suero anti-IgG (γ), suero anti IgA humana (α), suero anti-IgM humana (µ), suero anti-kappa libre humana (κ) y suero
anti-lambda libre humana (λ).
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Sin título-2 645 5/26/06, 10:26 AM

Figura 40-6. Electroforesis e inmunofijación del suero de un paciente (p) con gammapatía monoclonal IgG, κ. Suero anti-
IgG humana (γ), suero anti-IgA humana (α), suero anti-IgM humana (µ), suero anti-kappa libre humana (κ) y suero anti-lamdda
libre humana (λ).
Figura 40-7. Contrainmunoelectroforesis para la determinación de antígeno de superficie del virus de la hepatitis B. Pocillos
a: Suero de conejo anti-antígeno de superficie del virus de la hepatitis B. Pocillos b: Sueros humanos positivos y negativos a
antígeno de superficie del virus de la hepatitis B.
f) “Rocket” Inmunoelectroforesis. El “rocket” aproximadamente 2 horas. La altura de la zona de

inmunoelectroforesis es la combinación de la precipitación que tiene la forma de un “rocket” es
electroforesis y la inmunodifusion radial que han proporcional a la concentración de antígeno.
proporcionado un método rápido para medir El antígeno debe migrar hacia el polo positivo
concentración de antígenos. El Ag migra por en la electroforesis, por tanto, es conveniente para
electroforesis (aplicado en un pequeño pozo) en un albúmina, transferrina y ceruloplasmina, pero para
agar que contiene antisuero (anticuerpos en exceso). inmunoglobulina es más conveniente la
El tiempo requerido para la precipitación es de inmunodifusión radial (figura 40-8).
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Sin título-2 646 5/26/06, 10:26 AM

Figura 40-8. "Rocket" inmunoelectroforesis para la determinación de albúmina humana. Concentraciones de referencia
de albúmina (pocillos 1 al 3) y muestras de pacientes (pocillos 4 al 7).
g) Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensio- 2.1.2. Reacción de aglutinación

nal de Laurell. La inmunoelectroforesis cruzada
requiere inicialmente la separación electroforética Los antígenos particulados, como microorga-
de una mezcla de antígeno en una dirección per- nismos y suspensiones celulares son corrientemente
pendicular al fenómeno final de precipitación o aglutinados cuando se mezclan con sus antisueros.
de etapa “rocket”. Esta es capaz de resolver mezcla Los anticuerpos son dirigidos contra determinantes
de antígenos altamente complejas y cuantificar antigénicos de superficie que permiten un adecuado
cada uno de ellos (figura 40-9). Por ejemplo, se entrecruzamiento con el Ag particulado permitiendo
ha utilizado para estimar el grado de conversión la reacción de aglutinación. Los principios de la
de tercer componente del complementario (C3) a aglutinación son los mismos descritos para las
la forma inactivada C3c. reacciones con antígenos solubles.
Las reacciones de aglutinación se utilizan
preferentemente para identificar bacteria y tipificar
glóbulos rojos, es llevada a cabo, generalmente
en solución fisiológica (NaCl 0,15 M; pH 7,0) y
es ampliamente utilizada en determinaciones
semicuantitativas.
En las reacciones de aglutinación se debe
considerar el fenómeno de prozona que consiste en
que algunos sueros dan una efectiva reacción de
aglutinación solamente cuando están francamente
diluidos. Sueros no diluidos o diluidos levemente no
reaccionan visiblemente con el Ag. Actualmente se
conoce que en la prozona existen anticuerpos
absorbidos en la superficie celular y el fenómeno se
explica por el exceso de anticuerpos y a la presencia
Figura 40-9. Inmunoelectroforesis cruzada o bidimensional
de anticuerpos conocidos como bloqueadores o
de Laurell. Primera dimensión. El pocillo contiene suero incompletos que corresponden a anticuerpos
humano. Segunda dimensión: el gel de agar contiene un univalentes (Acs con un solo sitio activo).
antisuero oligoespecífico. Los precipitados o "rocket"
corresponden a las siguientes proteínas: (1) transferrina, (2)
alfa 2-macroglobulina, (3) ceruloplasmina, (4) alfa 1-
a) Aglutinación directa. La aglutinación directa
antitripsina, (5) alfa 1-glicoproteína ácida. se utiliza cuando el antígeno particulado posee
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Sin título-2 647 5/26/06, 10:26 AM

suficientes determinantes antigénicos en su 2.2. Inmunoanálisis con reactivos marcados
superficie permitiendo que el antisuero (Ac)
correspondiente produzca espontáneamente el Los inmunoanálisis con reactivos marcados
fenómeno de aglutinación. Se usa regularmente se clasifican en: homogéneos y heterogéneos y
en la serotipificación bacteriana. existen dos tipos básicos: competitivo y no
competitivo.
b) Aglutinación indirecta. La aglutinación
indirecta se utiliza para células que tienen un El inmunoanálisis homogéneo no requiere
número reducido de determinantes antigénicos o separación física del antígeno unido, del libre.
que existe una cantidad insuficiente de anticuerpos Considera las diferencias fisicoquímicas (tamaño
que dificultan el procedimientos de aglutinación, o cambios conformacionales) entre el antígeno
para lo cual es necesario disponer de otro reactivo libre y el acomplejado al anticuerpo, siendo este
que es el anticuerpo anti-inmunoglobulinas. Por hecho el que caracteriza la señal de respuesta. La
ejemplo, determinación del antígeno D (Rh) de sensibilidad puede verse afectada debido a que no
los glóbulos rojos. hay separación de la muestra del paciente con la
señal de detección final, facilitando interferencias.
c) Aglutinación pasiva. La aglutinación pasiva A veces se recomienda tratamiento previo de la
se utiliza para antígenos solubles que se absorben muestra para eliminar estas interferencias. Su
en forma covalente a la superficie de las partículas. automatización es fácil y se utiliza preferentemente
Se han usado partículas como glóbulos rojos en la detección de drogas y hormonas.
(hemaglutinacion pasiva) o polímeros sintéticos
tal como el poliestireno o un coloide mineral como El inmunoanálisis heterogéneo contempla la
la bentonita. La determinación del factor separación del antígeno unido del libre, conside-
reumatoídeo utiliza partículas de poliestireno de rando las diferencias físicas, químicas o inmuno-
aproximadamente 0.20 a 0.25 µm de diámetro lógicas (tamaño, carga, adsorción a superficie
recubiertas con gammaglobulina humana. sólida). Permite eliminar la mayoría de las interfe-
La aglutinación es considerada más sensible rencias de la muestra, mejorando la sensibilidad
que la precipitación para detectar anticuerpos, de la determinación. Su automatización es comple-
debido básicamente a que grandes partículas ja y se aplica en la determinación de anticuerpos
cubiertas con Ag sirven para amplificar la reacción. específicos, marcadores tumorales y hormonas.
2.1.3. Reacción con participación del com- El inmunoanálisis competitivo se basa en la

plemento competencia entre el antígeno de interés (analito)
y una cantidad constante del antígeno similar
a) Fijación del complemento. La fijación del marcado por una cantidad fija y limitada de
complemento permite detectar anticuerpos por la anticuerpo específico. En este caso esta marcado
formación de complejos inmunes que fijan el analito.
complemento por la vía clásica y que por una
reacción secundaria, lisis de un sistema indicador El inmunoanálisis no competitivo usa un exceso
glóbulos rojos-anti glóbulos rojos permite de anticuerpo específico marcado contra el
determinar la cantidad de antígeno o de anticuerpo antígeno o analito de interés. En este caso está
presente en la reacción. marcado el reactivo.
En la tabla 40-2 se muestra los métodos
b) Actividad hemolítica del complemento inmunoquímicos que utilizan reactivos marcados.
(CH50). La determinación de la actividad
hemolítica del complemento (CH50) permite 2.2.1. Inmunoanálisis fluorescente
conocer la actividad funcional del sistema
complemento y se basa en determinar la cantidad a) Microscopía inmunofluorescente. La
mínima de suero (complemento) que lisa el 50% microscopía inmunofluorescente incorpora el
de glóbulos rojos indicadores que han sido concepto tradicional de inmunofluorescencia (IF)
previamente sensibilizados en forma óptima con su que básicamente es una técnica inmunohisto-
anticuerpo (hemolisina). La hemólisis se produce química o inmunocitoquímica que permite la
por la activación de la vía clásica del complemento. localización de antígenos en células y tejidos y la
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Sin título-2 648 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 40-2. Inmunoanálisis con reactivos marcados
Inmunoanálisis fluorescente
Microscopía inmunofluorescente
Inmunofluorescencia directa
Inmunofluorescencia indirecta
Inmunoanálisis de fluorescencia polarizada (“FPIA”)
Inmunoanálisis de fluorescencia unida a enzima (“ELFIA”)
Citometría de flujo
Enzimainmunoanálisis (EIA)
EIA homogéneo. “EMIT”
EIA heterogéneo. “ELISA”, “MEIA”
Electroinmunotransferencia o “Western blot” o “Immunoblotting”
Radioinmunoanálisis (RIA)
RIA en fase soluble
RIA en fase sólida
Detección inmunorradiométrica para antígeno
Quimiluminiscencia
Bioluminiscencia
detección y titulación de anticuerpos específicos. regularmente en el laboratorio: directa e indirecta.

La fluorescencia es un fenómeno producido
por moléculas excitadas que emiten radiación, a.1) Inmunofluorescencia directa (IFD) . La IFD
energía o luz que cesa inmediatamente después utiliza un anticuerpo específico conjugado con el
que se retira la luz excitante. Las moléculas que fluorocromo que se aplica directamente sobre el
tienen esta característica se llaman fluorocromos. sustrato (tejido, célula, u otro) permitiendo
Los fluorocromos o fluoróforos son sustancias identificar la estructura responsable de la
coloreadas que absorben radiación y luego son especificidad. Se utiliza preferentemente para
excitadas emitiendo máxima energía a una identificar microorganismo y tipificar células (por
determinada longitud de onda. ejemplo: linfocitos).
Para obtener un máximo rendimiento de la
IF es necesario conocer los “peak” de excitación a.2) Inmunofluorescencia indirecta (IFI). La IFI
y de emisión del fluorocromo en uso que permita es una técnica de doble capa, en que un anticuerpos
seleccionar adecuadamente la fuente de luz y la no marcado se aplica directamente sobre el sustrato
combinacion de filtros (primarios y barrera) del y se visualiza la reactividad con un conjugado anti-
microscopio de fluorescencia. El “peak” de inmunoglobulinas-fluorocromo. Se utiliza
excitación es la longitud de onda a la que el preferentemente para la detección de autoanti-
fluorocromo absorbe radiación con una máxima cuerpos (figura 40-10).
eficiencia. El “peak” de emisión es la longitud de En la inmunofluorescencia se puede aumentar
onda a la que la energía fluorescente resultante es la sensibilidad con el sistema avidina
máxima. (estreptavidina)-biotina que tiene una alta afinidad,
Los fluorocromos más utilizados son el que utiliza primariamente un conjugado
isotiocianato de fluoresceina (FITC), rodamina B anticuerpo-biotina y luego conjugado avidina-
y ficoeritrina. Los anticuerpos con uno o dos fluorocromo.
residuos de fluorocromo por molécula son
intensamente fluorescentes y mantienen su b) Inmunoanálisis de fluorescencia polarizada.
actividad específica. Existen dos procedimientos El inmunoanálisis de fluorescencia polarizada
de inmunofluorescencia que se utilizan (“fluorescence polarization immunoassay"; FPIA)
649
Sin título-2 649 5/26/06, 10:26 AM

detector (ver capítulo 43). La molécula de
fluorocromo unida al anticuerpo monoclonal
absorbe luz del rayo láser y emite luz en otra
longitud de onda, en que su intensidad es captada
por otro detector que está en ángulo recto al rayo.
Ambos fenómenos facilitan la correcta
identificación de las poblaciones celulares.
2.2.2. Enzimainmunoanálisis
El enzimainmunoanálisis (EIA) ha reempla-

zado a muchas técnicas tradicionales en el
diagnóstico clínico e investigación biológica desde
que se introdujo en 1966 por Avrameas y Uriel.
Figura 40-10. Detección de anticuerpos antinucleares por Este método se basa en dos fenómenos biológicos:
inmunofluorescencia indirecta. Se usa células HEp-2. En este
caso se observa un patrón homogéneo.
alta especificidad del anticuerpo por un antígeno
(reacción inmunológica) y la amplificación por
reacciones químicas llevadas a cabo por enzimas
que actúan sobre sustratos que originan productos
es un inmunoanálisis homogéneo y competitivo coloreados (reacción indicadora).
que usa un antígeno marcado con un fluoróforo y La técnica de EIA es utilizada rutinariamente
polarizado, y su sistema de detección está basado para localización de antígeno o anticuerpo sobre
en la fluorometría. Es fácilmente automatizado y tejidos o células, para la detección de antígeno o
se utiliza para medir pequeñas moléculas como anticuerpos inmovilizados en una fase sólida, para
drogas y hormonas. la titulación de anticuerpo y para la medición de
antígeno. Los antígenos pueden ser medidos por
c) Inmunoanálisis de fluorescencia unida a procedimientos inmunoenzimáticos homogéneos
enzima. El inmunoanálisis de fluorescencia unida o heterogéneos.
a enzima (“enzyme-linked fluorescence immu- Las enzimas que se utilizan corrientemente
noassays", ELFIA) es un inmunoanálisis para marcar anticuerpo o antígeno son: fosfatasa
heterogéneo y puede ser de tipo competitivo o no alcalina, cuyo sustrato es el p-nitrofenil-fosfato y
competitivo, en que el inmunorreactante marcado la lectura de absorbancia se lleva a cabo a 405
con enzima está en combinación con un sustrato nm; peroxidasa que puede utilizar tres sustratos
fluorogénico que permite la detección por diferentes: o-fenilendiamina (oPD)/H202; 3,3',5,5'-
fluorometría. El ELFIA está automatizado y es uno tetrametilbenzidina (TMB)/H202 y 2,2'-di-azino(3-
de los métodos más sensibles hoy en día en el etilbenzotiazolina 6-ácido sulfónico (ABTS)/H202
laboratorio clínico. Utiliza preferentemente como con lecturas de densidad óptica a 492, 450 y 415
enzima marcadora fosfatasa alcalina y como nm respectivamente y beta-galactosidasa, cuyo
sustrato fluorogénico el 4 metil umbeliferona sustrato es el o-nitrofenil-beta-D-galactopira-
(4MUP). nósido (oNPG) y la lectura se realiza 420 nm.
En los EIA automatizados se usa corriente-
d) Citometría de flujo. La citometría de flujo mente la fosfatasa alcalina como enzima marca-
permite medir la cantidad de anticuerpo mono- dora y como sustrato el 4-metilumbeliferil fosfato
clonal fluorescente unido a cada célula en forma (MUP). El MUP es catalizado a un producto
individual, facilitando la identificación y tipifica- fluorescente (metilumbeliferona) que es medido
ción de diferentes subgrupos de poblaciones por fluorometría.
celulares con una extraordinaria sensibilidad, El EIA, también puede ser amplificado
eficiencia y rapidez. utilizando la interaccion avidina (estreptavidina)-
En el citómetro de flujo las células atraviesan biotina. Se utiliza los conjugados anticuerpos-
un rayo láser y son analizadas individualmente. biotina y avidina-enzima.
Las células deflectan o dispersan la luz de un láser
de una forma estrechamente relacionada con su a) EIA homogéneo. El “enzyme-multiplied im-
tamaño y granularidad que es registrada en un munoassay technique” (EMIT) es un EIA
650
Sin título-2 650 5/26/06, 10:26 AM

homogéneo y competitivo que usa una enzima
marcadora y el sistema de detección es
espectrofotométrico. La enzima marcadora es
unida covalentemente al antígeno en una posición
cercana al sitio activo de la enzima. Durante la
reacción inmunológica, cuando el antígeno
marcado con la enzima se une al anticuerpo, el
sitio activo de la enzima es bloqueado físicamente
y la enzima es inhibida funcionalmente. En la
forma libre del antígeno marcado con la enzima,
la enzima permanece activa funcionalmente y
actuará sobre el sustrato que se añade generando
un producto coloreado. El cambio de color
resultante es proporcional a la cantidad de antígeno
marcado libre disponible y debido a la naturaleza
competitiva del inmunoanálisis, será proporcional
Figura 40-11. Esquema de enzimainmunoanálisis en fase
a la cantidad de analito (antígeno) presente en la sólida (ELISA) para detección y cuantificación de
muestra. El EMIT se ha automatizado fácilmente anticuerpos específicos. En el esquema el antígeno se ha unido
y es usado principalmente en la detección de a un soporte sólido; luego el anticuerpo (Ac primario) a pesquisar
(suero del paciente) reconoce el antígeno. Posteriormente el
drogas.
conjugado anticuerpo secundario-enzima se une al Ac primario,
evento que es reconocido con la adición del sustrato que
b) EIA heterogéneo. Los procedimientos EIA catalizado por la enzima forma productos coloreados cuya
heterogéneos son en general más sensibles que los densidad óptica se lee a una determinada longitud de onda.
homogéneos.
El "enzyme-linked inmunosorbent assay"
(ELISA) se realiza sobre una fase sólida (placas
de poliestireno u otro similar) y es un EIA
heterogéneo, no competitivo y su detección
preferentemente es por espectrofotometría (figura
40-11). Es ampliamente utilizado en el laboratorio
clínico en la detección y medición de autoan-
ticuerpos y varias otras proteínas. Existe una
variedad que se realiza sobre papel de nitrocelulosa
que se ha llamado inmunofijacion en punto o
"immuno blot, "dotimmunobinding" o "dot"
(figura 40-12).
El "microparticle enzyme immunoassay"
(MEIA) es un método heterogéneo, no competitivo
y de tipo “sandwich”. Utiliza una enzima Figura 40-12. Inmunodifusión en punto o "dot
marcadora y el sistema de detección es por immunobinding". Enzimainmunoanálisis sobre papel de
fluorometría o espectrofotometría. Incorpora nitrocelulosa para detección de anticuerpos específicos. Los
puntos coloreados indican positividad.
micropartículas que permiten aumentar el área en
la cual ocurre la reacción antígeno-anticuerpo
facilitando la cinética de la reacción y
disminuyendo el tiempo de incubación. Ha sido mainmunoanálisis para originar una poderosa
automatizado permitiendo cuantificar una gran herramienta que permite estudiar cualitativa y
cantidad de moléculas, incluyendo hormonas y cuantitativamente las reacciones antígeno-
marcadores tumorales. anticuerpo. Los antígenos son separados en gel
SDS-poliacrilamida y transferidos a una mem-
c) Electroinmunotransferencia ("Western blot" brana de nitrocelulosa uniéndose inespecífica-
o "Immunoblotting"). La electroinmuno- mente e identificados con procedimientos
transferencia combina la electroforesis en gel SDS- inmunoenzimáticos. Debido a que existe un
poliacrilamida y la alta sensibilidad del enzi- proceso de denaturación de los antígenos por los
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detergentes utilizados se recomienda utilizar de IgE específica unida al soporte es estimada por
antisueros policlonales en el análisis ("blotting") la adición de un anticuerpo anti-IgE radiomarcado.
para aumentar la probabilidad de detectar epítopos
o determinantes antigénicos que no se han alterado c) Detección inmunorradiométrica para
por la denaturación. antígenos. En las pruebas inmunorradiométricas
La electroinmunotransferencia se utiliza en el reactivo marcado es utilizado en exceso. Para
el diagnóstico viral (confirmacion de anticuerpos la determinación de antígeno, los anticuerpos están
anti-HIV), tipificación de bacterias (Neisseria absorbidos sobre un soporte sólido al que se le
meningitidis), detección de autoanticuerpos agrega la solución de antígeno. Luego el soporte
(anticuerpos anti-antígenos nucleares extrac- es lavado y la cantidad de antígeno unido puede
tables), etc. ser estimado por la adición en exceso de un
anticuerpo radiomarcado. La prueba muestra una
2.2.3. Radioinmunoanálisis mayor especificidad cuando los anticuerpos
utilizados reconocen diferentes epítopos del
El radioinmunoanálisis (RIA) utiliza antígeno antígeno. La aplicación clásica de esta prueba es
o anticuerpo generalmente marcados con isótopos el RIST ("radioimmunosorbent test") para la
como, 125I o eventualmente 131I. Este inmunoa- determinación de IgE total, donde el anticuerpo
nálisis puede llevarse a cabo en fase soluble o anti-IgE se ha unido covalentemente a
sólida. microcristales de celulosa y se le adiciona el suero
del paciente y los sueros controles. La IgE total
a) RIA en fase soluble. El RIA en fase soluble unida es medida por la adición de un anticuerpo
permite determinar la capacidad de unión de un anti-IgE radiomarcado.
anticuerpo, por adición de un moderado exceso
de antígeno marcado a un antisuero, los 2.2.4. Quimiluminiscencia
anticuerpos forman complejos solubles y se
precipitan por los procedimientos ya indicados. La quimiluminiscencia es la emisión de luz
En el precipitado se mide la radiactividad dando producida en ciertas reacciones químicas de
una estimación de la capacidad de unión del oxidación. La mayoria de las reacciones
anticuerpo específico por su antígeno. Este quimiluminiscente son de oxidación debido a que
inmunoanálisis en fase soluble, también permite la producción de luz visible requiere reacciones
determinar antígeno (RIA clásico) por adición de altamente energéticas. La reacción quimilumi-
un antígeno marcado a una cantidad fija y limitada niscente más estudiada ha sido la oxidación del
de anticuerpo, cuya unión puede ser parcialmente luminol. Los marcadores más populares son los
inhibida por la adición de antígeno no marcado. derivados de isoluminol y ésteres de acridina. Para
La extensión de esta inhibición puede ser usada detectar un marcado quimiluminiscente se usa una
como una medida del antígeno no marcado. Se amplia variedad de luminómetros que miden la
debe realizar la medición de la radiactividad del emisión de luz.
antígeno radiomarcado libre, que debe estar En este último tiempo se está usando como
separado de los otros constituyentes del sistema. marcador la fosfatasa alcalina que reacciona con
sustratos basados en el adamantil 1,2-dioxetano
b) RIA en fase sólida. El RIA en fase sólida aril fosfato, que los desfoforila para producir un
permite medir un anticuerpo a través de su fenóxido intermediario y éste al descomponerse
capacidad de unión al antígeno que ha sido produce emisión de luz a 470 nm. Actualmente,
insolubilizado por adsorción física a un soporte los inmunoanálisis quimiluminiscentes son
plástico. La inmunoglobulina unida puede ser utilizados por varios analizadores automatizados.
estimada por la adición de un anticuerpo anti- En ellos se determinan drogas, hormonas,
inmunoglobulinas radiomarcada producida en otra marcadores tumorales y otras proteínas.
especie. Este procedimiento se ha utilizado en la
prueba RAST ("radioallergosorbent test") para la 2.2.5. Bioluminiscencia
determinación de IgE específica en pacientes
alérgicos. En este caso, el alergeno es La bioluminiscencia es un fenómeno natural que
covalentemente unido a un soporte y que luego es se encuentra en muchas formas inferiores de vida.
incubado con el suero del paciente. La cantidad Un sistema natural es la D-luciferina/luciferasa,
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en que la luciferasa cataliza la oxidación de la D- Wild, D., The Immunoassay Handbook,
luciferina en presencia de ATP y Mg +2 a Segunda Edición, CPL Scientific Publishing,
oxiluciferina, con emisión de luz a 546 nm. En Hardback, U.S.A., 2000.
los inmunoanálisis bioluminiscentes se está
utilizando conjugado anticuerpo-fosfatasa alcalina
o conjugado analito-fosfatasa alcalina que
reacciona con la D-luciferina-o-fosfato liberando
D-luciferina. La D-luciferina es oxidada por la
luciferasa con emisión de luz. Aún no está
disponible inmunoanálisis bioluminiscente para
aplicación rutinaria en el laboratorio.
LECTURAS SUGERIDAS
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immunoenzymatic techniques”, J Immunol. Meth.,
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Sin título-2 654 5/26/06, 10:26 AM

Capítulo 41
MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA
INMUNIDAD CELULAR
Jorge González C. y Pilar Vega C
1. Introducción 4. Estudio de la inmunidad celular

2. Preparación y aislamiento de dife- inespecífica
rentes poblaciones celulares 4.1. Ensayos funcionales de neutró-
2.1. Métodos de purificación tradicio- filos
nales 4.2. Ensayos funcionales de eosinó-
2.2. Separación inmunomagnética filos
3. Estudio de la respuesta inmune ce- 4.3. Ensayos funcionales de monoci-
lular específica tos y macrófagos
3.1. Estudio de las subpoblaciones de 5. Evaluación de laboratorios del pa-
linfocitos ciente infectado con el virus de la
3.2. Estudio de las funciones de inmu- inmunodeficiencia humana. Un mo-
nidad celular específica delo del estudio de las deficiencias
3.3. Estudio de la síntesis de citoqui- en la respuesta celular
nas y sus receptores 5.1. Estudio fenotípico de linfocitos
3.4. “DNA microarrays” 5.2. Estudio de la respuesta prolife-
3.5. Pruebas para evaluar reacciones rativa
de hipersensibilidad retardada 5.3. Estudio de la respuesta citotóxica
(RHR) 5.4. Evaluación de los niveles de
3.6. Estudios de la especificidad de citoquinas y subpoblaciones de
células T linfocitos T
3.7. Detección de células T precursoras
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RESUMEN
La respuesta inmune celular del hombre debe ser evaluada mediante pruebas de laborato-
rio, no sólo frente a la sospecha de estados inmunes alterados, sino también frente a tratamientos
con modificadores biológicos de la respuesta y en eventuales estudios de vacunación. Frente a
cualquiera de estas situaciones, la respuesta inmune celular puede ser evaluada tanto in vivo
como in vitro. Las respuestas in vivo, se evalúan únicamente mediante pruebas cutáneas, llama-
das reacciones de hipersensibilidad.
Por otro lado, un vasto arsenal de pruebas in vitro, están disponibles, para evaluar la res-
puesta celular y la factibilidad de su uso dependen tanto del nivel de equipamiento de cada
laboratorio como de la formación de sus recursos humanos. No obstante, de manera general
ningún ensayo aislado es suficiente para un adecuado diagnóstico; una visión adecuada del
funcionamiento de la respuesta celular puede obtenerse por la combinación e interpretación de
varios métodos y parámetros.
Especial cuidado debe tenerse en el análisis, manejo e interpretación de los resultados.
Debe considerarse que los resultados obtenidos podrían variar dependiendo de la metodología
empleada, del background genético de los diferentes individuos e incluso dentro de un mismo
individuo. Por ello resulta de especial valor que cada laboratorio determine y maneje con propie-
dad los parámetros normales para cada prueba, pudiendo así acceder a interpretaciones
laboratoriales más adecuadas.
El desarrollo de ensayos sensibles para analizar la respuesta inmune celular tanto en el
hombre como en modelos experimentales ha llevado a importantes descubrimientos tanto en
inmunología básica como clínica.
En el futuro, el empleo de métodos más sensibles y específicos, sumados a la utilización de
tecnologías emergentes como los “DNA microarrays” y el estudio de proteínas (proteomica),
permitirá mejorar el diagnóstico y el pronóstico de las diferentes enfermedades infecciosas y de
base inmunólogica
1. INTRODUCCIÓN poblaciones celulares. De esta forma, mientras la

respuesta humoral, permite controlar y eliminar
La rama celular de la respuesta inmune, con- microorganismos extracelulares y neutralizar sus
fiere inmunidad mediante la generación de célu- productos, la respuesta celular es responsable del
las efectoras. Aunque en estos mecanismos, pue- control de microorganismos intracelulares, la des-
den además participar tanto anticuerpos como fac- trucción de células infectadas por virus, células
tores del complemento, éstos juegan un papel se- tumorales y el rechazo a injertos. De esta forma
cundario. Por ello, tanto células específicas como se puede afirmar que la respuesta celular está adap-
no específicas estimuladas para un mismo antígeno tada para reconocer y eliminar células alteradas,
contribuyen a la respuesta inmune mediada por sean éstas infectadas por patógenos intracelulares
células. o que expresen antígenos tumorales.
Las células específicas, corresponden a las La importancia de la inmunidad mediada por
diferentes subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y células, resulta evidente cuando el sistema es de-
CD8+, mientras que en las células no específicas fectuoso. Por ejemplo, en niños con síndrome de
se incluye a macrófagos, neutrófilos, eosinófilos Di George, quienes nacen sin timo y por ende son
y células "natural killer" (NK). No obstante, la deficientes en células T, generalmente controlan
actividad de ambos tipos de células depende de patógenos extracelulares, pero no así los
las concentraciones locales de citoquinas, que son intracelulares (ver capítulo 29). Esta falla funcio-
mediadores solubles secretados por diferentes nal en la respuesta inmune mediada por células,
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resulta en infecciones a repetición por diferentes 2.1. Métodos de purificación tradicionales
patógenos intracelulares, donde incluso vacunas
atenuadas pueden producir estados infecciosos. Utilizan soluciones de ficoll-hipaque o
La evaluación de la respuesta inmune celular percoll en diferentes densidades, las que median-
permite, en pacientes, conocer de manera cualitati- te centrifugación permiten la separación de las di-
va y cuantitativa la funcionalidad de células y me- ferentes poblaciones celulares, basándose en sus
diadores de esta rama de la respuesta inmune, de diferencias de tamaño y densidad.
manera de determinar en correlación con los ante-
cedentes clínicos, el estado inmune del paciente. 2.1.1. Separación de linfocitos
La detección de estados alterados puede corres-
ponder a las llamadas inmunodeficiencias las cua- Para ello la sangre total es diluida en buffer
les pueden ser congénitas o adquiridas (ver capítu- fosfato salino en proporción 1:1, depositándola
los 29 y 30). Por otro lado, también se consideran sobre ficoll-hipaque a densidad de 1,077. Luego
estados de inmunidad alterada la reactividad con- de centrifugar, en la interfase entre el plasma di-
tra antígenos propios conocida como autoin- luido y la solución de ficoll, se forma un anillo
munidad (ver capítulo 23) y la hiperreactividad pro- blanco rico en leucocitos, mientras que en el pellet
pia de la alergia (ver capítulo 22). se encuentran los eritrocitos y los polimor-
De igual forma, el monitoreo de los niveles fonucleares (PMN).
de productos de la función celular como citoquinas
y monoquinas, puede ser de utilidad clínica en es- 2.1.2. Separación de polimorfonucleares y
tudios frente a modificadores de la respuesta bio- linfocitos
lógica (MRB). En el ámbito de la investigación
biomédica, ya sea en modelos animales, como en La sangre heparinizada se mezcla con una
personas, permite conocer y definir de manera solución de dextrano al 6% y se deja sedimentar a
experimental las características de la respuesta temperatura ambiente. De esta manera, se obtiene
inmune celular posibilitando la identificación de un plasma rico en PMN, monocitos y linfocitos
antígenos protectores tanto frente a patógenos pero libre de eritrocitos (figura 41-1).
como frente a tumores, en eventuales estudios de
vacunación. 2.1.3. Separación de linfocitos y PMN
En este capítulo se describe los principales
métodos diagnósticos que permiten evaluar el es- Una buena separación de linfocitos y PMN
tado de la rama celular de la respuesta inmune. se consigue a partir del plasma obtenido por sedi-
Muchas de las pruebas que permiten la evalua- mentación con dextrano al 6%. Esta se obtiene
ción de la respuesta inmune celular han sido utili- mediante centrifugación diferencial sobre ficoll-
zadas por muchos años. Otras son de incorpora- hipaque con densidad 1,077, observándose en la
ción más reciente al arsenal de pruebas de labora- interfase un anillo blanco que contiene los
torio. Algunas de ellas son de reciente aplicación linfocitos mientras que el pellet contiene los
en el ámbito de la inmunología y aunque no siem- eritrocitos (figura 41-1).
pre podrían ser factibles de aplicar de manera En todos los casos los procedimientos de pu-
masiva en los laboratorios, es necesario conocer rificación deben ser monitoreados mediante frotis
la existencia de ellas y sus posibles proyecciones. y evaluación morfológica de las células recupera-
das. La confirmación del tipo celular recuperado
se puede realizar mediante inmunofluorescencia
2. PREPARACIÓN Y AISLAMIENTO DE utilizando anticuerpos monoclonales contra mar-
DIFERENTES POBLACIONES CELU- cadores de superficie. El control de la viabilidad
LARES de estas células debe realizarse mediante pruebas
de exclusión con azul tripan, o mediante métodos
El estudio de la respuesta inmune celular re- fluorescentes utilizando ésteres de acetoxymetil
quiere, en algunos casos, disponer de poblaciones calceína (calceína-AM).
celulares puras o enriquecidas que permitan la eva-
luación de diferentes parámetros. Se puede utili- 2.1.4. Aislamiento de monocitos humanos
zar métodos de purificación tradicionales y basa-
dos en separación inmunomagnética. Gradientes de ficoll-hipaque han sido
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Figura 41-1. Separación de PMN y linfocitos. Utilizando dextrano 6% se pueden separar los PMN y linfocitos de los glóbulos
rojos y a la vez los dos primeros se pueden separar usando ficoll hipaque 1.077 o bien una gradiente doble de ficoll hipaque.
rutinariamente utilizadas para inicialmente aislar hipodensos. Debe tenerse en mente que diferen-
células mononucleares, de las cuales entre 10-20% cias funcionales han sido observadas dependien-
corresponden a monocitos. Para aislar los tes del método utilizado en la purificación. Apa-
monocitos, se usa su capacidad de adherir al plás- rentemente, eosinófilos purificados mediante se-
tico, luego de incubación por 1 h a 37 °C. El pro- paración celular magnética son menos respon-
cedimiento de aislamiento se desarrolla en esteri- dedores a lípidos quimiotácticos que las células
lidad, a temperatura ambiente, utilizando medios obtenidas por gradiente.
y material de vidrio o plástico que estén libres de
endotoxinas, debido a que endotoxinas bacterianas 2.1.6. Aislamiento de basófilos
como el lipopolisacárido (LPS) son potentes
activadores de monocitos y macrófagos. Los basófilos son los leucocitos de menor
abundancia en sangre humana y por ende su puri-
2.1.5. Aislamiento de eosinófilos ficación es relativamente difícil. Los procedimien-
tos basados en centrifugación por gradiente per-
El bajo número de eosinófilos en sangre miten enriquecer las preparaciones de basófilos
periférica de individuos normales ha hecho relati- hasta en un 50%, pero contienen una significativa
vamente difícil obtener preparaciones en número contaminación con otros tipos celulares especial-
y pureza apropiadas para estudios funcionales. mente linfocitos. Durante cualquier procedimien-
Para ello, protocolos basados en la separación de to de enriquecimiento deberá tenerse presente en
eosinófilos de neutrófilos la principal célula con- prevenir su estimulación y degranulación.
taminante, mediante densidad han sido utilizados
por largo tiempo. Estas técnicas resultan en célu- 2.2. Separación celular inmunomagnética
las de alta viabilidad, no obstante posean bajo
rendimiento y grados de pureza variable. Más aún Recientemente han sido utilizadas técnicas
la mayoría de los eosinófilos son de alta densidad basadas en la separación inmunomagnética de
(1095-1100 g/mL), por lo que presumiblemente neutrófilos, usando perlas magnéticas recubiertas
representarían poblaciones no activadas. Recien- de anticuerpo monoclonal anti-CD16. Aunque el
temente, se ha introducido la selección negativa, marcador CD16 no es exclusivamente expresado
basada en la remoción de neutrófilos por medio por neutrófilos (también está presente en algunos
de separación celular magnética usando perlas eosinófilos y en algunas células mieloides precur-
recubiertas de anticuerpo monoclonal anti-CD16. soras), el aislamiento inmunomagnético a partir
Este método aumenta la recuperación y pureza de de sangre periférica permite obtener preparacio-
los eosinófilos con respecto a las técnicas que uti- nes enriquecidas de neutrófilos con más de 99%
lizan gradiente de densidad. No obstante, estas pre- de pureza (figura 41-2). De igual manera, usando
paraciones difieren de las obtenidas por gradiente, perlas sensibilizadas con anticuerpos anti-CD14
ya que contienen además los eosinófilos es posible separar monocitos humanos, mientras
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que perlas magnéticas con anticuerpos CD4 y CD8 para secretar algunos mediadores biológicos como
permiten separar estas poblaciones linfocitarias. son las citoquinas. Entonces, es necesario cono-
cer los niveles de linfocitos T (LT), tanto CD4+
como CD8+ y sus propiedades funcionales eva-
3. ESTUDIO DE LA RESPUESTA INMUNE luando las principales citoquinas secretadas por
CELULAR ESPECÍFICA éstos. De igual manera es importante ensayar tan-
to la especificidad de estos linfocitos, basándose
La evaluación de la respuesta inmune celu- en aspectos estructurales, como también detectar
lar específica, requiere conocer tanto el número células T precursoras en poblaciones que prolife-
de células como su capacidad funcional. De igual ran en respuesta a un antígeno. En todos los ca-
manera, hoy es necesario conocer su capacidad sos, la hipótesis diagnóstica permite orientar la in-
vestigación de laboratorio, así como los resulta-
dos del laboratorio deben ser interpretados a la
luz de los hallazgos clínicos.
3.1. Estudio de las subpoblaciones de linfocitos
El estudio de la competencia celular debe co-

menzar por determinar los niveles de las células
que participan en esta respuesta. Por ello, el nú-
mero y capacidad funcional de los leucocitos cir-
culantes en sangre periférica refleja el estado ge-
neral de competencia inmune de un determinado
individuo. De esta manera en una variedad de si-
tuaciones clínicas, la evaluación del número y fun-
ción de linfocitos, granulocitos y monocitos han
comenzado a ser rutinarias tanto en el diagnóstico
de diferentes patologías como en el monitoreo de
tratamientos con inmunosupresores o inmuno-
rrestauradores.
Inicialmente, la determinación en el labora-
torio de linfocitos T y B, se realizó, mediante la
utilización de eritrocitos de cordero y la forma-
ción de rosetas. Los linfocitos T poseen la capaci-
dad de unirse a los eritrocitos de cordero, forman-
do un complejo en el que estas células están ro-
deadas de eritrocitos, de manera semejante a una
flor, denominada roseta E (eritrocito). La evalua-
ción de rosetas se realiza mediante lectura micros-
cópica. De igual manera, linfocitos B, polimor-
fonucleares y macrófagos poseen receptores de
superficie para fragmentos Fc de IgG y para com-
plemento. Por ello, en presencia de anticuerpos y
el factor C3b del complemento, forman las rosetas
EAC (eritrocito, anticuerpo-complemento), las
cuales son también evaluadas mediante micros-
copía óptica (figura 41-3).
3.1.1. Determinación del fenotipo inmunológico

mediante citometría de flujo
Figura 41-2. Separación inmunomagnética de neutrófilos,
En los últimos años, el uso de las pruebas de
utilizando anticuerpo monoclonal CD16 unido a partículas
magnéticas. citometría de flujo (ver capítulo 42) en la deter-
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Figura 41-3. Determinación de linfocitos por formación de Rosetas E y Rosetas EAC. La roseta E se produce por unión del
glóbulo rojo al receptor CD2 del LT. La roseta EAC se produce por interconexión entre el receptor para C3b del LB y la unión de
C3B al fragmento Fc de IgG. También pueden haber uniones de Fc al receptor que tiene LB humano.
minación de las diferentes subpoblaciones de antígenos CD45 y CD3, mientras que las
linfocitos, se ha transformado en un importante subpoblaciones de LT “helper” son reconocidos
método tanto en el diagnóstico como en el propor los anticuerpos anti-CD3 y anti-CD4. Las
nóstico de varias entidades clínicas, incluyendo subpoblaciones de LT citotóxicos y supresores se
la evaluación de las inmunodeficiencias y los des- definen con los anticuerpos anti-CD3 y anti-CD8,
órdenes inmunológicos. mientras que los linfocitos B presentan el marca-
La citometría de flujo, permite la enumera- dor CD19. Por otro lado, las células NK, se defi-
ción de diferentes tipos de linfocitos, los cuales nen por el fenotipo CD3-, CD16+ o CD56+. No
difieren en sus propiedades funcionales, su linaje es posible identificar células NK mediante un úni-
y su estado de maduración. Entonces mediante esta co antígeno, no obstante, el fenotipo CD3-/CD56+,
técnica es posible determinar los diferentes tipos incluye la mayoría de las células NK. Por ello se
de linfocitos mediante el uso de anticuerpos requiere marcación con dos fluorocromos, siendo
monoclonales marcados con substancias que existe un porcentaje de LT que son CD3+/
fluorescentes, que reconocen sus marcadores de CD56+. En esta perspectiva, el uso de anti-CD3
superficie (figura 41-4). Desde la invención de marcado con fluoresceína y anti-CD16 y anti-
los anticuerpos monoclonales, miles de ellos han CD56 marcados con otro fluorocromo (ficoeritrina
sido generados contra determinantes de superfi- o texas red) es recomendable para determinar en
cie de células hematopoyéticas. Inicialmente, gru- definitiva el fenotipo de las células NK.
pos de estos anticuerpos que demostraron pro-
piedades semejantes en cuanto a su ligación y dis- 3.1.2. Determinación de subpoblaciones de
tribución tisular fueron designados como "clusters linfocitos mediante inmunofluorescencia
differentiation" o antígenos CD (ver capítulo 45).
La identificación de estos CD en la superfi- La determinación de subpoblaciones
cie celular de los linfocitos, mediante anticuerpos linfocitarias, es también posible mediante
monoclonales, ha sido esencial en delinear los microscopía de fluorescencia utilizando
componentes del sistema inmune. Estos anticuerpos anti-CD, marcados con compuestos
anticuerpos son ahora rutinariamente usados en fluorescentes. Para ello, luego de purificar los
la identificación, recuento y separación de dife- linfocitos, se confecciona un frotis con las células
rentes subpoblaciones de leucocitos y en la clasi- fijadas, las que se incuban con los respectivos
ficación de afecciones malignas de estos anticuerpos. Al microscopio, se cuentan a lo me-
leucocitos. nos 250 células, determinando su fenotipo, me-
Los anticuerpos monoclonales usados para diante la marcación del anticuerpo. Este método
reconocer LT totales están dirigidos contra los permite calcular el porcentaje de un determinado
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Figura 41-4. Identificación de células “natural killer” mediante citometría de flujo. Para la identificación, separación y recuento de
estas células se utilizan anticuerpos monoclonales dirigidos contra sus antígenos marcadores de superficie CD16 y CD56. Uno de estos
anticuerpos está marcado con fluoresceína y el otro con rodamina por lo que emiten fluorescencia en diferentes longitudes de onda.
fenotipo. Mediante un procedimiento un tanto más dad para así lograr una apropiada interpretación
sofisticado, como es la microscopía confocal, es de los resultados, resulta importante evaluar estos
también posible utilizar dos o tres diferentes parámetros funcionales. La importancia del aná-
anticuerpos marcados con diferentes fluoro- lisis funcional resalta porque cada vez son más
cromos. frecuentes sus aplicaciones en el diagnóstico y
monitoreo de pacientes con síndrome de
3.2. Estudio de las funciones de inmunidad ce- inmunodeficiencia adquirida (SIDA), cáncer, en-
lular específica fermedades autoinmunes y en casos de pacientes
que requieren trasplantes de órganos. De igual
Es aceptado que las características fenotípicas manera, el uso de inmunomoduladores y MRBs
de las células del sistema inmune no proveen in- en estudios clínicos precisa de un monitoreo
formación sobre su actividad. Por ello, aunque el confiable del sistema inmune por parte del labora-
análisis funcional es algo más complejo por re- torio clínico. Entonces, hoy es posible medir un
querir experiencia y adecuados controles de cali- amplio espectro de parámetros funcionales que in-
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cluyen desde la activación, proliferación y produc- terapias inmunomoduladoras y para detectar la
tos de síntesis hasta la función de células efectoras. memoria inmunológica frente a diferentes
Más aún, considerable progreso se ha obtenido en antígenos como: derivado de proteína purificada
la separación y aislamiento de varias subpobla- (PPD), streptoquinasa, Candida, tetanus y difte-
ciones de células del sistema inmune. Sin embar- ria.
go, no sólo los ensayos funcionales pueden ser de Ciertos desórdenes inmunológicos como
utilidad sino que también los estudios estructurales Lupus eritematoso sistémico se manifiestan con
y la detección de células T precursoras. múltiples disfunciones de células T. Por ello, cuan-
Así, con un arsenal considerable de ensayos tificar la activación de células T es también útil
de laboratorio y opciones de evaluar diferentes fun- para monitorear el efecto de las terapias
ciones, la elección de las pruebas más apropiadas inmunomoduladoras.
permitirá al inmunólogo clínico disponer de la
información que permita conocer el estado de la Interpretación de los datos. La capacidad de
respuesta inmune celular del paciente. linfocitos para proliferar, in vitro, en respuesta a
lectinas mitogénicas como fitohemaglutinina
3.2.1. Activación de Linfocitos T (FHA) y concanavalina A (Con A), es el método
más común para evaluar la inmunidad mediada
La activación de linfocitos T es un proceso por células. La proliferación celular es ensayada
caracterizado por una compleja cascada de even- 72 horas después, evaluando la incorporación de
3
tos bioquímicos y moleculares, cuyo resultado fi- H timidina en el DNA recientemente sintetizado
nal es la producción de citoquinas, la expresión por la célula T. Métodos de más reciente aplica-
de receptores, la proliferación y en algunas célu- ción permiten evaluar eventos tempranos del pro-
las la expresión de citotoxicidad. En condiciones ceso de activación, tales como la elevación de cal-
fisiológicas, este fenómeno se inicia con la pre- cio intracelular, la activación de proteína quinasa
sentación antigénica en el contexto de moléculas C (PKC) o eventos que ocurren en las primeras
del Complejo Principal de Histocompatibilidad 24 h, tales como la síntesis de IL-2 y la expresión
(MHC) clase I o II e involucra complejos meca- de su receptor IL-2R. Estos últimos son los
nismos de señalización con participación de abordajes más directos y presentan varias venta-
quinasas, fosfatasas y segundos mensajeros (ver jas técnicas, como el hecho de requerir un peque-
capítulo 10). ño número de células mononucleares de sangre
periférica (CMSP), no necesitan enriquecer los
Indicaciones clínicas. La activación de células T, linfocitos T de CMSP, su ejecución requiere me-
debe evaluarse frente a la sospecha de desórdenes nos tiempo y realizada en serie resulta de más bajo
inmunológicos congénitos o adquiridos. Dentro de costo. Desde este punto de vista resulta apropiado
éstos se incluyen la inmunodeficiencia combinada evaluar la síntesis de IL-2 y su receptor, IL-2R, ya
severa (falla en el desarrollo de células B y T), el que la síntesis de éstos muestra además que las
síndrome de Di George (falla en el desarrollo del vías en que participa fosfoinositol/Ca++ y PKC,
timo), síndrome de Wiskott-Aldrich, síndrome de están intactas.
Chediak-Higashi (inmunodeficiencia por ataxia La IL-2 es evaluada en sobrenadantes de cul-
telangiectasia con albinismo parcial), inmuno- tivo de CMSP, luego de la estimulación con
deficiencias variables comunes y frente a infeccio- mitógenos por 24 h. La cantidad de IL-2 produci-
nes recurrentes por virus, parásitos y hongos. da por CMSP normales en cultivo, depende del
Las disfunciones de células T, predisponen a estímulo, las condiciones de cultivo y del método
infecciones virales por Herpes simplex, Varicella- empleado en su cuantificación. La activación de
zoster y Cytomegalovirus. De igual manera la células T puede ser inducida utilizando diferentes
candidiasis mucocutánea recurrente es frecuente- agonistas tales como lectinas, anticuerpos anti-re-
mente asociada con disfunción de células T. Den- ceptor, ionóforos y forbol ésteres. Lectinas como
tro de las infecciones por protozoos, Pneumocystis FHA y Con A pueden adicionarse directamente a
carinii y Toxoplasma gondii a menudo complican los cultivos de CMSP. En presencia de monocitos
el curso de pacientes con SIDA, en los cuales la que secretan IL-1, las células T producirán IL-2 y
subpoblación de linfocitos CD4+ es deficiente. desarrollarán una enérgica respuesta proliferativa
La activación de células T, también puede con "peak" a las 72 h. Las ventajas de usar
monitorearse, para evaluar el tratamiento mediante mitógenos son su estabilidad, bajo costo y fácil
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uso. Agonistas específicos como anticuerpos yen interacciones de membrana con citoesqueleto,
monoclonales contra el receptor CD3 pueden usar- influjos de Ca2+, activación de fosfolipasa C, libe-
se para activar células T y permiten evaluar la ca- ración de Ca2+ inducida por inositol-trifosfato y
pacidad del receptor para iniciar la traducción de activación de genes (ver capítulo 10). Las señales
señales por la vía fosfoinositol/Ca++/PKC. de transmembrana causan cambios significativos
Una disminución en la producción de IL-2 en el linfocito como ser la redistribución de recep-
es asociada con una disminución en la expresión tores, secreción de citoquinas y anticuerpos, movi-
de IL-2R. La disminución en la síntesis de IL-2 y lidad celular, reconocimiento entre células o ini-
en la expresión de IL-2R sugiere un defecto en la ciación de la proliferación celular. Entonces, la ca-
vía fosfatidilinositol/Ca2+/PKC. Entonces para de- pacidad de un linfocito para responder a un ligan-
terminar si esta vía de señalización no es funcio- do, es utilizada tanto en investigación básica como
nal, la medición de Ca2+ y de la actividad de PKC clínica, evaluando la proliferación. Como ya se
pueden ser de utilidad. La determinación de Ca2+ describió, diferentes lectinas, anticuerpos y com-
en células T puede realizarse usando algunos puestos químicos pueden estimular la proliferación
indicadores fluorescentes como Fura 2 o Quin 2. de linfocitos. La respuesta proliferativa puede en-
Por otro lado los ensayos para PKC son sensibles tonces ser evaluada en cultivos de sangre total, o
y específicos, no obstante requieren poblaciones en células mononucleares aisladas y en diferentes
enriquecidas en células T. En este tipo de ensayo subpoblaciones de linfocitos. No obstante, debe
las células T deben ser activadas por un agonista, considerarse que en muchos casos se requiere más
para luego preparar un extracto celular en el cual de un tipo celular para responder a un determinado
se evalúa la incorporación de P 32ATP en un ligando. Frecuentemente, además de las células T,
substrato peptídico sintético o en histonas. Es clase requiere la participación de células accesorias
ro que ambos ensayos requieren personal entre- que expresen asociadas a su membrana moléculas
nado y algunas condiciones del laboratorio por lo MHC clase II, como monocitos y macrófagos.
que no se realizan de manera rutinaria. De manera sucinta, un ensayo de prolifera-
ción debería medir el número de células sobrevi-
3.2.2. Estudio de proliferación de linfocitos vientes y aquellas generadas como consecuencia
del estímulo. Esto comúnmente se evalúa de ma-
El reconocimiento entre receptores de super- nera indirecta por medio de la incorporación de
ficie de linfocitos y determinados ligandos, inicia un nucleótido radiactivo (3H-timidina) en el DNA
una cascada de señales intracelulares que inclu- sintetizado (figura 41-5).
Figura 41-5. Estudio de la proliferación de linfocitos T, mediante la incorporación de 3H-timidina al ADN. Se miden las
cuentas por minuto (cpm) incorporadas al DNA de los linfocitos T que proliferan luego del estímulo mitogénico.
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Indicaciones clínicas. Parece claro que los ensa- La reacción mixta de linfocitos (RML) es
yos de proliferación o blastogénesis poseen am- una respuesta proliferativa a dos poblaciones de
plias aplicaciones clínicas. El ensayo es utilizado células T alogénicas cultivadas en conjunto. En
para estudiar alteraciones derivadas de otras palabras, se usa para conocer la reactividad
inmunodeficiencias congénitas, así como también de la población de linfocitos de un paciente frente
aquellas secundarias derivadas de enfermedades a las células de otro individuo. El principal estí-
infecciosas, cáncer, desnutrición, cirugías y enfer- mulo en este tipo de reacciones son los antígenos
medades autoinmunes. Dentro de las inmuno- del MHC, presentados en la membrana de los
deficiencias congénitas se incluye la inmunode- linfocitos T. Esta es sin duda la técnica de más
ficiencia combinada severa, caracterizada por una amplio uso para estudiar la respuesta
marcada deficiencia en las funciones de células B inmunológica de los linfocitos. En esta reacción
y T (ver capítulo 29). Entonces la utilidad clínica se verifican tres eventos principales: síntesis de
de este ensayo radica en proveer información de macromoléculas, transformación blástica y pro-
la capacidad funcional de linfocitos de sangre liferación. Las células respondedoras en RML son
periférica. Esta información es de valor para co- principalmente linfocitos CD4+. Éstas recono-
nocer el estado del sistema inmune del paciente y cen moléculas de MHC clase II por lo que
como indicador del progreso de una terapia. antígenos de Clase II son sus principales
La aparición del SIDA, atrajo nuevamente la estimuladores. Además de poder determinar los
atención a la investigación clínica de las niveles de la respuesta de linfocitos, esta reac-
inmunodeficiencias y reafirmó la importancia de ción sirve para demostrar la compatibilidad de
las determinaciones in vitro de las funciones de MHC. Se conoce dos tipos de RML, la
la inmunidad celular. Por ejemplo, una disminu- unidireccional y la bidireccional. En la
ción en la respuesta proliferativa a Phytolacca unidireccional, una población celular sirve como
americana (una lectina que actúa como antígeno (también conocidas como células
estimulador de células B y T) o frente a algunos estimuladoras) y es usada sólo después de la
antígenos de memoria tales como Cándida inhibición de su propia proliferación. Entonces
albicans o toxoide tetánico, tiene valor pronósti- sólo se determina la respuesta proliferativa de la
co, por ser la capacidad de proliferar un indicador segunda población celular (también llamadas cé-
precoz del deterioro de la función inmune en per- lulas respondedoras). En la RML bidireccional
sonas infectadas con el virus de la la respuesta proliferativa de ambas poblaciones
inmunodeficiencia humana tipo 1 (HIV-1), en pe- celulares es evaluada ya que ninguna población
ríodos de la infección en que los niveles de CD4+ celular es inhibida en su división. Si existe reco-
están aún dentro de límites normales. nocimiento o reactividad de los linfocitos habrá
De igual manera, el ensayo de proliferación proliferación e incorporación de 3H-timidina (fi-
puede ser utilizado para definir otras inmunode- gura 41-6).
ficiencias adquiridas, como el síndrome de fatiga Esta reacción ha sido usada para evaluar los
crónica (SFC), que frecuentemente se acompaña defectos de la respuesta inmune. No obstante, su
con reactivación frente a virus de alta prevalencia aplicación más importante es en el área de
como Epstein-Barr o virus Herpes. Por ejemplo, tipificación de tejidos y trasplante de órganos y
la respuesta proliferativa a PWM estuvo bajo la células.
media de los controles normales en el 95% de pa-
cientes con SFC. De igual manera, la habilidad de Interpretación, rangos normales y control de
linfocitos estimulados con mitógenos a producir calidad. La utilidad clínica del ensayo de proli-
IFN, generalmente se puede correlacionar con res- feración depende de la habilidad del inmunólogo
puesta proliferativa. clínico para interpretar de manera adecuada los
Los antígenos de potencial uso en clínica son resultados. Esto requiere conocer de manera
numerosos y deben ser escogidos con cuidado de exacta la respuesta a esperar en individuos
acuerdo al problema a investigar. Para evaluar res- inmunocompetentes, para poseer los adecuados
puesta frente a antígenos en los cuales altos por- controles. Esto implica, además, que cada labo-
centajes de la población están expuestos, (marca- ratorio debiera poseer sus propios rangos de va-
dores generales de inmunocompetencia celular), lores normales para la respuesta a cada
Cándida albicans y toxoide tetánico deberían uti- inmunógeno, tomando en consideración aspec-
lizarse. tos como edad, sexo y grupo étnico.
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Figura 41-6. Cultivo mixto de linfocitos. Las células no respondedoras (irradiadas) presentan sus antígenos de superficie a las
células respondedoras, que como respuesta entran a división celular e incorporan 3H-timidina en el DNA.
3.2.3. Estudio de la citotoxicidad celular presar diferentes tipos de estructuras de reconoci-

miento y mediar más de un tipo de citotoxicidad.
La citotoxicidad celular es una de las funcio- Las células citolíticas efectoras humanas com-
nes más importantes de esta rama de la respuesta prenden diferentes tipos celulares los cuales depen-
inmune. La citotoxicidad se entiende como la ca- diendo de su microambiente difieren en número,
pacidad de una célula de atacar o ser tóxica para estado de activación y en el mecanismo utilizado
otra célula blanco. Esta propiedad la poseen los en reconocimiento y muerte de la célula blanco.
LT citotóxicos (LTc), las células NK y aquellos Luego del reconocimiento y el contacto de superfi-
tipos celulares que participan de fenómenos de cie, la célula citolítica efectora activa una cascada
citotoxicidad dependientes de anticuerpos de señales, desencadenando una acción irreversi-
(ADCC) (ver capítulo 19). ble y letal hacia la célula blanco. La célula efectora,
De manera general las células citolíticas generalmente puede asociarse a nuevas células blan-
efectoras se pueden dividir en dos grupos: aquellas co en dos o tres ocasiones sin necesitar de reactivar
que requieren sensibilización previa con un antígeno su cascada de señales. En el capítulo 19 se descri-
y reconocen en el contexto de moléculas de HLA y ben los diferentes mecanismos de citotoxicidad que
aquellas que no requieren sensibilización previa, presenta los LTc y células NK.
ya que poseen reactividad espontánea, su respuesta
no está restringida a HLA y son activadas por Significancia clínica e interpretación de los re-
citoquinas. La mayor parte de las células T CD8- y sultados. La evaluación de las funciones citolíticas
CD4-, no actúan restringidas a HLA, pero las provee una medida eficaz para evaluar la eficien-
subpoblaciones (tanto CD4+ como CD8+) pueden cia de las diferentes subpoblaciones celulares en
ser restringidas a HLA. De igual manera las célu- estados de salud y de pérdida de ella.
las T L/B (células TCR2+) pueden mediar ambos Estos ensayos constituyen una parte sustan-
tipos de citotoxicidad, donde la expresión de la cial de la evaluación clínica de pacientes
molécula CD56 permite separar ambas inmunocompetentes. Las células citolíticas
subpoblaciones. La restricción de HLA parece ser efectoras parecen jugar un importante papel en una
más bien relativa que una propiedad constante de variedad de enfermedades del hombre. Por un lado,
los linfocitos T citolíticos. Esto podría depender de una función citotóxica ausente o disminuida, al
la naturaleza y presentación del antígeno, implican- análisis in vitro de células citolíticas, se observa
do que una célula efectora tiene potencial para ex- en pacientes con inmunodeficiencias como SIDA,
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en pacientes con cáncer, en infecciones crónicas intracelulares, en trasplante de órganos y en el con-
por virus y hongos y en ciertas enfermedades trol de neoplasias. La actividad antiviral puede ser
autoinmunes. Por otro lado, la activación de la detectada directamente en CMSP, sólo en períodos
función citolítica se observa en pacientes relativamente cortos en la infección aguda. Esta res-
inmunodeficientes que reciben una terapia exitosa, puesta de LTc, se desarrolla dentro de pocas sema-
en pacientes que se recuperan de infecciones nas luego de la infección viral. Después de la resolu-
virales y en personas con cáncer que responden a ción de la infección aguda, la respuesta de LTc sólo
la terapia. Las células citolíticas participan en el puede detectarse por estimulación in vitro de CMSP,
rechazo a trasplantes (entre ellos los de médula cultivando estas células durante varios días en pre-
ósea), eliminación de células anormales y en nu- sencia del antígeno viral específico. La CMSP de
merosos procesos patológicos. dadores normales generalmente contienen cantida-
des suficientes de células presentadoras de antígeno
Ensayos en sangre humana. Los estudios clíni- (monocitos) y células ayudadoras (linfocitos T
cos a menudo requieren monitorear la actividad de CD4+) para estimular esta respuesta de LTc de me-
células NK. Sin embargo, en algunos pacientes in- moria. No obstante citoquinas exógenas como IL-2
cluyendo niños la cantidad de sangre disponible es y IL-6, pueden adicionarse al cultivo para aumentar
escasa. Por ello, ha sido necesario desarrollar pro- la diferenciación de LTc precursoras en células killer
tocolos sensibles que usen pequeños volúmenes de funcionales. Una excepción la constituyen los pa-
sangre total evitando procesos de purificación. Es- cientes con SIDA quienes parecen mantener niveles
tos protocolos han proporcionado resultados com- detectables de células circulantes maduras con
parables con los procedimientos tradicionales. fenotipo CD8+ específico para HIV.
Todas las otras respuestas por LTc pueden ser
3.2.4. Linfocitos T citolíticos evaluadas por medio de una estimulación in vitro
de las células T de memoria mediante incubación
Las células T LB+ (TCR2+), que incluyen de CMSP con antígenos relevantes, para así indu-
aquellas células que participan en la respuesta cir una activación in vitro y una expansión clonal
citolítica restringida por HLA, son la principal de las células T reactivas al antígeno. Por ello una
población circulante de células T. Una población falla en la respuesta para generar respuesta por
significativamente menor, aunque importante, co- LTc in vitro, podría ser indicativo de: a) ausencia
rresponde a los linfocitos T g/d+, los cuales pueden de célula T de memoria; b) falla en las células T
mediar reacciones citolíticas no restringidas por de memoria para activarse, proliferar o diferen-
HLA, o semejantes a NK, después de cultivarse en ciarse en respuesta al antígeno; c) fallas en la pre-
presencia de IL-2, pero podrían también mostrar sentación del antígeno por parte de las células pre-
lisis por antígenos que son restringidos por molé- sentadoras de antígeno; d) incapacidad para indu-
culas de HLA clase semejante a I. Las células LB cir la muerte de la célula blanco.
TCR2+, de linfocitos citotóxicos reconocen seg- Los nuevos abordajes terapéuticos como tras-
mentos relativamente cortos, de 10-20 aminoácidos, plante de médula ósea, transferencia pasiva de
que asociados a moléculas de HLA se exponen en células y terapia con citoquinas, están tornando
la superficie de la célula. Por ello la susceptibilidad cada vez más importante identificar la causa de la
de una determinada célula blanco al ataque de una deficiencia de la respuesta por LTc de manera tan
determinada célula citotóxica, depende primaria- precisa como sea posible. Debe quedar claro que
mente del tipo de vía de procesamiento del antígeno una célula citolítica puede ser capaz de reconocer
en la célula blanco. Así, antígenos que son y matar a una célula blanco por más de un meca-
endógenamente procesados y asociados en la su- nismo. Entonces la activación in vitro de LTc pue-
perficie celular con moléculas de clase I, son reco- de ser capaz de matar tanto de manera específica
nocidos por LTc, CD8+. Por otro lado, antígenos y restricta a HLA como de manera no restricta a
procesados por medio de proteasas endosomales se HLA y semejante a como matan las células NK.
asocian con moléculas de HLA clase II y son reco- Por ello la interpretación de los ensayos de LTc es
nocidos por LTc, CD4+. Es claro que bajo ciertas a menudo difícil y requiere una cuidadosa consi-
circunstancias, ambos procesamientos pueden ocu- deración de la historia clínica del paciente, su es-
rrir en la misma célula blanco. tado clínico actual y la interpretación de los
Los LTc, son importantes en la inmunidad del parámetros de laboratorio en el contexto de los
huésped a infecciones por virus y otros patógenos valores normales establecidos por el laboratorio.
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Los métodos que evalúan citotoxicidad son está significativamente asociada con el desarrollo
comunes a todas las células involucradas en este de metástasis a distancia. Las células NK respon-
tipo de reacciones y se basan en la marcación pre- den rápidamente a MRB, aumentando la
via de las células blanco con 51C. Las células blan- citotoxicidad, por lo que esta propiedad puede ser
co marcadas son incubadas con las células utilizada como un sensible indicador en estudios
efectoras citolíticas y el 51Cr, liberado por las cé- in vitro destinados a evaluar la capacidad de las
lulas y presente en el sobrenadante, es un índice células del paciente en responder frente a la acti-
de la actividad citolítica (figura 41-7). vación de un determinado agente terapéutico. De
Figura 41-7. Medición de la citotoxicidad mediada por células. Células blanco marcadas con 51 Cr, son incubadas con células
efectoras (LT, células NK) HLA idénticas; luego la lisis de las células blanco se detecta cuantificando el 51Cr liberado.
3.2.5. Células NK igual manera el monitoreo seriado de la actividad

de células NK puede ser usado para demostrar
Las células NK circulantes, representan en- cambios en el estado de activación de células in-
tre el 10-15% de las CMSP y son capaces de indu- munes circulantes durante la terapia con MRB.
cir la lisis espontánea de células blanco neoplásicas El papel de células NK como primera línea
o infectadas por patógenos intracelulares, sin una de defensa frente a las infecciones es conocido.
necesaria sensibilización y sin restricción de HLA. Por ende en pacientes inmunocomprometidos, hay
Evidencias recientes muestran que células NK una estrecha correlación entre actividad NK y la
pueden ser activadas para producir citoquinas ta- presencia de infecciones severas. En el trasplante
les como TNFα, β e IFNγ, factor estimulador de de médula ósea, células NK parecen ser las pri-
colonias de granulocitos y macrófagos, IL-3 y pro- meras en re-colonizar la médula, por lo que estas
bablemente otros factores necesarios para el de- células pueden ser importantes para su instalación
sarrollo células hematopoyéticas. Las células NK exitosa y control de las infecciones virales
parecen ser importantes y activos componentes de postrasplante. Anormalidades en la respuesta NK
varios procesos patológicos en el ser humano. Por pueden encontrarse también en enfermedades
ello la medición de la actividad de células NK cir- autoinmunes. Por todo lo anterior, la evaluación
culantes o en tejidos parece necesaria para defi- seriada de la actividad NK es necesaria para co-
nir la contribución de estas células al proceso pa- nocer el estado de la respuesta inmune frente a
tológico. Por ejemplo en cáncer, una baja activi- varias enfermedades.
dad de células NK tiene un valor predictivo en el
progreso del tumor, la respuesta pobre al tratamien- 3.2.6. La reacción de citotoxicidad celular de-
to y la disminución en el tiempo de sobrevida sin pendiente de anticuerpos
metástasis. Una baja en la actividad NK también
puede significar un factor de riesgo en la instala- Los ensayos de ADCC pueden ser clínica-
ción de procesos malignos. De igual manera, una mente útiles para valorar la inmunocompetencia
baja actividad de NK en la sangre de pacientes de subpoblaciones de células efectoras caracteri-
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zadas por la presencia del receptor FcγRII y 3.2.7. Células “killer” activadas por linfoquinas
FcγRIII. En el hombre, las células NK CD3-
CD56+ CD16+ y una pequeña fracción de células El ensayo de células “killer” activadas por
T CD3+ CD16+ participan en ADCC. Así, en linfoquinas (LAK) es frecuentemente usado para
pacientes con varias enfermedades y especialmen- monitorear la respuesta a la terapia en pacientes
te en pacientes con cáncer que han sido tratados tratados con citoquinas u otros MRBs. Células
con MRB, estas pequeñas subpoblaciones pueden efectoras activadas in vivo pueden ser capaces de
expandirse in vivo y ser responsables por una fuer- matar células blanco resistentes a NK. Así, CMSP
te respuesta antitumoral y antiviral. Siendo que no son capaces de matar tales células en ensayos
las actividades NK y ADCC parecen ser media- de 4 h que miden liberación de 51Cr, mientras que
das por diferentes subpoblaciones de CMSP (CD3- algunos linfocitos residentes en tejidos pueden
CD56+CD16- versus CD3- CD56+CD16+ y tener una actividad LAK espontánea. Entonces,
CD3+CD56+CD16+, respectivamente), podría ser la evaluación de la actividad LAK en CMSP fres-
necesario monitorear todas ellas en estados de en- cas es una medida de la activación in vivo de cé-
fermedad. De igual manera, se sabe que estos dos lulas efectoras. Por ello el ensayo de la actividad
tipos de citotoxicidad parecen participar en mode células LAK, realizado antes y después de la
mentos diferentes de una determinada enferme- activación in vitro de CMSP con IL-2 u otra
dad. Las células NK son la primera línea de de- citoquina es una medida de la capacidad de célu-
fensa mientras que las reacciones de ADCC asu- las NK y T para activarse y expresar sus funcio-
men un papel importante una vez que las IgG di- nes efectoras.
rigidas contra un patógeno o célula blanco han sido
sintetizadas y se encuentran en la circulación (fi- 3.2.8. Citotoxicidad por macrófagos
gura 41-8).
Otra de las principales aplicaciones de En el ensayo para evaluar la competencia de
ADCC es la evaluación de la reactividad de monocitos para destruir células blanco, el tipo de
anticuerpos contra aloantígenos, células célula blanco puede indicar el tipo de mecanismo
tumorales y virus. La ADCC puede utilizarse para involucrado en la destrucción in vitro. Alteracio-
estudiar el suero de pacientes que recibirán un nes de la función de monocitos se presentan en
injerto o están desarrollando un rechazo a injer- algunas inmunodeficiencias o pueden ser secun-
to, en pacientes con cáncer que están siendo tra- darias a episodios infecciosos, así como también
tados con anticuerpos monoclonales dirigidos en procesos malignos y enfermedades autoin-
contra el tumor y en pacientes con infecciones munes y pueden en general acompañarse de
virales. Entonces ADCC entrega importante in- inmunosupresión. Generalmente otros ensayos son
formación acerca de la función de la más comunes para evaluar la capacidad funcional
citotoxicidad mediada por células en dichos pa- de monocitos, no obstante la evaluación de la
cientes durante la enfermedad. citotoxicidad es una función especializada que
Figura 41-8. Reacción de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos. Células blanco incubadas en presen-
cia de anticuerpos IgG, son reconocidas por células efectoras NK que expresan receptores del tipo FcγRII y FcγRIII. Como
resultado final, la célula recubierta de anticuerpos es lisada.
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podría ser importante en pacientes con cáncer y acridina tiñe de verde el DNA y de naranja el
en aquellos que padecen de enfermedades infec- RNA, ya que este colorante no intercala RNA. Las
ciosas. El ensayo de la citotoxicidad de monocitos células muertas son teñidas con bromuro de etidio
debe ser usado en conjunto con otras pruebas fun- y se ven naranjas, mientras que las células vivas
cionales, para evaluar la regulación positiva o ne- excluyen este colorante.
gativa de la función de monocitos luego del trata-
miento in vivo o in vitro con MRBs. c) Cuantificación de la fragmentación del DNA.
Estas técnicas se basan en el hecho que DNA frag-
3.2.9. Nuevos métodos de evaluación de la ac- mentado no sedimenta junto con el cromosoma
tividad citotóxica íntegro cuando es centrifugado. Siendo que esta
técnica es complicada sin ventajas comparativas
a) Ensayos de fragmentación de DNA. Diferen- sobre las otras técnicas ya descritas, se recomien-
tes observaciones muestran que las células suje- da sólo para evaluar poblaciones celulares que no
tas a ataque de linfocitos citotóxicos presentan puedan ser fácilmente marcadas en su DNA, como
cambios morfológicos semejantes a los observa- por ejemplo los linfocitos en reposo.
dos en células que desarrollan muerte celular pro-
gramada, también llamada apoptosis. Este proce- d) Ensayo de pérdida de adhesión de células
so es acompañado por pérdida de la integridad de blanco. Esta técnica tiene por objetivo evaluar las
la membrana celular, lo cual la hace más simple consecuencias funcionales resultantes de la
de cuantificar. interacción tumor-células T. Por ello la medición
Los mecanismos de esa muerte celular están de la pérdida de la adhesión de las células
basados en la inducción de fragmentación del DNA tumorales permite evaluar además la actividad
de la célula blanco, hecho que ocurre pocos mi- lítica de esas células T.
nutos luego del contacto con la célula citotóxica.
El grado de solubilización del DNA depende de la e) Aislamiento de gránulos citoplasmáticos. El
naturaleza de la célula blanco. Esta afirmación se estudio de gránulos citoplasmáticos aislados y
basa en la observación de que las células purificados entrega conocimientos más profundos
citotóxicas inducen el mismo tipo de daño en el acerca de los mecanismos de citotoxicidad celu-
envoltorio nuclear de todas las células, sin embar- lar, más allá de la simple observación in vitro de
go estos daños llevan a la desintegración celular la actividad citotóxica.
sólo en algunas células. No obstante, evidencias
posteriores no mostraron que el envoltorio nuclear f) Ensayo de esterasa. Las serino esterasas están
resulte dañado por los LTc en células que no desa- dentro de las numerosas moléculas biológicas que
rrollan desintegración celular. participan en los mecanismos de toxicidad celu-
La verificación de la fragmentación del DNA, lar. El ensayo es simple y confiable y se basa en la
requiere de electroforesis en geles de agarosa para medición de las esterasas liberadas durante las
demostrar el clásico patrón en escala. Para cuanti- reacciones de citotoxicidad en que participan LTc.
ficar la fragmentación del DNA, es necesario eva- Los linfocitos citotóxicos pueden ser activados por
luar la fracción soluble. El principio de esta técni- diferentes mecanismos como anticuerpos
ca se basa en que el DNA de doble hebra que ha monoclonales que semejan el efecto de células
sufrido un extensivo daño se mantiene soluble, blanco portadoras de antígeno, por combinación
mientras que el DNA intacto permanece insolu- de ionóforos de calcio y proteíno quinasa C (o
ble. Recientemente el uso de 3H-timidina en vez forbol éster) o de manera tradicional incubándo-
de 125I-UdR ha sido propuesto por poseer ventajas los con células blanco.
como ser menos tóxica para el propio DNA.
3.3. Estudio de la síntesis de citoquinas y sus
b) Cuantificación de apoptosis usando coloran- receptores
tes fluorescentes. El uso de compuestos
fluorescentes que se asocian a DNA es una técni- Las citoquinas son glicoproteínas solubles
ca simple que nos permite determinar el porcen- que desempeñan funciones reguladoras. Son sin-
taje de células que están en proceso apoptótico. tetizadas y secretadas por diferentes células, sien-
La combinación de bromuro de etidio y naranja do capaces de estimular células del sistema
de acridina es ampliamente utilizada. Naranja de inmunológico para inducir cambios en su función,
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activación y expresión génica (ver capítulo 11). Aunque los métodos que cuantifican el
Las citoquinas son producidas como resultado de mRNA específico para cada citoquina, resultan
la activación celular y se caracterizan porque su algo más complejos y demandan más trabajo, se
síntesis y secreción es breve y autolimitada. Por han empleado para evitar los problemas deriva-
ello, la evaluación de ellas en muestras biológi- dos de los métodos basados en la evaluación de la
cas puede ser utilizada para monitorear tanto la proteína o de su actividad. La ventaja de este tipo
respuesta inmunológica como inflamatoria, de ensayos radica en que permiten el análisis de
correlacionándose con el estado de activación de la expresión de una citoquina particular o un gru-
la respuesta inmune celular. po de citoquinas en un tejido definido, órgano o
De igual manera, es conocido que los grupo de células en un período de tiempo deter-
linfocitos T helper, pueden subdividirse en dos minado. Más aún, la alta sensibilidad de estas téc-
subpoblaciones, llamadas Th1 y Th2, las que se nicas permiten estudiar la expresión de citoquinas
pueden caracterizar por el patrón de secreción de en un pequeño número de células, lo que resulta
citoquinas. El predominio de una determinada imposible si se utilizan otros ensayos. Varios mé-
subpoblación de LT en el hombre, ha sido asocia- todos han sido propuestos para cuantificar mRNA
da a la patogénesis en algunos desórdenes como de citoquinas. Dentro de los más usados están el
el asma, las enfermedades alérgicas, enfermeda- “Northern blotting”, ensayo de protección para
des autoinmunes como el lupus eritematoso y ar- ribonucleasa y la reacción de polimerasa en cade-
tritis reactiva, así como también en la resistencia na- transcriptasa reversa (RT-PCR). Estos méto-
a enfermedades infecciosas y parasitarias. Por ello dos, requieren como primer paso del aislamiento
la determinación de los patrones de citoquinas del RNA, previo a evaluar la expresión génica de
secretadas por linfocitos humanos es cada vez de las citoquinas o su receptor. Por ello, errores en
mayor relevancia. este procedimiento de aislamiento llevan a menu-
Aunque las citoquinas pueden ser directa- do a errores en los resultados y en la
mente evaluadas por medio de ensayos biológi- reproductibilidad del método. Se debe considerar
cos (evaluando su función biológica sobre células de manera especial que el RNA aislado es inesta-
blanco) o por medio de enzima inmunoanálisis ble y sensible a la degradación por ribonucleasas
(ELISA) (ver capítulo 39), estos métodos poseen presentes tanto en la muestra original como en el
algunas limitaciones. La primera, se refiere al tipo material donde se realiza la extracción. Por ello,
de muestra disponible. El ensayo de actividad de para obtener una buena preparación de ARN se
citoquinas es apropiado para muestras líquidas, debe minimizar la actividad de ribonucleasas du-
tales sobrenadantes de cultivo o fluidos biológi- rante la lisis de células o tejidos, evitando intro-
cos, pero no es factible de realizarse en muestras ducir trazas de ribonucleasas en soluciones o ma-
de tejido sólido. El segundo aspecto a considerar terial de vidrio. Para evitar en parte este proble-
es que la cantidad de citoquina en un determinado ma, el material debe ser autoclavado, se deben usar
fluido representa un remanente de la cantidad de guantes durante todas las fases de la extracción y
citoquina producida con respecto a la utilizada o agua tratada con dietilpirocarbonato, que es una
degradada. Así, los valores de citoquinas como substancia inhibidora de ribonucleasa. De igual
IL-2 e IL-4 en sobrenadantes de cultivo contenien- manera, el uso exclusivo de material para la ex-
do anticuerpos anti-IL-2R o IL-4R que bloquean tracción de RNA es fuertemente recomendado.
su utilización, son considerablemente más altos Los procedimientos de extracción de RNA,
que en mediciones realizadas en cultivos en au- utilizan la mezcla de isotiocianato de guanidina y
sencia de estos anticuerpos, sugiriendo que las cloroformo más agentes reductores como 2-
concentraciones de citoquinas producidas son ge- mercaptoetanol, los cuales desintegran las estruc-
neralmente mucho más altas que lo que las medi- turas celulares, disocian las nucleoproteínas y al
ciones tradicionales suelen indicar. Entonces, bajo mismo tiempo inactivan las ribonucleasas
estas circunstancias la medición en sobrenadantes endógenas.
o en fluidos biológicos, no siempre podría entre- De esta manera, a partir del RNA aislado, se
gar resultados representativos de los reales nive- puede purificar el mRNA mediante cromatografía
les de síntesis de una determinada citoquina cuan- de afinidad en columna de oligo(dT) celulosa, para
do métodos basados en la captura y posterior iden- investigar la expresión de un determinado recep-
tificación mediante ensayos tipo ELISA son utili- tor. No obstante, la mayoría de los métodos utili-
zados. zados para este propósito, los cuales se describen
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a continuación, no requieren de este paso de puri- Estos partidores específicos para cada citoquina, per-
ficación. miten su amplificación a partir de pequeñas cantida-
des del cDNA generado. Los productos de la PCR
3.3.1. Reacción de polimerasa en cadena- pueden ser fácilmente detectados por medio de va-
transcriptasa reversa (RT-PCR) rias técnicas como la electroforesis en geles de
agarosa, los cuales son teñidos con bromuro de etidio,
Luego de la descripción original de esta técni- el “Southern blotting” seguido de hibridización con
ca orientada a amplificar pequeñas cantidades de sondas marcadas con 32P o mediante técnicas
DNA, el método fue adaptado para la detección de colorimétricas que usan sondas marcadas con subs-
RNA, incluyendo un paso inicial que utiliza tancias fluorescentes. La sensibilidad de estas
transcriptasa reversa en el cual el cDNA es sintetiza- metodologías de RT-PCR hacen de ellas métodos de
do para ser usado como molde en la amplificación elección para la detección de RNA específico, espe-
posterior (ver capítulo 44). La PCR usa partidores cialmente cuando se trabaja con pocas cantidades de
específicos, ya definidos para la mayoría de las células o con RNA, que normalmente son expresa-
citoquinas tanto humanas como murinas (tabla 41-1). dos en pequeñas cantidades.
Tabla 41-1. Secuencias de partidores para la detección de algunas citoquinas humanas mediante
reacción de polimerasa en cadena
Citoquina Partidores
IL-1B S5’-TACGAATCTCCGACCACCACTACAG-3’
A5’-TGGAGGTGGAGAGCTTTCAGTTCATATG-3’
IL-2 S5’-ACTCACCAGGATGCTCACAT-3
A5’-AGGTAATCCATCTGTTCAGA-3’
IL-4 S5’-CCTCTGTTCTTCCTGCTAGCATGTGCC-3’
A5’-CCAACGTACTCTGGTTGGCTTCCTTCA-3’
IL-6 S5’-AGCTCAGCTATGAACTCCTTCTC-3’
A5’-GTCTCCTCATTGAATCCAGATTGG-3’
IL-10 S5’-ATGCCCCAAGCTGAGAACCAAGACCCA-3’
A5’-TCTCAAGGGGCTGGGTCAGCTATCCCA-3’
IL-12p40 S5’-CCAAGAACTTGCAGCTGAAG-3’
A5’-TGGGTCTATTCCGTTGTGTC-3’
IL-13 S5’-TATGCATCCGCTCCTCAATCCTC-3’
A5’-CGAAGTTTCAGTTGAACCGTCC-3’
TNFα S5’-CGGGACGTGGAGCTGGCCGAGGAG-3’
A5’-CACCAGCTGGTTATCTCTCAGCTC-3’
IFNγ S5’-AGTTATATCTTGGCTTTTCA-3’
A5’-ACCGAATAATTAGTCAGCTT-3’
β-actina S5’-ATTGCCGACAGGATGCAGAA-3’
A5’-GCTGATCCACATCTGCTGGAA-3’
P5’-CAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGCA-3’
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3.3.2. Ensayo de protección de ribonucleasa Estas técnicas se basan en la detección
(EPR) intracelular, previa permeabilización de la célula,
de una determinada citoquina mediante el uso de
Es una técnica sensible y específica para la anticuerpos anti-citoquina marcados con
detección y cuantificación de mRNA. Se basa en compuestos fluorescentes, seguida de un corto
la hibridización en fase líquida, de una sonda período de activación de las células en presencia
radiactiva de RNA antisenso con el mRNA, de un estimulador conocido de la síntesis y en
seguida de la exposición a RNAasas que degradan presencia de bloqueadores del transporte de
la sonda remanente así como también cualquier proteínas como Brefeldina A o Monesina. Estos
RNA no hibridizado. El material remanente inhibidores impiden la secreción induciendo la
"protegido" es separado mediante electroforesis, acumulación citoplasmática de la citoquina. Las
visualizado y cuantificado mediante autorradio- células son también teñidas con anticuerpos
grarfía, densitometría o aparatos y "softwares" que dirigidos contra marcadores de membrana (CD3,
permiten evaluar fosfoimágenes. Entonces la CD4, CD8, etc.) en atención a definir la población
intensidad de las bandas es comparada con las celular productora de una determinada citoquina.
cantidades del RNA blanco, originalmente presentes Anticuerpos marcados con diferentes fluorocro-
en la muestra. En los últimos años, "kits" comerciales mos están disponibles comercialmente. No obs-
para esta metodología están disponibles, los cuales tante dependerá de la población celular a estudiar
permiten el análisis simultáneo de múltiples y de las citoquinas a investigar el tipo de anticuerpo
citoquinas en una misma muestra. anti-marcador celular y anti-citoquina a ser
utilizado.
3.3.3. Tinción intracelular de citoquinas
3.3.4. Evaluación del interferón
Una eventual limitación de los métodos
moleculares radica en la imposibilidad de poder Aunque esta molécula fue identificada a fines
seleccionar una determinada célula para su estudio de la década del cincuenta, como una proteína an-
y la imposibilidad de obtener información acerca tiviral, sus vastos efectos biológicos la sitúan como
de la identidad y frecuencia de células productoras una molécula inmunorreguladora capaz de alterar
de una citoquina particular dentro de una población una amplia variedad de procesos tales como
celular. Entonces, en ausencia de preparaciones crecimiento celular, diferenciación, transcripción
celulares puras, estas técnicas no pueden ser génica y traducción. Los interferones son
utilizadas para estudiar la producción de citoquinas producidos por una variedad de células en
por subpoblaciones definidas de células como es respuesta a la infección, y son por ello sintetizados
el caso de las subpoblaciones Th1 y Th2 de células como producto de la activación de la respuesta
T CD4+. Más aun considerable evidencia muestra inmune (ver capítulo 11). Existen tres tipos
que cambios en la frecuencia de diferentes conocidos de IFN α, β y γ, por lo que tanto el tipo
subpoblaciones celulares puede ocurrir en celular como el agente que actúa como inductor
diferentes enfermedades por lo que la capacidad de su síntesis son importantes en determinar el tipo
para detectar la producción de citoquinas por de IFN producido. De esta manera IFNα es
células individuales y fenotípicamente definidas producido por linfocitos T y B, macrófagos, células
resulta hoy de particular importancia. NK y linfocitos granulares grandes, en respuesta
Inicialmente, métodos de dilución limitante y a variados estímulos como virus, productos
ELISPOT se utilizaron para determinar la bacterianos, polinucleótidos, células tumorales y
frecuencia de células productoras de una células alogénicas. Estos mismos inductores
determinada citoquina. Estos métodos son podrían gatillar la síntesis de IFNβ, al tomar
laboriosos y consumen mucho tiempo. Por ello, contacto con fibroblastos, células epiteliales y en
técnicas de reciente introducción basadas en la menor medida con linfocitos. Por otro lado, el IFNγ
tinción intracelular de citoquinas han simplificado es producido por linfocitos T CD4+ y CD8+, para
el estudio de la producción de citoquinas en células cuya síntesis requieren de la cooperación de
individuales. Aparte de ser técnicas de gran monocitos y macrófagos. Esta citoquina es
sensibilidad y especificidad, no son afectadas por producida de manera específica cuando células T
factores como son la presencia de receptores sensibilizadas actúan frente a un antígeno o
solubles y de membrana para la citoquina en estudio. complejos antígeno anticuerpo. De igual manera,
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su síntesis es inducida de forma inespecífica por mediante algún bioensayo o mediante ELISA.
mitógenos, anticuerpos anti-linfocito o citoquinas La producción in vitro de IFNγ por células
como IL-2. mononucleares de sangre periférica, seguida de la
Todos los IFNs pueden aumentar o disminuir estimulación con mitógenos o antígenos
en una amplia variedad de reacciones inmunes. específicos es una manera efectiva de evaluar la
Los tipos celulares y las funciones que pueden ser función de células T (en lo que respecta a la
modificadas por los IFNs son variados. Los IFNs producción de citoquinas) y la interacción
modifican la reactividad inmune actuando sobre monocito-célula T. Un defecto en la producción
células B, T, NK, macrófagos, basófilos o células de IFNγ u otras citoquinas puede ser sugestivo de
germinales de médula ósea. La alteración que el problema de fondo es una aberración en
resultante de tales estímulos se traduce en la las señales regulatorias. La depresión en la
producción de anticuerpos, la citotoxicidad de producción de IFNγ, en respuesta a mitógenos,
células T, reacciones de injerto versus huésped, antígenos específicos o a IL-2 puede indicar un
blastogénesis mediada por mitógenos y antígenos, defecto en el número y función de células T y un
alteración de varias funciones de los macrófagos, defecto en la habilidad de monocitos para
hipersensibilidad retardada, citotoxicidad por interactuar con células T. La alteracion in vitro de
células NK, liberación de histamina mediada por los linfocitos para secretar IFNγ frente a un
IgE y maduración de células germinales de la estímulo, se asocia con enfermedades de base
médula ósea. Estos estados de inmunidad alterada inmune como autoinmunidad, inmunodeficiencia,
pueden ser importantes en la fisiopatología de la procesos linfoides malignos e infecciones con
autoinmunidad, inmunodeficiencia, procesos ciertos virus incluyendo VIH.
linfoides malignos y en infecciones virales.
La sobreproducción, la subproducción o la a) Ensayos biológicos
producción selectivamente localizada de IFNγ
puede ser un importante factor en autoinmunidad Los ensayos biológicos para IFNs, permiten
y en las inmunodeficiencias. evaluar la extensión en que esta molécula inhibe
Los tres IFNs son proteínas diferentes desde una o varias manifestaciones del crecimiento viral
el punto de vista antigénico, por lo que anticuerpos como son, la inhibición de la producción de
pueden utilizarse para su identificación y partículas virales, la inhibición del efecto citopático,
evaluación mediante métodos de RIA y ELISA la inhibición de la formación de placas, la inhibición
(ver capítulo 39). de la formación de antígenos virales o de la síntesis
de DNA viral. Estos ensayos requieren la incubación
Indicaciones clínicas. Se debe evaluar los de células con IFN, la remoción del IFN, la infección
niveles circulantes de IFNs, en pacientes con una de las células con virus y la evaluación de la
variedad de desórdenes, así como la detección in reducción del crecimiento viral. La actividad anti-
vitro de la producción de IFNγ podría ser un viral observada es cuantificada en unidades (U),
marcador de la función de células T. De igual donde 1U de IFN corresponde al recíproco de la
manera, IFNs pueden ser evaluados en la más alta dilución de IFN que inhibe una magnitud
circulación de pacientes con desórdenes específica del crecimiento o de la actividad viral
autoinmunes sistémicos como el lupus (generalmente el 50%), comparado con un control
eritematoso. En estos pacientes la presencia de no tratado con IFN.
IFNα se correlaciona con enfermedad clínica
activa. Además, las determinaciones de IFNs son b) Inmunoensayos para IFN
esenciales en el monitoreo de pacientes que
participan en estudios clínicos. Ensayos biológicos Todos los tipos de IFNs, pueden ser
deberían usarse para asegurar la actividad determinados mediante ensayos inmunoenzi-
biológica de IFNs que serán administrados a los máticos e inmunorradiométricos. La principal
pacientes. También, es importante monitorear los ventaja de estos ensayos es la rapidez y la
niveles séricos de IFN de pacientes que están posibilidad de tamizar muchas muestras. No ob-
recibiendo terapia con IFN. La síntesis de stante, los inmunoensayos no siempre reemplazan
anticuerpos anti-IFN, puede ser detectada en el a los ensayos biológicos, especialmente cuando
suero de pacientes en respuesta a terapias con IFN. se requiere identificar una molécula biológica-
En estos casos, los sueros deberían ser evaluados mente activa, como es el caso de la evaluación de
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diferentes partidas de IFNs para uso en inmunote- precozmente en pacientes que desarrollan SIDA
rapia. y por ello poseen elevado valor pronóstico.
Interpretación. Los ensayos para IFN en suero 3.4. “DNA microarrays”

de pacientes con HIV, evalúan la respuesta de
células linfoides frente a HIV y agentes Este tipo de análisis, denominados genómicos,
oportunistas así como alteraciones en los aspectos se han desarrollado en los últimos cinco años y
inmunorregulatorios. La replicación de HIV puede permiten evaluar en forma simultánea la expresión
ser responsable de la presencia de IFN α, β y γ, de miles de genes. Los genes de un determinado tipo
mientras que la respuesta T a proteínas de HIV, celular son dispuestos de manera ordenada sobre un
puede ser responsable de los niveles de IFNγ. No soporte sólido. Estos genes están representados ya
obstante, debe quedar claro que en la infección sea por oligonucleótidos o por fragmentos de cDNA.
aguda por diferentes patógenos oportunistas se El mRNA de las células en que se desea estudiar la
podría observar síntesis de IFNs. Elevados niveles expresión génica es utilizado para generar las sondas
de IFN, se asocian con anormalidades en la función de cDNA total para hibridizar con el “microarray”.
inmune tales como hipergamaglobulinemia o Estas sondas están marcadas con compuestos
depresión de algunas respuestas celulares. Sin fluorescentes, por lo que su eventual hibridización
embargo la producción de IFNs puede asociarse con genes del “microarray” es cuantificada mediante
con síntesis de otros factores no relacionados fluorescencia, cuya intensidad refleja la abundancia
como son producción de neopterina, aumento de de un determinado mRNA dentro de la célula en
la expresión de moléculas de HLA clases I y II, estudio. La medición de la expresión génica mediante
expresión de β2 microglobulina y producción de esta técnica ha mostrado estar en estrecha correlación
2-5 oligoadenilato sintetasa. con los resultados obtenidos con otras metodologías
Niveles séricos de IFNs son detectados en convencionales como “northern blot” y PCR
personas infectadas con HIV y se observan de cuantitativa. Entonces, es posible mediante este
manera precoz en el desarrollo del síndrome de método estudiar a gran escala la expresión génica
inmunodeficiencia adquirida. De hecho los niveles durante la activación de células T, durante la respuesta
séricos de neopterina y β2 microglobulina, las inmune a diferentes agentes infecciosos o durante la
cuales son inducidas por IFNs, se elevan terapia con inmunomoduladores (figura 41-9).
Figura 41-9. DNA microarrays. Representación esquemática de la preparación del material genético, hibridación, captura y
análisis de imágenes.
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3.5. Pruebas para evaluar reacciones de moniotorear los resultados de inmunoterapia en
hipersensibilidad retardada (RHR) algunas enfermedades malignas o en inmunodefi-
ciencias, para monitorear el curso de enfermedades
La inyección intradérmica de antígenos, como coccidiomicosis y para el diagnóstico de
como tuberculina (PPD), estreptoquinasa y Can- algunas enfermedades infecciosas.
dida entre otros, puede inducir una o más de los
cuatro tipos de reacciones cutáneas: (a) una Interpretación. Debe considerarse que algunos
reacción circular y enrojecida que alcanza su individuos podrían no responder a un determinado
máxima induración 15-20 minutos después de la antígeno, por no haber tenido contacto previo con
inoculación y es debida a la presencia de IgE él. No obstante, ciertos antígenos son ubicuos y
específica en la piel, (b) una reacción de fase tardía por ello la gran mayoría de las personas responden
mediada por IgE con una máxima induración en- frente a ellos por haber sido sensibilizados un algún
tre 12-24 h posteriores a la inyección, (c) una momento de sus vidas. Una revisión de la literatura
reacción caracterizada por una vasculitis local, extranjera, acerca de la respuesta de personas sanas
denominada reacción de Arthur, que toma lugar a diferentes antígenos, evaluada mediante RHR
entre 12-24 h luego de la inoculación y es mediada mostró que: 75,5% responde a paperas; 53,3% a
por anticuerpos fijadores de complemento Cándida albicans; 43,5% a Trichophyton; 38,3%
presentes en el sitio de la inoculación y (d) una a toxoide tetánico; 37,6% a tuberculina (PPD) y
reacción de hipersensibilidad retardada depen- 20,4% a coccidina. En base a estos estudios, los
diente de macrófagos y linfocitos, caracterizada referidos antígenos podrían ser utilizados en los
por eritema e induración en el sitio de la paneles de evaluación, o al menos ser utilizados
inoculación que se produce en 24-48 h posteriores para validar la realidad nacional. En orden a
al contacto con el antígeno. De esta manera las obtener resultados reproducibles, deberá existir
RHR representan un fenómeno de memoria consenso en lo referente a los antígenos a ser
inmunológica, para uno o más grupos de antígenos utilizados y establecer criterios uniformes en
frente a los cuales el individuo se ha sensibilizado. cuanto a su preparación, vía y forma de
Esto significa que una exposición previa causó la administración del antígeno así como también
sensibilización a un determinado antígeno y la respecto a los criterios a ser utilizados en la
nueva presencia de ese antígeno recuerda y alerta evaluación de la respuesta dérmica.
al sistema inmunológico. Ello desencadena una
respuesta inflamatoria específica al antígeno, 3.6. Estudios de la especificidad de células T
donde el diámetro de la reacción es un índice de
la hipersensibilidad cutánea. Así, las pruebas de 3.6.1. Tetrámeros. Las células T reconocen
hipersensibilidad retardada usando inyección pequeños péptidos, los que son presentados en el
intradérmica son aún un método válido, de costo contexto de moléculas de MHC, en asociación con
razonable para detectar hipersensibilidad y evaluar el receptor para células T (TCR). Entonces, es
inmunidad celular en el hombre (única prueba posible utilizar complejos MHC-péptido,
funcional in vivo). Respuestas dérmicas positivas marcados con colorantes fluorescentes, los que al
generalmente se correlacionan con los ensayos in asociarse con el TCR permitan visualizar esta
vitro para hipersensibilidad retardada, incluyendo ligación y a la vez evaluar la especificidad de esas
la proliferación de linfocitos y la medición de la células T por un determinado antígeno. No ob-
síntesis de citoquinas. stante, debe considerarse que la asociación entre
TCR y el complejo péptido-MHC es bastante débil
Indicaciones clínicas de la RHR. Es útil en la como para producir un complejo estable. Esto,
evaluación de pacientes con síndromes de puede ser compensado mediante el uso de
inmunodeficiencias primarias o adquiridas. Si un multímeros fluorescentes del complejo péptido-
paciente no presenta reacción después de la MHC, lo cual aumenta su avidez por la célula T.
inoculación intradérmica de cualquier antígeno, Así, dímeros y aún mejor, tetrámeros de complejos
se dice que es anérgico o presenta un estado de péptido-MHC clase I, han sido usados en ensayos
anergia. Esta condición debe necesariamente ser de citometría de flujo, para enumerar, caracterizar
comprobada utilizando concentraciones más altas y purificar células CD8+, específicas para un
de antígeno. determinado péptido. En este tipo de ensayos, tanto
Las RHR, también han sido utilizadas para la cadena ligera como la pesada de MHC, son
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producidas en Escherichia coli, para luego ser Relevancia clínica. La inmunoscopía provee
ensambladas in vitro, en presencia del péptido información acerca del repertorio de células T que
antigénico. Los complejos así formados son ha sido seleccionado durante la respuesta inmune.
purificados mediante filtración en gel. Entonces, En combinación con la técnica de tetrámeros es
una molécula de biotina es adicionada en el posible evaluar la diversidad de clones de células
carboxilo terminal de la cadena pesada de MHC. T específicos para un epitopo, expandidas luego
Esto permite su incubación con fluoresceína de la inmunización. De igual manera, el uso
marcada con streptoavidina, permitiendo que estos simultáneo de ambas técnicas permite el análisis
tetrámeros puedan ser utilizados en ensayos de detallado del repertorio de células T sin necesidad
ligación. de que estas poblaciones celulares sean
amplificadas in vitro.
Relevancia clínica. La frecuencia de células T
evaluadas mediante el ensayo de tetrámeros es 3.7. Detección de células T precursoras
generalmente 10 veces más alta de lo que revelan
las mediciones realizadas con métodos Las células T precursoras no tienen ninguna
convencionales. Considerando que la ligación del función efectora. Sin embargo pueden proliferar
complejo MHC-tetrámero, requiere la expresión al enfrentarse al estímulo antigénico. Esta
del TCR apropiado, este ensayo no provee proliferación ha sido ensayada mediante variados
evidencia acerca de la funcionalidad de la célula métodos que utilizan la incorporación de precur-
T ya que el ensayo está restringido a epitopos de sores radiactivos o compuestos fluorescentes. Sin
células T previamente identificados. No obstante embargo, ninguno de estos métodos permite
la característica más interesante del ensayo de purificar y caracterizar las células precursoras que
tetrámeros es su capacidad para visualizar todas proliferan frente a un antígeno. La capacidad de
las células T específicas sean éstas precursoras, una célula precursora para proliferar, permite la
efectoras, funcionales o anérgicas. amplificación de una población específica para
un antígeno, así como también determinar la
3.6.2. Inmunoscopía. La diversidad del frecuencia de estas células precursoras. Esto es
repertorio de células T, es creada mediante un posible mediante técnicas de dilución limitante
proceso de rearreglo del DNA somático y citometría de flujo. Esta última, utiliza
denominado recombinación V(D)J. La tercera colorantes fluorescentes para teñir la membrana
región hipervariable (CDR3) tanto de las cadenas de la célula por lo que es más sensible y de mayor
α como β de TCR, son producto de esta utilidad. Entonces, las células son teñidas con
recombinación. Entonces, mediante PCR colorantes fluorescentes como carboxifluores-
utilizando partidores específicos para V y C, las ceína o PKH26. Después de cada división celular,
diferentes regiones de CDR3 pueden ser las células acaban siendo dos veces menos
amplificadas y su distribución de tamaños puede fluorescentes, producto de la partición del
ser analizada mediante electroforesis en geles de colorante fluorescente en las dos células hijas
agarosa. Varias docenas de segmentos de genes resultantes de cada ciclo. Esto permite deducir
BV y 4 ó 5 de BJ que codifican para la cadena β el número de ciclos celulares a partir de la
son conocidos en el ratón y el hombre. Por ello, intensidad de la fluorescencia. De igual manera,
las posibilidades de combinación de los la frecuencia inicial de células T precursoras
segmentos V y J con los posibles CDR3 puede ser calculada a partir de la fluorescencia
representan más de 2.000, las que pueden ser observada al final del experimento (generalmente
analizadas en una única muestra. Después de la entre 4 y 15 días).
inmunización, unos pocos clones de células T son
amplificados. Todas las células pertenecientes a Relevancia clínica. El ensayo de la respuesta
un mismo clon presentarán el mismo CDR3. Este proliferativa de células precursoras mediante
abordaje, ha sido utilizado para visualizar y citometría de flujo es un método que presenta
cuantificar la expansión clonal tanto en el hombre ventajas sobre aquellos que utilizan la incorpora-
como el ratón. Utilizando la tecnología del PCR, ción de precursores radiactivos, más aún si se
el método inmunoscópico es altamente sensible considera que se puede utilizar la misma muestra
y una única célula T específica puede ser para determinar en paralelo la asociación de
detectada en 2 x 105 células. tetrámeros.
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4. ESTUDIO DE LA INMUNIDAD CELULAR como bacterias (Staphylococcus aureus) y
INESPECÍFICA levaduras (Cándida albicans). Los microorga-
nismos fagocitados pueden ser detectados
El estudio de este tipo de inmunidad, involu- mediante la tinción con colorantes y lectura
cra evaluar las células y mediadores que participan microscópica así como también mediante el uso
en esta vía de la respuesta inmunitaria. Dentro de de células microbianas marcadas con substancias
ellos debemos considerar los neutrófilos fluorescentes (citometría de flujo; ver capítulo 42)
(leucocitos polimorfonucleares, PMN), monocitos, o precursores radiactivos para luego evaluar la
eosinófilos y basófilos. fluorescencia o radiactividad asociada a los PMN.
Los defectos en la fagocitosis y muerte celular
llevan a un aumento en la susceptibilidad a b) Ensayo de actividad microbicida. Para evaluar
infecciones y pueden asociarse a alteración de estas la actividad microbicida de PMN, células
células o bien a deficiencias en factores purificadas son incubadas con microorganismos
quimiotácticos como C3a y C5a. Éstos también (S. aureus, C. albicans), en una proporción célula:
pueden deberse a fallas en la opsonización sea esta microorganismo igual a 1:5, en presencia de
por déficit de anticuerpos opsonizantes o de factores anticuerpos del paciente y de C3b más controles
opsonizantes del complemento como C3b y C4b. apropiados. Los tubos se incuban durante 3 h,
tomándose alícuotas cada 30 minutos. En cada
4.1. Ensayos funcionales de neutrófilos caso, las alícuotas son centrifugadas, las células
lisadas y la suspensión resultante es sembrada en
Los neutrófilos o leucocitos PMN constituyen el medios de cultivo apropiados para mediante el
más abundante tipo de leucocito en sangre desarrollo bacteriano, evaluar la cantidad de
periférica normal, donde sus concentraciones bacterias fagocitadas que permanecen viables.
varían entre 2000 y 5000 células/µl (ver capítulo
3). Estas células participan en la fase efectora de c) Prueba de reducción del azul de nitrotetra-
la respuesta inmune jugando además un importante soliun. La habilidad de neutrófilos para reducir el
papel en la inflamación y en la patogénesis de azul de nitrotetrasolium (NTB) es una medida de
muchas enfermedades. Su función en el control su actividad de NADPH oxidasa y su capacidad
de microorganismos es potenciada por actuar en para generar productos reactivos intermediarios de
interdependencia con algunos factores del sistema oxígeno. El O2- y otros productos del estallido
de complemento y anticuerpos opsonizantes. Los respiratorio tienen la capacidad de reducir el NTB
defectos intrínsecos de los neutrófilos que alteran a formazán, un precipitado negro azulado que se
su funcionamiento son, generalmente, de base determina espectrofotométricamente. Alternativa-
genética, como es el caso de la enfermedad mente, los neutrófilos se pueden fijar y examinar
granulomatosa crónica (ver capítulo 29). En este al microscopio, después de la incubación con NTB,
proceso se observa una ingestión normal, pero el permitiendo de esta manera determinar el
proceso de destrucción intracelular no ocurre. Esto porcentaje de células que contienen el colorante
es debido a la inactivación de la enzima NADPH reducido (formazan).
oxidasa, responsable de la síntesis de interme-
diarios reactivos del oxígeno. Por otro lado, la d) Generación de anión superóxido. La
deficiencia genética de mieloperoxidasa y glucosa generación de anión superóxido (O2-) puede ser
6 fosfato deshidrogenasa, es responsable por los evaluada utilizando tanto en células estimuladas
defectos en la capacidad de PMN en inducir la como no estimuladas, mediante la medición de la
muerte celular de los microorganismos. inhibición de la reducción de ferricitocromo c por
Los neutrófilos en su calidad de células superóxido dismutasa.
fagocíticas, son la principal población celular
involucrada en la respuesta inflamatoria aguda. e) Formación de peróxido de hidrógeno. La
Estas células pueden ser aisladas en gran número generación de peróxido de hidrógeno (H2O2) por
y pureza de la sangre del hombre y animales. neutrófilos se produce como consecuencia del
estímulo de membrana y puede medirse mediante el
a) Medición de la actividad fagocítica. La método basado en la oxidación del ácido
actividad fagocítica de neutrófilos puede medirse homovainillínico. Esta reacción es catalizada por
utilizando una variedad de microorganismos tales peroxidasa (HPR) y depende del H2O2 generado por
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la célula. Métodos fluorescentes de reciente medida en placas de 96 orificios, detectando los
introducción, permiten medir la producción de H2O2 eosinófilos asociados a célula por medio de la
usando el 10-acetil-3,7-dihidroxifenoxazima, el cual medición de la actividad de peroxidasa propia de
en presencia de HPR, reacciona con H2O2, generando los eosinófilos.
resorufina, compuesto que es altamente fluorescente
con emisión máxima a 563 nm. La lectura se realiza 4.3. Ensayos funcionales de monocitos y
en microplaca usando un espectrofluorómetro. macrófagos
4.2. Ensayos funcionales de eosinófilos Desde los trabajos pioneros de Ellie

Metchnikoff, los macrófagos han sido conside-
Los eosinófilos son granulocitos derivados rados como las células responsables de la
de la médula ósea y cuyos gránulos contienen regulación de la respuesta inmune. Los macrófagos
proteínas básicas que se tiñen con colorantes participan en procesos de recambio celular,
ácidos como la eosina. En personas sanas no incluyendo el remodelamiento tisular durante
alérgicas, estas células corresponden al 2-5% de embriogénesis, destrucción tisular y reparación de
los leucocitos sanguíneos (ver capítulo 3). Aunque los tejidos con posterioridad a injurias e
son capaces de fagocitar, su función está dada infecciones y renovación tisular que permite la
frente a ciertos agentes infecciosos incluyendo los eliminación de células senescentes o malignas. Los
helmintos. Además estas células juegan un papel macrófagos son células de central importancia en
significativo en la inflamación y la injuria celular la respuesta inmune. Una de sus características
seguida a las reacciones de hipersensibilidad distintivas que avala su papel central en la
retardada. La producción y activación de inmunidad es su presencia en la mayoría de los
eosinófilos está bajo el control de células T CD4+ tejidos de nuestro cuerpo. Entonces su principal
pertenecientes a la subpoblación Th2, responsables función es monitorear y regular los fluidos
por la producción de IL-5, que es el principal fac- circulantes y reaccionar frente a los cambios. Los
tor activador de eosinófilos. Después de su macrófagos participan tanto de las vías aferentes
activación, los eosinófilos aumentan de tamaño y como eferentes de la respuesta inmune. Sus
disminuyen su densidad. Eosinófilos activados son funciones son variadas e involucran pinocitosis,
potentes efectores de reacciones de ADCC y degradación de material ingerido, quimiotaxis,
producen una variedad de mediadores inflamato- actividad antimicrobiana, secreción de
rios incluyendo leucotrienio C4 (LTC4) y O2-. monoquinas y otros factores, procesamiento y
presentación de antígenos, cooperación con células
a) Generación de LTC4. El leucotrienio C4 es T y B y actividad citolítica.
un mediador derivado de ácido araquidónico que Los monocitos y los macrófagos son células
es producido por mastocitos, basófilos y que se originan en la médula y son programadas
eosinófilos. LTC4 y sus metabolitos derivados, para madurar y diferenciar de la célula
LTD4 y LTE4, son poderosos mediadores de hematopoyética germinal hasta ser liberada para
vasocontricción, jugando un papel central en la circular en la sangre periférica. La diferenciación
patogénesis del asma. La producción de LTC4 de monocitos a macrófagos ocurre en diferentes
por eosinófilos después de estimulación con varios tejidos, dependiendo de la localización tisular y
agentes (IL-5,GM-CSC, Zynosan, ionóforo del microambiente al que los monocitos son
A23187) puede medirse utilizando diferentes kits expuestos.
comerciales basados en el radioinmunoanálisis. Los monocitos circulantes y los macrófagos
tisulares desempeñan importantes funciones en la
b) Ensayo de anión superóxido. Al igual que defensa del huésped contra microorganismos
neutrófilos, los eosinófilos luego de su activación invasores y células tumorales. Por otro lado, la
pueden generar O2-. Éste puede medirse inhibiendo fagocitosis, degradación y muerte de microorga-
la reducción de ferricitocromo c por superóxido nismos permite a monocitos y macrófagos
dismutasa. participar en la presentación de antígenos, primer
y esencial paso en el montaje de la respuesta
c) Ensayo de adhesión de peroxidasa de inmune. De igual manera estas células pueden re-
eosinófilos. La adhesión de eosinófilos al colágeno sponder a un determinado antígeno secretando
o a células de endotelio vascular humano, es citoquinas (monoquinas) solubles, que permiten
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activar y reclutar diferentes tipos de células a) Producción de intermediarios del meta-
efectoras. La primera monoquina secretada frente bolismo oxidativo. Durante la fagocitosis y la
a un estímulo antigénico es interleucina 1 (IL-1), actividad citotóxica, los macrófagos son capaces
que inicia la respuesta inmune actuando sobre de producir varios intermediarios del metabolismo
células T CD4+ y CD8+, permitiendo la secreción del oxígeno. Durante las fases iniciales de la
de IL-2 y la expresión de receptores para IL-2, fagocitocis, los macrófagos muestran un aumento
que permite la proliferación de estas células. Otra en el consumo de oxígeno, cortocircuito de la
monoquina es IL-6, que posee capacidad para actividad de hexosa monofosfato y producción de
activar células NK, timocitos y linfocitos T. intermediarios de oxígeno, en un proceso conocido
Monocitos activados también producen el como estallido respiratorio. La generación de
factor estimulador del crecimiento de granulocitos radicales superóxido es catalizada por una NADPH
y macrófagos, el cual induce la maduración de oxidasa localizada en la membrana, siendo generado
monocitos y neutrófilos de la médula ósea y la por una apropiada estimulación de membrana. Esta
activación funcional de los monocitos circulantes. oxidasa transfiere electrones de NADPH citosólica
Monocitos estimulados por antígenos también al oxígeno extracelular, produciendo H2O2, el que
producen IL-8. El TNF sintetizado por monocitos es necesario para la muerte de los microorganismos
activados posee propiedades antitumorales pero invasores, pero al mismo tiempo causa inflamación
además es capaz de activar monocitos, granulo- y daño tisular. El estallido respiratorio no
citos y eosinófilos. No obstante monocitos y necesariamente depende de la fagocitosis pero
macrófagos no sólo producen monoquinas capaces permite caracterizar la actividad fagocítica. La
de estimular la respuesta inmune sino que además producción de O2-, es el paso inicial de la conversión
pueden producir factores inmunosupresores como de oxígeno a peróxido de hidrógeno y radicales
prostaglandina E2. Entonces el aislamiento de hidroxilo, los cuales son potentes metabolitos
monocitos de sangre periférica permite evaluar la microbicidas. Por ello la evaluación del nivel de
actividad microbicida y antitumoral de estas producción de O2-, es un importante indicador del
células así como su funcionalidad en producir potencial microbicida de los macrófagos. En este
monoquinas y prostaglandinas. aspecto, el método más apropiado para la medición
de O2- es evaluar la inhibición de la reducción de
Indicaciones clínicas. La evaluación in vitro de citocromo c Fe3+ a Fe2+, la que es dependiente de
la función de monocitos se recomienda en superóxido dismutasa.
pacientes en los cuales se sospecha deficiencias
en la inmunidad mediada por células. Deficiencia b)Estudio de la fagocitosis. Bajo el término de
en la función de monocitos se puede manifestar fagocitosis se describe la capacidad de células de
clínicamente como aumento en la frecuencia de tomar partículas sólidas, tales como eritrocitos,
infecciones las que podrían ser debidas a fallas diferentes microorganismos, materiales orgánicos
en la capacidad de matar gérmenes, en deficiencias e inorgánicos. Diferentes eventos celulares han sido
en el procesamiento y la presentación de antígenos asociados con la internalización y subsecuente
o en la producción de monoquinas. En estos casos, procesamiento del material ingerido. Cada fase de
el primer y más simple ensayo consiste en evaluar la fagocitosis es un proceso celular complejo, con
la capacidad antimicrobiana seguida de la características funcionales propias y diferentes
evaluación de la capacidad de secretar monoquinas requerimientos metabólicos donde participan
como TNF. En pacientes con cáncer, la evaluación factores intra y extracelulares. Por ello, la fagocitosis
de la capacidad tumoricida puede entregar valiosa representa uno de los parámetros funcionales usados
información acerca de las capacidades funcionales para caracterizar la función de los macrófagos.
in vivo de estas células. Por otro lado la medición Para obtener una evaluación más objetiva de
de la producción de PGE2 por monocitos permite este proceso biológico, es importante escoger de
conocer el nivel de actividad supresora de los manera cuidadosa la partícula a ser fagocitada.
monocitos. Ciertas enfermedades crónicas como Además de eritrocitos y varias cepas de bacterias,
cirrosis, tuberculosis, sarcoidosis, actinomicosis existen partículas comúnmente clasificadas como
y enfermedad de Crohn, pueden asociarse con inertes que son empleadas como reactivos para la
disfunción de monocitos por lo que el monitoreo cuantificación de la actividad fagocítica. Ellas son
de la función de estas células puede ser informativo sílica, metales carboxilados, microcristales y
acerca del estado de la enfermedad. partículas de látex. No obstante, la fagocitosis de
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bacterias es una de las técnicas tradicionalmente lisis de los monocitos. Por ello sólo incorporarán
usadas por más de una centuria. Prácticamente todas el isótopo aquellas levaduras que permanecen
las bacterias pueden ser utilizadas. Entonces cultivos viables, por lo que la radiactividad incorporada se
de monocitos se ponen en contacto con los compara con un control en que se cultivó idéntico
microorganismos por un período de tiempo. Luego, inóculo inicial pero en ausencia de monocitos.
los cultivos son lavados y se evalúa tanto el número También es posible evaluar la actividad
de bacterias intracelulares por cada 100 monocitos, microbicida mediante recuento microscópico del
como el porcentaje de monocitos que contienen número de células infectadas y el número de
bacterias intracelulares. El índice fagocítico que levaduras por cada 100 células infectadas.
muestra la relación entre el porcentaje de
macrófagos con a lo menos una bacteria y la media d) Evaluación de la actividad citostática frente
del número de bacterias por macrófagos positivos, a tumores. La habilidad de monocitos para
puede también ser considerado. Tradicionalmente, controlar el crecimiento tumoral, puede evaluarse
esta evaluación se ha realizado mediante mediante la incorporación de 3H- timidina en
microscopía óptica, aunque protocolos más células tumorales que sobreviven luego de la
recientes y algunos reactivos comerciales incubación con monocitos y que son comparadas
disponibles utilizan bacterias (Escherichia coli K12) con la incorporación de células tumorales que
marcadas con fluoresceína, lo que permite evaluar fueron incubadas en ausencia de macrófagos.
la fagocitosis por microscopía de fluorescencia,
citometría de flujo y espectrofluorometría. Resulta e) Evaluación de la actividad tumoricida. La
interesante destacar, que las metodologías evaluación de la actividad tumoricida es semejante
fluorescentes permiten diferenciar entre a la evaluación de la actividad citostática, con la
microorganismos localizados extracelularmente y diferencia de que las células tumorales son
los microrganismos intracelulares. Estos protocolos marcadas antes de la incubación con los
se basan en la observación de la viabilidad del macrófagos.
microorganismo al ser teñido con naranja de
acridina y luego observado en el rango ultravioleta f) Estudios de inducción de monoquinas. De
o con excitación azul. El microorganismo se manera general, cultivos de monocitos purificados
mostrará de color verde si estuviese viable o de son incubados por 24-48 h con algunos inductores
color rojo si estuviese muerto. de la producción de monoquinas como el LPS de
Otro posible abordaje, se basa en el uso de Escherichia coli. Luego los sobrenadantes son
microesferas fluorescentes y efectos de bloqueo, colectados mediante centrifugación y sometidos
que permite la fácil diferenciación entre las a evaluación o congelados inmediatamente. Tanto
partículas asociadas y aquellas interiorizadas. La ELISA como RIA pueden ser usados para la
técnica se basa en la propiedad de algunos detección de monoquinas. La principal desventaja
colorantes como el cristal violeta o el azul tripan de estos métodos es que también detectan
de apagar la fluorescencia de partículas fluores- monoquinas biológicamente inactivas. Por ello, los
centes libres o asociadas al monocito, mientras que métodos moleculares, principalmente aquellos
aquellas interiorizadas permanecen fluorescentes. basados en PCR, presentan grandes ventajas tanto
El fenómeno responsable por este bloqueo se llama en sensibilidad como en especificidad (ver punto
transferencia de energía de excitación. La 3.3.1 y capítulo 44).
transferencia ocurre cuando el espectro de
absorción del agente bloqueador se sobrepone al • Ensayo de IL-1. Para el ensayo de la
espectro de emisión del marcador fluorescente. actividad biológica de IL-1, sobrenadantes
de monocitos estimulados son usados para
c) Evaluación de la actividad microbicida. La estimular la proliferación dependiente de IL-
actividad microbicida y la fagocitosis puede 1 de una línea de células T (clon de células T
evaluarse incubando cultivos de monocitos con murinas). El ensayo utiliza IL-1α como
levaduras, como C. albicans, a diferentes control de la proliferación de las células T.
relaciones levadura : monocito (1:3; 1:10; 1:30). La presencia de esta monoquina puede
Luego de incubación a 37°C por 18 h, las levaduras ser identificada mediante ensayos de ELISA
son marcadas metabólicamente con 14C-glucosa, utilizando preparados comerciales, los cuales
adicionando el isótopo en agua, lo que permite la tienen sensibilidad en el rango de 20-50 pg/
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mL, sin reacciones cruzadas con otras unidades de TNF son calculadas en base a una
monoquinas y citoquinas. curva estándar. Considerando que tanto TNFα
como TNFβ (también llamada linfotoxina) son
• Ensayo de IL-6. Los ensayos biológicos detectados en este ensayo, la neutralización con
miden la habilidad de sobrenadantes de anticuerpos contra cada uno de éstos, es
cultivo de monocitos estimulados en inducir necesaria para conocer cuál monoquina está
la proliferación dependiente de IL-6 en una siendo detectada. No obstante sólo TNFα es
línea celular de plasmocitoma (por ejemplo sintetizado por monocitos, por lo que la
T1165 o B9). Diluciones seriadas de IL-6 detección de TNFβ sugiere que la preparación
recombinante son incluidas como control. De pudiese estar contaminada con linfocitos. Si no
igual manera, "kits" comerciales pueden ser fuese posible o pertinente marcar las células con
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utilizados para evaluar los niveles de IL-6. Cr, el ensayo podría realizarse tiñendo las
La sensibilidad de estos es de 3.5 pg/mL, de células al final de la incubación con azul tripan
proteína por ml, no presentando reacciones para así evaluar la viabilidad celular o teñir con
cruzadas con otras citoquinas. Estos ensayos cristal violeta que tiñe las células tumorales
son a lo menos tan sensibles como los ensayos residuales. Esta técnica es particularmente
biológicos con la ventaja de ser más rápidos apropiada cuando se usan como célula blanco
y la desventaja de su relativo alto costo. los fibroblastos murinos L929.
• Ensayo para GM-CSF. Los ensayos g) Ensayo de prostaglandina E2. La prosta-

biológicos de la actividad de factor glandina E2 es detectada por RIA. El sobrenadante
estimulador de colonias granulocito-monocito de monocitos estimulados es ajustado a pH 12,5
(GM-CSF), miden la habilidad de sobrena- con NaOH y luego es hervido, neutralizado y
dantes de cultivo de monocitos estimulados evaluado. Las concentraciones de PGE 2 son
en inducir la proliferación dependiente de calculadas en base a una curva de referencia.
GM-CSF en una línea celular de leucemia
humana (con frecuencia se usan los clones
Mo7e o TALL-101). Diluciones seriadas de 5. EVALUACIÓN DE LABORATORIO DEL
GM-CSF recombinante humano son PACIENTE INFECTADO CON EL VIRUS
utilizados como control. En este caso debe DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMA-
considerarse que las líneas tumorales NA: UN MODELO DE ESTUDIO DE LAS
utilizadas son respondedoras tanto a GM-CSF DEFICIENCIAS EN LA RESPUESTA
como a IL-3 por lo que una caracterización CELULAR
definitiva de la actividad de GM-CSF, se
realiza incubando los sobrenadantes de Frente a la sospecha inicial de encontrarse
monocitos esimulados con anticuerpos anti- frente a un paciente infectado por HIV, el
GM-CSF y anti-IL-3, antes de evaluar la diagnóstico de laboratorio se realiza mediante la
actividad de GM-CSF. De igual manera "kits" búsqueda de anticuerpos, utilizando ELISA. Las
comerciales de ELISA pueden ser utilizados. pruebas de “Western blot” y PCR se usan como
confirmatorias. Por ello, la evaluación de la
• Ensayo de TNF. Para el ensayo biológico de la respuesta inmune celular en estos pacientes, es de
actividad de TNF, se evalúa la capacidad de central importancia ya que permite monitorear el
sobrenadantes de cultivo de monocitos curso de la infección, evaluar el tratamiento y sus
estimulados, en lisar una línea celular de resultados poseen valor pronóstico (ver capítulo
fibrosarcoma murino, caracterizado por ser 30).
altamente sensible a TNF (por ejemplo WEHI
164-JD). En este caso las células del 5.1 Estudio fenotípico de linfocitos
fibrosarcoma son marcadas con 51Cr y luego
incubadas con diluciones seriadas del En base a lo anterior, el estudio inicial del
sobrenadante de cultivo de monocitos. Controles laboratorio debería incluir el análisis fenotípico
se realizan con células incubadas en ausencia mediante citometría de flujo, de las diferentes
de sobrenadantes. Diluciones seriadas de TNF subpoblaciones de linfocitos T, evaluando
recombinante son incluidas como control y las particularmente los marcadores CD3+, CD4+ y
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CD8+. Este examen se orienta particularmente a respuesta por LTc se manifiesta en períodos
conocer el porcentaje y recuento absoluto de LT tempranos de la infección, en personas en que a
CD4+, ya que éstos poseen una relación estricta pesar de estar infectadas por más de una década
con el estado de la infección. De acuerdo a la no presentan signos de enfermedad, o en
clasificación del Centro de Control de las trabajadoras sexuales y recién nacidos de padres
Enfermedades Infecciosas de los Estados Unidos infectados que no contrajeron la infección Aunque
(CDC), en relación a los niveles de células T en pacientes infectados con HIV los niveles de
CD4+, se pueden clasificar a los pacientes en tres CD8+ son cercanos a los niveles normales, la
categorías: a) Recuentos mayores 500 células/µL, habilidad para generar respuesta LTc, la cual
b) Recuentos entre 200-499 células/µL, c) requiere IL-2, está disminuida, ya que se observa
Recuentos menores a 200 células/µL. una reducción en los niveles de IL-2. Por ello,
No obstante, el avance en las técnicas de estudios recientes sugieren la evaluación de la
citometría de flujo, ha permitido proponer nuevos respuesta citotóxica de células T de pacientes
marcadores con valor predictivo. Entre éstos se infectados, frente a células blanco infectadas con
incluye evaluar la prevalencia e intensidad del HIV o que expresan proteínas virales. En estos
marcador CD38 de células T CD8+, el porcentaje casos se sugiere colectar CMSP y someterlas in
de células CD4+ que muestran pérdida de vitro a estimulación previa con diferentes
marcadores CD26 y CD28 y el porcentaje de antígenos de HIV tales como nef, gag, po1, vif y
células CD4+ que expresan el marcador CD95. env. Esta estimulación previa parece ser
La intensidad del marcador CD38 en linfocitos indispensable, ya que permite la estimulación
CD3/CD8+ se ha podido correlacionar de manera específica y la amplificación de pequeñas
estrecha a la progresión futura de la enfermedad, poblaciones precursoras de células T citotóxicas,
de manera más absoluta que el recuento único de que pudieran encontrarse en la sangre periférica
linfocitos CD4+. Pruebas adicionales podrían ser en el momento de la recolección de la muestra.
realizadas en estudios clínicos orientados a evaluar Por encontrarse en bajo número, de no mediar una
efectos terapéuticos de una determinada droga o estimulación previa, la actividad citotóxica de estas
el efecto protector de una eventual vacuna. En células no sería detectada en ensayos de
estos casos podría ser interesante un estudio citotoxicidad convencionales.
fenotípico extensivo a otras poblaciones celulares, De igual manera pueden ser importantes, la
incluyendo marcadores para monocitos, células evaluación del efecto citotóxico de células NK.
NK, células B y marcadores de la activación de Aunque el porcentaje de NK en pacientes
células T, tales como HLA-DR o el monitoreo de infectados con HIV puede permanecer normal, el
la expresión de receptor para IL-2. número absoluto de algunas subpoblaciones de NK
pueden estar disminuidas, por lo que la función
5.2. Estudio de la respuesta proliferativa NK se deteriora según progresa la infección.
Entonces, la actividad NK puede ser detectada en
Una de las alteraciones más tempranas del CMSP, mediante métodos que miden la liberación
paciente infectado con HIV, es una marcada de 51Cr por parte de células blanco.
reducción en la habilidad de los linfocitos T para Las reacciones de ADCC, específicas para
proliferar in vitro, en respuesta a mitógenos, HIV, pueden también ser evaluadas, ya que la
antígenos solubles y aloantígenos. Es por ello actividad ADCC, mediada por células NK, declina
importante la evaluación de la respuesta conforme progresa la enfermedad. Dos tipos de
proliferativa de los linfocitos de pacientes ADCC pueden utilizarse en la evaluación de
infectados con HIV. De esta manera, el estudio de pacientes infectados con HIV. La primera, es
la respuesta proliferativa de células T a mitógenos, denominada ADCC clásica o indirecta, en la cual
antígenos solubles y aloantígenos puede ser de se usa suero de pacientes infectados y linfocitos de
gran valor. dadores normales. La lisis de las células infectadas
es evaluada de mediante la liberación de 51Cr. Por
5.3. Estudio de la respuesta citotóxica otro lado, la ADCC directa, usa células NK frescas,
aisladas de pacientes infectados, las que son
Varias evidencias sugieren que LTc podrían cultivadas con anticuerpos citofílicos anti HIV y
ser importantes en la defensa frente a HIV. Éstas luego incubadas con células blanco infectadas con
se basan en la observación que una fuerte HIV o recubiertas con antígenos del virus.
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5.4. Evaluación de los niveles de citoquinas y LECTURAS SUGERIDAS
subpoblaciones de linfocitos T
Abbas A. K., Murphy, K., M, Sher, A., “Func-
Varias observaciones sugieren, que en la tional diversity of helper T lymphocytes”, Nature
infección por HIV, ocurre una alteración en el 383:787-793, 1996.
balance de la expresión de citoquinas y sus
receptores, lo que podría contribuir a la Abbas A. K., Lichtman, A.H., Pober, J.S., “Effec-
patogénesis de la infección. Elevados niveles de tor mechanisms of cell-mediated immunity”.
IL-1, IL-6, GM-CSF, TNFα y TNFβ se han Cellular and Molecular Immunology, chapter
reportado en suero y líquido cefalorraquídeo en 13, W.B.Saunders Company, 2000.
pacientes con HIV. De igual manera, según
progresa el síndrome, se observa una disminución Castillo D., Vega, P., Reid, M., Metodología
en los niveles de IL-2 y IFNγ, a la vez que inmunidad celular, Manual de Procedimientos
aumentan IL-4 e IL-10. Esta observación sugiere Técnicos de Laboratorio Clínico, Inst. Salud
que durante el transcurso de la enfermedad, la Pública de Chile, 1994, pp. 26-42.
actividad de la subpoblación Th1 disminuye
mientras que la subpoblación Th2 aumenta. Siendo Fernández-Botran, R. and Vetvicka, V., Advanced
que Th1 están asociados a las RHR y a las Methods in Cellular Immunology, chapters 2,
reacciones de citotoxicidad mientras que Th2 se 3, 4, 5, 8, 9, 10, 11, CRC Press, 2000.
asocia a la producción de anticuerpos, este cambio
en el predominio de una determinada subpoblación Hagmann, M., “Doing Immunology on a Chip”,
podría contribuir a la progresión de la enfermedad. Science 290: 82-83, 2000.
La disminución en la subpoblación Th1 se puede
asociar al hecho que en pacientes con SIDA, se Kuby, J., Immunology, Chap 3, 10, 11, 12, 13,
observa una significativa reducción en la 15, 21, 23,W.H. Freeman and Company, New
reactividad de las pruebas de sensibilidad cutánea York, 1994.
("skin-test"). De esta manera, la determinación de
citoquinas y sus receptores mediante métodos Michel, N., Kim. J.H., HIV Protocols. Methods
moleculares parece ser de central importancia en in Molecular Medicine, Humana Press, 1999.
la evaluación de la progresión del síndrome.
Los procedimientos de laboratorio propues- Rose, N.R., De Macario, E.C., Fahey, J.L., Fried-
tos en la evaluación de pacientes con HIV se man, H., Penn, G.M., Manual of Clinical Labo-
resumen en la figura 41-10. ratory Immunology, chapters 22-24, 30, 31, 33-
36, 41, 42, 59, 64-66, 115, 1992.
Figura 41-10. Flujograma de la evaluación inmunológica del paciente infectado con HIV.
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Capítulo 42
LABORATORIO DE HISTOCOMPATIBILIDAD
Y TRASPLANTE DE ÓRGANOS
Susana Elgueta M., Alejandra Arenas C. y Cristina Navarrete
1. Introducción
2. Nomenclatura HLA
2.1. Genética
3. Tipificación HLA
3.1. Técnica serológica
3.2. Técnica celular
3.3. Técnica molecular
4. Anticuerpos HLA
4.1. Anticuerpos reactivos con panel
4.2. Crossmatch
5. Requerimientos de
histocompatibilidad para trasplante
6. Otras aplicaciones de la tipificación
HLA
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RESUMEN
El Complejo Principal de Histocompatibilidad, HLA en el hombre, tiene un rol fundamen-

tal en la regulación de la respuesta inmune. El gran polimorfismo de este sistema asegura la
sobrevida de la especie, al permitir la presentación de péptidos inmunogénicos derivados de
distintos agentes patógenos a los linfocitos T.
Este polimorfismo es reconocido e identificado en el laboratorio clínico a través de la lla-
mada tipificación HLA, la cual ha tenido una evolución importante, desde la tipificación serológica
inicial, a las actuales técnicas moleculares que permiten el reconocimiento de las variantes alélicas.
Las técnicas, cada día más sensibles, de identificación de anticuerpos anti-HLA del recep-
tor contra los antígenos del donante, en especial la citometría de flujo, han permitido en el área de
trasplantes, evitar rechazos hiperagudos que ponen en riesgo la vida del paciente o sirven como
indicador de factor de riesgo para la pérdida del injerto
Sin embargo, el uso clínico del conocimiento sobre el MHC es aún limitado a sólo algunas
áreas de la medicina, pero en la medida que se siga profundizando en el conocimiento y com-
prensión del rol de estas moléculas del MHC y junto al desarrollo tecnológico, no cabe duda que
se ampliarán las fronteras de su aplicación al paciente.
1. INTRODUCCIÓN el tejido o célula trasplantada, o indirecto a través

de péptidos antigénicos derivados de estas molé-
Los antígenos del Complejo Principal de culas de HLA ajenas presente en estos tejidos o
Histocompatibilidad (MHC), llamado “Human células y presentados por moléculas HLA propias
Leucocyte Antigen” (HLA) en el hombre, es des- del receptor. Estos mecanismos se denominan
pués de los grupos sanguíneos clásicos ABO, la alorreconocimiento directo e indirecto, respecti-
segunda barrera más importante para el éxito del vamente.
trasplante de órganos, células y tejidos. Es así como estas moléculas participan en la
La compatibilidad de los grupos sanguíneos fase de inducción y como blanco de la respuesta
ABO es esencial para el éxito de los trasplantes inmune, en la cooperación entre células inmunes,
de órganos sólidos y la identidad proporciona en la selección del repertorio de linfocitos T y en
mejores resultados en los trasplantes hepáticos y la inducción de tolerancia.
de células hematopoyéticas. En el capítulo 8 se explicó el sistema HLA
El rol fundamental de las moléculas de HLA en el hombre y se indicó sus características y los
de clase I y II es la de unir péptidos antigénicos, y loci correspondientes a las moléculas de clase I y
presentarlos a los linfocitos T. Los receptores de II. Sin embargo, debemos insistir en su organiza-
antígenos de los linfocitos T (TCR, T cell recep- ción génica ya que es fundamental para compren-
tor) sólo reconocen antígenos presentados como der la nomenclatura actualmente en uso, su
fragmentos peptídicos unidos a las moléculas HLA polimorfismo y las técnicas de su determinación.
propias. Sin embargo, las moléculas de HLA no Una de las características importante de los
sólo pueden presentar péptidos antigénicos deri- genes que codifican las moléculas clásicas de HLA
vados de antígenos nominales al sistema inmune clase I (HLA-A,-B,-C) o clase II (HLA-DR,-DQ,–
como por ejemplo de virus o bacterias, sino que DP) es su alto nivel de polimorfismo, representa-
ellas mismas pueden ser reconocidas como do por la gran cantidad de alelos presente para cada
antígenos por los receptores de las células T. Este uno de los loci de clase I y II.
reconocimiento puede ser directo, vale decir de la En las moléculas clásicas de clase I (HLA-
molécula HLA incompatible o ajena presente en A,-B y -C) el polimorfismo radica en la cadena
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Figura 42-1. Representación esquemática del sistema HLA
pesada o alfa, y el número de alelos descritos para riando entre un 50% y 65%. En las moléculas DR
el locus HLA-A es de 209, para HLA-B es de 414 el polimorfismo radica en la cadena beta siendo la
y para HLAC es de 101. La cadena liviana llama- cadena alfa esencialmente idéntica. Se describen
da Beta 2 microglobulina, asociada a las cadenas de 9 a 18 sustituciones de aminoácidos entre los
alfa es constante y está codificada por un gen fue- diferentes alelos, en las llamadas zonas de
ra de la región del HLA. hipervariabilidad correspondientes a los
La determinación de la secuencia nucleotí- aminoácidos 9-13, 26-33 y 67-74. Sin embargo,
dica de los genes clásicos de clase I (HLA-A,-B en las moléculas DQ y DP el polimorfismo está
y –C) demostró que los alelos o variantes difieren presente en ambas cadenas alfa y beta. Se han des-
entre sí en sólo unos pocos aminoácidos, presen- crito 21 alelos DQA1 y 45 alelos en DQB1.
tando una homología global de 75% a 99%. La Similarmente, se han descrito 19 alelos en la ca-
mayor variabilidad la presentan los dominios alfa dena DP alfa1 y 93 en la DP beta1.
1 y alfa 2, con diferencias de 7 a 15 residuos de La subregión HLA-DR es la más compleja
los 90 que posee cada dominio, mientras que el ya que el número de moléculas expresadas varía
dominio alfa 3 que interactúa con la Beta 2 dependiendo del haplotipo. Así, el gen DRB1 de-
microglobulina es el más conservado. Existen termina los antígenos HLA-DR1 a DR18, el gen
epítopos comunes a varias moléculas clase I como DRB3 determina el antígeno HLA-DR52, el gen
los supertípicos Bw4 y Bw6, y donde se demostró DRB4 codifica para HLA-DR53 y el DRB5 para
que los aminoácidos en las posiciones 79, 80 y 83 HLA-DR51. Los genes DRB2,6,7,8 y 9 son
son críticos en la definición de estas especifici- pseudogenes.
dades. . Los dominios alfa 1 y 2 de la cadena pesada
A diferencia de los productos de clase I, la de las moléculas clase I y los dominios alfa 1 y
homología entre las cadenas alfa y beta de las di- beta 1 de las moléculas clase II forman una hendi-
ferentes moléculas de clase II es moderada, va- dura o “bolsillo” que une el péptido antigénico y
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Figura 42-2. Representación esquemática de la Región HLA-DR.
que corresponde a la estructura de una alfa hélice en las reuniones internacionales de trabajo llamadas
con una base de hoja beta plegada. Los residuos workshop, y en aquellos alelos en los que no existe
polimórficos, es decir aquellos aminoácidos que consenso se agrega una w que precede al número,
varían entre diferentes formas alélicas, son locali- como por ejemplo HLA-Bw 70. En el caso de los
zados en los lados de la alfa hélice del "bolsillo" o alelos del locus C siempre se coloca esta w para di-
en la hoja beta que forma el piso de este "bolsi- ferenciarlos de los componentes del complemento.
llo". El polimorfismo entre clase I y II sirve para La identificación de nuevos alelos por técni-
crear variación en la superficie química del "bol- cas moleculares dejó en claro que la nomenclatu-
sillo" que une el péptido. Otros residuos ra serológica no era suficiente para dar cuenta de
polimórficos de la molécula MHC contactan con todas las especificidades detectadas, de tal forma
el receptor para el antígeno del linfocito T. que el Comité de Nomenclatura de la OMS acor-
El polimorfismo de MHC clase I y II determi- dó designar la letra del gen seguido de un asteris-
na la superficie química del "bolsillo" y es el princi- co, luego la especificidad serológica que corres-
pal determinante de la especificidad y afinidad de la ponde a los dos primeros números y luego dos o
unión del péptido y el reconocimiento por células T. más números que corresponden a la especificidad
molecular. Por ej.:HLA-B*2701 se refiere a la
primera variante descrita para HLA-B27. La no-
2. NOMENCLATURA HLA menclatura incorporando el gen (*) indica que la
designación se ha hecho por métodos moleculares.
Históricamente los antígenos HLA se denomi- En las tablas 42-1 y 42-2 se indica algunos
naron con un número que sigue a la identificación ejemplos de designación de alelos HLA clase I
del locus con una letra. Ej.: HLA-A1 es el alelo lla- (HLA-A y B) y II (HLA-DR y DQ), señalándose
mado 1 del locus A del sistema HLA, HLA-A2 es el en cada caso la especificidad serológica, y en el
alelo 2 del locus A, etc. Esta designación se acordó caso de los HLA clase II la especificidad HLA-D
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Tabla 42- 1. Ejemplos de designación de alelos HLA.
Alelo HLA Especificidad HLA Equivalente previo
A*0101 A1 -
A*0102 A1 -
A*0201 A2 A2.1
A*0202 A2 A2.2F
A*0203 A203 A2.3
A*2301 A23(9) -
A*2402 A24(9) -
etc
B*0702 B7 B7.2
B*0703 B703 BPOT
B*0704 B7 B7E
B*1401 B64(14) -
B*1402 B65(14) -
B*1501 B62(15) -
B*1502 B75(15) -
Tabla 42-2. Ejemplos de designación de alelos DR.
Alelo HLA Especificidad Especificidad HLA-D Equivalente

serológica asociada previo
DRA*0101 - - DRα
DRA*0102 - - DRH
DRB1* 0101 DR 1 Dw1 -

DRB1* 0102 DR 1 Dw20 DR1-NASC
DRB1* 0103 DR103 Dw"BON" DR1 CETUS
DRB1* 0104 DR1 - DRB1*01New
DRB3* 0101 DR52 Dw24 DR3III,
DQA1*0101 - Dw1 DQA 1.1, 1.9

DQA1*01021 Dw2, w21, w19 DQA 1.2, 1.19
DQA1*0201 Dw7, w11 DQA 2, 3.7
2.1. Genética de los antígenos HLA cada locus. En la práctica diaria del laboratorio
encontraremos que los individuos heterocigotos
Es importante recordar que el sistema HLA presentan 2 antígenos HLA-A, 2 antígenos HLA-
es un sistema genético codominante, es decir se B, 2 HLA-C, 2 HLA-DR, 2 HLA-DQ. Otros
expresan tanto los genes heredados de la madre antígenos de clase II, como los codificados por el
como del padre y que el alto grado de polimor- locus DP, son más difíciles de determinar ya que
fismo hace poco frecuente la existencia de indivi- no existe serología disponible y sólo son detecta-
duos homocigotos. dos con técnicas celulares o de DNA.
Por lo tanto al determinar (o tipificar) en el Otro aspecto importante del sistema HLA, es
laboratorio las moléculas o antígenos HLA encon- la existencia de alelos en diferentes loci HLA cuya
traremos la expresión de 2 moléculas distintas para frecuencia de combinación es mayor a la espera-
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da por la frecuencia génica individual de cada uno de conejo se produce la muerte celular en aque-
de ellos, esto es lo que se denomina desequilibrio llos pocillos en los que se produce reacción
de ligamiento (ejemplo A1, B8, DR17) antígeno-anticuerpo. La reacción se evidencia por
Este patrón de segregación ha permitido el tinción con colorantes vitales o con fluorocromos
establecimiento de haplotipos, algunos de los cua- y se visualiza generalmente en microscopio de fase
les son característicos de un tipo de población hu- invertida o de fluorescencia.
mana, en cambio otros se encuentran presentes en
todos los variados grupos étnicos.
El tipo de herencia mendeliana y la expre-
sión codominante determina que entre hermanos
exista un 50% de probabilidad de ser semiidénticos
en estos antígenos HLA, es decir, compartir un
haplotipo (haplotipo son los genes heredados en
un mismo cromosoma), un 25% de probabilidad
de ser idéntico (compartir los 2 haplotipos), y un
25% de probabilidad de no compartir haplotipos.
Sin embargo, la determinación de haplotipos y
genotipos sólo puede ser hecha por estudios fami-
liares. La probabilidad de posibles haplotipos en
individuos no relacionados, debe ser realizada en
base a la frecuencia da haplotipos para el grupo
étnico al que pertenece el individuo.
Los fenotipos y genotipos deben ser expre-
sados de acuerdo a las recomendaciones de la
O.M.S., como en los siguientes ejemplos: Figura 42-3. Representación esquemática de la técnica de
microlinfocitotoxicidad dependiente de complemento.
Fenotipo: HLA-A2,30; B7 (Bw6), 44 (Bw4); Cw5;
DR1,4; DQ5,7
Genotipo: HLA-A2, B44(Bw4), Cw5, DR1, DQ5
/ A30, B7(Bw6), Cwx, DR4, DQ7. Es importante recalcar algunas característi-
cas de esta técnica que son las grandes limitantes:
Los antígenos indicados entre paréntesis co- - Requiere de células con viabilidad mayor al
rresponden a antígenos públicos o supertípicos, 90% y alta pureza
presentes en varios alelos. - Es difícil obtener antisueros monoespecíficos
contra determinadas especificidades HLA y
más aún contra subtipos.
3. IDENTIFICACIÓN DE LOS ANTÍGENOS - Reproducibilidad baja entre baterias comercia-
HLA les
- Los antígenos HLA así determinados presen-
Las técnicas utilizadas en la tipificación HLA tan reacción cruzada entre ellos, por lo que es
son de tres tipos, básicamente: Técnica serológica, aconsejable disponer de dos o más sueros de
Técnica celular y Técnica de biología molecular. distinta procedencia pero con la misma espe-
cificidad para asegurar la identificación del
3.1 Técnica serológica. la técnica de antígeno HLA.
microlinfocitotoxicidad dependiente de comple- - El tipo celular en el que se determinarán los
mento, desarrollada por Terasaki fue la técnica antígenos HLA deben expresar dichos
estándar para tipificación HLA durante muchos antígenos. Es así como para la tipificación de
años. La técnica serológica permitió la definición moléculas clase II (HLA-DR y DQ) se utiliza
de los antígenos HLA presentes sobre la superfi- preferencialmente linfocitos B los que deben
cie de las células. En esta técnica, sueros de espe- ser aislados de los linfocitos totales, ya que
cificidad conocida (de origen policlonal o representan sólo un 15 a 20% de ellos. Para
monoclonal) se enfrentan con las células que se esto se utiliza separación por columnas de lana
quieren tipificar, y en presencia de complemento nailon o perlas magnéticas. Estas últimas aun-
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que de mayor costo, dan mayor pureza a la 3.3. Técnicas de biología molecular. Al igual que
separación celular. La tipificación de molécu- en otros campos, las técnicas moleculares han
las clase I (HLA-A,B y C) es más simple ya revolucionado la tipificación HLA. El extremado
que se puede realizar en linfocitos totales. polimorfismo de los genes del MHC y la gran
homología entre las secuencias, se han converti-
Algunos antígenos muestran reactividad cru- do en un desafío importante para los biólogos
zada entre ellos, lo que está dado por el hecho que moleculares. En los últimos años, múltiples téc-
diferentes determinantes antigénicos o epítopos nicas que requieren de DNA se han desarrollado
son compartidos entre diferentes especificidades, con el fin de ser aplicadas en el laboratorio de
esto debe ser considerado en el momento de la Histocompatibilidad, de acuerdo a la urgencia clí-
interpretación de la tipificación serológica nica de los resultados, al número de muestras, sen-
Determinantes antigénicos compartidos por sibilidad de las determinaciones y equipamiento
muchos antígenos HLA se les denominó epítopos de cada laboratorio.
públicos (ejemplo: Bw4 presente en B51, B52, Los métodos moleculares ofrecen mayor flexi-
B44, B49 etc., Bw6 presente en B35, B45, B50 bilidad en la resolución, reproducibilidad y exacti-
etc). Existen además epítopos compartidos por un tud comparada con la serología tradicional. Las téc-
grupo de antígenos y éstos son los llamados CREG nicas basadas en la PCR (reacción en cadena de la
(“cross reactive group”), por ejemplo el grupo de polimerasa) son las más utilizadas para la tipificación
los antígenos B5, B35, B51, B52, B53 HLA. Éstas pueden ser clasificadas de acuerdo a la
metodología que utilizan para detectar los alelos:
3.2 Técnicas celulares. Estas técnicas permitie-
ron en los primeros años determinar los antígenos Técnicas de hibridización y sondas:
de clase II DR y DP, para los cuales no se dispo- PCR-SSO (oligonucleótidos de secuencia es-
nía de serología. Estos antígenos se denominaron pecífica)
HLA-Dw y hoy se sabe que las especificidades de PCR-Oligocaptura en sándwich
los antígenos Dw no tienen correlación exacta con PCR- Oligocaptura de fase dual
los antígenos detectados por serología o por bio-
logía molecular. La identificación de estos epítopos Técnicas basadas en electroforesis
que estimulan el cultivo mixto linfocitario y que PCR-SSP (secuencias de partidores especí-
se identifican como alelos Dw se realiza con un ficos)
panel de células homocigotas previamente carac- PCR-RFLP (polimorfismo de largos fragmen-
terizadas para cada uno de los alelos Dw conoci- tos de restricción)
dos. Estas células irradiadas, se usan para estimu- PCR-SBT (tipificación basada en la secuencia)
lar la proliferación de los linfocitos a tipificar, los
que responderán ante alelos diferentes y no res- Técnicas de análisis de conformación de DNA
ponderán ante alelos idénticos. PCR-SSPC (polimorfismo conformacional de
Los alelos HLA-DP se identifican por un hebra simple)
cultivo mixto secundario de linfocitos, ya que son PCR-HA (análisis de heterodúplex)
débiles estimulantes en cultivos primarios. Se debe PCR-UGH (análisis de heterodúplex con un
disponer de un panel de linfocitos previamente generador de heterodúplex universal).
estimulados, los que responderán al enfrentarse a PCR-RSCA (análisis conformacional mediado
las células que presenten el mismo alelo HLA-DP por hebras de referencias)
que las estimuló primariamente. En este caso la
reactividad celular sí se correlaciona con el Las más utilizadas, a nivel de laboratorio clí-
polimorfismo de las moléculas DP. nico, son las técnicas PCR-SSP y PCR-SSO, ya que
Como es obvio estas técnicas son más com- son capaces de entregar información básica como
plejas que las serológicas por lo que su uso está la serología. Virtualmente las mayores ventajas que
limitado a sólo algunos laboratorios con una ade- presenta la tipificación basada en PCR son la flexi-
cuada infraestructura. Con la introducción rutina- bilidad de la resolución que depende del número
ria de las técnicas moleculares para la definición de partidores o sondas que utilice, lo que permite
de los antígenos de clase I y II , estas técnicas ce- tener pruebas de baja resolución a alta resolución y
lulares han quedado prácticamente obsoletas. la consistencia en la definición, ya que siempre se
usan los mismos reactivos (primers o sondas).
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Tabla 42-3. Comparación de técnica PCR-SSP Y PCR-SSO
Característica PCR-SSP PCR-SSO
Partidores Multiples Único

Sondas de oligonucleótidos No Mútiples
Visualización Electroforesis Quimioluminiscente
Estándares internos de PCR Sí No
Resolución Baja y mediana Mediana y alta
Una ventaja del PCR-SSP sobre el PCR-SSO polimorfismo ha complicado la aplicación de mé-
es que el PCR-SSP detecta polimorfismo unido a todos basados en DNA que permite una identifi-
un cromosoma individual (cis), mientras que PCR- cación de las secuencias para los tipos de genes
SSO detecta polimorfismo del DNA de ambos HLA. Una alternativa de aproximación de este
cromosomas (cis y trans). Así el PCR-SSP tiene problema es el uso del análisis conformacional del
un mayor poder para discriminar entre DNA sobre la base de electroforesis en gel de
heterocigocidad que involucre dos alelos relacio- poliacrilamida no denaturante. Se utiliza princi-
nados fuertemente. palmente para identificar mutaciones.
Un DNA de buena calidad es imprescindible En resumen, podemos decir que las grandes
para la PCR-SSP y PCR-SSO. Sangre con citrato ventajas de la biología molecular sobre la
o EDTA como anticoagulante es preferible a la serología, dada por su sensibilidad y especifici-
heparina que inhibe la PCR y específicamente la dad, es la identificación de los verdaderos
PCR-SSP. homocigotos, la asignación certera de los alelos y
La desventaja que se atribuye a trabajar con la identificación de subtipos, además del uso de
métodos moleculares basados en secuencias co- pequeños volúmenes de muestra para la obtención
nocidas es que variantes alélicas nuevas pudieran de DNA, lo que es muy ventajoso en muestras
no ser detectadas o discriminadas de alelos cono- pediátricas.
cidos. Para eliminar esta posible falla, tanto para
SSO y SSP, se utilizan un gran número de
partidores o sondas cuyas combinaciones pudie- 4. ANTICUERPOS HLA
ran, potencialmente, detectar estos nuevos alelos
y aumentar la resolución del sistema de Las principales vias de sensibilización a los
tipificación. antígenos HLA son los embarazos, transfusiones
Métodos utilizados a nivel de investigación: y trasplantes, lo que se traduce en la presencia de
anticuerpos HLA. Esta sensibilización se pesqui-
Tipificación basada en la secuencia sa en el laboratorio a través de la determinación
del PRA (“Panel reactive antibodies”). En trasplan-
Se realiza un secuenciamiento a partir de produc- tes no sólo es importante definir el grado de sen-
to de PCR alelo específico y su aplicación está sibilización, sino también determinar la especifi-
relacionada con laboratorios de referencia por su cidad de dichos anticuerpos.
capacidad para detectar alelos nuevos y con labo-
ratorios de tipificación para trasplante alogeneico 4.1. Anticuerpos reactivos con panel
de médula ósea.
La técnica tradicional para determinar el gra-
Análisis conformacional del DNA do de sensibilización a antígenos HLA consiste
en enfrentar el suero del paciente con un panel de
La comparación de secuencias alélicas ha per- linfocitos, en base a la técnica de microlinfoci-
mitido comprender que cada alelo individual con- totoxicidad dependiente de complemento. Se de-
tiene una única combinación de secuencias, cada fine el porcentaje de células con las que dicho sue-
una de las cuales tiene su forma. Esta forma de ro reacciona, lo que se traduce en porcentaje de
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Sin título-2 693 5/26/06, 10:26 AM

PRA. Por ejemplo, si el panel de células está cons- humana unido con enzima, la que convierte un
tituido por 40 células y el suero reacciona con 20, sustrato en producto coloreado, cuando se ha pro-
ese suero tiene un 50% de PRA, si reacciona con ducido la reacción antígeno-anticuerpo inicial.
las 40 células tiene un 100% de PRA y si no reac- Más nueva es la aparición del uso de la
ciona con ninguna tiene 0% de PRA. citometría de flujo en la determinación de PRA, de
Es importante en la constitución del panel alta sensibilidad y con capacidad para detectar
celular considerar la distribución normal de los anticuerpos no fijadores de complemento. Esta de-
antígenos HLA de la población, de tal forma que terminación se realiza incubando partículas unidas
estén representados todos estos antígenos en el con antígenos HLA con el suero del paciente, se-
panel. Este panel puede ser formado por linfocitos guido por la adición de una anti-inmunoglobulina
totales o linfocitos T que identificará principal- humana marcada con un fluorocromo, y analizán-
mente anticuerpos anti-HLA clase I, y también se dose las muestras en el citómetro de flujo.
puede tener panel de linfocitos B y de células de Estas tres técnicas también pueden ser utiliza-
leucemia linfocítica crónica (LLC). Estas células das en la determinación de especificidad de estos
se mantienen criopreservadas en nitrógeno líqui- anticuerpos anti-HLA. La identificación de la es-
do, donde mantienen su viabilidad por muchos pecificidad puede ser bastante compleja y de alto
años. También es posible determinar el PRA uti- costo, pero es muy útil para la interpretación de las
lizando células frescas al azar o preferentemente pruebas cruzadas entre donante y receptor
de individuos previamente tipificados (con (crossmatch, XM). La determinación de la especi-
antígenos HLA conocidos) ficidad anti-HLA muchas veces requiere contar con
En esta reactividad hay que considerar la po- un software de análisis que permita identificar es-
sibilidad de la presencia de autoanticuerpos, los tas especificidades en el suero de los pacientes.
que darán altos porcentajes de PRA, falsos. Las Se recomienda que la sensibilidad del test es-
células de LLC, expresan antígenos HLA clase I cogido para determinar los anticuerpos -HLA sea
y II, pero prácticamente no expresan similar a la de la técnica que se utilice en las prue-
autoantígenos, por lo que son útiles en la interpre- bas cruzadas o crossmatch.
tación de esta reactividad. Los autoanticuerpos
se identifican por la presencia de un 4.2 Crossmatch
autocrossmatch positivo.
Desde hace algunos años han aparecido nue- El objetivo de esta prueba es pesquisar la pre-
vas técnicas para la determinación de anticuerpos sencia de anticuerpos preformados contra
anti-HLA, entre éstas destaca el uso de ELISA co- antígenos HLA presentes en el potencial donante.
merciales, algunos de los cuales son útiles como Esta prueba consiste en enfrentar el suero del pa-
screening para determinar presencia de anticuerpos ciente con las células del donante potencial, lo que
anti-clase I y II; detectan anticuerpos no fijadores se denomina alocrossmatch. La forma clásica uti-
de complemento. Estos kits comerciales de liza la técnica de microlinfocitotoxicidad depen-
ELISA, utilizan antígenos HLA clase I y II diente de complemento, con variantes que aumen-
solubilizados y unidos a las microplacas y el re- tan la sensibilidad de la prueba, como lavados, au-
velado utiliza un conjugado anti IgG o anti IgM mento del tiempo de incubación, uso de anti-
Tabla 42-4 Expresión de moléculas clase I y II en distintas poblaciones celulares.
Célula MHC-I MHC-II autoAntígeno

no MHC
Linfocitos T + sólo activados +

Linfocitos B + + +
LLC* + + -
LLC* : leucemia linfocítica crónica

+ : molécula presente - : molécula ausente
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inmunoglobulina humana (AHG, “anti human el trasplante de los distintos órganos.
globulin”). Las células utilizadas como blancos El trasplante de células troncales hematopo-
son preferencialmente linfocitos totales o linfocitos yéticas es uno de los más exigentes en cuanto a
T y linfocitos B, a distintas temperaturas de compatibilidad HLA puesto que el desarrollo de
incubación. La clase de anticuerpo involucrado en la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD,
la reacción se puede definir utilizando algunos “graft versus host disease”), es uno de los riesgos
reductores como el dithiotreitol (DTT), el cual más altos que acompañan a este tipo de tratamiento
reduce los puentes disulfuros intermoleculares de y está directamente ligado al grado de compatibi-
la inmunoglobulina M sin inactivar la inmuno- lidad de los antígenos HLA entre el paciente y el
globulina G. donante. De tal modo que la mayoría de los labo-
La presencia de autoanticuerpos se pesquisa ratorios que apoyan a programas de trasplante de
a través de un autocrossmatch, en el que se en- células hematopoyéticas han adoptado la
frenta suero del receptor con sus propias células. tipificación por DNA. La aplicación de alta reso-
Se ha definido que los autoanticuerpos no son lución para alelos HLA han indicado que cerca de
nocivos para los trasplantes de órganos y son ge- un 20% de los trasplantes que inicialmente no te-
neralmente de clase IgM y por lo tanto pueden ser nían incompatibilidad DR por serología a nivel
reducidos con tratamiento con DTT. Hay que te- alélico presentan incompatibilidades y disminu-
ner presente que pueden coexistir auto y ción de la sobrevida del injerto. Otros grupos han
aloanticuerpos. observado correlación entre incompatibilidad HLA
De mayor sensibilidad es el crossmatch por clase I y GvHD.
citometría de flujo, que permite identificar la cla- En el trasplante renal la compatibilidad de
se de anticuerpo de acuerdo al conjugado utiliza- HLA si bien es importante no es esencial, de tal
do (anti-IgG, anti-IgM). En la práctica se usan modo que en estos casos la mayoría de los tras-
protocolos de dos o tres colores . En el protocolo plantes se realiza con algún nivel de incompatibi-
de dos colores las células y suero son incubados y lidad. En cambio sí existe consenso absoluto de
el complejo antígeno anticuerpo se revela con un contraindicación del trasplante frente a un
anticuerpo anti inmunoglobulina humana marca- crossmatch positivo con linfocitos T, especialmen-
do con un fluorocromo ( FITC ), al mismo tiempo te si el suero del paciente es reciente o suero “ac-
que un anticuerpo monoclonal marcado con otro tual”. Son numerosos los estudios de la compati-
fluorocromo ( PE) identifica células CD3+ ( LT ) bilidad de los diferentes loci HLA entre donante y
o células CD 19+ ( LB ) receptor y el efecto en el injerto renal, con resul-
La interpretación de los resultados de un tados disímiles. Muchas de estas discordancias son
crossmatch es de suma importancia, ya que deter- explicadas por la población analizada, tipo de
mina la presencia o ausencia de anticuerpos noci- mismatch considerados, tipo de tipificación
vos para el trasplante. Aún hoy en día existe con- (serológica o molecular), efecto estudiado
troversia frente a algunos resultados de crossmatch (sobrevida, frecuencia de rechazos) etc. Existen
y el riesgo de fracaso del trasplante. muchos factores, no inmunológicos, que gravitan
fuertemente en la sobrevida del injerto y que de-
ben ser considerados en los análisis multivariables
5. LABORATORIO DE HISTOCOMPATI- de sobrevida .
BILIDAD Y TRASPLANTE Opelz en su estudio colaborativo de trasplante
(CTS) ha demostrado que mientras mejor es la
El mayor uso de la tipificación HLA es en el compatibilidad HLA entre donante y receptor,
campo del trasplante clínico, principalmente en mejor es la sobrevida del injerto renal (Opelz et
trasplante de celulas hematopoyéticas y trasplan- al, 1991). Este efecto es más pronunciado en
te renal, pero existen otras aplicaciones útiles en retrasplantes renales. Las técnicas de DNA están
la clínica diaria como por ejemplo en estudios de tratando de establecer la relación que podría tener
asociaciones entre HLA y enfermedades, en pro- DQ en la sobrevida del injerto, lo que ha sido difi-
veer plaquetas HLA compatible, en medicina cultoso debido al fuerte desequilibrio de unión
forense y estudios de paternidad. entre DQ -DR. En el caso de HLA-DP se ha ob-
Los requerimientos de estudio de histocom- servado que su efecto está claramente relaciona-
patibilidad varían de acuerdo al órgano o tejido do en un segundo trasplante. El uso retrospectivo
que se trasplante y se discute el efecto de ellos en de SSO para especificidades AB y RFLP para DR,
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Sin título-2 695 5/26/06, 10:26 AM

ha permitido establecer una diferencia de un 15% Actualmente las técnicas moleculares han
en la sobrevida del injerto entre aquellos trasplan- permitido encontrar nuevas asociaciones de sus-
tes con 0 incompatibilidades AB determinados por ceptibilidad o resistencia a una enfermedad, de
PCR-SSP comparados con aquellos con alguna evolución y pronóstico de respuesta a tratamien-
incompatibilidad al A ó B. to. Por ejemplo el 70 a 80% de los pacientes con
En trasplante de corazón se ha demostrado artritis reumatoidea agresiva, según la población
que la compatibilidad HLA sería beneficiosa en estudiada, portan uno o más de uno de los genes
la sobrevida de este injerto, por lo tanto se reco- del grupo de genes DR4 de susceptibilidad:
mienda efectuar crossmatch si el receptor tiene DRB1*0401, 0404, 0405.
anticuerpos HLA previos al trasplante. Sin embargo, dado que estas enfermedades
En trasplante hepático no se ha demostrado son generalmente multifactoriales, el uso de esta
la utilidad del crossmatch ni de la compatibilidad determinación tiene utilidad clínica limitada fren-
HLA. te a un caso individual
En trasplante de córnea en pacientes de alto
riesgo, son útiles algunos estudios de histocompa- Abortos espontáneos a repetición. Se ha identi-
tibilidad, dándosele mayor valor a la compatibili- ficado que en un porcentaje de abortos espontá-
dad de antígenos clase I que a los de clase II. neos a repetición en los que se han descartado cau-
En Chile, los criterios actualmente en uso sas gineco-obstétricas, existe una mayor compa-
para la selección de receptores de trasplante renal tibilidad en antígenos HLA entre la pareja. En
de donante cadáver considera la compatibilidad muchos de estos casos se ha tenido embarazos
ABO y crossmatch negativo como criterios de ex- exitosos después de la sensibilización de la mujer
clusión. A la compatibilidad HLA, tiempo de es- a los antígenos HLA mediante inyecciones
pera en programa y porcentaje de anticuerpos intravenosas o subcutáneas de células mononu-
linfocitotóxicos se les asigna un puntaje que defi- cleares del esposo o de un tercero.
ne la selección. A los receptores menores de 18
años se le asigna puntaje adicional. Medicina forense y pruebas de paternidad.
Gracias al uso de técnicas de DNA es ahora posi-
ble la tipificación HLA en pequeñas cantidades
6. OTRAS APLICACIONES DE LA TIPIFI- de células o tejido de distintos origen incluidos
CACIÓN HLA folículos, uñas etc. Esta determinación de los
antígenos HLA que permite descartar o identifi-
Además de la relevancia del sistema HLA en car a una persona, con un alto grado de probabili-
el trasplante clínico, existe un número de otras dad, utilizando el conocimiento de la frecuencia
aplicaciones útiles en la clínica diaria como por de estos antígenos en la población general está
ejemplo: siendo usado en casos de medicina forense y en
casos de pruebas de paternidad.
Refractariedad a transfusión de plaquetas. Esta
condición clínica definida como la incapacidad de Antropología. Conocer las frecuencias de
cierto grupo de pacientes de obtener incrementos antígenos HLA en las poblaciones indígenas ha
luego de una transfusión de plaquetas, es debido a permitido apoyar teorías de migración poblacional
la presencia de anticuerpos HLA que reaccionan que se dieron hace miles de años, al comparar las
y destruyen las plaquetas incompatibles trans- frecuencias génicas de estas poblaciones. Con las
fundidas. En estos pacientes la transfusión de actuales técnicas moleculares estos estudios han
plaquetas compatibles para los antígenos HLA, tomado fuerza ya que es posible la tipificación
tiene un efecto benéfico. HLA a partir de productos como el pelo, piel etc.
HLA y enfermedad. Como se describió en el ca-

pítulo 8, existen numerosas enfermedades asocia- LECTURAS SUGERIDAS
das a un determinado antígeno o alelo HLA. El
más utilizado es la determinación del HLA-B27 A map of the Human Major Histocompatibility
que apoya el diagnóstico clínico de Espondiloar- Complex, Immunol Tod 18 (2), 1997.
tritis anquilosante prácticamente en todos los gru-
pos étnicos.
696
Sin título-2 696 5/26/06, 10:26 AM

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Sin título-2 697 5/26/06, 10:26 AM

698
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Capítulo 43
CITOMETRÍA DE FLUJO:
PRINCIPIOS BÁSICOS Y APLICACIONES
Valeska Simon Z. y María Rosa Bono
1. Introducción
2. Principios generales
2.1. Sistemas de fluidos
2.2. Sistema óptico
2.3. Sistema electrónico
2.4. Reactivos para citometría de flujo
3. Aplicaciones de la citometría de flujo
3.1. Determinación de poblaciones
celulares
3.2. Fenotipificación de neoplasias
hematológicas
3.2.1. Fenotipificación de leucemias
3.2.2. Fenotipificación de linfomas
3.3. Enfermedad de Hodgkin
3.4. Trasplante de médula ósea
3.5. Análisis de DNA y ciclo celular
3.6. Análisis de enfermedad residual
mínima
699
Sin título-2 699 5/26/06, 10:26 AM

700
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RESUMEN
La citometría de flujo tiene aplicaciones en numerosos campos de la biología. Una de sus

principales ventajas es la posibilidad de realizar análisis multiparamétricos los cuales permiten
determinar la presencia de varios marcadores simultáneamente, tanto en la membrana como en
el citoplasma o núcleo de las células, sean éstas de origen animal o vegetal. La identificación de
marcadores celulares permite evaluar al interior de una muestra heterogénea la proporción relativa
de una población. Gracias a la utilización de computadores que poseen una gran capacidad de
memoria, es posible analizar poblaciones celulares presentes en proporciones relativamente bajas.
Existen además citómetros capaces de aislar una determinada población celular para estudios
posteriores. Finalmente, la cuantificación de la inmunofluorescencia constituye un avance
importante para los estudios farmacológicos. Esto permite estudiar in vitro la acción de nuevos
medicamentos y las modificaciones inducidas por los tratamientos in vivo. El desarrollo de nuevos
instrumentos cada vez más simples en cuanto a la calibración y alineamiento, capaces de
automatizar la adquisición de datos y análisis ha hecho del citómetro de flujo un instrumento
indispensable en los laboratorios clínicos.
En este capítulo se describen los principios básicos de la citometría de flujo y sus aplicaciones,
destacando las que son usadas en el laboratorio clínico.
1. INTRODUCCIÓN longitudes de onda la cual puede ser registrada

por fotodetectores ubicados perpendicularmente
La historia de la citometría de flujo es al fluido que las transporta. Las componentes de
relativamente corta, sin embargo, se ha las emisiones fluorescentes pueden ser separadas
popularizado enormemente gracias al desarrollo utilizando filtros ópticos, la información
de citómetros de flujo de fácil utilización, rápidos transformada en pulsos eléctricos por el sistema
y precisos en el análisis de células únicas dentro electrónico y almacenada en la memoria de un
de un fluido y al desarrollo de una amplia gama computador para ser posteriormente analizadas
de sondas fluorescentes. Esta tecnología permite utilizando programas computacionales especia-
medir los más diversos parámetros celulares tales lizados.
como antígenos de superficie, citoplasmáticos y En resumen, una vez comprendidos los
nucleares, contenido de ácidos nucleicos, actividad principios de operación del citómetro de flujo, éste
enzimática, flujo de calcio, potencial de se transforma en una herramienta muy útil y en
membranas y pH entre otras. continuo desarrollo tanto para la investigación
Un citómetro de flujo puede considerarse, básica como para la medicina y la industria. Por
muy simplificadamente, como un potente otra parte, las posibilidades de automatización de
microscopio que cuenta con un sistema esta tecnología permite su uso en forma rutinaria
transportador de partículas y un sistema de en laboratorios clínicos y hospitales.
detección de la luz. Las partículas suspendidas en
una solución fisiológica (células u otras entidades
biológicas como espermios o levaduras), son 2. PRINCIPIOS GENERALES
inyectadas bajo presión en el sistema de fluidos
que las transporta hacia un haz de luz focalizada Los citómetros de flujo están constituidos
en el cual, al chocar con las células, se desvía y es fundamentalmente por tres sistemas: el sistema de
registrado por detectores especiales. Si además se fluidos, un sistema óptico de iluminación y
acoplan a las células anticuerpos conjugados con detección, y el sistema electrónico (figura 43-1).
un fluorocromo, estas emitirán luz de determinadas
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Sin título-2 701 5/26/06, 10:26 AM

Figura 43-1. Diagrama de un citómetro de flujo junto con el sistema computacional.
2.1. Sistema de fluidos
El sistema de fluidos es el encargado de

transportar las células o partículas contenidas en
una solución hacia un punto interceptado por el
rayo de luz proveniente de un láser. Está
constituido por un fluido transportador, la
suspensión celular y los controles de presión, estos
últimos necesarios para movilizarlos a ambos hacia
el punto de contacto con el haz de luz. Este sector
es denominado cámara de flujo (figura 43-2). La
suspensión celular es inyectada dentro del caudal
del fluido transportador a través de la cámara de
flujo, hacia un estrecho orificio en el cual las
células adquieren una rápida aceleración. Esto
focaliza las células hidrodinámicamente dentro del
fluido y las dirige hacia un orificio cuyo diámetro
es similar al de una célula. Las células así
focalizadas, desfilan una a una frente a la fuente
de excitación luminosa.
La velocidad y presión con la que son
transportadas las partículas dentro de la cámara
de flujo son fundamentales en la resolución óptica Figura 43-2. Cámara de flujo del citómetro.
702
Sin título-2 702 5/26/06, 10:26 AM

de un citómetro de flujo. Por ejemplo, al aumentar la cual está acoplado el fluorocromo. La emisión
la presión de la muestra, se incrementa la velocidad de fluorescencia tiene una intensidad de varios
del flujo, con lo cual aumenta también el diámetro órdenes de magnitud más pequeña que la luz
del caudal de la muestra obteniéndose una menor dirigida hacia el frente (FSC). Esto hace necesario
calidad de análisis óptico. la utilización de fotodectores altamente sensibles
como son los tubos fotomultiplicadores en los
2.2. Sistema óptico cuales un fotón excita una cascada de electrones
lo que amplifica la señal detectada.
El sistema óptico está constituido funda-
mentalmente por dos componentes: una fuente de
iluminación y un sistema de detección de la luz.
Generalmente, se utiliza un láser como fuente
de excitación luminosa ya que se requiere una
intensa iluminación debido al tamaño de las células
y a la rápida velocidad a la que están desfilando
frente a ésta. El láser produce una luz de baja
divergencia, monocromática, unidireccional y de
alta intensidad. La luz láser abarca un amplio rango
de longitudes de onda, que representa una mezcla
de longitudes de onda específicas (líneas láser),
éstas pueden ser seleccionadas por espejos que
reflejan sólo la longitud de onda de interés. La luz
del láser excita los fluorocromos unidos a las
células, los que a su vez emiten luz detectable por
los fotomultiplicadores. El láser más utilizado en
los citómetros de flujo es el láser de Argón que
emite luz de longitud de onda de 488 nm. Algunos
citómetros poseen más de un láser lo que les
permite tener otras posibilidades en cuanto a lon-
gitudes de onda de excitación.
El segundo componente del sistema está
constituido por dos tipos de detectores: un
fotodiodo y 4 fotomultiplicadores. El fotodiodo
denominado detector de “forward scatter” o FSC
está ubicado al lado opuesto de la fuente luminosa
y recolecta la luz dispersada frontalmente por las
partículas al pasar frente al láser. La luz detectada
es aproximadamente proporcional al tamaño de Figura 43-3. Configuración óptica de un citómetro de flujo.
Esta configuración permite la detección simultánea de “for-
las células. FSC es extremadamente útil para ward scatter” (tamaño), “side scatter” (granulosidad) y tres
discriminar entre diferentes tipos de células y colores distintos de fluorescencia.
desechos celulares.
Los fotomultiplicadores recogen la luz
difundida perpendicularmente a las partículas al
pasar frente a la fuente luminosa. Este sistema 2.3. Sistema electrónico
permite medir la luz dispersada lateralmente, “side
scatter” o SSC y la luz correspondiente a las La producción de electrones por los
emisiones de fluorescencia en 3 rangos de longitud fotodetectores es proporcional a la intensidad de
de onda diferentes (FL1, FL2, FL3) (figura 43-3). la luz que ha incidido en ellos. Esta se convierte
La luz dispersada lateralmente o SSC entrega en una señal de voltaje que es procesada por una
información respecto a la estructura interna y serie de amplificadores que la transforman en
complejidad de de las células y la emisión de pulsos electrónicos. Generalmente existe una
fluorescencia determina características particu- relación lineal entre el número de moléculas de
lares de las células dependiendo de la molécula a fluorocromo unidas a una célula y la intensidad
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Sin título-2 703 5/26/06, 10:26 AM

de fluorescencia medida. El sistema electrónico certeza en subtipos, determinar el contenido de
convierte las señales de los fotodetectores en DNA y analizar las propiedades fisiológicas de las
valores digitales, los cuales se guardan para su células.
posterior análisis. El sistema de colección de datos Las señales fluorescentes de cada célula son
consiste de un discriminador de eventos, un detectadas sólo unos pocos milisegundos después
convertidor análogo-digital y una interface donde de ser excitadas con la luz. El sistema de detección
se guardan los datos (figura 43-4). es muy sensible pudiendo incluso dar una señal
Figura 43-4. Sistema de colección y análisis de datos de un citómetro de flujo.
2.4. Reactivos para citometría de flujo positiva de fluorescencia en una célula que
contiene 1000 partículas del fluorocromo cuando
Las moléculas asociadas a las células pueden se la compara con la fluorescencia basal o
ser reconocidas por anticuerpos u otras proteínas, autofluorescencia de las células.
como son lectinas, hormonas, avidina o El fluorocromo más utilizado en microscopía
estreptoavidina, entre otras. También el DNA o y citometría de flujo es isotiocianato de
RNA son susceptibles de ser visualizados con fluoresceína (FITC). Las ventajas que FITC ofrece
reactivos fluorescentes. Esto es la base de la por sobre otros fluorocromos son: su alto
versatilidad de la citometría de flujo. Así, aunque coeficiente de extinción, su eficiencia cuántica y
las mediciones de FSC y SSC permiten identificar sus características de absorción y emisión máxima,
tipos celulares dentro de una población óptimas para trabajar con láser de Argón y
heterogénea, son realmente las sondas lámparas de Mercurio. Además, se pueden obtener
fluorescentes las que nos permiten clasificarlas con comercialmente una amplia variedad de
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Sin título-2 704 5/26/06, 10:26 AM

anticuerpos y otras sondas conjugadas con FITC. y cuantificación de los antígenos expresados tanto
Sin embargo, también presenta algunos en la membrana como en el citoplasma de las
inconvenientes tales como la transferencia de células y en el análisis del ciclo celular. El
energía entre moléculas de FITC situadas muy estudio de las poblaciones celulares linfocitarias
próximas lo que hace disminuir la intensidad glo- identificadas por antígenos de diferenciación,
bal de fluorescencia obtenida (“quenching” de forman parte actualmente de los exámenes de
fluorescencia). De este modo, en el caso de utilizar rutina para la evaluación del estado
anticuerpos marcados con FITC, el resultado fi- inmunológico de un paciente. En estos estudios
nal en términos de intensidad de fluorescencia no se utiliza una nomenclatura estandarizada que
depende sólo del número de partículas categoriza los anticuerpos de acuerdo al
fluorescentes unidos a la célula, sino también de antígeno que éstos reconocen. Cada categoría
otras características como la proximidad espacial se donomina grupo de diferenciación o CD
entre ellos. Si se requiere un segundo o tercer ("cluster of differentiation") seguida por un
anticuerpo para marcajes simultáneos, se utilizan número y en ocaciones por una letra, por
fluorocromos que se exciten a la misma longitud ejemplo: CD1, CD1a, CD2, etc. (ver capítulo
de onda que la fluoresceína, como R-ficoeritrina 46). Las aplicaciones más corrientes están
(PE) por ejemplo cuyos rangos de emisión son destinadas a caracterizar las anomalías
distinguibles del verde de la fluoresceína y por cualitativas y cuantitativas de las
tratarse de un fluorocromo muy sensible que no subpoblaciones linfocitarias en las deficiencias
presenta fenómenos de “quenching” es el elegido inmunitarias congénitas o adquiridas, en la
en el caso de buscar antígenos presentes en alta vigilancia de los trasplantes de órganos o de
densidad. La mayoría de los restantes fluorocro- médula ósea y en el estudio del fenotipo de un
mos empleados, más que fluorocromos individua- clon neoplásico en las proliferaciones linfoides
les, son grupos de dos fluorocromos unidos entre malignas. En este último campo, la
ellos de forma natural (por ejemplo, la proteína fenotipificación por citometría de flujo ha
peridilclorofila o PerCP) o artificialmente (por aportado nuevos criterios de clasificación,
ejemplo la ficoeritrina-cianina 5, PE/Ci5, conocida pronóstico, elección de la terapia y seguimiento
tambien como Tricolor). del tratamiento para evaluar remisión y recaída
Utilizando sondas capaces de unirse precoz. La citometría de flujo permite, además,
estequiométricamente al DNA y RNA de las estudiar componentes séricos tales como
células, intercalándose en la doble hebra de ácidos complejos inmunes circulantes. Si se poseen
nucleicos como Yoduro de Propidio o Bromuro anticuerpos contra un determinado virus, es
de Etidio, por ejemplo, es posible evaluar posible por lo demás determinar qué poblaciones
contenido de DNA y las diferentes fases del ciclo celulares son infectadas por el virus
celular. También es posible medir simultáneamente Las aplicaciones de la citometría de flujo son
ciclo celular y antígenos, tanto en la membrana inmumerables y sólo se revisarán a continuación
como en el citoplasma o núcleo de las células. En con más detalle algunas de las apliciones clínicas
la tabla 43-1 se muestran ejemplos de de mayor interés.
fluorocromos y sus principales características.
Es importante recordar que las células son 3.1. Determinación de poblaciones celulares
entidades vivas y, en consecuencia, cualquier
tratamiento al que se les someta puede provocar La disponibilidad de una enorme variedad de
cambios en ellas. Esto hace imprescindible el anticuerpos monoclonales ha difundido el uso de
uso de controles negativos y positivos que la citometría de flujo en investigación básica y
permitan la adecuada interpretación de los clínica. El diseño de instrumentos en los cuales se
resultados. ha automatizado la alineación y calibración del
citómetro, unido al permanente desarrollo de
programas computacionales automatizados para
3. APLICACIONES DE LA CITOMETRÍA la adquisición y análisis de datos, ha permitido la
DE FLUJO expansión de esta metodología de trabajo hacia
los laboratorios clínicos los que pueden obtener
Las aplicaciones actuales de la citometría de resultados rápidos, objetivos y altamente
flujo reposan esencialmente en la identificación reproducibles.
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Tabla 43-1. Características de los principales fluorocromos utilizados en citometría de flujo.
Fluorescencia Marcaje Excitación Emisión Tipo de Abreviatura

Máxima (nm) Máxima (nm) láser
“Fluorescein- proteínas 495 520 488Ar FITC

isothiocyanate”
“R-Phycoerythrin” proteínas 565,545,480 575 488ar R-PE
“Texas Red” proteínas 595 620 595Dye TX
R6G
“Tamdem PE-TX” proteínas 565,545,480 613 488Ar
“Allophycocyanin” proteínas 650 660 632HeNe APC
595
“Tamdem PE-Cy5” proteínas 565,545,480 670 488Ar
“Perchlorophyll” proteínas 470 680 488Ar PerCP
“Propidium iodide” ácidos 495,342 639 488Ar PI
nucléicos
“Ethidium bromide” ácidos 493,320 637 488Ar EB
nucléicos
“Acridine orange” ácidos 503 530(DNA) 488Ar AO
nucléicos 640(ARN)
“Mithramycin” ácidos 445 569 458Ar
nucléicos
“Chromomycin A3” ácidos 430 580 457Ar
nucléicos
“Hoechst 33342” ácidos 395 450 UV a oK H342
nucléicos
“4',6-diamidino-2- ácidos 372 456 UV A o K DAPI
phenylindole” nucléicos
“Pyronin Y” ácidos 545 656 530 K PY
nucléicos 514 A
En el análisis de subpoblaciones de linfocitos, realizar marcajes en tres colores simultáneamente

provenientes tanto de sangre periférica como de al utilizarlos junto con anticuerpos marcados con
médula ósea, ha resultado fundamental la FITC y PE. Existen además, citómetros con más
utilización simultánea de anticuerpos conjugados de un láser y otros dispositivos detectores de luz
con fluorocromos diferentes, siendo de gran que permiten utilizar 4 fluorocromos distintos
utilidad la mezcla de anticuerpos CD45 y CD14 simultáneamente (FL1, FL2, FL3 y FL4). De esta
marcados con FITC y PE, que se unen en forma manera es posible obtener rápidamente mucha
diferencial a las distintas poblaciones de información con una cantidad mínima de muestra.
leucocitos, permitiendo identificarlas, cuanti- La co-expresión de moléculas de superficie o
ficarlas y analizarlas separadamente (figura 43- intracelulares en una misma célula permite
5). La producción reciente de anticuerpos diferenciar con certeza distintas subpoblaciones
monoclonales conjugados con PerCP permite (figura 43-6).
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Figura 43-5. Estrategia de análisis simultáneo de subpoblaciones celulares en una muestra de sangre total lisada. Las
distintas poblaciones celulares son claramente distinguibles por su tamaño, granulosidad y expresión diferencial de antígenos de
superficie, detectados con anticuerpos monoclonales dirigidos contra CD45 y CD14.
Figura 43-6. Análisis simultáneo de poblaciones linfocitarias en sangre total lisada de un paciente con SIDA. En A se
muestra el gráfico de FSC (tamaño) versus SSC (granulosidad) de una muestra de sangre total lisada. En éste se distinguen
claramente linfocitos, monocitos y granulocitos. En B, C y D se analiza la expresión de CD3, CD4 y CD8 de la población
correspondiente a los linfocitos.
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Los protocolos de marcaje de células que deben ser considerados, en conjunto, para
leucocitarias sanguíneas y de médula ósea se han establecer acertadamente un diagnóstico y
visto favorecidos por el desarrollo de reactivos que tratamiento apropiado en cada caso.
permiten eliminar fácilmente los glóbulos rojos,
población mayoritaria en la sangre. 3.2.1 Fenotipificación de leucemias
La caracterización de subpoblaciones
linfocitarias es una herramienta de gran utilidad Las leucemias agudas (LA) son expansiones
en el seguimiento de la progresión de cuadros de clonales de células precursoras hematopoyéticas
inmunodeficiencia. Esto permite detectar con alta (blastos) en la médula ósea con algunas
sensibilidad subpoblaciones poco representadas características en común como son una baja
dentro de la población total, como son los respuesta a mecanismos regulatorios y una
linfocitos T CD4+ en el SIDA (Síndrome de capacidad de diferenciación disminuida. Su
Inmunodeficiencia Adquirida). expansión se realiza, generalmente, a expensas de
El análisis de glóbulos rojos y plaquetas no los elementos normales de la médula ósea.
requiere purificación ya que la contaminación por Un proceso se clasifica como maligno por la
el resto de las células leucocitarias no es importante presencia de una hematopoyesis disminuida y un
(menos de 0,1%) y pueden ser fácilmente exceso de blastos. Las subclasificaciones se
eliminadas en la etapa de análisis. realizan considerando que los blastos presentes
mantienen algunas de las características de sus
3.2. Fenotipificación de neoplasias hemato- contrapartes normales.
lógicas En el análisis de leucemias se deben tener en
cuenta el porcentaje de células con morfología de
En general la aplicación de la citometría de blastos determinado por histoquímica y/o
flujo en el diagnóstico de patologías neoplásicas citoquímica y el linaje celular de los blastos
se ha incrementado considerablemente en los determinado por citometría de flujo. Las leucemias
últimos años debido a la reproducibilidad de los se clasifican en agudas o crónicas dependiendo
datos obtenidos. Esta información permite del grado de madurez de los blastos. Las células
determinar sin ambigüedad las células compro- linfoides o mieloides pueden estar involucradas
metidas en varias neoplasias como es el caso de en la leucemia, incluso simultáneamente. Con
las leucemias agudas, linfomas y mielomas entre menos frecuencia se observan leucemias con
otras. compromiso de megacariocitos o eritrocitos.
En estos estudios, la información del número Es importante resaltar que no existen
de células neoplásicas presentes, por lo general, marcadores específicos para leucemia y que lo que
es irrelevante, siendo más importante determinar se realiza es la interpretación de un conjunto de
si estas células están o no presentes y a qué tipo marcadores celulares comparado con la ontogenia
de neoplasia representan. El análisis multipara- normal.
métrico que considera la fluorescencia, el tamaño
y la granulosidad de las células permite obtener Leucemia aguda linfoblástica (LLA). Es la
una excelente información de la heterogeneidad leucemia más frecuente en niños menores de 15
celular (figura 43-7). años, con una incidencia mayor entre los 3 y 5 años,
Las células derivadas de la sangre, médula sin embargo, también se presenta en niños menores
ósea o de órganos linfoides son relativamente de 1 año y con menor frecuencia en adultos jóvenes.
fáciles de aislar para analizarlas por citometría de El pronóstico es más favorable en niños entre 1 y
flujo. Sin embargo, cuando se trata de estudiar 10 años de edad que en adultos. La mayor parte
células provenientes de tejidos u órganos es de las LLA son proliferaciones de células B (entre
recomendable realizar cortes histológicos antes y 75 a 85%) variando en el grado de maduración
durante la disgregación del tejido para asegurar que presentan las células. El fenotipo más común
una adecuada representación de los diversos tipos de las LLA de células B es la LLA común o
celulares que conforman la muestra. La correlación cALLa: expresan CD10, CD19, CD20, TdT
del estado clínico del paciente, morfología celular, (transferasa deoxiterminal), HLA-DR y en
citoquímica e histoquímica, el inmunofenotipo ocasiones CD34. No expresan inmunoglobulinas
obtenido por citometría de flujo, el contenido de de superficie ni citoplasmáticas. Este es el fenotipo
DNA y análisis del ciclo celular son antecedentes con mejor pronóstico y representa aproximada-
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Sin título-2 708 5/26/06, 10:26 AM

Figura 43-7. Estrategia de análisis para una inmunofenotipificación. La muestra corresponde a una biopsia de ganglio fresca.
La población a analizar se define en base al tamaño y granulosidad (A). En (B) se muestra el control negativo utilizando un
anticuerpo irrelevante. En (C) se muestra la expresión del marcador de activación celular HLA-DR. En (D) y (G) se analiza la
expresión de antígenos específicos de linfocitos B (CD19 y CD20). Puesto que se observa expresión de marcadores de linfocitos
B, se analiza la expresión del antígeno CD10 (F). En (E,K y L) aparece la expresión de marcadores de linfocitos T (CD5, CD3,
CD4 y CD8). Luego se analiza la expresión de cadenas livianas de inmunoglobulinas (κ y λ) (H, Y y J). El resultado del análisis
muestra expresión clonal de la cadena liviana kappa en las células B, lo cual es característico de un proceso neoplásico.
mente un 50% de los casos. Le siguen en Burkitt es la de peor pronóstico y presenta células
frecuencia (30% de los casos) la LLA que expresa morfológicamente distintas a las de una LLA de
los mismos antígenos ya descritos a excepción de células B. Los blastos se caracterizan por presentar
CD20. Con menor frecuencia, las LLA expresan vacuolas en el citoplasma que se tiñen con Oil Red
sólo CD19 o, en otros casos, expresan CD19, O, tienen un fenotipo de células B maduras con
CD20, HLA-DR, CD10 e inmunoglobulinas de expresión de inmunoglobulinas en la membrana
superficie o citoplasmáticas. La enzima TdT puede celular. Las leucemias de células T comprenden
estar presente tanto en LLA de células B como T. aproximadamente el 15-25% de los casos siendo,
La expresión de HLA-DR es de mayor intensidad por lo general, bastante agresivas y con menor
en células B más inmaduras. La leucemia de tipo respuesta al tratamiento. El fenotipo de esta
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patología es más complejo que el de LLA de diferenciar los monocitos normales, de los blastos
células B. Esto se debe a que no existen o de los precursores de monocitos. CD11c en
marcadores de clonalidad ni marcadores conjunto con CD14 permiten diferenciar entre leu-
específicos frecuentes para las etapas tempranas cemia mielomonocítica y leucemia aguda
de maduración de linfocitos T. El marcador más monocítica ya que, por lo general, no se expresan
útil es CD7, que se expresa en aproximadamente en otras formas de LLA o LMA. La coexpresión
95% de las LLA de células T. Sin embargo, CD7 del antígeno CD15 es muy útil ya que éste se va
también se expresa en los linfocitos T normales adquiriendo durante la maduración de la serie
en forma aberrante en las LLA de células B y en mieloide granulocítica, a la vez que disminuyen
un porcentaje más alto (25%) en las leucemias de la expresión de CD45.
estirpe mieloide. Otros marcadores para LLA de
células T son CD1a (excepto en el timo ya que los Leucemia linfocítica crónica (LLC). Esta es una
timocitos expresan normalmente CD1a), CD3, patología asociada a adultos mayores, y ocurre con
CD2 y CD5. Estos dos últimos están presentes, mayor frecuencia en hombres que en mujeres. Esta
con alta frecuencia en este tipo de leucemia. HLA- enfermedad, que involucra la médula ósea, los
DR es frecuentemente negativo en LLA de células nódulos linfáticos y/o el bazo, es una expansión
T y en ausencia de otros marcadores de linfocitos clonal de linfocitos inmunológicamente
T, la presencia de CD3 citoplasmático es definitiva competentes. La enfermedad es prácticamente
para asignar este linaje. En la LLA de células T se indistinguible de un linfoma bien diferenciado y
busca más bien expresión aberrante (por ejemplo, es denominada LLC si la médula ósea está
coexpresión de CD4 y CD8) o ausencia de uno o extensamente comprometida. Si la enfermedad se
más marcadores clásicos de linfocitos T. inicia en los nódulos linfáticos o en el bazo se
utiliza el término linfoma bien diferenciado o
Leucemias agudas no-linfocíticas (LANL). Este linfoma de linfocitos pequeños. Morfológica-
grupo de patologías está conformado por las mente, estas células son muy similares a los
leucemias agudas mieloides (LMA), eritrocíticas linfocitos normales, de allí la relevancia del
y megacariocíticas. La fenotipificación de estas análisis por citometría de flujo en este tipo de
leucemias ha sido útil para diferenciarlas de las patología. La mayor parte de las LLC están
LLA más que para clasificarlas en subtipos de compuestas por células B monoclonales, las que
LMA ya que, en general, desde el punto de vista presentan una expresión monotípica de cadenas
del tratamiento y diagnóstico, no establece livianas de inmunoglobulinas y coexpresión de
diferencias importantes. Las LMA son más CD5, CD20 y CD19.
fecuentes en adultos entre los 15 y 40 años.
Solamente alrededor del 20% de las leucemias en Leucemia mieloide crónica (LMC). Es una
niños son LMA. Una característica particular de patología de células troncales multipotenciales y
los blastos LMA es su homogeneidad en tamaño puede, por lo mismo, involucrar más de un linaje
y granulosidad dentro de la heterogeneidad ha- celular. La inmunofenotipificación de esta
bitual de las células de la médula ósea. Los enfermedad no es frecuente, excepto en los casos
marcadores celulares CD13, CD14, CD33 y CD34 de crisis blástica que es la forma progresiva y
nos indican si las células son de linaje mieloide y agresiva de esta patología. En este caso, el fenotipo
el grado de diferenciación monocítico. Aunque se utiliza para definir el tipo celular involucrado
HLA-DR no es un marcador mieloide específico, en la proliferación blástica.
es útil para diferenciar las leucemias promielo-
cíticas en las que HLA-DR está generalmente 3.2.2 Fenotipificación de linfomas
ausente o tiene una expresión débil. Por otra parte
la ausencia de CD45 en conjunto con la presencia Los linfomas son tumores del sistema inmune
de otros marcadores como CD71 o glicoforina A que se presentan principalmente en los nódulos
es un indicio de leucemia de linaje eritroide. Si linfáticos, bazo, médula ósea, en tejidos linfoides
además están presentes marcadores de plaquetas asociados a mucosas y, con menor frecuencia en
como CD61 y/o CD41a esto indica una leucemia la piel u otros órganos. Ocasionalmente los blastos
megacarioblástica. La expresión de CD14 está pueden detectarse en gran cantidad en la
virtualmente restringida a los monocitos más circulación sanguínea.
maduros, por esto, es de gran ayuda para El método básico en el diagnóstico y
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clasificación de los linfomas es la microscopía. marcador sea negativo. Expresa otros marcadores de
En los últimos años, se han desarrollado gran células B como son CD19, CD20, CD79a y CD22.
variedad de esquemas histológicos para la Por lo general, muestra trisomía 12 o anormalidades
clasificación de estos tumores. La clasificación del 13q en algunos casos.
"Intenational Lymphoma Study Group" presentada
en el año 1994 no categoriza estos tumores Inmunocitoma (linfoma linfoplasmocítico). Esta
clínicamente como de alto o bajo grado de neoplasia de origen B tiene tendencia a diferen-
malignidad (actualmente se reconoce que cada ciarse a un estado de células plasmáticas. Es posi-
entidad tiene sus propias características ble detectar IgM en el citoplasma o como inclu-
individuales), sino que las agrupa dependiendo siones intranucleares (cuerpos de Dutcher) en las
del tipo celular involucrado en la neoplasia, células de aspecto plasmocítico. Si la IgM tam-
basándose en las características antigénicas, bién aparece en el suero como paraproteína, la
citogenéticas, morfológicas y la observación enfermedad corresponde a una Macroglobulinemia
clínica. de Waldenström´s. La fuerte positividad para IgM
De este modo, en el caso de los linfomas no- citoplasmática y de superficie, en conjunto con la
Hodgkins, existen 10 que son de origen linfoide ausencia de CD5, puede ayudar a distinguir esta
B y éástas son la leucemia/linfoma linfoblástica enfermedad de las neoplasias linfocíticas peque-
de células B precursoras y las neoplasias de células ñas. El resto de los marcadores de células B, CD19,
B periféricas llamadas: leucemia linfocítica CD20, CD22 y CD79a son positivos. CD10 es
crónica de células B, inmunocitoma, linfoma del negativo. Es una enfermedad de adultos que suele
manto, linfoma folicular, linfoma MALT, leuce- seguir un curso indolente aunque puede transfor-
mia de células velludas, plasmocitoma, linfoma marse en un linfoma de células grandes más agre-
B difuso de células grandes y linfoma de Burkitt. sivo.
Otra categoría importante, aparte de la
enfermedad de Hodgkin, son las neoplasias que Linfoma de células del manto. Esta enfermedad
tienen su origen en células T y células "Natural se presenta, por lo general, con linfoadenopatías,
Killer" (NK). En este grupo se encuentran la leu- pero puede encontrarse en sitios extranodales,
cemia/linfoma T linfoblástico de células principalmente en el tracto gastrointestinal. Las
precursoras y las neoplasias de células T periféricas células son, en la mayoría parte de los casos, pe-
y de células NK llamadas: leucemia linfocítica queñas y de alto SSC debido a sus núcleos irregu-
crónica de células T, leucemia de linfocitos grandes lares. Presentan el marcador CD5 y carecen de
granulares, micosis fungoide / síndrome de Sézary, CD23. Existe asociación con una anormalidad
linfomas de células T periféricas inespecíficos, citogenética característica, la traslocación recípro-
linfoma angioinmunoblástico de células T, linfoma ca (t) (11;14) lo que determina la producción de
angiocéntrico, linfoma intestinal de células T, leu- la ciclina D1, la cual puede ser identificada por
cemia/linfoma de células T del adulto y linfoma citometría de flujo. Expresan también los marca-
de células anaplásticas grandes. dores de células B CD19, CD20 CD22 y CD79a,
No es la intención de este capítulo hacer un y tienen expresión clonal de cadenas livianas de
estudio extenso de cada clasificación por lo que inmunoglobulina, con mayor frecuencia cadenas
nos limitaremos a resaltar las características lambda. CD10 es frecuentemente negativo. Esta
inmunofenotípicas más relevantes en el estudio enfermedad se presenta preferentemente en adul-
de estas neoplasias por citometría de flujo. tos, siguiendo un curso moderadamente agresivo.
Leucemia/linfoma linfoblástico B. Se presenta tí- Linfoma folicular. Esta enfemedad es de progre-

picamente como una leucemia. Aunque el compro- sión lenta, pero esencialmente incurable. Las cé-
miso de la médula ósea y la sangre es muy común, lulas presentan los marcadores de células B CD19,
unos pocos casos se localizan como tumores sóli- CD20, CD22 y CD79a. Son CD5 y CD23 nega-
dos, usualmente en los nódulos linfáticos. La enfer- tivas y CD10 positivas. Presentan expresión
medad, aunque es agresiva, puede ser curada, parti- clonal de cadenas livianas de inmunoglobulina
cularmente cuando se trata de niños. Típicamente (kappa con mayor frecuencia). La traslocación
expresa TdT, CD10 (aunque a veces está ausente), (14;18) está presente en dos tercios de los casos
puede expresar cadenas pesadas de inmunoglobulina acompañada de la expresión de la proteína BCL-
en el citoplasma, pero es más frecuente que este 2, sin embargo, los casos que carecen de esta
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traslocación también expresan la proteína BCL-2 casos y rearreglamientos (40%) y/o mutación
y presentan las mismas características clínicas de (75%) de BCL-6. Es una enfermedad tanto de
aquellos que sí la tienen. niños como de adultos. Sigue un curso agresivo,
pero puede ser curable.
Linfoma de células B marginales (tipo MALT).
Este linfoma es también conocido como linfoma Linfoma de Burkitt. Este tipo de linfoma se pre-
de células pequeñas. Se origina en el ducto senta con mayor frecuencia en niños que en adul-
gastrointestinal o en otros sitios extranodales, ge- tos. Es una enfermedad agresiva pero responde a
neralmente en el tejido epitelial glandular. Este una terapia intensa, especialmente en niños. El
linfoma tiende a mantenerse localizado, por lo fenotipo es de células B periféricas: CD19, CD20,
que es en general de buen pronóstico, aunque pue- CD22, CD79a e IgM de superficie positivas.
de transformarse en un linfoma B de células gran- CD10 es siempre positivo. No expresa CD5 ni
des. Estas células tienen el fenotipo de células B CD23. El marcador Ki67 es positivo en 85% de
con expresión de CD19, CD20, CD22, CD79a e los casos. La citogenética muestra t(2;8), t(8;14)
inmunoglobulinas de superficie. No expresan o t(8;22), rearreglamiento de c-Myc en el
CD5, CD10 ni CD23. El perfil citogenético suele cromosoma 8 y en el gen para cadenas pesadas de
presentar t (11;18) en muchos casos y trisomía 3 las inmunoglobulinas. Con menos frecuencia es-
en algunos. Este mismo fenotipo se encuentra en tán involucradas las cadenas livianas.
el linfoma B de la zona marginal del bazo que re-
presenta una forma rara de leucemia crónica co- Leucemia/linfoma T linfoblástico de células
nocida como “linfoma esplénico de linfocitos ve- precursoras. Esta leucemia es morfológicamente
lludos” y se diferencia del linfoma tipo MALT en indistinguible de las neoplasias de origen B. Se
la alta incidencia de enfermedad en la médula ósea. presenta, por lo general, como leucemia aguda
pero ocasionalmente puede dar origen a tumores
Leucemia de células velludas o tricoleucemia. en los nódulos linfáticos o timo. Presenta
Es una leucemia de células B, las que expresan positividad para antígenos de línea T, aunque de-
todos los marcadores B además de CD25, CD103 bido a su inmadurez, el CD3 puede ser
y CD11c. No expresan CD5, CD10 ni CD23. Es, citoplasmático, es positivo para TdT, CD7, CD4
por lo general, una enfermedad de adultos que si- o CD8. CD1a es frecuentemente positivo.
gue un curso indolente pudiendo presentar
esplenomegalia y pancitopenia. Leucemia linfocítica crónica de células T. Esta
patología involucra la sangre periférica y se ase-
Plasmocitoma / Mieloma de células plasmáticas. meja a la de tipo B en la morfología. Cuando las
Las células plasmáticas son características del células presentan nucleólos más prominentes y
Mieloma múltiple o plasmocitoma. Por lo general citoplasma algo más abundante, se clasifican como
las células no expresan los marcadores B CD19, leucemia prolinfocítica de células T, siendo me-
CD20 y CD22, pero son positivas para nos frecuente y de peor pronóstico. Estos linfomas
inmunoglobinas citoplasmáticas (clonal para una expresan marcadores de células T CD2, CD3,
cadena liviana) acompañada en aproximadamen- CD5, CD4 con más frecuencia que CD8 y siem-
te un 50% de los casos de CD79a. Expresan CD38, pre son CD7 positivas. La citogenética muestra
CD138 y, en un elevado número de casos CD56. trisomía 8q e Inv 14(q11;32) en el 75% de los ca-
Los pacientes son en su mayoría adultos (mayo- sos . Es una enfermedad de adultos y más agresi-
res de 50 años) que responden inicialmente al tra- va que su equivalente de tipo B.
tamiento, pero que recaen luego de un período de
remisión variable. Leucemia linfocítica de células granulares gran-
des. Se subdividen fenotípicamente en aquellas
Linfoma difuso de células B grandes. Es uno de que se originan de células T y aquellas que proba-
los linfomas no-Hodgkin más comunes. Expresan blemente derivan de células NK. La primera, se
marcadores B (CD19, CD20, CD22, CD79a) y en presenta como una enfermedad de curso indolen-
algunos casos CD5 y CD10. Expresan las te y los pacientes suelen ser asintomáticos. El pro-
inmunoglobulinas con más frecuencia en la su- nóstico es por lo general bueno. En cambio en el
perficie que en el citoplasma. La citogenética segundo tipo, de células NK, los pacientes son de
muestra t (14;18) en aproximadamente 30% de los menor edad (40 años como promedio) y los sínto-
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mas son más agudos pudiendio presentar virus Epstein Barr está siempre presente en las cé-
esplenomegalia masiva, compromiso del tracto lulas neoplásicas. Estas células se originan, más
gastrointestinal y coagulopatía. Esta patología tien- probablemente, en células NK que expresan CD2
de a seguir un curso más agresivo. Fenotípica- y CD56. Sin embargo, también se puede detectar
mente ambas son similares, presentando antígenos marcadores de células T como CD5, CD7, CD4 o
comunes como CD2 y CD56; CD3 es positivo en CD8. Por lo general se encuentra CD3 citoplas-
el caso de células T, CD8 puede ser positivo en mático.
ambas, CD16 y CD57 son positivos en el caso de
ser células NK. Linfoma intestinal de células T. Es una enfer-
medad de adutos que sigue un curso agresivo. Por
Micosis fungoide/ Síndrome de Sézari. La Mi- lo general, los pacientes presentan una historia
cosis fungoide es un linfoma de células T que se larga de enfermedad celíaca, mientras que en otros
ve con más frecuencia en la piel y se define como se presenta directamente como linfoma. El pro-
síndrome de Sézari cuando las células se detectan nóstico es malo debido a que esta neoplasia suele
también en la circulación. Si la enfermedad pro- ser multifocal. Las células presentan fenotipo de
gresa, puede involucrar los ganglios linfáticos. células T. Son CD3 y CD7 positivas. CD8 es con
Esta enfermedad sigue un curso variable pudien- frecuencia positivo. En muchos casos las células
do extenderse y transformarse en tumores de cé- expresan la integrina CD103.
lulas grandes. Estas células expresan antígenos de
células T: CD2, CD3, CD5 y CD4. Son CD7, CD8 Leucemia/linfoma de células T del adulto. Esta
y CD25 negativos. En muchos casos CD30 es patología se asocia a la infección con el retrovirus
positivo, lo que es útil para diferenciar esta pato- HTLV-1. Los nódulos linfáticos son reemplaza-
logía de una dermatitis. dos difusamente por células T neoplásicas y en al-
gunos casos éstos se detectan en la sangre periférica.
Linfoma periférico inespecífico de células T. La enfermedad se asocia con lesiones óseas e
Típicamente, esta enfermedad contiene una mez- hipercalcemia. Sigue un curso por lo general agre-
cla de células neoplásicas pequeñas y grandes, con sivo, pudiendo ser, en escasas ocasiones, indolen-
una marcada presencia de otros tipos celulares no te. El fenotipo es de células T CD3, CD2, CD4,
neoplásicos, incluido macrófagos y eosinófilos. Es CD5 y CD25 positivo. CD7 es negativo.
una enfermedad de adultos, de curso agresivo pero
potencialmente curable. Presenta una variedad de Linfoma anaplástico de células grandes. Las
patrones antigénicos de células T siendo CD4 células expresan el antígeno CD30 o Ki-1, un
positivo con más frecuencia que CD8. CD3 pue- antígeno presente en las células de Reed-Sternberg
de ser positivo o negativo. El resto de los antígenos y suelen ser más grandes que en otros linfomas.
de células T se presentan en forma variable. En algunos casos es dificil hacer diagnóstico di-
ferencial con linfoma de Hodgkin. Típicamente,
Linfoma angioinmunoblástico de células T. Es el tumor invade los ganglios linfáticos y en otros,
una enfermedad sistémica con linfoadenopatía, se confina en la piel. Con poca frecuencia expre-
fiebre, pérdida de peso y rash cutáneo. Presenta san marcadores de linfocitos, pero cuando los hay
hipergammaglobulinemia policlonal. Es moderada- éstos indican un origen de células T.
mente agresiva y se consiera un linfoma de alto
grado. Aunque las células presentan fenotipo de 3.3. Enfermedad de Hodgkin
células T con preferencia CD4 positivas, su carac-
terística más relevante es la presencia de otros ti- La utilidad de la citometría de flujo en el diagnós-
pos celulares como histiocitos, células plasmáticas, tico de esta patología es escasa ya que se utili-
eosinófilos y células dendríticas foliculares. El diag- zan, con mayor éxito, criterios morfológicos. La
nóstico es más bien morfológico por presentar una clasificación es compleja y está mejor definida en
arquitectura particular. el campo de los patólogos, por lo que no será des-
crita en esta ocasión.
Linfoma angiocéntrico. Esta patología se presen-
ta tanto en niños como en adultos. Involucra zo- 3.4. Trasplante de médula ósea
nas extranodales como nariz, paladar y piel. El
curso clínico varía de indolente hasta agresivo. El La citometría de flujo tiene aplicación en las
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diferentes etapas del trasplante de médula ósea. 3.5. Análisis de contenido de DNA y ciclo celular
Contribuye, en conjunto con otras técnicas, a la
evaluación de la enfermedad residual en el Una de las aplicaciones importantes de la
momento de la decisión terapeútica así como citometría de flujo es la evaluación del contenido
también en la evaluación de las células de DNA y ciclo celular. Las células marcadas con
progenitoras CD34+. Las células progenitoras un fluorocromo, que se une estequiométricamente
pueden definirse como células que tienen la a los ácidos nucleicos, emiten una fluorescencia
capacidad de duplicarse y diferenciarse en una proporcional al contenido cromosómico global.
amplia variedad de lineas hematopoyéticas que, Las células malignas son con frecuencia afectadas
al ser trasplantadas en un receptor aplásico de una anomalía en el contenido de DNA, es decir,
(pancitopenia resultante tanto de una enfermedad son aneuploides. En muchos tumores humanos la
como de una terapia mielosupresora) son capaces ploidía representa un factor pronóstico. La
de reconstituir la médula ósea del paciente. Se medición del contenido de DNA y del ciclo celular
considera que el número de células CD34+ pueden ser combinadas con el estudio simultáneo
trasplantadas se correlaciona con el éxito y rapidez de la expresión de antígenos de la membrana,
de la reconstitución lo cual contribuye a disminuir citoplasmáticos o nucleares, con lo cual un tipo
el período de tiempo en que el paciente se particular de células puede ser evaluada dentro de
encuentra inmunosuprimido o bajo los efectos de una población heterogénea en conjunto con la
una quimioterapia de altas dosis. ploidía y las fases del ciclo celular.
La movilización de células CD34+ desde la El análisis por citometría de flujo del ciclo
médula ósea hacia la sangre periférica con factores celular puede reflejarse en una curva que muestre
de crecimiento de colonias (en pacientes cuya las variaciones del contenido de DNA versus el
médula ósea no se encuentra comprometida), ha número de células analizadas (figura 43-8). Las
permitido recolectar células progenitoras desde células que no están creciendo o involucradas en
la médula ósea o por leucoaféresis, evaluarlas y la división celular se denominan en el estado G0.
criopreservarlas para ser utilizadas en trasplantes Cuando se gatilla la división, la célula entra
alogénicos o autotrasplantes de pacientes primero en el estado G1 del ciclo celular, luego
sometidos a quimiorradioterapia. Los protocolos comienza a sintetizar DNA y entra a la fase S del
utilizados para incrementar los niveles de células ciclo celular. Durante esta fase el contenido de
progenitoras en la sangre son muy variados, los DNA de la célula aumenta hasta duplicarse, luego
mecanismos de este proceso de movilización no la célula ingresa a la fase G2 del ciclo y se prepara
se conocen y la caracterización biológica de las finalmente para entrar en mitosis (M) y volver a
células movilizadas es limitada. Ha sido dividirse retornando a G1 si la célula es estimulada
demostrado que los trasplantes realizados con o bien mantenerse en G0.
células mononucleares enriquecidas en células Las células somáticas son diploides, es decir
progenitotras CD34+ permiten la reconstitución tienen un número 2n de cromosomas. El número
de la hematopoyesis. En estos casos, es de gran de cromosomas de un tumor es con frecuencia
importancia cuantificar la población responsable mayor que 2n (hiperploide) y algunas veces menor
de la reconstitución rápida y sostenida de la (hipoploide). Un número anormal de cromosomas
hematopoyesis del receptor del trasplante. La se denomina aneuploidía y refleja cambios en el
medición de las células CD34+ por citometría de contenido de DNA. El contenido de DNA de un
flujo provee de un método rápido y reproducible tumor se expresa como el índice de DNA el cual
para cuantificar esta población. Para esto se realiza se define como la razón entre el contenido de DNA
doble marcaje utilizando anticuerpos dirigidos de las células tumorales con respecto a células
contra CD45 y CD34 y se utiliza un análisis normales diploides.Utilizando la citometría de
multiparamétrico de la muestra considerando las flujo es posible analizar el contenido de DNA tanto
características de tamaño y granulosidad de las de células frescas como de biopsias en parafina.
células progenitoras de manera a analizar Para esto es necesario obtener suspensiones de
exclusivamente los leucocitos de la muestra y núcleos o células evitando la degradación del
expresar los resultados en valores absolutos de DNA. Cuando se estudian tejidos neoplásicos,
células CD45+. generalmente éstos contienen algún porcentaje de
células normales diploides que sirven como con-
trol interno de la muestra. Alternativamente, se
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Figura 43-8. Comparación del contenido de DNA. Se muestran células mononucleares de sangre normal (A), células
mononucleares de sangre de un paciente con leucemia (B) y médula ósea del mismo paciente (C). En cada gráfico se muestra
además el contenido de DNA de núcleos de eritrocitos de pollo (CEN) los cuales se utilizan para la calibración del citómetro de
flujo. Se detecta una pequeña población aneuploide (hipodiploide) en ambas muestras del paciente siendo ésta mayor en la médula
ósea, concordante con el porcentaje de blastos detectados en la inmunofenotipificación por citometría de flujo.
pueden utilizar otros controles, como linfocitos ha demostrado poseer una clara utilidad clínica,
aislados, eritrocitos u otra célula cuyo contenido tanto en su aplicación diagnóstica como
de DNA sea estable (figura 43-8). pronóstica. La existencia de una elevada tasa
En líneas generales, la cuantificación de DNA proliferativa en tumores sólidos y en hemopatías
proporciona dos tipos de información biológica malignas se asocia globalmente con un diagnóstico
distinta: por un lado, nos orienta sobre la existencia histopatológico de malignidad, con características
o no de anomalías clonales de DNA- aneuploidías- clínicas, biológicas e histológicas de mal
y por otra, nos permite conocer la proporción de pronóstico y en definitiva con una peor evolución
células en las distintas fases del ciclo celular. Esta de la enfermedad y una supervivencia más corta.
metodología permite obtener además información Sin embargo, en los síndromes mielodisplásicos,
sobre la dinámica del ciclo celular si se incluye la la existencia de una mayor proporción de células
incorporación de análogos de nucleótidos como en fase S en la médula ósea se asocia con un mejor
la bromodeoxiuridina (BrdU) y así determinar con pronóstico.
exactitud las celulas en fase S. Actualmente se ha Pese a lo prometedor de los resultados
incorporado la utilización del compuesto obtenidos hasta ahora en este campo, el valor
fluorescente verde 5,6-carboxyfluorescein clínico de la detección de aneuploidía debe ser
diacetate succinimidyl ester (CFSE) que se une tomado con cautela. Un análisis detallado de la
covalentemente a macromoléculas intracelulares, literatura muestra la existencia de un elevado grado
permitiendo realizar cultivos mixtos de linfocitos de discrepancias en relación tanto, con la
y respuesta a mitógenos y aloantígenos en conjunto incidencia de aneuploidías para un mismo tumor,
con el estudio del ciclo celular. Desde el punto de como en sus posibles implicaciones clínicas. Las
vista pronóstico, la presencia de aneuploidía de causas de estas discrepancias son probablemente
DNA dentro de los tumores malignos, se ha metodológicas, van desde la calidad de la muestra,
asociado con una peor respuesta al tratamiento y procesamiento y métodos de tinción del DNA,
con supervivencia más cortas. No obstante, en hasta la interpretación de los resultados.
algunas situaciones concretas como en la leuce-
mia linfoblástica aguda del niño, el mieloma 3.6. Análisis de enfermedad residual mínima
múltiple, el neuroblastoma y el rabdomiosarcoma,
la presencia de aneuploidía, y en particular de El desarrollo actual de tratamientos de
hiperploidía, se asocia con un mejor pronóstico quimioterapia muy efectiva ha permitido alcanzar
de la enfermedad. El estudio del ciclo celular una elevada incidencia de remisiones completas
mediante citometría de flujo en lesiones tumorales en pacientes con leucemias agudas. Sin embargo,
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Sin título-2 715 5/26/06, 10:26 AM

un porcentaje importante de estos pacientes, luego basado en la experiencia de muchos años ha puesto
de alcanzar la remisón completa, recae debido a de manifiesto la existencia de múltiples
la persistencia de células tumorales residuales aberraciones antigénicas con respecto a los
(enfermedad residual mínima o ERM). En la patrones fenotípicos detectados en las células
actualidad, la confirmación de la remisión normales. Este es el eje central para la posterior
completa se basa en la existencia de menos de 5% detección de ERM, el cual necesariamente debe
de blastos en médula ósea y sangre periférica, estar apoyado en el inmunofenotipo del paciente
detectables por técnicas morfológicas y al momento del diagnóstico. Los patrones de
citoquímicas convencionales, así como por la aberración antigénica en conjunto con otras
ausencia de estas células en el líquido características celulares son de gran utilidad en la
cefalorraquídeo. De este modo entre los individuos detección de ERM. No obstante lo más acertado
en remisión completa, se incluye un grupo de es utilizar al menos dos parámetros, para
pacientes muy heterogéneo cuya masa tumoral identificar la población neoplásica en la muestra.
residual puede variar desde 109 a 1011 células Un atractivo complemento a esta estrategia,
leucémicas. no disponible aún, sería el empleo de anticuerpos
En los últimos años, diversos grupos han monoclonales contra proteínas de productos de
volcado sus esfuerzos en la detección de ERM en fusión de algunos genes implicados en
leucemias agudas. Su interés se ha centrado en el traslocaciones cromosómicas. Estos anticuerpos
desarrollo de métodos que permitan aumentar la serían marcadores leucémicos específicos,
sensibilidad de las técnicas morfológicas y ausentes en células normales, y que conjugarían
citoquímicas convencionales (1-5%) y en dos requisitos importantes para la investigación
establecer la posible utilidad clínica de este tipo de ERM: especificidad y sencillez. Aunque los
de análisis y sus implicaciones terapéuticas. De estudios sobre ERM son escasos en número y el
entre todos los métodos investigados para la seguimiento de los pacientes incluidos en la
detección de ERM en leucemias agudas, el mayoría de los estudios es relativamente corto, se
inmunofenotipo obtenido por citometría de flujo, ha constatado en forma unánime, que la presencia
junto con análisis de biología molecular aparecen de células blásticas durante la fase de tratamiento,
como las técnicas más atractivas debido a la de mantenimiento o en remisión completa permite
rapidez, alta sensibilidad y objetividad de los anticipar, con una elevada probabilidad, la recaída.
resultados. Como ha sido mencionado amplia-
mente, la citometría de flujo permite analizar
varios parámetros simultáneamente en una misma LECTURAS SUGERIDAS
célula, cuantificar la expresión de un marcador
molecular en un número muy grande de células Braylan, R., Benson N. and Iturraspe J., “Analy-
en corto tiempo, analizar una diversidad de sis of lynphomas by Flow Cytometry: Current and
marcadores de superficie o citoplasmáticos, emerging strategies”, Annalas of the News York
además del contenido de DNA permitiendo así academy of sciences. 677: 364-378, 1993.
acotar con bastante exactitud la población de
células neoplásicas. Braylan, R. “Lynphomas” en Clinical Flow
En general, la eficacia de cualquier método, Cytometry: Principles and applications, pp.
cuyo objetivo sea la detección de ERM en 203-234. De Bauerm, K., Duque, R. and Shankey,
leucemias agudas y otras patologías, depende de T., 1993.
su especificidad (capacidad para diferenciar entre
células normales y células neoplásicas), de su Duque R. “Acute Leukemia” en Clinical Flow
sensibilidad (límite de detección del método), de Cytometry: Principles and applications, pp.
su reproducibilidad (debe ser objetivo y fácil de 235-245. De Bauer, K., Duque, R. and Shankey,
estandarizar) y de su aplicabilidad (debe ser rápido T., 1993.
y susceptible de ser utilizado en la rutina de un
laboratorio clínico). Locken, M., “Immunofluorescence techniques” en
Las células leucémicas, salvo raras Clinical flow cytometry: Principles and appli-
excepciones, no presentan antígenos específicos cations, pp. 341-353. De Bauer, K., Duque, R. and
que permitan diferenciarlas de las células Shankey, T., 1993.
normales. Sin embargo el conocimiento actual
716
Sin título-2 716 5/26/06, 10:26 AM

Longobardi, A., Flow Cytometry: First prin-
ciples, Wiey-Liss, Inc., 1992.
Steen, H., “Charateristic of Flow Cytometers” en

Clinical flow cytometry: Principles and appli-
cations, pp. 235-245. De Bauer, K., Duque, R. and
Shankey, T., 1993.
Stewart, C. and Stewart, S. “Multiparameter

analysis of leucocyte by flow cytometry” en
Methods in cell biology: Flow Cytometry, Vol.
14, pp. 61-78. Ed. Darzynkiewics, Z., Robinson,
J. and Crissman, H., 1994.
Visscher, D. and Crissman, J. “Dissociation of

intact cell from tumor and normal tissue” en
Methods in cell biology: Flow Cytometry, Vol.
14, pp. 1-13. Ed. Darzynkiewics, Z., Robinson,
J. and Crissman, H., 1994.
717
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Capítulo 44
ANTICUERPOS MONOCLONALES
María Inés Becker C. y Alfredo E. De Ioannes I.
1. Introducción 4. Anticuerpos monoclonales versus

2. Fundamentos del desarrollo de hi- anticuerpos policlonales
bridomas 4.1. Especificidad
2.1. Mielomas 4.2. Avidez y afinidad
2.2. Fusión celular 5. Aplicaciones de los anticuerpos
2.3. Medio de selección monoclonales
3. Etapas de la producción de hibrido- 5.1. Investigación básica
mas murinos 5.2. Medicina
3.1. Inmunización 5.3. Biotecnología
3.2. Fusión 6. Otros tipos de hibridomas
3.3. Selección y crecimiento 6.1. Heterohibridomas
3.4. Subclonación y congelación 6.2. Hibridomas humanos
3.5. Cultivo masivo
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RESUMEN
Durante décadas, uno de los grandes anhelos de los inmunólogos fue producir in vitro,
anticuerpos monoespecíficos de especificidad predefinida. Sin embargo, su principal problema
era que los medios de cultivo disponibles no eran capaces de sustentar el crecimiento de las
células productoras de anticuerpos. No fue hasta 1975 que George Köhler y César Milstein
publicaron un procedimiento que permitía inmortalizar los linfocitos B de ratones previamente
inmunizados mediante su fusión con células mielomatosas, constituyéndose de esta forma un
hibridoma (o clon de células híbridas) capaz de secretar anticuerpos monoespecíficos
(monoclonales) al medio de cultivo.
Desde entonces, los anticuerpos monoclonales han sido una poderosa herramienta de aná-
lisis en investigación básica y aplicada en diversas áreas de la biología y biotecnología así como
también en medicina, especialmente en el campo del inmunodiagnóstico y la inmunoterapia.
Entre las razones de su éxito se debe destacar que debido a su monoespecificidad, tienen la
capacidad de interactuar con un solo epítopo del antígeno. Además, como la célula que los secre-
ta es de naturaleza tumoral, brinda la posibilidad de disponer de un anticuerpo homogéneo, que
no cambia sus propiedades en el tiempo, en cantidades ilimitadas.
Entre los aspectos más relevantes del desarrollo de los hibridomas se encuentra disponer de
un procedimiento que permita crecer sólo a los híbridos. Con este propósito, se utilizan líneas
celulares mielomatosas mutantes, con defectos en la producción de las enzimas envueltas en la
síntesis de novo de nucleótidos. En estas condiciones, es posible inducir las vías de rescate de la
síntesis de DNA a partir de nucleósidos exógenos como Timidina e Hipoxantina, sólo si están
presentes la enzima Timidina Kinasa para las pirimidinas, o la enzima Hipoxantina-Guanina-
Fosforibosil Transferasa para purinas, respectivamente. Habitualmente, para preparar hibridomas,
se utilizan células mieloides mutantes para TK o HGPRT que han sido seleccionadas por su sen-
sibilidad a Aminopterina un análogo del ácido fólico -inhibidor de la dihidrofolato reductasa-
que bloquea la síntesis de purinas y pirimidinas. De esta forma, en un medio que contiene
Aminopterina sólo es posible el crecimiento de los híbridos, que gracias al aporte del linfocito B,
poseen todo el panel de enzimas que conforman las vías de rescate de síntesis de DNA y, por lo
tanto, pueden utilizar la Hipoxantina y Timidina adicionada al medio de cultivo (medio HAT).
El procedimento básico en el desarrollo de hibridomas secretores de anticuerpos
monoclonales murinos se puede resumir en las siguientes etapas: (i) Inmunización: se debe desa-
rrollar atendiendo cuidadosamente a las propiedades del antígeno y a los propósitos a los cuales
está destinado el anticuerpo; (ii) Fusión: se requiere linfocitos esplénicos de un animal inmuni-
zado y células mielomatosas. Como agente fusógeno generalmente se utiliza Polietilénglicol.
(iii) Selección en medio HAT, para asegurar que sólo los híbridos crezcan. En torno a los 14 días
post-fusión, se inician las pruebas -ya sea mediante ELISA, aglutinación, inmunofluorescencia o
alguna otra técnica sencilla- para determinar la especificidad de los sobrenadantes. Posterior-
mente, todos los microcultivos positivos se expanden a un mayor volumen de medio para conti-
nuar con la caracterización del anticuerpo; (iv) Subclonación; procedimiento que se realiza con
los hibridomas de interés para asegurar la monoespecificidad del clon y por ende, del anticuerpo
que éste secreta; (v) Congelación: Permite preservar por un tiempo indefinido las líneas de
hibridomas en presencia de un medio crioprotector; (vi) Cultivo masivo: permite disponer de
mayores cantidades de anticuerpo monoclonal ya sea creciendo el hibridoma en grandes volúme-
nes de medio de cultivo (en frascos o en biorreactores) y también, mediante la inducción de
tumores secretores de líquido ascítico, inyectándo las células de hibridoma en ratones singénicos.
Por las propiedades de los anticuerpos monoclonales, rápidamente se visualizó su aplica-
ción en inmunoterapia en humanos, sin embargo, éstos, por ser de ratón, son inmunogénicos en
humanos, razón que impulsó el desarrollo de los hibridomas humanos con algunos problemas
aún no resueltos. Entre los más importantes están la fuente de linfocitos B y la ausencia de líneas
mielomatosas de humanos con crecimiento estable. Para salvar estos problemas se está utilizan-
do la ingeniería genética. Es así, como hoy día se dispone de anticuerpos quiméricos, anticuerpos
humanizados, anticuerpos que tienen asociadas moléculas con funciones no inmunológicas y
fragmentos que contienen las regiones CDR de un anticuerpo unidas por una molécula ligadora
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flexible. Finalmente, para demostrar una vez más que la creatividad humana no tiene límites,
actualmente es posible ensamblar anticuerpos en la superficie de fagos filamentosos, procedi-
miento que permitirá conocer más profundamente sobre los mecanismos involucrados en la ma-
duración de la respuesta inmunológica de los vertebrados.
1. INTRODUCCIÓN lares, en adelante denominadas hibridomas, po-

dían mantenerse en cultivo indefinidamente o con-
Desde que Burnet en 1959 postuló la teoría gelarse y ser luego recuperadas para crecerlas in
de la selección clonal -donde propone que cada vitro o in vivo, inyectándolas intraperitonealmente
linfocito B o su progenie terminalmente diferen- en ratones histocompatibles, donde formaban tu-
ciada, la célula plasmática, es capaz de producir mores secretores de líquido ascítico enriquecido
sólo un tipo de inmunoglobulina, cuya región cons- en el anticuerpo monoclonal original.
tante puede modificarse durante la diferenciación Por su trabajo al establecer las bases de la
del linfocito pero no así su región variable, la cual metodología para desarrollar hibridomas, en que
mantiene su singular especificidad- surge en se asegura una perpetua fuente de anticuerpos ho-
Inmunología el concepto de monoclonalidad y la mogéneos, Köhler y Milstein recibieron el Pre-
idea de producir anticuerpos monoespecíficos con- mio Nobel de Medicina en el año 1984.
tra un antígeno conocido. El concepto de
monoclonalidad permitió comprender la natura-
leza de la enfermedad conocida como mieloma, 2. FUNDAMENTOS DEL DESARROLLO
caracterizada por la transformación neoplásica de DE HIBRIDOMAS
un clon individual del linaje de los linfocitos B,
en que todos secretan la misma inmunoglobulina La preparación de hibridomas se sustenta en
constituyendo así, la primera fuente conocida de la aplicación de tres herramientas metodológicas
anticuerpos monoclonales, aun cuando se desco- generadas independientemente por biólogos celu-
noce el antígeno. lares y genetistas: la inducción de mielomas en
Durante años, debido a la imposibilidad de ratón, la fusión de células somáticas y el uso de
cultivar in vitro los linfocitos B, numerosos cien- medios de cultivo in vitro selectivos.
tíficos intentaron modificarlos experimentalmen-
te para lograr su crecimiento estable, asegurando 2.1. Mielomas
de esta forma una fuente continua de anticuerpos
homogéneos. Aplicaron procedimientos tales Los mielomas de ratón, inducidos experimen-
como la inducción de mielomas en ratón y su pos- talmente con aceite mineral, según un procedi-
terior crecimiento in vivo o in vitro, a pesar de que miento desarrollado por Potter en 1960, constitu-
no eran antígeno específicos. También ensayaron yeron un modelo decisivo para estudiar la expre-
procedimientos para transformar linfocitos B, con sión genética y la regulación de la síntesis de
virus Epstein Barr o SV40, que permitieron esta- inmunoglobulinas, básicamente, porque estas cé-
blecer algunas líneas productoras de anticuerpos lulas podían ser trasplantadas in vivo y también
monoespecíficos, pero con un inconveniente: los porque podían crecer continuamente in vitro. Esta
secretaban en muy pequeñas cantidades. última propiedad permitió clonarlas para obtener
Sólo en el año 1975, Köhler y Milstein de- variantes de la secreción de anticuerpos. Además,
mostraron que la hibridación o fusión de dos cé- podían ser manipuladas genéticamente para obte-
lulas somáticas -entre un linfocito B, que posee la ner mutantes en la estructura de las inmuno-
información para sintetizar un solo tipo de antiglobulinas. El conocimiento surgido de ambas lí-
cuerpo y una célula de mieloma, que tiene una neas de investigación, llevó a conocer la genética
capacidad ilimitada de proliferación celular- po- de las células productoras de anticuerpos, cuyos
día utilizarse para establecer un cultivo continuo principios se resumen a continuación:
de células secretoras de anticuerpos monoclonales a) Cuando se fusionan dos células mieloides pro-
de especificidad predefinida. Dichas líneas celu- ductoras de anticuerpos, la expresión de las
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inmunoglobulinas es codominante; es decir, las en torno a la membrana plasmática de las células
inmunoglobulinas de las dos células parentales permitiendo su aglutinación.
son expresadas, lo que sugiere estabilidad en
la expresión de los anticuerpos y un control 2.3. Medio de selección
independiente de los genes codificadores de
anticuerpos en ambas células parentales. Para desarrollar hibridomas secretores de
anticuerpos monoclonales, fue fundamental dis-
b) Cuando una línea mieloide no productora de poner de un procedimiento que sólo permitiera
anticuerpos se fusiona con una línea mieloide crecer a los híbridos compuestos de un linfocito B
que sí es productora, la producción de y una célula mieloide. Con este propósito, Köhler
inmunoglobulina no cesa, y tampoco se indu- y Milstein utilizaron un procedimiento desarro-
ce producción en la variante no secretora. llado en el año 1963 por Littlefield quien aisló,
con medios selectivos, líneas celulares fusógenas
c) Los híbridos producen sólo aquellas cadenas mutantes, con defectos en la producción de las
de inmunoglobulinas codificadas en las célu- enzimas envueltas en la síntesis de novo de
las parentales al momento de la fusión, lo cual nucleótidos. Como se esquematiza en la figura 44-
indica que no se producen nuevas cadenas de 1, en estas condiciones, es posible inducir en las
inmunoglobulinas. células de mamíferos las vías de rescate de la sín-
tesis de DNA a partir de nucleósidos exógenos
d) Los híbridos de dos células parentales produc- como Timidina (T) e Hipoxantina (H), sólo si es-
toras de anticuerpos, pueden ensamblar sus ca- tán presentes la enzima Timidina Kinasa (TK) para
denas pesadas y livianas en todas las combina- las pirimidinas, o la enzima Hipoxantina-Guanina-
ciones posibles, para constituir un anticuerpo Fosforibosil Transferasa (HGPRT) para purinas,
completo; aunque lo habitual es que las cade- respectivamente. Para seleccionar líneas mieloides
nas parentales se asocien preferencialmente. deficientes en alguna de estas dos enzimas, se cul-
tivan en Bromodeoxiuridina (células TK negati-
e) La fusión de células de mieloma con otras cé- vas) y en 8-Azaguanina o Tioguanina (células
lulas que no son del linaje de las células B, HGPRT negativas): las células así seleccionadas
tales como células fibroblásticas o epiteliales, son incapaces de usar la vía de rescate en la sínte-
inhibe la secreción de inmunoglobulinas. sis de ADN.
Para preparar hibridomas, se utilizan células
mieloides mutantes para TK o HGPRT que han sido
2.2. Fusión celular seleccionadas por su sensibilidad a Aminopterina
(A), un análogo del ácido fólico que bloquea la
Como se deduce de los antecedentes expues- síntesis de novo de purinas y pirimidinas,
tos anteriormente, otra herramienta fundamental inhibiendo la enzima dihidrofolato reductasa. De
en el desarrollo de la metodología de hibridomas esta forma, en un medio que contiene
fue la posibilidad de realizar fusión de células in Aminopterina sólo es posible el crecimiento de
vitro, en presencia de agentes que promueven la los híbridos, que gracias al aporte del linfocito B,
fusión de la membrana plasmática, para formar poseen todo el panel de enzimas que conforman
híbridos que poseen una comunión de propieda- las vías de rescate de síntesis de DNA y, por lo
des de las células parentales. tanto, pueden utilizar la Hipoxantina y Timidina
Los primeros hibridomas secretores de adicionada al medio de cultivo. Las células
anticuerpos monoclonales se prepararon utilizan- mieloides no fusionadas se mueren y los linfocitos
do como agente fusógeno virus Sendai. Sin em- B no fusionados tienen una vida limitada in vitro,
bargo, debido a las complicaciones que tiene este pues al no estar transformados, no proliferan y
tipo de agente, rápidamente se reemplazó por eventualmente también mueren. Los compuestos
fusógenos como la Isolecitina y el Polietilenglicol A, H y T componen el medio de selección habi-
(PEG), siendo este último el más utilizado para tual de los hibridomas murinos conocido como
desarrollar hibridomas murinos. Aunque el meca- medio HAT.
nismo de fusión vía PEG no está totalmente en-
tendido, se ha postulado que por ser un compues-
to altamente hidrofílico, absorbe la capa de agua
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Sin título-2 723 5/26/06, 10:26 AM

3. ETAPAS DE LA PRODUCCIÓN DE
HIBRIDOMAS MURINOS
En la figura 44-2 se ilustra las etapas para

preparar hibridomas murinos y, a continuación, se
resumen los principales pasos a seguir para que el
procedimiento sea exitoso.
3.1. Inmunización
La obtención de anticuerpos monoclonales

útiles a nuestros propósitos sólo se logra si el ani-
mal de experimentación presenta un título adecua-
do de anticuerpos. Los animales más frecuente-
mente utilizados para preparar hibridomas son los
ratones, especialmente los de la cepa BALB/c,
aunque también se han empleado ratas y hamster.
Dado que el período de inmunización puede to-
Figura 44-1. Principales vías de rescate envueltas en la sín- mar varios meses, los animales deben presentar
tesis de DNA: Fundamento del medio HAT (Hipoxantina, H; buen estado de salud y deben mantenerse en con-
Aminopterin, A; Timidina, T) de selección de hibridomas. diciones controladas de higiene, luz, temperatura
HGPRT (Hipoxantina-Guanina-Fosforibosil Transferasa), TK y alimentación.
(timidina kinasa), PRPP (5’-Fosforibosil-1-Pirofosfato)
Figura 44-2. Procedimiento general para desarrollar hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales murinos. PEG
(Polietilenglicol), HGPRT (Hipoxantina-Guanina-Fosforibosil Transferasa), TK (timidina kinasa), HAT (Hipoxantina, Aminopterin,
Timidina)
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Sin título-2 724 5/26/06, 10:26 AM

Antes de iniciar el período de inmunización, 3.2. Fusión
es preciso analizar las características del antígeno;
entre las más importantes se encuentran su natu- Habitualmente, alrededor de una semana antes de
raleza química y su tamaño molecular relativo, la fusión somática para preparar hibridomas, se
puesto que si se trata de un hapteno, será necesa- descongela un inóculo de células y se mantiene
rio acoplarlo químicamente a una proteína transen crecimiento exponencial (más o menos 500.000
portadora de inmunogenicidad probada. Entre células/ml) para asegurar una alta viabilidad y efi-
estas proteínas, una de las más utilizadas es la ciencia de fusión. En la tabla 44-1 se muestra al-
Hemocianina –cuya función es el transporte de gunas de las líneas que se han utilizado para pre-
oxígeno en moluscos y artrópodos- extraida de una parar hibridomas de diversas especies animales.
lapa californiana llamada “Keyhole limpet” En cuanto a la selección de la línea mieloide
(Megathura crenulata) y se conoce como KLH. parental a utilizar, el ideal es que no sea secretora
Una proteína similar, que ha mostrado excelentes de inmunoglobulina. Actualmente para hibridomas
resultados es la Hemocianina que se extrae del de ratón, las más usadas son las líneas NSO/2 y
molusco Loco (Concholepas concholepas). Tam- SP2/0 -ambas deficientes en enzima HGPRT- por
bién se debe tener presente la especie de origen su crecimiento estable y buena eficiencia de fu-
del antígeno y su grado de conservación. Si es una sión.
proteína de ratón, difícilmente será inmunogénica Como se señaló anteriormente, la fusión se
en esta especie, a menos que se trate de un antígeno realiza entre 3 y 4 días después de la última inyec-
de diferenciación o de antígenos tumorales. La ción de antígeno, para disponer de suficientes
solubilidad y toxicidad del antígeno deben ser linfoblastos, que corresponden al estado de dife-
consideradas. renciación en que los linfocitos B presentan la
Debido a la diversidad de antígenos, no es po- mejor capacidad de fusión, probablemente por sus
sible definir a priori un protocolo de inmunización características de activa proliferación similares a
común para todos, siendo lo habitual administrar las de las células mieloides, lo que permitiría una
al menos dos dosis del antígeno espaciadas por 15 mejor integración del material nuclear. No se debe
a 30 días. Si el antígeno tiene un alto grado de olvidar que los hibridomas son tetraploides y que,
pureza y es suficientemente inmunogénico, son ne- dado que su constitución ocurre totalmente al azar,
cesarias dosis en torno a 50 ug. Sin embargo, es es frecuente la pérdida de cromosomas, lo que se
recomendable el uso de coadyuvantes, quienes apor- traduce en inestabilidad e incapacidad de crecer;
tan señales de peligro necesarias para activar vigo- esto explica en parte el bajo rendimiento de dicha
rosamente la respuesta inmune innata y adaptativa. metodología. Aproximadamente el 1% de las cé-
El más utilizado en animales de experimentación lulas utilizadas se fusionan y sólo 1 de cada 10.000
es el coadyuvante completo de Freund’s -consiste forma híbridos viables. El bazo es el órgano utili-
de una emulsión de aceite en agua que además con- zado de preferencia para las fusiones somáticas
tiene Micobacterium atenuado- que se emplea en por su fácil acceso, menores riesgos de contami-
la primera inyección de antígeno. En posteriores nación en comparación con los ganglios o placas
inmunizaciones, se utiliza el mismo coadyuvante de Peyer y por el elevado número de linfocitos B
pero incompleto, es decir sin Micobacterium. Unos que concentra (en torno a 108 linfocitos/bazo).
diez días después de cada inmunización, es acon- Antes de la fusión, las células mieloides y
sejable tomar una muestra de suero de los animales los linfocitos esplénicos se mezclan y se lavan ri-
de experimentación y verificar la presencia de gurosamente para eliminar el suero fetal que se
anticuerpos contra el antígeno usando una técnica adiciona a los medios de cultivo, porque éste inhibe
sencilla, como ELISA, IFI o aglutinación. Si el la acción del PEG. Se debe tener especial cuida-
título de anticuerpos es bajo, se administra un par do en la elección de este compuesto, ya que su
de inyecciones más con el antígeno en coadyuvan- origen y pureza son determinantes para la eficien-
te incompleto, en dosis y tiempos similares a los cia de la fusión. PEG, en un rango de peso entre
descritos anteriormente. Si el título de anticuerpos 4000 y 6000 es el más aconsejable, ya que el PEG
es adecuado, bastará una inyección de refuerzo con de bajo peso molecular es altamente tóxico para
una dosis de unos 100 µg de antígeno en solución las células. En nuestra experiencia, PEG 4.000 a
por vía endovenosa, 3 a 4 días antes de la fusión temperatura ambiente, a pH 7,2 en amortiguador
somática . fosfato glucosado, a una concentración del 50%,
presenta óptimos resultados, es decir, un rendi-
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Tabla 44-1. Antisueros convencionales versus Anticuerpos Monoclonales
Característica Antisueros Monoclonales

Composición Heterogénea: contiene Homogénea: contiene un
anticuerpos diferentes para solo anticuerpo
diferentes epítopos de un
antígeno.
Reconocimiento Reconocen varios epítopos Reconocen un solo epítopo

antígeno de un antígeno. del antígeno.
Especificidad Variable, depende del animal Estándar

y la sangría. Mínimas reacciones
Reacciones cruzadas cruzadas.
parciales.
Afinidad Variable, depende del grado Se selecciona
de inmunización.
Pureza del antígeno Es esencial Hasta un 20%
Rendimiento de Hasta 1 mg/mL Hasta 100 µg/mL en el

anticuerpo útil sobrenadante de cultivo.
Hasta 20 mg/mL en ascítico
Inmunoglobulinas Hasta un 100% Ninguna en cultivo in vitro
contaminantes
Duración Hasta que se acaba el Ilimitada, es producido por

suero del animal células tumorales.
miento en torno a 2.000 hibridomas cuando se uti- enriquecido en el anticuerpo de interés, para de-
lizan 108 linfocitos esplénicos y 2,5 x 107 células terminar sus propiedades.
mieloides. Para realizar la selección primaria de los
hibridomas las técnicas más utilizadas son los en-
3.3. Selección y crecimiento sayos tipo ELISA, ya sea directos, de captura o de
competencia. En nuestra experiencia, se debe te-
La suspensión de células resultantes de una ner especial cuidado al elegir la técnica para reali-
fusión somática se siembra en placas de zar la selección primaria de los hibridomas, por-
micropozos en medio de selección HAT, que per- que si ésta no es la adecuada se pierde tiempo,
mite sólo el crecimiento de los híbridos. Dentro esfuerzo y recursos. A modo de ejemplo. Si se
de los 10 a 14 días siguientes, los clones alcanzan quiere obtener anticuerpos de alta afinidad (sobre
un tamaño suficiente -visible a simple vista- para 108 M-1), lo más aconsejable será la selección por
iniciar la selección primaria de los hibridomas de ELISA o RIA y no por aglutinación, en que la avi-
interés. Debido al escaso volumen de medio de dez de un anticuerpo prima por sobre su afinidad.
las placas de multipozos y a la activa prolifera- Actualmente, existen herramientas más po-
ción de los híbridos -con un ciclo celular de alre- derosas y sensibles para seleccionar los hibridomas
dedor de 10 horas- la selección debe hacerse con secretores de anticuerpos de interés, como por
una técnica sencilla y rápida para expandirlos a ejemplo se puede utilizar un equipo separador de
un mayor volumen de medio; de este modo, se células activado por fluorescencia (FACS). En este
asegura que continúen su crecimiento y también caso, el antígeno marcado con un fluorocromo se
se dispone de mayor cantidad de medio de cultivo agrega a las células fusionadas y aquellas que ex-
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Sin título-2 726 5/26/06, 10:26 AM

presen en su superficie el anticuerpo blanco pue- en la cavidad peritoneal de ratones histocom-
den ser separadas desde la mezcla de células re- patibles o irradiados, previamente tratados con
sultantes de la fusión. aceite mineral para inducir la formación de
Para un buen crecimiento de los hibridomas plasmacitomas. En estas condiciones, se alcan-
los factores más críticos son la calidad del medio zan concentraciones de anticuerpo de hasta 20 mg/
de cultivo -que debe ser rico en glucosa, porque ml a diferencia de un sobrenadante de cultivo in
los híbridomas utilizan la vía glicolítica como vitro, en que se obtienen concentraciones entre 20
fuente de energía- y la del suero fetal de bovino, y 50 µg/ml. Si se precisa aumentar la concentra-
que se agrega descomplementado. Es aconseja- ción de anticuerpos obtenidos in vitro, los
ble probar los sueros antes de realizar una fusión. hibridomas deben crecer en biorreactores, los cua-
Con este propósito se utiliza el procedimiento co- les pueden ser del tipo de los fermentadores, en
nocido como eficiencia de clonación, que consis- que las células se crecen en suspensión con agita-
te en sembrar mediante dilución límite células ción -individuales o formando acúmulos,
mieloides y determinar la capacidad del suero de encapsuladas en microesferas- o sistemas en que
sustentar el crecimiento de las células en las dilu- son empacadas e inmovilizadas en columnas de
ciones mayores (1 a 0,1 células /pozo). Para asegu- fibra hueca de material semipermeable.
rar un mejor crecimiento de los hibridomas, el
medio de cultivo se puede enriquecer con una sus-
pensión de células de bazo de un animal 4. ANTICUERPOS MONOCLONALES VER-
histocompatible no inmune, las que prácticamen- SUS ANTICUERPOS POLICLONALES
te no crecen, pero aportan al medio factores de
crecimiento, interleuquinas e intermediarios En la tabla 44-2 se presenta una compara-
metabólicos. ción de algunas características de los anticuerpos
monoclonales con respecto a los antisueros con-
3.4. Subclonación y congelación vencionales -también denominados anticuerpos
policlonales- y a continuación se comenta los as-
Una vez que se tiene un hibridoma de inte- pectos más destacables.
rés, se debe proceder rápidamente a su reclonación
por dilución límite para asegurar la 4.1. Especificidad
monoespecificidad de la línea celular, puesto que
es probable que al sembrar la suspensión de célu- Un anticuerpo monoclonal, por su naturale-
las resultantes de la fusión, caiga por azar más de za monoespecífica, es capaz de interactuar con un
un híbrido por pozo. Si un híbrido secretor de solo epítopo de un antígeno; en cambio, un
anticuerpos está mezclado con uno no secretor y antisuero convencional, debido a su naturaleza
de mayor tasa de proliferación, se perderá en el policlonal, contiene no sólo anticuerpos que pue-
tiempo el hibridoma secretor y por lo tanto, se den interactuar con varios epítopos de un antígeno,
perderá el anticuerpo monoclonal. sino que también, contiene una familia de
Para asegurar la preservación de una línea anticuerpos que difieren en estructura, afinidad y
de hibridomas, es importante congelar inóculos avidez, los que compiten por unirse a cada epítopo
de células representativos de cada una de las eta- del antígeno, como se ilustra en la figura 44-3.
pas de su crecimiento, esto es, células parentales Además, no se puede dejar de mencionar que en
(pre-subclonamiento) y de los reclones. Con este los sueros convencionales también están presen-
propósito, se preparan inóculos con una concen- tes los anticuerpos que constituyen la inmunidad
tración de células totales en torno a 1 ó 2 millo- humoral natural del animal del cual se obtuvo. Por
nes, en presencia de una mezcla crioprotectora, lo tanto, es posible que se produzcan reacciones
siendo óptima la mezcla compuesta por un 10% cruzadas de los anticuerpos, difíciles de eliminar,
de DMSO y un 90% de suero fetal de bovino. Las cuando se trata de antígenos similares que com-
células así tratadas se mantienen indefinidamente parten numerosos epítopos o cuando se trata de
en estanques con N2 líquido. antígenos diferentes con un epítopo en común, o
muy similar. Este problema puede evitarse con el
3.5. Cultivo masivo uso de anticuerpos monoclonales seleccionados
por su capacidad de unirse a un epítopo exclusivo
Los hibridomas pueden ser cultivados in vivo, de un antígeno. Un ejemplo de esta exquisita es-
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Sin título-2 727 5/26/06, 10:26 AM

Tabla 44-2. Líneas celulares inmortales usadas como parentales para constituir hibridomas
Especie Línea celular Fenotipo Celular Expresión

de Ig
Ratón X653 Mieloma No

NS0/2 Mieloma No
SP2/0 Mieloma No
NS1 Mieloma IgG1(κ)
Rata Y3-Ag 1.2.3. Mieloma κ

YB2/0 Mieloma No
Humana SK007 Mieloma IgE (λ)

RH-L4 Linfoblastoide IgG(κ) no secretor
GM1500 Linfoblastoide IgG(κ)
KR4 Linfoblastoide IgG2(κ)
Humana/ratón SHM-D33 Mieloma híbrido IgG2(κ)
pecificidad es el caso de los anticuerpos mono- Sin embargo, existen algunos casos en que
clonales que permiten discriminar entre el grupo la especificidad de los anticuerpos monoclonales
sanguíneo A y B de humanos, donde la única dife- puede ser cuestionada, por presentar reacciones
rencia en el trisacárido que constituye el determi- cruzadas mayores que las observadas con un
nante antigénico de cada grupo está constituida por antisuero convencional, lo que enfatiza la impor-
un azúcar, N-acetilgalactosamina y Galactosa, res- tancia de los procedimientos de selección y ca-
pectivamente. racterización de los anticuerpos monoclonales. Es
Figura 44-3. Heterogeneidad de anticuerpos presentes en el antisuero de un mamífero. El antígeno esquematizado tiene los
epítopos A, B, C y D. En el epítopo A se pueden unir dos anticuerpos de la misma clase pero de diferente especificidad y afinidad.
En el epítopo B se pueden unir dos anticuerpos de diferente clase, especificidad y afinidad. En el epítopo C se pueden unir dos
anticuerpos de diferente clase pero de la misma afinidad y especificidad y, en el epítopo D, se pueden unir dos anticuerpos de
diferente clase pero de la misma especificidad y afinidad.
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posible que un anticuerpo muestre reacción cru- se logra un número significativo de hibridomas
zada con un epítopo presente en un antígeno que secretores de anticuerpos monoclonales de tipo
no fue considerado al realizar los estudios de es- IgM cuando se realizan protocolos de inmuniza-
pecificidad de dicho anticuerpo. Por ejemplo, en ción cortos, sin estimulaciones reiteradas con el
el caso de dos glicoproteínas que comparten una antígeno para evitar una maduración de la respues-
secuencia oligosacárida; si el anticuerpo ta hacia IgG. En cuanto a la selección, si se desea
monoclonal reconoce esta región, es posible ob- anticuerpos aglutinantes, la selección por ELISA
servar un 100% de reacción cruzada; en cambio, no será apropiada porque el antígeno se presenta
con el antisuero convencional, que contiene en otra configuración, lo que se demuestra al cons-
anticuerpos dirigidos contra los epítopos no co- tatar que la mayoría de los anticuerpos seleccio-
munes de ambas glicoproteínas, la reactividad cru- nados por ELISA no presentan características
zada será menor. aglutinantes.
También es posible que un anticuerpo Finalmente, se pueden preparar mezclas de
monoclonal totalmente específico con un antígeno dos o más monoclonales de especificidad conoci-
en un tipo de ensayo dado, muestre reactividad da, lo que se denomina reactivo oligoclonal. En
cruzada con otro al ser utilizado en otro tipo de ellas es posible combinar y potenciar las caracte-
ensayo, especialmente si la sensibilidad de las téc- rísticas individuales de avidez y afinidad de cada
nicas es diferente. Un ejemplo de este fenómeno uno de los anticuerpos monoclonales que la com-
se observa en algunos anticuerpos monoclonales ponen.
dirigidos contra la hormona Gonadotrofina
Coriónica humana (hCG), compuesta por dos
subunidades: α y β. En ensayos de aglutinación 5. APLICACIONES DE LOS ANTICUER-
indirectos, cuando se hace reaccionar a estos POS MONOCLONALES
anticuerpos con partículas de látex recubiertas con
hCG, se produce una reacción de aglutinación al- 5.1. Investigación básica
tamente específica, ya que, aunque se agreguen
elevadas concentraciones de hormona Luteinizante La metodología de hibridomas ha sido una
humana (hLH) que comparte la subunidad α con herramienta insustituible para el avance científi-
hCG, no se observa inhibición de la aglutinación, co -tecnológico en el campo de la Biología, bási-
pero sí se observa al agregar las mismas concen- camente por su alto grado de especificidad y por-
traciones de hCG. Sin embargo, los mismos que al aislar varios anticuerpos monoclonales es-
anticuerpos se unen a ambas hormonas en ensa- pecíficos para diferentes epítopos de un antígeno,
yos tipo ELISA directo. se puede conocer la estructura y función de dife-
rentes partes de una molécula o tipos celulares.
4.2. Avidez y Afinidad Por ejemplo, se han usado en la purificación y ca-
racterización de receptores de hormonas y facto-
La avidez y afinidad de un antisuero es una res de crecimiento, con sus respectivos ligandos;
propiedad promedio del conjunto de anticuerpos en el estudio de vías metabólicas y las enzimas
específicos que lo componen, sin embargo, los involucradas; en el estudio de la estructura y fun-
anticuerpos monoclonales responden a las carac- ción de numerosas proteínas; en el conocimiento
terísticas de un único componente, cuya avidez y de la organización del citoesqueleto y de la matriz
afinidad dependerá del grado de inmunización del extracelular; en el desarrollo embrionario de di-
animal de experimentación utilizado como fuente versos organismos, permitiendo identificar
de linfocitos B y del método de selección utiliza- antígenos de diferenciación; en la clasificación y
do durante su preparación. Un ejemplo ilustrati- caracterización de numerosas bacterias y sus toxi-
vo de esta información se encuentra en el desarro- nas; en la caracterización de proteínas de virus que
llo de anticuerpos monoclonales para tipificar gru- infectan humanos; y así, la lista podría extenederse
pos sanguíneos humanos mediante aglutinación. largamente.
Los anticuerpos aglutinantes por excelencia, son Sin embargo, uno de los campos de la biolo-
los que se producen masivamente en la respuesta gía donde los hibridomas secretores de anticuerpos
primaria contra un antígeno y que corresponden a monoclonales han tenido mayor impacto ha sido
la clase IgM, cuyas características fundamentales en el estudio del sistema inmune al permitir, por
son su gran tamaño y gran avidez. Pues bien, sólo ejemplo, conocer los mecanismos genéticos
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Sin título-2 729 5/26/06, 10:26 AM

involucrados en la generación de la diversidad de y para la prevención del rechazo de trasplantes.
los anticuerpos, en la caracterización del Entre esta familia de anticuerpos, se destaca el
microambiente tímico y, especialmente, en el aná- anticuerpo anti-CD3 denominado OKT3, que ha
lisis del linaje de las células B y T mediante la sido extensamente utilizado en pacientes trasplan-
identificación de marcadores de superficie espe- tados y que fue uno de los primeros anticuerpos
cíficos. Éstos han permitido reconocer, aislar y de ratón “humanizado” por las razones que expli-
cuantificar subpoblaciones celulares, como en el caremos más adelante en este capítulo. Más re-
caso de los anticuerpos monoclonales anti-CD3, cientemente, se ha desarrollado un anticuerpo
anti-CD4 y anti-CD8, además de un conjunto de monoclonal murino, denominado anti-Tac, con-
otros marcadores. Es importante mencionar tam- tra un receptor particular de Il-2, Il-2Rα. Este re-
bién, el desarrollo de numerosos anticuerpos ceptor no se encuentra en células normales, se
monoclonales específicos contra moléculas del expresa en una población de células T envueltas
Complejo Principal de Histocompatibilidad de en rechazo de trasplantes, en células T que me-
clases I y II. dian enfermedades autoinmunes y también, en
Entre los aspectos de activa investigación con ciertas leucemias y linfomas producidos por el
los anticuerpos monoclonales, se encuentra su uso retrovirus HTVL-I. El monoclonal anti-Tac ha sido
en la construcción de biosensores y también la po- humanizado (Hu-anti-Tac), siendo utilizado
sibilidad de utilizarlos como enzimas, de ahí su exitosamente en la inmunoterapia de algunas
denominación como anticuerpos catalíticos. Se leucemias adultas muy agresivas producidas por
han producido anticuerpos monoclonales especí- el virus HTVL-1. Se postula que el anticuerpo
ficos de haptenos, que tienen capacidad catalítica previene la interacción de Il-2 con Il-
en ciertas reacciones que son caracterizadas por 2Rα+llevando a una deprivación de la citoquina
estados de transición semejantes a las formas esque induce a la muerte de la célula tumoral por
tables del hapteno, tanto por su geometría apoptosis.
molecular como carácter electrónico. Este tipo
de anticuerpos tienen un potencial ilimitado de b) Anticuerpos monoclonales para el tratamiento
aplicación en química y biomedicina. Por ejem- de infecciones bacterianas, que inhiben la acumu-
plo, ellos podrían proteger células normales de lación de neutrófilos y así se reduce el daño tisular,
quimiotoxicidad o activar pro-drogas en el sitio por ejemplo, en la meningitis y la injuria por
blanco. reperfusión del miocardio. Recientemente, se han
patentado anticuerpos para la prevención de la
5.2. Medicina infección respiratoria producida por el virus
sincitial y también para prevenir la infección por
Los anticuerpos monoclonales han permiti- citomegalovirus en trasplantados renales.
do un espectacular avance en la medicina a través
del conocimiento de los mecanismos moleculares c) Anticuerpos monoclonales para el tratamiento
de numerosas patologías. Poco después de su crea- del cáncer, dirigidos contra antígenos tumorales
ción, los anticuerpos monoclonales murinos fue- específicos. Por ejemplo, en el caso del antígeno
ron utilizados en el diagnóstico clínico en huma- c-erb B-2 (también conocido como HER-2/neu)
nos, en aspectos como la determinación de hor- sobre-expresado en ciertos carcinomas gástricos,
monas, enzimas, antígenos de grupos sanguíneos pulmonares, mamarios y de próstata, se ha desa-
y de histocompatibilidad, monitoreo de drogas rrollado un anticuerpo humanizado que contiene
terapéuticas, antígenos relacionados con enferme- las regiones determinantes de complementariedad
dades infecciosas y también en la identificación de un anticuerpo monoclonal murino que se une a
de marcadores tumorales, entre otros. Her-2/neu, mejorando significativamente la efi-
Por las propiedades de los anticuerpos cacia de la quimioteraopia con Taxol y
monoclonales, muy pronto se visualizaron las Doxorubicina
posibles aplicaciones terapéuticas de los
anticuerpos monoclonales, que se pueden resumir d) Anticuerpos que se pueden utilizar en la for-
básicamente en: ma inmunotoxinas, es decir, anticuerpos a los cua-
les se les adiciona potentes toxinas de plantas o
a) Anticuerpos monoclonales inmunosupresivos, bacterias -como la Ricina, presente en Ricinus
para el tratamiento de enfermedades autoinmunes communis y Abrus precatorius o la exotoxina
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Sin título-2 730 5/26/06, 10:26 AM

diftérica de Coynebacterium diphtheriae-- para rosas moléculas de interés, con la ventaja de un
que destruyan selectivamente las células que ex- mejor rendimiento: a diferencia de muchos pro-
presan dichos antígenos. cesos químicos de purificación, los antígenos se-
parados mediante columnas de afinidad con
e) Monoclonales como sondas para la localiza- anticuerpos monoclonales mantienen mejor su
ción de tumores y metástasis cuando se les acopla actividad.
radioisótopos de corta vida media, permitiendo una
evaluación dosimétrica precisa de la radioterapia. 6. OTROS TIPOS DE HIBRIDOMAS
5.3. Biotecnología 6.1. Heterohibridomas
La incorporación de la tecnología de Al fusionar un hibridoma secretor de

hibridomas a la investigación, desarrollo y fabri- anticuerpos contra un antígeno, con otro hibridoma
cación de vacunas y especialmente de reactivos o con linfocitos B de un animal inmunizado con-
de inmunodiagnóstico -clásicamente preparados tra otro antígeno, se obtiene un heterohibridoma
con sueros convencionales- produjo una gran reque secreta anticuerpos bifuncionales, capaces de
volución, al simplificar enormemente los proce- interactuar con dos antígenos diferentes, como se
dimientos de producción y control de calidad, ya ilustra en la figura 44-4. Este procedimiento fue
que las propiedades de un anticuerpo monoclonal aplicado pioneramente por Cuello y Milstein para
no cambian en el tiempo; además, porque han per- preparar un anticuerpo que se unía a Peroxidasa y
mitido desarrollar test de diagnóstico de mayor a Somatostatina y se utilizó para la detección
especificidad. Por otra parte, su incorporación en inmunohistoquímica de Somatostatina. Se prepa-
numerosos procesos productivos de la industria ró fusionando un hibridoma de ratón productor de
farmacéutica, alimenticia y petroquímica, entre un monoclonal anti-peroxidasa y linfocitos
otras, han simplificado y rebajado los costos de esplénicos de una rata inmunizada con
procesos conducentes a la purificación de nume- Somatostatina acoplada a Tiroglobulina.
Figura 44-4. Producción de anticuerpos bifuncionales. A: Fusión de dos hibridomas o de un hibridoma y un linfocito B. B:
Reasociación química de fragmentos de anticuerpos diferentes. C: agregación química de anticuerpos completos.
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Sin título-2 731 5/26/06, 10:26 AM

Los anticuerpos bifuncionales se pueden producir linfocitos B periféricos o drenados desde los
también por reasociación química de fragmentos nódulos linfáticos. 2. La inmunización de huma-
monovalentes de anticuerpos, con una desventa- nos con la mayoría de los antígenos no es
ja, es muy difícil disociar cadenas de inmuno- éticamente posible. 3. Las líneas mieloides hu-
globulinas sin provocar algún grado de manas no son tan estables como las de ratón.
desnaturación, con la consiguiente pérdida de ac- Muchas de ellas no son verdaderos mielomas y
tividad del anticuerpo. Sin embargo, un método carecen de suficiente retículo endoplásmico,
alternativo para evitar estos problemas, consiste mitocondrias y aparato de Golgi para una alta pro-
en acoplar anticuerpos completos, como se mues- ducción y secreción de anticuerpos.
tra en la figura 44-4. Frente a todos los problemas señalados ante-
riormente, la estrategia básica de la ingeniería
6.2. Hibridomas humanos genética ha consistido en rediseñar las partes
inmunogénicas de la molécula de anticuerpo y
Las principales razones que impulsaron el de- actualmente, ha llevado a la construcción de los
sarrollo de los hibridomas secretores de diversos tipos de anticuerpos que se muestran en
anticuerpos monoclonales humanos fueron las si- la figura 44-5. Éstos son: Los anticuerpos de tipo
guientes: En primer lugar, los anticuerpos murinos quimérico, en los cuales la región variable de ra-
no son compatibles con los humanos y por lo tan- tón es combinada genéticamente con una región
to, inducen una xenosensibilización en los pacien- constante humana para conservar las funciones
tes: estos producen, por una parte, anticuerpos anti- efectoras del anticuerpo; los anticuerpos de ratón
idiotípicos que disminuyen la eficiencia terapéu- humanizados, en que se trasplantan las regiones
tica del anticuerpo monoclonal, al neutralizar el responsables del reconocimiento antigénico del
sitio de combinación con el antígeno; por otra par- ratón (regiones CDR) en un anticuerpo humano;
te, también producen anticuerpos anti-isotipo, los los anticuerpos con funciones adicionales no in-
cuales aparentemente neutralizan y eliminan de la munes, a los cuales se les puede acoplar una dro-
circulación los anticuerpos terapéuticos, especial- ga o una toxina y, finalmente, los fragmentos Fv
mente en el caso de las IgG. En segundo lugar, para en que las regiones variables de la cadena liviana
algunos antígenos humanos los ratones no tienen y pesada del anticuerpo -que conforman el sitio
repertorio, lo que provoca la ausencia de respuesta activo del anticuerpo- son producidas en bacte-
inmune humoral o la producción de anticuerpos de rias y posteriormente se unen mediante una molé-
muy baja afinidad. Tal es el caso de los antígenos cula ligadora sintética, para mantener la confor-
del sistema Rh de grupo sanguíneo humano. En mación de la región de reconocimiento antigénico.
tercer lugar, la necesidad de substituir o reforzar Estos anticuerpos, son potencialmente los menos
las fracciones globulínicas de uso terapéutico ruti- inmunogénicos y, por su pequeño tamaño, tienen
nario, especialmente debido a la posible contami- la capacidad de penetrar los tejidos del cuerpo que
nación de las preparaciones convencionales de normalmente son restrictivos para moléculas de
anticuerpos humanos con virus como el del SIDA mayor tamaño.
y de la Hepatitis B y C. Finalmente, los anticuerpos Otra forma de producir anticuerpos mono-
monoclonales humanos permitirán conocer las par- clonales alternativa a los hibridomas, es mediante
ticularidades de la respuesta inmune humana y cier- genotecas de expresión en fagos filamentosos -
tos aspectos de la estructura antigénica no percibidos denominados anticuerpos coliclonales- como se
por otros animales. ilustra en la figura 44-6. Se preparan a partir de
Aunque el problema de la xenosensibi- una genoteca de expresión de mRNA de bazo de
lización se controla en parte con drogas animales normales o inmunes. Utilizando
inmunosupresivas, la aproximación radical a este partidores específicos, se obtiene el cDNA corres-
problema surgió gracias al avance de la ingenie- pondiente a las regiones variables (Fv) de los
ría genética y a las técnicas de biología molecular, anticuerpos representados en el mRNA esplénico,
puesto que la producción de hibridomas humanos los que son ligados a un cosmidio que contiene la
presenta serios problemas, entre los que se debe información genética del fago filamentoso y per-
destacar: 1. La fuente de células B; a diferencia mite la expresión de la información genética para
de los ratones, los humanos no pueden ser las regiones variables de una cadena liviana y una
inmunizados repetidamente con un antígeno, por pesada insertadas aleatoriamente. Una vez gene-
lo tanto, los hibridomas humanos se preparan con rados los cosmidios, se reconstituyen las partícu-
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Sin título-2 732 5/26/06, 10:26 AM

Figura 44-5.Tipos de anticuerpos construidos mediante ingeniería genética. A: Anticuerpo quimérico, contiene las regiones
variables de ratón y las regiones constantes de humano. B: Anticuerpo humanizado, se han reemplazado las secuencias génicas que
codifican para las regiones que unen antígeno (CDR) de un anticuerpo humano, por las regiones CDR de un anticuerpo de ratón.
C: Anticuerpo con funciones adicionales no inmunes, en el cual los dominios CH2 y CH3 de la región constante se han substituido
por un gen no relacionado con inmunoglobulinas, que puede ser una droga o toxina. D: Fragmento Fv de un anticuerpo producido
por la transformación de bacterias con un plasmidio que contiene los genes de las regiones variables de la cadena liviana y pesada
(VL y VP) en tándem, separadas por una secuencia codificadora de una molécula ligadora flexible (U), que le permite la formación
adecuada del sitio de combinación con el antígeno y le confiere mayor flexilidad al fragmento.
las virales para su posterior amplificación en bac- con el solo requisito de disponer de los partidores
terias. Los fagos recombinantes expresan en su adecuados. Sin embargo, una limitante importante
superficie en forma funcional los fragmentos Fv de este procedimiento es que en la genoteca de ex-
y de esta manera, es posible seleccionar en forma presión no ocurre el proceso de hipermutación
rápida y eficiente las especificidades presentes en somática que ocurre naturalmente en los animales
la genoteca. Además, con esta tecnología es posi- después de una inmunización y que contribuye al
ble disponer de las regiones del DNA que codifi- aumento de la afinidad de los anticuerpos en la res-
ca para las partes variables de los anticuerpos pre- puesta inmune humoral secundaria. Este problema
sentes en la genoteca, lo que permite reinsertar puede ser solucionado utilizando para construir la
los genes que codifican para las partes variables genoteca mRNA de animales hiperinmunizados.
de los coliclonales seleccionados en plasmidios Actualmente, se investiga activamente en los meca-
que expresan las regiones constantes de cualquier nismos involucrados en la hipermutación somática
clase de anticuerpo. de los genes de inmunoglobulinas, con el propósito
La metodología señalada anteriormente, a di- de reproducir este proceso a nivel de las genotecas
ferencia de la preparación de hibridomas tradiciona- de expresión para lograr la maduración de la afini-
les, puede ser aplicada a cualquier especie animal dad de los anticuerpos in vitro.
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Figura 44-6. Anticuerpos monoclonales preparados en bacterias. En la parte superior de la figura se muestra un elemento
representativo de la genoteca recombinante: el vector, que corresponde a la partícula del bacteriofago filamentoso conteniendo una
molécula de DNA circular de simple hebra con información para las proteínas estructurales del fago y sus elementos de regulación.
En un extremo de la partícula, se encuentran clonadas copias de la proteína menor de la cubierta del fago, codificada por el gen 3’
y en su extremo 5’ han sido insertados los genes que codifican para las regiones variables del anticuerpo (VH y VL). De esta forma,
la secuencia señal natural del gen 3 es retenida y por lo tanto, la proteína de fusión madura tiene el dominio N-terminal del
anticuerpo seguido por la proteína completa del gen 3. Esta proteína de fusión es ensamblada en la partícula del fago, el cual
presenta los fragmentos de anticuerpo sobre su superficie, de la forma que se muestra en el esquema inferior de la figura. Los
anticuerpos pueden ser expresados en la forma de cadenas simples (Fvs) en que VH y VL se unen vía un péptido ligador flexible o
como Fabs, uniendo ya sea VH-CH1 o la cadena liviana al gen 3 y expresando la cadena parental en forma soluble. Los anticuerpos
expresados de esta forma, mantienen las características de unión del anticuerpo original y debido a la exposición del sitio de unión
hacia el medio, permiten su selección por cromatografía de afinidad con el antígeno de interés.
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Capítulo 45
MÉTODOS FUNDAMENTALES DE BIOLOGÍA

MOLECULAR
Claudio Vásquez G. y Enrique González V.
1. Introducción 4.2. El proceso de expresión génica y

2. Bases de la Biología Molecular sus etapas
2.1. El DNA es el material genético 4.3. La expresión diferencial de genes
2.2. Componentes del DNA y su regulación
2.3. Estructura del DNA 5. Métodos de análisis de la expresión
3. Las nuevas tecnologías génica
3.1. Endonucleasas de restricción 5.1. Hibridación “Northern”
3.2. Clonamiento del DNA 5.2. Reacción de la polimerasa en ca-
3.3. Transferencia de “Southern” dena acoplada a la reacción de la
3.4. Transformación de células transcriptasa reversa (RT-PCR)
3.5. Secuenciación de DNA 5.3. Análisis del perfil transcripcional
3.6. Reacción de la polimerasa en ca- mediante el método de
dena “differential display” de mRNAs
3.7. Animales transgénicos y “knock 5.4. Hibridación sustractiva
out” de genes
4. La expresión génica en organismos
eucarióticos
4.1. Estructura de los genes eucarió-
ticos
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RESUMEN
Difícilmente existe una molécula más importante que el DNA. Ella tiene codificada en su
estructura la información hereditaria que determina cómo son, cómo se reproducen y cómo fun-
cionan los organismos vivos. Desde este punto de vista, podemos considerarla la molécula de la
vida.
El desarrollo de técnicas de DNA recombinante y su aplicación a la biología, ha traído
consigo una revolución de conocimientos que ha hecho que la gente de ciencia se replantee una
serie de conceptos acerca del conocimiento que se tiene de los organismos vivos en general.
Prácticamente no existen hoy áreas de la biología experimental moderna que no descansen de
cierto modo en alguna de estas nuevas tecnologías. Dado que la investigación científica en las
ciencias de la vida está sujeta a una dinámica continua, sin duda que este tipo de aproximaciones
(y con seguridad otras por desarrollar) ayudarán a entender mejor el enigma del fenómeno vital.
1. INTRODUCCIÓN codifican la información genética que especifica la

estructura primaria de todas las proteínas de un orga-
Las Ciencias Biológicas han sufrido una ver- nismo vivo. Desde este punto de vista, la unidad fun-
dadera revolución durante las últimas décadas. damental de información de los organismos vivos es
Esto se ha debido, principalmente, al desarrollo el gen, definido como aquel segmento de DNA que
de una serie de metodologías que han permitido codifica la información necesaria y requerida para pro-
una mejor aproximación experimental, para estu- ducir un producto biológico funcional. Este último
diar y comprender los mecanismos y/o estructu- puede ser tanto una proteína como una molécula de
ras moleculares subyacentes a complejos proce- ácido ribonucleico particular.
sos como el crecimiento, metabolismo, diferen- Los procesos más importantes que dan cuenta
ciación y división de la célula. Estas técnicas ade- de la utilización de la información genética por parte
más han posibilitado manipular y modificar in vitro de la célula, están enmarcados en el llamado “Dogma
moléculas claves que se encuentran involucradas Central de la Biología Molecular”, el cual resume las
en dichos procesos. Esto último es importante, rutas generales de flujo de información a través de los
pues de este modo se puede correlacionar la es- complejos procesos celulares de replicación, transcrip-
tructura y función de estas moléculas al observar ción y traducción (figura 45-1).
los cambios que ocurren en un organismo parti-
cular cuando se han reincorporado a él moléculas
que han sido alteradas en el tubo de ensayo.
En forma resumida se describirán los méto-
dos fundamentales de la Biología Molecular. An-
tes se hará una breve reseña de la molécula de DNA.
2. BASES DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR
Entre los “actores” macromoleculares más im-

portantes de la célula se encuentran los ácidos nucleicos
(DNA y RNA) y las proteínas. Ellos son polímeros
Figura 45-1. El Dogma Central de la Biología Molecular. El
lineales compuestos por subunidades nucleotídicas y DNA se replica obteniéndose una copia idéntica, se transcribe a
aminoacídicas, respectivamente. Los ácidos nucleicos mRNA y se traduce en una proteína en los ribosomas.
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2.1. El DNA es el material genético do a partir de 4 desoxirribonucleótidos precurso-
res, los cuales a su vez se encuentran constituidos
Entre las numerosas propiedades de los orga- por una base nitrogenada, un azúcar de 5 átomos
nismos vivos, hay una que es esencial para la con- de carbono (desoxirribosa) y un grupo fosfato.
tinuación de la vida: un organismo debe ser capaz Las bases nitrogenadas son compuestos
de replicarse y para hacerlo, debe poseer una des- heterocíclicos, planares, que derivan de dos com-
cripción completa de sí mismo. Esta descripción es puestos orgánicos parentales, la purina y la
una forma de información, un conjunto de instruc- pirimidina. Las bases púricas que se encuentran
ciones que especifican cada paso necesario para que en el DNA son la adenina y la guanina, mientras
la célula construya una réplica idéntica de sí mis- que las pirimídicas están representadas por la
ma. Como cada generación engendra la siguiente, timina y la citosina (figura 45-2). Las bases se en-
los descendientes han de recibir una copia del con- cuentran unidas covalentemente a través de enla-
junto de instrucciones para que a su vez, puedan ces N-glicosídicos (N1 de las pirimidinas y N9 de
replicarse. En una célula, la información necesaria las purinas) al carbono 1’ de la desoxirribosa. El
para replicarse se encuentra en el material genético grupo fosfato entretanto, se encuentra esterificando
como una macromolécula llamada DNA. el carbono 5’ del azúcar.
Los desoxirribonucleótidos son así compues-
2.2. Componentes del DNA tos solubles que, en soluciones acuosas, absorben
fuertemente la luz ultravioleta en la región de 260
Este material genético celular, el ácido nm. Es esta propiedad, precisamente, la que es ex-
desoxirribonucleico, es un biopolímero ensambla- plotada para cuantificar la concentración de ellos
Figura 45-2. Componentes de los ácidos nucleicos. Una base nitrogenada (purina o pirimidina) más un azúcar (ribosa o 2’
desoxirribosa) forman un nucleósido, que al unírsele una molécula del ácido fosfórico forma un nucleótido, los cuales estructuran
los ácidos nucleicos (DNA y RNA). Se muestran las estructuras de las bases nitrogenadas y azúcares.
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(y por ende, de ácidos nucleicos en general) en sintetizar el ácido nucleico en cuestión. Ésta agre-
una fracción de material biológico determinada. ga, normalmente, sólo la base correcta, la cual es
especificada por la hebra molde durante la
2.3. Estructura del DNA elongación de la hebra nueva. Es precisamente la
constancia y especificidad de este apareo de ba-
En la estructura primaria del ácido desoxirri- ses complementarias lo que constituye la base de
bonucleico, los nucleótidos se encuentran enlaza- la función del DNA como depositario de la infor-
dos entre sí a través de puentes de grupos fosfato mación genética.
formando largas cadenas. Específicamente, el gru- Una característica crucial de la estructura
po 5’ OH de la desoxirribosa de un residuo está general del DNA es que ella es independiente de
unido al grupo 3’ OH del azúcar del nucleótido la secuencia particular de los nucleótidos consti-
precedente a través de un enlace fosfodiéster. To- tuyentes, la cual a su vez es importante no sólo en
dos los enlaces de este tipo en el DNA tienen la el sentido de la estructura per se, sino que ella
misma orientación a lo largo de la cadena, dándo- define la secuencia de aminoácidos que constitu-
le a ésta una polaridad con extremos 5’ y 3’ bien ye el correspondiente polipéptido. La relación
definidos. Cadenas de estas subunidades de DNA entre la secuencia del DNA y la secuencia de la
existen como dos hebras asociadas en polaridad proteína correspondiente se conoce como código
opuesta con respecto al esqueleto azúcar-fosfato genético.
(antiparalelas), enrolladas una alrededor de la otra
formando una estructura de doble hebra o dúplex
(figura 45-3). 3. LAS NUEVAS TECNOLOGÍAS
Muchos métodos de amplia utilización en la-

boratorios de Biología Molecular en general, sa-
can partido de la relativa simpleza de los sistemas
celulares procarióticos como las bacterias. En
procariotes, la secuencia lineal de DNA se corres-
ponde directamente con las secuencias lineales del
RNA y la proteína. Sin embargo, en eucariotes la
información que determina una proteína en el DNA
posee a menudo interrupciones (intrones) en la
secuencia traducible. El DNA eucariótico es así
primero copiado en un transcrito primario (RNA
heteronuclear, ARNhn), el cual es procesado en el
núcleo por escisión de las secuencias que deter-
minan la proteína (exones). Éstos son unidos
linealmente en el RNA maduro, el cual puede se-
guir siendo procesado antes de ser exportado al
citoplasma para su traducción en la proteína co-
Figura 45-3. Apareamiento específico entre bases comple-
rrespondiente.
mentarias de las hebras antiparalelas del dúplex de DNA.
Adenina (A), timina (T), guanina (G) y citosina (C). El conocimiento y la comprensión de la es-
tructura, función, regulación y organización de
los genes y/o sus productos dentro de la célula,
resultan claves para la realización de un estudio
Ambas hebras del dúplex se asocian establemen- serio de un sistema biológico dado. Como punto
te entre sí, debido al potencial de formación de de partida para ello, el investigador de hoy debe
puentes de hidrógeno entre bases específicas en ser capaz de obtener y estudiar un gen determina-
una hebra con bases definidas en la hebra opuesta do en forma aislada in vitro.
o complementaria. La base adenina aparea siem- En este sentido, el desarrollo de técnicas de
pre con timina (2 enlaces de hidrógeno) y guanina clonamiento molecular del DNA ha provisto de
siempre lo hace con citosina (3 enlaces de hidró- poderosos mecanismos para aislar segmentos dis-
geno). La fidelidad del correcto apareo de bases cretos y únicos de DNA desde una población de
está dada por la maquinaria celular encargada de genes, purificarlos a homogeneidad y amplificar-
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los de modo de producir suficiente material para racterizadas para copiar, cortar y unir fragmentos
realizar análisis genéticos, químicos y específicos de DNA. Luego de hacer que formen
bioquímicos. parte de círculos de DNA autorreplicativos (ge-
neralmente plasmidios bacterianos o algunos vi-
3.1. Endonucleasas de restricción rus), estas moléculas pueden ser introducidas a
células vivas mediante la utilización de técnicas
Muchos de los logros de la genética relativamente simples de practicar, aun cuando no
molecular en las últimas décadas se deben al des- siempre bien comprendidas. Luego de múltiples
cubrimiento de un tipo especial de enzimas, de- ciclos de duplicación celular, las moléculas
nominadas endonucleasas de restricción. Estas son híbridas pueden ser reaisladas y purificadas, ge-
enzimas aisladas de bacterias que tienen la habili- nerando cantidades suficientes del material
dad de hidrolizar el ácido desoxirribonucleico en clonado (figura 45-5).
secuencias bien definidas, generando fragmentos Una vez que se dispone del segmento de DNA
discretos de DNA. aislado y purificado, se puede determinar rápida-
Los segmentos de DNA generados por una mente su secuencia nucleotídica, lo cual lleva a la
enzima particular, pueden ser separados en base a predicción de la secuencia de la proteína codifi-
sus tamaños relativos por electroforesis en geles cada. La marcación radiactiva de este fragmento
de agarosa o poliacrilamida, desde donde los frag- le permite al experimentador buscar copias de se-
mentos individuales pueden ser aislados y purifi- cuencias relacionadas en genomas complejos o
cados (figura 45-4). Con los datos obtenidos se mRNA entre más de un millón de secuencias no
puede construir un mapa físico que representa una relacionadas. Un ejemplo de ello ha sido el
verdadera "huella digital molecular" del ácido clonamiento, expresión y producción comercial de
nucleico en cuestión. interleuquinas.
Haciendo ingeniería del DNA clonado se pue-
3.2. Clonamiento del DNA de permitir su expresión en bacterias o levaduras u
otras células eucarióticas, convirtiéndose en fuen-
En general, el proceso de clonamiento se basa tes abundantes de grandes cantidades de proteínas
en llevar a cabo determinadas reacciones puras, las que pueden tener una gran importancia
enzimáticas en el laboratorio, utilizando general- médica y/o económica y que podrían ser difíciles
mente enzimas bacterianas específicas y bien cade conseguir por otros medios más tradicionales.
Figura 45-4. Las enzimas de restricción hidrolizan el DNA en secuencias muy específicas. Aquí se muestra el caso de la
enzima Bst VI, que corta el DNA cada vez que en él está presente la secuencia indicada, generando extremos cohesivos comple-
mentarios (a). Esto posibilita la creación de moléculas híbridas de DNA al permitir el apareamiento específico entre diferentes
ADNs que han sido previamente tratados con la misma enzima (b).
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Figura 45-5. Clonamiento del DNA. El DNA a clonar es unido covalentemente a una molécula “portadora” llamada vehículo o
vector de clonamiento, la que puede ser un DNA plasmidial o viral. Una vez obtenida la molécula de DNA híbrida, ésta es
introducida por transformación a células que han sido preparadas para el efecto, las que luego son presionadas para desarrollarse
en un medio que contiene el antibiótico particular. De este modo, sólo aquellas células que hayan incorporado moléculas conte-
niendo el gen de resistencia (y el DNA clonado) podrán desarrollarse.
También se pueden concebir en el laborato- ellos) pueden ser fácilmente identificados (fi-
rio versiones alternativas del DNA clonado, ya sea gura 45-6).
cambiando su estructura y/o secuencia. Estas cons-
trucciones pueden ser reintroducidas en células ais- 3.4. Transformación de células
ladas o en animales vivos para estudiar los resul-
tados de estos cambios (mutaciones) hechos por Moléculas de DNA que han sido manipu-
el hombre y así tratar de entender más cabalmente ladas in vitro, pueden ser introducidas de una
el complejo fenómeno del funcionamiento y de la forma relativamente fácil a células que han sido
regulación de la expresión génica. preparadas para tal efecto. Clásicamente, en el
caso de bacterias esto se logra tratando pre-
3.3. Transferencia de “Southern” viamente las células con soluciones de cloruro
de calcio. En el caso de eucariotes, el mismo
Los fragmentos de DNA que han sido resuel- efecto se consigue depositando sobre una
tos en un gel de agarosa por ejemplo, pueden monocapa de células el DNA a introducir, con-
ser desnaturados y transferidos a filtros de ni- juntamente con sales de fosfato de calcio o
trocelulosa u otro soporte sólido donde que- mediante el uso de ciertos virus que actúan
dan inmovilizados. De este modo, mediante como vectores.
la utilización de sondas específicas de DNA
marcadas, genes determinados (o partes de
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Figura 45-6. Método de transferencia (“blotting”) de “Southern”. Esta metodología permite realizar análisis de hibridación
DNA-DNA. Para ello, muestras de DNA de un espécimen dado son hidrolizadas utilizando enzimas de restricción y sometidas a
electroforesis en geles de agarosa. Los fragmentos resueltos en el gel son desnaturados y transferidos a un soporte sólido, usual-
mente membranas de nitrocelulosa, donde los fragmentos de DNA de una hebra quedan inmovilizados. Mediante el uso de sondas
específicas es posible determinar la existencia de secuencias homólogas en el material analizado.
El método ha resultado además una poderosísima herramienta para el análisis de genomas complejos, como el genoma eucariótico.
Permite determinar con precisión la existencia y el número de sitios de reconocimiento para endonucleasas de restricción en un gen
determinado (los cuales son de mucha utilidad como puntos de referencia moleculares), además del número de copias de ése y
otros genes en el genoma. Por otro lado, en combinación con el uso de varias enzimas de restricción, el método de transferencia de
“Southern” resulta muy útil para determinar pequeñas variaciones o “polimorfismos” en determinados genes.
3.5. Secuenciación del DNA rrollados para alcanzar este objetivo, siendo este
último el de mayor aplicación. Aun cuando am-
La determinación del orden (secuencia) de bos métodos difieren en su parte operativa, ellos
los desoxirribonucleótidos en la cadena del DNA, se basan en el mismo principio: la generación de
resulta de fundamental importancia para conocer fragmentos discretos de DNA en que cada uno
detalles íntimos de la estructura y función de esta contiene un desoxirribonucleótido más que el an-
biomolécula primordial. A partir de ella se puede terior.
deducir la existencia de marcos de lectura abier- En el caso particular del método de Sanger,
tos en una y otra hebra y por lo tanto, de acuerdo se establecen cuatro mezclas de reacción en que
al código genético, la secuencia aminoácida de cada una contiene los 4 desoxirribonucleótidos
la(s) proteína(s) codificada(s). También permite (uno de ellos marcado radiactivamente), el DNA
determinar dónde empiezan y dónde terminan pro- a secuenciar, un iniciador de síntesis específico
cesos como la transcripción y traducción, la (partidor o “primer”), una DNA polimerasa, ade-
existencia de intrones, señales de control y proce- más de un 2’-didesoxirribonucleótido trifosfato
samiento, etc. por tubo. La presencia de estos últimos causará el
Dos métodos, uno químico (Maxam y término de la elongación de las cadenas prematu-
Gilbert) y uno enzimático (Sanger) han sido desa- ramente y al azar, generando segmentos de distin-
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tos largos de DNA. Las mezclas obtenidas son desnaturado térmicamente e hibridado a partidores
posteriormente resueltas por electroforesis en geles cortos (20-31 bases) que son complementarios a
de poliacrilamida en condiciones desnaturantes y las hebras del dúplex a ambos lados de la región
analizadas por autorradiografía (figura 45-7). blanco. Utilizando una DNA polimerasa, se pue-
den extender las cadenas de DNA partiendo de
3.6. Reacción de la polimerasa en cadena los extremos 3’OH de cada partidor. Si la enzima
utilizada es termoestable, el ciclo completo puede
Una de las técnicas más poderosas desarro- ser repetido una y otra vez, desnaturando por ca-
lladas últimamente es la reacción de la polimerasa lor los productos de amplificación y permitiendo
en cadena (PCR), la cual permite amplificar seg- el apareamiento y reinicio de la síntesis de DNA
mentos cortos de DNA genómico. Lo único que (figura 45-8). De este modo, una secuencia cual-
se requiere es conocer la secuencia de desoxirribo- quiera puede ser amplificada más de un millón de
nucleótidos a ambos lados de la región blanco que veces en unos 25-31 ciclos, lo que constituye una
va a ser amplificada. herramienta de elección en el análisis molecular
Brevemente, el DNA a ser amplificado es de numerosos procesos biológicos. Manipulando
Figura 45-7. Determinación de la secuencia de DNA por el método de los didesoxirribonucleótidos de Sanger. El DNA a
secuenciar (generalmente de una hebra) es hibridado a un partidor específico que se encuentra marcado usualmente con 32P en su
extremo 5’. Se adiciona una DNA polimerasa capaz de extender las cadenas y la mezcla se distribuye en cuatro tubos que contie-
nen los 4 dNTPs además de uno de los ddNTP por tubo. Una vez finalizada la reacción, las mezclas de fragmentos marcados se
resuelven por electroforesis en geles muy delgados de poliacrilamida y la secuencia es finalmente leída del gel luego de la corres-
pondiente autorradiografía.
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adecuadamente las condiciones de hibridación de al genoma de una célula viva, es posible mediante
partidores específicos con el templado, el método eventos de recombinación de DNA homóloga en-
puede ser utilizado para detectar mutaciones en tre secuencias que residen en el cromosoma y se-
regiones muy pequeñas y, por lo tanto, resulta ade- cuencias introducidas a la célula. Si la receptora
cuado para identificar diferencias de secuencia en es una célula troncal derivada del embrión,
posiciones bien definidas del genoma. Una recien- pluripotencial, se puede transferir un gen modifi-
te técnica que utiliza estos principios es la cado específicamente por manipulación en el tubo
hibrización de oligonucleótidos alelo-específica. de ensayo a la línea germinal de un organismo vivo
(figura 45-9). Este tipo de células ha sido aislado,
3.7. Animales transgénicos y “knock out” de a la fecha, de embriones de ratón y de hamster y
genes se investiga sobre la posibilidad de obtenerlas a
partir de cerdo, ovejas, vacas, etc. Los animales
Hoy es posible obtener animales transgénicos transgénicos han sido utilizados para un sinnúme-
introduciendo secuencias nuevas de material he- ro de estudios, como por ejemplo: examinar el
reditario en células de la línea germinal del orga- efecto de genes que normalmente no se encuen-
nismo. tran presentes in vivo, para expresar genes norma-
La transferencia de un gen modificado in vitro les en células que normalmente no los expresan,
Figura 45-8. Esquema de la reacción de la polimerasa en cadena (PCR). Esta es una técnica que representa una manera fácil y
eficiente de amplificar enormemente secuencias definidas de DNA (Ver texto).
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para suprimir poblaciones de células específicas los genes que ella posee.
con transgenes que expresan proteínas tóxicas, etc.
Así, los animales transgénicos representan pode- 4.1. La estructura de los genes eucarióticos
rosas herramientas (“tubos de ensayo vivos”) para
expresar genes que pueden ser dirigidos La estructura básica de un gen consta de tres
específicamente a tipos especiales de células o elementos: la región codificadora, la señal con-
tejidos. trol del inicio de la transcripción o promotor
transcripcional y la señal de término de la trans-
cripción o terminador (figura 45-10).
La región codificadora contiene la informa-
ción genética que será transcrita en una molécula
de RNA. Esta información está codificada en una
de las cadenas del DNA (la hebra codogénica) en
tanto que la cadena complementaria (hebra mol-
de) actúa como templado para la generación del
RNA respectivo. En el caso de genes que codifi-
can para proteínas, la región codificadora contie-
ne un marco de lectura abierta (ORF) el que co-
rresponde a una sucesión continua de tripletes de
bases nitrogenadas o codones, comprendido entre
un triplete ATG (inicio del ORF) y un triplete sin
sentido (término del ORF). Esta sucesión de
codones especifica la estructura primaria de la pro-
teína codificada por el gen de acuerdo a la equi-
valencia codón:aminoácido establecida en el có-
digo genético (figura 45-10a). Una característica
importante de algunos genes eucarióticos es la pre-
sencia de intrones. Ellos corresponden a secuen-
cias de DNA sin codificación para aminoácidos
las que se intercalan en la región codificadora ge-
nerando interrupciones dentro del ORF. En con-
secuencia, los genes que contienen tales secuen-
Figura 45-9. Esquema que representa la obten- cias poseen una estructura segmentada en la que
ción de ratones transgénicos. En este caso, se se alternan exones (segmentos que contienen co-
muestra la técnica de microinyección de dificación) e intrones (figura 45-10b). Incluido
pronúcleos. También es posible lograr transferen- dentro de la región codificadora, se ubica el
cias de genes mediadas por retrovirus o por célu- terminador transcripcional. Este elemento corres-
las troncales de la línea germinal del animal. ponde a una secuencia particular de bases, las que
al ser transcritas permiten la formación de una
estructura secundaria en el RNA, la que actúa
como señal de término de la transcripción.
En los genes eucarióticos que codifican para
4. LA EXPRESIÓN GÉNICA EN ORGANIS- proteínas, el promotor transcripcional se localiza
MOS EUCARIÓTICOS previo a la región codificadora, en lo que se deno-
mina región río arriba. Este elemento correspon-
El término "expresión génica" ha sido acu- de a una secuencia particular de bases
ñado para referirse a la sumatoria de eventos que nitrogenadas, la cual al ser reconocida por el sis-
conducen a la aparición del producto codificado tema transcripcional establece el punto de inicio
por un gen determinado (RNA o proteínas), en su de la síntesis de RNA. Su presencia es esencial
forma activa y en el lugar donde ejercerán su rol para la realización del proceso de transcripción.
biológico. En eucariotes, este proceso reviste es-
pecial complejidad a causa de la organización y
estructura tanto de la célula eucariótica como de
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Figura 45-10. Estructura de genes eucarióticos. Dos tipos de genes están presentes en los organismos eucarióticos: genes sin
intrones (a) y genes con intrones (b). P: promotor transcripcional, T: terminador de la transcripción.
4.2 El proceso de expresión génica y sus son transcritos por el sistema de la RNA
etapas. polimerasa II y sus factores de transcripción
asociados. En un primer evento, los factores
En los organismos superiores, la expresión génica de transcripción generales (comunes para to-
es un proceso de alta complejidad que involucra dos los genes transcritos por la RNA
una serie de etapas. Si se considera el caso de genes polimerasa II) reconocen y se unen en forma
que codifican para proteínas, la aparición del secuencial al promotor transcripcional de ta-
polipéptido codificado por un gen particular en su les genes generando el complejo de iniciación.
forma tridimensional activa y en la localización En un segundo evento la RNA polimerasa II
intra o extracelular donde ejercerá su función in- se une al complejo de iniciación y comienza
cluye los siguientes eventos: a) transcripción, b) la síntesis de un RNA complementario a la
procesamiento postranscripcional, c) traducción, hebra molde de la región codificadora, la que
d) procesamiento postraduccional, e) transporte de procede hasta la región del terminador
la proteína y f) plegamiento de la proteína (figura transcripcional. En el caso de genes sin
45-11). intrones, se sintetiza un precursor de mRNA
(pre-mRNA) que contiene un ORF continuo.
a) Transcripción. En el núcleo de la célula Para los genes que contienen intrones se pro-
eucariótica, existen tres sistemas transcrip- ducirá un pre-mRNA, también denominado
cionales. Los genes que codifican proteínas RNA heterogéneo nuclear (hnRNA) el que
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contiene secuencias provenientes tanto de los algunas proteínas mitocondriales y de
exones como de los intrones y por lo tanto el cloroplasto en células vegetales, las proteí-
ORF se encuentra interrumpido. nas localizadas en los diferentes organelos
celulares son codificadas por genes nuclea-
b) Procesamiento postranscripcional. Previo res, realizándose su traducción en el citoplas-
a abandonar el núcleo, el pre-mRNA debe ser ma. En consecuencia, las proteínas sintetiza-
procesado a fin de generar el mRNA maduro. das deben ser dirigidas hacia los diferentes
Tal procesamiento implica, la modificación compartimentos intra o extracelulares donde
de ambos extremos de la molécula a fin de ejercerán su función. Para ello, en la estruc-
aumentar su estabilidad. En el extremo 5´ se tura primaria de cada polipéptido se incluye
produce la reacción de “capping” que hace al una secuencia de aminoácidos que actúa como
mRNA refractario a la acción de señal de destinación. Así, por ejemplo, las pro-
ribonucleasas. En el extremo 3´ se realiza la teínas extracelulares poseen un péptido señal
reacción de poliadenilación o adición de una que indica que ellas deben ser sintetizadas en
cola de poliAMP, razón por la cual los mRNA ribosomas asociados al RE y, por consiguien-
también de denominan RNA poliA+. En el te, son dirigidas hacia la ruta de secreción de
caso del hnRNA se incluye además el proteínas. Por su parte una señal diferente
"splicing" o remoción de las secuencias de opera para dirigir proteínas hacia el núcleo o
RNA provenientes de los intrones a fin de mitocondrias. Estas señales de destinación son
generar un ORF continuo. Una vez conclui- interpretadas por un complejo sistema de
do el procesamiento, el mRNA maduro es transporte que determina finalmente el tráfi-
transferido al citoplasma para su posterior tra- co intracelular de proteínas.
ducción.
f) Plegamiento de proteínas. Esta es última
c) Traducción. El mRNA maduro generado en etapa del proceso de expresión génica y se
la etapa anterior se une al ribosoma, donde el produce en forma coordinada con los even-
mensaje contenido en esta molécula es desci- tos de procesamiento pos traduccional y trans-
frado para sintetizar la proteína codificada. porte. La proteína expresada adopta finalmen-
En este proceso, cada triplete del ORF es inte su estructura tridimensional definitiva, lo
terpretado de acuerdo al código genético para que le permite cumplir con su rol funcional
asignar el aminoácido correspondiente en la en la localización que le corresponde. El ple-
estructura primaria del polipéptido. Depen- gamiento incluye la adopción de la estructu-
diendo del destino final de la proteína a sin- ra terciaria de la proteína a través de la
tetizar, la traducción se verificará en interacción entre los grupos laterales de los
ribosomas libres (proteínas intracelulares) o aminoácidos que la constituyen y, en el caso
en ribosomas unidos al retículo endoplásmico de proteínas que poseen estructura cuater-
(proteínas de membrana o extracelulares). naria, la interacción entre los diferentes
polipéptidos o subunidades que la conforman.
d) Procesamiento postraduccional. Un gran
número de proteínas y polipéptidos celulares
son sintetizados como precursores, por lo que 4.3. La expresión diferencial de genes y su re-
no poseen su estructura tridimensional acti- gulación
va, debiendo ser procesados para cumplir su
función biológica. Las modificaciones Aún cuando todas las células de un organis-
postraduccionales más comunes son: proce- mo poseen la misma información genética, los dis-
samiento proteolítico, adición de carbohi- tintos tipos celulares que lo componen poseen ca-
dratos o glicosilación (proteínas de membra- racterísticas estructurales y funcionales diferen-
na y extracelulares), fosforilaciones, adición tes y por consiguiente poseen un patrón de expre-
de aminoácidos al extremo amino o carboxilo sión génica que les es característico. Cada célula
terminal y adición de grupos prostéticos, ende un organismo expresa sólo aquella fracción de
tre otras. la información genética contenida en su genoma
que le permita producir las proteínas requeridas
e) Transporte de proteínas. Con excepción de para el desarrollo de la función que le es propia,
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Figura 45-11. Etapas del proceso de expresión génica en eucariotes
generando así un perfil de expresión génica tejido cluye a los genes de expresión regulada, esto es,
o célula-específico. Del mismo modo, tal patrón genes cuya expresión no es permanente sino que
de expresión génica puede ser modificado en res- aparece inducida o reprimida en respuesta a con-
puesta tanto a condiciones o señales exógenas (por diciones particulares. No obstante que la regula-
ej. factores medioambientales), como de natura- ción de la expresión de estos genes puede ser ejer-
leza endógena (por ej. programas de desarrollo y cida a varios niveles dentro de este proceso, la gran
diferenciación celular, estableciendo de esta ma- mayoría de los mecanismos regulatorios opera a
nera perfiles de expresión estadio-específicos. La nivel transcripcional. En forma general, tales me-
expresión tejido y/o estadio específica, es lo que canismos involucran la interacción específica en-
se denomina expresión diferencial de genes. tre dos tipos de elementos regulatorios: elemen-
En el contexto anterior, y considerando su tos cis y elementos trans. Los elementos cis, tam-
modo de expresión, los genes pueden ser clasifi- bién denominados “enhancers”, corresponden a
cados en dos grupos. La primera categoría corres- pequeñas secuencias específicas de bases
ponde a los denominados genes "housekeeping", nitrogenadas, generalmente localizadas río arriba
la que incluye a todos aquellos que codifican para de la región codificadora. Tales elementos (adi-
proteínas esenciales para el funcionamiento basal cionales al promotor transcripcional) son caracte-
de la célula por lo que son expresados en forma rísticos de los genes de expresión regulada y no
constante o constitutiva. La segunda categoría in- se encuentran presentes en los genes constituti-
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vos. Por su parte, los elementos trans correspon- cis presente en todos los genes que responderán a
den a un tipo particular de proteínas de unión a la acción hormonal (figura. 45-13a). En forma
DNA, las que al reconocer y unirse a un elemento análoga, otros sistemas de transducción de seña-
cis particular, actúan como factores de transcrip- les involucran la participación de proteínas
ción específicos. La interacción entre ambos ele- quinasas específicas, las que al fosforilar un fac-
mentos facilita la unión de los factores de trans- tor de transcripción determinado producen su ac-
cripción generales y la RNA polimerasa II al pro- tivación, posibilitando su unión a su respectiva se-
motor, induciendo la transcripción del gen some- cuencia blanco en la región regulatoria de los genes
tido a regulación (figura. 45-12). bajo su control (figura. 45-13b)
La unión de los factores de transcripción es- La capacidad de un organismo para respon-
pecíficos a su respectiva secuencia blanco o der a una gran variedad de señales externas e in-
“enhancer” corresponde generalmente a la etapa ternas determina la existencia de una compleja red
final de una vía de transducción de señales. A de vías de transducción de señales y de mecanis-
modo ejemplo, en el mecanismo de activación de mos moduladores de la expresión génica. La di-
la expresión génica por hormonas esteroidales del versidad de sistemas regulatorios que operan en
tipo glucocorticoides la hormona ingresa al cito- un organismo eucariótico requiere de una gran can-
plasma de la célula blanco donde se une a su re- tidad de elementos cis y trans distintos. Estima-
ceptor específico, el que corresponde a un ele- ciones para algunas especies indican que aproxi-
mento trans inactivo. El complejo hormona-recep- madamente el 10% de los genes presentes en su
tor constituye el factor de transcripción activo que genoma codifican para factores de transcripción
migra al núcleo donde se une al GRE específicos.
(“glucocorticoid responsive element”), elemento
Figura 45-12. Interacción entre elementos reguladores cis y trans durante la regulación de la expresión génica.
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Figura 45-13. Mecanismos de activación de la expresión génica en respuesta a señales externas. a) Activación de la transcrip-
ción inducida por hormonas esteroidales y la secuencia de eventos involucrados (etapas 1-5). b) Activación en respuesta a otro tipo
de factores exógenos (hormonas peptídicas, señales de estrés, elicitores, etc.). La secuencia de los principales eventos asociados a
este tipo de mecanismos se describe en las etapas 1-7.
5. MÉTODOS DE ANÁLISIS DE LA EXPRE- 5.1. Hibridación “Northern”

SIÓN DIFERENCIAL DE GENES
Esta técnica se derivó de la hibridación
Dado que la gran mayoría de los mecanis- “Southern” descrita anteriormente en este capítu-
mos regulatorios de la expresión génica operan a lo (3.). En este método lo que se persigue es de-
nivel de la iniciación de la transcripción, los mé- tectar la presencia de un transcrito proveniente de
todos de análisis de la expresión génica más co- un gen específico dentro de la población total de
rrientemente utilizados se dirigen hacia la detec- RNAs presentes en una célula o de un tejido de-
ción de transcritos de RNA específicamente ge- terminado. A diferencia de la hibridación
nerados en tejidos determinados y/o en condicio- “Southern”, el RNA total obtenido desde las célu-
nes particulares. Las técnicas a utilizar varían de- las de un tejido es sometido a un fraccionamiento
pendiendo del propósito del análisis: el estudio de por tamaño mediante electroforesis en geles
la expresión de un gen específico o la determina- desnaturantes de agarosa/formaldehído. Posterior-
ción del perfil global de expresión génica en una mente el RNA fraccionado es transferido a una
muestra determinada. membrana de nailon o un filtro de nitrocelulosa
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Sin título-2 752 5/26/06, 10:27 AM

en forma análoga a como se describe para la 5.2. Reacción de la polimerasa en cadena aco-
transferencia “Southern”. El RNA adherido a la plada a la reacción de la transcriptasa
membrana es sometido a hibridación con una reversa (RT-PCR)
sonda molecular la que generalmente correspon-
de a un fragmento del gen cuya expresión se La asociación de la tecnología de PCR a la
desea analizar y que ha sido marcado reacción catalizada por la enzima transcriptasa
radiactivamente. Tal hibridación es realizada en reversa, ha permitido desarrollar una poderosa he-
condiciones de temperatura y fuerza iónica que rramienta para el análisis de la expresión de un
permitan el apareo de la sonda sólo a moléculas gen en particular. La transcriptasa reversa es una
de RNA con las que posea un alto grado de DNA polimerasa sintetizada en células infectadas
complementariedad. Tras una serie de lavados por retrovirus la que se caracteriza por utilizar
que remueven la sonda adherida en forma mRNA como templado para sintetizar un DNA de
inespecífica la membrana es expuesta a una pla- doble cadena complementario al molde (cDNA).
ca autorradiográfica que permite detectar la pre- En la primera etapa de este método, el RNA poliA+
sencia de secuencias de RNA complementarias (mRNA total) obtenido de las muestras en estudio
a la sonda molecular (figura 45-14). Este méto- es utilizado como molde para sintetizar un cDNA
do, aún cuando posee algunas desventajas, es de cadena simple complementario, utilizando
ampliamente utilizado. Su sensibilidad, baja si como partidor oligodT12-18 (polímero de dTMP de
se compara con otros métodos de reciente desa- 12-18 nucleótidos de largo), el que se aparea con
rrollo, dificulta su aplicación para la detección la extensión de poliadeninas presente en los
de genes débilmente expresados. mRNAs eucarióticos. En esta reacción se obtiene
una colección de cDNAs representativa de todos
los genes expresados en la muestra analizada. En
la segunda etapa se determina si en la población
de cDNAs sintetizados por la transcriptasa reversa
está representado el producto de expresión de un
gen determinado. Para ello la colección de cDNAs
es utilizada como molde en una reacción de PCR
estándar, en condiciones similares a las descritas
anteriormente en este capítulo. Como partidores
para la amplificación del DNA se utiliza
oligonucleótidos de secuencia complementaria a
regiones específicas del gen cuya expresión se
investiga. Los productos de amplificación gene-
rados son analizados por electroforesis en geles
de agarosa o poliacrilamida. La aparición de un
fragmento de DNA del tamaño esperado es indi-
cativo de la efectiva expresión del gen en estudio
(figura 45-15). Las principales ventajas de la téc-
nica descrita son su alta sensibilidad y la rapidez
del análisis.
5.3. Análisis del perfil transcripcional median-

te el método de “differential display” de
mRNAs.
Esta técnica corresponde a una variación del

método de RT-PCR, adaptada para la detección
de grupos de genes cuya expresión es inducida o
reprimida en un tejido específico o en determina-
das situaciones. Para ello es necesario establecer
Figura 45-14. Esquema del método para la detección de la
el perfil de mRNAs presentes tanto en la muestra
expresión específica de genes mediante hibridación
"Northern". problema y contrastarlo con el de una muestra
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Sin título-2 753 5/26/06, 10:27 AM

Figura 45-15. Detección de la expresión específica de genes mediante la reacción de la polimerasa en cadena acoplada a la
transcriptasa reversa (RT-PCR). La detección de transcritos específicos en el tejido 2 es verificada mediante el usos de partidores
específicos para el gen en análisis (GSP1 y GSP2)
control. Ello significa seleccionar dos tejidos di- de cadena simple. A modo de ejemplo, al emplear
ferentes (para el análisis de expresión tejido-es- el partidor T11CG, se seleccionará como molde
pecífica) o bien el mismo tejido sujeto a dos con- para la síntesis de cDNA sólo a los mRNAs que
diciones experimentales distintas (análisis de ex- posean en su extremo 3´ la secuencia 5´-
presión inducida por factores exógenos y …CGAAAAAAAAAAAA-3´, por consiguiente
endógenos). Dado que la cantidad de transcritos los cDNA obtenidos representarán sólo una fracción
distintos presentes en una célula (10-20 mil) ex- de los mRNAs presentes en la muestra analizada.
cede la capacidad de análisis, la población global En la segunda etapa de este método, la
de mRNAs debe ser previamente dividida en subpoblación de cDNAs generada en la reacción
subpoblaciones. Este fraccionamiento se realiza a de la transcriptasa reversa es empleada como
nivel de la síntesis de cDNA por la transcriptasa sustrato en una reacción de PCR. Como partidores
reversa. Para ello se requiere de partidores cuya se utilizan el oligonucleótido T11MN empleado
secuencia nucleotídica corresponde a la estructu- para la síntesis de cDNA y un decámero de se-
ra general 5´-TTTTTTTTTTTTMN-3´, donde cuencia arbitraria (AP), el cual se apareará al azar
M:= A, G o C y N=A, G, C, o T. En consecuencia, sobre el cDNA molde. Los parámetros de ampli-
existen 12 oligonucleótidos posibles, cada uno de ficación y en particular la temperatura de apareo
los cuales se apareará sólo a una fracción del RNA se han modificado respecto de una reacción
poliA+ y generará una subpoblación de cDNAs estándar a fin de maximizar la unión de los
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partidores al molde. La reacción de PCR se realiza tificar grupos de genes expresados diferen-
en presencia de S35-a-dATP a fin de generar frag- cialmente en un tejido determinado y en una con-
mentos marcados radiactivamente. Los productos de dición experimental particular. Existen numero-
amplificación son analizados mediante electroforesis sas variantes de este método, una de las cuales se
en geles desnaturantes de poliacrilamida/urea y ana- describe a continuación (figura 45-17).
lizados mediante autorradiografía (figura 45-16). Los Como en el método anterior se requiere una
resultados que se generan en este análisis correspon- muestra de referencia además de la muestra pro-
den a un perfil parcial de los mRNAs presente en un blema. Ambas muestras son procesadas para la ex-
tejido o tipo celular específico y en una condición tracción y purificación del RNA poliA+. A partir
experimental determinada. La comparación del pa- del RNA poliA+ total de la muestra problema, se
trón obtenido con aquel determinado para otro teji- sintetizan los respectivos cDNAs de doble cade-
do o para el mismo tipo celular pero en diferentes na. Tales cDNA son posteriormente ligados a un
condiciones experimentales, permite identificar los vector de clonamiento molecular e introducidos
genes cuya expresión es inducida o reprimida en cada mediante transformación en células de E. coli, de
situación. acuerdo a los métodos descritos anteriormente en
este capítulo. Se obtiene así lo que se denomina
5.4. Hibridación sustractiva una genoteca de expresión, esto es, una colección
de bacterias que en su conjunto contienen todos
Esta técnica es una alternativa al “differential los genes expresados en la muestra en estudio. Una
display” y como ella se utiliza para detectar e iden- réplica de esta genoteca es transferida a un filtro
Figura 45-16. Identificación de transcritos diferencialmente expresados mediante la técnica de “differential display” de
mRNAs.
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de nitrocelulosa y procesada para hibridación. de expresión específica en la muestra problema.
Paralelamente, una fracción del mRNA de la mues-
tra problema es empleada para sintetizar su res-
pectivo cDNA de hebra simple, generando una LECTURAS SUGERIDAS
colección representativa de todos los mRNAs pre-
sentes en la muestra problema. Esta colección es Alberts, A.; Bray, D.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.
hibridada con un gran exceso de RNA poliA+ de y Watson, J.D., Molecular Biology of the cell, 3rd
la muestra de referencia. En estas condiciones to- Edition, Garland Publishing Inc., New York, 1994.
dos los mRNAs de la muestra de referencia co-
munes con los de la muestra problema se aparearán Brown, T.A., Genomes, Bios Scientific Publish-
con el respectivo cDNA, formando híbridos ers, John Willey & Sons Inc., New York, 1999.
cDNA/mRNA. Los cDNAs correspondientes a
mRNAs específicos de la muestra problema per- Glick, B. y Pasternak, J., Molecular Biotechnology,
manecerán al estado de hebra simple y pueden ser ASM Press, Washington D.C., 1994.
separados de los dúplex cDNA/mRNA. Tales
cDNA son marcados radiactivamente y utilizados Lewin, B., Genes VII, Oxford University Press,
como sondas moleculares para hibridación con los 2000.
filtros de nitrocelulosa que contienen a la genoteca
de expresión. Tras la exposición autorradiográfica, Watson, J.D., Gilman, M.; Witkowski, J. y Zoller,
las señales de hibridación positiva indican la pre- M., Recombinant DNA, 2nd Edition, Scientific
sencia de clones bacterianos conteniendo genes American Books, 1992.
Figura 45-17. Método de hibridación sustractiva para la detección y aislamiento de genes diferencialmente expresados.
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Capítulo 46
GRUPOS DE DIFERENCIACIÓN ANTIGÉNICA
Iván Palomo G., Flavio Carrión A. y Cristián Rodríguez G.
1. Introducción 3.3. Moléculas CD expresadas princi-

2. Estructura de los antígenos de palmente en células T
membrana 3.4. Moléculas CD expresadas princi-
2.1. Proteínas de transmembrana tipo I palmente en células NK
2.2. Proteínas de transmembrana tipo II 3.5. Moléculas CD expresadas princi-
2.3. Proteínas de transmembrana tipo palmente en granulocitos
III 3.6. Moléculas CD expresadas princi-
2.4. Proteínas ancladas a glicofos- palmente en monocitos-macró-
fatidilinositol fagos
3. Moléculas CD asociadas a líneas 3.7. Moléculas CD expresadas princi-
celulares palmente en plaquetas
3.1. Moléculas CD expresadas prin- 4. Familias de moléculas CD
cipalmente en "stem cell" 5. Algunas aplicaciones de la nomen-
3.2. Moléculas CD expresadas prin- clatura CD en Inmunología
cipalmente en células B
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RESUMEN
En este capítulo se muestra los criterios generales utilizados en la clasificación de las molé-
culas CD. Fundamentalmente fue la producción de anticuerpos monoclonales por diferentes cen-
tros y que reconocían las mismas moléculas lo que impulsó a los investigadores a realizar talleres
tendientes a universalizar la nomenclatura a usar.
Como una forma de facilitar la comprensión de las características estructurales de las molé-
culas CD, se describe las cuatro formas en que las proteínas de membrana se orientan en ella o se
unen a la membrana: proteínas de transmembrana tipos I, II y III, y unidas a Proteínas.
Se han descrito más de 240 moléculas CD. De estas moléculas, existen algunas que princi-
palmente se expresan en algunas líneas celulares; a modo de ejemplo: CD19 (LB), CD3 (LT),
CD56 (células NK), CD66a (granulocitos), CD14 (monocitos-macrófagos) y CD61 (plaquetas).
Algunas moléculas CD presentan similitud estructural entre sí y en algunos casos con otras
proteínas no incluidas en esta clasificación. Así hay moléculas CD que integran algunas familias
de proteínas, como por ejemplo: Superfamilia de las Ig, Familia de las lectinas, “Tetra-span
family", etc.
En los últimos años, se ha empezado a usar la nomenclatura CD en clínica, así por ejemplo
se usa en SIDA, inmunodeficiencias primarias, leucemias agudas, etc.
1. INTRODUCCIÓN rar la reactividad de los anticuerpos monoclonales

con células hematopoyéticas de diferentes linajes.
Alrededor de 1980, cinco años después que Los organizadores del taller separaron los
Kohler y Milstein publicaron un método para ob- anticuerpos en una serie de paneles codificados
tener anticuerpos monoclonales a partir de la fu- sobre la base de especificidad putativa de los
sión de células de ratón y una línea celular de anticuerpos. Los paneles fueron distribuidos a in-
mieloma múltiple, se iniciaron los trabajos de pro- vestigadores de 55 laboratorios quienes usaron
ducción de estos anticuerpos en varios centros de los anticuerpos para inmunotipificación, análisis
investigación. de unión cuantitativo, estudios inmunoquímicos
La tecnología de los anticuerpos monoclo- de las estructuras reconocidas por los anticuerpos
nales (ver capítulo 44) revolucionó la clasifica- y estudios funcionales. Los datos obtenidos en los
ción de los antígenos celulares de superficie. La laboratorios fueron tabulados por los organizado-
especificidad de estos anticuerpos permitió iden- res, quienes desarrollaron una nómina tentativa de
tificar y estudiar proteínas de la membrana de especificidades. Los anticuerpos monoclonales
linfocitos, plaquetas, monocitos y granulocitos, que tienen patrones de reactividad similares con
que usando heteroantisueros preparados en cone- varios tejidos, tipos de células y/o moléculas, se
jos no habían sido descritas. asignaron a un grupo de diferenciación ("Cluster
La producción de anticuerpos monoclonales of Diferentiation”, CD), seguido de un número.
en diferentes centros, condujo a que anticuerpos Se agrega un sufijo "w" a los CD que están sien-
con diferente nombre reconocieran una misma modo sometidos a estudio en los talleres o
lécula, debido a que la denominación de los “worshops”. La designación CD también se usa
anticuerpos incluía abreviaciones de los nombres para identificar la molécula que reconoce el anti-
de los investigadores que los producían o de sus cuerpo monoclonal, y en tal caso es más adecua-
instituciones. Esta situación motivó a que en 1982 do hablar de molécula CD. La posterior determi-
se realizara en París el Primer Taller (“workshop”) nación de la función y estructura molecular de
Internacional sobre Antígenos de Diferenciación estos antígenos ha permitido un mayor entendi-
de Leucocitos, que tuvo como propósito compa- miento de las interacciones celulares involucradas
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en la respuesta inmune. puesta inflamatoria. Las bases de datos actualiza-
Los “workshops” sobre CD se organizan en das sobre moléculas CD se puede obtener desde
secciones dedicadas a: a) células B, b) células T, Internet a tráves de algunas de las siguientes di-
c) células NK, d) células mieloides, e) plaquetas, recciones: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/prow/,
f) células endoteliales, g) moléculas de adhesión http://www.immunologylink.com/CDantigen.htm,
y h) receptores de citoquinas. El VI “workshop” www.hlda.org o http://members.aol.com/
realizado en Kobe, Japón en noviembre de 1996 researchd1/rdicdabs/cdindex.htm. Actualmente
privilegió la clasificación de las moléculas CD se han descrito más de 240 moléculas CD (ta-
según participaran en la respuesta inmune y/o res- bla 46-1).
Tabla 45-1. Principales características de los antígenos de grupos de diferenciación (CD)
Designación CD (Sinónimo) Estructura molecular Principal Función

expresión celular
CD1a 43-49 kDa; asociada a Timocitos Molécula MHC clase I

CD1b β2 corticales, asociada a b2m. Puede
CD1c SFIg células participar en la
CD1d dendríticas presentación antigénica.
(incluyendo
células de
Langerhans); LB
(CD1c); epitelio
intestinal (CD1d)
CD2 (T11; LFA 2;receptor 45-58 kDa transmem- Timocitos, LT, Molécula de adhesión,
de eritrocitos de cordero) brana tipo I células NK ligando de CD58(LFA-3);
SFIg activación de LT
CD2R 45-58 kDa LT activados y Epítopo conformacional de
(T11-3) SFIg algunas células NK CD2, dependiente de
activación.
CD3 Complejo de cinco LT, Timocitos Transducción de la señal
(T3; Leu-4) cadenas ( γ, δ, ε, ζ, β) de como resultado del
16-28 kDa c/u reconocimiento antigénico
por LT
CD4 55 kDa; Proteínas LT “helper”, Se une a molécula MHC
(T4) transmembrana tipo I macrófagos y clase II. Transducción de
SFIg células señal vía lck. Receptor de
dendríticas gp120 de VIH-1 y VIH-2.
CD5 67 kDa; Proteínas LT; subpoblación Ligando de CD72
involucrado
(T1;Lyt-1) transmembrana tipo I de células B y En la activación celular
Receptor “scavenger” timocitos y/o adhesión.
CD6 100-130 kDa; Proteínas Subpoblación de Posiblemente juega un rol
(T12) transmembrana tipo I LT; timocitos y en la transducción de
Receptor “scavenger” algunos LB señales
CD7 40 kDa; Proteínas Timocitos, LT, Desconocida. Marcador para
(Gp40) transmembrana tipo I células hemato- células T en LLA y leucemia
SFIg poyéticas pluri- a células indiferenciadas.
potenciales
CD8 Compuesto por dos LT citotóxicos y Adhesión (se une a
(T8; Leu-2; Lyt-2) cadenas de 33-34 kDa subpoblación de moléculas MHC clase I);
expresado como dímeros timocitos transducción de señales
αα o αβ monocitos,
SFIg
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CD9 22-27 kDa; Proteínas Plaquetas, Participa en la agregación
(p24) transmembrana tipo III megacariocitos, y activación plaquetaria
Molécula “tetra-span” monocitos,
células pre-B,
eosinófilos,
basófilos y LT
activados
CD10
(Neural endopeptidasa; 100 kDa; Proteínas Células pre B, LB Metaloproteasa dependiente
“Common Acute Lymphocytic transmembrana tipo II de centros germinales, de Zn que rompe enlaces
Leukemia Antigen” o CALLA) algunos neutrófilos, peptídicos en el extremo
precursores de LT amino de los aminoácidos
y células epiteliales hidrofóbicos. Marcador de
LLA.
CD11a 180 kDa, asociado con Linfocitos, Adhesión: unión a ICAM-1
(cadena α de LFA-1) CD18 forma la neutrófilos, (CD54), ICAM2 e ICAM-3.
integrina LFA-1; monocitos y
Proteínas macrófagos
transmembrana tipo I.
CD11b 170 kDa, asociado con Granulocitos, Ligando de CD54, iC3b y
CD18 forma la monocitos, proteínas de la matriz
integrina CR3. células NK y extracelular.
Proteínas subset de LT y LB
transmembrana tipo I
ver CD11a
CD11c 150 kDa, asociado a Monocitos, Función similar a CD11b.
(p150,95; CR4) CD18 forma integrina macrófagos, Une fibrinógeno
CR4. Proteínas neutrófilos,
transmembrana tipo I células NK y
ver CD11a algunos LT y LB
CDw12 90-120 kDa Monocitos, Desconocida
neutrófilos y plaquetas
CD13 150-170 kDa; Proteínas Granulocitos, Participa en la explosión
(gp150, aminopeptidasa transmembrana tipo II monocitos y oxidativa
N) células mielomonocíticas
CD14 53-55 kDa; Proteínas, Monocitos, Receptor para
(Mo2; gp55) unida a Proteínas I macrófagos, lipopolisacárido (LPS) y
neutrófilos, para el complejo LPS-LBP
algunas LB y (LPS-binding protein)
células dendríticas
CD15 y CD15S Pentasacárido Neutrófilos, Forma parte del grupo
(Lewis X y Sialil ramificado expresado eosinófilos y Sialil Lewis X; ligando
Lewis X) en glicolípidos y monocitos para E-selectina (CD62E)
Proteínass de membrana.
CD15u
(Sulphated CD15)
CD16a 50-65 kDa Células NK, Componente del receptor Fcγ
CD16b granulocitos y macrófagos de baja afinidad: ADCC y
(FcγRIII) activación de células NK
CDw17 Epítopo carboxi- Monocitos, Lactosilseramida
(lactosilceramida) hidratado neutrófilos y
plaquetas
CD18 95 kDa; Proteínas La misma Ver CD11a, CD11b y CD11c
(β2 Integrina) transmembrana tipo I. distribución que
CD11a, CD11b y
CD11c combinado
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CD19 95 kDa; Proteínas Todos los LB y Forma complejo con CD21
transmembrana tipo I sus precursores CR2) y CD81 (TAPA-1).
(B4) SFIg Molécula accesoria de
transducción de señales en
LB
CD20 Heterodímero de tres LB Posible papel en la
(B1; Bp35) cadenas de 33, 35 y 37 regulación de la activación
kDa; Proteínas de LB.
transmembrana tipo I.
Molécula “tetra-span”
CD21
(CR2; Receptor de C3d;
B2)
145 kDa; Proteínas LB, células Receptor para C3d, también
transmembrana tipo I. dendríticas relacionado con el virus de
SF de proteínas de foliculares, Epstein-Barr. Con CD19 y
control del complemento faríngeas y CD81 forma correceptor de
células epiteliales LB
cervicales, algunos
timocitos, y
algunas LT
CD22 135 kDa; Proteínas LB Participa en la adhesión
(BL-CAM) integral de membrana tipo I. celular y activación de LB
SFIg
CD23 45 kDa; Proteínas LB maduras, Receptor de baja afinidad
(FcεRII) transmembrana tipo II macrófagos para IgE. Ligando para los
activados, correceptores CD19,CD21,
células dendríticas CD81.
foliculares y plaquetas
CD24 42 kDa; proteína unida LB y Pre-B, Puede jugar un rol en la
a Proteína tipo I neutrófilos y al inducción de la
menos el 2% de proliferación y/o
los timocitos diferenciación de LB
CD25 α:55 kDa,SP de control LT activados, LB Cadena α del receptor para
(TAC; IL-2Rα) del complemento; y monocitos la IL-2. El receptor de alta
Proteínas de afinidad para la IL-2 está
transmembrana tipo I. compuesto por las cadenas
α (CD25),y β(CD122)
y γ(CD132)
CD26 110 kDa; Proteínas LT y B activados, Dipeptidilpeptidasa IV,
(Dipeptidilpeptidasa IV) transmembrana tipo II macrófagos Proteasa implicada en el
ingreso de VIH a la célula
CD27 110 kDa (55 cada LT maduros, Participa como señal
cadena); Proteínas timocitos coestimulatoria en la
transmembrana tipo I. medulares activación de LT y LB
SP de receptor NGF
CD28
(Tp44) 44 kDa; Proteínas Subpoblación de Receptor para señal
transmembrana tipo I LT y timocitos. coestimuladora (segunda
SFIg LB activados señal). Ligando de CD80
(B7-1) y CD86 (B7-2)
CD29 130 kDa (Integrina β1) Leucocitos Subunidad β1 de integrinas. Asociada a CD49 a forma
VLA-1. Adhesión a las
proteínas de la matriz
extracelular, adhesión
célula-célula.
CD30 105-120 kDa. Proteínas LB y T activados Se asocia a proliferación
(Ki-1) transmembrana tipo I. celular y muerte celular en
SP de receptor NGF líneas celulares de
linfomas.
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CD31 130-140 kDa; Proteínas Granulocitos, Participa en la adhesión
(PECAM-1) transmembrana tipo I. plaquetas, leucocito-endotelio
SFIg células
endoteliales,
monocitos
CD32 40 kDa Monocitos, Receptor Fc de IgG; papel
(FcγRII) SFIg granulocitos, LB, en fagocitosis, ADCC
eosinófilos
CD33 67 kDa; Proteínas Células mieloides Desconocida
transmembrana tipo I y precursores
SFIg mieloides
CD34 105-120 kDa “Stem cells” y Ligando para CD62 (L-
endotelio capilar selectina)
CD35
(CR1) 250 kDa Monocitos, Unión y fagocitosis de
SF de proteínas de granulocitos, partículas opsonizadas con
control del complemento células dendríticas, C3b y C4b
eritrocitos, LB y
eosinófilos
CD36 58-90 kDa; Proteínas Monocitos, Adhesión plaquetaria
(GPIV) transmembrana tipo III plaquetas
CD37 40-52 kDa; proteína LB maduros, Molécula implicada en la
tipo III algunos LT transducción de señales
Familia “tetra-span” monocitos y
granulocitos
CD38 45 kDa; Proteínas Células plasmáticas, Molécula implicada en la
(T10) transmembrana tipo II timocitos, LT y B activación y proliferación
activados celular. También se le
asocia con el metabolismo
del calcio.
CD39 78 kDa Macrófagos, células Puede facilitar la adhesión
dendríticas, LB maduras de LB
y células NK activadas
CD40 Heterodímero de cadenas LB, monocitos, Receptor para señal
de 44 y 48 kDa; Proteínas células dendríticas coestimuladora para LB; se
transmembrana tipo I une al ligando de CD40
SF de receptor NGF (CD40L) presente en LT
CD41
(ProteínasIIb) Heterodímero de 120 y 23 kDa: Plaquetas, megacariocitos Activación y agregación
plaquetaria: receptor de
fibrinógeno y fibronectina
CD42a 17-23 kDa Plaquetas y megacariocitos Adhesión plaquetaria, unión
(GPIX) a factor von Willebrand
CD42b 160kDa (135,23) Ver CD42a
(GPIb-α)
CD42c 22 kDa Ver CD42a
(GPIb-b)
CD42d 82 kDa Ver CD42a
(GPV)
CD43 115-135 kDa (neutrófilos) Leucocitos Participa en la adhesión y
(Sialoforina,leuco-sialina) 95-115 kDa (linfocitos T) (excepto LB en activación de células T. Se
reposo) une a CD54 (ICAM-1)
CD44 80-100 kDa Leucocitos, eritrocitos Receptor de ácido
(Pgp-1; Hermes) hialurónico, involucrado en
metástasis tumoral
CD44R 85-250 kDa Leucocitos, eritrocitos Receptor de ácido
(CD44v; CD44v9) hialurónico, involucrado en
metástasis tumoral
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CD45 180-240 kDa Células epiteliales, Molécula asociada a la
(T200, B220, antígeno monocitos y adhesión celular de los
común leucocitario o LCA) linfocitos leucocitos al endotelio y
activados sitios de inflamación
CD45RO 180 kDa Subpoblación de Isoforma de CD45 la cua lno
LT y LB, monocitos contiene los exones A,B y C.
y macrofagos
CD45RA 205-220 kDa LB, subgrupo de Isoforma de CD45, contiene
(B220) LT CD4 y exón C. Ver CD45
monocitos.
Subpoblación de
LT, LB,
monocitos,
macrofagos,
CD45RB 190-220 kDa granulocitos Isoforma de CD45, contiene
exón B.
CD45RC Isoforma de, contiene exón C.
CD46 56-66 kDa Timocitos, leucocitos, Proteína cofactor de
(MCP) células epiteliales membrana, se une a C3b y
fibroblastos, plaquetas C4b para permitir su
degradación por factor I
CD47 47-52 kDa No tiene tejidos Puede participar en el flujo
(Proteínas47-52; IAP) específicos de cationes en la membrana.
Se asocian a grupo
sanguíneo y Rh
CD47R Amplia Desconocida. Denominación
(MEM-133) antigua: CDw149
CD48 40-47 kDa; Proteínas Leucocitos, Participa en la adhesión
(BLAST-1) unida a Proteínas I epitelio bronquial celular vía CD2
y glándulas salivares
CD49a 210 kDa LT y B activados, Adhesión a colágeno,
(VLA-1), integrina α1 monocitos, laminina. Se asocia a CD29
endotelio
neurovascular
CD49b 160-170 kDa; Proteínas Plaquetas, LT y Adhesión a la matriz
(VLA-2; gpIa) transmembrana tipo I. integrina α2 B, fibroblastos y extracelular: receptor para
células endoteliales colágeno. Se asocia a CD29,
se une a colágeno y
laminina
CD49c
(VLA-3) 125 kDa; Proteínas LB, glomérulos Adhesión a fibronectina,
transmembrana tipo I. renales, tiroides laminina. Se asocia a CD29,
Integrina α3 y algunas se une a colágeno
membranas basales y laminina
CD49d 150 kDa(integrina α4) LT, B, NK, Adhesión a fibronectina, se
(VLA-4) monocitos, eosinófilos, asocia a CD29, HEV de
eritroblastos, timocitos y placas de Peyer y UCAM-1
cultivos mieloides
CD49e Dímero de 125 y 35 kDa, Monocitos, neutrófilos, Adhesión a fibronectina. Se
(VLA-5) asociado a CD29. leucocitos, fibroblastos, une a CD29
Integrina α5. plaquetas, mieloblastos y LT
de memoria
CD49f
(VLA-6) Dímero de 125 y 25 kDa Plaquetas, macrófagos, Adhesión a la matriz
asociado a CD29 monocitos, timocitos, extracelular: receptor para
Integrina α6 LT de memoria aminina. Se asocia a CD29
764
Sin título-2 764 5/26/06, 10:27 AM

CD50 108-140 kDa; proteína Timocitos, LT, B, Ligando para CD11a/CD18
(ICAM-3) transmembrana tipo Y monocitos y granulocitos (LFA-1)
CD51 Heterodímero de 120 y Células endoteliales, Adhesión: receptor para
(cadena α del receptor 24 kDa monocitos, macrófagos, vitronectina, fibrinógeno,
de vitronectina) plaquetas, algunas factor von Willebrand y
células B, osteoclastos trombospondina. Se asocia
y células uterinas a CD61
CD52 21-28 kDa Leucocitos Blanco para inmunoterapia,
(CAMPATH-1) mitogénico
CD53 35-42 kDa; proteína Leucocitos, plaquetas, Transducción de señales
(OX-44; MEM-53) tipo III osteoblastos y osteoclastos
CD54 85-110 kDa; Proteínas Leucocitos y Adhesión: ligando para
(ICAM-1) transmembrana tipo I células endoteliales CD11a/CD18 (LFA-1),
SFIg CD11b/CD18 (Mac-1).
Receptor para rinovirus
CD55 70-73 kDa; Proteínas Todas las células Regulación de la activación
(DAF) transmembrana unida a hematoyéticas del complemento, DAF
Proteínas I (incluidos los (“decay accelerating
eritrocitos)y no factor”), se une a C3b,
hematopoyéticas desensambla convertasas de
C3 y de C5.
CD56 Hetrodímero de 135 y Células NK,células Adhesión homotípica:
(Leu-19) 220 kDa embrionarias, isoforma de moléculas de
mieloblastos, adhesión de células
astrocitos, neurales (NCAM)
epitelio tiroídeo y
subgrupo de LT
CD57 110 kDa. Olígosacarido Células NK, algunos LT, Desconocida
(HNK-1; Leu-7) presente en glicoproteínas unos pocos LB y monocitos
CD58 55-70 kDa; proteína de Muchas células Adhesión: ligando de CD2
(LFA-3) transmembrana tipo I o hematopoyéticas y
unida a Proteínas I fibroblastos
CD59
(MEM-43; LY6; MIRL) 19 kDa; Proteínas unida a Muchas células Regulación de la acción del
proteínas I hematopoyéticas complemento (formación
incluidos glóbulos rojos, MAC); se une a C8 y C9.
endotelio vascular, células
epiteliales y placenta
CD60a Olígosacarido presente Subgrupo de LT, algunos Anticuerpos anti-CD60
(GD3) en glucosidos monocitos y plaquetas proporcionan una Señal
coestimulatoria para LT.
CD60b Olígosacarido presente Subgrupo de LT, algunos Anticuerpos anti-CD60
(9-O-acetyl-GD3) en glucosidos monocitos y plaquetas proporcionan una Señal
coestimulatoria para LT.
CD60c Olígosacarido presente Subgrupo de LT, Anticuerpos anti-CD60
(7-O-acetyl-GD3) en glucosidos algunos monocitos proporcionan una Señal
y plaquetas coestimulatoria para LT.
CD61 105 kDa Plaquetas, macrófagos Desconocida. Se une a
(ProteínasIIIa) megacariocitos, CD51 y CD41
células endoteliales,
osteoclastos y
células uterinas
CD62E 140 kDa, lectina tipo C Endotelio Adhesión de leucocitos al
(ELAM-1; E-selectina) endotelio; se liga a
sialil Lewis x, media el
“rolling” de los neutrófilos
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Sin título-2 765 5/26/06, 10:27 AM

CD62L 150 kDa, lectina tipo C LB, T, y otros leucocitos Adhesión de leucocitos al
(LAM-1; L-selectina) endotelio; se une a CD34,
glyCAM-1, media “rolling”
de neutrófilos
CD62P 140 kDa, lectina tipo C Plaquetas activadas, Adhesión de monocitos y
(P-selectina;GMP-140), células endoteliales y neutrófilos a plaquetas
PADGEM megacariocitos activadas y células
endoteliales, se liga a sialil
Lewis x
CD63 53 kDa Plaquetas activadas, Facilita la adhesión al
(gp53, PMT) monocitos, macrófagos, endotelio activado, proteína
células endoteliales lisosomal translocada a
superficie post activación
CD64 72 kDa; Proteínas Monocitos, macrófagos, Receptor Fcγ de alta
(FcγRI) transmembrana tipo I. SFIg y neutrófilos activados afinidad: participa en la
fagocitosis, ADCC,
y activación de macrófagos
CD65 Carbohidrato, componente Células mieloides, y algunas Participa en la activación
(VIM-2) de ceramida dodesacárido células monociticas, de neutrófilos
granulocitos
CD65s Células mieloides, y algunas Anticuerpos anti-CD65s
(sialil-CD65) células monociticas, inhiben fagocitosis
granulocitos
CD66 a,b,c,d,e 220 kDa, Proteínas Granulocitos, neutrofilos. Participan en la adhesión.
fosforilada, existen c y e: carcinoma de colon Miembro de la familia
variantes (CD66a - e: epitelio de antígeno carcinoembrionario
CD 66e) colon adulto El CD67 ha sido definido
como CD66b
CD68 110 kDa, proteína Monocitos, macrófagos, Molécula inductora de
(KPI) intracelular, macrosialina neutrófilo, linfocitos activación.
grandes, basófilos
CD69 Homodímeros de 28-34 kDa, LT y B activados, Desconocida. Antígeno de
(AIM) Proteínas fosforilada macrófagos y células NK activación temprano
CD70 70, 95, 170 kDa LB y T activados. Ligando para CD27
(Ki-24) Macrófagos
CD71 Homodímero de 90-95 kDa; LB y T activados, Receptor para transferrina:
(T9; receptor de Proteínas transmembrana tipo II macrófagos y células participa en el metabolismo
proliferativas de hierro, crecimiento
celular
CD72 Homodímero de 42 kDa LB Ligando para CD5:
(Lyb-2 (ratón), lectina interacción de LT-LB
tipo C)
CD73 69 kDa; Proteínas de Algunos LB, T, Regula el metabolismo de
(Ecto-5'-nucleotidasa) membrana unida a Proteínas I timocitos, nucleotidos,
algunas células defosforilandolos para
epiteliales y endoteliales permitir su liberación
y células dendríticas
CD74 33/35/41 kDa; LB, monocitos, Asociado con moléculas de
(cadena MHC clase II Proteínas de células dendríticas y MHC clase II recientemente
invariante (g)) transmembrana tipo II LT activadas, sintetizadas
macrófagos, células MHC
clase II.
CD75 53 y 87 kDa LB maduros y Adhesión celular. Ligando
(Lactosaminas) algunos LT para CD22
CD75s
(Alpha-2,6 sialylated
lactosamines)
766
Sin título-2 766 5/26/06, 10:27 AM

CD77
(Gb3, Grupo sanguíneo Pk) Epítopo carbohidratado Células B de centro Puede actuar como receptor
germinal de verotoxina de E. coli y
toxina Shiga de S.
Dysenteriae
CD79a
(Igα, MB1) 33-33 kDa; Proteínas LB Molécula accesoria que
transmembrana tipo I media la expresión de Ig y
la transducción de señales
CD79b 37-39 kDa; Proteínas LB Ver CD79a
(Igβ, B29, IgSF) transmembrana tipo I
CD80 60 kDa; Proteínas Células dendríticas, Coestimulador para la
(B7; B7-1; BB1) transmembrana tipo I LB activados y activación de linfocitos T;
macrófagos ligando para CD28 y CTLA-4
(CD152)
CD81
(TAPA-1, tetraspasmina) 22 kDa; molécula tipo III Variados grupos celulares, Asociado a CD19 y CD21.
incluyendo linfocitos Participa en la activación de
LB
CD82
(R2) 50-53 kDa; Proteínas Epitelio, endotelio y Transducción de señales
transmembrana tipo III linfocitos activados,
leucocitos
CD83
(HB15) 40-43 kDa; Proteínas Algunas líneas celulares Puede participar en la
transmembrana tipo I B y T activadas, células presentación antigénica
dendríticas circulantes
CD84
(2G7, Gr6) 73 kDa Monocitos, linfocitos B Desconocida
circulantes, plaquetas
CD85
(GR4) 120 kDa Células plasmáticas y Existe evidencia de que
dendríticas, LB y monocitos CD85participa en la
activacion de LT. Pertenece
a la familia ILT/LIR
CD86
(FUN-1, GR65, 80 kDa; Proteínas LB activados, células Su unión a CD28 presente
B7-2, B70) transmembrana tipo I dendríticas y monocitos en los LT induce una señal
coestimulatoria mientras
que su unión a CD152
(CTLA-4) induce una señal
inhibitoria
CD87 50-65 kDa; Proteínas LT activados, monocitos Receptor para el activador
(UPA-R) unida a ProteínasI y neutrófilos activados del plasminógeno tipo
uroquinasa
CD88 40 kDa. Neutrófilos, macrófagos, Receptor para el componente
(C5a-R) SF Rodopsina eosinófilos, células mastoides del complemento C5a:
participa en la inflamación
por complemento
CD89 50-70 kDa; Neutrófilos, monocitos, Citotoxicidad dependiente
(FcαR) Proteínas transmembrana tipo I macrófagos, y algunos de IgA (receptor de IgA)
SFIg LT y B
CD90
(Thy-1) 25-35 kDa; proteína unida a Timocitos, LT periféricas Marcador para LT;
ProteínasI (ratón), neuronas, rol en la activación de LT
SFIg protimocitos CD34+
CD91 600/G kDa (515/85) Monocitos Receptor para α2-
(α2M-R) macroglobulina
767
Sin título-2 767 5/26/06, 10:27 AM

CD92 70 kDa Neutrófilos, plaquetas Desconocida
(GR9) y monocitos
CD93 120 kDa Neutrófilos, monocitos Desconocida
(GR11) y células endoteliales
CD94 Dímero de 43 kDa cada unidad Células NK y unas El CD94 está implicado en
(Kp43) pocas LT la inhibición de la célula
NK
CD95 42 kDa; proteína de LT y líneas Participa en la muerte
(APO-1; Antígeno FAS) transmembrana tipo I celulares mieloides celular programada,
ligando tipo TNF
CD96 Formas de 160 kDa; LT activados Desconocida
(Tactile) proteína transmembrana tipo I
CD97 Formas de 74, 80, 90 kDa Monocitos y granulocitos Niveles altos de expresión
(GR1) maduros células activadas de CD97 han sido encontrados
en sitios de inflamación como
piel y pulmones.
CD98 Dímero de 40 y 80 kDa Monocitos, Involucrado en la activación
(4F2, 2F3) cada subunidad; Proteínas células endoteliales, celular. Potencial
transmembrana tipo II LT, B, NK transportador
de aminoácidos
CD99 33 kDa; Proteínas Timocitos, linfocitos Desconocida
(E2; MIC2) transmembrana tipo I periféricos y células
mieloides
CD100 150 kDa LT, B, NK, macrófagos, Asociada a actividad
(BB188, CrR3) monocitos, avisa la AT Pasa y serina quinasa.
expresión en células Coestimula con PMA, CD3
hematopoyéticas y CD2 para inducir
proliferación de LT
CD101 Dímero de subunidades Granulocitos, monocitos Anticuerpos anti-CD101
(BB27; BA27, BPC#4) de 140 kDa y algunos LT inhiben la respuesta T
alogénica
CD102
(ICAM-2) 55-65 kDa; Proteínas Células endoteliales, Ligando para integrina
transmembrana tipo I monocitos y otros leucocitos CD11a/CD18 (LFA-1)
pero no para CD11b/CD18
(Mac-1)
CD103 Dímero de subunidades de Linfocitos intra-epiteliales Junto con la integrina β7,
(HLM-1) 150 y 25 kDa; Proteínas 2-6% linfocitos perífericos, forma un receptor que
transmembrana tipo I y otros tipos celulares facilita la adhesión al
endotelio
CD104 220 kDa; Proteínas Epitelio, timocitos, Forma parte de un receptor
(Integrina β4) transmembrana tipo I unas pocas células para laminina, facilitando
neuronales, linfocitos, la adhesión de células
células tumorales a la matriz extracelular
CD105 Dímero de 95 kDa; Células epiteliales, Jugaría un papel en la
(Endoglina) Proteínas transmembrana macrófagos activados in adhesión.
tipo II vitro, células endoteliales
subset de células
de médula ósea
CD106 90-110 kDa; Proteínas Células endoteliales Receptor para la integrina
(VCAM-1, IgSF) transmembrana tipo I activadas, macrófagos, VLA-4: rol en la adhesión,
células dendríticas, activación linfocítica,
estroma medular hematopoyesis
CD107a 110 kDa; Proteínas Plaquetas activadas Proteína lisosomal de
(LAMP-1) transmembrana tipo I función desconocida
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Sin título-2 768 5/26/06, 10:27 AM

CD107b
(LAMP-2) 120 kDa; Proteínas Plaquetas activadas Proteína lisosomal de
transmembrana tipo I función desconocida
CD108 75-83 kDa; Proteínas de LT activados, Posible función en la
(GR2) membrana unida a Proteínas I algunas células adhesión celular
estromales
CD109 170/150 KDa; Proteínas LT activados, Desconocida
(GR56) de membrana unida plaquetas activadas y
a Proteínas I células endoteliales
CD110 70-95 KDa “stem cells”, Receptores para la
(MPL, TPO R) plaquetas y megacariocitos eritropoyetina
CD111 Células mieloides
(PRR1/Nectin1)
CD112 64-72 kDa Células mieloides, Molécula de adhesión
(PRR2) neuronales, epiteliales intercelular. Receptor 2
y endoteliales relacionado con el
poliovirus (PRR2)
CD114 130 kDa Monocitos, granulocitos, Receptor del factor
(G-CSFR, CSF3R, plaquetas y células estimulador de colonias
HG-CSFR) endoteliales de granulocitos (G-CSF)
CD115 150 kDa; Proteínas Placenta, macrófagos, Receptor del factor
(c-fms) transmembrana tipo I. monocitos y sus estimulador de colonias
SFIg precursores de monocitos (M-CSF)
CD116 70-85 kDa Monocitos, granulocitos, Cadena α del receptor
(GM-CSFRα) células endoteliales, de GM-CSF (CSF-R)
células dendríticas
y fibroblastos
CD117 145 kDa; Proteínas Progenitores Receptor de factor
(c-kit) Transmembrana tipo I hematopoyéticos, “stem cell” (SCF)
SFIg células mastoides,
melanocitos y algunas
células NK
CD118 Amplio espectro celular Receptor del interferón
(INF α,β R) βyα
CD119 90-100 kDa; Proteínas Macrófagos, monocitos, Receptor de IFN-γ
(IFN-γR) transmembrana tipo I LB, células epiteliales,
endotelio y fibroblastos
CD120a 50-60 kDa Muchos tipos celulares, Receptor de TNF α y β
(TNFRI) mayor expresión en
células epiteliales
CD120b 75 kDa; Proteínas Muchos tipos celulares, Receptor de TNF α y β
(TNFRII) transmembrana tipo I mayor expresión en
células mieloides
CD121a 80 kDa; Proteínas LT, timociots, condrocitos, Receptor para IL-1 Tipo I,
(IL-1R, tipo I) transmembrana tipo I células sinoviales, se une a IL-1 α y β
hepatocitos, fubroblastos
CDw121b 68 kDa; Proteínas LB, monocitos y Receptor para IL-1 Tipo II,
(IL-1R, tipo II) transmembrana tipo I macrófagos se une a IL-1 α y β
CD122 75 kDa; proteína LT en reposo, LB Cadena β del receptor de
(IL-2Rβ) transmembrana tipo I (algunas líneas), IL-2
monocitos, y
células NK
CD123 70 kDa Células troncales cadena α+ del receptor
(IL-3R) de médula ósea, de la IL-3
granulocitos,
monocitos,
megacariocitos
769
Sin título-2 769 5/26/06, 10:27 AM

CD124 130-150 kDa; Proteínas LB maduras, LT, Receptor de IL-4
(IL-4R) transmembrana tipo I epitelio, endotelio,
precursores hemopoyéticos
y fibroblastos
CDw125 55-60 kDa Eosinófilos y Receptor de IL-5
(IL-5R) basófilos
CD126 80 kDa; proteína Células plasmáticas, Receptor de IL-6,
(IL-6R) transmembrana tipo I leucocitos, células subunidad α
epiteliales, fibroblastos,
células nerviosas
y hepatocitos
CD127 75 kDa; Proteínas Precursores de LB, Receptor de IL-7
(IL-7R, superfamilias transmembrana tipo I timocitos, LT
de fibronectina tipo II) maduros y monocitos
CDw128a 58-67 kDa Neutrófilos, basófilos, Receptor A de IL-8
(IL-8RA, CXCR1) Monocitos y algunos LT
CDw128b 58-67 kDa Neutrófilos, basófilos, Receptor B de IL-8
(IL-8RB, CXCR2) monocitos, y algunos LT
CD130 130-140 kDa; Proteínas La mayoría de los Receptor de IL-6,
(gp130, IL-6Rβ) transmembrana tipo I leucocitos, células subunidad β
epiteliales, fibroblastos,
hepatocitos y
células nerviosas,
células endoteliales,
LB activados y
plasmocitos
CDw131 120 kDa Células mieloides Cadena β común de para
receptor IL-3, IL-5 y GM-
CSF
CD132 64 kDa Cadena γ común de
(Cadena γ común) LT, LB, células NK, receptores para IL-2,IL-4,
monocitos y granulocitos IL-7, IL-9 e IL-15
“stem cells”
CD133
(AC133)
CD134 48-50 kDa Subpoblación de Adhesión de LT activados.
LT activados Ligando de gp34
CD135 130-150 kDa Subpoblación de Receptor de tirosina
(F1t3/Flk2) células progenitoras quinasa y factor
de crecimiento
CDw136 180 kDa Tejidos epiteliales Receptor de proteína
(MSP-R) estimulante de macrófagos
Cdw137 30 kDa Subpoblación de LT Participa como molécula
(4-1BB) coestimulatoria en la
activación de LT.
CD138 20 kDa Plasmocitos, Ligando para colágeno tipo I
(SYNDECAN-1) células epiteliales
CD139 209,228 kDa LB de centros germinales Desconocida
CD140a 180 kDa Indetectable en la mayoría Receptor α de PDGF
de las células normales
CD140b 180 kDa Subpoblación de células Receptor β de PDGF
endoteliales, células
estromales,
CD141 100 kDa Células endoteliales Participa en la regulación
(Trombomodulina) de la coagulación
770
Sin título-2 770 5/26/06, 10:27 AM

CD142 45 kDa Monocitos activados, El complejo CD142:VIIa
(Factor tisular) células endoteliales inicia la cascada de
activados coagulación
CD143 170 kDa Subpoblación de Enzima convertidora de
(ACE) células endoteliales angiotensina (ACE)
CD144 135 kDa Células endoteliales Molécula de Adhesión
(VE-Cadhesina)
CDw145 25,90,110 kDa Células endoteliales, Desconocida
algunas células estromales
CD146 118 kDa Células endoteliales, Participa en la adhesión de
(MUC18/S-endo) LT activados LT activados
CD147 50-60 kDa Células endoteliales, Potencial molécula de
(Neurotelina/Basigina) monocitos, subpoblación adhesión
de LT, plaquetas,
eritrocitos
CD148 Células hematopoyéticas Desconocida. Tyrosina
(HPTP-ETA/DEP-1) phosphatasa RPTPasa,
tipo III
CD150 75-95 kDa LT,LB, timocitos Molécula coestimulatoria
(IPO-3/SLAM) para LB y células dendríticas.
CD151 27 kDa Plaquetas, células Desconocida
(PETA-3) endoteliales
CD152 44 kDa LT activados, algunos Ligando de CD80 y CD86.
(Proteína-4 asociada a LB activados Regulacdor negativo de la
LT citotóxicos o CTLA-4) activación de los LT
CD153 40 kDa LT activados Ligando de CD30 (CD30L).
(CD30L) Función desconocida
CD154 33 kDa LT activados, mastocitos, Ligando de CD40 (CD40L).
(CD40L) basófilos
CD155 80-90 kDa Monocitos, macrófagos, Receptor del virus polio
timocitos (PVR)
CD156a 60 kDa Monocitos, macrófagos, Desconocida
(ADAM-8) granulocitos
CD156b 100-120 kDa Amplia expresión celular Proteasa dependiente de Zn.
(TACE/ADAM17) Libera las formas solubles de
TNF y TGF-α
CD157 42-45 kDa Monocitos, neutrófilos, Esta molécula tiene
(BST-1) células endoteliales actividad de ADP-ribosil
ciclasa y ADP-ribosa
hidrolasa cíclica
CD158 Células NK Proteína perteneciente a la
familia KIR (“Killer cell
immunoglobulin (Ig)-like
receptors”) presente en las
células NK
CD158a 50-58 kDa Células NK, subpoblación Regulación de actividad
(p58.1, p50.1) de LT de las células NK
CD158b 50-58 kDa Células NK, subpoblación Regulación de actividad
CD158c 50-58 kDa Células NK, subpoblación Regulación de actividad
CD159a Células NK
(NKG2A)
771
Sin título-2 771 5/26/06, 10:27 AM

CD160 27 kDa. Glicoptoteína Células NK y LT Función desconocida. Se
(BY55) CD8+ citotoxicos encuentra alterada en
Hemoglobinuria
nocturna paroxistica
CD161 60 kDa Células NK, subpoblación Regulación de citotoxicidad
(NKR-P1) de LT mediada por células NK
CD162 110 kDa LT, subpoblación de LB, Molécula de adhesión.
(PSGL-1) granulocitos, monocitos Ligando de la P-selectina
CD162R Células NK Desconocida
(PEN5)
CD163 130 kDa Monocitos Desconocida
(KiM4)
CD164 80 kDa LT, monocitos, Molécula de adhesión
(MGC-24) granulocitos,
subpoblación de
LB, células
progenitoras
CD165 37 kDa Células epiteliales tímicas Molécula implicada en la
(AD2/gp37) adhesión timocito-epitelio
tímico
CD166 100 kDa Linfocitos T y B activados, Molécula de adhesión.
(ALCAM) células endoteliales, Ligando de CD6
fibroblastos
CD167a Células epiteliales Receptor tirosina quinasa.
(DDR1) Es activado por colágeno
Adhesión
CD168
(RHAMM)
CD169 Adhesión
(Sialoadhesina)
CD170 Adhesión
(Siglec-5)
CD171 140-230 kDa Células epiteliales Molécula de adhesión
(L1) y mielomonociticas implicada en la
y subsets de LT y LB neurohistogenesis
CD172a Adhesión
(SIRP alpha)
CD173 Desconocida
(Grupo de sangre H tipo 2)
CD174 Desconocida
(Lewis y)
CD175 Desconocida
(Tn)
CD175s
(Sialyl-Tn) Desconocida
CD176
(TF) Células Desconocida
CD177 mieloides
(NB1) Linfocitos Molécula implicada en la
CD178 muerte celular programada
(Ligando del Fas)
CD179a
(Vpre-B) 16-18 kDa Linfocitos pro-B y pre-B Se une a CD179b para
conformar la cadena liviana
necesaria para la
constitución del receptor de
la célula B (BCR)
772
Sin título-2 772 5/26/06, 10:27 AM

CD179b 22 kDa Linfocitos pro-B y pre-B Se une a CD179a para
(Lambda 5) conformar la cadena liviana
necesaria para la
constitución del receptor de
la célula B (BCR)
CD180 95-105 kDa Linfocitos B, monocitos Participa en el
(RP105) y células dendriticas reconocimiento de LPS
CD183 41 kDa LT y subsets de LB y NK Receptor para quimoquinas
(CXCR3) CXC como IP10, Mig y I-
TAC. Se expresa en LT
presentes en los sitios de
inflamación. Efecto
quimiotáctico
CD184 LT y subsets de LB y NK Receptor para quimoquinas
(CXCR4) CXC.
CD195 LT Receptor para quimoquinas
(CCR5) CC
CDw197 LT Receptor para quimoquinas
(CCR7) CC
CD200 Desconocida
(OX2)
CD201
(EPC R) Células endoteliales Desconocida
CD202b Células endoteliales Desconocida
(Tie2, Tek)
CD203c
(NPP3, PDNP3) 270 kDa Células mieloides Enzima que cataliza la
basofilos hidrolosis de
oligonucleotidos.
CD204 Células mieloides
(“Macrophage scavenger R”)
CD205 Células dendríticas
(DEC205)
(“Macrophage mannose R”)
(Langerin)
(DC-LAMP)
(DC-SIGN)
CDw210 Receptor de la IL-10
(IL-10 R)
CD212 Receptor de la IL-12
(IL-12 R)
CD213a1 Receptor α1 de la IL-13
(IL-13 R α1)
CD213a2 Receptor α2 de la IL-13
(IL-13 R α2)
CDw217 Receptor de la IL-17
(IL-17 R)
CD220 Receptor de la insulina
(Insulina R)
CD221 Receptor de IGF1
(IGF1 R)
CD222 250-300 kDa Molécula involucrada en la
(“Mannose-6-phosphate”, internalización de proteínas
IGF2 R) y enzimas hacia los
lisosomas.
CD223
(LAG-3)
CD224
(Gamma-glutamil transferasa)
773
Sin título-2 773 5/26/06, 10:27 AM

CD225
(Leu13)
CD226 65 kDa. Glicoproteína Células NK, plaquetas, Adhesión celular
(DNAM-1, PTA1) monocitos y un subset
de LT
CD227 220-350 kDa Células epiteliales Adhesión y señalización
(MUC.1) celular
CD228
(Melanotransferrina)
CD229
(Ly9)
CD230
(Proteína Prion)
CD231 LT de la LLA-T Función desconocida. Es un
(TALLA-1/A15) marcador específico para la
LLA-T
CD232
(VESP R)
CD233 Células eritroides
(Band 3)
(“Fy-glycoprotein” o DARC)
CD235a Células eritroides
(Glicoforina A)
CD235b Células eritroides
(Glicoforina B)
CD235ab Células eritroides
(Glicoforina A/B
(Glicoforina C/D
CD236R Células eritroides
(Glicoforina C)
(Kell)
(B-CAM)
CD240CE Células eritroides
(Rh30CE)
CD240D Células eritroides
(Rh30D)
CD240DCE Células eritroides
(Rh30D/CE)
(RhAg)
(ICAM-4)
CD243 “Stem cells”
(MDR-1)
CD244 Células NK
(2B4)
CD245 Linfocitos T
(p220/240)
CD246 Linfocitos T
(“Anaplastic lymphoma kinase”)
CD247 Linfocitos T
(Zeta chain)
AcMo, anticuerpo monoclonal; ADCC, citotoxicidad dependiente de anticuerpo; β 2m, Beta 2

microglobulina; CFS, factor estimulador de colonias; , cromosoma; GM, granulocito-monocito; Proteí-
nas, glicoproteína;ProteínasI, glicofosfatidilinositol; HEV, vénula de endotelio columnar; INF g, interferón
gama;+IL, interleuquina; LB, linfocito B; LT, linfocito T; MAC, complejo de ataque a membrana; M,
monocito; SF, superfamília; SFIg, superfamilia de las inmunoglobulinas; TNF, factor de necrosis tumoral.
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Sin título-2 774 5/26/06, 10:27 AM

Actualmente se sabe que la mayoría de las teínas generalmente participan como receptores de
moléculas CD reconocidas por anticuerpos superficie celular y/o ligandos. Varias de ellas per-
monoclonales murinos se expresan en más de una tenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas
línea celular hematopoyética. Otras moléculas CD (SFIg), como por ejemplo las moléculas CD2,
también son expresadas por células no CD4, CD8 y CD19.
hematopoyéticas (ej. células endoteliales, células Las proteínas de transmembrana tipo I, ge-
estromales) que son fundamentales en las respues- neralmente presentan un dominio de transmem-
tas inmune y/o inflamatoria. brana de aproximadamente 25 aminoácidos
hidrofóbicos, seguido por un grupo de aminoá-
cidos básicos. Estos aminoácidos con carga posi-
2. ESTRUCTURA DE LOS ANTÍGENOS DE tiva permiten la unión de estas proteínas a las car-
MEMBRANA gas negativas de los fosfolípidos aniónicos ubica-
dos en la capa interna de la membrana celular.
Las proteínas de membrana se clasifican en cua- El dominio de transmembrana no contiene al-
tro grupos, dependiendo de la orientación de la molé- gunos aminoácidos como arginina, asparragina, áci-
cula en la membrana plasmática o de su unión a ella. do aspártico, ácido glutámico, glutamina, histidina
o lisina, excepto cuando está asociado con el domi-
2.1. Proteínas de transmembrana tipo I nio de transmembrana de otras proteínas de mem-
brana, formando un complejo multimérico. Por
Las proteínas de transmembrana tipo I tie- ejemplo, las proteínas del complejo CD3 y las dos
nen el extremo carboxilo en el interior de la célu- proteínas del TCR (ver capítulo 7).
la y el extremo amino en el exterior de la misma
(figura 46-1). 2.2. Proteínas de transmembrana tipo II
Generalmente estas proteínas tienen una se-
cuencia señal en el extremo amino, la que es re- Las proteínas de transmembrana tipo II tie-
movida luego que la molécula entra al retículo nen una orientación opuesta a las proteínas de
endoplásmico. Posteriormente, si presenta sitios transmembrana tipo I. El extremo amino se en-
de glicosilación, puede ser glicosilada en el apa- cuentra en el interior de la célula y el extremo
rato de Golgi y expresada en la superficie celular. carboxilo en el exterior de la misma (figura 46-2).
La mayoría de las moléculas CD son Entre las moléculas CD que presentan esta estruc-
glicoproteínas de transmembrana tipo I. Estas pro- tura se encuentran CD10, CD13, CD23 y CD26.
Figura 46-1. Esquema de una proteína de transmembrana Figura 46-2. Esquema de las proteínas de transmembrana
tipo I. Estas proteínas tienen el extremo carboxilo orientado tipo II. Estas proteínas presentan su extremo amino orientado
hacia el interior y el extremo amíno hacia el exterior de la hacia el interior de la célula y el extremo carboxilo hacia el
célula. Como ejemplo se muestra la molécula CD4. exterior de la misma, respectivamente.
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Sin título-2 775 5/26/06, 10:27 AM

Estas proteínas a menudo presentan se- nales a través de la bicapa lipídica, para transpor-
cuencias señal para dominios de trans- te de iones o moléculas pequeñas.
membrana que no han sido removidas lo que Un subgrupo de este tipo de proteínas de
permite su remoción y liberación de la super- transmembrana es la denominada “tetra-span
ficie celular. Así, estas proteínas se pueden family” las cuales se caracterizan por cruzar cua-
comportar tanto como antígenos de superficie tro veces la membrana y presentar ambos extre-
y proteínas plasmáticas. mos de la molécula hacia el interior de la célula.
Un ejemplo de esta familia de moléculas es el CD9.
2.3. Proteínas de transmembrana tipo III
2.4. Proteínas unidas a glicofosfatidilinositol
Las proteínas de transmembrana tipo III cru-
zan la membrana celular más de una vez, pudien- Este tipo de proteínas está totamente expues-
do presentar el extremo carboxilo en el interior de to en el exterior de la célula y se une a la bicapa
la célula y el extremo amino en el exterior de la lipídica a través de una unión covalente (vía un
misma, o bien ambos extremos en el interior de oligosacárido específico) a fosfatidilinositol ubicado
la célula (figura 46-3). Entre las moléculas CD en la cara externa de la membrana. A esta unión se
que presentan esta estructura están: CD9, CD20, le llama glicofosfatidilinositol (figura 46-4). Entre
CD36, CD37, CD53, CD63 y CD81. las proteínas que presentan esta estructura se en-
La característica de cruzar más de una vez la cuentran las moléculas CD14, CD24, CD48, CD58
membrana, permite a estas proteínas formar ca- y CD87.
Figura 46-3. Esquema de proteína de transmembrana tipo III. Estas proteínas cruzan la membrana celular más de una vez y
pueden presentar sus extremos carboxilo y amino en dos orientaciones: a) El extremo carboxilo en el interior de la célula y el
extremo amino en el exterior de la misma, y b) ambos extremos en el interior de la célula.
Figura 46-4. Esquema de proteínas ancladas a glicofosfatidilinositol. Este tipo de proteínas se une a la bicapa lipídica de la
membrana celular a través de glicofosfatidilinositol (GPI).
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Sin título-2 776 5/26/06, 10:27 AM

Inmediatamente después de finalizada la sín- tal. Actualmente, estas células son utilizadas en
tesis proteica, la proteína precursora permanece trasplantes las cuales son obtenidas a partir de
unida a la membrana del retículo endoplásmico a sangre periférica, realizando leucoféresis y selec-
través de una secuencia de 15-20 aminoácidos cionando las células CD34+.
hidrofóbicos en su extremo carboxilo mientras que
el resto de la proteína se ubica en el lumen del 3.2. Moléculas CD expresadas principalmen-
organelo. Inmediatamente, una enzima corta la te en linfocitos B
proteína liberándola del segmento hidrofóbico
unido a la membrana mientras que el nuevo extre- Molécula CD10. La molécula CD10, también
mo carboxilo se une a un grupo amino de una conocida como CALLA (“common acute
molécula GPI previamente formada. lymphocytic leukemia antigen”) tiene un peso
molecular de 10 kDa y es miembro de una fami-
3. MOLÉCULAS CD ASOCIADAS A LÍNEAS lia de peptidasas de superficie celular.
CELULARES
Molécula CD19. La molécula CD19 es una
Una de las utilidades de las moléculas CD ha glicoproteína de transmembrana tipo I de 95 kDa
sido el reconocimiento del linaje celular y el (reducida). Es miembro de la SFIg; los dos
estadio madurativo de las células hematopoyéticas, dominios extracelulares que presenta son del tipo
particularmente de los leucocitos. Así por ejem- inmunoglobulinas.
plo el antígeno CD3 identifica a los LT, CD20 a Su expresión está restringida a las células B
los LB, CD66 de los granulocitos y CD61 a las normales y neoplásicas. Se expresa desde el
plaquetas. Sin embargo, la mayoría de los estadio de célula pre-B a célula plasmática.
antígenos son expresados en diferente cantidad por Se asocia no covalentemente con CD21,
varios tipos de células; para la identificación de CD81 y Leu-3, formando un complejo que en
algunos tipos celulares se requiere la identifica- forma independiente del BCR (ver capítulo 6)
ción de dos o más antígenos, lo que actualmente participa en la transducción de señales.
se realiza por citometría de flujo (ver capítulo 31).
En el capítulo 12 se describe las moléculas CD Molécula CD20. La molécula CD20 se encuentra
asociadas a la ontogenia de las células B y T. En el en todas las células B y en algunos precursores de
estudio de las leucemias agudas, linfomas, e LT. Es una fosfoproteína que se expresa en tres
inmunodeficiencias, es particularmente importan- isoformas (33, 35 y 37 kDa) como consecuencia
te conocer la línea celular afectada. de una diferente fosforilación de las serinas y
Además de las moléculas CD asociadas, pre- treoninas existentes en los extremos de la
ferentemente, a ciertas líneas celulares en particu- molécula. Esta molécula presenta cuatro dominios
lar, se han identificado moléculas CD asociadas a transmembrana y los extremos amino y carboxilo
la activación de LB, LT y plaquetas. se encuentran en el citoplasma. A pesar de su
disposición en la membrana, esta molécula no
3.1. Moléculas CD expresadas principalmente integra la familia "tetra-spans". Su estructura
en "stem cells" sugiere que podría actuar como canal iónico,
particularmente de Ca2+.
Molécula CD34. La molécula CD34 es el princi-
pal marcador utilizado en el reconocimiento de las Molécula CD21. La molécula CD21 se expresa
células progenitoras hematopoyéticas o “stem en una subpoblación de células B. Es una
cells”. Se trata de una sialoglicoproteína de glicoproteína de transmembrana tipo I (140 kDa)
transmembrana de 105-120 kDa (reducida). For- que presenta 15 ó 16 dominios de 60-70
ma parte de la familia “cell surface mucin” junto a aminoácidos (extracelular), seguido por un
las moléculas CD43 y CD68. La molécula CD34 dominio de transmembrana y 34 aminoácidos
es potencialmente adhesiva y probablemente intracitoplasmáticos.
interactúa con CD62E (E-selectina) y CD62L (L- La molécula CD21 es el receptor de los
selectina). fragmentos C3d (CR2), C3dg e iC3b del
Las “stem cells” representan un pequeño por- complemento. A tráves de un dominio de unión
centaje de las células de la médula ósea y sangre diferente actúa como receptor del virus Epstein-
periférica. También se encuentran en el hígado fe- Barr. Es miembro de la familia génica de
777
Sin título-2 777 5/26/06, 10:27 AM

reguladores de la activación del complemento, igual que las moléculas CD27, CD30, CD95,
integrada también por las moléculas CD35, CD46 CD120a y CD120b.
y CD55. También participa como ligando de El dominio extracelular presenta cuatro
CD23. Junto con CD19, CD81 y Leu-3, forma repeticiones ricas en cisteina. Es contrareceptor
parte de un complejo que transduce señales al inde CD40L (CD154) que se expresa en los LT
terior de los LB. activados, por lo que está involucrada en la
interacción LB-LT durante el cambio de clase de
Molécula CD22. La molécula CD22 es una inmunoglobulinas.
glicoproteína de transmembrana tipo I de 140 kDa.
Es miembro de la familia sialoadhesina Molécula CD72. La molécula CD72 es una
(sialoadhesina, CD33, glicoproteína asociada a proteína de transmembrana tipo II que tiene la
mielina). Se conocen dos isoformas (α y β); la estructura de un homodímero de 39 y 42 kDa
forma β tiene siete dominios tipo Ig (dos más que (reducida). Junto con las moléculas CD23, CD69
la forma α) y una cola citoplasmática 23 y CD94 integra la familia de lectinas dependiente
aminoácidos más larga que la forma α. de calcio. Puede actuar como ligando de la
La molécula CD22 se expresa en una molécula CD5 expresada en todos los LT y en una
subpoblación de las células B y actúa como una subpoblación de LB.
molécula de adhesión con capacidad de unión para Se expresa en todos los estadios madurativos
ácido siálico de carbohidratos que presentan por de las células B, excepto en las células plasmáticas.
ejemplo las moléculas CD45RO, CDw75 y
CDw76. Molécula CD80. La molécula CD80 es una
proteína de transmembrana tipo I de 60 kDa
Molécula CD23. La molécula CD23 es una (reducida). La región extracelular consiste en un
glicoproteína de transmembrana tipo II de 45-50 dominio tipo variable y un dominio tipo constante
kDa (reducida). Dado que presenta hacia su de Ig; la cola citoplasmática presenta 16
extremo carboxilo un dominio tipo lectina, aminoácidos.
pertenece a la familia de lectinas dependiente de Se expresa en LB en reposo y activados,
calcio, al igual que las moléculas CD69, CD72 y monocitos, células dendríticas y LT activados.
CD94. Actúa como ligando de moléculas accesorias
La molécula CD23 se expresa en una de LT, como son CD28 y CTLA-4 (CD152),
subpoblación de LB. Existen dos formas, FcεRIIa regulando así el desarrollo de la respuesta inmune.
y FcεRIIb las que difieren sólo en el extremo
amino. Continuamente el CD23 está siendo 3.3. Moléculas CD expresadas principalmente
liberado de la superficie celular como un en linfocitos T
polipéptido de 33 kDa que se ha visto actúa como
factor de crecimiento de LB. Molécula CD3. La molécula CD3 es un
heteropentámero formado por las cadenas, γ, δ, ε,
Molécula CD24. La molécula CD24 es una ξ y ζ, que se encuentra asociado al TCR (ver
glicoproteína unida a GPI. Tiene aproximadamente capítulo 7). Se expresa exclusivamente en las
42 kDa (reducida) y está marcadamente células T.
glicosilada. La mayoría de los anticuerpos CD3
Se expresa en células B (desde célula pre-B reconocen la cadena ε del complejo CD3.
hasta célula plasmática) y en granulocitos.
Varias proteínas unidas a la membrana a Molécula CD2. La molécula CD2 es una
través de ProteínasI, entre ellas CD24, se han glicoproteína de transmembrana tipo I de 50 kDa.
encontrado asociadas con proteínas tirosinas La región extracelular consiste en un dominio tipo
kinasas, fundamentales en la transducción de variable y un dominio tipo constante de Ig;
señales y activación celular. presenta una larga cola citoplasmática rica en
prolina y aminoácidos básicos.
Molécula CD40. La molécula CD40 es una La molécula CD2 se expresa en todas las
glicoproteína de transmembrana tipo I de 44-48 células T incluyendo timocitos inmaduros y células
kDa (reducida). Integra la familia de receptores de memoria. Además, se expresa en una
TNF/NGF (factor de crecimiento de nervio), al subpoblación de células NK.
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Sin título-2 778 5/26/06, 10:27 AM

CD2 es el receptor que une eritrocitos de una región bisagra. El segmento citoplasmático
cordero alrededor de los LT formando las de la cadena α presenta un dominio para unión
denominadas rosetas E, fenómeno que dio origen de la tirosina kinasa p56lck.
a uno de los primeros métodos utilizados para La molécula CD8 se expresa en una
reconocer y aislar linfocitos T. subpoblación de las células T, los LTc, y se une a
Es una molécula de adhesión que se une a las las moléculas MHC clase I de las células blanco,
moléculas CD58 (LFA-3), CD48 y probablemente estabilizando la interacción celular.
CD59. Participa en la transducción de señales en
las células T, representando una vía alternativa de Molécula CD27. La molécula CD27 es una proteína
activación de estas células. de transmembrana tipo I de 55 kDa (reducida) que
forma homodímeros unidos por puentes disulfuro.
Molécula CD4. La molécula CD4 es una Es miembro de la familia de receptores TNF/NGF,
glicoproteína tipo I de 59 kDa (reducida) que al igual que las moléculas CD30, CD40, CD95,
pertenece a la superfamilia génica de las Ig. La CD120a y CD120b. El segmento extracelular
región extracelular presenta cuatro dominios tipo presenta dos regiones ricas en cisteína.
Ig y el segmento intracitoplasmático tiene un La molécula CD27 es ligando para la
dominio que une la tirosina kinasa p56lck molécula CD70 que pertenece a la familia TNF
La molécula CD4 se expresa en una (CD30L, CD40L, CD70 y CD95L; L, ligando).
subpoblación de células T, la mayoría LTh. Se ha propuesto que esta interacción CD27/CD70
También puede expresarse en bajas concentracio- podría ser importante en la regulación de los LT y
nes en monocitos y macrófagos. en facilitar la diferenciación a LTc.
Las moléculas CD4 de los LTh se unen a Se expresa en una subpoblación de células T
regiones no polimórficas de las moléculas MHC maduras y de timocitos.
clase II, estabilizando la interacción entre las
células T CD4+ y las células presentadoras de Molécula CD28. La molécula CD28 es una
antígenos (CPA). La molécula CD4 además es el glicoproteína de transmembrana tipo I de 44 kDa
ligando para la gp120 del virus de la (reducida) que forma homodímeros por puentes
inmunodeficiencia humana (VIH). disulfuro. Presenta en la región extracelular un
dominio tipo Ig, por lo que pertenece a la SFIg.
Molécula CD5. La molécula CD5 es una Se expresa en una subpoblación de
glicoproteína de transmembrana tipo I de 67 kDa linfocitos T.
(reducida). Al igual que la molécula CD6 pertenece Esta molécula participa como ligando de las
a la "scavenger receptor family". La región moléculas CD80, CD86 y B7-3. Es una de las
extracelular consiste en tres dominios "scavenger moléculas que participan como señales coestimu-
receptor" ricos en cisteína. ladoras en la activación de células T.
La molécula CD5 se expresa en las células T
y en una población de LB asociada a enfermedades 3.4. Moléculas CD expresadas principalmente
autoinmunes. en células NK
Molécula CD7. La molécula CD7 es una Molécula CD16. La molécula CD16 también lla-
glicoproteína de transmembrana tipo I de 40 kDa mada FcγRIIIa es una proteína de transmembrana
(reducida). La región extracelular consiste en un tipo I de 50-65 kDa (reducida). El segmento
dominio tipo Ig, seguido hacia la membrana de extracelular presenta dos dominios tipo Ig. Actúa
una región O-glicosilada. como receptor de baja afinidad para IgG. Tam-
La molécula CD7 se expresa en una bién se expresa en monocitos activados y
subpoblación de LT inmaduros que corresponden granulocitos.
a precursores pretímicos en la médula ósea.
Molécula CD56. La molécula CD56 es una
Molécula CD8. La molécula CD8 es un glicoproteína de 175-185 kDa. El segmento
homodímero (α/α) o heterodímero (α/β, CD8b) extracelular presenta cinco dominios tipo Ig y dos
unido por un puente disulfuro. La región dominios tipo fibronectina tipo III. Actúa como
extracelular (amino terminal) presenta un dominio una molécula de adhesión homotípica. Tambien
tipo Ig separado del dominio transmembrana por se expresa en LT activados.
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Sin título-2 779 5/26/06, 10:27 AM

Molécula CD57. La molécula CD57 tiene estruc- plaquetas activadas. La molécula CD68 es una
tura de carbohidrato, probablemente unida a va- proteína asociada a lisosomas, que se traslada a la
rias proteínas y lípidos. Tiene un peso molecular membrana celular durante la activación.
de 110 kDa (reducida). Se expresa también en LT
y una subpoblación de LB. Molécula CD91. La molécula CD91 es una
glicoproteína que sufre una ruptura en el aparato
3.5. Moléculas CD expresadas principalmente de Golgi en dos cadenas polipeptídicas, la cade-
en granulocitos na α (85 kDa) y la cadena β (515 kDa), las cuales
no están unidas covalentemente. La cadena α pre-
Molécula CD66. La molécula CD66 es una senta varias copias de varios tipos de dominios:
fosfoproteína de aproximadamente 220 kDa rico en cisteína, factor de crecimiento epidermal
(reducida) marcadamente glicosilada. Integra la y repeticiones de YWTD. Actúa como receptor
familia génica de antígeno carcinoembrionario de varias moléculas, entre otras α2-macroglo-
(ACE). El segmento extracelular presenta cuatro bulina y activadores del plasminógeno.
dominios tipo inmunoglobulina, uno variable y
tres constantes. Como consecuencia de un 3.7. Moléculas CD expresadas principalmente
procesamiento (“splicing”) alternativo del mRNA en plaquetas
se obtienen varias isoformas (CD66a - CD66e).
La molécula CD66 presenta características Molécula CD41. La molécula CD41, también lla-
de una molécula de adhesión y puede unirse a bac- mada GPIIb (GP: glicoproteína), es un
terias. heterodímero de 140 kDa formado por proteínas
de transmembrana. El heterodímero (cadena α
3.6. Moléculas CD expresadas principalmente 120 kDa y cadena β 22 kDa), unido por puente
en monocitos-macrófagos disulfuro, se origina en una ruptura postraduccio-
nal de la proteína.
Molécula CD11b. Las moléculas CD11b tienen La molécula CD41 forma un complejo de-
un peso molecular de 170 kDa y estructuralmente pendiente de calcio con la molécula CD61
son proteínas de transmembrana tipo I. (GPIIIa). Este complejo une proteínas adhesivas
Además de las células monocito-macrófagos, importantes en la hemostasia: fibrinógeno, factor
se expresa en las células NK. Junto con CD18 for- von Willebrand y fibronectina.
ma una molécula de adhesión (CR3) de la familia
de las Integrinas. Molécula CD42a. La molécula CD42a, también
denominada GPIX, es una glicoproteína de
Molécula CD14. La molécula CD14 tiene 53-55 transmembrana de 23 kDa (reducida). Esta
kDa y se une a la membrana a través de GPI. Ade- molécula forma una complejo no covalente
más de los monocitos y macrófagos se expresa en (complejo CD42) con las moléculas CD42a y CD
neutrófilos, algunos linfocitos B y células 42b (unidas covalentemente forman la GPIb) o con
dendríticas. la molécula CD42d (GPV). La molécula CD42a
se expresa sólo en las plaquetas. El complejo CD42
Molécula CD64. La molécula CD64 tiene 75 kDa es responsable de la unión al factor von
y estructuralmente corresponde a una proteína de Willebrand.
transmembrana tipo I. Pertenece a la SFIg y se
expresa en monocitos, macrófagos y neutrófilos Molécula CD42b. La molécula CD42b (GPIb-α)
activados. es una proteína de transmembrana de 135 kDa.
Su función es la de actuar como receptor de En su extremo amino presenta el sitio de unión
alta afinidad de IgG (FcγRI). para el factor von Willebrand. Unida covalente-
mente a la molécula CD42c (GPIb-β) forma la
Molécula CD68. La molécula CD68 es una pro- GPIb. La molécula CD42b se expresa sólo en las
teína de transmembrana de 110 kDA (reducida) y plaquetas.
que se encuentra marcadamente glicosilada. Jun-
to a las moléculas CD34 y CD43 integran la fami- Molécula CD42c. La molécula CD42c (GPIb-β)
lia “cell surface mucin”. Además, al igual que las es una glicoproteína de transmembrana de 22 kDa.
moléculas CD107a y CD107b características de Al unirse covalentemente a la molécula CD42b
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Sin título-2 780 5/26/06, 10:27 AM

(GPIb-α) forma la GPIb. La molécula CD42c se "Tetra-span family". Estas moléculas presentan
expresa sólo en las plaquetas. cuatro dominios transmembrana y ambos
extremos, amino y carboxilo, están en el interior
Molécula CD42d. La molécula CD42d, también de la célula. Integran esta familia las moléculas
denominada GPV es una proteína de transmem- CD9, CD37, CD53, CD63, CD81 y CD82.
brana de 85 kDa (reducida) que al igual que la
molécula CD42a (GPIX) se puede unir a la GPIb "Scanaver receptor family". Las moléculas de
(CD42b-CD42c) y formar el complejo CD42. La esta familia se caracterizan por presentar en la
molécula CD42d se expresa sólo en las plaquetas. región extracelular tres dominios ricos en cisteína.
Entre otras moléculas, se incluyen en esta familia
Molécula CD51. La molécula CD51, también las moléculas CD5 y CD6.
llamada cadena α del receptor de vitronectina
(VnR) es un heterodímero de 125 y 25 kDa Familia de receptores de TNF y NGF. Esta fa-
(reducida) unido por puente disulfuro. El milia la integran CD27, CD30, CD40, CD95,
heterodímero se produce por ruptura postra- CD120a, CD120b.
duccional de la glicoproteína. Puede asociarse no
covalentemente con las integrinas β1 (CD29), β3 Familia de reguladores del complemento.
(CD61), β5, β6 o β8. El complejo αvβ1 une Forman esta familia las moléculas CD21, CD35,
vitronectina, fibronectina y colágeno tipo I; el CD46 y CD55.
complejo αvβ3 (GPIIb-IIIa) une vitronectina,
fibronectina, fibrinógeno, factor von Willebrand, Superfamilia rodopsina. Las moléculas de esta
trombospondina, osteopontina y colágeno; el familia se caracterizan por presentar siete dominios
complejo αvβ5 une vitronectina y αvβ6 une de transmembrana y unirse a proteínas que unen
fibrinógeno. GTP. Las moléculas CD incluidas en la familia
rodopsina son CD88, CDw128a y CDw128b.
Molécula CD61. La molécula CD61, también
denominada cadena β3 de las integrinas y GPIIIa, Familia “cell surface mucin”. Estas moléculas
es una glicoproteína de transmembrana tipo I de se caracterizan por ser proteínas de transmembrana
110 kDa (reducida). La molécula CD61 se puede tipo I que están marcadamente O-sialitizadas
asociar a la molécula CD41 (GPIIb) formando un (ácido sialico). Son miembros de esta familia las
complejo dependiente de calcio (GPIIb-IIIa) y con moléculas CD34, CD43 y CD68
la molécula CD51 (integrina αv) formando el re-
ceptor de vitronectina (αvβ3). Familia sialoadhesina. Las moléculas que
integran esta familia son: sialoadhesina, CD33 y
gp asociada a mielina.
4. FAMILIAS DE MOLÉCULAS CD
Las moléculas CD se pueden agrupar 5. ALGUNAS APLICACIONES DE LA

independientemente de los anticuerpos monoclo- NOMENCLATURA CD EN INMUNO-
nales que las reconocen, en base a su estructura LOGÍA
molecular y/o función. Así, se han descrito entre
otras, las siguientes familias: El advenimiento de la nomenclatura CD,
gracias al desarrollo de los anticuerpos
Superfamilia de las Ig. Estas moléculas se monoclonales y técnicas de la citometría de flujo,
caracterizan por presentar en la región extracelular, la inmunohistoquímica y la biología molecular, se
uno o más dominios tipo Ig. Entre otras moléculas, ha acompañado de una acelerada aplicación de
integran esta familia: CD4, CD8, CD28, CD54 estos marcadores en el campo de la investigación
y CD64. básica y la inmunología clínica. Como se describió
antes, desde un punto de vista conceptual, la
Familia de las lectinas. Las moléculas de esta expresión de estas moléculas en células del sistema
familia presentan en la región extracelular uno o inmune se puede resumir en la presencia de
más dominios tipo lectina. Integran esta familia moléculas de linaje (línea celular), de activación
las moléculas CD23, CD69, CD72 y CD94. y de madurez.
781
Sin título-2 781 5/26/06, 10:27 AM

Las moléculas de linaje son aquellas que definen Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida
en forma mayoritaria y ocasionalmente exclu- (SIDA). Uno de los elementos clásicos en el
yente, un tipo celular; por ejemplo CD4 para LT diagnóstico y seguimiento de pacientes con SIDA
“helper” y CD8 para LT citotóxicos. Estas ha sido la cuantificación de LT CD4+ y LT CD8+.
moléculas pueden aparecer en algún momento del Los valores absolutos de estas subpoblaciones al
desarrollo y a su vez cumplen funciones biológicas igual que su relación o índice CD4/CD8, han sido
definidas, pueden compartirse con otras células utilizados en la determinación de conductas
(ej. CD4 expresada en macrófagos/monocitos) si terapéuticas como inicio de tratamiento anti-
bien con expresión más baja o en un fenotipo retroviral o profilaxis antibiótica. Sin embargo,
morfológico o inmune muy distinto. estudios de seguimiento de series grandes de
pacientes han detectado que estos valores en
Las moléculas de activación suelen expresarse ocasiones anticipan lo suficiente para ser útiles.
frente a estimulación celular y no en forma Durante los últimos años, al ir dilucidándose la
excluyente de un tipo celular (ej. CD25, CD38, patogenia del SIDA donde la activación inmune
CD71). Algunas de estas moléculas suelen ha sido revelada como factor esencial en la
disminuir su expresión en la superficie celular progresión de la enfermedad, se han detectado
frente a un estado de activación celular ya que son cambios precoces en la expresión de marcadores
escindidas y pueden detectarse en forma soluble de activación linfocitarios en adultos y niños
(ej. moléculas de adhesión como la L-selectina infectados por VIH (Ej. CD38 y HLA-DR en LT
(CD62L), o CD23 en linfocitos B. Existe CD8+ y CD62L y CD23 en linfocitos B,
finalmente un conjunto de moléculas que se disminución de expresión de CD25 en LT CD4+
expresan mayoritariamente durante algunas etapas cambio de expresión de CD45RA a CD45RO tanto
del desarrollo de las células inmunes, lo que ayuda en LT CD4+ y LT CD8+) (tabla 46-2).
a definir estadios de madurez celular (ej. CD10,
CD34). Sin embargo, debido al estado biológico Inmunodeficiencias Primarias. El uso de las
de las células inmaduras, es factible detectar con moléculas CD ha permitido clasificar en forma
mayor frecuencia o intensidad algunos marcadores más precisa las diversas inmunodeficiencias
de activación (ej. CD71). primarias, tanto celulares como humorales (tabla
Finalmente, existen moléculas CD que se 46-3). La asociación entre la presencia o ausencia
asocian a la respuesta inmune específica y son de alguna molécula CD ha permitido en ocasiones
expresadas en los linfocitos, y aquellas que dilucidar la función de tal molécula, si ésta se
participan en la inflamación, fundamentalmente desconocía, o bien si ésta se conocía, explicar el
expresadas en granulocitos, monocitos/macrófa- mecanismo subyacente de una inmunodeficiencia
gos y células endoteliales. en particular.
Algunos usos de las moléculas CD en clínica
son los siguientes: Leucemias y Linfomas. Las leucemias son un
grupo heterogéneo de enfermedades resultantes de
Tabla 46-2. Marcadores inmunofenotípicos utilizados en el estudio

y seguimiento de pacientes VIH positivos
Célula Marcadores de Marcadores de

linaje celular activación
Linfocitos T CD3, CD4, CD8 CD25, CD38, CD28, CD69

CD45 RA/RO, HL-DR
Linfocitos B CD19, CD20, CD10 CD23, CD62L, CD69, CD71
Células NK CD16, CD56 CD57
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Sin título-2 782 5/26/06, 10:27 AM

Tabla 46-3. Marcadores CD usados en Inmunodeficiencias Primarias
Disgenesia Reticular CD34

Defecto de LT: Inmunodeficiencia Combinada CD3, CD4, CD8; CD25; CD152
Severa, Anomalía de Di George, otros TCR α/β, TCRδ/γ, CD69, CD132
Deficiencia de LB o Anticuerpos: Agamaglobulinemia CD19, CD20, CD5.
ligada a X, Inmunodeficiencia Común Variable
Síndrome de Hiper IgM CD19/CD40, CD3/CD154
Deficiencias de Células NK CD16/CD56
Síndrome de Wiskott Aldrich CD43
Síndrome de Leucocito Desnudo HLA clase I y II en LT CD4 y LT CD8; CD74
Defecto de Moléculas de Adhesión CD11a,b,c; CD18
una proliferación descontrolada de uno o más tipos esta clasificación es la definición de subgrupos
de células hematopoyéticas. La importancia de de leucemias linfoides, ej. diferenciación T y B, y
clasificar este grupo de enfermedades en distintas requiere de un observador entrenado, siendo
categorías radica en que existen modalidades además de interpretación subjetiva. El uso de una
terapéuticas distintas en cada grupo. Igualmente, inmunotipificación en su mayoría con marcadores
el pronóstico clínico de las distintas categorías sea CD de superficie aporta criterios descriptivos más
esta aguda o crónica, linfoide o mieloide es objetivos de las células leucémicas, en especial si
distinto. Por lo tanto, el propósito de la son evaluados por citometría de flujo (ver capítulo
caracterización de las leucemias es agrupar 31), que puede analizar dos o más marcadores por
pacientes con enfermedades similares para célula en forma simultánea (tabla 46-4).
optimizar la terapia o identificar aquellos pacientes
con peor pronóstico frente a los tratamientos Patología Inflamatoria. En enfermedades
actuales. La forma clásica de clasificar las inflamatorias como las vasculitis, artrítis
leucemias es la Franco-Americana-Británica reumatoídea, lupus eritematoso sistémico, sepsis
(FAB) que utiliza morfología, histoquímica y o rechazo de trasplantes, la pesquisa de la
algunos marcadores de superficie para clasificar expresión de moléculas de activación (CD25,
las leucemias mieloides en M0 a M7, y las integrinas, ICAMs, CD64, etc.) tanto en la
linfoides en L1 a L3. Sin embargo, la limitante de superficie celular de leucocitos periféricos como
Tabla 46-4. Marcadores CD de linaje y no linaje, usados en la inmunofenotipificación de

leucemias agudas
Linfocitos B Linfocitos T Célula mieloide No-linaje
CD19 CD3 CD13 HLA-DR

CD20 CD5 CD33 CD10
CD22 CD7 CD73
CD39 CD38
CD79a,b
* Las leucemias monoblásticas presentan la molécula CD14.
783
Sin título-2 783 5/26/06, 10:27 AM

de tejido, además de la forma soluble en el suero Ochs, H.D., Smith, C.I.E., Puck, J.M., Primary
u otros fluidos, se está incorporando como método Immunodeficiency Diseases- A Molecular Ap-
útil y precoz, y posiblemente específico, para proach, Editorial Oxford University Press, 1999.
determinar reactivación o respuesta a tratamiento
de estas patologías. Estos estudios aún se
encuentran en desarrollo, pero es factible postular Plaeger-Marshall, S. et al., “T cell activation in
que a futuro la determinación de estas moléculas pediatric AIDS pathogenesis: Three-color
serán incluidas en el estudio de todo cuadro immunophenotyping”, Clin Immunol
inflamatorio. Immunopahtol. 71, 19-26. 1994.
Trasplantes: En esta área, actualmente se
monitorea la efectividad de drogas como Rich, R., Clinical Immunology. Principles and
anticuerpos anti-CD3, midiendo los niveles de Practice, Editorial Mosby, 1996.
linfocitos CD3 periféricos, con el fin de controlar
rechazo agudo de trasplantes.
Otra aplicación es la obtención, desde sangre Rodríguez, C. et al., “HIV disease in children is
periférica, de “stem cells” usando como marcador associated with a selective decrease in CD23+ and
la molécula CD34 que expresan estas células. Las CD2L+B cells”, Clin Immunol Immuopatol 81 (2):
“stem cells” son utilizadas en pacientes a los que 191-199. 1996.
debe repoblarse la médula ósea.
Sin duda son numerosas las otras aplicaciones
de estas moléculas en investigación y clínica y Stiehm, E., Immunologic. disorders in Infants
muchas más están por desarrollarse. and Children, 4th Edition, WB Saunders, 1996.
Stockinger, H., Majdic, O. and Knapp, W., “Di-

LECTURAS SUGERIDAS rectory for the human leukocyte clusters of differ-
entiation”, Transfusion 36:268-285, 1996.
Alberts, B., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts,
K. and Watson, J., Molecular Biology of cell,
Chap.10 and 12, Third edition, Garland Publish- Anti-human CD clustered (CD) antibodies. Dis-
ing Inc., USA, 1994. ponible en http://members.aol.com/researchd1/
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Bower, K., Duque, R., Sharkey, T.V., Clinical
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www.immunologylink.com/CDantigen.htm
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Clinical Monogragh Nº 3. Becton Dickinson
Immunocytometry Systems.
784
Sin título-2 784 5/26/06, 10:27 AM

GLOSARIO
ADCC (“Antibody Dependent Cell Mediated Aglutinación indirecta: Aglutinación de partícu-

Citotoxicity"): Citotoxicidad mediada por célu- las o de eritrocitos recubiertos con un antígeno
las dependiente de anticuerpos. Reacción (adsorbido o acoplado químicamente) por
citotóxica en la que células con capacidad lítica, anticuerpos.
portadoras de receptores para Fc, reconocen las
células blanco a través de los anticuerpos especí- Aglutininas frías: Anticuerpos que aglutinan bac-
ficos que recubren a estas últimas. terias o eritrocitos más eficientemente a tempera-
turas inferiores a 37°C.
Adyuvante: Sustancia que intensifica inespecífi-
camente la respuesta inmunitaria frente a un Agretopo: Porción de un antígeno o fragmento
antígeno. antigénico, que interactúa con una molécula MHC.
Adyuvante completo de Freund´s: Emulsión Alelo: Uno de los dos genes presente en un locus,
óleo-acuosa que contiene micobacterias muertas que controlan una característica particular.
y aumenta la respuesta inmune cuando se mezcla
en una emulsión que contiene un antígeno. Alergeno: Agente que provoca una serie de reac-
ciones mediadas por inmunoglobulina E. Ej.: po-
Afinidad: Expresión termodinámica de la fuerza len, polvo, caspa animal, etc.; o por células T como
de unión entre un determinante antigénico es el caso de algunos haptenos. Ej.: el compuesto
(epítopo) y el sitio de combinación del anticuerpo exudado por el litre o compuestos químicos como
(paratopo) y así, de la compatibilidad el dinitrofluorbenceno.
estereoquímica entre ellos.
Alergia (Hipersensibilidad tipo I): Enfermedad
Agammaglobulinemia Ausencia de proteínas o reacción causada por una respuesta inmune a
plasmáticas en la región gamma de una uno o más antígenos ambientales, resultando en
electroforesis de suero sanguíneo. inflamación tisular y disfunción orgánica.
Aglutinación: Reacción antígeno-anticuerpo, en Aloanticuerpos: Anticuerpos dirigidos contra

la cual un antígeno sólido o particulado forma una antígenos presentes en algunos miembros de la
malla de interacciones con un anticuerpo que se misma especie (aloantígenos).
encuentra en solución. Como la aglutinación es
visible fácilmente, es la reacción básica de nume- Aloantígenos: Diferentes formas (alélico) de un
rosas pruebas serológicas. antígeno codificado por el mismo locus genético,
en todos los individuos de una especie.
Aglutinación directa: Aglutinación de eritrocitos,
microorganismos u otras sustancias, directamente Alogénico: Se refiere a las variaciones que puede
por anticuerpos. tener un antígeno codificado por un mismo locus
de una misma especie.
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Sin título-2 785 5/26/06, 10:27 AM

Aminas vasoactivas: Productos, como la constante de anticuerpos humanos.
histamina y la 5-hidroxitriptamina, liberados por
los basófilos, los mastocitos y las plaquetas, que Antigenicidad: Reactividad de un antígeno, es
actúan sobre el endotelio y la musculatura lisa de decir, capacidad de unirse en forma específica a
vasos locales. los anticuerpos.
Anafilaxia: Reacción inmune aguda y severa, Antígeno: Molécula que puede ser reconocida por
antígeno específica, mediada por IgE, que da lu- un anticuerpo o receptor de células T. Si es capaz
gar a vasodilatación y contracción de los músculos de estimular la respuesta inmune se le denomina
lisos, incluidos los bronquiales, y que puede ori- inmunógeno.
ginar la muerte del animal.
Antígeno de diferenciación: Antígeno que per-
Anafilotoxina: Péptidos del complemento (C3a mite distinguir un tipo celular de otro.
y C5a) que originan la desgranulación de los
mastocitos y la contracción de la musculatura lisa. Antígeno homólogo: Antígeno que reacciona con
anticuerpos que él mismo ha inducido.
Anemia hemolítica autoinmune: Destrucción de
eritrocitos, mediada por autoanticuerpos. Antígeno heterólogo: Antígeno que reacciona con
anticuerpos que él no ha inducido.
Anergia: Un estado de disminución o ausencia
de inmunidad mediada por células, mostrado por Antígenos T: Antígenos tumorales presentes sólo
una ausencia de reacción a varios antígenos dife- en células neoplásicas; probablemente proteínas
rentes inoculados subcutáneamente. producidas por genoma viral.
Anticuerpo: Molécula de inmunoglobulina pro- Antígenos timo dependientes: Antígenos que

ducida en los vertebrados por las células dependen de la interacción de las células B con
plasmáticas (estadio final de la diferenciación de las células T para estimular la síntesis de
los linfocitos B) en respuesta a un antígeno; tiene anticuerpos.
la propiedad de combinarse específicamente con
el antígeno que indujo su formación. Antígenos timo independientes: Antígenos que
pueden inducir una respuesta inmune sin la
Anticuerpo anti-idiotípico: anticuerpo dirigido participación de linfocitos T, aparentemente.
contra epítopos (idiotopos) de la región variable
de una inmunoglobulina o un receptor linfocitario. Antisuero: Conjunto de anticuerpos presentes en
el suero de un animal que ha sido inmunizado con
Anticuerpo bifuncional: Anticuerpo preparado un antígeno.
a partir de dos anticuerpos, cuya característica es
que se une a dos antígenos diferentes. Antitoxinas: Anticuerpos que neutralizan las toxi-
nas solubles producidas por las bacterias.
Anticuerpo catalítico: Anticuerpos con propie-
dades similares a una enzima. Asociación genética: Término usado para descri-
bir la condición en la que determinados genotipos
Anticuerpo humanizado: Anticuerpo de ratón en se asocian con ciertos fenómenos, tales como
el cual todas las regiones de las cadenas pesadas y determinadas enfermedades.
livianas no involucradas en la unión del antígeno,
han sido reemplazadas por secuencias humanas. Atopia: Manifestación clínica de las reacciones
de hipersensibilidad tipo I, incluyendo eccema,
Anticuerpo natural: Anticuerpo presente en el asma y rinitis.
suero del que se desconoce el antígeno.
Autoanticuerpo: Anticuerpo con especificidad para
Anticuerpo quimérico: Anticuerpo de ratón en antígenos propios. In vitro, tales anticuerpos son de-
el cual las regiones constantes han sido reempla- tectados por sus reacciones con antígenos similares
zadas, mediante ingeniería genética, por la región obtenidos de otros individuos de la misma especie.
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Sin título-2 786 5/26/06, 10:27 AM

Autoantígenos: Moléculas que son constituyen- Cadena kappa (κ): Uno de los isotipos de las
tes normales de un individuo y contra las cuales cadenas livianas de las inmunoglobulinas.
éste desarrolla una respuesta inmune.
Cadena lambda (λ): Uno de los isotipos de ca-
Autólogo: Perteneciente al mismo individuo. denas livianas de las inmunoglobulinas.
Autorradiografía: Técnica para detectar ácidos Cadenas livianas (L, “light”): Cadenas
nucleicos o proteínas en secciones de tejido o geles polipeptídicas presentes en todas las
con isótopos radiactivos, cuya emisión es graba- inmunoglobulinas. Existen dos tipos y en cada
da en una película fotográfica. especie se ha observado la predominancia de una
de ellas; se denominan kappa (κ) y lambda (κ).
Autosomas: Cromosomas distintos a los
cromosomas sexuales X e Y. Cadenas pesadas (H, “heavy”): Par de cadenas
polipetídicas idénticas que forman parte de las
Avidez: Fuerza de la unión anticuerpo-antígeno, inmunoglobulinas. La cadena pesada contiene
la cual depende de la afinidad entre epítopo y aproximadamente el doble del número de
paratopo, y de las valencias del anticuerpo y del aminoácidos de la cadena liviana.
antígeno.
Calnexina: Proteína de 88 kDa que actúa como
BCG (Bacillus Calmette-Guérin): Cepa atenua- chaperonina en el correcto ensamblaje y transpor-
da de Mycobacterium tuberculosis, usada como te de moléculas MHC y otras proteínas.
vacuna, adyuvante o modificadora de la respuesta
inmune. Cambio de clase: Proceso por el cual una célula
B individual puede unir nuevos genes C (constan-
Beta2-microglobulina: Polipéptido monomórfico te) de cadena pesada a su gen V (variable)
codificado fuera del MHC, que se asocia de modo recombinado, y producir así una clase de
no covalente con la cadena α codificada por el inmunoglobulina diferente con la misma especi-
MHC, formando las moléculas de clase I. ficidad. Este proceso se refleja también en el cam-
bio global de clase que tiene lugar durante la ma-
Bolsa (Bursa) equivalente: Órgano análogo a la duración de una respuesta inmune.
bolsa de Fabricio existente en aves. En el hombre
corresponde a la médula ósea. Cariotipo: Constitución cromosómica de una cé-
lula, que puede variar entre los individuos de una
Bolsa (Bursa) de Fabricio: Órgano linfoepitelial misma especie, dependiendo de la presencia o au-
situado entre el intestino posterior y la cloaca de sencia de cromosomas sexuales particulares o de
las aves. Constituye el lugar donde maduran las la incidencia de traslocaciones entre secciones de
células B. cromosomas diferentes.
Bradiquinina: Nonapéptido vasoactivo; es el “Carrier”: Proteína transportadora de alta

mediador de la inflamación más importante gene- inmunogenicidad utilizada para inducir respuesta
rado por el sistema de las quininas. inmune contra haptenos que le han sido acopla-
dos químicamente. Uno de los más utilizados es
C1-C9: Componentes de las vías clásica y lítica la hemocianina, proteína que transporta el oxíge-
del complemento responsables de mediar las reac- no en la mayoría de los moluscos y artrópodos.
ciones inflamatorias, la opsonización de las partí-
culas y la lisis de las membranas celulares. Células accesorias: Incluyen eosinófilos,
basófilos, células cebadas, plaquetas y células pre-
Cadena Invariante (Ii): Glicoproteína de mem- sentadoras de antígeno. Tienen un rol importante
brana asociada al correcto ensamblaje, transporte tanto en la respuesta inmune innata como adquiri-
y expresión de las moléculas MHC de clase II. da.
Cadena J: Glicopéptido monomórfico, presente Células de Microglia: Son las células fagocíticas
en la IgA e IgM poliméricas. que residen en el cerebro. Migran a este órgano
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Sin título-2 787 5/26/06, 10:27 AM

antes del nacimiento y durante el período neonatal. celular CD8+, que participan en la inmunidad ce-
lular.
Células de Kupffer: Macrófagos que tapizan los
sinusoides hepáticos. Célula T γδ: Células T cuyo receptor de células T
está formado por cadenas gamma y delta en el
Células de Langerhans: Células dendríticas de receptor de células T.
la piel que actúan como células presentadoras del
antígeno. Células T "helper" (Cooperadoras):
Subpoblación funcional de células T que pueden
Células dendríticas: Células mononucleares pre- ayudar a la generación de células T citotóxicas y
sentadoras de antígeno en tejido linfoide, pero dis- cooperar con las células B en la producción de
tintas de la línea monocito-macrófago. una respuesta de anticuerpos.
Células efectoras: Término que generalmente se Células T supresoras: Subpoblación de linfocitos

refiere a células T capaces de mediar citotoxicidad, T que suprimen la síntesis de anticuerpos por las
supresión, o función de ayuda ("helper"). células B o inhiben otras reacciones inmunes ce-
lulares de células T efectoras.
Células formadoras de placa: Son células
secretoras de anticuerpos que se miden en un en- Centros germinales: Grupo especializado de
sayo en que cada una produce una clara zona de linfoblastos B, macrófagos y células plasmáticas
lisis (placa) en una capa de eritrocitos sensibiliza- que aparecen en los folículos primarios de los te-
dos con el antígeno. Es una reacción de una extre- jidos linfoides seguido en respuesta a un estímulo
ma sensibilidad. antigénico.
Células LAK: (Células asesinas activadas por Cepa “inbred”: Son animales obtenidos por cru-
linfoquinas). Son linfocitos T singénicos genera- zamientos sucesivos entre hermanos, dando una
dos in vitro mediante tratamiento con citoquinas cepa con idénticos sets de autosomas.
tales como IL-2 e IFNγ.
Cepa congénica: Son razas idénticas excepto por
Célula mastoide (célula cebada o mastocito): un cambio en un locus determinado.
Célula tisular que posee receptores de alta afini-
dad para IgE y genera mediadores inflamatorios Cepas transgénicas: Son derivadas desde anima-
en la alergia. les que han recibido genes que han sido inserta-
dos cuando ocurre la fecundación. Todas las célu-
Células NK ("Natural Killer"): Células del li- las del animal transgénico llevan el nuevo gen,
naje linfoide con capacidad intrínseca para reco- aunque él pueda ser expresado en algunos o en un
nocer y destruir algunas células tumorales o in- linaje celular.
fectadas por virus.
Cepas “Knockout”: Son animales transgénicos
Células plasmáticas: Células sintetizadoras de que han sufrido una deleción o mutación de genes
anticuerpos. Se diferencian a partir de los linfocitos específicos.
B.
CDR ("Complementary Determining
Células pluripotenciales: Células capaces de Regions"): Partes de la región variable (V) de las
autorrenovación y de diferenciación hacia proge- inmunoglobulinas o de los receptores de células
nitores celulares hematopoyéticos y T, responsables de la unión con el antígeno.
linfopoyéticos.
Ciclofosfamida: Fármaco citotóxico usado
Células T αβ: Células T que reordenan y expre- frecuentemente como inmunosupresor.
san receptor de células T con cadenas alfa y beta.
La mayoría de las células T son de este tipo. Ciclosporina: Fármaco inmunosupresor
particularmente útil para suprimir el rechazo del
Células T citotóxicas: Linfocitos con marcador injerto.
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Sin título-2 788 5/26/06, 10:27 AM

Citometría de Flujo: Es una técnica que mide en Concanavalina A (Con A): Es una lectina obte-
un citómetro –equipo específico para este propó- nida del poroto Conavalia eusiformis, que se une
sito- las características individuales de una pobla- a glicopiranósidos, manopiranósidos y fructopi-
ción de células, incluyendo tamaño, granularidad ranósidos. Como éstos son constituyentes habi-
y fluorescencia si es que se les ha incorporado una tuales de las glicoproteínas de la membrana celu-
sonda fluorescente. lar, la Con A se une a ellas. Aglutina células de
muchos tipos y actúa como mitógeno para las cé-
Citoquinas: Término genérico para designar las lulas T.
moléculas solubles que median las interacciones
celulares. Congénico: Animales derivados genéticamente y
que difieren sólo en un locus particular.
Citostático: Que tiene la capacidad de detener el
crecimiento celular. Conjugado: Reactivo formado por el acoplamien-
to covalente de dos moléculas diferentes. Ej.:
Citotóxico: Que tiene la capacidad de destruir fluoresceína unida a una molécula de inmuno-
células. globulina.
Clases de inmunoglobulinas: Subdivisión de las CPA, (Célula presentadora de antígenos): Cé-

inmunoglobulinas, basada en el determinante lula que procesa una proteína antigénica,
antigénico de la región Fc de la cadena pesada (H). fragmentándola a péptidos que se presentan en la
En humanos son cinco clases de inmunoglo- superficie celular en conjunto con moléculas MHC
bulinas: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE. de clase II, para interactuar con el receptor de cé-
lulas T apropiado. Las células B, células
Clon: Grupo de células que forman parte de la dendríticas, monocitos y macrófagos pueden cum-
progenie de una sola célula. plir esta función.
Complejo de ataque a membrana: Componen- CR1, CR2, CR3: Receptores para los fragmen-
tes terminales del sistema del complemento (C5b- tos activados del componente C3 del complemen-
C9) que, cuando son activados, causan lisis de la to.
célula blanco.
Cromatografía de afinidad: Método de purifi-
Complejo inmune: Producto de la unión produ- cación en el cual una sustancia con una selectiva
cida por un anticuerpo con un antígeno. También afinidad de unión es unida covalentemente a una
se le denomina complejo antígeno-anticuerpo. matriz insoluble como agarosa. Así una sustancia
puede ser purificada desde una mezcla.
Complejo Principal de Histocompatibilidad
(MHC): Región genética presente en todos los CSF ("Colony Stimulating Factors"): Grupo de
mamíferos, cuyos productos son responsables del citoquinas que controlan la diferenciación de las
rechazo rápido de los injertos entre individuos y células hematopoyéticas.
que actúan como señales entre los linfocitos y las
células que expresan antígenos. Chaperoninas: Proteínas que participan en el ple-
gamiento, ensamblaje y/o transporte de otras pro-
Complemento: Grupo de proteínas séricas que in- teínas.
tervienen en el control de la inflamación, en la
activación de los fagocitos y en el ataque lítico Deleción clonal: Un concepto relacionado con la
sobre las membranas celulares. El sistema puede teoría de la selección clonal de Burnet, la cual su-
activarse por interacción con el sistema inmuni- giere que la tolerancia a un autoantígeno resulta
tario. de la deleción de clones de linfocitos
autorreactivos en la vida embrionaria.
Componente secretor: Molécula de 95 kDa pre-
sente en las células epiteliales y que se asocia a Determinante antigénico: Región del antígeno
inmunoglobulinas secretoras, particularmente IgA donde se une un anticuerpo, también se denomina
e IgM. epítopo.
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Determinante conformacional: Corresponde a Electroinmunodifusión: Método de inmunodifu-
epítopos derivados del arreglo espacial o plega- sión en el cual un antígeno y un anticuerpo son
miento de la cadena peptídica de una proteína, que guiados uno contra el otro en un campo eléctrico.
generalmente se destruyen al desnaturalizarla. La reacción antígeno-anticuerpo se visualiza como
un arco o banda de precipitación.
Determinante lineal: Corresponde a epítopos
formados por aminoácidos adyacentes (estructu- ELISA (“Enzime Linked Immunosorbent
ra primaria) en la secuencia polipeptídica de una assay”): Técnica de laboratorio, que permite la
proteína. detección y cuantificación de inmunoglobulinas
contra diferentes antígenos. Es un método muy
Desetopo: Parte de la molécula MHC que se une versátil que permite numerosas variaciones, razón
con el antígeno ya procesado. por la cual se ha transformado en el ensayo más
utilizado en la detección y cuantificación de nu-
Desgranulación: Exocitosis de gránulos a partir merosos antígenos no sólo de interés clínico, sino
de células, tales como mastocitos y basófilos. que también otros compuestos tales como residuos
de alimentos y contaminantes ambientales.
Determinante antigénico: Ver epítopo.
Endocitosis: Proceso por el cual material externo
DNP (Dinitrofenol): Es un hapteno que se puede a la célula es internalizado. Puede tomar la forma
unir a los grupos amino de las proteínas. de pinocitosis (líquidos) y fagocitosis (partículas).
Domicilinas o Adresinas: Ligandos en las célu- Endógeno: Originado dentro del organismo o
las de la mucosa endotelial para receptores espe- dentro de una célula.
cíficos presentes en linfocitos derivados desde las
Placas de Peyer. Endotelio: Células que tapizan el lumen de los
vasos sanguíneos y linfáticos.
Dominio: Región de un péptido que tiene una es-
tructura terciaria particular. Las inmunoglobuli- Endotoxinas: Lipopolisacáridos derivados desde
nas, las moléculas MHC de clases I y II, y otras la pared celular de microorganismos Gram nega-
moléculas de la llamada "superfamilia de las tivos. Tienen un efecto tóxico y pirogénico cuan-
inmunoglobulinas" tienen dominios similares. do son inyectados in vivo.
Dominios C: Dominios constantes de los Enfermedad de cadenas pesadas: Grupo

anticuerpos y de los receptores de células T. Estos heterogéneo de desórdenes paraproteícos carac-
dominios no contribuyen al sitio de unión para el terizado por la presencia de cadenas pesadas
antígeno y presentan una escasa variabilidad. monoclonales incompletas, sin cadenas livianas
en suero u orina.
Dominios V: Dominios N-terminal de las cade-
nas pesadas y ligeras de los anticuerpos, y de las Enlaces disulfuro: Enlace químico S-S entre ami-
cadenas α, β, γ de los receptores de células T. noácidos que contienen grupos sulfidrilos, los cua-
Varían entre los distintos clones y forman el sitio les unen las cadenas H y L, intra-cadenas H-H y
de unión con el antígeno. L-L, contribuyendo en este caso a la formación
de los dominios.
DTH ("Delayed Type Hypersensitivity"):
Hipersensibilidad de tipo retardada. Término que Epítopo: Determinante antigénico presente en una
incluye las reacciones cutáneas retardadas asocia- molécula. Es la región del antígeno que se combi-
das con la hipersensibilidad tipo IV. na con el paratopo del anticuerpo o del receptor
de células T.
Duplicados en tándem: Copias adyacentes de
genes relacionados, unidos en un cromosoma. Exclusión alélica: Es el proceso por el cual una
célula usa un gen de su cromosoma materno o uno
Electroforesis: Separación de moléculas en un paterno, pero no ambos. Ocurre en linfocitos B
campo eléctrico. para constituir la cadena pesada y liviana de la
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inmunoglobulina y también en linfocitos T, para receptores celulares para inmunoglobulinas y al
constituir los dímeros αβ ó γδ. componente C1q del complemento.
Exocitosis: Proceso por el cual material GALT ("Gut Associated Lymphoid Tissue"):
intracelular es llevado al exterior de la célula. Tejido linfoide de la mucosa gastrointestinal.
Exón: Segmento del gen que codifica para parte Gammaglobulinas: Proteínas séricas con movi-
de una proteína. lidad electroforética en la región gamma. La ma-
yoría de las inmunoglobulinas migran en esta re-
Fab: Parte de la molécula de inmunoglobulina que gión.
contiene el sitio de combinación con el antígeno.
Está compuesto por una cadena liviana y parte de Gammapatías monoclonales: Desórdenes que se
la cadena pesada y se obtiene por digestión caracterizan por presentar inmunoglobulinas
enzimática (papaína) de las inmunoglobulinas. monoclonales. Un ejemplo de estas enfermeda-
des es el Mieloma múltiple.
Factor activador plaquetario: Mediador infla-
matorio que activa plaquetas y células inflamato- Generación de diversidad: Se refiere al proceso
rias. mediante el cual se produce un gran número de
regiones V de los anticuerpos.
Factor inhibidor de la migración (MIF): Grupo
de péptidos producidos por los linfocitos que tie- Genes C: Segmentos génicos que codifican la región
nen la capacidad de inhibir la migración de los constante de las cadenas pesadas y ligeras de las
macrófagos. inmunoglobulinas y de las cadenas alfa, beta, gamma
y delta de los receptores de células T.
Factor quimiotáctico de macrófagos (MCF):
Linfoquina que atrae selectivamente monocitos o Genes D: Segmentos génicos situados entre los
macrófagos al área donde se produjo el factor. genes V y J en las cadenas pesadas de las
inmunoglobulinas, y en los genes de las cadenas
Factores B, P, D, H e I: Componentes de la vía beta y gamma de los receptores de las células T,
alternativa del complemento. que se recombinan con V y J durante la ontogenia.
Fagocitosis: Proceso por el cual las células en- Genes J: Segmentos génicos en los genes de las ca-
globan una partícula y la encierran dentro de una denas pesadas y ligeras de inmunoglobulinas, y en los
vacuola (fagosoma) citoplasmática. genes para las cadenas de receptores de células T, que
se combinan durante la diferenciación linfocitaria.
Fagocitos: Incluyen monocitos sanguíneos, Codifican parte de los dominios variables.
macrófagos y neutrófilos. Su función es incorpo-
rar patógenos, antígenos y restos celulares para Genes V: Genes que codifican la mayor parte de
reducirlos a pequeñas moléculas. los dominios V de las cadenas pesadas y ligeras
de los anticuerpos, y de las cadenas alfa, beta,
Fagolisosoma: Producto de la fusión de un gamma y delta de los receptores de células T.
fagosoma y un lisosoma.
Genoma: Todo material genético contenido den-
Fenotipo: Características expresadas en un indi- tro de la célula.
viduo.
Genotipo: Material genético heredado de los pa-
Fluorescencia: Emisión de luz de un color, cuan- dres. El individuo no expresa necesariamente todo
do una sustancia es irradiada con una luz de un este material.
color diferente.
Gradiente de Ficoll: Es utilizado para aislar cé-
Fragmento Fc: Región de las inmunoglobulinas lulas de diferente densidad. En particular es muy
que contiene los dominios CH2 y CH3 de las ca- utilizado para separar linfocitos. El Ficoll es un
denas pesadas. Es responsable de la unión a los polímero sintético.
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Grupo inmunodominante: Elemento estructural Histamina: Amina vasoactiva contenida en los
de un epítopo que aporta la mayor energía para la gránulos de mastocitos y basófilos, que causa con-
interacción con un anticuerpo. tracción de la musculatura lisa de bronquiolos
humanos y vasos sanguíneos pequeños. Aumenta
GVH ("Graft Versus Host"): Proceso causado la permeabilidad capilar y la secreción de glándu-
por linfocitos donantes alogénicos que reaccionan las de las mucosas bronquial y nasal.
contra los tejidos del huésped en un receptor
inmunológicamente comprometido. Hipergammaglobulinemia monoclonal: Incre-
mento de las inmunoglobulinas producidas por un
H-2: Complejo Principal de Histocompatibilidad solo clon de células B. Contiene una clase de ca-
del ratón. denas H y un tipo de cadenas L.
Haplotipo: Conjunto de determinantes genéticos Hipergammaglobulinemia policlonal: Incre-

situados en un solo cromosoma. mento de las gammaglobulinas de varias clases.
Contiene diferentes cadenas H y L.
Hapteno: Molécula pequeña que puede actuar
como epítopo, pero es incapaz de provocar por sí Hipersensibilidad: Ver alergia.
misma una respuesta de anticuerpos.
Histocompatibilidad: Situación que permite que
Hematopoyesis: Proceso por el cual se forman, se acepten injertos entre individuos.
diferencian y maduran las células sanguíneas.
HLA (“Human Leukocyte Antigen”): Comple-
Hemolisina: Un anticuerpo u otra sustancia ca- jo Principal de Histocompatibilidad humano.
paz de producir lisis eritrocitaria.
Homólogo: De la misma especie.
HEV (“High Endothelial Venule”): Vénula de
endotelio columnar (alto). Área especializada de Humoral: Relativo a los líquidos extracelulares
las vénulas post-capilares, a través de las cuales incluyendo el suero y la linfa.
los linfocitos migran hacia los ganglios linfáticos.
ICAM-1 (“Intercellular Adhesion Molecule-
Heterohibridoma: Célula híbrida -constituida por 1”): Molécula de la superficie celular, que se en-
dos hibridomas diferentes- que secreta un anticuer- cuentra en varios tipos de leucocitos y en células
po bifuncional. no hematopoyéticas, que interactúa con LFA-1 e
interviene en el tránsito celular.
Heterólogo: Se refiere a las diferencias
antigénicas intraespecies. Idiotipo: Antigenicidad de la región V de un re-
ceptor linfocitario T o B. Corresponde al conjun-
Hibridoma: Línea celular creada in vitro mediante to de idiotopos de ese receptor.
fusión de dos tipos de células linfoides, uno de los
cuales es tumoral. Los hibridomas más conocidos Idiotopo: Determinante antigénico único de la
son aquellos constituidos con un linfocito B, con- región V de un anticuerpo o de un receptor
firiéndoles la propiedad de secretar anticuerpos linfocitario.
monoclonales.
IgA: Inmunoglobulina predominante en las secre-
Hipersensibilidad inmediata: Sensibilidad ciones. Se caracteriza por la presencia de cadenas
inmunológica mediada por anticuerpos que se pesadas alfa (α).
manifiesta por reacciones tisulares pocos minu-
tos después de la unión antígeno-anticuerpo. IgA secretora: Dímero de moléculas de IgA uni-
das por una cadena J y que presenta un compo-
Hipogammaglobulinemia: Deficiencia de las cla- nente secretor.
ses mayores de inmunoglobulinas séricas (IgG,
IgM, IgA). IgD: Inmunoglobulinas de 185 kDa y glicosilada
en 9-14% . Se encuentra en la membrana de los
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linfocitos B circulantes. Tiene cadenas pesadas Inmunización: Administración natural o artificial
delta (δ) de un antígeno, para provocar una respuesta in-
mune; particularmente cuando ésta conlleva a la
IgE: Inmunoglobulina involucrada en reacciones protección del huésped contra alguna enfermedad
de hipersensibilidad inmediata. Caracterizada por como es el caso de las vacunas.
cadenas pesadas de tipo épsilon (ε).
Inmunocomplejo: Complejo antígeno-anticuer-
IgG: Inmunoglobulina de aproximadamente 150 po, que puede contener también componentes del
kDa con capacidad de fijar complemento y atra- sistema del complemento.
vesar la placenta. Se encuentra predominante en
el suero. Presenta cadenas pesadas de tipo gamma Inmunodeficiencias primarias: Son defectos
(γ). genéticos del sistema inmune y se manifiestan
generalmente en la infancia.
IgM: Inmunoglobulina pentamérica de 900 kDa
que representa aproximadamente el 10% de las Inmunodeficiencias secundarias: Procesos de-
inmunoglobulinas presentes en el suero. Sus ca- sarrollados por una variedad de condiciones pato-
denas pesadas son de tipo mu (µ). lógicas, drogas inmunosupresoras o infecciones
de las células del sistema inmune.
Imagen interna: Anticuerpo anti-idiotípico cuyo
sitio de combinación se asemeja o representa al Inmunodifusión radial: Método para cuantificar
epítopo de un antígeno. antígenos por inmunodifusión, en el cual un
antígeno se pone en un gel para que difunda por el
Infección oportunista: Infección producida en agar que contiene el anticuerpo. Los círculos de
individuos inmunodeprimidos, por precipitación resultantes reflejan la concentración
microorganismos de baja virulencia en individuos del antígeno.
inmunocompetentes.
Inmunoelectroforesis: Método que combina una
Inflamación: Es la respuesta de un tejido a la in- separación electroforética inicial de proteínas se-
juria, la cual es función de la llegada de molécu- guidas por una inmunodifusión con el resultado
las del suero y células del sistema inmune al sitio de formación de arcos de precipitación.
del daño. La reacción consiste de tres componen-
tes locales: Incremento de la circulación, incre- Inmunofluorescencia: Método que permite la
mento de la permeabilidad capilar y salida de cé- identificación microscópica mediante el micros-
lulas desde los vasos sanguíneos al tejido dañado copio de luz o citometría de flujo, de antígenos
localizados en tejidos o células, utilizando
Inmunidad adquirida o específica: Respuesta anticuerpos conjugados con fluorocromos.
inmune mediada por anticuerpos y células T ca-
racterizada por ser específica y presentar memo- Inmunogenicidad: Capacidad de generar una res-
ria. puesta inmune específica, que produce anticuerpos
y/o linfocitos T-activados.
Inmunidad innata o inespecífica: Mecanismos
de defensa presentes desde el nacimiento, los cua- Inmunógeno: Sustancia que cuando es intro-
les no presentan especificidad ni memoria ducida en un animal, estimula la respuesta inmu-
inmunológica. ne.
Inmunidad mediada por células: Inmunidad en Inmunoglobulina: Glicoproteína compuesta por

la que predomina la participación de linfocitos y cadenas H y L, que actúa como anticuerpo. Los
macrófagos. anticuerpos son inmunoglobulinas.
Inmunidad pasiva: Protección adquirida por la Inoculación: Introducción de un antígeno o

introducción de anticuerpos preformados o célu- antisuero en un animal para conferir inmunidad.
las inmunes en individuos no inmunizados.
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Integrinas: Familia de glicoproteínas diméricas células K y NK. Poseen marcadores linfocitarios
de transmembrana que promueven la adhesión y de monocitos/macrófagos.
celular. Son un tipo de moléculas de adhesión.
Ligamiento: Condición en la que dos genes se
Interferones: Grupo heterogéneo de proteínas de hallan muy próximos en un cromosoma y suelen
bajo peso molecular, elaboradas por células infec- heredarse juntos.
tadas. Son un tipo de citoquinas.
Ligando: Cualquier molécula que forma un com-
Interleuquinas (IL): Grupo de moléculas, tam- plejo con cualquier otra molécula. A esta última
bién denominadas citoquinas que intervienen en se le llama receptor.
la señalización entre las células del sistema inmu-
ne. Línea celular: Células producidas por crecimiento
continuo in vitro de un determinado cultivo celu-
Intrón: Segmento del gen, ubicado entre los lar. Las líneas celulares suelen contener varios
exones, que no codifica ninguna secuencia clones.
proteica.
Línea germinal: Material genético transmitido a
Isoelectroenfoque: Separación de moléculas so- través de los gametos, antes de que sea modifica-
bre la base de su carga. A lo largo de un gradiente do por recombinaciones somáticas o mutaciones.
de pH, cada molécula migra hasta alcanzar una
carga neta nula. Linfoblasto: Precursor inmaduro de los linfocitos,
presente normalmente en médula ósea.
Isólogo: De constitución genética idéntica.
Linfoquinas: Término genérico para designar
Isotipo: Se refiere a la variación genética dentro moléculas que transmiten señales entre las célu-
de una familia de proteínas o péptidos, de forma las del sistema inmune, es decir son citoquinas y
que cada miembro de la especie tendrá todos los son producidas por los linfocitos.
isotipos de la familia representados en su genoma.
Ej.: las clases de inmunoglobulinas. Linfocito: Son las células fundamentales en una
respuesta inmune porque reconocen el antígeno
Lectinas: Sustancias derivadas de plantas. Se unen en forma específica vía un receptor localizado en
específicamente a azúcares y oligosacáridos, y tie- su membrana. Pueden ser de tipo B o T. Célula
nen actividad de pan-aglutinina para eritrocitos. mononuclear de 7-12 µm de diámetro, que pre-
Las lectinas también son comúnmente mitógenos. senta un núcleo con cromatina densamente com-
pacta y escaso citoplasma.
LES (Lupus Eritematoso Sistémico): Enferme-
dad autoinmune del ser humano, en la que Linfocito activado: Linfocito que ha sido esti-
habitualmente intervienen anticuerpos mulado por un antígeno específico o por un
antinucleares. mitógeno no específico, como por ejemplo una
lectina.
Leucotrienos: Grupo de metabolitos del ácido
araquidónico que tienen potentes efectos Linfocito B (Célula B): Células precursoras de
farmacológicos. las células plasmáticas, productoras de
anticuerpos.
LFA (“Leucocyte Functional Antigens”): Gru-
po de tres moléculas que median en la adherencia Linfocito T (Célula T): Células derivadas del
intercelular entre los leucocitos y otras células, de Timo que participan en una variedad de reaccio-
un modo antígeno-inespecífico. Son un tipo de nes inmunes mediadas por células.
moléculas de adhesión.
Lisosoma: Organelo que contiene enzimas hidro-
LGL (“Large Granular Lymphocytes”): Gru- líticas y que está presente en el citoplasma de
po de linfocitos morfológicamente definidos que algunas células, como por ejemplo monocitos y
contienen la mayor parte de la actividad de las macrófagos.
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LPS (Lipopolisacárido): Producto de las paredes las alogénicas, por parte de las células T. La res-
celulares de algunas bacterias Gram negativas, ca- puesta se mide por la proliferación que se produ-
paz de actuar como mitógeno para las células B. ce en presencia de las células estimulantes.
Locus: Sitio del cromosoma en el que se encuen- Moléculas MHC clases I, II, III: Tres clases
tra un determinado gen. principales de moléculas codificadas dentro del
MHC. Las moléculas de clase I poseen un péptido
Macrófago: Células fagocíticas mononucleares MHC, asociado con la Beta2-microglobulina; las
que se encuentran en algunos tejidos y que deri- moléculas de clase II poseen dos péptidos codifi-
van de los monocitos. Presentan funciones acce- cados por el MHC, asociados de forma no
sorias en la inmunidad celular. covalente.
Maduración de la afinidad: Aumento de la afi- Monoclonal: Derivado de un solo clon, por ejem-
nidad de los anticuerpos. Se presenta con frecuen- plo, los anticuerpos monoclonales que son produ-
cia durante una respuesta inmune secundaria. cidos por un único clon de células B y tienen ca-
rácter homogéneo.
MALT (“Mucosa Associated Lymphoid
Tissue”): Término genérico con que se denomina Mutación genética: Cambio, deleción, inserción
al tejido linfoide del tubo gastrointestinal, árbol o inversión de una base o secuencia nucleotídica
bronquial y otras mucosas. en la molécula de DNA.
Marcadores CD (“Cluster of Diferentiation”): Mutación somática: Proceso que ocurre durante

Moléculas de la superficie celular que pueden la maduración de las células B y que afecta la re-
distinguirse con la ayuda de anticuerpos específi- gión V de los anticuerpos, aumentando la afini-
cos. Se utilizan generalmente para diferenciar las dad del anticuerpo por el antígeno.
distintas poblaciones celulares y estadios de ma-
duración de las células del Sistema Inmune. Oligoclonal: Conjunto de anticuerpos de especi-
ficidad restringida.
Medio HAT: Medio de cultivo utilizado para se-
leccionar los híbridos de una fusión entre linfocitos Opsonización: Proceso por el cual se facilita la
B y células mieloides. Contiene Hipoxantina, fagocitosis mediante depósito de opsoninas (un
Aminopterina y Timidina. Ej.: anticuerpos y C3 b) sobre el antígeno.
Memoria inmunológica: Mayor respuesta de un Órganos linfoides primarios: Órganos linfoides

animal inmune a la segunda o subsecuente admi- que son esenciales para la diferenciación de los
nistración de un antígeno. linfocitos. Estos órganos son el Timo para los
linfocitos T y la Médula Ósea, bolsa de Fabricio
Mieloma múltiple: Tumor de células plasmáticas. en las aves, para los linfocitos B.
Las células del mieloma producen una
inmunoglobulina monoclonal llamada Órganos linfoides secundarios: Órganos
paraproteína, la cual es detectable en el suero del linfoides periféricos en los cuales se producen las
paciente (componente monoclonal). respuestas inmunes adquiridas. Estos órganos son
el bazo, los ganglios linfáticos y el tejido linfoide
Mimotopo: Péptido sintético que imita o contie- asociado a mucosas.
ne la estructura de un epítopo. Epítopo sintético.
PAF (“Platelet Activating Factor”): Factor
Mitógeno: Sustancia que estimula la síntesis del activador de las plaquetas. Factor liberado por los
DNA, transformación blástica y finalmente divi- basófilos que causa agregación plaquetaria.
sión de linfocitos.
Paraproteinemia: Condición presente en un gru-
MLR/MLC (“Mixed Lymphocyte Reaction”/ po heterogéneo de enfermedades caracterizada por
“Mixed Lymphocyte Culture”): Sistema analí- la presencia de inmunoglobulina monoclonal en
tico para observar el reconocimiento de las célu- el suero u orina.
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Paratopo: Parte de la molécula del anticuerpo que Prostaglandinas: Derivados farmacológicamente
se une al epítopo. activos del ácido araquidónico. Las diferentes
prostaglandinas son capaces de modular la movi-
Patógeno: Microorganismo que causa enferme- lidad de las células y las respuestas inmunes.
dad.
Proteína básica mayor: Proteína tóxica de la
PHA (“Phitohemaglutinin”): Mitógeno para cé- membrana de los eosinófilos que produce daño
lulas, principalmente linfocitos T. Estimula la sín- tisular en alergias y enfermedades inflamatorias.
tesis de DNA y la transformación blástica de los
linfocitos. Proteína de Bence-Jones: Cadena liviana
monoclonal presente en la orina de pacientes con
Pinocitosis: Proceso mediante el cual la célula gammapatías monoclonales.
capta líquidos o partículas muy pequeñas.
Proteínas de fase aguda: Proteínas séricas cuyos
Placas de Peyer: Tejido linfoide ubicado en la niveles aumentan durante la infección o las reac-
mucosa del intestino delgado. Contienen todos los ciones inflamatorias.
elementos involucrados en una respuesta inmune:
linfocitos B, células plasmáticas, centros Proteínas G: Proteínas regulatorias que ligan
germinales, macrófagos y áreas dependientes de guanidín-nucleótidos, y que acoplan la señal des-
células T, entre otros. de el receptor a una activación de enzimas asocia-
das a la membrana o a la actividad de canales
Plásmido: Pequeño DNA circular de origen iónicos.
bacteriano que contiene resistencia a antibióticos.
Se utiliza como vector de clonamiento. Prueba Coombs: Método para detectar
inmunoglobulinas unidas a glóbulos rojos. En la
Plasmina: Enzima fibrinolítica capaz de digerir Prueba de Coombs directa, los eritrocitos de un
proteolíticamente la proteína C1 del complemen- individuo sensibilizado son aglutinados por
to. anticuerpos anti-gammaglobulinas (Suero de
Coombs). En la Prueba de Coombs indirecta, el
Policlonal: Se refiere a la activación policlonal y suero del paciente es incubado con eritrocitos nor-
mitosis de células T o B que tienen diferentes re- males y las células sensibilizadas son aglutinadas
ceptores en su superficie, es decir, en una respuesta con una anti-inmunoglobulina.
policlonal participan múltiples clones de diferen-
te especificidad. Púrpura trombocitopénico inmune: Síndrome
clínico, en el cual existe trombocitopenia persis-
Presentación antigénica: Proceso por el cual las tente asociada a la presencia de autoanticuerpos
células presentadoras de antígeno expresan el circulantes.
antígeno en moléculas MHC en su superficie; de
esta manera el antígeno es reconocible por los Quimiotaxis: Aumento de la migración
linfocitos T. direccional de las células, particularmente en res-
puesta a gradientes de concentración de ciertos
Procesamiento antigénico: Modificación del factores quimioatractantes o quimiotácticos.
antígeno en una forma que puede ser reconocido
por los linfocitos T. Quininas: Grupo de mediadores vasoactivos que
se producen tras la lesión tisular.
Proteasoma: Es un complejo de proteasas
multicatalíticas que rompe proteínas citosólicas en Radioinmunoensayo: Método analítico cuantita-
pequeños fragmentos. Dos de sus componentes tivo en el cual un isótopo radiactivo es usado para
(LMP-2 y LMP-7) son codificados dentro del MHC. detectar antígenos o anticuerpos en alguna forma
El proteasoma produce trocitos de antígeno que puede inmunoensayo.
den ser cargados sobre moléculas MHC de clase I.
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR):
Método de amplificación de segmentos de DNA
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o RNA de composición conocida, usando mente en el suero, las que pueden activar el siste-
partidores para iniciar la polimerización por las ma del complemento.
DNA o RNA polimerasas termoestables.
Respuesta primaria: Es la respuesta inmune
Reacción cruzada: La reacción de un anticuerpo (celular o humoral) que se produce después de un
con un antígeno diferente del que estimuló su se- encuentro inicial con un determinado antígeno.
creción.
Respuesta secundaria: Respuesta inmunitaria
Receptor: Molécula de la superficie celular que que sigue a un segundo o subsiguiente encuentro
se une específicamente a su ligando (proteínas o con un determinado antígeno.
péptidos).
Respuesta tipo Th1 y tipo Th2: El sub-set de
Receptor Fc: Receptor para los fragmentos Fc de linfocitos Th1 promueve las respuesta de tipo ce-
inmunoglobulinas, presente en varias células. lular, mientras que el sub-set Th2 promueve res-
puestas mediadas por anticuerpos. Cada modo de
Receptor de células T: Receptor antigénico de respuesta modula a la otra. Por ejemplo, el IFNγ
las células T que consta de un dímero alfa/beta producido por linfocitos Th1 limita la prolifera-
(TCR-2) o gamma/delta (TCR-1), asociado al ción de células Th2.
complejo CD3.
Restricción MHC: Los linfocitos T reconocen
Recombinación: Proceso por el cual la informa- antígenos asociados con ciertas moléculas MHC.
ción genética se redistribuye durante la meiosis. Por ejemplo, un linfocito T que reconoce un
Este proceso tiene lugar también durante la antígeno asociado con H-2Kb no lo reconoce si
redistribución somática del DNA, que ocurre en está asociado con H-2Db ó H-2Kk. La base de esta
la formación de los genes que codifican las molé- observación, es que los linfocitos T pueden
culas de anticuerpo y los receptores antigénicos interactuar con moléculas MHC propias que han
de las células T. sido selectivamente expandidas en el timo, y que
están preparadas para responder a antígenos so-
Región constante: Región carboxilo terminal, bre células presentadoras de antígeno que tienen
relativamente invariable de las cadenas pesadas y estos mismos MHC.
livianas de las inmunoglobulinas, y las cadenas
alfa, beta, gamma y delta de los receptores de cé- Retrovirus: Virus que contiene y utiliza una
lulas T. transcriptasa inversa.
Región hipervariable: Se refiere a las tres zonas Roseta E: Formación de un grupo (roseta) de cé-
más variables de la región V en las cadenas de lulas consistente en eritrocitos y linfocitos T hu-
inmunoglobulinas y de los receptores de células manos.
T. Estas regiones contribuyen al sitio de unión con
el antígeno. Roseta EAC: Grupo de eritrocitos sensibilizados
con anticuerpo y complemento, alrededor de
Repertorio: Es la suma total de receptores para linfocitos B humanos.
antígeno producido en el sistema inmune de una
especie dada. El repertorio inicial está parcialmen- Segmentos de andamiaje: Secciones de las re-
te determinado por los genes del TCR y por las giones V del anticuerpo, situadas entre las regio-
cadenas H y L de las inmunoglobulinas. nes hipervariables.
Respuesta inmune celular: Proceso en el cual, Seudogenes: Genes con estructuras homólogas a
la actividad inmune es llevada a cabo por linfocitos las de otros genes, pero que no pueden ser expre-
T citotóxicos y células NK principalmente. sados.
Respuesta inmune humoral: Proceso en el cual, S.I.D.A.: Inmunodeficiencia, causada por el vi-
la actividad inmune es mediada por rus de inmunodeficiencia humana (VIH).
inmunoglobulinas que se encuentran principal-
797
Sin título-2 797 5/26/06, 10:27 AM

Sinergismo: Interacción cooperativa. Tolerancia: Falta de respuesta inmune específi-
ca.
Singénico: Animal perteciente a cepas obtenidas
mediante procreación endogámica, de forma que Toxoide: Derivado antigénico no tóxico
las parejas de autosomas dentro de un individuo proveniente de una toxina.
son idénticas.
Transcriptasa reversa: Enzima que cataliza la
Sistema fagocítico mononuclear (SFM): Inclu- transcripción del RNA a DNA.
ye monocitos y macrófagos.
Transferencia pasiva: Tratamiento basado en la
Sistema linfático: Es el sistema de vasos que re- transferencia de anticuerpos o células inmunes
corre el cuerpo y recibe el exudado de los tejidos extraídos de un individuo sensibilizado a un
llevándolo a la sangre. Este líquido transparente antígeno, a otro individuo.
recibe el nombre de linfa. Este sistema también
actúa como una ruta importante en el movimiento Vacunación: Inmunización con antígenos admi-
de antígenos desde la periferia a los nódulos nistrados para la prevención de enfermedades in-
linfáticos y en la re-circulación de linfocitos y cé- fecciosas.
lulas dendríticas.
Vacuna anti-idiotípica: Vacuna que contiene un
Subclases de inmunoglobulinas: Subdivisión de anticuerpo anti-idiotípico como inmunógeno. El
las clases de inmunoglobulinas basado en diferen- anticuerpo anti-idiotípico es una imagen interna
cias antigénicas y estructurales en las cadenas pe- de un antígeno.
sadas (H). En humanos existen cuatro subclases
de IgG: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Vacuna recombinante: Vacuna que contiene un
antígeno preparado mediante tecnología del DNA
Superfamilia de las inmunoglobulinas: Grupos recombinante o un virus recombinante como
de genes relacionados estructuralmente que codi- inmunógeno.
fican a las inmunoglobulinas, receptor de células
T, moléculas MHC y otras moléculas. Vacuna génica: Contiene DNA que codifica un
antígeno.
Supresión: Una subpoblación de linfocitos T (T
supresores o Ts) modula la actividad de otros Vacuna sintética: Vacuna que contiene péptidos
linfocitos. sintéticos como inmunógeno.
TAP-1 y TAP-2: (Proteínas transportadoras de Vía alternativa del complemento: Vía de activa-
antígeno) Son miembros de la familia de trans- ción del sistema del complemento en que inter-
portadores ABC codificados en el MHC. Ellas viene C3 y los factores B, D, P, H e I. Interactúan
transfieren péptidos a través de la membrana del en la vecindad de una superficie activadora para
retículo endoplásmico, para ser presentados a constituir una vía alternativa en la formación de
moléculas MHC de clase I. la C3-convertasa.
Timo: Órgano linfoide primario habitualmente Vía clásica del complemento: Vía por la cual los
ubicado en la parte superior del tórax, en el cual complejos antígeno-anticuerpo pueden activar el
se produce el desarrollo y maduración de las célu- sistema del complemento; en la generación de C3
las T. convertasa participan los componentes C1, C2 y
C4.
Título de anticuerpos: Concentración relativa de
los anticuerpos presentes en una muestra de suero Vía de la lipoxigenasa: Metabolismo enzimático
u otro fluido. de la membrana celular. A partir del ácido ara-
quidónico se generan leucotrienos.
TNF (“Tumor Necrosis Factor”): Citoquina li-
berada por los macrófagos activados. Vía lítica: Participan los componentes C5-C9
(Complejo de ataque a membrana), responsable
798
Sin título-2 798 5/26/06, 10:27 AM

de la lisis de las membranas en las células
sensibilizadas.
Xenogénico: Dícese de las diferencias antigénicas

interespecies.
Xenosensibilización: Respuesta inmune de una

especie animal contra antígenos de otra especie.
Referencia
Palomo I., Ferreira A., Sepúlveda C., Rosemblatt
M., Vergara U., (Eds.), Fundamentos de
Inmunología, Editorial Universidad de Talca,
1998. Modificado por Palomo I., Carrión F.,
Becker M. I.
799
Sin título-2 799 5/26/06, 10:27 AM

800
Sin título-2 800 5/26/06, 10:27 AM

ÍNDICE ALFABÉTICO GENERAL DE MATERIAS
A Antígeno 105
asociación MHC 185, 187
clasificación 113
ABO (ver Sistema ABO) 111, 440 características 113
Activación 65, 195, 202, 205 de diferenciación 759
Adenina 740 determinante antigénico 106
Adenosin deaminasa 499 epítopo (ver en E)
ADN 739 eritrocitario 111, 439
Adyuvante de Freund`s 600 hapteno 108
Afinidad 136 histocompatibilidad 174
Agammaglobulinemia 499 neutrófilos 453
Alelos, exclusión 142 plaquetas 446
Alergeno 114 procesamiento y presentación
Alergia 381 endógena 185
Aloinjerto 621 exógena 187
Aloinmunidad 442, 447 Anti-idiotipo 283
Alogénico 621 Antihistamínicos 381
Anafiláctico, shock 393 Apoptosis 271
Anemia hemolítica inmune 439 Artritis Reumatoídea 411
Anergia clonal 272 Asma bronquial 381, 395
Anticuerpo (ver además Inmunoglobulina) Atópico 380
afinidad 136 Autoanticuerpo 404
anti-citoplasma de neutrófilos 455 Autoantígeno 404
antiespermáticos 321 Autotrasplante 621
antifosfolípidos 425 Autoinmune 404
anti-idiotipo 283 Autotolerancia 404
anti-injerto 623
avidez 136
biosíntesis 146
biotecnología (usos) 731 B
cadenas
livianas 127 β2-microglobulina 171
pesadas 127 Bacteria, inmunidad frente a 533
clases 130 Basófilo 74
diversidad 136 Bazo 82
estructura 120
monoclonal 721
Antigenicidad 106
801
Sin título-2 801 5/26/06, 10:27 AM

C clase II 172
clase III 173
Complejo inmune 383
C, región Complejo multicatalítico (ver proteasoma)
inmunoglobulina 127 Complemento
receptor célula T 152 vía
Cadena alterna 341
α clásica 337
MHC clase I 174 C1 333
MHC clase II 174 C2 333
β C3 333
MHC clase II 174 C4 333
célula T 152 C5 333
δ C6 333
anticuerpo 133 C7 333
receptor célula T 153 C8 333
γ C9 333
anticuerpo 131
receptor célula T 153
Invariante (Ii) 188
κ 127 D
λ 127
Calnexina 188 D, región
CD, moléculas 759 genes cadenas H de Ig 137
CDR 136 Deficiencia inmunitaria combinada grave
Célula (SCID) 498
de Langerhans 65 Déficit
endotelial columnar (CEC) 81 adenosin desaminasa 498
M 304 adhesión leucocitaria 498
métodos de separación 658 mieloperoxidasa 498
leucocito (ver en L) purín-nucleósido-fosforilasa 499
presentadora de antígenos (CPA) 183 Deleción clonal 272
Centro germinal 80 Desoxirribosa 740
CSF 56 Dermatitis por contacto 385
CFU 56 Determinante antigénico (ver Epítopo)
Chaperonina 187 Diacilglicerol 194
Citolisis Difusión en gel agarosa 643
complemento 344 Di George, anomalía de 507
linfocitos Tc 352 Disociación, constante de 136
«natural killer» 358 Disgenesia reticular 505
Citopenia Dominios de inmunoglobulinas
inmune 439 dominios constantes 130
Citoquina (ver Interleuquina) dominios variables 128
Citosina 740 Donante 621
Citotoxicidad
análisis de 658 E
mediada por célula 349
Clonamiento 742
Efecto “carrier” 598
Colágeno 55
Electroforesis 462
Complejo ataque membrana 344
ELISA 650
Complejo Principal de Histocompatibilidad ( MHC)
Endotelio columnar 81
antígeno (o molécula) 169
Enzimas de restricción 742
clase I 171
Eosinófilo 73
802
Sin título-2 802 5/26/06, 10:27 AM

Epítopo 106 Hipersensibilidad
Exon 747 manifestaciones orales 749
tipo I 381
tipo II 382
F tipo III 383
tipo IV 384
Hipogammaglobulinemia 498
Fab 128 Histamina 75, 380, 390
Factor “Homing” linfocitario 253
B (Complemento) 332
D (Complemento) 332
estimulante de colonias granulocito/macrófago
(ver GM-CSF) I
H (Complemento) 332
I (Complemento) 332 Idiotipo 130
necrosis tumoral (TNF) 217 Idiotopo 130
quimiotáctico 67 IgA secretora 133, 305
Fagocitosis 70 Inflamación 96
fagosoma 70 Inmunidad
opsonización 70, 330 adquirida 58, 100
Fibronectina 55 innata 87
Fluorescencia 649, 701 “Immunoblotting” 651
Fluorocromos 706 Inmunodeficiencia
Fusión 725 manifestaciones orales 480
primaria 497
secundaria 513
G Inmunodifusión 643
Inmunoelectroforesis 463, 644
Inmunofluorescencia 649
Gammaglobulinas 461 Inmunógeno 590
Ganglios linfáticos 80 Inmunogenicidad 106
Gen 739 Inmunoglobulina (ver además Anticuerpo)
Glucocorticoides 631 IgA 132
GM-CSF 56 IgD 133
G-CSF 56 IgE 134
Granulocito 65 IgG 131
Guanina 740 IgM 132
BCR 120
Inmunomodulador 629
Inmunoprecipitación 641
H Inmunosupresión 624
Inmunoterapia 613, 629
Hapteno 108 Inmunotoxinas 614
Haplotipo 176, 691 Infección 533, 547, 559, 569
HAT (medio selección) 723 Inositol 1,4,5-trisfosfato (IP3) 199
Hemaglutinación 647 Integrinas 245
Hematopoyesis 55 Interleuquinas 211
Heterohibridomas 731 Intron 747
Hibridomas 722 Isotipo 130
HLA 171, 687
803
Sin título-2 803 5/26/06, 10:27 AM

J M
J, cadena Macrófago 63
IgA 132 MALT (“Mucosal Associated Lymphoid
IgM 132 Tissue”) 83
Mastocito 75, 381, 389
M-CSF 56
K Médula ósea 75
Megacariocito 56
MHC (ver Complejo Principal de
Ka (constante de Histocompatibilidad)
asociación o afinidad) 136 Mieloma múltiple 467
κ (cadena Kappa) 127 Moléculas de adhesión
Kd (constante de disociación) 136 Integrinas 245
Superfamilia de las Ig 246
Selectinas 248
L Moléculas CD (ver CD, moléculas)
Monocito 62
λ (cadena Lambda) 127 Monoclonal (ver anticuerpo monoclonal)
Laminina 55
Leucocito
basófilo 74 N
eosinófilo 73
linfocito 57 “Natural killer” 58, 351
monocito 62 Neutrófilo 65
neutrófilo 65 Neutropenia inmune 453
Leucoplasia pilosa 481
Leucotrieno 90
Linfocito
B O
activación 62
de memoria 60 Opsonización 330
diferenciación 266 Órganos linfoides
función 59 primarios 75
marcadores 777 secundarios 80
receptor antigénico (BCR) 120
T
activación 62 P
citotóxico 59, 352
de memoria 60, 352
diferenciación 59, 269 Papaína 128
«helper» 59 Parásito, respuesta inmune a 569
moléculas accesorias 163 Paratopo 127
MHC 181 Péptidos
receptor (TCR) 152 reconocimiento por TCR 181
CD3 154 unión a moléculas MHC 184
Th1, Th2, Th0 226, 282 vacunas sintéticas 596
Linfoquinas (ver Interleuquina) Perforina 355
LMP 185 Plaqueta 56, 445
Lisozima 93 Plasma
Litre 114 proteínas, inflamación 98
Lupus Eritematoso Sistémico 402, 416 Plasmacitoma 470
804
Sin título-2 804 5/26/06, 10:27 AM

Polimorfismo Shock anafiláctico (ver, Anafiláctico shock)
moléculas MHC 170, 687 SIDA 513
Polimorfonuclear Síndrome
separación de 658 antifosfolípido 425
evaluación de función 678 de Good Pasture 402, 382
Properdina 332 de Sjögren 432
Prostaglandinas 96 de Wiskott-Aldrich 507
Proteasoma 185 Hiper-IgM 501
Proteína de Bence-Jones 461 Inmunodeficiencia adquirida o secundaria 511
Proteína Kinasa 196 Sistema antígeno leucocitario
humano (HLA) 169, 687
Sistema
Q ABO (grupo sanguíneo) (ver ABO)
complemento 329
endocrino 292
Quimioquinas 237 fagocítico-mononuclear 62
Quimiotaxis 67 inmune, célula 55
linfático 57
quininas 94
R “Southern blot” 743
Superantígeno 114
Radioinmunoanálisis 652 Superfamilia de las Inmunoglobulinas 246
Reacción de la polimerasa en cadena 745
Receptor
de células B (BCR) 120 T
de células T (TCR) 152
citoquinas 219 Timina 740
Fc 68, 127 Timo
fracciones del Complemento 332 desarrollo célula T 269
moléculas de adhesión 244 estructura 78
Respuesta inmune Timocito 270
células que intervienen 55 Tiroiditis Hashimoto 402
funciones efectoras 329, 351, 367 Tirosina kinasa (ver Proteína Kinasa)
regulación 277 Tolerancia
selección clonal 62 oral 309
Rinitis alérgica 381 Transgénico 746
Ribosa 740 Transmigración linfocitaria 250
RNA 739 Trasplante (Inmunología) 621
Trombocitopenia inmune 445
Tumor (Inmunología) 607
S
S, proteína 332 U
Segundo mensajero 199
Selección Úlcera oral recurrente (aftas) 484
clonal 62 Unión, antígeno-anticuerpo 640
negativa 272 Uracilo 740
positiva 271
Selectinas
E-Selectina 248
L-Selectina 248
P-Selectina 248
805
Sin título-2 805 5/26/06, 10:27 AM

V
V (región variable)
inmunoglobulinas 128
receptor de células T 152
Vacunas
adyuvantes 600
anti-idiotípicas 596
efecto “carrier” (ver efecto “carrier”)
naturales (tradicionales) 590
recombinantes 593
sintéticas 596
Virus, inmunidad frente a 559
W
“Western blot” (ver “Immunoblotting”)
X
Xenoantígeno 621
Xenotrasplante 621
Z
Zona
exceso 642
equivalencia 642
806
Sin título-2 806 5/26/06, 10:27 AM

807
Sin título-2 807 5/26/06, 10:27 AM

Este libro se terminó de imprimir en
Impresora Gutenberg-Talca, en una tirada de
450 ejemplares en Octubre de 2002.
808
Sin título-2 808 5/26/06, 10:27 AM

Inmunologia

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Fundamentos

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

Registro de propiedad intelectual © N° 128.873

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

Talca- Chile, julio de 2009

Sin título-2 1 5/26/06, 10:25 AM

EDITORIAL UNIVERSIDAD DE TALCA

Talca - CHILE, 2002

Sin título-2 2 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 3 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 4 5/26/06, 10:25 AM

Prof. Dr. Iván Palomo González

Prof. Dr. Arturo Ferreira Vigouroux

Prof. Dra. Cecilia Sepúlveda Carvajal

Prof. Dr. Mario Rosemblatt Silber

Prof. Dr. Ulises Vergara Castillo

Sin título-2 5 5/26/06, 10:25 AM

Dra. Ana María Agar Muñoz Dra. Luz P. Blanco Palma

Sin título-2 6 5/26/06, 10:25 AM

Dra. Susana Elgueta Miranda Prof. Dr. Jorge González Cortés

Sin título-2 7 5/26/06, 10:25 AM

Prof. Dr. Mauricio Oqueteaux Prof. Dr. Cristián Rodríguez Guiraldes

Sin título-2 8 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 9 5/26/06, 10:25 AM

International Union of Immunology Societies (IUIS)

Network for Research and Training in Parasitic Diseases

International Union of Immunology Societies (IUIS)

Sin título-2 10 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 11 5/26/06, 10:25 AM

SECCIÓN I: GENERALIDADES SOBRE INMUNIDAD 37

Sin título-2 12 5/26/06, 10:25 AM

SECCIÓN II: ESPECIFICIDAD DE LA RESPUESTA INMUNE 101

Sin título-2 13 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 14 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 15 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 16 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 17 5/26/06, 10:25 AM

SECCIÓN III: MECANISMOS EFECTORES DE LA RESPUESTA INMUNE 325

Sin título-2 18 5/26/06, 10:25 AM

SECCIÓN IV: INMUNOLOGÍA CLÍNICA 375

Sin título-2 19 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 20 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 21 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 22 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 23 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 24 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 25 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 26 5/26/06, 10:25 AM

SECCIÓN V: MÉTODOS INMUNOLÓGICOS Y DE BIOLOGÍA

Sin título-2 27 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 28 5/26/06, 10:25 AM

Sin título-2 29 5/26/06, 10:25 AM

ÍNDICE ALFABÉTICO GENERAL DE MATERIAS 801

Sin título-2 30 5/26/06, 10:25 AM

Adicionalmente, queremos expresar en estas líneas nuestro reconocimiento a los

Sin título-2 31 5/26/06, 10:25 AM

El libro Fundamentos de Inmunología (Julio de 1998, 33 capítulos) representó

Este texto cuenta con 46 capítulos, estructurados en cinco secciones: En la sec-

Por tratarse de un texto docente, con el propósito de facilitar la lectura, en los

En los últimos años se han realizado importantes avances en el conocimiento del

Sin título-2 32 5/26/06, 10:25 AM

Si bien el texto está escrito en castellano, se usarán algunos términos y siglas en