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Tecnicas de Colecta y Tincion de Parasitos Microbiologia II
Tecnicas de Colecta y Tincion de Parasitos Microbiologia II
colecta y
tincin de
parsitos
24 de septiembre
2008
Prctica III
Introduccin:
MTODOS DE COLORACIN:
Se utilizan para diferenciar fcilmente la morfologa y
estructura de los organismos en observacin.
Los colorantes modifican el ndice de refraccin de las
sustancias que colorean.
COLORACIN DE GIEMSA: se emplea en Hematologa
para observar los elementos sanguneos normales y en
Microbiologa para identificar parsitos (protozoarios de
la sangre y los tejidos), espiroquetas, levaduras y hongos
(Chlamydia).
Observacin: Los ncleos de clulas y protozoarios se
observan en color, el citoplasma en color azul claro. Los
eritrocitos en color gris claro.
Utilidad: se emplea principalmente en frotis sanguneos
para observar a los agentes patgenos junto a las clulas
sanguneas y mostrar las diferencias entre ambos. Se
ponen en evidencia la morfologa y estructura de los
microbios. Estas diferencias pueden ayudar al
diagnstico certero de varias enfermedades infecciosas
de la sangre.
Nota: El colorante de Giemsa es un colorante compuesto
ya que es una mezcla de varios colorantes. Por esto se
dice que la coloracin de Giemsa es una coloracin
compuesta o diferencial (ya que emplea ms de un
colorante).
Fundamento: se basa en la distinta afinidad que
demuestran las clulas y sus componentes a los distintos
colorantes incluidos en el colorante de Giemsa.
Tcnica: se realiza el extendido de la gota de sangre (gota
gruesa del pulpejo del dedo gordo). Se deja secar, se
cubre con la solucin de Giemsa, se lava con agua y se
observa. El fijador (metanol o etanol) se usa cuando se
cuentan con muestras de tejidos, no debe usarse con
extendidos de sangre.
Resultados errneos: se deben principalmente a errores
durante el extendido sanguneo o durante la aplicacin
del fijador.
La tincin de Giemsa emplea como colorante
fundamental, una mezcla de ticinicos catdicos, como el
Tiempo
tincin
excesivamente
prolongado.
Empleo de colorante excesivamente alcalino
Una coloracin excesivamente rosada (acidfila).
Extensin delgada.
Exceso de buffer.
Empleo de colorante excesivamente cido.
Solucin colorante de Giemsa
La solucin colorante de Giemsa se usa tanto para
manchas de sangre como para manchas de bacterias.
Una parte de la solucin base concentrada se deber
diluir en diez partes de agua destilada.
Utilice una mancha de sangre secada al aire y fije la
pelcula al portaobjeto colocndola en alcohol metlico
de 70% de tres a cinco minutos. Seque el portaobjeto al
aire. Luego coloque el portaobjeto en un plato o frasco
(en el frasco de Coplin, si se cuenta con uno) que
contenga solucin colorante de Giemsa de 15 a 30
minutos. Finalmente lave el portaobjeto en agua
destilada y squelo.
Muchas soluciones colorantes (generalmente aquellas
que son tintes bsicos de anilina, como la fucsina bsica,
el violeta cristal, el azul de metileno y la safranina) puede
ser usadas para colorear la bacteria. Se deber diluir la
solucin colorante; vierta una parte de la solucin base
concentrada en diez partes de agua. Se deber aplicar la
solucin colorante de uno a dos minutos, lavando luego
y, por ltimo, secando con papel secante. Los
cubreobjetos no son necesarios a menos que quiera
volver sus portaobjetos en permanentes. En tal caso,
aada una gota de blsamo cuando el portaobjeto est
seco y luego aada un cubreobjeto.
FILARIAS
Son un tipo de gusanos de aspecto filamentoso, largos y
delgados, que suelen aparecer en el tejido linftico
enrollados unos a otros.
La hembra puede tener distintas localizaciones en el
organismo y es la que produce las microfilarias que
alcanzan el torrente circulatorio. Cuando el individuo es
picado por un mosquito, le transfiere las microfilarias y
en su interior desarrolla el ciclo infeccioso de las larvas.
Cuando este mosquito vuelve a pica a otra persona, le
transmite las larvas.
La deteccin se lleva a cabo en sangre perifrica y ser
necesario realizar varias tomas ya que la presencia en
sangre es variable.
Las dos especies ms importantes desde el punto de
vista clnico son: (infecta los vasos linfticos y regin
inguinal) y
Tcnicas para la coloracin de protozoos
Mtodo de Klein modificado (impregnacin de plata para
tri codnidos)
Preparar frotis delgados tanto de piel como de las
branquias en un portaobjeto bien limpio.
Se deja secar al ambiente.
Objetivos:
Mtodo:
1.- Sangre
a) Tcnica de gota gruesa
Se pincho un dedo e inmediatamente se tomo una
muestra de sangre y se procedi a realizar el siguiente
procedimiento. Esquema A:
Trematoda
Fasciola
hepatica
Sapo:
Sacrificar ectoparasitos
Obtencin y fijacin
Conservacin tincin
Montaje y observacin
Identificacin
Busqueda de en la superficie
de los organos internos y
menbranas serosas la
presencia de quistes
Resultados:
Tabla 1: Organismos encontrados en la practica
organismo
Acaro
Ascaris
Clase
Genero
Especie
Ciliophora*
Secernentia
Balantidium
Ascaris
sp
lumbricoides
Hgado de Res
Anlisis de resultados:
Conclusiones:
Con base en la prctica se colecto parsitos de animales
de vida libre y en cautiverio, tambin se realizo las
diferentes tcnicas de tincin que se utilizan en
parasitologa observando que cada una de ellas ofrece
una utilidad, por ejemplo la tincin de Wright es rpida
en comparacin a Giemsa, aunque en sta ltima se
pueden observar mejor los detalles y puede ser usada en
frotis fino y de gota gruesa, as mismo realizo la forma
correcta de realizar preparaciones de los parsitos
colectados y su conservacin en AFA
Referencias:
PARASITOLOGA MEDICA. Jorge Tay
Zavala, Ramon Lara Aguilera et.al. 5a
edicin. Editorial Mendez editores. Mxico
1995.
Biagi Francisco. Enfermedades
parasitarias. Editorial el Manual Moderno.
3ra ed. Mxico, 2004.
Fasciola:
El ciclo biolgico se puede dividir en 3 fases:
1.) PUESTA Y ELIMINACIN DE HUEVOS:
Una fasciola adulta puede poner una media de 3.500
huevos al da, pero esta cifra puede variar en funcin de:
a) Antigedad de la infestacin: a mayor edad de la
fasciola, menor nmero de huevos pone.
b) poca estacional: en los meses de marzo, abril y mayo
la puesta es mxima, siendo mnima en los meses de
enero y febrero. c) Grado de parasitacin: a mayor
nmero de fasciolas albergadas en el hgado menor
nmero de huevos ponen.
de
quistes,
11.40g
200.0mL
100.0mL
47.0mL
3.0mL
15.0mL
15.0mL
PROCEDIMIENTO
Hacer un frotis en un portaobjetos y emulsionarlo con
solucin salina isotnica; es necesario que la capa quede
delgada. Antes de que las heces se sequen, se fija con
Schaudinn durante sesenta minutos. (se puede dejar
toda la noche en el fijador).
Trichuris trichiura
Ciclo de vida
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