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Manual de Practicas
Manual de Practicas
MANUAL DE PRCTICAS DE
LABORATORIO
SERIE BLANCA
ELABOR:
Serie Blanca
Facilidad
Especialm
DESVENTAJAS.
Slo logra
obtenerse una pequea cantidad de sangre que puede ser insuficiente.
Es
un
mtodo por lo general tardado y que tiende a provocar hemlisis de la muestra
En pacientes inmunocomprometidos puede provocar infecciones, excepto cuando se
realiza la puncin despus de 8 a 10 min. de contacto con la piel con un buen
antisptico.
Obtencin De Sangre Venosa .
Es el principal mtodo de extraccin de sangre en el laboratorio de anlisis clnicos, ya que
es relativamente fcil de realizar.
VENTAJAS.
Nos permite hacer mltiples exmenes y en repetidas veces si se desea, con la misma
muestra.
Las alcuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura referencia.
DESVENTAJAS
Puede provocar la coagulacin de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo.
Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada.
Puede dificultarse en nios, pacientes obesos en estado de shock.
Serie Blanca
Serie Blanca
DESCRIPCIN
Tubos de recogida de muestras con EDTA
Aguja de Vacutainer
Contenedor de Vacutainer
Jeringa
Lanceta
Torundas de algodn con alcohol isoproplico
Ligadura
4. PROCEDIMIENTO.
4.1 Puncin Capilar
4.1.1 Indicaciones.
En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna externa del taln.En nios de ms
de un ao, en la superficie palmar de la ltima falange del segundo, tercero cuarto dedo
de la mano.La puncin no deber realizarse en una parte edematosa congestionada,
donde la piel se encuentra fra y ciantica.
4.1.2
Serie Blanca
Actividades:
- Practicar la toma de sangre capilar.
- Practicar la toma de sangre venosa.
-Realizar esquemas de puncin capilar .
Serie Blanca
Serie Blanca
-Realizar esquema de los diferentes sistemas de extraccin: jeringa y sus partes; sistema
vacutainer y sus partes; tipos de tubos y colores de tapones empleados en el sistema
vacutainer, de acuerdo con el anticoagulante empleado .
- Reporte de resultados.____________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
Serie Blanca
_______________________________________________________________
Serie Blanca
4. PROCEDIMIENTO.
Tcnica de los dos Portaobjetos.
1. Colocar a una distancia de 1.5-1.9 cm del extremo derecho de un portaobjetos, una
pequea gota desangre ( del tamao de 3 cabezas de alfiler) obtenida por puncin capilar
del taln, del lbulo de la oreja por extraccin venosa.
2. Si se emplea sangre venosa mezclada con anticoagulante, el frotis deber realizarse lo
ms pronto posible, debido a que el contacto prolongado con ste altera la morfologa
celular.
3. Aproximar el portaobjetos extensor a la gora, dejando que hagan contacto y que por
capilaridad ste se extienda a lo largo del borde.
4. Se desliza el portaobjetos extensor hacia el extremo contrario, para lograr una pelcula
delgada de sangre.
5. dejar secar y teir.
NMERO
2
1
1
1
1
1
1
DESCRIPCIN
Tubos de recogida de muestras
Aguja de Vacutainer
Contenedor de Vacutainer
Jeringa
Torundas de algodn con alcohol isoproplico
Ligadura
Caja de portaobjetos limpios
ACTIVIDADES:
-Realizar 10 frotis
correctamente
confeccionados.
-Realizar
esquema
que
muestra
las
partes de un
frotis .
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10
- Reporte de resultados.____________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
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Causas
Tiempo excesivo de tincin
Lavado deficiente
Ph muy alcalino
Como se Corrige
Disminuir el tiempo de tincin
Lavar adecuadamente
Acidificar el pH
Precipitacin de colorante
Colorante no filtrado
Filtrado de colorante
Secado de la laminilla durante laProcurar que siempre haya un
tincin.
buen menisco de colorante durante la
tincin.
ANTICOAGULANTES.
Los 4 anticoagulantes ms usados son: mezcla de oxalato amnico y de potasio (
simplemente oxalato amnico ), citrato trisdico, sequestrene ( EDTA ), y heparina.
Los 3 primeros impiden la coagulacin sustrayendo el calcio del plasma sanguneo por
precipitacin fijacin en forma no ionizada. La heparina neutraliza la trombina y otras fases
de la activacin de los factores de coagulacin.
El citrato trisdico, el EDTA y la heparina, pueden emplearse para impedir la
coagulacin de la sangre destinada a transfusiones, sin embargo, la mezcla de oxalatos, no,
por ser txica.
Los oxalatos pueden usarse para determinaciones como hemoglobina, hematocrito y
recuentos globulares, aunque para extensiones sanguneas puede usarse tan slo en los
primeros minutos, pues ms tarde pueden desarrollarse alteraciones de las clulas
sanguneas como formas dentadas de los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los
granulocitos, fagocitosis de los cristales de oxalato, artefactos en los ncleos de los linfocitos
y monocitos, etc.Adems no deben emplearse para determinaciones qumicas de nitrgeno y
potasio. Para investigaciones de coagulacin, es muy til el citrato trisdico.
El EDTA sequestrene es tal vez el anticoagulante ms usado para el recuento de
clulas sanguneas. Se le compara con el oxalato para el estudio del hematocrito y
hemoglobina, pero para estudios morfolgicos, es todava mejor, pues con l, no se forman
alteraciones ni artefactos en las clulas sanguneas, an despus de un buen tiempo de estar
hecha la mezcla, si la sangre se refrigera ( 2 horas a 24 horas ).
La heparina tambin puede usarse para determinaciones como hematocrito y
hemoglobina, pero no de ptimos resultados en las extensiones sanguneas, ya que produce
un fondo azul en aqullas que son teidas con el colorante de Wright.
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3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos.
NUM.
1
2
3
4
5
6
7
CANTIDAD
0.1 g
60 ml
2.56 g
6.66 g
3g
0.8g
1.5L
CANTIDAD
1
2
1
4
1
3
1
1
10
DESCRIPCIN
Mortero
Probetas de 100 ml
Matraz Volumtrico de 100 ml
Varillas de vidrio
Frasco de vidrio color mbar de 1L de capacidad
Frascos de vidrio color mbar de 150 ml de capacidad
Jeringa sistema vacutainer para toma de muestra
Ligadura
Portaobjetos
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Colorante de Wright:
Metanol:
0.1 g
60 ml
Se tritura el colorante con el alcohol en un mortero; sto se hace poco a poco. Esta
operacin debe durar 30 min. hasta completar disolucin. Se deja reposar dos das y se filtra.
2.56 g
6.66 g
1L
Mezclar las sales con poca cantidad de agua destilada, e ir agregando poco a poco
ms agua, hasta aforar a 1 L. Guardar en un frasco mbar de 1 L.
3.4.3- EDTA.
EDTA
Agua destilada
3g
100 ml
0.8 g
80 ml
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica: Tincin de Wright.
4.1.1. Seleccionar un portaobjetos nuevo de 25 X 75 mm para hacer extendidos, que
tenga la orilla relativamente lisa.
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Actividades:
-Practicar la tincin de Wright con frotis de sangre perifrica.
-Corregir de acuerdo al recuadro , errores encontrados en la tincin.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
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Este objetivo debe utilizarse para evaluar la calidad de la tincin.Las clulas blancas
deberan verse fcilmente con este aumento.Si no es asi, el frotis debe ser nuevamente
teido.El borde aplumado debe ser examinado para buscar cmulos de plaquetas
filamentos de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta
evidencia de coagulacin podra interferir con muchas pruebas hematolgicas. Los extremos
laterales y aplumado deben evaluarse en bsqueda de un nmero desproporcionado de
leucocitos.,Las clulas ms grandes ( por ejemplo los neutrfilos y los monocitos, tienden a
acumularse ms en estos lugares y si el frotis est mal hecho, se acumularn ms en estas
reas, las cuales estn fuera del rea ideal de observacin.Si la mayora de las clulas se
encuentran en el borde aplumado, el frotis deber descartarse y prepararse uno nuevo.
2.2 Anlisis con alto poder.
Con este objetivo existen dos problemas por resolver. En primer lugar, se debe
seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial. Esta debe ser donde los
eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, y puede ser un rea en donde se encuentren 200
eritrocitos por campo. Si la cuenta de leucocitos es muy baja, puede ser necesario incluir
reas fuera del rea ideal con el fn de encontrar suficientes clulas blancas.El segundo
problema por resolver con este objetivo, ser estimar la cuenta total de leucocitos. Estando en
el rea ideal, contar el nmero de clulas blancas observadas en cinco a diez campos y
determinar el promedio. El promedio, multiplicado por un factor de correccin que a menudo
est entre 2000 y 2,500 ( 2 a 2.5 en miles) representar la cuenta total del leucocitos.
2.3 Anlisis con objetivo de inmersin.
Con este objetivo, la cuenta diferencial de leucocitos debe estimarse, la cuenta de
plaquetas, tambin debe poder estimarse y los tres tipos de clulas ( leucocitos , eritrocitos y
plaquetas ) deben observarse en bsqueda de anormalidades morfolgicas.
La cuenta diferencial consiste en identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos, y
reportar estos valores como un porcentaje. Es importante incluir las clulas de los mrgenes,
as como las del cuerpo del frotis. As, para lograr esto, debe seguirse el patrn de
observacin de la imagen siguiente:
El nmero de plaquetas tambin puede ser estimado con este objetivo. Empleando la
misma rea que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero no se
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sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este nmero ser
convertido en no. de plaquetas/l de sangre, como se hizo con la cuenta de leucocitos.
Deber calcularse el nmero promedio de plaquetas por campo, y dicho nmero se
multiplicar por un factor determinado por el propio laboratorio en base a la combinacin de
los objetivos y oculares empleados en sus microscopios. Por ejemplo, cada plaqueta,
observada representa 15,000 plaquetas 20,000 / l. Si se llegaron a observar un promedio
de 12 plaquetas por campo, entonces, la cuenta total de plaquetas sera de 180,000/ l en el
primer caso, 240,000 / l en el segundo caso.
La ltima actividad a realizar con este objetivo, sera evaluar la morfologa celular. Esto
puede irse haciendo a medida que se va realizando la cuenta diferencial. Cualquier
anormalidad inclusin en clulas rojas y blancas, deber reportarse. Tambin es importante
evaluar la forma y el tamao de los eritrocitos en esta misma rea. Las clulas suelen
distorsionarse en reas muy delgadas, demasiado gruesas. Las plaquetas tambin debern
evaluarse en su tamao y forma. Ms de una forma inusualmente grande de plaquetas, en
cada cinco campos debern ser reportadas .
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de laboratorio.
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
4.1 Anlisis con bajo poder.
4.1.1Evaluar la calidad de la tincin.
4.1.2Examen en el borde aplumado del frotis en bsqueda de cmulos de plaquetas
filamentos de fibrina.
4.1.3Evaluar extremos
laterales y aplumado en bsqueda de leucocitos
desproporcionados.
4.2 Anlisis con alto poder.
4.2.1Seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial.
4.2.3Estimar la cuenta total de leucocitos.
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ACTIVIDADES:
- Reporte de resultados
1. Anlisis con bajo poder.
1.1 Calidad de la tincin:_________________________________________________
__________________________________________________________________
1.2 Examen del borde aplumado del frotis ___________________________________
__________________________________________________________________
1.3 Examen de los extremos laterales y aplumado del frotis.____________________
_____________________________________________________________________
2. Anlisis con alto poder.
2.1 Seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial.________________
___________________________________________________________________
2.2 Estimar la cuenta total de leucocitos._____________________________________
______________________________________________________________________
3. Anlisis con objetivo de inmersin.
3.1 Recuento diferencial
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Metamielocitos
Bandas
Segmentados
Linfocitos
Monocitos
Eosinfilos
Basfilos
_____
_____
_____
_____
_____
_____
_____
100
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PORCENTAJE ( % )
0-2
0-11
40-74
12-46
1-13
LMITES ABSOLUTOS
<10-500
100-800
2000-6000
1000-4200
100-800
21
<100-200
<10-20
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Equipo de Laboratorio
1. Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Con el objetivo de inmersin, identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos en un
frotis teido con Wright, y reportar estos valores en por ciento.Se aconseja identificar el
rea ideal para la observacin: el rea del cuerpo del frotis, donde las clulas se tocan pero
no se sobreponen. El recorrido debe hacerse de manera vertical, para no omitir clulas de
los mrgenes y para no salirse del rea ideal para el recuento.
ACTIVIDADES.
Investigar en qu casos pueden encontrarse cada una de las lneas celulares reportadas en
la cuenta diferencial, con valores por arriba y por debajo de lo normal.
REPORTE DE RESULTADOS:
TIPO CELULAR
PORCENTAJE ( % )
VALORES
ABSOLUTOS
Metamielocitos
Bandas
Segmentados
Linfocitos
Monocitos
Eosinfilos
Basfilos
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Las pipetas empleadas para el recuento manual de glbulos blancos, son similares a
las que se usan para el recuento de glbulos rojos, pero presentan en su capilar superior, la
grabacin 11, y en la inferior, la grabacin 0.5, lo cual indica una dilucin distinta, que es en
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este caso de 1:20. Se emplea la misma cmara cuentaglbulos llamada cmara de Neubauer,
nada ms que el conteo y los clculos se realizan de diferente manera.
La cmara cuentaglbulos presenta un retculo con una superfcie total de 9mm, de
1 mm cada uno. Los cuadrados de las cuatro esquinas estn subdivididos en 16 cuadrados,
y el cuadrado central, en 25.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Reactivos
NUM
1
CONCENTRACIN
2%
CANTIDAD
50 ML
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1. Microscopio de Luz
DESCRIPCIN
Cmara de Neubauer
Pipeta para recuento de glbulos blancos
Tubo de ensaye de 13 X 100
Boquilla
PROCEDIMIENTO.
5.1
Tcnica.
4.1.1 Pipetear sangre hasta la marca de 0.5
4.1.2 Limpiar cuidadosamente con una gasa o papel suave el extremo de la pipeta
y completar con el lquido de dilucin hasta la marca de 11.
4.1.3 Mezclar en el agitador por 2 minutos.
4.1.4 Cargar la cmara con la dilucin bien homogeneizada
4.1.5 Dejar reposar
4.1.6 Contar los leucocitos contenidos en los cuatro retculos de las esquinas.
Estos se encuentran divididos en 16 cuadros cada uno.
4.1.7 Realizar clculos como indica la frmula:
N______x______20______x______10 =
4
N X 50
En donde:
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25
35
+
x 15,000
35
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26
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banda y
4.PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
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DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
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ACTIVIDADES.
Realizar una lista de enfermedades en las que se encuentren elevados los eosinfilos.
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Picnosis.
El ncleo del neutrfilo normalmente es algo picntico, pero pueden distinguirse la
paracromatina y la cromatina.Las clulas muertas las que estn a punto de morir, sin
embargo, tendrn un ncleo obscuro y redondo sin evidencia de estructura nuclear. Los
lbulos pueden estar separados puede haber un nico y redondo ncleo en degeneracin.
Las clulas pueden distinguirse como neutrfilas porque el citoplasma retiene el tiente rosa
habitual. Estas clulas tambin pueden ser identificadas como necrobiticas. En una muestra
fresca, estas clulas son evidencia de que el organismo est " perdiendo la batalla " en un
paciente con infeccin; tambin pueden aparecer en pacientes que reciben quimioterapia.
Estos cambios tambin pueden encontrarse como resultado de una prolongada exposicin al
EDTA.
Organismos intracelulares.
Esta es un tipo de inclusin muy rara de encontrar e indica la presencia del organismo
infectante, ya que una sola clula que presente un microorganismo es significativo. Puede ser
o bien una bacteria, bien una levadura, y puede observarse intra extracelularmente, e
indica una septicemia abrumadora, de mal pronstico aunque podra ser un artificio originado
por la toma de la muestra a travs de algn catter contaminado.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de picnosis y microorganismos
intracelulares.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
Serie Blanca
DESCRIPCIN
32
4.PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
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Granulaciones Txicas.
Este cambio representa la presencia de grnulos primarios no especficos, los cuales se
tien de color azul-prpura con la tincin de Wright como sucede con los del promielocito.
Pueden deberse al menor nmero de mitosis realizadas durante la maduracin celular.
Algunas clulas pueden contener slo unos pocos grnulos, otras, pueden contener muchos.
Las granulaciones txicas pueden ser vistas en una variedad de desrdenes inflamatorios
txicos, como por ejemplo, en infeccin bacteriana, ataque al corazn, insuficiencia renal,
gota, artritis reumatoide, as como en respuesta a una neoplasia.
Una granulacin aumentada tambin puede ser vista cuando el frotis es teido por mucho
tiempo. Si estos grnulos fueran realmente debidos a un proceso patolgico, no seran vistos
en todas las clulas, y adems aquellas que en verdad presenten granulaciones txicas, lo
harn en variedad de grados. Si todas las clulas se ven afectadas y en el mismo grado de
intensidad, sto debe considerarse como un artificio del frotis.
Vacuolizacin.
Ya que la principal funcin de los neutrfilos es la fagocitosis, si existe actividad
fagoctica aumentada, pueden haber numerosas vacuolas dentro del citoplasma como una
evidencia de sto. Estas son identificadas morfolgicamente como " hoyos " dentro del
citoplasma. Sin embargo, sto tambin puede ser el resultado de una exposicin prolongada
al EDTA. Al igual que en las granulaciones txicas, si todas las clulas se ven afectadas en el
mismo grado, debe sospecharse un artificio del frotis.
La vacuolizacin puede encontrarse frecuentemente cuando el paciente tiene una
infeccin bacteriana, especialmente con las bacterias pigenas . Tambin es frecuente
observarlas junto con las granulaciones txicas.
Cuerpos de Dhle.
Estas inclusiones son a menudo encontradas junto con las granulaciones txicas y/
vacuolizacin, aunque no siempre. A veces pueden ser la nica evidencia de un proceso
Serie Blanca
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txico reactivo en un paciente. Los cuerpos de Dhle son pedazos de RNA residual
( retculo endoplsmico rugoso ) en el citoplasma. Tienen el caracterstico color azul tenue del
RNA y se les encuentra frecuentemente cerca de la membrana citoplasmtica de la clula.
En algunas clulas, pueden ser muy prominentes, y en otras, pequeos y muy tenues, y
pueden pasarse por alto si el observador no tiene suficiente cuidado en la observacin.
En ocasiones pueden observarse los tres tipos de cambios txicos en la misma clula.
Agranulacin citoplsmica.
En ocasiones, la nica evidencia de neutrfilos activados es una rea clara agranular
en la periferia de la clula, que indica la formacin de un pseudpodo. Estas clulas tambin
se distinguen por un borde citoplsmico irregular en contraste con el borde redondo usual del
neutrfilo. Tambin sto puede ser visto junto con las granulaciones txicas, la vacuolizacin,
y los cuerpos de Dhle, aunque cada uno de ellos puede verse individualmente, y a menudo
estos cambios se asocian con aumento en las formas en banda y cuenta elevada de
leucocitos, aunque no siempre.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Se analizarn muestras con alteraciones en las que exista el hallazgo de varios cambios
morfolgico-benignos.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
DESCRIPCIN
Frois de sangre perifrica teido con Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Serie Blanca
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Serie Blanca
36
formas
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de linfocitos atpicos.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Se analizarn muestras que tengan el hallazgo de linfocitos plasmocitoides.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
ACTIVIDADES.
Serie Blanca
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Serie Blanca
39
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
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40
Serie Blanca
41
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
2.1 Principio.
Los extendidos de mdula sea se colorean con Wright siguiendo la tcnica usual.
Inicialmente son observados macroscpicamente para determinar la presencia de partculas.
Luego el extendido es examinado en bajo poder (10X) para apreciar la relativa cantidad de
grasa y de contenido celular hematopoytico de acuerdo al cual la mdula se puede clasificar
como: hipocelular, normocelular e hipercelular.
Despus de la observacin en 10X el extendido se examina con objetivo de 100X localizando
los campos donde se hallan las partculas y se procede al anlisis de las clulas sanguneas
que habitan en la mdula sea. Se establece la relacin del nmero de las clulas blancas
frente al nmero de clulas rojas nucleadas. Esta proporcin se denomina relacin mielo eritroide (M:E). Para estimar esta relacin es necesario la identificacin y tabulacin de 300 500 clulas nucleadas. Se observa aumento en la relacin mielo-eritroide, cuando se
aumentan los precursores mieloides como sucede en los procesos inflamatorios agudos,
leucemias o cuando se disminuyen los precursores eritroides como en la insuficiencia renal
crnica. Una disminucin en la relacin mielo-eritroide se presenta cuando se disminuyen los
precursores mieloides como en la anemia aplstica o cuando aumentan los precursores
eritroides como en las anemias hemolticas y megaloblsticas.
En forma simultnea se realiza una valoracin cuidadosa de la morfologa de las diferentes
lneas celulares: serie eritroide, granuloctica, linfoide, monoctica, megacarioctica, clulas
plasmticas y otras clulas.
Serie Blanca
42
2.2 Metodologa
Estudio de Mdula Osea
El estudio de mdula sea, comprende los siguientes aspectos:
60%.
20%.
20%.
Serie Blanca
43
50.4-70.3
0.2-1.5
2.1-4.1
8.4-17.0
10.0- 26.8
15.7 -31
Serie Roja
Proeritroblastos
Eritroblastos Basfilos
Eritroblastos Policromticos
Eritroblastos Ortocromticos
0.2-1.3
0.5-2.4
17.9-29.2
0.4-4.6
Linfocitos
11.1-23.1
0-0.2
Megacariocitos
0-0.4
Monocitos + macrfagos
0-0.8
Plasmocitos
0.4-3,9
Relacin Mieloide-Eritroide
1.5-3.3
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
1 Microscopio de Luz
Serie Blanca
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4.PROCEDIMIENTO.
Observar las laminillas diapositivas y reportar el mielograma de acuerdo con el formato
que aparece en el reporte de resultados.
ACTIVIDADES.
-Observacin de laminillas y/ diapositivas con imgenes de aspirados de mdula sea
normal .
-Reportar un mielograma normal.
Serie Blanca
45
MIELOGRAMA
Serie Blanca
Mieloblastos
Promielocitos
Mielocitos
Metamielocitos
Bandas + segmentados
Serie Roja
Proeritroblastos
Eritroblastos Basfilos
Eritroblastos Policromticos
Eritroblastos Ortocromticos
Linfocitos
Basfilos y Clulas Cebadas
Megacariocitos
Monocitos + macrfagos
Plasmocitos
Relacin Mieloide-Eritroide
Serie Blanca
46
Serie Blanca
CTH
CFC GEMM
CTH
47
Presencia de eritroblastos
Presencia de translocacin
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
Serie Blanca
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
48
4.PROCEDIMIENTO.
Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Serie Blanca
49
En las leucemias mieloides crnicas, la CTH tienen todava ms capacidad de dividirse que
una CTH normal.
Si la maduracin predomina hacia la lnea de los eritrocitos, se tendr:Policitemia vera.
Cuando la proliferacin es predominantemente hacia la lnea de los megacariocitos, pero
stos se mueren en la etapa de megacariocito maduro, a esta neoplasia se le llama
Mielofibrosis con Metaplasia Mieloide.
1.1 POLICITEMIA VERA
Policitemia ( elevacin de los glbulos rojos masa eritroctica total) de orgen
primario en la que hay que descartar otras causas de policitemia secundaria como son:
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
2.1 Criterios para el Diagnstico de Policitemia Vera:
Proliferacin de la CTH hacia todas las lineas con predominio hacia la lnea
eritroctica:plaquetas ,eritroblastos
,basofilia , eosinofilia, granulocitosis
con clulas no ms inmaduras que los mielocitos.Sin embargo la Biometra
Hemtica no es definitiva.
Serie Blanca
50
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
Serie Blanca
DESCRIPCIN
51
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Serie Blanca
52
La clula que sufre la mutacin neoplsica, es la CTH, que madura hacia todas las
lneas, pero con predominio hacia la lnea de megacariocitos-plaquetas.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
2.1 Criterios para el Diagnstico de Leucemia Mielomonoctica Crnica.
Serie Blanca
53
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Serie Blanca
54
Para que se consideren agudas deben tener > 20% de blastos en M.O.
Las clulas blsticas inhiben la proliferacin de las clonas normales.
Los pacientes tienen anemia, plaquetopenia, granulocitopenia.
La muerte sobreviene por hemorragias, por la plaquetopenia e infecciones.
La Leucemia M0, es una leucemia aguda cuya cuenta tpica de Mdula Osea es la siguiente:
96% de Mieloblastos ( 1a)
4% de eritroblastos ( eritroblastos y granulocitos en maduracin: muy
disminudos ). Por lo tanto: 0-3% de los blastos son positivos para tincin citoqumica de
MIELOPEROXIDASA.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M0
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
Serie Blanca
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y / diapositivas
Aspirad de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
55
Serie Blanca
56
Mielocitos:
2%
Eritroblastos: 12%
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Los criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M1, son:
>3% y < 10% de clulas tienen grnulos MPO positivos bastones de Auer
observables con la tincin citoqumica para MPO son clulas con un poco ms de
maduracin . ( que pueden ser: mieloblastos 1b ( mieloperoxidasa + ) , mieloblastos 2,
promielocitos , mielocitos.
90% de clulas son mieloblastos sin grnulos ( mieloblastos 1 =negativos para
mieloperoxidasa )
Hay anemia, granulocitopenia, trombocitopenia
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
DESCRIPCIN
1
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
1
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
Serie Blanca
57
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Serie Blanca
52%
33%
58
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M2:
Entre 30 y 89% de clulas de mdula sea ( excluyendo eritroblastos ) son
mieloblastos y > 10% de clulas son promielocitos granulocitos ms maduros. ) El rango
puede ser: desde 20% de blastos con 80% de promielocitos clulas ms maduras , hasta
80% de blastos con 20% de promielocitos clulas ms maduras
Las llamadas Leucemias Agudas de Eosinfilos, de Basfilos y de Clulas cebadas,
son similares a la M2, aunque con diferenciacin a cada lnea respectiva
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de Mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
Serie Blanca
59
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Serie Blanca
60
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M3.
90% de clulas de Mdula Osea maduran hasta la etapa de PROMIELOCITOS , los
cuales son anormales, y en mayor cantidad que los promielocitos normales; algunas clulas
pueden madurar hasta neutrfilos segmentados y las clulas que maduran ms pueden
presentar anomala de Pseudo-Pelger. Pueden ser de dos variedades:
1) Variedad de grnulos grandes, los cuales son observables, y cristalizan formando
bastones de Auer, generalmente en cantidad mltiple, llamados faggots, en el 90%
de las clulas )
2) La Variedad Microgranular, en la que los grnulos pueden no verse claramente,
teniendo estos casos el ncleo plegado, de aspecto monocitoide, por lo que puede
ser confundida con una leucemia M5b ( monoblstica ), por lo cual debe
realizarse para su diagnstico, tinciones de Mieloperoxidasa Y esterasas dobles:
MPO
M3
+++
M5b
Esterasas
+++
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
Serie Blanca
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
61
Serie Blanca
62
Mieloblastos y promielocitos:
Mielocitos:
Monoblastos y promonocitos:
Eritroblastos:
45%
8%
43%
4%
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M4
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANIDAD
1
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
Serie Blanca
63
Serie Blanca
64
6%
85%
7%
2%
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA.
Criterios para el diagnstico de la Leucemia M5.
M5a
M5b
Serie Blanca
65
M3 variedad
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
DESCRIPCIN
1
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
1
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes
con estas alteraciones.
Serie Blanca
66
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Serie Blanca
67
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
Serie Blanca
DESCRIPCION
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
68
Serie Blanca
69
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Criterios para el Diagnstico de la leucemia M7.
>30% de blastos en Mdula osea, de los cuales: >50% deben pertenecer a la lnea de
los megacariocitos.
Las clulas son positivas para los anticuerpos anti CD41 y
CD61, que ponen en
evidencia las glicoprotenas plaquetarias. ( tcnicas inmunocitoqumicas )
Mieloperoxidasa negativa en los blastos ( megacarioblastos )
Esterasas no especficas positivas focalmente en el aparato de Golgi.
De acuerdo con la etapa hasta la cual llegan a madurar las clulas se consideran:
M7a: La clona proliferante madura hasta la etapa de megacarioblasto.
M7b: La clona proliferante madura hasta promegacariocitos e incluso
megacariocitos. Pudiendo presentar plaquetas normales y aumentadas
morfolgicamente anormales ( gigantes y sin grnulos.
En ambas se observa tambin proliferacin de otras lneas celulares,
especialmente de eritroblastos. Con frecuencia presentan fibrosis medular.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
Serie Blanca
70
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Serie Blanca
71
Serie Blanca
72
CANTIDAD
1
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
Serie Blanca
73
Leucemia L1. Corresponden al tipo ms comn de leucemia aguda infantil y es la que tiene
el mejor pronstico de las 3.
Leucemia L2.Tienen un peor pronstico que las L1
Leucemia L3. Casi todos los casos corresponden a clulas B.Tienen mal pronstico
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
2.1Criterios para el diagnstico de la Leucemia L1.
blastos muy pequeos, en donde el ncleo ocupa la mayor parte de la superficie y por
lo tanto hay muy escaso citoplasma, el cual carece de vacuolas presenta muy
escasas;
hay homogeneidad en cuanto al tamao celular y densidad cromatnica;
la cromatina es fina, aunque no tanto como la de los mieloblastos Ocasionalmente, la cromatina es gruesa y pueden confundirse con linfocitos pequeos.
Los linfoblastos ocasionalmente adquieren forma de raqueta de mano.
2.2 Criterios para el diagnstico de la Leucemia L2.
Clulas muy variables en tamao
Las clulas ms grandes tienen cromatina fina y nucleolos bien demarcados, como los
de los mieloblastos; las de tamao intermedio, tienen cromatina ms gruesa, y las ms
pequeas, tienen cromatina condensada.
Con frecuencia, los ncleos tienen mltiples indentaciones cerebriformes ( en cuyo
caso, si se acompaan de grnulos positivos a la fosfatasa cida y a -naftil acetato
esterasa, corresponden a leucemias T y tienen un mal pronstico).
Citoplasma ms abundante que en las L1, generalmente sin grnulos y con pocas
ninguna vacuola.
Serie Blanca
74
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
Serie Blanca
75
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
2.1 Criterios para el diagnstico del Mieloma Mltiple.
En el aspirado de mdula sea:
Aumento notable de clulas plsmticas ( lo normal es <3%)
Algunas clulas presentan ncleos irregulares y multilobulados.
Clulas plasmticas
con cristales mltiples
intracelulares, constitudos por
inmunoglobulinas cristales azurfilos alargados.
Clulas plasmticas con bordes citoplsmicos irregulares y de color rojo ( clulas en
flama).
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio
Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
Serie Blanca
76
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Serie Blanca
77
Serie Blanca
78
3.8%
3%
1.0N
CANTIDAD
10ml
90ml
0.3g
1ml
1g
0.7ml
1.5ml
0.2g
DESCRIPCIN
Vasos de precipitados de 100 ml
Matraces aforados de 100 ml
Pipeta graduada de 10 ml
Pipetas graduadas de 5 ml
Pipeta graduada de 1 ml
Frascos de 250 ml
Frotis de sangre perifrica
10 ml
90 ml
Serie Blanca
100 ml
0.3 g
1 ml
79
Actividades:
-Practicar la tincin citoqumica para Mieloperoxidasa con frotis de sangre perifrica.
4.2 Resultados Esperados.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
1. INTRODUCCIN.
Serie Blanca
80
CONC.
37%
Concentrado
4%
CANTIDAD
20 mg
100mg
25 ml
45 ml
2.366
2.267 g
250 mg
1.25 ml
50 mg
2.5 ml
1.5 ml
Serie Blanca
81
DESCRIPCIN
Vasos de precipitados de 100 ml
Vasos de precipitados de 500 ml
Probetas de 100 ml
Probetas de 500 ml
Matraz volumtrico de 50 ml
Tubo de 13X100 ml
Pipetas de 10 ml
Pipetas de 5 ml
Goteros de 10 ml
Goteros de 100 ml
Frascos de 500 ml
Frotis de sangre perifrica
20 mg
100 mg
30 ml
25 ml
45 ml
30 ml
2.366 g
250 ml
b) KH2PO4
H2O destilada
2.267 g
250 ml
Serie Blanca
82
42.5 ml
7.5 ml
Soluciones de Tincin
3.4.4 Solucin de Pararosanilina
Cloruro de Pararosanilina
Agua destilada
HCl concentrado
250 mg
5 ml
1.25 ml
50 mg
2.5 ml
1.5 ml
1.5 ml
45 ml
3 ml
2.5 ml
4.PROCEDIMIENTO.
Serie Blanca
83
4.1 Tcnica:
4.1.1. Fijar los frotis a 4C por 30 segundos
4.1.2 Lavar los frotis con agua de la llave
4.1.3 Dejar secar a temperatura ambiente
4.1.4 Colocar los fotis en la mezcla de incubacin a temperatura ambiente por 45
minutos en la oscuridad
4.1.5 Lavar con agua de la llave
4.1.6 Contrateir con hematoxilina de Gill por 10 minutos
4.1.7 Lavar con agua de la llave
4.1.8 Secar a temperatura ambiente
4.1.9 Sellar con resina sinttica y cubrir con cubreobjetos del #1
Actividades:
-Practicar la tincin citoqumica para Esterasas con frotis de sangre perifrica.
BIBLIOGRAFA
1 .BLOOD CELL MORPHOLOGY. Peripheral Smear Evaluation. Manual 1.Lynn Maedel and
Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.
Serie Blanca
84
Serie Blanca
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