Caracterizacin de Materiales y Defectos

Tcnicas de Separacin Cromatogrfica

TCNICAS DE SEPARACIN. CROMATOGRAFA

1.- Introduccin

Cromatografa y mtodos de separacin clsicos. Separacin de

componentes de una muestra. No son tcnicas de caracterizacin
propiamente dicha

Las propiedades de los materiales dependen de los componentes y de la

proporcin existente entre ellos

No dan informacin de la naturaleza de los componentes, necesitan otros

mtodos de anlisis.

1.1.- Cromatografa y ciencia de materiales

Separacin de compuestos relacionados con la sntesis de materiales

Evaluacin de la actividad de materiales catalizadores y soportes slidos
en sntesis orgnica.
Desarrollo de nuevos materiales empleados en cromatografa
Seguimiento de una sntesis
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2.- Lugar que ocupa la cromatografa en la caracterizacin de materiales

Muestra
NO

SI

Hay que solubilizarla?

Es soluble?
Es voltil?

NO

Descompone
trmicamente?

NO

Forma
plasma?

SI

GAS

Hay que separar

componentes?

Otros
mtodos

SI

SI

Digestin

SI

SI

SI

SI

NO

NO

DISOLUCIN
SI

Cromatografa

NO

Hay que separar

componentes?

NO

Tcnicas y Mtodos de anlisis

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3.- La cromatografa. Conceptos y definiciones

Cromatografa: mtodo fsico de separacin

Proceso cromatogrfico
Fase estacionaria (slido, gel o lquido). Lecho cromatogrfico o sorbente
Fase ligada
Fase inmovilizada
Fase mvil (gas portador, eluyente)
Cromatografa lquida
Cormatografa de gases
Cromatografa con fluido supercrtico
Eluir
Efluente
Muestra
Componentes
Zona o banda
Cromatograma
Cromatgrafo

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3.1.- Mecanismos de separacin

a) Separacin por adsorcin (cromatografa de adsorcin)
Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie
de un slido activo (componentes con polaridad baja o media)
b) Separacin por reparto (cromatografa de reparto)
Diferente solublidad en fases estacionaria y mvil (Componentes con
polaridad media o alta)

Coeficiente de Reparto = K d =

[A] Fase mvil

[A] Fase Estacionaria

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3.1.- Mecanismos de separacin

c) Separacin por tamao molecular (Cromatografa de permeacin de gel,
de tamiz molecular o de exclusin por tamaos).
Parmetros de columna
- Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados
- Lmite de exclusin: M mnimo a partir del cual las macromolculas no
experimentan retencin.
Molculas pequeas
Molculas grandes

Flujo del disolvente

Partcula polimrica (gel)

con poros
Pared de columna
cromatogrfica

Disolvente

Las molculas pequeas penetran en los poros

de las partculas de gel, por lo que necesitan
ms tiempo para salir al final de la columna. Las
molculas grandes, en cambio, al no penetrar
en las partculas de gel se mueven con el
disolvente a una velocidad mayor de elucin y
salen antes de la columna. Por tanto, a mayor
masa molecular menor tiempo de elucin. Este
mtodo
permite
separar
por
tamaos
moleculares siendo posible obtener incluso
distribuciones de masas moleculares a distintos
tiempos de elucin.

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3.1.- Mecanismos de separacin

d) Separacin por Intercambio inico

La separacin se basa principalmente en la diferente afinidad para el

intercambio de iones de los componentes de la muestra.
+

Especies positivas
Especies negativas

+
+ - +
+ +
+ -

+
+

+
-

Pared de columna
cromatogrfica

+
-

Disolvente

La elucin de las especies retenidas se consigue

cambiando el pH del disolvente hasta igualarlo a su
punto isoelctrico o hasta invertir su carga neta.

Flujo del disolvente

+
-

Partculas slidas (matriz)

cargada positivamente

Las especies cargadas negativamente se unen a la

matriz slida cargada positivamente y son
retenidas, mientras que las especies positivas son
rechazadas. De esta manera en funcin de la
carga las especies se eluyen a distintos tiempos
dando lugar a la correspondiente separacin.

Una separacin puede estar basada en la conjuncin de diversos

mecanismos
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3.2.- Mtodos de anlisis cromatogrfico

a) Anlisis por desarrollo (cromatografa en papel o capa fina)
b) Anlisis por elucin (cromatografa de gases, cromatografa lquida)
c) Anlisis frontal
d) Anlisis por desplazamiento

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ANLISIS POR DESARROLLO

Cromatografa en columna
Cromatografa plana

Fase mvil

Fase Mvil

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Anlisis por elucin

Muestra

Fase Mvil

Sorbente

Cromatograma

Volumen de fase mvil

Placa Porosa
Efluente
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Fase Mvil
Con la muestra A+B+C

Anlisis frontal

Cromatograma

A+B+C
A+B
A
A
Placa Porosa

A
+
B

A
+
B
+
C

Volumen de fase mvil

Efluente
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3.3.- Clasificacin de acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico

a) Cromatografa en columna
- Columna empaquetada
- Columna tubular abierta
b) Cromatografa plana (o de lecho abierto)
- Cromatografa en papel
- Cromatografa en capa fina (TLC)

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3.4.- Clasificacin de acuerdo con el estado fsico de la fase mvil

a) Tcnicas cromatogrficas
- GLC
- GSC
- LLC
- LSC
b) Cromatografa de gases (siempre en columna)
c) Cromatografa Lquida (en columna o sobre plano)
- Cromatografa Lquida de Alta Eficacia o de Alta Presin, HPLC
d) Cromatografa con fluido supercrtico

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3.5.- Tcnicas especiales

a) Cromatografa con fase invertida
b) Cromatografa con fase normal
c) Anlisis isocrtico (composicin F. mvil constante)
d) Elucin con gradiente (Composicin F. mvil cambia de forma
continua)
e) Elucin en etapas o escalonada (Composicin F. mvil cambia de

forma escalonada)
f)

Cromatografa bidimensional (etapas adicionales de separacin)

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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa

a)

Retencin = capacidad real de la fase estacionaria para retardar la

salida de un componente.
- si caudal constante v t
- tM = tiempo muerto
- tR = tiempo de retencin
- tR = tiempo de retencin corregido = tR - tM

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa

b)

Factor de capacidad (retencin de un compuesto con independencia del

caudal)

t'R t R t M
K'=
=
tM
tM
c)

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

Dispersin de bandas

Parmetros caractersticos
de un pico gaussiano
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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa

d)

Eficacia

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

- Nmero de platos tericos

tR
n=

tR
n = 16
Wb

tR
n = 5.545
W h

Debe evitarse el ensanchamiento de

bandas. Dependen de caractersticas de
-Altura equivalente de un plato terico = L/n columna, velocidad de fase mvil, etc.
(Para comparar columnas de diferente
longitud)
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3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa

e)

Separacin y resolucin
- Retencin relativa

- Resolucin

t 'R 2
=
t 'R1
2t
Rs =
Wb1 + Wb 2

Sistema cromatogrfico

Eficacia de columna

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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4.- Tcnicas cromatogrficas no instrumentales

4.1.- Cromatografa en columna
El gradiente de presin necesario para el
desplazamiento de la fase mvil a travs
de la fase estacionaria se origina por
gravedad.

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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4.2.- Cromatografa en capa fina

La elucin se consigue por el movimiento capilar ascendente de la fase mvil
a) aplicaciones analticas

Rf =

y
x

Rx =

y
x

Aplicacin

Aplicacin

y
x

Sustancia patrn
Frente del disolvente

Frente del disolvente

b) aplicaciones preparativas

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5.- Mtodos instrumentales en cromatografa

5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)
Distribucin de un componente entre una fase mvil
gaseosa y una lquida inmovilizada sobre la superficie
de un slido inerte.
Componentes bsicos
- Gas portador segn detector (He, Ar, N2, CO2, H2)
- Sistema de inyeccin de muestra
- Columnas
Control de caudal

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

Medidor de caudal
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5.- Tcnicas instrumentales en cromatografa

5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)

Mejora de un cromatograma por

programacin de temperatura en
columna

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)

Detectores

CARACTERSTICAS DEL DETECTOR IDEAL

Adecuada sensibilidad
Buena estabilidad y reproducibilidad
Una respuesta lineal para los componentes que se extienda a
varios rdenes de magnitud
Intervalo trmico de trabajo (25 400)C
Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del
caudal
Alta fiabilidad y manejo sencillo
Respuesta semejante para todos los componentes
No destructivo

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5.1.- Cromatografa
Lquido)

de

gases

(Gas-

Detectores
DETECTOR DE IONIZACIN DE LLAMA

- Componente + H2/aire
+
encendido
elctrico iones + eDiferencia de potencial entre extremo de
quemador y electrodo colector (se mide la
corriente que pasa a su travs)
- Iones producidos n tomos de carbono
sensible a masa
- C-OH; -C=O; -X; -NH2
pocos iones

generan

Efluente de
la columna

Aire

H2

- Insensible a: H2O; CO2; SO2 y NOx

-Detector de los ms utilizados para el
anlisis de compuestos orgnicos
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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)

Detectores
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TRMICA
- Cambios de conductividad trmica del gas portador por la presencia de analito.
- Sensor = hilo de Pt, Au W calentado (a potencia elctrica cte) cuya T depende
del gas circundante (su R cambia)
- Caractersticas:

* Simple
* Amplio rango dinmico lineal (~ 105)
* Respuesta universal (especies orgnicas e
inorgnicas)
* Carcter no destructivo
* Sensibilidad relativamente baja (~ 10-8 g de soluto/ml
de gas portador)

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)

Detectores
DETECTOR TERMOINICO
- Detector selectivo de compuestos orgnicos con P y N.
- Efluente + H2 + llama

gas caliente + bola de silicato de rubidio caliente

(a 180V respecto colector)

Iones

Plasma (600 800C)

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)

Detectores
DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES
- Detector selectivo de halgenos, perxidos, quinonas y grupos nitro.
- Efluente + emisor

iones (gas portador) + rfaga de electrones

Corriente constante que vara en presencia de molculas capturadoras de e-

DETECTOR DE EMISIN ATMICA

plasma de He que atomiza y excita el efluente
emisin

espectros de

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5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)

Mtodos acoplados
- GC/Espectrometra de masas
- GC/espectroscopa IR
5.2.- Cromatografa de gases (Gas-Slido)
H2S; CS2; NOx; CO; CO2; gases nobles
(no se retienen en columnas Gas/Lquido)

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5.- Tcnicas instrumentales en cromatografa

5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC)
- Alta sensibilidad
- Adaptacin a determinaciones cuantitativas
- Separacin de especies no voltiles
- Separacin de especies termolbiles

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5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin

Instrumentacin para la cromatografa de lquidos
- Recipientes para la fase mvil y sistemas para el tratamiento de disolventes
(eliminacin de O2 y N2)
- Filtracin de disolventes
- Sistemas de bombeo
- Sistemas de inyeccin de muestra
- Columnas
- Precolumnas
-Termostatos
- Detectores: i) responden a propiedad de fase mvil; ii) responden a
propiedad del soluto.
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5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin

Instrumentacin para la cromatografa de lquidos
Figura tomada de:
-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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6.- Bibliografa

D.A. Skoog, J.J. Leary, Anlisis Instrumental, McGraw-Hill, Madrid (1996)

H.H. Willard, L.L. Merritt Jr.,J.A. Dean, F.A. Settle Jr., Mtodos Instrumentales de anlisis,
Grupo Editorial Iberoamericana S.A. de C.V., Mxico (1991).
TECHNIQUES in liquid chromatography Simpson, Colin F. John Wiley & Sons (1984).
Liquid chromatography column theory Scott, Raymond P.W. John Wiley & Sons (1992).
Chromatography of polymers : characterization by SEC and FFF American Chemical Society
(1993).
Handbook of size exclusion chromatography Marcel Dekker (1995).
Cromatografa de exclusin por tamaos [Vdeo] Prez Dorado, Angel, CEMAV, Universidad
Nacional de Educacin a Distancia (1997).
Manual de cromatografa Loro Ferrer, Juan Francisco Gobierno de Canarias, Direccin
General de Universidades e Investigacin (2001).

7.- Direcciones URL tiles

http://www.uib.es/depart/dqu/dquo/pau/Cromatograf%92a/chrom10/chrom/GC/concept/
main.htm
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm

Fco. Javier Gonzlez Benito