CONTENIDO

RESUMEN................................................................................................................. 2
INTRODUCCION....................................................................................................... 3
PARTE TEORICA....................................................................................................... 4
CROMATOGRAFIA.................................................................................................4
CROMATOGRAFIA PLANA....................................................................................4
CROMATOGRAFIA EN PAPEL............................................................................4
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA....................................................................5
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA........................................................................5
Detalles experimentales:........................................................................................... 7
A.

CROMATOGRAFIA DE PAPEL........................................................................7

B.

cromatografia en capa fina.........................................................................7

C.

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA.................................................................8

Resultados............................................................................................................... 9
a.- cromatografia en papel................................................................................9
B. cromatografia en capa fina...........................................................................9
c. cromatografia en columna............................................................................9
Discusin de resultados:.....................................................................................11
cromatografia en papel......................................................................................... 11
cromatografia en capa fina...................................................................................11
cromatografia en columna....................................................................................12
Conclusiones............................................................................................................ 13
Recomendaciones:................................................................................................... 14
Apndice.................................................................................................................. 15
GERANIO............................................................................................................. 15
REACTIVOS........................................................................................................... 15
Bibliografa............................................................................................................... 16

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RESUMEN
En esta oportunidad realizaremos la cromatografa, la cual es una tcnica de
separacin de compuestos qumicos de una mezcla.
Realizaremos tres tipos de cromatografa: en papel, en capa fina y en
columna, las cuales nos servir para distinguir cualitativamente los
compuestos que tiene una planta, que en este caso trabajaremos con el
geranio, para la cromatografa en papel y en capa fina, la cual
distinguiremos por los colores que resulten en esta experiencia.
En la cromatografia en columna trabajamos con azcar, disuelto en bencina,
como no es soluble en ella, no se solubiliza, luego observamos la tonalidad
de colores que extraeremos mediante el uso de esta tcnica, en esta tcnica
se debe tener en cuenta la polaridad de los solventes a utilizar para poder
realizar la practica con mas xito.

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INTRODUCCION
La cromatografa es una tcnica analtica y cuantitativa que ha alcanzado
un alto grado de desarrollo -y modalidades- en los laboratorios de qumica y
bioqumica. En general, la cromatografa consiste en hacer pasar una fase
mvil con un determinado disolvente (o eluyente), en este caso una mezcla
de agua y etanol -misma que contiene disuelta la mezcla de molculas que
se desea separar-, a travs de una fase fija que actuar como tamiz o filtro
selectivo, en este caso algodn. A su paso, la separacin de molculas se
produce debido a sus diferencias de tamao, geometra y distribucin de
carga elctrica.
En

sus

diversas

aplicaciones,

la

cromatografa

sirve

para

separar

compuestos qumicos diferentes a partir de mezclas multicomponentes, las

cuales pueden contener varios centenares de sustancias diferentes. Por
ejemplo, en el taller proponemos aplicar rudimentariamente -con la ayuda
de artculos comunes y de fcil adquisicin- esta tcnica, en su modalidad
de cromatografa en papel, a la separacin de los pigmentos (molculas)
que se encuentran mezclados. Se descubrir que un color determinado
puede estar formado por la combinacin de dos o ms pigmentos, lo que da
la oportunidad de abordar tambin algunos aspectos de la combinacin de
colores.

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PARTE TEORICA
CROMATOGRAFIA

La cromatografa engloba a un conjunto de tcnicas basadas en la

separacin de los componentes de una mezcla y su posterior deteccin. Las
tcnicas cromatogrficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una
fase mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que
arrastra a la muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido. Los componentes de la mezcla
interaccionan con distinta forma con la fase estacionaria y con la fase mvil.
De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas
velocidades y se van separando. Despus de haber pasado los componentes
por la fase estacionaria y haberse separado pasan por un detector que
genera una seal que puede depender de la concentracin y del tipo de
compuesto.
Las distintas tcnicas cromatogrficas se pueden dividir segn cmo est
dispuesta la fase estacionaria:

Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa

plana o sobre un papel. Las principales tcnicas son:
o

Cromatografa en papel

Cromatografa en capa fina

Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de

una columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se
distinguen:
o

Cromatografa de lquidos

Cromatografa de gases

Cromatografa de fluidos supercrticos

La cromatografa de gases es til para gases o para compuestos

relativamente voltiles, lo que incluye a numerosos compuestos orgnicos.
Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC, del ingls High Perfomance Liquid Chromatography), que
es la tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad.

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CROMATOGRAFIA PLANA
CROMATOGRAFIA EN PAPEL

La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios

para realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy
potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria
est constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y
evaporando el solvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se
hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel
verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente
que contiene fase mvil en el fondo. Luego de unos minutos cuando el
solvente deja de ascender o ha llegado al extremo se retira el papel y seca.
Si el solvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se
vern las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no
tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado.
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

La cromatografa en capa fina, o ms comnmente TLC (thin layer

chromatography, en ingls), es una tcnica cromatogrfica utilizada, entre
otros posibles usos, para separar
los
componentes
puros
que
forman parte de una mezcla. Esta
separacin se consigue mediante
la diferencia entre las fuerzas de
adhesin de las molculas de los
componentes a una fase mvil
(normalmente, un disolvente) y a
una fase estacionaria (la llamada
capa fina, que puede ser papel o
gel de slice). Esta diferencia se
traduce en un mayor o menor
Figura N1: CROMATOGRAFIA EN
desplazamiento o movilidad de
CAPA FINA
cada componente individual, lo
cual permite su separacin e identificacin.
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

La cromatografa en columna es
quizs el mtodo ms general,
utilizado para la separacin, a la
vez que para la purificacin, de
diferentes compuestos orgnicos
que se encuentren en estado slido
o lquido.
En
este
tipo
de

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Figura N2: CROMATOGRAFIA EN
COLUMNA

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cromatografa, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se

coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave
para controlar el paso de sustancias al exterior de la columna. La fase
estacionaria se impregna con el eluyente o fase mvil. Seguidamente la
mezcla orgnica que nos interesa separar la depositamos por la parte
superior de la fase estacionaria, y as la fase mvil podr ir atravesando el
sistema.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase mvil, poco a poco
saldrn de la columna cromatogrfica, y se recogen en fracciones. Las
fracciones menos polares, que son por lo general las que se retienen poco o
nada en el absorbente, sern las primeras en salir de la columna. En
cambio, las sustancias ms polares, quedan retenidas por ms tiempo en el
absorbente, y a menudo es necesario el uso de diferentes disolventes con la
finalidad de incrementar su polaridad para que sean arrastradas por estos.
El tiempo que se necesita para hacer fluir un compuesto por la columna, se
conoce con el nombre de tiempo de retencin. Este tiempo vara, siendo
caracterstico de cada compuesto en una condiciones cromatogrficas
determinadas, que varan segn el absorbente usado, el disolvente, la
presin, el dimetro que tenga la columna utilizada, etc.
El absorbente mayormente utilizado para las cromatografas en columna, es
el gel de slice. A veces, en sustitucin del gel de slice, cuando ste es
incompatible con la mezcla a cromatografiar, se utilizan la almina o el
florisil (silicato magnsico). La cromatografa en columna puede realizarse
por gravedad o a media presin. Cuando se realiza a media presin, se
conecta la cabeza de la columna a un compresor o a una lnea de aire
comprimido.
La medida de las partculas de gel de slice para realizar las cromatografas
a media presin debe ser ms pequeas que en el caso de la cromatografa
por gravedad. Si en la cromatografa por gravedad utilizsemos un gel de
slice con un tamao de partculas ms pequeas, no se producira elucin,
pues se impedira el flujo del disolvente. Pero en cambio, si aplicamos
presin, entonces debido a la fuerza si se producira la elucin por el
disolvente.
A causa de la disminucin del tamao de las partculas del absorbente, se
produce una separacin ms eficaz. Generalmente la cromatografa a media
presin, produce mejores resultados que la cromatografa por gravedad, y
adems, al ser ms rpida, es la ms utilizada.
Cuando vamos a realizar una cromatografa en columna, lo primero que
debemos hacer es elegir un disolvente adaptado para nuestro caso, para as
optimizar la separacin de los componentes de la mezcla. Dicha operacin
se produce a travs de cromatografa analtica en capa fina. La variante ms

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influyente en la eficacia de la separacin de la cromatografa a media

presin usando gel de slice es el dimetro de la columna, as como la
cantidad de gel utilizado.

DETALLES EXPERIMENTALES:
A. CROMATOGRAFIA DE PAPEL

Cortar tres tiras de papel para cromatografa de tamao adecuado,

para

colocarlos

en

la

probeta

que

servir

como

cmara

cromatogrfica.
Trazar con lpiz una lnea a 1.5cm del borde inferior del papel y otra a

una distancia de 3,0cm del borde superior.

Marcar con un punto en el lugar donde se aplicar la muestra. Este

debe ser un punto central situado sobre la lnea inferior.

Colocar un volumen de la fase mvil (Bencina) en el fondo de la
cmara con la ayuda de una pipeta (sin mojar las paredes),

seguidamente se debe tapar la cmara.

Aplicar la muestra en el papel con un capilar delgado de forma que se

produzca una mancha de aprox. 3mm de dimetro, luego dejar secar.

Si se requiere, se puede repetir la operacin tantas veces sea
necesario, secando despus de cada aplicacin.

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Introducir el papel en la cmara de modo que la lnea inferior

sobrepase el nivel de la fase mvil y comprobando que el papel est

completamente libre y no toque las paredes del tubo.

Dejar correr el cromatograma hasta que el frente del solvente alcance

la lnea superior.
Retirar el papel y dejar secar.

B. CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Disponer de un cromatofolio de 5cm de largo por 2cm de ancho

aprox.
Trazar con lpiz la lnea a 1cm del borde inferior del cromatofolio y
otra a una distancia de 0.5cm del borde superior. Se debe presionar
levemente el lpiz para marcar la lnea, pero evitando hacer que la
capa del adsorbente se interrumpa por esta accin, pues si as fuera

no podra correrse el cromatograma.

Marcar con un punto donde se aplicara la muestra. Debe ser un punto

central situado sobre la lnea inferior.

Colocar un volumen de la fase mvil (Tolueno y metanol) en el fondo
de la cmara con la ayuda de una pipeta (evitando mojar las paredes)

y tapar la cmara.
Aplicar la muestra con un capilar delgado de forma que se produzca

una mancha de aprox. 3mm de dimetro y dejar secar.

Si se precisa, repita esta operacin tantas veces como sea necesario,

secando despus de cada aplicacin.

Seguidamente, introducir la placa en la fase mvil sin que la mancha
llegue a introducirse en l. Tapar el frasco y dejar correr el

Cromatograma hasta que el solvente alcance la lnea superior.

Retirar la placa y dejar secar.

C. CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

Introducir una pequea porcin de algodn o lana de vidrio en la

columna (la cual debe estar bien limpia y seca) y llvela hasta el
extremo, de tal modo que cierre el extremo inferior de la columna y

sirva de soporte para el adsorbente.

Llenar la columna con bencina hasta aprox. La mitad. Extraer el aire
que haya quedado atrapado en la columna.

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Haga una papilla relativamente diluida con el adsorbente. Para ello,

mezclar aprox. 60g de azcar blanca (sacarosa) con 50mL de bencina

(segn dimensiones de la columna a utilizar).

Agregar la papilla a la columna, golpendola suave y continuamente,
a fin de quitar las burbujas de aire que estn retenidas. Debe
cuidarse que la superficie superior del adsorbente siempre este

cubierta por eluyente (bencina).

Rellenar la columna hasta unos 5cm aprox. de su parte superior.
Posteriormente dejar reposar unos minutos y enrase el lquido hasta

el nivel del relleno e la columna.

Aadir unos 3mL de muestra suavemente sin deformar la superficie

del relleno.
Haga que la columna adsorba la mezcla.
Aada fase mvil cuidadosamente hasta sobrepasar el tapn superior

unos 2-3cm.
Comenzar la elucin extrayendo lquido por la parte inferior de la

columna y reponindolo por la parte superior.

Cuando se haya producido la separacin de los componentes de la
mezcla cierre el extremo inferior de la columna y anote sus
observaciones.

RESULTADOS
A.- CROMATOGRAFIA EN PAPEL

En la cromatografa de papel se obtuvo dos bandas de pigmentos con las

siguientes coloraciones:

Verde claro en la parte superior

Verde amarillento claro en la
parte inferior

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Figura N3: CROMATOGRAFIA EN
PAPEL

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B. CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

En la cromatografa de capa fina se obtuvo cuatro bandas de pigmento con
las siguientes coloraciones:

Anaranjado

superior (1)
Anaranjado claro (2)
Verde claro (3)
Amarillo (4)

en

la

parte

Figura N4: CROMATOGRAFIA EN

CAPA FINA

C. CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
En la cromatografa por columna se obtuvo dos bandas de pigmentos de las
cuales estas se pudieron rescatar por separado en dos tubos de ensayo.
Las bandas de pigmentos presentaron las siguientes coloraciones:

Verde en la parte superior.

Amarillo en la parte inferior.

Figura N5: CROMATOGRAFIA EN

LABORATORIO DE
QUIMICA
ORGANICA A1
CAPA FINA

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DISCUSIN DE RESULTADOS:
CROMATOGRAFIA EN PAPEL

En la cromatografa de papel, el movimiento diferencial de los solutos es

consecuencia de la distribucin selectiva entre la fase estacionaria.,
constituida por la celulosa o las sustancias adheridas a ella, y el disolvente
(fase mvil), que puede ser totalmente orgnico. En la cromatografa de
papel ocurre una separacin de la muestra por reparto. En esta experiencia
se coloc la muestra de geranio en el papel filtro (celulosa como fase
estacionaria); seguidamente se us benzina como fase mvil. Al ponerse en
marcha se observa el movimiento de la fase mvil a travs del papel,
fundamentalmente por capilaridad. De la cual a lo largo de 5 minutos se

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pudo observar 2 bandas de pigmentos en el cromatograma, de las cuales se

puede deducir de qu compuestos orgnicos se tratan:

La coloracin verde clara observada en la parte superior se le puede

asociar al pigmento orgnico de la clorofila presente en el geranio.

La coloracin verde amarillenta claro observada en la parte inferior se
le puede asociar al pigmento orgnico de la xantofila presente en el
geranio.

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

La cromatografa en capa fina es un mtodo analtico verstil, sensible en

alto grado y rpido para separar en forma bien definida compuestos
estructuralmente muy parecidos, y se diferencia de la cromatogrfica de
papel por que no presenta celulosa como fase estacionaria..
En esta experiencia se hizo uso de xido de aluminio (almina) como
adsorbente de tipo ascendente, siendo esta la fase estacionaria; y tolueno
con metanol como fase mvil.
Cabe recalcar que la fuerza gravitatoria limita el ascenso de disolvente y
manchas, las cuales solo llegan a ascender de 10 a 18cm sobre el punto de
origen.
Se aplic muestra de geranio en la fase estacionaria (almina), la cual al
ponerse en marcha con la fase mvil, comenz a fluir y a arrastrar los
componentes de la muestra en la cual se observ 4 bandas de pigmentos
en el cromatograma, de las cuales a travs de los colores obtenidos se
puede deducir de qu compuestos orgnicos se tratan:

El color anaranjado observado en la parte superior se le puede

asociar al pigmento orgnico de caroteno presente en el geranio.

El color anaranjado claro, se le puede asociar a un pigmento orgnico

derivado del carotenoide presente en el geranio.

El color verde claro observado, se le puede asociar al pigmento

orgnico de la clorofila presente en el geranio.

El color amarillo observado en la parte inferior se le puede asociar al
pigmento orgnico de la xantofila presente en el geranio.

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

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La cromatografa de columna se emplea para la separacin de mezclas con

objetivos preparativos o analticos.
La columna contiene un relleno, que acta como fase estacionaria, a travs
de la cual fluye la fase mvil. La muestra es arrastrada por la fase mvil a
travs de la fase estacionaria y se distribuye entre ambas fases.
En esta experiencia se hizo una cromatografa de columna por adsorcin, en
el cual se pudo observar 2 bandas de pigmentos a travs de la columna, las
cuales estos 2 pigmentos fueron separados y recogidos en 2 tubos de
ensayos distintos. A travs de los colores obtenidos se puede deducir de
qu compuestos orgnicos se tratan.

El color verde observado y recogido, que se encontraba en la parte

superior de la columna se le puede asociar al pigmento orgnico de la

clorofila presente en la muestra de geranio.

El color amarillo observado y recogido, que se encontraba en la parte
inferior de la columna se le puede asociar al pigmento orgnico de la
xantofila presente en la muestra de geranio.

Cabe recalcar que con los pigmentos recogidos en los tubos de ensayos se
les puede pasar por cromatografa de papel o cromatografa de capa fina,
siendo la cromatografa de capa fina la ms adecuada debido a sus
caractersticas, para poder obtener con mayor precisin los pigmentos
orgnicos que se encuentran en lo extrado.

CONCLUSIONES

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La cromatografa por columna se emplea para la separacin de

mezclas o purificacin desustancias, reteniendo en su fase
estacionaria (en este caso la almina) a algunos compuestos
por su propiedad de adsorcin, por la que a travs de ella se
har pasar una corriente de disolventes o mezcla de disolventes
(fase mvil : eluyente) que arrastrar a los compuestos
constituyentes de la mezcla, hacindoles avanzar a travs de la
columna. Este tipo de cromatografa se utiliza para saber en
qu recipientes se encuentra un componente buscado y para
determinar la cantidad de este cuantitativamente, contrario a la
cromatografa por capafina donde solo se puede hacer un
anlisis cuantitativo.
La tcnica de cromatografa en capa fina (CCF) tiene numerosas
ventajas, aparte de ser rpida, sencilla, barata, tiene tambin la
ventaja de utilizar poca cantidad de muestra; siempre y cuando
se escoja al eluyente adecuado para la separacin de la mezcla.

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RECOMENDACIONES:

Tener cuidado en la experiencia de cromatografa en papel,

cuando introducimos el papel, dentro de la cmara, no debemos
de moverlo, dejarlo as en reposo, hasta que termine el
experimento.
Tener el mismo cuidado con la cromatografa en capa fina, en
este caso, la alumina debe estar con menor ngulo de
inclinacin respecto a la base del vaso de precipitado, para
poder obtener mejor la visualizacin de colores y su rapidez del
experimento.
Tener cuidado cuando se trabaje en la campana, al armar el
equipo para la cromatografa en columna, podra salir mal el
experimento, dependiendo como lo armemos.
Tener precaucin con los reactivos a utilizar,
pictogramas de seguridad.

LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA A1

ver

sus

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APNDICE
GERANIO

Segn su uso paisajstico se las clasifica como herbceas, respecto de

arbustivas

arbreas.

Muchas

especies aqu agrupadas, poseen

fitotoxinas, lo cual hace que otras
herbceas encuentren dificultades
en

penetrar

establecidas

plantaciones
de

una

ya

especie

determinada de este gnero. Por

ello se las reconoce como confiables
tapizantes.

Figura N5:
GERANIO

Sus hojas son simples, normalmente

palmatidivididas, a veces casi enteras y dentadas, estipuladas -estpulas

libres o soldadas, papirceas-, pecioladas. Las hojas basales se disponen
generalmente formando una roseta; las hojas caulinares, alternas u
opuestas.
Algunos de sus compuestos qumicos son, el geraniol, citronelol, linalol,
mirtenol, terponeol, citral, metona, eugenol, o el sabinero. Que le confieren
algunas de sus propiedades y su aroma dulce pero penetrante.
REACTIVOS

solvente
Metanol

formula

C H 3 OH

densidad
0,7918
g/cm3

p.
ebullicion
65C

polaridad
0,762

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pictograma

Peligrosida
d
Toxico por
inhalacion
inflamable

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Tolueno

C7 H 9

0,865
g/cm3

110C

0,099

Inflamable,
irritable,
nocivo

BIBLIOGRAFA

Cromatografa en columna | La Gua de Qumica

http://quimica.laguia2000.com/general/cromatografia-encolumna#ixzz3peICYCaf

Visto 22 de Octubre del 2015

Geranio. Direccin Web:
https://es.wikipedia.org/wiki/Geranium

- Visto 23 de Octubre de 2015

Geranio. Direccin Web:

http://www.espiritugaia.com/AromGeranio.htm

- Visto 23 de Octubre de 2015

Tolueno. Direccin web:
https://es.wikipedia.org/wiki/Tolueno

- Visto 24 de Octubre de 2015

Libros:

BROWNING, D. R. Cromatografa-Toray-Masson. Espaa. 1971.

DOMINGUEZ, Xorge Alejandro. Cromatografa en Papel y en
Capa Delgada. Serie de Qumica. Organizacin de los Estados
Americanos. N 16. U.S.A. 1975

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