TEMA 1.

INTRODUCCIN AL LABORATORIO
1. FUNCIN
La funcin del laboratorio de anlisis clnicos es efectuar determinaciones analticas cualitativas y
cuantitativas de lquidos orgnicos como sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, etc, as como heces y otras
sustancias.
2. PELIGROS Y ACCIDENTES EN EL LABORATORIO
a. Incendio o explosin
Ocurre cuando se utilizan solventes inflamables o sus vapores. Ej. Alcohol, ter, tolueno, etc. Se deben
manipular todos los solventes inflamables o vapores alejados de llama directa o chispa.
b. cidos y Bases fuertes
Destruyen rpidamente tejidos produciendo cicatrices.
Nunca pipetear con la boca.
Siempre se aadir el cido o la base sobre el agua, lentamente y agitando con frecuencia utilizando
vidrios resistentes. Si se realiza el agua sobre el cido o la base, se produce una reaccin exotrmica
que puede llegar incluso a explotar.
Los vapores de amoniaco son irritantes y pueden daar ojos y pulmones.
c. Oxidantes fuertes
Como por ejemplo H2O2, ac. perclrico, ac. crmico, dicromato potsico, etc.
d. Compuestos venenosos
Como ac. perclrico, ac.crmico, dicromato potsico, metanol, cianuro, arsnico, Hg, Pb, I, Ba, Zn,
hidrocarburos, derivados del petrleo, aminas aromticas,etc.
El I y Hg son compuestos venenosos que en bajas concentraciones no son perjudiciales para el organismo y
pueden ser utilizados como antisptico.
Todos los reactivos hay que manejarlos con mucha precaucin para evitar daos en piel y ojos.
e. Quemaduras y Escaldaduras. Choque elctrico
Quemadura: dao en los tejidos producido por un slido.
Escaldadura: dao en los tejidos producido por lquidos o vapores.
Medidas de Seguridad
Atencin (descuido, rapidez)
Extintor manual
Contaminacin
Vacunar al personal del laboratorio con gammaglobulinas
1

 No pipetear con la boca. En caso de pipeteados accidentales enjuagarse con agua y/o profilcticos.
Botiqun de urgencias
3. CAUSAS DE ERROR EN EL LABORATORIO DE ANLISIS CLNICOS ( ojo cae en examen)
A. Debido al paciente
Error en la identificacin
Error en la peticin
Preparacin del paciente
Variaciones individuales
Toma de alimentos
Hora del da al realizar las analticas
Posicin del cuerpo al realizar las analticas, ya que puede haber variaciones de parmetros, como por ejemplo
las protenas debido a la variacin existente entre el lquido intra y extracelular en distintas proporciones.
Medicamentos que tomen los pacientes
Recomendaciones:
estar sentado
en ayunas
maanas de 79 horas
B. Debido a la muestra
Extraccin de la muestra.
No deben utilizarse recipientes contaminados
El paciente debe estar en reposo
Cuando se vaya a realizar una extraccin de sangre el stasis no sea muy prolongado
No hemlisis en la muestra
Transporte de la muestra. Hay que tener en cuenta:
Temperatura de la muestra
Proteccin frente a la luz
Tiempo (lo ms rpido posible y no pasar ms de 2 horas desde la toma de la muestra hasta que llega al
laboratorio)
Separacin de la muestra
2

 Conservacin de la muestra
Evitar la contaminacin
Luz
Evitar posible evaporacin de la muestra
Evitar prdida de su estabilidad
C. Determinacin
Mtodo analtico. Los ms adecuados son los que sean ms especficos a la hora de determinar una
sustancia, generalmente son los enzimticos.
Errores tcnicos
Medio ambiente
Error instrumental
Mal funcionamiento del aparato
Mal uso del instrumental
Reactivos
Pipetas
Espectrofotmetros
Tiempo y temperatura
D. Procesos de Datos
Tener en cuenta las prediluciones
Trabajar con unidades concretas
E. Resultados
Tener en cuenta las prediluciones (multiplicar por inverso de dilucin)
Trabajar con unidades concretas
Errores en la coma
TEMA 2. INTRODUCCIN A LA BACTERIOLOGA
La microbiologa es una disciplina que estudia la biologa de los microorganismos. Los microorganismos son
seres vivos cuya caracterstica comn es que para su visualizacin es necesario utilizar el microscopio.
Los microorganismos se agrupan en el reino de los protistas, las creacin de este nuevo reino se debe a
Haeckel (1866), discpulo de Darwin que ante la polmica de la poca que inclua a unos microorganismos en
el reino animal y otros en el reino vegetal , sugiri que haba microorganismos que distan mucho de parecerse
a los animales o a los vegetales y eran considerados una cosa u otra segn la corriente del momento, por eso
Haeckel sugiri el nuevo reino para agrupar a los protozoos, bacterias, algas, etc.
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El reino de los protistas es muy heterogneo, son unicelulares y lo ms caracterstico que lo diferencia
esencialmente de los animales y vegetales es que no presenta diferenciacin interna, es decir, no hay
diferenciacin celular ni mucho menos especializacin celular en tejidos.
Mientras las clulas microbianas son capaces de crecer y reproducirse como seres aislados, los animales y
vegetales no son capaces de vivir solos sino en grupo.
En el reino de los protistas se aprecian claramente dos grados de evolucin, cuya diferencia fundamental
radica en la estructura nuclear:
Procariotas: no tienen estructura nuclear definida. Ej: bacterias.
Eucariotas: si tienen estructura nuclear definida. Ej: hongos, protozoos.
Otros autores hablan de un tercer grupo que se denomina Acariota, en este grupo incluyen los virus.
1. IMPORTANCIA Y APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGA
La microbiologa la podemos clasificar desde distintos puntos de vista:
Taxonmico
bacteriologa
viriologa
microbiologa
fitologa (algas)
Ecolgico
del suelo
de las aguas
de la leche
etc.
Aplicado
Agrcola
Industrial
Clnico
2. BACTERIOLOGA CLNICA
Estudia las bacterias que pueden causar infecciones en el hombre.
Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan una estructura relativamente sencilla y que se
incluyen en el reino de los protistas subgrupo procariota.
CARACTERSTICAS DE LAS BACTERIAS.
1. Tamao y forma
Tamao:

Las bacterias miden 0,5 1m de dimetro y de 2 5 m de longitud.

De las ms pequeas esta el micoplasma con 0,125 0,250m de dimetro ( no visible al microscopio
ptico).
De las ms grandes es la Espiroqueta que puede llegar a 500m de longitud, pero con un dimetro de 0,1
0,2m ( no visible al microscopio ptico por ser demasiado fina).
Formas:
Las bacterias pueden ser:
Cocos: son esfricos y exponen menos superficie al exterior distorsionndose menos. Suelen ser ms
resistentes a la desecacin. La relacin superficie/volumen es pequea.
Bacilos: tienen forma cilndrica rectangular, aparece mayor superficie al exterior. La relacin
superficie/volumen es mayor que la anterior. Tienen un metabolismo muy rpido.
Espirales: son adaptaciones al movimiento, avanzando con mayor facilidad. Tenemos:
Vibrios: tienen media vuelta de hlice.
Espirilos: tienen ms de una vuelta de hlice y son rgidos.
Espiroquetas: que se pueden confundir con los espirilos ya que tienen ms de una vuelta de hlice,
pero son ms flexibles.
Otras formas:
bacterias estrelladas.
Bacterias penduladas.
Bacterias con forma filamentosa.
Bacterias con forma ramificada.
Cuando se dividen las bacterias pueden quedarse unidas, esto da lugar a una serie de agrupaciones. Estas
dependen de:
que la bacteria tenga cpsula, ya que va a impedir que se separe.
que la bacteria sea mvil o inmvil. Las bacterias mviles tienden a separarse y las inmviles a
juntarse.
los planos de divisin.
Las agrupaciones ms frecuentes en cocos son:
Diplococos, un nico plano de divisin. Las bacterias aparecen unidas de dos en dos y su morfologa puede
variar.
Estreptococos, se dividen en un nico plano formando cadenas.
Estafilococos, se dividen segn dos planos de divisin. Algunas quedan unidas y otras sueltas, dan lugar a
agrupaciones irregulares (racimo de uvas).
Lampropedia, se dividen segn dos planos y permanecen unidas siempre, formndose una especie de
tableta.
Sarcina, se dividen segn tres planos de divisin, formando una agrupacin en forma de cubo.
Las agrupaciones de bacilos ms frecuentes son:
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 Estreptobacilos, son bacilos en cadena.

Otros casos:
*pendulares
*empalizadas
2. Estructura
Se comparan clulas procariotas y eucariotas. Las clulas eucariotas tienen ncleos definidos mientras que la
procariotas no tienen ncleo definido.

M. Nuclear
Nuclolo
ADN
Divisin
Reproduccin Sexual
Composicin
Formaciones Membranosas
Ribosomas
rganos de Membrana Simple
Respiracin
Aparato Fotosinttico
Flagelos
Movimiento no flagelados
Microtbulos

PROCARIOTA
No
No
Una molcula no asociada a
protenas
No mitosis
No meiosis
No esteroles
Son invaginaciones de la
membrana plasmtica
Son 70 S

EUCARIOTA
Si
Si
Varios cromosomas constituidas
por ADN y protenas
Si mitosis
Si meiosis
Si esteroles
Tienen retculo endoplsmico,
Ap.Golgi
Son 80 S
Estn presentes vacuolas,
Estn ausentes
lisosomas
Lo poseen en parte de la membrana Son rganos especficos para la
plasmtica
respiracin como las mitocondrias
Aparecen vesculas en continuidad Tienen rganos especializados:
de la membrana plasmtica
cloroplastos
Complejos formando subunidades
Simples
de 9+2
Movimiento no deslizante y
Movimiento deslizante
ameboide
Probablemente estn ausentes
Movimientos extendidos

ESTRUCTURA BASICA DE FUERA A DENTRO

1. CAPSULA: puede existir o no.
2. PARED
3. MEMBRANA: por debajo de la cual puede existir o no flagelos.
4. CITOPLASMA: se encuentra hacia el exterior, contiene gran cantidad de ribosomas. El material nuclear
es un filamento formado por una maneja sin principio ni fin. No hay cromosomas.
5. ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS NO FOTOSINTETICAS: cuerpos laminares, lisosomas y vacuolas.

6. ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS FOTOSINTETICAS: son equivalentes a los cloroplastos y se

denominan tilacoides, pueden ser laminales, vesicales y tubulares.
7. INCLUSIONES CON DISTINTAS SUSTANCIAS:
a) polihidroxibutilico que son sustancias de reserva carbonada.
b) glucgeno: reserva de hidratos de carbono.
c) bolutina: reserva de fsforo y cobre.
1. CPSULA
Algunas bacterias poseen hacia el exterior una envoltura constituida por sustancias mucosas ricas en agua
denominada cpsula. La cpsula es cuando esta sustancia tiene un espesor de 0.2 micrmetros y si est en
menor cantidad se habla de capa mucosa.
Este material lo sintetiza la propia bacteria y se pone de manifiesto mediante tincin negativa con Ac
especficos ya que la cpsula tiene poder antignico.
Si observamos al microscopio ptico (m.o.) las cpsula es mucho ms refringente, lo que se denomina
hinchazn de la cpsula o Reaccin de Quellus.
La formacin de la cpsula no e caracterstica de especie (sp) pudiendo existir en cepas. La cpsula no es una
estructura bsica, es facultativa, puede o no estar presente, y se puede eliminar por medios enzimticos.
Composicin qumica
En general, la cpsula esta compuesta por polisacridos, aunque puede haber polipptidos y complejos
polisacridoprotena.
Ejemplo:
Estreptococo neumoniae, tiene una naturaleza polisacrida a base de glucosa y cido glucurnico
formando cido celobiurnico.
Estreptococo pygenes, tiene en su capsula ac. glucurnico y Nacetilglucosamina que dan lugar al
ac. hialobiurnico.
Funciones
Bacterias patgenas
proteccin frente a fagocitosis
contribuye a aumentar su virulencia
si el animal est inmunizado frente a la cpsula, posee Ac. anticapsulares y la bacteria puede ser
fagocitada
Bacterias no patgenas
proteccin de la ingesta de protozoos
proteccin frente a la infestacin de bacteriofgos
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Otras funciones
proteccin frente a la desecacin
captacin de cationes mediante restos carboxlicos libres (COO)
adherencia al medio formando rosetas
La cpsula est unida a la pared, y esta unin puede ser por medio de enlaces inicos, enlaces covalentes,
puentes de H y fuerzas de VanderWalls.
2. PARED
Est fuera de la membrana plasmtica y aparece n todas las bacterias a excepcin del micoplasma. Su
composicin qumica es original y las bacterias con pared se dividen en dos grupos: gram + y gram ,
denominacin que procede de la respuesta frente a la Tincin de Gram.
Desde el punto de vista de la composicin qumica, las bacterias gram + retienen el colorante cristal violeta
mientras que en las gram el colorante es eliminado.
Desde el punto de vista de la estructura fsica si damos un corte y observamos al microscopio electrnico:
las bacterias gram + por fuera de la membrana plasmtica aparece una capa gruesa y compacta de 150
a 800 amstrongs.
las bacterias gram fuera de la membrana plasmtica aparece una capa estratificada de 100
amstrongs.
Composicin qumica
Est formada por murena, glicopptidos y peptidoglucanos. Es importante tener en cuenta que la murena
slo aparece en la pared bacteriana ( podemos utilizar antibiticos inocuos para el hombre ( las clulas
humanas no tienen pared y por tanto el antibitico no las daa)).
Ejemplo: en E.Coli existe en la murena una serie de cadenas polisacridas derivadas de Nacetilglucosamina
y Nacetilmurnico.
En la pared tambin pueden aparecer ac. teicoicos, estos se encuentran en la pared de las bacterias gram + y
no existen en las gram . Estos cidos son polmeros de polialcoholes fosfatos, los ms importantes son:
glicerol teicoico
ribitol teicoico
Los OH libres de los ac. teicoicos se sustituyen por distintos radicales como Nacetilglucosamina, alanina,
etc.
Para la sntesis de los ac. teicoicos es necesario fsforo en el medio, si no lo hay estos cidos son sustituidos
por los cidos teutnicos formados por: ac. teurnico y Nacetilgalactosamina.
Son compuestos cargados negativamente con carcter cido que sirven para captar cationes y proporcionando
un ambiente de carga necesaria para la actividad enzimtica. Tienen funcin en el crecimiento de la pared,
tienen carcter antignico y son receptores para fagos (virus)
En la pared tambin se encuentran lipopolisacridos que se encuentran en las bacterias gram . Son
molculas complicadas desde el punto de vista qumico y presentan una parte lpidica y una sacrida. Se
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denominan Ag 0 (somticos)
Otro componente de la pared son las lipoprotenas apareciendo solo en las bacterias gram .
Las protenas se encuentran en gram + y gram y tienen una funcin degradativa, como ribonucleasas o
desoxiribonucleasas, aunque algunas no son degradativas como las isomerasas.
Las protenas degradan los compuestos grandes que no pueden atravesar la membrana. Las bacterias producen
las protenas que degradan los polmetros en monmeros. No todos los monmeros pueden ser transportados,
actuando las isomerasas las cuales transforman los monmeros en ismeros.
3. MEMBRANA
Es un elemento obligado. Est situada debajo de la pared, se cree que ntimamente adherida a la pared debido
a la existencia de una elevada P osmtica que la empuja hacia la pared.
Presenta lo que se conoce como unidad de membrana, que es la presencia de dos capas densas envolviendo
a una capa clara con un espesor de 75 amstrongs.
Composicin qumica
Su composicin qumica global es igual a la de la membrana de las clulas eucariotas, 40% lpidos y 60%
protenas, aunque existen diferencias en el detalle del anlisis qumico, por ejemplo: en la membrana de las
bacterias hay ac. grasos ramificados, existe ciclopropano y es raro encontrar lecitina.
La funcin de los lpidos de membrana son:
estructural
intervenir en procesos de biosntesis
La funcin de las protenas de membrana son:
estructural
tienen enzimas con accin dirigida al citoplasma
enzimas que participan en la sntesis de la pared
permeasas
actividad ATPasa
Funciones de la membrana
Mantenimiento osmtico de la clula que regula el paso de sustancias de un lado a otro. Este paso de
sustancias puede ser a favor de gradiente o en contra de gradiente requiriendo un gasto de E.
Interviene en el metabolismo oxidativo y en la produccin de E.
Participa en la divisin celular, en la duplicacin del material gentico y sntesis de la nueva pared.
4. ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS
Se les denomina tilacoides porque son similares a los tilacoides de las plantas, y pueden ser tubulares,
vesicales y laminares.
Son invaginaciones de la membrana plasmtica igual que le mesosoma.

Pueden crecer en condiciones de anaerobiosis si las ponemos en condiciones anaerobias y si se aplica cierta
cantidad de luz aparecen vesculas en la periferia siendo muy numerosas.
5. CITOPLASMA
No presenta grnulos membranosos independizados. La mayor parte de sus componentes estn en estado
soluble. El citoplasma est lleno de ribosomas (sntesis de proteinas) estando libres y no unidos a la
membrana como en las cels. eucariotas.
Se puede encontrar distintos pigmentos como piocianina (azul), pioverdina (verde), prodigiosina (rojo) y
violacina (violeta).
6. RIBOSOMAS
No se obtienen ribosomas aislados sino polirribosomas. Para obtener ribosomas aislados tratamos el
polirribosoma con ribonucleasa y tambin con actinomicinaD. Si se hace en presencia de Mg se obtienen las
dos subunidades del ribosoma, la 30s y la 50s. Su composicin qumica es ARN y protenas.
7. INCLUSIONES CITOPLASMTICAS
Las bacterias pueden presentar en su citoplasma distintas inclusiones que son generalmente sustancias de
reserva y se suelen formar cuando hay un desequilibrio nutricional en el medio.
Las inclusiones son:
a. Glucgeno: en el medio hay muchos carbonos en forma de azcares capaces de dar glucosa, que por
medio de la glucognesis da glucgeno. Estas inclusiones no tienen morfologa diferenciada al observarlas al
microscopio electrnico como ocurre con los animales. Al microscopio tico el glucgeno no se ve pero
puede ponerse de manifiesto cuando la bacteria tiene una alta concentracin de glucgeno mediante tincin
con lugol ya que se tie de color pardorojizo.
b. Bolutina: su principal constituyente es el fsforo. Desde el punto de vista qumico son fosfatos
polimerizados, tambin pueden encontrarse otros constituyentes en menores proporciones. Pueden llegar a
constituir el 50% de los fosfatos de reserva en la clula.
c. Polibetahidroxilbutlico: es una reserva de carbono que se sintetiza cuando la fuente de carbono es
acetato o compuestos que se degradan en acetato.
d. Azufre: la acumulan dos tipos de bacterias:
sulfooxidantes: capaces de oxidar compuestos de azufre para obtener E.
fototrofas: emplean compuestos de azufre como dadores y aceptores de electrones en la fotosntesis.
e. Cristales paraesporales: se forman en bacterias esporuladas. Desde el punto de vista qumico son protenas
de estructura cristalina muy compacta y brillante al microscopio ptico. Su significado funcional no se conoce
y tiene relacin con la esporulacin.
8. MATERIAL NUCLEAR
Se habla de material nuclear y no de ncleo ya que no tiene envoltura nuclear, por lo que no hay separacin
entre ncleo y citoplasma. No se puede ver al microscopio ptico( M/O), para ver el material nuclear se
recurre a tcnicas especiales, como la tcnica de Feulgen que consiste en hacer una hidrlisis cida sobre los
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cidos nucleicos.
La duplicacin del cromosoma bacteriano se caracteriza por:
ser semiconservativa, el material nuclear esta constituido por dos cadenas de ADN a partir de la doble
hlice. Cuando se produce la duplicacin cada cadena sirve de molde para la sntesis de su complementaria.
slo tiene un origen de duplicacin.
Es discontinua, la cadena no se sintetiza continuamente sino en pequeos fragmentos denominados de
Okazoki que posteriormente son soldados.
Es bidireccional, ya que crece en dos direcciones.
En la duplicacin cromosmica es necesario la participacin de enzimas, como:
enzimas desenrollantes, cumplen la funcin de desenrollar la doble hlice para que cada
cadena sintetice su complementaria.
ARN polimerasa, ya que el ADN no se puede biosintetizar sin obtener un pequeo fragmento
de cido nucleico al que se aade.
ADN polimerasa, que se va aadiendo al ARN cebador.
9. ADN EXTRACROMOSMICO
Pequeos fragmentos de ADN pueden estar libres y duplicarse de forma autnoma , se les denomina
plsmidos o bien estos pequeos fragmentos de ADN que estn libres pueden integrarse en el cromosoma
bacteriano y duplicarse al mismo tiempo que el cromosoma y se les denomina episoma.
Dentro de los plsmidos tenemos distintos ejemplos:
1 Factor R o RTF (Factores de Transferencia a la Resistencia): son factores que transfieren resistencia
antimicrobiana, son frecuentes. Ej: bacterias que tengan plasmido penicilasa.
2 Factor F o factor sexual: codifican para la sntesis de una estructura de la superficie de la bacteria
denominada Pili sexuales, permite que en unas bacterias se de la conjugacin.
A las cepas que presentan el factor F se las denomina F+ o machos, ya que cede su material gentico. Las
cepas que carecen del factor F se las denomina F o hembras.
10. ESPORAS
Se tratan de estructuras presentes en algunas bacterias bacilares que pueden estar en el interior de la bacteria
(endoespora) o permanecer libre. Son formas de resistencia y son capaces de soportar durante tiempos
elevados temperaturas de 60 80 C, esta temperatura no la soporta una bacteria normal. Las ms resistentes
pueden resistir 120C durante 10 minutos.
Son visibles al M/O, la forma y posicin de la espora en el interior de la bacteria es caracterstica taxonmica
a la hora de clasificar las bacterias esporuladas.
El tamao es importante y se pueden clasificar en :
esporas no deformantes, son aquellas que su dimetro es inferior a la clula vegetativa. En funcin de la
posicin en que se encuentra la espora tenemos:
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 Espora en posicin central.

Espora en posicin subterminal.
Espora en posicin terminal.
esporas deformantes, son aquellas en las que su dimetro es mayor que la clula vegetativa.
Las bacterias esporuladas son un pequeo grupo de gneros, los ms importantes son :
Bacillus, son aerobios.
Clostridium, son anaerobios.
Estructura de las esporas
De dentro hacia fuera encontramos:
1. Citoplasma con material nuclear.
2. Membrana plasmtica.
3. Pared.
4. Por fuera aparece una capa gruesa propia de la espora llamada Cortex (corteza) que da resistencia.
5. Aparecen dos tnicas ( intima y exina) o ms que son ms resistentes a los agentes fsicos y qumicos.
6. Puede haber una ltima capa de contorno irregular llamada exosporio (slo en algunas especies).
A la bacteria que produce la espora se la denomina clula vegetativa o esporangio.
Se denomina esporulacin al fenmeno por el cual una bacteria vegetativa produce una espora al ser las
condiciones del medio adversas.
Se denomina gemacin al proceso por el cual de una espora surge una bacteria al volver a ser favorables las
condiciones para el germen.
11. FLAGELOS
La mayora de las bacterias mviles deben sta a apndices filamentosos denominados flagelos, cuya longitud
es igual a 10 20m y su dimetro a 10 20nm.
No son visibles al M/O por su pequeo dimetro .
Segn el nmero y posicin de los flagelos en la bacteria se clasifican en :
Monotriticas, un flagelo en el polo.
Politriticas o L ofotriticas, varios flagelos en el polo.
Anfitrcas, varios flagelos en ambos polos.
Peritricas, varios flagelos alrededor de la bacteria.
Los flagelos tienen naturaleza proteica. Al observarlos al M/E se distinguen tres partes:
Filamentos, constituidos por una cadena proteica denominada flagelina (diferente en cada especie). Tiene
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carcter antignico y se denomina Ag h o Ag flagelar.

Gancho, es un engrosamiento constituido por protenas globulares.
Cuello o cuerpo basal, con dos parejas de cilindros y protenas diferentes.
12. FIMBRIAS, PILIS O PELOS
Son apndices filamentosos similares a flagelos, aparecen en la superficie de algunas bacterias , son mviles e
inmviles y no tienen nada que ver con el movimiento y son ms finos que los flagelos, longitud 0,5 2m y
dimetro 7 8nm. No son visibles al M/O.
Puede haber distintos tipos de pilis segn el grosor: pili I, pili II, pili III, pili IV, pili V. Una bacteria puede
tener varios tipos dentro de una misma especie.
Los pelos mejor conocidos son los de E. Coli, tipo I, en los que se ha aislado una protena denominada pilina
que son protenas globulares con ordenacin helicoidal o lineal. A las especies cuyas cepas no tienen pelos se
las denomina calvas.
Funcin de los pelos
1. Adherirse al medio donde vive, en superficies inertes o clulas de animales.
2. Las cepas con pelos poseen una actividad respiratoria mayor que las cepas sin pelos.
Existen unos pelos especiales (pilis sexuales) que determinan presencia de material gentico
extracromosmico (Factor F) su funcin es actuar como conducto de material gentico de una bacteria F+ a
una F . La protena es distinta de los pelos normales y se denomina pilina F.
13. GLICOCLIX
Es una masa de fibras constituida por polisacridos que rodean a una o varias bacterias (posicin extracelular).
Gracias a l las bacterias pueden unirse a distintas superficies, como piezas dentarias, etc.
Sus funciones son :
De adherencia.
Concentra enzimas lticos.
Almacena y canaliza alimentos.
Protege a la bacteria de los fagocitos.
Interfiere en la respuesta inmune.
3. Tipo de reproduccin bacteriana
La principal forma de reproduccin bacteriana es binaria o asexual, esta divisin requiere la duplicacin de
todos los constituyentes necesarios y el reparto de todos en las clulas hijas.
La 1 etapa es la separacin de las cadenas de ADN y replicacin de cada una para dar dos cromosomas ms
que se repartirn entre las dos clulas hijas, luego se forma un tabique transversal asociado al mesosoma que
separa las dos clulas que se origina. Los dos cromosomas hijos emigran a uno de los polos as como los
orgnulos ms importantes. Tambin puede haber una reproduccin bacteriana pero menos importante a partir
de la gemacin (ms tpica en hongos)
% Mecanismo de intercambio gentico:
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Tiene lugar principalmente por divisin binaria. Tiene como principal inconveniente la falta de material
gentico, por ello la nica posibilidad de que la bacteria evolucione:
Variacin en el fenotipo: relacionado con las condiciones del medio ambiente. El genotipo no se altera, es
reversible y no hereditario.
Mutacin: se altera el genotipo, son irreversibles y hereditarias.
Transferencia: se produce cuando un fragmento de ADN (plsmido) procedente de una bacteria pasa a otra.
Existen tres tipos de trasferencias:
transformacin: la bacteria receptora capta ADN que se encuentra presente en el ADN despus de haber
sido liberado por la bacteria donante.
congujacion: se transfiere el plasmido por medio de un contacto fsico entre dos bacterias a travs de pilis
sexuales.
Traduccin: transferencia de ADN por medio de bacterifagos (virus).
% Crecimiento bacteriano:
La principal funcin de cualquier bacteria es el crecimiento considerando este un aumento de nmero o masa
de todos los componentes celulares.
La medicin del crecimiento se realiza inoculando un medio lquido con la bacteria y estudiando la
concentracin celular en cada momento. De esta forma comparando el nmero de clulas vivas/ml a lo largo
del tiempo se obtiene la curva de crecimiento, en la que se distinguen las siguientes fases:
1) fase de latencia: las bacterias inoculadas se adaptan al nuevo medio, no se observa crecimiento.
2) fase exponencial: la masa bacteriana aumenta como consecuencia de la multiplicacin bacteriana.
3) fase estacionaria: a medida que se agotan los nutrientes y aparecen productos txicos de materia celular,
el crecimiento se endentece pero existe un equilibrio que mantiene constante el nmero de clulas.
4) fase de declive: la tasa de mortalidad aumenta y el crecimiento se endentece por disminuir nutrientes el
nmero de bacterias viables disminuye hasta casi cero.
El tiempo que un cultivo bacteriano necesita para completar este ciclo depende del tiempo de generacin de
cada especie (tiempo para que cada clula de lugar a dos clulas hijas). Este tiempo de generacin es de
2030 minutos encontradas con frecuencia en patologa humana por lo que la curva se completara en
1824h.
El crecimiento bacteriano tambin se puede simular en aparatos del laboratorio denominados quimiostatos y
trbidostatos, ambos aparatos se basan en aadir medio fresco en un cultivo a medida que eliminamos igual
volumen que el cultivo viejo.
4. Nutricin Bacteriana
Para que una bacteria se desarrolle adecuadamente es necesario que el medio disponga de:
% De una fuente carbonada a partir de glcidos, lpidos y cetoacidos.
% Una fuente de nitrgeno que se consigue a partir de protenas, pptido y aminocidos.

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% Fuente de fsforo a partir de fosfatos inorgnicos.

% Metabolitos esenciales obtenidos de la degracion de alimentos y formados en el interior de las bacterias
gracias a reacciones metablicas que dan lugar a g6p.
% Factores de crecimiento que las bacterias no pueden producir F.V y F.X.
% Factores estimulantes que no son imprescindibles pero aligeran el procedimiento.
Las bacterias pueden obtener la energa de dos formas:
Energa radiaciones solares (fototrofas)
Reacciones qumicas (quimiotrofas).
En cuanto al poder sintetizante de cada bacteria, tiene una distinta capacidad para sintetizar glucidos, lpidos y
protenas a partir de elementos sencillos como agua, CO2 dependiendo de esta capacidad podemos distinguir:
Bacterias auttrofas: gran poder de sntesis (glucidos, lpidos y protenas) obtienen energa a partir de
materia inorgnica. Dentro de estas las podemos clasificar en:
% Estrictas: no pueden utilizar la materia orgnica.
% Facultativas: si pueden utilizar la materia orgnica.
Bacterias hetertrofas: poder de sntesis menor. Necesita obtener sus propios nutrientes (glucidos, lpidos,
protenas) a partir de materia orgnica.
5. Metabolismo bacteriano
Cuando los nutrientes has entrado en la bacteria sufren transformaciones qumicas que dan lugar a la sntesis
de materia bacteriana. A estas reacciones se les denomina metabolismo, el cual se divide en tres etapas:
Catabolismo: conjunto de transformaciones que sufre la materia asimilada por las bacterias hasta llegar a
degradarse en componentes ms sencillos y producir energa necesaria para que la bacteria pueda sintetizar
sus propios nutrientes. La energa se almacena en forma de ATP.
Anfibolismo: los metabolitos intermedios se transforman enzimaticamente en componentes bsico como
aminocidos, bases nitrogenadas. Tambin se puede obtener energa y almacenar en forma de ATP.
Anabolismo: sntesis de macromolculas de las bacterias. Aprovechando la energa obtenida en las fases
anteriores. Las bacterias tienen un anabolismo sintetizado, hidratos, lpidos, protenas, ADN, ARN, y 20
aminocidos necesarios. (las clulas eucariotas no sintetizan los 20 aminocidos).
Principales vas catablicas: se pueden clasificar en funcin de las oxidaciones biolgicas teniendo en cuenta
la naturaleza del aceptor final del hidrogeno:
1) Respiracin aerobia: el aceptor final es el oxigeno.
2) Respiracin anaerobia: el aceptor final es un componente inorgnico distinto del oxigeno, Ej.: sulfato y
nitrato
3) Fermentacin: el aceptor final es un componente orgnico.Existen distintos tipos de fermentacin:
Alcohlica: producto final es el CH3CH2OH y CO2.
15

 Lctica: producto final es el acido lctico y el CO2 por contaminacin de bacterias acticas que pueden dar
lugar a acido actico.
Propionica: CH3CH2COOH, CO2 y acido actico.
La fuente de obtencin y utilizacin del oxigeno en los distintos microorganismo permite clasificarlos en los
siguientes grupos:
Aerobios estrictos u obligados: deben utilizar el oxigeno como ultimo aceptor de electrn. Utiliza la
respiracin aerobia en su metabolismo.
Anaerobios estrictos u obligados: mueren o se inhiben ante la presencia utilizando la fermentacin en su
matebolismo.
Facultativas: pueden utilizar el oxigeno como aceptor final de electrones o alternativamente sales como
son, NO3, carbonatos. Utiliza la respiracin anaerobia.
Microaeroficos: son inhibidos por una partcula de oxigeno que es igual que atmosfrica, crecen o lo hacen
mejor con una concentracin baja de oxigeno.
Anaerobios aerotolerantes: no requieren oxigeno ni son inhibidos o destruidos por el, utilizan matebolismo
fermentativo.
TEMA 3. CLASIFICACIN, TAXONOMA Y NOMENCLATURA BACTERIANA. BACTERIAS
MS COMUNES, BACTERIAS DE LENTO CRECIMIENTO Y BACTERIAS ESPECIALES
1. CLASIFICACIN, TAXONOMA Y NOMENCLATURA
Para clasificar las bacterias se hace colocndolas en distintos segn sus caractersticas. Una bacteria pertenece
a:
a. Cepa. En ellas se encuentran organismos dentro de la misma especie con una cualidad determinada. Son
organismos con la mayora de sus caractersticas iguales.
b. Serotipo o Serogrupo: Son organismos que difieren por la posesin de los mismos Ag siendo todos de la
misma especie.
c. Especie: Son organismos que tienen caractersticas biolgicas iguales para todos.
d. Gnero: Son un grupo de especies estrechamente relacionadas.
e. Familia: Grupos de gneros estrechamente relacionados.
En la clasificacin podemos distinguir:
Reino
Filo
Orden
Clase
Familia
Tribu
Gnero
Especie
Cepa
Serotipo
Ejemplo: Neisseria gonorreae IV
16

 Reino: Procariotas
Filo: Bacteria
Orden: Eubacteria
Clase: Escotobacteria
Familia: Neisseriaceae
Gnero: Neisseria
Especie: Gonorreae
Cepa: IV
2. BACTERIAS MS COMUNES
Cuadro de las fotocopias
3. BACTERIAS DE LENTO CRECIMIENTO
Como vimos en la curva de crecimiento bacteriano, la mayora de las bacterias crecen entre 1824 horas,
aunque hay algunas bacterias que su periodo de crecimiento es superior. (> 7 das). Ejemplo: Brucella y
Micoplasma.
4. BACTERIAS ESPECIALES
a. Rickettsias
Son parsitos. Son cocobacilos pleomrficos, gram + que se presentan en cadenas o parejas y poseen pared
celular rgidas. Son parsitos intracelulares. La infeccin es transmitida por vectores.
Generalmente el parsito vive en las clulas intestinales y la saliva de donde se trasmiten al hombre por
picadura o agresiones en la piel.
b. Clamidias
Son cocobacilos gram con pared celular que se caracterizan por ser parsitos intracelulares. Es uno de los
microorganismos patgenos de mayor difusin dentro del reino animal, ya que utiliza como husped desde el
hombre hasta artrpodos pasando por todos los animales peridomsticos.
En el gnero Clamidia hay muchas especies entre las que se destacan:
Clamidia trachomatis (ETS)
Clamidia neumoniae ( relacionado con enfermedades respiratorias)
Clamidia psittachi (relacionada con enfermedades respiratorias)
c. Micoplasma
Organismos procariotas gram que carecen de pared celular, por lo que son muy pleimficos y varan desde
coco a filamentoso.
Su hbitat es muy amplio y puede multiplicarse en plantas, insectos o mamferos. Entre los aislados en el
hombre y productores de patologa:
Micoplasma neumoniae (infecciones respiratorias)
Micoplasma hominis (ETS)
Ureaplasma (ETS)
17

TEMA 4. RELACIN HUSPEDPARSITO

Parsito: Organismo que vive en otro organismo llamado husped y le causa un dao
Infeccin: La infeccin es la situacin en la cual un microorganismo se introduce en el husped y se
desarrolla perjudicndolo o no. No es sinnimo de enfermedad puesto que una infeccin no siempre
se traduce en dao para el husped, incluso si el patgeno es potencialmente virulento.
Enfermedad: Resultado de la interaccin entre agente patgeno y husped causando como
consecuencia un dao en el husped (modificacin en el metabolismo celular, malestar, lesiones, etc.
Las enfermedades infecciosas se clasifican segn la facilidad de transmisin de un individuo a otro
en:
a. Enfermedades infecciosas contagiosas o transmisibles: se transmiten fcilmente por contacto directo o
indirecto (besos, tos, toallas, cepillos de dientes). Ej. SIDA, gonorrea, sarampin, lepra, etc.
b. Enfermedades infecciosas no contagiosas: No se transmiten fcilmente por contacto sino por inoculacin
directa. Ej. Ttanos.
Virulencia: Capacidad de una cepa para producir enfermedad.
Patogenicidad: Capacidad de un grupo de organismos para producir enfermedades; pueden existir
especies patgenas que tengan cepas virulentas.
La Epidemiologa se encarga de estudiar las enfermedades infecciosas y los factores que determinan su
frecuencia y distribucin en una poblacin dada.
Desde el punto de vista etimolgico:
epi significa por encima o sobre
demos significa pueblo
loga significa tratado o ciencia.
En la Epidemiologa es importante:
1. Identificar el agente causal.
2. Descubrir la fuente de infeccin.
3. Buscar el mecanismo de infeccin.
4. Buscar las caractersticas del husped.
5. Investigar la influencia del medio ambiente.
Para que se produzca las enfermedad infecciosa es indispensable que se cierre la cadena epidemiolgica, la
cual est constituida por tres eslabones:
Fuente de Infeccin: Pueden ser:
Personas: pueden ser:
Persona enferma, es aquella que elimina los grmenes durante un periodo caracterstico de la enfermedad.
Persona portadora, es aquella que transmite la enfermedad pero no la padece. La persona est infectada pero
18

no presenta manifestaciones clnicas. Hay dos tipos de portadores: temporales (12 meses) y crnicos (toda la
vida).
A veces lo grmenes no se eliminan se quedan en sangre o tejidos del enfermo portador, sern, por tanto,
reservorios siempre que haya un vector que transmita el microorganismo (artrpodos picadores como
plasmodium, tripanosoma, leismonia,etc).
Cuando la fuente de infeccin es el hombre hablamos de infeccin homloga, si es un animal infeccin
heterloga.
Animal: Tiene un doble papel ya que el animal puede actuar como fuente de infeccin y como vector.
Mecanismo de Transmisin
Son los procedimientos que los agentes patgenos utilizan para su transmisin desde la fuente de infeccin
hasta la persona susceptible. Pueden ser:
Directos:
Por contacto fsico o estrecha relacin entre la persona sana y la fuente. Ej. contacto sexual,
piel.
Por gotitas salivares: gotculas de Wells y de Pfluge. La diferencia entre unas y otras es el
tamao. Ambas estn en la boca u se transmiten por besos, estornudos, tos, el habla, etc.
Manos sucias.
Objetos recientemente contaminados, principalmente por contaminacin salivar u
orofarngea. (fomites)*
Inoculacin directa por transfusiones sanguneas u jeringuillas (SIDA, hepatitis).
Indirectos:
Aire
Agua contaminada
Artrpodos (vectores)
Fomites (objeto contaminado capaz de transmitir enfermedad como toallas, ropa, bolgrafos, etc.)
Persona sana o susceptible de padecer enfermedad
La principal a destacar son las vas de entrad y de salida de los microorganismos como son:
Aerea
Digestiva
Parenteral
Cutnea
Ocular
tica
Urogenital
Anal
Placentaria
2. CLASIFICACIN DE LAS ENFERMAEDADES TRANSMISIBLES
DIGESTIVAS: El contagio se denomina DAME (dedos, alimentos, moscas y excretas)
19

RESPIRATORIAS: Su via de transmisin ms frecuente son las gotculas de Wells y las de Pluge (ej.
Paperas, sarampin, gripe)
ETS (sfilis)
ANIMALES (zoonosis) ej. Brucelosis, triquinosis.
3. MEDICINA PREVENTIVA
La prevencin se realiza a tres niveles:
Fuente de infeccin.
En el hombre, realizar un diagnostico precoz, tratamiento y aislamiento.
En el portador, realizar control y aislamiento.
En animales, realizar un diagnstico, tratamiento y sacrificio.
Mecanismo de Transmisin.
Saneamiento ambiental.
Desinfeccin.
Lucha contra el vector.
Persona sana.
Vacunacin.
Prevencin con quimoprofilaxis.
4. EPIDEMIOGNESIS
Es el estudio de las epidemias y su desarrollo. Hay que saber:
Endemia: Presencia habitual de una enfermedad en un rea geogrfica. El reservorio es generalmente
humano y el nmero de casos que casos que aparecen es aproximado al nmero terico.
Epidemia: Se produce cuando en un pas o comunidad el nmero de casos de una enfermedad es el
esperado.
Pandemia: Se produce cuando la epidemia afecta a varios pases o continentes.
Comienzo y Desarrollo de la Epidemiologa
La epidemiologa se inicia al romperse el equilibrio entre el husped y el germen debido a:
Falta o disminucin de inmunidad o resistencia de un grupo de poblacin con respecto al germen.
La llegada de un nuevo germen. (ej. Grmenes que llevaron los conquistadores a Amrica)
Mutacin del agente infeccioso; ocurre con frecuencia en virus de la gripe.
El desarrollo depende de:
Nmero de poblacin susceptible
Conservacin y virulencia del germen
Factores sociales, ambientales y econmicos
Factores de agregacin (colegios, internados)
20

 Factores de dispersin (turismo, inmigracin)

Factores de saneamiento ambiental y hbitos higinicos.
Clima y meteorologa que influyen en la supervivencia del germen.
Hay distintos tipos de epidemia:
Brote Holomintico: Se produce a travs de una fuente comn transmitiendo la infeccin a un nmero de
personas en poco tiempo. Suele transmitirse por va digestiva a travs de agua y/o alimentos contaminados. Se
caracteriza por una fuerte subida y un descenso brusco afectando a mucha poblacin. La epidemia se extingue
al suprimir la fuente de infeccin. Ej. Salmonelosis.
Brote Prosodmico: La propagacipn es de persona a persona establecindose una cadena de casos que
aumenta gradualmente hasta alcanzar un mximo que perdura en el tiempo y luego empieza a declinar. Ej.
Gripe.
Brote Mixto: Se caracteriza porque presenta un comienzo holomintico y continuacin prosodmica o
viceversa.
5. PODER PATGENO DE LOS MICROORGANISMOS
En la relacin husped microorganismo existen diversos grados:
1) Colonizacin: llegada, establecimiento y multiplicacin del microorganismo sin que haya respuesta
inmune por parte del husped.
2) Infeccin inaparente: los microorganismos que han colonizado origina una respuesta en el organismo
inmunitario.
3) Enfermedades infecciosas: cuando el microorganismo provoca daos en el husped, la enfermedad
depende del n de microorganismo, virulencia y resistencia que oponga el husped.
E= N x V / R
Para saber la virulencia de un germen se recurre a:
1) dosis mnima letal (DmL) que es la menor cantidad de microorganismo capaz de producir la muerte en la
dosis mnima letal, debemos sealar:
% El animal de experimentacin.
% Va entrada.
% proporcin respecto al animal.
Ej.: conejo, por va parenteral con 50 mg/Kg. de conejo.
2) dosis letal 50 ( Dl 50): dosis mnima letal que mata el 50% de los animales de experimentacin.
3) dosis infectiva 50 (Di50) provoca la infeccin del 50% de los animales.
6. FACTORES QUE DETERMINAN LA VIRULENCIA

21

1) Colonizacin
2) Penetracin
3) Multiplicacin
4) Invasin por continuidad a travs de va linftica, nerviosa o sangunea. Cuando el germen invade la va
sangunea hay que definir:
bacteremia: paso ocasional de bacterias o virus de la sangre.
septicemia: paso constante y masivo de la bacteria a la sangre.
viremia: paso ocasional de virus a sangre.
5) Toxinas: sustancia que proceden de las bacterias y causan lesin en el husped.
Se denomina toxigenicidad: a la capacidad de producir enfermedad por la liberacin de toxinas.
Las toxinas se clasifican:
Exotoxinas: toxinas liberadas extracelularmente por las bacterias a medida que van creciendo. Las toxinas
se trasladan por el cuerpo y causan daos en regiones retiradas del lugar donde estn creciendo las bacterias
que las produce.
Cada toxina tiene un tejido u rgano especfico donde acta o causa dao denominado tejido u rgano diana.
Se dir que la toxina tiene tropismo (tendencia) Ej.: toxina del botulismo es neurotropa.
Son de naturaleza proteica, la producen las bacterias gram positivas y negativas. Son sensibles al calor y a los
rayos UV. Se deterioran a T ambiente y pierden su capacidad toxica a mas de 60. Tiene un gran poder toxico
(el veneno biolgico mas potente es la toxina de botulismo). Ej.: 1mg de la toxina mata 100 toneladas de
materia viva.
Las exotoxinas tienen un gran poder antigenico por lo que estimulan la formacin de Ac.
Si se le aplica formol se convierten en Anatosoides: pierden su capacidad toxica pero no la antignica, esto es
a base de las vacunas hechas a partir de exotosinas. Son altamente especficas frente a su actuacin de su
rgano diana.
Endotoxinas: de naturaleza liposacrida y provienen de la pared bacteriana gram negativa. Se liberan con
la lisis de la bacteria. la bacteria tiene poder toxico bajo, no forman anatoxoides por lo que no sirven para
vacunas. Provocan leucopenia, hipertermia, hipotensin, plaquetopenia, etc.

Origen
Composicin
Toxicidad
Accin
Labilidad
Poder antignico

EXOTOXINAS
Bacterias positivas y algunas
negativas. Se recogen del
sobrenadante del cultivo.
Proteica
Elevada
Especifica sobre tejidos diana
Termolbil es
Son muy antignicos estimulando
formacin de Ac

ENDOTOXINAS
Bacterias negativas. Salen de la
bacteria cuando se destruye
Liposacridos
Baja
Inespecfica
Termoestables
Pocos antignicos no inducen la
formacin de Ac
22

Se transforman en toxoides por lo

que sirven como vacunas
Accin de los sueros
Son efectivos
Estudio de las exotoxinas ms importantes
Accin del formol

No se transforman en toxoides
No son efectivos

Toxina Diftrica: producida por Corinebacterium difteriae. Es pantotropa (tendencia por todo el
organismo). Se unen a las clulas del husped y a las pocas horas pierde su capacidad de sntesis
proteica y mueren.
Toxina tetnica: producida por Clostridium tetanus. Es cardiotoxica y hemoltica. Lo ms importante
es su accin espasmolizante al ser neurotropa y fijarse de forma irreversible a la sinapsis (conexiones
entre neuronas) neuronal.
Toxina botulnica: producida por Clostridium botulium. Es neurotropa y provoca una parlisis dando
lugar a la muerte por asfixia debida a parada cardio respiratoria.
Toxina de Clostridium perfinges: provoca gangrena gaseosa.
Toxina del Estreptococos pyogenes: lo ms importante es la estreptolisina que provoca hemlisis y
la toxina eritrognica que es la responsable del eritema de la escarlatina.
Toxina del Estafilococos aureus: acta como enterotoxina.
Toxina del Vibrio cholerae: produce el clera.
Toxinas enterotxicas: toxinas de E.coli y Salmonella, producen deshidratacin que puede llegar a la
muerte.
7. TIPOS DE MICROORGANISMOS
1. Patgenos: son exgenos al husped colonizan, infectan y producen enfermedad. Su accin patognica es
debida al nmero y virulencia.
2. Oportunistas: suelen ser endgenos al husped formando parte de la flora microbiana normal,
colonizando y en determinadas circunstancias provocando enfermedad, la cual es provocada por la
disminucin de las defensas del husped.
3. Flora habitual (saprofita): Son microorganismos que colonizan al husped y le producen incluso
beneficio comportndose como simbitico y preservando la salud del husped al :
facilitar la absorcin de vitaminas.
Degradacin de cidos biliares.
Realizar la interferencia microbiana que consiste en evitar la infeccin de verdaderos patgenos por
medio de bactericidas, alterar el pH o competir por el espacio con los verdaderos patgenos. Por tanto
ante un tratamiento antibitico se debe elegir el que menos daa la flora habitual.
Flora normal, oportunista y patgena en el hombre
Las reas del cuerpo se subdividen en dos categoras generales:
Las que poseen normalmente microorganismos.

23

 Las que normalmente son estriles o que ocasionalmente albergan algunos microorganismos pero que
pueden ser altamente colonizados en caso de enfermedad.
La flora segn aparatos es:
1 Aparato Respiratorio
reas que normalmente albergan microorganismos:
boca
nariz
garganta
regin nasofarngea
amgdalas
senos paranasales
La localizacin del organismo es muy importante para saber si es patgeno o no. Pueden aparecer en algunas
personas sin ser patgenos.
reas normalmente estriles:
bronquios
bronquolos
alvolos
laringe
traquea
Es posible su contaminacin por distintos microorganismos ocasionales. Los distintos mecanismos de defensa
tendern a eliminarlos rpidamente.
Tanto el exputo como algunos aspirados pueden estar contaminados por la flora de garganta, nariz y boca.
2 Tracto gastrointestinal
reas que normalmente albergan microorganismos:
intestino grueso
ileon inferior
reas normalmente estriles aunque ocasionalmente pueden presentar microorganismos:
esfago
estmago
Aunque hay que tener en cuenta que debida al paso de alimentos pueden estar contaminados por bacterias
pero no sobreviven por los jugos del estmago.
El hgado y la vescula biliar estn normalmente exentas de contaminacin microbiana. En estas zonas los
microorganismos son sntomas de enfermedades.
3 Tracto genitourinario

24

 reas que normalmente albergan microorganismos:

genitales externos
uretra
vagina
La microflora normal de la vagina dura hasta la menopausia siendo frecuente la presencia de bacilos de
Doderlein o ms correctamente Lactobacilus acidofilus. En ocasiones las complicaciones de los abortos
prolongados pueden ser ocasionados por la microflora vaginal, de modo similar los recin nacidos pueden
tener enfermedades por la flora vaginal.
reas normalmente estriles:
el rin
4 Tracto de la piel, odo y ojo
L a superficie externa del cuerpo esta poblada constantemente por microorganismos que reflejan las
costumbres del individuo, su dieta, clima, trabajo, etc.
5 Sangre y LCR (lquido cefalorraqudeo)
Son generalmente estriles pero en muchas enfermedades infecciosas y durante las complicaciones infecciosa
de las enfermedades es frecuente encontrar microorganismos en sangre.
8. CLASIFICACIN DE LOS AGENTES PRODUCTORES DE INFECCIN
De acuerdo con la clasificacin etiolgica se dividen en agentes productores de infeccin en:
1. enfermedades por hongos.
2. enfermedades por bacterias.
3. enfermedades por virus.
4. enfermedades por protozoos.
5. enfermedades por helmintos.
6. enfermedades por artrpodos.
7. enfermedades por algas.
8. enfermedades por priones.
Priones: son partculas infecciosas de pequeo tamao y naturaleza no bien conocida. Se presentan como
partculas de naturaleza proteica en las que no se ha determinado ni ADN ni ARN aunque no se excluye que
tenga alguno. Se les considera los agentes productores de la enfermedad de Crentzfeld Jacobs (CJ).
TEMA 5. OBSERVACIN DE LOS GRMENES VIVOS: MOVILIDAD DE LOS ORGANISMOS.
TINCIONES

25

1. OBSERVACIN DE LOS GERMENES VIVOS

Para la investigacin de algunas caractersticas biolgicas de los microorganismos como son su morfologa y
movilidad es necesario observar los grmenes in vivo.
Para ello se debe partir de cultivos jvenes ya que los microorganismos de los cultivos viejos pierden su
movilidad y gran parte de ellos estn en regresin.
Estas tcnicas son las siguientes:
a. EXAMEN EN FRESCO
Fundamento: Suspendiendo el microorganismo en un medio lquido transparente es posible observar
al M/O sus caractersticas morfolgicas y su movilidad. Se utiliza para clasificar a los organismos en
los procesos de identificacin en :
mviles o inmviles
observacin de estructuras espiriladas
fase de reproduccin
Material: m.o., cubreobjetos, portaobjetos excavado, mechero, asa de siembra.
Reactivos: vaselina slida y microorganismos (Proteus vulgaris).
Tcnica: Para el examen en fresco existen dos mtodos, son los siguientes:
1 Mtodo de la gota pendiente
Tcnica:
1 En el centro de un cubre limpio y desengrasado se coloca una gota de la suspensin de microorganismos
con un asa esterilizada.
2 Invertir sobre el cubre el porta excavado untando con vaselina alrededor del pocillo, colocndolo de forma
que la gota quede centrada en la depresin, la vaselina adhiere el cubre al porta de modo que se forma una
cmara que evita la evaporacin de la gota.
3 Despus dar rpidamente la vuelta a la preparacin.
4 Observar al M/O con el objetivo de 40x.
2 Mtodo de la cmara hmeda
Tcnica:
1 Depositar en el centro de un porta limpio y desengrasado una gota de agua estril.
2 Tomar con el asa una muestra del microorganismo y realizar una suspensin con la gota de agua.
3 Colocar sobre la suspensin un cubre evitando que queden burbujas de aire.
4 Observar al M/O con el objetivo de 40x.

26

 Resultados e interpretacin: La movilidad se manifiesta en un desplazamiento del microorganismo en

todas las direcciones del campo del M/O a diferencia del movimiento browniano de los grmenes
presentes en la suspensin que no presentan movilidad, los cuales se desplazan en la misma direccin.
Este extremo se puede comprobar aadiendo un antisptico a la preparacin en caso de tratarse de
organismos mviles desaparecer el movimiento observado.
Observaciones al mtodo: Es importante que el tamao de la gota sea adecuado. Si es muy grande
provocara en ambas tcnicas el desplazamiento del cubre impidiendo la visin correcta de la
preparacin, si es muy pequea puede evaporarse en el interior de la cmara. En el mtodo de la gota
pendiente si no se dispone de vaselina se puede humedecer los bordes de la excavacin con solucin
salina estril o agua destilada.
b. COLORACIN VITAL
Fundamento: Es un proceso intermedio entre el examen en fresco y las tcnicas de coloracin despus
de fijacin.
Tiene por objeto poner de relieve detalles estructurales de los microorganismos que no es posible observar en
fresco sin causar modificaciones fsicas o qumicas incompatibles con el elemento examinado.
En general no se tien sino que se acumulan en ciertas partes del microorganismo. Se deben emplear
colorantes atxicos a diluciones muy altas.
Material: Portaobjetos, cubreobjetos, asa de siembra, mechero, papel de filtro y aceite de inmersin.
Reactivos: Se emplean colorantes en disoluciones: 1/1000, 1/5000, 1/10000. Son: nigrosina, azul de
metileno, verde janus, verde malaquita.
Tcnica:
1 Colocar en el centro del porta una gota de la suspensin del microorganismo y otra del colorante.
2 Mezclar con el asa de siembra y colocar el cubreobjetos sobre la gota resultante (sin burbujas).
3 Observar al M/O con el objetivo de inmersin (100x).
2. TIPOS DE COLORANTES
Los colorantes son sustancias capaces de dar color a otros cuerpos, pero para que sean efectivos deben tener
predileccin por determinados organismos, es decir, deben ser selectivos.
Los colorantes se pueden dividir en:
a. En funcin de su naturaleza estructural, pueden ser:
Naturales (carmn y hematoxilina).
Artificiales (anilinas), que proceden de la destilacin de la hulla.
b. Desde el punto de vista qumico, pueden ser:
cidos (citoplasma)
Bsicos (ncleo)
27

 Neutros (cuando se asocian el colorante cido y el bsico. Los ms conocidos son los eosicionatos de
tiacina que suelen designarse con el nombre del autor que inventa la mezcla)
Indiferentes (son insolubles en agua y solubles en alcohol. Ej. Sudn III)
En bacteriologa, se usan principalmente los colorantes artificiales bsicos. Algunos colorantes se depositan
sobre determinadas estructuras cuando han sido sometidas a la accin de un mordiente (fijador) que puede
actuar en solitario o junto con el colorante formando lo que se denomina como laca
(LACA=FIJADOR+COLORANTE).
3. TCNICAS DE TINCIN
En la mayora de las ocasiones para la observacin de los microorganismos, stos son teidos ya que de esta
forma son ms fciles de visualizar y se pueden poner de manifiesto caractersticas diferenciales. Las
tinciones se pueden clasificar es funcin de 2 caractersticas:
a. Procedimiento de coloracin: Se pueden dar:
Tcnicas de Inmersin: Permite teir varias preparaciones a la vez. Se realizan introduciendo la
extensin en el/los recipientes que contienen colorante.
Tcnicas de Vertido: Son las ms usadas. Se efectan por decantacin libre de colorantes y reactivos
distinguindose 2 tipos:
Tcnica en condiciones normales.
Tcnica en condiciones drsticas. Llamada Tincin de Emisin de Vapores. Se suele emplear para los
BAAR (Bacilos cido alcohol resistentes).
Materiales: El mismo utilizado en condiciones normales.
Tcnica: La extensin debe quedar cubierta por un trozo de papel de filtro del mismo tamao
que el porta que se ir impregnando de forma intermitente con el colorante usado en la
tincin. La emisin de vapores se consigue calentando la parte inferior del porta con algodn
impregnado en alcohol etlico sostenido del extremo de una varilla de vidrio. No se debe
mantener la llama fija, pues se puede romper el porta. La extensin se somete a calentamiento
hasta que se emitan vapores. En ese momento se retira la llama hasta que deje de emitirlos y
se repite nuevamente el ciclo, as sucesivamente durante todo el tiempo que dure al titulacin
(prctica).
Observaciones: No se debe dejar secar el papel de filtro ya que si no se deteriorara la
extensin. Hay que ir aadiendo peridicamente el colorante. Algunos autores no usan papel
de filtro realizando la tcnica por contacto directo del colorante sobre la extensin y posterior
calentamiento hasta la emisin de vapores. Se debe tener la precaucin de aadir el colorante
repetidamente. Estas tinciones requieren calentamiento para que el colorante atraviese la
pared bacteriana como en las micobacterias.
b. Segn su aplicacin
Tcnica General de Tincin
1. Extensin.
Para obtener una pelcula lo ms homognea posible de muestra.
Si la muestra el lquida, depositar una pequea cantidad en el extremo del porta, extenderlo con el asa de
siembra hasta conseguir una capa fina y homognea.

28

Si la muestra es slida, depositar una gota de suero fisiolgico o agua destilada y suspender en ella una
pequea cantidad de cultivo, hasta obtener una capa fina y homognea.
2. Desecacin.
Tiene como objeto eliminar el agua de la extensin para fijarla. Se deja secar a T ambiente o calentando
ligeramente alrededor de la llama, jams directamente sobre ella.
3. Fijacin.
Se consigue la muerte de los microorganismos por coagulacin de las protenas quedando la extensin
adherida al porta, para que resista las operaciones siguientes. Tiene por objeto mantener la composicin
fcoqca. del microorganismos de forma que conserve definitivamente una estructura lo ms parecida posible a
la inicial.
La fijacin puede realizarse por:
Solucin fijadora (etanol, metanol), que se deja actuar durante varios minutos; se escurre y se deja
secar.
Calor, poniendo la parte inferior del porta contra la llama del mechero repitiendo la operacin.
4. Tincin.
Mediante la cual el microorganismo capta el colorante.
5. Lavado.
Mediante el cual eliminamos el exceso de colorante.
6. Secado.
Se mejora la visualizacin del microorganismo.
Hay distintos tipos:
Tincin Simple
Son aquellas que solo utilizan un colorante y tienen como objetivo permitir la observacin de la morfologa
bacteriana. La tincin resultante puede ser uniforme o presentar algunos grnulos en su interior, lo que
significa una mayor afinidad de determinados componentes de la clula por el colorante. Los mas usados son:
verde malaquita, violeta de genciana
Tincin diferencial o compuesta
Requieren ms de un colorante y sirven para poner de manifiesto algn carcter propio de microorganismos.
Las principales tinciones son: tincin de Gram y tincin ZiehlNielsen.
TINCION DE GRAM
Fundamento: divide a los microorganismos en gram positivas y gram negativas. Las gram positivas
son aquellas que resisten la accin de colorante del disolvente alcoholacetona, tras el tratamiento con
un colorante bsico y lugol, mientras que las gram negativas son decoloradas siendo posteriormente
29

teidas con un colorante de contraste como puede ser la fusina diluida o safranina, este hecho se debe
a la diferente composicin de la pared celular. Es conveniente realizar la tincin de gram sobre clulas
de cultivos jvenes ya que algunos microorganismos son gram positivos solo en la fase de
crecimiento.
Material: portaobjetos, mechero, asa de platino, pipeta, pinzas de madera, M.O. y equipos de tincin
(cristalizador, barras paralelas y frascos lavaderos).
Reactivos: lugol, violeta de genciana, fusina diluida o safranina, alcoholacetona, aceite de
inmersin.
Tcnica (ver fotocopia)
RESULTADOS
PASOS
Colorante bsico
Mordiente
Decolorante
Colorante contraste

METODOS
Violeta genciana
Lugol
Alcohol / acetona
Suframina o fusina

Positivos Negativos
Violeta Violeta
Violeta Violeta
Violeta Se decolora
Violeta Rosa

Resultados e Interpretacin: Las bacterias gram positivas son de color violeta y las gram negativas de
coloracin rosa.
TINCION DE ZIEHLNIELSEN
Fundamento: se utiliza para diferenciar BAAR es decir, aquellos microorganismos que resisten la
decoloracin con una mezcla de cido y alcohol.
Algunas bacterias poseen en su pared celular ciertos lpidos que le confieren la propiedad de resistir la
decoloracin con cido alcohol.
Esta tincin requiere un calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana. Los
microorganismos que resisten la coloracin son: micobacterias, actinomicetos y nocardia.
Material: portaobjetos, asa de siembra, pipetas, pinzas de madera, mechero, M.O. y equipo de tincin.
Reactivos: fusina, alcohol clorhdrico (97:3), azul de metileno, microorganismo uno BAAR y uno no
BAAR y aceite de inmersin.
Tcnica: (ver fotocopia).
Resultados e interpretacin: Los microorganismos BAAR adquieren color rojo y los no BAAR azul.
Tincin AuraminaRodamina
Fundamento: Tanto la Auramina como la Rodamina son dos fluorocromos que tien
microorganismos. En las micobacterias se fijan sobre los cidos micolicos de la pared
diferencindolas, por lo que en la investigacin de estas bacterias es una tcnica principal. Adems se
aplica un colorante de contraste no fluorescente con el fin de ejercer un papel de campo oscuro.
Materiales: portaobjetos, mechero, equipo de tincin, m/f.
Reactivos: Auraminarodamina.
Tcnica:
1 Extender, secar y fijar.
30

2 Teir con AuraminaRodamina a temperatura ambiente (37C) durante 15 minutos.

3 Lavar con agua destilada.
4 Decolorar con alcohol clorhdrico durante 23 minutos y despus lavar con agua destilada.
5 Contrastar durante 24 minutos con colorante de contraste, ya que tiempos mayores originan perdidas de
brillo. El contraste reduce la posibilidad de artefactos.
6 Lavar, secar y observar al m/f con objetivo de 40x.
Resultado e interpretacin: En los microorganismos se vern puntos amarillosverdosos brillantes.
Observaciones al mtodo: Es una tincin equivalente a la de los B.A.A.R.
No obstante debe utilizarse una tincin B.A.A.R de ZiehlNielsen para confirmar su prueba.
Este mtodo tiene la ventaja sobre el anterior de que no es necesario el calentamiento de la preparacin.
Tincin cido resistente de Kinyoun
Fundamento: la observacin de presencia o ausencia de B.A.A.R.
Tcnica:
1 Extensin.
2 Fijacin en llama(preferiblemente).
3 Cubrir la muestra con solucin de Kinyoun durante 3 minutos.
4 Lavar con aguas corriente durante 30 segundos.
5 Cubrir con solucin de Gabett durante 1 minuto.
6 Lavar con agua corriente y secar.
7 Observar al m/o con objetivo de inmersin.
Tinciones estructurales
Nos permiten ver distintas estructuras: flagelos, esporas, cpsula, corpsculos metacromticos, etc.
Flagelos:
Mtodo de Rodees.
Mtodo de Triboadeau.
Mtodo de Leifson.
Esporas:
Mtodo de Moeller.
31

 Mtodo de WirlzConklin.
Cpsula:
Mtodo de Hiss.
Mtodo de la tinta china.
Corpsculos metacromticos:
Mtodo de Albert.
Mtodo de Loeffer.
Tincin de WirlzConklin
Tcnica:
1 Extensin.
2 Desecacin.
3 Fijacin.
4 Teir con verde malaquita a emisin de vapores durante 10 minutos.
5 Lavar con agua destilada arrastrando el papel de filtro (opcional).
6 Teir con fusina diluida durante 3 minutos.
7 Lavar, secar y observar al m/o con el objetivo de inmersin.
Resultados e interpretacin: las esporas se observan de color verde, mientras que la forma vegetativa
se observa de color rojo.
TEMA 6. MEDIOS DE CULTIVO I
1. INTRODUCCIN
Para estudiar las reacciones metablicas y fisiolgicas de las bacterias es necesario cultivarlas en un medio de
cultivo que es una mezcla de sustancias que proporcionan en forma asimilable todos los elementos necesarios
para su crecimiento y multiplicacin.
El desarrollo de las bacterias en un medio de cultivo depende de una serie de factores:
1. Composicin: los medios de cultivo deben incluir los elementos imprescindibles para la vida bacteriana:
Fuente de N y C.
Elementos minerales como: S, P, Mg, Ca, Fe, etc.
Factores de crecimiento que por si solas no son capaces de sintetizar(aa, vitaminas, etc.).
Factores estimulantes o de arranque. Ej: sangre.
2. pH: suele estar alrededor de la neutralidad, aunque hay algunos microorganismos que tienen un pH
especfico diferente. Ej: bacterias acidofilas.
32

3. Presin osmtica: los medios se preparan en condiciones de isotonia.

4. Potencial Redox: esta en relacin con el tipo respiratorio de cada bacteria, que puede ser:
aerobios estrictos u obligados.
anaerobios estrictos u obligados.
facultativos.
microaerfilos.
anaerobios aerotolerantes.
5. Hidratacin: el agua es imprescindible para el crecimiento bacteriano por lo que estar en cantidad
suficiente en los medios de cultivo.
6. Temperatura: se incuba a la temperatura de inters mdico (3537C).
7. Atmsfera: algunas bacterias, especialmente algunas aerobias y facultativas necesitan la presencia de
ciertos ambientes gaseosos. El ms usado es el CO2 en proporciones entre 310%.
2. CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo se pueden clasificar:
1. Segn el fin al que estn destinados:
Medios generales: en los cuales se desarrollan una amplia variedad de microorganismos sin
condiciones nutritivas especiales. Ej: agar nutritivo o caldo nutritivo.
Medios selectivos o inhibidores: inhiben por completo el crecimiento de bacterias distintas de las que
se quieren aislar y que existen en la muestra. La selectividad del medio se consigue con la adiccin de
sustancias como sales biliares( inhiben las formas cocaceas gram +) o la zida sdica( slo permite el
crecimiento de las gram+). Los antibiticos son otras sustancias que transforman los medios de
cultivo en selectivos.
Medios de enriquecimiento: favorecen el crecimiento de algn tipo de bacteria que se encuentra
minoritariamente en una mezcla de varias bacterias. Ej: caldo de selenito y tetrationato que se usan
para en aumento de Salmonellas que existen en el contenido intestinal.
Medios de diferenciacin: se usan para poner de manifiesto a las bacterias que dan positiva alguna
prueba bioqumica y que estn presentes en la mezcla. Ej: bacterias glucosa + o glucosa
Medios de identificacin: son aquellos que se utilizan para estudiar la accin de un solo tipo de
bacterias frente a un determinado sustrato. Se diferencian del anterior en que se siembran con
bacterias pertenecientes a un slo clon. Se utiliza para la identificacin de bacterias.
Medios de multiplicacin: son aquellos que poseen una composicin determinada y ptima que
permiten el mximo aumento celular bacteriano en el mnimo tiempo. Son muy usados en la
preparacin de vacunas y Acs.
Medios de conservacin: son aquellos cuya composicin favorece el mantenimiento de los
microorganismos que en l se siembran y que posteriormente se incuban entre 24 C. Algunos
medios de conservacin incluyen glicerol y se guardan en el congelador(20C), estos medios han
sido desplazados por la liofilizacin.
33

Existe una variacin de los medios de conservacin que son los medios de transporte cuya finalidad es
mantener el estado viable aunque sin reproduccin(mnimamente) de los microorganismos presentes en la
muestra, permitiendo con posterioridad recuperar incluso a los que estn minoritariamente presentes. Los ms
utilizados son: de Stuart, Amies, CaryBlair.
2. Segn su consistencia.
Medios Lquidos: Tambin llamados caldos. No llevan ninguna sustancia gelificante, se usa
principalmente para enriquecimiento o identificacin. Su recipiente puede ser un frasco, una botella o
un tubo.
Medios semislidos: Contienen una proporcin menor del 5% de agente gelificante.
Medios slidos: Se denominan agares. Contienen agentes gelificantes en proporciones considerables.
Los medios slidos se pueden dividir en:
Inicialmente lquidos: segn su reversibilidad de estado hay 2 tipos:
Reversibles: despus de solidificar pueden volver a licuar. Tienen fcil conservacin. Los
agentes gelificantes incorporados son agar, suero, etc.
Irreversibles: no se pueden volver a licuar. Como sustancias solidificantes contienen huevo,
suero, etc.
Inicialmente slidos: en funcin de la naturaleza qumica del agente solidificante se distinguen 2
tipos:
Orgnicos: como tubrculos.
Inorgnicos: como silicatos.
Los medios slidos pueden estar contenidos en frascos, botellas o tubos, pudiendo aparecer stos:
en horizontal: usado en siembra de picadura
inclinado: se emplean en identificacin, obtencin de masa de microorganismos y almacenamiento
(colonias). Una variante es el pico de flauta.
Tambin los medios slidos suelen estar contenidos en placas, siendo las ms utilizadas las placas de Petri.
3. Segn su consistencia.
Medios naturales o empricos: Estn constituidos por componentes de origen animal o vegetal como
huevos, leche, patatas, etc. Actualmente est en desuso.
Medios sintticos: Son una solucin de medios puros qumicamente disueltos en agua destilada.
Poseen composicin constante. Se utilizan para el crecimiento y metabolismo bacteriano.
Medios semisintticos: Contienen sustancias qumicas de naturaleza y proporciones conocidas junto a
productos de origen natural. Son los medios ms utilizados actualmente.
3. PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO
FUNDAMENTO: La manipulacin adecuada de determinados agentes nutritivos permite obtener una
fuente de alimentacin y ambiente adecuado para que puedan crecer y desarrollarse los
34

microorganismos en las condiciones idneas.

REACTIVOS: Ingredientes del medio de cultivo, NaOH (1%) y HCl (1%).
MATERIALES: Vaso de precipitados de 250/500 cc., erlenmeyer de 250/500 cc., placa petri, pipetas
de 10 y 25 ml, papel indicador de pH, tubos de cultivo, autoclave, algodn graso, papel de aluminio y
balanza.
TCNICA:
Eleccin de los ingredientes: Slo cuando se elabora un medio de cultivo a partir de los elementos que los
componen. Este paso es poco frecuente debido a la comercializacin de los medios.
Pesada de cada uno de los ingredientes.
Hidratacin: El agua usada en la reconstitucin debe ser destilada o desionizada y calentada a 5060C. Se
coloca en un vaso de precipitado la mitad del agua a la que se le aaden los ingredientes o el medio de
cultivo homogenizando con una varilla agitadora y manteniendo la exposicin al calor. Los medios lquidos
no necesitan llevar a ebullicin en su preparacin, mientras que los medios slidos deben llevarse a
ebullicin pues necesitan una T de 98100C para disolverse. En la preparacin del medio slido se
recomienda que antes de iniciar el calentamiento se deje reposar el agua precalentada durante 510 minutos
para provocar un esponjamiento del agente gelificante que facilitar la disolucin.
Ajuste de pH: Se hace imprescindible cuando se parte de ingredientes por separado. Se mide el pH y si este
no es el adecuado se ajusta con las disoluciones de NaOH y HCl.
Distribucin: Para la esterilizacin se distribuir el medio de cultivo en recipientes que permitan un buen
proceso de esterilizacin y procurar que los recipientes sean los definitivos para llevar a cabo el cultivo. Se
plantean dos posibilidades:
Medios en tubo: con una pipeta de boca ancha o un dosificador se depositan en cada tubo la cantidad
de medio de cultivo correspondiente a 1020 cc., segn la capacidad del tubo. Se tapa con una
torunda de algodn graso que se cubre a su vez con papel de aluminio y se lleva a esterilizar. Tambin
se puede utilizar tubos con tapn de rosca. Con ello se consigue esterilizar recipiente y medio de
cultivo por lo que ste estar dispuesto para ser sembrado y almacenado hasta su uso, ya que los tubos
constituyen el recipiente definitivo.
Medios en placa: Se vierte el medio en un erlenmeyer no debe ocupar ms de 2/3 de la capacidad total
pues la ebullicin en el autoclave hara que el medio rebasase. Antes de esterilizar se tapa con algodn
graso y aluminio.
Esterilizacin: Se realiza a 121C durante 15 minutos. Para volmenes mayores de 250cc. se aumenta
el tiempo.
Vertido en placa: Tras la esterilizacin se homogeniza moviendo en sentido rotatorio. El vertido en
placa se debe realizar cuando la T sea prxima a la gelificacin 4555C (puede mantener la mano
sobre el recipiente).Con ello se evita la excesiva formacin de agua de condensacin en la tapa de las
placas. Para el llenado se usan pipetas estriles de boca ancha o un dosificador estril, siendo este ms
adecuado para evitar la obstruccin del agar. Las placas estriles por lo que la tcnica de vertido debe
realizarse en condiciones de esterilidad. El volumen de muestra que debe depositarse en la placa ser
segn el espesor de la capa deseada y las dimensiones de la misma ( de 2.53 mm, un poco ms de la
mitad de la placa).
Enfriamiento:
Medios lquidos: Tal como se extraen del autoclave se dejan enfriar.
Medios slidos: Depender de donde se encuentre el medio, as
Tubos: enfriar a T ambiente en posicin vertical (para conseguir agar horizontal) u oblicuo (para
conseguir agar inclinado).
Placas: tras el vertido debe asegurarse que no existen burbujas ejerciendo movimientos rotatorios
35

(las burbujas se quitan con el asa esterilizada).

OBSERVACIONES AL MTODO: Si no se dispone de autoclave se pueden esterilizar los
medios en bao mara hirviente o en olla a presin durante 30 min. repitiendo la operacin
durante 3 das consecutivos.
Los ingredientes o medios deshidratados se protegern de la humedad, la luz y el calor. Los
recipientes deben ser de plstico o vidrio opaco y cierre hermtico. No deben abrirse en ambientes
hmedos y deben desecharse cuando se apelmacen. Se controlar peridicamente su fecha de
caducidad. Los medios hidratados y esterilizados tienen un tiempo limitado de conservacin, en
general pueden conservarse 46 semanas en condiciones adecuadas. El problema ms frecuente es la
deshidratacin, se tendr en cuenta las siguientes recomendaciones:
almacenar en nevera a 4C, tambin a Tamb. aunque su duracin es ms limitada.
no deben guardarse a T menor de 0C (T de congelacin) pues altera la estructura del gel.
protegerlos de la luz, para ello envolver el recipiente en papel de aluminio
los tubos con cierre hermtico son ms recomendables que las torundas de algodn
los medios para verter en placa se conservan mejor en el frasco original aunque pueden
quedarse en ellos teniendo en cuenta:
se deben refrigerar inmediatamente despus de su solidificacin
se protegern frente a desecacin precintando con cinta adhesiva su borde lateral o envolviendo varias
en bolsa de plstico
se recomienda mantener en posicin invertida para evitar que se caiga sobre el medio el agua de
condensacin
Los medios conservados en refrigerador deben ser atemperados antes de su empleo con estufas de
cultivo o a T ambiente. No utilizar nunca medios con excesiva deshidratacin, la cual se manifiesta:
en medios lquidos, por aumento de concentracin o disminucin de volumen
en medios slidos, por disminucin de espesor, agrietamiento, retraccin, cambio de color,
etc.
Algunos medios son conservados en estado slido en el recipiente original y luego son refundidos
para su distribucin.
Las precauciones a tener en cuenta son:
no deben realizarse con medios cidos, ya que se alteran sus caractersticas (el agar se
hidroliza al calentarse en medios cidos)
si se mantienen fundidos periodos de tiempo mayores de 60 minutos, la calidad del medio
disminuye considerablemente
es aconsejable refundir al bao mara o autoclave durante 30 minutos, nunca aplicar calor
directamente
4. ELIMINACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Cualquier medio de cultivo sobre todo si ha sido sembrado, es un posible foco de contaminacin
debiendo eliminarlo tras su utilizacin.
Los medios de cultivo se pueden descontaminar:
1. Inundacin en solucin desinfectante: Se cubre la superficie con esta solucin y se deja unas 12
horas. Se utiliza cuando no hay autoclave.
36

2. Esterilizacin en autoclave
3. Incineracin: se utiliza para microorganismos muy patgenos.
Solo despus de la descontaminacin del medio de cultivo se proceder a la limpieza de sus
recipientes (cuando stos son recuperables).
5. CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
El 4% de los medios de cultivo de los lotes se controlan en estufas durante 57 das a una temperatura
de 37C, durante este tiempo debe verificarse el color del medio preparado as como la gelificacin,
los precipitados atpicos, etc. en el caso de advertir variaciones atpicas se desechan los lotes.
Con los medios de cultivo se deben establecer tres tipos de controles antes de considerarlos aptos:
1. Control de esterilidad (explicado anteriormente).
2. Control de calidad, se realiza para comprobar que el medio contiene aquellos componentes que
le caracterizan. Para su comprobacin se utilizan por lo menos dos grmenes distintos:
uno que crece en ese medio o da + una determinada prueba.
Otro que no crece en ese medio o da la prueba.
3. Control de caducidad, para ponerlo en prctica es necesario que en el momento de emplaque se
rotule en un lugar de la placa adems del medio, la fecha de preparacin.
TEMA 7. CULTIVO DE BACTERIAS II (SIEMBRA)
1. Introduccin
Dado que la manipulacin de muestras en microbiologa entraa riesgos, recordamos las siguientes
instrucciones:
Todo material debe ser estril.
La manipulacin en radio de 1015 cm. (zona asptica) alrededor de campana o zona de
flujo.
Se procurar disponer de todo el material al alcance de la mano para evitar desplazamientos.
Es necesario adquirir rapidez y automatismo indispensable para una buena ejecucin de las
tcnicas.
2. Manipulacin del material
Asa de hilo, platino o micro:
1 Esterilizar antes y despus de su uso, para lo cual se coloca perpendicular a la llama hasta que
alcance el rojo vivo en toda su longitud. Para evitar salpicaduras el instrumento se introduce
gradualmente en la llama.
2 Cuando se quiere meter en recipiente de boca estrecha se debe flamear la parte del mango que
quede dentro del recipiente durante su manipulacin.
3 Tras la esterilizacin se enfriar unos segundos en la fuente asptica, pues si contacta con la zona
del microorganismo (colonia, medio lquido, etc.)esterilizaremos la muestra recogida.
Pipetas: Con pipetas de seguridad (tienen filtro de algodn en su boquilla) o con prepipetas se
37

flamear previamente la punta y en toda su longitud que contacte con el recipiente de la

muestra. La pipeta se manejara con la punta dirigida hacia abajo, mantenindola vertical u
oblicua pero nunca horizontal.
Recipientes de vidrio: Siempre que contenga algn producto en su interior (m.c.) deben estar
tapados con torundas de algodn as:
No se abrirn en posicin vertical.
Su apertura se realizara oblicuamente dirigiendo su apertura sobre la llama.
El algodn se coge con el dedo meique de la mano opuesta, evitando el contacto mientras se
manipula el contenido del medio.
La boca se flameara al abrir y al cerrar, la cual se expone en la llama unos segundos con
movimientos rotativos.
Placas de Petri: Se manipularan semiabiertas con la abertura orientada a la llama del mechero.
3. MANUPILACION DE MUESTRAS
1) Medio lquido:
Con asa de platino o Nicron:
destapar el tubo
flamear la boca del tubo
introducir el asa estril y sumerguirlo
extraer el asa
La muestra queda formando una pelcula circular en la luz del asa, solo se puede conocer el volumen
de la muestra utilizando asas calibradas.
Con pipeta estril: se debe tener la precaucin de mantener limpia la parte exterior de la
pipeta por lo que se dejara gotear l liquido adherido a las paredes sobre el recipiente antes de
taparlo.
2) Medios slidos:
destapar el tubo o flamear el tubo
contactar suavemente el asa o el hilo estril con alguna colonia visible
flamear la boca del tubo o cerrar la placa
4. PREPARACION DEL INOCULO ESTANDARIZADO (prctica)
Cuando las muestras son muy viscosas o concentradas y para tcnicas en las que se pretende el
aislamiento del germen o la realizacin de un anlisis cuantitativo, es necesario preparar l inoculo de
siembra para obtener resultados fiables.
Tcnica general de preparacin de inoculos:
Se obtiene a partir de un cultivo joven (fase exponencial de crecimiento) y puro o de un producto
patolgico.
Se toma con un asa estril colonias de un cultivo o una porcin de una muestra biolgica y se diluye
en 5 cm cbicos de una solucin diluyente, la cual se homogeneiza. Como diluyente podemos utilizar
caldo nutritivo, solucin salina o agua destilada estril.
Tcnica de KYRBY BAUER:
Utiliza escalas con gradiente de turbidez, cada tubo de la escala va numerada y sirve de referencia
segn el n de microorganismos que se quieran. l inoculo se puede ajustar al patrn de referencia
38

mediante:
comparacin visual aproximada (turbidez)
espectrofotometra
Una escala universalmente aceptada es la escala de Mc FARLAN, constituida por una serie de tubos
en los que se origina un precipitado blanco de BaSO4 por accin de H2SO4 con BaCl2.
Cada tubo se lee en el espectrofotmetro y se obtiene una absorbancia de cada uno. Se representa
Absorbancia frente a concentracin y se obtiene una recta en la que se interpolan las absorbancias de
las muestras problema pudiendo conocer la concentracin de stas, as se estandariza la muestra
problema.
5. SIEMBRAS
Existen diferentes tcnicas y stas se clasifican segn el modo de efectuarse:
1. Por inoculacin.
Se puede llevar a cabo en medio liquido o medio slido.
Medio liquido:
Con asa: sumergir el asa cargada y agitar.
Con pipeta: verter el contenido de la pipeta sobre el m.c. y se homogeneiza.
Con escobillon: se realiza de igual modo que con el asa de siembra.
Medio slido:
En placa : Hay dos tcnicas: tcnica de Barry y la tcnica de Kirby Bauer.
Tcnica de Barry: Es una inoculacin previa al vertido en placa, se siguen los siguientes pasos:
1) se toma 0,1 cm cubico de inoculo y se aaden a 25 cm cbicos de m.c. fundido (4050).
2) homogeneizar.
3) verter en la placa de petri.
Una modificacin de esta tcnica consiste en verter l inoculo directamente en la placa y
seguidamente se agrega en m.c. y dando movimientos de rotacin para as mezclar. Esta tcnica se
utiliza para el recuento de viables y antibiogramas.
Tcnica de Kyrby Bauer: Es la inoculacin sobre la superficie del medio solidificado, se siguen los
siguientes pasos:
1) preparado l inoculo en tubo estril se introduce un escobillon tambin estril hasta quedar
impregnado.
2) se elimina el exceso de inoculo presionando el escobillon con movimientos de rotacin contra las
paredes del tubo.
3) se siembra la placa empleando la tcnica de los tres giros, pasando el escobillon por toda la placa 2
o 3 veces antes de efectuar cada giro, para distribuir uniformemente l inoculo.
4) se deja secar la placa 34 min. En posicin semi abierta e invertida quedando lista para utilizar.

39

Esta tcnica se emplea para el estudio de sensibilidad o inoculacin directa de productos patolgicos.
En tubo: Existen dos tcnicas: siembra en estras y siembra en picadura.
Siembra en estras: En superficie inclinada, se siguen los siguientes pasos:
1) se toma la muestra con el asa.
2) se introduce en el tubo que contiene el medio.
3) desde el fondo de la superficie y en progresin ascendente, deslizar el asa con movimientos de
zigzag.
Esta tcnica se utiliza para obtener colonias, renovar cepas (resembrar) y pruebas biolgicas.
Siembra en picadura: Se siguen los siguientes pasos:
1) se toma la muestra con la punta del hilo.
2) se punciona en el centro del m.c. introduciendo la punta del hilo hasta 23 mm del fondo del tubo.
3) se extrae el hilo por la misma lnea que se introdujo.
4) si se trata del medio inclinado (pico de flauta) se puede realizar una siembra en estras con el
mismo hilo por la superficie del medio.
Esta tcnica se emplea para pruebas de identificacin, movilidad, pruebas bioqumicas, hidrlisis de
principios inmediatos etc.
2. Por aislamiento
Se realizan en placa y hay dos tipos:
Por dilucin:
1 Disponer de tres tubos fundidos a 3050 C previamente marcados con los nmeros 1, 2 y 3.
2 Tomar con el asa estril la muestra y sembrar en el tubo 1.
3 Homogeneizar el tubo 1 por dilacin (entre las palmas de las manos) y tomar un asa del mismo
tubo, resembrando al tubo 2 dejando el tubo 1 al bao mara a 45C.
4 Homogeneizar el tubo 2, tomar una muestra y pasarla el nmero 3 dejando el tubo 2 en el bao
mara a 45C.
5 verter el contenido de cada uno de los tubos homogeneizados de nuevo en tres placas marcadas con
los nmeros 1, 2 y 3, esperar que solidifique el medio.
6 En la placa nmero 3 se obtendrn colonias aisladas.
Por agotamiento: Hay cuatro modos:
Siembra en estras o zigzag
1 Se deposita el inoculo en el extremo superior de la polaca.

40

2 Se siembra con el asa a partir del inoculo con un movimiento de zigzag cada vez ms amplio (en
la lnea media de la placa alcanza su mxima amplitud), para ello el asa debe contactar suavemente
con la superficie del medio (no se debe presionar demasiado pues se agrietara).
3 La siembra se efectuar hasta la zona distal del comienzo, donde se obtendrn colonias aisladas.
Siembra en estras mltiples
1 Se deposita el inoculo en el extremo de la placa.
2 Con el asa se reparten en varios tramos siguiendo el borde de la placa. Entre cada tramo se debe
flamear el asa.
3 Los segmentos seguidos definen un poliedro regular. El ltimo tramo se efectuar hacia el interior,
donde se obtendrn las colonias aisladas.
Siembra en los cuatro cuadrantes
1 Se divide la placa en cuatro cuadrantes (se puede rotular con rotulador de vidrio en la parte
superior).
2 Se deposita el inoculo en la parte superior de uno de los cuadrantes y se siembra por estras.
3 Sin flamear el asa se repite la operacin en los tres cuadrantes, en cada uno de ellos se siembra el
inoculo adherido al cuadrante anterior. Tenemos colonias aisladas en el cuarto cuadrante.
Siembra en tres giros
1 Se siembra en estra la mitad de la placa.
2 Flamear el asa.
3 Se gira la placa 90, sembrando en estra la mitad superior de la misma.
4 Se repiten los pasos 2 y 3.
5 Las colonias aisladas aparecen en la zona sembrada en ltimo lugar.
6. ESTUDIO MORFOLGICO DE LAS COLONIAS
El estudio morfolgico se hace tanto macro como microscpicamente.
1. Estudio macroscpico
Cuando una bacteria se cultiva en medio slido se desarrolla una colonia. La morfologa de dicha
colonia y su entorno en relacin con el medio donde se desarrolla es un dato orientativo y puede servir
para identificar al microorganismo.
El aspecto de la colonia puede recordar algn objeto denominndose de la misma forma.
Hay que tener en cuenta que una bacteria puede dar colonias distintas en funcin del medio (ejemplo:
salmonella en agar makonki da colonias distintas que en agar SS). El estudio de la morfologa de
colonias es solo orientativo, puesto que en determinados medios especies distintas pueden dar
colonias similares.

41

Las colonias aisladas en placa se pueden clasificar atendiendo a:

Forma: puntiforme, circular, filamentosa, ameboide, rizoide y fusiforme.
Elevacin: plana, convexa y umbonada.
Borde: entero, ondulado, lobulado, crenado, filamentoso y enrollado.
Superficie: lisa, rugosa, brillante y mete.
Color: relacionado con el medio de cultivo y el metabolismo del microorganismo.
Consistencia: para determinarla es necesario tocar la colonia con el asa (mantecosa, grumosa)
Las colonias aisladas en agar inclinado pueden ser: filiformes, equinuladas, perladas, difusas,
arborescentes y rizoides.
Entorno colonial: Las modificaciones del entorno colonial ms significativas son las
hemlisis producidas en agar sangre (presencia de una zona de eritrocitos lisados alrededor de
una colonia). Es un dato que resulta til en la identificacin inicial de ciertas bacterias, sobre
todo Estreptococos. Pueden existir tres tipos de hemlisis:
Hemlisis : La colonia est rodeada de una zona de eritrocitos parcialmente lisados
frecuentemente acompaada de color marrnverdoso o pardusco.
Hemlisis : Las colonias estn rodeadas de una zona clara del color del medio base
lo que indica lisis completa de eritrocitos.
Hemlisis : no se observa hemlisis aparente.
Olor: Es otra caracterstica que facilita la identificacin del entorno colonial (aunque son muy
subjetivos)
BACTERIAS
MEDIOS DE CULTIVO
OLOR
Pseudomonas
MK
Jabn
E.Coli
MK
Levadura de cerveza o pan
Proteus
MK
Ftido
Salmonella
Agar SS
Semen
2. Estudio Microscpico
Est relacionado con el tamao, forma y agrupacin de las bacterias (visto en tema 2)
TEMA 8. RECUENTO DE MICROORGANISMOS
1. Introduccin
El recuento de microorganismos es la determinacin del nmero de microorganismos presentes en
una muestra. Frecuentemente es conveniente su determinacin pero adems de la dificultad que
presentan los resultados no permiten excesiva fiabilidad.
2. Clasificacin de las tcnicas
1. METODOS INDIRECTOS: Son aquellos en los que no se encuentran el nmero de
microorganismo sino que se calcula a partir de otros parmetros. Los dividiremos en 3 grupos:
a. Determinacin analtica de molculas: pertenecientes al microorganismo. Por ejemplo: protenas,
ADN
b. Mtodos Gravimtricos: basados en la determinacin del peso seco.
c. Mtodos Turbidimtricos: son los ms utilizados.

42

2. METODOS DIRECTOS: En ellos a cada uno se considera una unidad. Hay 3 tipos:
a. Mtodos directos totales: determinacin del nmero de microorganismos vivos y muertos. Son
mtodos microscpicos y entre ellos destacamos:
mtodo de Breed o recuento de extensiones teidas,
mtodo de Wright
mtodo de recuento en cmara.
b. Directos culturales: contabilizan nicamente los microorganismos vivos, el mas utilizado:
recuento de viables en placa.
c. Semidirectos totales: por medio de contadores electrnicos de partculas.
Los ms rpidos son los turbidimtricos y semidirectos. Su inconveniente es que requiere un aparataje
sofisticado y no distingue entre microorganismos vivos y muertos.
3. RECUENTO EN CAMARA
(apuntes Isabel Lpez, 1 lab.)
4. MTODO DE EXTENSIONES TEIDAS
Fundamento: Se basa en contar los microorganismos de un volumen determinado de
suspensin de los mismos tras la extensin y tincin de sta. El mtodo a desarrollar es el de
Breed.
Material: Portas, mechero, pipeta de 10 l, equipo de tincin, estufa y microscopio.
Reactivos: Azul de metileno y suspensin de microorganismos.
Tcnica:
Marcar un porta un cuadrado de 1cm de lado con ayuda de papel milimetrado.
Invertir el porta y depositar en el cuadrado 10 l de la suspensin.
Dejar secar al aire o en estufa.
Fijar a la llama.
Teir con azul de metileno 3 minutos.
Lavar, secar y observar con objetivo de inmersin.
Contar los microorganismos existentes en 25 campos distintos situados en la diagonal.
Resultados e Interpretacin: Para el clculo del microorganismo se tiene en cuenta:
A= rea del cuadrado marcado (100mm2)
C= Volumen de suspensin utilizada (10 l)
R= Radio del campo del microscopio (mm)
S= Superficie del campo del microscopio (r2)
V= Volumen de suspensin del microorganismo contada en 25 campos (l)
N= Nmero total de microorganismos contados en 25 campos
A __________ C
S.25 ________ V ! V = CS25/A = 10 r2 25 / 100 = 2.5 r2
43

V ___________ N
S.25 ________ X ! X= N / V = n microorganismos / l
Observaciones al mtodo: La suspensin de microorganismos debe ser homognea
por todo el cuadrado, si no se desecha la preparacin. En lugar de azul de metileno se
puede utilizar cualquier colorante de la tincin simple (nigrosina, sudan IV, etc.)
5. Recuento de viables en placa
Fundamento: basado en que un microorganismo da lugar en un medio de cultivo a
una colonia visible, por tanto el nmero de colonias contadas ser igual al nmero de
microorganismos existentes inicialmente.
Material: pipeta de 1 ml, tubo de ensayo y placa de petri.
Reactivos: solucin salina estril, medio de cultivo para el microorganismo y
suspensin del microorganismo.
Tcnica:
1. Tomar 1ml de la solucin problema, homogeneizarla y aadirlo a 9 ml de solucin salina
estril (suspensin 1/10).
2. Homogeneizar.
3.Tomar 1ml y pasarlo a otro tubo con 9ml de solucin salina estril (suspensin 1/100).
4. Repetir la operacin.
5. De cada dilucin se siembran un mnimo de tres placas estriles. Depositar en cada una
1ml del inculo correspondiente y agregar 10ml de medio de cultivo, imprimiendo un
movimiento de rotacin con el fin de homogeneizar la muestra.
6. Dejar solidificar e incubar a una temperatura adecuada segn el tipo de microorganismo.
7. Contar las placas cuyo nmero de colonias este entre 30300.
Resultado e interpretacin: En primer lugar se calcula la media aritmtica de las
colonias contadas en las placas seleccionadas, esta se multiplica por la inversa de la
dilucin a la que se ha efectuado el recuento, con lo que se obtendr el nmero de
microorganismos viables por ml de muestra.
Observaciones al mtodo: El error ms habitual radica en que una colonia se forma a
partir de ms de un microorganismo. No obstante tiene ventajas frente a los
anteriores, no cuentan los microorganismos muertos o partculas contaminantes
indistinguibles de los microorganismos en los recuentos microscpicos.
Si se dispone de material suficiente se preparan 10 placas, de este modo los resultados
estadsticos son ms representativos.
Hay que homogeneizar la muestra perfectamente.
El medio y las condiciones de cultivo deben ser las idneas para el microorganismo
estudiado.
Una alternativa empleada para el recuento de viables consiste en utilizar un asa calibrada con
la que se siembra en placa.

44

TEMA 9. DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

1. Conceptos bsicos
Asepsia: ausencia de microorganismos conseguida por mtodos fsicos.
Antisepsia: ausencia de microorganismos conseguida por mtodos qumicos.
Desinfeccin: tcnica de saneamiento encaminada a eliminar elementos patgenos.
Esterilizacin: tcnica de saneamiento encaminada a eliminar cualquier forma de
vida patgena, no patgena o formas de resistencia como esporas.
Desinfectante: sustancia antimicrobiana que no puede aplicarse sobre superficies
vivas.
Bactericida: sustancia que destruye a las bacterias.
Bacteriosttico: sustancia que impide el crecimiento y multiplicacin de las
bacterias.
Desinfectante
Se utiliza para destruir las formas de vida patgenas, el ideal es el que ms se aproxime al
concepto de esterilizacin, pero estn muy lejos de conseguirlo. Segn el microorganismo
sobre el que acte se denomina:
Bactericida, si destruye bacterias.
Viricida, si destruye virus.
Funguicida, si destruye hongos.
Normalmente los desinfectantes son bactericidas y los antispticos son bacteriostticos.
Hay que tener en cuenta que muchos desinfectantes cuando se utilizan de forma errnea
pueden estimular el desarrollo de los organismos al seleccionarse las cepas ms resistentes
que son las ms virulentas.
Esterilizacin
Un objeto puede estar desinfectado pero no esterilizado, mientras que el objeto esterilizado
esta desinfectado tambin.
Experimentalmente se comprueba que la esterilizacin no destruye el 100% de los
microorganismos. Slo se conseguir la asepsia con temperaturas y tiempos muy elevados
(que son inoperantes).
Para que el mtodo de esterilizacin sea til debe destruir el 99,99% de los microorganismos.
Antes de desinfectar o esterilizar hay que limpiar bien el material de restos de materia
orgnica ya que estos dificultan dicho proceso.
Vamos a aclarar dos conceptos:
Material estril: Es aquel objeto que tras ser esterilizado sigue manteniendo esta propiedad en
el tiempo a la hora de ser utilizado, pues se le han aplicado medidas para ser estril.
Material esterilizado: Ha sido esterilizado y en el momento de usarlo ya no se conserva la
esterilidad, ya que no se le han aplicado las medidas para conservarlo.
2. MTODOS DE DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

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1. MTODOS FSICOS
a. Mtodos Trmicos
Factores que influyen en la muerte de microorganismos por calor
1. Nmero de microorganismos: Al aumentar en nmero de microorganismos aumentar la
intensidad del tratamiento aumentando la temperatura o el tiempo.
2. Naturaleza del microorganismo: Las formas vegetativas son ms sensibles que las
esporas.
3. Temperatura: Al aumentar la temperatura hasta cierto lmite aumenta la efectividad y
rapidez.
4. Tiempo de actuacin: Generalmente el tiempo de actuacin se relaciona con la
temperatura, jugando con ambos. Si se aumenta la temperatura disminuye el tiempo y si
disminuye el tiempo se aumenta la temperatura, es decir, con frecuencia estas dos variables se
comportan de forma inversa.
5. Tiempo de duracin: Hay que tener en cuenta la suma de:
Tiempo de penetracin: Tiempo necesario para que el material adquiera la
temperatura de esterilizacin.
Tiempo de calefaccin: Tiempo requerido para que dicha temperatura destruya la
poblacin microbiana.
Tiempo de seguridad: Se asigna de forma arbritaria.
Los sistemas enzimticos de las bacterias tienen una temperatura ptima para actuar, pero por
encima y por debajo de dicha temperatura tambin siguen viviendo, son las temperaturas
mximas y mnimas. Por ejemplo en E.Coli el intervalo de temperatura oscila entre 847C y
en N.Gonorreae 3040C. Segn esto, los intervalos de temperatura pueden ser grandes o
pequeos en funcin de los microorganismos.
Se pueden distinguir:
Bacterias psicrfilas: Intervalo de temperatura oscila entre 030C. Ejemplo:
Pseudomonas.
Bacterias mesfilas: Intervalo de temperatura oscila entre 2045C. Son las ms
numerosas y patgenas. Incluyen:
2024C: grmenes saprofitos y parsitos de plantas superiores.
3545C: grmenes saprofitos y parsitos del hombre y animales
superiores.
Bacterias termfilas: Temperatura ptima est por encima de los 45C. Habitan en
suelo y aguas termales.
El fro no mata a los microorganismos sino q impide su reproduccin.
Se dan 2 tipos de mtodos trmicos:
CALOR HUMEDO: Puede ser a travs de H20 o vapor.
H2O
Ebullicin: en el lab. Se utiliza poco no es muy fiable en el sentido estricto, no es un
46

mtodo de esterilidad ya que no destruye a las esporas. Consiste en introducir el

material en H2O hmeda durante unos 10 minutos.
Pasteurizacin: no mata las formas de resistencia, es muy til en tecnologa de
alimentos. Ej: leche. Podemos distinguir 2 tipos de pasteurizacin:
pasteurizacin alta: se consigue con T de 7275 durante 15 minutos.
Pasteurizacin baja: se consigue con T de 63 durante 30 minutos.
Tindalizacion: es un mtodo de esterilizaciones sucesivas, se utiliza en microbiologa
cuando existen problemas de contaminacin en el autoclave. Consiste en
esterilizaciones repetidas a lo largo de 3 o 4 das. Tericamente no se deben alcanzar
T superiores a 100 y durante este intervalo no se debe abrir el aparato que se somete
a la tindalizacion. El objetivo es destruir esporas cuando germinan, as como evitar
contaminacin con microorganismos resistentes. La tindalizacion se lleva a cabo a
65 durante 30 minutos cada da, durante 4 das. El resto del tiempo se mantiene a
3035.
Uperizacion: es muy til en industrias alimentarias, se realiza a una T aproximada de
150 durante 15 segundos. No se alteran las propiedades organolecticas (son
atributos, aquellas que podemos apreciar a travs de los sentidos, ej: color, olor,
sabor) y se produce esterilizacin.
VAPOR
A chorro: se alcanzan T de hasta 100, es un mtodo poco utilizado en
microbiologia.
Autoclave: es un recipiente cilndrico que se cierra hermticamente. Externamente
lleva un manmetro, un reloj de T y otro para el tiempo. En el interior tiene un
cestillo donde se introduce el material a esterilizar. La esterilizacin se puede
conseguir a 1 atm. 20 minutos a 120 . No abrir hasta que la presin no este en
cero.
CALOR SECO:
Flameado: poner algo a la llama.
Incinerado: se lleva a cabo en crematorios.
Horno pasteur o poupinel: la esterilizacin se consigue a 180 2 h. o 160 en 3h y
media.
La esterilizacin se lleva a cabo: se preparan los instrumentos a esterilizar que debern estar
debidamente protegido. Se introduce en la estufa, se conecta y se selecciona la T en el
termostato y el tiempo en el reloj (si lo hubiera). Comenzara a contabilizar cuando alcance la
T deseada, transcurrido el tiempo se desconecta el interruptor y dejamos que baje la T, los
materiales que se pueden esterilizar por este mtodo son: porcelana, vidrios y no para m.c. ,
plstico.
b. Radiaciones
Ionizantes: son fundamentalmente R. alfa y R. gamma. Destruyen las bacterias al
actuar los ac. Nucleicos y enzimas. Presentan un poder de penetracin alto.
No ionizantes: son R. UV no son muy tiles porque son poco penetrantes, solo
aseptizan la superficie.
2. METODOS MECANICOS
Filtros: con poro de menor tamao que las bacterias por lo que las retienen, se hacen
con barro y otras sustancias, generalmente los virus pueden atravesarlos.
Ultrasonido: consiste en introducir en tanques de distintos tamaos que contienen
lquido desinfectante. Una vez puesto en marcha el dispositivo comienza a vibrar a
gran velocidad ocasionando pequeas burbujas que entran en todos los recodos
47

consiguiendo eliminar todos los microorganismos. Es un mtodo poco utilizado ya

que es aro y poco practico.
Agitacin: se lleva a cabo por perlas de vidrios.
3. SALES MINERALES
Medios hipotnicos: colocar una bacteria en este medio tiende a coger H2O hasta
estallar. Esto es solo teora ya que en la prctica la pared bacteriana la protege.
Medios hipertnicos: colocar una bacteria en este medio pierde H2O hasta
deshidratarse, con lo que se frena la multiplicaron pero no se destruye.
4. COMPUESTOS QUIMICOS: van a producir la destruccin de todos los
microorganismos patgenos.
Todo buen material de desinfeccin debe cumplir:
1) matar al mayor n de grmenes o al menos a todos los patgenos.
2) ser econmico y de fcil adquisicin.
3) no ser corrosivo (material), toxico (para personas, animales o plantas) ni irritantes para los
tejidos.
4) que posea un alto poder de penetracin.
5) olor agradable.
6) estabilidad y homogeneidad de composicin y difusin.
Las tcnicas mas empleadas para su uso son:
inmersin
locin
nebulizacion
pulverizacin
Los desinfectantes y antispticos ms utilizados son:
Compuestos inorgnicos
Detergentes catinicos: se utilizan derivados del RNH4 , los ms empleados son:
Cloruro de Benzalconio
Cetrimida
Se suelen emplear para la limpieza y desinfeccin de paredes, ropa, etc.
Detergentes aninicos: como por ejemplo el uridilsulfato sdico.
Metales pesados: son derivados del mercurio, la ms conocida es la mercromina que
generalmente se emplea como antisptico.
Halgenos: existen dos tipos:
Derivados del cloro: se utilizan en forma de gases o hipoclorito (leja). Se utilizan
principalmente para el saneamiento de aguas.
Derivados del yodo: se utilizan en solucin alcohlica como la tintura de yodo
(Betadine).
Agentes oxidantes: como el agua oxigenada.
Compuestos orgnicos
Alcoholes: se utilizan como antisptico y desinfectante sobre el filo de algunas
48

superficies. Se emplea el etanol o alcohol etlico para tejidos y metanol para

superficies que no vayan a estar en contacto con la piel.
Fenoles: se utilizan para la desnaturalizacin de protenas. Los ms utilizados son el
resorfinol, hexaclorofeno, zotal, etc. muy utilizada es la clorohexidina que se puede
considerar lo ms parecido a un antisptico ideal, junto con el Betadine, ya que acta
sobre gram + y , hongos, virus, etc.
Aldehdos: se utilizan principalmente vapores de formol y glutaraldehdo.
Oxido de etileno: es un gas txico que con el aire forma una molcula explosiva, por
lo que se utiliza en cmaras de oxido de etileno a 46 atm. y mezclado con un gas
inerte como dixido de carbono queda adsorbido en el material por lo que una vez
estabilizado hay que airear dicho material.
Presenta un gran poder de penetracin y se aplica a cualquier material resistente al calor y que
no puede desinfectarse por otros mtodos. Ej: instrumentos para endoscopia, plsticos
termolbiles, cauchos, etc.
El material esta disponible para ser utilizado a las 48 horas despus de su esterilizacin y
deber conservarse estril en bolsas cerradas por procedimientos termoelctricos. La duracin
de la esterilizacin es de aproximadamente 6 semanas.
propiolactona: es un lquido muy txico que se utiliza para esterilizar material
sensible al calor.
Podemos generalizar y decir:
que para esterilizar se utiliza:
Calor.
Radiaciones.
Formol
Glutaraldehdo.
Oxido de etileno.
.propiolactona.
que para desinfectar se utilizan:
cidos y lcalis.
Algunos halgenos.
Glutaraldehdo.
que como antispticos se utilizan:
Detergentes.
Metales pesados.
Derivados halogenados.
Agentes oxidantes.
Alcoholes.
Fenoles.
Actualmente son ampliamente empleadas mezclas de desinfectantes para aumentar la
potencia o espectro de accin. Las asociaciones ms utilizadas son:
Clorhexidina con cetrimida
Mercuriales orgnicos con detergentes aninicos y fenoles.
3. CONTROLES DE ESTERILIDAD
Sirven para comprobar la eficacia del proceso de esterilizacin. Podemos distinguir:
a. De tipo Fsico: Son sistemas de control incluidos en sistemas de esterilizacin. Ejemplo:
manmetros, termmetros, vacumetros (miden el vaco) y registros grficos de distintos
49

parmetros.
b. De tipo Qumico: Son cintas adhesivas en las que se produce un cambio de color si se ha
estilizado bien.
c. De tipo Biolgico: Sistemas comerciales en forma de cpsula cerrada en cuyo interior hay
esporas. Dichas cpsulas tras haber sido sometidas a esterilizacin se incuban a 4045C
durante 4864 horas y se procede a la lectura donde la germinacin y cambio de color
indicar en cada caso que no se ha producido condiciones de esterilizacin.
4. EVALUACIN DE ACTIVIDAD DE UN DESINFECTANTE. DETERMINACIN
DEL COEFICIENTE FENOL (prctica)
Fundamento: Se puede determinar la potencia de un desinfectante problema
utilizando como patrn el fenol. Para ello se compara el poder germicida a distintas
concentraciones.
Material: Tubos de ensayo, pipetas de 2 y 5 ml, gradilla, asa de siembra, estufa de
cultivo, cronmetros o relojes.
Reactivos: Fenol, desinfectante problema, caldo nutritivo y microorganismo
problema.
Tcnica:
Se preparan 4 tubos con 5 ml de cada una de las diluciones crecientes del
desinfectante a titular. Las diluciones son: 1/100, 1/200, 1/400 y 1/800.
De la misma forma se preparan 4 tubos con 5ml de cada una de las diluciones
crecientes de fenol (patrn) cuya concentracin es el doble del antisptico problema.
Las diluciones son: 1/50, 1/100, 1/200 y 1/400.
Se llevan los todos los tubos al bao mara a 37C durante 5 minutos.
Se aade a cada tubo 1.5ml de la suspensin de microorganismos problema.
Pasados 5 minutos se toman de cada tubo un asa y se siembra en caldo nutritivo. Se
efecta la misma operacin a los 10 y 15 minutos.
Se incuba durante 48 horas a 37C en estufa. El crecimiento puede verse por turbidez,
cambio de color, precipitado blanco lechoso, etc.
Resultados e Interpretacin: El coeficiente final es la relacin existente entre
el inverso de la mayor dilucin del desinfectante problema que no inhibe los
microorganismos en 5 minutos de contacto pero s en 10 minutos y la mayor
dilucin del fenol que se comporta igualmente.
TEMA 10. TIPACIN BIOQUMICA
1. Introduccin.
2. Clasificacin.
3. Requerimientos nutritivos. Factores V y X.
4. Pruebas del metabolismo hidrocarbonado (oxidativo y fermentativo).
OF de Hung y Lesin.
Produccin de cido gas.
DGalactosidasa.
1. INTRODUCCIN

50

Los microorganismos como seres vivo tienen su propio metabolismo:

Anabolismo: relacionado con sntesis para lo que se requiere energa.
Catabolismo: relacionado con degradacin con ganancia de energa.
Estas reacciones vienen regidas por unos biocatalizadores de naturaleza proteica
denominados enzimas, los cuales son caractersticos para cada germen, por lo que la
deteccin in vitro del conjunto de estos enzimas es de gran utilidad en el proceso de
identificacin microbiolgica.
La presencia de enzimas se investiga de dos formas:
Sembrando el microorganismo en un medio que contenga el sustrato a investigar con
posterior incubacin en condiciones adecuadas. Ej: prueba de Hung y Leifson o la
reduccin de nitratos.
Cultivando previamente en un medio que o contenga el sustrato y posteriormente se
pone en contacto con l. Ej: prueba de la oxidasa, de la catalasa.
La tipacin bioqumica puede realizarse sobre un cultivo puro. El nmero y tipo de
pruebas bioqumicas a realizar sobre el germen depende de los primeros datos del
examen microbiolgico:
morfologa del germen y sus colonias.
caractersticas tintoriales.
medios donde crecen, etc.
2. CLASIFICACIN
(fotocopias)
3. REQUERIMIENTOS NUTRITIVOS. FACTORES V y X.
Algunos microorganismos son muy exigentes nutricionalmente y requieren para su
desarrollo la presencia de sustancias especficas llamadas factores de crecimiento,
vitaminas, aminocidos, factores de la coagulacin, etc. El ejemplo ms conocido en
bacteriologa es el de Haemophylus que precisa del factor X, V o ambos para
desarrollarse de forma ptima.
Las bacterias Haemophylas crecen bien en sangre entera, la cual aporta ambos
principios:
Factor X o hemina: es una sustancia termoestable derivada de la Hb.
Factor V o coenzima I (NAD): es una sustancia termolbil.
Fundamento: FV y FX por ser hidrosolubles difunden rpidamente en medio
slidos como el agar, si se depositan tiras de papel de filtro impregnadas en
estos factores en un medio dificultorio de los mismos se puede conocer la
necesidad de F V y X del microorganismo estudiado, observando el
desarrollo de las colonias alrededor de las tiras.
Material: placa de petri, asa, pipeta Pastear, pipeta calibrada y tubos estriles.
Reactivos: medio deficiente de F V y X, como agar MuellerHilton, caldo
infusin de cerebro corazn, tiras de papel de filtro impregnadas en F V y X
respectivamente y microorganismos.
Tcnica:
51

1. A partir de un cultivo puro del microorganismo problema preparar una

suspensin de 23 ml de caldo infusin cerebro corazn (BHI).
2. Realizar con esta suspensin una siembra de inoculacin en una placa con agar
MuellerHilton, preferiblemente por la tcnica de Kirby Bauer.
3. Colocar una tira con el FV y otra con el FX en la superficie del agar presionando
suavemente, deben estar separadas por 1 cm.
4. Incubar a 37C 1824 horas.
Resultados e interpretacin
Se observa si existe crecimiento alrededor de las tiras:
1 Caso: microorganismo requiere FX.
2 Caso: microorganismo requiere FX.
3 Caso: microorganismo requiere ambos factores.
Si el microorganismo estudiado es Haemophylus se cultivar en una atmsfera del
510% de CO2.
4. PRUEBAS DEL METABOLISMO HIDROCARBONADO
La utilizacin por un microorganismo de los hidratos de carbono tiene lugar por
alguno de estos procesos:
metabolismo oxidativo
metabolismo fermentativo
La oxidacin de hidratos de carbono es un proceso aerbico y lo realizan los
microorganismos aerobios obligados o estrictos.
La fermentacin es un proceso anaerbico efectuado por microorganismos aerbicos
y anaerbicos facultativos.
Las diferencias entre el metabolismo oxidativo y fermentativo estn presentes en el
esquema siguiente:

Produccin de cido
Produccin de gas
Grado de acidez
Fosforilacin de glucosa
ltimo aceptor de e en
la cadena respiratoria

Metabolismo
fermentativo
Aerbica y
anaerbicamente
Pueden producirlo
Alto
S
Sustrato orgnico

Metabolismo oxidativo
Aerbicamente
No
Bajo
No
Oxgeno

Las pruebas del metabolismo hidrocarbonato son:

1. PRUEBA O.F. DE HUNG Y LEYSON

52

 Fundamento: Se basa en que el metabolismo oxidativo slo produce cido en

la superficie del medio mientras que en el fermentativo el cido es producido
en todo el medio, incluso en las zonas de anaerobiosis; adems en caso de
aparicin de gas ste slo se forma en el metabolismo fermentativo.
La formacin de cido se detecta por el viraje de un indicador de pH mientras que la
de gas por la aparicin de burbujas dispersas, grietas o porque el medio se despega
del fondo.
La prueba se puede realizar sobre distintos HC, los ms utilizados son glucosa,
lactosa, sacarosa y maltosa.
Entre las principales aplicaciones de esta prueba estn:
Diferenciar gneros intestinales:
Enterobacterias: fermentan la glucosa
Pseudomonas: oxidan la glucosa
Moxarella, Alcalgenas, Acinetobacter: ni fermentan ni oxidan la glucosa
Diferenciar gneros de la familia Micrococaceae:
Staphylococo: fermentan la glucosa
Micrococus y Planococus: oxidan la glucosa
Material: Tubos de cultivo, hilo de siembra, pipeta de 10 ml,
algodn, mechero y estufa de cultivo.
Reactivos: Medio bsico de Hung y Leyson, parafina o vaselina
estril, solucin de HC al 10% y microorganismo.
Tcnica:
1. Agregar al medio bsico de Hung y Leyson un 10% de la solucin de HC
con lo que se obtiene una dilucin final del 1%.
2. A partir de un cultivo puro y joven de microorganismo problema se toma
una muestra con el hilo. Se siembra en picadura 2 tubos con el medio HL.
Un tercer tubo no inoculado actuar como control negativo.
3. Calentar uno de los dos tubos cultivados para que el CO2 del medio se
desprenda y se sella con 12 ml de vaselina o parafina fundida para mantener
la anaerobiosis.
4. Se incuba a 37C durante 4872 horas y en algunas ocasiones se
requieren hasta 14 das de incubacin.
Resultados e Interpretacin: Si se forma cido el medio virar de
verde a amarillo. La produccin de gas se ver en burbujas, grietas,
elevacin del medio, etc.
La interpretacin de resultados posibles se detalla en el siguiente esquema:

Fermentacin
anaerognica
Oxidacin
No oxidacin ni
fermentacin
Oxidacin y

Tubo abieto

Tubo cerrado

Amarillo

Amarillo

Amarillo

Verde

Verde

Verde

Amarillo

Amarillo
53

fermentacin
El tubo de control siempre ser de color verde quede cerrado o abierto.
Observaciones al mtodo: Para microorganismos con requerimientos
nutritivos se agrega al medio bsico de HL un 2% de suero o 0.1%
de extracto de levadura. En esta prueba se puede observar la
movilidad del microorganismo ya que har un zigzag en el medio.
2. PRODUCCIN CIDOGAS
Fundamento: Se basa en el viraje del indicador de pH al producirse
cido. La produccin de gas se detecta por la retencin de ste en una
campana de Durham. Al igual que en la prueba O.F. se puede realizar
sobre distintos HC. Su aplicacin fundamental es la investigacin de
la capacidad degradativa de un HC por el microorganismo.
Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, campana de Durham,
pipeta de 10 ml, algodn, mechero y estufa de cultivo.
Reactivo: Agua de peptona, solucin al 10% de HC, solucin al 1%
de rojo fenol y microorganismo.
Tcnica:
1. Mezclar 900 ml de agua de petona, 100 ml de solucin de HC al 10% y
1ml de la solucin de rojo de fenol al 1%.
2. Llenar 2 tubos de ensayo con la campana de Durham con 5ml del medio
preparado.
3. Esterilizar en autoclave.
4. A partir de un cultivo joven y puro de un microorganismo tomar una
muestra con el asa. Se inocula en uno de los tubo mientras que el otro acta
de control negativo.
5. Incubar a 37C durante 2448 horas.
Resultados e Interpretacin: Si se produce cido el medio virar de
color rojo a color amarillo. La produccin de gas se detecta en la
acumulacin de ste en la campana de Durham.
Observaciones al mtodo: La campana de Durham de estar llena de
caldo nutritivo en el momento de incubar ya que la sola presencia de
un burbuja de gas indica la formacin del mismo si queremos ver la
presencia de cido y gas a partir de lactosa por medio de
Enterobacterias. El medio descrito se sustituye por el caldo
McKonkey que lleva lactosa. En la preparacin del medio de cultivo
se puede sustituir el rojo de fenol por otros indicadores a la misma
concentracin, como: azul de bromotimol o prpura de bromocresol.
3. PRUEBA DE LA DGALACTOSIDASA
Determina la capacidad de fermentar la lactosa. Los microorganismos que
fermentan la lactosa de forma activa poseen dos enzimas:
Lactosa permeasa: localizada en la membrana celular y relacionada
con el transporte de la lactosa.
54

 Dgalactosidasa: enzima intracelular capaz de desdoblar la lactosa

en glucosa y galactosa.
Segn acten sobre la lactosa los microorganismos se clasifican en:
Fermentadores activos de lactosa: poseen ambos enzimas y la catabolizan
rpidamente (antes de 24 horas)
No fermentadores de lactosa: carecen de ambos enzimas y no penetran en la
clula ni es degradada la lactosa.
Fermentadores tardos de lactosa: carecen de lactosa permeasa pero pueden
fermentar la lactosa porque tienen Dgalactosidasa. Estos
microorganismos en presencia de altas concentraciones de lactosa son
capaces de permeabilizarse ligeramente a la lactosa y fermentarla entre 215
das.
La principal aplicacin de esta prueba es la diferenciacin de Enterobacterias:
da positiva esta prueba E.coli, Yersinia, Klebsiella y Shigella y la da negativa
Salmonella y Proteus.
Funadamento: Se puede detectar el enzima Dgalactosidasa
empleando ortonitrofenilDgalactopiransido (ONPG),
compuesto de estructra similar a la lactosa en el que la glucosa ha
sido sustituida por el ortonitrofenol, el cual liberado en medio
alcalino, por accin de la Dgalactosidasa, produce un color
amarillo. Esta reaccin se produce en un intervalo mximo de 24
horas.
( La lactosa se pone en contacto con el microorganismo; si el
microorganismo posee la Dgalactosidasa desdoblar la lactosa, si no la
posee no la desdoblar).
Material: Tubo de ensayo, asa de siembra y bao o estufa a 37C.
Reactivos: Solucin tamponada a pH 7 de ONPG y microorganismo.
Tcnica:
1. A partir de un cultivo puro preparar una suspensin densa de
microorganismo en 0,5ml de suero fisiolgico estril.
2. Aadir una gota de tolueno a la suspensin y mezclar. (As se consigue la
liberacin de la Dgalactosidasa de la bacteria).
3. Agregar 0,5ml de solucin tamponada de ONPG.
4. Incubar a 37C y leer antes de 24 horas.
Resultados e Interpretacin:
ONPG positivo: color amarillo. Algunos microorganismos
lo producen en 510 minutos, la mayora antes de 1 hora.
ONPG negativo: incoloro. No se debe interpretar como
negativo antes de 24 horas de incubacin.
Observaciones al mtodo: La solucin de ONPG se puede sustituir
por tabletas o discos comerciales.
Los microorganismos ensayados en esta prueba deben provenir de un medio
con lactosa (ej: kliger).

55

La solucin de ONPG recin preparada debe ser incolora y se puede emplear

un control positivo (E.coli) y otro negativo (Proteus).
La solucin debe conservarse en frascos de olor topacio a 4C y antes de
emplearse se debe atemperar a 37C para redisolver el fosfato que cristaliza
durante la conservacin.
Es importante utilizar un inculo concentrado para obtener una elevada
concentracin de enzima y as acelerar la velocidad de reaccin.
TEMA 11. TIPACIN BIOQUMICA II
1. Metabolismo proteico
Hidrlisis de la gelatina.
Produccin de sulfhdrico.
Prueba de las descarboxilasas.
2. Pruebas enzimticas.
Prueba de la oxidasa.
Prueba de la catalasa.
Prueba de la coagulasa.
Pruebas de la ureasa.
Prueba de reduccin de nitratos.
1. METABOLISMO PROTEICO
1. Hidrlisis de la gelatina
Las protenas exgenas son muy grandes para entrar en la clula bacteriana
por tanto para poder ser utilizadas deben hidrolizarse con enzimas
extracelulares de tipo proteoltico.
Estas enzimas son secretadas por ciertas bacterias y esta capacidad es
utilizada para su tipacin.
El catabolismo de las protenas por enzimas proteolticas es un proceso en
dos etapas:
1 protenas + H2O proteinasa polipptidos.
2 polipptidos H2O + proteinasa aminocidos.
Con esta tcnica se permite diferenciar distintas especies, como por ejemplo
Psudemonas aurogenosa(da +), Serratia (da +) y Listeria monocitogenes (da
).
Debemos tener en cuenta que la gelatina entre 2025C es slida y a
temperaturas superiores a 28C se licua.
Fundamento: Se siembra en picadura un tubo con gelatina nutritiva,
observndose la licuefaccin por la accin de las gelatinas.
Material: Hilo, tubos, algodn, mechero, pipeta 10ml, estufa de
56

cultivo.
Reactivos: Medio gelatina nutritivo y microorganismo.
Tcnica:
1. Se preparan dos tubos con gelatina nutritiva estril. Para su llenado se
licua el medio tras lo cual se solidifica con inmersin en hielo.
2. A partir de un cultivo joven y puro de microorganismo problema se toma
una muestra con el hilo.
3. Se siembra en picadura 1 tubo, el otro se punciona con el hilo estril
(actuar como control ).
4. Incubar a 2225C de 114 das.
Resultados e interpretacin:
Hidrlisis de gelatina +: se produce una zona de
licuefaccin con ensanchamiento en la lnea de puncin.
Hidrlisis de gelatina : no se produce ensanchamiento en
la lnea de puncin.
2. produccin de sulfhdrico (H2S)
Fundamento: Algunos microorganismos son capaces de liberar
azufre en forma de H2S (gas) como producto final de la accin
metablica sobre protenas con aminocidos azufrados.
Dan reaccin + : Proteus vulgaris y Proteus mirabilis.
Dan reaccin : Proteus morganii y Proteus rettegeri (permite distinguir
distintos especies de Proteus)
Tambin permite distinguir distintas Pseudomonas.
Tcnica:
1. A partir de un cultivo joven y puro del microorganismo problema se toma
una muestra con el hilo.
2. Se siembra en el medio AHP (Agar con Hierro y Peptona).
3. Incubar a 37C durante 1824 horas.
Resultados e interpretacin:
Sulfhdrico + : ennegrecimiento del medio.
Sulfhdrico : no ennegrecimiento del medio.
3.PRUEBAS DE LAS DESCARBOXIDASAS
Son un grupo de enzimas capaces de atacar el grupo carboxilo de los
aminocidos para formar aminas con desprendimiento de CO2.
Este proceso se realiza en anaerobiosis.
Cada descarboxilacion es especfica de un aminocido: lisina, arginina y
ornitina son los 3 aminocidos ms utilizados en la tipacion bioqumica:

57

LISINA CADAVERINA + CO2

(LDC= Lisina descarboxidasa)
ORNITINA PUTRESCINA + CO2
(ODC= Ornitina descarboxidasa)
ARGININA CITRULINA + NH3
PUTRESCINA + CO2
(ADC= Arginina descarboxidasa)
Son pruebas importantes para el estudio de las Enterobacterias. En los 3
procesos se produce una alcalinizacin del medio con desprendimiento de
CO2.
Fundamento: Si a un medio base (medio general) con un indicador de
pH se le aade los aminocidos correspondientes al enzima estudiado
y posteriormente se le aade el microorganismo, el viraje del
indicador del pH indicar la alcalinizacin del medio y por tanto la
presencia del enzima estudiado
DC
R CH COOH !!!!! R CH2 NH2
% CO2 bsico (ANAEROBIOSIS)
NH2
Amarillo Rojo prpura
Material: Tubo de ensayo y asa.
Reactivos: Caldo de Moeller para descarboxilasa, aminocidos
ensayados, parafina o vaselina estril y microorganismo.
Tcnica:
1. Se preparan 4 tubos:
T1 (C) 5 ml Caldo Moeller ! Control
T2 (L) 5 ml Caldo Moeller + L. Lisina (1% con respecto al
caldo)
T3 (O) 5 ml Caldo Moeller + L. Ornitina (1% con respecto al
caldo)
T4 (A) 5 ml Caldo Moeller + L. Arginina (1% con respecto
al caldo)
2. A partir de 1 cultivo joven y puro del microorganismo problema se
inoculan los 4 tubos.
3. Sellarlos con 23 ml de parafina estril (aprox. 1 cm de altura).
4. Incubar 35 C 1824 horas.

58

 Resultados e interpretacin: Si el aminocido es descarboxilado se

forman aminas que alcalinizan el medio dando un color rojo prpura
(la prueba es +). Si la prueba es el primer tubo es de color
amarillo.
NOTA: el pH del caldo de Moeller es igual a 6.
2 . PRUEBAS ENZIMATICAS
1. PRUEBA DE LA OXIDASA
La oxidasa es el enzima que cataliza la transferencia de electrones del
sustrato al oxigeno, en general se detecta en los microorganismo aerobios o
anaerobios facultativos. Los anaerobios estrictos carecen de ella.
Se denomina tambin citocromo oxidasa y sirve para diferenciar
Pseudomonaceae de los miembros oxidasa negativa de Enterobacteriaceae.
Ayuda a diferenciar entre los gneros Moraxella + y Neiseria + de
Acinetobacter .
Fundamento: consiste en la utilizacin de indicadores susceptibles de
ser oxidados en presencia de oxidasa.
Estos tienen la propiedad de ser incoloros en estado reducido y colorearse al
ser oxidados (cesin de electrones a la oxidasa).
Entre los indicadores ms utilizados se encuentran los derivados de la
parafenilendiamina que por accin de la oxidasa dan indofenol.
Material: Placa de petri, mechero, estufa de cultivo, papel, placa de
cultivo, asa, pipeta de 10 ml y pipeta Pasteur.
Reactivos: Agar sangre, microorganismo y reactivo oxidasa de
Kovacs.
Tcnica:
1. Cultivar el microorganismo problema en una placa de petri con agar
sangre.
2. Colocar un papel de filtro de 6 cm2 en la placa de petri vaca y estril.
3. Depositar 23 gotas del reactivo oxidasa de Kovacs en el centro del
papel.
4. Recoger con el asa una colonia de la placa con agar sangre y extenderla
en el papel.
5. Leer el resultado a los 510 sg.
Resultados e interpretacin:
Oxidasa + : aparicin de color negro prpura (violeta).
Oxidasa : no se produce color.
2. PRUEBA DE LA CATALASA

59

La catalasa es una enzima que acta sobre el peroxido de hidrogeno (H2O2)

segn la reaccin:
catalasa
2 H2O2 2H2O2 + O2 (gas)
BURBUJAS
El H2O2 se forma como producto terminal oxidativo de la degradacin
aerbica de los hidratos de carbono. Si se acumula es toxica para los
microorganismos y produce la muerte por lo que la catalasa es imprescindible
para su desarrollo.
Entre sus aplicaciones se encuentra la diferenciacin de:
Staphylococo, Bacillus, Listeria monocitogenes ! positivo
Estreptococo, Micrococo, Clostridium ! negativo
Fundamento: Se basa en poner en contacto el microorganismo
posible productor de catalasa con un sustrato natural (H2O2) y
observar la presencia del enzima por la aparicin de gas.
Material: Porta, pipeta pasteur, asa y mechero.
Reactivos: Agua oxigenada al 30% y microorganismo.
Tcnica:
1. Recoger con un asa una colonia de 1824 horas.
2. Colocar en un porta.
3. Agregar sobre el microorganismo una gota de agua oxigenada al 30%.
Resultados e interpretacin:
Catalasa + ! formacin inmediata de burbujas de O2.
Catalasa ! no aparecen burbujas.
Observaciones al mtodo: No utilizar m.c. que tengan hemates. Ej.:
agar sangre, agar chocolate, puesto que estos contienen catalasa por
lo que podran producir falsos negativos.
El agua oxigenada es inestable y se descompone con la luz, por ello hay que
mantenerlo en refrigerador y en frascos opacos.
3. PRUEBA DE LA COAGULASA
Enzima producida por ciertos microorganismos que es capaz de coagular en
plasma. Se utilizan para diferenciar Staphyloocos Aereus de otras especies.
Fundamento: Consiste en poner en contacto el microorganismo
problema con el plasma para observar la coagulacin de este por la
accin de la coagulasa.
Material: Tubo de hemlisis, pipeta de 0,5 ml., asa, mechero, bao,
estufa de cultivo.
Reactivos: Plasma humano o plasma de conejo y microorganismo.
Tcnica:
1. Colocar en un tubo de hemlisis estril 0,5 ml. de plasma
60

2. Agregar 0,5 ml de un cultivo de 1824 h en medio liquido del

microorganismo problema. En caso de partir de un medio slido, tomar con
el asa 2 o 3 colonias y emulsionarlas en el plasma.
3.Homogeneizar con rotacin suave en los tubos.
4. Incubar al bao M a 37. Observar cada 30 min. si hay coagulacin,
durante 4 h. Si a las 4 h no hay coagulo visible se deja en estufa de cultivo a
37 durante 24 h.
Resultados e interpretacin:
Coagulasa + ! formacin de coagulo.
Coagulasa ! no formacin de coagulo.
Observacin al mtodo: la prueba se puede realizar mezclando una
gota de plasma ms una gota de microorganismo en un porta. Si la
reaccin es + se detecta un precipitado en forma de aglutinado
blanco.
4. PRUEBA DE LA UREASA
La hidrlisis de la urea es catalizada por una enzima especfica denominada
ureasa dando carbonato amonico como producto final con la consiguiente
alcalinizacin del medio:
ureasa
NH2CONH2 + H2O CO2 +2NH3 ! CO3 (NH4)2
ROJO
Fundamento: Se basa en el viraje del indicador de ph debido a la
alcalinizacin del medio por el carbonato amonico producido por la
accin de la ureasa sobre la urea del cultivo.
Material: Tubos de cultivo, asa, pipeta de 10 ml, estufa de cultivo,
mechero, algodn.
Reactivos: Microorganismo agar uera de Christensen.
Tcnica:
1. A partir de un cultivo puro y joven se toma una muestra con el asa.
2. Inocular en la superficie del tubo con agar urea de Christensen.
3. Incubar a 37 hasta detectarse el viraje del indicador. Si no se produce el
viraje en 6 das la prueba ser negativa.
Resultados e interpretacin:
Urea + ! color rojo rosado.
Urea ! no se produce viraje del indicador.
5. PRUEBA DE REDUCCIN DE NITRATOS
Algunos microorganismos anaerobios o anaerobios facultativos utilizan
nitrato como ltimo aceptor de electrones en su metabolismo. Este proceso de
reduccin de nitratos es producido por una enzima, nitratasa o nitrato
61

reductasa, pudiendo originar diversos productos finales: nitritos, nitrogeno

molecular, oxido ntrico, oxido nitroso, amoniaco,etc. La formacin de uno u
otro depende de la especie bacteriana, lo ms comn son nitritos y nitrogeno
molecular.
La reduccin de nitratos consiste en la deteccin de los productos de
reduccin al ser excretados al medio por el microorganismo.
Se utilizan para la identificacin de especies de Haemophylus y Neisserias.
Fundamento: Puesto que los productos finales de la reduccin ms
comn son los nitratos y nitrgeno molecular, la prueba constar de
dos fases:
Deteccin de nitritos por una reactivo colorimtrico.
La no aparicin de color en la primera fase puede significar:
No se ha reducido el nitrato, se comprueba aadiendo un
agente reductor, con lo que se desarrolla la reaccin
colormetrica de la primera fase.
El nitrito se ha reducido a nitrgeno molecular, el cual se
detecta por la campana de Durham (si el medio es lquido) o
por la formacin de grietas (si el medio es slido).
El nitrito se ha reducido a otros productos nitrogenados. Ej:
oxido nitrico.
Materiales: Tubo, asa, pipeta 10ml., campana de Durham, algodn, mechero,
estufa de cultivo.
Reactivos: Caldo con nitrato, reactivo A (alfanaftilamina al 0.5%),
reactivo B (cido sulfanilico al 0.8%), Zn en polvo y
microorganismo.
Tcnica:
1. A partir de un cultivo joven y puro se toma un amuestra con el asa.
2. Inocular un tubo con caldo con nitrato, otro sin sembrar actuar como
control , en ambos se pone campana de Durham.
3. Incubar a 37C durante 1224 horas.
4. Agregar 1ml. de reactivo A y 1 ml. De reactivo B. Si se desarrollar color
antes de 30 segundos se da por finalizada la prueba, en caso contrario aadir
al tubo un pellizco de polvo de Zn.
Resultados e interpretacin:
Si la prueba es positiva:
Reduccin a nitritos, aparicin de color rojo o rosado al aadir el reactivo A
y B.
Reduccin a nitrgeno molecular, acumulacin de gas en la campana de
Durham.
Reduccin a otros productos nitrogenados, si al aadir el polvo de Zn no se
desarrolla color.
TEMA 12. TIPACIN BIOQUMICA III

62

El IMVIC son 4 pruebas de identificacin bioqumica que hacen referencia a:

I ! Indol: Se utiliza en el metabolismo proteico.
M ! Rojo de Metilo: Se utiliza en el metabolismo hidrocarbonado.
V ! VogesProskauer: Se utiliza en el metabolismo hidrocarbonado.
C ! Citrato: Se utiliza en el metabolismo hidrocarbonado.
Estas pruebas son muy tiles en el estudio de Enterobacterias ( E.Coli,
Salmonella, Shigella, Proteus, Yersinia).
1. PRUEBA DEL INDOL
Fundamento: Estudia la utilizacin de prtidos por parte de un
microorganismo, en concreto determina la capacidad de desdoblar
indol de la molcula de triptfano. El triptfano es un aminocido
que puede ser degradado por ciertas bacterias para originar distintos
metabolitos indlicos . El triptfano por accin de una enzima, la
triptofanasa, da lugar a determinados metabolitos indlicos como:
indol, escatol o indol actico).
El indol es detectado por un reactivo que produce coloracin al reaccionar
con l.
Las diversas enzimas intracelulares que intervienen en el proceso reciben el
nombre de triptofanasa.
Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml, algodn,
mechero y estufa de cultivo.
Reactivos: Agua de peptona, ractivo indol de Kovacs o reactivo indol
de Ehrlich, ter etlico (dietilter) y microorganismo.
Tcnica:
a. Mtodo de Kovacs
1. Sembrar el microorganismo en un tubo con agua de peptona.
2. Incubar a 37C 2448 horas.
3. Agregar 5 gotas del reactivo indol de Kovacs.
4. Agitar muy suavemente y dejar reposar unos minutos.
b. Mtodo de Ehrlich
1. Sembrar el microorganismo en un tubo con agua de peptona.
2. Incubar a 37C 2448 horas.
3. Aadir 1ml del ter etlico y esperar a que ste suba a la superficie.
4. Aadir 5 gotas del reactivo de Ehrlich resbalando por la pared del tubo.
Resultados e Interpretacin:
Indol +: Anillo rojo en superficie.
Indol : Color amarillento.
63

 Observaciones al mtodo: El reactivo indol de Kovacs debe ser

fresco (refrigerar a 4C varios das), si se deja a T ambiente variar el
color de amarillo a castao siendo menos sensible.
2. PRUEBA DEL ROJO DE METILO
Fundamento: Investiga la capacidad de un microorganismo de
producir cidos como metabolitos finales del proceso de
fermentacin de azcares. Emplea como indicador el rojo de metilo.
Los microorganismo rojo de metilo positivo producen cidos estables con
elevada concentracin de H+ cesando toda la actividad metablica.
Los microorganismos rojo de metilo negativo tambin producen cidos pero
en menor concentracin porque existe una recesin hacia la neutralidad
debido a la degradacin de cidos orgnicos y posible formacin de
compuestos de NH4.
Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml, algodn,
mechero y estufa de cultivo.
Reactivos: Medio de Clark y Lubs, solucin de rojo de metilo y
microorganismo.
Tcnica:
1. Sembrar el microorganismo problema en un tubo con medio de Clark y
Lubs.
2. Incubar a 37C 4872 horas.
3. Aadir 5 gotas de rojo de metilo.
4. La lectura se efecta inmediatamente despus de aadir el indicador.
Resultados e Interpretacin:
Rojo de metilo +: Color rojo intenso en superficie.
Rojo de metilo : Color amarillo en superficie.
Observaciones al mtodo: No interpretar nunca una prueba si el
medio no se ha incubado como mnimo 48 horas. Si la lectura se
efecta antes los resultados sern falsos positivos, dado que los rojo
de metilo no habrn tenido tiempo suficiente para metabolizar los
productos cidos iniciales acumulados por la fermentacin de la
glucosa.
El viraje de rojo de metilo a pH 4.5 da color rojo y a pH 6.3 da color
amarillo.
Si no hay rojo de metilo empleamos:
Rojo Fenol, a pH 6.8 da color amarillo y a pH 8.4 da color
rojo.
Azul de Bromotimol, a pH 6 da color amarillo y a pH 7.6 da
color azul.
Prpura de Bromocresol, a pH 5.2 da color amarillo y a pH
6.8 da color prpura.
3. PRUEBA DE VOGES PROSKAUER

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 Fundamento: Consiste en determinar la capacidad de un

microorganismo de producir un metabolito neutro llamado acetil
metil carbinol o acetona como producto intermediario derivado del
metabolismo de la glucosa. En presencia de oxgeno atmosfrico y
lcalis, la acetona es oxidada a diacetilo que es un sustrato que
genera un compuesto coloreado al aadirle los reactivos adecuados.
Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml, algodn,
mechero y estufa de cultivo.
Reactivos: Medio de Clark y Lubs, solucin naftol, solucin KOH
al 40% y microorganismo.
Tcnica:
1. Sembrar el microorganismo problema en un tubo con medio de Clark y
Lubs.
2. Incubar a 37C 4872 horas.
3. Agregar al cultivo en orden: 0.5 ml de naftol y 0.5 ml de KOH.
4. Agitar el tubo suavemente y mantenerlo inclinado casi horizontal con el
fin de favorecer la oxidacin de la acetona por el oxgeno atmosfrico.
5. Dejar reposar el tubo 1015 minutos antes de interpretar la prueba.
Resultados e Interpretacin:
Voges Proskauer +: color rojorosado en la superficie antes
de 1hora.
Voges Proskauer : color amarillo, a veces aparece color
cobrizo al mezclar los reactivos.
4. PRUEBA DEL CITRATO
Fundamento: Determina si un microorganismo es capaz de utilizar
citrato como nica fuente de carbono. El medio contiene citrato
(como fuente de carbono) y sales de amonio inorgnico (como fuente
de nitrgeno).
Los microorganismos citrato + crecen en este medio alcalinizndolo debido
a:
formacin de amoniaco por desdoblamiento de las sales de
amonio
produccin de carbonatos y bicarbonatos por degradacin de
citrato
Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml, algodn,
mechero y estufa de cultivo.
Reactivos: Medio de Kosser (medio lquido en tubo), medio citrato
de Simons (agar inclinado), medio citrato de Christensen (agar
inclinado) y microorganismo.
Tcnica:
1. Se preparan 2 tubos con el medio elegido. Se inocula uno de ellos,
mientras que el otro servir de control .
2. Incubar 4872 horas a 37C. Los tubos estarn destapados para que el
CO2 se evapore libremente. Leer despus de 48 horas de incubacin.
65

 Resultados e Interpretacin:
Medio Kosser:
Positivo: turbidez en el tubo
Negativo: no turbidez en el tubo
Medio Citrato de Simons
Positivo: color azul intenso en superficie
Negativo: no hay cambio de color
Medio Citrato Christensen
Positivo: color rojo o rosa con crecimiento de
microorg en superficie
Negativo: no cambio de color ni crecimiento de
microorganismo.
TEMA 13. COCOS POSITIVOS. ESTAFILOCOCOS Y
ESTREPTOCOCOS.
STAPHYLOCOCO
1. Introduccin (Morfologa y caractersticas).
2. Aislamiento
3. Pruebas de Identificacin
Esquema.
Prueba de la catalasa.
Prueba de la coagulasa.
Prueba de hemlisis.
Prueba de sensibilidad a la Novobiocina.
OF de Hung y Lesin.
Prueba de la ureasa.
Actividad de la fosfatasa.
Prueba de la desoxirribonucleasa.
Prueba de la pirrolidonilamidasa.
Sistemas comerciales (API).
4. Estructura antignica
Pptidoglucanos.
cidos teicoicos.
Protena A.
Factor de aglutinacin.
Polisacridos.
5. Enzimas y Toxinas:
Toxinas
Hemolisinas.
Leucocinas o leucotoxinas.
Enterotoxinas.
Toxina exfoliativa.
Toxina responsable del shock toxico.
Enzimas:
66

 Coagulasa.
Fibrinolisina.
Hialurodinasa.
lactamasa o penincilasa.
Lipasas, esterasas, proteinazas, catalasas y nucleasas.
6. PATOLOGA:
Infecciones superficiales.
Infecciones intestinales (enterotoxina).
Infecciones hematolgicas.
Infecciones respiratorias.
Localizaciones varias.
7. Infecciones Hospitalarias (Nosocomiales).
8. Diagnstico
Directo.
Indirecto.
9. Sensibilidad antibitica
1. INTRODUCCIN
Son cocos gram + que se pueden encontrar aislados, en parejas, tetradas,
cadenas cortas y racimos de uva.
La mayor parte de las especies son aerobias o anaerobias facultativas. Son
inmviles, no esporuladas y no capsulados.
Desde el punto de vista bioqumico son catalasa + , oxidasa y
fermentadores de azucares.
Crecen bien en los medios habituales, Ej: agar sangre o chocolate (para ver
hemlisis) o en caldo de trioglicolato o infusin cerebro corazn.
Son bastante resistentes a la accin del calor (50C 30 min.) y a la accin de
las sales biliares y NaCl, sin embargo se lisan por la accin de ciertos
antibiticos y se inhiben con productos qumicos como hexaclorofeno.
Se engloban junto con los gneros no patgenos: Micrococus, Planococus,
Estomacocus dentro de la familia Micrococaceae.
El gnero Estafilococo se compone actualmente de 27 especies. El hbitat
normal de stas es variado, principalmente a nivel de piel y mucosas, Ej:
Estafilococos capitis, E. Hominis, E. Haemoliticus (se encuentra en axilas y
pubis) E. Auricularis.
Las especies que se asocian a infecciones humanas o animales son
Estafilococos aureus, epidermis y saprofiticus.
2. AISLAMIENTO.
Los medios utilizados son:
67

 Champman.
Agar ChamManitol.
Baidparker.
stos son muy selectivos por tener altas concentraciones de NaCl.
Tambin se puede realizar su aislamiento en medios con sangre para el
estudio de su hemlisis. En el agar sangre aparecen colonias lisas de color
amarillento o blanco.
El material de estudio puede ser pus, sangre, esputo y LCR.
3. PRUEBAS DE IDENTIFICACION
1. Esquema ( fotocopias )
2. PRUEBA DE LA Catalasa (ya explicada)
Nos permite diferenciar:
Streptocoo ()
Staphylococo (+).
3. prueba de la Coagulasa (ya explicada)
Permite diferenciar:
Staphylococo Aureus (+)
Staphylococo Saprofitico y Staphylococo Epidermis ().
4. Prueba de hemlisis (ya explicada)
Distingue:
Staphylococo Aureus (+)
Staphylococo Saprofitico y Staphylococo Epidermis, no producen
hemlisis.
5. Sensibilidad a la Novobiocina
Sirve para diferenciar
Staphylococo Epidermis (sensibilidad +, resistencia = si muere)
Staphylococo Saprofitico (sensibilidad , resistencia +, = no muere).
Medio de cultivo utilizado es Mueller Hinton.
Reactivos: discos de Novobiocina.
Mtodo:
1. Inocular superficialmente un microorganismo en una placa de cultivo
2. Dejar reposar 15 min. A T ambiente
3. Depositar en el centro de la placa un disco de Novobiocina.
4. Incubar 24 h 35.
Lectura: aquellos Staphylococos que son inhibidos por discos de
68

Novobiocina son de la especie de Staphylococo Epidermis, los no

inhibidos son Staphylococos Saprofitico.
6. Prueba O F (ya explicada)
Staphylococo Aureus son fermentadores de azucares.
7. prueba Ureasa ( fotocopias )
Staphylococo aureus ! Variable: en funcin de la cepa puede dar (+)
o () a la ureasa.
Staphylococo epidermis ! (+)
Staphylococo saprofitico ! (+)
8. prueba Desoxirribonucleasa.
staphylococo aureus ! (+)
Staphylococo epidermis y Staphylococo saprofitico ! ()
9. prueba de la Actividad fosfatasa.
10. prueba de la Pirrolidonilamidasa.
11. Sistemas comerciales (API)
Son sistemas mltiples de pruebas de identificacin basadas en pruebas
bioqumicas, enzimticos y de sensibilidad (pruebas de antibiogramas).
Consisten en tiras con microcpulas que contienen los sustratos
deshidratados.
Se inocula la suspensin del microorganismo en cada una de ellas y tras la
incubacin se leen los resultados directamente o por revelado con reactivos.
Las reacciones + se traducen en un perfil numrico con el que se acude a un
manual que identifica la especie.
4. ESTRUCTURA ANTIGENICA
Los Staphylococos presentan en su estructura un importante contenido
antignico que est implicado en el mecanismo de patogeneicidad de estos
microorganismos. Las principales estructuras antignicas estn en la pared y
las ms importantes son:
Peptidoglucanos: Es un polmero polisacrido formado por un
compuesto N acetilmuranico y Nacetilglucosamida que
desempea un papel importante en la patologa de la infeccin ya
que:
Induce la produccin de IL (interleucinas).
Induce la produccin de Ac opsonizantes por los monolitos
humanos.
Atrae leucocitos.
Activa el C'.
Posee actividad endotoxica.
Ac. Teicoicos: (visto en pared bacteriana).
69

 Protena A: Es una protena de 42.000 Dalton que aparece en muchos

Staphylococos aureus. Se encuentra unida de forma covalente al
peptidoglucano. Estas protenas son capaces de anclarse en la regin
FC de las Ig G humanas y de activar el C'.
Factor de aglutinacin: Tambin conocido como coagulasa. Se
encuentra pegado a la superficie externa de Staphylococo aureus y
fija fibringeno mediante una reaccin no enzimtica.
Polisacridos: Algunos Staphylococos aureus poseen una cpsula
polisacrido situada en la parte externa de la pared celular capaz de
inhibir la fagocitosis por los leucocitos polimorfonucleares.
5. ENZIMAS Y TOXINAS
El efecto ms o menos patognico e Staphylococo aureus para hombre
depender de:
Ag presentes principalmente en la pared.
Toxinas.
Enzimas.
A. TOXINAS
Hemolisina: de composicin proteica y en general lisa con facilidad
los eritrocitos, adems de tener efectos txicos sobre clulas como
macrfagos y GB. Debido a esta propiedad estas exotoxinas son
conocidas como citotxicas. Son en general muy sensibles al calor y
se conocen un total de cuatro que son:
Alfa hemolisina o alfatoxina: ataca los hemates
produciendo una hemlisis total alrededor de las colonias en
medio agar sangre o agar chocolate. Por va subcutnea es
dermonecrtica, con ella se pueden hacer vacunas.
toxina o hemolisina: responsable de la hemlisis
parcial de hemates.
Gamma hemolisina: interviene en lesiones y heridas pero
tienen poca importancia patgena, no producen hemlisis.
Delta toxina: tiene una accin detergente sobre membranas
biolgicas y se le ha asociado un papel en la diarrea aguda en
algunas infecciones staphyloccicas.
Leucotoxinas o Leucocidinas: son responsables de matar leucocitos
polimorfo nucleares y macrfagos proporcionando una gran
resistencia a las bacterias.
Enterotoxina: son responsables de intoxicaciones alimentaras de las
que se conocen 6 serotipos distintos (A ! F). Se trata de toxinas
termoestables y resistentes a la accin de jugo gstrico, unindose
posteriormente a los receptores nerviosos del tubo digestivo y
actuando sobre el centro del vomito, lo que origina numerosos
vmitos, nauseas y diarreas. La intoxicacin alimentara no cursa con
fiebre.
Exfoliativa: engloba 2 toxinas responsables de los daos
dermatolgicos que tienen lugar en el sndrome de la piel escaldada
provocando una lesin caracterizada por una aparicin de ampollas.
Toxina responsable del Shock Txico: se ha observado que es ms
comn en mujeres que utilizan tampones.
B. ENZIMAS
70

 Coagulasa: coagula en el plasma sanguneo al activar el fibringeno,

as pues la coagulasa interviene en la formacin del coagulo.
Fibrinolisinas o Staphyloquinasas: destruyen los cogulos sanguneos
formando micrombolos que facilita la diseminacin del trombo, es
decir, ejercen un efecto opuesto a la coagulasa.
Hialurodinasa: disocia la sustancia fundamental del tejido conjuntivo
facilitando la penetracin del Staphylococo.
Lactomasa o penicilasa: rompe el anillo lactamico de las
penicilinas apareciendo resistencia a las penicilinas.
Lipasas, esterasas y proteinasas: que hidrolizan lpidos, esteres y
protenas.
Catalasa y Nucleasa: la nucleasa produce la ruptura de cidos
nucleicos. Catalasa (ya explicada).
6. PATOLOGIA
Estudio de las enfermedades producidas por Staphylococos.
a. Infecciones superficiales: Principalmente producen:
fornculos
ntrax.
problemas en la piel que producen muerte del tejido.
heridas
quemaduras.
infeccin en el acn.
b. Infecciones intestinales: relacionadas con:
vmitos
nauseas
diarrea
mal esta
a veces fiebre
La producen las enterotoxinas.
c. Infecciones hematolgicas: dando lugar a:
bacteriemia
se le ha atribuido a Staphylococo aureus el Sndrome de Shock
Txico caracterizado por fiebre, erupcin descamativa, hipotensin y
afectacin multisistmica (daos en distintos rganos).
d. Infecciones respiratorias:
sinusitis
laryngitis
faringitis
bronquitis
neumona.
e. Localizaciones varias: Puede dar:
artritis
endocarditis
pericarditis
71

 meningitis
neumona
osteomielitis
7. INFECCIONES HOSPITALARIAS O NOSOCOMIALES
Staphylococo aureus constituye el principal patgeno dentro de
Staphylococos. Se le denomina el microorganismo dorado ya que produce un
pigmento de color amarillo. Aproximadamente entre un 2 40 % de adultos
son portadores nasales y un 10 % de las mujeres lo llevan en la vagina.
Hay un grupo de poblacin que son ms propensos a ser colonizados por
Staphylococo aureus: personal sanitario, adictos por intravenosa, diabticos y
pacientes tratados por hemodilisis.
Es importante sealar el Staphylococo epidermis que es causante de
bacteriemia y endocarditis infecciosa, peritonitis, osteomielitis, infeccin del
tracto urinario.
El Staphylococo saprofitico es un agente ideolgico de infecciones
importantes del tracto urinario en mujeres jvenes sexualmente activas.
8. DIAGNOSTICO
Directo: vamos a hacer dos subgrupos:
Infecciones no intestinales: se recoge la muestra en
condiciones de asepsia de pus, exudados superficiales, LCR,
sangre.
Se realiza un Gram, se cultiva en agar sangre y se realizan pruebas
bioqumicas como catalasa y coagulasa.
Infecciones intestinales: la toma de muestra se hace de los
alimentos sospechosos y no de heces (ya que en condiciones
normales puede aparecer Staphylococo aureus en heces
(flora habitual)).
Se busca la enterotoxina y no se cultivan grmenes ya que no es el productor
de la enfermedad. Tambin se investigan los portadores.
Indirectos: no se suele hacer, si se quisiera buscar Ac frente a
antihemolisinas, antileucocinas o anticoagulantes (lo que se busca
son Ac frente Ag especficos)
9. SENSIBILIDAD ANTIBIOTICA
La sensibilidad de Staphylococo aureus a los antibiticos ha disminuido de
forma importante en los ltimos aos. Poco despus de la introduccin de la
penicilina G apareciendo cepas de Staphylococos que destruyeron el
antibitico por las penicilasas.
En pacientes con cepas de Staphylococo productoras de penicilasa la
penicilina no es eficaz.
La introduccin de las tetraciclinas y eritomicinas que se mostraron efectivas
en el tratamiento poco despus de ser comercializadas se aislaron numerosas
72

cepas hospitalarias, resistentes a estos antibiticos.

La introduccin de las penicilinas semisinteticas no ha resuelto el problema.
As la resistencia a ampicilina es del orden del 85% igual que la amoxicilina.
El desarrollo de las penicilinas semisintticas resistentes a la penicilasa como
la meticilina, oxacilina, doxacilina han resuelto en parte el problema.
Hoy en da los antibiticos mas utilizados son Vancomicina, Rifampicina y
Ciprofloxacina siendo muy til las Cefalosporinas y Aminoglucsidos.
STREPTOCOCO
1. Introduccin (Morfologa y Caractersticas)
2. Aislamiento
3. Pruebas de Identificacin
Prueba S.F. o glucosa azida
Prueba de la Bacitracina
Prueba de sensibilidad a Optoquicina
Solubilidad en bilis
Prueba Voges Proskauer
APIs
Otras pruebas:
Catalasa
Oxidasa
Fermentacin de HC, etc.
4. Estructura Antignica
Ag de pared especfico de grupo (LANCEFIED)
Protena M
Otros Ag
5. Clasificacin
hemolticos
Grupo D:
Enterococos
No Enterococos
hemolticos:
Streptococo viridans
Streptococo pneumoniae
6. Enzimas y Toxinas

73

 Enzimas:
Fibrinolisina o streptoquinasa
Hialuridinasa
Desoxirribonucleasa
Proteinazas
Toxinas:
Toxina eritrgenica
Hemolisina : O y F
7. Patologa
Streptococo pyogenes:
Tejidos (eripsipela)
Infecciones locales
Enfermedades poststreptoccicas no supurativas
Streptococo agalactiae
Streptococo grupo C
Streptococo viridans
Streptococo pneumoniae
Streptococo grupo D
8. Diagnstico
9. Sensibilidad a los antibiticos
1. INTRODUCCIN
Son cocos gram + agrupados en cadenas o parejas, inmviles, no
pigmentados, no esporulados, con o sin cpsula.
Pueden ser saprofitos o patgenos en funcin de su ubicacin.
En los cultivos viejos la bacteria puede perder su carcter gram + y aparecer
como gram .
Bioqumicamente son : catalasa , oxidadsa , fermentan lo HC, no producen
gas, indol ni SH2.
2. AISLAMIENTO
Son aerobios y anaerobios facultativos pero crecen mejor en medios que
presenten un 10% de CO2. Su temperatura es de 1545C siendo la ptima
37C.
Los medios de cultivo son:
M. Generales: agar sangre y agar chocolate.
M. Enriquecimiento: caldo tripticasa de soja e infusin cerebro corazn.
74

 M. Selectivos: contienen antibiticos (Ab) que inhiben el desarrollo de la

flora acompaante. Ej: agar columbiacolistinanalidixlico.
M. Selectivos de enriquecimiento: favorecen el desarrollo de Streptococos
inhibiendo el desarrollo del resto de microorganismos. Ej: glucosa azida
(inhibe bacilos gram ) y violeta de cristal (inhibe Staphylococos).
En agar sangre se comprueba la hemlisis (ver hemlisis).
3. PRUEBAS DE IDENTIFICACIN
1. Prueba de S.F. o de la glucosa azida
Fundamento: Consiste en comprobar el crecimiento de
microorganismo en presencia de azida sdica y en su caso la
capacidad de fermentar la glucosa.
Reactivos: El medio de cultivo (m.c.) es el caldo S.F. el cual es
selectivo para Streptococo fecalis y Enterococo.
Tcnica:
1. Se inocula el microorganismo cogiendo con un asa una colonia de
24horas y se pone en el caldo S.F.
2. Se incuba a 38C y se realiza la lectura a las 24 horas.
Resultados: Si hay turbidez en el medio la prueba el positiva con
crecimiento bacteriano. La modificacin del color indica
fermentacin de la glucosa.
2. PRUEBA DE LA BACITRACINA
Fundamento: Los Streptococos hemolticos del grupo A se
distinguen de los dems porque son sensibles a la bacitracina.
Reactivos: Se utiliza como m.c. agar sangra al 5% y como reactivos
discos de bacitracina.
Tcnica:
1. Inocular por diseminacin de superficie un placa de agar sangre con la
suspensin de microorganismo problema.
2. Dejar reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos.
3. Colocar con unas pinzas estriles un disco de bacitracina. Incubar a 37C
24 horas.
Resultados: Los Streptococos hemolticos del grupo A inhiben el
crecimiento alrededor del disco con un dimetro de 1018 mm. Los
dems Streptococos no inhiben si crecimiento.
3. PRUEBA DE LA SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA
Fundamento: El crecimiento de Streptococos pneumoniae se inhibe
por la optoquina, mientras que no afecta a otros Streptococos.
Reactivos: El m.c. utilizado es agar sangre de cordero o humano y
discos de optoquina.
Tcnica:
1. Empapar un hisopo con una suspensin de Streptococo, inocular la palca
75

y dejar reposar a temperatura ambiente.

2. Depositar presionando un disco de optoquina para favorecer el contacto
con el medio (algunos autores consideran importante aadir al disco una gota
de agua destilada para favorecer el crecimiento del halo de inhibicin).
3. Incubar a 35C durante 1824 horas.
Resultados: El crecimiento de Streptococo pneumoniae queda
inhibido con ms de 15 mm de halo de inhibicin alrededor del
disco.
NOTA: Si la zona de inhicin es menor de 15mm es indispensable confirmar
que es un neumococo con una prueba de solubilidad en bilis.
4. PRUEBA DE SOLUBILIDAD EN BILIS
Fundamento: Se basa en la capacidad de determinadas especies (spp)
bacterianas de lisarse en medios con sales biliares. Los ms
utilizados son desoxicolato sdico y taurocolato sdico al 2%.
Ambos provocan un descenso en la tensin superficial que unido a la
accin de enzimas autolticas destruyen las clulas. El efecto de esta
enzima autoltica se pone de manifiesto sobre colonias viejas de
Streptococo pneumoniae crecidas en medio slido.
Tcnica:
1. A 5ml de un cultivo de 24 horas se aade 0.5ml de solucin de sales
biliares al 10%.
2. Agitar la mezcla con cuidado e incubar a 35C.
Resultados: Si antes de 3 horas de incubacin se produce
aclaramiento del contenido del tubo se interpreta como soluble en
bilis, tendremos Streptococo pneumoniae. Si permanece turbia se
interpreta como insoluble en bilis por lo que tendremos otros
Streptococos.
NOTA: Es esencial el control del pH, ya que si las condiciones son cidas se
puede producir un precipitado del desoxicolato.
5. PRUEBA DEL VOGES PROSKAUER
6. OTRAS PRUEBAS
7. APIs
4. ESTRUCTURA ANTIGNICA
1. ANTGENO DE PARED ESPECFICA DE GRUPO
Se trata de un carbohidrato localizado en la pared de muchos Streptococos
que ha permitido una clasificacin serolgica en los llamados grupos de
LANCEFIED. Esta especificidad serolgica de HC especfico de grupo viene
determinada por un aminoazcar, as los Streptococos del:

76

 Grupo A: tienen como aminoazcar la ramosa Nacetilglucosamina

Grupo B: tienen como aminoazcar la ramosa glucosamina
Grupo C: tienen como aminoazcar la ramosa
Nacetilgalactosamina
Grupo D: tienen como aminoazcar la ramosa cido glicerolteicoico
Grupo F: tienen como aminoazcar el
glucopiranosilNacetilgalactosamina
2. PROTENA M
Se trata de un antgeno proteico que pertenece a la pared celular y constituye
el principal factor de virulencia de Streptococo pyogenes.
Aparece como proyecciones similares a pelos que emergen de la pared y su
presencia io ausencia condiciona la virulencia de las cepas.
En el caso de que no exista en el husped Ac contra esta protena, las cepas
de Streptococo pyogenes con proetena M son capaces de resistir la accin de
los fagocitos polimorfonucleares.
Esta protena tambin est implicada en la adherencia a clulas epiteliales.
Existen ms de 80 tipos distintos de estos Ag, por lo que una persona se
puede infectar repetidamente con cepas de Streptococo pyogenes con
distintas protena M en su pared.
3. OTROS ANTGENOS
Son las sustancias T y R localizadas en la pared celular y nucleoprotenas. En
el Streptococo pneumoniae su presencia en la cpsula polisacrida impide
que sean ingeridos por fagocitos. Adems es antignica de modo que los Ac
frente a la cpsula del pneumococo confieren inmunidad.
Existen ms de 80 tipos distintos de Ag capsulares.
5. CLASIFICACIN DE LOS STREPTOCOCOS
(Ver fotocopias tabla 6.3)
En general, los Streptococos se pueden clasificar en funcin de:
Comportamiento antignico frente a distintas pruebas biolgicas
Por el tipo de hemlisis
Por pruebas bioqumicas.
El resultado es la clasificacin en tres grupos importantes:
hemolticos: corresponden a distintos grupos denominados con
letras del alfabeto griego
Grupo D: pueden ser Enterococos y no Enterococos
Hemolticos: Se encuentran el Streptococo viridans y Streptococo
pneumoniae.
6. ENZIMAS Y TOXINAS

77

A. Toxinas: tienen capacidad antignica:

T. Eritrognica: provoca el exantema de la escarlatina y erisipela. Es
antignica y da lugar a la formacin de una antitoxina especfica.
Hemolisinas o estreptolisina: destruyen los hamates y podemos
distinguir dos tipos:
Estreptolisina O: protena que se inactiva en presencia de
oxigeno. Los anticuerpos dirigidos contra ella se denominan
ASO, ASLO o AEO (serian antiestreptolisina o ). Cuando un
individuo tiene un titulo superior a 250u, sugiere una
infeccin reciente por Estreptococos.
Estreptolisina S: resistente a la accin del oxigeno. No tiene
accin antignica.
B. Enzimas:
Fibrinolisina o estreptoquinasa: transforma el plasmingeno en
plasmina (sustancia responsable de la lisis de lisina) ha sido utilizada
por va intravenosa para el tratamiento de embolias y trombosis.
Hialudinasa: desdobla el cido hialurnico del tejido conjuntivo,
favoreciendo la diseminacin del coco. Tambin induce anticuerpos
especficos. Se ha facilitado para la absorcin de medicamentos.
7. PATOLOGA
1. streptococos pyogenes : del grupo A, produce enfermedad por:
Invasin de tejidos: es el agente etiolgico de la erisipela
(inflamacin aguda de la piel con afectacin de vasos linfticos
cutneos, cursa con fiebre elevada y escalofros), el rea afectada
suele ser la cara y en ocasiones tronco y extremidades.
Tambin puede producir sepsis; la infeccin puede afectar al recin nacido.
Tambin puede ocasionar celulitis, linfagitis y miositis (miomsculo).
Infecciones locales: la fundamental es faringitis, es ms benigna en
nios que en adultos. La toxina puede provocar inflamacin de
tejidos que bloquean el paso de aire y producir asfixia. Tambin
puede dar lugar a pioderma y procesos de endocarditis, otitis,
meningitis y neumona.
Enfermedades postestreptococicas no supurativas: fiebres reumticas
y glomerulonefritis. Se trata de procesos autoinmunes por reacciones
cruzadas por Acs. dirigidos contra Streptococos que se unen a las
clulas del rin y en ocasiones a las del miocardio formando
inmunocomplejos en estos rganos. Estos complejos atraen las
clulas defensivas del husped que son las que originan dao. Se
conocen como no supurativas porque en los rganos afectados no se
encuentran presentes los microorganismos ni existen reacciones
inflamatorias.
2. streptococos agalactiae:
Pertenecen al grupo B de Lancefied. Produce hemlisis y forma parte de
la flora normal del tracto genitourinario, encontrndose en la vagina de las
mujeres sanas, desde donde pasa al recin nacido en el momento del parto. Es
el agente etiolgico ms frecuente de sepsis y meningitis neonatal.
78

Tambin se ha visto implicado en osteomielitis, infeccin del tracto urinario,

heridas, endocarditis y neumonas. Se asocia a infecciones oportunistas.
3. streptococos del grupo C:
Aparecen como saprofitos en la rinofaringe, tracto gastrointestinal y vagina.
En raras ocasiones puede actuar como patgeno dando lugar a faringitis,
endocarditis, glomerulonefritis, bacteriemia, etc. Pueden provocar sepsis en
el parto.
4. streptococos viridans
Son saprofitos del tracto respiratorio y gastrointestinal (placa dental,
orofaringe, etc.), sin embargo se les ha considerado como patgenos
oportunistas, siendo la principal causa de endocarditis bacteriana aguda.
Las especies implicadas con mayor frecuencia son:
S.mutans (principal agente etiolgico de la caries dental)
S.sanguis I, II.
Las especies del grupo viridans tambin pueden producir abscesos, neumona
y otras infecciones supurativas.
5. streptococos neumoniae
Se agrupan en parejas (diplococos) rodeadas de una cpsula, siendo por tanto
inmviles, capsulada y no esporuladas. Para evidenciar la virulencia del
neumococo se buscan las cpsulas con tinta china o con Acsanticapsulares
especficos, provocando un precipitado de la cpsula que se denomina
hinchazn de la cpsula o reaccin de Quelluns.
Es el agente productor de neumona neumococica, proceso en el que hay una
reaccin de tipo inflamatorio en las reas pulmonares donde se desarrolla el
germen lo que conlleva una vasodilatacin de los capilares de la zona con
salida del plasma, hemates y leucocitos, lo que supone una solidificacin por
coagulacin. Clnicamente se presenta con disea, fiebre, dolor pleural, tos
productiva, edemas y mal estar general.
Su poder patognico se debe a la capacidad que tiene para multiplicarse en
los tejidos e inducir la reaccin produciendo fibrosis, siendo sta una
reaccin de tipo cocatricial producida por el tejido conjuntivo en la zona
afectada en respuesta a un agresin.
Tambin produce sinusitis, otitis, meningitis, etc.
La principal fuente de infeccin son las gotculas.
6. streptococos del grupo D
Pueden ser , o hemolticos, resisten bien los agentes externos, incluso
los antibiticos. Se dividen en :

79

 Enterococos, corresponden a S.fecalis y S.faecium entre otros. Son saprofitos

del intestino del hombre (apareen normalmente en heces, vagina y cavidad
oral). Son agentes etiolgicos de endocarditis, bacteriemia, infeccin del
tracto urinario, SNC, heridas, abscesos intrabdominales. En ocasiones el
origen de infecciones nosocomiales.
No enterococos, corresponden a S.bovilis, S.equinus que afectan a vacas y
caballos.
7. DIAGNSTICO
Directo: se emplea agar sangre para ver las hemlisis y
posteriormente se hacen las pruebas bioqumicas.
Indirecto: a travs de estudios serolgicos buscando el ASLO
(antiestreptolisina O).
8. SENSIBILIDAD ANTIBITICA
Streptococo pyogenes: sensible a penicilina y eritromicina.
Streptococo agalactiae : sensible a penicilina, ampicilina,
cefalosporina y vancomicina. Los aminoglucoxidos se usan
combinados con la penicilina para el tratamiento de la endocarditis
ya que actan de forma sinrgica.
Enterococos: son los Estreptococos ms resistentes, presentan
resistencia a cefalosporinas y penicilina, la mayor parte son tambin
resistentes a las tetraciclinas, aminoglucoxidos, clidamicina,
cloranfenicol y sulfamidas.
Son sensibles a : imipenem, ciprofloxacina y vancomicina.
Neumococos: el frmaco de eleccin es la penicilina, aunque existen
cepas resistentes a este antibitico.
La mayor parte de Streptococos son sensibles a la cefotaxima.
9. OTROS COCOS GRAM +
Pediococos y leuconstoc, son catalasa . Su principal caracterstica
es la resistencia a la vancomicina.
Lactococus, se usa en la industria lactea y es una especie no
patgena.
Gemella, produce procesos de endocarditis.
TEMA 14. COCOS GRAM NEGATIVOS. NEISSERIA Y
BRAHNAMELLA (MORAXELLA).
NEISSERIA
1. INTRODUCCIN.
2. CULTIVOS.
3. CLASIFICACIN DE LAS NEISSERIAS
Neisseria meningitidis.
Neisseria gonorreae.
Otras
80

4. NEISSERIA MENINGITIDIS
Poder antignico.
Patologa.
Epidemiologa.
Toma de muestras.
Pruebas qumicas y serolgicas.
Vacunas y tratamiento.
5. NEISSERIA GONORREAE:
Poder antignico.
Patologa.
Epidemiologa.
Toma de muestras.
Pruebas qumicas y serolgicas.
Vacunas y tratamiento.
6. MORAXELLA CATARRHALIS
1. INTRODUCCIN.
Son anaerobios estrictos, se presentan en parejas (diplococos), dentro de los
leucocitos polimorfonucleares con aspecto de rin o grano de caf.
Son inmviles y pueden presentar cpsula (+ virulentos).
Algunos pueden producir pigmentos de naturaleza carotenoide y color
amarillo.
Bioqumicamente son catalas (+), oxidasa (+) y fermentadores de hidratos de
carbono con produccin de cido sin gas.
Muy importante a tener en cuenta son los mtodos serolgicos
(inmunofluorescencia, aglutinacin, fijacin del complemento, precipitacin,
ELISA, etc.).
2. CULTIVOS.
Son aerobios y crecen a temperaturas aproximadas de 37C, cesando el
crecimiento por debajo de 30C. La adiccin al medio de un 510% de CO2
favorece el crecimiento.
Es importante tener en cuenta que se inhibe con la presencia de cidos grasos
y sales presentes en el agar.
Son microorganismos sensibles que no resisten a la desecacin ni a la
exposicin prolongada a la luz, en estas condiciones elaboran enzimas
autolticos que conducen a su destruccin.
Existen distintos medios:
Medios normales de aislamiento: agar sangre y chocolate.
Medios selectivos: ThayerMartin, que llevan antibiticos (para
81

destruir otras bacterias gram + y ) y antifngicos (para destruir

hongos). Tambin es selectivo el medio New York City (NYC).
Los antibiticos que pueden llevar son: colistina (inhibe bacilos gram ),
vancomicina (inhibe los bacilos gram +), etc.
Hay una modificacin de ThayerMartin que lleva trimetroprim que inhibe
Proteus.
Estas bacterias se localizan en las mucosas de los tractos respiratorio,
digestivo y genitourinario del hombre y los animales.
nicamente las especies de Neisseria meningitidis y Neisseria gonorreae se
consideran patgenos para el hombre.
3. CLASIFICACIN DE NEISSERIAS
Se pueden distinguir tres grupos:
Neisseria meningitidis: Producen meningitis y son muy difciles de cultivar
siendo necesario un medio especfico y una temperatura de 3537C. Se
denomina meningococo.
Neisseria gonorreae: Se le denomina gonococo. Son muy exigentes,
requieren cultivos muy especficos y una temperatura de 3537C. En
muchos casos su crecimiento se ve favorecido por un aporte de CO2 del
510%.
Neisserias saprofitas: Se encuentran en el aparato genital y en la rinofaringe.
Son microorganismos poco exigentes. Crecen a temperatura de 2235C.
Resisten bien a los agentes externos. Crecen en medios generales. (Ej: N.
subflava, N. lacatamica y N.sicca).
4. NEISSERIA MENINGITIDIS
A. PODER ANTIGNICO.
El polisacrido capsular producido por N.meningitidis ha conducido a la
clasificacin de este microorganismo en 13 serogrupos.
El diagnstico de N.meningitidis puede realizarse por la deteccin de los Ag
capsulares en muestras orgnicas (LCR, suero, etc)mediante tcnicas de
aglutinacin e inmunofluorescencia que transmiten un diagnostico precoz.
El meningococo posee adems otros determinantes antignicos como las
protenas de membrana, los pilis y liposacridos (responsables de la mayor
parte del proceso de infeccin meningoccica).
B. Patologa
El hombre es el nico husped natural para el meningococo.Se encuentra
frecuentemente en la nasofaringe de individuos sanos portadores, los
microorganismos se adhieren a las clulas faringeas con los pilis.
82

El cuadro clnico comienza con rinofaringitis leve que afecta sobre todo a los
nios, ya que en adultos aparece Ac protectores frente al meningococo. De
esta faringitis leve se evoluciona a una forma ms severa pudiendo
complicarse a bronquitis. Si el meningococo pasa a sangre puede dar lugar a
una sepsis meningococica que va acompaada de petequias, cefaleas, fiebres
altas y fracaso suprarrenal dando lugar a un sndrome denominado
WaterhoseFriederichen.
Puede pasar a LCR alcanzando las meninges y provocando meningitis con un
cuadro caracterizado por la rigidez de nuca, cefaleas y vmitos en
escopetazo, fiebre, etc.
El microorganismo meningococo puede producir artritis y con menor
frecuencia neumona, faringitis y uretritis.
C. Epidemiologa
La meningitis por Neisseria meningitidis suele ocurrir en brotes epidmicos.
Los nios entre 6 12 meses y adolescentes son los que se afectan con
mayor frecuencia.
Un individuo puede tener colonizada su nasofaringe por el meningococo y no
desarrollar sntomas ni infecciones (portador).
En periodos interepidemicos de 5 a 30 % de la poblacin puede ser portadora.
En pocas de epidemia los portadores aumentan hasta un 70 80 %.
El contagio ser por va area, siendo muy importante los factores de
agregacin.
D. Toma de muestra
Podemos hacer:
Hemocultivo se existe sepsis.
Frotis faringeo para buscar portadores.
LCR mediante puncin lumbar: Se toman 2 tubos y se transportan
inmediatamente al laboratorio. Se centrifugan los tubos:
Con el sedimento se realiza un gram o azul de metileno, puede haber cocos
que si son gram () ser meningitis meningococica y si son gram (+) habr
que cultivar y hacer la prueba de la catalasa que si es (+) ser Staphylococo y
si es () meningitis pneumococica (producida por Estreptococo pneumoniae).
Si aparecen bacilos en el gram, si son BAAR indica meningitis tuberculosis
(producida por Micobacterium tuberculosis).
Con el sobrenadante se estudiara albminas, Ig as como polisacridos
capsulares o reacciones inmunolgicas. Tambin se pueden observar
polimorfonucleares, glucosa disminuida y cloruros normales o disminuidos.
En personas afectadas por Neisserias meningitis el LCR es turbio, purulento
83

y con abundantes meningococos.

E. Pruebas bioqumicas y serolgicas
Bioqumicas ! catalasa (+), oxidasa (+) y fermentacin de hidratos de
carbono.
Serologicas ! inmunofluorescenia directa y ELISA.
F. Vacunas y tratamientos
Existen vacunas en caso de epidemias produciendo una inmunidad de grupo.
Las hay frente a los serogrupos A y C pero no contra B que es la que con ms
frecuencia origina epidemias.
El antibitico de eleccin es la penicilina, en individuos alrgicos a estos se
administra cefalosporina.
El estado de portador no se puede erradicar con penicilina porque ha creado
resistencia, es necesario administrar rifanticina.
Un nuevo antibitico lactamico distinto de la penicilina y cefalosporina es
el moxalactan, ha dado buenos resultados y se difunde rpidamente por el
LCR.
5. NEISERIA GONORREAE
A. Poder antignico
Es una bacteria con una composicin antignica compleja y capaz de
modificar para eludir la R.I. del husped.
Entre los componentes antignicos se encuentran los pilis que permiten
adherirse a las clulas epiteliales del husped y evitar la fagocitosis. Posee
tambin varias protenas con carcter antigenico:
Protena I o POR: forman parte de la superficie dando lugar a la
formacin de poros a travs de los cuales entra en la clula ciertos
nutrientes.
Protena II u OPA: mantiene la adherencia y la ayuda a anclarse en
las clulas del husped.
Protena III o PMR: se asocian a las protenas POR para formar los
poros de la superficie celular. Posee liposacridos con carcter
antignico y endotxico.
B. Patologa
Neisseria gonorreae tiene apetencia por las mucosas principalmente por las
urogenitales.
Los cuadros clnicos son:
Gonorrea o Blenorragia Tpica: es una E.T.S. que afecta a la mucosa
urogenital produciendo sudoracin purulenta, disuria (dolor en la
miccin), puede conllevar a esterilizacin o estrechecimiento en vas
84

urinarias. Es un microorganismo muy infectivo (con un solo contacto

es posible padecer la enfermedad).
En el varn es mas frecuente la uretritis gonoccica con la denominada dota
matinal o militar.
El periodo de incubacin es de 2 15 das, la infeccin puede ascender y dar
cistitis, prostatitis y orquitis, en la mujer puede cursar sintomticamente,
puede producir uretritis, cistitis, cervititis, endometritis u osferitis, peritonitis,
salpintigitis. Puede llegar a producir esterilidad.
Enfermedad Gonoccica Atpica: localizada en faringe y regin
anorectal.
Septicemias: mas frecuentes en mujeres sintomticas caracterizada
por lesin en la piel, Ej.: papulas, pstulas y en extremidades (artritis,
principalmente en tobillos y muecas).
Oftalmia neonatal: Puede aparecer en raras. Es una conjuntivitis
purulenta del recin nacido que al pasar por el conducto del parto se
infecta, puede producir ceguera. La prevencin hasta hace unos aos
era con nitrato de plata, hoy se utilizan colirios de penicilina.
C. Epidemiologa
Es una enfermedad de distribucin mundial transmitida casi exclusivamente
por transmisin sexual y principalmente por mujeres portadoras crnicas
asintomticas.
D. Toma de muestra
En el hombre la muestra ser tomada del pus de la gota matinal. En la mujer
de la mucosa vaginal y del crvix y en los homosexuales en el recto y uretra.
En septicemias la toma de muestra puede ser sangre y muestra farngea.
E. Pruebas bioqumicas y serolgicas
Se realizan las mismas pruebas que Neisseria meningitidis.
Bioqumicas ! catalasa (+), oxidasa (+) y fermentacin de hidratos de
carbono.
Serologicas ! inmunofluorescenia directa y ELISA.
F. Vacunas y tratamientos
Con penicilina o ampilicilina se crea resistencia, se suele sustituir por
cefalosporinas. Es conveniente administrar simultneamente cefalosporinas
con tetraciclina o eritomicina, debido a la concomitancia de infecciones
(varias infecciones a la vez por parte de ms de un microorganismo) por
Clamidias.
En el neonato la gonococia ocular se trata con nitrato de plata con instilacin
en el saco conjuntival. Tambin se puede tratar con antibiticos.
6. MORAXELLA CATARRHALIS.

85

Se habla de Moraxella o Brahnamella. Es catalasa y oxidasa (+), no

fermentan ningn azcar, dan positiva la DNAasa, reduce nitratos, lo que la
diferencia de las Neisserias.
Produce la enzima butiratoesterasa y lactamasa.
Crecen bien en medios habituales como agar sangre y chocolate.
Su temperatura ptima es de 35C y la incubacin puede hacerse en una
atmsfera con CO2.
Las colonias son blanco grisceas en agar sangre o chocolate.
Estas bacterias pueden formar parte de la flora normal del tracto respiratorio
superior de individuos sanos. No obstante se ha aislado como patgeno en
ciertas infecciones, como: septicemia, meningitis, endocarditis,y en
infecciones otorrinolaringologicas.
Brahnamella catharralis es responsable del 1015% de los casos de otitis
media y es un agente etiolgico importante de sinusitis. Los individuos ms
susceptibles a padecer esta infeccin son los ancianos y los nios.
Las cepas productoras de lactamasa se consideran resistentes clnicamente
a la penicilina, ampicilina y amoxicilina (los antibiticos que tienen un
anillo lactamico esta enzima lo rompe y se hacen resistentes).
Son sensibles a amoxicilinaclavulanico y ampicilinasulfbactem.
TEMA 15. COCOBACILOS GRAM NEGATIVO.
Haemophylus
1. INTRODUCCIN.
2. CLASIFICACIN E IDENTIFICACIN.
Dependencia del factor X y V.
Pruebas bioqumicas.
Pruebas serolgicas.
3. HAEMOPHYLUS INFLUENZAE.
Patologa
Tratamiento.
4. HAEMOPHYLUS DUCREY.
Patologa
Tratamiento.
5. AISLAMIENTO Y DIAGNSTICO BACTERIOLGICO.
Toma de muestras.
Tinciones.
Medios de cultivo.
86

 Pruebas bioqumicas y serolgicas.

1. INTRODUCCIN.
El gnero Haemophylus est formado por bacterias gram (), aerobios y
anaerobios facultativos, inmviles y no esporulados.
Algunas especies poseen cpsula. Son parsitos obligados del tracto
respiratorio superior del hombre y animales, llegando a constituir hasta un
10% de la flora acompaante de la orofaringe en los individuos sanos.
Las especies del gnero Haemophylus fermentan los hidratos de carbono con
produccin de cido, producen nitratos y la mayor parte son catalasa y
oxidasa (+) .
El crecimiento viene condicionado por la presencia en el medio de factor V y
X. El factor V a diferencia del X no se encuentra libre en sangre, para
liberarlo deben romperse las clulas sanguneas por calentamiento.
Los medios de cultivo son agar sangre y chocolate que deben incubarse a
3537C y en atmsfera de un 510% de CO2. Tambin se puede emplear
como medio especfico Levinthlal.
2. CLASIFICACIN E IDENTIFICACIN.
Existen distintas especies del gnero Haemophylus, las principales desde el
punto de vista patgeno para el hombre son H. influenzae y H. ducrey.
Para la identificacin de las especies nos basamos en:
Dependencia del factor V y/o X.
Pruebas bioqumicas. (ver cuadro).
Pruebas serologicas, aglutinacin el ltex y prueba de hinchamiento
capsular.
3. HAEMOPHYLUS INFLUENZAE
a. Patologa
Es una bacteria que parasita exclusivamente al hombre localizndose en el
tracto respiratorio superior. Accede a dicho tracto por inhalacin colonizando
las mucosas. Hasta un 80% de personas pueden ser portadoras sin que
desarrollen sntomas clnicos.
Es capsulado (virulento) y se ha observado que la cpsula est formada por
polisacridos distintos que segn sus caractersticas se diferencian en 6
serogrupos (a!f). En Espaa es ms frecuente la de tipo b.
Este microorganismo es junto al neumococo (Streptococo neumoniae) uno de
los agentes etiolgicos ms frecuentes de otitis media bacteriana y sinusitis
aguda.
Puede invadir el torrente circulatorio y alcanzar las meninges (produciendo
meningitis) o localizarse en articulaciones (produciendo artritis). Es la causa
87

ms frecuente de meningitis en nios menores de 5 aos. En recin nacidos

es muy rara la infeccin ya que poseen Ac maternos frente a este
microorganismo.
Tambin afecta a ancianos y adultos debilitados por procesos gripales.
Ocasionalmente puede producir epiglotitis con obstruccin respiratoria aguda
y un desenlace fatal si no se recurre a traqueotoma.
Este microorganismo est implicado como agente etiolgico de neumona
principalmente en nios y adultos con infeccin pulmonar o historia de
alcoholismo.
b. Tratamiento
En ausencia de tratamiento puede ser mortal en el caso de meningitis y
epiglotitis.
El tratamiento de eleccin son ampicilina y cloranfenicol, aunque
ltimamente existen cepas resistentes y se recomiendan las cefalosporinas.
A partir de los 18 meses de vida los nios se pueden vacunar frente a
Haemophylus b.
4. HAEMOPHYLUS DUCREY
a. Patologa
Es el agente etiolgico del chancro blando o chancroide (ETS), caracterizado
por la presencia de lceras en los genitales y zona perianal.
El periodo de incubacin es de 7 das, siendo una enfermedad muy similar a
la sfilis.
b. Tratamiento
A base de eritromicina.
5. AISLAMIENTO Y DIGNOSTICO BACTERIANO
a. Toma de muestras
Se realiza en condiciones totalmente aspticas a travs de exudados farngeos
esputo o lquido purulento en caso de infeccin de las vas respiratorias.
En caso de meningitis se saca LCR por puncin lumbar.
b. Tinciones
Generalmente tincin de gram o tincin negativa para el estudio de la
cpsula.
c. Medios de Cultivo
88

Principalmente agar sangre o agar chocolate a los que aadimos discos con
FV y FX y algn Ab para hacer ms selectivo el medio.
d. Pruebas bioqumicas y serolgicas
Pruebas bioqumicas: (ver cuadro)
Pruebas serolgicas: principalmente pruebas de precipitacin y
aglutinacin.
Brucella
1. INTRODUCCIN.
2. AISLAMIENTO Y DIAGNSTICO BACTERIOLGICO.
Estudio microbiolgico:
Toma de muestras.
Pruebas bioqumicas.
Estudio serolgico:
Test de seroaglutinacin o de Wright.
Test de Coombs antibrucella.
Test de rosa de bengala.
Prueba de la introdermorreaccin con la melitina.
Otras.
Medios de cultivo.
Tcnicas de cultivo:
Tcnica de castaeda.
Tcnica de isolator.
3. EPIDEMIOLOGA.
4. PATOLOGA.
5. TRATAMIENTO.
1. Introduccin y Clasificacin
Son cocobacilos gram negativos, inmviles, no esporulados y aerobios
estrictos. Algunos pueden presentar cpsula.
Se observan agrupados en parejas o en cadenas cortas.
Su temeperatura ptima de crecimiento es 37C y algunas especies necesitan
presencia de CO2.
Son catalasa +, la mayora dan la prueba de la oxidasa +, reducen NO3 y
fermentan escasos HC.
Las especies del gnero Brucella son parsitos obligados de animales y
algunos producen infeccin en el hombre.
Son bacterias de largo crecimiento y se destruyen con facilidad son
temperaturas de pasteurizacin (aprox. 70C).

89

2. AISLAMIENTO Y DIAGNSTICO BACTERIOLGICO

No es fcil evidenciar la clnica de la brucelosis, debido a que en muchas
ocasiones y sobre todo al principio de la enfermedad, sta es difusa (no hay
sntomas claros de brucelosis) siendo necesario los estudios microbiolgicos
y serolgicos.
a. Estudio microbiolgico
Toma de muestra: La recogida de muestra de los productos en los
que se sospecha presencia de Brucella son principalmente sangre y
en ocasiones lquidos orgnicos como pus y LCR.
De la muestra de sangre se realiza hemocultivo, de vital importancia ya que
la brucelemia (paso de Brucella a sangre) est presente en las primeras fases
de la brucelosis, sobre todo en manifestaciones febriles, teniendo en cuenta
que un resultado negativo de hemocultivo no excluye en principio la
enfermedad.
Pruebas bioqumicas: Se realizar al menos la prueba de la catalasa y
oxidasa (+), as como la prueba del indol, gelatina, voges proskauer y
rojo de metilo (). Tambin se realizan otras pruebas ( ver cuadro
12.3)
b. Estudio serolgico
Las pruebas ms importantes son:
Test de seroaglutinacin o test de Wright: Consiste en diluciones
sucesivas del suero problema en el medio que contiene antgeno
purificado especfico (el Ag de la Brucella), por lo que los ttulos
positivos (aglutinacin) indicarn un contacto previo con la Brucella
si este es superior a 1/80. Los ttulos de brucelosis en fase aguda
estn alrededor de 1/320.
En casos de cronicidad los ttulos suelen ser muy bajos e incluso negativos,
ya que en este tipo de pacientes aparecen muchos anticuerpos no aglutinantes
(incompletos) que debern ser detectados por otras pruebas (test de Coombs).
Test de Coombs antibrucella: Sirve para detectar anticuerpos
incompletos. Es una tcnica muy especfica y til en Brucellas
crnicas. Su negatividad no excluye brucelosis.
Test de rosa de Bengala: Es una prueba muy rpida de aglutinacin y
su negatividad no excluye brucelosis.
Prueba de la introdermorreaccin con la metilina: Consiste en una
inyeccin intradrmica en el brazo o antebrazo de un filtrado
autolisado con bacterias muertas, pero con efecto antignico y otra
inyeccin de carcter intradrmico (testigo calentado a 100C) en el
otro brazo, que acta de control (). Transcurridas 8 horas se
efectuar la lectura, si la reaccin es (+) aparecer una zona roja y
edematosa de 3 o ms cm. de dimetro en el lugar donde se aplic el
autolisado.
Otras: fijacin del complemento, radioinmunoanlisis, etc.
c. Medios de cultivo

90

La Brucella es un microorganismo intracelular, por lo que necesitan

compuestos nutricionales. Existen muchos medios para el aislamiento de
Brucella:
Medios lquidos: como el caldo tripticasa, el caldo de hgado, caldo de
brucella, etc.
Medios slidos: como el agar tripticasa, agar de brucella, etc.
Medios selectivos: que contienen antibiticos, como el medio de Kurdas y
Mose, Forwel o JonesMorgan.
Las colonias de Brucella son pequeas y transparentes y son de dos tipos
morfolgicos:
Colonias lisas o S: son transparentes y corresponden a cepas
virulentas cuya virulencia corresponde a dos factores virulentos:
factor A y M, que son de naturaleza polisacrida.
Colonias rugosas o R: no son patgenas.
En la tincin de gram para Brucella se recomienda prolongar el tiempo de
contacto con la safranina y resuspender las colonias sospechosas con una
gota de solucin salina fenicada al 1%, depositndolo en el portaobjetos con
el fin de evitar el peligro de contaminacin para el personal del laboratorio.
d. Tcnicas de cultivo
Las muestras de sangre se cultivan siguiendo dos tcnicas:
Tcnica de Castaeda: Utiliza un medio bifsico (medios que tienen
una fase lquida y otra slida en un mismo frasco). El medio lquido
permite el enriquecimiento previo de la Brucella y el medio slido
sirve para la siembra. Esta tcnica tiene las siguientes ventajas:
manipilacin sencilla.
frascos de cierre hermtico que dificultan la contaminacin.
los frascos pueden llevar CO2.
conservacin indefinida y transporte cmodo.
El volumen de sangre que se siembra no debe superar el 20% del volumen
del medio. El frasco se incuba a 3537C en posicin vertical y a las 48 horas
se inclina para que la fase lquida impregne la fase slida y se incuba
nuevamente en posicin vertical.
El hemocultivo se observa cada 23 das hasta un total de 30 das.
Tcnica de Isolator: En un sistema de lisiscentrifugacin realizado
en el mismo tubo. La sangre inoculada se lisa por la accin de
detergentes y se somete a concentracin por centrifugacin. El
sedimento se siembra en medio slido. Esta tcnica tiene como
ventajas:
lisa las clulas sanguneas, por lo que permite una mayor
recuperacin de patgenos intracelulares.
se acorta el tiempo de aislamiento.
mayor nmero de resultados positivos.
91

Inconvenientes: la tasa de contaminacin es mayor al no tratarse de

incubacin en recipientes cerrados, sino en placas de agar.
3. EPIDEMIOLOGA.
La brucelosis es una tpica zoonosis en la que el hombre es un husped
accidental. Las posibles fuentes de contaminacin son:
Contagio directo por:
contacto con animales infectados
inhalacin de aerosoles
inoculacin
contacto con mucosas principalmente en personas que trabajen con animales
Contagio indirecto por ingestin de leche y derivados no
pasteurizados.
Es importante destacar el peligro que corre el personal del laboratorio que se
puede infectar por:
contacto con piel y mucosas.
inhalacin de aerosoles.
inoculacin accidental con agujas contaminadas.
Por ello siempre que se sospeche Brucella hay que extremar las condiciones
de trabajo.
Recomendaciones:
Trabajar en campana de seguridad.
Usar ropa protectora.
No oler ninguna placa de cultivo.
Tirar directamente las jeringas del hemocultivo al contenedor.
4. PATOLOGA
El periodo de incubacin de la Brucella es de 16 semanas; en este tiempo la
Brucella se multiplica en el interior de las clulas en el retculo endoplsmico
y de aqu pasa a sangre y tejidos donde se producen granulomas y abcesos.
Es caracterstico el polimorfismo de la enfermedad y la recada en los
primeros meses.
Es frecuente que la infeccin se localice en distintos rganos ( hgado,
msculo, huesos, etc).
La Brucella melitensis causa un acusado neurotropismo (tendencia por SNC).
En humanos las complicaciones ms frecuentes es la osteomielitis.
La Brucella es el agente productor de brucelosis, fiebre de malta o fiebres
ondulantes. Comienza con fiebre, debilidad, dolores seos y sudoracin. La
fiebre aumenta por la tarde y disminuye por la noche apareciendo una
92

sudoracin con olor a paja mojada..

La enfermedad se disemina por va linftica alcanzando los ganglios
linfticos, bazo, hgado y vrtebras donde se forman ndulos granulomatosos.
5. TRATAMIENTO
Dado que se trata de un microorganismo intracelular y las reacidas son
frecuentes, los tratamientos han de ser prolongados principalmente por
tetraciclinasestreptomicinas. Tambin es til la rifancitina y la doxiciclina.
En ninos menores de 14 aos se usa trimetroprimsulfametoxazol.
Bordetella.
1. INTRODUCCIN.
2. CLASIFICACIN Y ESPECIES MS IMPORTANTES.
3. AISLAMIENTO Y DIAGNSTICO BACTERIOLGICO.
Toma de muestras.
Medios de cultivo.
Tinciones.
Pruebas bioqumicas y serolgicas.
4. EPIDEMIOLOGA.
5. PATOLOGA.
6. TRATAMIENTO Y PROFILAXIS.
1. INTRODUCCIN
Es un bacilo gram , capsulado, mvil o inmvil, no formador de esporas y
se considera parsito estricto.
Crece en clulas epiteliales ciliadas del tracto respiratorio.
Son muy sensibles al calor y desecacin y sobrevive muy poco fuera del
hombre.
2. CLASIFICACIN Y ESPECIES MS IMPORTANTES
La especie ms importante es Bordetella pertusis. (ver cuadro 12.4)
3. AISLAMIENTO Y DIAGNSTICO BACTERIOLGICO
a. Toma de muestras
Se toma en condiciones aspticas con una torunda impregnada en alginato
clcico a travs de esputos o incluso con un escobilln de la zona
nasofarngea. Tambin se puede tomar la muestra por expectoracin en placa
en un medio especfico para Bordetella pertusis denominado Bordetgengou.
93

Las placas se incuban a 35C en atmsfera hmeda y CO2 opcional.

Las colonias a los 57 das de incubacin son pequeas y de color blanco
perlado (similar a gotas de Hg)
b. Tinciones
Se realiza tincin de gram, de esporas y de cpsula.
c. Pruebas bioqumicas y serolgicas
Pruebas bioqumicas: (ver cuadro 12.4)
Pruebas serolgicas: Consiste en la bsqueda de Ac de Bordetella
aglutinante mediante reacciones de precipitado del suero del paciente
con suero especfico. Suelen emplear tcnicas de ELISA, fijacin de
C e inmunofluorescencia. Son muy tiles en la fase terminal de la
fase catarla y paroxstica cuando el microorganismo disminuye su
nmero (en fase precoz es ms til el cultivo).
4. EPIDEMIOLOGA
La enfermedad que produce se denomina tos ferina. El periodo de
incubacin es de 710 das. La fuente de infeccin es el enfermo,
generalmente nios menores de 5 aos.
Se transmite por va respiratoria al toser, estornudar, hablar, etc.
5. PATOLOGA
Bordetella pertusi posee una enterotoxina dermonecrtica y estimulante de la
tos. Produce la tos ferina y la enfermedad comienza con un periodo catarral
que dura 12 semanas. Es un catarro dbil con fiebre y tos muy contagiosa.
Se contina con periodo paroxstico o espasmdico en el cual tras una
inspiracin profunda se producen de 1012 golpes de tos breves pero
peridicos. Bruscamente se produce una inspiracin profunda de carcter
sibilante (silbido) que se asemeja al canto de un gallo (se denomina tos
coqueluchoide).
El trax queda fijo en inspiracin y el nio aparece ciantico volviendo a
producir otra serie de golpes de tos.
El mecanismo de la tos es mixto:
Central: por accin de la enterotoxina en el centro de la tos
Perifrico: por el esputo viscoso y filante y la compresin de los
bronquios.
Se observa un aumento de linfocitos y tambin puede estar acompaada de
vmitos.
Puede haber fiebre por asfixia.
En lactantes es frecuetne la apnea (ausencia de respiracin), cianosis y
94

estertor (inspiracin forzada).

Los nios mayores o adultos inmunizados presentan solamente sntomas
catarrales o ligera bronquitis.
6. TRATAMIENTO Y PROFILAXIS
Tratamiento: a base de eritromicina. La administracin de antibitico
en la fase previa catarral erradica los microorganismos. Cuando la
enfermedad ha entrado en su fase paroxstica la administracin de
antibitico no bloquea el progreso de la misma. Se recomienda
entonces la oxigenoterapia para evitar lesiones cerebrales.
Profilaxis: durante el primer ao de vida se debe vacunar a los nios
frente a Bordetella Pertussi, se administra la vacuna DTT (Difteria,
Ttanos y Tos ferina).
Francisella tularensis.
1. INTRODUCCIN.
2. AISLAMIENTO Y CARACTERSTICAS BIOQUMICAS.
Toma de muestras.
Estudios microbiolgicos y serolgicos.
3. PATOLOGA.
4. TRATAMIENTO.
1. Introduccin
Es un cocobacilo gram aerobio y anaerobio facultativo y no esporulado,
responsable de una enfermedad zoontica llamada Tularemia. Forma parte
de la flora orofaringea normal de un gran nmero de animales salvajes, desde
donde pasa al hombre por varias vas:
Contacto con cadveres de animales infectados.
Inhalacin de aerosoles.
Ingestin de carne contaminada.
Picaduras de moscas, mosquitos y garrapatas que actan de vectores
de las bacterias.
2. Aislamiento y caractersticas bioqumicas
Toma de muestras ! la toma de sangre se realiza de las heridas,
esputo y sangre.
Estudios serologicos y microbiolgicos ! en cuanto a los estudios
microbiolgicos: tincin de gram y tincin de fluorescencia.
Medio de cultivo ! Thaller Martin y agar sangre enriquecidos con
glucosa y cistena a 37.
Pruebas bioqumicas: catalasa y produccin de sulfhdrico.
Pruebas serologicas: pruebas de aglutinacin y test de
introdermoreaccin en la piel.
3. Patologa
95

Tiene un periodo de incubacin de 34 das. El paciente tiene fiebre,

escalofros, dolor de cabeza y linfoadenopatias. La forma mas comn de la
enfermedad es la Tularemia ulceroglandular, en la que se observa una lesin
localizada en la puerta de entrada de las bacterias menos habituales, son las
Tularemias OculoGlandular y Orofarngea asociado a infecciones en ojos y
faringe.
Si la infeccin se produce por inhalacin de aerosoles se vern afectados los
pulmones dando lugar a Tularemia Pulmonar.
La ingestin de carne contaminada dar lugar a Tularemia Tifoidal (infeccin
sistmica con alta tasa de mortalidad).
4. Tratamiento
Principalmente estreptomicina.
Pasteurella.
1. INTRODUCCIN.
2. ESPECIES MS IMPORTANTES.
3. PATOLOGA.
4. AISLAMIENTO Y CARACTERSTICAS BIOQUMICAS.
1. Introduccin
Son cocobacilos gram no esporulados, anaerobios facultativos capsulados y
patgenos para algunos hombres y algunos animales.
2. Especies mas importantes
Existen seis especies siendo la ms importante Pasteurella Multocida.
3. Patologa
Tiene una estructura capsular de accin enterotoxica dando un efecto
virulento principalmente en infecciones locales afectando a la piel.
El foco de infeccin es a travs de las heridas, de aqu pasa s sangre
ocasionando bacteriemia, a veces en enfermedades crnicas de origen
pulmonar se han observado sobre infecciones originando cuadros de
neumona.
Tambin se ha visto implicada en Meningitis.
4. Aislamiento y caractersticas bioqumicas
Toma de muestra: de heridas
Tinciones: gram principalmente
96

 Medio de cultivo: agar sangre dando colonias pequeas y traslucidos

que desprenden olor a champin.
Pruebas bioqumicas: oxidasa, catalasa, Indol, nitratos +. Las
colonias pueden ser rugosas, lisas o mucosas.
Pruebas serologicas: aglutinacin.
Tratamiento: penicilina.
KINGELLA
Cocobacilo gram forma parte de la flora normal de la orofaringe del
hombre y rara vez produce dao en este.
Se ha aislado en bacteriemia y en lesiones de piel y huesos.
El tratamiento: penicilina, gentamicina y cloranfenicol.
ACTINOBACILLUS
Son cocobacilos gram inmviles y oxidasa +, forman parte de la flora oral
habitual de un gran numero de animales domsticos.
El hombre se infecta por inoculacin de esta bacteria generalmente por
mordeduras.
Una de las especies ms importantes es Actinobacillus
Actinomycetemcomitans, se le ha asociado a peridontitis destructiva de los
adolescentes. Se considera patgeno oportunista y es sensible a la penicilina.
TEMA 16. BACILOS Y COCOBACILOS GRAM POSITIVOS
1. BACILLUS
Introduccin
Especies ms importantes
Bacillus anthracis
Epidemiologa
Patologa
Carbunco cutneo
Carbunco pulmonar
Carbunco intestinal
Aislamiento y caractersticas bioqumicas
Toma de muestra
Tincin
Medios de Cultivo
Pruebas biqumicas
Pruebas serolgicas
Tratamiento
Bacillus cereus (intoxicacin alimentaria)
2. LISTERIA
Listeria monocitogenes
Introduccin
Patologa
97

 Aislamiento y caractersticas bioqumicas

Toma de muestra
Tinciones
Medios de cultivo
Pruebas bioqumicas
Pruebas serolgicas
Tratamiento
3. Corynebacterium
Introduccin
Especies ms importantes !
Corynebacterium difteriae
Patologa y profilaxis
Aislamiento y caractersticas bioqumicas
Tratamiento
4. OTROS
Erysipelothrix rhusiopathiae
Kurthia
Lactobacillus
1. BACILLUS
A. INTRODUCCIN
La familia Bacillaceae comprende los gneros
Bacillus y Clostridium que son bacilos gram (+)
formadores de esporas (Clostridium lo estudiaremos
en un captulo aparte de anaerobios).
El gnero Bacillus comprende numerosas especies
ampliamente distribuidas en la naturaleza pero slo
unas pocas tienen importancia patolgica, entre ellas
destaca B.cereus y B. Anthracis.
Se caracteriza por crecer la mayor parte a 37C en
medios generales. Son aerobios y facultativos
(pueden crecer en condiciones anaerobias) y
esporulados.
B. ESPECIES MS IMPORTANTES
Bacillus anthracis
Epidemiologa: Es una zoonosis
principalmente siendo una enfermedad
profesional de pastores, veterinarios,
mataderos, etc. El germen entra a travs de
rasguos, heridas, inhalaciones, etc.
Patologa: Es el microorganismo causante
del Carbunco o ntrax; hoy en da no se
suele dar en pases industrializados pero s
98

en subdesarrollados.
En un bacilo gram (+) que se agrupa en parejas o
cadenas, con bordes cortantes, con aspecto de tiza o
caa de bamb, capsulado, esporulado e inmvil.
Se puede transmitir por inhalacin por lo que se
deber realizar un aislamiento.
Forma una exotoxina de carcter proteico con una
accin muy txica y junto a presencia de cpsula
proporciona a estas bacterias propiedades
antifagocitarias.
El carbunco humano tiene lugar tras el primer
contacto con animales infectados que tras un periodo
de incubacin de 23 das da lugar a:
Carbunco cutneo o Pstula maligna: El poder
patgeno se debe a la exotoxina que da lugar a una
ppula que se transforma en vescula luego en
pstula y posteriormente en lcera necrtica cubierta
por una costra negra; a partir de sta se propaga por
va linftica provocando linfagitis y septicemia. Los
ms habitual son formas benignas que se curan con
facilidad tras un tratamiento adecuado.
Carbunco pulmonar: Cursa con edema pulmonar u
pulmona debido a la inhalacin de polvo
contaminado con esporas. Tambin se le denomina
como la enfermedad de los cardadores de lana.
Carbunco intestinal: Conlleva dolor abdominal,
vmitos, diarreas, etc debido a la ingestin de
alimentos contaminados. Es la ms rara y grave.
Aislamiento y caractersticas bioqumicas:
Toma de muestra: se coge a partir de
la pstula o tambin del esputo. Se
realizara un hemocultivo
(septicemia).
Tinciones: gram, esporas y cpsula.
Medio de cultivo: medios generales
como sangre, dando lugar a colonias
grandes en forma de melenas de
len o cabezas de medusas.
Pruebas bioqumicas: (esquema,
fotocopias: tabla 10.1 y 10.2)
Pruebas serologicas:
inmunofluorescencia
Prueba de la Antracina: Es una
prueba de introdermoreaacion, la
cual ser positiva si da una reaccin
99

eritomatosa de al menos 8 ml de
dimetro a las 24 h.
Tratamiento: Penicilina y alternativamente
tetraciclina, cefalosporina, cloranfenicol y
aminoglucosidos.
BACILLUS CEREUS
Agente capaz de producir toxiinfecciones mediante
el aislamiento en alimentos y heces del paciente.
Es resistente a los betalactamicos, y sensibles a los
aminoglucosidos, vancomicina y clindamicina.
2. LISTERIA
Existen 8 especies siendo la ms importante Listeria
monocitogenes.
A. PATOLOGA
Se han descrito una gran variedad de
manifestaciones clnicas, entre ellas, las importantes
son: sepsis o meningitis neonatal, sepsis o meningitis
en pacientes inmunodeprimidos (particularmente en
transplantados de rin) y sepsis puerperal (despus
del parto) o enfermedad gripal en la gestacin.
Se ha observado que se desarrolla en personas que
tienen bajas las defensas pudiendo producir la
muerte.
Listeria monocitogenes es capaz de crecer en el
interior de las clulas del sistema retculo endotelial
lo que le permite vivir en macrfagos confirindole
una extraordinaria resistencia frente a agentes
antibacterianos(Ab). Adems este mecanismo le va a
facilitar su diseminacin.
Posee una estructura antignica especfica
correspondiente a Ag flagelares (Ag H) y Ag
somticos (Ag O).
B. AISLAMIENTO Y CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
Toma de muestra: Sangre, LCR, esputo, etc.
Tincin: Gram
Medios de Cultivo: Medios enriquecidos con
ambiente microaerfilo (10% de CO2) a
3742C. Se puede sembrar en agar sangre
para conocer su grado de hemlisis. Listeria
nopresenta ni cpsula ni esporas, pero s
100

flagelos en disposicin peritrtica. Su

distribucin es ubicua (en todas las partes,
agua, tierra, ser humano, aire, etc) y se ha
aislado asociado a numerosas enfermedades
de peces, mamferos, plantas, etc.
Pruebas bioqumicas: Catalasa, ONPG,
esculina (+); oxidasa, coagulasa,
decarboxilasa, ureasa (); movilidad (+) a
22C. (ver cuadro 10.2)
Pruebas serolgicas: Principalmente pruebas
de aglutinacin en el que se evaluar el
ttulo de las aglutininas H de las muestras
del suero del paciente. Tambin se realizan
tcnicas de fijacin de C' cuyo ttulo se da
como positivo a partir de 1/10. Tambin
tcnicas de inmunoprecipitacin,
inmunofluorescencia, test de alergia por
introdermoreaccin, etc.
C. TRATAMIENTO
Principalmente ampicilina y eritromicina.
3. CORYNEBACTERIUM
A. INTRODUCCIN Y ESPECIES MS
IMPORTANTES
Comprende un grupo de cocobacilos gram positivos,
no esporulados, generalmente inmviles y pueden
contener grnulos metacromticos que se tien
irregularmente. Son pleomrficos y lo ms
caracterstico es que adoptan una posicin en
empalizada o letras chinas.
Estn muy distribuidos en la naturaleza y forman
parte de la flora normal del hombre; algunos autores
los denominan difteromorfos.
Son erobios facultativos o microarfilos. La especie
ms represantiva es Corynebacterium difteriae que
junto con Corynebacterium ulcerans y
Corynebacterium pseudotuberculosis son los nicos
que pueden producir toxinas o ser patgenos. Las
dems especies son patgenos oportunistas.
B. PATOLOGA Y PROFILAXIS
El Corynebacterium difteriae produce la difteria que
es una enfermedad infecciosa aguda causada por
cepas que producen toxinas.
La va de entrada es la mucosa respiratoria donde se
101

multiplica y produce la exotoxina que causa necrosis

en los tejidos vecinos provocando una respuesta
inflamatoria con formacin de la pseudomembrana
diftrica.
La toxina puede afectar al corazn y nervios
perifricos. El periodo de incubacin es de 35 das
y teniendo en cuenta el punto de entrada se produce
faringitis o amigdalitis con fiebre y/o disea
(dificultad respiratoria). Esto se debe a la
pseudomembrana que provoca una obstruccin de
las vas areas producindose un edema (hinchazn
por retencin de lquidos) localizado en el cuello,
denominado cuello de toro, provocando un
taponamiento de las vas respiratorias que puede
llevar a la asfixia lo que se denomina crup difttico.
Si hay una difusin de la toxina se pueden producir
alteraciones hepticas, renales,etc.
Su efecto patgeno se encuentra directamente
relacionado con dos tipos de Ag:
Ag O: es un polisacrido termoresistente y
responsable de reacciones cruzadas con
micobacterias.
Ag K: es un Ag proteico sensible a la T y
responsable de da la reaccin de
hipersensibilidad.
Otros factores de patogenocidad:
Hialurodinasa: causa la infeccin sobre las
clulas.
Exotoxina
Glicoliticos: muy toxico y causa muerte
celular.
En cuanto a la profilaxis: la vacuna DTT.
C. Aislamiento y caractersticas bioqumicas
Toma de muestra: vas respiratorias.
Tincones: gram, corpsculos metacromicos.
Medio de cultivo: Loeffler que da colonias
grisceas pequeas con bordes irregulares.
Pruebas bioqumicas: (ver tabla 10.3)
Prueba de la Toxigenicidad: Puede realizarse
in vivo o in vitro.
In vivo ! se inyecta
introperitonalmente una suspensin
con el corinebacterium difteriae a un
animal de experimentacin (cobaya)
y a un control al que se le inyecta
102

adems antitoxina difterica, al cabo

de 2 das si la cepa de la suspensin
fuese toxgena se producir una
infeccin.
In vitro ! se lleva a abo por medio de
un test de inmunodifusion radial en
placa, la prueba ser positiva si
aparece el precipitado en el pocillo.
D. Tratamiento
Penicilina y eritromicina.
4. OTROS
Erysipelothrix Rhusiopathiae
Solo tiene una especie, es muy frecuente como
patgeno en los cerdos y otros animales. Produce la
Erisipela Porcina. En el hombre puede producir una
lesin inflamatoria en la piel que generalmente
afecta a manos y a dedos que se denomina
Erysipeloide.
Las lesiones presentan un borde eritomatoso elevado
y puede complicarse con septicemia y endocarditis.
La adquisicin en el hombre esta vinculado con
contactos de tejidos animales: matarife, carniceros,
pescadores, pescaderos, etc. aunque tambin puede
estar presente en suelos contaminados.
Diagnostico: muestra de biopsias de las lesiones de
la piel y hemocultivos. Crece bien en los medios
habituales (agar sangre, chocolate). La caracterstica
mas llamativa es la produccin de sulfhdrico en el
medio TSI (triple sugar iron) hay que relacionarlo
con el Kligler.
Caractersticas bioqumicas: catalasa negativa,
oxidasa negativa, movilidad negativa, sulfhdrico
positiva, nitratos negativa, glucosa positiva, lactosa
positiva, xilosa negativa, manitol negativa, sacarosa
negativa.
Kurthia
Lactobacillus
Son bacilos gram positivos, pleomrficos,
normalmente inmviles, microaerfilos y catalasa
negativos. Reciben este nombre porque el producto
principal de su metabolismo es el cido lctico.
Destacan algunas especies como el bacilo de
103

Doderleim presente en la flora vaginal.

Otras especies forman parte de la flora intestinal
como el Lactobacillus acidofilus. Especialmente se
ha aislado en casos de neumona, sepsis o infeccin
del tracto urinario. Son sensibles a muchos
betalactmicos.
TEMA. 17 MICOBACTERIUM Y
ACTINOMICETOS
1. Introduccin.
2. Micobacterium
Introduccin.
Procesamiento de las muestras para el estudio de
micobacterias.
Aislamiento y caractersticas bioqumicas.
Realizacin de baciloscopias.
Patogenicidad.
Especies ms importantes: M.tuberculosis y M.
Leprae.
3. Micobacterim tuberculosis
3.1 Patologa.
3.2 Epidemiologa.
3.3 Prueba de la tuberculina.
3.4 Tratamiento.
4. Micobacterium leprae
4.1 Patologa: lepra tuberculoide y lepra
lepromatosa.
4.2 Epidemiologia.
4.3 Prueba de la lepromina o mitsuda.
4.4 Toma de muestras.
4.5 Tratamiento.
5. Actinomicetos
5.1 Introduccin.
5.2 Especies ms importantes.
104

5.3 Aislamiento y caractersticas bioqumicas.

5.4 Patologa.
5.5 Tratamiento.
1. Introduccin
De acuerdo con la ltima edicin del manual de
Bergey`s Micobacterium se encuentra en la seccin
17 dentro de los Actinomicetes, el orden
actinomiceto presenta ocho familias de las que dos
resultan importantes para el ser humano por su
inters clnico:
Micobacteriaceae.
Nocardiaceae.
2. Micobacterium
2.1. Introduccin
Los Micobacterium son bacilos rectos o ligeramente
curvados de 0.2 0.6 m, son aerobios, inmviles y
no esporulados. Siendo tpico de estos
microorganismos la pared, ya que se encuentra
altamente enriquecida por cidos miclicos y en
general componentes creos, de tal forma que para
su coloracin se necesitan colorantes de alta
capacidad tintorial as como calor para facilitar su
penetracin ya que este tipo de microorganismos se
tien muy difcilmente. Una vez teidos son
altamente resistentes a la decoloracin cida, por
todo ello son llamados BAAR, que es la principal
diferencia con los dems microorganismos.
La presencia de estos componentes en la pared
ofrecen a las micobacterias resistencia a la
desecacin y accin de decolorante, desinfectante y
de agentes antibacterianos.
As el colorante verde malaquita y el antibitico
penicilina se emplean en medios habituales de
aislamiento de Micobacterium.
Son grmenes muy distribuidos en la naturaleza,
pueden ser saprfitos del agua, suelo, etc. , incluso
afectar al hombre causando infecciones graves y en
ocasiones crnicas como la lepra.
De las 57 especies que se conocen al menos 25 se
han aislado en infecciones del hombre.

105

Se tien difcilmente con gram pero cuando lo hacen

responden a gram + , aunque su principal
caracterstica es su capacidad BAAR.
Las micobacterias se pueden clasificar :
Atendiendo a su velocidad de crecimiento.
Morfologa colonial.
Y a la propiedad de desarrollar pigmentos de
naturaleza carotenoide en determinadas
condiciones.
Segn estos puntos Runyon dio los siguientes
grupos:
Micobacterium fotocromgenos: desarrollan
color cuando se exponen a la luz (pigmento
amarilloanaranjado)
Micobacterium escotocromgenos:
desarrollan color en la oscuridad.
Micobacterium no cromgenos: de
crecimiento lento ( ms de 1 semana).
Micobacterium crecedores rpidos: (menos
de 7 das)
Posteriormente se vio que esta clasificacin no era
perfecta puesto que existen micobacterias que
pueden clasificarse en ms de un grupo.
Otros autores realizan otra clasificacin dividiendo a
las micobacterias en dos grupos importantes:
Bacilos de Micobacterium cultivables en
medios artificiales, con crecimiento ms
bien lento y que en funcin de su cuadro
clnico que producen en el hombre se
dividen en:
Especies que producen tuberculosis en el
hombre y animales (Micobacterium
tubercolisis y Micobacterium bovis)
Especies de micobacterias atpicas de
crecimiento muy lento y que pueden
presentar un poder patgeno en el hombre
distinto de tuberculosis y lepra.
Bacilos de Micobacterium no cultivables en medios
artificiales y patgenos para el hombre
(Micobacterium leprae)
2.2. PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS
PARA EL ESTUDIO DE MICOBACTERIAS
La mayor parte de las muestras que se procesan para
micobacterias proceden del tracto respiratorio
(esputos, lquido pleural, broncoaspirado), orina,
106

LCR, biopsias, etc.

El procesamiento de muestras requiere un paso
inicial que es una concentracin por medio de
centrifugacin (muestras ms peligrosas). La mayor
parte de las muestras contaminadas por flora
acompaante que crece ms rpido que las
micobacterias puede inhibir el desarrollo de stas,
por ello las muestras deben ser sometidas a un
proceso de homogenizacindescontaminacin
previo a las siembra.
La homogenizacin de esputo es necesario para
fluidificar la muestra, normalmente muy mucosa,
para ello se utilizan mucolticos como
Nacetilcistena o el detergente laurilsulfatosdico.
La descontaminacin se lleva a cabo con cido o
lcalis, a pesar de que las micobacterias son muy
resistentes a estos agentes nicamente sobreviven de
un 1020% de la poblacin inicial. El tiempo de
contacto de NaOH no debe ser mayor a 15 minutos.
Los lquidos estriles cono el LCR no necesitan del
proceso de homogenizacin ni descontaminacin y
pueden sembrarse directamente.
El proceso de descontaminacin se lleva a cabo en
cabinas de seguridad.
2.3. AISLAMIENTO Y CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
Toma de Muestras: esputo, LCR,
broncoaspirado, etc.
Tinciones: principalmente ZiehlNielsen y
AuraminaRodamina.
Medios de Cultivo: LowensteinJensen que
contiene huevo y verde malaquita y
antibiticos, como penicilina, para inhibir el
crecimiento de otros microorganismos.
Miedlebrook
Hoy se utilizan medios de cultivo radiomtricos
siendo el ms utilizado BactecTB. Este sistema
contiene un medio liquido de soporte de crecimiento
de micobacterias suplementado con Ab y que
contiene un sustrato marcado con C14. Las
micobacterias al crecer metabolizan el sustrato y
liberan CO2 marcado radiactivamente que puede ser
detectado. La principal ventaja de este mtodo es el
acortamiento del tiempo de crecimiento de
107

micobacterias.
Cuando se emplean medios de cultivo
convencionales deben cultivarse a 35C en oscuridad
y en atmsfera hmeda con 510% de CO2 durante
1 semana, y despus se pone a atmsfera normal.
Pruebas bioqumicas: Test de la niacina,
reduccin de nitratos, catalasa, hidrlisis de
Tween 80, test de la arilsulfatasa, reduccin
de telurito e inhibicin del crecimiento por la
hidracida del cido tiofeno2carboxlico.
Hoy en da se han desarrollado nuevas
tcnicas que permiten la determinacin de
especies en pocas horas. Las ms empleadas
son: tcnicas de sondas genticas de ADN y
anlisis cromatogrfico de lpidos de la
pared celular.
Pruebas serolgicas: principalmente
precipitacin, aglutinacin, fijacin de
complemento.
2.4. REALIZACIN DE BACILOSCOPIAS
Una vez recogida la muestra debe hacerse un
proceso de concentracindescontaminacin y una
tincin BAAR.
El hallazgo de BAAR en un frotis no es diagnstico
definitivo de infeccin bacteriana pero permite:
Un diagnstico de presuncin de tuberculosis.
Seguimiento del paciente que est siendo tratado con
antituberculosos, pudindose saber cuando la
baciloscopia de vuelve negativa.
Para la realizacin de la extensin se recoge una
mnima parte de esputo y cubrir las 2/3 partes de la
superficie, no deben ser gruesas pues dificultaran la
visin.
Cuando se observa una tincin de ZiehlNielsen se
recomienda hacer una valoracin cuantitativa de los
bacilos presentes en la muestra. El objetivo se debe
colocar en un extremo de la preparacin y se recorre
toda una lnea. Si se observan aproximadamente 100
campos se cuentan los BAAR encontrados. Si se han
visto 50 BAAR no es necesario continuar y se
informa como 50/1L (50 bacilos en una lnea del
porta). Si el nmero est entre 10 y 50 se informa
con X/1L, siendo X el nmero de bacilos contados.
Si el nmero de bacilos es menor de 10, habr que
observar 2 lneas ms, un total de 300 campos,
108

expresndose el nmero de BAAR como X/3L. Otra

de comunicar la informacin es por
semicuantificacin (sistema de cruces).
El examen microscpico es subjetivo y el
microscopista que carece de experiencia puede
cometer errores, por lo que es necesario conocer las
causas ms frecuentes de los falsos positivos y
negativos:
Falsos positivos:
Restos de comida en esputo
Fibras de algodn
Ralladura del porta
Precipitados de colorante
Falsos negativos:
Mala realizacin del frotis ( grueso,
no haber cogido la zona ms
purulenta, mala fijacin, mala
decoloracin)
Fallo del microscopista
2.5. PATOGENICIDAD
Los bacilos tuberculosos virulentos contienen una
serie de componentes celulares que daan los tejidos
del husped. Son ceras, fosfolpidos, protenas,
polisacridos y cidos gluclicos.
Tambin producen factores txicos como ceraD y
factor cord (denominado factor cuerda o cuerda
serpentina, ya que al microscopio tiene disposicin
de largas cuerdas) cuya presencia est relacionado
con la virulencia.
3. MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS
3.1. PATOLOGA
Es un bacilo denominado Bacilo de Koch. Es capaz
de crecer en el interior de las clulas
retculoendoteliales sin ser destruidas.
Llega al organismo por inhalacin aunque
excepcionalmente por ingestin de alimentos
contaminados o heridas en la piel. Tras una nica
exposicin es menor el riesgo de desarrollar la
infeccin (35%), siendo necesarias exposiciones
repetidas para que aumente esta probabilidad junto
con una inmunidad deteriorada por parte del
husped.
Cuando el M.tuberculosis llega al husped por
109

inhalacin produce una infeccin primaria o

primoinfeccin tuberculosa que acta sobre el
pulmn y ms concretamente a nivel de los alvolos
provocando una intensa reaccin inflamatoria que
produce exudacin. Estos bacilos pueden llegar a los
vasos linfticos, ganglios y retornar a la circulacin
venosa originando focos metatsicos en distintos
rganos.
Si no hay tratamiento a tiempo el tubrculo que se
origina en el pulmn se va desarrollando
evolucionando a necrosis caseosa (masa amorfa y
homognea generalmente debida a protenas
coaguladas formada por estructura de tejidos en
descomposicin; es similar a un queso en su
aspecto). El tubrculo que se forma est constituido
en su parte central por clulas gigantes en cuyo
interior se encuentran los bacilos, una parte
intermedia de carcter epitelial y con apenas bacilos
y una parte perifrica que contiene abundantes
linfocitos, monocitos y bacilos tuberculosos. Esto va
acompaado de fiebre, sudoracin nocturna,
adelgazamiento, tos con esputos purulentos y en
fases avanzadas hemoptisis (expulsin de sangre por
la boca procedente de las vas respiratorias bajas).
Adems de la lesin primaria tambin podemos
hablar de tuberculosis postprimaria o reaccin
secundaria que ocurre tras una reactivacin de la
lesin primaria.
Histolgicamente hablamos de que micobacterium
puede producir dos tipos de lesiones:
Exudativas: son propias de la etapa inicial
apareciendo lesin inflamatoria aguda con
edema y acumulacin de polimorfonucleares
alrededor del bacilo tuberculoso. El cuadro
se asemeja a la neumona. Puede curar
espontneamente, producir necrosis tisular p
evolucionar hacia una lesin productiva.
Lesin productiva granulomatosa: consiste
en un granuloma crnico formado en la zona
central por clulas gigantes y bacilos, una
zona intermedia de carcter epitelial y zona
perifrica con linfocitos y macrfagos.
3.2. EPIDEMIOLOGA
Se difunde por las gotculas y esputos de individuos
y animales, tambin por contaminacin de alimentos
(tuberculosis intestinal) y por heridas.

110

Los bacilos pueden sobrevivir hasta 6 semanas en

esputos y se destruyen a la luz solar en poco tiempo.
Su mayor incidencia est en grupos sociales de bajo
nivel, malnutridos y sin condiciones higinicas.
La tuberculosis es una enfermedad importante a
nivel en pases subdesarrollados y en grupos
marginados de pases industrializados. El
M.tuberculosis produce cada ao de 58 millones de
nuevos casos, siendo el responsable de 23 millones
de muertes en el mundo.
En el M.tuberculosis la fuente de infeccin es el
hombre a nivel del tracto respiratorio; en el caso de
M. Bovis la va de entrada es respiratoria por la tos
de la vaca o por ingestin de la leche no pasteurizada
o de la carne procedente de una vaca tuberculosa.
La tuberculosis afecta principalmente a las personas
inmunideprimidas: alcoholicos, ancianos,
drogadictos, pacientes con SIDA.
3.3. PRUEBA DE LA TUBERCULINA
Permite diferenciar entre individuos infectados y no
infectados.
Prueba positiva: indica que el individuo ha
estado en contacto con M.tuberculosis y es
portador de micobacterium en los tejidos. No
implica que exista infeccin activa en ese
momento pero existe el riesgo de adquirir la
enfermedad por reactivacin de dicho foco
primario.
Prueba negativa: no se corre el riesgo de
reactividad.
A la prueba de la tuberculina tambin se le llama
prueba de Mantoux, que consiste en una inyeccin
intradrmica de DPP (derivado proteico purificado);
a las 4872 horas se mide el grado de induracin de
la zona. Tradicionalmente se consideraba positivo
cuando el dimetro es mayor o igual a 10 mm.
Actualmente se siguen las siguientes pautas para
considerara positivo el test:
Dimetro " 10 mm en pacientes menores de
35 aos.
Dimetro " 15 mm en pacientes de 35 aos o
ms.
Dimetro " 5 mm en individuos en contacto
con pacientes tuberculosos e infectados con
111

VIH.
3.4. TRATAMIENTO
Los frmacos antituberculosos que se usan
normalmente son isoniazida, etanbutol,
rifampicina y estreptomicina. Para evitar la
aparicin de resistencia se lleva a cabo la politerapia.
Los tratamientos son largos, de 612 meses, ya que
las bacterias son muy resistentes a agentes
teraputicos; no se debe olvidar que son
microorganismos intracelulares y que el acceso del
antibitico se dificulta la propia composicin
caseosa de las lesiones tuberculosas.
Las micobacterias que producen lesiones cutneas se
tratan con ciruga. Las infecciones por otras
micobacterias distintas de tuberculosis se denominan
micobacteriosis.
4. MICOBACTERIUM LEPRAE
4.1. PATOLOGA
Agente etiolgico de la lepra. Se trata de una especie
que no se puede cultivar en el laboratorio por lo que
se conoce muy poco sus caractersticas
microbiolgicas. Se ha observado que el nico
reservorio es el hombre con autntica predileccin
por las terminaciones nerviosas.
Son BAR aislados en parejas o masas, se pueden
inocular en animales siendo el armadillo la especie
ms receptora. S existen pruebas serolgicas para la
lepra.
Es un bacilo inmvil, rectilneo, que se encuentra en
la mucosa nasal, dermis y biopsias de lesiones de
individuos con lepra.
Son bacilos no esporulados, no flagelados ni
capsulados. En el hombre da lugar a la lepra que es
una enfermedad caracterizada por lesiones
granulomatosas crnicas. Es de lenta evolucin que
ocasiona lesiones desfigurantes y mutilantes en las
zonas ms fras del cuerpo ya que el bacilo posee
gran afinidad por el tejido cutneo y nervioso.
Aparecen maculas plidas y ndulos grandes
llamados lepromas acompaados de anestesia local.
La afeccin de la cara da lugar a la cada de la cola
de la ceja y a la destruccin del tabique nasal, es lo
112

que se denomina facies leonina o cara de len. La

lepra se puede manifestar de dos formas:
Lepra tuberuloide: de evolucin benigna y
con tendencia a quedar latente con maculas
cutneas, grave afectacin nerviosa y prueba
de la lepromina positiva.
Lepra lepromatosa: de curso maligno con
aparicin de ndulos cutneos, amputacin y
prueba de la lepromina negativa.
4.2. Epidemiologa
Generalmente se necesitan ms de un contacto con
enfermos de lepra activa. El material mas infeccioso
son las secreciones nasales y el periodo de
incubacin es de 26 aos. Es una enfermedad
difcilmente de determinar por su elevado periodo de
incubacin. Su periodo de invasin es poco
especfico y con sntomas raros no asociables a la
lepra. A veces se presenta picor, hormigueo, perdida
de la sensibilidad en manos y pies y a partir de aqu
de forma lenta y progresiva lesiones cutneas. Suele
durar toda la vida y su evolucin ms o menos grave
depender del grado de inmunidad del husped.
4.3. Prueba de la lepromina o Mitsuda
Existe una prueba que indica el estado inmune del
individuo frente a la enfermedad que se denomina
Mitsuda. Se toma un extracto de la lesin leprosa y
se pasa por el autoclave, posteriormente se inyecta
en el antebrazo. Puede ocurrir despus de 25 das:
Aparece una induracin de ms de 25 mm de
dimetro: Esto indica que estamos frente a
un organismo inmunizado frente a
micobacterium.
Induracin de menos de 3 mm: individuos
sensibles por no haber tenido contacto o por
tener una lepra lepromatosa.
Induracin entre 35 mm: son de resultado
dudoso (nos fijaremos en la sintomatologa).
4.4. Toma de muestra
Se realiza un raspado de la mucosa del tabique nasal
o se hace una biopsia de un leproma en la oreja,
ganglio nervioso o trozo de nervio afectado.
4.5. Tratamiento
Se utilizan sulfanos y rifampicinas.

113

5. ACTINOMICETOS
5.1. Introduccin
Son bacilos gram positivos aunque se tien con
dificultad siendo mas caracterstico porque algunas
especies son baar positivo debido a la composicin
de la pared celular (cidos miclicos y componentes
creos), dan positiva la prueba de la catalasa y el
microorganismo se ve de forma variable
dependiendo de los gneros, pudiendo ser:
cocobacilos, filamentosos
La morfologa filamentosa se asemeja a la de los
hongos, de ah el nombre de actinomiceto. Estos
microorganismos se encuentran en el suelo, plantas y
vegetales generalmente, aunque tambin pueden
aislarse en piel, orofaringe y tracto gastrointestinal
del hombre y animales.
El hombre puede infectarse por inhalacin o contacto
de una herida, son inmviles no esporulados y no
capsulados.
5.2. Especies ms importantes
(ver fotocopias tabla 11.2)
5.3. Aislamiento y caractersticas bioqumicas
Toma de muestras: esputo, secreciones
virulentas, LCR, liquido pleural.
Tinciones: gram positivas (se ven con
dificultad) principalmente BAAR, Niehl
Ziensen y RodaminaAuramina positivas.
Medios de cultivo: agar infusin cerebro
corazn, Mueller Milton y medio de
Lovestein Jensein. La T de cultivo 2027
que impide que se desarrollen otras
bacterias.
Pruebas bioqumicas: (tabla 11.2)
Pruebas serologicas: fijacin del
complemento, Elisa, aglutinacin,
precipitacin.
5.4. Patologa
Cualquier infeccin pulmonar causada por estos
microorganismos se considera nocardiosis. Gran
parte de los estudios de nocardiosis parecen apuntar
a infecciones de carcter oportunistas, es decir que se
requiere de una enfermedad subyacente previa o que
el paciente est inmunolgicamente debilitado.
114

El gnero Nocardia no producen toxinas pero tiene

en su pared bacteriana una alta proporcin de lpidos
muy relacionados con su virulencia ya que le van a
conferir a las bacterias alta resistencia frente a los
sistemas de defensa del husped. Tiene la capacidad
de crecer y multiplicarse en el interior de los tejidos
y macrfagos de aqu que se hayan considerado
parsitos intracelulares.
Las manifestaciones clnicas mas frecuentes son:
Nocardiosis pulmonar: causada por
Nocardia, asteroides que producen lesiones
pulmonares con abscesos, inflamacin
diseminada semejante a la tuberculosis,
pudiendo dar reas de necrosis y a partir de
aqu la diseminacin general por sangre a
otros rganos. Tambin pueden diseminarse
por el sistema linftico, rara vez puede
afectar al hgado, bazo y miocardio, pero
cuando afecta puede ser grave o mortal, se le
denomina pulmn del granjero como
consecuencia de hipersensibilidad a Ag de
los actinomicetos.
Nocardiosis cutneo: generalmente se debe a
la manipulacin de tierra y plantas
contaminadas con actinomicetos apareciendo
celulitis pustular.
Micetomas: infeccin crnica supurativa
cutnea y subcutnea que afecta a tendones,
huesos y msculos. La localizacin ms
frecuente son las extremidades. El origen
puede ser la inoculacin de las bacterias
procedentes del suelo o vegetacin. Es una
enfermedad tpica en climas tropicales
principalmente la especie Brasiliensis.
5.5. Tratamiento
Trimetropin Sulfametosazol combinado con
Rifampicina y aminoglucosidos.
En el caso de micetoma y otras formas graves de
Nocardiosis cutnea es necesario recurrir a la
intervencin quirrgica adems de la administracin
de antgenos.
TEMA 18. MICROORGANISMOS
ANAEROBIOS
1. INTRODUCCIN
2. SIGNOS CLNICOS DE INFECCIN POR
115

ANAEROBIOS
3. CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS
ANAEROBIAS
4. BACTERIAS ANAEROBIAS
ESPORULADAS. GNERO CLOSTRIDIUM
4.1.Introduccin
4.2.Clasificacin
Accin neurotoxica.
Accin histolgica.
Accin sobre el aparato digestivo.
Responsables de cuadros purulentos.
5. AISLAMIENTO Y CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
6. TOMA DE MUESTRAS, TRANSPORTE,
ETC.
1. INTRODUCCIN.
Todas aquellas bacterias incapaces de crecer y/o
mantenerse en contacto con el oxigeno a la presin
atmosfrica se consideran anaerobias o anaerobias
estrictas.
A estos microorganismos se les considera que tienen
un metabolismo anoxibiotico, es decir incapaz de
utilizar el oxigeno como aceptor final de electrones,
utilizando como aceptor sustratos orgnicos.
Se sabe que estas bacterias no tienen cierto enzimas
llamados metaloporfirinicos que en los mecanismos
aerobios transportan oxigeno.
Nos encontramos bacterias anaerobias para los que la
presencia de oxigeno es altamente toxica o
bactericida, mientras que para otras bacterias es
bacteriosttico de tal forma que cuando se
establezcan de nuevo las condiciones de anaerobiosis
las bacterias crecen.
Las bacterias anaerobias forman parte de la flora
normal (tabla 16.1) y dan lugar a patologas.
2. SIGNOS CLNICOS DE INFECCIN POR
ANAEROBIOSIS
(Ver tabla 16.2)
116

3. CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

ANAEROBIAS
(Ver tabla 16.1)
4. BACTERIAS ANAEROBIAS
ESPORULADAS. GNERO CLOSTRIDIUM
4.1. Introduccin
Dicho gnero tiene ms de 30 especies y muchas son
peligrosas para el ser humano. Este gnero se
caracteriza por la formacin de toxinas que
responden a sustancias proteicas solubles.
4.2. Clasificacin
Se clasifican en los siguientes grupos:
De accin neurotoxica, en este grupo se
encuentra Clostridium tetanis (produce
ttanos) y Clostridium botulium (produce
botulismo).
De accin histotxica, en este grupo se
encuentra Clostridium perfringes (produce
gangrena gaseosa) y otros Clostridium.
De accin sobre el aparato digestivo,
destacaremos el Clostridium perfringes,
Clostridium dificille y Aclostridium.
Responsables de cuadros purulentos,
destacaremos a Clostridium pyogenes,
Aclostridium, Clostridium perfinges y
Clostridium ramosum.
Clostridium Tetanis
Es un bacilo gram +, pequeo, con capacidad de
formar esporas terminales dando a las bacterias un
aspecto de cerillas o palillo de tambor. Su hbitat se
encuentra fundamentalmente en la tierra y en
intestinos de hombres y animales.
Posee 3 toxinas de accin neurotoxica y son
transportados por va sangunea hasta el SNC
bloqueando la liberacin de neurotransmisores, esto
origina convulsiones y parlisis apareciendo a nivel
perifrico en exceso de liberacin de acetilcolina en
el msculo esqueltico que constituye el cuadro
clnico caracterstico de parlisis, as mismo se ve
alterado el sistema contraccin relajacin muscular,
de forma que este entra en una fase de contraccin y
no se recupera (rigidez tetnica).

117

Para que se produzca el ttano es necesario que el

microorganismo se encuentre en condiciones de
anaerobiosis. Tras una herida mas o menos profunda
ya sea cortante, punzante, mordedura, araazo,
quemaduras, lceras por decbito e incluso heridas
superficiales como rozaduras que se pudieran
infectar y formar costra facilitan la infeccin
anaerobia.
Si las condiciones son favorables el periodo de
incubacin es de 5 7 das y se origina la reaccin
patgena. Podemos hablar de 2 formas clnicas:
Local
Tetnica, que es la ms grave.
El ttanos afecta principalmente a pases
subdesarrollados, es importante el diagnostico
precoz y las medidas profilctica (vacunas DTT). De
no ser as el ndice de mortalidad es muy elevado.
Clostridium Botulium
Son bacilos gram +, anaerobios estrictos, grandes, no
capsulados, mviles, debido a su flagelacin
peritrica. Presentan esporas de carcter subterminal y
en general es capaz de formar toxinas, las toxinas
que se denominan con letras (A ! G). Las ms
peligrosas y potentes para el hombre son las
neurotoxinas A, B. y E.
Clostridium Botulium presenta una estructura
antignica tpica debida a los Ag flagelares y a los
Ag de esporas.
Se encuentra ampliamente distribuido en muchos
ambientes como aire, suelo, alimentos. Si las
condiciones son las adecuadas las esporas germinan
facilitando la proliferacin de Clostridium Botulium.
Es importante destacar su presencia en las conservas
y pescados.
El efecto patgeno es debido a dichas neurotoxinas y
son venenos biolgicos que se conocen muy bien,
una pequea cantidad del microorganismo es
suficiente para causar la muerte. Las condiciones
para que germine la espora ser de anaerobiosis, T
aproximada 30 C y un pH neutro o ligeramente
cido.
Estas toxinas son de carcter proteico y termolabiles,
de tal forma que se destruyen con facilidad a T altas
(100C 15 min., 70 C 30 60 min.)
118

La toxina puede llegar al hombre a travs de

alimentos contaminantes, en el tubo digestivo
producir in situ una toxiinfeccin alimentaria.
A partir de aqu a travs de va sangunea y linftica
llega al sistema nervioso perifrico donde acta
sobre terminaciones nerviosas bloqueando la
liberacin de acetilcolina y originando como
consecuencia parlisis del msculo esqueltico, as
como otras manifestaciones neurolgicas como:
visin borrosa, fotofobia, disfagia, sequedad en boca
y faringe y debilidad en los msculos incluyendo los
respiratorios que pueden llegar a paralizarse y en
muchas ocasiones es frecuente la muerte por fallos
respiratorios y arritmias cardiacas.
Su periodo de incubacin est en torno a las 1636
horas despus de la ingestin de alimentos
contaminados. Los cuadros ms graves se originan a
las 2448 horas.
Algunos autores hablan del Botulismo del lactante
que se produce por la elaboracin de toxinas en el
colon tras la ingestin de esporas. El cuadro clnico
puede ser desde leve a grave y se manifiesta por
dificultad muscular, en la alimentacin,
estreimiento, disminucin del reflejo de succin e
insuficiencia respiratoria.
El diagnstico del botulismo es fundamentalmente
clnico ya que el microbiolgico puede retrasarse. Se
puede mostrar presencia de toxinas en sangre por
pruebas serolgicas.
El tratamiento consiste en combatir los sntomas,
limpieza a fondo de heridas, administracin de
antitoxina botulnica y Ab. Tambin frmacos
relacionados con el funcionamiento de al
acetilcolina.
Clostridium que afecta a los tejidos. Clostridium
perfringes
Es un bacilo gram positivo y anaerobio estricto. Se
caracteriza porque est ampliamente distribuido por
la naturaleza, especialmente en el suelo cuya
concentracin habitualmente sobrepasa las 50 mil
bacterias /gramos de tierra, especialmente en tierras
hmedas y abonadas con estircol.De aqu a travs
de heridas puede pasar al hombre produciendo
gangrena gaseosa. Es poco frecuente pero muy
grave.
119

La gangrena gaseosa consiste en necrosis tisular

(muscular)y signos de toxicidad sistmica debido a
la produccin de toxinas histolgicas. Se caracteriza
por un intenso dolor en la herida seguido de
aparicin de lesiones cutneas como edemas,
ampollas, etc, que se extienden rpidamente y
evolucionan a necrosis y destruccin celular.
El diagnstico se realiza por cuadro clnico y
presencia en tincin de gram realizada
principalmente en pus o tejidos afectados.
El tratamiento es quirrgico y altas dosis de
penicilina.
Existe una toxina , que es la principal responsable
de este dao, y otras toxinas y H que son
responsables pero en menor medida.
Clostridium que afecta a tracto digestivo.
Clostridium perfringes
Adems de provocar gangrena gaseosa puede dar
lugar a infeccin toxialimentaria producida por
ingestin de carne contaminada. En el intestino
delgado germinan las esporas dando un cuadro
caracterstico con diarreas, vmitos, dolor
abdominal, etc, pudiendo llegar a estados de shock.
El cuadro es generalmente benigno y el diagnstico
se realiza mediante deteccin del microorganismo en
el alimento o heces del paciente.
Clostridium responsable de cuadros purulentos.
Clostridium pyogenes
Suele ir acompaado de otras bacterias anaerobias.
Las toxinas no actan ejerciendo efectos patgenos
salvo cuando hay complicaciones.
5. AISLAMIENTO Y CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
Toma de muestras: Se ha de realizar en
condiciones de asepsia.
Tinciones: Tincin gram y de esporas
(Clostridium tetani)
Medios de cultivo: Medios especficos como
agar TSM a base de carne, sangre, huevos,
tripticasa trisulfato y neomicina.
Pruebas bioqumicas: Se utilizan muchas
siendo las ms importantes: hidrlisis de
120

gelatina, produccin de indol y pruebas de

fermientacin de HC.
Otras pruebas de identificacin:
Para Clostridium tetani: pruebas de
inoculacin en animales, cromatografa de
gases, HPLC, etc.
Para Clostridium perfringes y Clostridium
botulium: las mismas que para Clostridium
tetani adems de RIA e
inmunofluorescencia.
6. TOMA DE MUESTRAS,
TRANSPORTE, ETC.
La incubacin se lleva a cabo con un sistema
de campana, la atmosfera anaerobia se
consigue mediante la introduccin en la
misma de un sobre generador de gas (CO2)
y un catalizador.
Se incluir siempre un medidor de
anaerobiosis, que cambia de color en
ausencia de aire, para comprobar que el
sistema ha funcionado.
El sobre generador de gas se activa
introduciendo en l 10 ml de agua del grifo,
lo que da lugar a la liberacin de H2 y CO2.
El oxgeno del interior de la campana se une
al hidrogeno y forma agua que se deposita
en forma de gotas en las paredes del
recipiente. El CO2 generado procuce el
crecimiento de algunos anaerobios.
Los sobres e indicadores de anaerobiosis son
de un solo uso.
(Ir a la pregunta 6 de las fotocopias)
TEMA 19. RICKETTSIA, CLAMIDIAS
Y MICOPLASMA.
1. FAMILIA RICKETTSIACEAE
Introduccin.
Gneros y especies ms importantes:
Rickettsias: R. Prowazekii, R.
conorii y R. rickettsi.
Coxiella burnetii.
Ehrlichia.
1.3 Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
121

2. CLAMYDIAS
2.1 Introduccin.
2.2 Especies ms importantes: C. tracomatis,
C. psitacci y C. pneumoniae.
2.3 Tratamiento.
2.4 Aislamiento y caractersticas
bioqumicas.
3. MICOPLASMA.
3.1 Introduccin.
3.2 Micoplasma neumoniae.
3.3 Micoplasma genitalis: Ureaplasma
urealiticum y M. Hominis.
3.4 Acholeplasma.
3.5 Aislamiento y caractersticas
bioqumicas.
4. FORMAS L
1. FAMILIA RICKETTSIACEAE
1.1. Introduccin.
Son microorganismos procariotas que
precisan de clulas vivas para poder
desarrollarse, es decir son microorganismos
intracelulares que se encuentran adaptados a
un parasitismo celular.
Morfolgicamente son cocos o cocobacilos
gram que presentan una dotacin
enzimtica muy escasa de ah que necesiten
microorganismos o clulas a las que
parasitar.
Producen en el hombre enfermedades
epidmicas o endmicas transmitidas por
vectores (piojos, pulgas, caros, etc.).
Esta familia comprende 4 gneros
importantes:
Rickettsias.
122

 Coxiella
Ehrlichia.
Rochalimaea.
1.2. Gneros y especies ms importantes
Rickettsias.
Son cocobacilos gram y cuyo dimetro es
igual a 0,30,5m y 0,82m de longitud.
Dentro de estas tenemos:
Rickettsias prowazekii: produce el
tifus epidmico, lo transmite el
piojo, la va de entrada en el hombre
a travs de la picadura que tras el
rascado produce la penetracin. El
periodo de incubacin es de 13
semanas, los sntomas que produce
son: escalofros, fiebres muy altas,
dolores generalizados e
inflamaciones que afectan sobretodo
a capilares, arteriolas y vnulas, as
como a piel y msculo. Pueden crear
estados obstructivos que dificulten
la corriente sangunea debido a la
formacin de ndulos y en casos
graves pueden provocar gangrena en
extremidades. Lo ms probable es
que en la piel aparezcan manchas
rosadas que luego se vuelven
papulosas y petequiales. Esta
enfermedad es transmitida de
persona a persona produciendo gran
epidemias en guerras. Puede ser
grave (incluso muerte) en
condiciones adversas.
Tratamiento: tetraciclinas y cloranfenicol,
siendo muy importante y decisivo la lucha
contra el piojo (vector) con insecticidas.
Puede presentarse recadas al cabo de
muchos aos llamndose entonces
enfermedad de BrillZinsser.
Rickettsias conorii: produce la
fiebre botonosa, se transmite a
travs de la garrapata. Es una
enfermedad endmica en la cuenca
mediterrnea, en general es de curso
benigno y da lugar a manchas negras
en el lugar donde muerde la
garrapata. Sus sntomas en primer
123

lugar es macular y posteriormente

papular y botonosa. La enfermedad
se mantiene durante 820 das.
Tratamiento: tetraciclinas.
Rickettsia Rickettsi: Produce la
llamada fiebre de las montaas
rocosas, transmitida por garrapatas,
periodo de incubacin 3 6 das
aparecen fiebres muy altas que
presentan mialgias y manchas
negras en la zona de picadura.
COXIELLA BURNETTI
Produce la llamada enfermedad de la fiebre
Q. La va de entrada principalmente por
inhalacin aunque puede haber otros.
Es un microorganismo bacilar de pequeo
tamao de 0,3 micrmetros de dimetro y o,
41 micrmetros de longitud. Afecta al
ganado, presentando un tropismo especial
por las placentas siendo excretado en el
parto.
Las manifestaciones clnicas son sntomas
generales del estado febril, mialgias y
afectacin pulmonar en la mitad de los
casos, por lo que se considera agente de
neumona atpica, puede dar tambin
afectacin heptica.
El tratamiento es cloranfenicol y
tetraciclinas.
1.3. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
En estados de fiebre las Rickettsias se
mantienen abundantemente en sangre, as
pues ser la muestra de eleccin.
A partir de sangre heparinizada y
centrifugada se usar el sedimento para
obtener una muestra mas concentrada.
Posteriormente realizaremos:
Tincion directa: Ej.; Giemsa,
apareciendo la Rickettsias de color
prpura. Tincion de Jimnez: que se
ven de color rojo sobre fondo verde.
Si hacemos un gram se vern
124

negativo. Tambin podemos realizar

tcnicas de inmunofluorescencia.
Medio de Cultivo: se pueden
inocular en cultivos celulares o
embriones de pollo.
Pruebas serolgicas: principalmente
reacciones Ag Ac, las pruebas mas
usadas son las seroaglutinacin,
inmunofluorescencia indirecta y la
tcnica de Weil Flix que consiste
en que a partir de diluciones de
suero problema con esta bacteria
ponerlas en contacto con una
cantidad fija de Ag de Rickettsia.
2. CLAMYDIAS
2.1. Introduccin
Son microorganismos procariotas que hasta
hace poco se consideraban ms bien virus
que bacterias. Son procariotas intracelulares
estrictos ya que no pueden sintetizar ATP.
Morfolgicamente son cocos gram ,
inmviles y tienen 2 tipos de cidos
nucleicos: ADN y ARN, se multiplican por
divisin binaria, dato que aleja a las
Clamydias de los virus.
2.2. Especies ms importantes
(ver tabla 12.2)
Clamydia Tracomatis
Puede producir distintas enfermedades:
Tracoma: que es una
queratoconjuntivitis, causa ms
importante de ceguera en el mundo,
principalmente en pases
subdesarrollados.
Linfogranuloma venreo: que es una
E.T.S. para su deteccin se realiza
inmunofluorescencia.
Clamydia Psitacci
Puede producir neumona atpica, la
transmisin suele esta mediada por contacto
con aves, el diagnostico principalmente es
por fijacin del complemento.
125

Clamydia Pneumoniae
Es un patgeno de reciente descubrimiento
que produce neumona.
2.3. Tratamiento
Sulfamidas.
2.4. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
Toma de muestra: secreciones
oculares o genitales segn el caso.
Tinciones: Giensa, Jimnez, Gram.
Tcnicas citolgicas: para observar
clulas del epitelio conjuntivas y
genital con el fin de verificar los
grnulos ricos en glucogeno.
Cultivos: embriones de pollo aunque
sta tcnica no es muy frecuente por
el riesgo de infeccin en el
laboratorio.
Pruebas serolgicas: principalmente
radioinmunoensayos y fijacin del
C.
3. MICOPLASMA
3.1. INTRODUCCIN
Da los microorganismos ms pequeos y se
caracteriza porque carece de pared celular.
Presenta divisin binaria.
El carecer de pared celular le confiere una
serie de propiedades tales como:
sensibilidad a la presin osmtica
del medio en que se encuentra que
puede facilitar su lisis
pleomorfismo
resistencia a antibiticos como
cefalosporinas y penicilina
no se tien con gram
Estn ampliamente distribuidos en la
naturaleza y pueden afectar al hombre,
principalmente Micoplasma neumoniae.
Requiere medios enriquecidos y apartir de
medios lquidos pueden visualizarse en
microscopio ptico de campo oscuro o
contraste de fase.
126

Las colonias son tpicas por su forma de

huevo frito.
Los principales gneros son:
Micoplasma
Ureplasma
Acholeplasma
3.2. MICOPLASMA NEUMONIAE
Principal agente causal de neumonas
atpicas, con un periodo de incubacin de
aproximadamente 3 semana considerando
que es un microorganismo de lento
crecimiento.
Los sntomas son fiebres, mialgias, cefaleas
y tos no productiva afectando principalmente
a los escolares. En muchas ocasiones la
infeccin es subclnica (no tiene sntomas
claros) o de neumona suave, pero este
micoplasma puede permanecer varios meses
en el tracto respiratorio tras la infeccin.
Existen otros micoplasmas que son flora
normal como Micoplasma salivarium,
Micoplasma orale y Micoplasma buccale.
La infeccin por Micoplasma neumoniae no
presenta distribucin estacionaria (no
depende de las estaciones del ao). La
enfermedad requiere un contacto estrecho.
Puede tener pronstico benigno y aparecer
manifestaciones extrapulmonares como por
ejemplo erupciones cutneas.
3.3. MICOPLASMA GENITAL
Comprenden este grupo Ureplasma
urealyticum y Micoplasma hominis. Forman
parte de la flora normal de las mujeres el
60% de Ureaplasma y el 20% de
Micoplasma hominis. Se consideran
patgenos oportunistas produciendo
enfermedades uretrales y vaginales como
vaginitis, prostatitis, etc. Pueden producir
fiebre en el postparto.
3.4. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
Toma de muestras: mucosa faringea,
127

secrecin uretral, exudados, esputo,

sangre, etc, segn la patologa.
Tincin: de Giemsa principalmente,
tambin tincin en campo oscuro
con nigrosina. No se hace gram
porque carece de pared celular.
Medio de cultivo: medios
especficos a 37C y ambientes
aerobios.
Pruebas serolgicas:
inmunofluorescencia, RIA, fijacin
de complemento.
4. FORMAS L
No hay que confundirlas con micoplasma
aunque tienen en comn carecer de pared
celular. Son variantes de bacterias en los que
ha ocurrido prdida de pared celular, que se
puede inducir mediante sustancias que
inhiben la sntesis de la pared.
TEMA 20. VIBRIOS,
CAMPYLOBACTER Y GNEROS
RELACIONADOS
1. VIBRIOS
1.1. Introduccin
1.2. Especies ms importantes
1.3. Poder patgeno
1.4. Patologa
1.5. Tratamiento
1.6. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
2. CAMPYLOBACTER
2.1 Introduccin
2.2 Especies ms importantes
2.3. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
2.4. Patologa
2.5. Tratamiento
128

3. HELICOBACTER PILORI
3.1. Introduccin
3.2. Mtodos de deteccin
Directos
Indirectos
Prueba de la urea rpida
Prueba de la urea
respiratoria
Pruebas serolgicas
3.3. Poder patgeno
3.4. Patologa y Tratamiento
4. AEROMONAS
4.1. Introduccin
4.2. Patologa
4.3. Tratamiento
4.4. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
5. PLESIOMONAS
1. VIBRIOS
1.1. INTRODUCCIN
Son bacilos gram negativos, anaerobios
facultativos, de morfologa curva, no
esporulados y mviles gracias a su
flagelacin loftrica.
Crece bien en medios generales y son
oxidasa positivo, prueba que nos va a
permitir diferenciarlos de las
Enterobacterias.
Aguantan bien elevadas concentraciones de
NaCl, por lo que se le denominan bacterias
halofticas y su crecimiento se facilita en
medio alcalino.
Reducen nitratos a nitiritos.
Se hallan muy distribuidos en la naturaleza.
Son bacterias acuticas que habitan en ros,
129

lagos, etc.
De las 34 especies conocidas slo 11 se han
aislado en el hombre.
1.2. ESPECIES MS IMPORTANTES
(ver tabla 14.2)
Vibrio parahaemolyticus: Vive en
ambientes marinos y se transmite al
hombre a travs de alimentos como
el pescado y el marisco. En el
hombre produce cuadros
gastrointestinales graves.
Vibrio fluvialis: Produce cuadros
gastrointestinales a travs de
alimentos como el pescado y el
marisco.
Vibrio alginolyticus: Se asocia a
conjuntivitis y otitis.
Vibrio vulnificus: Agente causal de
infeccin de heridas traumticas
causadas en ambientes marinos.
Vibrio cholerae: Es el ms patgeno
para el hombre. Es el agente
etiolgico del clera. Provoca
diarreas graves hasta llegar a la
deshidratacin, shock hipovolmico
y si no hay tratamiento la muerte.
1.3. PODER PATGENO (Vibrio
cholerae)
Presenta 3 componentes antignicos
responsables de su virulencia:
Ag somtico O: Termoestable y de
naturaleza polisacrida.
Ag flagelar H: Termolbil.
Exotoxinas: Son enterotoxinas de
naturaleza proteica y sobre la que se
desencadena el principal efecto
patgeno del clera.
Las cepas epidmicas de Vibrio cholerae, de
las que existen ms de 100, se pueden
separar en funcin de sus serotipos siendo
los ms importantes el 01.
1.4. Patologa (Vibrio cholerae)
El Vibrio cholerae penetra en el organismo
por va oral a tavs de agua y alimentos
contaminados, principalmente productos
130

marinos crudos.
Debe se capaz de eludir el medio cido del
estmago, hecho que sucede cuando se
ingiere ms de 100 millones de grmenes,
circunstancia que se facilita en epidemias
sobre todo si se tiene en cuenta que pueden
encontrarse 106 grmenes/ml de agua
contaminada.
Adems de estas condiciones, Vibrio
cholerae deber traspasar la barrera del
estmago para producir diarrea que da lugar
a una prdida de agua y electrolitos que
provoca una deshidratacin que sin
tratamiento puede causar shock
hipovolmico y la muerte.
El mecanismo por el que produce la
deshidratacin es provocado por la
enterotoxina que se encuentra en las
microvellosidades intestinales. Dicha
enterotoxina se divide en dos fracciones: la
fraccin a y la fraccin b. La fraccin b es la
encargada de seleccionar los receptores
especficos a los que se une, y una vez unida
la enterotoxina, la fraccin a actuar
activando una enzima, la adenilciclasa, lo
que supone que el ATP de las clulas que
infecta se transforma en AMP. Como
consecuencia de las elevadas
concentraciones de AMP se producir una
inhibicin de la absorcin de Na por parte de
las clulas intestinales y una liberacin de
agua, cloruros, bicarbonatos, K y que en los
casos ms graves puede perderse de 1015
litros al da.
El periodo de incubacin es de 14 das y
los sntomas clnicos nauseas, vmitos, dolor
abdominal, diarrea, etc. Las heces contienen
moco, clulas y gran cantidad de Vibrio. La
muerte sobreviene en pocas horas si no se
restablece l equilibrio electroltico.
1.5. TRATAMIENTO
El tratamiento es sintomtico y encaminado
a la reposicin de lquidos. Vibrio cholerae
es sensible a tetraciclinas y
trimetroprimsulfametoxazol.

131

El uso de antibiticos ha dado lugar a la

aparicin de cepas resistentes.
Se trabaja en la elaboracin de vacunas.
1.6. AISLAMIENTO Y
CARACTERSTICAS BIOQUMICAS
Las muestras de heces que no se procesan
inmediatamente se transportan en medio de
CaryBlair donde los Vibrios se mantienen
viables hasta 4 semanas. Se debe evitar la
exposicin al aire ya que son muy sensibles
a la desecacin.
El vibrio se desarrolla bien en agar sangre y
Mckonkey, pero el ms selectivo es el medio
TCBS (triptona, citrato, bilis y sacarosa)
donde Vibrio cholerae crece dando colonias
amarillas. Tambin se puede utilizar como
caldo de enriquecimiento a partir de heces
agua peptonada al 1% de NaCl. El tiempo de
incubacin es de 1622 horas a 3537C.
2. CAMPYLOBACTER
2.1. INTRODUCCIN
Son bacilos gram negativos, cortos, con
forma espiral, alas de gaviota o coma. Son
microaerfilos, mviles, con un flagelo
polar, no esporulados, no fermentan HC y
dan posita la oxidasa y catalasa.
Habitan en el tracto gastrointestinal de un
gran nmero de animales. En el hombre se
asocia a infecciones gastrointestinales y cada
vez ms a infecciones extraintestinales como
meningitis, endocarditis, artritis, etc,
especialmente en pacientes con SIDA.
2.2. ESPECIES MS IMPORTANTES (
ver tabla 14.1)
Las especies ms importantes de
Campylobacter son:
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
Campylobacter hyointestinalis
2.3. AISLAMIENTO Y
CARACTERSTICAS BIOQUMICAS
132

Hay dos tipos de muestras:

Muestra de heces
Emplea medios selectivos que poseen
antibiticos para reducir la flora
acompaante (medio Skirrow, Campy o
Buzler).
Uso de atmosfera reducida en oxgeno
(ambiente de CO2) y temperatura de 42C.
Un medio alternativo para el aislamiento de
Campylobacter en heces es filtrar las heces
para eliminar los coliformes y otra flora
acompaante. Los filtros son de acetato de
celulosa y se colocan sobre una superficie de
agar, se pone una gota de heces, se incuba
toda la noche, se retira el filtro y se vuelve a
incubar la placa.
Muestra de sangre
En sangre se han aislado como agente
etiolgico se sepsis en pacientes
inmunodeprimidos y con SIDA.
2.4. PATOLOGA
Campylobacter jejuni se ha asociado a
infecciones en el hombre asociadas con
gastroenteritis con eliminacin de sangre por
las heces.
El microorganismo se adquiere por va oral,
por la ingestin de comidas o bebidas
contaminadas, o por el contacto con aves.
Es sensible al pH gstrico por lo que se debe
ingerir un inculo muy elevado de
microorganismo. Se multiplica en el
intestino delgado e invade el epitelio,
produce inflamaciones, en ocasiones pasa a
sangre y origina fiebre. La diarrea que
produce se acompaa de dolor intestinal,
dolor de cabeza, fiebre, nauseas, etc.
2.5. TRATAMIENTO
La infeccin es autolimitada resolvindose
en una semana sin necesidad de administrar
antibitico. Los casos ms graves se tratan
con eritromicina.

133

Existe una especie la Campylobacter

hyointestinalis que causa infeccin intestinal
y es comn en individuos homosexuales.
3. HELICOBACTER PILORI
3.1. INTRODUCCIN
En 1982, se aislaron por primera vez en
pacientes con lesiones gstricas y lceras
peptdicas unos bacilos gram negativos con
forma de espiral y gran actividad ureasa.
3.2. MTODOS DE DETECCIN
a. Mtodos directos
Helicobacter pilori se encuentra en los
pliegues de la mucosa gstrica. Si el estudio
no se va a hacer de inmediato es til como
medio de transporte solucin glucosada al
20% o solucin salina, mantenindose viable
en estos medios durante 5 horas a 4C.
Las muestras recibidas pueden usarse para
realizar un gram. Las biopsias se cortan en
trozos o se machacan en un mortero estril
con solucin glucosada al 20% y se siembra
en los siguientes medios:
agar BHI (infusin cerebro corazn)
agar MellerHinton
agar Brucella al 1% de almidn
soluble,
agar sangre o chocolate
Para el aislamiento de Helicobacter pilori es
importante incluir medios selectivos con
antibiticos.
La incubacin es de carcter microaerfilo
que se puede conseguir con las jarras de
CO2 y la temperatura ptima es de 37C, no
desarrollndose a 25,30 y 42 C.
La identificacin de Helicobacter pilori se
realiza por la tincin de gram y pruebas
bioqumicas como catalasa, oxidasa y
ureasas positivas, teniendo en cuenta que la
temperatura de crecimiento es muy selectiva.
b. Mtodos indirectos

134

 Prueba de la urea rpida: Un trozo

de biopsia se inocula en un medio
con altas concentracin de urea y un
indicador de pH. Un viraje del
indicador a un medio alcalino por
hidrlisis de la urea es significativo
de Helicobacter pilori.
Prueba de la urea respiratoria: El
paciente ingiere urea marcada y tras
un periodo de tiempo se mide el
nivel de CO2 espirado. Se emplea
urea marcada con C13 o C14 que se
detecta en un espectrofotmetro de
masas.
Pruebas serolgicas: principalmente
ELISA para detectar presencia de
IgG e IgA en individuos con
Helicobacter pilori.
3.3. PODER PATGENO
Se seala al produccin de ureasa capaz de
crear un entorno alcalino que protege a los
microorganismos de la acidez gstrica hasta
que se localiza en las capas de la mucosa
gstrica. Tambin las proteasas modifican el
pH gstrico de la mucosa y disminuyen la
capacidad del cido de difundir al mucus.
3.4. PATOLOGA Y TRATAMIENTO
Helicobacter pilori es el agente etiolgico de
gastritis aguda y crnica. En relacin a
ulceras peptdicas se asla en el 100% de los
casos y el ulcera duodenal en el 77% .
Parece ser que la presencia del
microorganismo no es suficiente para
desarrollar la ulcera aunque se cree que
colabora.
Es importante tener en cuenta que hasta el
50% de la poblacin adulta es portadora
desconocindose el mecanismo de
transmisin.
Tratamiento: Es sensible a succionato de
bismuto y sucsalicato de bismuto y muy
resistente a antibiticos. El tratamiento es
difcil y nunca se emplea monoterapia.
Suelen administrarse varios frmacos juntos
y an no se erradica el microorganismo
habiendo recadas.

135

4. AEROMONAS
4.1. Introduccin
Son bacilos gram , anaerobios facultativos,
oxidasa + y fermentan la glucosa con o sin
produccin de gas, la mayor parte son
mviles y crecen a temperaturas de 440C.
habitan en aguas dulces y saladas donde
infectan a los animales, generalmente peces
y anfibios.
En el hombre se asocian a infecciones
intestinales en heridas e infecciones
sistmicas.
4.2. Patologa
Produce una diarrea aguda (diarrea
del viajero) que suele ser
autolimitada.
Puede dar lugar a celulitis o
infecciones de heridas por contacto
de mucosas, por la tierra o aguas
contaminadas.
Septicemias en pacientes
inmunodeprimidos.
Otras (endocarditis, peritonitis,
meningitis,etc.).
4.3. Tratamiento
Tetraciclinas, aminoglucosidos y
cefalosporinas.
4.4. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
Toma de muestras: lquidos
orgnicos (sangre o exudados).
Medios de cultivo: agar sangre y
agar Mc konkey y ms selectivos:
agar tripiticasa de soja al 5% y agar
sangre con ampicilina.
5. PLESIOMONAS
Comprenden una sola especie que es la
sigeloide. Es un bacilos gram , anaerobio
facultativo, mvil o inmvil, catalasa y
oxidasa + que fermenta glucosa sin producir
gas y reduce nitratos a nitritos.
La temperatura ptima es de 37C aunque
136

crece bien entre 844C. se aisla bien en el

intestino de peces de agua dulce y no
sobrevive en agua del mar.
En el hombre se asocia a diarrea en zonas
tropicales y subtropicales.
Crece bien en agar sangre y agar SS.
TEMA 21. ESPIROQUETAS:
TREPONEMAS, BORRELIAS Y
LEPTOSPIRA
1. INTRODUCCIN A LAS
ESPIROQUETAS
2. TREPONEMAS
2.1. Introduccin
2.2. Especies ms importantes: Treponema
pallidum
Patologa
Epidemiologa
Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
Tratamiento
3. BORRELIAS
3.1. Introduccin
3.2. Especies ms importantes
3.3. Patologa
Fiebre recurrente
Enfermedad de Lyme
3.4. Tratamiento
3.5. Aislamiento y caractersticas
bioqumicas
4. Leptospira
4.1. Introduccin
4.2. Especies ms importantes
4.3. Patologa
4.4. Tratamiento
137

4.5. Aislamiento y caractersticas

bioqumicas
1. INTRODUCCIN A LAS
ESPIROQUETAS
Existe una serie de bacterias con morfologa
espiral y flexible denominadas
espiroquetas. Presentan una movilidad
caracterstica no asociada a flagelos, sino a
un filamento axial que se extiende
longitudinalmente por debajo de la envoltura
externa.
Presenta una pared muy fina y flexible de
naturaleza liposacrida y lipoproteica donde
se vana a encontrar la mayor parte de los Ag
especficos.
Son gram negativas, pero presentan muchas
dificultades para teirse. Se tien con
impregnacin argntica, tincin de Giemsa o
microscopa de fases. Presentan
metabolismo fermentativo u oxidativo
siendo aerobios o aerobios facultativos.
Se encuentran muy difundidos en la
naturaleza, en el agua, suelo y mucosas del
hombre y animales.
Dentro de la familia Espiroquetaceae existen
5 gneros:
Treponema
Borrelia
Leptospira
Espiroqueta
Cristipira
2. TREPONEMA
2.1. INTRODUCCIN
Comprende especies patgenas que afectan
al hombre y otras que forman flora normal
del tracto intestinal, boca y tracto genital.
Son espiroquetas muy helicoidales, finas,
pequeas y mviles. Son anaerobias
facultativas y presentan un metabolismo
fermentativo.
Se tien difcilmente con gram utilizndose
138

giemsa e impregnacin argntica.

No crece en cultivos in vitro y requiren un
medio in vivo.
2.2. ESPECIES MS IMPORTANTES
La especie ms importante es Treponema
pallidum, que produce la sfilis. Afecta
principalmente a adultos. Es de distribucin
mundial. Es una ETS, siendo una infeccin
congnita. Produce lesiones destructivas e
infecta a todos los tejidos.
PATOLOGA
Es el agente causante de la sfilis. Es un
microorganismo que no es capaz de resistir
fuera del organismo humano.
La sfilis comienza con un primer contacto
(sexual, ETS), con lesiones primarias ricas
en treponemas presentes en la mucosa.
Despus de un periodo de incubacin de
1090 das, con termino medio de 20 das,
aparece en la zona genital un chancro
primario, es lo que se denomina Periodo
primario de Sfilis, con abundantes
treponemas que poco despus se diseminan
por va sangunea y linftica a otras
localizaciones convirtindose en una
enfermedad sistmica.
Es frecuente su multiplicacin en los
ganglios linfticos prximos a la zona
genital originando pequeos tumores.
Transcurrido un tiempo corto (26 semanas)
estos signos desaparecen espontneamente y
entran en fase de latencia. Transcurrido un
tiempo (2 meses2 aos) surge la Sfilis
secundaria o florida. De forma sbita hay
una espiroquetemia en genral muy
abundante y que da lugar a manchas en la
piel y mucosas muy ricas en treponemas y
altamente infecciosas. Tambin se pueden
producir lesiones en otros rganos, fiebre, y
en ocasiones pstulas o ppulas ricas en
treponemas. Si esto se produjese nos
encontraramos con una forma eruptiva, pero
la mayor parte de los casos no aparece
debido a la fuerte respuesta inmunitaria.
Este cuadro clnico de carcter sistmico
139

remite a las pocas semanas (26 semanas)

volviendo a entrar en fase de latencia.
Transcurrida la fase de latencia (330 aos),
surge la Sfilis terciaria, forma muy grave y
mal pronstico si los pacientes no han sido
tratados. El nmero de treponemas en sangre
es muy escaso y abundante en ganglios,
hueso, bazo, sistema cardiovascular, SNC,
etc. Cuando afecta al SNC se denomina
Neurosfilis, formndose tambin unas
lesiones granulomatosas denominadas
grummas.
Recientemente de distingue entre:
Sfilis precoz: menos de 1 ao de evolucin
Sfilis tarda: mas de 1 ao de evolucin
EPIDEMIOLOGA
La transmisin ms frecuente es la sexual,
pudiendo aparecer lesiones en labios, boca,
tronco, etc.
Otra modalidad de transmisin es la
transplacentaria, llamada Sfilis congnita,
que para evitarla se hace un estudio
serolgico durante la gestacin. Tambin se
realiza este estudio a donantes de sangre
para evitar contagio por va transfusional.
En la actualidad han disminuido los
contagios por una buena metodologa del
diagnostico y tratamiento eficaz aunque se
est lejos de la erradicain.
Tambin se le denomina Lues venerium.
AISLAMIENTO Y
CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
Toma de muestras: Se realiza
exprimiendo el chancro primario o
condiloma (mancha que aparece en
la piel en la sfilis secundaria)
Medios de cultivo: No crece en
medios in vitro, solo en medios in
vivo como testculos de conejo.
Tinciones: de Giemsa e
Impregnacin argntica.
Diagnstico: Puede ser directo o
indirecto:
Directo: Buscamos
microorganismos en tinciones.
140

 Indirecto: Pruebas serolgicas donde

se busca en el suero del paciente Ac
frente Treponema pallidum por
medio de distintas pruebas:
Pruebas reagnicas o no
treponmicas: Son baratas,
rpidas y ofrecen buena
indicacin de la actividad de
la enfermedad, pero son
inespecficas, ya que dan
falsos positivos. Tambin se
denominan pruebas
cardiolipnicas, ya que el Ag
utilizado no el es Ag de
treponema sino la
cardiolipina, que es un
lpido extrado de tejidos de
mamferos (generalmente
corazn de buey). Esta
prueba es positiva entre las
23 semanas de infeccin
no tratada. Existen 2
pruebas:
Prueba de la
floculacin o VRDL
o RPR: La
cardiolipina que
acta de Ag se
combina con la
reagina (Ac tipo Ig
E) que el husped
produce para dar
aglutinacin visible.
Prueba de
Wassermann o
Fijacin de
complemento: Las
reaginas del suero
fijan el
complemento en
presencia de
cardiolipinas .
Estas pruebas no
treponmicas tienen
gran sensibilidad.

Prue
trepo
Se
utiliz
para
141

conf
Los
Ag
utiliz
son
trepo
y
se
utiliz
test
de
fluor
deno
prue
FTA
y
de
aglut
(TPH
que
tiene
la
venta
de
que
es
senc
y
no
nece
micr
de
fluor
Tam
se
utiliz
ELIS
TRATAMIENTO
Penicilina, siendo
alternativas
eritromicina,
cefalosporinas y
tetraciclinas.
3. BORRELIA
3.1 Introduccin
Es una espiroqueta
de mayor tamao,
con espirales ms
amplias e
142

irregulares, son
mviles y existen
especies patgenas
para el hombre y
animales,
originndose fiebres
recurrentes y
endmicas. Es
anaerobio con
metabolismo
fermentativo y se
tien con facilidad,
son gram , se
cultivan in vitro con
medios complejos y
enriquecidos.
3.2 Especies ms
importantes
Todas las bacterias
son transmitidas por
artrpodos:
Piojo:
dando lugar
a Borrellia
recurrentis,
que provoca
fiebres
recurrentes
a nivel
mundial.
Garrapata:
produciendo
Borrellia
hispanica
que produce
fiebres
recurrentes
endmicas
en Espaa.
Tambin
por
garrapatas
se transmite
la Borrellia
turicatae y
Borrellia
hermsii que
producen
fiebres
143

recurrentes
en Estados
Unidos.
Borrellia
burgoloferi
produce la
enfermedad
de Lyme,
etc.
3.3 Patologa
1. Fiebres
recurrentes:
Se manifiesta como
una enfermedad
septicmica febril
con periodo de
incubacin de 315
das, la fiebre
persiste y continua
con periodos
afebriles de varios
das o semanas
pudindose repetir
las recidivas hasta
10 veces en
pacientes no
tratados. Esto ocurre
por las variaciones
antignicas que se
van produciendo en
el microorganismo.
A causado grandes
epidemias en la 2
guerra mundial con
un milln de casos
declarados,
calculndose en ms
de 9 millones las
infecciones reales.
Actualmente es
anormal en nuestro
pas.
2. Enfermedad de
Lyme.
Es una enfermedad
cuyo agente
etiolgico se conoce
144

desde 1981, que

produce una
reaccin
inflamatoria que en
su inicio aparece
como un eritema
crnico migratorio
(ECM),
acompaado de
mialgias, fiebre y
adenopatas
semanas o meses
ms tarde produce
complicaciones
como
meningoencefalitis,
artritis, miocarditis,
etc.
Se da en Espaa,
pero las dificultades
de su diagnstico
hace que se detecten
menos casos de los
que se podran
esperar.
3.4 Tratamiento
Penicilinas y
tetraciclinas.
3.5 aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
Se toma la muestra
de sangre en estados
febriles y se realiza
tincin de gram y
giemsa, tambin se
realiza inoculacin
en animales de
experimentacin por
ejemplo ratas y en
ocasiones tambin
se realizan tcnicas
serolgicas.
4. LEPTOSPIRA
4.1. Introduccin
145

Formada por
espiroquetas finas
con espiras
regulares muy
numerosas y
apretadas con sus
extremos
ligeramente
incursados. Son
mviles. Se tien
dbilmente con
gram siendo gram
tambin con Giensa
e impregnacin
argntica.
Se pueden cultivar
in vitro en medios
ricos en albmina y
con cidos grasos.
Su metabolismo es
oxidativo y
necesitan
condiciones
aerobias.
Existen en la
naturaleza
Leptospiras
saprfitas y
parsitas. En el
hombre pueden
originar
lectosporiasis que
originan cuadros
febriles. El
reservorio son
animales y de hecho
las lectosporiasis se
consideran
zoonosis.
4.2. Especies ms
importantes
Lectospira biflexia:
no es patgena para
el hombre y es
abundante en agua.
Lestospira
interrogans: que da
lugar a cepas
146

parasitarias.
4.3. Patologa
Presentan cuadros
clnicos variados de
leves a muy graves
y en ocasiones
mortales. Tras
incubacin de 5 das
a 3 semanas surge
una 1 fase febril,
donde la Leptospira
se disemina por el
aparato circulatorio
originando
leptospiremia. Le
sigue una 2 fase de
lectospiuria y en
algunos casos
tambin aparece en
heces. Cuando la
gravedad es extrema
aparece ictericia,
hapetomegalia,
hematuria, nefritis,
es decir principal
afectacin renal y
heptica.
4.4. Tratamiento
Tetraciclinas,
penicilinas
4.5. Aislamiento y
caractersticas
bioqumicas
Toma de muestra
sangunea en
periodos febriles. Si
la toma es de orina
se realizara a los 10
15 das de la
enfermedad y recin
cogida se intentara
visualizar la
Leptospira por
examen directo as
como aislarla en
medios especficos
147

como Jonhson
Harrys. Esto se
realiza
inmediatamente ya
que la Leptospira se
destruye con
facilidad. Si la
muestra es suero se
recurre a muestras
inmunolgicas para
demostrar la
presencia de Acs
frente a Leptospira
como pruebas de
fijacin de
complemento,
ELISA, ect.
TEMA 22.
BACILOS GRAM
NEGATIVOS NO
FERMENTADORES
DE GLUCOSA.
PSEUDOMONAS.
1.
INTRODUCCIN
2.
PSEUDOMONAS
2.1 Caractersticas
2.2 Clasificacin
Primer
grupo
(pigmentos
fluorescentes)
: P.
Aeruginosa,
P. Putria y
P.
Fluorescens.
Segundo
grupo
(producen
el muermo)
: P. Mallei y
P.
Pseudomallei.
Tercer
148

grupo
(excepcionalmente
patgenas) :
P. Cepacea,
P.
Diminuta,
P.
Maltopila y
P.
Acidovorans.
2.3 Poder patgeno.
Antigenos:
Ag.
somtico O,
Ag.
flagelar H
y Ag.
mucoide M.
Toxinas:
enterotoxina
y
eritrodermica.
Piocianina.
2.4 Patologa.
1 A nivel
respiratorio:
sinusitis,
neumona,
faringitis,
etc.
2 A nivel del
aparato circulatorio:
endocarditis
en
drogadictos
y personas
con SIDA.
3 A nivel del
aparato digestivo:
enterocolitis,
principalmente
pacientes
con SIDA.
4 A nivel del
sistema nervioso:
meningitis
149

en neonatos
e
inmunodeprimidos.
5 A nivel del
aparato urinario:
pielonefritis.
6 A nivel de la piel:
infecciones
graves por
quemaduras.
7 A nivel del
sistema
osteoarticular:
artritis.
8 A nivel de ojos y
odos:
ceguera y
sordera.
En casos graves
bacteriemia y
muerte.
2.5 Aislamiento y
caractersticas
bioqumicas.
3. OTROS
MICROORGANISMOS
NO
FERMENTADORES
DE GLUCOSA.
1.
INTRODUCCIN
Son
microorganismos
que aparecen como
saprofitos o como
comensales de
hombres y animales.
En ocasiones se
asocian a
infecciones
afectando sobretodo
a
inmunodeprimidos.
Todos son
150

incapaces de
fermentar la
glucosa. El principal
patgeno es
Pseudomona
aeruginosa,
considerado como
el segundo agente
patgeno
nosocomial despus
de E.coli.
2.
PSEUDOMONAS
2.1 Caractersticas
Son bacilos gram ,
aerobios estrictos,
oxidasa + y
mviles, con
flagelacin polar a
excepcin de P.
Mallei que es
inmvil. No
fermentan los
hidratos de carbono,
pero pueden usar los
azcares
oxidndolos. Es
catalasa + y salvo
alguna excepcin no
forman cpsula, no
son esporulados.
De 27 especies slo
8 tienen importancia
clnica por el
posible efecto
patgeno que
podran
desencadenar.
2.2 Clasificacin
Primer
grupo: se
caracteriza
por dar
pigmentos
fluorescentes.
Se pueden
151

encontrar de
forma
saprofita en
piel y tubo
digestivo,
aunque
puede
crecer en
rganos
debilitados
(quemados,
graves
infecciones)
provocando
cuadros
graves y
mortales
(septicemias).
Segundo
grupo:
generalmente
se asocian a
zoonosis,
aunque se
podran
aislar en el
hombre. P.
Mallei es el
agente
causal del
muermo
(zoonosis
transmitida
generalmente
por equinos
que produce
alteraciones
cutneas,
cuyo agente
causal es P.
mallei).
2.3 Poder patgeno
(Pseudomonas
aeruginosa).
Presentan 3
antgenos:
Antgeno
somtico O.
Antgeno
flagelar H.
152

 Antgeno
mucoide M.
Presenta tambin
toxinas:
Enterotoxina,
que provoca
nauseas,
vmitos,
dolor
abdominal,
etc.
Eritrodermica.
Y en
ocasiones
tambin
toxinas con
mecanismo
de accin
parecido a
la toxina
diftrica
que
disminuye
el consumo
de oxigeno.
Tambin es capaz
de formar ciertas
sustancias, como la
piocianina que es un
pigmento azulado
de accin
bactericida o la
fluorescena de
color verde amarillo
o incluso pigmentos
melnicos de color
marrn.
2.4 Patologa
Depender de que
los cuadros sean
graves o muy
graves, del carcter
oportunista, es
decir, de las
caractersticas del
husped.
1. A nivel
respiratorio:
153

 sinusitis
neumona
faringitis,
etc.
2. A nivel del
aparato circulatorio:
endocarditis
en
drogadictos
y personas
con SIDA.
3. A nivel del
aparato digestivo:
enterocolitis,
principalmente
pacientes
con SIDA.
4. A nivel del
sistema nervioso:
meningitis
en neonatos
e
inmunodeprimidos.
5. A nivel del
aparato urinario:
pielonefritis.
6. A nivel de la
piel:
infecciones
graves por
quemaduras.
7. A nivel del
sistema
osteoarticular:
artritis.
8. A nivel de ojos
y odos:
ceguera y
sordera.
En casos graves
bacteriemia y
muerte.
2.5 Aislamiento y
caractersticas
154

bioqumicas
Se realizar un
frotis y tincin de
gram (si la pus es
azulada se
sospechar de la
existencia de P.
aeruginosa).
Tambin tincin de
flagelos o tincin
con anticuerpos
fluorescentes para
poder visualizar
piocianina o
pioverdina. Se
cultiva a 37C.
Es importante el
estudio de los
pigmentos pudiendo
distinguir 4:
Piocianina:
color
azulado que
puede
adquirir el
medio y es
caracterstico
de P.
Aeruginosa
es el nico
que la
posee).
Pioverdina:
color verde.
Eritorgeno:
color rojo.
Melenico:
color
marrn.
Se pueden presentar
distintas colonias:
R: rugosas.
S: lisas.
M:
mucoide.
Medio de
cultivo:
Agar
155

cetrimida.
En otros
medios
como
Mckonkey,
agar sangre,
podemos
ver
hemlisis
con olor
caracterstico
a fruta,
debido a la
produccin
de
aminoacetofenona,
lo que
ayuda a su
identificacin.
Toma de
muestras:
generalmente
se realiza de
cualquier
producto
patolgico
de carcter
purulento.
Caractersticas que
ayudan a la
identificacin de
Pseudomonas
aeruginosa
1 En agar sangre
aparicin de
colonias azuladas y
olor afrutado.
2 Catalasa, oxidasa
y reduccin de
nitratos + .
3 Crecimiento a
42C.
4 Oxidacin de
glucosa y hidrlisis
de arginina.
5 Tolerancia a la
cetrimida.
156

TRATAMIENTO
Es resistente a la
mayor parte de los
antibiticos,
excepto
aminoglucosidos,
carbencilinas y
colistina.
3. OTROS
BACILOS GRAM
NO
FERMENTADORES
DE GLUCOSA.
(Ver pregunta 5 de
fotocopia)
TEMA 23.
ENTEROBACTERIAS
I
1.
INTRODUCCIN.
2.
CARACTERSTICAS
MS
IMPORTANTES.
3. ESTRUCTURA
ANTIGNICA.
3.1 Antgenos: O, H
y K (capsular).
3.2 Toxinas:
exotoxinas,
endotoxinas,
hemolisinas y
colimicinas.
4. GNEROS.
4.1 Fermentadores
rpidos de lactosa.
4.2 Fermentadores
lentos de lactosa.
4.3 No
157

fermentadores de
lactosa
5. PRUEBAS
BIOQUMICAS.
6. AISLAMIENTO
Y
CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS.
6.1 Medios de
cultivo:
Diferenciales
poco
selectivos:
McKonkey
y EMB.
Diferenciales
selectivos:
SS, XLD y
Hektoen.
Complejos
diferenciales:
KIA y TSI.
6.2 Caldos de
enriquecimiento:
Selenito.
Tetrationato.
6.3 Prueba de la
DNAasa.
1.INTRODUCCIN.
Son bacilos gram ,
aerobios y/o
anaerobios
facultativos,
mviles (con
flagelacin) o
inmviles que en la
ltima edicin del
manual de Bergey's
se clasifican en la
familia
Vibrionaceae.
Se caracterizan por
ser fermentadores
de glucosa, suelen
158

ser huspedes
habituales del tracto
gastrointestinal de
hombres y animales,
producindose en
muchas ocasiones
efectos patgenos,
en otros casos puede
actuar como
saprofito de la flora
intestinal.
Se pueden encontrar
en agua y suelo y se
pueden comportar
como oportunistas.
2.
CARACTERSTICAS
MS
IMPORTANTES.
Son
cocobacilos
gram .
Aerobios
y/o
anaerobios
facultativos.
Mviles o
inmviles.
Oxidasa .
Catalasa +.
Fermentadores
de glucosa.
Reducen
nitratos a
nitritos.
Son muy
importantes
las pruebas
del INVIC,
KIA y TSI.
Pueden
producir
gran
cantidad de
fermentos
como
gelatinazas,
descarboxilasas,
ureasas y
159

galactosidasas.
Algunos
pueden
producir
sulfhdrico.
Presentan
gran
similitud
biolgica
con los
vibrios, por
eso se
estudian
conjuntamente
aunque los
vibrios son
oxidasa +.
3.
ESTRUCTURA
ANTIGNICA
3.1.
ANTGENOS
Antgeno
somtico O:
Termosestable,
ligado a la
pared
bacteriana
siendo una
endotoxina
que
presenta
una parte
proteica
responsable
del poder
antignico,
y una parte
lipdica
responsable,
en parte de
la toxicidad.
Antgeno
capsulado
K: De
naturaleza
polisacrida
con
propiedades
antiparasitarias.
160

 Antgeno
flagelar H:
De carcter
proteico y
responsable
de la accin
patgena de
las
bacterias.
3.2. TOXINAS
Exotoxina:
son
enterotoxinas.
Endotoxinas:
responsables
del shock
txico.
Hemolisinas:
las
producen
algunas
cepas.
Colimicinas:
susutancias
son efecto
antibitico
(son txicas
para las
cepas de la
misma o
distinta
especie de
las cepas
que las
producen).
4. GNEROS DE
ENTEROBACTERIAS
Las enterobacterias
siempre han sido
clasificadas en
funcin de su
capacidad de
fermentar la lactosa.
Hay tres grupos:
Fermentadores
rpidos de lactosa:
en l se encuentran
Escherichia coli,
Klebsiella y
161

Enterobacter.
Fermentadores
lentos de lactosa: se
encuentran
Citrobacter,Serratia,
Yersinia y Shigella
sonnei. Estos dos
grupos de les
denomina
coliformes por su
capacidad de
fermentar la lactosa.
No fermentadores
de lactosa: son no
coliformes, se
encuentran
Salmonella,
Shigella y Proteus.
5. PRUEBAS
BIOQUMICAS
(Ver tabla 13.2)
6.
AISLAMIENTO Y
CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
6.1. MEDIOS DE
CULTIVO
Los medios ms
utilizados son:
1. Medios
diferenciales poco
selectivos: Permiten
ver las diferencias
entre fermentadores
y no fermentadores
de lactosa. Se
utilizan:

Mackonkey
(MK):
donde
los
fermentadore
aparecen
formando
colonias
162

rosas
y
los
no
fermentadore
colonias
incoloras
EMB
(Medio
eosina
azul
de
metileno
o
Levine)
2. Medios
diferenciales ms
selectivos: Son:
Agar
SS
Medio
XLD
Medios
Ektoen
3. Complejos
diferenciales: Son:
KIA
(agar
triple
Fe):
contiene
lactosa
y
glucosa
TSI
(triple
azucar
Fe):
contiene
lactosa,
glucosa
y
sacarosa
Tanto TSI como
KIA son medios
slidos en tubo que
constan de 2 partes:
a. Parte superior
acabada en pico de
163

flauta que permite

ver el crecimiento
aerobio
b. Parte inferior
que permite ver el
crecimiento
anaerobio.
La siembra se hace
a partir de una
colonia bien aislada,
tanto en la
inclinacin como en
el fondo.
Las reacciones que
pueden tener lugar y
sus interpretaciones
son:
Parte
Fondo
aerbica

Inclinaci
roja y fon
amarillo,
hay
fermenta
de la gluc

Alcalino cido

Parte
Fondo
aerbica

Amarillo
Amarillo,
cido
cido fermenta
de glucos
lactosa.
Rojo / Ro
Alcalino Alcalino hay
fermenta
Indica
inclinaci
/ fondo
naranja, n
Sin
hay
Alcalino
cambio fermenta
de azucar
nicamen
utiliza las
peptonas

164

Los medios KIA y

TSI permiten
observar si hay
produccin de gas
en cuyo caso
aparecer burbujas
de aire o elevacin
del medio y en
ocasiones
desquebrajamiento
del medio.
A las bacterias
productoras de gas
se les denomina
aerognicas y las
no productoras
anaerognicas.
La produccin de
sulfhdrico se pone
de manifiesto con la
aparicin de
coloracin negra,
debido a las sales
ferrosas como
consecuencia de la
reaccin del
sulfhdrico con Fe
3+.
Por tanto KIA y TSI
ponen de manifiesto
tres caractersticas:
Capacidad
para
fermentar la
lactosa
(KIA) o
lactosa y
sacarosa
(TSI).
Produccin
de gas por
fermentacin
de azucares.
Produccin
de
sulfhdrico.
6.2. Caldos de
enriquecimiento
165

Para que las

bacterias se
multipliquen y
crezcan podemos
utilizar caldos de
enriquecimiento, ej.:
caldo
selenito !
Salmonella
caldo
tetrationato
!
Salmonella
y Shigella.
Estos caldos son
muy utilizados en
las pruebas de
heces, se toma con
una torunda la
muestra y se
disuelve en dicho
caldo 24 48 h.
6.3. Prueba de la
ADNasa
Se realiza sobre un
agar que contiene
verde de metilo
como indicador y
ADN como sustrato.
Los organismos que
producen ADNasa
se identifican por la
produccin de una
zona clara alrededor
de la colonia.
TEMA 24.
ENTEROBACTERIAS
II
1.
SALMONELLA
1.1. Introduccin
1.2. Epidemiologa
1.3. Accin
patgena e inters
166

clnico
Fiebres
tifoideas
Fiebres
paratifoideas
Infeccin
gastrointestinal
1.4. Tratamiento
1.5. Aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
2. SHIGELLA
2.1. Introduccin
2.2. Accin
patognica e inters
clnico
Ag O y K
Exotoxinas
(neurotoxina,
citotoxina y
enteroinvasiva)
2.3. Tratamiento
3.
ESCHERICHIA
COLI
3.1. Introduccin
3.2. Clasificacin
segn cuadro
clnico
Enteropatgenas
Enterotoxgena
Enterohemorrgica
Enteroinvasiva
3.3. Profilaxis y
tratamiento
3.4. Aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
4. YERSINIA
167

4.1. Introduccin
4.2. Especies ms
importantes
Yersinai pestis
(bubnica,
pulmonar y
septicmica)
Yersinia
pseudotuberculosis
Yersinia
enterocoltica
4.3. Aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
5. OTRAS
ENTEROBACTERIAS
(OPORTUNISTAS)
1.
SALMONELLA
1.1.
INTRODUCCIN
El gnero
Salmonella es el
responsable de un
gran nmero de
gastroenteritis por
los alimentos.
Es mvil, con
flagelacin
pertrica, no
coliforme, no
esporulado y casi
nunca capsulado.
Tiene un carcter
ms o menos
patgeno segn las
especies.
1.2.
EPIDEMIOLOGA
Las fuentes ms
frecuentes de
infeccin son las
168

aves (pollos, patos,

etc.) y sus productos
(huevos).
Los brotes suelen
aparecer por
ingestin de
alimentos que
contienen huevos
crudos o carnes
poco hechas, dado
que la Salmonella es
sensible al cido
gstrico se tienen
que ingerir un gran
nmero de
microorganismos
(106109 o/ml. o
gr.) para que
aparezcan los
sntomas,
multiplicndose en
el intestino delgado.
1.3. ACCIN
PATOGNICA E
INTERS
CLNICO
Su accin
patognica va a ser
dependiente de los
antgenos
estructurales y
toxinas. Poseen 3
antgenos:
Antgeno
somtico O.
Antgeno
flagelar H.
Antgeno
capsular K.
Tambin posee una
endotoxina y una
enterotoxina
responsable del
efecto irritante y en
ocasiones citotxico
sobre el tracto
intestinal.

169

Las especies del

gnero Salmonella
pueden actuar sobre
el hombre y
animales, los ms
importantes son: S.
typhi, S. paratyphi,
S. choleraesuis y S.
enteritidis.
Los principales
cuadros clnicos
son:
a. Fiebres
tifoideas(S. Typhy)
y Fiebres
paratifoideas(S.
paratyphi)
La Salmonella tras
ser ingerida llega al
intestino delgado y
penetra por
endocitosis
destruyendo parte
de la mucosa
intestinal. Una vez
dentro la
Salmonella son
fagocitadas por
macrfagos
originando una
primera
bacteriemia que
tiene una duracin
de 815 das, a
partir de aqu hay
un comienzo brusco
de signos y
sntomas de la
enfermedad.
La Salmonella en
sangre es de nuevo
captada por los
mononucleares y de
aqu pasa al bazo,
hgado, etc.
produciendo la
multiplicacin de
nuevas Salmonellas,
170

volviendo de nuevo
al intestino donde
provocan unas
placas ulceradas con
necrosacin
denominadas placas
de peyer y en casos
ms graves pueden
originar perforacin
y hemorragias.
Las fiebres pueden
alcanzar 40C y
durar varias
semanas. Van
acompaadas de
dolores de cabeza,
anorexia, debilidad,
dolor muscular, etc.
El germen se
elimina a travs de
las heces
(Salmonella en
heces es patgeno)
b. Infecciones
gastrointestinales
Es la infeccin ms
frecuente en caso de
Salmonella. El
periodo de
incubacin es de
848 horas de haber
ingerido el alimento
contaminado.
Aparecen nauseas,
vmitos, etc.
El sndrome
requiere tratamiento
de
aproximadamente 6
das. Puede ser que
no existan bacterias
en sangre , sin
embargo s aparecen
en heces.
Las personas ms
propensas a padecer
171

la infeccin son
nios, ancianos e
inmunodeprimidos.
Tras una infeccin
de fiebres tifoideas
un 13% se vuelven
portadores crnicos
eliminndolo en las
heces durante largos
periodos de tiempo.
Desde el punto de
vista
epidemiolgico
tiene gran
importancia dado
que de este modo se
contribuye a la
diseminacin del
patgeno.
En las salmonelosis
no tifoideas menos
del 1% de los
pacientes van a
seguir excretando el
bacilo por heces.
1.4.
TRATAMIENTO
Ampicilina,
cloranfenicol,
trimetropim,
sulfametoxazol y
cefalosporinas.
1.5.
AISLAMIENTO Y
CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
Toma de muestras
Se realiza en
alimentos
contaminados,
sangre y heces.
En caso de
enfermedades
172

gastrointestinales
son importantes los
coprocultivos y
alimentos
sospechosos.
En casos de fiebres
tifoideas y
paratifoideas las
muestras se
obtienen de sangre,
orina y heces.
2. SHIGELLA
2.1.
INTRODUCCIN
Bacilo gram , no
esporulado, no
flagelado, no
produce
desaminasas, ni gas,
ni H2S.
2.2. ACCIN
PATOGNICA
Se debe a los
factores antignicos
0 y K y a la
produccin de
toxinas,
principalmente
exotoxinas que
presentan
propiedades
citotxicas,
neurotoxicas y
enteroinvasivas.
La toxina esta
compuesta por 2
subunidades:
subunidad
b, que acta
adheriendose
a las clulas
del epitelio
gastrointestinal
(efecto
173

enteroinvasivo).
subunidad
a, cuyo
mecanismo
consiste en
el bloqueo
de la
sntesis
proteica
(efecto
citotxico
que origina
un estado de
necrosis
celular con
la
consiguiente
formacin
de ulceras,
hemorragias
y
perforaciones,
siendo un
cuadro
clnico muy
grave.
Cualquier especie
de Shigella al llegar
al intestino
comienza a ejercer
la accin toxica para
pasar despus al
coln complicando
el proceso, lo que
origina neurosis y
en general los
signos y sntomas
anteriormente
descritos.
Los cuadros
diarreicos van
acompaados de
dolor clico,
nauseas, vmitos,
fiebre y
deposiciones cada
vez ms
sanguinolentas
(disentera bacilar),
con moco y pus, los
ms afectados son
174

los nios.
2.3.
TRATAMIENTO
El mismo que para
Salmonellas y
tambin
fluoroquinolonas.
3.
ESCHERICHIA
COLI
3.1.
INTRODUCCIN
Y
CLASIFICACIN
SEGN EL
CUADRO
CLNICO
Bacilo gram
negativo, no
esporulado, mvil
con flagelos
perticos, raramente
capsulado y su
capacidad
antignica se debe a
los Ag O y K
confirindole
propiedades
antifagocitarias y de
resistencia frente a
sustancias
bactericidas,
proporcionndole
con ello alto poder
invasivo.
Tambin presenta
distintos tipos de
toxinas, as los
cuadros clnicos de
las cepas
patognicas para el
hombre son ms o
menos variables
segn el tipo de
toxina que la
origina:
175

 Escherichia coli
enteropatgena:
forma una
enterotoxina
citotxica con
cuadros diarreicos
en brotes
epidmicos que
afecta
principalmente a
nios y lactantes.
Escherichia coli
enterotoxgena:
forma una
enterotoxina
semejante a la del
Vibrio cholerae,
provocando
procesos diarreicos
que afecta a nios y
adultos. Produce la
diarrea del viajero.
Escherichia coli
enterohemorrgica:
es similar a Shigella
disenteriae que
produce procesos
diarreicos graves de
tipo hemorrgico
(sangre).
Escherichia coli
enteroinvasiva: se
presenta
principalmente en
nios y adultos
produciendo
cuadros diarreicos
graves con fiebre,
dolor abdominal,
diarreas con gran
contenido de moco
junto con leucocitos
y PMN.
En Escherichia coli
no se recomienda
dar profilaxis
antibitica para
diarrea del viajero
con el fin de evitar
cepas resistentes, s
es conveniente
176

tomar precauciones
como tomar agua
embotellada, no
consumir hortalizas
crudas, etc. En caso
de padecer esta
infeccin se
proceder a la
restauracin del
equilibrio
electroltico.
3.2.
TRATAMIENTO
El tratamiento en
lactantes es
neomicina y en
adultos
fluorquinolonas.
3.3.
AISLAMIENTO Y
CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
Escherichia coli es
saprofito del tubo
digestivo y en
general su presencia
en agua y alimento
es indicativo de
contaminacin fecal
reciente.
A parte de
trastornos
gastrointestinales
puede originar otras
lesiones urinarias,
biliares, infeccin
de heridas y lesin
en meninges
principalmente en
neonatos.
Es uno de los
principales
microorganismos
productores de
infecciones
nosocomiales.
177

En cuanto a las
pruebas
bioqumicas,
destacar:
las de la
tabla 13.2
las pruebas
del IMVIC
Kliger
4. YERSINIA
4.1.
INTRODUCCIN
Bacilo o cocobacilo
gram negativo con
flagelacin
peritrica, moviles a
25 C e inmoviles a
37C. No fermentan
la lactosa, no
forman esporas y
excepcionalmente
pueden presentar
capsula.
4.2. ESPECIES
MS
IMPORTANTES
Son: Yersinia pestis
Yersinia
pseudotuberculosis
Yersinia
enterocolitica
1. YERSINIA
ENTEROCOLITICA
Afecta
principalmente a
animales aunque
tambin al hombre y
principalmente a
nios.
Es un patgenos
capaz de crecer a
temperaturas de
178

refrigeracin (4C),
por lo que es un
microorganismo a
tener en cuenta en
industria
alimentaria.
Se requiere un
inculo de 109 o
/gr para adquirir la
infeccin. Tras un
periodo de
incubacin de 47
das aparecen
sntomas clnicos
como: dolor
abdominal, fiebre y
en ocasiones
diarrea. En los casos
en los que no hay
diarrea se confunde
la yersioniosis con
apendicitis aguda.
Afecta a nios de
515 aos y
principalmente en
Europa.

Es sensible a
aminoglucosidos,
cloranfenicol y
trimetroprimsulfametoxaz
No se recomienda la
utilizacin de Ab en
caso de que los
sntomas solo sean
gastrointestinales,
ya que la infeccin
suele ser
autolimitada.
2. YERSINIA
PESTIS
Es el agente causal
de la peste en el
hombre. Se origina
de forma epidmica,
da lugar a cuadros
agudos y febriles
con alta inflamacin
179

de ganglios
linfticos,
hemorragias
internas, petequias y
cuadros
septicmicos y de
neumona.
Es grave y muy
contagiosa aunque
para ello es
necesario la
presencia de ratas y
roedores,
encargados de su
diseminacin. Se
origina en lugares
de salubridad baja.
Los factores de
virulencia que
determinan la
gravedad de
Yersinia pestis son:
Toxina
murina: de
carcter
proteico;
bloquea la
utilizacin
de oxgeno
por parte de
ciertas
clulas y en
general slo
se liberan al
medio
cuando
muere la
bacteria.
Endotoxinas:
liberadas
por la
bacteria en
el
transcurso
de la
enfermedad;
estn
relacionadas
con el
180

proceso
febril.
Antgeno V:
le confiere
propiedades
antofagocitarias.
Coagulasas
y
fibrinolisinas.
A Yersinia pestis
tambin se le
denomina Yersinia
bubnica; Llega al
hombre a travs de
pulgas infectadas
por ratas con peste.
Tras la picadura de
la pulga atraviesa
los vasos linfticos
y de aqu a los
ganglios donde se
multiplica formando
bubones
(inflamacin de los
ganglios). De aqu
pasa a sangre y
posteriormente se
disemina por bazo,
hgado, pulmones,
piel y mucosas
donde aparecen
lesiones con
carcter pigeno,
hemorrgico,
necrtico y
edematoso.
En casos graves
puede aparecer
coagulacin
intravascular por
accin de las
coagulasas y
hemorragias por
accin de las
fibrinolisinas,
colapso circulatorio,
toxemia
generalizada y
muerte.
Existen varias
181

formas clnicas
dependiendo de su
localizacin. Las
ms importantes
son:
Peste bubnica: Es
la ms frecuente y
tras un periodo de
incubacin de 37
das aparecen los
primeros sntomas
con escalofros,
vmitos, bubones en
ingles, axilas y zona
submaxilar. Si no
hay tratamiento se
produce la muerte.
Peste pulmonar: Es
una complicacin
de la peste
bubnica,
producindose una
afectacin pulmonar
grave con
insuficiencia
respiratoria, siendo
altamente mortal.
Peste septicmica:
Corresponde a los
ltimos estados de
la peste en
cualquiera de sus
formas, pulmonar o
bubnica. Es
generalmente
mortal.
4.3.
AISLAMIENTO Y
CARACTERSTICAS
BIOQUMICAS
La toma de muestra
es a travs de
exudados
purulentos, bubn,
sangre, LCR, tejido
pulmonar, esputo,
etc.
5. OTRAS
182

ENTEROBACTERIAS
OPORTUNISTAS
Klebsiella,
Enterobacter
y Serratia
producen
enfermedades
nosocomiales.
Klebsiella
neumoniae
es el agente
etiolgico
del 3% de
las
neumonas
de origen
bacteriano.
Afecta
principalmente
a individuos
con diabetes
mellitus y
alcohlicos
con
infeccin
pulmonar
crnica.
Enterobacter
se asocia a
infecciones
de heridas,
quemaduras,
e
infecciones
del tracto
urinario y
respiratorio.
Serratia
coloniza el
tracto
respiratorio
y urinario
de pacientes
hospitalizados.
Citrobacter
se asocia a
infecciones
respiratorias
y urinarias
y, en
ocasiones,
183

en neonatos
se ha
aislado en
meningitis.
Proteus,
Morganella
y
Providencia
se han
relacionado
con
enfermedades
del tracto
urinario;
tienen la
capacidad
de
hidrolizar
urea con
liberacin
de
amoniaco
produciendo
la
alcalinizacin
de la orina
que induce
a la
formacin
de clculos
renales. La
movilidad
de Proteus
favorece la
invasividad
del tracto
urinario. El
gnero
Providencia
se ha
asociado a
bacteriemias
en pacientes
con
catteres
venosos.
TEMA 25.
LEGIONELLA,
GARDNERELLA,SPIRILI
HIMUS,STREPTOBACILL
MOVILIFORMES
Y
184

CALYNMATOBACTERIU
GRANULOMATIS
1.
LEGIONELLA
NEOMOFILA
1.1. Introduccin
1.2. Hbitat
natural y patogenia
de la infeccin
1.3. Inters clnico
1.4. Aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
1.5. Tratamiento
2.
GARDNERELLA
VAGINALIS
2.1. Introduccin
2.2. Hbitat
natural e inters
clnico
2.3. Aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
2.4. Tratamiento
3.
STREPTOBACILLUS
MOVILIFORME
(produce la Fiebre
Norverhill)
4. SPIRILIUM
HIMUS (produce la
Fiebre de Sodoku)

5.
CALYNMATOBACTERIU
GRANULOMATIS
(produce
Granuloma inguinal
185

o Donovalosis)
1. LEGIONELLA
NEOMOFILA
1.1. Introduccin
Presenta 29
especies, tres
subespecies y
distintos subgrupos.
De ella Legionella
neomofila es el
patgeno mas
frecuente. Se aisl
por 1 vez en 1976 a
partir del tejido
pulmonar en un
brote de pulmona
ocurrida en un
grupo de legionarios
de Philadelfia por lo
que se conoce como
la enfermedad de
los legionarios.
Es un bacilo gram
, aerobio, de 0,5
2 micras que
produce potentes
citotxicas que
pueden ser
responsables de la
lesin tisular del
pulmn. La mayor
parte de las especies
posee flagelos.
Todas las especies
son catalasa y
gelatina +, en
general, no
fermentan ni oxida
HC y es nitrato y
urea . Los
aminocidos son su
mayor fuente de
energa y todas las
especies necesitan
N cistena para su
crecimiento.

186

1.2. Hbitat
natural y
patogenia de la
infeccin
El hbitat es el agua
y a partir del agua
se pueden
contaminar
residencias,
cuarteles, hospitales
Este
microorganismo
resiste T de hasta
60 C y se a aislado
en agua fra y
caliente, sistemas de
aire acondicionado
con desages. Los
aerosoles que se
generan en estos
ambientes son la
principal fuente de
infeccin. Los
pacientes de alto
riesgo que pueden
adquirir en
enfermedades a
travs de esta fuente
en los hospitales.
Legionella es un
parsito intracelular
facultativo, se
desarrolla en el
interior del
citoplasma de
clulas respiratorias,
en ella se libera
enzimas como
lipasa, nucleasas,
fosfatasas y
potentes enzimas
proteolticos que
dan lugar a la
destruccin celular.
En el organismo
humano se replica
preferentemente en
los macrfagos
alveolares.
187

1.3. Inters
clnico
La enfermedad de
los legionarios es
una neumona
aguda con
manifestaciones
multisistmicas que
pueden presentarse
como brotes
epidmicas e
infecciones
nosocomiales. Tiene
principal influencia
en los meses de
verano siendo mas
frecuente en el
hombre que en la
mujer.
El periodo de
incubacin es de
una semana. La
enfermedad
comienza con fiebre
aguda, mialgia,
debilidad y tos no
productiva.
Posteriormente
comienza los
sntomas
respiratorios con
esputo
sanguinolento o
purulento, disnea,
dolor pleural,
bradicardia,
anorexia y en
general un cuadro
tpico de neumona
atpica. Tambin va
acompaado de
sntomas
extrapulmonares
como confusin,
desorientacin,
vmitos, nauseas,
diarrea
La radiografa del
trax muestra un
188

filtrado pulmonar y
a menudo derrame
pleural. Otras
alteraciones
analticas es un
aumento de
creatinina,
hipolatremia,
hipofosforemia y
aumento de
transaminasas sin
ictericia, aumento
de VSG e
insuficiencia renal.
Los factores que
favorecen la
infeccin son la
inmunosupresin,
ciruga reciente,
edad elevada y
tabaquismo.
Adems produce un
cuadro semejante a
la gripe que se
denomina fiebre de
Pontiac,
caracterizado por
fiebre, tos, mialgia,
dolor torcico,
diarrea
1.4. Aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
Toma de muestras:
Generalmente son
respiratorias aunque
tambin existen
muestras
extrarespiratorias
como liquido
peritoneal,
pericardico,
exudados de heridas
y en ocasiones
hemocultivo.
El esputo es una
muestra valida para
189

el cultivo de
Legionella ya que
no forma parte de la
flora normal. Si el
paciente no
expectora, se tomara
una muestra por
broncoscopia.
En el transporte se
debe evitar el uso
con solucin salina
porque el Na inhibe
el crecimiento de
Legionella.
En cuanto al
diagnostico
microbiolgico
destacaremos:
Examen directo: se
pueden hacer
tinciones de gram,
giensa, Jimnez
aunque son muy
tiles las tcnicas de
inmunofluorescencia
directa. El hecho la
inmunofluorescencia
sea negativa no
excluye la
enfermedad y es
necesario realizar
un cultivo.
Pruebas
serolgicas:
principalmente RIA
y ELISA el
inconveniente es
que no estn
comercializadas.
Tcnicas de
hibridacin de ADN
con PCR.
En cuanto a los
medios de cultivo el
ms utilizado es:
Bcye . Las
placas se incuban a
35 C en atm. De
190

CO2 con humedad,

un mnimo de 7 das
algunos laboratorios
incuban 2 semanas
antes de desecharlas
como , la
identificacin de las
colonias se hacen
comparndola con
una cepa control a
las que se dan pases.
1.5. Tratamiento
Principalmente
eritromicina y en
ocasiones
rifampicina.
2.
GARDNERELLA
VAGINALIS
2.1. Introduccin
Se suelen agrupar
en bacilos gram
pero se caracterizan
por tener una pared
laminar no tpica de
gram + y gram ,
por tanto, es un
bacilo gram
variable, es
anaerobio
facultativo y
oxidasa y catalasa
.
2.2. Hbitat
natural e inters
clnico
Se encuentra en
flora vaginal de
mujeres sanas de un
20 70 % este
microorganismo
desempea un papel
importante en el
sndrome de
vaginosis
191

bacteriana
caracterizado por:
Exudado
vaginal
maloliente
Ph vaginal
mayor 4, 5
Flujo
vaginal
abundante
Pruebas de
las aminas
+. Esta
prueba
consiste en
mezclar una
gota de
KOH al
90% con
una gota de
exudado
vaginal y si
es + se
aprecia un
fuerte olor a
pescado
podrido.
Presencia
de clulas
CLUE, que
son clulas
epiteliales
recubiertas
de bacterias.
En vaginosis
bacteriana el
sndrome se
caracteriza por la
presencia de al
menos 3 de los
sntomas expuestos,
tambin se ha
descrito bacteriemia
debido a
Gardnerella
vaginalis sobre todo
en la fiebre post
parto o post aborto.
Tambin esta
asociado a
meningitis neonatal,
192

peritonitis, abscesos
hepticos e
infecciones
urinarias.
2.3. Aislamiento y
Caractersticas
bioqumicas
La toma de muestra
se realizara de
exudado vaginal y
es preferible la toma
de 2 muestras:
para
examen
directo
para cultivo
que se
realiza entre
48 72 h
con medios
semiselectivos
con agar
sangre
humana con
colistina y
cido
nalidsico.
Para su
determinacin se
utilizan pruebas
bioqumicas,
enzimticos y
cromatografitas
acompaados de
APIs.
2.4. Tratamiento
Metromidazol,
clindamicina y
gentamicina.
3.
STREPTOBACILLUS
MOVILIFORMES
Son bacilos gram
pleomrficos y
anaerobios
193

facultativos. Se
encuentra en
nasofaringe de ratas.
El hombre adquiere
la infeccin por
mordedura,
araazos de ratas u
otros roedores.
Produce la fiebre de
Norverhill que se
adquiere tras ingerir
leche, agua u otra
comida
contaminada.
La fiebre por
mordedura de rata
consiste en
aparicin rpida de
fiebre, cefaleas,
nauseas y en un 75
% aparecen eritema
primero macular
papilar en la palma
de la mano y planta
del pie.
Tambin puede
haber diarreas y en
la mitad de los
pacientes poliartritis
migratoria.
En ocasiones
existen
complicaciones
graves como
neumonas,
meningitis,
endocarditis.
Se asla en
hemocultivos y
lquido sinovial y
crecen en medio con
agar sangre y
chocolate a 35
El tratamiento:
penicilina,
estreptomicina y
194

tetraciclina.
4. SPIRILiUM
HIMUS
Produce la fiebre de
Sodoku, se produce
por mordedura de
rata y la
sintomatologa va a
ser igual que el del
Streptobacillus
moviliformes.

CALYNMATOBAC
Son bacilos gram ,
pleomorficos, no
mviles y
capsulados.
Produce la
donovalosis o
granuloma
inguinal. La
enfermedad se
adquiere por va
sexual y se
caracteriza por
aparicin de
lesiones ulcerosas
en el rea ano
genital y algunas
veces tambin en el
rea extragenital. La
mejor muestra es
una biopsia donde
se realiza tincin de
giemsa. La
donovalosis se
caracteriza por la
presencia de
cuerpos de Donovan
que consiste en
reacciones donde el
microorganismo
aparecer como
racimos teidos de
azul oscuro o negro
en el citoplasma de
clulas
mononucleares.
195

No existen medios
de cultivo eficaces.
Tratamiento es
penicilina,
tetraciclina y
gentamicina.
TEMA
26.IDENTIFICACIN
BACTERIANA
1. PRUEBA DE
IDENTIFICACIN
Epidemiologa.(1
evaluacin)
Morfologa.(1
evaluacin)
Tinciones.(1
evaluacin)
Pruebas de
susceptibilidad.(tema
de antibiticos)
2. SISTEMAS
COMERCIALES
Y SISTEMAS
AUTOMTICOS
2.1 Sistemas
multipruebas:
Macrotcnicas:
KIA y TSI.
Microtcnicas:
API, Tubos,
otros.
Sistemas
rpidos:
tiras
reactivas,
mtodos
automticos.
2.2 APIS.
Introduccin.
Fundamento.
Material.
Reactivos.
Tcnica:
1 Preparacin de la
196

galera.
2 Preparacin del
inculo.
3 Realizacin de la
inoculacin.
4 Periodo de
incubacin.
5 Resultados e
interpretacin.
API
Es un sistema de
1020 microtubos
que contienen los
medios
deshidratados. Se
cultivan con una
suspensin
bacteriana que los
rehidrata. Durante la
incubacin el
metabolismo del
microorganismo
origina cambios en
el color del medio o
bien se produce al
aadir reactivos.
La interpretacin de
estos cambios se
produce mediante
tablas de lectura u
otros sistemas
automticos.
Si la practica la
realizamos
manualmente
obtendremos un
perfil numrico que
nos servir para la
identificacin de
microorganismos.
(Ver figura 17.15 y
libros de
Staphylococos y
197

Enterobacterias)
TEMA 27.
ANTIMICROBIANOS
Y PRUEBA DE
SENSIBILIDAD A
LOS
ANTIMICROBIANOS
1.
CLASIFICACIN
2.
CONSIDERACIONES
PRCTICAS
2.1. Eleccin de
antibitocos
2.2. Controles
durante la
antibioterapia
2.3. Fallo en la
respuesta
2.4. Asociacin de
antibitocos
3.
ANTIBITICOS
EN
SITUACIONES
ESPECIALES
3.1. Embarazo
3.2. Lactancia
3.3. Antibiticos
en insuficiencia
renal
4.
DEFINICIONES
4.1. Antibitico
sensible
4.2. CMI
4.3. CMB
198

4.4. Coeficiente
teraputico
4.5. Resistencia
5. MTODOS
DE
ANTIBITICOS
5.1. Dilucin
Slido
Lquido
5.2. Difusin.
Fuentes de error son
debidas a:
Medio
Antibiticos
Microorganismo
Observador
5.3. Eluccin de
discos
6.
RESISITENCIA A
LOS
ANTIMICROBIANOS
6.1. Alteracin de
permeabilidad
6.2. Alteracin de
blanco o diana
6.3. Inactivacin
enzimtica
6.4. Reflujo
6.5. Bloqueo
1.
CLASIFICACIN
1.1.
LACTMICOS
En su estructura
qumica presentan
un anillo
lactmico.
199

Su mecanismo de
accin se basa en la
inhibicin de la
formacin de
peptidoglucano
componente
esencial de la pared
celular. Para ello se
fijan a las PDP/PFD
(protenas fijadoras
de penicilina). Su
accin suele ser
bactericida y los
grupos principales
son:
Penicilinas
Cefalosporinas
Carbapenemas
Monobactamas
INBIL (inhibidores
de lactamasa)
1. PENICILINAS
La base se estos
compuestos es el
6amino
penicilnico
(6APA).
Dentro de las
penicilinas hay
varios grupos:
Penicilina G y V: Se
suelen administrar
oralmente. Son
tiles para gram
positivos como
neumococo,
streptococo,
strptococo
pyogenes,
anaerobios,
espiroquetas y
enterococo. No es
activa frente a
enterobacterias.
Presenta baja
toxicidad y se
asocian a procana
200

y benzatina para
prolongar la
semivida plasmtica
(concepto de tiempo
de activacin de los
Ab en el
organismo),
tambin se puede
unir al probenecid
que bloquea su
excrecin por los
tbulos renales.
Aminopenicilinas:
Se destacan la
ampicilina y
amoxicilina. Son de
amplio espectro
(pueden actuar
sobre gram
positivos y gram
negativos). Actan
bien sobre
enterobacterias
aparece resistencia
en cepas de
Escherichia coli.
Isoosazolil: Son
penicilinas
resistentes a
penicilasas y son
muy tiles como
tratamiento de
eleccin para
Staphylococos
aureus. Las
principales son:
oxacilina,
cloxacilina y
meticilina.
Carboxipenicilinas:
Se recomiendan
para gram
negativos,
principalmente para
Enterobacterias y
Psudomonas. La
principal es la
carbenicilina.
Ureidopenicilinas:
Muy utilizado frente
a enterococos y
streptococos,
201

destacando la
piperacilina.
2. Cefalosporinas
El ncleo es el
7aminocefalosporamico
(7ACA)
Proceden de
productos de
fermentacin de
hongos del genero
Cefalosporium cuyo
anillo bsico es el
anterior.
Se clasifican por
generaciones
estando en
desarrollo la 4
generacin;
1 generacin:
actan sobre gram +
y tiene una accin
moderada sobre
gram . Destacan:
cefalotina y
cefactor.
2 generacin: tiles
sobre gram y
algunos anaerobios.
Destacan cefoxitina
y cefamandol.
3 generacin:
aunque disminuye
su actividad sobre
gram + aumenta
sobre gram .
Destaca
Cefotaxima. Hoy
existen preparados
activos sobre va
oral como cefixima.
3. Carbapenemas
El principal es
IMIPENEM. Tiene
la siguiente
estructura:
202

Es inestable y
destruido por
dihidropeptidasas
renales por lo que se
une a lafilaxtatina
para evitarlo. Tiene
un gran espectro de
accin generalmente
todos los cocos
gram + y gram ,
bacilos gram +,
anaerobios y la
mayor parte de
enterobacterias y
algunas
pseudomonas son
sensibles a l.
Es resistente a
Staphilococo
Aureus y no se
absorbe por va oral.
4. Monobactamas:
Son derivados
monociclicos cuyo
principal
representante es
aztreonam cuya
formula es:
Se caracteriza por
tener un espectro
ms reducido siendo
activo solo gram
especialmente
pseudomonas y
enterobacterias
5. INBIL
Inhibidor de
lactamasa. Su
actividad
antimicrobiana es
reducida pero su
unin irreversible
sobre algunos
lactamasa
impiden que estos
destruyan los Ab
203

lactmicos por lo
tanto estos
inhibidores suicidas
deben ir asociados a
otros Ab
lactmicos
proporcionando un
aumento de su
espectro. Destaca el
cido clavulanico,
cuya estructura es:
1.2.
INHIBIDORES
DE LA SNTESIS
PROTEICA
Antibiticos que
actan sobre la
subunidad 30s de
los ribosomas
Aminoglucsidos:
Son
antibiticos
naturales y
semisintticos.
Son
potentes
bactericidas
y pueden
derivar de
Streptomyces
o
Micromonospora
(son
hongos).
Los
principales
aminoglucosidos
son:
Streptomicina,
Gentamicina,
Trobamicina,
Neomicina,
Amikacina.
El mecanismo de
accin se centra en
el ribosoma en la
subunidad 30s,
producindose una
inhibicin de la
204

sntesis proteica o
protenas
defectuosas por
error en la lectura
del ARNm. Son
muy activos sobre
gram entre ellos
Psudomonas,
Acinetobacter y
sobre gram + como
Staphylococo
aureus.
Pueden presentar
sinergismo con
lactmicos, con
los que
frecuentemente se
asocian.
Las reacciones
adversas ms
importantes son
toxicidad renal y
auditiva.
Tretraciclinas:
Son
antibiticos
de amplio
espectro
bacteriosttico
que se unen
a la
subunidad
30S del
ribosoma
inhibiendo
la sntesis
proteica.
La ms utilizada es
la Doxiciclina que
presenta un amplio
espectro sobre gram
y + (Ej: Brucella,
Vibrio, Micoplasma,
Micobacterium,
Clamidia, etc.).
En la actualidad el
nivel de resistencia
de Neumococos y
205

Enterobacterias es
elevado.
No se utilizan en
nios menores de 8
aos ya que pueden
afectar a la
denticin y huesos.
Pueden provocar
trastornos
gastrointestinales y
hepticos.
5

6
Tetraciclina
CH2OH
Clortetraciclina
CH2OH
Doxicilina
OH CH3
Antibiticos que
actan sobre la
subunidad 50s de
los ribosomas:
Cloranfenicol:
Su accin se
sita en la
subunidad
50s del
ribosoma,
impidiendo
la
transpeptidacin.
Su espectro
abarca gram
y + (Ej:
anaerobios,
espiroquetas,
micoplasmas,
etc.),
aunque se
suelen
reservar
para
infecciones
graves ya
que produce
toxiinfeccin
medular.
Si: R es NO2
>
Cloranfenicol.
206

R es
CH2SO2>
Tranfenicol

Macrlidos:
Dentro de
este grupo
tenemos dos
principalmente:
Eritromicin
que
procede
de
Streptomyces
Es
un
antibitico
de
medio
espectro
que
acta
a
nivel
de
la
subunidad
50s
impidiendo
la
transpeptidac
y
translocacin
inhibiendo
la
elongacin
de
la
cadena
proteica.
Su
espectro
abarca
gram
+,
Micoplasma,
Trachomatis
Legionella,
siendo
resistentes
las
Enterobacter
207

 Clindamicin
es
un
antibitico
frente
a
anaerobios
y su
espectro,
mecanismo
de
accin
y
farmacologa
es
parecida
a
los
macrlidos.
Se
considera
por
esto
compuesto
similar
a
los
macrlidos.
1.3.
QUINOLONAS Y
FLOXACINAS
Son quimioterpicos
que se obtienen por
sntesis qumica; su
mecanismo de
accin se basa en la
inhibicin de la
ADNgirasa,
enzima necesaria
para la duplicacin
del ADN.
Son bactericidas.
El primero que se
introdujo fue el
cido nalidxico
como antisptico de
vas urinarias.
La norfloxacina
208

supuso una
ampliacin de
espectro sobre gram
positivos y
pseudomonas.
La Ciprofloxacina
se puede utilizar en
infecciones distintas
de las vas urinarias
debido a la buena
concentracin que
alcanza en los
tejidos. Presenta
buena actividad
sobre parasitos
intracelulares y
amplio espectro.
Puede actuar sobre
Rickettsias,
micobacterias,
parsitos
intestinales y
genitales. Se puede
utilizar por va oral.
El uso desmedido
de las quinolonas
llevan a un aumento
de la resistencia.

R1
Ac. Nalidxico CH2CH3
Norfloxacina CH2CH3
Ciprofloxacinol
1.4.
GLUCOPPTIDOS
Destacan la
vancomicina y
teicoplamina.
Tienen actividad
sobre los gram
positivos. Presentan
toxicidad renal y
tica y no se
absorben por oral.
Estn reservados
para infecciones por
gram positivos
resistentes. Su
mecanismo de
209

accin se dirige
contra la formacin
de la pared celular
inhibiendo la
sntesis de
peptidoglucanos.
1.5.
SULFAMIDAS Y
TRIMETROPRIM

Ambos inhiben a
distintos niveles la
sntesis de cido
flico. Se utiliza el
trimetroprimsulfametoxaz
Las sulfamidas
derivan del
paraaminobencenosulfamida
cuya estructura es:
Suele administrarse
por va oral. No se
utiliza en neonatos
porque compite con
la bilirrubina.
Presenta un amplio
espectro que
comprende gram
positivos, gram
negativos,
actinomicetales,
clamidias y algunos
parsitos como
toxoplasma,
plasmodium, etc.
1.6.
NITROIMIDAZOLES
Destaca el
metroimidazol que
es bactericida.
Acta sobre el ADN
y es til sobre
anaerobios y
algunos parsitos
como triquina,
tricomonas y
entamoeba.

210

1.7. OTROS
ANTIBITICOS
Nitrofurantona:
es un
antisptico
de vas
urinarias y
acta sobre
gram
positivos y
gram
negativos.
cido
fusdico:
acta sobre
Staphylococos
aureus
Rifampicina:
esun
antituberculoso;
tambin
acta contra
el
meningococo,
gonococo,
clamydias y
haemophylus.
Fosfomicina:
de origen
espaol, de
amplio
espectro
que acta a
nivel de la
pared
celular.
2.
CONSIDERACIONES
PRCTICAS
2.1. ELECCIN
DEL
ANTIBIOTICO
Para elegir un
frmaco hay que
tener en cuenta:
microorganismo
condiciones
de la
211

infeccin
condiciones
del paciente
Siempre que sea
posible, el
tratamiento debe ser
elegido o iniciado
slo despus de que
se haya determinado
el agente etiologico;
esto nos obliga a un
conocimiento de los
principales
grmenes
implicados en
infecciones
especficas as como
el Ab ms
especfico para cada
grmen.
Un punto
importante a tener
en cuenta son las
condiciones del
paciente. Tenemos
que considerar la
posible historia de
hipersensibilidad,
estado inmunitario,
funcin heptica y
funcin renal. Una
vez determinadas
dichas condiciones
debemos elegir el
Ab que debe
cumplir los
siguientes
requisitos:
ser el ms
activo y
especfico, a
ser posible
bactericida
menos
txico
ms barato
2.2. CONTROL
DURANTE LA
ANTIBIOTERAPIA

212

Son necesarios
debido a la
aparicin de efectos
secundarios. Estas
medidas son ms
necesarias en
aquellas
condiciones en las
que se prevea un
mayor riesgo por
edad, alteracin
heptica, renal, etc.
Estas medidas
incluyen controles
qumicos,
hematolgicos,
bioqumicos,
bacteriolgicos, etc.
2.3. FALLOS DE
RESPUESTA
Ante este problema
se debe plantear de
nuevo toda la
sistemtica
relacionada con la
eleccin del Ab. Si
las causas son:
Debidas al germen:
Que no sea
el agente
etiolgico
Que
presente
resistencia
Que haya
sobreinfeccin
(haya ms
de un
microorganismo
implicado
en la
infeccin)
Debidas al
antibitico:
Que
no
sea
el
Ab
213

adecuado
para
el
germen
Que
no
sea
la
va
de
administraci
adecuada
Que
no
sea
la
dosis
adecuada
Debidas
a
caracterstica
del
paciente
o de
su
infeccin:
Prese
de
cuerp
extra
Acce
insuf
dren
(la
sang
no
llega
al
lugar
de
infec
El
pacie
no
cump
el
trata

2.4.
ASO
DE
ANT
214

Los
objet
que
se
persi
con
la
asoc
de
Ab
son:

Es
impo
esco
antib
con
distin
meca
de
acci
cuya
acci
tenga
un
efect
sinr
a
ser
posib
bacte
Se
debe
admi
por
sepa
y
cada
uno
en
215

su
dosis
terap

3.
ANT
EN
SITU
ESP

3.1.
Emb

Las
regla
gene
para
el
uso
de
Ab
en
gesta
es
el
sigui

Cont
abso
de
drog
antiv
Evita
medi
nuev
Evita
frm
en
el
1
trime
Emp
el
meno
n
de
frm
en
los
mese
sigui

216

Se
cons
siem
contr

Se
suele
utiliz
amp
eritr
y
mico

3.2.
Lact

En
la
leche
mate
se
alcan
nivel
simil
a
los
sang
con
el
uso
de
clora
eritr
sulfa
y
tetra

3.3.
ANT
en
insu
rena

En
pacie
con
insuf
renal
217

se
debe
evita
los
Ab
mas
txic
y
los
de
elim
exclu
renal

4.
Con

4.1.
antib
Sens

Cuan
un
deter
Ab
alcan
nivel
plasm
igual
a
la
CMI
en
el
lugar
de
la
infec

4.2.
CMI

La
mni
canti
de
antib
que
inhib
el
creci

218

4.3.
CMB

Es
la
conc
mni
bacte
(mat
al
micr

4.4.
Coef
terap

Es
la
relac
entre
la
conc
en
el
lugar
de
la
infec
y
CMI

4.5.
Resi

Es
cuan
no
inhib
el
creci

5.
Mto
de
antib

219

5.1.
Dilu

220

1.
Prep
diluc
de
antim
a
parti
de
la
soluc
madr
por
el
caldo
de
Me

2.
Se
coloc
en
una
serie
de
tubo
de
rosca
1
ml
de
cada
soluc
de
antim
e
inocu
con
1
ml
de
221

susp
de
micr

3.
Incu
37

C
18

24
h.

222

223

224

225

226

227

228

229

230

231

232

233

234

235

236

237

238

239

240

241

242

243

244

245

246

247

248

249

250

251

252

253

254

255

256

257

258

259

260

261

262

263

264

265

266

267

268

269

270

271

272

273

274

275

276

277

278

279

280

281

282

283

284

285

286

287

288

289

290

291

292

293

294

295

296

297

298

299

300

301

302

303

304

305

306

307

308

309

310

311

312

313

314

315

316

317

318

319

320

321

322

323

324

325

326

327

328

329

330

331

332

333

334

335

336

337

338

339

340

341

342

343

344

345

346

347

348

349

350

351

352

353

354

355

356

357

358

359

360

361

362

363

364

365

366

367

368

369

370

371

372

373

374

375

376

377

378

379

380

381

382

383

384

385

386

387

388

389

390

391

392

393

394

395

396

397

398

399

400

401

402

403

404

405

406

407

408

409

410

411

412

413

414

415

416

417

418

419

420

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