Factores que afectan la actividad de las enzimas

Algunos factores que influyen en la

actividad de las enzimas son:

Cofactores y coenzimas

Temperatura

pH

Concentracin del sustrato

Inhibidores

Mecanismos reguladores

Apoenzima
(inactiva)

Cofactor

Sustrato

Las enzimas que requieren cofactores

o coenzimas generalmente no se activan
hasta que esta molcula se une:

Apoenzima enzima a la cual no

se ha unido el cofactor (inactiva).
Holoenzima enzima a la cual se
uni el cofactor (activa).

Holoenzima
(activa)

Efecto de la temperatura
El efecto de la temperatura sobre la velocidad de una reaccin enzimtica generalmente
muestra dos etapas:
1) Aumento gradual de la velocidad de la reaccin hasta alcanzar un mximo local, que
se conoce como temperatura ptima.

Velocidad de reaccin (v0)

2) Disminucin progresiva de la velocidad de reaccin debido a la inactivacin de la

enzima por desnaturalizacin trmica.

Temperatura (oC)

La temperatura ptima para la mayora de las enzimas humanas est en el rango entre
los 35 y 40 oC, estas comienzan a desnaturalizarse por encima de los 40 oC.

Efecto del pH

Velocidad de reaccin (v0)

Los pHs extremos tambin pueden inactivar a la enzima por desnaturalizacin, por lo que
el efecto del pH es similar al efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin.

Pepsina

Tripsina

Fosfatasa
alcalina

pH

Cada enzima opera en un rango relativamente corto de valores de pH, rango en el cual sus
grupos qumicos se encuentran ionizados, de manera que facilitan la catlisis.

Dentro de este rango, el pH para el cual se alcanza un mximo local de velocidad se

conoce como pH ptimo.

El pH ptimo para las enzimas humanas vara notablemente, alcanzando incluso

valores extremos (por ejemplo: pHopt = 2 para la pepsina, una enzima gstrica).

Efecto de la concentracin de sustrato

El efecto de la concentracin de sustrato, [S], en la velocidad de una reaccin enzimtica
tambin muestra de dos etapas:
1) La velocidad de la reaccin aumenta gradualmente hasta acercarse a una velocidad
mxima (vmx).
2) La velocidad se mantiene constante pues todos los centros activos de las molculas
de enzima han sido ocupados por el sustrato, se dice entonces que se presenta un
comportamiento de saturacin.
Parmetros importantes:

v0
1
vmx
2
vmx

Km

[S]

vmx

Km valor de concentracin
de sustrato para el cual se ha
alcanzado la mitad de la vmx

Km es una medida de la afinidad

de la enzima por su sustrato
(a menor Km mayor afinidad).

Enzima 1

Enzima 2

[S]

Km alta refleja baja

afinidad de la enzima
por el sustrato.
Km baja refleja alta
afinidad de la enzima
por el sustrato.

Efecto de la concentracin de sustrato

La relacin entre v0 y [S] para una reaccin
enzimtica fue descrita por Leonor Michaelis
y Maude Menten en 1913, dando lugar a la
conocida ecuacin de Michaelis-Menten:

A altas concentraciones
de sustrato ([S] >> Km),
v0 se mantiene constante
e independiente de [S].

La ecuacin de Michaelis-Menten:

Indica que la curva de v0 vs [S] tiene

forma de hiprbola, con una asntota
en vmx.
Refleja que la velocidad de reaccin
es inversamente proporcional al valor
de Km (afinidad de la enzima por el
sustrato).

La principal desventaja de este

modelo es que no se cumple para todas
las enzimas.

[S]

A bajas concentraciones
de sustrato ([S] << Km),
v0 es directamente
proporcional a [S].

Inhibicin enzimtica
La inhibicin enzimtica ocurre cuando una molcula diferente al sustrato (denominada
inhibidor) interacta con la enzima, impidiendo el correcto funcionamiento de esta.
Hay muchos tipos de inhibidores, pero los ms representativos son:
Inhibidores competitivos

Tienen cierta afinidad con el centro

activo (anlogos estructurales del
sustrato).
Compiten con el sustrato, pero la
reaccin no procede tras la unin.

Inhibidores no competitivos

Generalmente se unen a un sitio

diferente al centro activo.

La unin ocurre tras la formacin

del complejo ES, afectando as la
ocurrencia de la reaccin.

Inhibicin enzimtica
Todos los inhibidores provocan una disminucin de la velocidad de la reaccin enzimtica
(afectan la eficiencia de la enzima).
No obstante, cada tipo de inhibidor afecta de manera diferente a los parmetros cinticos.

Inhibidor
competitivo
Inhibidor no
competitivo

Inhibidores competitivos

Al competir con el sustrato, disminuyen

la afinidad de la enzima por este:

Inhibidores no competitivos

Puesto que no compiten con el

sustrato:

Aumentan el valor de Km.

No modifican el valor de Km.

No modifican la vmx, pero la

saturacin se alcanza a mayor
concentracin de sustrato.

Disminuyen directamente
el valor de vmx.

Inhibidores como medicamentos

Ms de la mitad de los medicamentos de consumo aprobado y de venta en las farmacias
actuales son en realidad inhibidores enzimticos.
Inhibidor

Enzima a la que inhiben

Efecto

Antibiticos -lactmicos
(ej. Penicilina)

Enzimas de la sntesis de la
pared celular bacteriana

Reduccin de la poblacin de la
bacteria patgena en el husped.

Antivirales anlogos a
guanosina (ej. Aciclovir)

DNA polimerasa viral

Bloquean la replicacin del ADN

viral y por ende, del propio virus.

Estatinas (ej. Lipitor)

HMG-CoA reductasa humana

(sntesis de colesterol)

Disminucin del nivel plasmtico

de colesterol.

Reductores de la presin
sangunea (ej. Captopril,
Enalapril)

Enzima convertidora de
angiotensina (ACE) humana

Bloquean la conversin de la
angiotensina I en angiotensina II
(potente vasoconstrictor).

Antifolatos (ej. Metotrexato,

Aminopterina)

Dihidrofolato reductasa

Interfieren con la divisin celular,

por lo que puede usarse como
agentes antineoplsicos o como
antibiticos.

Citrato de sildenafil (Viagra)

Fosfodiesterasa tipo 5 (PDE5)

Promueve el flujo de sangre al

pene, por lo que se usa como
tratamiento de disfunciones
erctiles.

HMG-CoA
reductasa

HMG-CoA
(sustrato
natural)

Lovastatina
(anlogo)

Viagra
(inhibidor de la PDE5
por analoga con
el sustrato)

cGMP
(sustrato natural
de la enzima PDE5)

Enzimas en el diagnstico clnico

El hallazgo de concentraciones sanguneas elevadas para enzimas propias de los diferentes
tejidos permite diagnosticar la existencia de patologas en estos tejidos.
En condiciones normales:

La concentracin sangunea de las

enzimas tisulares es baja.

Estas pequeas concentraciones

basales se deben al recambio
celular normal.

Recambio celular

En situaciones patolgicas los niveles

plasmticos de las enzimas exclusivas de
los tejidos afectados suele aumentar.

Enzimas

Esto puede ocurrir por:

La existencia de dao celular
(ruptura de clulas) en dichos
tejidos.
Un alto grado de proliferacin
celular, usualmente asociado a
formaciones tumorales.

Dao tisular

Proliferacin

Algunas enzimas importantes en el diagnstico clnico

Enzima

Uso diagnstico

Alanina transaminasa
(transaminasa pirvica) (ALT)

Hgado (perfil heptico)

Aspartato transaminasa
(transaminasa oxaloactica) (AST)

Infarto del miocardio, hgado (en

menor grado que ALT)

Creatina quinasa (CK)

Infarto del miocardio, msculo en

general

Amilasa intestinal

Pncreas

Lipasa intestinal

Pncreas

Lactato deshidrogenasa (LDH)

Hemlisis

Fosfatasa cida

Prstata

Fosfatasa alcalina

Trastornos seos, hgado

(enfermedades obstructivas)

Mecanismos reguladores
La actividad de las enzimas in vivo est regulada por mltiples mecanismos, que pueden
tener un efecto positivo o negativo, segn las necesidades celulares.
Principales mecanismos reguladores:

Clivaje proteoltico Algunas enzimas se sintetizan como precursores inactivos

(proenzimas o zimgenos), que se activan luego por el corte de uno o ms segmentos
de cadena. Todas las proteasas digestivas se secretan en forma de zimgenos.

Proteasa

Zimgeno
(inactivo)

Enzima activa

Alosterismo (prximas diapositivas).

Modulacin covalente (prximas diapositivas).

Regulacin de la expresin (sntesis) de la enzima a nivel de la transcripcin.

Degradacin de la propia enzima.

Alosterismo
El alosterismo es una forma de regulacin en la que una molcula endgena (conocida
como modulador alostrico) se une a la enzima y modula su actividad.
No todas las enzimas estn sujetas a este tipo de regulacin, las que lo estn se conocen
como enzimas alostricas o reguladoras.
Los moduladores alostricos:

Se unen siempre a sitios especficos

(sitios alostricos), diferentes al centro
activo de la enzima.

La unin media un cambio en la enzima

que puede ser favorable o desfavorable.

Pueden ser positivos (si aumentan

la actividad de la enzima) o negativos
(si la disminuyen).

Enzima menos activa

Enzima ms activa

Estos no se consideran como inhibidores,

pues son endgenos y actan de manera
diferente. Forman parte de la funcin
normal de la protena.

Sustrato
Modulador alostrico positivo

Alosterismo
A diferencia de los inhibidores, los moduladores alostricos modifican la manera en la que
la velocidad de reaccin depende de la concentracin de sustrato.
Enzima con una cintica
de tipo Michaelis-Menten.
v0

Enzima alostrica.
[S]

Para las enzimas alostricas:

No se cumple la ecuacin de Michaelis-Menten.

La curva de v0 vs [S] no tiene forma hiperblica, sino sigmoidal (forma de S alargada).

La concentracin para la cual se alcanza la mitad de la vmx no se denota como Km,

sino como K0.5, aunque esta tiene una implicacin similar en cuando a la afinidad E-S.

v0
MA+
MA

[S]

El alosterismo en el metabolismo: retroinhibicin

La enzimas alostricas se encuentran muchas veces ubicadas en puntos estratgicos en las
vas metablicas, regulando el flujo metablico de acuerdo a las necesidades de la clula.
La retroinhibicin o inhibicin feedback es una forma de regular el metabolismo, en la
que los productos finales de una va metablica son moduladores alostricos negativos de
una enzima reguladora ubicada al principio de la va.

De esta forma se evita:

Gastar energa y compuestos intermediarios cuando hay suficiente producto final.

Degradar los intermediarios iniciales cuando hay carencia de estos, por haber sido
usados en la produccin del producto final.

Modulacin covalente
La modulacin covalente consiste en la unin covalente y temporal de grupos pequeos
a la enzima.

Esta unin puede tener un efecto positivo

o negativo, segn la enzima.

La ms comn es la unin de grupos fosfato,

denominada fosforilacin.

Sobre la fosforilacin:

El grupo fosfato se une generalmente a

residuos de Tyr, Ser, Thr His.

Este grupo es aportado por un nucletido

trifosfato (ATP, GTP).

La llevan a cabo enzimas conocidas

como quinasas o cinasas.

La reaccin inversa (eliminacin del grupo

fosfato) tiene efecto contrario en la enzima
y es llevada a cabo por otras enzimas
conocidas como fosfatasas.

Enzima
inactiva

Enzima
activa

Regulacin hormonal
El mecanismo de modulacin covalente permite que la actividad de las enzimas pueda ser
regulada en respuesta a estmulos extracelulares.

La seal externa se trasmite al interior de la clula mediante un sistema de

transduccin de seales.

Un sistema de este tipo involucra:

Un primer mensajero extracelular,

usualmente una hormona.
Una protena integral de membrana,
conocida como receptor.
Este reconoce a la hormona
y trasmite el estimulo al interior.

Un sistema efector, encargado de

activar la respuesta intracelular.
Este puede ser activado por un
segundo mensajero intracelular
(diferente a la hormona).
La respuesta usualmente implica la
fosforilacin de mltiples protenas
intracelulares.

Hormona
EXT
Receptor

Membrana
INT

Sistema efector

RECEPTORES
ACOPLADOS A
PROTENA G

RECEPTORES
CON ACTIVIDAD
ENZIMTICA

R
E

RECEPTORES SIN
ACTIVIDAD ENZIMTICA
INTRNSECA

R
G

E
R
2 M

2 M

E
E
2 M

Respuesta

Respuesta

Respuesta

Receptores con actividad enzimtica

Estos receptores tienen dos dominios principales:

2 M

Dominio extracelular funcin receptora

Dominio intracelular funcin cataltica (quinasa)

La recepcin de la seal por el dominio extracelular hace que

se active la funcin enzimtica del dominio intracelular y este
pueda entonces trasmitirla al medio interno.
El ejemplo ms representativo es el del receptor de insulina.

Respuesta
Insulina

El dominio intracelular tiene actividad tirosina quinasa

(puede autofosforilarse y fosforilar a otras protenas).

Insulina

Citosol

Ncleo

Receptores acoplados a protena G (GPCRs)

Estos sistemas constan de tres componentes:

El receptor per se.

Una enzima de membrana que media la sntesis

del segundo mensajero intracelular (por ejemplo
la adenilato ciclasa, que convierte el ATP en AMP
cclico, cAMP).

Una protena que acta como nexo entre los dos

primeros, denominada protena G (porque puede
unir GDP y GTP).

R
G

2 M

Respuesta

Muchas hormonas y neurotransmisores funcionan

mediante GPCRs, por ejemplo:

Glucagn.

Epinefrina (adrenalina).

Corticotropina (ACTH).

Dopamina.

Prostaglandinas.

Serotonina.

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