Determinacin de la concentracin letal (CL50) del K2Cr2O7 en

Artemia Salina
Introduccin:

Un
Un bioensayo
bioensayo es
es el
el proceso
proceso experimental
experimental mediante
mediante el
el cual
cual se
se
determinan
determinan las
las caractersticas
caractersticas y
y la
la fuerza
fuerza de
de una
una sustancia
sustancia
potencialmente
txica
o
de
un
desecho
metabolito,
a
travs
del
potencialmente txica o de un desecho metabolito, a travs del
estudio
estudio de
de sus
sus efectos
efectos sobre
sobre organismos
organismos cuidadosamente
cuidadosamente escogidos
escogidos
y
y bajo
bajo condiciones
condiciones especficas
especficas de
de laboratorio.
laboratorio. La
La dosis
dosis necesaria
necesaria
para
para producir
producir un
un efecto
efecto txico
txico particular
particular en
en 50%
50% de
de los
los animales
animales se
se
llama
llama dosis
dosis txica
txica media
media (DT50).
(DT50). Si
Si el
el efecto
efecto txico
txico causa
causa la
la muerte
muerte
del
del animal,
animal, se
se puede
puede definir
definir experimentalmente
experimentalmente la
la dosis
dosis letal
letal media
media
(CL50).
(CL50). La
La CL50
CL50 es
es la
la concentracin
concentracin a
a la
la cual
cual hay
hay muerte
muerte en
en el
el 50%
50%
de
de la
la poblacin
poblacin estudiada.
estudiada. Es
Es la
la dosis
dosis a
a la
la cual
cual existe
existe el
el 50%
50% de
de
probabilidad
de
morir
en
slo
individuo.
(1)
probabilidad
de
morir
en
slo
individuo.
(1)
La
determinacin
de
dicha
concentracin
se
lleva
a
cabo
mediante
La determinacin de dicha concentracin se lleva a cabo mediante el
el
tratamiento
tratamiento estadstico
estadstico de
de la
la relacin
relacin entre
entre la
la concentracin
concentracin
suministrada
y
el
nmero
de
muertes
dentro
del
ensayo
del
efecto
suministrada y el nmero de muertes dentro del ensayo del efecto
letal
un
letal de
de un
un frmaco
frmaco para
para una
una poblacin
poblacin determinada
determinada de
de
un
organismo
organismo in
in vivo.
vivo. El
El dicromato
dicromato de
de potasio
potasio K2Cr2O7
K2Cr2O7 es
es un
un polvo
polvo
color
color naranja
naranja con
con propiedad
propiedad oxidante
oxidante y
y de
de alta
alta toxicidad
toxicidad para
para los
los
organismo
organismo vivos
vivos ya
ya que
que entra
entra a
a las
las clulas
clulas a
a travs
travs de
de canales
canales
inicos
inicos del
del sistema
sistema de
de transporte
transporte del
del sulfato,
sulfato, produciendo
produciendo
reacciones
reacciones oxido-reduccin
oxido-reduccin orgnicas
orgnicas intracelulares
intracelulares dando
dando lugar
lugar a
a la
la
formacin
formacin de
de radicales
radicales hidroxilos,
hidroxilos, Cromo
Cromo (V)
(V) y
y de
de Cromo
Cromo (III),
(III), ste
ste
ltimo
altera
los
procesos
de
replicacin
y
transduccin
del
ADN,
por
ltimo altera los procesos de replicacin y transduccin del ADN, por
lo
es
lo que
que el
el K2Cr2O7
K2Cr2O7
es clasificado
clasificado como
como carcingeno.
carcingeno. (2)
(2)
Como
Como defensa
defensa natural
natural ante
ante estos
estos agentes
agentes txicos
txicos las
las clulas
clulas
producen
producen un
un grupo
grupo de
de compuestos
compuestos denominados
denominados antioxidantes,
antioxidantes,
generalmente
generalmente son
son vitaminas
vitaminas como
como la
la A,C
A,C y
yE
E con
con la
la caracterstica
caracterstica de
de
que
que se
se oxidan
oxidan con
con facilidad
facilidad para
para proteger
proteger de
de la
la oxidacin
oxidacin a
a otros
otros
compuestos
corporales.
(3)
compuestos
corporales.
(3)
Artemia
Artemia salina
salina es
es un
un pequeo
pequeo crustceo
crustceo de
de la
la subclase
subclase de
de los
los
anostrceos
anostrceos y
y conforma
conforma el
el plancton
plancton de
de las
las aguas
aguas continentales.
continentales. El
El
modelo
modelo in
in vitro
vitro de
de artemia
artemia salina
salina se
se utiliza
utiliza para
para el
el estudio
estudio preliminar
preliminar
de
la
CL50
de
frmacos
debido
a
las
ventajas
que
ofrece,
ya
que
no
de la CL50 de frmacos debido a las ventajas que ofrece, ya que no
es
es costosa,
costosa, es
es fcil
fcil de
de cultivar
cultivar y
y manipular
manipular en
en laboratorio,
laboratorio, es
es
sensible
sensible a
a una
una gran
gran variedad
variedad de
de txicos
txicos como
como lo
lo es
es el
el K2Cr2O7
K2Cr2O7 y
y
genera
genera resultados
resultados que
que permiten
permiten analizar
analizar el
el experimento.
experimento. Sin
Sin
embargo
embargo existen
existen desventajas,
desventajas, tales
tales como
como su
su variabilidad
variabilidad biolgica
biolgica y
y
la
la dificultad
dificultad para
para identificar
identificar su
su sexo
sexo o
o edad
edad y
y la
la cuantificacin
cuantificacin de
de las
las
mismas.(4)
mismas.(4)

Hiptesis:

-- A
A mayor
mayor concentracin
concentracin de
de dicromato
dicromato de
de potasio,
potasio, mayor
mayor ser
ser el
el
nmero
nmero de
de muertes
muertes que
que se
se presenten
presenten en
en los
los viales.
viales.
-Los
intervalos
de
confianza
obtenidos
por
los
mtodos
de
Litchfield-Los intervalos de confianza obtenidos por los mtodos de LitchfieldWilcoxon
y
Miller-Tainter
sern
muy
similares.
Wilcoxon
y
Miller-Tainter
sern
muy
similares.
-La
-La CL
CL 50
50 se
se encontrar
encontrar cerca
cerca de
de las
las concentraciones
concentraciones en
en las
las cuales
cuales
tengamos
tengamos una
una f
f cercana
cercana a
a 0.5.
0.5.

Objetivos:

-Calcular
-Calcular la
la CL50
CL50 de
de dicromato
dicromato de
de potasio
potasio mediante
mediante el
el anlisis
anlisis Probit
Probit
de
de la
la curva
curva dosis-respuesta
dosis-respuesta cuantal
cuantal en
en el
el sistema
sistema biolgico
biolgico de
de
artemia
artemia salina.
salina.
-Manejar
-Manejar un
un sistema
sistema biolgico
biolgico alterno
alterno a
a los
los mamferos
mamferos y
y roedores
roedores
para
para la
la determinacin
determinacin de
de una
una curva
curva concentracin-respuesta
concentracin-respuesta
cuantal
cuantal..

Procedimiento:

Resultados:

Anlisis
Anlisis

de
de

resultados
resultados

-Las
-Las pruebas
pruebas que
que nos
nos permiten
permiten cuantificar
cuantificar la
la toxicidad
toxicidad de
de algn
algn compuesto
compuesto
son
son pruebas
pruebas necesarias
necesarias para
para las
las diferentes
diferentes disciplinas
disciplinas de
de la
la salud
salud como
como la
la
toxicologa,
toxicologa, sin
sin embargo
embargo son
son pruebas
pruebas que
que no
no pueden
pueden realizarse
realizarse en
en seres
seres
humanos
humanos ,por
,por lo
lo que
que se
se requieren
requieren sistemas
sistemas alternos
alternos para
para cuantificar
cuantificar su
su
toxicidad,
toxicidad, como
como el
el realizado
realizado en
en esta
esta prctica,
prctica, en
en donde
donde mediante
mediante un
un sistema
sistema in
in
vitro,
vitro, se
se determin
determin la
la CL50
CL50 del
del K
K22Cr
Cr22O
O77 en
en Artemia
Artemia salina.
salina.
Una
Una vez
vez definido
definido en
en la
la Introduccin
Introduccin el
el mecanismo
mecanismo de
de accin
accin del
del dicromato
dicromato en
en
las
las clulas
clulas podemos
podemos interpretar
interpretar nuestros
nuestros resultados
resultados experimentales,
experimentales, al
al
observar
observar el
el numero
numero de
de muertes
muertes con
con respecto
respecto a
a la
la concentracin
concentracin de
de dicromato
dicromato
en
en el
el medio
medio podemos
podemos notar
notar una
una tendencia
tendencia a
a aumentar
aumentar el
el nmero
nmero de
de muertes
muertes
conforme
conforme aumenta
aumenta la
la concentracin
concentracin de
de dicromato
dicromato en
en disolucin,
disolucin, esto
esto es
es lgico
lgico
y
y esperado
esperado ya
ya que
que al
al aumentar
aumentar la
la concentracin
concentracin de
de dicromato
dicromato en
en el
el medio
medio un
un
mayor
mayor nmero
nmero de
de iones
iones atravesarn
atravesarn la
la membrana
membrana generando
generando un
un mayor
mayor dao
dao
celular,
celular, es
es lgico
lgico tambin
tambin que
que algunas
algunas artemias
artemias hayan
hayan muerto
muerto con
con una
una
concentracin
concentracin mucho
mucho menor
menor a
a otras,
otras, ya
ya que
que debido
debido a
a su
su variabilidad
variabilidad biolgica
biolgica
cada
cada artemia
artemia ser
ser ms
ms o
o menos
menos sensible
sensible a
a la
la fuerza
fuerza oxidativa
oxidativa del
del dicromato
dicromato
que
que otras.
otras. Sin
Sin embargo
embargo el
el promedio,
promedio, que
que es
es el
el valor
valor representativo
representativo de
de nuestra
nuestra
poblacin
sigue
la
tendencia
antes
mencionada,
a
mayor
concentracin
poblacin sigue la tendencia antes mencionada, a mayor concentracin ms
ms
muertes.
muertes.
Como
se encontrara
Como primera
primera aproximacin
aproximacin podemos
podemos especular
especular que
que la
la CL
CL 50
50 se encontrara
entre
entre los
los valores
valores de
de concentracin
concentracin de
de 4
4 y
y 6
6 mg/mL
mg/mL y
y que
que estos
estos valores
valores
presentan
se utiliz un el
presentan un
un valor
valor de
de f
f cercano
cercano a
a 0.5,
0.5, para
para determinar
determinar la
la CL
CL 50
50 se utiliz un el
mtodo
y
mtodo Probit
Probit el
el cual
cual linealiza
linealiza nuestros
nuestros datos
datos y
y nos
nos permite
permite calcular
calcular la
la CL
CL 50
50 y
posteriormente
posteriormente los
los intervalos
intervalos de
de confianza.
confianza. Cabe
Cabe mencionar
mencionar que
que al
al realizar
realizar la
la
grfica
grfica de
de Probit
Probit vs
vs Log
Log C,
C, se
se omiti
omiti el
el dato
dato obtenido
obtenido para
para una
una concentracin
concentracin
de10mg/mL
de10mg/mL debido
debido a
a que
que present
present una
una menor
menor ff que
que la
la concentracin
concentracin
anterior(8mg/Kg),
anterior(8mg/Kg), por
por lo
lo que
que no
no segua
segua la
la tendencia
tendencia general.
general. El
El valor
valor de
de R
R 22
para
para el
el modelo
modelo Probit
Probit no
no fue
fue tan
tan cercano
cercano a
a 1,
1, esto
esto nos
nos dice
dice que
que nuestro
nuestro
experimento
experimento no
no present
present un
un comportamiento
comportamiento del
del todo
todo lineal,
lineal, esto
esto se
se aprecia
aprecia
claramente
calculada
claramente en
en la
la forma
forma curva
curva de
de nuestra
nuestra grfica.
grfica. Finalmente
Finalmente la
la CL
CL 50
50 calculada
fue
muy
parecida
a
la
esperada
como
primer
estimacin,
sin
embargo
nuestros
fue muy parecida a la esperada como primer estimacin, sin embargo nuestros
intervalos
intervalos de
de confianza
confianza calculados
calculados no
no estn
estn dentro
dentro del
del intervalo
intervalo reportado
reportado en
en
la
-5 a
la literatura
literatura que
que es
es de
de (6.7x10
(6.7x10-5
a 0.0599)
0.0599) mg/mL
mg/mL (5)
(5) ,este
,este valor
valor es
es muy
muy bajo
bajo
comparado
con
el
que
manejamos
en
la
prctica,
la
gran
diferencia
entre
comparado con el que manejamos en la prctica, la gran diferencia entre la
la
concentracin
concentracin calculada
calculada y
y la
la reportada
reportada puede
puede atribuirse
atribuirse a
a la
la variabilidad
variabilidad
biolgica
de
las
artemias
salinas.
El
intervalo
de
confianza
nos
da
un
rango
de
biolgica de las artemias salinas. El intervalo de confianza nos da un rango de
concentraciones,
concentraciones, a
a las
las cuales
cuales existe
existe cierta
cierta probabilidad
probabilidad (En
(En este
este caso
caso 0.95)
0.95) de
de
que
que el
el 50%
50% de
de los
los organismos
organismos presenten
presenten el
el efecto
efecto estudiado.
estudiado.
Conclusiones:
Conclusiones:

-Se
-Se pueden
pueden utilizar
utilizar sistemas
sistemas biolgicos
biolgicos alternos
alternos a
a los
los mamferos
mamferos y
y roedores
roedores tpicos
tpicos de
de las
las
prcticas
prcticas de
de laboratorio
laboratorio para
para conocer
conocer la
la toxicidad
toxicidad de
de algunas
algunas sustancias,
sustancias, el
el uso
uso de
de
animales
en
sistemas
in
vitro
es
una
herramienta
muy
til
para
calcular
dosis
letales.
animales en sistemas in vitro es una herramienta muy til para calcular dosis letales.
-A
pesar
de
que
un
experimento
no
tenga
un
comportamiento
del
todo
lineal,
el
mtodo
-A pesar de que un experimento no tenga un comportamiento del todo lineal, el mtodo
Probit
de forma muy efectiva.
Probit nos
nos permite
permite calcular
calcular CL
CL50
50 de forma muy efectiva.
-Los
-Los dos
dos mtodos
mtodos propuestos
propuestos en
en clase
clase para
para calcular
calcular los
los intervalos
intervalos de
de confianza
confianza son
son
igualmente
igualmente validos
validos ya
ya que
que arrojan
arrojan valores
valores muy
muy similares.
similares.
-El
-El Cromo
Cromo (VI)
(VI) es
es un
un agente
agente oxidante
oxidante muy
muy fuerte
fuerte y
y muy
muy txico,
txico, a
a concentraciones
concentraciones muy
muy
bajas
bajas puede
puede causar
causar efectos
efectos txicos
txicos y
y letales
letales en
en diferentes
diferentes sistemas
sistemas biolgicos,
biolgicos, por
por lo
lo que
que
su
su mal
mal tratamiento
tratamiento representa
representa un
un riesgo
riesgo para
para el
el medio
medio ambiente
ambiente y
y la
la salud
salud pblica.
pblica.

Referencias:
Referencias:

(1):
(1): Rang,
Rang, H.
H. P.
P. Farmacologa.
Farmacologa. Ed.
Ed. Elsevier
Elsevier Science.
Science. 4
4 edicin,
edicin, Espaa
Espaa 2002.
2002.
(2)http://www.scielo.org.pe/pdf/rins/v25n1/a08v25n1.pdf
(2)http://www.scielo.org.pe/pdf/rins/v25n1/a08v25n1.pdf
(3)
Skoog,
Qumica
Analtica
Ed.
McGraw
Hill,
7
ed.
Mexico
2002
(3) Skoog, Qumica Analtica Ed. McGraw Hill, 7 ed. Mexico 2002
(4)
(4) http://biblioteca.portalpez.com/la-artemia-salina-vp15740.html
http://biblioteca.portalpez.com/la-artemia-salina-vp15740.html
(5)
(5) United
United Nation
Nation Environment
Environment Programme
Programme (UNEP)
(UNEP) (1988)
(1988) International
International Programme
Programme of
of
Chemical
Chemical Safety
Safety (IPCS).
(IPCS). Environmental
Environmental Healt
Healt Criteria
Criteria (EHC)
(EHC) 61,
61, Chromium.
Chromium.