Cultivo Puro

Tcnicas de aislamiento
Mantenimiento y preservacin de cultivos puros
Morfologa macroscpica
Morfologa microscpica
Definicin
El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el
desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las
condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo
del laboratorio.

Para determinar las caractersticas de especies concretas de
microorganismos, es imperativo que el organismo se aisl y se
desarrollo en el laboratorio como un cultivo libre de otras
especies.
Mtodo para aislar cultivos puros.
Tcnica de siembra por estras en placa
Tcnica por difusin en placa
Tcnica de la placa vertida
Tcnica del enriquecimiento del cultivo
Tcnica de las diluciones en serie
Aislamiento de una sola bacteria
Tcnicas de
aislamiento
Tcnicas de siembra por estras en placa
Con un asa bacteriolgica, se pasa una porcin de la muestra a
la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se
siembra en el medio por estras en cuadrantes.
Tcnicas de siembra por difusin en placa
Para sembrar por difusin en placa, por lo comn se usa una
varilla de cristal estril para esparcir la muestra.
Esta operacin hace posible adelgazar la muestra de tal manera
que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas
unas de otras.
Tcnicas de siembra en placa
Una porcin de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo
viene a ser un cultivo puro.

Despus de una incubacin apropiada, el desarrollo de cada cultivo se
observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.
El principio de la tcnica de la placa vertida es la dilucin
(adelgazamiento) de la muestra en tubos.

El medio se mantiene al estado lquido a una temperatura
de 45 52 C para permitir que el inculo se distribuya
adecuadamente en el medio.

Esta tcnica se hace en forma cualitativa o cuantitativa.
Tcnica de la placa vertida
Tcnica de la placa vertida
Tcnica del enriquecimiento del cultivo.
El principio de esta tcnica, es procurar un ambiente de cultivo
diseado (medio de composicin conocida y condiciones
especficas de incubacin) que pueda favorecer el desarrollo de
cierto tipo concreto de bacterias que necesitemos pero que no
sea adecuado para las dems
Tcnica del enriquecimiento del cultivo.
Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el
tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy
pequeas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que
muchas de las otras especies presentes en el inculo.
Tcnica del enriquecimiento del cultivo.
Tcnica de las diluciones en serie.
Se realiza mediante diluciones seriadas.

Se basa en cuando la muestra est muy diluida
contendr solamente la bacteria que buscamos.

O dependiendo de la dilucin realizada se aislara el
microorganismo adecuado.
Tcnica de las diluciones en serie.
Dilucin
Tipo de microorganismo
10
-1
a 10
-3
Hongos
10
-4
a 10
-6
Levaduras
10
-7
a 10
-10
Bacterias
Para el aislamiento de microorganismos se puede
aplicar la tcnica de aislamiento por estra o por
extensin en superficie (se trasfiere de 0.1 a 0.5
ml.)
Tcnicas de Siembra
a) Siembra por inoculacin o agitacin: Con una asa
bacteriolgica, esterilizada, se toma cantidad de inculo, se
introduce en el centro del medio lquido, agitndose, no tocar la
pared del tubo
b) Siembra por estra (en tubos de agar inclinado): Muestra de
material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por
superficie ms profunda



c) Siembra por picadura: Asa recta, tomar
muestra, sembrar en agar semislido, forma
vertical
d) Siembra por dispersin-agotamiento: Asada de
la muestra, sembrar en medi slido, en placa
Petri
e) Siembra por vertido en placa: Diluciones en
varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilucin,
agregar en placa Petri estril, se agrega medio
licuado, mantener a 55C, movimientos
rotatorios, solidificar


Morfologa y crecimiento de las colonias
Las colonias son masas visibles de clulas que se forman por divisin de una o varias clulas.
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbilogo identificar las bacterias
porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto caracterstico.
El tamao, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo.
La morfologa de la colonia de una bacteria puede variar segn el medio en que crezca la bacteria.

Colonias de bacterias
Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey
Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja
Shigella flexneri
Cultivada en
Agar MacConkey
Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en
medios con pocos nutrientes