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Dechloromonas sp., Alicycliphilus denitrificans, Azoarcus spp. Nuevas
y Thauera aromatic alternativas nuevas en la biorremediacin de
benceno en acuferos subterrneos
Hctor Javier Caraballo Lpez

Resumen
El benceno es el componente bsico de los compuestos aromticos y es indispensable en
varias clases de industrias, por lo que la contaminacin con el mismo es muy posible y comn.
Debido a la migracin, las reas ms afectadas son los acuferos subterrneos, por lo que la
primera ruta de exposicin es la ingestin. Para remediar este problema las tcnicas consisten en
el bioventeo y en la extraccin/descarga de agua, que implica costos elevados en la operacin
debido al personal y a la inversin en el equipo. Existen varios organismos con la capacidad de
degradar el benceno. La mayora son de naturaleza aerbica, seguidos por los metanognicos o
estn presentes slo en sedimentos, lo cual limita el contacto con benceno. En acuferos
subterrneos contaminados predominan los ambientes anaerbicos, como consecuencia de la
constante y creciente actividad de los organismos puede consumir el oxgeno. Las bacterias
anaerbicas que ayudaran a crear procesos de remediacin ms seguros y costo-efectivos:
Alicycliphilus denitrificans, Azoarcus spp. y Dechloromonas sp., estas tienen la capacidad de
mineralizar compuestos aromticos en acuferos subterrneos en condiciones anaerbicas. Los
estudios genmicos abren la posibilidad a la creacin de bacterias ms tolerantes, con lo que se
podr crear una gran herramienta para la biorremediacin anaerbica en ambientes contaminados
con compuestos aromticos.

Introduccin
Los compuestos aromticos estn presentes en muchos de los procesos industriales a
nivel mundial. Estos compuestos aromticos son utilizados en la manufactura de combustibles,
detergentes, medicamentos, pesticidas y plsticos. El componente principal y base estructural de
los compuestos aromticos es benceno, un compuesto orgnico cclico que cuenta con doble
enlace: alternado y deslocalizado, con capacidad de contaminar el suelo, agua y aire. Muchos
organismos, residentes en suelos, han sido identificados y estudiados para determinar su rol en la
degradacin de benceno (Sakai, 2009; Xie, 2010 & Olsen, 1993). La mayora de los organismos
utilizados en estos procesos son de naturaleza aerbica, metanognicos o estn presentes en los
sedimentos solamente, lo que limita la remediacin en sistemas de aguas subterrneas a los
contaminantes que entren en contacto con los sedimentos. Otro problema que presenta la
biorremediacin anaerbica de benceno es el poco rendimiento y tiempo prolongado que
requiere para la degradacin de contaminantes. Luego de haber adquirido estos conocimientos,
nos debemos hacer la siguiente pregunta: Cul ser el siguiente pas que debemos tomar para
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optimizar y obtener el mximo posible de las bacterias anaerbicas degradantes de benceno en
acuferos subterrneos?

Benceno
La base de los compuestos aromticos son los anillos orgnicos con doble enlace:
alternado y deslocalizado. Su manera ms simple es el benceno (C
6
H
6
). Segn la Agencia de
Proteccin Ambiental Federal (EPA, por sus siglas en ingls) la concentracin mxima de este
contaminante (MCL) en agua es 0.005 mg/L (5 ppb) (Enviromental Protection Agency, 2010). El
benceno tiene la propiedad de adquirir diferentes estructuras y/o grupos funcionales como el
grupo hidroxilo (-OH) o elementos como el cloro (-Cl), cambiando su toxicidad, al igual que los
MCLs estipulados por la EPA (desde 1,000 ppb para tolueno hasta 3 x 10
-5
ppb para dioxin). La
exposicin al benceno puede causar efectos a corto plazo como anemia, daos a los sistemas
nervioso, inmunolgico, reproductivo; y puede tener efectos a largo plazo como desrdenes
cromosomales y cncer.

Contaminacin de Acuferos Subterrneos
Los depsitos de aguas subterrneas pueden ser alcanzados por la contaminacin en los
suelos con benceno. Actualmente, las tcnicas para remediar este problema consisten en el
bioventeo y en la extraccin/descarga de aguas. El tratamiento de la extraccin de aguas causa la
volatilizacin del contaminante utilizando el movimiento y la aeracin superficial, adems de la
biorremediacin intrnseca que pudiera estar presente en el terreno donde se descarga el
contaminante, removindolo del agua subterrnea y evitando que vuelva a llegar a la misma. El
propsito del bioventeo es eliminar el contaminante presente en el acufero subterrneo utilizado
la volatilizacin. La volatilizacin requiere monitoreo continuo con el propsito de evitar la
descarga de altas concentraciones de compuestos voltiles al aire. Esta tcnica puede permitir la
migracin del contaminante, lo que implica costos adicionales en equipos y en el personal.

Remediacin
El benceno es degradado fcilmente en presencia de oxgeno, de ah la utilizacin de
sistemas como la aeracin para el tratamiento en acuferos subterrneos. En los acuferos
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subterrneos contaminados la constante y creciente actividad de los organismos pueden consumir
el oxgeno presente creando extensos ambientes anaerbicos (Anderson & Lovley, 1997). La
aplicacin de la tcnica de bioventeo slo creara mayor actividad en las reas adyacentes a la
inyeccin de oxgeno, por lo tanto, en los acuferos se necesita instalar varios sistemas para que
el proceso sea efectivo. Estas condiciones abren la posibilidad del uso de bacterias anaerbicas
para el proceso de remediacin de benceno. Se estn estudiando varias tcnicas que envuelven
procesos biolgicos anaerbicos asistidos. Entre estas encontramos la utilizacin de aceptadores
de carbono como nitratos, Fe (III), sulfatos o bixido de carbono (Katayama et al., 2008). Hay
estudios fundamentados en el uso de bacterias metanognicas, sin embargo la gran parte de estos
organismos estn limitados a sedimentos (Coates et al., 1997; Coates et al., 2008), o a la creacin
de sistemas de biorremediacin anaerbica Ex-Situ (Ferrarese et al., 2008). Un sistema de
remediacin con microorganismos anaerbicos que tengan la capacidad de quimiotaxis hacia los
contaminantes, sera un gran avance en el desarrollo y mejoramiento de estos procesos. Como
respuesta a este sealamiento se han encontrado organismos no patgenos como:
Dechloromonas aromatica (Coates et al., 2001), Alicycliphilus denitrificans (Stams et al., 2008),
Azoarcus spp. (Philipp et al., 2007) y Thauera aromatic (Zhao et al., 2010), con la capacidad de
mineralizar compuestos aromticos en acuferos subterrneos, incluyendo el benceno y el
tolueno, en condiciones anaerbicas.

Dechloromonas aromatica
Es un bacilo gram negativo y la nica bacteria conocida capaz de oxidar benceno
anaerbicamente en presencia de nitratos adems de degradar percloratos tanto en condiciones
aerbicas, como en anaerbicas (Coates & Chakraborty, 2005). La gentica de las
Dechloromonas aromatica son estudiadas con el propsito de conocer mejor sus propiedades y
futuros usos en sistemas de biorremediacin (Salinero et al., 2009). Las rutas utilizadas por estos
microorganismos para la degradacin de aromticos de manera anaerbica siguen siendo un tema
de discusin (Daz et al., 2009). Se ha demostrado que procesos de hidroxilacin y carboxilacin
son llevados a cabo por bacterias en condiciones anaerbica para degradar compuestos
aromticos como benceno a benzoato, un metabolito no txico (Coates & Chakraborty, 2005). Se
ha podido demostrar que este organismo puede metabolizar benceno y tolueno simultneamente
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(Coates, Chakraborty, O'Connor, & Chan, 2005). Otra caracterstica importante de
Dechloromonas aromatica es que presenta quimiotaxis positiva hacia los compuestos
aromticos, incluyendo benceno (Salinero et al., 2009), lo cual aumentara el contacto de la
bacteria con el contaminante y hara ms efectivo el proceso. Con todas estas caractersticas,
queda evidenciado el potencial del organismo para ser utilizado ampliamente en los procesos de
biorremediacin. Las condiciones que necesita para crecer son en temperaturas que varan desde
5C a 36C y un pH de 6.1 a 8.3 (Drake et al., 2005), pero sus condiciones ptimas de
crecimiento son 30C con un porciento de salinidad de cero (Coates & Chakraborty, 2005). Un
pre-tratamiento del rea para poder crear el ambiente propicio de temperatura y salinidad, para el
crecimiento y accin metablica de esta bacteria, podra conllevar otros efectos en la biota
natural del rea. Esto la excluye de su uso In-Situ en muchos ambientes, pero sigue siendo una
excelente herramienta para los procesos Ex-Situ y en la creacin de bioreactores en los cuales las
condiciones de temperatura y salinidad podran ser controladas. Otra de las dificultades que
encontramos con el uso de Dechloromonas sp. para la remediacin In-Situ seran los niveles de
tolerancia para el crecimiento de las mismas, especialmente en benceno, el cual es tan bajo como
100 M, y su razn degradacin es de 10 M por da (Coates & Chakraborty, 2005).

Alicycliphilus denitrificans
Es una de las varias bacterias identificadas en muestras de descomposicin de
poliuretano. Su crecimiento ptimo se logra en un rango de temperatura de 28C - 30C y un pH
de 7.2 a 7.4

tanto aerbica como anaerbicamente (Fuchs et al., 2003). Sin embargo, es la
capacidad que sta exhibe para degradar aromticos como benceno lo que la hace ms llamativa
(Loza-Tavera et al., 2007). Esta cualidad es acentuada cuando consideramos que Alicycliphilus
denitrificans es una bacteria aerbica facultativa con capacidad de llevar estos compuestos de
degradacin tanto en presencia como en ausencia de oxgeno molecular (Stams et al., 2008). Esta
bacteria mineraliza totalmente los contaminantes dejando como producto bixido de carbono. Un
sistema de biorremediacin In-Situ utilizando Alicycliphilus denitrificans sera ms eficiente ya
que esta bacteria registra una razn de degradacin de benceno de 100 M en comparacin con
Dechloromonas aromatica (Stams et al., 2008). Comparaciones genmicas han demostrado la
ausencia en Alicycliphilus denitrificans de los genes cld responsable de la produccin de clorito
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de dismutasa, presente en Dechloromonas aromatica (Stams et al., 2008), sugiriendo as nuevas
rutas metablicas de aromticos.

Azoarcus spp.
Azoarcus anaerobius y Azoarcus tolulyticus son bacilos gram negativo, con capacidad
natural de degradar aromticos (Schink et al., 1998). Una caracterstica esencial es que no
necesitan pasos reductivos para iniciar la degradacin de aromticos e utilizan la ruta catalizada
por la enzima Benzoyl CoA (Hellstern et al., 2005). Las condiciones ptimas para su crecimiento
son pH 7.2 a una temperatura de 28C y cero salinidad, ya que sta inhibe su crecimiento
(Schink et al., 1998). Otro de los obstculos es su lmite de degradacin, hasta concentraciones
de 10 ppb (Watanabe et al., 2009) el cual es todava un valor superior a lo estipulado por la
regulacin. El aadir ms cantidades de enzimas no ha demostrado tener efecto en aumentar la
capacidad de degradacin de Azoarcus spp. sobre benceno (Hellstern et al., 2005). Estudios han
identificado los genes envueltos en la generacin de las mismas lo que permitir mayor
investigacin en el desarrollo de promotores para la actividad bioremediativa (Rabus et al.,
2004), al igual que lograr superar su inhibicin de crecimiento en ambientes salinos. Azoarcus
spp. demostr por medios de estudios una interaccin metablica entre este organismo y otros
dos organismos presentes en reas contaminadas, Owenweeksia hongkongensis y Pelotomaculum
isophthalicum, haciendo ms efectiva la degradacin de benceno (Watanabe et al., 2007).

Thauera aromatic
Es un bacilo gram negativo aerbico facultativo, con capacidad de degradar compuestos
aromticos mediante la produccin de benzylsuccianato, tanto aerbicamente como
anaerbicamente (Zhao et al., 2010). Las condiciones ptimas para su crecimiento son un pH de
7.0 a 7.4 y temperatura de 28C (Haggblom et al., 2000). La mayor eficiencia de este organismo
se encuentra cuando se utiliza en conjunto con Azoarcus anaerobius, principalmente en la
creacin de bioreactores Ex-Situ (Zhao et al., 2010). Thauera aromatic presenta susceptibilidad a
la presencia de ambientes conteniendo cidos grasos (Heipieper et al., 2010), lo cual aunque no
es comn encontrarlos disueltos en acuferos subterrneos, este factor debe ser considerado ante
la posibilidad de encontrarlos como parte de los contaminantes dada la utilizacin de benceno
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como solvente. Investigaciones han permitido conocer sus rutas metablicas para la degradacin
de aromticos aerbicos como los anaerbicos, y identifica los genes bss y tod

como reguladores
de este proceso (Kato et al., 2008).

Conclusin
Los organismos presentados tienen limitaciones de temperatura (28C) y salinidad (0%)
para los ambientes en donde pueden ser utilizados, adems de la eficiencia del proceso. En
algunos casos una sola tcnica no sera suficiente para cumplir con las regulaciones establecidas.
Pero no podemos negar que la utilizacin de bacterias anaerbicas en procesos de contaminacin
subterrneas sera una gran herramienta que creara procesos de remediacin ms seguros debido
a la completa mineralizacin del contaminante por medio de organismos no patgenos y
reducira los costos de operacin, principalmente en trminos de personal y equipo. Un buen
paso en esa direccin es el estudio del genoma de estos organismos y la identificacin de los
genes involucrados en sus caractersticas degradantes del benceno. La experimentacin con
promotores o la transformacin de los mismos en bacterias ms resistentes con estos genes
degradantes son una de las muchas posibilidades que pueden resultar de la continua
investigacin y experimentacin en este campo. La presencia de quimiotaxis en estos organismos
es otra de las caractersticas que debemos explorar, ya que aumentara el contacto con los
contaminantes y optimizara la degradacin de los mismos. Los conocimientos y avances
adquiridos durante los ltimos tiempos en el campo de la biotecnologa podrn ofrecer grandes
respuestas a los problemas de contaminacin ambiental que estamos enfrentando.

Agradecimientos
A Yaronie De Jess-Torres por su constante apoyo.
Al Profesor Rafael R. Canales-Pastrana, porque cuando tengo todas las respuestas me crea
nuevas preguntas.





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Hctor Javier Caraballo Lpez, hcaraballo0310@email.bc.inter.edu BS. En Universidad de Puerto Rico, Campus
de Mayagez. Estudiante del programa de MS con concentracin menor en biotecnologa molecular en el
Departamento de Ciencias Naturales, Universidad Interamericana de Puerto Rico, Recinto de Bayamn. . 12 aos de
experiencia en el rea de farmacuticas.