Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Concepción
Facultad de Medicina
Escuela de Medicina
Dpto. de Bioquímica
PRACTICO NO 1:
“MÉTODOS
ESPECTROFOTOMÉTRICOS”
(Muestra Problema: MP1 x fd 10)
Volumen indicado
BSA 10mg/ml +
agua destilada
Resultados
Se necesita saber la composición proteica de las distintas disoluciones, por lo tanto, se
determinan los volúmenes de agua y albúmina de cada mezcla con los siguientes datos
conocidos:
• Concentración de la proteína albúmina, solución estándar 10 mg/ml
• Concentración de la nueva solución que se necesita obtener según la muestra
• Se utilizó la ecuación de dilución, igualdad consistente en:
Moles antes de la mezcla concentrados= Moles después de la mezcla diluidos
MOLES INICIALES = MOLES FINALES
C1 x V1 = C2 x V2
C1: concertación de la solución estándar de albúmina 10 mg/ml
V1: volumen necesario de la solución estándar
C2: concentración de la nueva solución que se necesita obtener
V2: volumen requerido de la solución a formar (0.5 ml = 500 µl)
• Estándar 0.5 mg/ml
C1 x V1 = C2 x V2
10 mg/ml x V1 = 0.5 mg/ml x 0.5ml
V1 = 0.025 ml / x 1000 = 25 µl
y=absorvancia
x=concentración
b=coeficiente de posición, en nuestra ecuación éste es cero, por lo tanto no influye en los
cálculos
Como nuestra muestra problema tiene un factor de dilución igual a 10, la concentración se
debe multiplicar por este factor, por lo tanto, la concentración de la muestra problema es:
Por último, existe un método menos preciso para calcular la concentración de la muestra
problema; lo hacemos mediante la interpolación de los puntos con la recta, esta información
se adjunta en un gráfico hecho en papel milimetrado.
Conclusión y discusión
La actividad práctica presentada en este informe tuvo como objetivo principal
establecer la concentración de una solución proteica de albúmina (BSA). En este caso se
determinó utilizando el reactivo de Biuret (sulfato de cobre 1% en NaOH 14%) que
reacciona con sustancias que contengan 2 grupos carbamilos (-CONH), como proteínas y
péptidos (a partir de tripéptidos) constituyendo complejos de coordinación coloreados
(violeta), cuya intensidad depende de la concentración de proteína utilizada que puede
detectarse mediante lectura de absorbancia en un espectrofotómetro. Por lo tanto, además
de medir la concentración proteica de una solución, también este método puede emplearse
para diferenciar proteínas de aminoácidos, exceptuando la histidina que por su estructura da
positiva a esta reacción.
Los métodos espectrofotométricos son bastante útiles y confiables, siempre y
cuando se tengan ciertas precauciones de uso. Se debe proceder con limpieza, orden y
concentración, como por ejemplo en la correcta manipulación de la micropipeta con sus dos
topes que pueden alterar la concentración de las disoluciones al prepararlas,
homogeneizarlas correctamente para obtener una lectura uniforme, utilizar cubetas que
estén dentro del rango de absorbancia permitido (+/- 0,010), calibración a 0 absorbancia del
instrumento, etc. Por lo tanto, este práctico nos introduce a la precisión y dedicación que se
debe tener al realizar este tipo de procedimientos, y la delicadeza que significa el trabajo
metódico cuando se trata de diagnosticar a un paciente donde está la vida de una persona de
por medio.
Con los resultados obtenidos tras la lectura de absorbancia de los estándares, se
construye una curva de calibración que se prepara con límites de linealidad determinados,
lo ideal es que todos los puntos estén contenidos dentro de la curva, siguiendo todos una
misma tendencia. Esta curva también nos sirva para interpolar y calcular la concentración
de la muestra problema. En nuestra caso, hubo algunos puntos que se escapaban en de la
línea de tendencia, sin embargo, existe el llamado Índice de Regresión Lineal, dato arrojado
por los cálculos efectuados en Excel, que indica el grado de exactitud de los resultados:
mientras este valor se acerque más a 1, la exactitud es mayor. En nuestro caso, el Índice de
Regresión Lineal fue 0.9992, de modo que, a pesar de que a simple vista en el gráfico no
todos los datos coinciden con la línea de tendencia, estos están bastantes cercanos a los
valores exactos.
Bibliografía