LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

ASIGNATURA: LAB.DE MICROBIOLOGIA.

TEMA: CULTIVO PURO
PROFESORA: BLGA ALICIA DECHECO EGUSQUIZA.
SECCIN: B
INTEGRANTES:
ROQUE MENDOZA, MIRLA LIZET.
RODRIGUEZ CRUZ, KARINA ISABEL
TAFUR GARAY, CARLOS.
VERTIZ GARCIA, MAYUMI ALEJANDRA.

2011




LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA




Los microorganismos en estado natural crecen de forma heterognea o
mixta. Cuando queremos estudiar un microorganismo dado, debemos
aislarlo.
Un cultivo puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo. El
modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que
provienen de una sola clula (son clones). Hay diferentes mtodos para
obtenerlas:
MTODO DE SIEMBRA POR AGOTAMIENTO O EN ESTRA
Procedimiento: Con el asa estril tomamos la muestra y hacemos
extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y
extendemos parte de la extensin anterior en otra direccin. Volvemos a
esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda
extensin en otra direccin. Esterilizamos y repetimos la operacin.
Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera zona, habr un
amasijo de clulas. En la segunda, parte de la primera zona estar mejor
extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an.
Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un
cultivo puro.
MTODO DE LAS DILUCIONES SUCESIVAS
Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que,
tras inocularse en un medio de cultivo, generen colonias aisladas.
Metodologa:
Ahora tomamos 0.1 ml de cada tubo y lo depositamos en una placa petri
con medio de cultivo. Con un asa de vidrio se extiende esa cantidad sobre
la placa, e incubams a 37 C durante 24 horas.
En la primera dilucin habr un amasijo de colonias. En la siguiente
habr diez veces menos nmero de colonias, y as sucesivamente hasta
conseguir colonias aisladas.


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Este mtodo nos permite calcular el nmero de microorganismos viables
que existen en la muestra que estamos analizando:
N=C 1/D 1/i donde:
N es el nmero de microorganismos presentes en la muestra
C es el nmero de colonias contadas UFC (unidades formadoras de
colonias)
D es la dilucin
I es el inculo
Debe haber entre 30 y 300 colonias. Si hay menos, no es significativo
(puede tratarse de una contaminacin) y, si hay ms, no estn aisladas.
Mantenimiento y preservacin de cultivos puros.

La mayora de los laboratorios de bacteriologa cuentan con una gran
variedad de este tipo de cultivos, que frecuentemente se denominan
coleccin de cultivos tipo. Es muy importante tener identificadas las
bacterias del cultivo puros listas para usarse. La mayora de las
compaas industriales de productos biolgicos, mantienen colecciones de
cultivos bacterianos en cantidades importantes. Estos cultivos se emplean
para probar la efectividad de agentes qumicos moteraputicos y
potencialmente efectivos, as como cultivos de referencia para estudios
taxonmicos., como agentes de ensayo para antibiticos y vitaminas, y
como cultivos de referencia que citan en las patentes de las compaas.












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AGAR SS
Es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y
Shigella a partir de muestras fecales. El medio contiene sales biliares y
verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y grmenes Gram
positivos.


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La presencia de lactosa y rojo de
metilo nos permiten diferenciar las
colonias que fermentan la lactosa
(rosas o rojas) de las que no lo hacen
(incoloras).
Las especies de Salmonella y Shigella
no fermentan nunca la lactosa por lo que
este medio es excelente para
descartar todas las colonias que no
cumplan este requisito.
El agar SS es doblemente diferencial, porque adems de indicarnos el
comportamiento de los grmenes con relacin a la lactosa, nos muestra los
grmenes que son capaces de producir cido sulfhdrico, que se manifiesta
como un precipitado de color negro en el centro de la colonia.







Preparacin de agar
Pesamos 6,3g de agar.
Disolver en 100 ml de agua destilada
Revolver bien hasta que el agar se disuelva
Transportar a una botella esterilizada
Hacer hervir la botella por un periodo de 5 minumtos y sacarla y
moverla en forma de crculos por un minuto
Repetir esta operacin 6 veces
Dejar enfriar a una temperatura aprox de 45C y plaquear
Luego de plaquear dejar enfriar por 10 min para lograr una buena
solidificacin


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Preparacin de la muestra
Primero se peso 10g de nuestra muestra pan con chorizo de
distintas partes en un herber estril.
Luego ponemos la muestra de chorizo en otro herber y lo mezclamos
con 20 ml de agua hervida fra
Aplastar con el tenedor hacia las paredes del herber la muetra para
lograr una solucin viscosa
Luego pasar a sembrar
CARTILLA DE ANLISIS DEL PRODUCTO:
CARTILLA DE HIGIENE
Muestra Pan con chorizo
fecha de compra 8 de noviembre del 2011


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Lugar de compra Patio del anexo 8 de la universidad
nacional Federico Villarreal
Hora de compra 6: 31 pm
Ubicacin del producto Este se encontraba dentro de una
vitrina(conservador) con
compartimientos con otros
productos como gaseosa, pasteles,
empanadas etc.
Proteccin del producto Estaba en un plato junto a otros
(pan con chorizo) cubierto por una
bolsa de hamburguesa.
Utensilio empleado Solo uso una bolsa de plstico
transparente
Materiales con que se vende el
producto
Sola la bolsa de hamburguesa y
servilletas
Analistas

Roque Mendoza Mirla Lizet

Vendedor
Higiene preventa vendedor Tena las manos aparentemente
limpias, sin guantes, tena gorro,
una chaqueta blanca.
Proteccin de vendedor Tena una chaqueta blanca y un
gorro blanco.
Condicin del vendedor
Condicin del cabello Tena el cabello corto,
semicubierto por el gorro.
Uas del vendedor Semicortadas se notaba grasosas
y no tena guantes.
Contacto con el producto Fue casi directo pero usaba una
bolsa de plstico transparente,
Lugar
Zona del lugar es una zona semiabierto , poca
iluminacin
Piso del lugar El piso es de granito y es de color
negro se notaba que estaba un
poco sucia con restos de grasa y
papitas al hilo en el piso
Condicin del lugar
Mascotas No hay mascotas
Roedores e insectos Se pudo observar moscas.
Se utilizo el mtodo de siembra por estras en placa


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Con un asa de kolle, se paso una porcin de la muestra a la
superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar, en nuetro
Agar SS
Incubar adecuadamente por un tiempo de 48 horas a una
temperatura de 37C promedio







Nota: Todo este procedimiento se sigui para obtener colonias y luego
seleccionar una sola y de esta manera volver a sembrar para obtener un
cultivo puro de solo una colonia en nuestra placa
Cada colonia aislada es descendencia de una sola clula y por lo tanto un
cultivo puro.
En las especies donde las colonias se agrupan de manera caracterstica,
las colonias se desarrollan a partir de un mismo tipo de clulas e
igualmente provienen de un cultivo puro. Una porcin de una colonia que
se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro.



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Medio de cultivo SS
Muestra Pan con chorizo
Lugar de recoleccin de la
muestra
Patio del anexo 8 de la universidad
nacional Federico Villarreal
Fecha y hora de recoleccin de la
muestra
8 de noviembre del 2011
Fecha y hora de siembra 6: 31 pm
Temperatura de muestra y
tiempo de incubacin
24 - 48 horas a 150C
Fecha y hora de lectura 15/11/2011
Analista
Forma Redonda
Irregular
Redondeada X
Rizoide
Elevacin Aplanado
Elevado X
Convexo
Superficie Liso X
Rugoso
Estirado mate
Brillante X
Bordes Entero X
Ondulado
Lobulado
Dentado
irregular
Color CREMA
Opacidad Transparente
Opaco X
Consistencia Seco X
Mucoide
Membranosa
contaminacin Escasa
regular
abundante X
dimetro 2 mm



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RESULTADOS
Obtuvimos clones de colonias de una sola especie
Analizamos la poblacin de nuestra placa sembrada (sus caractersticas
principales)
Analizamos el gnero, la especie a la cual pertenece nuestro cultivo de
colonias











CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Seleccionar una colonia que tenga las siguiente caractersticas:
La mejor desarrollada
La que tenga mejor coloracin
La que este mas aislada del resto
La que sea netamente de una bacteria que tenga un excelente
crecimiento en el otro agar en el cual se va a sembrar y cultivar


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Al momento de transporta la colonia elegida hacia el otro agar,
observar que este pura y libre de otras colonias, hongos, levaduras
ya que stas pueden alterar nuestro resultado

Incubar convenientemente para que el proceso de desarrollo de la
bacteria sea lo mas optimo posible
BIBLIOGRAFA
Microbiologa, Pelczar/Reid/Chan, cuarta edicin, editorial
MC.GRAW-HILL, Capitulo 8, Pg. 117.

Titulo:manual para la introduccin al laboratorio de
microbilogia
Autor: Daniel Ricardo Toro ,Editorial: Universidad de
Caldas,Mes y ao de edicin: Noviembre de 2005

Titulo: Laboratorio de Microbiologa Instrumentacin y
principios bsicos;Autores: Jos Gonzlez Alfaro, Boris
Gonzlez Gonzlez,Rosa T. Barrial Gonzlez;Editorial:
Ciencias Mdicas Ecimed,Paginas: 255,Edicion: 2004