Instituto Tecnolgico de Costa Rica Escuela de Biologa Ecologa I semestre 2011 I Examen Parcial Fabiola Alfaro Alvarado 200868864

Esteve Mesn Porras 200846149 Gerald Ruiz !n"#ez 200860209 Andrea $lloa Fern!ndez 2008416%4 1& $n e'(resario desea "ontratar un biote"n)lo*o en"ontrar una ba"teria lla'ada Alcaligenes eutrophus +ue (rodu"e un "o'(onente +ue sirve (ara (rodu"ir (l!sti"o, Este "o'(uesto P-. es un (ol/'ero 'u0 i'(ortante +ue utiliza la industria de (l!sti"os, Pero el due1o de la e'(resa (iensa +ue en 2osta Ri"a (uede en"ontrar una "e(a es(e"ial (or las "ondi"iones "li'!ti"as +ue (resenta este (a/s, Forma de realizar el examen a& Anali"e3 desarrolle3 elabore es+ue'as e investi*ue "on todo el 'aterial +ue (osee en su es"ritorio las (osibles res(uestas3 no deduz"a +ue el due1o es "ono"edor de la 'ateria3 solo (osee re"ursos e"on)'i"os (ara llevar a "abo la e4tra""i)n, b& Es"riban las diferentes alternativas de traba5o 0 de investi*a"i)n3 aborden la (roble'!ti"a de diferentes (untos de vista, Presenten a su "liente todas las o("iones +ue (oseen, "& 6o se li'iten a res(uestas si'(les3 5ustifi+ue "ada (arte de su e4a'en 0 rela"ione "ada se""i)n del desarrollo, Preguntas (Cada res uesta tiene un !alor de 10 untos" 1# $esarrolle una metodologa de tra%a&o ara la extraccin de la %acteria' (cam o ( en el )*B"' la duracin ( las osi%les rue%as a realizar# Alcaligenes eutrophus es una ba"teria de ti(o "o"oide *ran ne*ativa3 ')vil "on fla*ela"i)n (er/tri"a3 +ui'io#eterotr)fi"a, 7entro de su ta4ono'/a (resenta varios sin)ni'os entre ellos8 Ralstonia eutropha3 Wautersia eutropha3 Hydrogenomonas eutropha3 0 Cupriavidus necator, Esta es(e"ie en (arti"ular deriva del filo Proteoa"teria 0 de la "lase 9&(roteoba"teria :62;<3 2011=, El (oli&9&#idro4i&butirato :P-;= 0 (oli&9&#idro4i&valerato :P-.= son ter'o(l!sti"os biode*radables 0 bio"o'(atibles (rodu"idos (or diversos 'i"roor*anis'os derivados de los (oli#idro4ial"anoatos :P-A=3 entre ellos Alcaligenes eutrophus, Puede ser e'(leado (ara (rodu"ir fibras3 #o5as3 bolsas (l!sti"as 0 botellas, Alcaligenes eutrophus -16 es una ba"teria "a(az de fabri"ar su (ro(io ali'ento :aut)trofa fa"ultativa= de r!(ido "re"i'iento en un 'edio "ultivo *eneral, Para sintetizar el P-;3 esta ba"teria re+uiere un 'edio de "ultivo "on "ondi"iones anaer)bi"as "on una fuente de 2>2 0 62 :?u'ar @ PrabaAaran3 200%=,

Bos (ol/'eros de P-A suelen a"u'ularse en *r!nulos esfri"os dis"retos dentro de las "lulas "ito(las'!ti"a de Alcaligenes eutropha3 lo "uales alanzan di!'etros de 100&800 n' :.erlinden et al3 200C=, Para "o'(render la 'anera en +ue o"urre la for'a"i)n de este (ol/'ero3 (ri'ero se debe re"ono"er la ruta 'etab)li"a de los (oli#idro4ial"anoatos :Rivera&Ma"Aintos# @ 6ev!rez&Moorill)n3 2009=, Bos dos "o'(uestos 0a 'en"ionados :P-; 0 P-.=3 0a sea en for'a de #o'o(ol/'eros o #etero(ol/'eros3 van for'ando el (ol/'ero "on base en la si*uiente f)r'ula8

Figura 1# F)r'ula *eneral de un (oli#idro4ial"anoato, Fuente8 Rivera&Ma"Aintos# @ 6ev!rez&Moorill)n3 2009,

Bos #etero(ol/'eros derivados de P-A "o'o son los P-. suelen (resentar "ara"ter/sti"as dD"tiles 0 resistentes, Ba adi"i)n de 'on)'eros de P-. redu"e el (unto de fusi)n3 (ero in"re'enta su biode*radabilidad, El (ro"eso de bios/ntesis de P-. se des"ribe a "ontinua"i)n8

Figura 2# >r*aniza"i)n estru"tural de un *r!nulo de P-A 0 las rutas 'etab)li"as i'(li"adas en la bios/ntesis 0 "atabolis'o de los (oli#idro4ivaleratos, (a" Ruta de la o4ida"i)n de un al"ano3 (%" 9& o4ida"i)n de los !"idos *rasos3 (c" ;ios/ntesis de "arbo#idratos3 (d" /ntesis de !"idos *rasos de novo, Fuente8 Buen*o et al3 200E,

2o'o se a(re"ia en la fi*ura anterior3 a (artir de una 'ol"ula de azD"ar3 las enzi'as "etotiolasas "atalizan la adi"i)n reversible de un *ru(o a"etil a una 'ol"ula de a"etil& 2oA, Posterior'ente3 la enzi'a a"etoa"etil&2oA redu"tasa se en"ar*a de redu"ir :de for'a reversible= las 'ol"ulas de a"etoa"etil&2oA en #idro4ibutiril&2oA, Final'ente3 las P-. sintetasas llevan a "abo la rea""i)n de (oli'eriza"i)n entre las 'ol"ulas de #idro4iburitaro (ara "onfor'ar el (oli#idro4ial"anoato en estudio +ue "orres(onde a (oli#idro4ivalerato :Rivera&Ma"Aintos# @ 6ev!rez&Moorill)n3 2009=, Rasltonia eutropha es la ba"teria '!s estudiada a nivel b!si"o 0 a(li"ado res(e"to a la s/ntesis de (oli#idro4ial"anoatos, Esta es(e"ie tiene la "a(a"idad de a"u'ular '!s de un 80F del (eso se"o "elular 'ediante el uso de una serie de fuentes de "arbono +ue in"lu0en "arbo#idratos3 al"o#oles 0 !"idos or*!ni"os, Esta es(e"ie es utilizada debido a +ue "re"e "on fuentes de "arbono baratas3 lo "ual es un as(e"to i'(ortante a es"ala industrial, 7os razones (or las "uales se sele""iona son la elevada "a(a"idad de (rodu""i)n del (ol/'ero (or (arte de la ba"teria 0 la f!"il se(ara"i)n del (ol/'ero de las "lulas :;inti3 2009=, Re"iente'ente3 los (oli#idro4ial"anoatos #an lle*ado a ser utilizados (ara a(li"a"iones 'di"as tales "o'o las suturas3 i'(lantes3 in*enier/a "ardiovas"ular 0 neural de te5idos3 fi5a"i)n de fra"turas3 trata'iento de la nar"ole(sia :i'(li"ada "on el sue1o= 0 adi"i)n de al"o#ol3 'i"roen"a(sula"i)n de "lulas3 anal*si"os3 entre otras :Buen*o et al3 200E=, An!lisis realizados (or el *ru(o "onfor'ado (or insAe0 0 tubbe en la ba"teria A. eutrophus3 de'ostraron +ue la di'eriza"i)n de dos enzi'as P-; sintetasas se re+uiere (ara ini"iar el (ro"eso de for'a"i)n in vitro de P-;, A (esar de tales estudios3 ta'bin #a sido ne"esario desarrollar 'odelos 'ole"ulares +ue 'uestren el tie'(o +ue tarda el ensa'bla5e de los *r!nulos del (ol/'ero3 (or ende3 se #an desarrollado dos 'odelos :GendrosseA3 2009=, El 'odelo de la 'i"ela asu'e +ue la (rote/na soluble P-A sintetasa rea""iona "on las 'ol"ulas de sustrato en el "ito(las'a de la ba"teria3 una vez +ue las (ri'eras 'ol"ulas del (ol/'ero se for'an3 las 'ol"ulas se a*re*an (or intera""iones #idrof)bi"as3 dando "o'o resultado la for'a"i)n de (e+ue1os *r!nulos de P-A, Ba enzi'a P-A sintetasa (er'ane"e unida a la su(erfi"ie de los *r!nulos de P-A 0 se vuelve insoluble, El 'odelo de brota"i)n (or su (arte3 asu'e +ue la P-A sintetasa se aso"ia "on la 'e'brana "ito(las'!ti"a 0 +ue una "adena ini"ial de P-; intera"tDa "on la 'e'brana (or intera""iones #idrof)bi"as3 resultando en la for'a"i)n de 'ol"ulas de P-;, Bos *r!nulos se dis*re*an de la 'e'brana en eta(as (osteriores 0 las (rote/nas de P-A de su(erfi"ie se (ueden a*re*ar a los *r!nulos en "re"i'iento, Para "ultivar la ba"teria Alcaligenes eutrophus en "ondi"iones de laboratorio3 es re"o'endable realizar las si*uientes (ruebas 0 "onsiderar los si*uientes as(e"tos des"ritos en el Manual de ;er*e0 de ;a"teriolo*/a iste'!ti"a8 1, En "ondi"iones aer)bi"as3 la ba"teria "re"e ade"uada'ente en un 'edio nutritivo sintti"o "on !"ido B&*lut!'i"o3 sin e'bar*o3 en anaerobiosis o"urre (o"o "re"i'iento, 2, Ba ba"teria tiene un 'etabolis'o estri"ta'ente res(iratorio :aer)bi"o= "on el o4/*eno +ue a"tDa "o'o ele"tr)n a"e(tor ter'inal,

E, Bas rea""iones +u/'i"as de la "atalasa 0 la o4idasa *eneran un resultado (ositivo :H=, 4, Iienen la "a(a"idad de redu"ir el "o'(uesto nitrato :6>2=, %, Ba te'(eratura )(ti'a de desarrollo es de 2CJ23 aun+ue ta'bin (uede "re"er a ECJ2, 6, El (- )(ti'o suele ser de C,0&8,03 0 suele aislarse del suelo3 donde est! ina"tiva, C, Es resistente al "obre a "on"entra"iones de #asta 800 KM3 ade'!s este ele'ento esti'ula el "re"i'iento de esta ba"teria, e re(rodu"e (or fisi)n binaria, 8, A eutrophus en un 'edio nutritivo "on a*ar des(us de 2 d/as de in"uba"i)n a 2CJ2 e'(ieza a for'ar "olonias de as(e"to *ris!"eo3 brillante3 'u"oide3 lisas 0 "onve4as, 9, Puede lisar diversas ba"terias Gra' ne*ativas 0 (ositivas3 0a +ue a"tDa "o'o un de(redador no obli*ado, 10, En "aldo de tio*li"olato3 la ba"teria "re"e s)lo en la zona o4idada, $n buen "re"i'iento se obtiene en un 'edio +ue "onten*a a"etato o fru"tuosa 0 +ue est su(le'entado "on "loruro de a'onio :6- 42l= "o'o Dni"a fuente de nitr)*eno or*!ni"o, $n e4"elente "re"i'iento se (uede obtener en un 'edio sintti"o 6&1 su(le'entado "on !"ido B&*lut!'i"o "o'o Dni"a fuente de nitr)*eno or*!ni"o :2arrit0 et al3 200E=, >tra de las (ruebas 'orfol)*i"as +ue se deber/a realizar (ara deter'inar si o"urre la for'a"i)n de los *r!nulos de P-. en el estudio de la ba"teria de R. eutropha utilizando la 'i"ros"o(/a de fluores"en"ia es la tin"i)n "on ro5o de 6ilo, 7es(us de llevar a "abo este (ro"eso de tin"i)n3 GendrosseA :2009= su*iere +ue los *r!nulos (re'aturos se lo"alizan en la su(erfi"ie (erifri"a de la "lula o en los (olos "elulares, Ade'!s3 deter'in) +ue la for'a"i)n de *r!nulos de P-A s)lo to'a 10 'in des(us de #a"er la transferen"ia de las "lulas libres de P-; a un 'edio +ue (ro'ueva la a"u'ula"i)n del (ol/'ero #asta los (ri'eros *r!nulos ubi"ados en los (olos "elulares3 "on la (osterior for'a"i)n del "o'(le5o (rotei"o P#a2&EGFP (ara observar las "lulas vivas, Aun+ue la tin"i)n "on ro5o de 6ilo (er'iti) observar +ue los *r!nulos fluores"entes estaban distribuidos en la 'e'brana "ito(las'!ti"a3 al*unos (untos se visualizaron en la (eriferia de la "lula, Bas "lulas +ue a"u'ularon P-; en su interior3 "re"ieron en el laboratorio en un 'edio de "ultivo 6; :"aldo nutritivo o nutritive broth= en toda la "lula3 (ero durante la fase esta"ionaria se 'ovilizaron a la 'e'brana "elular :des(us de 24&E6 # de in"uba"i)n= :GendrosseA3 2009=,

Figura +# Pro"eso de for'a"i)n de *r!nulos de P-;, $n "ultivo libre de P-; de la ba"teria R. eutropha a"u'ulando el (ol/'ero P-;&4 es transferido a un 'edio 6; su(le'entado "on 0,2F de *lu"onato de sodio al ini"io :0 'in=, e (uede observar la for'a"i)n de los *r!nulos a (artir del "o'(le5o del *en P#a2& EGFP :(rote/na verde fluores"ente= 0 el 'ovi'iento de este "o'(le5o a la "lula (erifri"a durante un (eriodo de in"uba"i)n de 10 'in a E0J2, Ba tin"i)n "on ro5o de 6ilo (er'iti) identifi"ar la a(ari"i)n de *r!nulos des(us de 10 'in, Fuente8 GendrosseA3 2009,

Extraccin en cam o Ba 'uestra de la ba"teria Cupriavidus necator se ubi"a en el #u'edal Palo .erde :10J 2%L 20M latitud norte 0 8%J 2EL 00M lon*itud oeste=3 ubi"ado en el "ant)n de ;a*a"es en la (rovin"ia de Guana"aste3 2osta Ri"a, Ba e4tra""i)n de la 'uestra de suelo se realiza a (artir de un ta(ete 'i"robiano a 1,% '' de (rofundidad de la "a(a su(erfi"ial "on base en los "i"los "ir"adianos3 (or lo +ue se (odr/a "ole"tar en 5ulio, Bue*o3 la 'uestra fue liofilizada (ara ina"tivar la ba"teria 0 al'a"enarla, Bas 'uestras de la ba"teria +ue se e'(learon (ara el an!lisis de A76 del (oli#idro4ial"anoato fueron "on*eladas en nitr)*eno l/+uido 0 (osterior'ente fueron "ortadas en un 'i"r)to'o en "a(as de %00 K' de es(esor :.illanueva et al3 2010=, Extraccin en la%oratorio Bas 'uestras del ta(ete 'i"robiano fueron #o'o*enizadas en solu"i)n isot)ni"a, Bas dilu"iones de la 'uestra fueron "ultivadas en un 'edio de "ultivo lla'ado N"aldo nutritivoO :% *Pl e4tra"to de "arne3 E *Pl (e(tona 0 20 *Pl a*ar= su(le'entado "on *lu"osa o fru"tosa 0 200K* de estre(to'i"inaP'l, Bos "ultivos fueron "re"idos ba5o "ondi"iones )4i"as a 2CJ2 durante un (eriodo de 24 # :6aran5o3 2010=, Prue%as adicionales ara la determinacin mor,olgica de la %acteria ( el P-* Para dete"tar las "e(as +ue (rodu5eron (oli#idro4ial"anoatos3 (ri'ero se realiz) el "ultivo de la ba"teria en un 'edio su(le'entado "on ro5o de 6ilo :0,% '*Pl= en di'etilsulf)4ido, Ade'!s3 la a"u'ula"i)n fue "onfir'ada 'ediante la tin"i)n "on azul de 6ilo 0 una t"ni"a +u/'i"a lla'ada N2ro'ato*raf/a l/+uida de alta efi"ien"iaO :-PB2=, Bos "ultivos e'(leados (ara el an!lisis -PB2 fueron in"ubados durante 48 # en un 'edio EMH3 lue*o se "entrifu*) la 'uestra3 se resus(endi) en el 'is'o 'edio "on nitr)*eno li'itado 0 se volvi) a in"ubar (or un (eriodo de 48 #, El (ellet ba"teriano :'uestra= obtenido fue liofilizado 0 di*erido "on 2 'l de 6a>- 26 a 100J2 (or 4% 'in, 7es(us3 los tubos fueron refri*erados3 0 al finalizar este (ro"eso3 se adi"ion) 1 'l de -2l %6 0 1 'l de buffer fosfato :solu"i)n a'orti*uadora (ara re*ular el (- a C=, Ba

'uestra fue "entrifu*ada a 2000 *P20 'in 0 el su(ernadante se filtr), El e4tra"to obtenido se utiliz) (ara llevar a "abo el (ro"edi'iento de -PB2 :.illanueva et al3 2010=, 2# Escri%a un m.todo de muestreo' los osi%les an/lisis estadsticos' tome en cuenta el clima el suelo' el 0a%itat' las osi%les interacciones con otros organismos# Rasltonia eutropha, (ertene"e a la sub"lase 9&(roteoba"terias 0 dentro del *nero de Burkholderia 0 Ralstonia las "uales se*Dn ilva @ .inuesa3 :200C= (ueden estable"er rela"iones si'bi)ti"as "on la ra/z (lantas le1osas 0 "olonizar n)dulos radi"ales, Por eso3 #a0 +ue "onsiderar varios as(e"tos antes de ini"iar el (ro"eso de 'uestreo "o'o8 deli'itar la zona a 'uestrear3 la "ual debe "ontener la sufi"iente "antidad de e5e'(lares +ue se andan bus"ando3 ade'!s al tratarse de es(e"ies le1osas "u0a altura es variable3 0 "u0o siste'a radi"al *eneral'ente est! or*anizado en una ra/z (ivotante 0 varias se"undarias3 se debe dis(oner del e+ui(o ade"uado (ara llevar a "abo esa e4"ava"i)n sin da1ar la (lanta3 0 el a'biente +ue lo rodea3 lo '!s re"o'endable es to'ar la 'uestra de ra/"es se"undarias +ue est!n 'enos li*nifi"adas3 ade'!s al ser las +ue van abriendo terreno (ara obtener nutrientes (resentan un 'etabolis'o '!s a"tivo 0 'a0or "antidad de nutrientes (or lo +ue e4iste una 'a0or (robabilidad de en"ontrar la ba"teria en esta zona, General'ente3 "uando se 'ane5a un deter'inado e"osiste'a3 se debe "onsiderar +ue los #!bitats naturales en +ue se desarrollan los or*anis'os est!n "onstituidos de una serie de re"ursos 0 nutrientes3 lo "ual i'(li"a el desarrollo de una *ran diversidad de 'i"roor*anis'os 0 su (osible intera""i)n 0 "o'(eten"ia, En este sentido3 las teor/as en las +ue s)lo se "onsidera un nutriente (or se(arado no des"riben "orre"ta'ente la din!'i"a (obla"ional en siste'as "on 'Dlti(les re"ursos, Ade'!s3 en estos siste'as las intera""iones entre la diversidad de es(e"ies "onlleva a os"ila"iones re*ulares o la (erturba"i)n de la din!'i"a de la (obla"i)n3 os"ila"iones +ue usual'ente 'antienen la diversidad en los e"osiste'as :-iltunen et al3 2008=, 2onsiderando +ue se traba5ar/a en el #u'edal Palo .erde3 el "li'a re*ional ser/a tro(i"al se"o "on dos esta"iones 'ar"adas8 esta"i)n se"a +ue abar"a los 'eses de di"ie'bre&abril 0 esta"i)n lluviosa +ue va de 'a0o&novie'bre, Ba (re"i(ita"i)n anual de la re*i)n es de 126E '', Esta !rea de "onserva"i)n a utilizar (resenta (lani"ies 0 serran/as de (o"a eleva"i)n3 'ientras +ue las zonas altas (resentan 'aterial "alizo derivado de los arre"ifes o arenis"as de sili"io, 2o'o el traba5o se realizar/a en un #u'edal a"tivo3 se #ar/a uso de un #!bitat de bos+ue tro(i"al lluvioso :Ira'a3 F, 200%=, $na de las 'etodolo*/as a se*uir (ara realizar este ti(o de 'uestreos es el +ue (lantea ;arrett @ ParAer :2006= +uienes tratando de de'ostrar la "oe4isten"ia de Cupriavidus3 "on Mimosa sp aislaron se*'entos de ra/z sin destruir la (lanta 'adre, ;arrett @ ParAer :2006=3 e4"avaron un se"tor de la base de la (lanta3 #asta lle*ar a la ra/z3 lue*o to'aron un trozo de la 'is'a3 +ue (ara efe"tos de "onserva"i)n3 *uardaron en un fras"o "on a*ente dese"ante 0 lue*o los refri*eraron (ara indu"ir un estado de laten"ia3 o dis'inu"i)n de la a"tividad 'etab)li"a en la ba"teria3 una vez

+ue la trasladaron al laboratorio ba5o "ondi"iones estriles3 se sa"aron (e+ue1os trozos de ra/z e ino"ularon :se'braron= en (latos Petri, Por otro lado se (uede to'ar "o'o referen"ia el 'uestreo realizado (or Arn!ez @ >rtiz3 :2010= en Vochysia erruginea3 (lanta +ue lle*a a 'edir #asta 4% 'etros : olis @ Mo0a, 2004= el 'uestreo realizado en esta es(e"ie "onsisti) en to'ar 'uestras de suelo a diferentes distan"ias de la "o(a del !rbol se*Dn la fi*ura 43 de esa 'uestra de suelo se e4tra5eron las ra/"es finas del !rbol (ara (osteriores an!lisis, Ba A. eutrophus *eneral'ente se en"uentra aso"iada a la ra/z del !rbol Calophyllum longi olium3 el "ual lle*a a 'edir #asta 2% '3 (or lo +ue to'ando "o'o referen"ia el 'uestreo de Vochysia erruginea3 se (odr/a realizar una re"ole"ta de ra/"es del 'is'o 'odo "on el fin de (oder aislar la ba"teria,

Figura 1# Es+ue'a de los sitios de 'uestreos radi"ulares en !rboles de Vochysia erruginea, Fuente2 Arnaz3 @ >rtiz, 2010,

Enton"es3 se deli'itan las zonas a 'uestrear3 0 #a"iendo uso de un a(arato ade"uado (ara la tarea "o'o lo es un barreno3 se (ro"ede a e4traer los trozos de ra/z, Para di"#a e4tra""i)n al no tener un 'a(a de la ra/z de la (lanta se (ro"ede a de'ar"ar la zona "ir"undante al !rbol "on el fin de to'ar 'uestras a diferentes distan"ias de la base as/ "o'o (rofundidades de la (lanta3 "on el fin de deter'inar en +u zona (uede #aber 'a0or "antidad de ra/"es as/ "o'o 'a0or (resen"ia de n)dulos 0 "o'binado "on la 'etodolo*/a de ;arrett @ ParAer :2006=3 se (ro"ede a al'a"enar las 'uestras en un re"i(iente ade"uado 0 a ba5a te'(ratura (ara evitar la de*rada"i)n del 'aterial as/ "o'o la 'uerte de la ba"teria , Ba fi*ura % re(resenta un es+ue'a del (ro"eso a se*uir (ara 'uestrear,

Figura 3# Es+ue'a de la 'etodolo*/a a se*uir (ara el 'uestreo de ra/"es de una (lanta le1osa, Fuente2 Gru(o de traba5o,

El 'todo e'(leado no "ausa *randes estra*os a nivel de e"osiste'as ni en otras es(e"ies +ue intera"tDen "on la (lanta (ues el a(arato utilizado (ara to'ar la 'uestra tiene un di!'etro (e+ue1o 0 es un 'todo 'anual3 donde la 'ani(ula"i)n del 'aterial no "ausa da1os si*nifi"ativos a las es(e"ies rela"ionadas "on la (lanta, 7entro de los (osibles an!lisis estad/sti"os +ue se (odr/an a(li"ar a un e4(eri'ento de este ti(o3 (uede a(li"arse una I&student (areada3 +ue 'e (er'ite to'ar datos de los 'is'os e5e'(lares en dos 'o'entos distintos 0 (oder "orrela"ionarlos3 al*unos (ar!'etros +ue se (ueden 'edir a travs de este 'todo (uede ser la "on"entra"i)n ba"teriana en los n)dulos radi"ales3 "antidad de nutrientes 0 de a*ua dis(onibles en el suelo as/ "o'o en las ra/"esQ en dos (o"as distintas3 esto (er'ite sa"ar un esti'ado de "ual es l (er/odo )(ti'o (ara to'ar la 'uestra, Ia'bin se (uede a(li"ar un an!lisis de .arianza (or e5e'(lo si se +uiere estudiar las rela"iones si'bi)ti"as de la (lanta se*Dn el or*anis'o "on el +ue intera"tDe, +# $esde el unto de !ista &er/r4uico como realizara su ex erimento# Bas "o'unidades 'i"robianas estratifi"adas :"ono"idas "o'o ta(etes 'i"robianos= son a+uellas (obla"iones de ba"terias +ue se desarrollan en *radientes a'bientales deter'inados en interfases de a*ua 0 un sustrato s)lido, $sual'ente3 estas "o'unidades est!n estratifi"adas verti"al'ente "on base en los *radientes de intensidad de luz 0 rea""iones +u/'i"as de redu""i)n&o4ida"i)n3 "ondi"iones +ue son 'odifi"adas diaria'ente3 0 +ue "rean N'i"roni"#osO3 los "uales son o"u(ados (or una serie de (obla"iones ba"terianas, Para re"ono"er la 'anera en +ue se deber/a realizar el e4(eri'ento 5er!r+ui"a'ente3 #a0 +ue "ono"er al*unos as(e"tos en rela"i)n "on los "i"los bio*eo+u/'i"os 0 el re"i"lado de los nutrientes ubi"ados en las "a(as del suelo, En (ri'er tr'ino #a0 +ue "onsiderar +ue las elevadas tasas fotosintti"as +ue o"urren en la "a(a f)ti"a en la su(erfi"ie del suelo3 van a *enerar *radientes de (-3 "on"entra"iones de "arbono inor*!ni"o disuelto 0 "on"entra"i)n de o4/*eno :.illanueva, 200%=, En lo +ue res(e"ta al "i"lo del "arbono 0 el o4/*eno3 la ba"teria Cupriavidus necator se en"ar*a de la a"tividad #eter)trofa (ro"edente de la res(ira"i)n aer)bi"a (ara (rodu"ir

las fuentes de "arbono inor*!ni"o ne"esarias (ara el resto de 'i"roor*anis'os en las "a(as '!s (rofundas del suelo, in e'bar*o3 es ne"esario se1alar +ue el (ro"eso de res(ira"i)n +ue realizan estas ba"terias es re*ulado (or fa"tores "o'o son la te'(eratura 0 la intensidad de luz, i #a0 un in"re'ento de la irradia"i)n solar su(erfi"ial3 as/ ta'bin au'entar! la (enetra"i)n de la luz a nivel del suelo3 lo "ual va a a"tivar los (ro"esos fotosintti"os en las "ianoba"terias 0 el resto de or*anis'os fotosintti"os3 indu"iendo (ro(or"ional'ente un au'ento en la (rodu""i)n del o4/*eno 0 en la a"tividad 'etab)li"a de Cupriavidus necator, Por otra (arte3 niveles de te'(eratura elevados indu"en la a"tividad o4i*enasa de la enzi'a Rubis"o3 lo +ue i'(li"a un in"re'ente en la fotos/ntesis en "on"entra"iones "re"ientes de o4/*eno debido a +ue (robable'ente o"urre un as"enso de la o4ida"i)n de 'ateria or*!ni"a 0 la (rodu""i)n de di)4ido de "arbono aso"iados a un efi"iente re"i"lado de fotosintatos en la "a(a f)ti"a :.illanueva, 200%=, >tro ele'ento "lave i'(li"ado en la (rodu""i)n de bio'asa en los ta(etes 'i"robianos es el nitr)*eno, En el "aso de la ba"teria C. necator3 0a +ue ta'bin (uede #a"er si'biosis "on "iertos !rboles 'ediante el desarrollo de n)dulos en las ra/"es del !rbol3 es (osible +ue la ba"teria (ueda fi5ar nitr)*eno a (artir fuentes de nitr)*eno or*!ni"o "o'o son el a'onio3 nitratos 0 nitritos +ue (ro"eden de la 'ateria or*!ni"a disuelta en el suelo :.illanueva, 200%=,

Figura 5# Es+ue'a 'ostrando las rela"iones fisiol)*i"as entre las (obla"iones 'i"robianas 0 los *radientes estable"idos dentro de los ta(etes 'i"robianos, Fuente8 .illanueva, 200%,

2on base en el es+ue'a anterior3 "onsiderando +ue Cupriavidus necator es una ba"teria +ui'iolit)trofa (or+ue re+uiere nutrientes inor*!ni"os (ara "re"erQ 0 se desarrolla de for'a )(ti'a en a'bientes o4i*ni"os3 aun+ue "abe la (osibilidad +ue se desarrolle en a'bientes an)4i"os3 se "onsiderar/a (ri'ordial'ente "o'o una ba"teria #eter)trofa aer)bi"a "on (osibilidad de anaerobiosis, Por lo tanto3 la ba"teria se en"ontrar/a en la zona de transi"i)n )4i"a&an)4i"a3 esto i'(li"a +ue desde el (unto de vista 5er!r+ui"o3 el 'uestreo se debe llevar a "abo a 1,% '' de (rofundidad del suelo 0 #a"ia la zona )4i"a, Ba zona o4i*ni"a del suelo se "ara"teriza (or "ontribuir "on el balan"e de la din!'i"a de las (obla"iones entre la (rodu""i)n de o4/*eno

fotosintti"o 0 la absor"i)n del o4/*eno (or (arte de las ba"terias #eter)trofas3 las "uales 5ue*an un (a(el i'(ortante en redu"ir el "ontenido de o4/*eno dentro del ta(ete 'i"robiano3 favore"iendo el re"i"lado de 'ateria or*!ni"a 0 ener*/a en el siste'a :.illanueva, 200%=, 1# )a %acteria se encuentra en los cerros calizos de Palo 6erde con una reci itacin anual de 700 a 1200 mm con una tem eratura anual romedio de 28 9C ( 2: 9C# ;En 4u. zona de !ida se encuentra< ;Cmo odra ser su origen (Bacteria" si uno de los rimeros cerros 4ue emergieron en Costa Rica son los de Palo 6erde< En 2osta Ri"a se #an *enerado variados siste'as de "lasifi"a"i)n de la ve*eta"i)n3 los "uales bus"an a*ru(ar los diferentes e"osiste'as en unidades +ue (resenten al*Dn *rado de si'ilitud, Bas variables e'(leadas (ara los diferentes siste'as de "lasifi"a"i)n son en 'u"#os "asos diferentes 0 e'(lean 'etodolo*/as i*ual'ente diferentes, in e'bar*o el siste'a '!s e'(leado es el iste'a de Ronas de vida o for'a"iones ve*etales (ro(uesto (or -oldrid*e :1982=, e*Dn esta "lasifi"a"i)n3 Palo .erde "on una (re"i(ita"i)n anual de 800 a 1200 '' "on una te'(eratura anual (ro'edio de 2CJ2 0 29J2 (ertene"e a la zona de vida de bos+ue se"o tro(i"al, Esto debido a +ue (resenta un !'bito de (re"i(ita"i)n entre 800 0 2100 '' de (re"i(ita"i)n 'edia anual, 2o'o 'en"iona Suesada :200%=3 esta zona de vida est! re(resentada en Guana"aste3 valle del r/o Ie'(is+ue, Ba "ara"ter/sti"a funda'ental en esta zona de vida es la dis'inu"i)n 'ar"ada de las (re"i(ita"iones +ue se da entre los 'eses de novie'bre a 'a0o :"ono"ido "o'o esta"i)n se"a o err)nea'ente verano=, Este fen)'eno deter'ina una (eriodi"idad 'u0 'ar"ada en la fenolo*/a de la ve*eta"i)n, 7urante la esta"i)n se"a3 una *ran "antidad de es(e"ies forestales (rodu"en lla'ativas flora"iones, El ist'o 2entroa'eri"ano "onstituido (or un !rea de "er"a de %2% 000 A' 2 se for') #a"e 2 'illones de a1os, 7urante el 2ret!"i"o3 los '!r*enes de 6orte 0 uda'ri"a estaban se(arados (or una e4tensi)n de a*ua de E 000 A' de 'ar abierto, A final del (er/odo 2ret!"i"o3 una serie de islas vol"!ni"as +ue ven/an desde 2olo'bia #asta el sureste de 6i"ara*ua3 dieron ori*en a este ist'o +ue #o0 "ono"e'os, Este ist'o #a lle*ado a ser un "orredor biol)*i"o (ara el NGran <nter"a'bio A'eri"anoO de flora 0 fauna terrestre en las re*iones te'(ladas 0 tro(i"ales3 0 #a deli'itado una barrera entre el Mar 2aribe 0 el >"ano Pa"/fi"o :Ellison, 2004=,

10

Figura 8#Io(o*raf/a se"undaria de 2entro A'ri"a, B/neas de "ontorno en intervalos de 1000 ', Fuente8 Ellison, 2004,

A'ri"a "o'o barrera result) en una es(e"ia"i)n alo(!tri"a de fauna 'arina, Por otra (arte3 la interse""i)n de las (la"as te"t)ni"as *ener) la fra"tura del ist'o3 en el "ual 'u"#os de los #u'edales se lo*raron desarrollar, En 2osta Ri"a3 la subdu""i)n de la (la"a del 2o"o en la (la"a del 2aribe resulta del vul"anis'o a"tivo a lo lar*o de todo el ist'o, En este sentido3 las a*uas subterr!neas de ori*en *eotr'i"o #an "ausado 'odifi"a"iones en la "orriente +u/'i"a 0 e"ol)*i"a en el (a/s :Ellison, 2004=, A'ri"a 2entral se ori*in) de dos blo+ues3 el blo+ue 2#ortis :abar"a territorio #ondure1o3 el norte de 6i"ara*ua3 el levanta'iento de 6i"ara*ua 0 la isla de Ga'ai"a= 0 el blo+ue 2#orote*a :abar"a el sur de A'ri"a 2entral= :Fi*ura 8=, El ori*en de la (rovin"ia de Guana"aste se #a"e 180 Ma "uando se ori*in) el blo+ue 2#orote*a3 esto se dio "uando una anti*ua (or"i)n de la (la"a o"e!ni"a del Pa"/fi"o >riental se fra*'ent) en dos (la"as3 a#/ se ini"i) el (ro"eso de subdu""i)n +ue dio ori*en a una "adena de islas de ori*en vol"!ni"o3 estas se 'antuvieron aisladas #asta #a"e 6%Ma "uando se dio "olisi)n "on el blo+ue 2#ortis :-ern!ndez @ Baurito, 200%=, El "#o+ue de estos blo+ues (rodu5o un (uente (ara el traslado de es(e"ies 0 tras for'arse el lla'ado N(uente de Pana'!O se dio un inter"a'bio de es(e"ien de A'ri"a del sur a 6ortea'ri"a 0 vi"eversa :-ern!ndez @ Baurito, 200%=, Esa ba"teria (udo #aber lle*ado a nuestro territorio (or ese inter"a'bio de es(e"ies o bien3 aDn si el territorio era una isla3 'u"#as es(e"ies 'i*rantes "o'o aves (udieron ino"ularla en esos territorios re"in e'er*idos,

11

Figura 7# Ma(a te"t)ni"o del 2aribe 0 de (rovin"ias *eol)*i"as de A'ri"a 2entral, Fuente2 -ern!ndez @ Baurito, 200%,

Bos suelos de Palo .erde son <n"e(tisoles de ori*en vol"!ni"o 0 al*unos son .ertisoles, Bas tierras altas de Palo .erde se "ara"terizan (or (resentar "olinas de (iedra "aliza (orosa, Bos suelos son del*ados3 ro"osos 0 se #allan a lo lar*o de "ordilleras +ue dese'bo"an en tierras ba5as "on suelos '!s (rofundos derivados de la 'ez"la de (iedra "aliza 0 ar"illa o de()sitos de li'o "er"anos al R/o Ie'(is+ue, Bos bos+ues de Palo .erde "ontienen !rboles de es(e"ies de"iduas 0 sie'(re verdes3 +ue in"lu0en e4tensas !reas de bos+ues inundados, 2on base en las investi*a"iones ar+ueol)*i"as realizadas en Palo .erde3 los datos obtenidos sobre el (olen 0 el "arb)n su*ieren +ue los seres #u'anos #an vivido en esta re*i)n durante 'iles de a1os3 las densidades (obla"ionales en la (o"a (re&2olo'bina eran ba5as3 0 la 'edida en +ue estas (obla"iones 'odifi"aron el 'edio a'biente 0 la "o'(osi"i)n las es(e"ies forestales se des"ono"e, Aun+ue en los a1os 1%00Ts "on la invasi)n de los es(a1oles3 se redu5eron las (obla"iones de ind/*enasQ (ara los a1os 1800 0 1900 estas !reas e4(eri'entaron una transfor'a"i)n de un (aisa5e do'inado (ri'ordial'ente (or bos+ues a un (aisa5e de (astizales de sabana +ue se 'antienen a travs de +ue'as 0 (astoreo, Bas #ierbas e4)ti"as :en es(e"ial Hyparrenia ru a= +ue fueron introdu"idas "on el *anado3 su(ri'ieron la re*enera"i)n 0 de es(e"ies forestales nativas debido a +ue las 'is'as ten/an la "a(a"idad de rebrotar vi*orosa'ente des(us de llevar a "abo el (ro"eso de +ue'a, El Urea de 2onserva"i)n de Palo .erde +ue fue estable"ido "o'o tal en los a1os 19C0Ts #a re+uerido #erra'ientas (ara su 'ane5o sostenible, E5e'(lo8 la dis'inu"i)n del (astoreo #a sido Dtil (ara (ro'over la re*enera"i)n de la diversidad de es(e"ies forestales :PoVers et al, 2009=, 3# =ue causas odra &usti,icar 4ue esta %acteria es end.mica ara Costa Rica# $na es(e"ie se "onsidera end'i"a si es (ro(ia de un lu*ar 0 #abita e4"lusiva'ente esa !rea *eo*r!fi"a deter'inada :-ern!ndez @ Baurito, 200%=, Bos e"osiste'as

12

an)4i"os #idroter'ales en los +ue se #an desarrollado las ba"terias ar+ueas (udieron #aber *enerado el desarrollo 0 la evolu"i)n de una serie de ba"terias +ui'iolit)trofas3 #i(erter'of/li"as3 ar+ueas 0 aer)bi"as +ue lo*raron desarrollarse utilizando 'on)4ido de "arbono :2>= "o'o Dni"a fuente de ener*/a, Bos "a'bios *eol)*i"os en el tie'(o en 'a*nitud de las e'isiones vol"!ni"as 0 en tr'inos de +u/'i"a de la at')sfera #an redu"ido los niveles de 2> de "on"entra"iones tan elevadas "o'o 100 ((' durante la at')sfera (ri'itiva a los niveles a"tuales de 0,0%&0,E% ((', A (esar de +ue los /ndi"es de 2> en la a"tualidad #an lle*ado a ser li'itados3 al*unas ba"terias o4idantes de 2> #an (odido ada(tarse 0 evolu"ionar (ara desarrollarse ba5o estas "ondi"iones, El 'on)4ido de "arbono se (uede ori*inar de nu'erosas fuentes bi)ti"as 0 abi)ti"as +ue no deriven del vul"anis'o3 "o'o la a"tividad #u'ana3 las #o5as3 las ra/"es 0 los ani'ales3 la de*rada"i)n foto+u/'i"a de la 'ateria or*!ni"a disuelta en siste'as a"u!ti"os3 0 la foto+u/'i"a 0 ter'o+u/'i"a de*rada"i)n de la 'ateria or*!ni"a en suelos 0 sedi'entos 'arinos, A "ontinua"i)n3 se 'uestran las diferentes fuentes de ener*/a 0 diversos #!bitats +ue #an "ontribuido "on la diversidad filo*enti"a 0 fisiol)*i"a de las ba"terias +ue #an lo*rado e4(lotar el 2> "o'o fuente de ener*/a o bio'asa :?in* @ Weber3 200C=,

Figura :# Prin"i(ales fuentes naturales de la biosfera 0 su'ideros de 'on)4ido de "arbono8 Ba de*rada"i)n foto+u/'i"a de la 'ateria se"a +ue (rodu"e una (lanta al"anza unos 60 I*Pa1o de 2> +ue "ontribu0e a *enerar una "ar*a total de 2> de 2%00&2600 I*Pa1o, $na "antidad +ue se des"ono"e de 2> (uede ser "onsu'ida (or la ba"teria en la filosfera, Bas ra/"es de la (lanta e'iten 2> dentro del suelo 0 (ueden so(ortar la 'i"robiota o4idante de 2> en la rizosferaQ (or lo +ue el suelo "ontribu0e a re'over #asta E00 I*Pa1o de 2> de la at')sfera, El "i"lo de 2> en los o"anos de(ende de la de*rada"i)n foto+u/'i"a de la 'ateria or*!ni"a disuelta3 una (e+ue1a (arte de 2> se (ierde a la at')sfera 0 en otra (arte es de*radada (or el ba"terio(lan"ton, Este (ro"eso de de*rada"i)n introdu"e una (arte del 2> al fondo del o"ano3 la "ual (uede ser lo"al'ente i'(ortante (ara las ba"terias aerobias 0 anaerobias o4idantes de 2> Fuente8 ?in* @ Weber3 200C,

A estas ba"terias +ue e4isten desde el ini"io de la vida se "ono"en "o'o ba"terias o4idantes de 2>3 debido a +ue a"o(lan la o4ida"i)n de 2> (ara redu"irlo a o4/*eno3 inde(endiente'ente de su "a(a"idad (ara "re"er "on 2> "o'o Dni"a fuente de "arbono 0 ener*/a, Ba rea""i)n bio+u/'i"a se 'uestra a "ontinua"i)n8 2> H - 2>

13

2>2 H 2-H H 2e&, 7entro del *ru(o de ba"terias o4idantes de 2>3 se en"uentran a+uellas ba"terias #eter)trofas terrestres 0 'arinas (ertene"ientes al *ru(o de las 9& (roteoba"terias, Este *ru(o de ba"terias es (osible +ue no (uedan "re"er ba5o elevados /ndi"es de 'on)4ido de "arbono3 (or lo +ue (ara su "re"i'iento3 ta'bin ne"esitan "o'(uestos or*!ni"os :carbo!id"voros=3 0 se "ara"terizan (or un lento "re"i'iento 0 est!n rela"ionados 'i4otr)(i"o "o'o fuente de ener*/a (ara el 'anteni'iento o la sobreviven"ia, El aisla'iento de ba"terias ter')filas3 #al)filas3 (si"r)filas e #i(erter')filos da una "lara idea de la diversidad fisiol)*i"a de ba"terias o4idantes de 2>3 (ero ta'bin (rovee infor'a"i)n valiosa a"er"a del ori*en 0 la evolu"i)n res(e"to a la "a(a"idad de o4ida"i)n el 2> :?in* @ Weber3 200C=, Por otra (arte3 el estudio de los *eno'as en este ti(o de ba"terias #a sido una #erra'ienta vital (ara re"ono"er +ue e4iste una serie de *enes Co! i'(li"ados en la o4ida"i)n del 2> 0 a"er"a de la estru"tura 0 la a"tividad aer)bi"a de la enzi'a 'on)4ido de "arbono des#idro*enasa :2>7-=3 la "ual (ertene"e a la fa'ilia de enzi'as del 'olibdeno #idrolasa3 0 +ue "onsiste de un d/'ero (ro"edente de #eterod/'eros, Esta enzi'a (osee tres subunidades +ue "odifi"an (ara los *enes co!#3 co!M 0 co!$3 +ue son subunidades de ta'a1o "re"iente, Ba 'a0or/a de o4idantes aer)bi"os de 2> +ue se #an estudiado 'ole"ular'ente "onstitu0en un sub*ru(o sustan"ial derivado de las ba"terias #eter)trofas, e sabe ade'!s +ue (ara el "aso de la ba"teria C. necator3 el *ru(o de *enes co! de la for'a << es el +ue (redo'ina3 0 est! rela"ionado "on la (referen"ia a otro sustrato distinto al del *ru(o de *enes co! de la for'a < 0 (resenta una fun"i)n li'itada al 2>7- :?in* @ Weber3 200C=, iendo los "erros de Palo .erde los (ri'eros en e'er*er en el (a/s3 0 "onsiderando +ue la ba"teria Hydrogenomonas eutropha una de las ba"terias +ue #a e4istido desde el "o'ienzo de la vida3 no es dif/"il "onsiderar se #a0a (odido desarrollar en los suelos de ori*en vol"!ni"o o en los sedi'entos 'arinos del #u'edal de Palo .erde "o'o una ba"teria o4idante de 'on)4ido de "arbono3 +ue a (esar de +ue se desarroll) lenta'ente3 el (ro"eso de evolu"i)n (er'iti) +ue la 'is'a se diversifi"ara, Adi"ional'ente3 la ener*/a "onservada (ro"edente del 'etabolis'o de esta ba"teria aer)bi"a #a sido Dtil (ara fi5ar di)4ido de "arbono (ara (rodu"ir bio'asa3 (ro"eso +ue i'(li"a el "i"lo de 2alvin&;enson3 basado en la a"tividad de la enzi'a Rubis"o :Mndez et al3 2010=, 5# =ue ,actores naturales 0an ro!ocado 4ue 0a(a ma(or di!ersidad en Costa Rica 4ue en Climas tem lados# *sumiendo 4ue esta %acteria esta re resentada or di!ersas es ecies como deducira cual es la es ecie !erdadera con 4ue usted desea tra%a&ar' (a 4ue en este as no existen es ecialistas en taxonoma %acteriana# e*Dn el <6;io3 2osta Ri"a "on s)lo %1,100 A'2 de su(erfi"ie terrestre :030EF de la 'undial= 0 %89,000 A'2 de 'ar territorial es "onsiderado uno de los 20 (a/ses "on 'a0or biodiversidad del 'undo, u (osi"i)n *eo*r!fi"a3 sus dos "ostas 0 su siste'a 'onta1oso3 +ue (rovee nu'erosos 0 variados 'i"ro"li'as3 son al*unas de las razones +ue e4(li"an esta ri+ueza natural3 tanto en es(e"ies "o'o en e"osiste'as, Bas '!s de %00,000 es(e"ies +ue se su(one se en"uentran en este (e+ue1o territorio re(resentan "er"a del 4F del total de las es(e"ies esti'adas a nivel 'undial,

14

Ba ubi"a"i)n tro(i"al irre*ular "on un !'bito altitudinal +ue va desde el nivel del 'ar #asta 4000' 0 su (osi"i)n /st'i"a +ue (er'iti) la 'i*ra"i)n de es(e"ies entre las 'asas "ontinentales de 6orte 0 ur A'ri"a son +uiz!s los as(e"tos funda'entales +ue definen esta valiosa "ara"ter/sti"a, $n fa"tor (ri'ordial es la altitud :altura sobre el nivel del 'ar=3 +ue en los tr)(i"os (rodu"e te'(eraturas +ue var/an desde un "alor fuerte al nivel del 'ar #asta la nieve (er'anente en las "i'as 'onta1osas, El relieve deter'ina diferen"ias "onsiderables en el "li'a3 (rodu"iendo as/ "li'as 'u0 diferentes en !reas redu"idas, E"ol)*i"a'ente3 la altitud deter'ina fran5as transversales de diferentes ti(os de bos+ues3 0 "on ello de diferentes "o'unidades ani'ales, Xstas no son ne"esaria'ente fi5asQ todos los ani'ales3 desde 'ari(osas #asta vertebrados3 se trasladan de una fa5a lon*itudinal a las otras, Ba danta (or e5e'(lo3 vive tanto en los (!ra'os del 2#irri()3 a E800 '3 "o'o al nivel de 'ar, Bas aves e'i*ran3 tanto altitudinal'ente :"o'o ve'os todav/a en las bandadas de (eri"os= "o'o #a"ia !reas ad0a"entes "o'o A'ri"a del 6orte3 aun+ue (or su(uesto ta'bin #a0 es(e"ies relativa'ente sedentarias o sea3 +ue via5an (o"o :B)(ez3 2009=, Asi'is'o3 la biodiversidad o ri+ueza en es(e"ies de (lantas 0 ani'ales (are"e estar rela"ionada3 en tr'inos *enerales3 "on el "li'a3 es(e"ial'ente "on la #u'edad8 a 'a0or #u'edad3 'a0or diversidad, As/3 las !reas '!s ri"as en biodiversidad son el sureste de Asia3 A'ri"a tro(i"al :2osta Ri"a= 0 el oeste de Ufri"a3 +ue son ta'bin las '!s #D'edas de la tierra, 7e la 'is'a 'anea3 la ri"a biodiversidad de 2osta Ri"a se debe a su ubi"a"i)n *eo*r!fi"a3 (ues se en"uentra en la zona intertro(i"al del (laneta3 abar"ando 'a0or biodiversidad +ue la de otros (a/ses, Por otra (arte3 otros fa"tores i'(ortantes influ0entes son su "er"an/a "on el E"uador 0 estar rodeadas (or dos "ostas :Mar 2aribe 0 El Pa"/fi"o=, Por lo tanto3 2osta Ri"a3 a (esar su (e+ue1a e4tensi)n3 es un (a/s in"re/ble'ente diverso3 tanto (or su ubi"a"i)n *eo*r!fi"a "o'o (or sus esfuerzos de "onserva"i)n realizados #asta la fe"#a :B)(ez3 2009=, Al no "ontar "on es(e"ialista en ta4ono'/a ba"teriana en el (a/s3 (ara lo*rar identifi"ar "u!l es la es(e"ie verdadera "on la +ue se est! traba5ando se (odr/a #a"er 'ediante la t"ni"a de P2R :Rea""i)n en 2adena de la Poli'erasa= desarrollada (or ?ar0 Mullis a 'ediados de los a1os 80, Este es un 'todo (ara la a'(lifi"a"i)n e4(onen"ial sele"tiva de una re*i)n ele*ida dentro de una 'ol"ula de A76, 2o'o su no'bre indi"a3 se basa en la a"tividad de la enzi'a A76 (oli'erasa +ue es "a(az de fabri"ar una "adena de A76 "o'(le'entaria a otra 0a e4istente, us Dni"os re+ueri'ientos son +ue e4istan nu"le)tidos en el 'edio +ue son la 'ateria base (ara fabri"ar el A76 :los nu"le)tidos de adenina3 ti'ina3 "itosina 0 *uanina=3 0 una (e+ue1a "adena de A76 +ue (ueda unirse a la 'ol"ula +ue +uere'os "o(iar (ara +ue sirva "o'o "ebadora :el "ebador3 en in*ls M(ri'erM= :Rouessa",200E=, Ba sele""i)n del "ebador de A76 debe in"or(orar a+uellos *enes +ue estn involu"rados en el 'etabolis'o de los (oli#idro4ial"anoatos :P-A= 0 +ue sean es(e"/fi"os (ara la es(e"ie en estudio +ue resulta ser A. eutrophus, El *ru(o de *enes pha2;A "odifi"a (ara tres (rote/nas :enzi'as= i'(li"adas en este (ro"eso8 el *en P#A :9&"etotiolasa= +ue "ataliza la s/ntesis de una 'ol"ula lla'ada a"etoa"etil&2oA a (artir de a"etil 2oAQ el *en P#a; :6A7P-&o4idorredu"tasa=3 el "ual redu"e la 'ol"ula a"etoa"etil&2oA a :R=&E&#idro4ibutiril&2oAQ 0 el *en P#a2 :P-A (oli'erasa= +ue se

15

en"ar*a de (ro'over la in"or(ora"i)n de los enanti)'eros :'ol"ulas "on i'!*enes es(e"ulares= :R=&E&#idro4ibutiril&2oA +ue fueron sintetizados anterior'ente (ara for'ar el (ol/'ero en "re"i'iento :Buen*o et al3 200E=, Este *ru(o de *enes se des"ribe a "ontinua"i)n en el si*uiente es+ue'a8

Figura 10# >r*aniza"i)n de *enes 0 enzi'as i'(li"ados en la bios/ntesis de bio(l!sti"os derivados de la ba"teria en estudio Ralstonia eutropha, Fuente8 Buen*o et al3 200E,

Bas otras dos (rote/nas adi"ionales3 P#aR 0 P#aP (arti"i(an en el "atabolis'o 0 la estabiliza"i)n de los *r!nulos de (oli#idro4ial"anoatos3 res(e"tiva'ente, En este sentido3 el *en P#aR es una de()li'erasa +ue "ataliza la libera"i)n :R=&E& #idro4ibutirato del (ol/'ero, Por otra (arte3 el *en P#aP : phasin= es una (rote/na de ba5o (eso 'ole"ular +ue esti'ula el in"re'ento en la (rodu""i)n de (oli#idro4ivalerato :P-.= 'ediante la uni)n a los *r!nulos de P-., e #a re(ortado +ue la s/ntesis 0 a"u'ula"i)n de P#aP a"tDa "o'o un 'e"anis'o de(endiente de P-; +ue se rela"iona "on el *en P#aR3 +ue es un *en re(resor +ue re*ula la s/ntesis del (ol/'ero, En otro as(e"to3 la de*rada"i)n e4tra"elular de P-. o"urre (or a""i)n de "iertos 'i"roor*anis'os +ue tienen la enzi'a de(oli'erasa3 as/ "o'o varios fa"tores a'bientales :Buen*o et al3 200E=, Ba rea""i)n en "adena de la (oli'erasa se desarrolla en tres (asos, El (ri'ero es la se(ara"i)n de las dos "adenas +ue for'an la 'ol"ula de A76 +ue se +uiere a'(lifi"ar3 (ara lo "ual se debe "alentar el A76 a altas te'(eraturas +ue (ueden ser (r)4i'as a la ebulli"i)n, 2ada una de estas "adenas a"tuar! "o'o 'olde (ara fabri"ar su "o'(le'entaria, A "ontinua"i)n3 se ba5a la te'(eratura (ara "onse*uir +ue "ada "ebador se una a su re*i)n es(e"/fi"a dentro de la "adena de A76, El Dlti'o (aso "onsiste en la *enera"i)n de la "adena de A76 "o'(le'entaria (or a""i)n de la A76 (oli'erasa, 2ada una de las 'ol"ulas de A76 #i5as (ueden volver a entrar en el (ro"eso 0 servir "o'o 'olde (ara fabri"ar '!s "o(ias, As/ tras 20 "i"los de rea""i)n se (uede obtener #asta 1 'ill)n de "o(ias de una 'ol"ula de A76 :Rouessa",200E=, Bos fra*'entos obtenidos (or P2R se (ueden "ar*ar en un *el de a*arosa 0 se(ararlos (or ele"troforesis, Este an!lisis (er'ite8 deter'inar el ta'a1o e4a"to del fra*'ento3 si #a0 'uta"iones +ue alar*an o a"ortan el *en3 realizar un an!lisis de restri""i)n del fra*'ento3 deter'inando si #a0 'odifi"a"iones o diferen"ias "on res(e"to a se"uen"ias de Nreferen"iaO, Asi'is'o3 (er'ite deter'inar la (resen"ia o ausen"ia de fra*'entos (uede indi"ar si un *en est! o no est! en una *enote"a, $na vez a'(lifi"adas la se"uen"ia de inters 0 "on una 'uestra (atr)n de Alcaligenes eutrophus3 se (uede "orrer una ele"troforesis 0 'ediante una "o'(ara"i)n de bandas se "orroborar/a la identidad de la 'uestra in")*nita, Mediante la ele"troforesis se da la se(ara"i)n de los fra*'entos de distinto ta'a1o de A76 en un *el de a*arosa3 en el

16

+ue di"#os fra*'entos 'i*raran a diferente velo"idad se*Dn su (eso 'ole"ular al ser so'etidos a una "orriente el"tri"a, i las bandas refle5adas (or la 'uestra a'(lifi"ada son las 'is'as de las arro5adas (or Alcaligenes eutrophus se (odr/a "on"luir +ue se trata de la 'is'a ba"teria :Rouessa",200E=, Este 'todo de identifi"a"i)n fue realizado (or abine Be"#ner 0 Ralf 2onraden el a1o 199C3 en el "ual bus"aban identifi"ar una ba"teria #idro*en&o4idasa anaer)bi"a rela"ionada "on Alcaligenes eutrophus. Para esto (rosi*uieron a e4traer el A76 de la ba"teria in")*nita 0 dise1ar los (ri'ers es(e"/fi"os (ara Alcaligenes eutrophus, "o'o se 'uestran en la fi*ura 10, Ba rea""i)n en "adena de la (oli'erasa estaba "o'(uesta (or8 100n* de A76 *en)'i"o3 %0('ol de "ada (ri'er3 200K'ol de d6IP Ls3 %Kl del buffer P2R 10Y3 2 unidades de Ia+ Poli'erasa 0 %0Kl de a*ua (ara un volu'en de rea""i)n de 0,% 'l,

Figura 11# Pri'ers es(e"/fi"os (ara Alcaligenes eutrophus utilizados en P2R, Fuente2 Be"#ner @ 2onraden, 199C,

Bos "i"los de P2R se 'uestran en el "uadro 1, Cuadro 1# 2i"lo de P2R (ara el set de (ri'ers utilizados,

Fuente2 Be"#ner @ 2onraden :199C=,

e obtuvieron (rodu"tos de 660 (b3 a(ro4i'ada'ente3 +ue (osterior'ente se "orrieron en un *el de a*arosa al 4F "on 0,% '*Pl de bro'uro de etidio3 en el "ual se "orrobor) la identidad de la ba"teria in")*nita al (resentar el 'is'o (atr)n de bandas +ue Alcaligenes eutrophus. Bos resultados obtenidos afir'an +ue la t"ni"a de P2R 5unto "on ele"troforesis es un 'todo efe"tivo (ara "o'(robar la identidad de una 'uestra, >tra 'anera alternativa (ara deter'inar la "ara"teriza"i)n 'orfol)*i"a de la ba"teria Cupriavidus necator es 'ediante la "ara"teriza"i)n de los fl)"ulos :a*re*ados de "lulas ba"terianas= 'ediante un an!lisis de i'!*enes di*itales, Ba t"ni"a +ue i'(li"a el estudio de i'!*enes di*itales (er'ite "ara"terizar bioa*re*ados3 no s)lo en tr'inos de ta'a1o sino ta'bin en tr'inos de for'a utilizando los (ar!'etros de

17

Eu"lides 0 la *eo'etr/a fra"tal3 (or lo tanto3 est! t"ni"a #a (asado a ser una #erra'ienta "lave en las "ien"ias biol)*i"as debido a la (osibilidad de e4traer infor'a"i)n "uantitativa3 redu"iendo la (osibilidad del fa"tor #u'ano :FlinAler et al, 200C=, As/ enton"es3 des(us de tratar la 'uestra de la ba"teria C. necator "on taninos "o'o a*ente flo"ulante3 "ultivarla (ara obtener una "on"entra"i)n ade"uada de "lulas 0 "ara"terizar los fl)"ulosQ se (ro"ede a to'ar una 'uestra del a*re*ado total "on a0uda de una (i(eta Pasteur3 "on la "ual se "olo"a una *ota de esa 'uestra en un (ortaob5etos 0 se "ubre "on un "ubreob5etos, Estos a*re*ados son observados ba5o un 'i"ros"o(io de luz "on un filtro de luz e'(leando un au'ento de 40Y 0 se 'e5or) la i'a*en "on el 'i"ro'tri"o, Bue*o de +ue las i'!*enes 'ediante una "!'ara +ue el 'i"ros"o(io ten/a in"or(orado3 fueron (ro"esadas 'ediante un softVare es(e"ializado :<'a*e Pro Plus=, Bas i'!*enes fueron "a'biadas de for'ato RG; a i'!*enes "on es"ala de *rises se*uido de la re'o"i)n del fondo de la i'a*en, Ba i'a*en (or lo tanto3 fue 'odifi"ada 0 los fl)"ulos se observaron os"uros ba5o un fondo "laro, En un (aso (osterior3 se realiz) una serie de o(era"iones 'orfol)*i"as (ara obtener una i'a*en en for'ato binario :fl)"ulos "laros sobre un fondo os"uro=, Final'ente3 (ara obtener los datos "uantitativos3 se deter'in) el nD'ero de a*re*ados 0 se "al"ularon los (ar!'etros 'orfol)*i"os "on a0uda de los (ar!'etros *eo'tri"os de Eu"lides :!rea3 (er/'etro "onve4o 0 fa"tor for'a de "ada "lula= :FlinAler3 et al,200C=,

Figura 12# <'!*enes resultantes de los (asos realizados en el (ro"edi'iento (ara el an!lisis de i'!*enes, Fuente2 FlinAler3 et al, 200C,

En un estudio realizado (or FlinAler3 et al :200C= 'ediante la t"ni"a del an!lisis de i'!*enes di*itales3 las i'!*enes binarias obtenidas (er'itieron visualizar "lara'ente la distribu"i)n del ta'a1o del bioa*re*ado3 (ar!'etro +ue es "lave en la deter'ina"i)n 'orfol)*i"a de la ba"teria, Ade'!s3 "er"a del 90F de los a*re*ados obtenidos en la i'a*en di*ital (resentaron ta'a1os variables de E0&210 K'3 los "uales "on"uerdan "on otros estudios realizados "on esta t"ni"a, 2o'o "on"lusi)n se 'en"iona +ue esta t"ni"a utilizada (ara "uantifi"ar la 'orfolo*/a de los a*re*ados ba"terianos de Cupriavidus necator (odr/a ser Dtil (ara 'onitorear la (rodu""i)n de (oli#idro4ial"anoatos "o'o 'todo r!(ido3 auto'atizado 0 re(rodu"ible, 8# )a %acteria crece ( se desarrolla en un -2 +' resulta 4ue se uede extraer con ma(or ,acilidad en una . oca es ec,ica# Como' cuando ( en 4ue condiciones la odra extraer' ( or4ue se ele!a la tasa de crecimiento en ese

18

erodo es ec,ico< Comente en t.rminos de recicla&e de nutrientes' ,actores ed/,icos' endiente' atrones de !egetacin la regunta anterior# Bos 'e"anis'os e4istentes (ara 'antener la diversidad de es(e"ies est!n divididos en 'e"anis'os de flu"tua"i)n inde(endiente :"o'o la de(reda"i)n 0 la divisi)n de nutrientes= 0 en 'e"anis'os de flu"tua"i)n de(endiente, Al*unos estudios afir'an +ue las "o'unidades naturales est!n 'u0 diversas 0 las es(e"ies (ersisten en el a'biente sin "onsiderar el (rin"i(io de e4"lusi)n "o'(etitiva8 Nla "o'(eten"ia (odr/a redu"ir la diversidad de "o'unidades naturales en el "aso de +ue en un e"osiste'a3 el nD'ero de re"ursos li'itados sea ba5oO, Por otra (arte3 -ut"#ison :1961= (ro(one +ue las "ondi"iones a'bientales en flu"tua"i)n o las (erturba"iones atro(ol)*i"as a es"ala lo"al redu"en la diversidad de es(e"ies e"ol)*i"as, Ba es"ala te'(oral de las flu"tua"iones (obla"ionales es i'(ortante en la din!'i"a e"ol)*i"a, Ba ba5a linealidad +ue se (resenta en las flu"tua"iones (obla"ionales (ro'ueve la diversidad3 0a +ue "ada es(e"ie difiere en su res(uesta #a"ia un nutriente +ue es li'itado en el es(a"io 0 el tie'(o, Por otra (arte3 una "ara"ter/sti"a +ue favore"e a al*unos 'i"roor*anis'os es su "a(a"idad (ara al'a"enar nutrientes durante "ondi"iones a'bientales favorables (ara evitar la redu""i)n o e4tin"i)n (obla"ional durante "ondi"iones desfavorables :-iltunen et al, 2008=, 7ado +ue la res(uesta de las (obla"iones a "ondi"iones "a'biantes tiene un (eriodo de tie'(o finito3 las lar*as flu"tua"iones te'(orales res(e"to a la dis(onibilidad de los re"ursos3 'odifi"an los /ndi"es de "re"i'iento de una es(e"ie en (arti"ular, Ba fre"uen"ia del tie'(o es i'(ortante (ara 'antener la diversidad3 0a +ue las es(e"ies difieren en su res(uesta a la "inti"a de "a(ta"i)n3 absor"i)n o asi'ila"i)n de un nutriente3 (or lo tanto3 al*unas (obla"iones tendr!n una venta5a sele"tiva a favore"erse en rela"i)n "on otras se*Dn el nutriente +ue se en"uentre dis(onible, En un estudio realizado (or -iltunen et al :2008=3 en 2 (obla"iones "on 8 'i"roor*anis'os #eter)trofos donde se in"lu0) una "e(a ba"teriana de C. necatorQ se deter'in) +ue las flu"tua"iones a'bientales de la ba"teria (resentaban efe"tos (ositivos :flu5o de nutrientes= 0 ne*ativos :(erturba"i)n 0 'ortalidad=, Ba tasa de "re"i'iento 'i"robiana in vitro se deter'in) 'ediante el uso de 10 trata'ientos "on diferentes "on"entra"iones de 'edio de "ultivo :e4tra"to de #eno en "on"entra"iones de 0,1&10*Pl=, Por su (arte3 (ara 'edir esta tasa de "re"i'iento se utiliz) un es(e"trofot)'etro de "arbono3 el "ual (er'ite 'edir la densidad )(ti"a de "ultivos dis"ontinuos ba5o una lon*itud de onda de 480&%80 n' a intervalos de 10 'in, Cuadro 2# Par!'etros de '!4i'o /ndi"e de "re"i'iento :r'a4= e /ndi"e de satura"i)n 'edia :?s= (ro"edentes de la fun"i)n Monod (ara las (ruebas "on las "e(as ba"terianas estudiadas,

19

Z Bos (ar!'etros fueron obtenidos en e4(eri'entos 'ani(ulando la "on"entra"i)n del 'edio de "ultivo de e4tra"to de #eno, Bas letras a&d indi"an valores si*nifi"ativos de los diferentes (ar!'etros entre las es(e"ies :([0,0%3 (rueba de (er'uta"i)n (ara esti'ar los (ar!'etros del 'todo bootstrap (ara an!lisis filo*enti"os=, Fuente8 -iltunen et al, 2008,

Bos resultados obtenidos en "uanto a los /ndi"es de "re"i'iento a elevadas "on"entra"iones de e4tra"to de #eno en el 'edio de "ultivo 'ostraron +ue Cupriavidus necator es una de las es(e"ies "on 'enor tasa de "re"i'iento, Por lo tanto3 (ara "ultivar esta ba"teria in vitro3 es re"o'endable adi"ionar "on"entra"iones "er"anas a 0,6 *Pl al 'edio de "ultivo (ara obtener una flu"tua"i)n (obla"ional relativa'ente elevada,

Figura 1+# Res(uesta al "re"i'iento #a"ia la "on"entra"i)n del nutriente3 'ediante el /ndi"e de "re"i'iento '!4i'o :r'a4= 0 las "onstantes de satura"i)n 'edia :?s= de las 8 es("ies, Fuente8 -iltunen3 et al, 2008,

Bos datos e4(eri'entales obtenidos (or este *ru(o de investi*a"i)n su*ieren +ue la diversidad de es(e"ies tiende a ser 'a0or en a'bientes te'(orales variables, Ade'!s3 siendo el (ri'er estudio rela"ionado "on el flu5o te'(oral de nutrientes3 se 'en"iona +ue no #a0 eviden"ia estad/sti"a +ue la flu"tua"i)n del su'inistro de re"ursos #a0a afe"tado el nD'ero de es(e"ies, in e'bar*o3 el /ndi"e de #annon 'ostr) +ue #ab/a 'a0or diversidad en el a'biente donde #ab/a una flu"tua"i)n (obla"ional '!s ba5a, Ba idea de +ue la flu"tua"i)n de los nutrientes (ro'ueve la diversidad en #!bitats deter'inados se #a estudiado en diversos laboratorios3 donde la "oe4isten"ia "on un nutriente (arti"ular (uede ser un fa"tor benefi"ioso o no (ara una es(e"ie3 de(endiendo de variabilidad de esa (obla"i)n, >tro as(e"to i'(ortante es +ue las ba"terias "onsu'en '!s f!"il'ente las sustan"ias de*radables 0 la 'a0or/a de "o'(uestos re"al"itrantes3 0 les es '!s "o'(li"ado de*radar los "o'(uestos +u/'i"os definidos +ue se adi"ionan al 'edio de "ultivo, Ia'bin se observ) +ue la dis(onibilidad de los nutrientes dis'inu/a lenta'ente durante el e4(eri'ento3 debido a la (rodu""i)n de bio'asa (or (arte de las ba"terias3 "a'bios en la "o'(osi"i)n de las es(e"ies o evolu"i)n en el uso efi"iente de los re"ursos (or

20

(arte de las "o'unidades (obla"ionales, 7e "ual+uier 'anera3 las dos "o'unidades ba"terianas 'ostraron asi'etr/a en "uanto a su din!'i"a 0 "o'(etitividad :-iltunen3 et al, 2008=, En lo +ue res(e"ta a la "obertura bos"osa 0 (atrones de ve*eta"i)n3 Gilles(ie3 et al. :2000= llevaron a "abo un estudio (ara "ono"er la diversidad de los bos+ues se"os tro(i"ales en 2entro A'ri"a 0 los datos obtenidos 'ostraron +ue no #ab/an diferen"ias si*nifi"ativas res(e"to a la ri+ueza de es(e"ies en Palo .erde en "o'(ara"i)n "on otras !reas de "onserva"i)n, Al "o'(arar el nD'ero de !rboles 0 arbustos de "ada !rea estudiada3 se observ) +ue la fa'ilia %abaceaea fue la +ue do'in) en todas las !reas de "onserva"i)n3 0 en el "aso de Palo .erde3 la es(e"ie arbustiva '!s abundante fue Allophyllus occidentales3 donde se #allaron E8 e5e'(lares, E'(ero3 se observ) una ba5a densidad de es(e"ies, En "uanto a la estru"tura del bos+ue3 Palo .erde 'ostr) el 'enor nD'ero de !rboles 0 un ba5o nD'ero de es(e"ies de lianasQ 0 en (ro'edio el !rea total del bos+ue se"o tro(i"al fue de 21,0&2E,0 '2P#a, Cuadro +# .ariables a'bientales de C !reas de "onserva"i)n "on (resen"ia de bos+ues tro(i"ales se"os en A'ri"a 2entral,

Fuente8 Gilles(ie3 et al, 2000,

Cuadro 1# Resu'en de la diversidad flor/sti"a (ara (lantas \ 2,% "' (ro"edentes de 'uestras de 0,1 #a 0 (ro'edio de es(e"ies (or transe"to en C sitios de bos+ue

tro(i"al se"o,

21

Fuente8 Gilles(ie et al3 2000,

Bos resultados e4(eri'entales obtenidos deter'inaron +ue en los bos+ues tro(i"ales se"os de 2entro A'ri"a tienen una ba5a densidad de individuos en rela"i)n "on otros bos+ues 6eotro(i"ales3 a (esar de +ue su diversidad fue 'a0or, Este fa"tor se debe a las (osibles intera""iones de las (erturba"iones #ist)ri"as en las !reas de "onserva"i)n del (a/s, Ade'!s3 en los bos+ues tro(i"ales de Palo .erde3 las +ue'as #an destruido (arte del sotobos+ue :arbustos 0 lianas= +ue "onfor'aban una (or"i)n si*nifi"ativa de la estru"tura total de (lantas le1osas, Ba 'a0or/a de lianas ta'bin ten/an ba5as densidades3 lo "ual "onlleva +ue estas es(e"ies de lianas sean sus"e(tibles a +ue'as en "o'(ara"i)n "on los individuos forestales +ue (resentan 'a0or *ravedad es(e"/fi"a 0 resisten las +ue'as :Gilles(ie3 et al, 2000=, 7iversos estudios "onfir'an +ue el nivel de (re"i(ita"i)n anual se rela"iona dire"ta'ente "on la ri+ueza de es(e"ies de (lantas a lo lar*o de un *radiente en los bos+ues tro(i"ales se"os3 sin e'bar*o los datos obtenidos en los "uadros anteriores "ontradi"en este dato, Esta ano'al/a (osible'ente se debe a las ada(ta"iones evolutivas +ue (resentan estas es(e"ies (ara desarrollarse e4itosa'ente en un sitio "o'o Palo .erde +ue tiene un (eriodo de % o 6 'eses de esta"i)n se"a "on 'enos de %0 '' de (re"i(ita"iones, e debe to'ar en "uenta +ue ade'!s3 el ti(o de suelo +ue tiene esta !rea de "onserva"i)n3 el "ual deriva de los sedi'entos 'arinos de del Eo"eno3 "ara"ter/sti"a +ue "o'(arten "on las !reas de "onserva"i)n Ba Flor 0 2#a"o"ente3 ubi"adas en 6i"ara*ua, Esta si'ilitud e4(li"a las si'ilitudes +ue (resentan estos tres sitios en rela"i)n "on la ri+ueza 0 la "o'(osi"i)n de es(e"ies arbustivas 0 lianas3 aun+ue en Palo .erde se en"uentra la 'a0or diversidad debido a +ue es (robable +ue el suelo est robuste"ido "on (iedra "aliza :el suelo est! si*nifi"ativa'ente 'enos desarrollado +ue las Ureas de 2onserva"i)n de 6i"ara*ua= 0 fisio*r!fi"a'ente3 los terrenos de Palo .erde tienen "ara"ter/sti"as si'ilares a las de los flu5os de lava ti(o NaaO, $no de los fa"tores +ue '!s afe"ta la "o'(osi"i)n 0 estru"tura del bos+ue es la (erturba"i)n antro(o*ni"a3 lo +ue #a favore"ido la redu""i)n en la diversidad de es(e"ies en los bos+ues Palo .erde :Gilles(ie3 et al. 2000=, Ba "o'(le5a intera""i)n entre los fa"tores bi)ti"os 0 abi)ti"os afe"ta la re*enera"i)n de los bos+ues se"os tro(i"ales de 2osta Ri"a, El 'ane5o ade"uado de los fa"tores bi)ti"os i'(li"an8 el uso del suelo3 fa"tores +ue afe"tan la lle*ada de la se'illa "o'o los su'ideros3 los or*anis'os dis(ersores3 0 a+uellos fa"tores +ue afe"tan la *er'ina"i)n 0 el estable"i'iento :"o'(eten"ia de (lantas es(ont!neas re'anentes3 (rofundidad de la "a(a de #o5aras"a3 falta de si'biontes 'i"orrizas 0 de(redadores de se'illas=, A+uellos fa"tores abi)ti"os +ue afe"tan la re*enera"i)n in"lu0en la (erturba"i)n "ontinua del #o'bre #a"ia los bos+ues a "ausa de +ue'as3 (re"i(ita"i)n3 te'(eratura3 dis(onibilidad de la luz 0 nutrientes3 0 la intensidad de la se+u/a, -a0 +ue "onsiderar +ue los efe"tos +ue "onlleva transfor'ar una re*i)n de bos+ue tro(i"al (ara desarrollar suelos a*r/"olas var/an se*Dn la re*i)n3 los ti(os de bos+ues 0 la es"ala es(a"ial, <nvesti*a"iones realizadas en el bos+ue tro(i"al se"o de Palo .erde #an estudiado la edad de la (lanta3 as/ "o'o la re*enera"i)n de los !rboles :PoVers3 et al, 2009=,
Cuadro 3# Pro(iedades +u/'i"as 0 f/si"as de E ti(os de bos+ues tro(i"ales se"os en 2osta Ri"a :nD'ero de (ar"elas 'uestreadas (ara los diferentes ti(os de bos+ue a(are"en en

22

(arntesis= 7entro de una fila3 los ti(os de bos+ues +ue no "o'(art/an al*una letra :a&b= difer/an si*nifi"ativa'ente de otra ba5o la "orre""i)n de ;onferroni, e abrevia "o'o se si*ue8 R>A?]bos+ue de en"ino en anta Rosa3 RI7F]bos+ue tro(i"al se"o de anta Rosa3 P.I7F]bos+ue tro(i"al se"o de Palo .erde :^ ] 0,0009=,

Fuente8

PoVers et al3 2009,

En tr'inos de "ara"ter/sti"as ed!fi"as3 el "uadro anterior (er'ite inferir +ue las variables +u/'i"as del suelo difieren en 'a0or 'edida +ue las "ara"ter/sti"as f/si"as, El (ro'edio de (- (ro'edio del suelo fue 'a0or en Palo .erde :(-]6,8= res(e"to a los sitios 'uestreados en anta Rosa :(-]%,8 0 6,4=3 (ero tendi) a ser '!s si'ilar al del bos+ue tro(i"al se"o ubi"ado en el Par+ue 6a"ional anta Rosa, A(arte de eso3 el total de ele'entos "ati)ni"os 'uestreados :in"lu0endo 2a3 ?3 M* 0 6a= se #allaron en "on"entra"iones '!s elevadas en Palo .erde +ue en las !reas de anta Rosa, Al "o'(arar a'bos ti(os de bos+ue se"o tro(i"al3 el total de P3 2 0 6 or*!ni"os #allado en anta Rosa 'ostr) "on"entra"iones inter'edias un (o"o '!s elevadas +ue en Palo .erde, 7e las variables f/si"as analizadas3 la densidad a(arente :0&10 "'= fue 4& 12F 'a0or en el bos+ue tro(i"al se"o de anta Rosa res(e"to al bos+ue de en"ino de anta Rosa 0 a Palo .erde, Ba elevada "on"entra"i)n de ar"illa3 ba5a densidad a(arente 0 ba5o "ontenido ro"oso en los suelos del bos+ue tro(i"al se"o de Palo .er de su*ieren +ue di"#os suelos (odr/an tener un alto nivel de #u'edad, Estas "ara"ter/sti"as ed!fi"as (er'iten deter'inar "u!n dis(onibles est!n los nutrientes en el suelo, 2on base en los datos obtenidos3 se "onsidera +ue el suelo (resenta una elevada fertilidad3 0a +ue la te4tura del suelo se #alla en la zona fran"o&ar"illosa3 0 los nutrientes se en"uentran en elevadas "on"entra"iones3 este fa"tor (ro'ueve +ue se #a0a observado una ba5a diversidad de es(e"ies "on res(e"to al bos+ue tro(i"al se"o de anta Rosa +ue (resent) un suelo "on una fertilidad inter'edia 0 'a0or densidad a(arente :PoVers3 et al, 2009=,

23

Figura 11# _ndi"e de atributos estru"turales del bos+ue analizados en las (ar"elas en fun"i)n a la edad de 'adurez en los tres ti(os de bos+ues de 2osta Ri"a, Bos (aneles in"lu0en8 (a" (l!ntulas :[1,E ' de altura=3 (%" (lantas 5)venes :\1,E ' altura (ero [ 10 "' di!'etro a altura de (e"#o=3 (c" arbustos de 10&E0 "' di!'etro a altura de (e"#o3 0 (d" !rboles \ E0 "' di!'etro altura de (e"#o, e abrevia "o'o se si*ue8 R>A?]bos+ue de en"ino en anta Rosa3 RI7F]bos+ue tro(i"al se"o de anta Rosa3 P.I7F]bos+ue tro(i"al se"o de Palo .erde :^ ] 0,0009=, Fuente8 PoVers et al3 2009,

En lo +ue res(e"ta a la estru"tura del bos+ue3 la densidad de la ve*eta"i)n le1osa de"re"i) "on un in"re'ento en el ta'a1o de la "lase de (l!ntula \ (lanta 5oven \ arbusto :10&E0 "'= \ !rbol 'aduro :\ E0 "'=3 si*uiendo los (atrones de la Nreversa GO, Bas densidades de las (l!ntulas3 (lantas 5)venes3 arbustos 0 !rboles 'aduros en Palo .erde 'ostraron tenden"ia a dis'inuir de a"uerdo "on la edad de la (lanta, En todos los trata'ientos3 la densidad del ta'a1o de los tallos de los !rboles 'aduros \ E0 "' de di!'etro a la altura de (e"#o se in"re'entaron de 'anera asint)ti"a desde 0 #asta 1%0 v!sta*osP#a :"on valores de R2 de 0,42&0,61=, Bos *r!fi"os de dis(ersi)n (er'iten notar +ue la dis'inu"i)n de las densidades de las (obla"iones (or el au'ento en la edad del !rbol3 su*ieren +ue estru"tura de re*enera"i)n bos"osa tendi) a ser si'ilar des(us de 40&60 a1os, Adi"ional'ente3 la densidad de los individuos 'aduros :\ E0 "' di!'etro a la altura de (e"#o= se in"re'ent) asint)ti"a'ente3 lo +ue (er'ite "onfir'ar +ue de a"uerdo "on la edad 'adura3 la 'ortalidad redu"e las densidades de los arbustos 5)venes a 'edida +ue el !rbol "re"e 0 se desarrolla "o'o !rbol 'aduro, $na raz)n (or la "ual3 la densidad de los v!sta*os en las es(e"ies de Palo .erde 'ostraron un au'ento "on la edad de (lanta se debe a +ue las es(e"ies evaluadas tienen ras*os "ara"ter/sti"os :"o'o el 'odo de dis(ersi)n= +ue est!n i'(li"ados en la din!'i"a de re*enera"i)n de los distintos ti(os de bos+ues :PoVers3 et al. 2009=,

24

Figura 13, _ndi"e de diversidad de #annon :-T= evaluada en fun"i)n de la edad de las (lantas en las (ar"elas estudiadas de tres ti(os de !rboles se"os tro(i"ales en 2osta Ri"a, e abrevia "o'o se si*ue8 R>A?]bos+ue de en"ino en anta Rosa3 RI7F]bos+ue tro(i"al se"o de anta Rosa3 P.I7F]bos+ue tro(i"al se"o de Palo .erde :^ ] 0,0009=, Fuente8 PoVers et al3 2009,

Ba diversidad 0 "o'(osi"i)n de es(e"ies en Palo .erde se observa "on el /ndi"e de #annon de la fi*ura anterior3 +ue in"or(ora la ri+ueza 0 si'ilitudes de es(e"ies observadas en los tres trata'ientos3 "o'o una 'anera de evaluar "a'bios en la "o'(osi"i)n de la "o'unidad a travs del tie'(o en su"esi)n, 2o'o se a(re"ia3 la diversidad en las (l!ntulas 0 (lantas 5)venes de Palo .erde tiene valores ini"iales de diversidad '!s altos en rela"i)n "on los otros ti(os de bos+ues :1,C% a(ro4i'ada'ente=3 los "uales se 'antienen "onstantes a lo lar*o de la edad de la (lanta, El 'otivo '!s i'(ortante (or el +ue no #ubo una varia"i)n si*nifi"ativa entre la diversidad de es(e"ies 0 la edad de la (lanta en Palo .erde en el /ndi"e de #annon (robable'ente se deba a +ue esta !rea fue #abitada 0 (erturbada (or el ser #u'ano antes de +ue Palo .erde se estable"iera "o'o (ar+ue na"ional3 (or lo +ue se (udieron 'odifi"ar sele"tiva'ente (or el desarrollo de "ose"#as3 (astoreo o las +ue'as :PoVers et al3 2009=, El estudio de ")'o los (atrones estru"turales del bos+ue 0 la "o'(osi"i)n de es(e"ies de !rboles var/a en rela"i)n "on la edad de los !rboles3 las (ro(iedades del suelo 0 la distan"ia *eo*r!fi"a a lo lar*o de la bio'a de bos+ues tro(i"ales se"os en 2osta Ri"a revel) una serie de (atrones interesantes8 :PoVers3 et al, 2009= A es"ala re*ional3 la 9&diversidad de bos+ues tro(i"ales se"os en 2osta Ri"a se rela"iona "on las (ro(iedades del suelo, Bos "a'bios e4itosos en la estru"tura del suelo difieren (or el ti(o de "obertura bos"osa3 (ero en *eneral3 la estru"tura del bos+ue se re"u(er) r!(ida'ente, El /ndi"e de #annon 'uestra +ue el bos+ue re"u(era su "obertura bos"osa des(us de 40 a1os de ser (erturbado3 '!s no su "o'(osi"i)n, Aun+ue e4iste eviden"ia +ue los distintos ti(os de bos+ues est!n es(e"ializados a "ondi"iones lo"ales ed!fi"as3 la edad de 'adurez del bos+ue es un 'e5or fa"tor de "orrela"i)n de la "o'(osi"i)n de las es(e"ies res(e"to a las (ro(iedades del suelo dentro de los ti(os de bos+ue,

2onsiderando todos los fa"tores anterior'ente 'en"ionados3 0 "onsiderando +ue el 'a0or /ndi"e de (rodu""i)n de bio'asa o"urre en durante la esta"i)n se"a "on la flora"i)n :Ru"As3 et al, 2004= en el #u'edal Palo .erde "on un (erfil tr'i"o elevado en la "a(a su(erfi"ial del suelo3 la e4tra""i)n de la ba"teria se (odr/a e4traer "on 'a0or fa"ilidad en la (o"a de di"ie'bre&abril3 donde #abr/a 'a0or (robabilidad +ue se in"re'ente las flu"tua"iones (obla"iones de C. necator, 2on res(e"to a los fa"tores ed!fi"os (ro(ios del #u'edal3 se sabe +ue la fertilidad del suelo es bastante alta (or+ue los nutrientes se en"uentran en elevada "on"entra"i)n3 #a0 +ue "onsiderar +ue la diversidad 0 nD'ero de es(e"ies ba"terianas (odr/a ser ba5o de a"uerdo "on las "ara"ter/sti"as +ue (resenta este suelo, i se "onsidera +ue el (- del suelo se

25

en"uentra a 6,8 0 se re+uiere +ue la ba"teria se desarrolle a un (- de E3 enton"es "ono"iendo el (erfil del ta(ete 'i"robiano a analizar (resenta distintos *radientes de (-3 es (robable +ue la ba"teria reali"e anaerobiosis 0 sea ne"esario e4traerla en la zona an)4i"a del suelo +ue se en"uentra a E '' de (rofundidad, En "uanto a la "obertura bos"osa3 0a +ue 'u0 ba5as densidad de !rboles aso"iados a esta ba"teria3 es re"o'endable #a"er un an!lisis del nD'ero de e5e'(lares de Calophyllum longi olium de la zona o al*una otra es(e"ie +ue se aso"ie "on la ba"teria (ara llevar a "abo un 'uestreo ade"uado de las zonas de la ra/z a evaluar, ` en lo +ue res(e"ta a la (endiente3 se sele""ionar/an las zonas ba5as3 (ero +ue "onten*an de()sitos de (iedra "aliza (orosa3 0a +ue en esta !rea #a0 'a0or diversidad3 fertilidad del suelo 0 '!s densidad ve*etal, 7# )a %acteria esta asociada a una es ecie de /r%ol Calophyllum longifolium 4ue osee una densidad de 0#27 or 0ect/rea' es olinizada or insectos e4ue>os' la cantidad de /r%oles adultos es de +7 en 1211 ?m2# )os atrones ,enolgicos de esta es ecie se encuentran mu( alterados (a 4ue su %iomasa ,loral' de ,ruto ( de semillas no llegan a alcanzar el esta%lecimiento de ning@n indi!iduo# =ue as ectos gen.ticos' clim/ticos' de a areamiento' dis ersin de olen odran estar a,ectando esta o%lacin /r%oles' (a 4ue la %acteria resenta un incremento de %iomasa en la . oca de ,loracin# =ue ,actores ueden in,luir con la din/mica de la ,enologa ( el incremento de la %acteria# (20 untos"# Ba es(e"ie de !rboles Calophyllum longi olium (ertene"e a la fa'ilia "lusia"eae 0 (resenta los si*uientes no'bres "o'unes8 2edro Mar/a3 Mar/a3 Mar/a "olorado3 Palo de 'ar/a 0 anta'ar/a :Suesada @ Fern!ndez, 200%=, Este !rbol (resenta una altura de entre 1% 0 E%'3 (resenta #o5as si'(les 0 o(uestas de entre 20 0 2%"' de lar*o (or C a 9"' de an"#o3 "on #o5as 0 ra'as *labras3 "on el !(i"e de la #o5a redondo la nervadura (enninervada3 (resenta flores verde&a'arillas en inflores"en"ias de #asta 4 "' de lar*o 0 frutos ti(o dru(a de E"' de di!'etro, :2roat, 19C8Q Ra'ora3 et al, 2004=, Ba (obla"i)n de estos !rboles (resenta una redu"ida densidad3 esto debido a diferentes as(e"tos3 entre ellos el "li'a3 (ues la "a(a"idad fotosintti"a 0 el "re"i'iento de estos !rboles se ven alterados (or la intensidad de luz re"ibida (or la (lanta3 (lantas e4(uestas a 'a0or radia"i)n solar (resentan 'a0or "a(a"idad fotosintti"a +ue (lantas e4(uestas a foto(eriodos ba5os 0 ba5a intensidad lu'/ni"a, En el bos+ue se"o tro(i"al de 2osta Ri"a3 es(e"/fi"a'ente en el !rea de "onserva"i)n Ie'(is+ue3 la 'a0or intensidad lu'/ni"a se da en los 'eses de a*osto a 'arzo :2uadro 6=3 estas fe"#as "oin"iden "on la (o"a de flora"i)n :en novie'bre 0 di"ie'bre= 0 fru"tifi"a"i)n :entre enero 0 'arzo= de C. longi olium. En este estado re(rodu"tivo3 el !rbol des(laza los fotosintatos al'a"enados 0 (rodu"idos #a"ia los !(i"es (ara +ue se d el desarrollo de las flores 0 frutos3 lo +ue obli*a a la (lanta a re+uerir 'a0or "antidad de nutrientes3 si la ba"teria se aso"ia a las ra/"es o se en"uentra en la rizoesfera del !rbol "uando este absorba los nutrientes3 estos van a ser inter"e(tados (ri'ero (or la ba"teria3 la "u!l es +ui'iolit)trofa fa"ultativa 0 en "ondi"iones an)4i"as utiliza nitratos "o'o a"e(tor de ele"trones3 (rovo"ando +ue en ese suelo se d un dfi"it de nutrientes3 es(e"/fi"a'ente en la rizoesfera de las ra/"es absorbentes de la (lanta,

26

Cuadro 5# Es(e"ies '!s abundantes :a*ru(adas (or (ar"elas se*Dn la edad de la (lanta= de !rboles \ 10 "' de di!'etro a la altura de (e"#o se*Dn la "lase de edad en el bos+ue tro(i"al se"o de Palo .erde3 0 sus res(e"tivos a*entes de dis(ersi)n,

Fuente8 PoVers et al3 2009,

Bas (lantas +ue tienen 20 a1os de su"esi)n3 (resentan 'a0or nD'ero de e5e'(lares en rela"i)n "on los arbustos '!s 'aduros 0 !rboles3 los "uales (resentan ba5as densidades, En todas las "lases de edad de la (lanta3 en Palo .erde se observ) +ue la es(e"ie '!s do'inante fue &ua'uma ulmi olia3 "on densidades elevadas de EE&1E6 v!sta*osP#a En las (lantas de 0 a 20 a1os de edad en el bos+ue tro(i"al se"o Palo .erde3 las es(e"ies de !rboles '!s abundantes se "ara"terizan (or+ue son dis(ersadas (or el viento o tienen se'illas de#is"entes :&ua'uma ulmi olia=3 indi"ando +ue la dis(ersi)n (or viento es la v/a '!s fa"tible +ue tienen las se'illas (ara *er'inar en el suelo, in e'bar*o3 'u"#as de las es(e"ies de !rboles do'inantes 'uestreadas +ue su(eran los 20 a1os de edad se "ara"terizaron (or+ue sus se'illas fueron dis(ersadas (or aves :PoVers3 et al, 2009=, 2o'o se a(re"ia ade'!s3 la es(e"ie Calophyllum candidissimum3 +ue "onstitu0e un !rbol rela"ionado "on Calophyllum longi olium3 tiene la (arti"ularidad de +ue la dis(ersi)n de sus se'illas o"urre (or el viento3 este as(e"to #a in"idido (osible'ente en la ba5a densidad de es(e"ies #alladas en este estudio en rela"i)n "on otras es(e"ies3 "u0a dis(ersi)n o"urre (or ani'ales, Cuadro 8# Par!'etros a'bientales 0 sus desvia"iones est!ndar 'edidos durante los a1os de estudio de la fenolo*/a de #. capiri .

27

Fuente2 Gar"ia @ 7i tefano, 200%,

Esta ba"teria (resenta un "re"i'iento )(ti'o a una te'(eratura entre E0 0 40J2Q la te'(eratura del suelo var/a se*Dn la te'(eratura at'osfri"a 0 la radia"i)n solar re"ibida, 7urante el trans"urso del d/a la '!4i'a te'(eratura se obtiene una #ora des(us del (asa5e del sol (or el 'eridiano3 (ero la te'(eratura suele ser '!s "onstante a 'a0or (rofundidad en el suelo :Fi*ura 1%=3 (or eso se dan varia"iones de te'(eratura se*Dn la (rofundidad3 observ!ndose un (erfil tr'i"o en el suelo :Ru"As et al3 2004=, Esa te'(eratura "onstante "rea un 'i"ro"li'a (ara +ue se desarrolle la ba"teria en "ondi"iones an)4i"as3 (or lo tanto se da un au'ento en el "onsu'o de 6itr)*eno (or (arte de esta ba"teria3 #a"indolo 'enos dis(onible (ara la (lanta, Ese dfi"it de nitr)*eno (rovo"a un desarrollo inade"uado de las flores 0 frutos en este !rbol3 alterando su re(rodu""i)n,

28

Figura 15# .aria"iones diurnas en la te'(eratura de un suelo Fuente2 Ru"As3 et al, 2004,

El flu5o de *enes dentro de la (obla"i)n de !rboles de Calophyllum longi olium es "ru"ial en el e+uilibrio (obla"ional 'antenido (or esta (lanta3 este (rovee los as(e"tos de diferen"ia"i)n rela"ionados "on la deriva *ni"a 0 un au'ento en la fre"uen"ia de "o'bina"iones *enti"as favorables, Ade'!s3 la esti'a"i)n (re"isa de la dis(ersi)n de *enes es esen"ial (ara evaluar la "orrela"i)n entre a(titud de re(rodu""i)n de las (obla"iones naturales3 el re"ono"i'iento del (a(el de la sele""i)n se4ual 0 los fa"tores e"ol)*i"os en la evolu"i)n de los siste'as de sie'bra, El flu5o de *enes es un as(e"to i'(ortante en la "onserva"i)n de la biolo*/a debido a su influen"ia "on un ta'a1o de (obla"i)n efe"tiva de es(e"ies en (eli*ro de e4tin"i)n3 "on ba5a (obla"i)n o "on (atrones fenol)*i"os alterados :;ur"z0A3 et al, 2004=, Ba densidad de la (obla"i)n de C. longi olium es ba5a3 esto (ro(i"ia a +ue se d endo*a'ia :dis'inu0endo el flu5o de *enes= entre los individuos re(rodu"tiva'ente a"tivos 0 esta (rovo"a (roble'as "o'o dis'inu"iones sustan"iales en el ta'a1o "or(oral3 la viabilidad 0 la fe"undidad, Ia'bin se da la e4(resi)n de *enes deletreos re"esivos au'entando las (robabilidades de un des(lo'e de la (obla"i)n de esta es(e"ie, En !rboles uno de los fa"tores '!s i'(ortantes (ara +ue se d el flu5o *enti"o es la dis(ersi)n del (olen3 (ues si no se da una (oliniza"i)n efe"tiva la (obla"i)n de !rboles se (odr/a ver afe"tada, En C. longi olium la (oliniza"i)n se da (or 'edio

29

de inse"tos3 0 estos via5an distan"ias de al 'enos 210' (ara (olinizar entre !rboles :2uadro 8=, Por eso la altera"i)n de los (atrones fenol)*i"os de esta es(e"ie ta'bin se (uede dar si se altera la (obla"i)n de los (olinizadores, Cuadro 7, Esti'a"iones de la 'i*ra"i)n de *enes 'ediada (or el flu5o de (olen en las (obla"iones de !rboles forestales basadas en el an!lisis de e4"lusi)n *enti"a,

Fuente2 ;ur"z0A , et al, 2004,

El in"re'ento en la bio'asa de la ba"teria durante la (o"a de flora"i)n se e4(li"a (or+ue (uede absorber los nutrientes +ue la (lanta est! ne"esitando3 ade'!s el au'ento en la radia"i)n durante esos 'eses au'enta la te'(eratura del suelo lle*ando este a los E0&40J2 :te'(eratura )(ti'a de desarrollo de la ba"teria Alcaligenes eutrophus=,

:#

En un lago usted encontr unas ciano%acterias mu( roducti!as ( usted 4uiere sa%er si en ma(o cuando de inician las llu!ias son tan roducti!a como en octu%re# $e manera 4ue usted extra&o %iomasa de las %acterias en dos . ocas del a>o' ma(o ( octu%re# Ae o%tu!o los siguientes resultados# (10 untos"# MA`> >2I$;RE 4,8C 0,22 E,8C 2,22 1,21 4,22 0,21 E,4%

1, 2, E, 4, %, 6, C, 8,

E,2 1,%6 0,2E 1,8C 2,4% %,00 E,%% 2,99

30

9, 10,

4,22 4,%6

1,%6 2,6C

2o'(are "on an!lisis estad/sti"o en "ual (o"a del a1o usted (uede e4traer "on 'a0or se*uridad al*o de "ianoba"terias, Es"o5a el an!lisis 0 desarr)llelo "on todos sus "!l"ulos3 no o'ita nin*Dn valor, ;as!ndose en los datos 'ostrados 0 to'ando en "uenta +ue se dan 'edi"iones sobre un 'is'o or*anis'o en dos (o"as del a1o distintas se (ro"edi) a a(li"ar la (rueba I& tudent (areada3 "on el fin de "o'(arar si e4isten diferen"ias en "uanto a la (rodu"tividad de las "ianoba"terias en 'a0o 0 en o"tubre, El (lanteo de las #i()tesis as/ "o'o el "!l"ulo de la (rueba se 'uestra a "ontinua"i)n8 -0B Bas "ianoba"terias son i*ual de (rodu"tivas en 'arzo :"uando ini"ian las lluvias= "o'o en o"tubre, -I ] Bas "ianoba"terias no son i*ual de (rodu"tivas en 'arzo :"uando ini"ian las lluvias= "o'o en o"tubre, Cuadro :# ;io'asa obtenida de "ianoba"terias en 'a0o 0 en o"tubre 0 "!l"ulo de I& student (areada, Biomasa (g" Ca(o Dctu%re d d2 E32 438C 136C 23C889 13%6 0322 13E4 13C9%6 032E E38C E364 1E32496 138C 2322 03E% 03122% 234% 1321 1324 13%EC6 % 4322 03C8 036084 E3%% 0321 E3E4 1131%%6 2399 E34% 0346 032116 4322 13%6 2366 C30C%6 43%6 236C 1389 E3%C21 EdB18'+8 Ed2B 12'12
Fuente2 Gru(o de traba5o,

n] 10 *,l,]:n&1= ]9 TcB 43CC TtB 2326

TB

] 1'88

Tc FTt 43CC \ 2326

e*Dn el an!lisis estad/sti"o realizado3 se a"e(ta la -03 las "ianoba"terias son i*ual de (rodu"tivas en 'a0o3 "uando se ini"ian las lluvias3 "o'o en o"tubre, Por lo tanto3 en "ual+uier (o"a del a1o se (uede e4traer "on se*uridad "ianoba"terias,

)iteratura citada
31

Arn!ez3 E,3 @ >rtiz3 R, 2010, Estudio radi"ular de .o"#0sia ferru*inea :botarra'a= en (lanta"iones 0 "ondi"iones naturales en 2osta Ri"a, (ecnolog)a en Marcha 3 9& 18, ;arrett3 2,3 @ ParAer3 M, :2006=, 2oe4isten"e of ;urA#olderia3 2u(riavidus3 and R#izobiu' s(, 6odule ;a"teria on tVo Mi'osa s((, in 2osta Ri"a, A**$+,A.- ,.V+R/.M,.(A$ M+CR/B+/$/&0 3 1198&1206, ;inti3 A, 2009, "ale u( of bio(ol0'er :P-;= fer'entation fro' %00 'B s#aAe flasAs to 2 B stirred tanA fer'entor, Iesis (ara o(tar (or el *rado de ;a"#iller en <n*enier/a Su/'i"a "on Xnfasis en ;iote"nolo*/a, Pa#an*3 Mala0sia3 $niversiti Mala0sia Pa#an*, 6E (, ;ur"z0A, G, 3 7iFazio, , @ Ada's, W, 2004, Gene floV in forest trees8 #oV far do *enes reall0 travela, Forest Geneti"s3 nD'ero 113 volu'en Eb4, (( 1C9b192, 2arrit03 GQ ;ell3 G @ Bilburn3 I, 200E, Prefa"e to t#e First Edition of Bergey1s Manual2 o #ystematic Bacteriology, 42(, 2#ee3 GQ `o*a3 Q Bau3 6Q Bin*3 Q Abed3 R @ udes#3 ?, 2010, ;a"teriall0 Produ"ed Pol0#0dro40alAanoate :P-A=8 2onvertin* ReneVable Resour"es into ;io(lasti"s, (echnology and ,ducation (opics in Applied Microbiology and Microbial Biotechnology, E28 1E9%&1404, 2roat, I, 19C8, Flora of ;arro 2olorado <sland, tanford $niversit0 PressQ 1 edition, 2alifornia3 $ A, 9%6(, Ellison3 A, 2004, Wetlands of 2entral A'eri"a, Wetlands ,cology and Management, 128 2&%% FlinAler3 BQ Ginoris3 `Q Buna3 2Q Alves3 IQ Pinto3 G @ 2oel#o3 M, 200C, Mor(#olo*i"al "#ara"terization of 2u(riavidus ne"ator 7 M %4% flo"s t#rou*# i'a*e anal0sis, World 3ournal o Microbiology and Biotechnology, 2E8 801&808,

Gar"ia, E @ 7i tefano, G, 200%, Fenolo*/a de !rbol idero40lon "a(iri : a(ota"eae= en el ;os+ue e"o Iro(i"al de 2osta Ri"a, Rev, biol, tro( conlined, 200%3 vol,%E3 n,1&2 c"itado 2011&04&10d3 ((, 0%&14 , 7is(onible en8 [#tt(8PPVVV,s"ielo,sa,"rPs"ielo,(#(as"ri(t]s"ieartte4t@(id] 00E4& CC44200%000100002@ln*]es@nr']iso\, < 6 00E4&CC44, Gilles(ie3 IQ Gri5alva3 A @ Farris3 2, 2000, 7iversit03 "o'(osition3 and stru"ture of tro(i"al dr0 forests in 2entral A'eri"a, *lant ,cology, 14C8 ECb4C,

32

-ern!ndez, B, @ Baurito, 2, 200%, -istoria 6atural de 2osta Ri"a, 6D"leo de Iuris'o, <nstituto 6a"ional de A(rendiza5e, an Gos3 2osta Ri"a, 10%( 7is(onible en8 #tt(8PPVVV,asvo"r,or*P(dfsP#itorianatural,(df, c10P04P 2011d, -iltunen3 IQ BaaAso3 GQ ?aitala3 .Q uo'alainen3 B @ PeAAonen3 M, 2008, Ie'(oral variabilit0 in detritus resour"e 'aintains diversit0 of ba"terial "o''unities, Acta /ecol"gica, EE8 291&299, <6;io, 2011, ;iodiversidad de 2osta Ri"a, 7is(onible en8 #tt(8PPVVV,inbio,a","rPesPbiodPbioebiodiver,#t', cCP04P 2011d, GendrosseA3 7, 2009, Pol0#0dro40alAanoate Granules Are 2o'(le4 ub"ellular >r*anelles :2arbonoso'es=, 3ournal o Bacteriology, 1918 E19%&E202, ?i'3 `, 2009, ;ios0nt#esis and "#ara"terization of (ol0#0dro40alAanoates b0 a lo"all0 isolated Chromobacterium s(, $ M2, Iesis de *radua"i)n (ara o(tar (or el *rado de Ma*ister of "ien"e, Pa#an*3 Mala0sia3 $niversiti Mala0sia Pa#an*, 41 (, ?in*3 G @ Weber3 2, 200C, 7istribution3 diversit0 and e"olo*0 of aerobi" 2>&o4idizin* ba"teria, .ature Revie4s, %8 10C&118, ?u'ar3 @ PrabaAaran3 G, 200%, Produ"tion of P-; :bio(lasti"s= usin* bio&effluent as substrate b0 Alcaligens eutrophus, <ndian Gournal of ;iote"#nolo*0, %8 C6&C9,

Be"#ner3 ,Q @ 2onrad3 R, 199C, 7ete"tion in soil of aerobi" #0dro*en&o4idizin* ba"teria related to Al"ali*enes eutro(#us b0 P2R and #0bridization assa0s tar*etin* t#e *ene o* t#e 'e'brane&bound :6iFe= #0dro*enase, Mi"robiolo*0 E"olo*0, 228 196&206, B)(ez3 A, ;iodiversidad de 2osta Ri"a es verdadero tesoro, 2009, Ba Presnsa Bibre,7is(onible en8 #tt(8PPVVV,(rensalibre,"rP(lPabani"oP14E1&biodiversidad& de&"osta&ri"a&es&verdadero&tesoro,#t'l, c%P04P 2011d, Buen*o3 GQ Gar"/a3 ;Q andoval3 AQ 6a#arro3 G @ >livera3 E, 200E, ;io(lasti"s fro' 'i"roor*anis's, ,cology and industrial Microbiology, 682%1b260, 6ational 2enter for ;iote"#nolo*0 <nfor'ation, 2011, Ia4ono'/a de la ba"teria 2u(riavidus ne"ator, 2onsultado el 6 de abril del 20118 #tt(8PPVVV,n"bi,nl',ni#,*ovPIa4ono'0P;roVserPVVVta4,"*ia 'ode]<nfo@id]106%90@lvl]E@lin]f@Aee(]1@sr"#'ode]1@unlo"A Mndez3 ;Q Pettinari3 G @ B)(ez3 6, 2010, 2uando los no'bres o"ultan a los no'brados, 5u)mica Viva, 28 %9&64,

33

6aran5o3 G, 2010, Produ""i)n de (oli#idro4ibutiratos a (artir de residuos a*roindustriales, Iesis (ara o(tar (or el *rado de Ma*ister en <n*enier/a Su/'i"a, Manizales3 2olo'bia, $niversidad 6a"ional de 2olo'bia, 12C(, PoVers3 GQ ;e"Anell3 GQ <rvin*3 G @ Prez&Aviles3 7, 2009, 7iversit0 and stru"ture of re*eneratin* tro(i"al dr0 forests in 2osta Ri"a8 Geo*ra(#i" (atterns and environ'ental drivers, %orest ,cology and Management, 2%88 9%9&9C0, Suesada3 R, @ Fern!ndez3 ., 200%, A"tualiza"i)n de listado de es(e"ies arb)reas de uso forestal 0 otros usos en 2osta Ri"a, ?urD8 Revista Forestal, 2arta*o3 2osta Ri"a, .olu'en 23 nD'ero 4, Suesada3 R, :200C=, Bos bos+ues de 2osta Ri"a, lY 2on*reso 6a"ional de 2ien"ias, E4(lora"iones fuera 0 dentro del aula, 7is(onible en8 #tt(8PPVVV,"iente",or,"rPe4(lora"ionesP(onen"ias200CPRu(ertoSuesada,(df, c20P0EP2011d, Rivera&Ma"Aintos#3 BQ 6ev!rez&Moorill)n3 G, 2009, Fuentes de "arbono e"on)'i"as (ara la (rodu""i)n de bio(l!sti"os ba"terianos, (ecnociencia Chihuahua, E8 %8& 6E, Rouessa"3 F, :200E= An!lisis Su/'i"o8 Mtodos 0 I"ni"as <nstru'entales Modernas, Es(a1a3 M"GraV -ill, P!*s, 121&1EE Ru"As, B,3 Gar"/a, F,3 ?a(l!n, A,3 Pon"e de Be)n, G, @ -ill, M, :2004=, Pro(iedades F/si"as del uelo, 7is(onible en8 #tt(8PPVVV,fa*ro,edu,u0Pfedafolo*iaP"ursoPMaterialF20de F20le"turaPF< <2A Pfisi"as,(df, c10P04P2011d, ilva3 2,3 @ .inuesa3 P, :200C=, E"olo*/a evolutiva de ba"terias 0 el "on"e(to de es(e"ie8 el "aso de los rizobios, En B, E*uiarte3 ., ouza3 @ Y, A*uirre3 ,colog)a Molecular :(!*, %94=, M4i"o, olis3 M,3 @ Mo0a3 R, 2004, Vochysia guatemalensis en Costa Rica. an 5os, Ira'a3 F, 200%, Mane5o A"tivo 0 Restaura"i)n del -u'edal Palo .erde8 2a'bios en las 2oberturas de .e*eta"i)n 0 Res(uesta de las Aves A"u!ti"as, Iesis (ara o(tar (or el *rado de Ma*ister "ien"e en 2onserva"i)n 0 Mane5o de .ida ilvestre, -eredia3 2osta Ri"a, $niversidad 6a"ional, 1CE(, .erlinden3 RQ -ill3 7Q ?enVard3 MQ Willia's3 2 @ Rade"Aa3 <, 200C, ;a"terial s0nt#esis of biode*radable (ol0#0dro40alAanoates, 3ournal o Applied Microbiology, 1028 14EC&1449, .illanueva3 B, 200%, E"o(#0siolo*i"al and 'ole"ular "#ara"terization of estuarine 'i"robial 'ats, Iesis (ara o(tar (or el *rado de 7o"tor:a= en ;iolo*/a, ;ar"elona3 Es(a1a, $niversidad de ;ar"elona, 1%%(,

34

.illanueva3 BQ 7el 2a'(o3 G @ Guerrero3 R, 2010, 7iversit0and (#0siolo*0of (ol0#0dro40alAanoate&(rodu"in* and &de*radin* strains in'i"robial'ats, Microbial ,cology, %8 1&1E, Ra'ora, 6,Q Gi'nez, S, @ Poveda, B, G, 2004, Urboles de 2osta Ri"al .ol <<<, 2entro 2ient/fi"o Iro(i"al3 2onserva"i)n <nterna"ional @ <nstituto 6a"ional de ;iodiversidad, Ed, <6;io, %%6 (,

35