O-Estreptolisina

liofilizada
Mtodo hemoltico para la determinacin del ttulo de antiestreptolisina O SIGNIFICACION CLINICA El anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en ttulos bajos, debido a que las infecciones estreptoccicas son comunes. Sin embargo un ttulo alto o creciente de antiestreptolisina O, indica una infeccin reciente producida por estreptococo -hemoltico grupo A, como amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela. Tiene adems especial inters en los procesos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumtica y glomerulonefritis aguda. Por lo tanto, a pesar de no ser una prueba especfica para fiebre reumtica, apoya su diagnstico cuando lo sugieren la historia y los signos clnicos. FUNDAMENTOS DEL METODO La estreptolisina O, producida por el estreptococo -hemoltico de grupo A, tiene la propiedad de producir hemlisis cuando se pone en contacto con glbulos rojos. Al colocar distintas diluciones de un suero que contenga antiestreptolisina O en presencia de dosis constantes de estreptolisina O, se produce una reaccin antgeno-anticuerpo que neutraliza la capacidad hemoltica de la misma. Este fenmeno se evidencia por una inhibicin de la hemlisis al agregar suspensin de glbulos rojos del 3 al 5%. El ttulo de antiestreptolisina ser la recproca de la mxima dilucin del suero del paciente capaz de neutralizar totalmente la estreptolisina. REACTIVOS PROVISTOS Estreptolisina-O: estreptolisina liofilizada titulada. Buffer concentrado: solucin de buffer fosfatos conteniendo fosfatos 0,36 mol/l y cloruro de sodio 1,2 mol/l, para pH final 6,5. REACTIVOS NO PROVISTOS - Agua destilada. - Eritrocitos frescos humanos de grupo O, del mismo paciente o de conejo. - Solucin fisiolgica. INSTRUCCIONES PARA SU USO A baja temperatura el Buffer concentrado puede cristalizar. En tal caso, colocar en bao de agua a 37oC unos minutos mezclando por inversin hasta disolucin completa. Buffer; preparacin: - 6 x 3 ml: diluir el contenido con 150 ml de agua destilada. - 6 x 10 ml: diluir el contenido con 600 ml de agua destilada. Estreptolisina-O: disolver el vial con el volumen de Buffer indicado en el rtulo, mezclando por inversin hasta disolucin completa. Suspensin de eritrocitos: lavar los mismos 3 veces con solucin fisiolgica. Luego del ltimo lavado centrifugar a 2.000 r.p.m. durante 15 minutos. En el sobrenadante no debe aparecer hemlisis; caso contrario desechar. Con los eritrocitos lavados, una vez descartado el sobrenadante, preparar una suspensin del 3 al 5% con Buffer pH 6,5. PRECAUCIONES Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro". Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de qumica clnica. Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Estreptolisina-O: una vez preparada es estable 2 horas a temperatura ambiente, 5 das en refrigerador (2-10oC) o 2 meses congelada (-20oC) y fraccionada. Ver LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO. Buffer: estable 1 ao en refrigerador (2-10oC). Suspensin de eritrocitos: los eritrocitos pueden usarse hasta 48 horas despus de preparada la suspensin, si previamente se lavan una vez con Buffer y no se observa hemlisis. MUESTRA Suero a) Recoleccin: debe obtenerse suero libre de hemlisis. b) Aditivos: no se requieren. c) Sustancias interferentes conocidas: muestras con hemlisis visible pueden conducir a una interpretacin errnea de los resultados, por lo que deben descartarse. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la antiestreptolisina en suero es estable congelada por lo que puede mantenerse en estas condiciones hasta efectuar el ensayo. MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Tubos de hemlisis. - Material volumtrico apropiado. - Centrfuga. - Bao de agua a 37oC. CONDICIONES DE REACCION - Temperatura de reaccin: 37oC - Tiempo de incubacin: 60 minutos - Volumen final de reaccin: 2 ml Si se emplea la presentacin 6 x 3 ml los volmenes de muestra y reactivo deben reducirse a la mitad. Si se desea realizar microtcnica en policubetas, solicitar las instrucciones al Servicio Bibliogrfico de Wiener lab.
870780000 / 00 Pg. 1 de 6

PROCEDIMIENTO Preparar diluciones de la siguiente forma: 1:10 (0,2 ml de suero + 1,8 ml de Buffer), 1:100 (0,5 ml de dilucin 1:10 + 4,5 ml de Buffer), 1:500 (1 ml de dilucin 1:100 + 4 ml Buffer). Luego proceder de la siguiente forma: Dilucin del suero Tubo N Suero diluido (ml) Buffer (ml) Estreptolisina-O (ml) 1:10 1 0,2 0,8 0,5 2 1 0,5 3 0,8 0,2 0,5 1:100 4 0,6 0,4 0,5 5 0,4 0,6 0,5 6 0,3 0,7 0,5 7 1 0,5 8 0,8 0,2 0,5 1:500 9 0,6 0,4 0,5 10 0,4 0,6 0,5 11 0,2 0,8 0,5 CONTROLES 12 1,5 13 1 0,5

Mezclar y mantener a bao Mara a 37C 15 minutos. Eritrocitos 3-5% (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

Mezclar agitando ligeramente y mantener en bao Mara a 37oC durante 15 minutos, agitar nuevamente y continuar en bao Mara durante 30 minutos ms. Centrifugar 3 minutos a 1.500 r.p.m. y leer. Unidades Todd/ml 50 100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500 (-) (+)

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS El ttulo de la muestra se expresa mediante la inversa de la mayor dilucin en la cual se observa ausencia total de hemlisis. El tubo 12 (control eritrocitario) no deber presentar hemlisis mientras que el tubo 13 (control Estreptolisina-O) deber mostrar hemlisis completa. METODO DE CONTROL DE CALIDAD Para controlar el procedimiento y los reactivos es conveniente procesar simultneamente un suero con cantidad conocida de antiestreptolisina O. VALORES DE REFERENCIA Normalmente pueden existir en suero hasta 200 unidades de antiestreptolisina O. Ttulos superiores son indicativos de un proceso infeccioso por estreptococo -hemoltico de grupo A.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO En caso de conservar la Estreptolisina-O reconstituida congelada, se recomienda fraccionarla de modo de evitar los congelamientos y descongelamientos sucesivos que ocasionan su deterioro. PRESENTACION - 6 x 3 ml (Cd. 1073202). - 6 x 10 ml (Cd. 1073204). BIBLIOGRAFIA - Bennett, C.V. - "Clinical Serology" - Charles Thomas Pub., USA (1964). - Sonnenwirth, A.C.; Jarret, L. - Gradwohl Mtodos y Diagnsticos del Laboratorio Clnico - Edit. Panamericana - 8 Ed. (1983). - Rantz, L.A. y Randall, M.F. - Proc. Soc. Exp. Bio. 59:22 (1945).

870780000 / 00

Pg. 2 de 6

EXPLICACION DE LOS SIMBOLOS Estreptolisina O Estreptolisina O Buffer conc

Buffer concentrado

Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.

C
V
X
H l

Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagnstico "in vitro"

P Representante autorizado en la Comunidad Europea

Uso diagnstico "in vitro" Contenido suficiente para <n> ensayos Fecha de caducidad Lmite de temperatura (conservar a) No congelar Riesgo biolgico Volumen despus de la reconstitucin
Cont.

?
F

Contenido Nmero de lote Elaborado por: Nocivo Corrosivo / Castico

g
M
Xn

Xi

Irritante Consultar instrucciones de uso Calibrador Control Control Positivo Control Negativo Nmero de catlogo

i
Calibr.

b b c h

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944 2000 - Rosario - Argentina http://www.wiener-lab.com.ar Dir. Tc.: Viviana E. Ctola Bioqumica Producto Autorizado A.N.M.A.T. Cert. N: 30/92

Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
870780000 / 00 Pg. 3 de 6