Universidad Mariano Glvez Facultad de Ciencias Mdicas y de la Salud Carrera de Mdico y Cirujano

TINCIONES ESPECIALES PARA QUIESTES DE AMEBAS

PRACTICA 4 1. Introduccin

Los protozoos son organismo unicelulares del reino animal, unos son de vida libre y otros son parsitos de animales y plantas. Son microscpicos y se localizan en diferentes tejidos. Algunos son inofensivos, otros producen daos importantes que trastornan las funciones vitales causando enfermedad y en ciertos casos la muerte del husped. 2. Objetivos Que el estudiante: 3. Comprenda la importancia de la realizacin de un adecuado diagnostico. Desarrolle habilidad en la identificacin de los quistes de diferentes amebas. Obtenga una informacin integral del tema de los protozoos.

Alcance

En esta prctica el estudiante obtendr una idea completa de la morfologa de los quistes de las diferentes amebas humanas y su correcta identificacin. 4. Antecedentes

La amebiasis es una infeccin producida por Entamoeba histolytica, especie parasitaria del hombre, que puede vivir como comensal en el intestino grueso, invadir la mucosa intestinal produciendo ulceraciones y tener localizacin extraintestinales. Esta afeccin, se conoce desde hace ms de cien aos. Lambel en 1859, descubri en un nio de Praga, quien muri con un cuadro diarreico, la presencia de un protozoo con seudpodos y no se le dio importancia. No fue hasta en 1875, cuando Losch en San Petersburgo, descubri, que la diarrea de un campesino era a causa de un microorganismo mvil, que posea ecto y endoplasma y contena glbulos rojos y le llamo Amoeba coli y as, con el paso del tiempo, se ha llegado a 1,924 cuando se logro cultivar con xito E. histolytica en un medio artificial a base de huevo. 5. Materiales y equipo Microscopio compuesto Cubreobjetos limpios Marcador indeleble para vidrio Varillas de vidrio para colocacin Colorantes: Giemsa, MIF
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6.

Papel limpia lentes Lentes de proteccin Frascos con muestra desconocida Formalina (Fijador) Guantes de ltex Papel mayordomo Torundas de algodn Beackers con cloro (1 por mesa con 20 ml de cloro) Aplicadores de madera Bolsas para descarte de basura Pipetas pasteur estriles Goteros Perilla pequea, de goma Muestra de agua desconocida Caja de petri de vidrio Portaobjetos limpios y desgrasados (4 / A) Alcohol al 70% (5.0 ml/A)

Procedimiento a. b. c. d. e. f. g. h. i. Limpie una lmina porta objetos y rotulela como muestra. Tomo un 1ml de agua y trasldela a un tubo ependorf. Centrifugue por dos minutos Descarte el sobrenadante Con ayuda de una pipeta pasteur, tome una gota del sedimento y depostelo en la lmina ya rotulada. Tape la muestra con un cubre objetos Llvela al microscopio y observe tanto en 10 X como en 40 X Vea al microscopio y esquematice Reporte las estructuras

PARTE I. Preparacin de Frotis de Muestra De Agua

PARTE II. Preparacin del Frotis Directo a. Limpie y desgrase 3 lminas portaobjetos y rotelos con el nmero de la muestra, as: 1a, 1b y 1c.
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b. c. d. e. f.

Prepare una cmara hmeda (Caja de petri, con algodn, humedecido con agua destilada). Agite suavemente uno de los tubos que contienen muestras ya fijadas y destape con precaucin. Extraiga una gota de la muestra, con ayuda de una pipera pasteur y depostela sobre la lmina ya numerada. descarte la pipeta pasteur, en el Beacker que contiene cloro (pero no la perilla de goma) Coloque un cubre objetos sobre la preparacin.

PARTE III. Preparacin de Frotis coloreado con MIF a. b. c. d. e. f. Tome la segunda lamina (1b) ya numerada en la Parte I de este trabajo. En el centro de la lmina, coloque una gota del colorante MIF. Agite suavemente uno de los tubos que contienen muestras ya fijadas y destape con precaucin. Extraiga una gota de la muestra, con ayuda de una pipeta pasteur y depostela sobre la gota del colorante. Descarte la pipeta de pasteur, en el Beacker que contiene cloro (pero no en la perilla de goma). Coloque un cubre objetos sobre la preparacin y djela en la cmara hmeda, por termino de dos minutos.

PARTE IV. Preparacin del Frotis coloreado con GIEMSA a. Tome la tercera lamina (1c) ya numerada en la Parte I de este trabajo. b. Rotule un tubo ependorf, con el mismo nmero de la lmina e igual nmero de muestra. c. Agite suavemente el tubo que contienen muestras ya fijadas y destape con precaucin. d. Con ayuda de una pipeta pasteur, extraiga aproximadamente 0.5 ml de muestra y depostela en el interior del tubo ependorf. e. Nivele un segundo tubo ependorf con agua y centrifugue ambos tubos, por termino de dos minutos. f. Descarte el sobrenadante. g. Con un aplicador de madera extraiga una gota de sedimento y depostelo en el centro de la madera. h. Haga un extendido del material, en dos tercios de la lmina, ayudado siempre del aplicador de madera. i. j. Descarte el aplicador, en el recipiente con cloro. Deje secar a temperatura ambiente.

k. Coloree con GIEMSA por 20 segundos, lave y deje secar a temperatura ambiente.

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PARTE V. Observacin al Microscopio a. Llvela al microscopio y observe tanto en 10 X como en 40 X. b. Vea al microscopio y esquematice. c. Reporte las estructuras. 7. Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad a. Lvese las manos despus de realizar cualquier tarea dentro de laboratorio de microbiologa. b. Todo el material empleado en las prcticas microbiolgicas se descarta en las bolsas rojas. c. No dejar por ningn motivo cajas, tubos o cualquier otro material contaminado, en lugares que no corresponda al rea de trabajo. NINGUN EQUIPO DE PROTECCIN SUSTITUYE EL CUIDDO, ORDEN Y PRECAUCIN QUE DEBE TENER CADA ESTUDIATE AL REALIZAR SU TRABAJO 8. Cuestionario a. Qu diferencia hay entre las preparaciones? b. Cul considera que es la ms apropiada y por qu? c. Cul recomendara ms til y rentable para hacer el diagnostico y por qu? d. Investigue sobre enfermedades producidas por las amebas de vida libre y su patologa. 9. Formato de presentacin de resultados a. Esquematice las observaciones realizadas de cada una de las lminas b. Conteste el cuestionario y realice la investigacin. 10. Bibliografa de referencia Macalup S. 1997. Procedimientos de Laboratorio Edicin nica. Editorial Impresora Amarilys e.i.r.l. Lima, Per. Kaminsky R. 1996. Manual de Parasitologa. 2 Edicin. Editorial Rossany Auceda Tegucigalpa, Honduras. Botero D. 1992. Parasitosis Humana 2da Edicin. Carvajal S.A Impreso en Medelln Colombia.

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