UNIVERSIDAD PRIVADA JOSE CARLOS MARIATEGUI

FACULTAD DE INGENIERIA AGRONMICA

MDULO NEMATOLOGIA EN HORTALIZAS Y FRUTALES

MOQUEGUA - PER

INDICE
PRIMERA UNIDAD
LECCIN N 1. GENERALIDADES DE LA NEMTOLOGIA
1. CONCEPTOS Y DEFINICIONES 2. CLASIFICACIN TAXONMICA 3. FILOGENIA 4. MORFOLOGIA DE LOS NEMTODOS 4.1. FORMA DEL CUERPO 4.2. COMPONENTES DEL CUERPO 4.3. COLOR DE LOS NEMTODOS 4.4. SIMETRA DE LOS NEMTODOS 4.5. CUBIERTA CORPORAL DE LOS NEMTODOS 4.6. CUTICULA O EXOESQUELETO 5. NUTRICIN DE LOS NEMTODOS 6. RESPIRACIN DE LOS NEMTODOS 7. DIGESTIN DE LOS NEMATODOS 8. EXCRECIN DE LOS NEMTODOS 9. RGANOS DE LOS SENTIDOS 10. REPRODUCCIN DE LOS NEMTODOS 11. CICLO DE VIDA DE LOS NEMTODOS 12. SINTOMATOLOGA DE LAS ENFERMEDADES CAUSADAS POR NEMTODOS

LECCIN N 2. NEMTODOS DAINOS A HORTALIZAS Y FRUTALES

1. MELOIDOGYNE SPP. (NEMTODOS AGALLADORES) 1.1. CULTIVOS SUCEPTIBLES A DAOS 1.2. BIOLOGIA 1.3. SINTOMAS 1.4. CONTROL 2. PRATYLENCHUS SPP. (NEMTODOS LESIONADORES) 2.1. CULTIVOS SUCEPTIBLES A DAOS 2.2. BIOLOGIA 2.3. SINTOMAS 2.4. CONTROL

3. GLOBODERA SPP. Y HETERODERA SPP. (NEMTODOS QUSTICOS) 3.1. CULTIVOS SUCEPTIBLES A DAOS 3.2. BIOLOGIA 3.3. SINTOMAS 3.4. CONTROL 4. DITYLENCHUS SPP. (NEMTODOS DE LOS TALLO Y LOS BULBOS) 3.1. CULTIVOS SUCEPTIBLES A DAOS 3.2. BIOLOGIA 3.3. SINTOMAS 3.4. CONTROL

SEGUNDA UNIDAD
LECCIN N 3. PRINCIPIOS DEL CONTROL NEMATOLGICO
1. INTRODUCCIN 2. PREVENCIN 3. CONTROL QUIMICO 4. PLANTAS Y PRODUCTOS ALELOPTICOS 5. MEDIOS CULTURALES 5.1. BARBECHO 5.2. ROTACIONES 5.3. SOLARIZACIN 5.4. VAPOR DE AGUA 5.5 ENCHARCAMIENTO 5.6. ADICIN DE MATERIA ORGNICA Y BIOFUMIGACIN 6. RESISTENCIA 7. CONTROL BIOLGICO

LECCIN N 4. MANEJO INTEGRADO DE ENFERMEDADES NEMATOLGICAS

1. INTRODUCCIN 2. TOMA DE MUESTRAS PARA DIAGNSTICO NEMATOLGICO 3. PRECAUCIONES PARA OBTENER RESULTADOS PRECISOS 4. HONGOS CAPTURADORES DE NEMTODOS

LECCIN N 5. MTODOS PARA EXTRACCIN DE NEMTODOS DEL SUELO

1. MTODO DE LA BANDEJITA 2. MTODO DE TAMIZADO Y DECANTACIN DE COBB (1981) MODIFICADO 3. MTODO DE CHRISTIE Y PERRY (1951), MODIFICACIONES MTODO BAERMAN 4. MTODO DE CENTRIFUGACIN EN AZCAR 5. MTODO MODIFICADO DE FENWICK 6. MTODO DE LA ACETONA 7. MTODO DE BAUNACKE 8. MTODO DE LA COCA COLA 9. CONTAJE DE QUISTES Y DE HUEVOS DE GLOBODERA SP.

LECCIN N 6. MTODOS PARA EXTRACCIN DE NEMTODOS DE TEJIDO VEGETAL

1. MTODO DEL LICUADO 2. MTODO DEL LICUADO, TINCIN Y MICROONDAS 3. MTODO DE EXTRACCIN DE HUEVOS DE MELOIDOGYNE SP. 4. MTODO DE FUCSINA CIDA-LACTOFENOL

LECCIN N 7. PROCESO DE MUERTE, FIJACIN Y MONTAJE DE NEMTODOS

1. MUERTE 2. FIJACIN 3. MONTAJE

PRIMERA UNIDAD
LECCIN N 1. GENERALIDADES DE LA NEMATOLOGIA

1. CONCEPTOS Y DEFINICIONES La Nematologa es la ciencia que estudia a los nemtodos. Los nemtodos son animales multicelulares generalmente microscpicos que poseen los principales sistemas fisiolgicos, con excepcin del sistema respiratorio y circulatorio. Los nemtodos (Nematoda Rudolphi, 1808) forman el mayor grupo de asquelmintos (Aschelminthes GROBBEN, 1910) o nematelmintos (Nemathelminthes GEGENBAUER, 1859), con unas 80,000 especies descritas en la bibliografa cientfica. Algunos investigadores calculan que existen realmente alrededor de un milln de especies. Se les considera como una clase zoolgica o, de acuerdo con un nmero creciente de zologos, como un filo independiente. La palabra "Nematodo" procede del trmino nematoide, que significa "similar a un hilo". Incluye a organismos que reciben nombres comunes como "gusanos redondos", "gusanos filamentosos", "lombrices" o "angululas". Los nemtodos estn presentes en todos los ambientes y son casi imperceptibles a

simple vista. La mayor parte de ellos son microscpicos y transparentes, aunque algunos nemtodos marinos pueden medir hasta 9 metros de longitud, pudiendo haber ms de un milln de nemtodos por metro cuadrado de suelo.

Figura N1. Micrografa electrnica de un nemtodo fitoparsito

La caracterizacin de los nemtodos an est sometida a revisin. Si bien hay una sola muestra de tierra, es posible que slo haya de 10 a 25 especies. Los

unas

10,000 especies de nemtodos en total, slo existen en el suelo unas 1,000 especies. En

nemtodos parasitan plantas y animales que habitan sobre el suelo. De esta y de la formacin de

manera, son los responsables de los nudos de la raz de la vid

quistes en la soya. La mayor parte de las infestaciones patgenas de las plantas causadas por nemtodos, slo pertenecen a unas cuantas especies de nemtodos fitopatgenos. Los nemtodos de vida libre suelen encontrarse en los 10 cm superiores del

contorno del suelo, habitando un 90% de stos en los 15 cm superiores de ste. De este modo, los nemtodos resultan activos en capas de agua, si bien algunos resisten los ciclos de sequa, formando quistes, o bien atraviesan un perodo de reposo. Las poblaciones de nemtodos son mayores en ambientes orgnicos con un pH neutro, aunque su presencia no se restringe a estos ambientes. Asimismo, dichas poblaciones son ms numerosas cerca de las races de las plantas que en otros lugares. Algunas especies de alimentan de la (poblacin de la nemtodos parasitan races que vivas, habita mientras cerca que otras se

rica

poblacin microbiana

de

estas

races

rizosfera). Estas poblaciones elevadas reflejan el alto contenido de

materia orgnica que hay cerca de las races. Los nemtodos presentan altos niveles reproductivos, con cinco y seis generaciones anuales. Pueden depositar miles de huevos, formando paquetes. Los nemtodos no participan directamente en la descomposicin de la materia Los nemtodos de vida

orgnica. Por el contrario, son saprfitos o depredadores.

libre consumen microorganismos, mientras que los otros se alimentan de rotferos y protozoos. En vista de que los nemtodos pueden consumir hasta 5,000 clulas por minuto, ayudan a regular las poblaciones microbianas del suelo. Los nemtodos son parasitados, a su vez, por otros organismos del suelo y son consumidos como parte de la cadena alimenticia del suelo.

Figura N2. Ndulos en races

2. CLASIFICACIN TAXONMICA Los nemtodos pertenecen al: Reino: Metazoa Sub reino: Eumetazoa Divisin: Bilateralia Sub divisin: Protostonia Super phylum: Pseudocelolates Phyllum: NEMATA Debido a su gran variedad de formas de vida, los nemtodos se han estudiado por investigadores de distintas disciplinas interesados en grupos particulares. Por ello, se han investigado independientemente los de vida libre, los zooparsitos y los fitoparsitos, habindose propuesto diferentes formas de clasificacin. Su ordenacin en gneros, familias y superfamilias es satisfactoria, pero la ordenacin en grupos superiores es controvertible. La clasificacin ms aceptada de los nemtodos es la propuesta por B. G. Chitwood y M. B. Chitwood (1950), segn la cual forman un filo dividido en dos clases, Phasmidia y Aphasmidia. La clase Phasmidia (Fasmidios o Fsmidos) o Secernentea (Secerntidos) incluye a los Nematodos provistos de fasmidios, rganos sensoriales, pares en forma de pequeas bolsas que se ubican en la zona caudal. Estructuras pares similares (anfidios) del extremo anterior, estn escasamente desarrolladas. Sistema excretor presente, con uno o dos canales laterales, con o sin clulas glandulares asociadas.

Los Fsmidos comprenden parte de las especies que habitan en el suelo, la mayora de los parsitos animales y casi todos los parsitos de los vegetales. Entre los fsmidos se encuentran los estrongilinos, los ascaridinos (grupo al que pertenecen los Ascaris y los Oxiuros) y los espirulinos (al que pertenecen las filarias, como Wuchereria). La clase Aphasmidia (Afasmidios o Afsmidos) o Adenophorea (Adenofridos) incluye a los que carecen de glndulas fasmidiales y poseen anfidios de formas variables, generalmente bien desarrollados, detrs de los labios. Sistema excretor con una o ms clulas excretoras (renetas). Comnmente con glndulas hipodrmicas y caudales. La mayora son de vida libre. Comprenden a casi todas las especies acuticas, tanto dulceacucolas como ocenicas, parte de las especies del suelo, parte de los parsitos animales (como las triquinas Trichinella y tricoffalos Trichuris) y algunos parsitos de los vegetales.

3. FILOGENIA Antiguamente se consider a los nemtodos como un grupo aislado evolutivamente. Hoy no cabe duda que estn emparentados con los Gastrotricos, cuyos representantes marinos presentan claras afinidades con los nemtodos, especialmente por sus faringes y cutculas. Posiblemente tambin tengan afinidades con los nematomorfos. Segn algunos zologos, los gastrotricos, nemtodos y nematomorfos derivan de un nico grupo de platelmintos turbelarios aclicos. En general, se considera que los gastrotricos son ms primitivos. Las relaciones evolutivas con otros grupos de pseudocelomados son menos claras y muchos de sus caracteres comunes podran deberse a fenmenos de convergencia evolutiva. Dentro del grupo Nematodos es difcil determinar lneas filogenticas, an se discute acerca de cules deben considerarse ms primitivo.

4. MORFOLOGIA DE LOS NEMTODOS Los nemtodos son parecidos a los gusanos, con cuerpo vermiforme y un tubo digestivo que recorre longitudinalmente su cuerpo desde la boca al ano. Miden menos de un milmetro de longitud, por lo que se precisan potentes lupas binoculares o microscopios para observarlos.

En algunas especies el cuerpo de la hembra difiere en su forma de la del macho, presentando una silueta en forma de pera o casi esfrica debida normalmente a la presencia de huevos. Presentan un dimorfismo sexual marcado, sobre todo en la parte final del cuerpo, el macho es ms grueso y corto que la hembra, cuyo cuerpo es absolutamente liso. El cuerpo es homogneo y carece de apndices complementarios. Los una espina dura y hueca con la que absorben la savia de las plantas. nematodos

fitopatgenos se caracterizan por la presencia en su cuerpo del llamado estilete,

4.1. FORMA DEL CUERPO Los nemtodos tiene formas diferentes interna y externamente, pero existe una forma universal que incluso sirvi para darles nombre y es la forma fusiforme, en donde se notan claramente dos ejes, uno longitudinal alargado y otro transversal muy corto. El acortamiento o alargamiento de estos ejes le da forma caracterstica a cada tipo de nemtodo. La forma tpica, al corte transversal presente forma tpicamente circular y los dimetros anterior y posterior son menores que en el dimetro medio. De acuerdo a las variaciones en las longitudes de los ejes las formas del cuerpo pueden ser: Cilndrica: Cuando los ejes transversales en sus tres puntos Trichodorus. Subcilindrica: El dimetro anterior es de menor tamao que el medio y el son casi iguales:

posterior. Tylenchorhynchus, Helycotylenchus. Fusiforme: Ditylenchus Filiforme: El dimetro medio anterior y posterior similar a fusiforme pero el eje longitudinal es bastante largo. Vermiforme ensanchado: Agrandamiento del dimetro ms que el anterior y posterior.

Redondeada: Dimetro medio y posterior ensanchados grandemente, se produce atrofia muscular y origina incapacidad de movimiento. Piriforme: Meloydogine Limn Rugoso: Heterodera Ensanchado irregular: Rotylenchulus, Nacobbus, Tylenchulus

4.2. COMPONENTES DEL CUERPO Esencialmente el cuerpo del nemtodo esta constituido por dos tubos o cilindros: uno externo, otro interno y uno interno al tubo digestivo. Los arreglos musculares o msculos de la pared se encuentran en forma longitudinal. Los rganos se encuentran uno a continuacin de otro dentro del cuerpo y no uno junto al otro. Los rganos son seriados uno a continuacin del otro. La cavidad del cuerpo presente lquido pseudocelomtico y la forma redondeada del cuerpo se debe a que la cavidad del cuerpo se mantiene turgente en forma bastante significativa y tambin a la presencia de la pared del cuerpo que es bastante rgida.

4.3. COLOR DE LOS NEMTODOS Los nemtodos generalmente presentan el cuerpo incoloro, transparente. Cuando se observa coloreado es por el tipo de material alimenticio acumulado en el intestino. Para su observacin se requiere iluminacin de abajo hacia arriba.

4.4. SIMETRIA DE LOS NEMTODOS La simetra de los nemtodos debera ser bilateral, es decir, que todos los rganos deberan estar por duplicado y al corte transversal deberan aparecer como un espejo sea uno frente al otro. Pero por procesos evolutivos la simetra bilateral es mnima, predominan en el nemtodo posiciones asimtricas de rganos as como posiciones radiales.

4.5. CUBIERTA CORPORAL DE LOS NEMTODOS La pared corporal es un saco msculo-cutneo, en el que se comprenden el aparato excretor y el sistema nervioso. El saco msculo-cutneo limita el pseudoceloma, que contiene al aparato digestivo y el reproductor. El cuerpo est cubierto por una cutcula resistente delgada, cubierta quitinosa que a menudo tiene un relieve en forma de anillos y cubre la faringe, digestivo posterior y otras aberturas corporales. La cutcula de la superficie corporal general suele presentar ornamentaciones (punteaduras, verrugas, costillas, espinas o sedas). A veces hay un conjunto variable de prominencias cuticulares (alas), que pueden encontrarse a lo largo de la longitud del cuerpo, en la regin cervical o en la regin caudal del macho (en algunos se encuentra all una expansin formada por tres lbulos, con funcin copuladora). La pared del cuerpo es la parte del cuerpo que lo pone al nemtodo en contacto con el medio ambiente por un lado y por el otro con el pseudoceloma. Est formado por tres partes fundamentales: la cutcula, la hipodermis (epidermis, subcuticula o lmina media) y la capa muscular. El rol de la pared es el intercambio gaseoso, movimiento y proteccin de los rganos internos.

4.6. CUTICULA O EXOESQUELETO La cutcula, gruesa, es un producto elstico de las clulas epidrmicas subyacentes. Entrega un soporte resistente, protege de algunos compuestos txicos y permite aumentar o disminuir el volumen corporal sin cambiar la presin del lquido perivisceral. En la cutcula predominan protenas similares al colgeno, y la capa externa contiene una protena del tipo de las queratinas, cubierta por una pelcula lipdica. La cutcula consta de tres zonas: capa basal (estriada, laminada o con fibras helicoidales), capa mediana, que vara entre una estructura granular uniforme hasta varillas, fibrillas o canales, y capa cuticular externa, cortical o crtex (frecuentemente anillada y dividida en parte externa e interna).

Estas capas estn formadas por fibras entrecruzadas, que confieren cierta elasticidad longitudinal, pero limitan la capacidad de extensin lateral. Las tres capas pueden estar subdivididas en estratos y a ellas se agrega una epicutcula delgada, que puede presentar una cubierta de quinona. La superficie cuticular puede tener punteaduras, que actan verrugas, como costillas, espinas, o sedas u otras en la modificaciones, locomocin. En los nemtodos el crecimiento se acompaa normalmente de cuatro mudas de la cutcula. La cutcula antigua se separa de la epidermis subyacente empezando por el extremo anterior y el animal segrega la cutcula nueva. La cutcula antigua se desprende entera o en fragmentos, pero puede ser absorbida parcialmente por la nueva cutcula. Antes de cada muda, la epidermis se engruesa y forma una gran cantidad de ribosomas. En el animal adulto no hay mudas, pero la cutcula contina expandindose mientras el animal crece. Bajo la cutcula existe una subcutcula o epidermis, generalmente celular, aunque en parsitos a veces es sincicial. La epidermis consta de pocas series de clulas, generalmente ocho. La epidermis secreta la cutcula, mantiene reservas de nutrientes, contiene fibras de anclaje que unen la musculatura a la cutcula y en algunas especies endoparsitas es una importante superficie de absorcin de nutrientes. La epidermis de los nemtodos se expande hacia el interior, formando cuatro crestas o prominencias longitudinales a lo largo de las lneas media dorsal, media ventral y medias laterales (lneas o cordones longitudinales o crestas epidrmicas). Estos cordones son menos prominentes en las zonas dorsal y ventral, y pueden desaparecer en los extremos del cuerpo. Incluyen a los troncos nerviosos (lneas medioventral y mediodorsal) y a los canales excretores (lneas laterolongitudinales) que dividen a la musculatura en cuatro campos. Generalmente los ncleos epidrmicos se restringen a estos cordones. Las zonas de epidermis situadas entre las protuberancias son campos plasmticos anucleados y delgados. Ciertas especies parsitas, como triquina, carecen de campos laterales; otras como el tricocfalo presentan un revestimiento muscular no interrumpido (holomiarios). rganos sensoriales participan

En muchas especies parsitas y de vida libre hay glndulas cutneas. Son especialmente constantes tres grandes glndulas adhesivas del extremo posterior del cuerpo, con las cuales los animales pueden fijarse al substrato. El sistema muscular est constituido por clulas mioepiteliales, las que forman una capa muscular, que corresponde a la musculatura somtica general, y msculos especializados. La capa muscular est formada por clulas mioepiteliales, fusiformes, que forman fibras longitudinales, situadas en cuatro bandas o cuadrantes (dos masas musculares dorsales y dos ventrales, separadas en sentido longitudinal por una lnea dorsal, una lnea ventral y dos lneas laterales, formadas por relieves de la subcutcula, entre los cordones longitudinales. Muchos nemtodos tienen slo entre dos y cinco msculos en cada campo (meromiarios), otros tienen muchas clulas musculares en cada campo (polimiarios). Las fibras pueden ser anchas y planas, o bien altas y estrechas, segn la especie. Los msculos somticos comprenden dos tipos principales, aunque pueden encontrarse formas intermedias: celomiarios y platimiarios. Los msculos "celomiarios" presentan fibrillas contrctiles en la periferia, sobre tres lados, faltando en la cara que va a la cavidad corporal; mientras que los msculos "platimiarios" son aquellos en los que las fibrillas contrctiles se limitan a la capa basal, junto a la epidermis. Las clulas musculares de los nemtodos son las nicas que tienen extensiones nerviosas, cada fibra muscular posee un brazo delgado que va hasta el cordn nervioso longitudinal, dorsal o ventral, donde se produce la inervacin. Los msculos especializados se utilizan para el movimiento de partes especiales del cuerpo, por ejemplo los msculos labiales para la prehensin de alimento, msculos farngeos para engullir, msculos rectales para la defecacin y msculos copuladores, asociados a los rganos reproductores, ya sea espculas o vulva. De fuera a adentro, presenta las siguientes capas: Cutcula, muy gruesa, est estratificada, compuesta fundamentalmente de colgeno. Sirve para proteger al animal del ambiente hostil del hospedador, cuando el animal es parsito. Le permite colonizar ambientes hostiles. Esta cutcula es producida por la epidermis subyacente.

Epidermis, Monoestratificada. Puede ser celular o sincitial. Presenta cuatro entrantes hacia el pseudoceloma que reciben el nombre de cordones epidrmicos, que recorren longitudinalmente el cuerpo del animal; uno por la lnea mediodorsal, otro por la lnea medioventral y otros dos mediolaterales. En los cordones estn los ncleos de las clulas epidrmicas. En el cordn epidrmico dorsal y ventral se localizan los cordones nerviosos longitudinales. En los cordones epidrmicos laterales se localizan los conductos excretores. Musculatura, Es longitudinal y estriada. Son clulas exclusivas, ya que conectan con el sistema nervioso mediante prolongaciones citoplasmticas. Bajo la musculatura se localiza el pseudoceloma. El hecho de que la musculatura sea longitudinal hace que el movimiento de estos animales est reducido al serpenteo. La musculatura est dividida en cuatro paquetes o campos musculares, separados por los cordones epidrmicos. Pseudoceloma, El pseudoceloma o pseudocele es una cavidad derivada del blastocelo, ubicada entre las vsceras y la pared corporal, no est tapizada por peritoneo y posee lquido perivisceral en su interior. La cavidad se extiende desde la musculatura hasta el tubo digestivo, y rodea a los rganos reproductores. Su alta presin hidrosttica (fuerte turgencia) conjuntamente con la cutcula, actan como antagonista elstico (hidroesqueleto) de la capa longitudinal muscular, lo que se correlaciona funcionalmente con la ausencia de msculos circulares. En las especies pequeas de vida libre, el pseudocele es reducido o no existe, en las formas grandes, como Ascaris, es voluminoso, ocupado por un tejido muy laxo con clulas que presentan enormes vacuolas. El lquido perivisceral, a presin, funciona como un hidrostato. Contiene metabolitos orgnicos, incluyendo hemoglobina en algunas especies. En nemtodos parsitos suele contener substancias txicas, especialmente hemolticas para el husped. En las paredes del pseudoceloma existen clulas fagocitarias fijas, importantes en la defensa interna.

5. NUTRICIN DE LOS NEMTODOS Muchas especies de vida libre son carnvoras y otras fitfagas. Las formas marinas y de agua dulce se alimentan de diatomeas, algas, hongos y bacterias. Para muchas especies terrestres de nemtodos son importantes como alimento las algas y los hongos. Abundan las especies terrestres que perforan las races vegetales para succionar su contenido. Estos nemtodos producen grandes prdidas comerciales. Tambin hay muchas especies que ingieren partculas de substrato (sedimentvoras), que al igual que las que viven en materia orgnica muerta (estircol, cadveres) se nutren en realidad de bacterias y hongos. Algunas especies son saprfagas, se alimentan succionando cadveres de pequeos animales o plantas muertas, o sus restos en diversos estados de descomposicin. El nemtodo del vinagre, Turbatrix aceti, vive en el sedimento del vinagre sin pasteurizar. Los nemtodos son el grupo de consumidores de bacterias y hongos ms abundante y cosmopolita, por lo que tienen gran importancia en las cadenas trficas. El aparato digestivo es casi rectilneo, raramente ondulado. Se extiende entre la abertura oral (anteroterminal) y la abertura anal (subterminal), que puede faltar. Comprende un estomodeo (boca, cavidad bucal y faringe), un mesentern (intestino medio) y un proctodeo (intestino terminal, que puede ser recto o cloaca). En la regin bucal se manifiestan las mayores variaciones. La boca carece de probscide, pero a menudo est muy diferenciada y tapizada por cutcula. La superficie cuticular puede espesarse y estar reforzada por bordes, varillas o placas, o llevar dientes afilados, puntiagudos (onchia). La boca est rodeada por un nmero variable de lbulos salientes o de labios y sensilas de varios tipos. En muchas especies marinas la boca est rodeada por 6 lbulos en forma de labio, 3 a cada lado. Debido a fusin, las formas terrestres y parsitas suelen tener slo 3 labios. Primitivamente los labios y la superficie anterior externa a ellos tienen 18 sensilas. La boca conduce a una cavidad bucal o estoma, ms o menos tubular y recubierta por cutcula. Los detalles estructurales de la cavidad bucal estn relacionados con los hbitos alimentarios y son importantes en la identificacin de las especies. La cavidad bucal puede ser un tubo estrecho o un espacio oval o con forma de taza.

Cuando la cavidad bucal est muy especializada, puede dividirse en una cmara anterior, cerrada por los labios; un prostoma largo, y un telostoma. En algunos carnvoros y vegetarianos, en la cavidad bucal hay un largo estilete oral o lanza bucal, hueco o macizo, que puede salir de la boca mediante accin muscular. Los estiletes sirven para punzar a la presa, y el estilete hueco acta, adems, como un tubo por donde la faringe succiona. El estilete a veces se origina en una modificacin del epitelio de la cavidad bucal (estomatostilo) y otras veces por una importante modificacin de un diente (odontostilo). Los Nematodos que viven en el interior de tejidos animales y los saprfagos de vida libre se alimentan predominantemente de lquidos y su regin bucal se reduce a un poro diminuto que conduce a la faringe. En los Nematodos carnvoros hay frecuentemente dientes, protuberancias grandes, placas cortantes, raspas o dentculos pequeos y abundantes. Detrs de la boca puede haber una cpsula bucal con dientes en su base. La cavidad bucal se abre hacia una faringe tubular denominada esfago o faringeesfago. La luz farngea es trirradiada en seccin transversal, contiene fibras musculares radiales y tambin est revestida por cutcula. La pared tiene clulas mioepiteliales y glandulares. En algunos casos es un tubo no especializado, pero generalmente est especializada por regiones y vara ampliamente en cuanto a su forma y a la proporcin relativa de tejidos glandulares y musculares. Muchos nemtodos vegetarianos poseen un engrosamiento oval alrededor del centro de la faringe. Entre los zooparsitos la faringe puede presentar diferentes caractersticas. Algunos presentan un ventrculo glandular no muscular y posterior, que puede alargarse, o tienen la faringe dividida en una porcin anterior corta y una porcin muscular posterior ms ancha. Las glndulas farngeas secretan enzimas que inician la digestin del alimento o ayudan a la penetracin de los nutrientes a travs de la pared celular. Las secreciones enzimticas se proyectan fuera de la boca realizando una predigestin de los alimentos, previa a su ingestin. Algunos Nematodos tienen una o ms protuberancias musculares (bulbos o ciegos) en el extremo posterior de la faringe, que funcionan como bombas que llevan el alimento lquido hacia el intestino. A menudo hay vlvulas. Mientras la faringe se llena, una vlvula faringo-intestinal est cerrada, y cuando los msculos farngeos empujan el alimento hacia el intestino, se abre la vlvula y la boca se cierra.

La digestin comienza en la luz del intestino y se completa intracelularmente. La digestin intracelular, cuando existe, es poco importante. El epitelio intestinal secreta enzimas digestivas. El intestino almacena alimentos y participa en la sntesis de vitelo. Las reservas de glucgeno y grasas de las clulas intestinales se utilizan durante el ayuno y la muda. A veces a su alrededor se encuentra una capa muscular. Una vlvula en cada extremo del intestino impide que el alimento sea expulsado por la presin del lquido pseudocelmico. Desde la faringe sale un intestino medio tubular, formado por una capa de clulas epiteliales, que puede ser ciliado o tener un ribete en cepillo, y luego sigue un recto o intestino terminal, corto y aplanado, que est recubierto por cutcula y puede contener glndulas rectales unicelulares. El intestino medio, es un tubo sencillo con alguna escasa especializacin regional. Presenta pocas variaciones, aunque el nmero de clulas que lo compone vara ampliamente. En algunas especies, presenta en su extremo anterior unas evaginaciones ciegas, y la superficie puede estar plegada. En algunos casos se puede distinguir, histolgicamente, una regin anterior ventricular, una regin media y una prerrectal. El intestino terminal o recto, deriva del ectodermo y est tapizado por la cutcula. Se extiende desde la vlvula intestino-rectal hasta el ano, que est en la lnea media ventral, antes del extremo del cuerpo, y tiene forma de ojal. El labio del ano y la pared rectal se levantan por accin de un msculo que ayuda a la defecacin. La fuerza de expulsin deriva de la presin del pseudocele. En especies parsitas son frecuentes las glndulas rectales grandes y unicelulares. En los machos, el conducto reproductor se une al recto formando una cmara llamada cloaca, aunque en ella no desembocan vas excretoras. Tubo digestivo, Es muy sencillo. Es completo. Comienza en una pequea cavidad bucal que desemboca en una faringe muy musculosa, tambin llamada hexfago, que ayuda a la deglucin. Se contina con el intestino, que es muy largo y se extiende por todo el cuerpo del animal hasta el extremo posterior del cuerpo, pare desembocar en el ano, en el caso de las hembras. En los machos, el recto es una autntica cloaca, ya que en ella desembocan las vas reproductoras. La cloaca comunica con el exterior por el orificio cloacal. La faringe (estomodeo) y el recto (proctodeo) son ectodrmicos; estn recubiertos por cutcula. La digestin es extracelular ya que en el intestino se segregan enzimas digestivas a la vez que es intracelular.

Hay nemtodos carnvoros, que se alimentan de pequeos invertebrados. Los hay fitfagos que perforan las races de las plantas. Hay nemtodos que pueden producir grandes daos a los cultivos agrcolas. Otros se alimentan de algas, bacterias, hongos, etc. Otros son detritvoros y se alimentan de materia en descomposicin. Los hay parsito de plantas y animales, incluido el hombre.

6. RESPIRACIN DE LOS NEMTODOS Los nemtodos carecen de rganos respiratorios diferenciados. Los adultos que viven

como parsitos intestinales son principalmente anaerobios, en ellos falta el ciclo de Krebs y el sistema de citocromos, pero todos pueden utilizar el oxgeno si est disponible. Algunos nemtodos de vida libre y los estados libres de algunos parsitos, son aerobios obligados, y por lo tanto poseen ciclo de Krebs y sistema de citocromos.

7. EXCRECIN DE LOS NEMTODOS Los nemtodos excretan desechos en forma de amonio, que difunde a travs de la pared corporal. El sistema excretor carece de clulas en llama y de protonefridios. Unos pocos nemtodos carecen de cualquier sistema de excrecin. La osmorregulacin, la regulacin inica y, quizs, la excrecin de otros desechos, se asocian generalmente con estructuras especializadas particulares: una clula o clulas glandulares excretoras (glndula ventral), sistema de canales excretores (conductos acuferos), o ambos. Estos sistemas aparecen solamente en nemtodos y dentro del grupo constituyen los rganos ms desarrollados. En ambos casos de trata de formaciones unicelulares. Cuando se presentan tanto sistema de canales como glndulas, comparten el mismo poro hacia el exterior. La clula glandular excretora es grande, se encuentra a nivel de la unin de faringe con el intestino medio, protruye en el pseudocele y tiene un conducto en forma de cuello que desemboca medioventralmente en un poro. Su papel excretor es incierto, se han sugerido otras funciones, como secrecin de matriz gelatinosa alrededor de los huevos, secrecin de una cubierta de glicoprotenas sobre la cutcula y produccin de exoenzimas para iniciar la digestin de los tejidos del hospedador. El rgano excretor de tipo glndula ventral se encuentra especialmente en formas de vida libre, as los Nematodos marinos suelen tener una simple clula excretora sacciforme con su cuello abierto hacia el poro excretor.

El sistema de canales excretores, sin cilios, se encuentra dentro de una clula, la clula ms grande del cuerpo del animal, generalmente tiene forma de H alargada (clula en forma de H), los dos canales largos se sitan en los cordones epidrmicos laterales y se unen por uno o varios canales situados en la barra transversal. Este sistema sirve especialmente para la regulacin inica. Del conducto transversal sale un conducto corto impar que desemboca en la superficie del cuerpo en un poro de la regin farngea. A veces el conducto se agranda y forma una ampolla que se llena y vaca rtmicamente. El sistema de canales que corren a lo largo de cordones laterales se encuentra en muchos parsitos y en especies del suelo. En algunos casos este tipo de sistema excretor presenta un par de glndulas cervicales.

8. SISTEMA NERVIOSO El Sistema nervioso es intraepitelial, localizado en la epidermis, la faringe y el digestivo posterior. Existe un anillo nervioso circunfarngeo, o collar periesofgico (comisura ceflica), con varios ganglios asociados, que rodea al intestino anterior y sobre el cual las clulas nerviosas se distribuyen generalmente en forma difusa, y varios cordones longitudinales. El anillo nervioso circunfarngeo est formado principalmente por fibras nerviosas, los cuerpos neuronales se ubican en ganglios. Del anillo nervioso circunfarngeo, asociado a un cerebro bilobulado, salen hacia adelante nervios que inervan los rganos sensoriales, especialmente las sensilas y los anfidios. Hacia la parte posterior salen troncos nerviosos dorsales, laterales y ventrales dentro de los cordones longitudinales, unidos por comisuras. Algunos son motores (mediodorsal, medioventral, sublaterales), los otros son sensitivos (laterales). Los extremos de las clulas musculares contactan con los nervios dorsales y ventrales; los nervios laterales se asocian con los canales excretores. El cordn nervioso dorsal, predominantemente motor, se encuentra en el cordn epidrmico dorsal. Los troncos nerviosos laterales, predominantemente sensitivos, se encuentran en los cordones epidrmicos laterales, atravesando los ganglios lumbares y terminando en el ano. El nervio principal es el tronco ventral, que a menudo tiene races pares y probablemente deriva de la fusin de dos nervios. En Ascaris el cordn ventral presenta 55 fibras. Existe un sistema simptico farngeo. Los nervios viscerales inervan el intestino. En las vas nerviosas hay ganglios, concentrados especialmente cerca del extremo posterior, donde hay un ganglio anal o caudal, sencillo o doble.

El sistema nervioso es pues, intraepidrmico. Del anillo surgen los cordones nerviosos longitudinales. Surge uno de cada ganglio (6). De ellos, los dorsales se fusionan para forma un nico cordn. Los ventrales corren independientes hasta el poro excretor, donde se fusionan. Se localizan en los cordones epidrmicos. De los cuatro cordones que quedan al final, slo el ventral presenta ganglios.

9. RGANOS DE LOS SENTIDOS Poseen anfidios y fasmidios. Ambas estructuras son pares. Los anfidios se localizan en el extremo anterior del cuerpo, y los fasmidios en el extremo posterior del cuerpo. Se abren al exterior mediante sendos orificios. Tienen la misma estructura. Estn rodeados por una glndula, que vierte su secrecin al saco. Hay clulas neurosensoriales ciliadas, que llevan la informacin al Sistema Nervioso Central. Tanto anfidios como fasmidios son quimioreceptores. Los fasmidios estn especializados en la deteccin de individuos del sexo contrario. Los rganos sensoriales son relativamente sencillos. Estn concentrados en el extremo corporal anterior. Las formas libres las poseen en mayor nmero que las parsitas. En el tipo fundamental se sitan en tres crculos y en un par de fosetas laterales. Los crculos constan de 4 o 6 rganos sensoriales. Papilas labiales y ceflicas, Son pequeas salientes de la cutcula en los labios y en la cabeza. Probables mecanorreceptores. Los deiridios o papilas cervicales se encuentran en muchas especies edficas o parsitas, pero suelen faltar en las formas acuticas. Sedas o quetas, Son cerdas alargadas, en la cabeza y cuerpo. Son mecanoreceptores que cuando se estimulan hacen que el animal se aleje del estmulo. Anfidios, Son estructuras pares que desembocan al exterior por un poro cuticular que expone los cilios al ambiente. Se consideran quimioreceptores. Los anfidios alcanzan su mximo desarrollo en los Nematodos acuticos, son invaginaciones ciegas, tubulares o sacciformes de la cutcula, que contienen un poro exterior, un conducto y una bolsa anfidial. Generalmente se ubican tras las sedas ceflicas. En algunos nemtodos, como Ancylostoma, los anfidios se conectan con grandes glndulas anfidiales (glndulas ceflicas), extendidas en la cavidad corporal.

Los receptores tctiles se presentan bajo la forma de papilas o de sedas, los quimioreceptores, como los anfidios, varan desde un simple poro hasta una compleja estructura tortuosa y espiralada. Los rganos sensoriales llevan una dendrita ciliada englobada en una parte especializada de la pared corporal. En papilas, sedas y anfidios hay una dendrita con un cilio distal. Los fasmidios o glndulas precaudales, son un par de rganos de glndula sensoriales unicelulares que desembocan separadamente a cada lado de la cola, especialmente en especies parsitas. Constan de una glndula, un poro y terminaciones nerviosas. Los fasmidios se relacionan con la reproduccin y muestran dimorfismo sexual. Ocelos u ojos (manchas oculares), poco frecuente, va uno a cada lado de la faringe en Nematodos acuticos. Son ojos compuestos por ocelos, que tienen cpula pigmentaria y cristalina. Receptores de estiramiento, o cordones epidrmicos, probablemente regulan los movimientos locomotores.

10. REPRODUCCIN DE LOS NEMTODOS La reproduccin es siempre sexual y la fecundacin interna. Casi todos los nemtodos son de sexos separados (dioicos o bisexuales), y en la mayora de los casos el macho es menor que la hembra. Los machos presentan caracteres sexuales secundarios, tales como glndulas ventrales y lbulos caudales. Existen algunos pocos nemtodos terrestres que son hermafroditas o partenogenticos. Hay casos en que se desconocen los machos. Las especies hermafroditas son proterndricas, es decir los rganos masculinos y los espermatozoides se desarrollan antes que los rganos femeninos y los vulos. En ellas existe un ovotestculo. En general se autofecundan. Los espermatozoides se desarrollan primero y son almacenados en las vesculas seminales. La autofecundacin ocurre despus de la formacin y maduracin de los vulos. Peridicamente surge un pequeo nmero de machos que fecundan cruzadamente a los hermafroditas.

El sistema reproductor es generalmente par. Las gnadas, en nmero de una o dos, se comunica con el exterior por un poro nico, la cloaca, en los machos, y un gonporo o vulva en las hembras. La posicin de la vulva vara, siendo a veces posterior y otras veces anterior. En los machos, hay un testculo tubular, con forma de un cordn macizo apelotonado sobre s mismo. En algunos nemtodos hay dos testculos, orientados generalmente en forma opuesta. El o los testculos se convierten imperceptiblemente en un largo espermiducto o conducto deferente. Cada espermiducto se ensancha en el extremo posterior formando una larga vescula seminal, donde se acumulan los espermatozoides. Un conducto eyaculador muscular, con glndulas prostticas, conecta las vesculas seminales con la cloaca. Las secreciones prostticas son adhesivas y posiblemente facilitan la cpula. La vescula seminal desemboca en el recto, modificado en una cloaca. La pared de la cloaca est evaginada formando dos sacos que se unen antes de desembocar en la cmara cloacal. La regin posterior de los machos presenta una considerable variacin. Suele estar curvada en forma de gancho o la cutcula ensanchada en expansiones alares con forma de abanico, constituyendo un accesorio copulador llamado bursa. A veces presentan papilas pedunculadas, sedas sensoriales o expansiones a modo de ventosas. El poro genital masculino est situado muy cerca del ano y tiene ganchos cuticulares (espculas copuladoras), varillas utilizadas para asir a la hembra durante la cpula y para mantener abierto el gonoporo femenino durante la transmisin de espermatozoides. Cada saco contiene una espcula, que generalmente es corta, con forma de hoja aguzada y curva. Las espculas asoman a travs de la cloaca y salen por el ano o abertura, mediante msculos especiales, pueden ser evaginadas y retradas en la bolsa cutnea. Las espculas copuladoras del macho asoman por la cloaca y el ano. Los espermatozoides, de distintas formas (redondos, cnicos, sinuosos o alargados), se pueden mover lentamente en forma ameboide y carecen de flagelo. Los espermatozoides pueden estar formados por cabeza y cola, la cola suele poseer una larga mitocondria central con microtbulos laterales. Puede haber uno o dos ovarios, tubulares, cordones apelotonados tpicamente pares. Normalmente una gnada est orientada hacia la parte anterior y la otra hacia la parte posterior, con sus extremos opuestos enfrentados.

En muchas especies cada gnada se dobla sobre si misma y en algunas especies parsitas cada gnada es larga y enrollada en espiral. La parte germinativa es terminal, en las especies mayores las clulas suelen agruparse alrededor de un cordn nutricio central (raquis). La clula ms interna de cada gnada, la clula del extremo distal, secreta una substancia promotora de la mitosis, que produce la proliferacin de ncleos de clulas germinales. Cada ovario se prolonga poco a poco convirtindose primero en oviducto tubular y luego en un tero largo y muy amplio. En algunos casos hay un ovario nico y un solo oviducto. El extremo superior del tero puede funcionar como receptculo seminal. Cada tero desemboca en un tubo muscular corto comn, denominado vagina. La vagina desemboca al exterior por el poro sexual generalmente impar (vulva), situado ventralmente, generalmente en la zona media del cuerpo. El poro sexual femenino est situado en la parte ventral del extremo anterior del cuerpo, aunque a veces se traslada hacia las proximidades del ano. Los huevos son pequeos, generalmente alargados y estn rodeados por envolturas muy duras, que les permiten esperar indefinidamente la aparicin de condiciones ambientales adecuadas. Existen tres cubiertas: una lipdica, otra cuticular y una tercera proteica, con ornamentaciones. Son numerosos en las especies parsitas. Por ejemplo, una hembra de ascride pone muchos millones de huevos.

Figura N 3. Masa de huevos de nemtodos hembras sobre races de Viola sp.

Se conocen casos de hembras que produjeron 27 millones de huevos, expulsando 200,000 diariamente. Esta elevada fertilidad puede producir deformaciones, la hembra adquiere forma redondeada, con intestino, sistema nervioso y otros rganos involucionados, a veces se evagina la vagina y crece intensamente formando una envoltura para el ovario, el tero y los embriones, quedando el cuerpo como un apndice diminuto.

Las hembras de algunas especies producen una feromona que atrae a los machos. La fecundacin es interna. Durante la cpula, las espculas cloacales del extremo posterior en forma de gancho del macho son expulsadas por la abertura cloacal, se enredan en torno a la regin de los poros genitales de la hembra y se insertan en el gonoporo femenino, mantenindolo abierto. Los espermios ameboides migran hacia la vagina y se dirigen al receptculo seminal, en el extremo superior del tero, donde ocurre la fecundacin.

El vulo fecundado secreta una gruesa membrana de fecundacin, que se endurece. A esta capa se agrega otra cubierta externa, secretada por las paredes uterinas, que a menudo presenta estructuras caractersticas. La superficie de los huevos est esculpida de diferentes formas especficas para cada especie. Los huevos son retenidos en el tero durante algn tiempo antes de ser depositados. A veces el desarrollo comienza cuando los huevos an estn dentro de la hembra.

Figura N 4. Hembra y masa de huevos de Meloidogyne sp.

11. CICLO DE VIDA DE LOS NEMTODOS Su ciclo de vida tiene una duracin de unas tres o cuatro semanas en las condiciones ambientales ms adecuadas. Las larvas de los nemtodos, morfolgicamente muy parecidas a los adultos, sufren durante su desarrollo cuatro mudas, una al final de cada etapa larvaria. La primera muda se produce cuando an se encuentran en el interior del huevo y la ltima es la que define el sexo del nematodo adulto (en estos organismos existen machos, hembras e individuos hermafroditas).

La reproduccin de estos seres es generalmente sexual, pero en casos especiales puede llevarse a cabo de forma paternogentica (la hembra genera descendencia sin la intervencin del macho) o hermafrodita (con autofecundacin).

12. SINTOMATOLOGIA DE LAS ENFERMEDADES CAUSADAS POR NEMTODOS En campo las enfermedades causadas por nemtodos se suelen manifestar como rodales irregulares de crecimiento pobre, de forma circular o elipsoidal, si los sntomas aparecen en campo distribuidos de una forma regular, claramente el problema no ser debido a nemtodos.

Figura N5. Daos producidos por Heterodera en trigo

Los nemtodos pueden producir sntomas caractersticos en el sistema radicular como agallas, lesiones necrticas en las races, proliferacin de races secundarias y pobre crecimiento radicular, lo que se traduce en clorosis y en general plantas dbiles con pobre crecimiento. En cuanto a los sntomas causados por los nemtodos que atacan partas areas, podremos observar manchas foliares, putrefacciones y distorsiones en cuello y bulbos, as como agallas en las espigas de algunos cereales. Los principales nemtodos parsitos de plantas y los sntomas que causan se muestran en la siguiente tabla. Cuadro N1. Sntomas de cultivos susceptibles a los principales nematodos fitoparsitos.

NEMATODO Meloidogyne Pratylenchus Globodera heterodera Ditylenchus Tylenchulus semipenetrans

SINTOMAS Agallas en las races Debilitamiento de la planta Lesiones y destruccin de races Debilitamiento de la planta Cuentas de collar en races Debilitamiento de la planta Distorsiones en hojas y bulbos Decoloracin de los bulbos Deterioro radicular Debilitamiento de la planta Engrosamiento y necrosis radicular.

CULTIVOS Hortcolas, Hortcolas, Tabaco, papa, cereales, cereales, remolacha,

frutales, ornamentales. frutales, ornamentales. leguminosas, cereales. Ajo, cebolla, otros bulbos, cereales. Vid y ctricos.

Xiphinema longidorus Trichodorus paratrichodorus

Debilitamiento de la planta Transmisin de virus Engrosamiento y necrosis radicular Debilitamiento de la planta Transmisin de virus

Cultivos perennes Numerosos cultivos

Aphelenchoides Anguina de los cereales

Distorsiones y necrosis en las hojas Distorsiones granos de las espigas y

Fresa, crisantemos, lirios y otras ornamentales. Cereales y pastos

AUTOEVALUACIN
1. A que profundidad se encuentran los nemtodos de vida libre, en el suelo? 2. Cul es el nivel reproductivo anual de los nemtodos? 3. Cul es la forma tpica del cuerpo de los nemtodos? 4. Cmo es la simetra realmente de los nemtodos? 5. Qu sustancias contienen la hipodermis en la cubierta corporal de los nemtodos? 6. Qu es el pseudoceloma? 7. Como es el aparato digestivo de los nemtodos? 8. A que se le denomina anfidios? 9. Explique los sntomas mas comunes de Meloidogyne sp. En el cultivo de hortalizas?

LECCIN N2. NEMTODOS DAINOS A HORTALIZAS Y FRUTALES

1. MELOIDOGYNE SPP. (NEMTODOS AGALLADORES) 1.1. CULTIVOS SUSCEPTIBLES DE DAOS Tienen un muy amplio rango de hospedadores, incluyendo casi todos los

cultivos hortcolas. 1.2. BIOLOGA Generalmente pasan el invierno en suelo en forma de huevos. En primavera conforme la temperatura del suelo se incrementa, los juveniles de segundo estado J2, eclosionan, emigran a travs del suelo y penetran en las races de las plantas hospedadoras, donde establecen sitios de alimentacin. Durante el crecimiento, los juveniles van engrosando y mudando hasta convertirse en hembras adultas o machos. Las hembras son redondeadas e inmviles, los machos filiformes y generalmente abandonan la raz pues no se alimentan. Las hembras producen de un hasta 3000 huevos de envueltos en una su masa ciclo gelatinosa. en menos Generalmente los nemtodos mes dependiendo agalladores completan

la temperatura del suelo y por tanto puede tener

varias generaciones durante un cultivo. 1.3. SNTOMAS Como otros muchos nemtodos no causan sntomas caractersticos en el follaje de la planta. Las plantas infectadas por Meloidogyne sp, muestran amarillamientos, marchitamientos y races reducciones en la produccin. La infeccin de las produce engrosamientos caractersticos o agallas que pueden ser de varios

tamaos dependiendo del nmero de hembras que alberguen.

Figura N6. Agallas en raz de Tomate (Meloidogyne sp.)

Figura

N7.

Anguilulosis

de

la

raz

(Meloidogyne sp.)

1.4. CONTROL En primer lugar es necesaria la prevencin de la entrada del nematodo, pues una vez ste se ha establecido es virtualmente imposible erradicarlo, por lo que importante el uso nemtodos. Aquellas parcelas en las que se encuentre Meloidogyne deberan mantenerse al margen de la Produccin hortcola por un periodo entre 2 y 4 aos. Cultivos no resistentes pueden cultivarse para reducir las poblaciones. Las sirvan como hospedadores los nemtodos. En general, aquellas parcelas donde se vayan hospedadores o alternativos a de semilla y plantones certificados es y material limpio

malas hierbas deben ser eliminadas para evitar que

a cultivar hortcolas susceptibles al nematodo deberan ser analizadas regularmente para la presencia de nemtodos agalladores. Si los niveles detectados estn por encima del umbral econmico de dao se recomienda el uso de un nematicida. Hoy existe un marcado inters en el control biolgico de nemtodos como por ejemplo la bacteria Pasteuria sp., parsito obligado que ha sido encontrado sobre Meloidogyne sp. A campo y en experimentos. y se fija sobre la cutcula del nemtodo. Cuando el nemtodo entra a la raz que infecta, las esporas van adheridas. La bacteria germina en el interior del nemtodo hembra, y se transforma, ms tarde, en una bolsa de esporas. En consecuencia, la hembra no puede reproducirse y muere al reventar bajo la presin de las esporas que se liberan nuevamente al suelo y se reinicia el ciclo (Figura N 8). Tiene alta especificidad el hospedante, tolerancia al calor, la desecacin y a nematicidas. Produce endospora

Cuadro N 2. Evaluacin de ndice de masas de huevos en huspedes diferenciados utilizados para la identificacin de especies y razas de Meloidogyne spp.
HUSPEDES Algodn Tabaco Pimentn Patilla Man Tomate NDICE DE MASAS DE HUEVOS 0 0 4-5 5 0 5

2. PRATYLENCHUS SPP. (NEMTODOS LESIONADORES) 2.1. CULTIVOS SUSCEPTIBLES DE DAOS Virtualmente casi todas las especies de plantas cultivadas. 2.2. BIOLOGA Generalmente sobrevive la estacin sin hospedador como juveniles dentro de las races o en suelo. Penetran en las races jvenes de las plantas hospedadoras, all migran a travs de las races, a menudo destruyendo clulas.

Las hembras depositan los huevos de uno en uno en el tejido radicular o en suelo y pueden producir hasta 100 huevos a lo largo de su vida. El ciclo de vida se completa generalmente en tres o cuatro semanas dependiendo de la temperatura del suelo, por lo que pueden producir varias generaciones por estacin.

Figura N9. Lesiones en raz (Pratylenchus sp.)

2.3. SNTOMAS Los sntomas en planta son los mismos que en el caso de los nemtodos

agalladores. En races la penetracin de los nemtodos produce pequeas lesiones necrticas que sirven de entrada a otros patgenos (Verticillium, Rhizoctonia, destruidas. 2.4. CONTROL El primer paso es usar semilla y plantones libres del nematodo. Debido a su amplsimo rango de hospedadores es difcil controlar rotacin de cultivos. sus poblaciones mediante etc.). Las plantas infectadas por nemtodos lesionadores, generalmente tienen sistemas radiculares reducidos y las races alimenticias

El esprrago se conoce como mal hospedador de casi todas las especies de Pratylenchus. Campos en los que se detecte la presencia de Pratylenchus por encima del umbral econmico de dao deberan ser mantenidos en barbecho antes de la siembra. Es muy importante mantener un barbecho limpio de malas hierbas. En algunos casos rotaciones con esprrago, sorgo o pasto del sudan pueden ayudar a reducir las poblaciones de Pratylenchus. En general, como control qumico se recomiendan nematicidas granulares no fumigantes.

3. GLOBODERA SPP. Y HETERODERA SPP. (NEMTODOS QUSTICOS) 3.1. CULTIVOS SUSCEPTIBLES DE DAOS En general, las especies de nemtodos qusticos presentan un parasitan solanceas, Heterodera avenae gramneas, rango de

hospedadores bastante estrecho, Globodera rostochiensis y Globodera pallida Heterodera glycines leguminosas, Heterodera schachtii crucferas.

Figura N10. Hembras de Globodera sp, en races

3.2. BIOLOGA Los quistes son sacos de huevos rodeados por los restos muertos de las hembras, pueden tener forma de limn Heterodera spp o redondeada Globodera spp. Los nemtodos qusticos sobreviven a la estacin sin cultivo como huevos dentro de los quistes, Los exudados radiculares estimulan hasta de sus plantas hospedadoras a engordar, la eclosin de los huevos, los juveniles migran en el suelo hasta a adultos. Las hembras alcanzan un tamao que llegan a romper expuestas al suelo. Los machos son hembras. Las hembras

las races donde generan sitios de alimentacin y comienzan llegar el tejido radicular con lo que quedan producen entre 50 y

filiformes y salen de la raz parar fecundar a las

100 huevos en una matriz fuera de sus cuerpos, pero

muchos ms huevos permanecen dentro de sus cuerpos. Los huevos producidos en la matriz generalmente eclosionan rpidamente

tras ser producidos, mientras que los que permanecen dentro del quiste, pueden tardar hasta 10 aos en eclosionar.

3.3. SNTOMAS En general producen los mismos sntomas inespecficos que nemtodos agalladores y lesionadores. Las hembras formadas pueden observarse durante el cultivo en las races del cultivo hospedador como cuentas de collar. 3.4. CONTROL Debido a que los quistes pueden contener huevos viables durante ms de 10 aos las medidas preventivas para evitar la contaminacin del suelo son de especial importancia. Si el nematodo se establece en un campo, el agricultor debe aprender a manejar sus poblaciones y nemtodos. Gracias al optimizar su produccin en presencia de los estrecho margen de hospedadores que presentan los

nematodos qusticos, la rotacin de cultivos es en la mayora de los casos una buena estrategia para controlar sus poblaciones. El uso de nematicidas no es tan efectivo como con otros nemtodos debido a la capacidad del quiste para proteger a los huevos.

4. DITYLENCHUS SPP. (NEMTODOS DE LOS TALLO Y LOS BULBOS) 4.1. CULTIVOS SUSCEPTIBLES DE DAOS Cebolla, remolacha, ajo, zanahoria, tomate, algunos cereales y bulbos.

Figura N11. Daos en cebolla causados por Ditylenchus sp

Figura N12. Daos en cebolla causados por Ditylenchus sp

4.2. BIOLOGA Ditylenchus sobrevive la estacin sin hospedador como juveniles de 4 estadios J4 y adultos en un estado criptobitico, ya sea en tejido vegetal o en suelo. Cuando la humedad es la adecuada, los nemtodos migran hacia las hojas y tallos de las plantas jvenes. Las hembras pueden producir hasta 500 huevos y sobrevivir hasta 10 semanas. En condiciones ptimas el ciclo de vida puede

durar unas tres semanas. Los nemtodos de los tallos y bulbos pueden persistir durante largo tiempo en suelo y son bastante resistentes a la sequa y a las bajas temperaturas. A menudo forman agregados de un gran nmero de individuos que se conocen como algodn de gusanos, que actan como forma de resistencia. No obstante, las poblaciones decrecen rpidamente en ausencia de hospedador. 4.3. SNTOMAS Deformaciones en hojas y bulbos son cuando el sntoma ms caracterstico de las

infecciones por Ditylenchus. A menudo, las plantas jvenes pueden morir las infecciones son altas. Los bulbos infectados presentan capas concntricas de hojas marrones y a menudo se pudren durante el almacenaje por infecciones secundarias causadas por bacterias. 4.4. CONTROL Evitar bulbos. plantar semilla o plantones infectados. El uso de rotaciones o

barbechos reduce considerablemente las poblaciones de nemtodos de los tallos y

El tratamiento con agua caliente de bulbos y semilla mata a los nemtodos, no obstante la temperatura del agua debe ser cuidadosamente mantenida entre 43-46 C durante una o dos horas. Como estos nemtodos se mueven por la superficie de las hojas con el agua, la humedad sobre las hojas tambin debe ser controlada.

AUTOEVALUACIN
1. Qu cantidad produce las hembras de Meloidogyne sp? 2. Que tipo de lesiones ocasiona Pratylenchus y que consecuencias tiene? 3. Defina Quiste y explique que genero de nematodos los produce? 4. Cul es el periodo de vida mas largo de Ditylenchus y en que condiciones se da? 5. En general, cuales son las medidas de control mas recomendadas para los nemtodos?

LECCIN N 3. PRINCIPIOS DEL CONTROL NEMATOLGICO

1. INTRODUCCIN Hasta hace poco de las opciones disponibles para el control de nemtodos

dependan con y/o

la intensidad y rentabilidad del cultivo. En cultivos hortcolas y mientras que No en de otros cultivos manejo la de menor rendimiento rotaciones

ornamentales de alta rentabilidad se usaban rutinariamente desinfestaciones del suelo nematicidas, se variedades puesto econmico usaban programas integrado, incluyendo preocupacin por

resistentes. en una

obstante,

entre consumidores europeos e

y organizaciones por los riesgos ambientales de los nematicidas, as como el nfasis agricultura sostenible organismos internacionales ha cambiado drsticamente la situacin y de una excesiva confianza en los nematicidas, se debe pasar urgentemente a otros sistemas que integren mtodos alternativos de control compatibles con el respeto al medio ambiente. Existen diversos mtodos de control nematolgico alternativos al control qumico, desde los tradicionales como el barbecho o la rotacin de cultivos, hasta los ms novedosos como resistencias Todos ellos tienen ventajas incorporadas mediante biologa molecular. e inconvenientes y ninguna estrategia por si sola,

parece ser satisfactoriamente efectiva, por lo que el acercamiento ms productivo al control nematolgico debera involucrar la integracin de varios mtodos, como prevencin, medidas culturales, resistencia y control biolgico.

2. PREVENCIN En general, control nematolgico es esencialmente prevencin, porque una vez una planta es parasitada, es imposible eliminar el nematodo sin destruir tambin el hospedador. encaminadas No a obstante, se entienden como medidas preventivas aquellas impedir la extensin de un problema nematolgico en una

determinada rea. Debido a que la mayora de los nemtodos entra o se extiende en nuevas reas por movimiento de tierras o plantas infectadas, el control fronterizo es en el pas de nuevos organismos fundamental para evitar la introduccin ser usados siempre.

patgenos procedentes de otros pases. Plantones y semillas certificadas deberan

Una vez que la plaga es detectada en el campo las medidas de cuarentena e higienizacin del material de labranza permiten controlar su expansin.

3. CONTROL QUMICO Aunque sigue o siendo no el mtodo qumicos de control utilizados y nematolgico como emulsiones) ms efectivo, ya la

mayora de los productos fumigantes

nematicidas,

sean riesgos

fumigantes (granulares

presentan

medioambientales, por lo que su uso debe ser limitado siempre que existan alternativas. Por otra parte la economa de produccin de la cosecha no permite en muchos casos un retorno suficiente de la inversin para justificar el uso de nematicidas.

4. PLANTAS Y PRODUCTOS ALELOPTICOS Existen plantas que liberan productos nematicidas al suelo, bien durante su crecimiento o bien como resultado de la descomposicin de sus residuos. Estos un productos se conocen como aleloqumicos, por ejemplo las races de sorgo ejemplo son los glucosinatos e isothiocianatos, una tremenda contienen un compuesto qumico, que se degrada en cianuro de hidrgeno que es nematicida poderoso. Otro resultado de la descomposicin de las Brasicas. No obstante, existe

variabilidad dentro las especies de plantas antagonistas respecto a la supresin a las diversas razas de nemtodos, por lo que su uso debe estar siempre supervisado por personal tcnico especializado.

5. MEDIOS CULTURALES 5.1. BARBECHO Un barbecho estricto por 1-2 aos normalmente reducir las poblaciones de nemtodos en un 80-90 por ciento. Este efecto puede lograrse en tan slo una de estacin introduciendo otras medidas culturales. Sin embargo, debido a la potencial de tiempo materia orgnica, peligro de erosin y perdida barbechar puede ser inaceptable para el agricultor perdida productivo.

Adems

si

se

permite

el

crecimiento

de

malezas

durante el

barbecho,

algunos nemtodos pueden sobrevivir y reproducirse en ellas, haciendo esta practica ineficaz. 5.2. ROTACIONES La rotacin con cultivos no hospedadores es a menudo adecuada por si misma para impedir que las poblaciones nematolgicas alcancen niveles perjudiciales econmicamente. Sin embargo es necesario disponer de una amplia base de datos incluyendo variabilidad entre cultivares y razas de nemtodos. 5.3. SOLARIZACIN La solarizacin es un mtodo de pasteurizacin del suelo que permite

suprimir la mayora de las especies de nemtodos patgenos eficazmente. Sin embargo slo es consistente en lugares con veranos clidos y calurosos. La tcnica bsica consiste en poner una o dos lminas de plstico transparente encima del suelo ligeramente humedecido durante el verano y aproximadamente de seis a ocho semanas.

Figura N13. Prueba de solarizacin en campo

5.4. VAPOR DE AGUA Vapor a 80-100 C por 30 minutos controla efectivamente algunos nemtodos patgenos. No obstante produce un impacto severo en la zona del suelo donde se desarrollan las races (rizosfera), a la que deja con un vaco biolgico fcilmente reinfectable por otros patgenos.

5.5. ENCHARCAMIENTO Donde el agua es abundante, el encharcamiento del campo se puede usar para el control de nemtodos. La inundacin del suelo durante 7-9 meses mata a los nemtodos reduciendo la cantidad de oxigeno disponible para la respiracin y aumentando la concentracin de sustancias toxicas como cidos orgnicos, metano y sulfuro de hidrogeno. Sin es utilizar embargo ciclos de puede llevar varios (mnimo aos dos destruir todas las masas de huevos de Meloidogyne. Una alternativa al encharcamiento continuo inundacin, semanas) alternando secado y pases de disco. No obstante un insuficiente o pobre manejo puede empeorar la situacin, ya que algunas plagas y enfermedades se pueden extender fcilmente cuando el suelo est encharcado. 5.6. ADICIN DE MATERIA ORGNICA Y BIOFUMIGACIN Hay evidencias sustanciales de que la adicin de materia orgnica o materiales quitinosos en forma de abono o estircol disminuyen las poblaciones de nemtodos y el dao asociado a ellas, lo que parece ser debido a un incremento nemtodos. en las poblaciones de microorganismos antagonistas de los

6. RESISTENCIA Las variedades resistentes son un mtodo de control ms eficaz contra las especies de endoparsitos qusticos dentro de las races. sedentarias Tomates como Meloidogyne o los nemtodos (Globodera, Heterodera) que pasan la mayor parte de su ciclo de vida y sojas, en particular, han sido intensivamente

seleccionados para resistencia a los nemtodos. No obstante, la obtencin de nuevas variedades resistentes es complicada por la habilidad de las especies de nemtodos de desarrollar razas o biotipos que superen la resistencia. Cuando una nemtodos generalmente variedad resistente se planta, las poblaciones de disminuyen, pero en la estacin siguiente, los pocos

nemtodos en una poblacin capaces de superar la resistencia empiezan a aumentar, con lo que al cabo de unas generaciones la resistencia ha sido rota, ms del 80% de las poblaciones de Meloidogyne incognita muestreadas en invernaderos japoneses rompe la resistencia proporcionada por el gen Mi.

Por otra parte las fuentes de resistencia natural estn limitadas a unas pocas especies patgeno. de nemtodos y en ocasiones slo son eficaces frente a una raza de ese

7. CONTROL BIOLGICO Microorganismos antagonistas establecidos en el lugar de siembra antes o a la vez que el patgeno pueden ser usados para prevenir la infestacin. Varios microorganismos nemtodos. han sido identificados incluyen las como enemigos naturales penetrans y de los stos bacterias Pasteuria Bacillus

thuringiensis y los hongos Paecilomyces lilacinus, Verticillium chlamydosporium, Hirsutella rhossiliensis, Catenaria spp. Sin embargo, para la mayora de ellos las formulaciones comerciales no estn todava disponibles.

AUTOEVALUACIN
1. Cul es la principal medida que permite controlar realmente la expansin de los nemtodos? 2. Que son los aleloquimicos? 3. Describa el proceso de la solarizacin 4. Es conveniente emplear los mtodos de control de encharcamiento, hasta que punto? 5. Es efectiva la utilizacin de variedades resistentes al ataque de nemtodos?

LECCIN N 4. MANEJO INTEGRADO DE ENFERMEDADES NEMATOLGICAS

1. INTRODUCCIN Con el desarrollo del concepto de manejo integrado de plagas, el seguimiento de las plagas y enfermedades en campo se ha convertido en un componente importante de la agricultura moderna. Mediante la toma de muestras peridica se determinan los niveles de infestacin en suelo, infeccin en planta y los modelos de distribucin en campo. Esta informacin se usa para determinar la estrategia de proteccin

del cultivo de forma que las poblaciones se mantengan a niveles que no causen perdidas o bien que stas sean tolerables. Cuadro N3. Esquema de un programa de control integrado de nematodos.
ESQUEMA DE UN PROGRAMA DE CONTROL INTEGRADO DE NEMATODOS

IDENTIFICACIN DE NEMETODOS Los Nematodos son identificados, al menos hasta el nivel de genero, utilizando microscopio en laboratorio y tcnicas moleculares

CUANTIFICACIN DE LOS NIVELES DE POBLACIN Las densidades reales en suelo o races se estiman corrigiendo los valores obtenidos en los recuentos, con la eficacia del mtodo usado para la extraccin

RELACIN ENTRE DENSIDADES DE NEMATODOS Y EL DAO EN EL CULTIVO Las estimaciones de la densidad de poblacin de nematodos se comparan con los umbrales de dao establecidos para un nematodo y cultivo particular

No obstante, las dificultades del proceso de diagnosis nematolgica y la creciente complejidad de los programas de manejo integrado, implican que haya una creciente demanda por parte del agricultor decisiones sobre control de ayuda profesional en la toma de nematolgico.

Generalmente, esta ayuda es proporcionada en un primer nivel por tcnicos agrcolas que trabajan en campo y poseen un conocimiento profundo del sistema de cultivo empleado, los cuales, diagnostico y en colaboracin medidas de control apropiadas. enviando con muestras a un laboratorio de un nematlogo recomendarn al agricultor las

2. TOMA DE MUESTRAS PARA DIAGNSTICO NEMATOLGICO Para la confirmacin de un diagnstico en campo, siempre ser necesario el anlisis de muestras de suelo y races en el laboratorio que nos permitan confirmar la presencia de los nemtodos sospechados. Debido a que los nemtodos

no

pueden o

ser

observados directamente vegetales

en

campo,

deben

ser

extrados

del

suelo

muestras

y luego identificados y contados al microscopio.

Si el cultivo est en pie, debern tomarse muestras de races y suelo, para confirmar que los nemtodos son la causa del problema. En tal caso, el mejor momento para hacer un muestreo de las poblaciones de nemtodos en campo es desde la mitad hasta el final de la estacin de crecimiento del cultivo hospedador, cuando los nemtodos estn ms activos y las densidades son ms elevadas. Cuando el muestreo se realiza previo al cultivo, las muestras deben ser tomadas antes de la siembra y siempre antes de cualquier tratamiento con `plaguicidas o fertilizantes. Las densidades en suelo de nemtodos obtenidas permitirn predecir si los niveles son suficientemente altos como para causar daos a los cultivos y si

algunas medias de control son necesarias. Del mismo modo, estos muestreos predictivos son tiles en cultivos perennes en los que se efecta un seguimiento regular de las densidades nematolgicas y segn los datos decidir en que momento aplicar los nematicidas. Para la toma de muestras de suelo se pueden utilizar tanto una palita de jardinero como diversos tomadores especialmente diseados. El tomador de tipo Auger, es de los mas utilizados y consiste en un cilindro de unos 2-3 cm de dimetro y entre 20 y 40 cm de longitud, abierto por un lado lo que permite obtener catas de estas profundidades. El auger se introduce en el suelo hasta la profundidad deseada se gira varias vueltas para cortar un cilindro de suelo y se saca. La columna de suelo se deposita en una bolsa de plstico con la ayuda de una ua metlica o de madera. En general una muestra se compone de varias catas.

Figura N14. Tomador de suelo o auger

3. PRECAUCIONES PARA OBTENER RESULTADOS PRECISOS 1 En caso de cultivos establecidos, tomar las muestras de suelo en las reas perifricas a las zonas daadas. No tomar nunca muestras en zonas donde las plantas estn muertas. En caso de muestreos previos a un cultivo, tomar las muestra con distintas catas distribuidas regularmente por la superficie de la parcela. 2 La precisin el nmero de de catas. nuestra Sin embargo estimacin mejorar con el incremento en

para minimizar costes y tiempo es importante

tambin reducir el nmero de catas tomadas. El mtodo seguido para disminuir errores en la estimacin, es el de tomar un nmero elevado de catas en diferentes puntos del campo a muestrear y agruparlas en una muestra sencilla, en la que se estimar el nmero medio de nemtodos. La superficie a incluir en una muestra no debe sobrepasar 2 Hay debe representar un rea homognea dentro de un campo segn historial de cultivo, tipo de suelo u otras variables. Campos ms grandes deben ser divididos en subparcelas y muestreados separadamente. En general se recomiendan densidades de toma alrededor de 60 catas por Ha. Combinar todas las catas en una bolsa o cubo de plstico, mezclar bien y traspasar aproximadamente 500 cm3 laboratorio. 3 Las muestras deben ser tomadas preferentemente alrededor de las zonas de crecimiento radicular, en general entre 5 y 30 cm. de profundidad, y deben incluir suelo y races. El suelo no debe estar muy hmedo ni muy seco. En el caso de cultivos arbreos se muestrear la llamada zona de goteo del rbol, en la vertical del borde la presencia de procurando nemtodos en material vegetal, que pertenezcan a las partes marcado por la copa de este. 4 Cuando tratemos de investigar se seleccionarn trozos del mismo, de suelo a una bolsa de plstico para enviar al

afectadas, preferentemente en sus lmites con zonas sanas. 5 Las muestras deben colocarse en bolsas de plstico cerradas para prevenir su secado, mantenerse a temperatura fresca durante el transporte y evitar el contacto directo con la luz solar. 6 Cerrar la bolsa e incluir nombre y nmero de muestra en una etiqueta dentro de la bolsa y con un rotulador fuera de la bolsa, colocar la bolsa en un contenedor fuerte para prevenir roturas y enviarlo al laboratorio de anlisis, junto a un formulario semejante al siguiente,

en el que se debe incluir la mayor cantidad de informacin disponible, respecto al cultivo, parcela, sntomas, etc.

4. HONGOS CAPTURADORES DE NEMTODOS Para comprobar que existe algo parecido a la justicia en el mundo microbiano, basta observar a ciertos hongos, que atrapan nemtodos para alimentase. Los hongos realizan este trabajo de diversas maneras. Los Arthrobotrys forman anillos contrctiles inductibles, los cuales se engendran

cuando los nemtodos estn en presencia de estos hongos. As, los hongos pueden reconocer su presencia, puesto que disponen de unos

receptores que detectan protenas especiales, llamadas lectinas, en los nemtodos. Estos anillos son sensibles a la presin. Cuando los nemtodos pasan a travs de los anillos, estos se contraen e inmovilizan a su presa. Unas estructuras especializadas de los hongos llamadas haustorios penetran en los

nemtodos. Asimismo, se forman anillos no contrctiles que actan como laberinto por el cual circulan los nemtodos, sin posibilidad de escapar. A continuacin, se forman unos botones adhesivos en los nemtodos, en los cuales se instalan los haustorios. Los hongos tambin producen conidios que germinan en el interior de los nemtodos una vez que se han consumido.

AUTOEVALUACIN
1. En que circunstancias se deben de tomar muestras en el suelo, cunado an no existe el cultivo? 2. Explique dos precauciones que tomara en cuenta para poder obtener buenos resultados en el manejo integrado de enfermedades. 3. En que consiste el auger? Descrbalo. 4. Cules son los hongos mas comunes que capturan a los nemtodos?

LECCIN N 5. MTODOS PARA EXTRACCIN DE NEMTODOS DEL SUELO

1. MTODO DE LA BANDEJITA Materiales: Tubos de PVC de 10 cm de dimetro Bandejitas de plstico con un dimetro superior de 11 cm y uno inferior de 9. Mallas de tela o plstico Papel higinico

Procedimiento: 1 Cortar los tubos de PVC en anillos de un ancho de 5 cm. y adaptarlos a las bandejitas de tal modo que no choque con la base de la bandejita, pegar la malla en uno de los extremos del tubo. 2 Luego colocar un pedazo doblado de papel higinico o papel facial por el interior del colador de tubo de PVC de modo que lo cubra por completo. 3 Colocar 50 cc de suelo homogenizado dentro del tubo de PVC. 4 Colocar el tubo de PVC con el suelo dentro de la bandejita. 5 Llenar con una pizeta la bandejita de modo que el agua cubra el suelo. 6 Luego de 48 horas retirar el suelo y el agua de la bandejita con los nematodos, pasarla por un tamiz de 38 micras. 7 Colectar en una placa petri, pequea, rayada, que facilita el conteo de nematodos del tamiz. 8 Ver al microscopio. los

2. MTODO DE TAMIZADO Y DECANTACIN DE COBB (1918) MODIFICADO Materiales: 100 ml de suelo 2 recipientes (baldes 1 y 2) de aproximadamente 4 litros de capacidad. 1 esptula Tamices de: 500 m o 34 mesh 350 m o 45 mesh 175 m o 80 mesh 100 m o 150 mesh 50 m o 280 mesh 4 beakers (vasos) de 500 o 250 ml 1 pizeta Procedimiento: 1 Coloque 100 ml de suelo en un recipiente o balde (1) con agua, ms o menos 2 litros, agite bien con una esptula para separar los nematodos de las partculas de suelo, deje reposar la suspensin por 5 segundos para permitir que las partculas ms grandes de suelo sedimenten. 2 Pase ntegramente toda la suspensin a travs de un tamiz de 500 m sobre el otro recipiente o balde (2). Descarte el suelo que qued en el balde (1) y el material grueso que ha quedado en el tamiz de 500 m, porque todos los nematodos activos han pasado a travs del tamiz y se encuentran en el recipiente (2). Algunos nematodos muy largos como algunos Longidoridae no pasan rpidamente y es conveniente agitar suavemente dentro del agua los restos que quedaron en el tamiz. Lave el tamiz. 3 Agite la suspensin que contiene el recipiente (2) y psela lentamente por el tamiz de 350 m sobre el recipiente (1). Al suelo que ha quedado en el recipiente (2) agregue un poco ms de agua, agite y pase esta suspensin lentamente por el tamiz de 350 m sobre el mismo recipiente (2), repita esta operacin una tercera vez. Descarte el suelo que qued en el recipiente o balde (2) y deje limpio el recipiente.

4 Lo que queda en el tamiz de 350 m son los nematodos activos muy grandes como Xiphinema. Para extraerlos enjuague el tamiz con una pizeta y recoja la suspensin en un beaker que le llamaremos 1. Esta operacin se realiza cada vez que se pasa la suspensin del recipiente 2 a travs del tamiz de 350 m. Deje limpio el tamiz de 350 m. 5 Agite la suspensin que se colect en el recipiente 1 del paso 3 y psela lentamente a travs de un tamiz de 175 m sobre el recipiente 2 el mismo nmero de veces y de la misma manera como en el paso 3. Descarte el suelo que qued en el recipiente 1 y deje limpio el recipiente. 6 Lo que queda en el tamiz de 175 m son nematodos medianos como por ejemplo Helicotylenchus. Para extraerlos, enjuague el tamiz con una pizeta y reciba la suspensin en un beaker que le llamaremos 2. Esta operacin se realiza despus de cada vez que se pasa la suspensin del recipiente 1 sobre el tamiz de 175 m. Deje limpio el tamiz de 175 m. 7 Agite la suspensin que se colect en el recipiente 2 del paso 5 y psela lentamente a travs de un tamiz de 100 m, sobre el recipiente 1 de la misma manera y el mismo nmero de veces como en el paso 3 descarte el suelo que qued en el recipiente 2 y deje limpio el recipiente. 8 Lo que queda en el tamiz de 100 m son nematodos pequeos como por ejemplo Pratylenchus. Para extraerlos, enjuague el tamiz con la pizeta y reciba la suspensin en un beaker al que llamaremos 3. Esta operacin se realiza despus de cada vez que se pasa la suspensin del recipiente 2 sobre el tamiz de 100 m. Deje limpio el tamiz de 100 m. 9 La suspensin que se recibi en el recipiente 1 del paso 7 se agita y pasa lentamente a travs de un tamiz de 50 m, el mismo nmero de veces y de la misma manera como en el paso 3. La suspensin que pasa el tamiz y el suelo que qued en el recipiente 1 se descarta. Deje limpio el recipiente. 10 Lo que queda en el tamiz de 50 m son los nematodos ms pequeos y larvas, para extraerlos enjuague el tamiz con una pizeta y reciba la suspensin en un beaker que llamaremos 4. Deje limpio el tamiz de 50 m.

11 Los nematodos que se encuentran en los beakers 1, 2, 3 y 4 se observan directamente o si las suspensiones turbias, se pueden utilizar el suspensiones. tienen muchas partculas de suelo y estn la bandejita para clarificar las mtodo de

3. MTODO DE CHRISTIE Y PERRY (1951) (Modificaciones del mtodo de Baerman, 1917) Materiales: 100 cc de suelo seco. Embudos de vidrio de 100 mm de dimetro. Mangueritas de jebe de 8 15 cm de largo. Clips Tamiz de 500 m (34 mesh). Tamiz de 50 m (325 mesh). Recipiente o balde de aproximadamente 4 litros de capacidad. Pizeta. Solucin de metileno (4 ppm) para preservar los nematodos del ataque de hongos y bacterias. Papel filtro tipo muselina o papel facial. Mallas de metal de 90 mm de dimetro. Soporte de madera o metal para embudos. Procedimiento: 1 Coloque los 100 cc de suelo en balde y agregue aproximadamente 2 litros de

agua. Agite con una esptula para separar y suspender los nematodos y partculas de suelo, deje reposar la suspensin por 5 segundos. Esto permite que las partculas ms grandes de suelo sedimenten. 2 Coloque el tamiz de 500 m sobre el tamiz de 50 m y a travs de ellos, haga pasar lentamente la suspensin del recipiente o balde, haciendo rotar el balde para que las partculas de tierra se vayan depositando en las paredes del balde. Agregue nuevamente 2 litros de agua al suelo que qued en el balde, deje reposar 5 segundos y pase esta suspensin por los tamices. Agregue por tercera vez 2 litros de agua al suelo que qued en el balde, deje reposar 5 segundos y pase esta suspensin por los tamices.

3 Descarte el material grueso que qued en el tamiz de 500 m. Los nematodos y las partculas de suelo ms pequeas quedan en el tamiz de 50 m. Concentre los nematodos en un solo lado del tamiz para facilitar su traslado al embudo. 4 Prepare el embudo conectando a su cuello, la manguerita de jebe y colquelo en el soporte de madera o metal. Cierre la manguerita con un clip y llene el embudo con la solucin de azul de metileno, hasta un poco ms de la mitad del embudo. Coloque la malla de metal y papel filtro o facial en la parte superior del embudo. 5 Con una pizeta conteniendo la solucin de azul de metileno (0.01%), enjuague el tamiz de 50 m sobre el embudo trasladando los nematodos y las partculas de suelo, que quedarn sobre el papel filtro y la malla de metal. Agregue suficiente solucin de azul de metileno hasta que cubra con una ligera capa, la suspensin que contiene los nematodos. Los nematodos por movimiento propio atravesarn sedimentarn en la parte inferior del embudo. el Las papel partculas filtro de y suelo

quedarn retenidas en el papel filtro. Debe evitarse que los bordes del papel sobrepasen el dimetro del embudo. 6 Al cabo de 48 horas, abra el clip y colecte 50 ml de la suspensin con los nematodos. En una placa de Siracusa observe bajo el microscopio estereoscpico los nematodos colectados.

4. MTODO DE CENTRIFUGACIN EN AZCAR Materiales: 300 cc de suelo Recipiente graduado de 2 litros Esptula Tamiz de 500 m Recipiente de 2 a 5 litros Tamiz de 44 m Vaso de 200 ml Pizeta Centrifugadora con tubos de 100 a 200 ml

Procedimiento: 1 Colocar 200 cc de suelo en el envase graduado de 2 litros y completar con agua hasta 800 ml. Agite bien con una esptula, para desmenuzar el suelo y ste se suspenda. Agregue agua hasta completar dos litros y agite para facilitar la separacin de los nematodos de las partculas de suelo. 2 Deje reposar 10 minutos para que las partculas ms grandes de suelo, sedimenten y pase la suspensin a travs del tamiz de 500 m, sobre el recipiente de 2 a 5 litros. Elimine los restos que han quedado sobre el tamiz de 500 m (piedras pequeas y restos orgnicos). Deje limpio el tamiz . 3 Agite bien con una esptula, l suspensin que recibi en el recipiente de 2 a 5 litros, deje reposar 10 minutos y pase la suspensin a travs del tamiz de 44 m, mediante una corriente suave de agua, concentre el suelo con los nematodos en un solo lado del tamiz de 44 m y con una pizeta recjalos en el vaso de 200 ml. 4 Pase la suspensin a un tubo de centrfuga de 100 a 200 cc. Si es necesario complete con agua hasta llenar el tubo. Agite la suspensin y centrifugue a 1250 rpm durante 3.5 minutos. Los nematodos con el suelo quedan en le fondo del tubo, en el tubo queda el agua sin nematodos y en la superficie del agua algunos restos orgnicos. Elimine el agua y los residuos orgnicos. 5 Al mismo tubo que contiene el suelo, agregue la solucin de azcar al 50%, hasta la mitad del tubo. Agite para suspender el suelo y los nematodos. Llene el tubo con la solucin de azcar y centrifugue durante 2.5 minutos. Los nematodos flotan en la solucin azucarada, las partculas de suelo quedan en el fondo de tubo. 6 Pase la solucin de azcar con los nematodos, del tubo del tubo de centrfuga, a un tamiz de 35 m e inmediatamente enjuguelos con agua corriente, los nematodos en una placa petri o para eliminar el azcar y evitar que los nematodos se plasmolicen. Concentrar, de Siracusa y observarlos bajo el microscopio de diseccin. El mtodo tiene la ventaja de ser rpido, pero el azcar siempre afecta a los nematodos, por lo cual los nematodos obtenidos por este mtodo no son tiles para montajes al microscopio o para inoculaciones.

5. MTODO MODIFICADO DE FENWICK (Para extraccin de quistes) En este mtodo, es necesario hacer secar la tierra con quistes para que los quistes secos, floten en el agua, de varias maneras, pero mientras que las partculas de suelo sedimenten. La a continuacin se indican algunos materiales y separacin de los quistes del suelo, usando el principio de flotacin se puede lograr procedimientos que pueden ser usados. El equipo Fenwick modificado, consiste en un embudo colocado sobre una especie de jarra. El embudo tiene en la base de su parte ensanchada un tamiz de 1 mm de tamao de poro. La jarra tiene forma trapezoidal, en su parte superior presenta los soportes del embudo y una aleta inclinada que bordea la jarra como collar, pero que termina en un solo conducto. La jarra en su parte inferior tiene un tapn que se retira para enjuagarla y limpiarla.

Figura N 15. Equipo de Fenwick

El equipo de Fenwick esta compuesto por: - Tamiz de 175 m de tamao de poro - Embudo de ms o menos 10 cm de dimetro - Embudo de 15 cm de dimetro - Papel filtro o papel facial - Erlenmeyers de 500 ml de capacidad - Fiolas de 250 ml de capacidad - Placas petri Materiales: 100 cc de suelo Equipo de Fenwick modificado Procedimiento: 1 Colocar 100 cc de suelo sobre el tamiz del embudo de equipo de Fenwick y coloque el tamiz de 175 m para recibir lo que rebalsa de la jarra. 2 Lave el suelo colocado en el tamiz del embudo, hasta que solo queden retenidas piedras, restos de races y material orgnico. Las partculas pesadas del suelo se van depositando en la base inclinada y la parte inferior de la jarra. Algunas partculas pequeas de suelo, quistes y restos orgnicos flotan, rebalsan, salen a travs de la aleta de la jarra y se depositan en el tamiz de 175 m (si espera encontrar especies de quistes ms pequeos puede usar un tamiz de menor tamao de poro). Las partculas menores de 175 m y agua pasan a travs del tamiz. Los quistes y restos orgnicos quedan retenidos en el tamiz. Retire el tapn de la parte inferior de la jarra para desaguarla y deje limpio el equipo. 3 Coloque un pedazo de 10 x 10 cm de tela (tul fino) sobre un crculo de metal y malla metlica, soldados a la parte superior de un soporte de metal. 4 Los quistes y material orgnico que quedaron en el tamiz de 175 m concntrelos en un solo lado del tamiz y con una pizeta y un embudo transfiralos a un Erlenmeyer de 500 ml. Los quistes y restos orgnicos flotan, orgnicos y partculas de suelo sedimentan. Decante la Erlenmeyer sobre la tela del soporte de metal. algunos restos del suspensin

5 Los quistes y restos orgnicos quedan retenidos en la tela, el agua pasa a travs de la tela. Doble los bordes de la tela, asegrelos con un clip y puede hacerlos secar a temperatura ambiente o con un desecador. 6 Luego de secado la tela calada o el papel filtro, se puede observar al

estereoscopio, pero esta muestra an tendr gran cantidad de estos orgnicos que dificultaran el conteo. Por ello se utiliza un mtodo complementario que es el de la acetona.

6. MTODO DE LA ACETONA Materiales: Fiola de 250 ml. Acetona Embudo Beakers Papel filtro Procedimiento: 1 Cuando los quistes y restos orgnicos estn secos, se puede usar el mismo principio del mtodo de Fenwick para separarlos, es decir hacer flotar los quistes y sedimentar los restos orgnicos. Para esto se transfieren los quistes con la ayuda de un embudo a una fiola de 250 ml (puede utilizarse un embudo para que esta operacin sea ms fcil). Llene hasta la mitad de la fiola con acetona; para que los quistes floten con facilidad, agite la fiola para que los quistes se separen de los restos orgnicos, llene con acetona, hasta 1 2 cm del borde superior de la fiola. La mayora de restos orgnicos se depositan en la parte inferior de la fiola, los quistes y algunos restos orgnicos afloran y se sitan en la superficie de lquido. 2 Si usa acetona en la separacin de quistes, puede realizar los siguientes operaciones para recuperar la acetona. Coloque un embudo sobre el beaker de 500 ml y un papel filtro puede estar rayado en forma de cono dentro del embudo, (el papel filtro puede estar rayado en cuadros). Decante los quistes y restos orgnicos que estn en la superficie de la acetona, haciendo rotar la fiola para que no retenga quistes.

Los quistes quedan retenidos en el papel de filtro y la acetona pasara al frasco. Cuando no queden quistes en la fiola, agite, haga rotar la fiola y decante los restos orgnicos sobre un embudo de mayor dimetro, que contenga papel facial y que este colocado sobre un frasco 2 a 5 litros. Los restos orgnicos quedan retenidos en el filtro y la acetona se recupera en el frasco. 3 Cuando la acetona del papel filtro del embudo se haya evaporado, retire el papel filtro y colquelo en una placa petri. Observe bajo el microscopio de diseccin. Si el papel filtro est rayado en cuadros, le facilitar el contaje de nmero de quistes (use iluminacin de arriba hacia abajo). Cuando el nmero y restos orgnicos es demasiado se puede contar por partes. 4 Para separar los restos orgnicos y an quedan los quistes, puede

hacerlos rodar a travs de una hoja orgnicos quedan en el papel.

de papel. Los quistes ruedan y los restos

7. MTODO DE BAUNACKE (Para extraer quistes) El principio de usado en este mtodo, es hacer secar los quistes para que la masa de huevos del suelo interior de cada quiste se contraiga y deje el mayor espacio en aire. Esto permite que los quistes floten en la superficie del agua, mientras que las partculas de suelo sedimentan. Materiales: 50 ml de suelo seco Tamiz de 175 m Recipiente blanco de ms o menos 10 cm de profundidad y 20 cm de dimetro, con los bordes inclinados (lavatorio, lavador o ponchera) Pincel fino (N 061) Papel filtro Placa petri Contmetro

Procedimiento: 1 Coloque 50 ml de suelo seco, en el tamiz de 175 m y lvelos el

cuidadosamente con agua. Lo que ha quedado en el tamiz, depostelo en ms o menos 3 cm del borde superior.

recipiente blanco de bordes inclinados y llene con agua el recipiente hasta

2 Los quistes flotan en la superficie del agua y se dirigen a los bordes del recipiente blanco. Por su color marrn contrastan con el recipiente y pueden ser extrados con el pincel. 3 En la placa petri coloque un disco de papel filtro rayado en lneas o en cuadrculas, humedecer y depositar sobre este papel, los quistes colectar 4 Observar bajo el microscopio de diseccin, la placa de petri con los quistes. Use iluminacin directa (de arriba hacia abajo) y cuente los quistes. 8. MTODO DE LA COCA COLA Materiales: 50 ml de suelo Botella transparente de pico angosto Papel filtro Placa petri

Procedimiento: 1 Coloque 50 ml de suelo seco en la botella. 2 Agregue agua hasta la mitad de la botella y agite bien. 3 Llene con agua hasta 1 cm del pico. 4 Transfiera los quistes y la materia orgnica que han flotado en el pico al papel filtro rayado en lneas o en cuadritos. 5 Cuente los quistes bajo el microscopio de diseccin

9. CONTAJE DE QUISTES Y DE HUEVOS DE GLOBODERA SP Materiales: Quistes Homogenizador de Huijsman Plaquita de contaje Estereoscopio

Procedimiento: Para el contaje de quistes deben eliminarse los quistes formados de hembras que no han completado su desarrollo y pequeos. Contaje de quistes: Una vez obtenidos los quistes por cualquiera de los mtodos anteriormente sealados se colocarn stos en una placa de conteo, se llevarn al estereoscopio y se proceder a su contaje con la ayuda del contmetro. Contaje de huevos: Para realizar el contaje de los huevos. Se dispondr de quistes y se proceder de la siguiente manera: 1 Coger 20 quistes, colocarlos en el homogenizador de Huijsman y proceder a triturarlos. 2 Llevar la muestra triturada a una solucin de 100 ml agregndole agua. 3 Homogenizar la solucin con una bomba de pecera y extraer una alcuota de 10 ml colocarla en una plaquita petri rayada para contaje y llevarla al microscopio. 4 Realizar el conteo con la ayuda del estereoscopio. 5 Sacar el promedio del nmero por quiste, restarle de 10 a 20% del nmero de huevos que representa el contenido residual en cada quiste. que generalmente son ms claros y muy

AUTOEVALUACIN
1. Cules son los mtodos de extraccin de nemtodos mas eficientes, econmicos y fcil de emplear, indistintamente? Explique por que. 2. Que indica la medida mesh y a cuanto equivale? 3. Describa los componentes del equipo de Fenwick.

LECCIN N 6. MTODOS PARA EXTRACCIN DE NEMTODOS DE TEJIDO VEGETAL

1. MTODO DEL LICUADO Materiales: 5 g de tejido vegetal Licuadora Pizeta Tamices de 500 y 38 m Balanza Fuente o bandeja plstica Tijeras Placa petri pequea rayada en el fondo.

Procedimiento: 1 Se toma la muestra de tejido vegetal (races, bulbos, hojas) y con la ayuda de la tijera se pican en trozos de 1 cm aproximadamente. 2 En la bandeja se homogeniza la muestra picada y al azar se cogen y pesan 5 g de tejido vegetal. 3 La muestra de 5 g se introduce a una licuadora con aproximadamente 100 ml de agua y se agita a velocidad moderada por 10 segundos. 4 La muestra licuada se echa sobre la batera de tamices de 500 y 38 m puestos el primero sobre el segundo y se enjuaga con abundante agua corriente. 5 Con ayuda de la pizeta se colecta lo que queda en el tamiz de 38 m en la placa petri para el contaje.

2. MTODO DEL LICUADO, TINCIN Y MICROONDAS Este mtodo se emplea principalmente para extraer hembras adultas

ensanchadas de races.

Materiales: Hipoclorito de sodio al 10% Fucsina cida Races frescas Licuadora 2 Tamices de 100 y 400 mesh Vaso de vidrio Horno microondas

Procedimiento: 1 Colocar 5 g de races frescas en una licuadora. Agregar 20 ml de

hipoclorito de sodio al 10% e incrementar el volumen a 200 ml agregando agua de cao. Licuar por 30 segundos lavar las paredes de la licuadora y licuar por 30 segundos ms. 2 Verter la suspensin sobre 2 tamices, en la parte de arriba 1 tamiz de 100 mesh y en la parte de abajo en un tamiz de 400 mesh. Enjuagar los 2 tamices, descartar lo que qued en el tamiz de 100 mesh y colectar el material que qued en el tamiz de 400 mesh en un vaso de vidrio. 3 Teir la muestra con fucsina cida (agregar 1 gota de fucsina cida por cada 10 ml de la suspensin). 4 Colocar la muestra en un horno microondas y calentar por 5 minutos. 5 Contar el nmero de hembras y otros estados en el estereoscopio.

3. MTODO DE EXTRACCIN DE HUEVOS DE MELOIDOGYNE Este nemtodo no forma quistes sino ndulos y deposita sus huevos en una masa gelatinosa ubicada en la parte posterior de su cuerpo.

Materiales: Hipoclorito de sodio al 0.5% y 1% Beaker con tapa de sellado hermtico 5 g de races Tamices de 180 y 38 m Pizeta Bomba de pecera Contmetro

Cuando se quiera obtener nematodos vivos para inoculacin se debe emplear hipoclorito de sodio al 0.5%. En caso solamente, se emplea la solucin al 1%. Procedimiento: 1 Colocar en un beaker con tapa de sellado hermtico 5 g de races mas la solucin de hipoclorito de sodio al 0.5% en cantidades suficiente que cubra a todo el tejido vegetal luego proceder a taparlo y agitarlo por tres minutos. 2 Luego se disponen dos tamices de abundante agua. 3 Seguidamente los huevos retenidos en el tamiz de 38 m se juntan a un lado con el agua de la pizeta y se vacea a un tres alcuotas de 10 ml cada una. 4 Finalmente se procede al conteo con la ayuda del contmetro, y se determina el nmero de huevos por planta y el nmero de huevos por gramos de raz. Se ha determinado que el hipoclorito de sodio diluye la masa que cubre a los huevos, por lo cual se debe tener cuidado con el tiempo de exposicin que no debe mayor de 4 minutos para evitar su desintegracin completa. beaker; se completa a 100 ml y se homogeniza la solucin con la bomba de pecera. Por ltimo, se saca a placas petri 180 y 38 m de arriba hacia abajo contrario, para propsitos de contaje

respectivamente. Se vierte las races tratadas con leja y se procede a lavarlas con

4. MTODO DE FUCSINA CIDA - LACTOFENOL Materiales: Races infectadas libres de suelo Lactofenol puro Fenol lquido 94 ml Acido lctico 63 ml Glicerina 160 ml Agua destilada 100 ml Fucsina cida al 0.1% del lactofenol

Procedimiento: 1 Lave cuidadosamente las races sumergidas en agua para quitar el suelo. 2 La tincin se puede hacer caliente o fra. Primero podra tratarse la tincin fra para lo cual el material vegetal se transfiere a fucsina cida lactofenol al 0.1 %. Se deja all 12 24 horas dependiendo del grosor del material vegetal. Si no se obtienen buenos resultados con la tincin fra se puede tratar con la tincin caliente, para lo cual se sumerge el material vegetal en fucsina cida lactofenol 0.1% caliente (80C o ms dependiendo del grosor del material vegetal). 3 Despus de la tincin fra transfiera el material teido directamente a lactofenol puro para clarificar el tejido vegetal. Despus de la tincin fra caliente el material vegetal teido a un recipiente conteniendo agua y lvelo con agua en circulacin para eliminar el exceso de tinte. Transfiera el material vegetal teido a lactofenol puro para clarificar el tejido vegetal. 4 Despus de algn tiempo que puede ser 3 das o un mes, el material estar listo para su observacin. Los nematodos que estarn teidos pueden ser vistos dentro del tejido vegetal. 5 Los nematodos teidos pueden ser montados en porciones de tejido vegetal en lactofenol puro o pueden ser disecados del material vegetal y montados en lactofenol puro, pero los porta objetos deben llevar un anillo de parafina, glicel o esmalte de uas para sostener el cubre- objeto. El cubre-objeto se coloca sobre este anillo y as no se aplasta los nematodos.

6 Las partes del cubre - objeto que van a ser sellados lmpielas con un hisopo pequeo de algodn humedecido en etanol de 100 %. Fije el cubre -objeto con tres gotas pequeas de glicel o esmalte de uas, mediante un pincel de pintar. Despus de 24 horas vuelva a aplicar glicel a todo el contorno del cubre-objeto. 7 Anotar en el montaje permanente: El nombre especifico del nematodo. El nmero, sexo o estado del nematodo. El mtodo de montaje. Lugar del que se extrajeron los nematodos (suelo y el cultivo). Nmero de slides en su coleccin. Iniciales del nombre de la persona que realiza el montaje. La fecha del montaje.

AUTOEVALUACIN
1. Se puede sustituir algn material utilizado en el mtodo del licuado con algn otro mas domestico, diga cual? 2. Especialmente, para que se emplea el mtodo del licuado, tincin y microondas? 3. Qu sustancia se debe usar en el mtodo de extraccin de huevos de Meloidogyne sp para obtener nemtodos vivos para inocular? 4. Describa brevemente el proceso del mtodo de fucsina.

LECCIN N 7. PROCESO DE MUERTE, FIJACIN Y MONTAJE DE NEMTODOS

1. MUERTE 1 Colectar los nematodos en una gota de agua sobre una luna de reloj. 2 Coloque en un tubo de vidrio cerrado, una mezcla de formalina y cido propinico en la proporcin 4:1 y caliente a Bao Mara (90 C). En otro tubo tenga formalina al 4%. En lugar del cido propinico puede usar cido actico (80 C). 3 Agregue a la luna de reloj que contiene la gota de agua con los

nemtodos, 5 cc de FP 4:1, caliente a 90 C e inmediatamente agregue 50 cc de formalina al 4%.

2. FIJACIN Despus de matar los nematodos, transfiralos a una placa de fijacin con formalina al 4%. Tape la placa con una laminilla cubreobjeto y gurdela en una placa petri conteniendo en el matar el protoplasma sin fondo, papel filtro humedecido en formalina al 4%. Mantenga los nematodos en este lugar por 10 a 15 das. Despus de causar distorsin, los diferentes tejidos deben ser deshidratados y endurecidos para que los nematodos puedan ser montados. La deshidratacin se realiza con la finalidad de facilitar la penetracin de la glicerina, no soluble en agua, dentro de los tejidos del nematodo, esto se consigue mediante los siguientes pasos: 1 Transfiera los nematodos de la placa de fijacin con formalina al 4%, a otra placa de fijacin conteniendo la solucin SEINHORST I: Solucin Seinhorst I: Etanol al 96%, 26 partes Glicerina, 1 parte Agua destilada, 73 partes

2 Tape la placa de fijacin con una laminilla cubreobjeto y colquela en un vaso conteniendo exceso de etanol de 0.6% (mas o menos la mitad del vaso). Cierre hermticamente el vaso y depostelo en una incubadora a 35 - 40 C por 16 horas. 3 Al cabo de 16 horas con una micropipeta, saque la solucin de la placa de fijacin, chequeando bajo el estereoscopio que los nemtodos no sean sacados y llnela con la solucin Seinhorst II. Solucin Seinhorst II: Glicerina deshidratada, 7 partes Etanol 96%, 93 partes

4 Tape la placa de fijacin con un cubre objeto y colquela en una placa petri. Guarde la placa petri en una incubadora a 30 - 40 C. Despus de 3 horas agregue a la placa de fijacin una gota de glicerina deshidratada tpela con la laminilla cubreobjeto y djela en la incubadora a 35 - 40C. 5 Al da siguiente retire la laminilla cubreobjeto y despus de 4 a 5 horas, coloque la placa de fijacin en un desecador con CaCl2 o slica gel por 4-5 das.

3. MONTAJE 1 Transfiera los nematodos procesados a glicerina deshidratada. 2 Limpie el cubre y portaobjeto con etanol al 96%. Coloque una gota de glicerina deshidratada sobre el portaobjeto. 3 Coloque los nematodos a montar en el centro de la gota de glicerina y en una laminilla cubreobjetos tibia para que no

posicin radial a la gota tres fibras de vidrio de dimetro similar al de los nematodos. Deposite suavemente quede burbujas de aire. El cubre-objetos queda sobre las fibras de vidrio las que impiden que los nematodos sean presionados por el cubreobjeto. 4 Si la gota no llena el cubreobjeto, se puede aadir glicerina

deshidratada. Si lo sobrepasa retire el exceso con pedazos de papel filtro.

5 Las partes del porta y cubreobjetos que van a ser sellados lmpielas con un hisopo de algodn humedecido en etanol al 100%. Fije el cubreobjeto con tres gotas de glicel aplicados en tres puntos distintos. Despus de 5 minutos selle completamente con glicel mediante un pincel. Despus de 24 horas vuelva aplicar glicel en el contorno. 6 Rotule en el montaje permanente: Nombre especifico del nematodo. Nmero y sexo. El mtodo de montaje. Lugar del que se extrajeron los nematodos (suelo y cultivo). Nmero de slide en su coleccin. Iniciales de la persona que realiza el montaje.

AUTOEVALUACIN
1. Qu sustancias y materiales se emplean en el proceso de muerte de los nemtodos? 2. Con que finalidad se deshidratan los tejidos en el proceso de fijacin? 3. Cules son las especificaciones que debe ir en el montaje?

Cuadro N4. Caractersticas bsicas para la identificacin al estereoscopio de algunos fitonemtodos.

GENERO DE LA CABEZA Pratylenchus Meloidogyne Helycotylenchus Heterodera Globodera Xiphinema Tylenchulus Radopholus Rotylenchulus Ditylenchulus Hemicycliophora Rotylenchus Trichodorus Hirschmaniella Paratylenchus Tylenchorhynchus Scutellonema Tylenchus Psilenchus Aphelenchus Aphelenchoides Bursaphelenchus Criconemoides Nacobbus

ESCLEROTIZACIN ESTOMATOESTILETE Corto, desarrollado Delgado c/porcin hialina Desarrollado Desarrollado Desarrollado Largo, desarrollado Dbil, no existe Corto desarrollado Ligeramente desarrollado Corto, no existe Largo delgado Bien desarrollado Curvado Bien desarrollado Variable Bien desarrollado Bien desarrollado Dbil Dbil Dbil Dbil Dbil Largo, fuerte Fuerte dorsal redondeado

ODONTOESTILETE

ONCHIO ESTILETE

SUPERPOSICIN Ventral cnica

COLA POSICIN redonda

DE LA VULVA

OVARIOS

Ventral subaguda Ventral punta hemisfrica Ventral aguda c/porcin hialina No existe Term. puntiaguda subaguda Dorsal redondeada Ventral terminal redondeado Alongada, cnica terminal Hemisfrica alongada aguda Dorsal redondeada No existe Ventral terminal puntiaguda mic No existe No existe Escutelo No existe No existe Sin ndulos Dorsal cnica Ligeramente dorsal No existe Larga c/punta redon. Cilndrica Cnica y aguda 85-96% Curvada ventral Cnica redondeada Dorsal hemisfrica Filiforme Filiforme clavida Dorsal roma redond Cilndrica 51-62% 50-60% 48-58% 76-86% 46-60% 50-60% 55-78% 55-78% 74-78% 62-83% 02 02 02 01 02 02 02 02 01 01 01 01 casi 59-60% 57-63% 80-85% 02 02 01 Variable 50-55% 02 55-69% 02