Está en la página 1de 3

Prctica N 8 Accin de agentes fsicos sobre los microorganismos

Es bien conocido que las actividades vitales de los organismos estn condicionadas por su ambiente. Modificando fundamentalmente estos factores, el organismo bien se adapta a las nuevas condiciones o muere; dependiendo esto de la magnitud y tipo de cambio operado. En este aspecto, los microorganismos difieren de las clulas de plantas superiores y animales. El conocimiento de varios factores fsicos que controlan la supervivencia y multiplicacin de los microorganismos, hace que la actividad bacteriana pueda ser incrementada, disminuida o destruida completamente. Las alteraciones en el tiempo de divisin celular indican que uno de los factores o ms han cambiado. El tipo de muerte bacteriana por agentes fsicos est relacionado al nmero de bacterias sobrevivientes, lo que significa que el proceso de desinfeccin no es repentino sino gradual, en el que el nmero de microorganismos muertos por unidad de tiempo es mayor al principio y mucho menor cuando la accin contina.
A.EFECTO DE LA TEMPERATURA

Las bacterias son capaces de sobrevivir amplios lmites de temperatura, pero el rango en el que ellos pueden crecer y ejercer sus actividades est entre los 0-90C. * RANGO DE MUERTE TRMICA: Es la temperatura en la que muere un organismo al ser expuesta 10 minutos bajo condiciones controladas. * CONDICIONES QUE VARAN EL RANGO DE MUERTE TRMICA: Contenido de agua del medio: La muerte de la bacteria por accin del calor es por coagulacin de las protenas del protoplasma. Cuanto mayor es el porcentaje de agua en el medio, menor ser la temperatura requerida para matar la bacteria. . : Contenido de agua de los organismos: A menor cantidad de agua, los microorganismos se secan y se produce mayor resistencia a la temperatura. Concentracin de hidroqeniones: Los organismos mueren fcilmente en condiciones acidas o alcalinas, requirindose temperaturas menores que en medios neutros. Composicin del medio: Los medios que contienen alta concentracin de protenas incrementan la temperatura requerida para destruir bacterias, ya que las protenas forman una pelcula alrededor de los microorganismos protegindolos de influencias desfavorables. Edad de las clulas: Las clulas viejas son ms resistentes que las clulas jvenes a las condiciones adversas.
MATERIAL.-

1.2.3.4.5.6.-

Cultivo en caldo de E. co//. Una pipeta graduada de 1 ml. 8 tubos estriles. 8 placas estriles. 1 frasco con 100 ml. de agar fundido. Bao maria.

PROCEDIMIENTO.-

1.2.3.4.5.6.7.-

8.-

Distribuir el cultivo de E. coli en los 8 tubos en cantidades de 2 ml. cada uno (ENUMERAR TUBOS). Llevar el primer tubo a bao mara por 10 minutos a 45 C. Transcurrido este tiempo, enfriarlo bruscamente en agua fra. Una vez enfriado, tomar 1 ml y vaciar en una placa Petri estril. Vertir en la placa el agar fundido, mezclar bien y dejar solidificar. Rotular datos. Incubar a 37 C durante 24-48 hrs. Proceder en igual forma con los 7 tubos restantes, pero elevando la temperatura del bao mara (10) cada vez que se coloca un nuevo tubo; por lo tanto, para el tubo 8 la temperatura del bao mara ser de 115 C. Hacer las lecturas y determinar la ZONA TRMICA LETAL.

B.-ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA

Este factor viene a ser la presin desbalanceada que da lugar a los fenmenos de difusin y osmosis, en una solucin donde hay diferencia de concentraciones. Si un organismo est inmerso en una solucin que tenga alta presin osmtica, el agua saldr de la clula hasta que establezca un equilibrio entre el interior y exterior celular lo que ocasionar que la membrana citoplasmtica y el protoplasma se contraigan hacia el centro de la clula; es entonces que decimos que la clula se ha plasmolizado y el proceso es llamado PLASMOLISIS. Lo contrario ocurre cuando una clula est en un medio con baja presin osmtica, el agua ingresar a la clula hasta establecer equilibrio con el exterior y si la diferencia de presin es grande la membrana tender a explotar y se dir que la clula est plasmoptizada y el fenmeno es llamado PLASMOPTISIS. Los cambios celulares durante la plasmlisis y plasmoptisis pueden demostrarse fcilmente en clulas animales y vegetales. Las bacterias son sensibles en menor grado a estos cambios osmticos y es necesario que las presiones sean muy grandes para observar una accin destructiva sobre la bacteria.
MATERIAL.-

1.2.-

Cepa de E. coli. 4 placas con concentraciones crecientes de sacarosa o NaCl al 5%, 10%, 20%, 40%.

PROCEDIMIENTO.-

1.2.3.4.-

En las placas con diferentes concentraciones de NaCI o sacarosa, sembrar la cepa de E. coli. Rotular datos. Incubar a 37C por 24-48 hrs. Comparar con crecimiento en placa con agar nutricio (concentracin normal de NaCI) de E. coli.

C.- ACCIN GERMICIDA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA

Los rayos ultravioleta son componentes invisibles de la radiacin solar. Todos los microorganismos: hongos, levaduras, bacterias, virus y esporas son sensibles al tratamiento UV. Sin embargo, las esporas requieren mayor tiempo de exposicin para tener el mismo porcentaje de reduccin que las clulas vegetativas. El poder de penetracin de la luz depende de la cantidad de materia suspendida. La experiencia demuestra que 1 minuto de exposicin a la luz UV provoca la muerte del 70% de bacterias G(-) y 60% de G(+) contenidas en cubos de hielo de 30 mm de grosor. Los rayos UV son absorbidos por las protenas, el DNA, RNA y otros compuestos orgnicos; siendo las bases pirimdicas las ms sensibles. La UV altera el DNA causando dmeros de timina y citosina, lo que provoca mutaciones en la clula irradiada y cuando la intensidad de irradiacin es mayor el efecto puede ser letal.

MATERIAL.-

1.2.3.4.5.6.7.-

Cultivo de E. coli en caldo. Cultivo de B. subtilis en caldo. Una placa de agar corriente. Una lmpara de radiacin ultravioleta. Un cartn circular de 12 cm. de dimetro, cortado en uno de los cuadrantes. Una pipeta Pasteur. Un lpiz de vidrio.

PROCEDIMIENTO.1. Con la pipeta capilar colocar de 10 a 12 gotas de uno de los cultivos en el centro de la placa. 2. Con la esptula de Drigalsky extender la siembra por toda la superficie del medio. 3. Trazar con el lpiz graso cuatro cuadrantes perpendiculares sobre el dorso de la placa, 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.

enumerndolos del 1 al 4. Colocar la placa sembrada a 32 cm de la lmpara de rayos uV. Cambiar la tapa por el circulo de cartn. Exponer el cuadrante libre (1) a la radiacin por 30 seg. Apagar la lmpara. Rotar el crculo de cartn dejando libre el cuadrante (2) y exponer a la luz uV por 60 seg. Apagar la lmpara. Rotar el crculo de cartn dejando libre el cuadrante (3) y exponer a la luz uV por 90 seg. Apagar la lmpara. El cuadrante (4) no se expone. Cubrir con su tapa el cultivo e incubar a 37C por 24 hrs. Anotar los resultados.