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Tinción de

Gram
Clase de Microbiología
Docente: Cristian Gonzales
OBJETIVOS
• Repasar los componentes de la
pared bacteriana como
fundamento de la tinción de
Gram.
• Explicar el método y sus posibles
fallas durante el procedimiento.
• Aplicar lo aprendido e interpretar
resultados en la lectura.
TINCIÓN DE GRAM

• Tinción diferencial compuesto por:


• Dos tintes (Catiónicos): Cristal violeta
(principal) y Safranina (de contraste)
• Un mordiente (Lugol) (Complejo Cristal
Violeta-Ribonucleato de magnesio-Yodo)
• Un decolorante
• Nos permite diferenciar dos grandes grupos:
• Gram positivos = color violeta
• Gram negativos = color rosa
COMPOSICIÓN Gram (-) Gram (+)

• Colorante Primario: Cristal Violeta 1% en


solución de oxalato de amonio al 0,85 %
• Tiempo: 1 minuto

• Mordiente: Lugol yodo/yoduro de potasio


(1g/2g) en 300 ml de agua.
• Tiempo: 1 minuto

• Decolorante: Alcohol-Acetona (70/30)


(50/50)
• Tiempo: hasta 30 segundos (1 min. solo
alcohol)
• Colorante de Contraste: Safranina 0,25%
• Tiempo: hasta 1 minuto (según
validación de método)
RECOMENDACIONES

BACTERIAS DE BUEN USO DE VERIFICAR BUEN ESTADO DECOLORACIÓN


DE COLORANTES O
EXCESIVOS
CULTIVOS EN FASE MICROSCOPIO. EXCESIVA.
EXPONENCIAL. REACTIVOS. (SIN LAVADOS.
PRECIPITADOS EN
CRISTAL VIOLETA)

SOBRECALENTAMIENTO EXTENSIONES MUY RESPETAR EL ORDEN


EN LA FIJACIÓN. GRUESAS. Y TIEMPOS EN EL
PROCESO.
GRAM POSITIVOS.

Pared

Membrana
GRAM NEGATIVOS

Pared Membrana externa

Espacio
periplasmático

Membrana citoplasmática
GRAM POSITIVOS.
L L L L
L L L L V
V L V V
V V V L
V
V V V V V
V
V

Pared

Membrana
GRAM POSITIVOS - DECOLORACIÓN.
S S
S S
S
S S S S
S

Pared

Membrana
VL VL VL
VL VL
VL
VL VL VL VL
VL
VL VL
VL
VL
GRAM NEGATIVOS L
L L L
L L L L V
V L V V
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V
V V V V V
V
V

Pared Membrana externa

Espacio
periplasmático

Membrana citoplasmática
GRAM NEGATIVOS

Pared Membrana externa

Espacio
periplasmático

VL
VL VL Membrana citoplasmática
VL VL
VL
VL VL VL VL
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GRAM NEGATIVOS

Pared S
S S S
S
S S S S
S

Espacio
periplasmático

Membrana citoplasmática

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