Resultados HPLC - FTIR

Solanum ovigerum
(Planta ponedora, planta huevo, planta que da huevos, planta pone huevos, planta de huevos de pascua)

Planta que da frutos con aspecto de huevos, que al madurar toman un color
amarillo.

Florece durante toda la primavera con hermosas flores violetas que fructifican en
verano y mantiene sus frutos hasta el otoño en la planta.

Es anual y llega a medir hasta un metro de altura.

Principal uso: ornamental

Hojas: combatir infecciones urinarias y prevenir que heridas en la piel se infecten. Los curanderos
tradicionales reportan que los frutos son muy tóxicos
Secada y Almacenamiento de las hojas de S. ovigerum

Secado en estufa de desecación:

1. Temperatura 30 ºC
2. Abanico para mover constantemente el aire
3. Aire con humedad menor al 20%

Almacenamiento:
1. Material pulverizado se almaceno en bolsas de papel dentro de caja de madera
2. Temperatura ambiente del laboratorio (20 ºC)
Práctica de HPLC:
Las fracciones recolectadas de la resina de sílica gel en baja resolución con actividad antibacteriana positiva (6, 7, 8, 9, 14,
15, y 16), se sometieron a separación ahora en resina de fase reversa utilizando un equipo de HPLC, en busqueda de su
purificación.

* Equipo: HPLC marca Agilent, modelo 1100

* Columna: Zorbax Eclipse Plus C18 (4.6x150mm, 3.5µm)
Tiempo H2O ACN
(min) % %
0 100 0
* Gradiente Fase móvil: 3 100 0
3.1 40 60
10 0 100
13 0 100
13.1 100 0
* Flujo: 0.5 mL/min 15 100 0

* Detector UV/VIS: 214nm

* Inyección: 20µL (2mg/mL)

* Fracciones analizadas: 6, 7, 8, 9, 14, 15 y 16

 Fracción Tret (min) Gram (+) Gram (-)
Fracción inyectada en HPLC : F6
F1 2.619 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F2 2.752 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F3 4.968 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F4 5.143 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F5 5.823 0.256 0.260 0.256 0.488 0.488 0.485

F6 6.618 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F7 9.356 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F8 10.736 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F9 11.841 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

F10 11.948 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368

Agua:EtOH 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368 1.368

 Fracción Tret (min) Gram (+) Gram (-)
Fracción inyectada en HPLC: F7
F1 4.937 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F2 5.139 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F3 5.393 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F4 5.822 0.000 0.001 0.001 0.188 0.188 0.185
F5 9.390 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F6 10.664 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F7 11.944 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
Agua:EtOH 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368 1.368
Fracción inyectada en HPLC: F8 Fracción Tret (min) Gram (+) Gram (-)
F1 4.937 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F2 5.139 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F3 5.393 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F4 5.822 0.000 0.001 0.001 0.088 0.085 0.086
F5 9.390 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F6 10.664 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F7 11.944 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
Agua:EtOH 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368 1.368
 Fracción Tret (min) Gram (+) Gram (-)
Fracción inyectada en HPLC : 9 F1 2.619 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F2 2.752 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F3 4.968 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F4 5.143 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F5 5.823 0.156 0.160 0.156 0.288 0.288 0.285
F6 6.618 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F7 9.356 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F8 10.736 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F9 11.841 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F10 11.948 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
Agua:EtOH 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368 1.368
Fracción inyectada en HPLC : F14
Fracción Tret (min) Gram (+) Gram (-)
F1 5.032 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F2 5.288 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F3 5.481 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F4 6.606 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
F5 8.414 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F6 9.071 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F7 10.353 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F8 11.533 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F9 11.984 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
Agua:Etol 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368 1.368
Fracción inyectada en HPLC : F15
Fracción Tret (min) Gram (+) Gram (-)
F1 5.032 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F2 5.288 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F3 5.481 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F4 6.606 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
F5 8.414 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F6 9.071 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F7 10.353 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F8 11.533 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F9 11.984 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
Agua:Etol 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368 1.368
Fracción inyectada en HPLC : F16 Fracción Tret (min) Gram (+) Gram (-)
F1 2.494 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F2 4.982 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F3 5.168 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F4 5.422 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F5 6.615 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
F5 8.408 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F6 9.059 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F7 10.315 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F8 11.742 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
F9 11.948 1.368 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368
Agua:Etol 1.367 1.368 1.368 1.367 1.368 1.368
Recirculación Fracciones para evaluar pureza * Columna: Zorbax Eclipse Plus C18 (4.6x150mm, 3.5µm)
* Gradiente Fase móvil: Tiempo H2O ACN
(min) % %
* Flujo: 0.5 mL/min
0 100 0
* Detector UV/VIS: 214nm
3 100 0
* Inyección: 20µL (2mg/mL)
3.1 40 60
F8 * Fracciones: 8 y 15
10 0 100

13 0 100

13.1 100 0

15 100 0

F15
Videos refuerzo:

Cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC)

https://youtu.be/woJp1-jdL5M

High Performance Liquid Chromatography HPLC- UV-VIS Detector Animation

https://youtu.be/eCj0cRtJvJg

Simulador de HPLC gratuito

Para jugar con las condiciones de flujo, fase móvil, temperatura, etc., y analizar como estos factores afectan la resolución
de los analitos de interés.
https://hplc-simulator-free.en.aptoide.com/app
Grupos funcionales
Infrarrojo medio como identificador de grupos funcionales

1.- Obtención del espectro de IR

PASO 1 PASO 2 PASO 3

Compuesto puro y seco Moler Tamizar

PASO 4 PASO 4
Espectro de Analizar en FTIR (Bruker,
FTIR modelo PMA50)
2.- Observación-inferencia

CONSEJO: El conocimiento teórico de la naturaleza del compuesto o los compuestos (por ejemplo: carbohidratos, lípidos o proteínas) de la muestra
ensayada será de mucha utilidad para la interpretación de las bandas del espectro resultante.
 2000-2500 cm-1

2) Análisis de espectro de IR
Divida en cuatro zonas el espectro
con el propósito de facilitar la
identificación 2500-4000 cm-1

1500-2000 cm-1 400-1500 cm-1

Región de 4000-2500 cm-1

Bandas relacionadas con enlaces de estiramiento de O-H, C-H y N-H

El enlace O-H del agua = banda muy amplia y
alta entre 3500 y 3200 cm-1

La banda de este mismo enlace, pero ubicado en otra molécula,

tiene una apariencia puntiaguda y poco intensa.
El enlace de estiramiento N-H aparece entre la región de
3420 y 3200 cm-1con una apariencia menos amplia que
el enlace O-H del agua

Entre 3080 y 2760 cm-1 aparecen bandas ligadas al enlace de

estiramiento C-H
Región de 2500-2000 cm-1
A menudo en esta región en un espectro no aparecen bandas
En caso, de aparecer tales bandas, estas tienen su origen en enlaces triples, por ejemplo, C≡C, C≡O o C≡N.
Región de 2000-1500 cm-1
En esta región, también llamada de los dobles enlaces, principalmente aparecen los enlaces de vibración C=C y C=O

En esta región es importante la posición, así que saber que tipo de molécula se esta trabajando es vital
La región de huella digital (1500-600 cm-1 )
Las bandas que aparecen en esta región son producto de varios tipos de vibraciones de enlace, por lo cual a menudo es difícil de asignar su
origen a una banda en particular.
FTIR de fracción 6-9
FTIR de fracción 14-15