Estrategias de análisis por GC-MS

aplicadas a la determinación de
plaguicidas y otros
contaminantes en aguas y
alimentos
 INTRODUCCIÓN

METODOLOGÍA ANALÍTICA EN EL ANÁLISIS DE TRAZAS

TENDENCIA EN COSTE
LIMITES DE DETECCIÓN, ppm (Aprox.)

BIOENSAYO, GRAVIMETRÍA
>1

TENDENCIA EN SELECTIVIDAD
COLORIMETRÍA, ESPECTROFOTOMETRÍA
0.1

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL Y CAPA FINA

0.01

CROMATOGRAFÍA DE GASES Y LIQUIDOS

0.001

GC-MS Y HPLC-MS
<0.0001

1940 1950 1960 1970 1980 1990 2000

AÑO (Aprox.)
 INTRODUCCIÓN

Alimentos: Directiva 90/642 CEE Aguas: Normativa Europea

de Aguas de Consumo
76/464/EEC
Tomate Pimiento Pepino
Abamectine 0.01 0.01 0.01
Benomyl 0.50 0.10 0.50 0.1 g/l plaguicidas individuales
Cyromazin 0.50 2.00 0.10 0.5 g/l plaguicidas totales
Dimetomorf 0.50 0.02 0.50
Ethiofencarb 2.00 2.00 2.00
Flufenoxuron 0.50 0.50 0.20 Lista negra de plaguicidas prioritarios
Hexaflumuron 0.05 0.50 0.05
Hexitiazox 0.05 0.50 0.10 Aldrin Disulfoton Monolinuron
Imidacloprid 0.10 0.50 0.10 Atracina Endosulfan Ometoato
Lufenuron 0.02 0.02 0.02 Azinfos-etil Endrin Oxidemeton-metil
Methomyl 1.00 1.00 0.02 Azinfos-metil Fenitrorion Paration-etil
Oxamyl 2.00 2.00 2.00 Clordane Fention Paration-metil
Teflubenzuron 0.50 0.50 0.20 Coumafos Hepatclor Foxim
Tiabendazole 0.10 1.00 1.00 2,4-D Hexaclorobenceno Propanil
Acrinathrin 0.10 0.20 0.02 DDT Linuron Pirazon
Bifenthrin 0.20 0.20 0.01 Demeton Malation Simazina
Buprofecin 0.50 0.50 0.20 Diclorprop MCPA 2,4,5-T
Chlorpyriphos-me 0.50 0.50 0.05 Diclorvos Mecoprop Triazofos
Endosulfan 1.00 1.00 1.00 Dieldrin Metamidofos Triclorfon
Malathion 3.00 3.00 3.00 Dimetoato Mevimfos Trifluralin
Methalaxyl 0.20 0.05 0.05
Methamidophos 0.50 0.01 1.00
INTRODUCCIÓN

REQUERIMIENTOS PARA LA CONFIRMACIÓN DE

RESULTADOS

CONFIRMACIÓN DE RESULTADOS NEGATIVOS (<LCL)

• Calibración aceptable (medida del LCL)

• Recuperación aceptable (confirmada en lote)

CONFIRMACIÓN DE RESULTADOS POSITIVOS (>LCL)

• Calibración aceptable
• Recuperación aceptable
• Confirmación adicional

SANCO/3103/2000
INTRODUCCIÓN

CONFIRMACIÓN DE RESULTADOS

• Empleo de diferentes detectores

• Empleo de columnas de diferente polaridad
• Empleo de técnicas alternativas
• Técnicas de derivación

• Mayor coste
• Mayor tiempo de análisis
INTRODUCCIÓN

CONFIRMACIÓN DE RESULTADOS POSITIVOS

EJEMPLOS:
GC-ECD: 2 columnas, 1 detector Cuestionable
2 columnas, 2 detectores Aceptable (?)
GC-NPD: Idem
GC-FPD: Idem

HPLC-UV: 2 columnas, 1 detector Mayor. Inaceptable

1 columna + HPLC-DAD Puede ser aceptable
2 columnas + HPLC-DAD Aceptable

HPLC-Fluor: 2 columnas, 1 detector Aceptable

1 columna + HPLC-DAD Mayor. Aceptable
GC-XX + HPLC-YY: Aceptable
GC-MS, LC-MS: Confirmación inequívoca
SANCO/3103/2000
 GC-MS
• Quadrupolo (GC-Q-MS)
• Trampa de Iones (GC-IT-MS)
 entificación
INTRODUCCIÓN Id

GC-IT-MS (full-scan)

Pirimifos -metil
Extracto vegetal contaminado EI
45
(0.05 mg/kg)

Vinclozolina/Paration
40
Clorpirifos
35
197

Endosulfan I
26000 314
22000

97 258
Relative Abundance

18000
30
14000

10000
213 286

Clorpirifos
125 169

Clortalonil
6000
65 244
351

Endosulfan II
25 2000
60 100 140 180 220 260 300 340 m/z
Diazinon
20

15

10

0
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Time (min)
CLORPIRIFOS
4 ppm

1 ppm

0.1 ppm
IDENTIFICACIÓN/CONFIRMACIÓN

tR = 10.48
Abundance
3600000
CLORPIRIFOS
3200000

2800000

2400000

2000000
1600000

1200000

800000

400000

0
6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 min

Abundance
280000 97
EI
240000 197 Full scan
200000

160000 314

120000
258
65 125 286
80000 213
43
169
40000 244
81 144 351
0 111
40 80 120 160 200 240 280 320 m/z
 IDENTIFICACIÓN/CONFIRMACIÓN

CLORPIRIFOS
97
S
Abundance
197 Cl N OP(OCH2CH3)2
8000

6000 314
Cl Cl
4000 258
65 125
43 213 286
2000
169 244 351
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 m/z

REFERENCIA
FIT = 99%
Abundance 197
8000 97 314

6000
258
286
4000
212
2000 244 351
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340
m/z
 CRITERIOS DE IDENTIFICACIÓN

• TIEMPO DE RETENCIÓN (menos de 5 sec)

• 3 IONES ESPECIFICOS (S/N>3)
Similar tiempo de retención
Similar pendiente de pico (Crom. de iones seleccionados)
Intensidad relativa ± 30% estándar
• SI INTERFERENCIAS: SELECCIÓN DE IONES ALTERNATIVOS
• SUSTRACCIÓN DEL FONDO: PRECAUCIÓN.
• FIT > 750
• IONES MATRIZ <25% DEL PICO BASE (EI).
 EFECTO MATRIZ

• IDENTIFICACIÓN ERRONEA (FALSOS POSITIVOS/NEGATIVOS)

• INCORRECTA CUANTIFICACIÓN
• DISMINUCIÓN DE LA SENSIBILIDAD
• CONTAMINACIÓN DEL SISTEMA CROMATOGRÁFICO

• PROCEDIMIENTOS DE “CLEAN-UP” EXHAUSTIVOS

• REDUCCIÓN DEL TAMAÑO DE MUESTRA
• TÉCNICAS DE ANÁLISIS MÁS SELECTIVAS Y SENSIBLES
 IONIZACIÓN QUÍMICA entificación
Id

Interferencia al tiempo de
retención del Clorfenvinfos

Muestra de aceituna: Blanco Matriz

EI-MS

S/N: 7/1 m/z 267

 entificación
IONIZACIÓN QUÍMICA Id

Muestra de aceituna: contaminada con

0.1 mg/kg Chlorfenvinphos

CI-MS

Fit 978

S/N: 60/1 m/z 359 (M+1)

IONIZACIÓN QUÍMICA

AFINIDADES PROTONICAS DE LOS PRINCIPALES GASES

REACTIVOS

GAS REACTIVO PA (kJ/mol)

He 178
H2 423
CH4 550
C2H4 680
H2O 697
H2S 712
CH3OH 761
CH3CN 787
i-C4H10 823
NH3 854
CH3NH2 896
IONIZACIÓN QUÍMICA

ESPECTRO DE DIAZINON
Abundancia
179
16000
137
14000
304
12000 199
152
10000
8000 EI
6000 227 276
248
4000 93 216
124
163 260 289
2000 66
54 109
81
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 m/z

ESPECTRO DE DIAZINON
Abundancia 305 [M+H]+
220000

180000

140000 PCI/CH4
100000 [M+C2H5]+

60000 333 [M+C H ]+

3 5

345
20000 137 259 277
165 290
0
80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360m/z
 IONIZACIÓN QUÍMICA

Abundance
276
Abundance

5000000 PY 140000 EI Identificación

GC-MS/EI de PTs:
Análisis por GC-MS
120000
4000000 100000
80000 262
1
3000000 60000
2
4 40000 125 194 [M]+
3 233
2000000 20000
93109 152 177 319
U5 212 249
0
U4 5
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 m/z
1000000 6
13
U1 11 U3 *
U *
7 8 2
9 10 12
0
5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00
Abundancia Time (min) 320 [M+H]+

44000 GC-MS/PCI
Abundance

3e+07
PY
PCI
36000

2
28000
2.5e+07 3
4
1 20000
2e+07

12000 180 348

1.5e+07 13 5
U3 U4
208 278 360
U1 U5 4000
1e+07 U2 6
11
* 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 m/z
5000000 10
12 *
0
5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 Time (min)
TRAMPA DE IONES

GC-MS/MS

METOLACLOR
(0.1 g/L)
TRAMPA DE IONES

GC-MS/MS
100
90 RT: 9.48

Relative Abundance
AA: 44388 FULL SCAN
80
70
60
50
SN: 8
40
30
20
10
0
9.3 9.4 9.5 9.6 9.7 9.8 9.9 10.0 10.1 10.2 10.3
Time (min)

100 67.4
CLORPIRIFOS
Relative Abundance

79.4
80

60 91.4
313.5
135.2
40 97.3 315.5
199.1
147.2 213.0 258.1285.6 354.6
20 171.1 428.3
227.0 316.4 355.6 413.5 430.3
462.7 502.0
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 m/z

MS/MS
100
RT: 9.48
Relative Abundance

80
AA: 11034
60
SN: 71
40

20

0
6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5 11.0 11.5 12.0 12.5
Time (min)

258
100
Relative Abundance

80

60 259
40

20 286
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 m/z
TRAMPA DE IONES

GC-CI-MS/MS

Ionization MS/MS Fragmentation

Ionization Main ions (m/z) Precursor ion Excitation rf Product ions (m/z)
mode (RA, %) (Isolation window)a voltage (mV)b (RA, %)
Chlorothalonil NCI 266(100), 264(50), 268(40) 266 (6) 1700 229(100), 231(90), 266(20)

Dichlofluanid NCI 199(100), 155(60), 99(10) 199 (2) 800 155(100), 91(51), 199(25)

Sea-Nine 211 NCI 245(100), 209(30), 281(10) 245 (4) 800 160(100), 162(56), 245(25)

Irgarol 1051 PCI 254(100), 282(25), 198(20), 294(10) 254 (2) 900 198(100), 254(30)

TCMTB NCI 166(100), 58(20) 166 (2) 1100 134(100), 166(25)

SELECCIÓN DEL ION PRECURSOR

• MÁXIMA ABUNDANCIA: MAYOR SENSIBILIDAD
• RELACION m/z ELEVADA
• GRUPO DE IONES
 TRAMPA DE IONES

GC-IT-EI-MS/MS
NUARIMOL 100 139 DICOFOL
100 139

75 75

50 50
123

Nuarimol
Unid.

Dicofol
25 25
235 251
0
40
0

75 100 125 150 175 200 225 m/z 125 150 175 200 225 250m/z

30

20

10
Ion: 139 Ion: 139
0
30.4 30.5 30.6 30.7 30.8 30.9 31.0 min
Analyst, (2001) Enviado
 CUANTIFICACIÓN

ELIMINACIÓN DE EFECTOS MATRIZ

• CUIDADOSA SELECCIÓN DEL ION/IONES DE CUANTIFICACIÓN

• PREPARACIÓN DE ESTANDARS EN MATRIZ
• CLEAN-UP DE LAS MUESTRAS
• METODOS DE CUANTIFICACIÓN ALTERNATIVOS