INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA MICROBIANA

PRÁCTICA 1:
TRANSPORTE DE
GLUCOSA EN
LEVADURAS
PROTOCOLO EXPERIMENTAL

Sección 2
17. Con ayuda del diagrama de flujo, inicia la explicación del protocolo experimental empezando
- en la parte de la obtención de la suspensión celular y la preparación del matraz 1. Explica
¿cuál es el objetivo de colocar este matraz en hielo?

Un aumento
de la
temperatura
produce una
mayor
movilidad de
las moléculas,
lo que
conlleva a un
aumento de
la fluidez de
la membrana.

· Horton R., Moran L. A., Scrimgeour K. G., Perry M. D. y Rawn J. D.

(2008). Principios de Bioquímica. 4a ed. Pearson Educación. México.
18. Continúa con la explicación del protocolo experimental a partir de la preparación del matraz 2 al 5. Explica la
finalidad de preparar cada uno de estos matraces para llevar a cabo el ensayo de transporte.
-
Sólo 2,3,4
6 mL H2O 6 mL DNF 6 mL NEM 16 mL H2O T. amb - 20 min
+ + + +
4 mL susp. 4 mL susp. 4 mL susp. 4 mL susp.
celular celular celular celular

2 3 4 5

10 mL Glc
Referencias:
-Colegio de Ciencias y Humanidades. (2013). Problemas de
metabolismo: Dinitrofenol. Recuperado de
https://portalacademico.cch.unam.mx/sites/default/files/dinitrofenol.pdf
- Giraldo, M. (2015). Tipos de transporte en la membrana plasmática.
Recuperado de
https://noxservices.files.wordpress.com/2015/03/capitulo-28.pdf
2 3 4
19. Continúa con la explicación del protocolo experimental a partir de la toma
- de alícuotas hasta la obtención del sobrenadante y fundamenta por qué se
reciben las alícuotas en NaOH.

2021 Khan Academy. Transporte Activo. Recuperado de https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/cell-structure-and-

20. Explica del protocolo experimental la parte de la determinación de glucosa residual y explica cómo se calcula el volumen
de la alícuota para realizar la determinación. Describe el fundamento de la determinación de azúcares por el método del
- DNS.

PROTOCOLO
REACCIÓN GENERAL QUE OCURRE EN EL
MÉTODO DNS

Rajbhar, K., Dawda, H., & Mukundan, U. (2016). Quantitative

spectrophotometric estimation of specific monosaccharides by DNSA
method. IJRDO - Journal of Biological Science (ISSN: 2455-7676),
2(1), 112-126. Retrieved from
https://www.ijrdo.org/index.php/bs/article/view/1592
 Cálculo para la alícuota
Cantidad de glucosa inicial: Concentracion de glucosa en la alicuota de
2mL al añadir 1mL de NaOH:
4mg ---------------- 1mL
X=40mg ---------- 10mL
Glucosa= 4mg / 3 mL= 1.333mg/mL

Concentracion de glucosa al Esta concentración no cambia aun

tiempo cero en el matraz: después de centrifugarse.

Glucosa= 40 mg / 20 mL= 2mg/mL

Se realizará una curva de 0-500 µg:

Concentracion de glucosa en la En la alícuota debe haber 250 µg

alicuota de 2mL: aprox. Para un buen resultado
2mg ---------------- 1mL Glucosa= 1.333mg/mL = 1333 µg/mL
X=4mg ---------- 2mL
0.1mL = 133 µg
0.2mL= 266 µg
0.3 mL = 399 µg
¡Gracias por su atencion!