CFGS Laboratorio Clínico y Biomédico

Módulo: Técnicas de
Inmunodiagnóstico

Tema 1: Las Técnicas

Inmunológicas:
Introducción a la Inmunología
Profesor: José Ángel Pina Alburquerque
INMUNOLOGÍA, SISTEMA INMUNE E
INMUNIDAD
 La Inmunología es una disciplina
dentro de la Biología que se ocupa
del estudio del reconocimiento
de "lo propio" frente a "lo
extraño".

 La Inmunología es una ciencia

relativamente joven. En 1796,
Edward Jenner descubrió una
sustancia que ofrecía protección
frente a una enfermedad, llamada
viruela. A esta sustancia la denominó
vacuna. Desde este momento, se
puede decir que nace la Inmunología
 INMUNOLOGÍA, SISTEMA INMUNE E INMUNIDAD
http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/inmune/contenidos1.htm
 Inicialmente, la Inmunología
estudió los elementos implicados
en la defensa del organismo
frente a ataques externos.
 En una fase posterior, la
Inmunología analizó, además, los
procesos de transformación de
células sanas en células
tumorales, así como las
respuestas del organismo frente
a esas células, reconociendo
estas células tumorales como
unas células extrañas.
 Actualmente, la Inmunología
abarca también el estudio de las
enfermedades autoinmunes, las
alergias y los fenómenos de
rechazo que aparecen en los
trasplantes.
 El sistema inmune o
sistema inmunitario, es un
sistema difuso, ya que
está constituido por un gran
número de órganos y tejidos
diseminados por todo el
cuerpo. Se encarga de
elaborar la respuesta
inmune frente a un
antígeno.   
 La capacidad de resistir a un
agente infectivo, ya sea por
la defensa que realiza el
sistema inmune o sea por
otro tipo de barrera que
defienda al organismo de la
infección, se denomina
Inmunidad:
– Inmunidad inespecífica
– Inmunidad específica
Sistema Inmune: Introducción
Inmunidad INESPECÍFICA:
 La piel es la primera barrera
defensiva.
– Una herida en la piel
determina liberación local de
histamina, que produce una
respuesta inflamatoria que
hace aumentar el flujo de
sangre en la zona, aumenta la
permeabilidad de los capilares
y atrae leucocitos que inician
la respuesta inmune.
 También el pH del
estómago, la lisozima de las
lágrimas, la flora intestinal,
etc. constituyen una
primera barrera.
Sistema Inmune: Introducción

Inmunidad Específica
 En los vertebrados el
sistema inmune está
formado por órganos y
células bien
diferenciadas que
permiten reconocer las
sustancias extrañas
(antígenos) para poder
eliminarlas.
Sistema Inmune: Introducción
Foto: Macrófago engullendo una bacteria

 En la inmunidad
específica la respuesta
inmune se dirige hacia
la molécula extraña
que la provoca.
 Muchas células
participan en ella.
 Tiene memoria, por lo
que en la mayoría de
ocasiones no se sufre
la enfermedad dos
veces.
Sistema Inmune: Introducción
(Foto: IgG)

El sistema inmune debe aprender a

combatir selectivamente a una
molécula extraña que va a
ingresar al organismo, y esto lo
hace:
 A través de efectores humorales
(los más importantes son los
anticuerpos ó
inmunoglobulinas): Inmunidad
humoral.
 A través de células (efectores
celulares): Inmunidad celular.
 Pero es difícil “poner puertas al
campo”.
Ver más en Tema 48
(42 del libro)
Células del sistema inmune
(Hematopoyesis)

 A partir de una sola

célula madre
pluripotencial (Stem
cell) se forman dos
líneas:
– La LINEA (o serie)
MIELOIDE
– La LINEA (o serie)
LINFOIDE
Células de la serie Mieloide
(Foto: Hiperplasia mieloide en Medula Ósea)

- Monocitos, macrófagos y
células dendríticas.
- Neutrófilos
Polimorfonucleares
- Eosinófilos
- Basófilos y Mastocitos
- Plaquetas (a partir de
megacariocitos)
Células de la serie Mieloide:
Monocitos y Macrófagos:
 Fagocitan organismos
extraños y productos
autólogos de
deshecho (Función
inespecífica en la
respuesta inmune)
 Algunos son Células
presentadoras de
antígeno (APC):
– En piel, ganglios
linfáticos, bazo y timo.
– Presentan los antígenos
a los linfocitos.
 Células de la serie Mieloide
Neutrófilos Polimorfonucleares:
 Fagocitan bacterias productoras de pus
Células de la serie Mieloide
Eosinófilos
El contenido de sus
gránulos se libera al
exterior de la célula.
 Actúa contra dianas
grandes no
fagocitables: Como los
Helmintos.
 También se relaciona
con alergias.
 Células de la serie Mieloide
Basófilos y Mastocitos

 Poseen gránulos cuyo contenido (histamina y heparina)

puede ser liberado al exterior de la célula (debido a una
activación previa derivada del proceso inflamatorio).
 Son sustancias quimiotácticas que provocan un acúmulo
de eosinófilos y neutrófilos en el foco infeccioso.
 Responsables de los síntomas adversos de la alergia.
Células de la serie Mieloide
Plaquetas:
 Además de participar
en la hemostasia:
 Participan en la
inflamación: Se
adhieren al endotelio
dañado liberando
sustancias que
aumentan la
permeabilidad.
Células de la serie Linfoide
 Linfocitos T:
Responsables de
la inmunidad
celular.
 Linfocitos B:
Responsables de
la inmunidad
humoral
(anticuerpos)
 Células de la serie Linfoide
Linfocitos T
Linfocitos T helper: Linfocitos T
supresores/citotóxicos:
 Inducen la proliferación de los linfocitos B y su
diferenciación a células plasmáticas
1. Frenanproductoras
la respuesta
de
anticuerpos. inmune, inactivando a
 Producen Linfoquinas otros linfocitos.
2. Lisanantivírica
 Producen Interferón: Con actividad las células diana.
Células de la serie Linfoide
Linfocitos B
 Cuando entran en
contacto con el antígeno,
sufren una proliferación
clonal, dando lugar a:

1. Células plasmáticas que

sintetizan anticuerpos.
2. Linfocitos B con memoria
inmunológica.
 Células de la serie Linfoide
Células de tercera población
(células nulas –no B no T-)
1. Células NK (natural
killers):
2. Linfocitos K: Células
con función ADCC
(citotoxicidad celular
dependiente de
anticuerpo)
 Células de la serie Linfoide
Células de tercera población.
1. Células NK
(natural killers):
 Lisan a las células
tumorales y a las
infectadas por virus
 Reconocen
glucoproteínas de alto
pM de la superficie de
estas células.
 Células de la serie Linfoide
Células de tercera población.
2. Linfocitos K:
 Células con función ADCC
(citotoxicidad celular
dependiente de
anticuerpo)
 También lisan células,
pero a través de la unión
de anticuerpos a las
células diana (solo
cuando las células diana
están recubiertas de
anticuerpos).
 ÓRGANOS Y
TEJIDOS
LINFOIDES
ÓRGANOS Y TEJIDOS LINFOIDES
Conectados entre sí por los vasos linfáticos

 0RGANOS LINFOIDES
PRIMARIOS:
– Medula ósea
– Timo
 ORGANOS LINFOIDES
SECUNDARIOS:
– Ganglios linfáticos
– Bazo
– Zonas asociadas a los
aparatos digestivo y
respiratorio.
Antígenos y Anticuerpos
Antígenos
 ANTÍGENO O
INMUNÓGENO: Es
toda molécula capaz
de inducir una
respuesta inmune,
pudiendo reaccionar
con los anticuerpos
formados. Suelen ser
moléculas grandes.
Antígenos
 HAPTENO: Moléculas de
pequeño peso molecular
que por sí solas no
pueden provocar la
producción de
anticuerpos, pero sí
cuando se asocian a
proteínas.
 La especificidad de la
reacción depende de esta
parte NO proteica.
EPITOPES Y DETERMINANTES ANTIGÉNICOS
 EPÍTOPES: Fragmentos de la molécula
de antígeno (estructuras de superficie)
que son reconocidos específicamente
por los anticuerpos.

 DETERMINANTES ANTIGÉNICOS:
Regiones de la molécula de Ag que
presentan varios epítopes cercanos.

 PARATOPE: Región de la molécula del

Anticuerpo que contacta con el Ag.

 Existe una complentariedad espacial

entre epítope y paratope con cierta
flexibilidad.

 La unión Ag-Ac es reversible

FACTORES DE ANTIGENICIDAD
 Factores que determinan
el poder antigénico de
una molécula:
1. Naturaleza química
2. Tamaño
3. Complejidad
4. Conformación y
accesibilidad
5. Calidad de extraño.
Epítopes de linfocitos B
 Los linfocitos B reconocen
epítopes sobre antígeno
nativo.
 Es mejor Ag:
– Una molécula GRANDE
que pequeña.
– Si tiene CALIDAD DE
EXTRAÑO: No se asemeje
a la de otras moléculas
propias.
– PROTEÍNAS mejor que
polisacáridos o glicolípidos:
Las partes de su estructura
que sobresalen tienen alta
densidad de epítopes.
Epítopes de linfocitos T
 El receptor de los linfocitos T
(TCR) NO RECONOCE EL Ag
NATIVO.
 Necesita un procesamiento
previo del antígeno en la
CELULA PRESENTADORA DE
ANTÍGENO (APC) que lo
transforma en un péptido
lineal.
 El TCR reconoce al péptido
antigénico sobre la superficie
de la APC y asociado a una
molécula del MHC (clase I o
II).
Epítopes de linfocitos T
 Los Linfocitos T necesitan
que el antígeno vaya
asociado a una molécula
del MHC:
– De clase II para los
CD4+ (Linfocitos T Helper)
– De clase I para los
CD8+ (Linfocitos T
citotóxicos/supresores)
Epítopes de linfocitos T
Existe una diferencia en el
procesamiento de los
antígenos según que
sean:
 Antígenos proteicos
solubles exógenos
 Antígenos proteicos
endógenos:
Sintetizados en el
interior celular, como las
proteínas virales.
Epítopes de linfocitos T
 Los antígenos proteicos
solubles EXÓGENOS:
1. Son captados por endocitosis
por las APC.
2. Sufren una desnaturalización
de su estructura y una
proteolisis para dar un
péptido lineal.
3. Se fusiona entonces con una
vesícula que contiene
moléculas del MHC de clase
II
4. Retorna a la superficie para
ser presentado al receptor del
linfocito (TCR).
Epítopes de linfocitos T
 Los antígenos
ENDÓGENOS:
1. Se degradan en el
citoplasma por proteasas (
vía de la ubiquitina)
2. Se fusionan después con
moléculas del MHC de
clase I
3. Salen a la superficie para
su reconocimiento por el
TCR.
ANTICUERPOS
 ANTICUERPOS:
Glucoproteínas formadas por
el organismo como
respuesta al contacto con un
antígeno y que reacciona
específicamente contra él.
 Se les conoce también como
INMUNOGLOBULINAS (Ig)
 La mayoría son γ-globulinas
Estructura del Anticuerpo:
 Parte proteica: 4
cadenas polipeptídicas
unidas entre sí por
enlaces covalentes y
puentes disulfuro en
forma de “Y”:
 2 cadenas “L”:
pequeñas.
 2 cadenas “H”:
grandes.
 Región bisagra: zona de
unión de los tres brazos
de la “Y”.
Fragmentos de
unión al antígeno
(fragment antigen
binding)

Fragmento
Cristalizable
Estructura del Anticuerpo:
 Cada cadena presenta varios
Dominios (Regiones de tamaño
uniforme):
– Región variable (V):
 En el extremo amino-terminal
 Secuencia de AA muy variable de unas
Ig a otras.
 Solo una región V en cada cadena
(tanto en las H como en las L)
– Regiones constantes (C):
 El resto de la cadena.
 Secuencia de AA muy parecida en todas
las Ig.
 Las cadenas L tienen una región C
 Las cadenas H tienen 3 o 4 regiones C.
Estructura del Anticuerpo:
 En la región V hay:
– 3 CDR: Regiones
Determinantes de la
Complementariedad. Son
hipervariables.
– 4 FR: Regiones de armazón o
entramado (Framework Region).

 El PARATOPE es una porción de

las CDR (Regiones Fab).
 Las regiones Fc intervienen en la
fijación del complemento o la
unión a tejidos.
Variaciones estructurales de los Ac
 ISOTIPOS

 ALOTIPOS

 IDIOTIPOS
Variaciones estructurales de los Ac
 ISOTIPOS: Variaciones en las
regiones CONSTANTES de las
cadenas H y L, presentes en
todos los individuos sanos de la
especie.
 5 isotipos en las CH:
– Gamma  Ig G
– Mu  Ig M
– Alfa  Ig A
– Delta  Ig D
– Epsilon Ig E
 2 isotipos en las CL:
– Kappa (κ)
– Lamda (λ)
 Cada isotipo CH tiene dos
versiones: κ y λ
Variaciones estructurales de los Ac
 ALOTIPOS:
Variaciones en las
regiones constantes
de la cadenas H y L,
presentes solo en
algunos individuos
sanos de la especie.
 Dependen
genéticamente de
diferentes alelos.
 Variaciones estructurales de los Ac
 IDIOTIPOS:  También puede ocurrir
Variaciones en las que determinados
regiones determinantes idiotípicos
variables de los sean comunes a dos o
anticuerpos. más clones.
 Normalmente, los  Debido a que distintos
distintos clones clones de linfocitos B de
de linfocitos B un mismo individuo
producen pueden usar la misma
idiotipos región génica para
distintos entre construir sus porciones
sí, no variables.
compartidos  En este caso se habla de
Variabilidad de las inmunoglobulinas
 La variabilidad de las
inmunoglobulinas tiene
una base genética:
Estando en diferentes
cromosomas los genes
que codifican las
cadenas H (14), las Lκ
(22) y las Lλ (2).
 Estas partes se unen
produciendo las
distintas variedades de
Ac.
Variabilidad de las inmunoglobulinas
 Anticuerpos monoclonales:
Anticuerpos de un tipo
específico (todos iguales).
Se producen:
 En el Mieloma múltiple (una
célula productora de Ig se
divide continuamente,
dando lugar a un clon
celular)
 In vitro: fusionando células
del mieloma con linfocitos B
expuestos a un antígeno (
hibridomas).
Clases de anticuerpos: IgG:
 Monómero
 Dos zonas de unión al
antígeno (dos fragmentos
Fab)
 Cuatro subclases (Ig1, Ig2,
Ig3, Ig4)
 La Ig más abundante en el
plasma (80%).
 Bajo Pm  Difunde bien a
otros líquidos corporales y
atraviesa la barrera
placentaria.
Clases de anticuerpos: IgG:
 Neutraliza toxinas
bacterianas
 Sensibiliza y agrega
microorganismos para
estimular su fagocitosis
(opsonización).
 Activa el complemento.
 Es la Ig más importante
en la respuesta
inmunitaria secundaria
(linfocitos B de memoria).
http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_05.htm

Algunos datos sobre las subclases de IgG

Subclase nº de concentración opsonina Activación

de IgG puentes S-S en suero (en s del
mg/ml) compleme
nto
IgG1 2 9 +++ ++
IgG2 4 3 +/- +
IgG3 11 1 +++ +++
IgG4 4 0.5 - -
Clases de anticuerpos: IgM
 Elevado Pm (“macroglobulina”)
 Pentámero de Ig
 Los 5 monómeros están unidos
por puentes disulfuro y la
“proteína j”
 10 fragmentos fab para unión al
Ag
 Confinada al espacio
intravascular
 Eficaz en la aglutinación y citolisis
de microorganismos
 Respuesta inmunitaria primaria:
Papel predominante (aparición
temprana)
Clases de anticuerpos: IgA
Dos subclases:
 IgA : Monomérica. En plasma
1
(poco abundante).
 IgA : Dimérica. Predominante
2
en secreciones externas (saliva,
lagrimal, nasal, leche materna, etc).

 Monomeros unidos por

puentes disulfuro y proteína j
 Tiene otra cadena
polipeptídica denominada
COMPONENTE SECRETOR
(sIgA), producida por las
células de las mucosas que la
protege de la proteolisis
enzimática y facilita su
transporte.
Clases de anticuerpos: IgA
 Inhibe la adherencia de
los microorganismos a
la superficie de las
células de las mucosas,
por lo que es una
primera línea de
defensa frente a las
infecciones.
 También es importante
en el procesamiento de
los antígenos
alimentarios en el
intestino.
Clases de anticuerpos: IgD
 Monómero
 Poco abundante en plasma
 Se encuentra en la superficie
de algunos linfocitos B
sanguíneos
 Parece que tiene relación con
la activación de los linfocitos B
 Clases de anticuerpos: IgE
 Monómero
 Baja concentración en
plasma.

 Se encuentra en la
superficie de los mastocitos
y los basófilos
 Es la mediadora de las
reacciones de
 Confiere protección local hipersensibilidad inmediata
frente a ciertos patógenos (alergias).
grandes, como helmintos
 Sirve para reclutar células
 Estáaumentada en
plasmáticas a través de una
infecciones
reacción de inflamación
parasitarias.
aguda.
 Properties of Human Immunoglobulins

IgM IgG IgA IgE IgD

Property
% of Serum
10 75 15 <0.01 <0.5
Ig
Pentam
Structure Monomer Dimer Monomer Monomer
er
Complement
+++ + - - -
Fixation

Transplacent
- + - - -
al Passage

Allergic
- - - + -
Response
Mucosal
- - + - -
Secretion

Opsonization +* +++ - - -
* Opsonization is via
Concepto de reacción Ag - Ac
 Cuando un Ac entra en
contacto con un Ag
contra el que está
dirigido, ambos se unen
formándose un complejo
Ag-Ac.
 La unión Ag-Ac es
reversible.
 La permanencia de la
unión depende de:
– Grado de adaptación entre
ambas moléculas.
– Fuerza y estabilidad de los
enlaces que las unen.
Enlaces que intervienen en la unión Ac-Ag
 No son covalentes. Son cuatro tipos:
1. Electrostáticos: Entre grupos iónicos
(NH3+ y -COO-) de Prots. distintas.
2. Puentes de hidrógeno entre grupos
polares hidrofílicos (-OH, -NH 2, -COOH).
3. Hidrofóbicos: Gr. No polares
hidrófobos en medio acuoso (cadenas
laterales de algunos AA.)
4. De van der Waals: Fuerzas
intermoleculares débiles de origen
eléctrico que se ejercen a distancia entre
moléculas.
 Las fuerzas de unión de cada uno de ellos
son menores que en los covalentes, pero en
conjunto consiguen una considerable
energía de unión.
COMPLEMENTARIEDAD DE EPÍTOPE Y PARATOPE
• EPÍTOPE Y PARATOPE
han de tener
estructuras
complementarias que
• encajan entre sí.
Se forman varios
enlaces no covalentes
simultáneamente.
 La distancia entre Ag y Ac
es muy pequeña en el
punto de unión, lo que
incrementa la fuerza de
esa unión.
AFINIDAD DEL ANTICUERPO

 Es la fuerza de unión
entre el Ac con su Ag
 Determina la atracción
entre ellos.
 Esa fuerza es la suma de
las fuerzas de los enlaces
que intervienen en la
unión.
AVIDEZ DEL ANTICUERPO
 Es una medida de la fuerza de
unión y estabilidad del complejo:
Ag multivalente – Ac multivalente.
 Ac multivalentes: Tienen más de
un punto de unión para
Antígenos.
 Ag multivalentes: Tienen varios
determinantes antigénicos (más
de un punto de unión para los
Ac).
 La fuerza de unión es mayor que
la suma de las afinidades de cada
uno de los puntos de unión
ESPECIFICIDAD DEL
ANTICUERPO
 Si un anticuerpo reacciona solo
con un Ag: Es muy específico.
 Si un Ac reacciona con
varios Ag: Tiene una
especificidad baja. Se habla de
REACTIVIDAD CRUZADA.
 Esto ocurre porque varios
antígenos tienen uno o más
determinantes antigénicos
iguales o similares, capaces por
tanto de unirse al mismo Ac.