Lección 2.

Observación de microorganismos

1. Fundamentos del microscopio óptico

1.1 El microscopio de campo claro
1.2 Tinción de microorganismos para su observación al
microscopio de campo claro
1.3 Microscopio de contraste de fases
1.4 Microscopio de campo oscuro
1.5 Microscopio de fluorescencia

2. Microscopio confocal de barrido con láser

3. Fundamentos del microscopio electrónico

3.1 Microscopio electrónico de transmisión
3.2 Microscopio electrónico de barrido
 Recorrido
de la luz
Aumento Imagen
visualizada
ojo

Lente ocular

Imagen intermedia
(invertida respecto
a la muestra)

Lente objetivo
Muestra

Ninguno Condensador

Fuente de luz

Microscopio óptico
 Tinción de células para
la observación microscópica

Extensión de una fina capa

de células sobre el porta

Adición del colorante

lavado y secado
Secado al aire

Se coloca una gota de aceite

de inmersión sobre el porta y
se observa con el objetivo de
Fijación por flameado del porta 100X
 Tinción de Gram
Tinción del frotis
Previamente fijado al calor,
Paso 1 con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las células se tiñen
de color azul-violeta.

Añadir Lugol,
Paso 2 dejar actuar 2 minutos

Todas las células siguen

de color azul-violeta.
Gram +

Decolorar con alcohol

Las células Gram +
Paso 3 siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.

Tinción de contraste
Con safranina 2 minutos.

Las células G+
se ven azul-violeta.
Paso 4
Las G- rosas o rojas.

Gram -
 Microscopio de
Campo Claro
Alga verde
(eucariota)

Microscopio de
Fluorescencia

Bacteria filamentosa
Teñida con naranja
de acridina

Microscopio de Contraste
de Fases
Saccharomyces cerevisiae

Microscopía
Confocal por Láser

Cianobacteria
filamentosa
Microscopio láser
de barrido confocal
 Sonda filogenética Colorante fluorescente

Microscopio de fluorescencia
Tinción células con sondas filogenéticas unidas a un
colorante fluorescente
FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales

Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH3 → NO2-)

Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO2- → NO3-)
 Oxidación anaerobia de metano en sedimentos marinos

Agregados de bacterias metanogénicas (rojo)

rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde)

Cada tipo celular está teñido con un colorante filogenético (FISH)

diferente

Bacterias
sulfato-reductoras
Bacterias metanogénicas
Micrografía Láser Confocal de una
muestra de fango de aguas residuales
Microscopio Electrónico

Transmisión

Barrido