Unidad I: Introducción a la citopatología 

Contenidos: Generalidades

 Frotis para diagnostico citopatológico

 Fijación de frotis

Estimados estudiantes la bienvenida a la asignatura citopatología, La

citopatología es la parte de la anatomía patológica que, mediante diversos
procedimientos, estudia las alteraciones morfológicas de las células
desprendidas libremente de los epitelios de revestimiento o extraídas de
distintas zonas del cuerpo humano.
Los contenidos a desarrollar son los siguientes:

 Frotis para diagnostico citopatológico

 Fijación de frotis

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una

muestra o cultivo con objeto de separar las muestras o sustancias a analizar,
ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una
imagen clara y nítida.
Objetivo General

 Conocer los elementos básicos de observación y análisis de células.

Objetivos Específicos

 Reconocer las células normales y anormales, así como su debida fijación.

Material de Estudio de la Unidad II

Citología
La citología es una ciencia que según su etimología estudia todo lo relacionado con el
comportamiento de los seres vivos, en especial en los seres humanos, ya que es en nosotros
en quienes se han desarrollado más funciones, aplicaciones y retos. En torno la historia,
podemos evidenciar una ausencia de estos fundamentos, no hasta la invención del
microscopio, ya que la creación de este aparato represento la evolución del estudio celular,
aunque es claro que ya con anterioridad, la medicina había tocado el campo del estudio celular.
La citología es la rama de la ciencia que estudia e investiga las células, a nivel
estructural, fisiológico y bioquímico, tanto en su estado normal como
patológico. Según el tipo de estudios que se realicen se divide en:

 Biología celular: se dedica al estudio de la anatomía, la función y la bioquímica celular

en estado normal.
 Citopatología: se encarga del estudio de la enfermedad celular, y de los cambios
celulares que orientan el diagnóstico de las enfermedades.

Es una ciencia experimental, de observación de comportamiento, desde un

punto de vista microscópico, sin embargo, con proyecciones macroscópicas, ya
que las alteraciones que se puedan suscitar a nivel celular, afectan
directamente las reacciones y estímulos del cuerpo en general. Esta ciencia
está abocada a la realización de curar para enfermedades de gran
envergadura, como el VIH, el cáncer, tuberculosis, enfermedades venéreas o
de calibre viral, donde la cepa de una bacteria pueda afectar una masa
poblacional considerable.

Continuación

La citología comprende un campo de estudio amplio, en el que la unidad de medición es el

micrómetro, unidad en la que son visible, mediante la utilización de técnicas de coloración y
separación, las pequeñas células que puedan contener porciones de tejido extraídas del área
en cuestión mediante procesos de corte, raspado y extracción. Gracias a la citología, se han
desarrollado exámenes de laboratorio en los que se descartan posibles afecciones por virus.
Se le da también el nombre de citología a dichos exámenes, entre los cuales destaca el
Papanicolaou, es un estudio que con un raspado del área afectada sirve para determinar la
presencia del Virus del Papiloma Humano (VPH).
Tipos de tejidos para su estudio
EPITELIO ESCAMOSO ESTRATIFICADO

Un epitelio escamoso estratificado consiste en células epiteliales escamosas (aplanadas),

establecidas en capas sobre una membrana basal. Sólo una capa está en contacto con dicha
membrana basal; Las otras capas se unen una a la otra para mantener la integridad de la
estructura. Aunque este epitelio es llamado escamoso, muchas células dentro de las capas no
son planas; esto se debe a la convención de denominarlo epitelio en función del tipo de células
en la superficie.
Este tipo de epitelio está bien adaptado a zonas en el cuerpo que están sujetas a constante
abrasión. Así, las capas pueden ser secuencialmente mudadas y reemplazadas antes de que
se exponga la membrana basal.
El epitelio escamoso estratificado se clasifica a su vez por la presencia o ausencia de queratina
en la superficie apical de la membrana plasmática. Las superficies sin queratina deben
permanecer humedecidas por secreciones corporales para prevenir que se sequen y mueran,
mientras que las superficies queratinizadas se mantienen hidratadas y protegidas por la
queratina.
Papanicolaou
La prueba de Papanicolaou es un procedimiento que se usa para la obtención de células del
cuello uterino con el fin de observarlas con un microscopio y así detectar si hay cáncer y
precáncer.
Las células tomadas por raspado de la abertura del cuello uterino se examinan bajo un
microscopio. El cuello uterino es la parte más baja del útero (matriz) que desemboca en la parte
superior de la vagina.
La paciente se recuesta sobre una mesa y coloca las piernas en estribos. El proveedor de
atención médica coloca un instrumento llamado espéculo dentro de la vagina para abrirla
ligeramente. Esto le permite al proveedor de atención médica observar el interior de la vagina y
el cuello uterino. Se raspan células suavemente de la zona del cuello uterino. La muestra se
envía a un laboratorio para su análisis.
Preparación para el examen.

Informe a su doctor acerca de todos los medicamentos que usted está tomando. Algunas
píldoras anticonceptivas que contienen estrógeno o progestina pueden afectar los resultados
del examen.
Igualmente, dígale a su proveedor de atención médica si:

 Ha tenido un resultado anormal en una prueba de Papanicolaou.

 Podría estar embarazada.

Dentro de las 24 horas anteriores al examen, no haga esto:

 Duchas vaginales (nunca debe ducharse)

 Tener relaciones sexuales
 Usar tampones

Evite programar la citología mientras esté teniendo el periodo (esté menstruando). La sangre
puede hacer que los resultados de la citología sean menos precisos. Si está presentando un
sangrado inesperado, no cancele su examen. Su proveedor de atención médica determinará si
todavía se puede hacer la citología.
Resultados.
Los resultados anormales se clasifican siguiendo el sistema Bethesda:
Anomalías de las células escamosas (SIL)
 Células escamosas atípicas de significado incierto (ASC-US)
 Células escamosas atípicas sugestivas de alto grado (ASC-H)
 Lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado (L-SIL)
 Lesión intraepitelial escamosa de alto grado (H-SIL)
 Carcinoma de células escamosas (SCC)

Anomalías de las células epiteliales glandulares (AGC)

 Las células glandulares atípicas no especificados en otra (AGC-NOS)

 Las células glandulares atípicas que sugieren neoplasia (AGC-Neo)
 Adenocarcinoma in situ endocervical (AIS)
 Adenocarcinoma (AC)

Las células escamosas atípicas, (ACS)

Son el resultado anormal más común de las pruebas de Papanicolaou. El Sistema Bethesda
divide esta categoría en dos grupos: ASC-US y ASC-H.

 ASC-US, células escamosas atípicas de significado indeterminado. Las células

escamosas no aparecen completamente normales, pero los médicos no están seguros del
significado de los cambios celulares. Los cambios pueden estar relacionados con una
infección por VPH, pero pueden ser causados también por otros factores.
 ASC-H, células escamosas atípicas. No pueden excluir una lesión intraepitelial
escamosa de alto grado. Las células no parecen normales, pero los médicos no están
seguros del significado de los cambios celulares. Es posible que exista un riesgo mayor de
que las lesiones ASC-H sean precancerosas en comparación con las lesiones ASC-US.

Las lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado, (LSIL). Se consideran anomalías

leves causadas por una infección por VPH. De bajo grado significa que se han observado los
primeros cambios en el tamaño y en la forma de las células. Intraepitelial se refiere a la capa de
células que forma la superficie del cérvix. Cuando las células del área anormal se extraen y
analizan en un microscopio (durante un procedimiento llamado biopsia), por lo general se
encuentra que las LSIL tienen cambios celulares leves que pueden clasificarse como displasias
leves o neoplasias intraepiteliales de cérvix de grado 1 (CIN-1, cervical intraepithelial
neoplasia).
Las lesiones intraepiteliales escamosas de alto grado, (HSIL). Son anomalías más graves
que tienen una probabilidad mayor de que se conviertan en cáncer si no son tratadas. De alto
grado significa que hay cambios más marcados en el tamaño y en la forma de las células
anormales (precancerosas) y que las células se ven muy diferentes de las células normales.
Cuando se examinan en un microscopio, a menudo se encuentra que las HSIL tienen cambios
más extensos que pueden clasificarse como displasia moderada o grave o como categorías
CIN-2, CIN-3, o CIN-2/3 (en orden de mayor gravedad). El análisis microscópico de las HSIL
también puede revelar carcinoma in situ (CIS). El CIS normalmente se incluye en la categoría
CIN-3.
El carcinoma de células escamosas. Es cáncer de cérvix. Las células escamosas anormales
han invadido más profundamente el cérvix, así como otros tejidos u órganos. En una población
que se hace exámenes selectivos de detección con regularidad, como lo es la de Estados
Unidos, que se encuentre cáncer en un examen selectivo de detección de cáncer de cérvix es
sumamente raro.
Las anomalías de las células glandulares describen cambios anormales que ocurren en los
tejidos glandulares del cérvix. Estas anomalías se dividen en las siguientes categorías:
Células glandulares atípicas (AGC). Significan que las células no parecen normales, pero los
médicos no están seguros del significado de los cambios celulares.
Adenocarcinoma endocervical in situ (AIS). Significa que se han encontrado células con
graves anomalías pero que no se han diseminado más allá del tejido glandular del cérvix.
El adenocarcinoma. Incluye no solamente el cáncer del canal endocervical mismo, sino
también, en algunos casos, el cáncer endometrial, el cáncer extrauterino y otros cánceres.

Tinción Hematoxilina-Eosina
La hematoxilina es un compuesto natural que al ser oxidado constituye una substancia de color
morado oscuro denominada hemateína.
Se utiliza en histología para teñir los componentes aniónicos (ácidos) de los tejidos, a los que
da una coloración violeta. Tiñe intensamente los núcleos de las células, dado que estos
contienen ácidos nucleicos ricos en radicales ácidos.
Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso de oxidación, su capacidad
de tinción es muy limitada. Por lo tanto, debe combinarse con iones metálicos, especialmente
las sales de hierro (III) o aluminio (II), que actúan como mordientes.
Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante básico, ya
que el componente cromógeno reside en el complejo catiónico (básico) de la misma. Es de
notar que la tinción histológica por hematoxilina no indica tanto la constitución química de los
componentes celulares, sino la densidad de cargas eléctricas negativas de los mismos
La eosina es un colorante basófilo (afinidad con lo básico, porque es acida), en forma de polvo
rojo cristalino, de uso ampliamente extendido en el ámbito industrial, desde la industria textil
hasta el estudio biológico e histológico.
La tinción hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina. La tinción
hematoxilina y eosina es uno de los métodos más populares de tinción utilizado en histología
y medicina diagnóstica.

Citocentrífuga
Equipo de laboratorio que se utiliza para separar los componentes de suspensiones por la
aplicación de la fuerza.
Consiste de una unidad impulsora fijada a un eje vertical y un rotor horizontal unido al extremo
superior. Este equipo está diseñado para centrifugar las muestras de paciente, por ejemplo, los
fluidos corporales, ya sea sola o después de la adición de reactivos y otros aditivos antes de
medir los analitos.
Centrífuga diseñada para obtener preparaciones citológicas a partir de muestras de líquidos
corporales.
Fácil manejo que reduce el tiempo de manipulación, características imprescindibles en
servicios de oncología, citología, hematología, virología y microbiología.
La citocentrífuga está diseñada para la concentración de muestras biológicas sobre una
superficie visible al microscopio, y su posterior identificación y caracterización.

Funcionamiento.
El centrifugado es una sedimentación acelerada, ya que la aceleración de la gravedad se
sustituye por la aceleración centrífuga: , donde  es la velocidad angular de giro de la
centrifugadora y  es la distancia al eje de la centrifugadora. Puesto que la velocidad
mencionada puede ser de miles de revoluciones por minuto, se alcanzan aceleraciones mucho
mayores que la intrínseca de la gravedad.
Además de ser más rápida que la sedimentación, la centrifugación permite separar
componentes que la mera sedimentación no podría realizar, por ejemplo, separar el uranio 235
del uranio 238.
PREPARACIÓN Y FIJACIÓN DE FROTIS, TINCIONES: SIMPLES Y DE GRAM 

 CONTEXTUALIZACIÓN

Examen directo:
Muchas muestras pueden ser examinadas en el microscopio de campo claro o contraste de
fase en su estado original, en las cuales las muestras pueden ser extendidas directamente
sobre la superficie de un portaobjeto o se puede diluir en igual cantidad de solución salina
fisiológica, este tipo de preparaciones es conocido como montaje directo húmedo o montaje en
fresco.

 PROCEDIMIENTO PARA LAS PREPARACIONES FRESCAS Y FIJAS

EXAMEN DE MATERIAL EN FRESCO

Colocar sobre un portaobjetos limpio y desengrasado una gota de la muestra a evaluar, añadir
igual cantidad de solución fisiológica, colocar el cubreobjeto y observar.

Frotis Bacteriano
1. Extensión
 Sobre un portaobjeto de vidrio, limpio y seco se coloca una gota de material o se hace rodar un
hisopo con que se tomó la muestra y dejar secar (Material proporcionado).
2. Fijación.
Con metanol (bacterias procedentes de medio líquido).
Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca.
Esperar a que el metanol se evapore completamente.

3. Tinción simple
Una vez realizada la fijación se añaden unas gotas de azul de metileno o lugol y se deja
reposar durante un minuto. Transcurrido el tiempo se lava con agua y se deja secar al aire.
4. Tinción de Gram
Para la tinción de gran partimos de la muestra fijada y se cubre el portaobjetos con violeta
cristal y dejar en contacto sin que se seque durante 1 minuto. Eliminar el exceso colocando en
posición vertical el portaobjeto. Enjuagar el portaobjetos con agua. Cubrir el portaobjetos con
lugol y dejar en contacto, sin que se seque, durante el doble del tiempo que estuvo en contacto
con el cristal violeta. Enjuagar el porta objetos con agua, lavar con alcohol-acetona y retirar el
exceso. Cubrir el porta objetos con el colorante de contraste (safranina) y dejar en contacto
durante 30 seg. Sin que se seque. Enjuagar con agua corriente, secar suavemente con un
papel absorbente o al aire. Para las muestras líquidas con microorganismos dejar secar al aire.
Observar al microscopio.

Continuación
Frotis en fresco con azul de metileno
PARA OBSERVAR HONGOS
Colocar una gota de la muestra de hongo en solución fisiológica, agregar una gota de azul de
metileno, colocar el cubre objetos sobre la muestra y observar en el microscopio.