E.L.I.S.

A
ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY

(ENSAYO POR INMUNOABSORCIÓN LIGADO A ENZIMAS)

FUNDAMENTO

o Método analítico que se basa en la reacción Ag-Ac especifico.

o Marcaje con enzima indicadora unida a un Ag o Ac, que

produce productos coloreados.

o Las enzimas son capaces de modificar al sustrato en presencia

de un cromógeno, produciendo un producto coloreado que es
detectado visualmente o por un espectrofotómetro.
 Antígeno / Anticuerpo
ANTICUERPOS: proteínas producidas en las células plasmáticas de los vertebrados
como parte del sistema inmunitario para determinar y para neutralizar objetos no
nativos como bacterias y virus, tiienen forma de “Y” grandes.

ANTIGENO: Sustancia que al introducirse en el organismo induce en este una

respuesta inmunitaria, provocando la formación de anticuerpos.
 E.L.I.S.A
CLASIFICACION:
O
ELISA DIRECTO
Detención de antígenos

ELISA INDIRECTO
Detención de anticuerpos

ELISA “SANDWICH”
 ELISA DIRECTO
Procedimiento simplificado:

o 1º El antígeno se inmoviliza sobre una microplaca.

o 2º Se añade un anticuerpo primario marcado con una enzima que se unirá al antígeno de
interés.
o 3º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará un color observable a
simple vista y cuantificable mediante un espectrofotómetro.
 METODO INDIRECTO
El procedimiento simplificado :

o 1º El antígeno se inmoviliza sobre una microplaca.

o 2º Se añade un anticuerpo primario sin marcar que se une al antígeno de interés.

o 3º Se añade un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo
primario.

o 4º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que
permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.
 ELISA TIPO SÁNDWICH

Procedimiento simplificado :

1º El anticuerpo de captura se inmoviliza sobre la microplaca.

2º Se añade la muestra que contiene el antígeno de interés que se unirá al anticuerpo de captura.

3º Se añade el anticuerpo de detección que se unirá al antígeno unido a su vez al anticuerpo de captura.

4º En caso de que el anticuerpo de detección vaya conjugado a una enzima, procederemos directamente con el paso 5º . En caso
contrario, será necesario añadir un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo de detección.

5º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que permitirá la detección y/o cuantificación
del antígeno de interés.
 USOS
o VIH

La prueba ELISA puede usarse para diagnosticar las siguientes

afecciones:

oVIH (virus que causa SIDA)

oEnfermedad de Lyme

oAnemia perniciosa

oRickettsiosis exantemática de Ricketts

oRotavirus

oCarcinoma escamoso

oSÍFILIS

oToxoplasmosis

oVirus varicela zóster (que causa varicela y culebrilla)

oUsado en la industria alimentaria para descubrir la presencia y los

niveles de contaminantes potenciales del alergénico de la comida.

 VENTAJAS

ADAPTABLE A LAS
CARACTERÍSTICAS DE
CUALQUIER LABORATORIO
SE UTILIZA POCA CANTIDAD DE
MUESTRAS BAJO COSTO
ALTA
SENSIBILIDAD RÁPIDO FIABLE