Staphylococcus

Reino: Bacteria
División:Firmicutes
Orden: Bacillales
Familia: Staphylococcaceae
Genero: Staphylococcus
 Cocos gram positivos de 0,5 a 1,5 um de diámetro.

 Se agrupan en forma irregular (racimos).

 No móviles, no forman esporas.

 Anaerobios facultativos, fermentan la glucosa.

 No son exigentes en cuanto a sus requerimientos nutritivos.

 Crecen en medios con 10% de ClNa

 18 – 40 oC (óptima entre 30 - 37 oC)

 Se conocen un total de 32 especies y 15 subespecies en el género, con 16

especies y 2 subespecies halladas en personas
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE
STREPTOCOCOS
MUESTRAS IMPLICADAS EN
EL DIAGNOSTICO
Piodermitis, sinusitis, faringitis,
otitis, oftalmias, uretritis, vaginitis, EXUDADOS Y
enfermedades nosocomiales SECRECIONES

Endocarditis, septicemia
SANGRE

Pielonefritis, uretritis, cistitis ORINA

AG
AR
SA
NG
RE
AGAR MACCONKEY
AGAR MANITOL SALADO
CO
LO
RA
CIO
N
GR
AM
Tincion gram

La tinción de Gram o coloración de Gram es un

tipo de tinción diferencial empleado en
bacteriología para la visualización de bacterias,
sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre
al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938),
que desarrolló la técnica en 18841. Se utiliza
tanto para poder referirse a la morfología celular
bacteriana, como para poder realizar una primera
aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose bacterias grampositivas a las que
se visualizan de color morado, y bacterias
gramnegativas a las que se visualizan de color
rosado y rojo.
Bacterias gram positivas y gram negativas

Se denominan bacterias grampositivas, o bacterias Gram-positivas, aquellas

bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram.​Esta
característica química está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura
celular, por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de
los principales grupos de bacterias.Las restantes son las bacterias gramnegativas.

La envoltura celular de las bacterias grampositivas comprende la membrana

citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de
peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana
citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de
peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable
de retener el tinte durante la tinción de Gram. A diferencia de las bacterias
grampositivas, las gramnegativas presentan una segunda membrana lipídica
externa a la pared celular.
Pasos en la tinción gram
• Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de
algodón).
• Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
• Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
• Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
• Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El
lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar
en la pared de las células bacterianas.
• Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos
segundos.
• Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir las
gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con un tono
rosado o rojo. Lavar con agua.
Se visualizarán de color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram
negativas.
Pasos para la tinción gram
CLASIFICACIÓN

• S. Aureus
COAGULASA
POSITIVO

• S. Epidermidis
COAGULASA • S. Saprophyticus
NEGATIVO •
•
S. Capitis
S. Haemoliticus
Identificación Pruebas bioquímicas

Las pruebas o ensayos bioquímicos son

aquellas reacciones que ponen en evidencia
la existencia de una enzima o pasos
metabólicos determinados, y que muchas
veces nos permiten llegar a la identificación
a nivel de especie. Ahora enumeraremos las
pruebas bioquímicas necesarias para la
identificación de los estafilococos.
 PRUEBA DE LA
CATALASA
Separar Staphylococcus y Micrococcus (catalasa positivos) de los
géneros Streptococcus y Enterococcus (catalasa negativos).

Se coloca una gota de H2 O2 al 3% sobre un portaobjetos y luego se

transfiere una porción de colonia sobre el H2 O2 realizándose una
emulsión. En lo posible debe tomarse la colonia a partir de un medio sin
sangre, ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden
falsear los resul tados.

El desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva

PRUEBA DE LA COAGULASA
permite separar S. Esta actúa directamente
aureus, que posee sobre el fibrinógeno
coagulasa, de las otras provocando la formación
especies de S. aureus posee dos de coágulos o grumos
estafilococos que tipos de coagulasa cuando se mezcla una
genéricamente se las suspensión bacteriana
denomina estafilococos con plasma citratado
coagulasa negativos (test en lámina)

Entre un 10 a 15% de las S. Aureus

Mientras el test en tubo cepas de S. aureus se
es definitivo, el test en mostrarán negativas en
lámina nos sirve como el test en lámina, por lo
una rápida y económica cual en esos casos se
técnica de tamizaje hace necesario realizar
(screening). S. Epidermidis
un test en tubo.
PRUEBA DE OXIDASA

Esta prueba sirve para
determinar la presencia de
enzimas oxidasas. Se debe Se toma una pequeña
a la presencia de un cantidad de coultivo y se
Se usa para diferenciar a
sistema citocromooxidasa transfiere a un trozo de
Staphylococcus (OXIDASA
que activa la oxidación del papel filtro con oxidasa. Se
NEGATIVA) de Micrococcus
citocromo el cual es observara la presencia
(OXIDASA NEGATIVA)
reducido por el oxígeno violeta en caso de ser
molecular produciéndose positivo.
agua o peróxido de
hidrógeno 
PRUEBA DE RESISTENCIA
A LA BACITRACINA
Micrococcus y
Staphylococcus ( R
stomacoccus (S)
) resistente a la
sensibles a la
bacitracina
bacitracina

Se realiza sobre
placas de agar Cualquier halo de
sangre inoculadas inhibición se
en superficie con considera positivo
disco de 0.04U de
Bacitracina
  Sensibilidad del microorganismo a la NOVOBIOCINA.

RESISTENCIA A LA  Diferencia entre Gram positivos CATALASA

POSITIVA.
NOVOBIOCINA (5ug)  Staphylococcus Aureus
 Staphylococcus Saprophyticus
 Staphylococcus Epidermidis.
RESISTENTE: Un halo de
inhibición de crecimiento
menor o igual a 16
TEST DE DNAsa

S. Epidermidis Permite diferenciar S.

aureus que posee DNAsa
de otras especies del
S. Saprophyticus género Staphylococcus.
NEGATIVO
S. Haemolyticus Interpretación de
resultados: la formación
PRESENCIA de un halo transparente
DE DNAsa S. Capitis alrededor de la siembra

POSITIVO S. Aureus