PERÚ Ministerio de Salud Instituto Nacional de

Salud
 

UNIDAD III
PROCESAMIENTO DE LA
BACILOSCOPIA

TEMA 3
TINCIÓN: OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA, LECTURA DE
EXTENDIDOS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

Blgo. Eddy Valencia Torres.

Laboratorio de Referencia Nacional de Micobacterias
Centro Nacional de Salud Pública
Instituto Nacional de Salud
evalencia@ins.gob.pe
Primer Paso: Coloración - Técnica de Ziehl
Neelsen
• Colocar sobre el soporte de coloración (varillas de vidrio) la serie de
láminas fijadas con el extendido hacia arriba, separadas una de la otra
con el número hacia el operador.
• Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con colorante
fucsina básica fenicada, previamente filtrada. No use colorante sin
filtrar.
• Calentar suavemente con la llama de un hisopo de algodón
humedecido en alcohol (no calentar con mecheros), por debajo de los
extendidos, hasta la emisión de vapores, repetir el proceso por tres
veces, no debe hervir el colorante.
Si el volumen del colorante disminuye por evaporación, agregar hasta
cubrir totalmente el extendido y dejar enfriar.
Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. En actualización, 2018
 Primer Paso: Coloración - Técnica de Ziehl
Neelsen

• El tiempo mínimo de coloración con fucsina

básica es de 5 minutos.
• Con una pinza levantar la lámina
cuidadosamente, eliminar el colorante
inclinándola hacia adelante, dejar caer el agua
de caño a baja presión sobre la parte que no
tiene el extendido, girar la lámina y lavar con
cuidado la parte posterior.
 Segundo Paso: Decoloración
• Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la
solución de alcohol ácido durante dos minutos.
• Enjuagar con agua a baja presión, cuidando de no desprender la
película que formada en el extendido.
• Se considera decolorado el extendido, cuando se observa
coloración rosa pálido. Si se observa coloración rosado intenso
o cúmulos rojos volver a decolorar nuevamente, efectuando
movimientos en vaivén de la lámina.
• Eliminar el exceso de agua inclinando la lámina.

Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. En actualización, 2018

 Tercer Paso: Coloración de fondo
• Cubrir la superficie del extendido con el colorante azul
de metileno, previamente filtrado, durante 30 segundos
a un minuto.
• Eliminar el azul de metileno y lavar cada lámina con
agua a baja presión, por ambos lados (el que tiene el
extendido, como el otro lado), y limpiar la parte inferior
con algodón.
• Colocar las láminas coloreadas en orden numérico sobre
el soporte y dejar secar al medio ambiente.
• Verificar la numeración de la lámina y si es necesario
volver a numerar antes de la observación al
microscopio.
Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. En actualización, 2018
 Observación microscópica, lectura de
extendidos e interpretación de resultados
• La observación microscópica tiene dos objetivos importantes:
a. Determinar si en el extendido hay bacilos ácido alcohol
resistentes (BAAR).
b. Establecer el número aproximado de bacilos en los
campos observados.
• Características morfológicas del bacilo de la Tuberculosis
• Los BAAR se observan como bastoncitos delgados,
ligeramente curvos, teñidos de rojo, generalmente con gránulos
más coloreados en su interior, aislados, en parejas o en grupos
sobre un fondo azul, miden entre 1 y 10μm de largo.

Fotos: Manual de la Baciloscopia, INS. En actualización, 2018

 Lectura de láminas: es importante tomar en cuenta
las siguientes indicaciones
• Ubicar sobre una mesa, el Microscopio y todos los elementos que se requieren
para la lectura: Aceite de inmersión, Papel lente, Hoja de registro y lapicero,
Caja para conservar láminas coloreadas
• Colocar una gota de aceite de inmersión en un extremo del extendido, sin
tocar la muestra con el gotero.
• Usando el ocular 10X y objetivo de inmersión de 100X enfocar la muestra, y
examinar avanzando de izquierda a derecha del extendido, y observando un
mínimo de 100 campos útiles (un analista capacitado hace aproximadamente
en 5 minutos).
• Se considera campo microscópico útil, aquel en el cual se observa elementos
celulares de origen bronquial (leucocitos, fibras mucosas y células ciliadas).
Los campos en que no aparezcan dichos elementos, no deben ser considerados
en el conteo durante la lectura.
 Lectura de láminas
Es importante tomar en cuenta las indicaciones siguientes
• Cada campo microscópico, se debe observar en superficie y en  1  0 0  0  2  1  1  0  0   4

profundidad, para lo cual se utilizará permanentemente el micrométrico.  0 1  2  0  0  3  1  1  0  0 

                   
• Contar el número de campos y el número de bacilos observados. Podría                    
                   
utilizarse como ayuda una hoja con cuadricula de 10 por 10 cuadrados,                    
representando los 100 campos microscópicos, donde se debe anotar en  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
cada cuadrado el N° de BAAR observados, en caso de no observar                    
                   
BAAR anotar 0.
 Lectura de láminas
Es importante tomar en cuenta las indicaciones siguientes
• Si en una lámina se encuentra menos de 5 bacilos en 100
campos microscópicos, debe ampliarse la lectura a 100 campos
más. Si el resultado persiste, realizar otro extendido de la
misma muestra.
• Si la lectura del segundo extendido no modifica el resultado
del anterior se debe informar el número de bacilos encontrados
anotando en el libro de registro el hallazgo y solicitar nueva
muestra o derivar la muestra para cultivo. Fotos: Manual de la Baciloscopía, INS. En
actualización, 2018
• Al término de la lectura retirar la lámina de la platina del
microscopio, limpiar el exceso de aceite del objetivo de
inmersión con papel lente humedecido con alcohol
isopropílico, limpiar el aceite de inmersión de la lámina y
guardar.
 INFORME DE RESULTADOS
Se recomienda la siguiente escala semicuantitativa:
 
___________________________________________________________
(- ) No se encuentran BAAR * en 100 campos microscópicos observados.
 
(1-9) Se observan de 1 a 9 BAAR en 100 campos observados.
 
(+ ) Se observan de 10-99 BAAR en 100 campos observados.
 
(++) Se observan de 1 a 10 BAAR por campo, en 50 campos observados.
 
(+++) Se observan más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados.
______________________________________________________________
* BAAR: Bacilos Acido Alcohol Resistentes
PERÚ Ministerio de Salud Instituto Nacional de
Salud
 

GRACIAS

Eddy Valencia Torres, Blgo.

Laboratorio de Referencia Nacional de Micobacterias
Centro Nacional de Salud Pública
Instituto Nacional de Salud
evalencia@ins.gob.pe