UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
PROGRAMA ACADÉMICO DE MICROBIOLOGÍA Y LABORATORIO
CLÍNICO

TÉCNICA DE TINCIÓN
TRICRÓMICA DE MASSON

PRESENTADO POR:
• PAOLA YAMILED CHOQUE APAZA

D R . D A N T E M A M A N I S A I R I T U PA C
 ANTECEDENTES

• Masson fue muy conocido por sus trabajos

sobre los tumores del cerebro y el sistema
nervioso, además de su reconocimiento
por el desarrollo de la técnica de
coloración tricrómica, que se convirtió en
la estándar de los laboratorios de patología
de la época.
Masson, Claude L. Pierre
 ¿QUÉ ES?

• Técnica de coloración especial que

permite visualizar claramente las fibras
de colágeno tipo I (fibras gruesas o
haces).
• Diseñados para dar resistencia;
también evidencia, aunque en menor
intensidad, las fibras reticulares.
Fibras de colágeno
 ¿PARA QUÉ SIRVE?

• Usadas frecuentemente para

diferenciar entre colágeno y
músculo liso en tumores.
• Identifica incrementos en
tejidos colagenosos (cirrosis
hepática).
Tumor de músculo liso
 ¿CÓMO SE UTILIZA?

• Esta tinción emplea tres

colorantes, hematoxilina, fucsina
y verde luz.
• Pone de manifiesto las fibras de
colágeno, y el conectivo en
general, respecto a otros.
¿DÓNDE SE UTILIZA?
• En laboratorios para la
diagnosis de procesos
tumorales.
• Hay muchas variantes de esta
tinción adaptadas a necesidades
particulares de cada
laboratorio.
 FUNDAMENTO
• Primeramente, se tiñen las secciones con un tinte ácido tal como
la fucsina. Todos los elementos acidófilos del tejido tales como
el citoplasma, el músculo y el colágeno se unirán a los tintes
ácidos. Las secciones entonces se tratan con ácido
fosfotúngstico y/o fosfomolíbdico. Ya que el citoplasma es
mucho menos permeable que el colágeno, los ácidos
fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos permiten que la fucsina
difunda del colágeno pero no del citoplasma.

• Los ácidos fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos tienen numerosos

grupos ácidos que probablemente actúen como medio de unión
entre el colágeno y el azul de la anilina, que es el tinte del
colágeno. Probablemente, el pH de la solución
fosfotúngstico/fosfomolíbdico también aumente la coloración y
ayude al colágeno en la difusión o el retiro de los colorantes.
 MATERIALES

• Cubeta de tinción
• Cubreobjetos
• Portaobjetos
• Pizeta
 REACTIVOS
• Xileno
• Etanol de 50°, 70°, 80°, 90°, 96° y 100°
• Hematoxilina férrica de Weigert
• Fucsina escarlata
• Acido fosfomilíbdico al 5%
• Verde luz
• Agua destila
• Agua corriente
• Medio de montaje
 PREPARACIÓN DE REACTIVOS

Hematoxilina férrica de Weigert (I)

• Colorante aniónico
• Actúa como mordiente
Aplicación de alcohol acido para la
diferenciación de la tinción nuclear.
 PREPARACIÓN DE REACTIVOS

Solución de Biebrich scarlett-

Fucsina ácida (II)
• *Colorante aniónico
 PREPARACIÓN DE REACTIVOS

Solución ácido fosfomolíbdico-fosfotúngstico

(PMA-PTA)
• Actúa como mordiente y diferenciador
• Solución muy aniónica y de moléculas
grandes
• Saca el exceso de colorante y se queda unido
al tejido conectivo favoreciendo que el azul
de anilina se una por medio del ácido.
 PREPARACIÓN DE REACTIVOS

Azul de anilina o azul de

metileno (III)
• Colorante catiónico
 TÉCNICA DE TINCIÓN
Se recomienda muestras que han sido fijadas
en solución de Bouin e incluidas en parafina
(secciones de unas 8 µm adheridas a
portaobjetos recubiertos con gelatina).
• 2x10 min en xileno para desparafinar
• 2x10 min en etanol 100º para hidratar.
• 10 min en etanol 96º para hidratar.
• 10 min en etanol 80º para hidratar.
• 10 min en etanol 50º para hidratar.
 TÉCNICA DE TINCIÓN
• 5 min en H2O destilada (si el tejido no se fijó
con BOUIN, sumergir las secciones en la
solución durante 24 h a T° ambiente o 1 h a 56
- 60 ºC.
• 3x3 min en H2O destilada.
• 5 min en Hematoxilina férrica de Weigert (10
min si el colorante lleva más de 5 días hecho).
• 5 min en agua corriente para diferenciación
(cuando vire de color se puede comprobar si la
tinción es adecuada, pudiendo volver a meter
las muestras si no es suficientemente intensa).
• 3 min lavado en H2O destilada.
 TÉCNICA DE TINCIÓN

• 5 minutos en Fucsina Escarlata.

• 2 min lavado en agua destilada (comprobar si
la coloración es satisfactoria).
• 15 min en ácido fosfomolíbdico al 5% en agua
destilada (imprescindible para que el verde luz
tiña correctamente el tejido).
• 10 min en verde luz al 2% (puede ser sustituido
por azul de anilina)
 TÉCNICA DE TINCIÓN
• Diferenciación con Ac. Acético 5% en agua
destilada (se necesita de 1 minuto para
demostrar si la muestra esta bien teñida con
verde luz. Si hay exceso de tinción, basta con
alargar el proceso de deshidratación (etanol
96%). De lo contrario, se retrocede y vuelve a
utilizar el Ácido fosfomilíbdico y el verde luz.
• 2x10 min en xileno
• Montado con medio de montaje
 OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

Sección de parafina de 8 µm de grosor teñidas con tricrómico de Masson.

Zona profunda de la lengua de rata.
 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

• Colágeno: verde azulado.

• Músculo: rojo, marrón.
• Citoplasma: rosado, fucsia.
• Núcleos: negro.
• Citoplasma: rosado.
 RECOMENDACIONES

• En este protocolo se puede

volver hacia atrás sin
problemas, pero no más de
tres o cuatro veces puesto
que el tejido va perdiendo la
capacidad de retener los
colorantes.