Aphelenchoides besseyi Christie

(Nematoda: Aphelenchoididae),
RESUMEN agente causal del amachamiento
OBJETIVO
del frijol Phaeoisariop
sis griseola
común el objetivo del presente trabajo fue identificar el agente Sacc.
Se realizo una causal del amachamiento del frijol y su relación con los
identificación • Análisis para detectar ARN de doble
cadena (dsRNA) de origen viral síntomas observados en el campo.
en 2008 Ferraris ,
• DAS-ELISA INTRODUCCION (mancha
-2009 del • Cumplimiento de los postulados de angular),
agente causal Koch
del mediante • Prueba de patogenicidad.
El frijol (Phaseolus vulgaris L.) es un alimento
4 pruebas: Thanateph
básico en América Central y constituye la principal orus
fuente de proteína vegetal, así como la de menor cucumeris
costo de que dispone la población. Franc,

El análisis para la detección de dsRNA reveló la

presencia de dos bandas de aproximadamente Las plantas afectadas por esta enfermedad En Costa Rica los productores de Donk
1100 y 3200 pb, coincidentes en tamaño para presentan coloración verde oscura, hojas frijol enfrentan problemas (mustia
un miembro del género Bromo virus, aunque no coriáceas, guía anormalmente más larga y hilachosa)
fitosanitarios entre los que
se pudo establecer su asociación con el diversos grados de deformación foliar sin destacan enfermedades causadas
amachamiento debido a que ese patrón de mostrar ningún tipo de mosaico o variegación. Colletotrich
por:
bandas solo se presentó en el 55,5% de las um
muestras de plantas enfermas analizadas. lindemuthi
anum Sacc.
Mediante la prueba de DASELISA no se detectó
el Cowpea chlorotic mottle virus (CCMV) en Por medio de análisis de microscopía
electrónica, serológicos y de electroforesis
ninguna de las muestras de plantas con de ácidos nucleicos virales, sugirieron que el Aphelenchoides
amachamiento analizadas lo que confirma que besseyi Christie
bromovirus Cowpea chlorotic mottle virus (falsa mancha
ese virus no es causante de la enfermedad. (CCMV) era el agente causal de la angular)
Cowpea
enfermedad. chlorotic
mottle virus
 MATERIALES Y
METODOS
Análisis de ARN de doble cadena
(dsRNA)
Prueba de ELISA de doble anticuerpo
tipo sandwich (DAS ELISA)
Figura 1:Detección de ARN doble cadena en muestras de plantas Postulados de Koch
de frijol con amachamiento. Líneas 1-4: muestras de Veracruz,
Pérez Zeledón; Líneas 5-6: muestras de Las Brisas, La Cruz; Líneas
7-10: muestras de El Águila, Pérez Zeledón; Líneas 11-15: Prueba de patogenicidad con el
muestras de La Garita, La Cruz; Línea P: marcadores de peso nematodo A. besseyi
molecular.
RESULTADOS Y
La tinción se hizo con bromuro de etidio y se
DISCUSION
visualizó el gel en un transiluminador con ayuda del
software GeneSnap (Syngene).
Se analizaron un total de 88 muestras y seis controles
con anticuerpos específicos para la detección del
CCMV
se aplicaron los postulados de Koch para determinar la
patogenicidad de este nematodo:
Se sembraron semillas de frijol sanas de la variedad Cabécar en
potes plásticos de 1000 mL, cuyas plántulas fueron inoculadas
con el nematodo a los 14 días después de la siembra.

Determinar que existe una 3) Inocular el

asociación constante entre microorganismo en un 4) Reaislar el mismo
2) Aislar el microorganismo
el microorganismo y la hospedante sano y organismo del punto 2
enfermedad reproducir los síntomas
CONCLUSIONES

La prueba de patogenicidad y el cumplimiento de

los postulados de Koch confirmaron que el
nematodo A. besseyi es el verdadero agente
causal del amachamiento y a su vez descartaron
la posibilidad de que otros organismos estuvieran
asociados con la enfemedad, como el fitoplasma
propuesto por Moreira etal.