EXTRACCIÓN DE ADN

OBJETIVO

• Separar el ADN de otros componentes celulares (como la

membrana o las proteínas)
• Con el fin de poder estudiarlo o manipularlo.

•
Alberto Checa Rojas. (2017). Extracción de ADN. 2020, Junio 3, Conogasi.org
Sitio web: http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn-2/
 EXTRACCIÓN DE ADN

• La extracción consiste en el aislamiento y purificación de

MOLÉCULAS DE ADN
• Se basa en las características fisicoquímicas de la molécula.
• Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que
le confiere al ADN una carga neta negativa y lo hace altamente polar,
• Características que son aprovechadas para su extracción. 

https://editors.eol.org/eoearth_images/e/e3/Dnabasepairs.gif
 EXTRACCIÓN DE ADN

• Tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite
disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de
la molécula.
• En presencia de ETANOL, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los
grupos fosfato.
• Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como Na+ que reducen las
fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que el ADN
precipite.
• Por otro lado, la carga neta negativa del ADN le permite unirse a moléculas y
matrices inorgánicas cargadas positivamente.
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/a5/Phosphodiester_Bond_Diagram.svg/250px-
Phosphodiester_Bond_Diagram.svg.png
 EXTRACCIÓN DE ADN

• Se han diseñado distintos protocolos con la finalidad de obtener

una cantidad y calidad de ADN adecuada
• Garantizar la eliminación de inhibidores potenciales que dificulten el
tratamiento posterior a la molécula.
• En los años 50 se utilizaban solventes orgánicos para SEPARAR LAS
PROTEÍNAS DEL ADN
• Una vez suspendido en la fase acuosa, aislarlo por precipitación con etanol.
• Estos métodos requieren preparar soluciones y la extracción puede tomar
dese unas horas hasta varios días
• homogenización del tejido, lisis celular, separación de proteínas y lípidos,
precipitación de redisolución del ADN. 
 EXTRACCIÓN DE ADN

• A partir de los años 90 se introdujeron al mercado KITS DE

EXTRACCIÓN 
• Utilizan matrices inorgánicas compactas cargadas positivamente
capaces de retener varios microgramos de ADN y separarlos del resto
de las biomoléculas, permitiendo obtener un extracto libre de
inhibidores.
• Durante la Extracción del ADN (-) adsorbe o une a la matriz selectiva
de manera reversible y se mantiene unido a ésta durante la remoción
de lípidos, proteínas y metabolitos secundarios
• Posteriormente la molécula se libera de la matriz.
https://blog.analitek.com/hubfs/magpurix-purification-1.png
 PUNTOS IMPORTANTES

• La selección del método de extracción es un paso fundamental en las

técnicas moleculares y depende del organismo en el que se realiza el
estudio, el tejido disponible y su estado de conservación.
• La técnica que se aplicará posteriormente, así como la infraestructura
de los laboratorios, los recursos económicos y tiempo para obtener
resultados.
• Independientemente del método seleccionado es recomendable
encontrar un equilibrio entre pureza y rendimiento de acuerdo a la
aplicación posterior.
REACTIVOS Y MATERIALES

Proteinasa K: es una
Material biológico: células
enzima que sirve para
en cultivo, tejido de
romper/degradar a las
biopsias, órganos o fluidos
proteínas que están unidas
corporales.
al ADN.

Fenol: es un disolventes Etanol: es un disolvente

orgánicos que sirven para que no se mezcla con el
separar las proteínas ADN por lo tanto se usa
celulares del ADN para precipitar el ADN

RNAsa: proteína (enzima)
que rompe el ARN.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf
 Lisar o romper nuestras
células para extraer el
ADN y todos los
componentes celulares
PROCEDIMIENTO libres.
Se inactiva la enzima de
ARN con calor y después
se resuspende el ADN en
agua ultra pura con el fin
de manipularlo mejor
Cuantificación de ADN: se mide la
concentración del ADN usando un
equipo llamado espectrofotómetro
para conocer la cantidad de ADN
total de nuestro material biológico.
Degradar las proteínas
Después se separan los
principalmente las unidas
diferentes componentes
al ADN y las del
celulares del ADN con
citoplasma usando proteasa
disolventes orgánicos
K.
Como el etanol precipita
también al ARN (por que
son polímeros muy
Precipitar con etanol  y/o
similares) se debe colocar
 centrifugación 
una RNAsa, el cual rompe el
ARN con el fin de dejar solo
ADN
CUANTIFICACIÓN DE ADN

http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf
https://slideplayer.es/slide/5578857/2/images/25/Cuantificaci%C3%B3n+de+ADN.jpg