Cultivo de Meristemas

Principales métodos de Micropropagación

 Meristemas
Los meristemas son grupos de células indiferenciadas que
retienen la capacidad de dividirse durante todo el ciclo de
vida de una planta.
Los meristemas determinan el crecimiento de
la planta y dan origen a sus diferentes órganos
 Aplicaciones
• Posibilitan la micropropagación de diferentes
especies vegetales. Sin embargo, toma
mucho más tiempo la producción de brotes.
• Constituyen el explante ideal para liberar de
patógenos in vitro a plantas infectadas por
virus, hongos y/o bacterias.
• Son ampliamente utilizados como explantes
para la criopreservación y conservación de
germoplasma.
Domo Meristemático + primer juego de hojas
Meristema apical

Primordios foliares
El cultivo de meristemas no incluye los
meristemas laterales. Solo el meristema apical.

eTjido para el cultivo de

meristemas

eYmas laterales
El cultivo de - El domo meristemático no está vascularizado
meristemas (muchos patógenos se translocan por los tejidos
facilita la de conducción).
eliminación de
patógenos - El número de partículas virales es menor en los
meristemas que en otros tejidos (White, 1934).

- La velocidad de división celular a nivel del

meristema es mayor que la velocidad de
replicación de un virus.

- Las primeras plantas saneadas a partir del

cultivo de meristemas fueron obtenidas por
Morel y Martin entre 1952 y 1957 a partir de
cultivos de papa y Dahlia.
 Limpieza de virus

Existen varias alternativas complementarias al cultivo

de meristemas, para obtener plantas libres de virus:
1. Termoterapia.
2. Quimioterapia.
 Termoterapia
Talluelos in vitro son colocados en una camara de crecimiento
por 3-6 semanas a una temperatura de 34-38 oC.
Después de la termoterapia, los meristemas se extraen para
el cultivo.
 eTrmoterapia
Termoterapia
Esta práctica no es efectiva para todos los virus por igual,
depende del virus y del hospedante.
Se ha observado que un mismo virus en distintas especies se
inactiva en forma diferente. Generalmente, esta práctica ha
resultado más efectiva en virus de partículas alargadas, y menos
eficiente para virus poliédricos.
En algunos casos las bajas temperaturas (5°C) seguidas del
cultivo de meristemas fueron utilizadas con éxito para la
eliminación de virus.
Esta práctica fue aplicada principalmente en el caso de viroides,
los cuales se desarrollan bien con altas temperaturas.
 Quimioterapia

El uso de antivirales sería la solución definitiva para las

enfermedades virales; sin embargo, hasta ahora no se ha
encontrado un producto que por sí solo cumpla esta
función.
Algunas sustancias químicas ocasionan una disminución en
la concentración de virus existentes en la planta y atenúan,
o suprimen, los síntomas típicos de los virus, pero, una vez
suspendido el tratamiento se recupera la concentración
original.
Han sido evaluadas diferentes sustancias pero la más
utilizada es el Ribavirin o Virazole.
 Quimioterapia

Un problema importante con el Virasole es su fitotoxicidad, que a

su vez depende de la dosis empleada y de la especie de planta
utilizada.
El éxito del proceso en muchos casos requiere de varios meses
de tratamiento y la fitotoxicidad del antiviral constituye una
dificultad.
aTmbién se han obtenido plantas libres de virus a partir de callos a
los que previamente se les aplicó Virasole, aunque esta práctica
no ha sido eficiente en todos los casos.
 Quimioterapia

Un modo adecuado de emplear los antivirales es

combinándolos con el cultivo de meristemas.
aTmbién han sido aplicados directamente a los meristemas
in vitro.
En este caso, el antiviral es colocado en medio del cultivo
en concentraciones variables, que van desde 10 a 50 mg/l,
y en algunos casos hasta 100 mg/l. Las plantas son
mantenidas bajo la acción del antiviral por largos períodos
que incluyen varios subcultivos.
 Piña

 Tamaño del meristemo: 2 mm

 Intensidad luminosa: 3000 lux
 Fotoperiodo: 12 horas de luz
 Temperatura: 28 +/-4°C
 Medio de iniciación y establecimiento:
(MS)
• BAP : 2.0 mg/l + ANA: 1 mg/l
 Medio de enraizamiento: (MS)
• ANA : 2 mg/l
Resultado: Plantas asépticas de piña
 Plátano

 Tamaño del meristemo: 0.5-0.7 mm

 Intensidad luminosa: 2000 lux
 Fotoperiodo: 16 horas de luz
 Temperatura: 26-28°C
 Medio de iniciación: Murashige & Skoog (MS)
• BAP :1.0 mg/l
 Medio de multiplicación: (MS)
• BAP :3.0 mg/l
 Medio de enraizamiento: (MS), sin hormonas
Resultado: Plantas de plátano asépticas.
 Manzano
Tratamiento con calor: 37°C x 2 semanas
Tamaño del meristemo: 0.8-1.0 mm
Intensidad luminosa: 3000 lux
Fotoperiodo: 16 horas de luz
Temperatura: 26°C
Ribavarin: 25 ug. x 2 subcultivos (40 días)
Medio de iniciación: Murashige & Skoog
• BAP :1.0 mg/l
Resultado: Plantas de manzano libres de virus.
 Producción de plantas de ajo ( Allium sativum L.) libre
de virus
• Entre las enfermedades que afectan a este cultivo, los virus
son los responsables de las mayores pérdidas (entre un 20
y 80% de disminución en el peso de los bulbos).
• Las infecciones son causadas por un complejo viral que
incluye Potyvirus (Onion yellow dwarf virus, OYDV , y Leek
yellow stripe virus, L
YSV); Carlavirus (Garlic common latent
virus, GCL
V y Shallot lantent virus, SLV), y Allexivirus (Garlic
virus-A, -B, -C, -D, -E, -X, GarV -A-B -C- D- E -X; Garlic
mite-borne filamentous virus, GarMbFV).
Producción de plantas de ajo ( Allium sativum L.) libre
de virus

 Para ello dientes de ajo fueron sembrados en terrinas con

una mezcla de tierra/mantillo/arena (1/1/1) y mantenidos
en una cámara a 36ºC.

 Cuando plantas de ajo Blanco fueron sometidas 60 días a

36°C y luego se hizo el cultivo de meristema, se
regeneraron pocas plantas, pero las que se obtuvieron
resultaron «libres de virus».
A: planta en medio de iniciación.
B: micropropagación.
C: bulbillos obtenidos in vitro (microbulbillos).
D: planta transferida a tierra y mantenida en cámara húmeda.
E: planta adaptada a las condiciones ex vitro.
F: plantas en suelo bajo jaula antiáfidos.
G: multiplicación a gran escala bajo jaula antiáfidos.
H: bulbos de ajo libre de virus (arriba) e infectados (abajo).
Esquema de
producción
Plantas de ajo
libres de virus
IFFIVE-INTA,
Argentina.
 Muestra Muestra
negativa positiva

Control
Rss
Bact / ml

108

107
106

105

(+E)

(-E)
+E = Extracto de suelo sano con enriquecimiento
-E = Extracto de suelo sano sin enriquecimiento