Altas de practicas.

Equipo 6.
Practica adicional: Preparación de medios de cultivo.
Practica 2: Biofilm Observación in vivo y formación in vitro.
Practica 3 : tinción de ziehl neelsen.
Practica 4: Genero Staphylococcus aislamiento e identificación.
Practica 5 : Genero Streptococcus aislamiento e identificación.
Practica 6: Urocultivo.
Practica 7: coprocultivo
practica 8: Genero Pseudomonas aislamiento e identificación.
Practica 9: Cándida albicans. Identificación.
Preparación de medios de cultivo
Un medio de cultivo es un conjunto de componentes
que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos.
Composición
•Macronutrientes.
•Micronutrientes o elementos traza.
•Factores de crecimiento.
Preparación de medios
de cultivo

Se debe pesar la
cantidad de agar que
se va a utiliza.

Foto tomada de la web.

Preparación de medios
de cultivo.

Dejar que se hidrate

el medio.
Importante no agitar
ya que se pueden
formar grumos que
serán difíciles de
disolver.

Foto tomada de la web.

Preparación de medios
de cultivo.

Ebullir el medio .
Evitar que se
desborde ya que se
pierde volumen.

Foto tomada de la web.

 Preparación de medios
de cultivo.

Esterilizar el medio.
Se le hacen tapones a los
matraces con algodón
gasa y papel craf y se
introducen al autoclave
(15 min, 121 ºc, 1 atm.)
Preparación de medios
de cultivo.

Vaciar el medio en las

placas, dejar
solidificar, se pueden
dejar un poco abiertas
cerca del mechero
para evitar la
formación de
condensación.
Un biofilm es una estructura de microorganismos que se adhiere a
superficies vivas o inertes y está revestida por una capa protectora
segregada por los propios microorganismos.
Biofilm.

Observación in-
vivo.
Se observa la
adherencia de
bacterias gram
positivas en
células
epiteliales
bucales.
 Biofilm

Observación in-vivo

Células epiteliales
de la boca con
bacterias adheridas,
cocos
grampositivos.
Biofilm.

In-vitro.
Observación
microscópica del
biofilm.
(cocos
grampositivos)
Biofilm.

In-vitro
Observación
microscópica
del biofilm.
Practica 3 : Tinción de ziehl neelsen
La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decoloración con ácidos
fuertes después de ser coloreadas con solución de fucsina caliente, permite reunirlas bajo
la denominación general de bacterias “ácido- resistentes” o “ácido-alcohol resistentes”. La
ácido-alcohol resistencia es la capacidad de incorporar ciertos colorantes y retenerlos
después de someterlos a la acción de ácidos y alcohol y está determinada por la presencia
en la pared celular de los ácidos micólicos que son ácidos grasos de cadenas ramificadas de
alto peso molecular (60 a 70 átomos de carbono).
Las micobacterias son bacilos ácido-alcohol resistentes, cortos, ligeramente curvos. El
género Mycobacterium, incluido en esta clasificación, comprende especies patógenas
para el hombre, animales y especies saprófitas. El grado de “ácido-alcohol resistencia” es
variable entre las especies de es- te género y está relacionado muchas veces con las
condiciones culturales, no pudiendo utilizarse esta diferencia para distinguirlos entre sí.
Los bacilos “ácido-alcohol resistentes” (BAAR) se observan de color rojo al ser coloreados
con los colorantes para Ziehl Neelsen, mientras que otros gérmenes y células toman
distintos tonos de azul debido al azul de metileno que se utiliza como colorante de
contraste
 Tinción de ziehl
neelsen

-Cubrir el extendido con Fucsina

(carbolfucsina).
Flamear por debajo del portaobjeto
hasta el desprendimiento de
vapores blancos (evitar que se
produzca la ebullición por exceso de
calor).
Dejar enfriar 5 minutos y repetir el
flameado hasta nuevo
desprendimiento de vapores
blancos. Dejar enfriar 5 minutos.
Cuando esté frio, mediante el uso
de pinzas, quitar y descartar el
papel de filtro.
- Lavar con agua corriente.
- Cubrir con Decolorante para Ziehl
Neelsen. Dejar 2 minutos.
- Lavar con agua corriente.
- Cubrir con Azul de Metileno para
Ziehl Neelsen. Dejar 30 segundos.
- Lavar con agua corriente durante
30 segundos.
- Secar el extendido.
Tinción de ziehl
neelsen

Bacilos acido- alcohol

resistentes.

Se observan bacilos,
de color rojos, teñidos
con la tinción de ziehl
neelsen, estos bacilos
son acido-alcohol
resistentes.
Tinción de ziehl
neelsen

Bacilos acido- alcohol

resistentes.

Se observan bacilos, de
color rojos, teñidos con
la tinción de ziehl
neelsen, estos bacilos
son acido-alcohol
resistentes.
Practica 4: Genero Staphylococcus aislamiento e identificación
 Cocos Gram positivos que poseen tendencia a agruparse en
racimos. Tienen una forma esférica y un diámetro de alrededor de una micra.

Caracteristica S. aureus. S. saprophyticus S. epidermidis

bioquimica.
Coagulasa + - -
Susceptibilidad a la R R S
novobiocina.

Prueba de Manitol. + V -

DNAsa + - -
Staphylococcus

Prueba Coagulasa.

Cepa: S. aureus.

Resultado : positivo.
Staphylococcus

Prueba Coagulasa.

Cepa: S. saprophyticus.

Resultado : Negativo.
Staphylococcus

Prueba Coagulasa.

Cepa: S. epidermidis.

Resultado : Negativo.
Staphylococcus

Prueba :
Fermentación del
manitol.

Cepa: S.aureus.

Resultado : Positivo.

Control (-)
Staphylococcus

Prueba :
Fermentación del
manitol.

Cepa: S. epidermidis

Resultado :Negativo .

Control (-)
Staphylococcus

Prueba : Fermentación
del manitol.

Cepa: S. saprophyticus

Resultado : Positivo.

Control (-)
Staphylococcus

Control.

Susceptible

Resistente
Staphylococcus

Prueba :
susceptibilidad a la
novobiocina.

Cepa: S.aureus.

Resultado : resistente.
 Staphylococcus

Prueba : susceptibilidad a
la novobiocina.

Cepa: S. epidermidis.

Resultado : Resistente.
 Staphylococcus

Prueba: susceptibilidad a
la novobiocina.

Cepa: S. saprophyticus

Resultado : Resistente.
Staphylococcus

Prueba : DNAsa

Cepa: S.aureus.

Resultado : DNAsa
positivo .

Control: negativo.
Staphylococcus

Prueba : DNAsa

Cepa: S.saprophyticus.

Resultado : DNAsa
positivo .

Control: negativo.
Practica 5 : Genero Streptococcus aislamiento e identificación.
Cocos gram positivos en cadenas o pares.
 Pruebas de
identificación.

Catalasa.

+
-
Staphylococcus
Streptococcus

Susceptibili Prueba de Bilis Tolerancia Susceptibili Solubilidad

dad a la CAMP esculina. al cloruro dad a la en bilis.
bacitracina. de sodio. optoquina.
Punta de Neumococos.
α
flecha.β α Distingue a
↑sensibles hemolíticos. hemolíticos Enterococc
hemolíticos,
β identifica a S.
S. .(D) us. pneumoniae.
hemolíticos agalactiae. (sensible)
(A)
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Streptococcus α
Hemolíticos.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Streptococcus β
hemolíticos.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Sensibilidad a la
bacitracina.
S. pyogenes.
Muestra problema
S.agalactiae.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Sensibilidad a la
optoquina.
S. pyogenes.
Muestra problema
S.agalactiae.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Prueba de camp.

S.agalactiae. (+)

Muetra problema. (-)

S piogenes. (-)
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Solubilidad en bilis.

S.bovis: Negativo.

Neumococo: Positivo

Prueba positiva.
Neumococo, imagen
tomada de la web.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Tolerancia al NaCl.

S. bovis.

Resultado: Negativo
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Tolerancia al NaCl.

E. faecalis.

Resultado: Positivo.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Tolerancia al NaCl.

Muestra problema.

Resultado: Negativo.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Bilis esculina.

Controles

Positivo y
negativo.

Imagen obtenida de la web.

Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Bilis esculina.

E. faecalis.

Positivo.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Bilis esculina.

S.bovis.

Negativo
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Bilis esculina.

Problema

Positivo.
Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Tinción de Gram
Streptococcus.

Imagen tomada de la web.

Genero Streptococcus
aislamiento e
identificación.

Tinción de Gram
Streptococcus.
Practica 6: Urocultivo.
 El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infección sintomática del
tracto urinario o infección asintomática (bacteriuria asintomática) en pacientes
con riesgo de infección.
Está basada en la presencia de un número significativo de bacterias
(generalmente >100.000 bacterias/ml.)
Urocultivo.

La muestra se debe
sembrar en cuadricula
para que sea posible
el conteo de las UFC.

Imágenes
tomadas de la
web.
Urocultivo.

A las colonias
sospechosas se le
montan las pruebas
bioquímicas.
Urocultivo.

A las colonias
sospechosas se le
montan las pruebas
bioquímicas.
Urocultivo.

Lectura de las pruebas

bioquímicas.

TSI.

1.- A/A : Fermenta

glucosa y lactosa.
2.- K/A: Fermenta solo
glucosa.
3.- K/K H2S: no
fermenta y produce
acido sulfúrico.
4.-K/K: no fermenta
ningún azúcar.

1 2 3 4
Urocultivo.

Lectura de las pruebas

bioquímicas.

LIA

1.- K/A: no
desaminacion.

2.- K/K: desaminacion

oxidativa.

3 K/K H2S:
desaminacion con
producción de acido 1 2 3
sulfúrico.
Urocultivo.

Lectura de las pruebas

bioquímicas.

Citrato.

Cualquier coloración
azul : Citrato positivo.

(+) (-)
Urocultivo.

Lectura de las pruebas

bioquímicas.

Urea.

Cualquier coloración
rosada es: urea positivo.

(+) (-)
Urocultivo.

Lectura de las pruebas

bioquímicas.

MIO

1.- M: -, O -, I –
1*.- M:-, O-, I+

2.-M: - , O +.
2*M:-, O +, I –

3.- M:-, O+
3.- M:-, O +, I +
Practica 7 : coprocultivo
El coprocultivo es el método de elección para el diagnostico de las
infecciones bacterianas intestinales
Coprocultivo

Cepa: Salmonella
enteritidis.

Agar: S.S.

Colonias lisas,
transparentes, no
fermentadoras de
lactosa.
Coprocultivo

Cepa: Salmonella
enteritidis.

Agar: XLD.

Colonias rojas a rosadas

con o sin centro negro.
Coprocultivo.

Cepa: Shigella sonnei.

Agar: XLD.

Colonias tranparentes o
del mismo color del
medio (rojo)
Coprocultivo.

Cepa: Shigella sonnei.

Agar: S.S.

Colonias lisas,
transparentes, con o sin
centro negro, no
fermentadoras de
lactosa.
Coprocultivo.

Cepa: Shigella sonnei.

Pruebas bioquímicas.

TSI:K/A
LIA: K/A
Citrato: -
Urea:-
MIO: O + M + I-
Coprocultivo.

Cepa: Salmonella
enteritidis.

Pruebas bioquímicas.

TSI:A/A*
LIA: K/K*
Citrato: +
Urea:-
MIO: O + M + I-
practica 8: Genero Pseudomonas aislamiento e identificación.
Género de bacilos rectos o ligeramente curvados, Gram
negativos, oxidasa positivos, aeróbicos estrictos aunque en algunos casos pueden utilizar el
nitrato como aceptor de electrones. El catabolismo de los glúcidos se realiza por laruta de Etner-
Doudoroff y el ciclo de los ácidos tricarboxílicos. Algunos miembros del género son psicrófilos,
mientras que otros sintetizan sideróforos fluorescentes de color amarillo-verdoso con gran valor
taxonómico. Es común la presencia de plásmidos y no forman esporas.
Pseudomonas

Cepa: P. aeruginosa
Pseudomonas

Oxidasa : Positivo
Cepa: : P. aeruginosa

Control -
Pseudomonas

Cepa: : P. aeruginosa
Pruebas bioquimicas.

TSI K/K
LIA K/K
CITRATO +
UREA +
MIO O+M- I-
Peudomonas.

Cepa: P. flourecens
Pseudomonas

Oxidasa : Positivo
Cepa: : P. flourecens.

Control -
Pseudomonas

Cepa: P. flourecens

Pruebas bioquimicas.

TSI K/K
LIA K/K
CITRATO +
UREA -
MIO O+M- I-
Practica 9: Cándida albicans. Identificación.
 Es un hongo diploide asexual (forma de levadura).
Normalmente se encuentra en la cavidad oral, en el tracto
gastrointestinal y en la vagina. Está envuelta en un rol relevante en la
digestión de los azúcares mediante un proceso de fermentación.
Candida albicans

Medio de cultivo: Biggy.

Crecimiento de colonias
muy pequeñas, de
coloración marrón
(café).
Cándida albicans

Tubulos germinales
positivos.

Imagen tomada de la web

Candida albicans.

Clamidosporas.
Formadas por la cepa de
C.albicans.

Imagen tomada de la web