Mejoramiento Vegetal

utilizando Técnicas de Cultivo

de Tejido

Daniel N. Moriconi
Ing. Agr. (M.Sc.)
Dept. Cs. Básicas y Tecnológicas
 Métodos para acelerar programas de
mejoramiento e identificación varietal

Introducció
n
Selección
Hibridación
Vigor hibrido
Creación de

Variación
variedades

cromosómica
Mutaciones
genéticas
Cultivo de tejido
Fusión de células
Transformación
genética
Selección masal
Métodos de

EdiciónRetrocruza
genética
selección

Selección
recurrente
Cultivo de anteras
Sel. Con
marcadores
 Métodos para acelerar
programas de mejoramiento e
identificación varietal
DANIEL N. MORICONI
ING. AGR. M.SC.
UNDEC 2016

• OBTENCIÓN DE PLANTAS DOBLE HAPLOIDES

• POLINIZACIÓN Y FERTILIZACIÓN IN VITRO
• HIBRIDACIÓN SOMÁTICA
• EPIGENÉTICA
• MUTAGÉNESIS
• VARIACIÓN SOMACLONAL
• MARCADORES MOLECULARES
Oy
 Producción de haploides

 Haploidía puede intervenir en el mejoramiento de las

plantas autógamas de dos modos diferentes.
 A) Facilita la identificación y selección de mutantes
recesivos a nivel de plantas y de células.
 B) La inducción de haploides en los híbridos, seguido de un
doblamiento cromosómico permite la obtención de líneas
perfectamente homocigóticas evitando una larga serie de
autofecundaciones.
 La haploidía acelera notablemente los programas de
selección después del cruzamiento.
 diploide

Generación Esporofitica
Generación Gametofitica

haploide

Algas verdes Musgo Helecho Ginosperma Angiosperma

filamentosas
Obtención de plantas doble haploides
Mejoramiento de trigo por doble haploide

Mej.
tradicional
99,2 %
homología

100 %
homología

Doble
haploide
 Mediante esta técnica, las
anteras inmaduras que
contienen polen en una etapa
específica de desarrollo se
colocan en medios donde el
polen inmaduro se divide para
formar embriones o callos.
 Transferidos estos a medios de
regeneración, se forman plantas.
 En la mayoría de los casos se
producen plantas haploides
estériles, pero en algunas
especies ocurre una duplicación
espontanea de los cromosomas
en las etapas de desarrollo del
callo y regeneración de la planta.
Cultivo de Microsporas
Cultivo de anteras y gametas
Polinización y fertilización in vitro

 Estas barreras de Fertilización:

 prefertilización o precigóticas

 autoincompatilidad esporifítica

 autoincompatibilidad gametofítica

Rescate de
embriones
 Protoplasto
Célula vegetal desprovista de pared celular, por proceso
mecánico o enzimático.
Membrana plasmática completamente expuesta.
Estado transitorio, permite manipulación de esas células.
Mantiene potencialidades de células
vegetales completas
 Mesófilo
Mesófilo Suspensión celular
Aislamiento

Enzima Enzima
Protoplastos Protoplastos

División celular
Protoplastos

Medio de callo Colonia celular

Cultivo

Medio de Brotes (o embriones)

regeneración

Regeneración de
plantas
 Protoplasto División celular Microcallos
células desnudas Agregados de celular

Callos Embriones somáticos Microplantas

Masa indiferenciada
 Hibridación somática
Aislamiento de gametas Aislamiento de protoplastos
 Secuencia ARN guía
PAM
Secuencia genómica Proteína Cas9
complementaria
ADN genómico

ADN donor
Reparación

Edición genómica dirigida

Bacterias

Líneas celulares
humanas Plantas
Plantas Insectos
 Embriogenesis Somatica
 Es la formación de un embrión a partir de una célula, sin la necesidad de la
fusión de gametos. Este fenómeno es conocido en la naturaleza como una
forma de apomixis llamada embrionía adventicia, descrita por primera
vez por Strasburges en 1878.
Caracteristicas:
1. Es una estructura bipolar con un ápice radical, uno apical y
cotiledones.
2. Tiene autonomía frente al tejido generador (protegido
generalmente por una epidermis).
3. Histológicamente se plantea que no tiene conexión vascular
con el tejido que le dio origen, por lo que pueden ser
separados fácilmente de este.
4. Presenta bandas procambiales entre los ápices.
 Causas de la Variabilidad Somaclonal
1. Genéticas (variabilidad heredable)
• Variabilidad pre-existente en células somáticas en el
explanto.
• Causada por mutación u otro cambio del ADN
• Ocurre con alta frecuencia.

2. Epigenéticas (variabilidad no-heredable)

• Variación generada durante el cultivo de tejido
• Causada por cambios fenotípicos temporarios
• Ocurre a baja frecuencia
Genotipo Explanto
 Factores relacionados a la aparición de
Variación Somaclonal

Vías de Regeneración Naturaleza del Callo

 Factores relacionados a la aparición de
Variación Somaclonal
Medio de Cultivo
Reguladores de Deficiencia o exceso de
crecimiento minerales
Edad del cultivo
Aplicaciones en el Mejoramiento Genético
 Variabilidad en cultivo de tejido

Mutación que ocurre Callo que contiene a

en el crecimiento de sectores de células mutantes
un callo

Desarrollo de bote
adventicios

Quimera sectorial Quimera periclinal

 Variabilidad Somaclonal

MORFOGENESIS DIRECTA MORFOGENESIS INDIRECTA

Rescate de Ápice Explanto Callo Protoplasto

embriones meristematico
Callo

Organoge- Embriogene- Organoge- Organoge-

Embriogene- nesis
nesis nesis Embriogene-
sis somatica

Frecuencia de variabilidad
Germinación Brotes sis somatica
sis somatica
in vitro laterales
Especie polisomáticas

Especie non -polisomáticas

VARIACION SOMACLONAL

Tiempo
 apice del
brote

antera
flor

flor

hoja
hoja

semilla
planta

apice de
raíz

nucela

embrion

células raices