Sondas de Ácidos Nucleicos: Hibridación, Southern Blot,

Northen Blot, Hibridación Fluorescente (FISH)

Diana Vasco, Génesis Calvache, Cristian Allauca, Dario Guaminga

INTRODUCCIÓN
Las sondas de ácido nucleico son nuevas y poderosas herramientas aportadas por la biotecnología que se emplean tanto en
la investigación básica como para diagnosticar enfermedades, por ejemplo, ciertas patologías hereditarias. La posibilidad
de utilizarlas con el fin de detectar diversos agentes patógenos, sea en el ser humano, en plantas o animales, ya ha tenido
importantes repercusiones económicas. Las sondas de ácidos nucleicos son fragmentos de ácido desoxirribonucleico
(ADN) o de ácido ribonucleico (ARN) marcados con algún elemento que les permite revelar, mediante una señal, su
presencia.
MÉTODOS RESULTADOS
La hibridación es la construcción artificial de ácidos nucleicos
bicatenarios a partir de dos monocatenarios usando la Fig 1. Esquema
representativo de cada uno
complementariedad de bases. Se trata, por tanto, de un proceso de los pasos involucrados
en la técnica de Southern
de unión de dos cadenas complementarias de ADN, ARN para blot. Obtención del ADN
genómico y digestión con
formar una molécula de ácido nucleico de doble cadena. Es un enzimas de restricción,
método muy versátil que permite estudiar el grado de relación electroforesis,
transferencia, hibridación
genética entre dos ácidos nucleicos. También permite la específi ca con una sonda y
detección de la secuencia
detección de fragmentos de DNA que son complementarios a de interés.

fragmentos monocatenarios de secuencia conocida (sondas).

La técnica de Southern blot la desarrolló, en 1975, Edwin
Southern y es una estrategia estándar para analizar ADN
previamente digerido con enzimas de restricción. Esta técnica
se utiliza para determinar la presencia de un gen o fragmentos
del ADN específicos en una mezcla de ácidos nucleicos
previamente extraídos. Se basa en la aplicación de dos
procesos fundamentales: la desnaturalización o separación de
las cadenas complementarias del ADN y la hibridación o unión
de dos cadenas complementarias. Este fundamento es
compartido por todas las técnicas de hibridación.
La técnica de Northern blot no se utilizan enzimas de
restricción, ya que las moléculas de ARN son más pequeñas y
para su análisis no requieren su fraccionamiento. Sin embargo, Fig 2. Southern blot para el diagnóstico de anemia falciforme. El esquema de la izquierda representa el ADN
digerido con enzimas de restricción, separado por electroforesis y teñido con bromuro de etidio. El esquema de
prácticamente comparten todos los demás pasos, como son la la derecha muestra el resultado de la hibridación, donde se observan las bandas que son reconocidas por la
sonda.
electroforesis, la desnaturalización la transferencia y la
hibridación con una sonda.
En la actualidad, las más relevantes son las marcadas con Fig 3. Técnica de Hibridacion in situ
Fluorecente (FISH). Identificación del gen
fluorescencia, modalidad conocida como hibridación in situ HER2/NEU en cáncer de mama por la técnica
de FISH. El gen HER2/NEU se encuentra
acoplada a un sistema de fluorocromos (FISH) o con biotina, localizado en el cromosoma 17q, y su
amplificación está presente en 25 a 30% de las
ya que el detalle morfológico no se pierde, a diferencia de lo neoplasias de mama; se relaciona
que ocurre con las modalidades radiactivas. estrechamente con los estados avanzados,
metastásicos, que implican mal pronóstico. En
la actualidad existe un tratamiento con
anticuerpos dirigidos específicamente contra el
producto del gen HER2/NEU que mejora el
CONCLUSIONES pronóstico y la sobrevida del paciente.

BIBLIOGRAFÍA
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