MODIFICACIN

GENTICA DE LAS
PLANTAS
BIOTECNOLOGIA VEGETAL
Tcnicas de ingeniera gentica + cultivo de tejidos
vegetales in vitro

Ingeniera gentica:
- Tcnicas de manipulacin ADN
-Desarrollo (ADN-Watson y Crick):nueva o moderna
biotecnologa

Cultivo in Vitro:
-Partes de plantas y plantas enteras en medios
aspticos y ambientes controlados (luz y T)
-Totipotencia: capacidad de clulas vegetales
( no todas) de regenerar plantas enteras.
- Protoplastos: Biotecnologa de hibridacin
somtica (hbridos entre especies diferentes que
comienza con fusin de protoplastos y posterior
regeneracin de plantas enteras).
 TRANSFORMACIN GENTICA DE LAS
PLANTAS
Agrobacterium tumefasciens

Agallas de la corona (Plasmido Ti)

Material gentico: cromosoma y varios plasmidos

Transfiere porcin del plasmido Ti ( T-DNA) al genoma de la clula vegetal, donde se integra y expresan genes : divisin y proliferacin de cel vegetales sin control:Tumor
 -Genes iaaM-iaatt
-Gen ipt
-Otros

Particularidades nicas de
Agrobactrium:
- Transferir fragmento de DNA e
integrarlo en cel vegetal.
- Genes DNA reconocidos por cel
vegetal.
- Genes que codifican enzimas
metabolismo de opinas.
PROCESO DE INFECCION:

T-DNA y regin vir (plasmidoTi) + genes virulencia chv

(cromosoma)

-T-DNA delimitado por repeticiones de 25pb (borde derecho

e izquierdo)
-Regin vir fuera del T-DNA, formada por operones (genes
cuyos productos regulan la expresin de otros genes)
 ETAPAS DEL PROCESO

1._ Reconocimiento: genes chv, movimiento quimiotctico bacteriano y

unin a receptores especficos de clula vegetal.
2._ Vir A se expresa.
3._ Unin Vir G a los dems genes vir y activacin
4._ Vir D1-D2 (endonucleasas) . Liberan cadena simple de DNA. Formacin del
complejo T.
5._ Paso del complejo T por el canal formado por Vir B.
6._ Entrada al ncleo con previo reconocimiento de SLN por D2 y D1.
7._ Integracin del T-DNA al genoma vegetal.
 GENES DE T-DNA-SUSTITUCION POR
FORANEOS

- Se demuestra que los genes forneos se

pueden transferir, integrar y expresar en
plantas usando Agrobacterium tumefasciens
como vehculo.

- VECTORES DE TRANSFORMACION: plasmidos con

informacin esencial para replicarse,
transferirse e integrarse y posibilitar expresin
de genes forneos en genoma de la cel
vegetal.
 TIPOS DE VECTORES:

1._ VECTORES COINTEGRADOS: Cuando plasmido de E.coli se transfiere en agrobacterium, el Dna forneo de coli se integra en los bordes de su T-DNA por recombinacin homologa dando lugar a: Plasmido con regin vir y el T-DNA con el Dna forneo
2._VECTORES BINARIOS: Plsmido Ti desarmado con solo regin vir y en un
segundo plsmido bordes de l T-DNA con origen replicacin funcional en
ambas bacterias. Este ltimo mas pequeo y manipulable para introducir genes
forneos entre bordes.
Genes marcadores permiten reconocer y
seleccionar
clulas transformadas:

1. Marcadores de seleccin: permiten a cel vivir

en agente selectivo (antibitico o herbicida)

2. Marcadores informadores: Codifican enzimas

que con sustrato adecuado reaccionan
dando una caracterstica nueva a las clulas.
*Ejemplo: B-glucuronidasa con un sustrato
da
color azul y con otro
fluorescente.
LOS PROCESOS DE REGENERACIN Y TRANSFORMACIN SON
DISTINTOS PARA CADA ESPECIE VEGETAL:

- Transformar una planta no indica que por el mismo

procedimiento se pueda transformar una especie muy
prxima.

- Depende de la relacin patgeno/husped (mayora

dicotiledneas)

- Genes regin vir y algunos del T-DNA como los de virulencia

determinan genoma de especies especificas para cada
cepa bacteriana.
APLICACIONES
BIOTECNOLGICAS
 -Resistencia a plagas y enfermedades

-Resistencia a condiciones ambientales extremas

-Integracin planta y microorganismos

-Las plantas como biofactoras

-Mejora de la calidad en productos agrarios

Plagas y enfermedades

Estn sometidas a:

Agentes
infecciosos

Organismos
consumidores
Plagas y enfermedades
 Agentes qumicos

Programas de control
a plagas, mediante
organismos
depredadores al
organismo
perjudicial.

Mejoras genticas
Condiciones ambientales
extremas
La disminucin en el rendimiento de cultivos se debe al
estrs:

Bitico
Abitico
Este ltimo es el responsable de las mayores prdidas
de productividad.
 A travs de la ingeniera gentica, podr aumentar la torelancia y
desarrollar estrategias hacia el estrs.

Para ello es necesario conocer los mecanismos de defensa de las

plantas hacia el estrs
Interaccin planta-
microorganismo
Los microorganismo se agrupan segn relacin:
Perjudiciales
Beneficiosas
Sin efecto directo

Compiten por nutrientes y espacio.

Ej. Rizobacterias
Perjudiciales

Dalbulus maidys la chicharrita adulta del

maz
Beneficiosas

Rhizobium en
leguminosa
Las plantas como
biofactoras
Las plantas son fuente de alimento, combustible, y
fibras.

Los avances en vitro del ADN y la transformacin de

diferentes especies han permitido la creacin de
plantas transgnicas.
Plantas de Ananas sativus

Agave sp.
Han ido encaminadas al desarrollo de plantas con caractersticas
agronmicas mejoradas.

Plantas tolerantes a herbicidas, virus, insectos

A mejorar el producto extrado de la planta: como en el tomate, las
patatas
Tolerancia a los herbicidas

Parcela de soya infectada con herbicida Roundup (izquierda)

Cultivos Bt resistentes a los insectos

Maz hbrido con un gen Bt

(izquierda) y un hbrido sensible al
barrenador europeo del maz
(derecha).
 Sus esporas contienen una protena cristalina (Cry). En el intestino del
insecto, la protena se descompone y libera una toxina que se une al
revestimiento intestinal y crea poros as muere el insecto.
En los cultivos Bt se ha incorporado una versin modificada del gen
Cry bacteriano en el ADN de la propia planta, de tal modo que la
maquinaria celular de la planta produce la toxina.
Otra utilidad en las plantas
como biofactorias, es la
de producir enzimas
industriales, antgenos para
las vacunas, anticuerpos,
pptidos de uso
farmacutico
Mejora de productos
agrarios
Para el incremento de la produccin de las cosechas
y la disminucin del uso herbicidas
Beneficiados los agricultores y la sociedad
Objetivos: obtencin de productos con menos
contaminantes agroqumicos y de mejor calidad
Mejorar en el tamao, valor nutritivo, extensin de
vida
GENES EN ANTISENTIDO PARA RESTABLECIMIENTO
DEL FRUTO

Muchos genes han sido

introducidos en
variedades de inters
agrnomo con objetivos
de mejora.

En plantas transgnicas
se ha conseguido:
- resistencia y mayor
tolerancia a plagas,
enfermedades,
herbicidas.
- mejora de la calidad
nutritiva.
EL TOMATE DE LARGA VIDA

En tomates
cosechados, la
enzima
poligalacturonasa
degrada las pectinas
(componentes
esenciales de
muchas frutas)

Consecuencia:
reblandecimiento del
fruto y deterioros en
su aroma y sabor.
Procedimiento:
1 Las plantas transgnicas de tomate se han
transformado en la regin codificadora del gen
de la enzima poligalacturonasa.

2 El gen se ha insertado al revs en el mdulo

de expresin, es decir, en antisentido.
*Antisentido: en la doble cadena de DNA:
- la guanina se sustituye por citosina y la
citosina por guanina.
- la adenina se sustituye por timina y la
timina por adenina.
3 El gen en antisentido transcribe un
RNAm con secuencia complementaria al
RNAm transcrito por el gen de la
poligalacturonasa.

4 Se tiende a la formacin de una doble

cadena entre ambos RNAm y as, bloquear
parcialmente la sntesis del enzima.

5 Debido al efecto previo, se consigue un

retraso en la degradacin de las pectinas y,
por tanto, un tomate que tarda mucho ms
tiempo en reblandecerse.
Retraso de la maduracin
en el tomate
Maduracin: conjunto de cambios externos,
de sabor y textura que un fruto experimenta
cuando completa su crecimiento.
Segn el proceso de maduracin, el tomate
es un fruto climatrico, es decir, acumula
almidn durante su crecimiento y, en la
maduracin, lo hidroliza a monosacridos,
glucosa y fructosa principalmente. Se
produce mucho gasto de energa y se
experimenta un aumento en la respiracin.
Por transformacin con genes en
antisentido, se ha conseguido bloquear
parcialmente la sntesis de etileno (hormona
de la maduracin).

Procedimiento:
- Mediante la tcnica antisentido, se ha
conseguido bloquear la sntesis de ACC-
sintasa no se sintetiza etileno no se
produce maduracin.

Restauracin de la maduracin:
- por tratamiento con etileno exgeno
cuando los frutos se ponen a la venta.