ELECTROFORE

SIS

QU
ES?
Es el procedimiento del anlisis de los
cidos nucleicos y protenas.
As como el microscopio permite
visualizar microorganismos y estructuras
similares, la electroforesis nos ayuda a
observar los cidos nucleicos y protenas
al final del procedimiento.

FUNDAMEN
TO

El principio bsico de la electroforesis consiste en la

migracin de las molculas a travs de un gel u otro
tipo de matriz de naturaleza porosa, en el cual, por
accin de un campo elctrico, sern separadas de
acuerdo a su tamao o peso molecular.

.
Para controlar el avance de la separacin de
las molculas en la matriz y establecer un
patrn de fragmentos, las molculas debern
ser teidas con diferentes colorantes. Estos
pasos facilitan la visualizacin de las
molculas a manera de simples bandas las
cuales sern posteriormente analizadas e
interpretadas

PROCEDIMIE
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROS
NTO
La electroforesis en gel de agarosa es de las ms
utilizadas para analizar y caracterizar cidos
nucleicos de distintas procedencias.
Los geles se comportan como un tamiz molecular
y permiten separar molculas cargadas en funcin
de su tamao y forma. As, molculas de DNA de
diferente tamao van a emigrar de forma distinta
en una electroforesis en gel de agarosa. Adems,
si en dicha electroforesis se aplican marcadores de
peso molecular (fragmentos de DNA de tamao
conocido) se puede calcular el tamao aproximado
del DNA en estudio.

AGAROSA
Es un polisacrido altamente purificado derivado del agar, el tamao del poro puede ser
predeterminado ajustando su concentracin en el gel; entonces a mayor concentracin menor
tamao de poro.
El rango de trabajo es aproximadamente de 0,4 a 2 % (p/v).
Se utiliza para separar macromolculas tales como cidos nucleicos y grandes complejos
proteicos.
Tienen un menor poder de resolucin pero un gran rango de separacin, tal que DNAs desde
200 pb hasta aproximadamente 50.000 pb pueden ser separadas utilizando varias
concentraciones de agarosa.

Sumergir el gel de poliacrilamida o agarosa en un envase de tefln

conteniendo bromuro de etidio a una concentracin de 1g/mL y
dejar incubando por 5 minutos en reposo. Trasladar el gel hacia un
cuarto oscuro donde se encuentre un transiluminador de luz UV.
Depositar el gel cuidadosamente sobre la pantalla del
transiluminador.
Las molculas de ADN son visualizadas indirectamente cuando son
coloreadas con bromuro de etidio, fluoreciendo como bandas de
un color naranja frente a la luz UV. Las molculas de ADN que son
ms grandes, generalmente migran ms retardadamente que las
molculas de menor peso

APLICACI
N
Separar, identificar y purificar
fragmentos de DNA o RNA.

Determinar tamao de
un fragmento de DNA.

PARTES DEL
EQUIPO

REFERENC
IAS
http://www.uv.es/qflab/2012_13/descargas/cuadernillos/tecnicasAnalitica
s_cuader/castellano/T_A6.pdf
http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol- mol/pdfs/15%20ELECTROFORESIS.pdf
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ELECTROFORESIS PARA PROTENAS Y ADN Blgo. Carlos Augusto
Ybar Varas